JP2016501525A - 固定床リアクタにおける細胞の分離のためのシステムおよび方法 - Google Patents

Abstract

細胞を処理するための装置が開示される。１つの実施形態では、固定床リアクタが細胞のために設けられ、固定床リアクタは、固定床の充填状態に対応する第１の位置から固定床の解放状態に対応する第２の位置へ移動できる部分を含む。仕切りの移動は、固定床からの細胞の採取を容易にする。関連する装置、キット、方法、および、システムも開示される。【選択図】図１

Description

この出願は、その開示が参照することにより本願に組み入れられる米国仮特許出願第６１／７３５，８４１号の利益を主張する。

この開示は、バイオプロセス技術に関し、特に、固定床リアクタにおける細胞の分離のためのシステムおよび方法、バイオプロセスのための装置、システム、および、キット、ならびに、関連する方法に関する。

多くのバイオリアクタは、細胞接着および細胞増殖を促進させるための固定床または充填床を形成する固定充填材料の形態を成すキャリアを含む。固定床の充填材料の配置は、局所的な流体輸送、熱輸送、および、質量輸送に影響を及ぼすとともに、通常は、所定の空間内での細胞培養を最大限に高めるために非常に高密度である。充填床または固定床から細胞を採取するために、トリプシンなどの化学薬剤が使用されてもよいが、これだけでは、しばしば、ごく限られた量の細胞分離しか引き起こさない。問題は、部分的には、床全体にわたって化学薬剤を循環させて採取細胞の収率を高めることをより困難にする、典型的なリアクタ内の固定床材料の高密度充填性に起因する。

したがって、固定床リアクタから採取される細胞の収率を高める仕方の必要性が認められる。

１つの態様において、細胞を処理するための装置は、細胞のための固定床リアクタを備える。固定床リアクタは、固定床の充填状態に対応する第１の位置から固定床の解放（ｄｅｐａｃｋｅｄ）状態に対応する第２の位置へ移動できる可動部を含む。その結果、仕切りの移動は、固定床から細胞の採取を容易にするために固定床を拡張させる。

１つの実施形態では、可動部が仕切りを備える。仕切りは、固定床を含むリアクタの区画室内に配置されてもよい。装置は、拡張可能なリテーナであって、リテーナの非拡張状態において仕切りを第１の位置に保持し、リテーナの拡張状態において仕切りを第２の位置に保持するための拡張可能なリテーナを更に含んでもよい。

プランジャが設けられてもよい。プランジャは、仕切りを第１の位置から第２の位置へ移動させるようになっていてもよく、プランジャが仕切りに連結されてもよい。仕切りは、固定床を備えるリアクタの区画室の外部の第１の部分と、区画室内の第２の部分とを含んでもよい。リアクタは、密閉収容器を備えてもよく、また、可撓性外壁を備えてもよい。リアクタの第１の区画室が固定床を含んでもよく、また、第２の区画室は、第１の区画室を通じて流体を循環させるために設けられてもよい。また、リアクタがローラーボトルを備えてもよい。

開示の更なる態様は、細胞を処理するための装置に関連する。装置は、細胞増殖に適合する媒体を含む収容器と、細胞のための内部区画室と関連付けられる仕切りとを備え、仕切りは、第１の容積を区画室に与えるための第１の位置から、第１の容積よりも大きい第２の容積を区画室に与える第２の位置へ移動できる。

媒体が区画室内の充填材料を構成してもよい。仕切りは、第２の位置で区画室の下部を形成してもよい。収容器が端壁を含んでもよく、仕切りは、第２の位置においてよりも第１の位置において端壁に近づけられてもよい。拡張可能なリテーナであって、リテーナの非拡張状態において仕切りを第１の位置に保持し、リテーナの拡張状態において仕切りを第２の位置に保持するための拡張可能なリテーナが設けられてもよい。拡張可能なリテーナがスプリングを備えてもよい。仕切りを第１の位置から第２の位置へ移動させるためのプランジャが設けられてもよく、プランジャが仕切りに連結されてもよい。仕切りは、固定床を含むリアクタの区画室の外部の第１の部分と、区画室内の第２の部分とを含んでもよい。内部区画室を通じて流体を循環させるための外部区画室が設けられてもよい。仕切りが略環状であってもよい。

本開示の更なる態様は、細胞を処理するための装置に関する。装置は、流体を受容するための内部を形成する側壁を含む収容器と、細胞のための固定床を含む収容器の内部に配置される拡張可能な区画室とを備える。拡張可能な区画室は、収容器の内部の外部区画室によって取り囲まれてもよく、また、内部区画室を取り囲んでもよい。側壁は、少なくとも部分的に可撓性であってもよい。

装置は、振動器を更に含んでもよい。装置は、流体をリアクタ内で循環させるためのデバイス、例えば磁気撹拌器などを更に含んでもよい。デバイスまたは磁気撹拌器がリアクタの区画室内にあってもよい。装置が複数の細胞を含んでもよい。装置は、固定位置から細胞を分離するための剥離剤を更に含んでもよい。

本開示の更なる態様において、液体を使用して細胞を処理するための装置は、細胞を増殖させるための床を含むリアクタと、床を振動させるための振動器と、空気−液体界面を床内に形成するためにリアクタから流体を排出するためのドレンとを備える。１つの実施形態において、振動器は、リアクタを支持するための振動テーブルを備える。床が固定床を構成してもよく、また、リアクタは、固定床の充填状態に対応する第１の位置から固定床の解放状態に対応する第２の位置へ移動できる仕切りを含んでもよく、これにより、仕切りの移動は、固定床からの細胞の採取を容易にするために固定床を拡張させる。

本開示の更なる他の態様は、固定床リアクタ内で細胞を処理する方法に関する。方法は、固定床を解放するステップと、解放後に、リアクタから細胞を採取するステップとを備える。採取するステップは、剥離剤をリアクタに供給するステップ、リアクタを振動させるステップ、リアクタを叩くステップ、または、これらの組み合わせを備えてもよい。解放するステップは、リアクタの固定床を含む区画室を拡張させるステップを備えてもよい。解放するステップは、固定床の充填材料を支持する仕切りを移動させるステップを備えてもよい。解放するステップは、仕切りを下降させるステップを備えてもよい。

