JP6578919B2

JP6578919B2 - 細胞培養用部材

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Publication number: JP6578919B2
Application number: JP2015238842A
Authority: JP
Inventors: 荻原直人; 柏村岳
Original assignee: Toyo Ink SC Holdings Co Ltd
Current assignee: Toyo Ink SC Holdings Co Ltd
Priority date: 2015-12-07
Filing date: 2015-12-07
Publication date: 2019-09-25
Anticipated expiration: 2035-12-07
Also published as: JP2017104028A

Description

本発明は、新規な生体適合性樹脂と熱可塑性樹脂とを溶融混練して得られる細胞培養用部材に関する。

近年、細胞工学の発展や再生医療に注目が集まっており、生体外にて細胞を適切な形で培養し、創薬研究や治療への応用、生体反応モデルとして使用する試みが活発に行われている。このような目的において、創薬研究や再生医療研究のツールの１つである細胞培養用部材の開発においては、一般的にはコラーゲン、ポリスチレンおよびポリメチルメタクリレートが良好であることが知られており、中でもポリスチレンが細胞毒性の低さと経済性、加工性に優位性があり、現行の組織培養においてはポリスチレンを親水化処理したものが使用されている。

ポリスチレン表面に親水性を付与する方法としては、減圧した空気、アルゴンガス等の雰囲気下で高電圧をかけ、プラズマを発生させて表面にラジカルを生成させ、このラジカルに水蒸気や酸素を接触反応させ、水酸基やカルボキシル基などの親水性の官能基を生成させる方法が利用されている。しかしながら、このような方法では、プラズマ処理後、ポリスチレン表面は徐々に疎水性に変化していき、親水性な表面状態を保持できないという問題があった。また、このような培養部材では細胞の進展、増殖は認められるものの、細胞の機能維持に有利とされている３次元的な細胞構造を形成させることができないため、細胞凝集塊を形成させるような高分子材料が求められている。

こうした問題点を背景に、優れた生体適合性高分子材料の実現を目指して、数多くの表面設計方法が研究されてきた。

生体適合性高分子の表面としては、ミクロ相分離表面、親水性表面、両性イオン型分子を含む細胞膜に類似した表面構造などの有効性が報告されている。例えば、ホスホベタイン型であるリン脂質極性基を持つ２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）を一成分として有するポリマーは、基材表面に処理すると超親水性の表面が得られ、該表面にはリンパ球などの細胞が全く接着しないため、人工心肺、ステント、コンタクトレンズ、細胞培養基材など様々な医療製品の表面処理剤として利用されている。また、２−メトキシエチルアクリレートもシンプルな化学構造であるものの、ＭＰＣポリマーと同様に生体適合性を示す高分子材料であることから、人工心肺をはじめとする多くの医療機器の表面処理剤として製品化されている。

その他の生体適合性材料としては、ポリエチレンオキサイド部分（以下、ＰＥＧと略すことがある）を組み込んだ樹脂が多く検討されている。ＰＥＧは、高い親水性と低い抗原性を有し、従来から非イオン性界面活性剤、可塑剤、医薬品基材などとして用いられてきた。しかし、ＰＥＧは非常に優れた血液適合性を有する一方、水溶性であるため、医療用材料として使用する場合は、他のポリマーとのブロック共重合体やグラフト共重合体にして使用する必要がある。

このような要求に応えるため、ＰＥＧ鎖を主鎖や側鎖に組み込んだポリマーの利用が提案されている。例えば、ＰＥＧ鎖を主鎖に組み込んだポリマーとして、特許文献１にはＰＥＧ含有ポリエステルの利用が、特許文献２にはＰＥＧ含有液晶性ポリエステルの利用が開示されている。また、特許文献３にはＰＥＧ含有ポリアミドの利用が、特許文献４にはＰＥＧ含有ポリイミドの利用が、特許文献５にはアルキル鎖を側鎖に有するＰＥＧ共重合体がそれぞれ開示されている。また、ＰＥＧ鎖を側鎖に組み込んだポリマーとしては、特許文献６に開示されるようなアクリル樹脂が提案されている。

また、特許文献７では、本発明のようにＰＥＧ鎖を主鎖に組み込んだアクリル樹脂が開示されているが、本発明で取り上げる生体適合性に関する記載や、細胞非接着性の熱可塑性樹脂と前記アクリル樹脂を溶融混練して成型する記載は一切ない。

特開平９−２９００１９号公報特開平１１−１１４０５０号公報特開平９−３０２２２３号公報特開平６−１４９８９号公報特開２００５−２８１６６５号公報ＷＯ２００４／８７２２８特開２００７−７７２９２号公報

本発明の目的は、血漿タンパクの吸着性、溶血性、細胞接着性の低い表面性状が安定している細胞培養用部材を提供することにある。

一般に、ＰＥＧは高い運動性や生体内の極性基と強く相互作用する遊離水酸基により、血液接触時に補体活性化を誘発し、フィブリン形成促進による血栓形成の要因になるとされており、安全性が重視される医療用材料への利用は適切ではない。そこで、本発明者らはＰＥＧをブロック重合体の主鎖に組み込むことにより、ＰＥＧの末端に存在する水酸基の部分数や過度の運動性を減少させ、ＰＥＧが有する親水性や柔軟性を維持しつつも血栓形成の問題が改善された、生体適合性に優れたポリマーの検討を行った。その結果、水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）の平均値が０以上、２以下であるアクリル系モノマーを用いてアクリル系ポリマー部分（Ａ１）とポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）とを有するブロック重合体体を形成すると、前記ブロック重合体はＰＥＧの特性を維持したまま、良好な血液適合性および細胞非接着性を発現し、細胞接着性の熱可塑性樹脂と溶融混練して射出成型することで、素材表面が安定化した細胞培養用部材を提供することができた。

即ち、本発明は、細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）と細胞接着性の熱可塑性樹脂とを含む細胞培養用部材（１）であって、
前記細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）樹脂が、水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）の平均値が０以上、２以下であるアクリル系モノマーから形成されるアクリル系ポリマー部分（Ａ１）と、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）とが、下記式（Ｉ）で結合してなるブロック重合体（Ａ）である、
細胞培養用部材（１）に関する。

前記の細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）に含まれる、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）の質量／［アクリル系ポリマー部分（Ａ１）とポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）との合計の質量］＝０．０１〜０．５であることが好ましい。

前記の細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）が、下記一般式（II）にて示されるポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）を有し、質量平均分子量が５，０００〜１０万である高分子アゾ系重合開始剤を用いてアクリル系モノマーを重合してなるブロック重合体であることが好ましい。式中、ｍ、ｎは１以上の整数を示す。

前記アクリル系ポリマー部分（Ａ１）が、水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）が０以上２以下であるアクリル系モノマーのみから形成されるホモポリマー部分もしくはコポリマー部分であることが好ましい。

