JP2015211678A - 改良された特性を有するβ−グルコシダーゼＩ変異体 - Google Patents

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Kralj Slavko
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Abstract

【課題】改良されたβ−グルコシダーゼ（ＢＧＬ１）の提供。【解決手段】ＢＧＬ１変異体であって、（ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、（ｂ）セロビアーゼ活性、（ｃ）タンパク質発現、（ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の存在下でのセロビアーゼ活性又はＣＣ加水分解活性のいずれかにより測定されるＢＧＬ活性、（ｅ）熱安定性、（ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、及び（ｇ）グルコース存在下での加水分解活性、から選択される少なくとも２つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されているＢＧＬ１変異体。【選択図】なし

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２００９年１１月２０日に出願された米国特許仮出願第６１／２６３，２４０号の利益を主張し、その全体を参照により本明細書に組み込む。
（連邦により支援された研究開発の下でなされた発明の権利への宣言）
本発明は、条件付支援番号：Ｄｅ−Ｆｃ３６−０８ｇｏ１８０７８の下、エネルギー省により政府支援を得てなされた。政府は本発明において特定の権利を持つ。
（発明の分野）
本開示は、概して酵素を目的とし、具体的には、β−グルコシダーゼ変異体を目的とする。同様に、β−グルコシダーゼ変異体をコードする核酸、β−グルコシダーゼ変異体を含む組成物、β−グルコシダーゼ変異体の使用方法、並びに更なる有用なβ−グルコシダーゼ変異体の同定方法も開示する。
セルロース及びヘミセルロースは光合成により産生される最も豊富な植物性原料である。これらの原料は、高分子基質を単糖へと加水分解することのできる細胞外酵素を産生する多数の微生物（例えば、バクテリア、酵母及び真菌）により分解して、エネルギー源として使用することができる（Ａｒｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：２４３０９〜２４３１４，２００１）。非再生可能資源の制限が近付くにつれて、セルロースが主要な再生可能なエネルギー源になる可能性は非常に高い（Ｋｒｉｓｈｎａら、Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈ．，７７：１９３〜１９６，２００１）。生物学的過程を介しセルロースを有効利用することは、食物不足、餌不足及び燃料不足を克服する１つのアプローチになる（Ｏｈｍｉｙａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｇｅｎ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒ Ｒｅｖ．，１４：３６５〜４１４，１９９７）。
セルラーゼはセルロース（β−１，４−グルカン又はβ Ｄ−グルコシド結合）を加水分解して、グルコース、セロビオース、セロオリゴ糖及び同様物を産生する酵素である。セルラーゼは、慣習的に３つの主要な部類：エンドグルカナーゼ（ＥＣ ３．２．１．４）（「ＥＧ」）、エキソグルカナーゼ又はセロビオヒドロラーゼ（ＥＣ ３．２．１．９１）（「ＣＢＨ」）、並びにβ−グルコシダーゼ（β−Ｄ−グルコシドグルコヒドロラーゼ；ＥＣ ３．２．１．２１）（「ＢＧ」）に分類される（Ｋｎｏｗｌｅｓら、ＴＩＢＴＥＣＨ ５：２５５〜２６１，１９８７；及びＳｃｈｕｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１６０：２３４〜２４３，１９８８）。エンドグルカナーゼが主にセルロース繊維の非晶質部位に作用する一方で、セロビオヒドロラーゼは結晶質セルロースも分解することができる（Ｎｅｖａｌａｉｎｅｎ及びＰｅｎｔｔｉｌａ，Ｍｙｃｏｔａ，３０３〜３１９，１９９５）。したがって、結晶質セルロースを効率的に可溶化するには、セルラーゼ系にセロビオヒドロラーゼを存在させることが必要とされる（Ｓｕｕｒｎａｋｋｉら、Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ，７：１８９〜２０９，２０００）。β−グルコシダーゼは、セロビオース、セロオリゴ糖、及び他のグルコシドからＤ−グルコース単位を遊離させるよう作用する（Ｆｒｅｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８：９３３７〜９３４２，１９９３）。
セルラーゼが、多数のバクテリア、酵母及び真菌により産生されることは既知である。特定の真菌は、結晶質形態のセルロースを分解することのできる全セルラーゼ系を産生し、その結果、このセルラーゼは発酵により容易に大量に産生される。多くの酵母、例えばサッカロマイセス・セレヴィシエ（Saccharomyces cerevisiae）はセルロース加水分解能を欠くことから、糸状菌は特別な役割を果たす（例えば、Ｗｏｏｄら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１６０：８７〜１１６，１９８８を参照されたい）。
ＣＢＨ、ＥＧ及びＢＧの真菌セルラーゼ分類は、それぞれに分類される複数の成分を包含するよう更に拡大することができる。例えば、２つのＣＢＨ、すなわちＣＢＨ Ｉ（「ＣＢＨ１」）及びＣＢＨ ＩＩ（「ＣＢＨ２」）、少なくとも８つのＥＧ、すなわち、ＥＧ Ｉ、ＥＧ ＩＩ、ＥＧ ＩＩＩ、ＥＧ ＩＶ、ＥＧ Ｖ、ＥＧ ＶＩ、ＥＧ ＶＩＩ及びＥＧ ＶＩＩＩ、及び少なくとも５つのＢＧ、すなわちＢＧ１、ＢＧ２、ＢＧ３、ＢＧ４、ＢＧ５及びＢＧ７に関する既知の遺伝子を含有する、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）（ヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）とも呼ばれる）などの様々な真菌供給源より、多数のＣＢＨ、ＥＧ及びＢＧが単離されてきた（Ｆｏｒｅｍａｎら（２００３）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（３４）：３１９８８〜３１９９７）。ＥＧＩＶ、ＥＧＶＩ及びＥＧＶＩＩＩもキシログルカナーゼ活性を有する。
結晶質セルロースを効率的にグルコースへと変換させるためには、結晶質セルロースの加水分解活性が低い成分を単離するためにＣＢＨ、ＥＧ及びＢＧのそれぞれの部類の成分を含む、全セルラーゼ系が必要とされる（Ｆｉｌｈｏら、Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，４２：１〜５，１９９６）。エンド−１，４−β−グルカナーゼ（ＥＧ）及びエキソ−セロビオヒドロラーゼ（ＣＢＨ）は、セロオリゴ糖（主生成物はセロビオース）へのセルロースの加水分解を触媒する一方、β−グルコシダーゼ（ＢＧＬ）はオリゴ糖をグルコースへと変換する。異なる部類に由来するセルラーゼ成分間の相乗的な関係が観察されてきた。特に、ＥＧ型セルラーゼ及びＣＢＨ型セルラーゼは、相乗作用してセルロースを効率的に分解する。
これまでにもβ−グルコシダーゼ組成物は説明されてきたが、新しくかつ改良されたβ−グルコシダーゼ組成物が未だに必要とされている。改良されたβ−グルコシダーゼ組成物は、例えばバイオマス糖化時での使用が見出される。望ましい程度の発現、活性及び安定性の１つ以上を示すβ−グルコシダーゼは特に対象になる。
本開示は、β−グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドを提供する。本開示は、β−グルコシダーゼ変異体に一部基づく。同様に、β−グルコシダーゼ変異体をコードする核酸、β−グルコシダーゼ変異体を含む組成物、β−グルコシダーゼ変異体の使用方法、並びに更なる有用なβ−グルコシダーゼ変異体の同定方法も開示する。本発明の一態様では、β−グルコシダーゼ変異体は、ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）変異体である。
したがって、一態様では、本発明は、（ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、（ｂ）セロビアーゼ活性、（ｃ）タンパク質発現（ＨＰＬＣ）、（ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシの穂軸（ＣＣ）の存在下でのセロビアーゼ活性又はＣＣ加水分解活性のいずれかにより測定される、β−グルコシダーゼ活性、（ｅ）熱安定性、（ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、及び（ｇ）グルコースの存在下での加水分解活性の増加からなる群から選択される少なくとも２つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良された、β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、表４−８、３−２、４−２及び４−３に示す任意の変異体である。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｄ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｌ２６６Ａ、Ｉ５６７Ｅ、Ｓ２８３Ｆ、Ｓ２８３Ｐ、Ｔ２５８Ｅ、Ｔ２５８Ｉ、Ｔ２５８Ｋ、Ｔ２５８Ｑ、Ｐ５３６Ｔ、Ｐ５３６Ｗ、Ｉ５３２Ｙ、Ｙ５３０Ｔ、Ｐ６０７Ｄ、Ｑ４０６Ｍ、Ｑ４０６Ｓ、Ｖ６０２Ｔ、Ｇ３００Ｍ、Ａ６３０Ｓ、Ａ６３０Ｔ、Ｔ１８０Ｈ、Ｔ１８０Ｍ、Ａ４５０Ｍ、Ｉ４４４Ｅ、Ｉ４４４Ｆ、Ｉ４４４Ｎ、Ｉ４４４Ｗ、Ｉ４４４Ｙ、Ｖ５００Ｑ、Ａ６３３Ｉ、Ｓ４８２Ｐ、Ａ６６７Ｖ、Ａ４８５Ｌ、Ａ４８５Ｗ、Ｙ６７８Ｒ、Ｖ６０３Ｇ、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｆ２６０Ｗ、Ｙ５３０Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ａ６３０Ｙ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｅ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｐ６０７Ｈ、Ｔ０１１Ｅ、Ｔ０１１Ｙ、Ｎ１４６Ｅ、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、又はＬ２９３Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｆ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｎ２６１Ｃ、Ｔ２５８Ｃ、Ｆ３９２Ｑ、Ｓ６２４Ｅ、Ｐ６０７Ｃ、Ｐ６０４Ｍ、Ａ３７７Ｑ、Ｎ４６１Ａ、Ｎ４６１Ｆ、Ｎ４６１Ｐ、Ｔ４３６Ａ、Ｔ４３６Ｃ、Ｔ４３６Ｆ、Ｔ４３６Ｉ、Ｔ４３６Ｍ、Ｔ４３６Ｑ、Ｔ４３６Ｙ、Ｑ２２０Ｃ、Ａ６５５Ｌ、Ｔ６４６Ｈ、Ｙ６７８Ｆ、Ａ４６８Ｉ、Ｄ１７７Ｍ、Ｐ６６１Ｅ、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｔ４３６Ｅ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｗ、Ｙ５３０Ｆ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｅ１７０Ｆ、Ｓ５０７Ｇ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｂ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｉ５６７Ｑ、Ａ５６５Ｆ、Ａ５６５Ｋ、Ａ５６５Ｑ、Ａ５６５Ｖ、Ｆ５５６Ｅ、Ｆ２６０Ｉ、Ｐ６０７Ｅ、Ｇ６０５Ｒ、Ｇ３００Ｃ、Ａ３７７Ｃ、Ａ３７７Ｄ、Ｓ３０８Ｃ、Ｎ１４６Ｈ、Ｎ１４６Ｓ、Ａ６５５Ｃ、Ａ６５５Ｇ、Ｐ１７６Ｌ、Ｔ２０９Ｉ、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ａ５６５Ｃ、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｙ６３９Ｖ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ｅ１７０Ｆ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｃ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｉ５６７Ｋ、Ｉ５６７Ｒ、Ａ５６５Ｅ、Ａ５６５Ｓ、Ａ５６５Ｙ、Ｆ３９２Ｙ、Ｑ４０６Ｈ、Ｑ４０６Ｔ、Ｐ６０４Ｃ、Ｎ０３８Ｆ、Ｔ５６８Ａ、Ｎ４６１Ｇ、Ｙ６３９Ｌ、Ｙ６３９Ｍ、Ｔ２４３Ａ、Ｔ２４３Ｃ、Ｑ２４５Ｈ、Ｑ２４５Ｍ、Ｑ２４５Ｔ、Ｔ６４６Ａ、Ｔ６４６Ｃ、Ｉ６７１Ｆ、Ｉ６７１Ｌ、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ａ５６５Ｃ、Ｙ６３９Ｇ、Ｙ５３０Ｆ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、Ｓ５０７Ｇ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｄ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｉ５６７Ｓ、Ｇ６０６Ｅ、Ｇ６０６Ｈ、Ｇ６０６Ｎ、Ｇ６０６Ｓ、Ｌ２９３Ａ、Ｓ３０８Ｒ、Ｉ４４４Ｃ、Ｍ２０１Ｄ、Ｒ５４２Ｎ、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ｎ５６６Ｆ、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ｓ６９２Ｌ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｅ）及び（ｇ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｌ２６６Ｆ、Ｉ５６７Ｙ、Ａ２７０Ｒ、Ｓ３８４Ｃ、Ａ６３０Ｗ、Ｅ１２８Ｒ、Ｎ１４６Ｍ、Ｎ１４６Ｖ、Ｎ１４６Ｗ、Ｌ１８１Ｆ、Ｖ０４３Ｃ、Ｙ６３９Ｐ、Ｓ５０７Ｆ、Ｑ２４５Ｐ、Ｇ６６２Ｃ、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｐ６０７Ｆ、Ａ６３０Ｙ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６５５Ｄ、又はＬ２９３Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｃ）及び（ｅ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｎ２６１Ｅ、Ｎ２６１Ｋ、Ｎ４００Ａ、Ｖ６０２Ｋ、Ｌ２９３Ｉ、Ｎ４６１Ｓ、Ｄ４５７Ａ、Ｖ０４３Ｑ、Ｑ３０３Ｎ、Ｋ３２０Ｓ、Ｇ６６２Ｄ、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ａ６０１Ｄ、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｄ５６４Ｔ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６５５Ｄ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｆ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｎ５６６Ｌ、Ｎ５６６Ｐ、Ｎ５６６Ｗ、Ａ２７０Ｋ、Ａ２７０Ｎ、Ｆ５５６Ｈ、Ｆ５５６Ｋ、Ｐ６０４Ｎ、Ｎ４６１Ｄ、Ｎ４６３Ｅ、Ｋ２０６Ｇ、Ａ４６８Ｑ、Ａ４６８Ｙ、Ｎ５６６Ｆ、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ａ４６８Ｔ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｅ１７０Ｆ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｃ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｓ２８３Ｄ、Ａ２７０Ｄ、Ｎ１４６Ｙ、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ａ５６５Ｃ、Ｋ２０６Ｓ、Ｄ５６４Ｔ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｅ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｆ５５６Ｇ、Ｆ２６０Ｓ、Ｐ６０４Ｅ、Ｐ６０４Ｖ、Ｎ１４６Ｄ、Ｙ６３９Ｔ、Ｔ２２１Ｃ、Ｎ４７３Ｓ、Ｎ５８３Ｒ、Ｒ６４５Ｇ、Ｇ６６２Ｙ、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｓ６９２Ｌ、Ｄ５６４Ｔ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｔ５６８Ｅ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｃ）及び（ｄ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｄ２５９Ｓ、Ｔ２４３Ｖ、Ｙ５３０Ｆ、Ａ３３８Ｄ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｅ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｓ５５０Ｑ、Ｐ６０７Ｒ、Ｎ４００Ｑ、Ｖ６０２Ｆ、Ａ６０１Ｇ、Ａ６０１Ｌ、Ｌ２９３Ｋ、Ｙ５７５Ｃ、Ｙ５７５Ｒ、Ａ４５０Ｑ、Ｉ４８６Ｃ、Ｉ４８６Ｙ、Ａ６５５Ｓ、Ｑ２４５Ｆ、Ｄ３２９Ａ、Ｐ５３６Ｇ、Ｐ６０７Ｑ、Ａ６５５Ｑ、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｓ６９２Ｌ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ａ３３８Ｄ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、又はＬ２９３Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｆ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｐ５３６Ｆ、Ｆ３９２Ｃ、Ｓ６２４Ｌ、Ｓ６２４Ｒ、Ｓ６２４Ｗ、Ｉ４８６Ｆ、Ｉ４８６Ｗ、Ａ６６７Ｇ、Ａ６６７Ｓ、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｎ５６６Ｆ、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｗ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｃ）及び（ｇ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｓ３８４Ｇ、Ｓ３８４Ｗ、Ｎ０３８Ｅ、Ｎ０３８Ｍ、Ｎ０３８Ｐ、Ｖ０４３Ｈ、Ｖ０４３Ｗ、Ｙ０６８Ｅ、Ｙ０６８Ｇ、Ｙ０６８Ｍ、Ｌ１１０Ｃ、Ｌ１１０Ｇ、Ｌ１１０Ｑ、Ｌ１１０Ｗ、Ａ６５５Ｈ、Ｎ２６４Ｌ、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｙ６３９Ｇ、Ｋ２０６Ｓ、Ａ６５５Ｄ、又はＳ５０７Ｇである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｇ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｇ６０６Ｄ、Ｙ０６８Ｖ、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ｆ２６０Ｗ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｇ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ３７７Ｉ、Ｎ４６１Ｙ、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ｔ４３６Ｅ、Ｙ６３９Ｇ、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ｙ６３９Ｖ、Ｆ２６０Ｗ、Ｐ６０７Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、Ｅ１７０Ｆ、Ｓ５０７Ｇ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｃ）及び（ｆ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｋ２０６Ｄ、Ａ６０１Ｄ、Ｙ５３０Ｆ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｓ５０７Ｇ、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｅ）及び（ｆ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ４６８Ｇ、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ａ６０１Ｄ、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆである。