本開示の更なる態様は、空気−液体界面を有する床を含むリアクタを使用して細胞を処理する方法に関する。方法は、床を振動させるステップを備える。床を振動させるステップは、床を含むリアクタを振動させるステップを備えてもよい。振動させるステップは、リアクタを振動テーブル上に配置するステップを備えてもよい。振動させるステップは、リアクタを叩くステップを備えてもよい。方法は、振動させるステップ中に空気−液体界面を移動させるステップを更に含んでもよい。方法は、床を濯いだ後に、振動させるステップを繰り返すステップを更に含んでもよい。方法は、振動させるステップ中にリアクタを回転させるステップを更に含んでもよい。

この開示の更なる他の態様は、流体中のキャリアに付着される細胞を処理するためのシステムに関連する。システムは、細胞、キャリア、および、流体を受容するための収容器であって、前記収容器が流体を解放するための少なくとも１つのポートを含む、収容器と、収容器を振動させるための振動器と、ポートと関連付けられるフィルタとを備える。フィルタは、細胞を通すがキャリアを通さないようになっていてもよい。

システムは、流体よりも上側の収容器内のヘッドスペース内の圧力を増大または減少させるためのポンプを更に含んでもよい。システムは、収容器からの流体をフィルタに通すための排出ラインを更に含んでもよい。ポートが多位置ドレンを備えてもよく、また、フィルタは、ドレンを取り囲むとともに流体を通すことができるがキャリアを通さないようになっている可撓性材料を備えてもよい。可撓性材料がメッシュ材料を備えてもよい。

本開示の更なる他の態様は、キャリア上で細胞を培養するようになっている装置に関連する。装置は、キャリアよりも大きいドレン開口を有するドレンを含む容器と、流体がドレン開口を通ることができるようにするがキャリアを通さないようになっているフィルタとを備える。フィルタは、ドレン開口を取り囲む可撓性材料を備えてもよい。可撓性材料がメッシュを備えてもよい。

開示においては更に、流体中のキャリアに付着される細胞を処理するための方法の態様が記載される。方法は、細胞、キャリア、および、流体を受容するための収容器を用意するステップであって、収容器が流体を除去するための少なくとも１つのポートを含む、ステップと、キャリアから細胞を分離するために収容器を振動させるステップと、分離された細胞が流体と共に除去されるとともにキャリアが流体と共に除去されないように、容器から除去される流体からキャリアを濾過するステップとを備える。濾過するステップは、ポートを通じて流体を除去するとともに、キャリアよりも小さく細胞よりも大きい孔径を有するフィルタに流体を通すステップを備えてもよい。方法は、流体を除去するために収容器を加圧するステップを更に備えてもよい。加圧するステップは、収容器と連通するポンプを設けて、流体よりも上側のヘッドスペース内に圧力を印加するステップを備えてもよい。振動させるステップと加圧するステップとが同時に行なわれてもよい。

本開示の更なる態様は、バイオプロセスに関連して用いるキットである。１つの実施形態において、キットは、第１の内部を含む滅菌された第１の収容器と、第１の収容器に接続される滅菌された第２の収容器であって、前記第２の収容器が第２の内部を含み、前記第２の収容器が、第１の収容器に加えられるための添加剤を第２の収容器の第２の内部に含む、第２の収容器と、添加剤を第２の収容器に閉じ込めるために第１の収容器と第２の収容器との間にある取り外し可能なバリアと、第１および第２の収容器を収容するためのパッケージとを備える。

バリアが取り外し可能なクランプを備えてもよい。添加剤が流体と混和できなくてもよい。第１の収容器がバイオプロセス容器、例えばバッグ（混合器を含んでもよい）であってもよい。

本開示の他の態様は、流体に関連して細胞を処理するためのキットに関する。キットは、第１の内部を含む滅菌された第１の収容器と、第１の収容器に接続される滅菌された第２の収容器であって、第２の収容器が第２の内部を含む、第２の収容器と、第２の収容器の第２の内部にある添加剤であって、前記添加剤が流体と混和できない、添加剤と、第１の収容器と第２の収容器との間にある取り外し可能なバリアとを備える。

添加剤は、増殖されるべき細胞を支持するようになっている材料を備えてもよい。混合器が第２の収容器内に設けられてもよい。第２の収容器が第１の収容器の外部にあってもよい。

本開示の更なる態様は、流体に関連して細胞を処理するためのキットに関連する。キットは、混合器を有する第１の内部を含む滅菌された第１の収容器と、第１の収容器に接続されて第１の内部の外部にある滅菌された第２の収容器であって、第２の収容器が第２の内部を含む、第２の収容器と、第２の内部にある添加剤と、第１の収容器と第２の収容器との間にある取り外し可能なバリアとを備える。

本開示は、流体中のキャリアに付着される細胞を処理するためのシステムであって、キャリアと流体とを含む本明細書中に開示される任意の収容器と、収容器を振動させるための振動器とを備える、システムに関連する。流体から細胞を濾過するために細胞よりも大きくキャリアよりも小さいサイズの孔を備えるフィルタが設けられてもよく、第１の収容器を加圧するための圧力源であってもよい。

また、この開示は、流体と共に用いるためのバイオプロセスシステムを与える方法にも関連する。方法は、第１の収容器を第２の収容器に取り付けるステップであって、第２の収容器が流体と混和できない添加剤を含む、ステップと、取り付けられた第１および第２の収容器を一緒に滅菌するステップと、滅菌された第１および第２の収容器を輸送のために包装するステップとを備える。包装するステップは、取り付けられた第１および第２の収容器とバリアとを取り囲むための第３の収容器を用意するステップを更に備えてもよい。方法は、第１の収容器に混合器を設けるステップを更に含んでもよい。また、方法は、第１および第２の収容器の包装を解くステップと、第１の収容器へ添加剤を供給するためにバリアを除去するステップと、第１の収容器へ流体を加えるステップと、流体を混合するステップと、流体を回収するステップとを更に含んでもよい。流体中で細胞を増殖させるステップが行なわれてもよく、また、回収するステップは、第１の収容器からの添加剤の通過を防止しつつ細胞を通すことができるようになっているフィルタに第１の収容器からの流体を通すステップを備えてもよい。方法は、回収するステップ中に第１の収容器を加圧するステップ、および／または、回収するステップの前または最中に第１の収容器を振動させるステップを更に含んでもよい。

本開示に係る培養容器の第１の実施形態の概略図である。 図１の実施形態の概略図である。 別の実施形態の概略図である。 更に別の実施形態の概略図である。 更に別の実施形態の概略図である。 更に別の実施形態の概略図である。 開示された発明を使用する方法に関連する詳細を示す。 開示された発明を使用する方法に関連する別の詳細を示す。 更なる他の実施形態を示す。 本開示に係る更なる実施形態を示す。 本開示に係る更なる別の実施形態を示す。 本開示に係る更なる別の実施形態を示す。 本開示に係る付加的な実施形態を示す。 本開示に係る付加的な別の実施形態を示す。 本開示に係る付加的な更なる別の実施形態を示す。 本開示に係る更なる別の実施形態を示す。 本開示に係る更なる別の実施形態を示す。