また、本発明は、水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）の平均値が０以上、２以下であるアクリル系モノマーから形成されるアクリル系ポリマー部分（Ａ１）と、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）とが、下記式（Ｉ）で結合してなる細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）と、細胞接着性の熱可塑性樹脂とを、混練し成型することを特徴とする、細胞培養用部材（１）の製造方法に関する。

ＰＥＧと特定のアクリル系ポリマー部分により主として構成されているブロック重合体（Ａ）は、血漿タンパクの吸着性、細胞接着性が低く、かつ、細胞接着性の熱可塑性樹脂と溶融混練して成型する際の加工性等が良好である。本発明により、従来のプラズマ処理後の表面経時変化という問題点が解決され、表面性状を安定することができる。

＜ブロック重合体（Ａ）＞
ブロック重合体（Ａ）は、水／１−オクタノール分配係数（ｃＬｏｇＰｏｗ：以下ＬｏｇＰ）の平均値が０以上、２以下（以下、０〜２）であるモノマーから形成されるアクリル系ポリマー部分（Ａ１）とポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）とを有する。各ブロック（Ａ１）と（Ａ２）は、それぞれが１以上含まれていればよく、両ブロックが交互に含まれていてもよい。

このブロック重合体は、生体適合性を有する生体適合性ブロック重合体であり、且つ、血漿タンパクの吸着性、溶血性、細胞毒性が低いので、上記の体液接触用医療用具に特に好ましく用いられる、体液接触用医療用具用の生体適合性ブロック重合体である。ここで、「ブロック重合体」は「ブロック共重合体」と同義である。
アクリル系ポリマー部分は、アクリル系モノマーの重合体ブロックであり、このブロック部分は、アクリル系モノマーのホモポリマーでも、アクリル系モノマーのコポリマーでもどちらでも良い。コポリマーの場合、交互共重合、ランダム共重合、又はブロック共重合のいずれの形式でも良い。

ＬｏｇＰは、化学物質の性質を表す数値の一つであり、添加量に依存しない一定の値である。対象とする物質が、水と１−オクタノールの混合液において、水相とオクタノール相が接した系中で平衡状態にある場合を対象として、各相の濃度をその常用対数で示したものである。ＬｏｇＰが大きくなると、比較的に疎水性が増大する傾向があり、ＬｏｇＰが小さくなると、比較的に親水性が増大する傾向がある。

ＬｏｇＰの測定は、一般にＪＩＳ日本工業規格Ｚ７２６０−１０７（２０００）に記載のフラスコ浸とう法により実施することができる。また、ＬｏｇＰは実測に代わって、計算化学的手法あるいは経験的方法により見積もることも可能である。ＬｏｇＰの計算に用いる方法やソフトウェアについては公知のものを用いることができるが、本発明ではＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ社のシステム：ＣｈｅｍｄｒａｗＰｒｏ１１．０に組み込まれたプログラムを用い、ＬｏｇＰを求めている。

本発明のブロック重合体（Ａ）は、従来のＰＥＧ系ポリマーに比して、前記ＬｏｇＰの平均値が０以上、２以下（以下、０〜２）であるモノマーから形成されるアクリル系ポリマー部分を有しているため、水に対する溶解性が制御され、脂溶性が向上する。その結果、ポリスチレンなどの疎水性であり細胞接着性の熱可塑性樹脂との相溶性も向上し、溶融混練した際の外観不良を抑えることができる。さらには、ブロック重合体（Ａ）中のアクリル系ポリマー部分（Ａ１）に、後述する架橋剤と反応し得る官能基を有するモノマーを共重合することで、架橋構造を形成することもできる。アクリル系ポリマー部分（Ａ１）の有し得る官能基としては、カルボキシル基、水酸基、エポキシ基、アミノ基、イソシアネート基などを挙げることができる。

また、本発明のブロック重合体（Ａ）は、従来のアクリル系ポリマーに対し、ポリエチレンオキサイド部分を主鎖に組み込んでいるため、ミクロ相分離が誘起され、表面凝集構造が変化することによる低い抗原性を付与することができる。
このように、本発明のブロック重合体（Ａ）は、血漿タンパクの吸着性、溶血性、細胞接着性の抑制や生物学的安全性の効果を最大限に発揮できるように、分子量、側鎖官能基種類および側鎖官能基導入量を、その使用目的に応じて最適化することが可能である。

ブロック重合体（Ａ）を構成する親水性に富むポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）と疎水性に富むアクリル系ポリマー部分（Ａ１）のバランスにより、熱可塑性樹脂との相溶性や、血漿タンパクの吸着性、溶血性、細胞接着性の抑制等を効果的に制御し得る。後述する熱可塑性樹脂の性質に適したアクリル系ポリマー部分（Ａ１）を導入することにより、成型時の着色むらや機械的物性の保持を向上することが可能となる。また、目的とする血漿タンパクの吸着性、溶血性、細胞接着性の抑制の各効果を十分に発揮することが可能である。ブロック重合体（Ａ）は、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）の質量／［アクリル系ポリマー部分（Ａ１）とポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）との合計の質量］＝０．０１〜０．５であることが好ましく、（Ａ２）／［（Ａ１）＋（Ａ２）］＝０．０５〜０．３であることがより好ましい。

ブロック重合体（Ａ）は、下記式（II）にて示されるポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）を有し、質量平均分子量が５，０００〜１０万である高分子アゾ系重合開始剤を用いて重合して得ることが好ましい。

（式中、ｍ、ｎは１以上の整数を示す。）

前記高分子アゾ重合開始剤の質量平均分子量は、５０００〜１０万程度、好ましくは１万〜５万であればよい。また、該開始剤のＰＥＧ部分の分子量は、８００〜１万程度、好ましくは１０００〜８０００程度であればよい。
前記高分子アゾ重合開始剤は、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）及びアゾ基（−Ｎ＝Ｎ−）を含有する繰り返し部分を含む。
前記高分子アゾ重合開始剤はポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）を有しているため、水、アルコール、有機溶剤に可溶であり、溶液重合や乳化重合、分散重合にてブロック重合体（Ａ）の合成が可能である。また、分子鎖骨格中に重合開始部分（ラジカル発生部分：―Ｎ＝Ｎ−）を有しているため、別途重合開始剤を使用する必要がなく、さらには末端反応性マクロモノマーに比べてラジカルの反応性、安定性が高いという特徴を有している。
前記高分子アゾ重合開始剤は、・Ｃ（ＣＨ₃）ＣＮ−（ＣＨ₂）₂−ＣＯＯ−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_m−ＣＯ−（ＣＨ₂）₂−Ｃ（ＣＨ₃）ＣＮ・にて示されるようなラジカルを生じ、後述するアクリル系モノマーを重合させる。そして、アクリル系モノマーから形成されるアクリル系ポリマー部分（Ａ１）と前記ラジカル由来の部分とが結合した主鎖を形成し、ブロック重合体（Ａ）を形成する。ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）は、ラジカルの一部に由来する。
高分子アゾ重合開始剤の具体例としては、和光純薬製の高分子アゾ開始剤ＶＰＥ０２０１（（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_mの部分の分子量が約２０００、ｎが６程度）などが例示される。