別態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｇ）が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｒ１７９Ｖ、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ｋ２０６Ｓ、Ａ４６８Ｔ、Ｙ６３９Ｖ、Ｐ６０７Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ｅ１７０Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｗ、Ｙ５３０Ｆ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、又はＬ２９３Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｄ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ｄ５６４Ｔ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６５５Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｎ５６６Ｆ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｅ１７０Ｆ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ５６５Ｃ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｐ５３６Ｇ、Ｐ６０７Ｑ、Ａ６５５Ｑ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ａ６３０Ｙ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、又はＬ２９３Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｃ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ６０１Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、又はＬ２９３Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ｐ６０７Ｆ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、又はＬ２９３Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｃ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、又はＡ６５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｔ４３６Ｅ、Ｆ２６０Ｗ、Ｅ１７０Ｆ、Ｓ５０７Ｇ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｃ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｙ６３９Ｇ、Ｐ６０７Ｆ、Ａ６５５Ｄ、又はＳ５０７Ｇである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｔ５６８Ｅ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｋ２０６Ｓ、又はＰ６０７Ｆである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ｆ２６０Ｗ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ａ６３０Ｙ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ４６８Ｔ、Ｅ１７０Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｓ６９２Ｌ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｙ６３９Ｖである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、又はＳ６８３Ｗである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、又はＮ４００Ｓである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｆ２６０Ｗ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｙ５３０Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｐ６０７Ｆである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｔ５６８Ｅ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｓ３０８Ｅである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ６３０Ｙ、又はＬ２９３Ｆである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ６５５Ｄである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｅ１７０Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ３３８Ｄ、又はＦ２６０Ｌである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｓ５０７Ｇである。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、又はＧ６６２Ｆである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｆ２６０Ｌである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ｌ２９３Ｆである。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良された、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供し、ＢＧＬ１変異体は、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである。
本発明は、（ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、（ｂ）セロビアーゼ活性、（ｃ）タンパク質発現、（ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシの穂軸（ＣＣ）の加水分解活性により測定される、β−グルコシダーゼ活性、（ｅ）熱安定性、（ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、並びに（ｇ）グルコース存在下での加水分解活性からなる群から選択される少なくとも２つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良された、ＢＧＬ１変異体も提供し、ＢＧＬ１変異体は、表５〜１に列挙されるものから選択される置換を２つ以上含む。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｃ）が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ、Ｄ１７８Ｋ｜Ａ３３８Ｋ｜Ｓ４７４Ｄ｜Ｇ６６２Ｌ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、及びＤ１７８Ｎ｜Ｎ２６４Ｋ｜Ａ３３８Ｄ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｋ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｆ）が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ２１５Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ、及びＱ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、及びＬ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｅ）及び（ｇ）が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜、Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｆ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｆ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｆ｜Ｒ２６５Ｍ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｔ２８２Ｉ｜Ｓ３１２Ｄ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｑ２１６Ｉ｜Ｔ２８２Ｋ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ａ６２２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ、Ａ３４７Ｙ｜Ｒ５４２Ｎ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｆ）が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｅ）が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｅ）が改良され、置換が、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｇ）が改良され、置換が、Ｅ１７０Ｆ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｓ３１２Ｙ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｇ）が改良され、置換が、Ｄ１７８Ｉ｜Ｑ３０３Ｅ｜Ａ３３８Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、及びＬ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｄ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７８Ｎ｜Ｎ２６４Ｋ｜Ａ３３８Ｄ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｋ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｇ）が改良され、置換が、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２ＤＥ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、及びＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの活性が改良され、置換が、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は７つの活性が改良され、置換が、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
本開示は、β−グルコシダーゼ変異体を提供し、ここで、この変異体はβ−グルコシダーゼ活性を有し、変異を含む成熟型であり、変異が単一変異である場合、変異は、３７、６１、１２５、１２９、１３２、１３３、１５８、１５９、１６６、１７７、２３６、２３７、２３８、２４０、２５２、３１４、４４４及び４４９からなる群から選択される位置ではなく、ここで、この位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。一部の実施形態では、変異は置換である。他の実施形態では、変異は欠失、又は挿入である。一部の好ましい実施形態では、変異は、Ｗ３７Ａ、Ｗ３７Ｇ、Ｗ３７Ｎ、Ｗ３７Ｄ、Ｄ６１Ｎ、Ｄ６１Ａ、Ｒ１２５Ｋ、Ｒ１２５Ａ、Ｋ１５８Ｇ、Ｈ１５９Ａ、Ｈ１５９Ｓ、Ｅ１６６Ｑ、Ｄ１７７Ｅ、Ｄ２３６Ｇ、Ｄ２３６Ｎ、Ｄ２３６Ｅ、Ｗ２３７Ｆ、Ｗ２３７Ａ、Ｗ２３７Ｌ、Ｗ２３７Ｃ、及びＷ２３７Ｐからなる群から選択される置換により構成されるものではない。一部の好ましい実施形態では、置換により、発現、活性及び安定性のうちの１つ以上が参照ＢＧＬ１と比較して改良された、β−グルコシダーゼ変異体が得られる。
加えて、本開示は、β−グルコシダーゼ変異体を提供し、ここで、この変異体はβ−グルコシダーゼ活性を有し、以下からなる群から選択される１つ以上の位置において置換を含む成熟型であり：２２、２４、２５、２６、２７、２８、３３、３５、３６、３７、５０、５１、５２、６１、６７、９１、９２、９３、９９、１００、１２５、１５８、１５９、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７６、１７７、１７８、１７９、１９４、１９６、１９９、２０４、２０８、２０９、２１４、２１５、２１６、２２４、２２５、２２６、２３６、２３７、２３８、２４２、２４８、２４９、２６３、２６４、２６５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８２、２８４、２８７、２９１、３０１、３０２、３０３、３０６、３１２、３１３、３１６、３２０、３２４、３２８、３２９、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４４、３４５、３４７、３６１、３６３、３６９、３７０、３７１、３７２、３７４、３７５、３８０、３８１、３８２、３９６、３９７、３９８、３９９、４０２、４０９、４１０、４１１、４２０、４２６、４２７、４２８、４４１、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５２、４５３、４５４、４５５、４６０、４６７、４７３、４７４、４７５、４８９、４９０、４９２、４９６、４９７、４９８、５２１、５２２、５３４、５４２、５４７、５４８、５５３、５５４、５５５、５６０、５６１、５６３、５６４、５７０、５７１、５８１、５８３、５８６、５９１、６０３、６１１、６１２、６２２、６２６、６２７、６３８、６４２、６４３、６４５、６４９、６５０、６５６、６６０、６６１、６６２、６６３、６６６、６７２、６７３、６７４、６７５、６８０、６８１、６８２、６８３、６８４、６８５、６９２、７０２、及び７０５、ここで、この位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。一部の実施形態では、変異体は、３７、６１、１５８、１５９、１６６、２３６、２３７、２３８、及び４４９からなる群から選択される１つ以上の位置において更なる置換を含み、ここで、この位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。一部の実施形態では、Ｗ０３７Ａ、Ｄ０６１Ｎ、Ｋ１５８Ｇ、Ｈ１５９Ａ、又はＳ、Ｅ１６６Ｑ、Ｄ２３６Ｇ、及びＷ２３７Ｐからなる群から更なる置換が選択される。それに加え、一部の実施形態では、１つ以上の置換の位置は、位置１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４及び２５からなる群から選択されるものである。