ここで、細胞を処理するためのシステム１０を示す図１を参照する。１つの実施形態において、システム１０は、細胞を増殖させるためのリアクタ１２の形態を成す装置を含む。リアクタ１２は、流体を受け入れて収容するようになっている硬質の、または可撓性がある収容器（例えば、バッグ）を構成してもよく、また、１回だけ使用されるようになっていてもよい（それにより、洗浄処置の必要性および関連する費用を回避する）。いかなる場合でも、リアクタ１２を形成する収容器は、細胞を最適な態様で増殖させるための無菌内部状態を維持するべく、使用中に周囲環境から密閉されてもよい。

リアクタ１２は、細胞の付着および増殖を促進させるための充填材料１６（繊維、ビーズ、球、または、同様のものなど）から構成される充填床または固定床１４を伴う内部を形成する壁１２ａを含む。材料１６はリアクタ１２の内部の区画室１８ａ内に配置され、該区画室は、中空の垂直に延びるチューブの上部を構成してもよい。リアクタ１２の内部には、固定床１４を少なくとも部分的に形成する区画室１８ａの材料１６へおよび該材料１６から流体を運ぶための第２の区画室１８ｂが設けられる。一般に、充填材料１６は、細胞増殖のための表面積を最大にするように配置されるべきであり、この場合、１，０００ｍ^２が表面積の好適な大きさであると考えられる（例えば、充填材料１６として医療グレードのポリエステルマイクロファイバを使用して達成されてもよい）。

リアクタ１２内の流体を固定床１４に通して移動させるために、例えば磁気撹拌器Ｓなどの循環デバイスが設けられてもよいが、外部ポンプ（図示せず）を使用することもできる。撹拌器Ｓは、第１および第２の区画室１８ａ，１８ｂと流体連通するリアクタ１２の第３の区画室１８ｃ内に設けられてもよい。結果として生じる流れは、図１に作用矢印により示されるように、リアクタ１２の下端から上端へ向かってもよい。この態様でリアクタ１２を形成するための１つの想定し得る手法の詳細は、その開示が参照することにより本願に組み入れられる米国特許第８，１３７，９５９号明細書において見出されてもよい。

図１および図２を共に参照することにより最も良く理解できるように、リアクタ１２は、固定床１４の充填材料１６を充填状態から拡張させる、または「解放させる」ことができるようになっていてもよい。したがって、図１に示されるように、リアクタ１２は、区画室１８ａを２つの部分に分けるための可動仕切り２０を備えてもよい拡張可能部と関連付けられる。図示の実施形態において、この仕切り２０は、固定床１４を形成する区画室１８ａ内の充填材料１６のための支持を行ない、区画室１８ａは、この場合も先と同様に、中空の垂直に延びるチューブを構成してもよい。仕切り２０は、チューブ１８ａの外径よりも小さい外径を有するように設計されてもよいとともに、流体を透過する。

細胞を増殖させるための第１の状態において、仕切り２０は、最初に、対応する区画室１８ａ内に高密度充填材料１６を含む第１の容積Ｖ１を形成するように配置され、そのような状態では、床１４を通じた流体輸送、熱輸送、および、質量輸送にとって最適な状態を与えることができる。細胞の採取が望まれる場合、仕切り２０は、充填床１４を形成する区画室１８ａの第１の容積を更に大きい第２の容積Ｖ２まで拡張させるように移動されてもよく（おそらく、リアクタ１２を開放することなく）、それにより、充填材料１６が拡張できる、または解放できる。材料１６のこの状態では、その後、細胞を採取のためにより容易に分離することができ、この分離は、前述したように、化学薬剤を単独で、または以下の説明で更に詳しく概説される他の技術と組み合わせて使用して達成されてもよい。

図３〜図６は、解放機能を達成するための様々な実施形態を示す。図３および図４では、仕切り２０がスペーサ２２に連結され、スペーサ２２は、第１の状態または充填状態を規定するために、床１４に隣接する透過性の上壁１４ａの近傍に配置されてもよく、または上壁１４ａと当接してもよい。例えばコイルスプリングなどの拡張可能リテーナ２４が仕切り２０とリアクタ１２の上壁１２ｂなどの固定構造体との間で延びてもよい。

リテーナ２４が圧縮状態または非拡張状態（例えば、スプリングの圧縮状態）にあると、それにより、仕切り２０は、床１４の材料１６を充填状態に保持する。採取が望まれると、リテーナ２４を拡張できるようにしてもよい（例えば、スプリングの場合には、関連するホルダ２６を例えば切断または分断するなどして取り外すことによって拡張できるようにしてもよい）。図４を参照すると理解できるように、この拡張は、仕切り２０が移動して区画室１８ａの容積を拡張できるようにし、それにより、床１４の材料１６を解放できるようにする。

図５および図６における実施形態は、同様の最終結果を達成するが、仕切り２０を移動させる仕方が異なる。この実施形態では、仕切り２０がプランジャ２８に連結され、プランジャ２８はリアクタ１２の壁（上壁１２ｂなど）を貫通してもよい。プランジャ２８の作動は、床１４が第１の状態または充填状態（図５）から拡張状態（図６）に変化するように仕切り２０を移動させる。言うまでもなく、この実施形態の１つの利点は、ひとたび採取が進むと、プランジャ２８を充填状態と関連付ける位置まで戻すことができ、その後、再び非充填状態までプランジャを作動させることができるという点である。無菌状態を維持するために、シール３０（場合によりスリーブを含む）がプランジャ２８をリアクタ１２と関連付けてもよい。

前述したように、採取中にトリプシンなどの化学薬剤を使用できる。更なる実施形態では、図７および図８に関連して、細胞分離を容易にするために充填材料１６が振動に晒されてもよい。これは、リアクタ１２全体を振動テーブル３２上に配置することによって、あるいは、単にリアクタ１２を叩くことによって行なわれてもよい。充填材料１６を振動に晒すことは、単独で、または化学薬剤の付加と組み合わせて行なわれてもよい。振動は、床１４の拡張状態または非拡張状態で加えられてもよい。振動と化学薬剤との組み合わせを伴う採取の場合、振動は、任意の化学薬剤の導入前、導入中、あるいは、導入後に行なわれてもよい。