また、本発明では前記の高分子アゾ重合開始剤と併用して、２，２’−アゾビスイソブチロニトリルや２，２’−アゾビス(２−メチルブチロニトリル)、１，１’−アゾビス（シクロヘキサン１−カルボニトリル）や２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）、２，２’−アゾビス（２，４−ジメチル−４−メトキシバレロニトリル）やジメチル２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオネート）、４，４’−アゾビス（４−シアノバレリック酸）や２，２’−アゾビス（２−ヒドロキシメチルプロピオニトリル）、２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］等のアゾ系開始剤や、過酸化ベンゾイル、ｔｅｒｔ−ブチルパーベンゾエート、クメンヒドロパーオキシドやジイソプロピルパーオキシジカーボネート、ジ−ｎ−プロピルパーオキシジカーボネートやジ（２−エトキシエチル）パーオキシジカーボネート、ｔｅｒｔ−ブチルパーオキシ−２−エチルヘキサノエート、ｔｅｒｔ−ブチルパーオキシネオデカノエートやｔｅｒｔ−ブチルパーオキシビバレート、（３，５，５−トリメチルヘキサノイル）パーオキシドやジプロピオニルパーオキシド、ジアセチルパーオキシド等の有機過酸化物開始剤を用いることができる。これらの開始剤を併用することにより、開始効率を高め効率よくアクリル系ポリマー部分（Ａ１）にＰＥＧに組み込むことができ、残留モノマーを減らすことができる。

また、合成時には、用途に応じてラウリルメルカプタン、ｎ−ドデシルメルカプタン等のメルカプタン類、α−メチルスチレンダイマー、リモネン等の連鎖移動剤を使用して、分子量や末端構造を制御しても良い。

＜モノマー＞
次に、ブロック重合体（Ａ）のアクリル系ポリマー部分（Ａ１）の原料であるアクリル系モノマーについて説明する。なお、本発明において、アクリル系モノマーとは、アクリルモノマーとメタクリルモノマーの両方を意味する。
形成されるブロック重合体（Ａ）の生体適合性の観点から、アクリル系モノマーの水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）の平均値は０以上、２以下である。ＬｏｇＰの平均値が０より低いアクリル系モノマーを用いて合成する場合、最終的に得られるブロック重合体の親水性が増大し、水に対する溶解性が向上するため、安定な塗膜を形成することができない。
一方、ＬｏｇＰの平均値が２より高いアクリル系モノマーを用いて合成する場合、最終的に得られるブロック重合体の水に対する溶解性は抑えられるものの、疎水性が増大しすぎるために、タンパク吸着を抑制することができない。

本発明における、ＬｏｇＰの平均値の求め方について説明する。本発明において、ＬｏｇＰの平均値は、使用する各モノマーのＬｏｇＰを、各モノマーの質量％で平均した値とする。すなわち、ＬｏｇＰが０のモノマーとＬｏｇＰが２のモノマーを５０：５０ｗｔ％の割合で仕込む場合、ＬｏｇＰの平均値は１となる。

本発明では、使用するアクリル系モノマーのＬｏｇＰが０〜２の範囲であれば、ホモポリマー部分の原料として使用することができる。また、使用するアクリル系モノマーのＬｏｇＰが０〜２の範囲外であっても、その他のアクリル系モノマーを含めたＬｏｇＰの平均値が０〜２の範囲であれば、コポリマー部分の原料として使用することができる。

水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）が０以上２以下であるモノマーとしては、例えば、架橋点となる官能基を有さないモノマーや、架橋点となる官能基を有するモノマーに分けて挙げることができる。
架橋点となる官能基を有さないモノマーとしては、例えば、
アルキル基の炭素数が１〜４のアルキルアクリレート；
アルキル基の炭素数が１〜３のアルキルメタクリレート；
メトキシメチル（メタ)アクリレート、２−メトキシエチル（メタ)アクリレート、エトキシメチル（メタ)アクリレート、エトキシエチル（メタ)アクリレート、プロポキシメチル（メタ)アクリレート、プロポキシエチル（メタ)アクリレート、２−（２−メトキシエトキシ）エチル(メタ)アクリレート、２−［２−（２−メトキシエトキシ）エトキシ］エチル(メタ)アクリレート、２−（２−エトキシエトキシ）エチル(メタ)アクリレート、２−［２−（２−エトキシエトキシ）エトキシ］エチル(メタ)アクリレート、テトラヒドロフルフリル（メタ）アクリレート等のアルコキシ基含有モノマー；
（メタ）アクリロニトリル、酢酸ビニル、ブタジエン、イソプレンなどのビニル基含有モノマー；
Ｎ−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニル−ε−カプロラクタム、１−ビニルイミダゾール、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミドなどのアミド基含有モノマー；
などが挙げられる。
これらは単独で用いても良いし、２種以上を組み合わせて用いても良い。これらの化合物のうち、特に２−メトキシエチルアクリレート、テトラヒドロフルフリルアクリレートが経済性や操作性の点から好ましい。

架橋点となる官能基を有するモノマーとしては、カルボキシル基含有モノマー、水酸基含有モノマー、エポキシ基含有モノマー、アミノ基含有モノマー、イソシアネート基含有モノマーなどを使用することができる。
例えば、カルボキシル基が導入された共重合体は、エポキシ化合物やアジリジン化合物、カルボジイミド化合物、金属キレート化合物、Ｎ−ヒドロキシエチルアクリルアミド化合物により架橋することができる。水酸基が導入された共重合体は、イソシアネート化合物、カルボジイミド化合物等により架橋することができる。アミノ基が導入された共重合体は、エポキシ化合物により架橋することができる。イソシアネート基が導入された共重合体は、水酸基含有化合物により架橋することができる。これら、架橋点となる官能基を有するモノマーの使用量は、全モノマーの合計１００質量％中、１０質量％以下で使用することが好ましい。１０質量％以下で使用することで、架橋剤を併用した場合に適度な架橋密度を有する細胞培養部材を得ることができる。

カルボキシル基含有モノマーとしては、その構造中にカルボキシル基有するものであれば特に制限はなく、例えば、（メタ）アクリル酸、（メタ）アクリル酸２−カルボキシエチル、あるいはエチレンオキサイドやプロピレンオキサイド等のアルキレンオキサイドの繰り返し付加した末端にカルボキシル基を有するアルキレンオキサイド付加系コハク酸（メタ）アクリレート等が挙げられる。