一部の実施形態では、変異体は、ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１（ＴｒｉｒｅＢＧＬ１）、ハンセヌラ・アノマラ（Hansenula anomala）ＢＧＬ（ＨａｎａｎＢｇｌｕ）、ピロマイセスｓｐ（Piromyces sp）ＢＧＬ（ＰｉｒｓｐＢｇｌｕ）、コクシジオイデス・イミチス（Coccidioides immitis）ＢＧＬ（ＣｏｃｉｍＢｇｌｕ）、サッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Saccharomycopsis fibuligera）ＢＧＬ２（ＳａｃｆｉＢｇｌｕ２）、サッカロマイコプシス・フィブリゲラＢＧＬ１（ＳａｃｆｉＢｇｌｕ１）、セプトリア・リコペルシシ（Septoria lycopersici）ＢＧＬ（ＳｅｐｌｙＢｇｌｕ）、クライシア カプシュラタ（Kuraishia capsulata）ＢＧＬ（ＫｕｒｃａＢｇｌｕ）、トリコデルマ・リーゼイＢＧＬ７（ＴｒｉｒｅＢＧＬ７）、ウロマイセス・ファバエ（Uromyces fabae）ＢＧＬ（ＵｒｏｆａＢｇｌｕ）、アスペルギルス・テレウス（Aspergillus terreus）ＢＧＬ（ＡｓｐｔｅＢｇｌｕ）、ケトミウム・グロボサム（Chaetomium globosum）ＢＧＬ（ＣｈａｇｌＢｇｌｕ）、トリコデルマ・リーゼイＢＧＬ３（ＴｒｉｒｅＢＧＬ３）、ペニシリウム・ブラシリアナム（Penicillium brasilianum）ＢＧＬ（ＰｅｎｂｒＢＧＬ）、ペリコニアｓｐ．（Periconia sp.）ＢＧＬ（ＰｅｒｓｐＢｇｌｕ）、ファエオスファエリア・アベナリア（Phaeosphaeria avenaria）ＢＧＬ（ＰｈａａｖＢｇｌｕ）、アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus fumigatus）ＢＧＬ（ＡｓｐｆｕＢＧＬ）、アスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）ＢＧＬ１（ＡｓｐｏｒＢＧＬ１）、アスペルギルス・アキュリタス（Aspergillus aculeatus）ＢＧＬ１（ＡｓｐａｃＢＧＬ１）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）ＢＧＬ（ＡｓｐｎｉＢＧＬ）、タラロマイセス・エメルソニイ（Talaromyces emersonii）ＢＧＬ（ＴａｌｅｍＢｇｌｕ）、及びサーモアスカス・アウレンティアクス（Thermoascus aurentiacus）ＢＧＬ（ＴｈｅａｕＢＧＬ）からなる群から選択される親β−グルコシダーゼから誘導される。一部の好ましい実施形態では、変異体は、アミノ酸配列が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、及び配列番号２４からなる群のメンバーに対して少なくとも７５％（８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％）同一である、親β−グルコシダーゼから誘導される。一部の好ましい実施形態では、変異体は、Ａ１６、Ｋ２８、Ｇ３４、Ｇ４４、Ｃ５８、Ｄ６１、Ｒ６７、Ｅ１００、Ｇ１０５、Ｌ１１０、Ｐ１１２、Ｇ１２４、Ｒ１２５、Ｅ１２８、Ｄ１３３、Ｐ１３４、Ｌ１３６、Ｇ１４７、Ｑ１４９、Ｋ１５８、Ｈ１５９、Ｒ１６９、Ｓ１７３、Ｄ１７８、Ｐ１８８、Ｆ１８９、Ｍ２０１、Ｙ２０４、Ｎ２０８、Ｋ２２４、Ｆ２２９、Ｇ２３１、Ｄ２３６、Ｗ２３７、Ｇ２５０、Ｄ２５２、Ｍ２５３、Ｍ２５５、Ｐ２５６、Ｒ２８４、Ｄ２８７、Ｒ２９１、Ｋ３３５、Ｎ３３６、Ｌ３４１、Ｐ３４２、Ｇ３８５、Ｐ３９５、Ｅ４４１、Ｄ４５２、Ｖ４７８、Ｌ５１８、Ｙ５５９、Ｆ５６２、Ｆ５７３、Ｇ５７４、Ｇ５７６、Ｌ５７７及びＬ６５１からなる群から選択される保存残基を１〜５９個含み、ここで、この位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。これらの実施形態の部分集合において、変異体はＥ４４１及びＤ４５２を含む。好ましい実施形態では、置換により、発現、活性及び安定性のうちの１つ以上が参照ＢＧＬ１と比較したときに改良された、β−グルコシダーゼ変異体が得られる。
同様に、本開示では置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体も提供され、ここで、置換は、Ｋ０２２−Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｎ０２４−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｌ０２５−Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｑ０２６−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｄ０２７−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、又はＶ；Ｋ０２８−Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、又はＶ；Ｓ０３３−Ｃ、Ｇ、又はＴ；Ｖ０３５−Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｇ０３６−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｗ、又はＹ；Ｗ０３７−Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、Ｖ、又はＹ；Ｓ０５０−Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｋ０５１−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＶ、Ｉ０５２−Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、又はＶ；Ｄ０６１−Ｅ、Ｇ、又はＰ；Ｒ０６７−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｒ０９１−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｅ０９２−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｒ０９３−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｅ０９９−Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｗ、又はＹ；Ｅ１００−Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、又はＹ；Ｒ１２５−Ａ、又はＤ；Ｋ１５８−Ａ、Ｃ、Ｈ、又はＴ；Ｈ１５９−Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｎ、Ｗ、又はＹ；Ｎ１６３−Ａ、Ｈ、又はＳ；Ｅ１６４−Ｇ、又はＳ；Ｑ１６５−Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｅ１６６−Ｄ、Ｆ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＹ；Ｌ１６７−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｎ１６８−Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、又はＹ；Ｒ１６９−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｑ、Ｓ、又はＴ；Ｅ１７０−Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｐ１７６−Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｄ１７７−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｄ１７８−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｒ１７９−Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｑ１９４−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｎ１９６−Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、又はＴ；Ｓ１９９−Ａ、Ｇ、Ｎ、Ｔ、又はＶ；Ｙ２０４−Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｎ２０８−Ｋ、又はＲ；Ｔ２０９−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｅ２１４−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｄ２１５−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、又はＷ；Ｑ２１６−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｋ２２４−Ｈ、Ｒ、又はＶ；Ｄ２２５−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｑ２２６−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｄ２３６−Ａ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、又はＴ；Ｗ２３７−Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＹ；Ｎ２３８−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｍ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、又はＷ；Ｔ２４２−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｎ２４８−Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｓ２４９−Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、又はＶ；Ｎ２６３−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｎ２６４−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｒ２６５−Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｎ２７６−Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｋ、Ｍ、又はＱ；Ｓ２７７−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｗ、又はＹ；Ｎ２７８−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｑ２７９−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｔ２８２−Ｃ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、又はＶ；Ｒ２８４−Ｈ、Ｍ、又はＮ；Ｄ２８７−Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｑ３０１−Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＶ；Ｄ３０２−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｑ３０３−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｙ３０６−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｓ３１２−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｒ３１３−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｓ、Ｖ、又はＷ；Ｑ３１６−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｋ３２０−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＹ；Ｒ３２４−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｒ３２８−Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｄ３２９−Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、又はＹ；Ｌ３３４−Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｍ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｋ３３５−Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｎ３３６−Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｄ３３７−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ａ３３８−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｎ３３９−Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｖ、又はＹ；Ｋ３４４−Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＶ；Ｋ３４５−Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ａ３４７−Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、又はＹ；Ｈ３６１−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、又はＹ；Ｒ３６３−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｎ３６９−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｄ３７０−Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｗ、又はＹ；Ｋ３７１−Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｇ３７２−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｄ３７４−Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｄ３７５−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｒ、Ｖ、又はＷ；Ｍ３８０−Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｇ３８１−Ｈ；Ｗ３８２−Ｆ、Ｎ、又はＹ；Ｙ３９６−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｄ３９７−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ａ３９８−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｉ３９９−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｒ４０２−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｑ４０９−Ｃ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、又はＶ；Ｖ４１０−Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｔ４１１−Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、又はＹ；Ｓ４２０−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｒ４２６−Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｇ４２７−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｋ４２８−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｅ４４１−Ａ、Ｃ、Ｄ、又はＧ；Ｔ４４５−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、又はＹ；Ｖ４４６−Ａ、Ｃ、Ｋ、Ｑ、又はＲ；Ｅ４４７−Ａ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｇ４４８−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｎ４４９−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｄ４５２−Ｎ；Ｒ４５３−Ａ、Ｅ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、又はＳ；Ｎ４５４−Ａ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＶ；Ｎ４５５−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｈ４６０−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｗ、又はＹ；Ｑ４６７−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｎ４７３−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｓ４７４−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｎ４７５−Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｅ４８９−Ｄ、又はＮ；Ｑ４９０−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｌ４９２−Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｑ４９６−Ａ、Ｇ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｖ４９７