実施例
図７および図８を参照すると、本発明を実施する１つの想定し得る仕方が記載される。図７は採取方法１００におけるステップの流れを示し、採取方法１００は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いた濯ぎステップ１０２と、その後の随意的な第２の濯ぎ（１０４）と、培養ステップ１０６と、中和ステップ１０８と、その後に細胞を除去するためにリアクタ１２に対する振動付加などによる機械的作用の印加ステップ１１０とを含む。ステップ１１２で再び濯いだ後、ステップ１１４に示されるように、機械的作用が再び印加される。図８は、プロセスにおける各ステップで行なわれるサンプルリングの結果として採取される細胞の様々な収率を示すとともに、第１の機械的作用ステップが収率を著しく増大させることを示す。

他の実施例は、リアクタから流体を排出すること、および、その後、濯ぎ溶液（３７℃まで予熱されたＰＢＳなど）を加えることを伴う。濯ぎ溶液が固定床を通じて循環されて、リアクタが空にされる。その後、酵素分離溶液（例えば、トリプシン）が床を通じて循環される。リアクタは、その後、５０Ｈｚの周波数および約１ミリメートルの振幅で振動するテーブル上に１０分間にわたって配置される。流体は、その後、振動を停止させる一方で流体を部分的に排出することによって、または振動中に移動する空気−液体界面を形成することによって（床の中央でこの界面を示す図２のラインＭ参照）回収ステップの一部として排出されてもよい。リアクタが空にされた時点で酵素溶液の中和が完了されてもよい。

図９は、リアクタ１２とは別個の容器２００内に非充填状態の充填材料１６を配置することによって床１４の解放が起こってもよいことを更に示す。これは、固定床１４を形成する個々のキャリア２０２を、リアクタ１２内に配置して、容器２００へ移し、トリプシンなどの分離剤２０４を伴う溶液中に配置するとともに、ヘッドスペース２０６（空気など）を形成することによって達成されてもよい。収容器２００は、取り外し可能なキャップ２００ａを有するローラーボトルなどの閉じられた収容器を構成してもよい。また、収容器２００は、キャリア２０２からの細胞分離を容易にするために振動に晒されてもよい。

ここで、バイオリアクタとしての使用に適した受容体１の更なる実施形態を示す図１０および図１１を参照する。細胞培養のための受容体１は、充填物（ｐａｃｋｉｎｇ）３を収容する内部空間２を有する。受容体が細胞培養のために使用されるようになっている場合には、充填物３が細胞増殖に適合しなければならない。内部空間２は、任意の形状を有してもよいが、開示された実施形態では、以下によって画定される環状容積を有する。
− 第１の外端４１および第２の外端４２と、矢印４４によって示される長手方向に延びる長手方向壁４３とを有する外側管状壁４。外側管状壁４は、長手方向４４で環状容積の外側境界を画定する；
− 外側管状壁４の第１の外端４１および第２の外端４２のそれぞれで環状容積を画定して閉じる第１および第２の閉塞体６１，６２；
− 外側管状壁の第１の外端の方へ向けられた第１の外端５１と、外側管状壁４の第２の外端の方へ向けられた第２の外端５２とを有する内側長尺壁５。内側長尺壁５は外側管状壁４内に配置される。内側長尺壁５は、長手方向４４に延びるとともに、環状容積の内側境界を画定し、該内側境界は外側境界によって包囲される。

内側長尺壁５の第２の外端５２は、第２の閉塞体６２と一致する。一例として、外側管状壁は、円筒状の外側管状要素４０によって与えられる。内側長尺壁５は、円柱ロッドなどの中実の内側円柱要素５０によって与えられてもよい。外側管状要素４０は、円筒管状要素であり、長手方向と平行な中心軸線４５を有する。内側円柱要素５０および外側管状要素４０は同軸状に装着されてもよい。

内側円柱要素５０の第１の外端は、内側円柱要素５０を、ならびに、内側円柱要素５０および外側管状要素４０に固定されている閉塞体６１，６２を用いて同様に外側管状要素４０も、駆動機構、例えばバイオリアクタのモータに対して結合するために、結合要素５３を備えてもよい。内部空間２へおよび／または内部空間２から媒体および／またはガスを与えるおよび／または引き出すために、第２の閉塞体６２には、受容体を媒体源またはガス源に結合するのに適したコネクタが設けられる。このコネクタ、または代わりに更なるコネクタは、第１の閉塞体６１または第２の閉塞体６２に設けられてもよい。

内部空間２は少なくとも部分的に充填物３で満たされる。一例として、充填物は、細胞増殖に適合する、鉱物キャリア、例えば、ケイ酸塩、リン酸カルシウム、有機化合物、例えば多孔質カーボン、天然物、例えばキトサン、高分子、または、バイオポリマーであってもよい。充填物は、細胞増殖に適合する高分子の織り、または不織りのマイクロファイバまたは任意の他の材料を備えてもよい。また、充填物は、孔および／またはチャネルを伴う材料の単体として設けることもできる。

随意的に、充填物は、５０％〜９８％の範囲内の多孔率Ｐを有してもよい。多孔率Ｐという用語は、所定の体積の材料中に存在する空気の体積であり、所定の体積の材料のパーセンテージとして表わされる。多孔率は、以下の式を用いて多孔質材料の単位体積当たりの重量Ｗｘを測定することによって測定され得る。
Ｐ＝１００−（１−Ｗｘ／Ｗｓｐｅｃ）
ここで、Ｗｓｐｅｃは、材料の比重量である。多孔質材料は、材料の１つの固体単位であってもよく、あるいは、複数の個々の単位、例えば、粒子、チップ、ビーズ、繊維、または、繊維塊であってもよい。

受容体１の移動中、充填物（特に多孔質材料）が受容体に対して所定の相対位置にあってもよい。受容体１は、随意的には０．１〜２５回転／分の回転速度でその軸線４５の周りで回転されるようになっている。

図１０ａの径方向断面部において最も良く見えるように、内部空間は、細胞培養媒体１５などの培養媒体で部分的に満たされる。一例として、液面１８が、少なくとも、媒体１５中に部分的に浸漬される内側長尺壁５と接触する。液面１８の下側に配置される充填物３の部分は、細胞培養媒体などの培養媒体によって湿潤される。液面１８よりも上側に配置される充填物３は、内部空間２内に存在するガスまたは空気と接触している。受容体が軸線４５の周りで一方向に回転されると、例えば矢印１７により示されるように時計回りに回転されると、細胞培養媒体１５などの培養媒体は、充填物３に対して反対方向、例えば（１９によって示される）反時計回り方向に回転する。細胞培養媒体１５などの培養媒体は、栓流にしたがって充填物３の全体にわたって通される。受容体の、例えば時計回りの回転中、細胞培養媒体などの培養媒体は、栓流の前縁２０にあるガスまたは空気１６を反時計回りに移動させる。媒体１５の後縁２１には、随意的に限られた陥凹部が形成され、それにより、ガスまたは空気１６が後縁へ向けて吸引される。したがって、媒体１５およびガスまたは空気１６が充填物３全体にわたって通過する。

