JP2015512259A5 - - Google Patents
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Description
本発明は組換えタンパク質の製造方法であり、(a)前記組換えタンパク質をコードする核酸で形質転換された原核宿主細胞を発酵させること、(b)前記組換えタンパク質をdO2濃度が0%より高い条件下で収集すること、及び(c)前記組換えタンパク質をFBSへ精製することとを含み、前記濾過バルクは、310nmでのIECアッセイによって測定して、検出可能なDHNA−リコンビナントタンパク質付加体を含まず、dO2はオーバーレイもしくはスパージドエアー、背圧の上昇、又は撹拌(すなわち、かき混ぜること)で維持される、組換えタンパク質の製造方法を企図している。一実施態様で、オーバーレイエアーは約0.4vvmから約0.8vvmである。別の実施態様では、オーバーレイエアーのターゲットは0.6vvmである。別の実施態様では、背圧の上昇は約1.0から30psiである。一実施態様では、背圧の上昇のターゲットは19psiである。さらに別の実施態様では、撹拌速度は約6ワット/リットルから8ワット/リットルである。さらに別の実施態様では、撹拌速度は少なくとも6ワット/リットルである。別の実施態様では、撹拌速度のターゲットは6ワット/リットルである。
Claims (22)
- 組換えタンパク質の製造方法であって、(a)前記組換えタンパク質をコードする核酸で形質転換された原核宿主細胞を発酵させること、(b)溶存酸素(dO2)濃度が0%より高い条件下で前記組換えタンパク質を収集すること、及び(c)前記組換えタンパク質を保存用濾過バルク(FBS)へと精製することとを含み、前記濾過バルクが、310nmでのイオン交換クロマトグラフィー(IEC)アッセイにより測定して、検出可能な1,4−ジヒドロキシ−2−ナフトエ酸(DHNA)−リコンビナントタンパク質付加体を含まない、組換えタンパク質の製造方法。
- 前記分析的アッセイが、HPLC、RP−HPLC、HIC−HPLC、NMR、質量分析法、又はUV分光法によるものである、請求項1に記載の方法。
- 前記dO2が工程(b)の収集操作の間、一貫して0%より高い濃度に維持されている、請求項1に記載の方法。
- 収集操作がホモジナイズ工程を含む、請求項3に記載の方法。
- 前記dO2がホモジナイズ前に約30%〜約75%に維持されている、請求項4に記載の方法。
- 前記dO2がホモジナイズ前に75%より高い濃度に維持されている、請求項4に記載の方法。
- 前記dO2がホモジナイズ後に約50%に維持されている、請求項4又は5に記載の方法。
- 前記dO2がホモジナイズ後に50%より高い濃度に維持されている、請求項4又は5に記載の方法。
- 前記dO2が1.5時間以上の間維持される、請求項5に記載の方法。
- 前記dO2が2時間以上の間維持される、請求項6に記載の方法。
- 前記dO2がオーバーレイエアーもしくはスパージドエアー、背圧の上昇、又は撹拌速度で維持される、請求項1〜10の何れか一項に記載の方法。
- オーバーレイエアーが約0.4vvmから約0.8vvmである、請求項11に記載の方法。
- オーバーレイエアーのターゲットが0.6vvmである、請求項12に記載の方法。
- 背圧の上昇が約1.0〜30psiである、請求項11に記載の方法。
- 背圧の上昇のターゲットが19psiである、請求項14に記載の方法。
- 撹拌速度が約6ワット/リットルから約8ワット/リットルである、請求項11に記載の方法。
- 撹拌速度のターゲットが約6ワット/リットルである、請求項16に記載の方法。
- 組換えタンパク質の製造方法であって、(a)前記組換えタンパク質をコードする核酸で形質転換された、menE遺伝子を欠損した原核宿主細胞を発酵させること、(b)前記組換えタンパク質を収集すること、(c)前記組換えタンパク質をFBSへと精製することとを含み、前記濾過バルクが、310nmでのイオン交換クロマトグラフィー(IEC)アッセイにより測定して、検出可能な1,4−ジヒドロキシ−2−ナフトエ酸(DHNA)−リコンビナントタンパク質付加体を含まない、組換えタンパク質の製造方法。
- 組換えタンパク質の収率が、対照原核宿主細胞使用時の収率と比較して約20%以上増、約30%以上増、約40%以上増、約50%以上増、約60%以上増である、請求項18に記載の方法。
- 発酵がスケール非依存的である、請求項1〜19に記載の方法。
- 前記組換えタンパク質が組換えポリペプチド又は単離された抗体である、請求項1〜20の何れか一項に記載の方法。
- 前記原核宿主細胞が、大腸菌(E.coli)、エンテロバクター属、アゾトバクター属、エルウィニア属、バシラス属、シュードモナス属、クレブシエラ属、プロテウス属、サルモネラ属、セラチア属、赤痢菌、根粒菌、ビトレオシラ属、及びパラコッカス属である、請求項1〜21の何れか一項に記載の方法。
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