−Ａ、Ｃ、Ｉ、Ｍ、Ｎ、又はＴ；Ｋ４９８−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｄ５２１−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｖ５２２−Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｋ５３４−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、又はＶ；Ｒ５４２−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｇ５４７−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｓ５４８−Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｅ５５３−Ｄ、Ｉ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｗ、又はＹ；Ｇ５５４−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｌ５５５−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｋ５６０−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｈ５６１−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｄ５６３−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｄ５６４−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｒ５７０−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、又はＶ；Ｙ５７１−Ｈ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、又はＷ；Ｋ５８１−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｎ５８３−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｒ５８６−Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｎ、Ｐ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｓ５９１−Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、又はＶ；Ｖ６０３−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｆ６１１−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｑ６１２−Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、又はＷ；Ａ６２２−Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｑ６２６−Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｔ、又はＶ；Ｖ６２７−Ｄ、Ｋ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、又はＹ；Ｔ６３８−Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｓ６４２−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ａ６４３−Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｒ６４５−Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｋ６４９−Ａ、Ｃ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、又はＹ；Ｑ６５０−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｋ６５６−Ｒ；Ｔ６６０−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｐ６６１−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｇ６６２−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、
Ｗ、又はＹ；Ｑ６６３−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、又はＷ；Ｔ６６６−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｎ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｒ６７２−Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｒ６７３−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｒ６７４−Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、Ｔ、Ｖ、又はＹ；Ｄ６７５−Ｃ、Ｅ、Ｈ、Ｌ、Ｓ、又はＹ；Ｄ６８０−Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｔ６８１−Ａ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ａ６８２−Ｃ、Ｅ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｗ、又はＹ；Ｓ６８３−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｖ、又はＷ；Ｑ６８４−Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、又はＴ；Ｋ６８５−Ａ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、又はＹ；Ｓ６９２−Ｃ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；Ｒ７０２−Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷ；及びＲ７０５−Ｃ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、又はＷからなる群のうちの１つ以上の置換を含み、ここで、この位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体は以下の特徴：発現（ＨＰＬＣ）、ＣＮＰＧアーゼ活性、熱安定性、グルコースによる阻害の減少、ｐＨ ５でのセロビアーゼ活性、ｐＨ ６でのセロビアーゼ活性、アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸の存在下で、セロビアーゼ活性、並びに酸で前処理したトウモロコシ茎葉の加水分解のうちの少なくとも１つに関し、ＰＩが１超である。
更に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ａ、Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｓ、Ｋ０２２Ｗ、Ｎ０２４Ａ、Ｎ０２４Ｄ、Ｎ０２４Ｅ、Ｎ０２４Ｌ、Ｎ０２４Ｐ、Ｌ０２５Ｗ、Ｖ０３５Ｓ、Ｖ０３５Ｗ、Ｗ０３７Ｅ、Ｗ０３７Ｆ、Ｗ０３７Ｈ、Ｗ０３７Ｓ、Ｗ０３７Ｙ、Ｋ０５１Ａ、Ｄ０６１Ｅ、Ｄ０６１Ｇ、Ｄ０６１Ｐ、Ｒ０６７Ｇ、Ｒ０６７Ｌ、Ｒ０６７Ｍ、Ｒ０６７Ｐ、Ｒ０６７Ｔ、Ｒ０６７Ｖ、Ｒ０６７Ｙ、Ｒ０９１Ｉ、Ｒ０９１Ｔ、Ｒ０９１Ｙ、Ｅ０９２Ｋ、Ｅ０９２Ｌ、Ｅ０９２Ｔ、Ｒ１２５Ａ、Ｒ１２５Ｄ、Ｋ１５８Ａ、Ｋ１５８Ｃ、Ｈ１５９Ｃ、Ｈ１５９Ｅ、Ｈ１５９Ｇ、Ｈ１５９Ｎ、Ｈ１５９Ｗ、Ｈ１５９Ｙ、Ｎ１６３Ａ、Ｎ１６３Ｈ、Ｎ１６３Ｓ、Ｌ１６７Ｗ、Ｒ１６９Ａ、Ｒ１６９Ｃ、Ｒ１６９Ｄ、Ｒ１６９Ｅ、Ｒ１６９Ｋ、Ｅ１７０Ａ、Ｅ１７０Ｋ、Ｅ１７０Ｌ、Ｅ１７０Ｐ、Ｅ１７０Ｗ、Ｅ１７０Ｙ、Ｐ１７６Ａ、Ｐ１７６Ｄ、Ｐ１７６Ｇ、Ｄ１７７Ｃ、Ｄ１７７Ｇ、Ｄ１７７Ｋ、Ｄ１７７Ｎ、Ｄ１７８Ａ、Ｄ１７８Ｅ、Ｄ１７８Ｐ、Ｄ１７８Ｔ、Ｄ１７８Ｗ、Ｑ１９４Ａ、Ｑ１９４Ｙ、Ｓ１９９Ａ、Ｙ２０４Ａ、Ｙ２０４Ｅ、Ｙ２０４Ｇ、Ｙ２０４Ｈ、Ｙ２０４Ｉ、Ｙ２０４Ｋ、Ｙ２０４Ｐ、Ｙ２０４Ｑ、Ｙ２０４Ｒ、Ｙ２０４Ｓ、Ｙ２０４Ｔ、Ｙ２０４Ｖ、Ｙ２０４Ｗ、Ｑ２１６Ｄ、Ｑ２１６Ｅ、Ｑ２１６Ｎ、Ｑ２１６Ｒ、Ｄ２２５Ｃ、Ｑ２２６Ａ、Ｄ２３６Ａ、Ｄ２３６Ｐ、Ｄ２３６Ｑ、Ｄ２３６Ｓ、Ｄ２３６Ｔ、Ｗ２３７Ｈ、Ｗ２３７Ｉ、Ｗ２３７Ｋ、Ｗ２３７Ｍ、Ｗ２３７Ｒ、Ｗ２３７Ｓ、Ｗ２３７Ｔ、Ｔ２４２Ｓ、Ｎ２４８Ａ、Ｎ２４８Ｃ、Ｓ２４９Ａ、Ｎ２６４Ｄ、Ｎ２６４Ｅ、Ｎ２６４Ｈ、Ｎ２６４Ｌ、Ｎ２６４Ｒ、Ｎ２６４Ｓ、Ｎ２６４Ｖ、Ｎ２６４Ｙ、Ｒ２６５Ａ、Ｒ２６５Ｇ、Ｒ２６５Ｙ、Ｓ２７７Ａ、Ｓ２７７Ｄ、Ｎ２７８Ａ、Ｎ２７８Ｄ、Ｔ２８２Ｄ、Ｔ２８２Ｎ、Ｔ２８２Ｒ、Ｔ２８２Ｖ、Ｑ３０３Ａ、Ｑ３０３Ｅ、Ｑ３０３Ｎ、Ｙ３０６Ａ、Ｙ３０６Ｅ、Ｙ３０６Ｆ、Ｙ３０６Ｌ、Ｙ３０６Ｗ、Ｓ３１２Ａ、Ｓ３１２Ｄ、Ｓ３１２Ｇ、Ｓ３１２Ｉ、Ｓ３１２Ｎ、Ｓ３１２Ｒ、Ｒ３１３Ｄ、Ｒ３１３Ｅ、Ｑ３１６Ａ、Ｑ３１６Ｄ、Ｑ３１６Ｆ、Ｋ３２０Ａ、Ｋ３２０Ｈ、Ｋ３２０Ｎ、Ｋ３２０Ｓ、Ｋ３２０Ｙ、Ｋ３３５Ｌ、Ｋ３３５Ｓ、Ｋ３３５Ｔ、Ａ３３８Ｄ、Ａ３３８Ｅ、Ａ３３８Ｇ、Ａ３３８Ｎ、Ａ３３８Ｒ、Ａ３４７Ｙ、Ｒ３６３Ａ、Ｒ３６３Ｇ、Ｒ３６３Ｋ、Ｒ３６３Ｍ、Ｒ３６３Ｖ、Ｄ３７０Ｅ、Ｄ３７０Ｑ、Ｋ３７１Ａ、Ｋ３７１Ｈ、Ｄ３７４Ａ、Ｙ３９６Ａ、Ｄ３９７Ｎ、Ｉ３９９Ｌ、Ｓ４２０Ａ、Ｓ４２０Ｄ、Ｇ４２７Ｅ、Ｇ４２７Ｓ、Ｋ４２８Ａ、Ｅ４４１Ａ、Ｅ４４１Ｃ、Ｅ４４１Ｄ、Ｅ４４１Ｇ、Ｖ４４６Ａ、Ｅ４４７Ａ、Ｅ４４７Ｎ、Ｇ４４８Ａ、Ｇ４４８Ｄ、Ｇ４４８Ｆ、Ｇ４４８Ｍ、Ｇ４４８Ｎ、Ｇ４４８Ｒ、Ｇ４４８Ｓ、Ｇ４４８Ｔ、Ｇ４４８Ｙ、Ｎ４５４Ａ、Ｎ４７３Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｓ４７４Ｇ、Ｓ４７４Ｋ、Ｓ４７４Ｎ、Ｓ４７４Ｒ、Ｓ４７４Ｔ、Ｓ４７４Ｖ、Ｓ４７４Ｙ、Ｅ４８９Ｄ、Ｄ５２１Ａ、Ｋ５３４Ｑ、Ｒ５４２Ａ、Ｒ５４２Ｄ、Ｇ５４７Ｅ、Ｇ５４７Ｌ、Ｇ５４７Ｐ、Ｓ５４８Ｅ、Ｓ５４８Ｆ、Ｓ５４８Ｈ、Ｓ５４８Ｌ、Ｋ５６０Ｈ、Ｎ５８３Ｄ、Ｒ５８６Ｄ、Ｖ６０３Ｌ、Ｖ６０３Ｍ、Ｖ６０３Ｑ、Ｖ６０３Ｓ、Ｑ６１２Ｄ、Ｑ６１２Ｇ、Ｑ６１２Ｋ、Ｑ６１２Ｖ、Ａ６２２Ｌ、Ａ６２２Ｗ、Ａ６２２Ｙ、Ｑ６２６Ｉ、Ｑ６２６Ｌ、Ｑ６２６Ｔ、Ｑ６２６Ｖ、Ｔ６３８Ｄ、Ｓ６４２Ｄ、Ａ６４３Ｍ、Ｋ６４９Ａ、又はＫ６４９Ｗ；Ｑ６５０Ｄ；Ｇ６６２Ｄ、Ｇ６６２Ｅ、Ｇ６６２Ｌ、Ｇ６６２Ｓ、又はＧ６６２Ｔ；Ｑ６６３Ｄ、又はＱ６６３Ｇ；Ｔ６６６Ａ、Ｒ６７３Ｎ、Ｒ６７３Ｗ、Ｓ６８３Ｋ、Ｑ６８４Ｄ、Ｑ６８４Ｆ、Ｑ６８４Ｈ、Ｑ６８４Ｋ、Ｑ６８４Ｌ、Ｑ６８４Ｍ、Ｑ６８４Ｒ、Ｑ６８４Ｓ、及びＱ６８４Ｔからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体は発現レベルが改善されている（例えば、ＰＩは１超である）。
同様に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ｆ、Ｋ０２２Ｇ、Ｋ０２２Ｈ、Ｋ０２２Ｉ、Ｋ０２２Ｐ、Ｋ０２２Ｑ、Ｋ０２２Ｒ、Ｋ０２２Ｖ、Ｋ０２２Ｙ、Ｎ０２４Ｃ、Ｎ０２４Ｆ、Ｎ０２４Ｇ、Ｎ０２４Ｋ、Ｎ０２４Ｍ、Ｎ０２４Ｑ、Ｎ０２４Ｒ、Ｎ０２４Ｓ、Ｎ０２４Ｔ、Ｎ０２４Ｖ、Ｎ０２４Ｙ、Ｌ０２５Ａ、Ｌ０２５Ｄ、Ｌ０２５Ｆ、Ｌ０２５Ｇ、Ｌ０２５Ｉ、Ｌ０２５Ｋ、Ｌ０２５Ｎ、Ｌ０２５Ｑ、Ｌ０２５Ｒ、Ｌ０２５Ｓ、Ｌ０２５Ｔ、Ｌ０２５Ｖ、Ｌ０２５Ｙ、Ｑ０２６Ｃ、Ｑ０２６Ｄ、Ｑ０２６Ｅ、Ｑ０２６Ｇ、Ｑ０２６Ｈ、Ｑ０２６Ｉ、Ｑ０２６Ｋ、Ｑ０２６Ｌ、Ｑ０２６Ｐ、Ｑ０２６Ｒ、Ｑ０２６Ｓ、Ｑ０２６Ｔ、Ｑ０２６Ｖ、Ｑ０２６Ｗ、Ｑ０２６Ｙ、Ｄ０２７Ａ、Ｄ０２７Ｃ、Ｄ０２７Ｅ、Ｄ０２７Ｌ、Ｄ０２７Ｍ、Ｄ０２７Ｑ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｋ０２８Ｌ、Ｋ０２８Ｍ、Ｋ０２８Ｓ、Ｋ０２８Ｖ、Ｓ０３３Ｃ、Ｓ０３３Ｇ、Ｓ０３３Ｔ、Ｖ０３５Ｃ、Ｖ０３５Ｅ、Ｖ０３５Ｇ、Ｖ０３５Ｈ、Ｖ０３５Ｋ、Ｖ０３５Ｌ、Ｖ０３５Ｎ、Ｖ０３５Ｐ、Ｖ０３５Ｑ、Ｖ０３５Ｒ、Ｖ０３５Ｔ、Ｖ０３５Ｙ、Ｇ０３６Ｃ、Ｇ０３６Ｄ、Ｇ０３６Ｅ、Ｇ０３６Ｋ、Ｇ０３６Ｎ、Ｇ０３６Ｒ、Ｇ０３６Ｓ、Ｗ０３７Ｍ、Ｗ０３７Ｖ、Ｓ０５０Ａ、Ｓ０５０Ｃ、Ｓ０５０Ｆ、Ｓ０５０Ｇ、Ｓ０５０Ｉ、Ｓ０５０Ｋ、Ｓ０５０Ｌ、Ｓ０５０Ｍ、Ｓ０５０Ｎ、Ｓ０５０Ｐ、Ｓ０５０Ｒ、Ｓ０５０Ｔ、Ｓ０５０Ｖ、Ｓ０５０Ｙ、Ｋ０５１Ｃ、Ｋ０５１Ｄ、Ｋ０５１Ｅ、Ｋ０５１Ｇ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｉ、Ｋ０５１Ｌ、Ｋ０５１Ｍ、Ｋ０５１Ｎ、Ｋ０５１Ｑ、Ｋ０５１Ｒ、Ｋ０５１Ｓ、Ｋ０５１Ｔ、Ｋ０５１Ｖ、Ｉ０５２Ａ、Ｉ０５２Ｆ、Ｉ０５２Ｍ、Ｉ０５２Ｐ、Ｉ０５２Ｓ、Ｉ０５２Ｔ、Ｉ０５２Ｖ、Ｒ０６７Ａ、Ｒ０６７Ｃ、Ｒ０６７Ｄ、Ｒ０６７Ｅ、Ｒ０６７Ｆ、Ｒ０６７Ｉ、Ｒ０６７Ｎ、Ｒ０６７Ｑ、Ｒ０６７Ｓ、Ｒ０６７Ｗ、Ｒ０９１Ａ、Ｒ０９１Ｄ、Ｒ０９１Ｅ、Ｒ０９１Ｆ、Ｒ０９１Ｇ、Ｒ０９１Ｈ、Ｒ０９１Ｋ、Ｒ０９１Ｌ、Ｒ０９１Ｎ、Ｒ０９１Ｑ、Ｒ０９１Ｓ、Ｒ０９１Ｖ、Ｒ０９１Ｗ、Ｅ０９２Ａ、Ｅ０９２Ｃ、Ｅ０９２Ｄ、Ｅ０９２Ｆ、Ｅ０９２Ｈ、Ｅ０９２Ｉ、Ｅ０９２Ｍ、Ｅ０９２Ｎ、Ｅ０９２Ｑ、Ｅ０９２Ｒ、Ｅ０９２Ｖ、Ｅ０９２Ｙ、Ｒ０９３Ａ、Ｒ０９３Ｃ、Ｒ０９３Ｄ、Ｒ０９３Ｅ、Ｒ０９３Ｆ、Ｒ０９３Ｈ、Ｒ０９３Ｋ、Ｒ０９３Ｌ、Ｒ０９３Ｍ、Ｒ０９３Ｑ、Ｒ０９３Ｓ、Ｒ０９３Ｔ、Ｒ０９３Ｖ、Ｒ０９３Ｗ、Ｅ０９９Ａ、Ｅ０９９Ｄ、Ｅ０９９Ｆ、Ｅ０９９Ｉ、Ｅ０９９Ｋ、Ｅ０９９Ｍ、Ｅ０９９Ｎ、Ｅ０９９Ｗ、Ｅ０９９Ｙ、Ｅ１００Ａ、Ｅ１００Ｇ、Ｅ１００Ｉ、Ｅ１００Ｋ、Ｅ１００Ｌ、Ｅ１００Ｍ、Ｅ１００Ｎ、Ｅ１００Ｑ、Ｅ１００Ｓ、Ｅ１００Ｔ、Ｅ１００Ｙ、Ｋ１５８Ｈ、Ｋ１５８Ｔ、Ｅ１６４Ｇ、Ｅ１６４Ｓ、Ｑ１６５Ｃ、Ｑ１６５Ｄ、Ｑ１６５Ｆ、Ｑ１６５Ｇ、Ｑ１６５Ｈ、Ｑ１６５Ｉ、Ｑ１６５Ｋ、Ｑ１６５Ｌ、Ｑ１６５Ｍ、Ｑ１６５Ｎ、Ｑ１６５Ｒ、Ｑ１６５Ｓ、Ｑ１６５Ｔ、Ｑ１６５Ｖ、Ｑ１６５Ｗ、Ｑ１６５Ｙ、Ｅ１６６Ｄ、Ｅ１６６Ｋ、Ｅ１６６Ｌ、Ｅ１６６Ｎ、Ｅ１６６Ｐ、Ｅ１６６Ｒ、Ｅ１６６Ｓ、Ｅ１６６Ｔ、Ｅ１６６Ｙ、Ｌ１６７Ａ、Ｌ１６７Ｃ、Ｌ１６７Ｄ、Ｌ１６７Ｅ、Ｌ１６７Ｆ、Ｌ１６７Ｇ、Ｌ１６７Ｍ、Ｌ１６７Ｎ、Ｌ１６７Ｑ、Ｌ１６７Ｒ、Ｌ１６７Ｓ、Ｌ１６７Ｖ、Ｌ１６７Ｙ、Ｎ１６８Ａ、Ｎ１６８Ｄ、Ｎ１６８Ｅ、Ｎ１６８Ｇ、Ｎ１６８Ｈ、Ｎ１６８Ｑ、Ｎ１６８Ｒ、Ｎ１６８Ｔ、Ｎ１６８Ｙ、Ｒ１６９Ｆ、Ｒ１６９Ｈ、Ｒ１６９Ｑ、Ｒ１６９Ｓ、Ｒ１６９Ｔ、Ｅ１７０Ｄ、Ｅ１７０Ｆ、Ｅ１７０Ｉ、Ｅ１７０Ｍ、Ｅ１７０Ｖ、Ｐ１７６Ｅ、Ｐ１７６Ｆ、Ｐ１７６Ｈ、Ｐ１７６Ｋ、Ｐ１７６Ｌ、Ｐ１７６Ｍ、Ｐ１７６Ｑ、Ｐ１７６Ｒ、Ｐ１７６Ｓ、Ｐ１７６Ｔ、Ｐ１７６Ｖ、Ｐ１７６Ｗ、Ｐ１７６Ｙ、Ｄ１７７Ａ、Ｄ１７７Ｅ、Ｄ１７７Ｆ、Ｄ１７７Ｈ、Ｄ１７７Ｌ、Ｄ１７７Ｍ、Ｄ１７７Ｑ、Ｄ１７７Ｒ、Ｄ１７７Ｖ、Ｄ１７７Ｗ、Ｄ１７７Ｙ、Ｄ１７８Ｃ、Ｄ１７８Ｋ、Ｄ１７８Ｎ、Ｄ１７８Ｑ、Ｄ１７８Ｒ、Ｄ１７８Ｓ、Ｄ１７８Ｙ、Ｒ１７９Ａ、Ｒ１７９Ｃ、Ｒ１７９Ｇ、Ｒ１７９Ｉ、Ｒ１７９Ｋ、Ｒ１７９Ｓ、Ｒ１７９Ｔ、Ｒ１７９Ｖ、Ｒ１７９Ｗ、Ｑ１９４Ｃ、Ｑ１９４Ｅ、Ｑ１９４Ｆ、Ｑ１９４Ｇ、Ｑ１９４Ｈ、Ｑ１９４Ｋ、Ｑ１９４Ｌ、Ｑ１９４Ｍ、Ｑ１９４Ｒ、Ｑ１９４Ｔ、Ｑ１９４Ｗ、Ｎ１９６Ｅ、Ｎ１９６Ｇ、Ｎ１９６Ｈ、Ｎ１９６Ｌ、Ｎ１９６Ｍ、Ｎ１９６Ｐ、Ｎ１９６Ｑ、Ｎ１９６Ｒ、Ｎ１９６Ｔ、Ｓ１９９Ｇ、Ｓ１９９Ｎ、Ｓ１９９Ｔ、Ｓ１９９Ｖ、Ｙ２０４Ｆ、Ｙ２０４Ｍ、Ｎ２０８Ｋ、Ｎ２０８Ｒ、Ｔ２０９Ｃ、Ｔ２０９Ｄ、Ｔ２０９Ｅ、Ｔ２０９Ｇ、Ｔ２０９Ｈ、Ｔ２０９Ｉ、Ｔ２０９Ｋ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｍ、Ｔ２０９Ｑ、Ｔ２０９Ｒ、Ｔ２０９Ｓ、Ｔ２０９Ｖ、Ｔ２０９Ｗ、Ｔ２０９Ｙ、Ｅ２１４Ａ、Ｅ２１４Ｃ、Ｅ２１４Ｄ、Ｅ２１４Ｇ、Ｅ２１４Ｈ、Ｅ２１４Ｋ、Ｅ２１４Ｌ、Ｅ２１４Ｍ、Ｅ２１４Ｎ、Ｅ２１４Ｐ、Ｅ２１４Ｑ、Ｅ２１４Ｒ、Ｅ２１４Ｓ、Ｅ２１４Ｔ、Ｅ２１４Ｖ、Ｅ２１４Ｙ、Ｄ２１５Ａ、Ｄ２１５Ｃ、Ｄ２１５Ｅ、Ｄ２１５Ｆ、Ｄ２１５Ｇ、Ｄ２１５Ｈ、Ｄ２１５Ｌ、Ｄ２１５Ｍ、Ｄ２１５Ｎ、Ｄ２１５Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｄ２１５Ｗ、Ｑ２１６Ａ、Ｑ２１６Ｃ、Ｑ２１６Ｆ、Ｑ２１６Ｇ、Ｑ２１６Ｈ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｋ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２１６Ｍ、Ｑ２１６Ｐ、Ｑ２１６Ｓ、Ｑ２１６Ｔ、Ｑ２１６Ｗ、Ｑ２１６Ｙ、Ｋ２２４Ｈ、Ｋ２２４Ｒ、Ｋ２２４Ｖ、Ｄ２２５Ａ、Ｄ２２５Ｅ、Ｄ２２５Ｆ、Ｄ２２５Ｇ、Ｄ２２５Ｈ、Ｄ２２５Ｉ、Ｄ２２５Ｌ、Ｄ２２５Ｍ、Ｄ２２５Ｑ、Ｄ２２５Ｓ、Ｄ２２５Ｔ、Ｄ２２５Ｖ、Ｄ２２５Ｗ、Ｄ２２５Ｙ、Ｑ２２６Ｃ、Ｑ２２６Ｄ、Ｑ２２６Ｅ、Ｑ２２６Ｆ、Ｑ２２６Ｈ、Ｑ２２６Ｉ、Ｑ２２６Ｋ、Ｑ２２６Ｌ、Ｑ２２６Ｍ、Ｑ２２６Ｎ、Ｑ２２６Ｒ、Ｑ２２６Ｓ、Ｑ２２６Ｔ、Ｑ２２６Ｖ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｗ２３７Ｙ、Ｎ２３８Ａ、Ｎ２３８Ｃ、Ｎ２３８Ｄ、Ｎ２３８Ｅ、Ｎ２３８Ｆ、Ｎ２３８Ｇ、Ｎ２３８Ｍ、Ｎ２３８Ｐ、Ｎ２３８Ｓ、Ｎ２３８Ｔ、Ｎ２３８Ｗ、Ｔ２４２Ａ、Ｔ２４２Ｃ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｆ、Ｔ２４２Ｇ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ２４２Ｉ、Ｔ２４２Ｋ、Ｔ２４２Ｌ、Ｔ２４２Ｍ、Ｔ２４２Ｎ、Ｔ２４２Ｑ、Ｔ２４２Ｒ、Ｔ２４２Ｖ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４８Ｆ、Ｎ２４８Ｇ、Ｎ２４８Ｌ、Ｎ２４８Ｔ、Ｎ２４８Ｗ、Ｎ２４８Ｙ、Ｓ２４９Ｇ、Ｓ２４９Ｉ、Ｓ２４９Ｍ、Ｓ２４９Ｖ、Ｎ２６３Ａ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｄ、Ｎ２６３Ｅ、Ｎ２６３Ｆ、Ｎ２６３Ｇ、Ｎ２６３Ｈ、Ｎ２６３Ｉ、Ｎ２６３Ｋ、Ｎ２６３Ｌ、Ｎ２６３Ｐ、Ｎ２６３Ｑ、Ｎ２６３Ｒ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６３Ｖ、Ｎ２６３Ｙ、Ｎ２６４Ａ、Ｎ２６４Ｃ、Ｎ２６４Ｇ、Ｎ２６４Ｋ、Ｎ２６４Ｍ、Ｎ２６４Ｑ、Ｎ２６４Ｔ、Ｒ２６５Ｅ、Ｒ２６５Ｆ、Ｒ２６５Ｉ、Ｒ２６５Ｋ、Ｒ２６５Ｌ、Ｒ２６５Ｍ、Ｒ２６５Ｎ、Ｒ２６５Ｐ、Ｒ２６５Ｑ、Ｒ２６５Ｓ、Ｒ２６５Ｔ、Ｒ２６５Ｖ、