図１１に示されるように、外側管状壁４は、外側管状要素２４０によって与えられてもよい。内側長尺壁５は、長尺な円筒管状要素２５０によって与えられてもよい。外側管状要素２４０および長尺な円筒管状要素２５０は、２つの取り外し可能な閉塞体２６１，２６２に固定される。第１の閉塞体２６１には、長手方向４４の軸線に沿って受容体を回転させるための駆動手段に対して受容体を結合するための結合要素２５３が設けられる。第１の閉塞体２６１は、内部空間２を、例えば可撓性チューブに接続するためのコネクタ２６３を更に備える。

一例として、外側管状要素は、例えば１１０ｍｍの長さＬと、例えば１３５ｍｍの内径Ｄｏとを有するガラスチューブであってもよい。内側長尺要素は、例えば８８．９ｍｍの外径Ｄｉを有するフッ化ビニリデン樹脂（ＰＶＤＦ）であってもよい。内側長尺要素の外端、したがって内側長尺壁の外端は、閉塞体２６１，２６２と一致する。閉塞体は、シリコーンを使用して内側要素および外側要素に取り付けられてもよいステンレス鋼またはＰＶＤＦの環状ディスクであってもよい。コネクタ２６３を備えてもよい第１の閉塞体２６１は、例えば約３５ｍｍの外径Ｄｃｅを有する結合要素２５３を有する。

前述したように、内部空間２は少なくとも部分的に充填物３で満たされる。一例として、充填物は、図１０の実施形態における充填物と同一または同様であってもよい。図１１を参照すると理解され得るように、充填物は、図示の実施形態では環状であってもよい仕切り２７０によって画定される区画室内に固定されて収容される。仕切り２７０は、細胞回収を容易にするために、充填状態（図示せず）と非充填状態（図示せず）との間で空間２内を移動するように配置される。移動は、プランジャ２８０などのアクチュエータによって引き起こされてもよい。受容体１は、材料を通じて適切な剥離剤を循環させるために、充填物３と共に非充填状態で回転されてもよく、また、細胞分離を容易にするために振動されてもよい。

図１２を参照すると、細胞を分離するためのシステムの更なる実施形態が開示される。この実施形態では、流体Ｆ中に懸濁されてもよい細胞増殖適合材料１６を保持するための容器３００が提供される。容器３００は、細胞培養容器またはバイオプロセス容器であってもよく、あるいは、使用後に細胞培養容器またはバイオプロセス容器の内容物を受容するための貯留容器であってもよい。容器３００内の流体Ｆは、細胞増殖のための媒体、水または他の洗浄流体、トリプシンなどの化学薬剤、あるいは、これらの任意の組み合わせであってもよい。

材料１６は、粉末、粒子、チップ、ビーズ、または、繊維などのマイクロキャリアの形態を成してもよい。この材料１６は、凝集塊を形成してもよく、あるいは、流体Ｆ中に懸濁した状態であってもよい。１つの実施形態では、採取されるべき細胞が少なくとも部分的に材料１６に付着されてもよい。

容器３００は、充填材料１６からの細胞の除去のために振動に晒されてもよい。効率を最大にするために、振動は、低い振幅および高い周波数であってもよい。前述したように、この振動は、容器３００を振動テーブル３０２上に配置することによって、あるいは、容器３００を手動で振動させることによって達成されてもよい。充填材料１６が振動されるにつれて、細胞が材料１６から除去されるようになり始める。細胞は、その後、流体Ｆ中に懸濁され、材料１６から独立するようになってもよい。

容器３００は、排出ラインＥに関連して使用されてもよいフィルタ３０４を更に含んでもよい。フィルタは、材料１６から分離された細胞を含む細胞が通過できるようにするが材料１６の通過を防止するように寸法付けられてもよい。この場合、フィルタ３０４の下流側の排出ラインＦは、材料１６から分離した採取細胞を含む。

また、容器３００は、ポンプ３０６などの加圧デバイスを含んでもよい。このポンプ３０６は、流体Ｆの液面よりも上側の容器３００内のヘッドスペース３０８内の圧力を増大させてもよい。流体Ｆよりも上側の圧力のこの増大により、流体が排出ラインＥを通じて容器から出てもよく、その結果、流体の液位が下がってもよい。この加圧および流体液位の低下は、振動の印加とは無関係に、または振動の印加と同時に行なわれてもよいが、前述したように、可能であれば、振動を空気−液体界面に集中させる利点が存在してもよい。

図１３を参照すると、材料を一方の収容器から他方の収容器へ無菌態様で移すために使用されてもよいシステム４００が開示される。１つの実施形態において、システムは、可撓性バッグまたは少なくとも部分的に硬質な容器などのバイオプロセス収容器の形態を成してもよい第１の収容器４０２を備えてもよい。第１の収容器は、インペラ、パドル４１２、または、同様のものなどの混合器を含んでもよく、また、流体の付加のためのポート４１４を更に含んでもよい。１つの実施形態において、第１の収容器４０２は、その開示が参照することにより本願に組み入れられる米国特許出願公開第２０１０／００１５６９６号明細書または米国特許第７，３８４，０２７号明細書に記載されるタイプを成してもよい。

システム４００は、第１の収容器４０２に対して恒久的に、または一時的に取り付けられてもよい第２の収容器４０４を更に含んでもよい。第２の収容器４０４は、第１の収容器４０２よりもかなり小さい容積を有してもよく、また、第１の収容器の容積の約１０％以下であってもよい。

第２の収容器４０４は、第１の収容器４０２に加えられてもよい添加剤４１６を含んでもよい。添加剤４１６は、細胞増殖のための栄養素、化学添加剤、または、接着細胞増殖を促進させるための材料など、無菌態様で第１の収容器４０２に加えられてもよい任意の材料であってもよい。添加剤４１６が細胞接着材料である場合、添加剤は、粉末、粒子、チップ、ビーズ、繊維、または、繊維塊の形態を成すキャリアまたはマイクロキャリアなど、前述した任意の形態を成してもよい。添加剤４１６は、第１の収容器４０２内の流体と混和できなくてもよく、また、液体培養媒体などの任意の水性流体と混和できなくてもよい。