水酸基含有モノマーとしては、その構造中に水酸基を有するものであれば、特に制限はなく、例えば、（メタ）アクリル酸２−ヒドロキシエチル、（メタ）アクリル酸１−ヒドロキシプロピル、（メタ）アクリル酸２−ヒドロキシプロピル、（メタ）アクリル酸３−ヒドロキシプロピル、（メタ）アクリル酸１−ヒドロキシブチル、単官能（メタ）アクリル酸グリセロール、ラクトン環の開環付加により末端に水酸基を有するポリラクトン系（メタ）アクリル酸エステル、エチレンオキサイドやプロピレンオキサイド等のアルキレンオキサイドの繰り返し付加した末端に水酸基を有するアルキレンオキサイド付加系（メタ）アクリル酸エステル、グルコース環系（メタ）アクリル酸エステル類が挙げられる。

エポキシ基含有モノマーとしては、その構造中にエポキシ基を有するものであれば、特に制限はなく、例えば、（メタ）アクリル酸グリシジル、（メタ）アクリル酸３，４−エポキシシクロヘキシルメチル等が挙げられる。

アミノ基含有モノマーとしては、その構造中にアミノ基を有するものであれば、特に制限はなく、例えば、（メタ）アクリル酸モノメチルアミノエチル、（メタ）アクリル酸モノエチルアミノエチル、（メタ）アクリル酸モノメチルアミノプロピル、（メタ）アクリル酸モノエチルアミノプロピル等が挙げられる。

本発明では、ブロック重合体（Ａ）が細胞培養部材から溶出するのを抑えるという観点から、架橋点となる官能基を有するモノマーを共重合させることが好ましい。これにより後述する架橋剤と反応し得る官能基を導入することができ、架橋構造を形成できる。

本発明ではモノマーとして、上記に挙げたＬｏｇＰが０〜２の範囲外のモノマーを共重合させることもできるが、アクリル系ポリマー部分（Ａ１）が、水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）が０〜２であるモノマーのみから形成されるホモポリマー部分もしくはコポリマー部分であることがより好ましい。
すなわち、前記分配係数ＬｏｇＰが０〜２であるモノマーを一種類だけ用い、前記の高分子アゾ系重合開始剤を用いて重合してブロック重合体を得ても良いし、前記分配係数ＬｏｇＰが０〜２であるモノマーを複数種用い、前記の高分子アゾ系重合開始剤を用いて重合してブロック重合体を得ても良い。

ＬｏｇＰが０〜２の範囲外のモノマーの中で、架橋点となる官能基を有さないモノマーとしては、例えば、アルキル基の炭素数が５〜２０のアクリレート、アルキル基の炭素数が４〜２０のメタクリレート、スチレンなどのビニル基含有モノマーなどが挙げられる。なかでも、スチレンは、細胞培養用部材に汎用的に使用されているポリスチレンとの相溶性が高い点で好ましい。

ＬｏｇＰが０〜２の範囲外のモノマーの中で、架橋点となる官能基を有するモノマーとしては、例えば、マレイン酸等のカルボキシル基含有モノマー、４−ヒドロキシスチレン、Ｎ−ヒドロキシエチル（メタ）アクリルアミド等の水酸基含有モノマーなどが挙げられる。

さらに、本発明では、ブロック重合体（Ａ）に部分的に架橋構造を導入するために多官能モノマーをさらに共重合させてもよい。
共重合しながら架橋する場合、架橋割合は、用いる多官能モノマー量が多いほど架橋度が高くなり、反応中にゲル化する可能性も高まる。そのため、多官能モノマーの量としては、全モノマー１００質量％中、０．０１〜１０質量％の範囲が好ましく、０．１〜５質量％がより好ましい。ブロック重合体（Ａ）が多官能モノマーにより架橋している場合、難水溶性になるため、架橋剤を使用した場合と同様に、細胞培養部材から溶出するという問題を低減することができる。

多官能モノマーとしては、その構造中にエチレン性不飽和基を２つ以上有するものであれば、特に制限はなく、例えば、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ジエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリエチレンオキサイドジ（メタ）アクリレート、プロプレングリコールポリエチレンオキサイドジ（メタ）アクリレート、ジプロプレングリコールポリエチレンオキサイドジ（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、１，６−ヘキサンジオールジ（メタ）アクリレート、グリセリンジ（メタ）アクリレート、ジメチロールトリシクロデカンジ（メタ）アクリレート、トリプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、又はネオペンチルグリコール変性トリメチロールプロパンジ（メタ）アクリレート等の二官能（メタ）アクリレート類；
トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールトリ（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールテトラ（メタ）アクリレート、ジペンタエリスリトールヘキサ（メタ）アクリレート、又はジペンタエリスリトールペンタ（メタ）アクリレート等の三官能以上の多官能（メタ）アクリレート類；あるいは、
１，６−ヘキサンジオールジグリシジルエーテルの（メタ）アクリル酸付加物、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテルの（メタ）アクリル酸付加物、グリセロールジグリシジルエーテルの（メタ）アクリル酸付加物、ビスフェノールＡジグリシジルエーテルの（メタ）アクリル酸付加物、ビスフェノールＦ型エポキシの（メタ）アクリル酸付加物、又はノボラック型エポキシの（メタ）アクリル酸付加物等のエポキシ（メタ）アクリレート類等が挙げられる。また、以上に挙げた（メタ）アクリレートを、更に（ポリ）アルキレンオキシドや（ポリ）カプロラクトン等で変性したものも使用することができる。

本発明において、ブロック重合体（Ａ）は、公知の方法により合成できる。例えば、溶液重合、塊状重合、乳化重合、分散（沈殿）重合などが好ましく、溶液重合や分散（沈殿）重合がより好ましい。

前述の通り、ブロック重合体（Ａ）は、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）の質量／［アクリル系ポリマー部分（Ａ１）とポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）との合計の質量］＝０．０１〜０．５であることが好ましく、（Ａ２）／［（Ａ１）＋（Ａ２）］＝０．０５〜０．３であることがより好ましい。
本発明における、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）の質量／［アクリル系ポリマー部分（Ａ１）とポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）との合計の質量］の求め方について説明する。
ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）の質量を計算する際、厳密には、アゾ系重合開始剤中のポリエチレンオキサイドの重量のみを計算して求めるべきであるが、本発明においては、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）を有する高分子アゾ系重合開始剤の重量をそのまま適応することにする。また、アクリル系ポリマー部分（Ａ１）の質量は、重合に供したアクリル系モノマーの合計量である。
すなわち、モノマー９０重量部、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）を有する高分子アゾ系重合開始剤１０重量部を用いて合成した場合、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）の質量／［アクリル系ポリマー部分（Ａ１）とポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）との合計の質量］は０．１となる。