Ｎ２７６Ａ、Ｎ２７６Ｆ、Ｎ２７６Ｋ、Ｎ２７６Ｍ、Ｎ２７６Ｑ、Ｓ２７７Ｃ、Ｓ２７７Ｅ、Ｓ２７７Ｆ、Ｓ２７７Ｇ、Ｓ２７７Ｈ、Ｓ２７７Ｉ、Ｓ２７７Ｍ、Ｓ２７７Ｎ、Ｓ２７７Ｐ、Ｓ２７７Ｑ、Ｓ２７７Ｒ、Ｓ２７７Ｙ、Ｎ２７８Ｃ、Ｎ２７８Ｆ、Ｎ２７８Ｇ、Ｎ２７８Ｈ、Ｎ２７８Ｉ、Ｎ２７８Ｌ、Ｎ２７８Ｍ、Ｎ２７８Ｑ、Ｎ２７８Ｒ、Ｎ２７８Ｓ、Ｎ２７８Ｔ、Ｎ２７８Ｖ、Ｎ２７８Ｗ、Ｎ２７８Ｙ、Ｑ２７９Ｃ、Ｑ２７９Ｄ、Ｑ２７９Ｅ、Ｑ２７９Ｇ、Ｑ２７９Ｈ、Ｑ２７９Ｉ、Ｑ２７９Ｋ、Ｑ２７９Ｎ、Ｑ２７９Ｓ、Ｑ２７９Ｔ、Ｑ２７９Ｖ、Ｑ２７９Ｙ、Ｔ２８２Ｃ、Ｔ２８２Ｇ、Ｔ２８２Ｋ、Ｔ２８２Ｌ、Ｔ２８２Ｐ、Ｔ２８２Ｓ、Ｒ２８４Ｈ、Ｒ２８４Ｎ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｅ、Ｄ２８７Ｆ、Ｄ２８７Ｇ、Ｄ２８７Ｈ、Ｄ２８７Ｉ、Ｄ２８７Ｋ、Ｄ２８７Ｌ、Ｄ２８７Ｍ、Ｄ２８７Ｎ、Ｄ２８７Ｓ、Ｄ２８７Ｖ、Ｄ２８７Ｗ、Ｄ２８７Ｙ、Ｑ３０１Ａ、Ｑ３０１Ｅ、Ｑ３０１Ｇ、Ｑ３０１Ｌ、Ｑ３０１Ｎ、Ｑ３０１Ｒ、Ｑ３０１Ｓ、Ｑ３０１Ｔ、Ｑ３０１Ｖ、Ｄ３０２Ａ、Ｄ３０２Ｃ、Ｄ３０２Ｅ、Ｄ３０２Ｆ、Ｄ３０２Ｇ、Ｄ３０２Ｋ、Ｄ３０２Ｌ、Ｄ３０２Ｍ、Ｄ３０２Ｎ、Ｄ３０２Ｐ、Ｄ３０２Ｓ、Ｄ３０２Ｔ、Ｄ３０２Ｗ、Ｄ３０２Ｙ、Ｑ３０３Ｃ、Ｑ３０３Ｄ、Ｑ３０３Ｆ、Ｑ３０３Ｇ、Ｑ３０３Ｈ、Ｑ３０３Ｉ、Ｑ３０３Ｋ、Ｑ３０３Ｌ、Ｑ３０３Ｍ、Ｑ３０３Ｐ、Ｑ３０３Ｒ、Ｑ３０３Ｓ、Ｑ３０３Ｔ、Ｑ３０３Ｖ、Ｑ３０３Ｗ、Ｑ３０３Ｙ、Ｙ３０６Ｃ、Ｙ３０６Ｇ、Ｙ３０６Ｉ、Ｙ３０６Ｋ、Ｙ３０６Ｍ、Ｙ３０６Ｎ、Ｙ３０６Ｐ、Ｙ３０６Ｑ、Ｙ３０６Ｒ、Ｙ３０６Ｓ、Ｙ３０６Ｔ、Ｙ３０６Ｖ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｋ、Ｓ３１２Ｌ、Ｓ３１２Ｍ、Ｓ３１２Ｑ、Ｓ３１２Ｔ、Ｓ３１２Ｖ、Ｓ３１２Ｗ、Ｓ３１２Ｙ、Ｒ３１３Ａ、Ｒ３１３Ｃ、Ｒ３１３Ｇ、Ｒ３１３Ｋ、Ｒ３１３Ｌ、Ｒ３１３Ｎ、Ｒ３１３Ｓ、Ｒ３１３Ｖ、Ｒ３１３Ｗ、Ｑ３１６Ｃ、Ｑ３１６Ｅ、Ｑ３１６Ｇ、Ｑ３１６Ｈ、Ｑ３１６Ｉ、Ｑ３１６Ｋ、Ｑ３１６Ｌ、Ｑ３１６Ｍ、Ｑ３１６Ｎ、Ｑ３１６Ｐ、Ｑ３１６Ｒ、Ｑ３１６Ｓ、Ｑ３１６Ｔ、Ｑ３１６Ｖ、Ｑ３１６Ｗ、Ｑ３１６Ｙ、Ｋ３２０Ｃ、Ｋ３２０Ｅ、Ｋ３２０Ｇ、Ｋ３２０Ｌ、Ｋ３２０Ｍ、Ｋ３２０Ｐ、Ｋ３２０Ｑ、Ｋ３２０Ｒ、Ｋ３２０Ｔ、Ｒ３２４Ｃ、Ｒ３２４Ｄ、Ｒ３２４Ｅ、Ｒ３２４Ｆ、Ｒ３２４Ｈ、Ｒ３２４Ｉ、Ｒ３２４Ｋ、Ｒ３２４Ｌ、Ｒ３２４Ｍ、Ｒ３２４Ｑ、Ｒ３２４Ｖ、Ｒ３２４Ｗ、Ｒ３２４Ｙ、Ｒ３２８Ｃ、Ｒ３２８Ｅ、Ｒ３２８Ｇ、Ｒ３２８Ｉ、Ｒ３２８Ｋ、Ｒ３２８Ｌ、Ｒ３２８Ｍ、Ｒ３２８Ｑ、Ｒ３２８Ｓ、Ｒ３２８Ｔ、Ｒ３２８Ｖ、Ｄ３２９Ａ、Ｄ３２９Ｅ、Ｄ３２９Ｆ、Ｄ３２９Ｇ、Ｄ３２９Ｈ、Ｄ３２９Ｍ、Ｄ３２９Ｎ、Ｄ３２９Ｑ、Ｄ３２９Ｓ、Ｄ３２９Ｔ、Ｄ３２９Ｙ、Ｌ３３４Ａ、Ｌ３３４Ｃ、Ｌ３３４Ｆ、Ｌ３３４Ｍ、Ｌ３３４Ｔ、Ｌ３３４Ｖ、Ｌ３３４Ｗ、Ｋ３３５Ａ、Ｋ３３５Ｄ、Ｋ３３５Ｆ、Ｋ３３５Ｇ、Ｋ３３５Ｈ、Ｋ３３５Ｉ、Ｋ３３５Ｍ、Ｋ３３５Ｎ、Ｋ３３５Ｒ、Ｋ３３５Ｖ、Ｋ３３５Ｗ、Ｎ３３６Ａ、Ｎ３３６Ｃ、Ｎ３３６Ｇ、Ｎ３３６Ｈ、Ｎ３３６Ｌ、Ｎ３３６Ｍ、Ｎ３３６Ｑ、Ｎ３３６Ｒ、Ｎ３３６Ｓ、Ｎ３３６Ｔ、Ｎ３３６Ｖ、Ｎ３３６Ｙ、Ｄ３３７Ａ、Ｄ３３７Ｃ、Ｄ３３７Ｅ、Ｄ３３７Ｇ、Ｄ３３７Ｈ、Ｄ３３７Ｋ、Ｄ３３７Ｌ、Ｄ３３７Ｍ、Ｄ３３７Ｎ、Ｄ３３７Ｒ、Ｄ３３７Ｓ、Ｄ３３７Ｔ、Ｄ３３７Ｖ、Ｄ３３７Ｗ、Ｄ３３７Ｙ、Ａ３３８Ｃ、Ａ３３８Ｆ、Ａ３３８Ｈ、Ａ３３８Ｉ、Ａ３３８Ｋ、Ａ３３８Ｌ、Ａ３３８Ｍ、Ａ３３８Ｐ、Ａ３３８Ｑ、Ａ３３８Ｖ、Ａ３３８Ｗ、Ａ３３８Ｙ、Ｎ３３９Ｄ、Ｎ３３９Ｅ、Ｎ３３９Ｇ、Ｎ３３９Ｈ、Ｎ３３９Ｉ、Ｎ３３９Ｋ、Ｎ３３９Ｌ、Ｎ３３９Ｐ、Ｎ３３９Ｑ、Ｎ３３９Ｒ、Ｎ３３９Ｖ、Ｎ３３９Ｙ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４４Ｅ、Ｋ３４４Ｆ、Ｋ３４４Ｇ、Ｋ３４４Ｉ、Ｋ３４４Ｌ、Ｋ３４４Ｍ、Ｋ３４４Ｎ、Ｋ３４４Ｐ、Ｋ３４４Ｑ、Ｋ３４４Ｒ、Ｋ３４４Ｓ、Ｋ３４４Ｔ、Ｋ３４４Ｖ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｄ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｆ、Ｋ３４５Ｇ、Ｋ３４５Ｈ、Ｋ３４５Ｎ、Ｋ３４５Ｐ、Ｋ３４５Ｑ、Ｋ３４５Ｒ、Ｋ３４５Ｓ、Ｋ３４５Ｔ、Ｋ３４５Ｖ、Ｋ３４５Ｗ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｄ、Ａ３４７Ｆ、Ａ３４７Ｈ、Ａ３４７Ｉ、Ａ３４７Ｋ、Ａ３４７Ｌ、Ａ３４７Ｍ、Ａ３４７Ｐ、Ａ３４７Ｑ、Ａ３４７Ｒ、Ａ３４７Ｓ、Ｈ３６１Ａ、Ｈ３６１Ｃ、Ｈ３６１Ｄ、Ｈ３６１Ｅ、Ｈ３６１Ｇ、Ｈ３６１Ｋ、Ｈ３６１Ｌ、Ｈ３６１Ｍ、Ｈ３６１Ｎ、Ｈ３６１Ｐ、Ｈ３６１Ｓ、Ｈ３６１Ｔ、Ｈ３６１Ｙ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｅ、Ｒ３６３Ｌ、Ｒ３６３Ｎ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｓ、Ｒ３６３Ｔ、Ｒ３６３Ｗ、Ｒ３６３Ｙ、Ｎ３６９Ａ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｆ、Ｎ３６９Ｉ、Ｎ３６９Ｌ、Ｎ３６９Ｍ、Ｎ３６９Ｒ、Ｎ３６９Ｓ、Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｖ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｄ３７０Ｆ、Ｄ３７０Ｇ、Ｄ３７０Ｓ、Ｄ３７０Ｗ、Ｄ３７０Ｙ、Ｋ３７１Ｄ、Ｋ３７１Ｆ、Ｋ３７１Ｇ、Ｋ３７１Ｌ、Ｋ３７１Ｎ、Ｋ３７１Ｑ、Ｋ３７１Ｒ、Ｋ３７１Ｓ、Ｋ３７１Ｔ、Ｋ３７１Ｖ、Ｋ３７１Ｗ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ３７２Ｃ、Ｇ３７２Ｄ、Ｇ３７２Ｅ、Ｇ３７２Ｌ、Ｇ３７２Ｍ、Ｇ３７２Ｎ、Ｇ３７２Ｓ、Ｇ３７２Ｔ、Ｇ３７２Ｖ
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６６２Ｍ、Ｇ６６２Ｎ、Ｇ６６２Ｑ、Ｇ６６２Ｒ、Ｇ６６２Ｗ、Ｇ６６２Ｙ、Ｑ６６３Ａ、Ｑ６６３Ｃ、Ｑ６６３Ｅ、Ｑ６６３Ｆ、Ｑ６６３Ｈ、Ｑ６６３Ｉ、Ｑ６６３Ｋ、Ｑ６６３Ｌ、Ｑ６６３Ｍ、Ｑ６６３Ｎ、Ｑ６６３Ｒ、Ｑ６６３Ｓ、Ｑ６６３Ｖ、Ｑ６６３Ｗ、Ｔ６
６６Ｃ、Ｔ６６６Ｄ、Ｔ６６６Ｅ、Ｔ６６６Ｆ、Ｔ６６６Ｇ、Ｔ６６６Ｈ、Ｔ６６６Ｋ、Ｔ６６６Ｌ、Ｔ６６６Ｎ、Ｔ６６６Ｒ、Ｔ６６６Ｓ、Ｔ６６６Ｖ、Ｔ６６６Ｗ、Ｔ６６６Ｙ、Ｒ６７２Ｃ、Ｒ６７２Ｅ、Ｒ６７２Ｆ、Ｒ６７２Ｇ、Ｒ６７２Ｈ、Ｒ６７２Ｉ、Ｒ６７２Ｋ、Ｒ６７２Ｌ、Ｒ６７２Ｍ、Ｒ６７２Ｎ、Ｒ６７２Ｔ、Ｒ６７２Ｖ、Ｒ６７２Ｗ、Ｒ６７２Ｙ、Ｒ６７３Ａ、Ｒ６７３Ｃ、Ｒ６７３Ｅ、Ｒ６７３Ｆ、Ｒ６７３Ｇ、Ｒ６７３Ｈ、Ｒ６７３Ｉ、Ｒ６７３Ｋ、Ｒ６７３Ｌ、Ｒ６７３Ｍ、Ｒ６７３Ｑ、Ｒ６７３Ｓ、Ｒ６７３Ｔ、Ｒ６７３Ｖ、Ｒ６７４Ｋ、Ｒ６７４Ｌ、Ｒ６７４Ｍ、Ｒ６７４Ｑ、Ｒ６７４Ｖ、Ｄ６７５Ｅ、Ｄ６７５Ｈ、Ｄ６７５Ｓ、Ｄ６７５Ｙ、Ｄ６８０Ａ、Ｄ６８０Ｃ、Ｄ６８０Ｅ、Ｄ６８０Ｆ、Ｄ６８０Ｈ、Ｄ６８０Ｉ、Ｄ６８０Ｋ、Ｄ６８０Ｌ、Ｄ６８０Ｍ、Ｄ６８０Ｎ、Ｄ６８０Ｑ、Ｄ６８０Ｒ、Ｄ６８０Ｓ、Ｄ６８０Ｖ、Ｄ６８０Ｗ、Ｄ６８０Ｙ、Ｔ６８１Ａ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｈ、Ｔ６８１Ｋ、Ｔ６８１Ｌ、Ｔ６８１Ｍ、Ｔ６８１Ｎ、Ｔ６８１Ｐ、Ｔ６８１Ｑ、Ｔ６８１Ｒ、Ｔ６８１Ｓ、Ｔ６８１Ｖ、Ｔ６８１Ｗ、Ｔ６８１Ｙ、Ａ６８２Ｃ、Ａ６８２Ｅ、Ａ６８２Ｉ、Ａ６８２Ｌ、Ａ６８２Ｍ、Ａ６８２Ｎ、Ａ６８２Ｐ、Ａ６８２Ｓ、Ａ６８２Ｗ、Ａ６８２Ｙ、Ｓ６８３Ａ、Ｓ６８３Ｃ、Ｓ６８３Ｄ、Ｓ６８３Ｅ、Ｓ６８３Ｆ、Ｓ６８３Ｇ、Ｓ６８３Ｉ、Ｓ６８３Ｌ、Ｓ６８３Ｍ、Ｓ６８３Ｐ、Ｓ６８３Ｑ、Ｓ６８３Ｒ、Ｓ６８３Ｖ、Ｓ６８３Ｗ、Ｑ６８４Ａ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｅ、Ｑ６８４Ｇ、Ｑ６８４Ｉ、Ｑ６８４Ｎ、Ｑ６８４Ｐ、Ｋ６８５Ａ、Ｋ６８５Ｅ、Ｋ６８５Ｆ、Ｋ６８５Ｇ、Ｋ６８５Ｉ、Ｋ６８５Ｌ、Ｋ６８５Ｍ、Ｋ６８５Ｎ、Ｋ６８５Ｑ、Ｋ６８５Ｒ、Ｋ６８５Ｓ、Ｋ６８５Ｔ、Ｋ６８５Ｖ、Ｋ６８５Ｗ、Ｋ６８５Ｙ、Ｓ６９２Ｃ、Ｓ６９２Ｅ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｉ、Ｓ６９２Ｋ、Ｓ６９２Ｌ、Ｓ６９２Ｍ、Ｓ６９２Ｎ、Ｓ６９２Ｐ、Ｓ６９２Ｑ、Ｓ６９２Ｔ、Ｓ６９２Ｖ、Ｓ６９２Ｗ、Ｒ７０２Ｃ、Ｒ７０２Ｄ、Ｒ７０２Ｆ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０２Ｈ、Ｒ７０２Ｉ、Ｒ７０２Ｋ、Ｒ７０２Ｌ、Ｒ７０２Ｍ、Ｒ７０２Ｎ、Ｒ７０２Ｑ、Ｒ７０２Ｓ、Ｒ７０２Ｔ、Ｒ７０２Ｖ、Ｒ７０２Ｗ、Ｒ７０５Ｃ、Ｒ７０５Ｆ、Ｒ７０５Ｈ、Ｒ７０５Ｉ、Ｒ７０５Ｌ、Ｒ７０５Ｍ、Ｒ７０５Ｐ、Ｒ７０５Ｓ、Ｒ７０５Ｔ、Ｒ７０５Ｖ、及びＲ７０５Ｗからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体は、発現レベルが減少している（ＰＩは０．１超だが１未満である）。
更に、本開示は、β−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ａ、Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｆ、Ｋ０２２Ｇ、Ｋ０２２Ｐ、Ｋ０２２Ｑ、Ｋ０２２Ｓ、Ｋ０２２Ｖ、Ｋ０２２Ｗ、Ｋ０２２Ｙ、Ｎ０２４Ａ、Ｎ０２４Ｃ、Ｌ０２５Ａ、Ｌ０２５Ｄ、Ｌ０２５Ｆ、Ｌ０２５Ｇ、Ｌ０２５Ｉ、Ｌ０２５Ｋ、Ｌ０２５Ｑ、Ｌ０２５Ｒ、Ｌ０２５Ｓ、Ｌ０２５Ｔ、Ｌ０２５Ｖ、Ｌ０２５Ｗ、Ｌ０２５Ｙ、Ｑ０２６Ｃ、Ｑ０２６Ｈ、Ｑ０２６Ｉ、Ｑ０２６Ｋ、Ｑ０２６Ｌ、Ｑ０２６Ｐ、Ｑ０２６Ｒ、Ｑ０２６Ｓ、Ｑ０２６Ｔ、Ｑ０２６Ｖ、Ｑ０２６Ｗ、Ｄ０２７Ａ、Ｄ０２７Ｃ、Ｄ０２７Ｅ、Ｄ０２７Ｌ、Ｄ０２７Ｍ、Ｄ０２７Ｑ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｓ０３３Ｃ、Ｓ０３３Ｇ、Ｖ０３５Ｃ、Ｖ０３５Ｅ、Ｖ０３５Ｇ、Ｖ０３５Ｈ、Ｖ０３５Ｋ、Ｖ０３５Ｌ、Ｖ０３５Ｎ、Ｖ０３５Ｐ、Ｖ０３５Ｑ、Ｖ０３５Ｒ、Ｖ０３５Ｓ、Ｖ０３５Ｔ、Ｖ０３５Ｙ、Ｇ０３６Ｄ、Ｇ０３６Ｅ、Ｇ０３６Ｒ、Ｇ０３６Ｓ、Ｗ０３７Ｖ、Ｗ０３７Ｙ、Ｓ０５０Ａ、Ｋ０５１Ｃ、Ｋ０５１Ｄ、Ｋ０５１Ｅ、Ｋ０５１Ｇ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｍ、Ｋ０５１Ｑ、Ｋ０５１Ｒ、Ｋ０５１Ｔ、Ｋ０５１Ｖ、Ｒ０６７Ａ、Ｒ０６７Ｃ、Ｒ０６７Ｄ、Ｒ０６７Ｆ、Ｒ０６７Ｇ、Ｒ０６７Ｎ、Ｒ０６７Ｐ、Ｒ０６７Ｑ、Ｒ０６７Ｓ、Ｒ０６７Ｗ、Ｒ０９１Ａ、Ｒ０９１Ｄ、Ｒ０９１Ｆ、Ｒ０９１Ｌ、Ｒ０９１Ｑ、Ｒ０９１Ｖ、Ｒ０９１Ｗ、Ｅ０９２Ｃ、Ｅ０９２Ｋ、Ｅ０９２Ｌ、Ｅ０９２Ｎ、Ｅ１００Ａ、Ｅ１００Ｇ、Ｅ１００Ｉ、Ｅ１００Ｍ、Ｅ１００Ｓ、Ｅ１００Ｔ、Ｅ１６４Ｓ、Ｑ１６５Ｃ、Ｑ１６５Ｆ、Ｑ１６５Ｈ、Ｑ１６５Ｉ、Ｑ１６５Ｌ、Ｑ１６５Ｍ、Ｑ１６５Ｒ、Ｑ１６５Ｓ、Ｑ１６５Ｔ、Ｑ１６５Ｖ、Ｑ１６５Ｗ、Ｑ１６５Ｙ、Ｅ１６６Ｄ、Ｅ１６６Ｋ、Ｅ１６６Ｌ、Ｅ１６６Ｐ、Ｅ１６６Ｒ、Ｅ１６６Ｔ、Ｌ１６７Ａ、Ｌ１６７Ｃ、Ｌ１６７Ｄ、Ｌ１６７Ｅ、Ｌ１６７Ｇ、Ｌ１６７Ｑ、Ｌ１６７Ｒ、Ｌ１６７Ｓ、Ｌ１６７Ｖ、Ｌ１６７Ｗ、Ｌ１６７Ｙ、Ｎ１６８Ａ、Ｎ１６８Ｄ、Ｎ１６８Ｅ、Ｎ１６８Ｇ、Ｎ１６８Ｙ、Ｐ１７６Ｆ、Ｐ１７６Ｇ、Ｐ１７６Ｋ、Ｐ１７６Ｌ、Ｐ１７６Ｒ、Ｐ１７６Ｔ、Ｐ１７６Ｖ、Ｐ１７６Ｗ、Ｄ１７７Ｖ、Ｄ１７７Ｗ、Ｄ１７８Ａ、Ｄ１７８Ｃ、Ｄ１７８Ｑ、Ｄ１７８Ｒ、Ｒ１７９Ｗ、Ｑ１９４Ａ、Ｑ１９４Ｋ、Ｑ１９４Ｙ、Ｎ１９６Ｅ、Ｙ２０４Ｆ、Ｔ２０９Ｃ、Ｔ２０９Ｄ、Ｔ２０９Ｅ、Ｔ２０９Ｇ、Ｔ２０９Ｈ、Ｔ２０９Ｉ、Ｔ２０９Ｋ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｍ、Ｔ２０９Ｑ、Ｔ２０９Ｒ、Ｔ２０９Ｓ、Ｔ２０９Ｖ、Ｔ２０９Ｗ、Ｔ２０９Ｙ、Ｅ２１４Ａ、Ｅ２１４Ｃ、Ｅ２１４Ｄ、Ｅ２１４Ｇ、Ｅ２１４Ｈ、Ｅ２１４Ｌ、Ｅ２１４Ｍ、Ｅ２１４Ｎ、Ｅ２１４Ｑ、Ｅ２１４Ｒ、Ｅ２１４Ｓ、Ｅ２１４Ｔ、Ｅ２１４Ｙ、Ｄ２１５Ｅ、Ｄ２１５Ｌ、Ｄ２１５Ｎ、Ｄ２１５Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｑ２１６Ｇ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２１６Ｎ、Ｑ２１６Ｓ、Ｑ２１６Ｙ、Ｋ２２４Ｒ、Ｋ２２４Ｖ、Ｄ２２５Ｖ、Ｑ２２６Ａ、Ｑ２２６Ｆ、Ｑ２２６Ｌ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２３８Ａ、Ｎ２３８Ｅ、Ｎ２３８Ｇ、Ｎ２３８Ｍ、Ｎ２３８Ｓ、Ｎ２３８Ｔ、Ｔ２４２Ａ、Ｔ２４２Ｃ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｆ、Ｔ２４２Ｇ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ２４２Ｉ、Ｔ２４２Ｋ、Ｔ２４２Ｌ、Ｔ２４２Ｍ、Ｔ２４２Ｎ、Ｔ２４２Ｑ、Ｔ２４２Ｒ、Ｔ２４２Ｖ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４８Ａ、Ｎ２４８Ｃ、Ｎ２４８Ｆ、Ｎ２４８Ｔ、Ｎ２４８Ｗ、Ｎ２６３Ａ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｇ、Ｎ２６３Ｈ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６４Ｃ、Ｒ２６５Ｅ、Ｒ２６５Ｋ、Ｒ２６５Ｌ、Ｒ２６５Ｎ、Ｒ２６５Ｑ、Ｓ２７７Ｗ、Ｎ２７８Ｆ、Ｑ２７９Ｃ、Ｔ２８２Ｃ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｅ、Ｄ２８７Ｎ、Ｄ２８７Ｓ、Ｑ３０１Ａ、Ｑ３０１Ｋ、Ｑ３０１Ｌ、Ｑ３０１Ｎ、Ｑ３０１Ｒ、Ｑ３０１Ｓ、Ｑ３０１Ｔ、Ｑ３０１Ｖ、Ｄ３０２Ａ、Ｄ３０２Ｃ、Ｄ３０２Ｗ、Ｑ３０３Ａ、Ｑ３０３Ｃ、Ｑ３０３Ｅ、Ｑ３０３Ｈ、Ｑ３０３Ｉ、Ｑ３０３Ｋ、Ｑ３０３Ｌ、Ｑ３０３Ｍ、Ｑ３０３Ｎ、Ｑ３０３Ｒ、Ｑ３０３Ｓ、Ｑ３０３Ｔ、Ｑ３０３Ｖ、Ｑ３０３Ｙ、Ｙ３０６Ｃ、Ｙ３０６Ｇ、Ｙ３０６Ｉ、Ｙ３０６Ｋ、Ｙ３０６Ｌ、Ｙ３０６Ｍ、Ｙ３０６Ｎ、Ｙ３０６Ｐ、Ｙ３０６Ｑ、Ｙ３０６Ｒ、Ｙ３０６Ｓ、Ｙ３０６Ｔ、Ｙ３０６Ｖ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｔ、Ｓ３１２Ｖ、Ｓ３１２Ｗ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｃ、Ｑ３１６Ｐ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３２０Ｃ、Ｒ３２８Ｃ、Ｒ３２８Ｅ、Ｒ３２８Ｇ、Ｒ３２８Ｋ、Ｒ３２８Ｌ、Ｒ３２８Ｍ、Ｒ３２８Ｑ、Ｒ３２８Ｓ、Ｒ３２８Ｔ、Ｒ３２８Ｖ、Ｄ３２９Ａ、Ｄ３２９Ｅ、Ｄ３２９Ｇ、Ｄ３２９Ｈ、Ｄ３２９Ｍ、Ｄ３２９Ｎ、Ｄ３２９Ｑ、Ｄ３２９Ｓ、Ｄ３２９Ｔ、Ｋ３３５Ａ、Ｋ３３５Ｄ、Ｋ３３５Ｆ、Ｋ３３５Ｈ、Ｋ３３５Ｉ、Ｋ３３５Ｌ、Ｋ３３５Ｍ、Ｋ３３５Ｎ、Ｋ３３５Ｒ、Ｋ３３５Ｓ、Ｋ３３５Ｔ、Ｋ３３５Ｖ、Ｋ３３５Ｗ、Ｄ３３７Ａ、Ｄ３３７Ｃ、Ｄ３３７Ｅ、Ｄ３３７Ｇ、Ｄ３３７Ｈ、Ｄ３３７Ｋ、Ｄ３３７Ｌ、Ｄ３３７Ｍ、Ｄ３３７Ｎ、Ｄ３３７Ｒ、Ｄ３３７Ｓ、Ｄ３３７Ｔ、Ｄ３３７Ｖ、Ｄ３３７Ｙ、Ａ３３８Ｃ、Ａ３３８Ｆ、Ａ３３８Ｇ、Ａ３３８Ｈ、Ａ３３８Ｉ、Ａ３３８Ｌ、Ａ３３８Ｍ、Ａ３３８Ｎ、Ａ３３８Ｐ、Ａ３３８Ｒ、Ａ３３８Ｖ、Ａ３３８Ｗ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４４Ｅ、Ｋ３４４Ｆ、Ｋ３４４Ｇ、Ｋ３４４Ｉ、Ｋ３４４Ｌ、Ｋ３４４Ｍ、Ｋ３４４Ｎ、Ｋ３４４Ｒ、Ｋ３４４Ｓ、Ｋ３４４Ｔ、Ｋ３４４Ｖ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｆ、Ｋ３４５Ｈ、Ｋ３４５Ｐ、Ｋ３４５Ｑ、Ｋ３４５Ｒ、Ｋ３４５Ｓ、Ｋ３４５Ｔ、Ｋ３４５Ｖ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｄ、Ａ３４７Ｆ、Ａ３４７Ｐ、Ａ３４７Ｙ、Ｈ３６１Ｇ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｋ、Ｒ３６３Ｌ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｔ、Ｒ３６３Ｗ、Ｒ３６３Ｙ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｆ、Ｎ３６９Ｌ、Ｎ３６９Ｍ、Ｎ３６９Ｓ、Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｖ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｄ３７０Ｅ、Ｄ３７０Ｆ、Ｄ３７０Ｇ、Ｄ３７０Ｓ、Ｄ３７０Ｗ、Ｄ３７０Ｙ、Ｋ３７１Ａ、Ｋ３７１Ｆ、Ｋ３７１Ｇ、Ｋ３７１Ｌ、Ｋ３７１Ｎ、Ｋ３７１Ｑ、Ｋ３７１Ｒ、Ｋ３７１Ｓ、Ｋ３７１Ｔ、Ｋ３７１Ｖ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ３７２Ｃ、Ｇ３７２Ｅ、Ｇ３７２Ｌ、Ｇ３７２Ｍ、Ｇ３７２Ｔ、Ｇ３７２Ｖ、Ｄ３７４Ｃ、Ｄ３７４Ｆ、Ｄ３７４Ｇ、Ｄ３７４Ｌ、Ｄ３７４Ｍ、Ｄ３７４Ｎ、Ｄ３７４Ｑ、Ｄ３７４Ｓ、Ｄ３７４Ｖ、Ｄ３７５Ａ、Ｄ３７５Ｃ、Ｄ３７５Ｅ、Ｄ３７５Ｉ、Ｄ３７５Ｖ、Ｍ３８０Ｉ、Ｍ３８０Ｌ、Ｍ３８０Ｑ、Ｍ３８０Ｓ、Ｍ３８０Ｔ、Ｍ３８０Ｖ、Ｙ３９６Ａ、Ｙ３９６Ｃ、Ｙ３９６Ｄ、Ｙ３９６Ｅ、Ｙ３９６Ｆ、Ｙ３９６Ｇ、Ｙ３９６Ｉ、Ｙ３９６Ｋ、Ｙ３９６Ｔ、Ｄ３９７Ｃ、Ｄ３９７Ｅ、Ｄ３９７Ｈ、Ｄ３９７Ｉ、Ｄ３９７Ｋ、Ｄ３９７Ｌ、Ｄ３９７Ｍ、Ｄ３９７Ｎ、Ｄ３９７Ｐ、Ｄ３９７Ｑ、Ｄ３９７Ｒ、Ｄ３９７Ｓ、Ｄ３９７Ｔ、Ｄ３９７Ｖ、Ｄ３９７Ｙ、Ａ３９８Ｃ、Ａ３９８Ｄ、Ａ３９８Ｅ、Ａ３９８Ｆ、Ａ３９８Ｇ、Ａ３９８Ｈ、Ａ３９８Ｉ、Ａ３９８Ｋ、Ａ３９８Ｌ、Ａ３９８Ｍ、Ａ３９８Ｎ、Ａ３９８Ｐ、Ａ３９８Ｑ、Ａ３９８Ｒ、Ａ３９８Ｓ、Ａ３９８Ｔ、Ａ３９８Ｖ、Ａ３９８Ｗ、Ａ３９８Ｙ、Ｉ３９９Ｌ、Ｉ３９９Ｖ、Ｒ４０２Ａ、Ｖ４１０Ｃ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｆ、Ｔ４１１Ｇ、Ｔ４１１Ｈ、Ｔ４１１Ｉ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｌ、Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｓ、Ｔ４１１Ｖ、Ｔ４１１Ｙ、Ｓ４２０Ｃ、Ｓ４２０Ｄ、Ｓ４２０Ｇ、Ｓ４２０Ｋ、Ｓ４２０Ｎ、Ｓ４２０Ｑ、Ｓ４２０Ｔ、Ｓ４２０Ｙ、Ｒ４２６Ａ、Ｒ４２６Ｔ、Ｇ４２７Ｃ、Ｇ４２７Ｆ、Ｇ４２７Ｈ、Ｇ４２７Ｌ、Ｇ４２７Ｍ、Ｇ４２７Ｓ、Ｇ４２７Ｙ、Ｋ４２８Ａ、Ｔ４４５Ａ、Ｔ４４５Ｃ、Ｔ４４５Ｅ、Ｔ４４５Ｆ、Ｔ４４５Ｇ、Ｔ４４５Ｍ、Ｔ４４５Ｖ、Ｔ４４５Ｙ、Ｇ４４８Ａ、Ｇ４４８Ｃ、Ｇ４４８Ｄ、Ｇ４４８Ｅ、Ｇ４４８Ｈ、Ｇ４４８Ｔ、Ｎ４４９Ａ、Ｎ４４９Ｃ、Ｎ４４９Ｅ、Ｎ４４９Ｆ、Ｎ４４９Ｍ、Ｎ４４９Ｐ、Ｎ４４９Ｔ、Ｎ４４９Ｖ、Ｎ４５５Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、Ｎ４５５Ｗ、Ｎ４７３Ｓ、Ｓ４７４Ｃ、Ｓ４７４Ｆ、Ｓ４７４Ｉ、Ｓ４７４Ｌ、Ｓ４７４Ｍ、Ｓ４７４Ｎ、Ｓ４７４Ｐ、Ｓ４７４Ｒ、Ｓ４７４Ｔ、Ｓ４７４Ｙ、Ｎ４７５Ｉ、Ｎ４７５Ｌ、Ｎ４７５Ｍ、Ｎ４７５Ｐ、Ｎ４７５Ｑ、Ｎ４７５Ｒ、Ｎ４７５Ｓ、Ｎ４７５Ｔ、Ｎ４７５Ｖ、Ｎ４７５Ｗ、Ｎ４７５Ｙ、Ｑ４９０Ａ、Ｑ４９０Ｃ、Ｑ４９０Ｅ、Ｑ４９０Ｆ、Ｑ４９０Ｇ、Ｑ４９０Ｈ、Ｑ４９０Ｋ、Ｑ４９０Ｌ、Ｑ４９０Ｒ、Ｑ４９０Ｓ、Ｑ４９０Ｔ、Ｑ４９０Ｖ、Ｑ４９０Ｙ、Ｌ４９２Ａ、Ｌ４９２Ｄ、Ｌ４９２Ｈ、Ｌ４９２Ｎ、Ｖ４９７Ａ、Ｖ４９７Ｔ、Ｋ４９８Ｅ、Ｋ４９８Ｌ、Ｋ４９８Ｍ、Ｋ４９８Ｖ、Ｄ５２１Ａ、Ｖ５２２Ａ、Ｖ５２２Ｃ、Ｖ５２２Ｆ、Ｖ５２２Ｈ、Ｖ５２２Ｉ、Ｖ５２２Ｋ、Ｖ５２２Ｌ、Ｖ５２２Ｍ、Ｖ５２２Ｑ、Ｖ５２２Ｒ、Ｖ５２２Ｓ、Ｖ５２２Ｔ、Ｖ５２２Ｗ、Ｖ５２２Ｙ、Ｋ５３４Ｆ、Ｋ５３４Ｖ、Ｒ５４２Ｃ、Ｒ５４２Ｅ、Ｒ５４２Ｆ、Ｒ５４２Ｇ、Ｒ５４２Ｈ、Ｒ５４２Ｉ、Ｒ５４２Ｋ、Ｒ５４２Ｌ、Ｒ５４２Ｍ、Ｒ５４２Ｎ、Ｒ５４２Ｐ、Ｒ５４２Ｑ、Ｒ５４２Ｓ、Ｒ５４２Ｔ、Ｒ５４２Ｖ、Ｒ５４２Ｗ、Ｒ５４２Ｙ、Ｇ５４７Ａ、Ｇ５４７Ｌ、Ｇ５４７Ｐ、Ｓ５４８Ｃ、Ｓ５４８Ｅ、Ｓ５４８Ｆ、Ｓ５４８Ｈ、Ｓ５４８Ｉ、Ｓ５４８Ｌ、Ｓ５４８Ｍ、Ｓ５４８Ｎ、Ｓ５４８Ｑ、Ｓ５４８Ｒ、Ｓ５４８Ｔ、Ｓ５４８Ｖ、Ｓ５４８Ｗ、Ｓ５４８Ｙ、Ｇ５５４Ｄ、Ｇ５５４Ｌ、Ｇ５５４Ｍ、Ｇ５５４Ｑ、Ｇ５５４Ｗ、Ｌ５５５Ｃ、Ｌ５５５Ｉ、Ｌ５５５Ｖ、Ｈ５６１Ｍ、Ｈ５６１Ｎ、Ｄ５６３Ａ、Ｄ５６３Ｍ、Ｄ５６３Ｑ、Ｄ５６４Ａ、Ｄ５６４Ｃ、Ｄ５６４Ｆ、Ｄ５６４Ｌ、Ｄ５６４Ｍ、Ｄ５６４Ｔ、Ｄ５６４Ｖ、Ｒ５７０Ａ、Ｙ５７１Ｗ、Ｋ５８１Ａ、Ｋ５８１Ｄ、Ｋ５８１Ｅ、Ｋ５８１Ｆ、Ｋ５８１Ｇ、Ｋ５８１Ｈ、Ｋ５８１Ｉ、Ｋ５８１Ｌ、Ｋ５８１Ｍ、Ｋ５８１Ｎ、Ｋ５８１Ｒ、Ｋ５８１Ｓ、Ｋ５８１Ｔ、Ｋ５８１Ｖ、Ｋ５８１Ｗ、Ｋ５８１Ｙ、Ｎ５８３Ａ、Ｎ５８３Ｃ、Ｎ５８３Ｄ、Ｎ５８３Ｇ、Ｎ５８３Ｒ、Ｎ５８３Ｖ、Ｒ５８６Ｅ、Ｒ５８６Ｆ、Ｒ５８６Ｌ、Ｒ５８６Ｎ、Ｒ５８６Ｐ、Ｒ５８６Ｖ、Ｒ５８６Ｗ、Ｖ６０３Ａ、Ｖ６０３Ｃ、Ｖ６０３Ｄ、Ｖ６０３Ｅ、Ｖ６０３Ｆ、Ｖ６０３Ｇ、Ｖ６０３Ｈ、Ｖ６０３Ｓ、Ｖ６０３Ｔ、Ｖ６０３Ｗ、Ｖ６０３Ｙ、Ｆ６１１Ａ、Ｑ６１２Ｃ、Ｑ６１２Ｇ、Ｑ６１２Ｓ、Ａ６２２Ｅ、Ａ６２２Ｆ、Ａ６２２Ｇ、Ａ６２２Ｈ、Ａ６２２Ｋ、Ａ６２２Ｌ、Ａ６２２Ｍ、Ａ６２２Ｒ、Ａ６２２Ｓ、Ａ６２２Ｔ、Ａ６２２Ｖ、Ｑ６２６Ｅ、Ｑ６２６Ｆ、Ｑ６２６Ｇ、Ｑ６２６Ｍ、Ｑ６２６Ｔ、Ｔ６３８Ａ、Ｔ６３８Ｄ、Ｔ６３８Ｅ、Ｔ６３８Ｇ、Ｔ６３８Ｉ、Ｔ６３８Ｋ、Ｔ６３８Ｌ、Ｔ６３８Ｍ、Ｔ６３８Ｑ、Ｔ６３８Ｒ、Ｔ６３８Ｓ、Ｔ６３８Ｖ、Ｔ６３８Ｗ、Ｔ６３８Ｙ、Ｓ６４２Ｃ、Ｓ６４２Ｅ、Ｓ６４２Ｆ、Ｓ６４２Ｈ、Ｓ６４２Ｉ、Ｓ６４２Ｌ、Ｓ６４２Ｍ、Ｓ６４２Ｎ、Ｓ６４２Ｐ、Ｓ６４２Ｑ、Ｓ６４２Ｒ、Ｓ６４２Ｔ、Ｓ６４２Ｖ、Ｓ６４２Ｗ、Ｓ６４２Ｙ、Ａ６４３Ｌ、Ａ６４３Ｍ、Ｒ６４５Ｇ、Ｒ６４５Ｋ、Ｋ６４９Ａ、Ｋ６４９Ｃ、Ｋ６４９Ｆ、Ｋ６４９Ｉ、Ｋ６４９Ｌ、Ｋ６４９Ｍ、Ｋ６４９Ｑ、Ｋ６４９Ｓ、Ｋ６４９Ｗ、Ｋ６４９Ｙ、Ｔ６６０Ｃ、Ｔ６６０Ｄ、Ｔ６６０Ｉ、Ｔ６６０Ｗ、Ｐ６６１Ｃ、Ｐ６６１Ｄ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｉ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｓ、Ｐ６６１Ｖ、Ｐ６６１Ｗ、Ｇ６６２Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｇ６６２Ｈ、Ｇ６６２Ｔ、Ｇ６６２Ｗ、Ｇ６６２Ｙ、Ｑ６６３Ａ、Ｑ６６３Ｃ、Ｑ６６３Ｄ、Ｑ６６３Ｅ、Ｑ６６３Ｇ、Ｑ６６３Ｉ、Ｑ６６３Ｋ、Ｑ６６３Ｓ、Ｑ６６３Ｗ、Ｔ６６６Ａ、Ｔ６６６Ｃ、Ｔ６６６Ｎ、Ｒ６７２Ｋ、Ｒ６７３Ｋ、Ｒ６７３Ｎ、Ｒ６７３Ｓ、Ｒ６７３Ｔ、Ｄ６７５Ｅ、Ｄ６７５Ｈ、Ｄ６７５Ｓ、Ｄ６７５Ｙ、Ｄ６８０Ａ、Ｄ６８０Ｃ、Ｄ６８０Ｅ、Ｄ６８０Ｍ、Ｄ６８０Ｑ、Ｄ６８０Ｒ、Ｄ６８０Ｖ、Ｄ６８０Ｙ、Ｔ６８１Ａ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｍ、Ｔ６８１Ｓ、Ｔ６８１Ｗ、Ｓ６８３Ｇ、Ｓ６８３Ｖ、Ｓ６８３Ｗ、Ｑ６８４Ａ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｑ６８４Ｎ、Ｑ６８４Ｐ、Ｋ６８５Ａ、Ｋ６８５Ｅ、Ｋ６８５Ｆ、Ｋ６８５Ｇ、Ｋ６８５Ｉ、Ｋ６８５Ｌ、Ｋ６８５Ｍ、Ｋ６８５Ｎ、Ｋ６８５Ｑ、Ｋ６８５Ｒ、Ｋ６８５Ｓ、Ｋ６８５Ｔ、Ｋ６８５Ｖ、Ｋ６８５Ｗ、Ｋ６８５Ｙ
、Ｓ６９２Ｃ、Ｓ６９２Ｅ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｉ、Ｓ６９２Ｋ、Ｓ６９２Ｌ、Ｓ６９２Ｍ、Ｓ６９２Ｎ、Ｓ６９２Ｐ、Ｓ６９２Ｑ、Ｓ６９２Ｔ、Ｓ６９２Ｖ、Ｓ６９２Ｗ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０５Ｉ、及びＲ７０５Ｖからなる群のうちの１つ以上を含む置換を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体はＣＮＰＧアーゼ活性が改善されている（ＰＩは１超である）。
同様に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体も提供し、置換は、次のもの：Ｋ０２２Ａ、Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｓ、Ｎ０２４Ｄ、Ｎ０２４Ｅ、Ｎ０２４Ｆ、Ｎ０２４Ｇ、Ｎ０２４Ｋ、Ｎ０２４Ｌ、Ｎ０２４Ｍ、Ｎ０２４Ｐ、Ｎ０２４Ｔ、Ｌ０２５Ｔ、Ｑ０２６Ｄ、Ｑ０２６Ｐ、Ｑ０２６Ｒ、Ｑ０２６Ｗ、Ｑ０２６Ｙ、Ｋ０２８Ｌ、Ｋ０２８Ｍ、Ｋ０２８Ｎ、Ｗ０３７Ｆ、Ｗ０３７Ｉ、Ｓ０５０Ｃ、Ｓ０５０Ｆ、Ｓ０５０Ｇ、Ｓ０５０Ｋ、Ｓ０５０Ｐ、Ｓ０５０Ｒ、Ｓ０５０Ｔ、Ｓ０５０Ｙ、Ｋ０５１Ａ、Ｋ０５１Ｄ、Ｋ０５１Ｇ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｍ、Ｋ０５１Ｔ、Ｋ０５１Ｖ、Ｉ０５２Ａ、Ｉ０５２Ｆ、Ｉ０５２Ｎ、Ｉ０５２Ｓ、Ｒ０６７Ａ、Ｒ０６７Ｃ、Ｒ０６７Ｄ、Ｒ０６７Ｅ、Ｒ０６７Ｆ、Ｒ０６７Ｇ、Ｒ０６７Ｉ、Ｒ０６７Ｍ、Ｒ０６７Ｎ、Ｒ０６７Ｐ、Ｒ０６７Ｓ、Ｒ０６７Ｔ、Ｒ０６７Ｖ、Ｒ０６７Ｗ、Ｒ０６７Ｙ、Ｒ０９１Ａ、Ｒ０９１Ｄ、Ｒ０９１Ｅ、Ｒ０９１Ｆ、Ｒ０９１Ｇ、Ｒ０９１Ｈ、Ｒ０９１Ｉ、Ｒ０９１Ｋ、Ｒ０９１Ｌ、Ｒ０９１Ｎ、Ｒ０９１Ｑ、Ｒ０９１Ｓ、Ｒ０９１Ｔ、Ｒ０９１Ｖ、Ｒ０９１Ｗ、Ｅ０９２Ｋ、Ｅ０９２Ｔ、Ｒ０９３Ａ、Ｒ０９３Ｃ、Ｒ０９３Ｄ、Ｒ０９３Ｅ、Ｒ０９３Ｆ、Ｒ０９３Ｇ、Ｒ０９３Ｈ、Ｒ０９３Ｋ、Ｒ０９３Ｌ、Ｒ０９３Ｍ、Ｒ０９３Ｑ、Ｒ０９３Ｓ、Ｒ０９３Ｔ、Ｒ０９３Ｖ、Ｒ０９３Ｗ、Ｅ０９９Ａ、Ｅ０９９Ｆ、Ｅ０９９Ｉ、Ｅ０９９Ｍ、Ｅ０９９Ｗ、Ｅ０９９Ｙ、Ｅ１００Ｉ、Ｅ１００Ｋ、Ｅ１００Ｌ、Ｅ１００Ｙ、Ｈ１５９Ｅ、Ｈ１５９Ｇ、Ｑ１６５Ｄ、Ｑ１６５Ｉ、Ｑ１６５Ｋ、Ｑ１６５Ｌ、Ｑ１６５Ｒ、Ｑ１６５Ｖ、Ｑ１６５Ｗ、Ｑ１６５Ｙ、Ｅ１６６Ｆ、Ｅ１６６Ｋ、Ｅ１６６Ｌ、Ｅ１６６Ｎ、Ｅ１６６Ｒ、Ｅ１６６Ｓ、Ｅ１６６Ｔ、Ｅ１６６Ｙ、Ｒ１６９Ａ、Ｒ１６９Ｃ、Ｒ１６９Ｅ、Ｒ１６９Ｆ、Ｒ１６９Ｈ、Ｒ１６９Ｑ、Ｒ１６９Ｓ、Ｒ１６９Ｔ、Ｅ１７０Ｆ、Ｅ１７０Ｉ、Ｅ１７０Ｌ、Ｅ１７０Ｍ、Ｅ１７０Ｖ、Ｅ１７０Ｗ、Ｅ１７０Ｙ、Ｐ１７６Ａ、Ｐ１７６Ｄ、Ｐ１７６Ｒ、１７７Ａ、Ｄ１７７Ｇ、Ｄ１７７Ｌ、Ｄ１７７Ｍ、Ｄ１７７Ｎ、Ｄ１７７Ｑ、Ｄ１７７Ｗ、Ｄ１７８Ｓ、Ｒ１７９Ａ、Ｒ１７９Ｖ、Ｑ１９４Ａ、Ｎ１９６Ｅ、Ｎ１９６Ｇ、Ｎ１９６Ｍ、Ｎ１９６Ｐ、Ｓ１９９Ａ、Ｙ２０４Ｍ、Ｎ２０８Ｒ、Ｔ２０９Ｋ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｍ、Ｔ２０９Ｒ、Ｅ２１４Ａ、Ｅ２１４Ｋ、Ｅ２１４Ｐ、Ｅ２１４Ｒ、Ｅ２１４Ｗ、Ｅ２１４Ｙ、Ｄ２１５Ａ、Ｄ２１５Ｃ、Ｄ２１５Ｆ、Ｄ２１５Ｇ、Ｄ２１５Ｈ、Ｄ２１５Ｍ、Ｄ２１５Ｎ、Ｄ２１５Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｄ２１５Ｖ、Ｄ２１５Ｗ、Ｑ２１６Ａ、Ｑ２１６Ｃ、Ｑ２１６Ｄ、Ｑ２１６Ｅ、Ｑ２１６Ｆ、Ｑ２１６Ｈ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｋ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２１６Ｍ、Ｑ２１６Ｐ、Ｑ２１６Ｒ、Ｑ２１６Ｔ、Ｑ２１６Ｗ、Ｑ２１６Ｙ、Ｄ２２５Ａ、Ｄ２２５Ｃ、Ｄ２２５Ｅ、Ｄ２２５Ｆ、Ｄ２２５Ｈ、Ｄ２２５Ｉ、Ｄ２２５Ｌ、Ｄ２２５Ｑ、Ｄ２２５Ｔ、Ｄ２２５Ｖ、Ｄ２２５Ｗ、Ｄ２２５Ｙ、Ｑ２２６Ａ、Ｑ２２６Ｃ、Ｑ２２６Ｄ、Ｑ２２６Ｅ、Ｑ２２６Ｉ、Ｑ２２６Ｋ、Ｑ２２６Ｗ、Ｗ２３７Ｙ、Ｎ２３８Ａ、Ｎ２３８Ｄ、Ｎ２３８Ｆ、Ｎ２３８Ｇ、Ｎ２３８Ｐ、Ｎ２３８Ｓ、Ｎ２３８Ｗ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ２４９Ｍ、Ｎ２６３Ａ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｄ、Ｎ２６３Ｅ、Ｎ２６３Ｆ、Ｎ２６３Ｈ、Ｎ２６３Ｉ、Ｎ２６３Ｋ、Ｎ２６３Ｌ、Ｎ２６３Ｐ、Ｎ２６３Ｑ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６３Ｖ、Ｎ２６４Ａ、Ｎ２６４Ｃ、Ｎ２６４Ｄ、Ｎ２６４Ｅ、Ｎ２６４Ｇ、Ｎ２６４Ｈ、Ｎ２６４Ｋ、Ｎ２６４Ｌ、Ｎ２６４Ｍ、Ｎ２６４Ｑ、Ｎ２６４Ｒ、Ｎ２６４Ｓ、Ｎ２６４Ｔ、Ｎ２６４Ｖ、Ｎ２６４Ｙ、Ｒ２６５Ａ、Ｒ２６５Ｅ、Ｒ２６５Ｆ、Ｒ２６５Ｇ、Ｒ２６５Ｉ、Ｒ２６５Ｍ、Ｒ２６５Ｐ、Ｒ２６５Ｑ、Ｒ２６５Ｓ、Ｒ２６５Ｔ、Ｒ２６５Ｖ、Ｎ２７６Ａ、Ｓ２７７Ａ、Ｓ２７７Ｃ、Ｓ２７７Ｄ、Ｓ２７７Ｅ、Ｓ２７７Ｆ、Ｓ２７７Ｇ、Ｓ２７７Ｍ、Ｓ２７７Ｎ、Ｓ２７７Ｑ、Ｓ２７７Ｒ、Ｓ２７７Ｗ、Ｎ２７８Ｃ、Ｎ２７８Ｄ、Ｎ２７８Ｆ、Ｎ２７８Ｇ、２７８Ｑ、Ｎ２７８Ｒ、Ｎ２７８Ｖ、Ｑ２７９Ｃ、Ｑ２７９Ｄ、Ｑ２７９Ｖ、Ｔ２８２Ｄ、Ｔ２８２Ｈ、Ｔ２８２Ｋ、Ｒ２８４Ｎ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｆ、Ｄ２８７Ｈ、Ｄ２８７Ｉ、Ｄ２８７Ｋ、Ｄ２８７Ｌ、Ｄ２８７Ｍ、Ｄ２８７Ｖ、Ｄ２８７Ｗ、Ｄ２８７Ｙ、Ｑ３０１Ｅ、Ｑ３０１Ｌ、Ｑ３０１Ｔ、Ｑ３０１Ｖ、Ｙ３０６Ｃ、Ｓ３１２Ａ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｄ、Ｓ３１２Ｇ、Ｓ３１２Ｉ、Ｓ３１２Ｋ、Ｓ３１２Ｌ、Ｓ３１２Ｍ、Ｓ３１２Ｎ、Ｓ３１２Ｑ、Ｓ３１２Ｒ、Ｓ３１２Ｗ、Ｓ３１２Ｙ、Ｒ３１３Ｅ、Ｒ３１３Ｇ、Ｒ３１３Ｌ、Ｒ３１３Ｓ、Ｒ３１３Ｖ、Ｒ３１３Ｗ、Ｑ３１６Ａ、Ｑ３１６Ｃ、Ｑ３１６Ｄ、Ｑ３１６Ｅ、Ｑ３１６Ｆ、Ｑ３１６Ｇ、Ｑ３１６Ｈ、Ｑ３１６Ｉ、Ｑ３１６Ｋ、Ｑ３１６Ｎ、Ｑ３１６Ｐ、Ｑ３１６Ｒ、Ｑ３１６Ｓ、Ｑ３１６Ｔ、Ｑ３１６Ｖ、Ｑ３１６Ｗ、Ｑ３１６Ｙ、Ｋ３２０Ｅ、Ｋ３２０Ｇ、Ｋ３２０Ｍ、Ｋ３２０Ｎ、Ｋ３２０Ｔ、Ｒ３２４Ｃ、Ｒ３２４Ｄ、Ｒ３２８Ｃ、Ｒ３２８Ｅ、Ｒ３２８Ｉ、Ｒ３２８Ｌ、Ｒ３２８Ｑ、Ｄ３２９Ａ、Ｄ３２９Ｆ、Ｄ３２９Ｑ、Ｄ３２９Ｔ、Ｄ３２９Ｙ、Ｌ３３４Ｍ、Ｌ３３４Ｖ、Ｋ３３５Ａ、Ｋ３３５Ｇ、Ｋ３３５Ｓ、Ｋ３３５Ｔ、Ｋ３３５Ｖ、Ｋ３３５Ｗ、Ｎ３３６Ｓ、Ｎ３３６Ｔ、Ｎ３３６Ｙ、Ｄ３３７Ａ、Ｄ３３７Ｃ、Ｄ３３７Ｗ、Ａ３３８Ｆ、Ａ３３８Ｐ、Ａ３３８Ｑ、Ａ３３８Ｖ、Ａ３３８Ｗ、Ａ３３８Ｙ、Ｎ３３９Ｄ、Ｎ３３９Ｉ、Ｎ３３９Ｌ、Ｎ３３９Ｐ、Ｎ３３９Ｑ、Ｎ３３９Ｒ、Ｎ３３９Ｖ、Ｎ３３９Ｙ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｄ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｇ、Ｋ３４５Ｈ、Ｋ３４５Ｑ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｄ、Ａ３４７Ｆ、Ａ３４７Ｉ、Ａ３４７Ｋ、Ａ３４７Ｌ、Ａ３４７Ｍ、Ａ３４７Ｐ、Ａ３４７Ｑ、Ａ３４７Ｒ、Ａ３４７Ｓ、Ａ３４７Ｙ、Ｈ３６１Ａ、Ｈ３６１Ｃ、Ｈ３６１Ｅ、Ｈ３６１Ｇ、Ｈ３６１Ｋ、Ｈ３６１Ｌ、Ｈ３６１Ｍ、Ｈ３６１Ｐ、Ｈ３６１Ｓ、Ｈ３６１Ｙ、Ｒ３６３Ａ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｅ、Ｒ３６３Ｇ、Ｒ３６３Ｋ、Ｒ３６３Ｌ、Ｒ３６３Ｎ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｓ、Ｒ３６３Ｔ、Ｒ３６３Ｖ、Ｒ３６３Ｗ、Ｎ３６９Ａ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｉ、Ｎ３６９Ｌ、Ｎ３６９Ｍ、Ｎ３６９Ｒ、Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｖ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｄ３７０Ｅ、Ｄ３７０Ｆ、Ｄ３７０Ｗ、Ｄ３７０Ｙ、Ｋ３７１Ａ、Ｋ３７１Ｄ、Ｋ３７１Ｆ、Ｋ３７１Ｇ、Ｋ３７１Ｌ、Ｋ３７１Ｓ、Ｋ３７１Ｔ、Ｋ３７１Ｗ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ３７２Ｃ、Ｇ３７２Ｄ、Ｇ３７２Ｎ、Ｇ３７２Ｓ、Ｄ３７４Ａ、Ｄ３７４Ｉ、Ｄ３７４Ｒ、Ｄ３７４Ｗ、Ｍ３８０Ｅ、Ｍ３８０Ｆ、Ｍ３８０Ｇ、Ｍ３８０Ｌ、Ｍ３８０Ｑ、Ｍ３８０Ｔ、Ｍ３８０Ｖ、Ｍ３８０Ｙ、Ｗ３８２Ｎ、Ｗ３８２Ｙ、Ｄ３９７Ｎ、Ａ３９８Ｃ、Ａ３９８Ｄ、Ａ３９８Ｅ、Ａ３９８Ｆ、Ａ３９８Ｇ、Ａ３９８Ｈ、Ａ３９８Ｌ、Ａ３９８Ｎ、Ａ３９８Ｐ、Ａ３９８Ｓ、Ａ３９８Ｔ、Ａ３９８Ｙ、Ｉ３９９Ｌ、Ｒ４０２Ｃ、Ｒ４０２Ｅ、Ｒ４０２Ｇ、Ｒ４０２Ｉ、Ｒ４０２Ｌ、Ｒ４０２Ｐ、Ｒ４０２Ｑ、Ｒ４０２Ｓ、Ｒ４０２Ｖ、Ｒ４０２Ｙ、Ｑ４０９Ｃ、Ｑ４０９Ｄ、Ｑ４０９Ｇ、Ｑ４０９Ｈ、Ｑ４０９Ｉ、Ｑ４０９Ｖ、Ｖ４１０Ｇ、Ｖ４１０Ｌ、Ｒ４２６Ａ、Ｒ４２６Ｅ、Ｒ４２６Ｆ、Ｒ４２６Ｉ、Ｒ４２６Ｋ、Ｒ４２６Ｌ、Ｒ４２６Ｍ、Ｒ４２６Ｎ、Ｒ４２６Ｑ、Ｒ４２６Ｓ、Ｒ４２６Ｔ、Ｒ４２６Ｙ、Ｇ４２７Ｄ、Ｇ４２７Ｅ、Ｇ４２７Ｆ、Ｇ４２７Ｌ、Ｇ４２７Ｎ、Ｇ４２７Ｑ、Ｇ４２７Ｓ、Ｇ４２７Ｔ、Ｇ４２７Ｖ、Ｇ４２７Ｗ、４２８Ａ、Ｋ４２８Ｐ、Ｔ４４５Ａ、Ｔ４４５Ｃ、Ｔ４４５Ｅ、Ｔ４４５Ｆ、Ｔ４４５Ｇ、Ｔ４４５Ｍ、Ｔ４４５Ｐ、Ｔ４４５Ｑ、Ｔ４４５Ｓ、Ｔ４４５Ｖ、Ｔ４４５Ｙ、Ｅ４４７Ａ、Ｅ４４７Ｌ、Ｅ４４７Ｗ、Ｇ４４８Ｄ、Ｇ４４８Ｅ、Ｇ４４８Ｆ、Ｇ４４８Ｈ、Ｇ４４８Ｋ、Ｇ４４８Ｌ、Ｇ４４８Ｍ、Ｇ４４８Ｎ、Ｇ４４８Ｑ、Ｇ４４８Ｓ、Ｇ４４８Ｔ、Ｇ４４８Ｖ、Ｇ４４８Ｙ、Ｎ４４９Ｃ、Ｎ４４９Ｅ、Ｎ４４９Ｇ、Ｎ４４９Ｋ、Ｎ４４９Ｌ、Ｎ４４９Ｒ、Ｎ４４９Ｖ、Ｎ４４９Ｗ、Ｄ４５２Ｎ、Ｒ４５３Ａ、Ｒ４５３Ｅ、Ｒ４５３Ｌ、Ｒ４５３Ｍ、Ｒ４５３Ｑ、Ｒ４５３Ｓ、Ｎ４５５Ａ、Ｎ４５５Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、Ｎ４５５Ｉ、Ｑ４６７Ａ、Ｑ４６７Ｃ、Ｑ４６７Ｄ、Ｑ４６７Ｅ、Ｑ４６７Ｈ、Ｑ４６７Ｋ、Ｑ４６７Ｎ、Ｑ４６７Ｓ、Ｑ４６７Ｖ、Ｑ４６７Ｗ、Ｑ４６７Ｙ、Ｎ４７３Ｆ、Ｎ４７３Ｐ、Ｎ４７３Ｑ、Ｎ４７３Ｒ、Ｎ４７３Ｓ、Ｎ４７３Ｔ、Ｎ４７３Ｖ、Ｓ４７４Ｄ、Ｓ４７４Ｇ、Ｓ４７４Ｋ、Ｓ４７４Ｌ、Ｓ４７４Ｍ、Ｓ４７４Ｎ、Ｓ４７４Ｑ、Ｓ４７４Ｒ、Ｓ４７４Ｖ、Ｎ４７５Ｉ、Ｎ４７５Ｋ、Ｎ４７５Ｌ、Ｎ４７５Ｐ、Ｎ４７５Ｔ、Ｎ４７５Ｖ、Ｎ４７５Ｗ、Ｎ４７５Ｙ、Ｅ４８９Ｎ、Ｑ４９０Ｃ、Ｑ４９０Ｇ、Ｌ４９２Ｙ、Ｑ４９６Ａ、Ｑ４９６Ｇ、Ｑ４９６Ｋ、Ｑ４９６Ｎ、Ｑ４９６Ｐ、Ｑ４９６Ｔ、Ｑ４９６Ｖ、Ｑ４９６Ｗ、Ｖ４９７Ｃ、Ｖ４９７Ｎ、Ｋ４９８Ａ、Ｋ４９８Ｃ、Ｋ４９８Ｅ、Ｋ４９８Ｆ、Ｋ４９８Ｇ、Ｋ４９８Ｈ、Ｋ４９８Ｉ、Ｋ４９８Ｑ、Ｋ４９８Ｒ、Ｋ４９８Ｓ、Ｋ４９８Ｔ、Ｋ４９８Ｙ、Ｄ５２１Ｅ、Ｄ５２１Ｆ、Ｄ５２１Ｐ、Ｄ５２１Ｔ、Ｄ５２１Ｖ、Ｖ５２２Ｇ、Ｖ５２２Ｋ、Ｖ５２２Ｎ、Ｋ５３４Ｄ、Ｋ５３４Ｅ、Ｋ５３４Ｇ、Ｋ５３４Ｈ、Ｋ５３４Ｉ、Ｋ５３４Ｎ、Ｋ５３４Ｑ、Ｋ５３４Ｓ、Ｋ５３４Ｔ、Ｋ５３４Ｖ、Ｒ５４２Ａ、Ｒ５４２Ｃ、Ｒ５４２Ｄ、Ｒ５４２Ｆ、Ｒ５４２Ｉ、Ｒ５４２Ｋ、Ｒ５４２Ｐ、Ｒ５４２Ｑ、Ｒ５４２Ｓ、Ｒ５４２Ｗ、Ｒ５４２Ｙ、Ｇ５４７Ａ、Ｇ５４７Ｃ、Ｇ５４７Ｅ、Ｇ５４７Ｆ、Ｇ５４７Ｋ、Ｇ５４７Ｌ、Ｇ５４７Ｎ、Ｇ５４７Ｐ、Ｇ５４７Ｑ、Ｇ５４７Ｒ、Ｇ５４７Ｔ、Ｇ５４７Ｖ、Ｇ５４７Ｙ、Ｓ５４８Ｅ、Ｓ５４８Ｆ、Ｓ５４８Ｉ、Ｓ５４８Ｌ、Ｓ５４８Ｑ、Ｓ５４８Ｔ、Ｓ５４８Ｖ、Ｓ５４８Ｗ、Ｅ５５３Ｄ、Ｅ５５３Ｉ、Ｅ５５３Ｋ、Ｅ５５３Ｑ、Ｅ５５３Ｗ、Ｅ５５３Ｙ、Ｇ５５４Ａ、Ｇ５５４Ｃ、Ｇ５５４Ｄ、Ｇ５５４Ｆ、Ｇ５５４Ｈ、Ｇ５５４Ｋ、Ｇ５５４Ｌ、Ｇ５５４Ｍ、Ｇ５５４Ｑ、Ｇ５５４Ｒ、Ｇ５５４Ｓ、Ｇ５５４Ｔ、Ｇ５５４Ｗ、Ｋ５６０Ａ、Ｋ５６０Ｃ、Ｋ５６０Ｅ、Ｋ５６０Ｇ、Ｋ５６０Ｈ、Ｋ５６０Ｉ、Ｋ５６０Ｌ、Ｋ５６０Ｍ、Ｋ５６０Ｎ、Ｋ５６０Ｐ、Ｋ５６０Ｑ、Ｋ５６０Ｒ、Ｋ５６０Ｓ、Ｋ５６０Ｔ、Ｋ５６０Ｖ、Ｋ５６０Ｙ、Ｈ５６１Ｃ、Ｈ５６１Ｄ、Ｈ５６１Ｇ、Ｈ５６１Ｍ、Ｈ５６１Ｎ、Ｈ５６１Ｔ、Ｈ５６１Ｗ、Ｄ５６３Ａ、Ｄ５６３Ｉ、Ｄ５６３Ｒ、Ｄ５６３Ｓ、Ｄ５６３Ｖ、Ｄ５６３Ｙ、Ｄ５６４Ａ、Ｄ５６４Ｃ、Ｄ５６４Ｅ、Ｄ５６４Ｆ、Ｄ５６４Ｇ、Ｄ５６４Ｎ、Ｄ５６４Ｙ、Ｒ５７０Ｅ、Ｒ５７０Ｇ、Ｒ５７０Ｍ、Ｒ５７０Ｎ、Ｒ５７０Ｑ、Ｒ５７０Ｔ、Ｒ５７０Ｖ、Ｙ５７１Ｈ、Ｙ５７１Ｍ、Ｙ５７１Ｗ、Ｋ５８１Ｃ、Ｋ５８１Ｄ、Ｋ５８１Ｇ、Ｋ５８１Ｌ、Ｋ５８１Ｎ、Ｋ５８１Ｔ、Ｎ５８３Ｄ、Ｒ５８６Ｄ、Ｓ５９１Ｃ、Ｓ５９１Ｄ、Ｓ５９１Ｆ、Ｓ５９１Ｇ、Ｓ５９１Ｈ、Ｓ５９１Ｉ、Ｓ５９１Ｋ、Ｓ５９１Ｍ、Ｓ５９１Ｐ、Ｓ５９１Ｑ、Ｓ５９１Ｖ、Ｆ６１１Ｇ、Ｆ６１１Ｉ、Ｆ６１１Ｌ、Ｆ６１１Ｎ、Ｆ６１１Ｒ、Ｆ１１Ｓ、Ｆ６１１Ｔ、Ｆ６１１Ｖ、Ｆ６１１Ｙ、Ｑ６１２Ｃ、Ｑ６１２Ｄ、Ｑ６１２Ｇ、Ｑ６１２Ｈ、Ｑ６１２Ｉ、Ｑ６１２Ｗ、Ａ６２２Ｄ、Ａ６２２Ｅ、Ａ６２２Ｌ、Ｖ６２７Ｄ、Ｖ６２７Ｋ、Ｖ６２７Ｐ、Ｖ６２７Ｑ、Ｖ６２７Ｒ、Ｖ６２７Ｓ、Ｖ６２７Ｙ、Ｔ６３８Ａ、Ｔ６３８Ｄ、Ｔ６３８Ｑ、Ｔ６３８Ｒ、Ｓ６４２Ｄ、Ｓ６４２Ｅ、Ｓ６４２Ｆ、Ｓ６４２Ｇ、Ｓ６４２Ｉ、Ｓ６４２Ｌ、Ｓ６４２Ｍ、Ｓ６４２Ｎ、Ａ６４３Ｅ、Ａ６４３Ｆ、Ａ６４３Ｇ、Ａ６４３Ｈ、Ａ６４３Ｋ、Ａ６４３Ｍ、Ａ６４３Ｎ、Ａ６４３Ｑ、Ａ６４３Ｓ、Ａ６４３Ｔ、Ａ６４３Ｖ、Ａ６４３Ｗ、Ａ６４３Ｙ、Ｒ６４５Ａ、Ｒ６４５Ｄ、Ｒ６４５Ｅ、Ｒ６４５Ｆ、Ｒ６４５Ｈ、Ｒ６４５Ｉ、Ｒ６４５Ｌ、Ｒ６４５Ｍ、Ｒ６４５Ｐ、Ｒ６４５Ｑ、Ｒ６４５Ｓ、Ｒ６４５Ｔ、Ｒ６４５Ｖ、Ｒ６４５Ｗ、Ｒ６４５Ｙ、Ｋ６４９Ａ、Ｋ６４９Ｑ、Ｋ６４９Ｗ、Ｑ６５０Ｄ、Ｋ６５６Ｒ、Ｔ６６０Ｃ、Ｔ６６０Ｅ、Ｔ６６０Ｆ、Ｔ６６０Ｇ、Ｔ６６０Ｉ、Ｔ６６０Ｋ、Ｔ６６０Ｍ、Ｔ６６０Ｎ、Ｔ６６０Ｐ、Ｔ６６０Ｑ、Ｔ６６０Ｒ、Ｔ６６０Ｓ、Ｔ６６０Ｖ、Ｔ６６０Ｗ、Ｔ６６０Ｙ、Ｐ６