１つの実施形態において、システム４００は、第１の収容器４０２と第２の収容器４０４との間にバリアまたはシールを更に含む。バリアは、第２の収容器４０４から第１の収容器４０２への添加剤４１６の通過を可能にするために取り外し可能であってもよい。図１３に示されるように、バリアは、添加剤４１６が第２の収容器４０４から流出するのを防止するクランプまたはクリップ４０６などの取り外し可能なリテーナの形態を成してもよい。

第１の収容器４０２および第２の収容器４０４は、例えば２つの収容器を接続する継ぎ目のない材料などを介して恒久的に接続されてもよい。あるいは、システムは、第１の収容器４０２を第２の収容器４０４に接続するための接続具４０８を含んでもよい。接続具４０８は、第１または第２の収容器４０２，４０４にある１つ以上の延在部を保持するためのクリートの形態を成してもよく、または、第１の収容器と第２の収容器との間のバルブの形態を成してもよい。接続具と関連して、またはシステム４００の任意の部分へのアクセスを伴う任意の他のポートと関連して１つ以上のフィルタ（図示せず）が使用されてもよい。

実際には、第２の収容器４０４は、添加剤４１６で満たされてもよく、また、前述した任意の仕方の場合のように、第１の収容器４０２に接続されてもよい。構成要素が個別に滅菌された後に無菌態様で接続されてもよく、あるいは、システム４００の全体が接続された後に同時に（任意の添加剤を含めて）滅菌されてもよい。いずれにせよ、接続された第１および第２の収容器４０２，４０４は、滅菌される閉じられたシステムを形成する。この閉じられたシステムは、その後、無菌であろうとなかろうと、システム４００内の無菌性に影響を与えない状態で、任意の環境において使用されてもよい。

無菌システム４００は、図１４に示されるような単一のユニットまたはキットとして出荷されてもよい。第１および第２の収容器４０２，４０４のうちの１つ以上は、破損を防ぐためにクッション４２０などの保護層で覆われてもよい。また、システム４００は、単一のユニットとして輸送するためにバッグ４２２などのパッケージ層によって取り囲まれてもよい。

ここで、図１５および図１６を参照すると、システム５００が多位置ドレン５０４を有する容器５０２を含んでもよいことが分かり、多位置ドレン５０４は、流れを防止して容器５０２の内側区画室を密閉するための閉位置と、流れが進行できるようにするための開位置（図示の位置）とを含む。位置は手動または自動で調整されてもよく、また、そのようなことは、この開示の目的にとって重要ではない。そのようなドレンの例は、その開示が参照することにより本願に組み入れられる米国特許出願公開第２０１２／０２６０６０８号明細書において見出されてもよい。

接着細胞増殖を促進させるためのビーズ５１６などのキャリアが存在するときには、流体Ｆが（任意の細胞を含めて）回収される間にこの材料が収容器または容器の区画室内に留まることが望ましい。ドレン５０４がこの目的のために使用される場合には、言うまでもなく、ビーズ５１６または他の材料が、出口としての機能を果たすドレン開口に押し寄せて、所望の態様での流れの進行を妨げる場合がある。材料間で完全ではない相対的なサイズおよび形状に応じて、ビーズ５１６が流出物と共に流出する場合もあり、望ましくない更なるフィルタリングステップを必要とする場合もある。

したがって、開示の１つの態様は、ドレンと、流体Ｆが通過できるようにするが容器５０２の区画室内に任意の接着材料または同様のものを保持するようになっている事前濾過要素５２０とを関連付けることである。図示の実施形態において、この要素５２０は、ビーズ５１６を通過させないようにしつつ流体の通過を可能にするように寸法付けられた開口を有するメッシュ５２２の形態を成す可撓性材料を備える。言うまでもなく、メッシュ５２２のこの構成は、収容器の内部区画室に関連付けられるドレン開口と区画室自体との間にバッファ領域を形成し、したがって、流体の自由な流れを促すのに役立つ透過性バッグ状構造をもたらす。また、メッシュ５２２の可撓性は、例えば揺動または振動などによって容器５０２の外部からメッシュを容易に操作できるようにもする。この操作は、ドレン５０４の一部を形成するフランジ５０４ａを受容するための開口を含んでもよい可撓性混合バッグを容器５０２が備えるときに特に簡略化される。

特定の発明原理の開示にしたがって本明細書中で成される幾つかの実施形態の前述の説明は、例示および説明の目的のために与えられる。説明された実施形態は、包括的であるように意図されておらず、あるいは、本発明を開示された正にその形態に限定しようとするものではなく、また、実際に、開示された実施形態の構成要素の任意の組み合わせが考えられる。リアクタとの関連において本明細書中で使用される用語「可撓性」とは、流体がリアクタ内にあるときに所定の形状を保持する「硬質」構造とは対照的に、補助的な支持がない場合にはリアクタ内に収容される流体の形状に適合し得る構造のことである。先の教示内容に照らして改変または変形が可能である。例えば、仕切り２０が床１４の下部を形成するように示されるが、可動部が上板または側壁にも成り得る。説明された実施形態は、発明の原理およびその実用的な用途の例示を与え、それにより、様々な実施形態で、および考えられる特定の用途に適した様々な改変を伴って当業者が発明を利用できるようにするべく選択された。そのような改変および変形の全ては、それが適正に、合法的に、公正に権利付与される広さにしたがって解釈されるときに本発明の範囲内に入る。

Claims (79)