ブロック重合体（Ａ）の質量平均分子量は、取り扱い性および医療用具等へ塗布する観点から、３，０００〜１，０００，０００であることが好ましく、より好ましくは、５，０００〜５００，０００である。
なお、ブロック重合体（Ａ）の質量平均分子量の調製は、例えば、高分子アゾ重合開始剤中に含まれるアゾ基のモル数に対する、アクリル系モノマーの全モル数の比率を適宜変更することによって可能となる。たとえば、高分子アゾ重合開始剤中に含まれるアゾ基のモル数に対する、アクリル系モノマーの全モル数の比率が２００であると２００量体のアクリル系ポリマーがＰＥＧ鎖の間に組み込まれることになり、ポリマーの絡み合いによる高い凝集力を付与することができる。

ブロック重合体（Ａ）のガラス転移温温度は、−７０℃〜８０℃であることが好ましく、より好ましくは、−６０℃〜７０℃である。ブロック重合体（Ａ）のガラス転移温度を−７０℃〜８０℃の範囲に調製することで、熱可塑性樹脂と溶融混練しやすくなり、結果として成型時の着色むらや機械的物性の保持を向上することができる。
ガラス転移温度の調製は、アクリル系ポリマー部分（Ａ１）を構成するモノマーを適宜調製することによって可能となる。例えば、２−メトキシエチル（メタ）アクリレートなどのポリアルコキシアルキル（メタ）アクリレートの比率を高くすることにより、側鎖エーテル結合特有の柔軟性を付与することができるため、ガラス転移温度は−５０℃に近い範囲で調製することができる。

＜架橋剤＞
次に、本発明で用いることのできる架橋剤について説明する。本発明において用いることのできる架橋剤としては、例えば、エポキシ基、イソシアネート基、およびアジリジニル基から選ばれる少なくとも一種の官能基を有するものの他、金属キレート化合物、カルボジイミド基含有化合物等が挙げられる。これらの架橋剤は、細胞培養部材の弾性率や耐性を上げる目的で使用することができる。

［エポキシ基を有する架橋剤］
本発明で用いられるエポキシ基を有する架橋剤としては、１分子中に２個以上のエポキシ基を有するものであればよく、特に限定されるものではない。
２官能エポキシ基を有する架橋剤としては、例えば、エチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリエチレンオキサイドジグリシジルエーテル、プロピレングリコールジグリシジルエーテル、ポリプロピレングリコールジグリシジルエーテル、テトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリテトラメチレングリコールジグリシジルエーテル、１，６-ヘキサンジオールジグリシジルエーテル、ネオペンチルグリコールジグリシジルエーテル、ポリブタジエンジグリシジルエーテル等の脂肪族エポキシ化合物、ビスフェノールＡ型エポキシ樹脂、ビスフェノールＦ型エポキシ樹脂、ビスフェノールＳ型エポキシ樹脂、ビフェノール型エポキシ樹脂、ジヒドロキシベンゾフェノンジグリシジルエーテル、レゾルシノールジグリシジルエーテル、ヒドロキノンジグリシジルエーテル、ジヒドロキシアントラセン型エポキシ樹脂、ビスフェノールフルオレンジグリシジルエーテル、Ｎ，Ｎ−ジグリシジルアニリン等の芳香族エポキシ化合物、上記記載の芳香族エポキシ化合物の水素添加物、ヘキサヒドロフタル酸ジグリシジルエステル等の脂環式エポキシ化合物などが挙げられる。
エポキシ基を３つ以上有する架橋剤としては、例えば、トリグリシジルイソシアヌレート、トリスフェノール型エポキシ化合物、テトラキスフェノール型エポキシ化合物、フェノールノボラック型エポキシ化合物等が挙げられる。

[イソシアネート基を有する架橋剤］
本発明で用いられるイソシアネート基を有する架橋剤としては、１分子中に２個以上のイソシアネート基を有した化合物であればよく、特に限定されるものではない。
２官能イソシアネート化合物としては、例えば、２，２’−ジフェニルメタンジイソシアネート、２，４’−ジフェニルメタンジイソシアネート、４，４’−ジフェニルメタンジイソシアネート、２，４−トリレンジイソシアネート、２，６−トリレンジイソシアネート、ヘキサメチレンジイソシアネート、イソホロンジイソシアネート等を挙げることができる。
３官能イソシアネート化合物としては、上記で説明したジイソシアネートのトリメチロールプロパンアダクト体、水と反応したビュウレット体、イソシアヌレート環を有する３量体が挙げられる。
また、イソシアネート基を有する架橋剤中のイソシアネート基は、ブロック化されていても良いし、ブロック化されていなくても良い。
本発明で用いられるブロック化イソシアネート架橋剤としては、前記イソシアネート化合物中のイソシアネート基がε−カプロラクタム、ＭＥＫオキシム、シクロヘキサノンオキシム、ピラゾール、フェノール等でブロックされたブロック化イソシアネート化合物であればよく、特に限定されるものではない。

[アジリジニル基を有する架橋剤］
本発明で用いられるアジリジン化合物としては、１分子中に２個以上のアジリジン基を有した化合物であればよく、特に限定されるものではない。アジリジン化合物としては、例えば、２，２’−ビスヒドロキシメチルブタノールトリス［３−（１−アジリジニル）プロピオネート］、４，４−ビス（エチレンイミノカルボニルアミノ）ジフェニルメタン等が挙げられる。

［金属キレート化合物］
本発明で用いられる金属キレート化合物としては、例えば、アルミニウムキレート化合物、アルミニウムアルコキシド化合物、アルミニウムアシレート化合物などの有機アルミニウム化合物、チタンキレート化合物、チタンアルコキシド化合物、チタンアシレート化合物などの有機チタン化合物、ジルコニウムキレート化合物、ジルコニウムアルコキシド化合物、ジルコニウムアシレート化合物などの有機ジルコニウム化合物等が挙げられる。

［カルボジイミド基含有化合物］
本発明で用いられるカルボジイミド基含有化合物としては、日清紡績株式会社のカルボジライトシリーズを用いることができ、Ｖ−０２、Ｖ−０４、Ｖ−０６などの水性タイプ、Ｖ−０１、Ｖ−０３、Ｖ−０５、Ｖ―０７、Ｖ―０９などの油性タイプ等が挙げられる。

［β−ヒドロキシアルキルアミド基含有化合物］
本発明では、β−ヒドロキシアルキルアミド基含有化合物も架橋剤として用いることができる。
β−ヒドロキシアルキルアミド基含有化合物としては、分子内にβ−ヒドロキシアルキルアミド基を含有する化合物であればよく、特に限定されるものではない。β−ヒドロキシアルキルアミド基含有化合物としては、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（ヒドロキシエチル）アジパミド（エムスケミー社製ＰｒｉｍｉｄＸＬ−５５２）をはじめとする種々の化合物を挙げることができる。