６１Ａ、Ｐ６６１Ｃ、Ｐ６６１Ｄ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｇ、Ｐ６６１Ｉ、Ｇ６６２Ｅ、Ｇ６６２Ｆ、Ｇ６６２Ｉ、Ｇ６６２Ｋ、Ｇ６６２Ｌ、Ｇ６６２Ｍ、Ｇ６６２Ｎ、Ｇ６６２Ｑ、Ｇ６６２Ｓ、Ｇ６６２Ｗ、Ｑ６６３Ｖ、Ｑ６６３Ｗ、Ｔ６６６Ａ、Ｔ６６６Ｃ、Ｔ６６６Ｄ、Ｔ６６６Ｅ、Ｔ６６６Ｆ、Ｔ６６６Ｇ、Ｔ６６６Ｈ、Ｔ６６６Ｌ、Ｔ６６６Ｓ、Ｔ６６６Ｖ、Ｔ６６６Ｙ、Ｒ６７２Ｍ、Ｒ６７３Ｆ、Ｒ６７３Ｎ、Ｒ６７３Ｗ、Ｒ６７４Ｋ、Ｒ６７４Ｌ、Ｒ６７４Ｑ、Ｄ６７５Ｅ、Ｄ６７５Ｈ、Ｄ６７５Ｓ、Ｄ６７５Ｙ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｌ、Ａ６８２Ｃ、Ａ６８２Ｅ、Ａ６８２Ｉ、Ａ６８２Ｌ、Ａ６８２Ｍ、Ａ６８２Ｎ、Ａ６８２Ｐ、Ａ６８２Ｓ、Ａ６８２Ｗ、Ａ６８２Ｙ、Ｓ６８３Ａ、Ｓ６８３Ｃ、Ｓ６８３Ｄ、Ｓ６８３Ｅ、Ｓ６８３Ｋ、Ｓ６８３Ｌ、Ｓ６８３Ｒ、Ｓ６８３Ｖ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｄ、Ｑ６８４Ｅ、Ｑ６８４Ｆ、Ｑ６８４Ｇ、Ｑ６８４Ｈ、Ｑ６８４Ｉ、Ｑ６８４Ｋ、Ｑ６８４Ｌ、Ｑ６８４Ｍ、Ｑ６８４Ｎ、Ｑ６８４Ｐ、Ｑ６８４Ｒ、Ｑ６８４Ｔ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｌ、Ｓ６９２Ｎ、Ｓ６９２Ｔ、Ｓ６９２Ｖ、Ｒ７０２Ｃ、Ｒ７０２Ｄ、Ｒ７０２Ｆ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０２Ｉ、Ｒ７０２Ｋ、Ｒ７０２Ｌ、Ｒ７０２Ｍ、Ｒ７０２Ｑ、Ｒ７０２Ｓ、Ｒ７０２Ｖ、Ｒ７０Ｗ、及びＲ７０５Ｐからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体はグルコース阻害が減少されている（ＰＩは１超である）。
更に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ａ、Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｆ、Ｋ０２２Ｇ、Ｋ０２２Ｉ、Ｋ０２２Ｐ、Ｋ０２２Ｑ、Ｋ０２２Ｓ、Ｋ０２２Ｖ、Ｋ０２２Ｗ、Ｋ０２２Ｙ、Ｎ０２４Ａ、Ｎ０２４Ｃ、Ｎ０２４Ｅ、Ｎ０２４Ｍ、Ｌ０２５Ｉ、Ｌ０２５Ｔ、Ｑ０２６Ｈ、Ｑ０２６Ｋ、Ｑ０２６Ｒ、Ｑ０２６Ｓ、Ｖ０３５Ｌ、Ｖ０３５Ｓ、Ｖ０３５Ｔ、Ｗ０３７Ｅ、Ｗ０３７Ｆ、Ｗ０３７Ｈ、Ｗ０３７Ｍ、Ｗ０３７Ｓ、Ｗ０３７Ｙ、Ｓ０５０Ａ、Ｋ０５１Ａ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｍ、Ｒ０９１Ｙ、Ｅ０９２Ｋ、Ｅ０９２Ｌ、Ｅ０９２Ｍ、Ｌ１６７Ｒ、Ｌ１６７Ｗ、Ｅ１７０Ｌ、Ｐ１７６Ａ、Ｐ１７６Ｇ、Ｄ１７８Ａ、Ｄ１７８Ｔ、Ｑ１９４Ａ、Ｑ１９４Ｋ、Ｑ１９４Ｒ、Ｓ１９９Ａ、Ｄ２１５Ｓ、Ｑ２１６Ｅ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２１６Ｎ、Ｄ２２５Ｃ、Ｄ２２５Ｇ、Ｄ２２５Ｌ、Ｄ２２５Ｑ、Ｄ２２５Ｓ、Ｄ２２５Ｔ、Ｄ２２５Ｖ、Ｑ２２６Ａ、Ｎ２３８Ａ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ２４２Ｓ、Ｎ２４８Ａ、Ｎ２４８Ｃ、Ｎ２４８Ｌ、Ｎ２４８Ｔ、Ｓ２４９Ｉ、Ｎ２７８Ｄ、Ｔ２８２Ｃ、Ｔ２８２Ｄ、Ｔ２８２Ｇ、Ｔ２８２Ｎ、Ｔ２８２Ｒ、Ｔ２８２Ｖ、Ｑ３０３Ａ、Ｑ３０３Ｄ、Ｑ３０３Ｅ、Ｑ３０３Ｆ、Ｑ３０３Ｇ、Ｑ３０３Ｉ、Ｑ３０３Ｋ、Ｑ３０３Ｌ、Ｑ３０３Ｍ、Ｑ３０３Ｎ、Ｑ３０３Ｒ、Ｑ３０３Ｓ、Ｑ３０３Ｔ、Ｑ３０３Ｖ、Ｑ３０３Ｙ、Ｙ３０６Ｆ、Ｙ３０６Ｉ、Ｙ３０６Ｌ、Ｙ３０６Ｒ、Ｙ３０６Ｗ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｎ、Ｋ３２０Ｃ、Ｋ３２０Ｈ、Ｋ３２０Ｎ、Ｋ３２０Ｓ、Ｋ３２０Ｙ、Ｄ３２９Ａ、Ｋ３３５Ａ、Ｋ３３５Ｌ、Ｋ３３５Ｒ、Ｋ３３５Ｓ、Ｋ３３５Ｔ、Ｋ３３５Ｗ、Ａ３３８Ｃ、Ａ３３８Ｄ、Ａ３３８Ｇ、Ａ３３８Ｉ、Ａ３３８Ｎ、Ａ３３８Ｖ、Ａ３３８Ｗ、Ｋ３４４Ｓ、Ａ３４７Ｄ、Ａ３４７Ｆ、Ａ３４７Ｙ、Ｒ３６３Ｌ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｆ、Ｎ３６９Ｉ、Ｎ３６９Ｌ、Ｎ３６９Ｍ、Ｎ３６９Ｒ、Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｖ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｇ３７２Ａ、Ｉ３９９Ｌ、Ｒ４０２Ａ、Ｖ４１０Ｌ、Ｔ４１１Ｆ、Ｔ４１１Ｈ、Ｔ４１１Ｌ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｙ、Ｓ４２０Ａ、Ｓ４２０Ｄ、Ｒ４２６Ｆ、Ｒ４２６Ｎ、Ｇ４２７Ｅ、Ｇ４２７Ｓ、Ｋ４２８Ａ、Ｋ４２８Ｓ、Ｔ４４５Ｄ、Ｔ４４５Ｇ、Ｎ４７３Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｓ４７４Ｇ、Ｓ４７４Ｉ、Ｓ４７４Ｋ、Ｓ４７４Ｍ、Ｓ４７４Ｎ、Ｓ４７４Ｒ、Ｓ４７４Ｔ、Ｓ４７４Ｖ、Ｓ４７４Ｙ、Ｖ４９７Ａ、Ｖ４９７Ｉ、Ｖ４９７Ｍ、Ｖ４９７Ｔ、Ｄ５２１Ａ、Ｄ５２１Ｓ、Ｇ５４７Ａ、Ｇ５４７Ｅ、Ｇ５４７Ｋ、Ｇ５４７Ｌ、Ｇ５４７Ｐ、Ｇ５４７Ｒ、Ｇ５４７Ｖ、Ｓ５４８Ｃ、Ｓ５４８Ｅ、Ｓ５４８Ｆ、Ｓ５４８Ｈ、Ｓ５４８Ｉ、Ｓ５４８Ｌ、Ｓ５４８Ｍ、Ｓ５４８Ｖ、Ｓ５４８Ｗ、Ｇ５５４Ｑ、Ｈ５６１Ｎ、Ｄ５６３Ａ、Ｄ５６３Ｅ、Ｎ５８３Ｄ、Ｎ５８３Ｒ、Ｒ５８６Ｄ、Ｖ６０３Ａ、Ｖ６０３Ｅ、Ｖ６０３Ｈ、Ｖ６０３Ｍ、Ｖ６０３Ｎ、Ｖ６０３Ｑ、Ｖ６０３Ｓ、Ｆ６１１Ａ、Ｑ６１２Ｄ、Ｑ６１２Ｇ、Ａ６２２Ｄ、Ａ６２２Ｇ、Ａ６２２Ｈ、Ａ６２２Ｉ、Ａ６２２Ｌ、Ａ６２２Ｎ、Ａ６２２Ｒ、Ａ６２２Ｓ、Ａ６２２Ｗ、Ａ６２２Ｙ、Ｑ６２６Ｅ、Ｑ６２６Ｌ、Ｑ６２６Ｔ、Ｔ６３８Ｄ、Ａ６４３Ｍ、Ｒ６４５Ｄ、Ｒ６４５Ｇ、Ｒ６４５Ｋ、Ｋ６４９Ｌ、Ｋ６４９Ｍ、Ｋ６４９Ｑ、Ｋ６４９Ｗ、Ｔ６６０Ｃ、Ｔ６６０Ｄ、Ｔ６６０Ｅ、Ｔ６６０Ｆ、Ｔ６６０Ｈ、Ｔ６６０Ｉ、Ｔ６６０Ｋ、Ｔ６６０Ｍ、Ｔ６６０Ｑ、Ｔ６６０Ｖ、Ｔ６６０Ｗ、Ｔ６６０Ｙ、Ｐ６６１Ｃ、Ｐ６６１Ｄ、Ｐ６６１Ｓ、Ｐ６６１Ｖ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｄ、Ｇ６６２Ｅ、Ｇ６６２Ｆ、Ｇ６６２Ｈ、Ｇ６６２Ｋ、Ｇ６６２Ｌ、Ｇ６６２Ｍ、Ｇ６６２Ｎ、Ｇ６６２Ｑ、Ｇ６６２Ｒ、Ｇ６６２Ｓ、Ｇ６６２Ｔ、Ｇ６６２Ｗ、Ｇ６６２Ｙ、Ｔ６６６Ａ、Ｒ６７３Ｗ、Ｓ６８３Ｖ、Ｑ６８４Ｆ、Ｑ６８４Ｈ、Ｑ６８４Ｋ、Ｑ６８４Ｌ、Ｑ６８４Ｍ、Ｑ６８４Ｓ、Ｑ６８４Ｔ、Ｋ６８５Ａ、Ｋ６８５Ｌ、Ｋ６８５Ｓ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｋ、Ｓ６９２Ｌ、Ｓ６９２Ｍ、Ｓ６９２Ｔ、及びＲ７０５Ｌからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体は熱安定性が改善されている（ＰＩは１超である）。
同様に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ｈ、Ｋ０２２Ｒ、Ｎ０２４Ｆ、Ｎ０２４Ｇ、Ｎ０２４Ｋ、Ｎ０２４Ｑ、Ｎ０２４Ｒ、Ｎ０２４Ｓ、Ｎ０２４Ｔ、Ｎ０２４Ｖ、Ｌ０２５Ａ、Ｌ０２５Ｄ、Ｌ０２５Ｆ、Ｌ０２５Ｇ、Ｌ０２５Ｋ、Ｌ０２５Ｎ、Ｌ０２５Ｑ、Ｌ０２５Ｒ、Ｌ０２５Ｓ、Ｌ０２５Ｖ、Ｌ０２５Ｙ、Ｑ０２６Ｃ、Ｑ０２６Ｄ、Ｑ０２６Ｅ、Ｑ０２６Ｇ、Ｑ０２６Ｉ、Ｑ０２６Ｌ、Ｑ０２６Ｐ、Ｑ０２６Ｔ、Ｑ０２６Ｖ、Ｑ０２６Ｗ、Ｑ０２６Ｙ、Ｄ０２７Ａ、Ｄ０２７Ｃ、Ｄ０２７Ｅ、Ｄ０２７Ｌ、Ｄ０２７Ｍ、Ｄ０２７Ｑ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｋ０２８Ｌ、Ｋ０２８Ｍ、Ｋ０２８Ｓ、Ｋ０２８Ｖ、Ｓ０３３Ｃ、Ｓ０３３Ｇ、Ｓ０３３Ｔ、Ｖ０３５Ｃ、Ｖ０３５Ｅ、Ｖ０３５Ｇ、Ｖ０３５Ｈ、Ｖ０３５Ｋ、Ｖ０３５Ｎ、Ｖ０３５Ｑ、Ｖ０３５Ｒ、Ｇ０３６Ｒ、Ｇ０３６Ｓ、Ｗ０３７Ｖ、Ｓ０５０Ｃ、Ｓ０５０Ｆ、Ｓ０５０Ｇ、Ｓ０５０Ｉ、Ｓ０５０Ｋ、Ｓ０５０Ｌ、Ｓ０５０Ｍ、Ｓ０５０Ｎ、Ｓ０５０Ｐ、Ｓ０５０Ｒ、Ｓ０５０Ｔ、Ｓ０５０Ｖ、Ｓ０５０Ｙ、Ｋ０５１Ｃ、Ｋ０５１Ｄ、Ｋ０５１Ｅ、Ｋ０５１Ｇ、Ｋ０５１Ｉ、Ｋ０５１Ｌ、Ｋ０５１Ｎ、Ｋ０５１Ｑ、Ｋ０５１Ｒ、Ｋ０５１Ｓ、Ｋ０５１Ｔ、Ｋ０５１Ｖ、Ｉ０５２Ｖ、Ｒ０６７Ｑ、Ｒ０９１Ａ、Ｒ０９１Ｄ、Ｒ０９１Ｅ、Ｒ０９１Ｆ、Ｒ０９１Ｇ、Ｒ０９１Ｈ、Ｒ０９１Ｋ、Ｒ０９１Ｌ、Ｒ０９１Ｎ、Ｒ０９１Ｑ、Ｒ０９１Ｓ、Ｒ０９１Ｖ、Ｒ０９１Ｗ、Ｅ０９２Ａ、Ｅ０９２Ｃ、Ｅ０９２Ｄ、Ｅ０９２Ｆ、Ｅ０９２Ｈ、Ｅ０９２Ｉ、Ｅ０９２Ｎ、Ｅ０９２Ｑ、Ｅ０９２Ｒ、Ｅ０９２Ｖ、Ｅ０９９Ａ、Ｅ０９９Ｄ、Ｅ０９９Ｆ、Ｅ０９９Ｉ、Ｅ０９９Ｋ、Ｅ０９９Ｍ、Ｅ０９９Ｎ、Ｅ０９９Ｗ、Ｅ０９９Ｙ、Ｅ１００Ｍ、Ｅ１００Ｑ、Ｅ１００Ｔ、Ｌ１６７Ａ、Ｌ１６７Ｃ、Ｌ１６７Ｅ、Ｌ１６７Ｆ、Ｌ１６７Ｇ、Ｌ１６７Ｍ、Ｌ１６７Ｎ、Ｌ１６７Ｑ、Ｌ１６７Ｓ、Ｌ１６７Ｖ、Ｌ１６７Ｙ、Ｎ１６８Ａ、Ｎ１６８Ｄ、Ｎ１６８Ｅ、Ｎ１６８Ｇ、Ｎ１６８Ｈ、Ｎ１６８Ｑ、Ｎ１６８Ｒ、Ｎ１６８Ｔ、Ｎ１６８Ｙ、Ｅ１７０Ｄ、Ｅ１７０Ｆ、Ｅ１７０Ｉ、Ｅ１７０Ｍ、Ｅ１７０Ｖ、Ｐ１７６Ｅ、Ｐ１７６Ｈ、Ｐ１７６Ｌ、Ｐ１７６Ｍ、Ｐ１７６Ｑ、Ｐ１７６Ｒ、Ｐ１７６Ｓ、Ｐ１７６Ｔ、Ｐ１７６Ｖ、Ｐ１７６Ｙ、Ｄ１７７Ａ、Ｄ１７７Ｅ、Ｄ１７７Ｆ、Ｄ１７７Ｈ、Ｄ１７７Ｌ、Ｄ１７７Ｍ、Ｄ１７７Ｑ、Ｄ１７７Ｒ、Ｄ１７７Ｖ、Ｄ１７７Ｙ、Ｄ１７８Ｃ、Ｄ１７８Ｋ、Ｄ１７８Ｎ、Ｄ１７８Ｑ、Ｄ１７８Ｒ、Ｄ１７８Ｓ、Ｒ１７９Ａ、Ｒ１７９Ｃ、Ｒ１７９Ｇ、Ｒ１７９Ｉ、Ｒ１７９Ｋ、Ｒ１７９Ｓ、Ｒ１７９Ｔ、Ｒ１７９Ｖ、Ｒ１７９Ｗ、Ｑ１９４Ｃ、Ｑ１９４Ｅ、Ｑ１９４Ｆ、Ｑ１９４Ｇ、Ｑ１９４Ｈ、Ｑ１９４Ｌ、Ｑ１９４Ｍ、Ｑ１９４Ｔ、Ｑ１９４Ｗ、Ｎ１９６Ｅ、Ｎ１９６Ｇ、Ｎ１９６Ｈ、Ｎ１９６Ｌ、Ｎ１９６Ｍ、Ｎ１９６Ｑ、Ｎ１９６Ｒ、Ｎ１９６Ｔ、Ｓ１９９Ｇ、Ｓ１９９Ｔ、Ｓ１９９Ｖ、Ｙ２０４Ｆ、Ｙ２０４Ｍ、Ｎ２０８Ｋ、Ｔ２０９Ｃ、Ｔ２０９Ｄ、Ｔ２０９Ｅ、Ｔ２０９Ｇ、Ｔ２０９Ｈ、Ｔ２０９Ｉ、Ｔ２０９Ｋ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｍ、Ｔ２０９Ｑ、Ｔ２０９Ｒ、Ｔ２０９Ｓ、Ｔ２０９Ｖ、Ｔ２０９Ｗ、Ｔ２０９Ｙ、Ｅ２１４Ｄ、Ｅ２１４Ｑ、Ｄ２１５Ａ、Ｄ２１５Ｃ、Ｄ２１５Ｅ、Ｄ２１５Ｆ、Ｄ２１５Ｇ、Ｄ２１５Ｈ、Ｄ２１５Ｌ、Ｄ２１５Ｍ、Ｄ２１５Ｎ、Ｄ２１５Ｑ、Ｄ２１５Ｗ、Ｑ２１６Ａ、Ｑ２１６Ｃ、Ｑ２１６Ｆ、Ｑ２１６Ｇ、Ｑ２１６Ｈ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｋ、Ｑ２１６Ｍ、Ｑ２１６Ｐ、Ｑ２１６Ｓ、Ｑ２１６Ｔ、Ｑ２１６Ｗ、Ｑ２１６Ｙ、Ｋ２２４Ｒ、Ｋ２２４Ｖ、Ｄ２２５Ａ、Ｄ２２５Ｅ、Ｄ２２５Ｆ、Ｄ２２５Ｈ、Ｄ２２５Ｉ、Ｄ２２５Ｍ、Ｄ２２５Ｗ、Ｄ２２５Ｙ、Ｑ２２６Ｃ、Ｑ２２６Ｄ、Ｑ２２６Ｅ、Ｑ２２６Ｆ、Ｑ２２６Ｈ、Ｑ２２６Ｉ、Ｑ２２６Ｋ、Ｑ２２６Ｌ、Ｑ２２６Ｍ、Ｑ２２６Ｎ、Ｑ２２６Ｒ、Ｑ２２６Ｔ、Ｑ２２６Ｖ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２３８Ｃ、Ｎ２３８Ｄ、Ｎ２３８Ｅ、Ｎ２３８Ｆ、Ｎ２３８Ｇ、Ｎ２３８Ｍ、Ｎ２３８Ｓ、Ｎ２３８Ｔ、Ｎ２３８Ｗ、Ｔ２４２Ｃ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｆ、Ｔ２４２Ｇ、Ｔ２４２Ｋ、Ｔ２４２Ｎ、Ｔ２４２Ｑ、Ｔ２４２Ｒ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４８Ｆ、Ｎ２４８Ｇ、Ｎ２４８Ｗ、Ｎ２４８Ｙ、Ｓ２４９Ｇ、Ｓ２４９Ｍ、Ｓ２４９Ｖ、Ｎ２６３Ａ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｄ、Ｎ２６３Ｅ、Ｎ２６３Ｆ、Ｎ２６３Ｇ、Ｎ２６３Ｈ、Ｎ２６３Ｉ、Ｎ２６３Ｋ、Ｎ２６３Ｌ、Ｎ２６３Ｐ、Ｎ２６３Ｑ、Ｎ２６３Ｒ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６３Ｖ、Ｎ２６３Ｙ、Ｎ２６４Ｃ、Ｎ２６４Ｇ、Ｎ２６４Ｋ、Ｎ２６４Ｍ、Ｎ２６４Ｑ、Ｎ２６４Ｔ、Ｒ２６５Ｅ、Ｒ２６５Ｆ、Ｒ２６５Ｉ、Ｒ２６５Ｋ、Ｒ２６５Ｌ、Ｒ２６５Ｍ、Ｒ２６５Ｎ、Ｒ２６５Ｐ、Ｒ２６５Ｑ、Ｒ２６５Ｓ、Ｒ２６５Ｔ、Ｒ２６５Ｖ、Ｎ２７６Ａ、Ｎ２７６Ｆ、Ｎ２７６Ｍ、Ｎ２７６Ｑ、Ｓ２７７Ｃ、Ｓ２７７Ｅ、Ｓ２７７Ｆ、Ｓ２７７Ｇ、Ｓ２７７Ｈ、Ｓ２７７Ｉ、Ｓ２７７Ｍ、Ｓ２７７Ｎ、Ｓ２７７Ｐ、Ｓ２７７Ｑ、Ｓ２７７Ｒ、Ｓ２７７Ｙ、Ｎ２７８Ｃ、Ｎ２７８Ｆ、Ｎ２７８Ｇ、Ｎ２７８Ｉ、Ｎ２７８Ｌ、Ｎ２７８Ｍ、Ｎ２７８Ｑ、Ｎ２７８Ｒ、Ｎ２７８Ｓ、Ｎ２７８Ｔ、Ｎ２７８Ｖ、Ｎ２７８Ｗ、Ｎ２７８Ｙ、Ｑ２７９Ｃ、Ｑ２７９Ｄ、Ｑ２７９Ｅ、Ｑ２７９Ｇ、Ｑ２７９Ｈ、Ｑ２７９Ｉ、Ｑ２７９Ｋ、Ｑ２７９Ｎ、Ｑ２７９Ｓ、Ｑ２７９Ｔ、Ｑ２７９Ｖ、Ｑ２７９Ｙ、Ｔ２８２Ｋ、Ｔ２８２Ｌ、Ｔ２８２Ｐ、Ｔ２８２Ｓ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｅ、Ｄ２８７Ｇ、Ｄ２８７Ｈ、Ｄ２８７Ｉ、Ｄ２８７Ｋ、Ｄ２８７Ｌ、Ｄ２８７Ｍ、Ｄ２８７Ｎ、Ｄ２８７Ｓ、Ｄ２８７Ｖ、Ｑ３０１Ｅ、Ｑ３０１Ｎ、Ｄ３０２Ａ、Ｄ３０２Ｃ、Ｄ３０２Ｅ、Ｄ３０２Ｆ、Ｄ３０２Ｇ、Ｄ３０２Ｋ、Ｄ３０２Ｍ、Ｄ３０２Ｎ、Ｄ３０２Ｐ、Ｄ３０２Ｓ、Ｄ３０２Ｔ、Ｄ３０２Ｗ、Ｄ３０２Ｙ、Ｑ３０３Ｃ、Ｑ３０３Ｈ、Ｑ３０３Ｐ、Ｑ３０３Ｗ、Ｙ３０６Ｃ、Ｙ３０６Ｇ、Ｙ３０６Ｋ、Ｙ３０６Ｍ、Ｙ３０６Ｎ、Ｙ３０６Ｐ、Ｙ３０６Ｑ、Ｙ３０６Ｓ、Ｙ３０６Ｔ、Ｙ３０６Ｖ、Ｓ３１２Ｋ、Ｓ３１２Ｌ、Ｓ３１２Ｍ、Ｓ３１２Ｑ、Ｓ３１２Ｔ、Ｓ３１２Ｖ、Ｓ３１２Ｗ、Ｓ３１２Ｙ、Ｒ３１３Ａ、Ｒ３１３Ｃ、Ｒ３１３Ｇ、Ｒ３１３Ｋ、Ｒ３１３Ｌ、Ｒ３１３Ｎ、Ｒ３１３Ｓ、Ｒ３１３Ｖ、Ｒ３１３Ｗ、Ｑ３１６Ｃ、Ｑ３１６Ｅ、Ｑ３１６Ｇ、Ｑ３１６Ｋ、Ｑ３１６Ｌ、Ｑ３１６Ｍ、Ｑ３１６Ｒ、Ｑ３１６Ｓ、Ｑ３１６Ｔ、Ｑ３１６Ｖ、Ｑ３１６Ｗ、Ｑ３１６Ｙ、Ｋ３２０Ｅ、Ｋ３２０Ｇ、Ｋ３２０Ｌ、Ｋ３２０Ｍ、Ｋ３２０Ｐ、Ｋ３２０Ｑ、Ｋ３２０Ｒ、Ｋ３２０Ｔ、Ｒ３２４Ｃ、Ｒ３２４Ｄ、Ｒ３２４Ｅ、Ｒ３２４Ｆ、Ｒ３２４Ｈ、Ｒ３２４Ｉ、Ｒ３２４Ｋ、Ｒ３２４Ｌ、Ｒ３２４Ｍ、Ｒ３２４Ｑ、Ｒ３２４Ｖ、Ｒ３２４Ｗ、Ｒ３２４Ｙ、Ｒ３２８Ｃ、Ｒ３２８Ｅ、Ｒ３２８Ｇ、Ｒ３２８Ｋ、Ｒ３２８Ｌ、Ｒ３２８Ｍ、Ｒ３２８Ｑ、Ｒ３２８Ｔ、Ｒ３２８Ｖ、Ｄ３２９Ｅ、Ｄ３２９Ｆ、Ｄ３２９Ｇ、Ｄ３２９Ｈ、Ｄ３２９Ｍ、Ｄ３２９Ｎ、Ｄ３２９Ｑ、Ｄ３２９Ｓ、Ｄ３２９Ｔ、Ｄ３２９Ｙ、Ｌ３３４Ａ、Ｌ３３４Ｃ、Ｌ３３４Ｆ、Ｌ３３４Ｍ、Ｌ３３４Ｔ、Ｌ３３４Ｖ、Ｌ３３４Ｗ、Ｋ３３５Ｄ、Ｋ３３５Ｆ、Ｋ３３５Ｇ、Ｋ３３５Ｈ、Ｋ３３５Ｉ、Ｋ３３５Ｍ、Ｋ３３５Ｎ、Ｋ３３５Ｖ、Ｎ３３６Ａ、Ｎ３３６Ｃ、Ｎ３３６Ｇ、Ｎ３３６Ｈ、Ｎ３３６Ｌ、Ｎ３３６Ｍ、Ｎ３３６Ｑ、Ｎ３３６Ｒ、Ｎ３３６Ｓ、Ｎ３３６Ｔ、Ｎ３３６Ｖ、Ｎ３３６Ｙ、Ｄ３３７Ａ、Ｄ３３７Ｃ、Ｄ３３７Ｅ、Ｄ３３７Ｇ、Ｄ３３７Ｈ、Ｄ３３７Ｋ、Ｄ３３７Ｌ、Ｄ３３７Ｍ、Ｄ３３７Ｎ、Ｄ３３７Ｒ、Ｄ３３７Ｓ、Ｄ３３７Ｔ、Ｄ３３７Ｖ、Ｄ３３７Ｗ、Ｄ３３７Ｙ、Ａ３３８Ｆ、Ａ３３８Ｈ、Ａ３３８Ｋ、Ａ３３８Ｌ、Ａ３３８Ｍ、Ａ３３８Ｐ、Ａ３３８Ｑ、Ａ３３８Ｙ、Ｎ３３９Ｄ、Ｎ３３９Ｅ、Ｎ３３９Ｇ、Ｎ３３９Ｈ、Ｎ３３９Ｉ、Ｎ３３９Ｋ、Ｎ３３９Ｌ、Ｎ３３９Ｐ、Ｎ３３９Ｑ、Ｎ３３９Ｒ、Ｎ３３９Ｖ、Ｎ３３９Ｙ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４４Ｅ、Ｋ３４４Ｆ、Ｋ３４４Ｇ、Ｋ３４４Ｉ、Ｋ３４４Ｌ、Ｋ３４４Ｍ、Ｋ３４４Ｎ、Ｋ３４４Ｐ、Ｋ３４４Ｑ、Ｋ３４４Ｒ、Ｋ３４４Ｔ、Ｋ３４４Ｖ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｄ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｆ、Ｋ３４５Ｇ、Ｋ３４５Ｈ、Ｋ３４５Ｎ、Ｋ３４５Ｐ、Ｋ３４５Ｑ、Ｋ３４５Ｒ、Ｋ３４５Ｓ、Ｋ３４５Ｔ、Ｋ３４５Ｖ、Ｋ３４５Ｗ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｈ、Ａ３４７Ｉ、Ａ３４７Ｋ、Ａ３４７Ｌ、Ａ３４７Ｍ、Ａ３４７Ｐ、Ａ３４７Ｒ、Ａ３４７Ｓ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｅ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｔ、Ｎ３６９Ａ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｓ、Ｇ３７２Ｃ、Ｇ３７２Ｎ、Ｇ３７２Ｖ、Ｄ３７４Ｃ、Ｄ３７４Ｎ、Ｄ３７４Ｙ、Ｗ３８２Ｎ、Ｗ３８２Ｙ、Ｙ３９６Ｃ、Ｙ３９６Ｄ、Ｙ３９６Ｅ、Ｙ３９６Ｆ、Ｙ３９６Ｇ、Ｙ３９６Ｈ、Ｙ３９６Ｉ、Ｙ３９６Ｋ、Ｙ３９６Ｌ、Ｙ３９６Ｍ、Ｙ３９６Ｎ、Ｙ３９６Ｑ、Ｙ３９６Ｓ、Ｙ３９６Ｔ、Ｙ３９６Ｖ、Ｙ３９６Ｗ、Ｄ３９７Ａ、Ｄ３９７Ｃ、Ｄ３９７Ｅ、Ｄ３９７Ｐ、Ｄ３９７Ｑ、Ｄ３９７Ｒ、Ｄ３９７Ｓ、Ｄ３９７Ｔ、Ｄ３９７Ｖ、Ａ３９８Ｃ、Ａ３９８Ｄ、Ａ３９８Ｅ、Ａ３９８Ｆ、Ａ３９８Ｇ、Ａ３９８Ｈ、Ａ３９８Ｉ、Ａ３９８Ｋ、Ａ３９８Ｌ、Ａ３９８Ｍ、Ａ３９８Ｎ、Ａ３９８Ｐ、Ａ３９８Ｑ、Ａ３９８Ｒ、Ａ３９８Ｓ、Ａ３９８Ｔ、Ａ３９８Ｖ、Ａ３９８Ｗ、Ａ３９８Ｙ、Ｉ３９９Ａ、Ｉ３９９Ｃ、Ｉ３９９Ｄ、Ｉ３９９Ｅ、Ｉ３９９Ｆ、Ｉ３９９Ｇ、Ｉ３９９Ｍ、Ｉ３９９Ｑ、Ｉ３９９Ｓ、Ｉ３９９Ｔ、Ｉ３９９Ｖ、Ｉ３９９Ｗ、Ｉ３９９Ｙ、Ｒ４０２Ｃ、Ｒ４０２Ｅ、Ｒ４０２Ｆ、Ｒ４０２Ｇ、Ｒ４０２Ｉ、Ｒ４０２Ｌ、Ｒ４０２Ｐ、Ｒ４０２Ｑ、Ｒ４０２Ｓ、Ｒ４０２Ｖ、Ｒ４０２Ｗ、Ｒ４０２Ｙ、Ｑ４０９Ｃ、Ｑ４０９Ｄ、Ｑ４０９Ｇ、Ｑ４０９Ｈ、Ｑ４０９Ｉ、Ｑ４０９Ｖ、Ｖ４１０Ａ、Ｖ４１０Ｃ、Ｖ４１０Ｆ、Ｖ４１０Ｇ、Ｖ４１０Ｈ、Ｖ４１０Ｉ、Ｖ４１０Ｎ、Ｖ４１０Ｓ、Ｖ４１０Ｔ、Ｖ４１０Ｗ、Ｖ４１０Ｙ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｇ、Ｔ４１１Ｉ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｓ、Ｔ４１１Ｖ、Ｓ４２０Ｃ、Ｓ４２０Ｇ、Ｓ４２０Ｈ、Ｓ４２０Ｋ、Ｓ４２０Ｎ、Ｓ４２０Ｑ、Ｓ４２０Ｔ、Ｓ４２０Ｙ、Ｒ４２６Ｅ、Ｒ４２６Ｉ、Ｒ４２６Ｋ、Ｒ４２６Ｌ、Ｒ４２６Ｍ、Ｒ４２６Ｐ、Ｒ４２６Ｑ、Ｒ４２６Ｓ、Ｒ４２６Ｔ、Ｒ４２６Ｗ、Ｒ４２６Ｙ、Ｇ４２７Ｃ、Ｇ４２７Ｄ、Ｇ４２７Ｆ、Ｇ４２７Ｈ、Ｇ４２７Ｋ、Ｇ４２７Ｌ、Ｇ４２７Ｍ、Ｇ４２７Ｎ、Ｇ４２７Ｐ、Ｇ４２７Ｑ、Ｇ４２７Ｒ、Ｇ４２７Ｔ、Ｇ４２７Ｖ、Ｇ４２７Ｗ、Ｇ４２７Ｙ、Ｋ４２８Ｃ、Ｋ４２８Ｄ、Ｋ４２８Ｅ、Ｋ４２８Ｆ、Ｋ４２８Ｇ、Ｋ４２８Ｈ、Ｋ４２８Ｉ、Ｋ４２８Ｌ、Ｋ４２８Ｍ、Ｋ４２８Ｎ、Ｋ４２８Ｐ、Ｋ４２８Ｑ、Ｋ４２８Ｒ、Ｋ４２８Ｔ、Ｋ４２８Ｖ、Ｋ４２８Ｗ、Ｋ４２８Ｙ、Ｔ４４５Ａ、Ｔ４４５Ｃ、Ｔ４４５Ｅ、Ｔ４４５Ｆ、Ｔ４４５Ｉ、Ｔ４４５Ｋ、Ｔ４４５Ｌ、Ｔ４４５Ｍ、Ｔ４４５Ｎ、Ｔ４４５Ｐ、Ｔ４４５Ｑ、Ｔ４４５Ｒ、Ｔ４４５Ｓ、Ｔ４４５Ｖ、Ｔ４４５Ｙ、Ｖ４４６Ｑ、Ｎ４４９Ｃ、Ｎ４５４Ｆ、Ｎ４５４Ｋ、Ｎ４５４Ｌ、Ｎ４５４Ｍ、Ｎ４５４Ｒ、Ｎ４５４Ｓ、Ｎ４５４Ｔ、Ｎ４５４Ｖ、Ｎ４５５Ａ、Ｎ４５５Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、Ｎ４５５Ｅ、Ｎ４５５Ｆ、Ｎ４５５Ｇ、Ｎ４５５Ｈ、Ｎ４５５Ｌ、Ｎ４５５Ｍ、Ｎ４５５Ｓ、Ｎ４５５Ｔ、Ｎ４５５Ｖ、Ｎ４５５Ｗ、Ｎ４５５Ｙ、Ｑ４６７Ａ、Ｑ４６７Ｃ、Ｑ４６７Ｄ、Ｑ４６７Ｎ、Ｑ４６７Ｓ、Ｎ４７３Ａ、Ｎ４７３Ｃ、Ｎ４７３Ｅ、Ｎ４７３Ｇ、Ｎ４７３Ｈ、Ｎ４７３Ｋ、Ｎ４７３Ｌ、Ｎ４７３Ｍ、Ｎ４７３Ｐ、Ｎ４７３Ｑ、Ｎ４７３Ｒ、Ｎ４７３Ｔ、Ｎ４７３Ｖ、Ｓ４７４Ａ、Ｓ４７４Ｃ、Ｓ４７４Ｅ、Ｓ４７４Ｆ、Ｓ４７４Ｌ、Ｓ４７４Ｐ、Ｓ４７４Ｑ、Ｎ４７５Ｉ、Ｎ４７５Ｌ、Ｎ４７５Ｍ、Ｎ４７５Ｐ、Ｎ４７５Ｑ、Ｎ４７５Ｒ、Ｎ４７５Ｓ、Ｎ４７５Ｔ、Ｎ４７５Ｖ、Ｎ４７５Ｗ、Ｎ４７５Ｙ、Ｅ４８９Ｎ、Ｑ４９０Ａ、Ｑ４９０Ｃ、Ｑ４９０Ｅ、Ｑ４９０Ｆ、Ｑ４９０Ｇ、Ｑ４９０Ｈ、Ｑ４９０Ｋ、Ｑ４９０Ｌ、Ｑ４９０Ｐ、Ｑ４９０Ｒ、Ｑ４９０Ｓ、Ｑ４９０Ｔ、Ｑ４９０Ｖ、Ｑ４９０Ｗ、Ｑ４９０Ｙ、Ｌ４９２Ａ、Ｌ４９２Ｄ、Ｌ４９２Ｆ、Ｌ４９２Ｈ、Ｌ４９２Ｉ、Ｌ４９２Ｍ、Ｌ４９２Ｎ、Ｌ４９２Ｑ、Ｌ４９２Ｒ、Ｌ４９２Ｔ、Ｌ４９２Ｗ、Ｌ４９２Ｙ