1. 細胞を処理するための装置であって、
   細胞のための固定床リアクタを備え、前記固定床リアクタが、固定床の充填状態に対応する第１の位置から前記固定床の解放状態に対応する第２の位置へ移動できる可動部を含み、
   仕切りの移動によって、細胞の採取を容易にするように前記固定床が拡張する、装置。
2. 前記可動部が、前記固定床リアクタのうち前記固定床を含む区画室内に配置される仕切りを備える、請求項１に記載の装置。
3. 拡張可能なリテーナであり、前記リテーナの非拡張状態において前記仕切りを前記第１の位置に保持し、前記リテーナの拡張状態において前記仕切りを前記第２の位置に保持するための拡張可能なリテーナを更に含む、請求項１または２に記載の装置。
4. 前記仕切りを前記第１の位置から前記第２の位置へ移動させるためのプランジャを更に含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の装置。
5. 前記プランジャが前記仕切りに連結されている、請求項４に記載の装置。
6. 前記仕切りが、前記固定床リアクタのうち前記固定床を備える区画室の外部の第１の部分と、前記区画室内の第２の部分とを含む、請求項４に記載の装置。
7. 前記固定床リアクタが密閉収容器を備える、請求項１〜６のいずれか一項に記載の装置。
8. 前記固定床リアクタが可撓性外壁を備える、請求項１〜７のいずれか一項に記載の装置。
9. 前記固定床を含む第１の区画室と、前記第１の区画室を通じて流体を循環させるための第２の区画室とを更に含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の装置。
10. 前記固定床リアクタがローラーボトルを備える、請求項１〜９のいずれか一項に記載の装置。
11. 細胞を処理するための装置であって、
    前記細胞の増殖に適合する媒体を含む収容器と、前記細胞のための内部区画室と関連付けられる仕切りとを備え、前記仕切りが、第１の容積を前記内部区画室に与えるための第１の位置から、前記第１の容積よりも大きい第２の容積を前記内部区画室に与える第２の位置へ移動できる、装置。
12. 前記媒体が前記内部区画室内の充填材料を構成している、請求項１１に記載の装置。
13. 前記仕切りが、前記第２の位置で前記内部区画室の下部を形成している、請求項１１または１２に記載の装置。
14. 前記収容器が端壁を含み、前記仕切りが、前記第２の位置よりも前記第１の位置において前記端壁に近づけられる、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の装置。
15. 拡張可能なリテーナであり、前記リテーナの非拡張状態において前記仕切りを前記第１の位置に保持し、前記リテーナの拡張状態において前記仕切りを前記第２の位置に保持するための拡張可能なリテーナを更に含む、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の装置。
16. 前記拡張可能なリテーナがスプリングを備える、請求項１５に記載の装置。
17. 前記仕切りを前記第１の位置から前記第２の位置へ移動させるためのプランジャを更に含む、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の装置。
18. 前記プランジャが前記仕切りに連結されている、請求項１７に記載の装置。
19. 前記仕切りが、リアクタのうち固定床を含む区画室の外部の第１の部分と、前記区画室内の第２の部分とを含む、請求項１１〜１８のいずれか一項に記載の装置。
20. 前記内部区画室を通じて流体を循環させるための外部区画室を更に含む、請求項１１〜１９のいずれか一項に記載の装置。
21. 前記仕切りが略環状である、請求項１１に記載の装置。
22. 細胞を処理するための装置であって、
    流体を受容するための内部を形成する側壁を含む収容器と、前記収容器の内部に配置され、前記細胞のための固定床を含む拡張可能な区画室とを備える、装置。
23. 前記拡張可能な区画室が、前記収容器の内部の外部区画室によって取り囲まれている、請求項２２に記載の装置。
24. 前記拡張可能な区画室が内部区画室を取り囲んでいる、請求項２２に記載の装置。
25. 前記側壁が少なくとも部分的に可撓性である、請求項２２に記載の装置。
26. 振動器を更に含む、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の装置。
27. 流体をリアクタ内で循環させるためのデバイスを更に含む、請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の装置。
28. 前記デバイスが磁気撹拌器を備える、請求項２７に記載の装置。
29. 前記磁気撹拌器が前記リアクタの区画室内に配置されている、請求項２８に記載の装置。
30. 複数の細胞を更に含む、請求項２２〜２９のいずれか一項に記載の装置。
31. 固定位置から細胞を分離するための剥離剤を更に含む、請求項２２〜３０のいずれか一項に記載の装置。
32. 液体を使用して細胞を処理するための装置であって、
    前記細胞を増殖させるための床を含むリアクタと、
    前記床を振動させるための振動器と、
    空気−液体界面を前記床内に形成するように前記リアクタから流体を少なくとも部分的に排出するためのドレンと、
    を備える、装置。
33. 前記振動器が、前記リアクタを支持するための振動テーブルを備える、請求項３２に記載の装置。
34. 前記床が固定床を構成しており、前記リアクタが、前記固定床の充填状態に対応する第１の位置から前記固定床の解放状態に対応する第２の位置へ移動できる仕切りを含み、
    前記仕切りの移動によって、前記固定床からの細胞の採取を容易にするように前記固定床が拡張する、請求項３２または３３に記載の装置。
35. 固定床リアクタ内で細胞を処理する方法であって、
    固定床を解放するステップと、
    解放後に、前記固定床リアクタから細胞を採取するステップと、
    を備える方法。
36. 前記採取するステップが、剥離剤を前記固定床リアクタに供給するステップ、前記固定床リアクタを振動させるステップ、前記固定床リアクタを叩くステップ、または、これらの組み合わせを備える、請求項３５に記載の方法。
37. 前記解放するステップが、前記固定床リアクタのうち前記固定床を含む区画室を拡張させるステップを備える、請求項３５に記載の方法。
38. 前記解放するステップが、前記固定床の充填材料を支持する仕切りを移動させるステップを備える、請求項３５に記載の方法。
39. 前記解放するステップが、前記仕切りを下降させるステップを備える、請求項３８に記載の方法。
40. 空気−液体界面を有する床を含むリアクタを使用して細胞を処理する方法であって、
    前記床を振動させるステップを備える方法。
41. 前記床を振動させるステップが、前記床を含む前記リアクタを振動させるステップを備える、請求項４０に記載の方法。
42. 前記振動させるステップが、前記リアクタを振動テーブル上に配置するステップを備える、請求項４０に記載の方法。
43. 前記振動させるステップが、前記リアクタを叩くステップを備える、請求項４０に記載の方法。
44. 前記振動させるステップ中に前記空気−液体界面を移動させるステップを更に含む、請求項４０〜４３のいずれか一項に記載の方法。
45. 前記床を濯ぐステップの後に、前記振動させるステップを繰り返すステップを更に含む、請求項３４に記載の方法。
46. 前記振動させるステップ中に前記リアクタを回転させるステップを更に含む、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載の方法。