本発明において、架橋剤は、一種のみを単独で用いてもよいし、複数を併用しても良い。架橋剤の使用量は、ブロック重合体（Ａ）中に含まれる官能基の種類やモル数を考慮して決定すればよく、特に限定されるものではないが、通常はブロック重合体（Ａ）１００質量部に対して０．１質量部〜１０質量部の範囲で用いられる。ブロック重合体（Ａ）中に含まれる官能基のモル数よりも少ない範囲で配合することで、未反応の架橋剤が遊離する懸念をなくすことができる。この範囲であれば、目的とする血液適合性、生体組織適合性、生体組織接着抑制、血漿タンパクの吸着性、溶血性、細胞接着性の抑制の各効果に、特に優れた性能が発現される。

＜熱可塑性樹脂＞
次に、本発明で用いることのできる細胞接着性の熱可塑性樹脂について説明する。本発明において用いることのできる熱可塑性樹脂としては、例えば、ポリエステル、ポリスチレン、アクリル・スチレン系共重合樹脂、アクリル系樹脂、ポリ乳酸、ポリグルコール酸、シリコーン、ポリアミド、ポリイミド、ポリオレフィン、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリビニルアルコール系樹脂、エチレン・ビニルアルコール系共重合樹脂、熱可塑性エラストマー、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリフッ化ビニリデン、ポリテトラフルオロエチレン、ハロゲン化ポリオレフィン、ポリカーボネート、ポリビニリデンフルオライド等、樹脂が挙げられる。中でもポリスチレンが細胞毒性の低さと経済性、加工性に優位性があり好ましい。

＜熱可塑性樹脂との加熱溶融＞
ブロック重合体（Ａ）と熱可塑性樹脂とを加熱溶融する場合、（Ａ）と熱可塑性樹脂とを、好ましくはブロック重合体（Ａ）／熱可塑性樹脂＝０．０１／９９．９９〜５０／５０（重量比）の割合で配合し、種々の混合機や分散機、混練機を用いて加熱混練することができる。
本発明の細胞培養部材は、マスターバッチまたはコンパウンドから形成することができる。あるいは、ブロック重合体（Ａ）と熱可塑性樹脂とから直に成型機に投入し、細胞培養部材を形成することもできる。
本発明でいうマスターバッチとは、ブロック重合体（Ａ）を高濃度に含有し、成型時に希釈樹脂（熱可塑性樹脂）で希釈して成型に供されるペレット状の樹脂組成物である。また、本発明でいうコンパウンドとは、ブロック重合体（Ａ）の濃度が比較的小さく、希釈樹脂で希釈せずにそのまま成型に供されるペレット状の樹脂組成物である。
マスターバッチとコンパウンドを比較すると、これらを得る加工工程自体に大差はない。しかし、得られる細胞培養部材の価格の点からペレット状やフレーク状のマスターバッチを用いることが好ましい。即ち、後述する白色顔料などを配合する際、マスターバッチの方が顔料を高濃度に含有する分、コンパウンドよりややコスト高である。しかし、マスターバッチの場合は、マスターバッチを安価な希釈樹脂で希釈して成型物を得ることができるため、コンパウンドから製造した成型物よりもマスターバッチから製造した成型物の方が安価となるので、好ましい。

＜成型＞
本発明では、ブロック重合体（Ａ）と熱可塑性樹脂とを含有する組成物を射出成型し、細胞培養部材を形成しても良いし、熱可塑性樹脂を押出し成型する際、ブロック重合体（Ａ）を共に押出し成型した後、金型を用いる等して所望の形状に成型してもよい。
ブロック重合体（Ａ）を熱可塑性樹脂と加熱溶融し成型することで、血液、生体組織、タンパクおよび細胞と接触する界面においてブロック重合体（Ａ）を安定的に存在させることができ、ブロック重合体（Ａ）が溶出する危険性を極めて少なくすることができる。また、該ブロック重合体（Ａ）を界面に保持させた結果としてタンパクや細胞の吸着抑制、血小板の粘着や活性化の抑制などの効果が発揮される。

本発明の細胞培養部材は、必要に応じて、本発明による効果を妨げない範囲で、顔料、紫外線吸収剤、光安定剤、ラジカル捕捉剤、充填剤、増粘剤、老化防止剤、酸化防止剤、帯電防止剤、難燃剤、熱伝導改良剤、可塑剤、だれ防止剤、防汚剤、防腐剤、殺菌剤、消泡剤、レベリング剤、ブロッキング防止剤、顔料分散剤、シランカップリング剤等の各種添加剤を含むことができる。

本発明の細胞培養部材の形状としては、シャーレ、フラスコ、広口瓶、細口瓶、試験管、マルチウェルプレートなどを含むが、特にこれらに限定されるものではない。マルチウェルには、６ウェル、１２ウェル、４８ウェル、９６ウェル、３８４ウェルの各プレートがあるが、これらは一般にプレート全体の大きさはほぼ同じであり、ウェルの数が大きくなるほど、１ウェルのサイズが小さくなる。

マルチウェルプレートウェルにおいて、培養容器の用途が、発光又は蛍光現象を用いた標準物質測定である場合、ウェル間を遮光し、発光又は傾向が隣接するウェルに漏れないように、細胞培養部材が顔料を含有していることが好ましい。例えば、白色顔料としては、酸化チタン等が挙げられ、黒色顔料としては、カーボンブラック等が挙げられる。顔料の量としては、十分な遮蔽性と十分な機械的強度を維持する点から、ブロック重合体（Ａ）と熱可塑性樹脂と顔料との合計１００質量％中、酸化チタンは５〜２０質量％含むことが好ましく、カーボンブラックは１〜１５質量％含むことが好ましい。遮光の程度は、隣接するウェルへの光透過率が少なければ少ない方が好ましく、例えば１％以下であり、好ましくは０．１％、より好ましくは０．０１％以下である。

以下の実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、以下の実施例は本発明の権利範囲を何ら制限するものではない。なお、実施例における、「部」および「％」は、「重量部」および「質量％」をそれぞれ表し、Ｍｗは質量平均分子量、Ｔｇはガラス転移温度を意味する。

＜質量平均分子量（Ｍｗ）の測定方法＞
Ｍｗの測定は昭和電工社製ＧＰＣ（ゲルパーミエーションクロマトグラフィー）「ＧＰＣ-１０１」を用いた。ＧＰＣは溶媒（ＴＨＦ；テトラヒドロフラン）に溶解した物質をその分子サイズの差によって分離定量する液体クロマトグラフィーである。本発明における測定は、カラムに「ＫＦ−８０５Ｌ」（昭和電工社製：ＧＰＣカラム：８ｍｍＩＤ×３００ｍｍサイズ）を直列に２本接続して用い、試料濃度１ｗｔ％、流量１．０ｍｌ／ｍｉｎ、圧力３．８ＭＰａ、カラム温度４０℃の条件で行い、質量平均分子量（Ｍｗ）の決定はポリスチレン換算で行った。データ解析はメーカー内蔵ソフトを使用して検量線および分子量、ピーク面積を算出し、保持時間１５〜３０分の範囲を分析対象として質量平均分子量を求めた。

