JP2015221851A - 粘着剤組成物、細胞支持用基材、細胞培養用基材、並びに、細胞の培養方法 - Google Patents

Abstract

【課題】細胞毒性を示さない粘着剤組成物を提供する。
【解決手段】反応性基と炭素数が４以上の残基からなるモノマーを重合させて生成する、生存細胞を接着させるための粘着剤組成物が提供される。前記モノマーは、アクリル酸エステルであることが好ましい。該粘着剤組成物によって細胞支持面を構成したことを特徴とする細胞支持用基材、該細胞支持用基材からなることを特徴とする細胞培養用基材、及び該細胞培養用基材に細胞を接着させて、前記細胞を培養することを特徴とする細胞の培養方法も提供される。
【選択図】なし

Description

本発明は、粘着剤組成物、細胞支持用基材、細胞培養用基材、並びに、細胞の培養方法に関する。本発明の粘着剤組成物は、細胞毒性を示さないものである。

接着性細胞を支持体から回収する場合に、細胞への負担をできるだけ小さくしたまま個々の細胞と選別・回収したいという要望がある（例えば、特許文献１）。この目的を達成するための研究課題として、細胞剥離が容易に行える基材の材料を開発することが挙げられる。

また、細胞への負担をできるだけ小さくするためには、前記した基材の材料自体が細胞に対して損傷等を与えないもの、例えば細胞毒性を示さないものであることも求められる。例えば特許文献２，３では、細胞毒性が低い細胞培養基材について検討されている。

国際公開第２００８／１１４８２８号 特開２００２−２５３２０４号公報 特開２００６−５５１５７号公報

本発明者らは、接着性細胞を接着させるための新たな基材材料として、粘着性を有するポリマーに着目し、種々の検討を行った。その過程において、粘着剤には細胞毒性を示すものが存在し、細胞接着用の基材材料として適用できるものは一部に限られることを見出した。

上記した知見に基づいて提供される本発明の１つの様相は、反応性基と炭素数が４以上の残基からなるモノマーを重合させて生成する、生存細胞を接着させるための粘着剤組成物である。

本発明は生存細胞を接着させる粘着剤組成物に係るものであり、反応性基と炭素数が４以上の残基からなるモノマーを重合させて生成するものである。本発明の粘着剤組成物は細胞毒性を示さず、細胞支持用の基材材料として適している。

好ましくは、前記モノマーは、アクリル酸エステルである。アクリル酸エステル（ＣＨ₂＝ＣＨ−ＣＯＯ−Ｒ）の場合、残基とは−Ｒのことをいう。

好ましくは、前記モノマーはアミノ基を有する。

本発明の他の様相は、上記構成の粘着剤組成物によって細胞支持面を構成したことを特徴とする細胞支持用基材である。

本発明は細胞支持用基材に係るものであり、細胞支持面が上記構成の粘着剤組成物によって構成されている。本発明の細胞支持用基材によれば、生存細胞に損傷等の負担を与えることなく生存細胞を支持することができる。

本発明の他の様相は、上記構成の細胞支持用基材からなることを特徴とする細胞培養用基材である。

本発明は細胞培養用基材に係るものであり、上記構成の細胞支持用基材からなることを特徴とする。本発明の細胞培養基材によれば、細胞に損傷等の負担を与えることなく細胞を培養することができる。

本発明の他の様相は、上記構成の細胞培養用基材に細胞を接着させて、前記細胞を培養することを特徴とする細胞の培養方法である。

本発明は細胞の培養方法に係るものであり、上記構成の細胞培養用基材に細胞を接着させて細胞を培養する。本発明の細胞の培養方法によれば、細胞に損傷等の負担を与えることなく細胞を培養することができる。