47. 流体中のキャリアに付着される細胞を処理するためのシステムであって、
    前記細胞、前記キャリア、および、前記流体を受容するための収容器であり、前記収容器が前記流体を放出するための少なくとも１つのポートを含む、収容器と、
    前記収容器を振動させるための振動器と、
    前記ポートと関連付けられるフィルタであり、前記フィルタが前記細胞を通すが前記キャリアを通さないようになっている、フィルタと、
    を備えるシステム。
48. 前記収容器内のうち前記流体よりも上側のヘッドスペース内の圧力を増加または減少させるためのポンプを更に含む、請求項４７に記載のシステム。
49. 前記収容器からの流体を前記フィルタに通すための排出ラインを更に含む、請求項４７または４８に記載のシステム。
50. 前記ポートが多位置ドレンを備え、前記フィルタは、前記多位置ドレンを取り囲むとともに前記流体を通すが前記キャリアを通さないようになっている可撓性材料を備える、請求項４７〜４９のいずれか一項に記載のシステム。
51. 前記可撓性材料がメッシュ材料を備える、請求項５０に記載のシステム。
52. キャリア上で細胞を培養するようになっている装置であって、
    前記キャリアよりも大きいドレン開口を有するドレンを含む容器と、前記ドレン開口を流体が通るが前記キャリアが通らないようになっているフィルタとを備える装置。
53. 前記フィルタが、前記ドレン開口を取り囲む可撓性材料を備える、請求項５２に記載の装置。
54. 前記可撓性材料がメッシュを備える、請求項５３に記載の装置。
55. 流体中のキャリアに付着される細胞を処理するための方法であって、
    前記細胞、前記キャリア、および、前記流体を受容するための収容器を用意するステップであり、前記収容器が前記流体を除去するための少なくとも１つのポートを含む、ステップと、
    前記キャリアから前記細胞を分離するために前記収容器を振動させるステップと、
    分離された前記細胞が前記流体と共に除去されるとともに前記キャリアが前記流体と共に除去されないように、前記収容器から除去される前記流体から前記キャリアを濾過するステップと、
    を備える方法。
56. 前記濾過するステップが、前記ポートを通じて流体を除去するとともに、前記キャリアよりも小さく前記細胞よりも大きい孔径を有するフィルタに前記流体を通すステップを備える、請求項５５に記載の方法。
57. 前記収容器を加圧して前記流体を除去するステップを更に備える、請求項５５または５６に記載の方法。
58. 前記加圧するステップが、前記収容器と連通するポンプを設けて、前記流体よりも上側のヘッドスペース内に圧力を印加するステップを備える、請求項５７に記載の方法。
59. 前記振動させるステップと前記加圧するステップとが同時に行なわれる、請求項５５〜５８のいずれか一項に記載の方法。
60. バイオプロセスに関連して用いるキットであって、
    第１の内部を含む滅菌済みの第１の収容器と、
    前記第１の収容器に接続される滅菌済みの第２の収容器であり、前記第２の収容器が第２の内部を含み、前記第２の収容器は、前記第１の収容器に加えるための添加剤を前記第２の収容器の前記第２の内部に含む、第２の収容器と、
    前記添加剤を前記第２の収容器に閉じ込めるように前記第１の収容器と前記第２の収容器との間にある取り外し可能なバリアと、
    前記第１の収容器および前記第２の収容器を収容するためのパッケージと、
    を備えるキット。
61. 前記バリアが取り外し可能なクランプを備える、請求項６０に記載のキット。
62. 前記添加剤が流体と混和できない、請求項６０または６１に記載のキット。
63. 前記第１の収容器がバイオプロセス容器である、請求項６０または６２に記載のキット。
64. 前記バイオプロセス容器が可撓性バッグを備える、請求項６３に記載のキット。
65. 前記バイオプロセス容器が混合器を含む、請求項６３または６４に記載のキット。
66. 流体に関連して細胞を処理するためのキットであって、
    第１の内部を含む滅菌済みの第１の収容器と、
    前記第１の収容器に接続される滅菌済みの第２の収容器であり、前記第２の収容器が第２の内部を含む、第２の収容器と、
    前記第２の収容器の前記第２の内部にある添加剤であり、前記添加剤が前記流体と混和できない、添加剤と、
    前記第１の収容器と前記第２の収容器との間にある取り外し可能なバリアと、
    を備えるキット。
67. 前記添加剤が、増殖されるべき細胞を支持するようになっている材料を備える、請求項６６に記載のキット。
68. 前記第２の収容器内に混合器を更に含む、請求項６３または６４に記載のキット。
69. 前記第２の収容器が前記第１の収容器の外部にある、請求項６６〜６８のいずれか一項に記載のキット。
70. 流体に関連して細胞を処理するためのキットであって、
    混合器を有する第１の内部を含む滅菌済みの第１の収容器と、
    前記第１の収容器に接続され、前記第１の内部の外部にある滅菌済みの第２の収容器であり、前記第２の収容器が第２の内部を含む、第２の収容器と、
    前記第２の内部にある添加剤と、
    前記第１の収容器と前記第２の収容器との間にある取り外し可能なバリアと、
    を備えるキット。
71. 流体中のキャリアに付着される細胞を処理するためのシステムであって、
    前記キャリアと前記流体とを含む請求項６０〜７０のいずれか一項に記載の第１の収容器と、
    前記第１の収容器を振動させる振動器と、
    前記流体から細胞を濾過するために前記細胞よりも大きく前記キャリアよりも小さいサイズの孔を備えるフィルタと、
    を備えるシステム。
72. 前記第１の収容器を加圧するための圧力源を更に含む、請求項７１に記載のシステム。
73. 流体と共に用いるためのバイオプロセスシステムを用意する方法であって、
    第１の収容器を第２の収容器に取り付けるステップであり、前記第２の収容器が前記流体と混合できない添加剤を含む、ステップと、
    取り付けられた前記第１の収容器および前記第２の収容器を一緒に滅菌するステップと、
    滅菌済みの前記第１の収容器および前記第２の収容器を輸送のために包装するステップと、
    を備える方法。
74. 前記包装するステップが、取り付けられた前記第１の収容器および前記第２の収容器とバリアとを取り囲むための第３の収容器を用意するステップを更に含む、請求項７３に記載の方法。
75. 前記第１の収容器に混合器を設けるステップを更に含む、請求項７３または７４に記載の方法。
76. 前記第１の収容器および前記第２の収容器の包装を解くステップと、バリアを除去して前記第１の収容器へ前記添加剤を供給するステップと、前記第１の収容器へ流体を加えるステップと、前記流体を混合するステップと、前記流体を回収するステップとを更に含む、請求項７３〜７５のいずれか一項に記載の方法。
77. 前記流体中で細胞を増殖させるステップを更に含み、前記回収するステップは、前記第１の収容器からの前記添加剤の通過を防止しつつ前記細胞を通すことができるようになっているフィルタに前記第１の収容器からの前記流体を通すステップを備える、請求項７６に記載の方法。
78. 前記回収するステップ中に前記第１の収容器を加圧するステップを更に含む、請求項７３〜７７のいずれか一項に記載の方法。
79. 前記回収するステップの前または最中に前記第１の収容器を振動させるステップを更に含む、請求項７３〜７７のいずれか一項に記載の方法。

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