＜ガラス転移温度（Ｔｇ）の測定方法＞
溶剤を乾燥除去したブロック重合体について、メトラー・トレド社製「ＤＳＣ−１」を使用し、サンプル量約５ｍｇをアルミニウム製標準容器に秤量し、温度変調振幅±１℃、温度変調周期６０秒、昇温速度２℃／分の条件にて、−８０〜２００℃まで測定し、可逆成分の示差熱曲線からガラス転移温度を求めた。

＜ブロック重合体の合成＞
［製造例１]
温度計、撹拌機、窒素導入管、還流冷却器、滴下管を備えた反応容器に、窒素気流下、有機溶媒としてＭＥＫ６５重量部を仕込み、撹拌下８０℃で３０分加熱した。滴下管にモノマーとしてメトキシエチルアクリレートを４９．４重量部、アクリル酸を０．６重量部、重合開始剤としてＶＰＥ０２０１（和光純薬工業社製：マクロアゾ開始剤）を２．５重量部、溶媒としてＭＥＫを５重量部仕込み、２時間かけて滴下した。滴下終了後１時間熟成させた後、２，２’−アゾビス（イソ酪酸）ジメチル０．０１２５重量部をＭＥＫ２重量部で溶解した溶液を添加し、１時間熟成した。その後、さらに、２，２’−アゾビス（イソ酪酸）ジメチル０．０１２５重量部をＭＥＫ２重量部で溶解した溶液を添加し、１時間熟成させた後、室温に冷却し反応を停止した。その後、ダイヤフラムポンプでＭＥＫを除去することで、固形分１００質量％のブロック重合体溶液を得た。得られたブロック重合体のＭｗは２８１，０００、Ｔｇは−４５℃、ＰＥＧの割合は４．８質量％であった。

［製造例２〜４]
製造例１と同様の方法で、表１の組成および仕込み重量部に従って合成を行い、ブロック重合体溶液を得た。その特性値を表１に示す。

［比較製造例１］
温度計、撹拌機、窒素導入管、還流冷却器、滴下管を備えた反応容器に、窒素気流下、有機溶媒としてＭＥＫ６５重量部を仕込み、撹拌下８０℃で３０分加熱した。滴下管にモノマーとしてエチルアクリレートを５０重量部、重合開始剤として２，２’−アゾビス（イソ酪酸）ジメチルを０．３重量部、溶媒としてＭＥＫを５重量部仕込み、２時間かけて滴下した。滴下終了後１時間熟成させた後、２，２’−アゾビス（イソ酪酸）ジメチル０．０１２５重量部をＭＥＫ２重量部で溶解した溶液を添加し、１時間熟成した。その後、さらに、２，２’−アゾビス（イソ酪酸）ジメチル０．０１２５重量部をＭＥＫ２重量部で溶解した溶液を添加し、１時間熟成させた後、室温に冷却し反応を停止した。その後、ダイヤフラムポンプでＭＥＫを除去することで、固形分１００質量％のアクリル樹脂溶液を得た。得られたアクリル樹脂のＭｗは６２，０００、Ｔｇは−１８℃、ＰＥＧの割合は０質量％であった。

［比較製造例２〜３]
製造例１と同様の方法で、表１の組成および仕込み重量部に従って合成を行い、ブロック重合体体溶液を得た。その特性値を表１に示す。

［比較製造例４］
温度計、撹拌機、窒素導入管、還流冷却器を備えた反応容器に、窒素気流下、トルエン５０重量部、水酸基価２７９ｍｇＫＯＨ／ｇのポリエチレングリコール３６．２重量部を仕込み、撹拌下１１０℃まで昇温し、トルエン１３重量部を留去すると同時に原料を脱水した。５０℃まで冷却した後、イソホロンジイソシアネート１９．１重量部を添加し、１１０℃まで昇温し、ＦＴ−ＩＲでイソシアネート基由来のピーク（２２５４ｃｍ -1 付近）がなくなるまで反応させた。反応停止後、ダイヤフラムポンプでトルエンを除去することで、固形分１００質量％のＰＥＧ含有ウレタン溶液を得た。得られた樹脂のＭｗは４３，０００、Ｔｇは−２８℃、ＰＥＧの割合は６５．５質量％であった。

［比較製造例５］
温度計、撹拌機、窒素導入管、還流冷却器を備えた反応容器に、窒素気流下、トルエン５０重量部、水酸基価１１１ｍｇＫＯＨ／ｇのポリエチレングリコール４３．０重量部、ジメチロールブタン酸１．１部を仕込み、撹拌下１１０℃まで昇温し、トルエン１４重量部を留去すると同時に原料を脱水した。５０℃まで冷却した後、イソホロンジイソシアネート１０．６重量部を添加し、１１０℃まで昇温し、ＦＴ−ＩＲでイソシアネート基由来のピーク（２２５４ｃｍ -1 付近）がなくなるまで反応させた。反応停止後、ダイヤフラムポンプでトルエンを除去することで、固形分１００質量％のＰＥＧ含有ウレタン溶液を得た。得られた樹脂のＭｗは３８，０００、Ｔｇは−５１℃、ＰＥＧの割合は７８．６質量％、酸価は７．７ｍｇＫＯＨ／ｇであった。

表１中、略号は以下の通り。
ＭＥＡ：メトキシエチルアクリレート、ＬｏｇＰ＝０．４８
ＡＡ：アクリル酸、ＬｏｇＰ＝０．３８
ＴＨＦＡ：テトラヒドロフルフリルアクリレート、ＬｏｇＰ＝０．７８
Ｓｔ：スチレン、ＬｏｇＰ＝２．９５
ＥＡ：エチルアクリレート、ＬｏｇＰ＝０．９８
ＡＣＭＯ：アクリロイルモルホリン、ＬｏｇＰ＝−０．２
２ＥＨＡ：２−エチルヘキシルアクリレート、ＬｏｇＰ＝３．５３
Ｖ６０１：２，２’−アゾビス（イソ酪酸）ジメチル

［実施例１〜１０］、［比較例１〜７］
表２の組成に従い、ブロック重合体（Ａ）と熱可塑性樹脂をドライブレンドした後、２３０℃に設定した２軸押出機にて混練し、直径３ｍｍ、長さ３ｍｍの円柱状ペレットに造粒した。なお、硬化剤は、表２における量となるよう２軸押出機の押出速度を制御しつつ液体添加装置から２軸押出機内に注入した。
次いで、２３０℃に設定した射出成型機を用い、前述したペレットから外径３９ｍｍ×厚さ２ｍｍの試験用プレートを製造した。
後述する方法にて、試験用プレートの着色状態、機械強度、細胞接着性、タンパク吸着性、溶血性を評価した。結果を表２に示す。