本発明の粘着剤組成物によれば、細胞毒性を示さない細胞支持用の基材材料を提供することができる。

本発明の細胞支持用基材及び細胞培養用基材は、細胞毒性を示さないので、基材上の細胞に対して損傷等を与えることがない。

本発明の細胞の培養方法では、細胞毒性を示さない基材を用いるので、培養細胞に対して損傷等を与えることがない。

本発明の粘着剤組成物は、生存細胞を接着させるための粘着剤組成物であって、反応性基と炭素数が４以上の残基からなるモノマーを重合させて生成するものである。
反応性基と炭素数が４以上の残基からなるモノマーの例としては、重合により粘着剤を生成するものであれば特に限定はなく、ブタジエンなどの脂肪族共役ジエン；スチレン、α−メチルスチレン、（ｔ−ブチル）スチレン、クロロスチレン、シアノスチレンおよびブロモスチレンなどのモノビニリデン芳香族モノマー；ブチルアクリレートなどのα，β−エチレン性不飽和カルボン酸のアルキルエステル；アクリロニトリル、無水マレイン酸、アクリルアミド、などのα，β−エチレン性不飽和ニトリル、無水物およびアミド；ビニルアセテートなどのビニルエステル；また、ビニルエーテル、ビニルケトン、ビニルおよびビニリデンハライド、等が挙げられる。

生存細胞を接着させる接着剤組成物は、表面が電荷を帯びているのが好ましい。接着剤組成物の表面が電荷を帯びているためには、接着剤組成物を構成するポリマーにアミノ基を有することが好ましい。アミノ基を有するポリマーとしてアミノエチルアクリルポリマーが挙げられる。

好ましくは、残基の炭素数が４以上であるアクリル酸エステルが上記モノマーとして用いられる。該アクリル酸エステルの例としては、アクリル酸ブチル（ブチルアクリレート）、アクリル酸イソボルニル、アクリル酸シクロヘキシル、アクリル酸ジシクロペンタニル、アクリル酸シクロドデシル、アクリル酸メチルシクロヘキシル、アクリル酸トリメチルシクロヘキシル、アクリル酸ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル、α−エトキシアクリル酸シクロヘキシル、アクリル酸シクロヘキシルフェニル、メタクリル酸イソボルニル、メタクリル酸シクロヘキシル、メタクリル酸ジシクロペンタニル、メタクリル酸シクロドデシル、メタクリル酸メチルシクロヘキシル、メタクリル酸トリメチルシクロヘキシル、メタクリル酸ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル、メタクリル酸シクロヘキシルフェニル、等が挙げられる。そして、例えば、残基の炭素数が４以上であるアクリル酸エステルを主モノマーとして用いた共重合体が、本発明の粘着剤組成物の例として挙げられる。

なお、残基の炭素数が少ないモノマーを用いた粘着剤組成物が細胞毒性を示す原因としては、重合反応せずに残ったモノマーの存在が考えられる。

本発明の粘着剤組成物は、溶液重合、塊状重合、乳化重合、各種ラジカル重合などの公知の方法で製造することができる。

本発明の粘着性組成物には、その性能を損なわない範囲内において、必要に応じて他の成分を含有させてもよい。他の成分としては、シランカップリング剤、タッキファイヤー、フィラー粒子、架橋剤、光応答性ガス発生剤、光増感剤、等が挙げられる。

シランカップリング剤の具体例としては、Ｎ−２−（アミノエチル）−３−アミノプロピルメチルジメトキシシラン、Ｎ−２−（アミノエチル）−３−アミノプロピルトリメトキシシラン、Ｎ−２−（アミノエチル）−３−アミノプロピルトリエトキシシラン、Ｎ，Ｎ'−ビス［（３−トリメトキシシリル）プロピル］エチレンジアミン、３−アミノプロピルトリメトキシシラン、等が挙げられる。これら以外のシランカップリング剤を用いてもよく、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。

光応答性ガス発生剤として用いられる化合物としては、２，２'−アゾビス（Ｎ−シクロヘキシル−２−メチルプロピオンアミド）、２，２'−アゾビス［Ｎ−（２−メチルプロピル）−２−メチルプロピオンアミド］、４−ドデシルベンゼンスルフォニルアジド等のアゾ化合物が具体例として挙げられる。これらの化合物は、特定の波長域の光又は熱等の外部刺激を受けることにより窒素ガスを発生させる。