表２中、略号は以下の通り。
ＡＬＣＨ：川研ファインケミカル社製、アルミキレート化合物
ケミタイトＰＺ：日本触媒社製、多官能アジリジン化合物
ＥＸ３２１Ｌ：ナガセケムテックス社製、多官能脂肪族エポキシ化合物
Ｖ０５：日清紡社製、油性カルボジイミド基含有化合物
Ｖ０２：日清紡社製、水性カルボジイミド基含有化合物
ＸＬ５５２：エムスケミー社製、ヒドロキシアルキルアミド基含有化合物
ＰＳ：ＰＳジャパン社製、ＨＦ７７、汎用ポリスチレン

＜評価＞
（１）着色状態
実施例及び比較例で調製した試験用プレートの着色状態を目視により評価した。
○：黄変なし
×：黄変が著しい

（２）機械強度
実施例及び比較例で調製した試験用プレートの曲げ弾性率および曲げ強度の保持率をＪＩＳＫ−７２０３、アイゾット衝撃値はＪＩＳＫ−７１１０にそれぞれ準拠して評価した。
○：９６％以上
△：９０％以上９６％未満
×：９０％未満

（３）細胞接着性
外径４０ｍｍのシャーレの底に収まるように実施例及び比較例で調製した試験用プレートを設置し、エチレンオキサイドガス滅菌した後、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）にウシ胎児血清（ＦＢＳ）を１０％添加したものを培地とし、マウス線維芽細胞用細胞株（ＮＩＨ／３Ｔ３細胞）を２×１０⁵個播種し、５％ＣＯ² ／３７℃のインキュベーターで３日目まで培養した。細胞接着性は３日後に光学顕微鏡で外径４０ｍｍのシャーレを確認し、細胞凝集塊ができているかどうかによって判断した。
○：細胞凝集塊ができている
△：細胞凝集塊ができている箇所と細胞が平面に増殖している箇所が混在する
×：細胞が平面に増殖している

（４）タンパク吸着性
外径４０ｍｍのシャーレの底に収まるように実施例及び比較例で調製した試験用プレートを設置し、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）にウシ血清アルブミンを濃度０．５質量％となるように加えたタンパク質含有液：８．０ｍＬを入れ、２４時間インキュベートした後、シャーレ内の液を棄て、ＰＢＳ：約８．０ｍＬにて洗浄し、前記洗浄液を棄てた。その後、ＰＢＳに１質量％のドデシル硫酸ナトリウムを添加したタンパク質溶出用溶液：８．０ｍＬを添加することにより、試験管内壁に吸着したタンパク質を溶出させ、前記タンパク質溶出用溶液中のタンパク質の濃度をＭｉｃｒｏＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＫｉｔ（タカラバイオ社製）により測定し、塗膜に吸着していたタンパク質の量を求めた。
○：タンパク吸着量≦１．２０μｇ
△：１．２０μｇ＜タンパク吸着量≦４．００μｇ
×：４．００μｇ＜タンパク吸着量

（５）溶血性試験
実施例及び比較例で調製した試験用プレートに生理食塩水１０ｍＬを加え、３７℃で７２時間かけて抽出し、試験液１０ｍＬを得た。
この試験液に０．２ｍＬのウサギ脱繊維血を加え、３７℃で１、２および４時間インキュベートした。インキュベート後の試験液を約７５０×ｇで５分間遠心分離した後の上澄み液について、５７６ｎｍにおける吸光度を測定した。陰性対照として生理食塩水１０ｍＬ、陽性対照として蒸留水１０ｍＬにそれぞれ０．２ｍＬのウサギ脱繊維血を加えたものを使用し、同様に吸光度を測定した。下記式で溶血率を算出し、溶血性（溶血毒性）を評価した。
溶血率（％）＝（検体の吸光度−陰性対照の吸光度）／（陽性対照の吸光度−陰性対照の吸光度）×１００
○：溶血率≦２
△：２＜溶血率≦２０
×：２０＜溶血率

表２に示す実施例と比較例を見て分かる通り、実施例１〜１０で使用している細胞培養用部材は、比較例１〜７で使用している細胞培養用部材に対し、ＬｏｇＰの平均値が０〜２であるモノマーからなるアクリル系ポリマー部分を主鎖中に有しているため、細胞接着性、タンパク吸着性、溶血性を共に満足する物性を得ることができた。一方、ＬｏｇＰの平均値が０〜２であるモノマーからなるアクリル系ポリマー部分を主鎖中に有していても、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）を有しないと、タンパク質や細胞の接着が顕著である。また、架橋剤を併用することで、一層良好な機械強度を付与することができた。

ブロック重合体（Ａ）と熱可塑性樹脂とを含む本発明の細胞培養用部材は、タンパク質や細胞と接触する容器に用いることができ、従来のプラズマ処理やコロナ放電処理、酸化処理、紫外線照射などを用いることなく、培養表面を形成することができる。

Claims

細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）と細胞接着性の熱可塑性樹脂とを含む細胞培養用部材（１）であって、
前記細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）樹脂が、水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）の平均値が０以上、２以下であるアクリル系モノマーから形成されるアクリル系ポリマー部分（Ａ１）と、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）とが、下記式（Ｉ）で結合してなるブロック重合体（Ａ）である、
細胞培養用部材（１）。
細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）に含まれる、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）の質量／［アクリル系ポリマー部分（Ａ１）とポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）との合計の質量］＝０．０１〜０．５である、請求項１記載の細胞培養用部材（１）。
細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）が、下記一般式（II）にて示されるポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）を有し、質量平均分子量が５，０００〜１０万である高分子アゾ系重合開始剤を用いてアクリル系モノマーを重合してなるブロック重合体である、請求項１または２記載の細胞培養用部材（１）。

式中、ｍ、ｎは１以上の整数を示す。
アクリル系ポリマー部分（Ａ１）が、水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）が０以上２以下であるアクリル系モノマーのみから形成されるホモポリマー部分もしくはコポリマー部分である、請求項１〜３いずれか１項に記載の細胞培養用部材（１）。
水／１−オクタノール分配係数（ＬｏｇＰ）の平均値が０以上、２以下であるアクリル系モノマーから形成されるアクリル系ポリマー部分（Ａ１）と、ポリエチレンオキサイド部分（Ａ２）とが、下記式（Ｉ）で結合してなる細胞非接着性のブロック重合体（Ａ）と、細胞接着性の熱可塑性樹脂とを、混練し成型することを特徴とする、細胞培養用部材（１）の製造方法。