光増感剤の具体例としては、例えば、チオキサントン、ベンゾフェノン、アセトフェノン類等が挙げられる。これらの光増感剤は、単独で用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。

なお、光応答性ガス発生剤を含有させておくと、細胞を粘着剤組成物から剥離させる際、光応答性ガス発生剤から発生したガスが、細胞の剥離を容易にさせる。

本発明の粘着剤組成物の用途としては、接着性細胞用の支持体としての用途が挙げられる。例えば、本発明の粘着剤組成物からなる成形体や、本発明の粘着剤組成物からなる粘着層を有する粘着テープや粘着シートを、接着性細胞用の支持体として用いることができる。本発明は、上記構成の粘着剤組成物によって細胞支持面を構成した細胞支持用基材を包含する。

上記構成の細胞支持用基材は、細胞培養用基材として使用できる。本発明は、上記構成の細胞支持用基材からなる細胞培養用基材を包含する。さらに、該細胞培養用基材に細胞を接着させて、前記細胞を培養する細胞の培養方法を包含する。

本発明の対象となる細胞としては特に限定はなく、接着性細胞であれば全てが対象となり得る。例えば、ｉＰＳ細胞；ＥＳ細胞；ヒト子宮頸がん由来のＨｅｌａ；ヒト乳腺癌由来のMCF-7；胎児細胞由来の有核赤血球や胎児白血球；Ｔ細胞白血病由来のJurkat、HD-Mar2、SKW-3；Ｂ細胞白血病由来のNALM-6；白血病由来のHL-60；ラット副腎髄質由来ＰＣ１２；アフリカミドリザル腎臓由来COS-1やCOS-7；チャイニーズハムスター卵巣由来CHO/HGPRT、などの細胞が挙げられる。

以下、実施例をもって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。

表１に示す組成にて、２種の粘着剤組成物（実施例、比較例）を作製した。

（実施例）
ブチルアクリレート（残基の炭素数：４）９６重量部とアクリル酸４重量部のアクリル系共重合体（重量平均分子量８０万）を作製した。次に、そのアクリル系共重合体１００重量部と、溶剤としての酢酸エチル２００重量部と、架橋剤としてのエポキシ系化合物（綜研化学社製、商品名Ｅ−ＡＸ）１重量部と、ガス発生剤としてグリシジルアジドポリマー（ＧＡＰ）（日油社製）、光増感剤としてのイソプロピルチオキサントン（東京化成社製）２重量部とを混合し、混合液を離型処理したＰＥＴフィルムに塗布し、１１０℃で５分加熱し、厚さ５０μｍのフィルム状の粘着性組成物を得た。

（比較例）
ブチルアクリレートの代わりに、メチルメタクリレート（残基の炭素数：１）を用いたこと以外は実施例と同じにした。

各粘着性組成物について細胞毒性試験を行った。すなわち、得られたフィルム状の粘着性組成物５ｃｍ×５ｃｍを貼り付けた直径９ｃｍのシャーレに、細胞懸濁液（細胞濃度：５０万個／ｍＬ）を１００μＬ加え、室温３７℃，二酸化炭素濃度５％，湿度９８％の環境下７２時間静置した。取り出したシャーレを顕微鏡で観察し、細胞の生死を確認した。
その結果、実施例の粘着剤組成物は細胞毒性を示さず、一方、比較例の粘着剤組成物は細胞毒性を示した。

Claims (6)

1. 反応性基と炭素数が４以上の残基からなるモノマーを重合させて生成する、生存細胞を接着させるための粘着剤組成物。
2. 前記モノマーは、アクリル酸エステルであることを特徴とする請求項１に記載の粘着剤組成物。
3. 前記モノマーはアミノ基を有することを特徴とする請求項１又は２に記載の粘着剤組成物。
4. 請求項１〜３のいずれかに記載の粘着剤組成物によって細胞支持面を構成したことを特徴とする細胞支持用基材。
5. 請求項４に記載の細胞支持用基材からなることを特徴とする細胞培養用基材。
6. 請求項５に記載の細胞培養用基材に細胞を接着させて、前記細胞を培養することを特徴とする細胞の培養方法。