、Ｑ４９６Ａ、Ｑ４９６Ｇ、Ｑ４９６Ｎ、Ｑ４９６Ｐ、Ｑ４９６Ｓ、Ｑ４９６Ｔ、Ｖ４９７Ｃ、Ｖ４９７Ｎ、Ｋ４９８Ａ、Ｋ４９８Ｃ、Ｋ４９８Ｅ、Ｋ４９８Ｆ、Ｋ４９８Ｇ、Ｋ４９８Ｈ、Ｋ４９８Ｉ、Ｋ４９８Ｌ、Ｋ４９８Ｍ、Ｋ４９８Ｎ、Ｋ４９８Ｑ、Ｋ４９８Ｒ、Ｋ４９８Ｓ、Ｋ４９８Ｔ、Ｋ４９８Ｖ、Ｋ４９８Ｙ、Ｄ５２１Ｃ、Ｄ５２１Ｅ、Ｄ５２１Ｆ、Ｄ５２１Ｇ、Ｄ５２１Ｈ、Ｄ５２１Ｉ、Ｄ５２１Ｋ、Ｄ５２１Ｌ、Ｄ５２１Ｍ、Ｄ５２１Ｐ、Ｄ５２１Ｒ、Ｄ５２１Ｔ、Ｄ５２１Ｖ、Ｄ５２１Ｗ、Ｖ５２２Ａ、Ｖ５２２Ｃ、Ｖ５２２Ｆ、Ｖ５２２Ｇ、Ｖ５２２Ｈ、Ｖ５２２Ｉ、Ｖ５２２Ｋ、Ｖ５２２Ｌ、Ｖ５２２Ｍ、Ｖ５２２Ｎ、Ｖ５２２Ｐ、Ｖ５２２Ｑ、Ｖ５２２Ｒ、Ｖ５２２Ｓ、Ｖ５２２Ｔ、Ｖ５２２Ｗ、Ｖ５２２Ｙ、Ｋ５３４Ｃ、Ｋ５３４Ｄ、Ｋ５３４Ｅ、Ｋ５３４Ｆ、Ｋ５３４Ｈ、Ｋ５３４Ｉ、Ｋ５３４Ｎ、Ｋ５３４Ｒ、Ｋ５３４Ｓ、Ｋ５３４Ｔ、Ｋ５３４Ｖ、Ｒ５４２Ｃ、Ｒ５４２Ｅ、Ｒ５４２Ｆ、Ｒ５４２Ｇ、Ｒ５４２Ｈ、Ｒ５４２Ｋ、Ｒ５４２Ｌ、Ｒ５４２Ｍ、Ｒ５４２Ｎ、Ｒ５４２Ｐ、Ｒ５４２Ｑ、Ｒ５４２Ｓ、Ｒ５４２Ｔ、Ｒ５４２Ｖ、Ｒ５４２Ｗ、Ｒ５４２Ｙ、Ｇ５４７Ｃ、Ｇ５４７Ｆ、Ｇ５４７Ｎ、Ｇ５４７Ｑ、Ｇ５４７Ｔ、Ｇ５４７Ｙ、Ｓ５４８Ｎ、Ｓ５４８Ｑ、Ｓ５４８Ｒ、Ｓ５４８Ｔ、Ｓ５４８Ｙ、Ｅ５５３Ｄ、Ｅ５５３Ｋ、Ｅ５５３Ｎ、Ｅ５５３Ｗ、Ｇ５５４Ａ、Ｇ５５４Ｃ、Ｇ５５４Ｄ、Ｇ５５４Ｆ、Ｇ５５４Ｈ、Ｇ５５４Ｋ、Ｇ５５４Ｌ、Ｇ５５４Ｍ、Ｇ５５４Ｒ、Ｇ５５４Ｓ、Ｇ５５４Ｔ、Ｇ５５４Ｖ、Ｇ５５４Ｗ、Ｌ５５５Ａ、Ｌ５５５Ｃ、Ｌ５５５Ｄ、Ｌ５５５Ｅ、Ｌ５５５Ｆ、Ｌ５５５Ｇ、Ｌ５５５Ｈ、Ｌ５５５Ｉ、Ｌ５５５Ｋ、Ｌ５５５Ｍ、Ｌ５５５Ｎ、Ｌ５５５Ｐ、Ｌ５５５Ｑ、Ｌ５５５Ｔ、Ｌ５５５Ｖ、Ｌ５５５Ｗ、Ｌ５５５Ｙ、Ｋ５６０Ａ、Ｋ５６０Ｃ、Ｋ５６０Ｇ、Ｋ５６０Ｉ、Ｋ５６０Ｌ、Ｋ５６０Ｍ、Ｋ５６０Ｎ、Ｋ５６０Ｐ、Ｋ５６０Ｒ、Ｋ５６０Ｓ、Ｋ５６０Ｔ、Ｋ５６０Ｖ、Ｋ５６０Ｙ、Ｈ５６１Ａ、Ｈ５６１Ｃ、Ｈ５６１Ｄ、Ｈ５６１Ｅ、Ｈ５６１Ｆ、Ｈ５６１Ｇ、Ｈ５６１Ｉ、Ｈ５６１Ｍ、Ｈ５６１Ｑ、Ｈ５６１Ｓ、Ｈ５６１Ｔ、Ｈ５６１Ｖ、Ｈ５６１Ｗ、Ｄ５６３Ｃ、Ｄ５６３Ｆ、Ｄ５６３Ｉ、Ｄ５６３Ｌ、Ｄ５６３Ｍ、Ｄ５６３Ｑ、Ｄ５６３Ｒ、Ｄ５６３Ｓ、Ｄ５６３Ｔ、Ｄ５６３Ｖ、Ｄ５６３Ｗ、Ｄ５６３Ｙ、Ｄ５６４Ａ、Ｄ５６４Ｃ、Ｄ５６４Ｅ、Ｄ５６４Ｆ、Ｄ５６４Ｇ、Ｄ５６４Ｋ、Ｄ５６４Ｌ、Ｄ５６４Ｍ、Ｄ５６４Ｎ、Ｄ５６４Ｑ、Ｄ５６４Ｒ、Ｄ５６４Ｓ、Ｄ５６４Ｔ、Ｄ５６４Ｖ、Ｄ５６４Ｙ、Ｒ５７０Ａ、Ｒ５７０Ｃ、Ｒ５７０Ｄ、Ｒ５７０Ｅ、Ｒ５７０Ｇ、Ｒ５７０Ｈ、Ｒ５７０Ｉ、Ｒ５７０Ｍ、Ｒ５７０Ｑ、Ｒ５７０Ｓ、Ｒ５７０Ｔ、Ｒ５７０Ｖ、Ｙ５７１Ｈ、Ｙ５７１Ｍ、Ｙ５７１Ｗ、Ｋ５８１Ａ、Ｋ５８１Ｃ、Ｋ５８１Ｄ、Ｋ５８１Ｅ、Ｋ５８１Ｆ、Ｋ５８１Ｇ、Ｋ５８１Ｈ、Ｋ５８１Ｉ、Ｋ５８１Ｌ、Ｋ５８１Ｍ、Ｋ５８１Ｎ、Ｋ５８１Ｐ、Ｋ５８１Ｒ、Ｋ５８１Ｓ、Ｋ５８１Ｔ、Ｋ５８１Ｖ、Ｋ５８１Ｗ、Ｋ５８１Ｙ、Ｎ５８３Ａ、Ｎ５８３Ｃ、Ｎ５８３Ｅ、Ｎ５８３Ｆ、Ｎ５８３Ｇ、Ｎ５８３Ｈ、Ｎ５８３Ｉ、Ｎ５８３Ｋ、Ｎ５８３Ｌ、Ｎ５８３Ｍ、Ｎ５８３Ｐ、Ｎ５８３Ｓ、Ｎ５８３Ｔ、Ｎ５８３Ｖ、Ｎ５８３Ｗ、Ｎ５８３Ｙ、Ｒ５８６Ｅ、Ｒ５８６Ｆ、Ｒ５８６Ｇ、Ｒ５８６Ｌ、Ｒ５８６Ｎ、Ｒ５８６Ｐ、Ｒ５８６Ｖ、Ｒ５８６Ｗ、Ｒ５８６Ｙ、Ｓ５９１Ｃ、Ｓ５９１Ｄ、Ｓ５９１Ｇ、Ｓ５９１Ｈ、Ｓ５９１Ｉ、Ｓ５９１Ｋ、Ｓ５９１Ｍ、Ｓ５９１Ｐ、Ｓ５９１Ｑ、Ｓ５９１Ｖ、Ｖ６０３Ｃ、Ｖ６０３Ｄ、Ｖ６０３Ｆ、Ｖ６０３Ｇ、Ｖ６０３Ｐ、Ｖ６０３Ｒ、Ｖ６０３Ｔ、Ｖ６０３Ｗ、Ｖ６０３Ｙ、Ｆ６１１Ｃ、Ｆ６１１Ｄ、Ｆ６１１Ｇ、Ｆ６１１Ｉ、Ｆ６１１Ｋ、Ｆ６１１Ｌ、Ｆ６１１Ｍ、Ｆ６１１Ｎ、Ｆ６１１Ｒ、Ｆ６１１Ｓ、Ｆ６１１Ｔ、Ｆ６１１Ｖ、Ｆ６１１Ｗ、Ｆ６１１Ｙ、Ｑ６１２Ｃ、Ｑ６１２Ｆ、Ｑ６１２Ｈ、Ｑ６１２Ｉ、Ｑ６１２Ｌ、Ｑ６１２Ｍ、Ｑ６１２Ｒ、Ｑ６１２Ｓ、Ｑ６１２Ｗ、Ａ６２２Ｅ、Ａ６２２Ｆ、Ａ６２２Ｋ、Ａ６２２Ｍ、Ａ６２２Ｔ、Ａ６２２Ｖ、Ｑ６２６Ｆ、Ｑ６２６Ｇ、Ｑ６２６Ｍ、Ｖ６２７Ｋ、Ｖ６２７Ｐ、Ｖ６２７Ｑ、Ｖ６２７Ｒ、Ｖ６２７Ｓ、Ｔ６３８Ａ、Ｔ６３８Ｅ、Ｔ６３８Ｆ、Ｔ６３８Ｇ、Ｔ６３８Ｉ、Ｔ６３８Ｋ、Ｔ６３８Ｌ、Ｔ６３８Ｍ、Ｔ６３８Ｐ、Ｔ６３８Ｑ、Ｔ６３８Ｒ、Ｔ６３８Ｓ、Ｔ６３８Ｖ、Ｔ６３８Ｙ、Ｓ６４２Ａ、Ｓ６４２Ｃ、Ｓ６４２Ｅ、Ｓ６４２Ｆ、Ｓ６４２Ｇ、Ｓ６４２Ｈ、Ｓ６４２Ｉ、Ｓ６４２Ｋ、Ｓ６４２Ｌ、Ｓ６４２Ｍ、Ｓ６４２Ｎ、Ｓ６４２Ｐ、Ｓ６４２Ｑ、Ｓ６４２Ｒ、Ｓ６４２Ｔ、Ｓ６４２Ｖ、Ｓ６４２Ｗ、Ｓ６４２Ｙ、Ａ６４３Ｃ、Ａ６４３Ｅ、Ａ６４３Ｆ、Ａ６４３Ｇ、Ａ６４３Ｈ、Ａ６４３Ｋ、Ａ６４３Ｌ、Ａ６４３Ｎ、Ａ６４３Ｑ、Ａ６４３Ｒ、Ａ６４３Ｓ、Ａ６４３Ｔ、Ａ６４３Ｖ、Ａ６４３Ｗ、Ａ６４３Ｙ、Ｒ６４５Ａ、Ｒ６４５Ｅ、Ｒ６４５Ｆ、Ｒ６４５Ｈ、Ｒ６４５Ｉ、Ｒ６４５Ｌ、Ｒ６４５Ｍ、Ｒ６４５Ｐ、Ｒ６４５Ｑ、Ｒ６４５Ｓ、Ｒ６４５Ｔ、Ｒ６４５Ｖ、Ｒ６４５Ｗ、Ｒ６４５Ｙ、Ｋ６４９Ｃ、Ｋ６４９Ｆ、Ｋ６４９Ｉ、Ｋ６４９Ｓ、Ｋ６４９Ｔ、Ｋ６４９Ｙ、Ｑ６５０Ａ、Ｑ６５０Ｃ、Ｑ６５０Ｅ、Ｑ６５０Ｆ、Ｑ６５０Ｇ、Ｑ６５０Ｈ、Ｑ６５０Ｉ、Ｑ６５０Ｋ、Ｑ６５０Ｌ、Ｑ６５０Ｍ、Ｑ６５０Ｎ、Ｑ６５０Ｒ、Ｑ６５０Ｔ、Ｑ６５０Ｖ、Ｑ６５０Ｙ、Ｋ６５６Ｒ、Ｔ６６０Ｇ、Ｔ６６０Ｎ、Ｔ６６０Ｐ、Ｔ６６０Ｒ、Ｔ６６０Ｓ、Ｐ６６１Ａ、Ｐ６６１Ｅ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｇ、Ｐ６６１Ｈ、Ｐ６６１Ｉ、Ｐ６６１Ｋ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｍ、Ｐ６６１Ｑ、Ｐ６６１Ｒ、Ｐ６６１Ｔ、Ｐ６６１Ｗ、Ｇ６６２Ａ、Ｇ６６２Ｉ、Ｑ６６３Ａ、Ｑ６６３Ｃ、Ｑ６６３Ｅ、Ｑ６６３Ｆ、Ｑ６６３Ｈ、Ｑ６６３Ｉ、Ｑ６６３Ｋ、Ｑ６６３Ｌ、Ｑ６６３Ｍ、Ｑ６６３Ｎ、Ｑ６６３Ｒ、Ｑ６６３Ｓ、Ｑ６６３Ｖ、Ｑ６６３Ｗ、Ｔ６６６Ｃ、Ｔ６６６Ｄ、Ｔ６６６Ｅ、Ｔ６６６Ｆ、Ｔ６６６Ｇ、Ｔ６６６Ｈ、Ｔ６６６Ｋ、Ｔ６６６Ｌ、Ｔ６６６Ｎ、Ｔ６６６Ｒ、Ｔ６６６Ｓ、Ｔ６６６Ｖ、Ｔ６６６Ｗ、Ｔ６６６Ｙ、Ｒ６７２Ｃ、Ｒ６７２Ｆ、Ｒ６７２Ｇ、Ｒ６７２Ｈ、Ｒ６７２Ｉ、Ｒ６７２Ｋ、Ｒ６７２Ｌ、Ｒ６７２Ｎ、Ｒ６７２Ｔ、Ｒ６７２Ｖ、Ｒ６７２Ｗ、Ｒ６７３Ａ、Ｒ６７３Ｃ、Ｒ６７３Ｅ、Ｒ６７３Ｇ、Ｒ６７３Ｈ、Ｒ６７３Ｉ、Ｒ６７３Ｋ、Ｒ６７３Ｌ、Ｒ６７３Ｍ、Ｒ６７３Ｑ、Ｒ６７３Ｓ、Ｒ６７３Ｔ、Ｒ６７３Ｖ、Ｒ６７４Ｋ、Ｒ６７４Ｌ、Ｒ６７４Ｍ、Ｒ６７４Ｑ、Ｒ６７４Ｖ、Ｄ６７５Ｅ、Ｄ６７５Ｈ、Ｄ６７５Ｓ、Ｄ６７５Ｙ、Ｄ６８０Ａ、Ｄ６８０Ｃ、Ｄ６８０Ｅ、Ｄ６８０Ｆ、Ｄ６８０Ｈ、Ｄ６８０Ｉ、Ｄ６８０Ｋ、Ｄ６８０Ｌ、Ｄ６８０Ｍ、Ｄ６８０Ｎ、Ｄ６８０Ｑ、Ｄ６８０Ｒ、Ｄ６８０Ｓ、Ｄ６８０Ｖ、Ｄ６８０Ｗ、Ｄ６８０Ｙ、Ｔ６８１Ａ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｈ、Ｔ６８１Ｋ、Ｔ６８１Ｌ、Ｔ６８１Ｍ、Ｔ６８１Ｎ、Ｔ６８１Ｐ、Ｔ６８１Ｑ、Ｔ６８１Ｒ、Ｔ６８１Ｓ、Ｔ６８１Ｖ、Ｔ６８１Ｗ、Ｔ６８１Ｙ、Ａ６８２Ｃ、Ａ６８２Ｅ、Ａ６８２Ｉ、Ａ６８２Ｌ、Ａ６８２Ｍ、Ａ６８２Ｎ、Ａ６８２Ｐ、Ａ６８２Ｓ、Ａ６８２Ｗ、Ａ６８２Ｙ、Ｓ６８３Ａ、Ｓ６８３Ｃ、Ｓ６８３Ｄ、Ｓ６８３Ｅ、Ｓ６８３Ｆ、Ｓ６８３Ｇ、Ｓ６８３Ｉ、Ｓ６８３Ｌ、Ｓ６８３Ｍ、Ｓ６８３Ｐ、Ｓ６８３Ｑ、Ｓ６８３Ｒ、Ｓ６８３Ｗ、Ｑ６８４Ａ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｅ、Ｑ６８４Ｇ、Ｑ６８４Ｉ、Ｑ６８４Ｎ、Ｑ６８４Ｐ、Ｋ６８５Ｅ、Ｋ６８５Ｆ、Ｋ６８５Ｇ、Ｋ６８５Ｉ、Ｋ６８５Ｍ、Ｋ６８５Ｎ、Ｋ６８５Ｑ、Ｋ６８５Ｒ、Ｋ６８５Ｔ、Ｋ６８５Ｖ、Ｋ６８５Ｗ、Ｋ６８５Ｙ、Ｓ６９２Ｃ、Ｓ６９２Ｅ、Ｓ６９２Ｉ、Ｓ６９２Ｎ、Ｓ６９２Ｐ、Ｓ６９２Ｑ、Ｓ６９２Ｖ、Ｓ６９２Ｗ、Ｒ７０２Ｃ、Ｒ７０２Ｄ、Ｒ７０２Ｆ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０２Ｈ、Ｒ７０２Ｉ、Ｒ７０２Ｋ、Ｒ７０２Ｌ、Ｒ７０２Ｍ、Ｒ７０２Ｎ、Ｒ７０２Ｑ、Ｒ７０２Ｓ、Ｒ７０２Ｔ、Ｒ７０２Ｖ、Ｒ７０２Ｗ、Ｒ７０５Ｃ、Ｒ７０５Ｆ、Ｒ７０５Ｈ、Ｒ７０５Ｉ、Ｒ７０５Ｍ、Ｒ７０５Ｐ、Ｒ７０５Ｓ、Ｒ７０５Ｔ、Ｒ７０５Ｖ、及びＲ７０５Ｗからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体は、熱安定性が低下している（ＰＩは０．１超だが１未満である）。
更に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ａ、Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｆ、Ｋ０２２Ｐ、Ｋ０２２Ｑ、Ｎ０２４Ｃ、Ｎ０２４Ｆ、Ｎ０２４Ｑ、Ｎ０２４Ｒ、Ｎ０２４Ｙ、Ｌ０２５Ｄ、Ｑ０２６Ｃ、Ｑ０２６Ｅ、Ｑ０２６Ｈ、Ｑ０２６Ｉ、Ｑ０２６Ｋ、Ｑ０２６Ｌ、Ｑ０２６Ｐ、Ｑ０２６Ｒ、Ｑ０２６Ｓ、Ｑ０２６Ｔ、Ｑ０２６Ｖ、Ｑ０２６Ｗ、Ｄ０２７Ａ、Ｄ０２７Ｃ、Ｄ０２７Ｅ、Ｓ０３３Ｃ、Ｖ０３５Ｃ、Ｖ０３５Ｐ、Ｖ０３５Ｔ、Ｇ０３６Ｄ、Ｇ０３６Ｅ、Ｇ０３６Ｋ、Ｇ０３６Ｒ、Ｇ０３６Ｓ、Ｇ０３６Ｙ、Ｓ０５０Ｃ、Ｓ０５０Ｌ、Ｋ０５１Ｃ、Ｋ０５１Ｅ、Ｋ０５１Ｇ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｉ、Ｋ０５１Ｍ、Ｋ０５１Ｑ、Ｋ０５１Ｔ、Ｋ０５１Ｖ、Ｉ０５２Ｄ、Ｉ０５２Ｔ、Ｒ０９１Ｄ、Ｒ０９１Ｇ、Ｒ０９１Ｋ、Ｒ０９１Ｑ、Ｅ０９２Ａ、Ｅ０９２Ｃ、Ｅ０９２Ｄ、Ｅ０９９Ｙ、Ｅ１００Ａ、Ｅ１００Ｇ、Ｅ１００Ｎ、Ｅ１００Ｑ、Ｅ１００Ｓ、Ｅ１００Ｔ、Ｅ１００Ｙ、Ｋ１５８Ｈ、Ｋ１５８Ｔ、Ｑ１６５Ｉ、Ｑ１６５Ｋ、Ｑ１６５Ｍ、Ｑ１６５Ｎ、Ｑ１６５Ｖ、Ｅ１６６Ｄ、Ｌ１６７Ｃ、Ｌ１６７Ｗ、Ｎ１６８Ａ、Ｎ１６８Ｄ、Ｎ１６８Ｅ、Ｎ１６８Ｇ、Ｎ１６８Ｙ、Ｅ１７０Ｄ、Ｅ１７０Ｆ、Ｐ１７６Ｋ、Ｐ１７６Ｒ、Ｐ１７６Ｗ、Ｐ１７６Ｙ、Ｄ１７７Ｅ、Ｄ１７７Ｆ、Ｄ１７７Ｈ、Ｄ１７７Ｌ、Ｄ１７７Ｍ、Ｄ１７７Ｖ、Ｄ１７７Ｗ、Ｄ１７７Ｙ、１７８Ｃ、Ｄ１７８Ｙ、Ｒ１７９Ｃ、Ｒ１７９Ｍ、Ｒ１７９Ｓ、Ｑ１９４Ｃ、Ｎ１９６Ｅ、Ｎ１９６Ｌ、Ｎ１９６Ｑ、Ｎ１９６Ｒ、Ｎ１９６Ｔ、Ｓ１９９Ａ、Ｔ２０９Ｃ、Ｔ２０９Ｇ、Ｔ２０９Ｈ、Ｔ２０９Ｉ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｍ、Ｔ２０９Ｑ、Ｔ２０９Ｓ、Ｔ２０９Ｖ、Ｔ２０９Ｙ、Ｅ２１４Ｗ、Ｄ２１５Ｃ、Ｄ２１５Ｅ、Ｄ２１５Ｌ、Ｄ２１５Ｎ、Ｄ２１５Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｑ２１６Ａ、Ｑ２１６Ｅ、Ｑ２１６Ｇ、Ｑ２１６Ｈ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２１６Ｍ、Ｑ２１６Ｎ、Ｑ２１６Ｓ、Ｑ２１６Ｗ、Ｑ２１６Ｙ、Ｋ２２４Ｈ、Ｋ２２４Ｒ、Ｋ２２４Ｖ、Ｄ２２５Ｇ、Ｄ２２５Ｈ、Ｄ２２５Ｉ、Ｄ２２５Ｌ、Ｄ２２５Ｍ、Ｄ２２５Ｔ、Ｄ２２５Ｖ、Ｄ２２５Ｗ、Ｄ２２５Ｙ、Ｑ２２６Ｆ、Ｑ２２６Ｉ、Ｑ２２６Ｌ、Ｑ２２６Ｍ、Ｑ２２６Ｒ、Ｑ２２６Ｖ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２３８Ａ、Ｎ２３８Ｃ、Ｎ２３８Ｅ、Ｎ２３８Ｇ、Ｔ２４２Ａ、Ｔ２４２Ｃ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｆ、Ｔ２４２Ｇ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ２４２Ｋ、Ｔ２４２Ｌ、Ｔ２４２Ｍ、Ｔ２４２Ｎ、Ｔ２４２Ｑ、Ｔ２４２Ｒ、Ｔ２４２Ｓ、Ｔ２４２Ｖ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４８Ａ、Ｎ２４８Ｆ、Ｎ２４８Ｇ、Ｎ２４８Ｔ、Ｎ２４８Ｗ、Ｓ２４９Ｍ、Ｓ２４９Ｖ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｄ、Ｎ２６３Ｇ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６４Ｃ、Ｎ２７６Ａ、Ｎ２７６Ｃ、Ｎ２７６Ｆ、Ｓ２７７Ｃ、Ｓ２７７Ｆ、Ｓ２７７Ｗ、Ｓ２７７Ｙ、Ｎ２７８Ｃ、Ｎ２７８Ｆ、Ｎ２７８Ｇ、Ｎ２７８Ｖ、Ｑ２７９Ｃ、Ｔ２８２Ｃ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｓ、Ｑ３０１Ｇ、Ｑ３０１Ｋ、Ｑ３０１Ｌ、Ｄ３０２Ａ、Ｄ３０２Ｃ、Ｄ３０２Ｅ、Ｄ３０２Ｆ、Ｄ３０２Ｇ、Ｄ３０２Ｋ、Ｄ３０２Ｍ、Ｄ３０２Ｔ、Ｑ３０３Ａ、Ｑ３０３Ｃ、Ｑ３０３Ｋ、Ｑ３０３Ｍ、Ｑ３０３Ｐ、Ｙ３０６Ｇ、Ｙ３０６Ｋ、Ｙ３０６Ｍ、Ｙ３０６Ｑ、Ｙ３０６Ｒ、Ｙ３０６Ｖ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｄ、Ｓ３１２Ｗ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｋ、Ｑ３１６Ｐ、Ｑ３１６Ｒ、Ｑ３１６Ｓ、Ｑ３１６Ｔ、Ｑ３１６Ｙ、Ｋ３２０Ｃ、Ｒ３２８Ｓ、Ｄ３２９Ａ、Ｌ３３４Ａ、Ｌ３３４Ｖ、Ｋ３３５Ａ、Ｋ３３５Ｄ、Ｋ３３５Ｈ、Ｋ３３５Ｖ、Ｋ３３５Ｗ、Ｎ３３６Ａ、Ｎ３３６Ｇ、Ｄ３３７Ｃ、Ｄ３３７Ｋ、Ｄ３３７Ｗ、Ａ３３８Ｃ、Ａ３３８Ｗ、Ｎ３３９Ｅ、Ｎ３３９Ｇ、Ｎ３３９Ｈ、Ｎ３３９Ｋ、Ｎ３３９Ｌ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４４Ｆ、Ｋ３４４Ｉ、Ｋ３４４Ｌ、Ｋ３４４Ｍ、Ｋ３４４Ｐ、Ｋ３４４Ｓ、Ｋ３４４Ｔ、Ｋ３４４Ｖ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｄ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｆ、Ｋ３４５Ｇ、Ｋ３４５Ｓ、Ｋ３４５Ｖ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｓ、Ａ３４７Ｙ、Ｈ３６１Ａ、Ｈ３６１Ｃ、Ｈ３６１Ｇ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｇ、Ｒ３６３Ｋ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｓ、Ｒ３６３Ｗ、Ｒ３６３Ｙ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｆ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｋ３７１Ａ、Ｋ３７１Ｇ、Ｋ３７１Ｌ、Ｋ３７１Ｔ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ３７２Ｋ、Ｇ３７２Ｗ、Ｄ３７４Ｃ、Ｄ３７４Ｌ、Ｄ３７４Ｍ、Ｄ３７４Ｑ、Ｄ３７４Ｓ、Ｄ３７４Ｖ、Ｄ３７５Ｃ、Ｄ３７５Ｅ、Ｄ３７５Ｗ、Ｍ３８０Ｎ、Ｍ３８０Ｖ、Ｗ３８２Ｆ、Ｙ３９６Ａ、Ｙ３９６Ｃ、Ｙ３９６Ｅ、Ｙ３９６Ｆ、Ｙ３９６Ｋ、Ｙ３９６Ｖ、Ｄ３９７Ｃ、Ｄ３９７Ｅ、Ｄ３９７Ｈ、Ｄ３９７Ｉ、Ｄ３９７Ｋ、Ｄ３９７Ｌ、Ｄ３９７Ｍ、Ｄ３９７Ｎ、Ｄ３９７Ｑ、Ｄ３９７Ｒ、Ｄ３９７Ｓ、Ｄ３９７Ｔ、Ｄ３９７Ｖ、Ｄ３９７Ｙ、Ａ３９８Ｅ、Ａ３９８Ｒ、Ａ３９８Ｖ、Ａ３９８Ｗ、Ｉ３９９Ｃ、Ｉ３９９Ｙ、Ｒ４０２Ａ、Ｒ４０２Ｅ、Ｒ４０２Ｇ、Ｒ４０２Ｌ、Ｒ４０２Ｑ、Ｒ４０２Ｓ、Ｒ４０２Ｗ、Ｑ４０９Ｇ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｆ、Ｔ４１１Ｇ、Ｔ４１１Ｈ、Ｔ４１１Ｉ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｌ、Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｓ、Ｔ４１１Ｖ、Ｓ４２０Ｃ、Ｓ４２０Ｇ、Ｓ４２０Ｈ、Ｓ４２０Ｋ、Ｓ４２０Ｎ、Ｓ４２０Ｑ、Ｓ４２０Ｔ、Ｓ４２０Ｖ、Ｓ４２０Ｙ、Ｒ４２６Ａ、Ｇ４２７Ｃ、Ｇ４２７Ｄ、Ｇ４２７Ｅ、Ｇ４２７Ｆ、Ｇ４２７Ｈ、Ｇ４２７Ｐ、Ｇ４２７Ｖ、Ｇ４２７Ｙ、Ｋ４２８Ａ、Ｋ４２８Ｎ、Ｔ４４５Ａ、Ｔ４４５Ｃ、Ｔ４４５Ｅ、Ｔ４４５Ｆ、Ｔ４４５Ｇ、Ｔ４４５Ｍ、Ｔ４４５Ｐ、Ｔ４４５Ｖ、Ｔ４４５Ｙ、Ｖ４４６Ｑ、Ｖ４４６Ｒ、Ｅ４４７Ｖ、Ｇ４４８Ｃ、Ｇ４４８Ｄ、Ｇ４４８Ｅ、Ｇ４４８Ｆ、Ｇ４４８Ｎ、Ｎ４４９Ａ、Ｎ４４９Ｃ、Ｎ４４９Ｅ、Ｎ４４９Ｇ、Ｎ４４９Ｋ、４５４Ｆ、Ｎ４５５Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、Ｎ４５５Ｓ、Ｎ４５５Ｖ、Ｎ４５５Ｗ、Ｈ４６０Ｅ、Ｈ４６０Ｇ、Ｈ４６０Ｍ、Ｈ４６０Ｑ、Ｈ４６０Ｓ、Ｑ４６７Ｐ、Ｑ４６７Ｓ、Ｎ４７３Ａ、Ｎ４７３Ｅ、Ｎ４７３Ｌ、Ｎ４７３Ｒ、Ｎ４７３Ｗ、Ｓ４７４Ａ、Ｓ４７４Ｃ、Ｓ４７４Ｄ、Ｓ４７４Ｇ、Ｓ４７４Ｋ、Ｓ４７４Ｌ、Ｓ４７４Ｎ、Ｎ４７５Ｉ、Ｎ４７５Ｍ、Ｎ４７５Ｓ、Ｎ４７５Ｔ、Ｎ４７５Ｙ、Ｑ４９０Ｃ、Ｑ４９０Ｈ、Ｑ４９０Ｌ、Ｑ４９０Ｒ、Ｑ４９０Ｖ、Ｑ４９０Ｗ、Ｑ４９０Ｙ、Ｌ４９２Ａ、Ｌ４９２Ｄ、Ｌ４９２Ｆ、Ｌ４９２Ｗ、Ｌ４９２Ｙ、Ｑ４９６Ｇ、Ｑ４９６Ｗ、Ｖ４９７Ｃ、Ｖ４９７Ｍ、Ｖ４９７Ｔ、Ｋ４９８Ａ、Ｋ４９８Ｃ、Ｋ４９８Ｅ、Ｋ４９８Ｆ、Ｋ４９８Ｇ、Ｋ４９８Ｉ、Ｋ４９８Ｍ、Ｋ４９８Ｔ、Ｋ４９８Ｙ、Ｄ５２１Ａ、Ｄ５２１Ｃ、Ｄ５２１Ｗ、Ｖ５２２Ａ、Ｖ５２２Ｃ、Ｖ５２２Ｋ、Ｖ５２２Ｌ、Ｖ５２２Ｍ、Ｖ５２２Ｑ、Ｖ５２２Ｒ、Ｖ５２２Ｓ、Ｖ５２２Ｗ、Ｋ５３４Ｃ、Ｋ５３４Ｄ、Ｋ５３４Ｅ、Ｋ５３４Ｆ、Ｋ５３４Ｎ、Ｋ５３４Ｒ、Ｋ５３４Ｖ、Ｒ５４２Ｓ、Ｇ５４７Ａ、Ｇ５４７Ｃ、Ｓ５４８Ｃ、Ｓ５４８Ｅ、Ｓ５４８Ｆ、Ｓ５４８Ｌ、Ｓ５４８Ｍ、Ｓ５４８Ｑ、Ｓ５４８Ｔ、Ｓ５４８Ｗ、Ｇ５５４Ｃ、Ｇ５５４Ｄ、Ｇ５５４Ｆ、Ｇ５５４Ｈ、Ｇ５５４Ｍ、Ｇ５５４Ｑ、Ｇ５５４Ｗ、Ｌ５５５Ｃ、Ｌ５５５Ｄ、Ｌ５５５Ｅ、Ｌ５５５Ｇ、Ｌ５５５Ｈ、Ｌ５５５Ｋ、Ｌ５５５Ｎ、Ｌ５５５Ｐ、Ｋ５６０Ａ、Ｋ５６０Ｅ、Ｋ５６０Ｇ、Ｋ５６０Ｐ、Ｋ５６０Ｒ、Ｋ５６０Ｗ、Ｈ５６１Ｇ、Ｈ５６１Ｉ、Ｈ５６１Ｍ、Ｈ５６１Ｎ、Ｈ５６１Ｑ、Ｈ５６１Ｓ、Ｈ５６１Ｖ、Ｈ５６１Ｗ、Ｄ５６３Ａ、Ｄ５６３Ｑ、Ｄ５６３Ｓ、Ｄ５６３Ｔ、Ｄ５６３Ｙ、Ｄ５６４Ａ、Ｄ５６４Ｃ、Ｄ５６４Ｆ、Ｄ５６４Ｇ、Ｄ５６４Ｋ、Ｄ５６４Ｌ、Ｄ５６４Ｍ、Ｄ５６４Ｎ、Ｄ５６４Ｑ、Ｄ５６４Ｔ、Ｄ５６４Ｖ、Ｄ５６４Ｙ、Ｒ５７０Ａ、Ｒ５７０Ｃ、Ｒ５７０Ｄ、Ｒ５７０Ｅ、Ｒ５７０Ｇ、Ｒ５７０Ｉ、Ｒ５７０Ｑ、Ｒ５７０Ｓ、Ｒ５７０Ｔ、Ｒ５７０Ｖ、Ｙ５７１Ｈ、Ｙ５７１Ｍ、Ｋ５８１Ａ、Ｋ５８１Ｃ、Ｋ５８１Ｄ、Ｋ５８１Ｅ、Ｋ５８１Ｆ、Ｋ５８１Ｇ、Ｋ５８１Ｈ、Ｋ５８１Ｉ、Ｋ５８１Ｌ、Ｋ５８１Ｍ、Ｋ５８１Ｎ、Ｋ５８１Ｒ、Ｋ５８１Ｓ、Ｋ５８１Ｗ、Ｋ５８１Ｙ、Ｎ５８３Ａ、Ｎ５８３Ｃ、Ｎ５８３Ｄ、Ｎ５８３Ｇ、Ｎ５８３Ｈ、Ｒ５８６Ｎ、Ｒ５８６Ｐ、Ｒ５８６Ｖ、Ｒ５８６Ｗ、Ｖ６０３Ｇ、Ｖ６０３Ｈ、Ｖ６０３Ｙ、Ｆ６１１Ａ、Ｆ６１１Ｃ、Ｑ６１２Ｃ、Ｑ６１２Ｇ、Ｑ６１２Ｓ、Ａ６２２Ｅ、Ｑ６２６Ｅ、Ｑ６２６Ｈ、Ｔ６３８Ａ、Ｔ６３８Ｄ、Ｔ６３８Ｇ、Ｔ６３８Ｗ、Ｓ６４２Ｅ、Ｓ６４２Ｆ、Ｓ６４２Ｇ、Ｓ６４２Ｈ、６４２Ｉ、Ｓ６４２Ｌ、Ｓ６４２Ｑ、Ｓ６４２Ｒ、Ｓ６４２Ｔ、Ｓ６４２Ｗ、Ｓ６４２Ｙ、Ａ６４３Ｋ、Ａ６４３Ｖ、Ｒ６４５Ａ、Ｒ６４５Ｇ、Ｒ６４５Ｉ、Ｒ６４５Ｋ、Ｒ６４５Ｌ、Ｒ６４５Ｍ、Ｒ６４５Ｗ、Ｒ６４５Ｙ、Ｋ６４９Ｃ、Ｋ６４９Ｎ、Ｋ６４９Ｔ、Ｑ６５０Ａ、Ｑ６５０Ｃ、Ｑ６５０Ｄ、Ｑ６５０Ｆ、Ｑ６５０Ｇ、Ｑ６５０Ｋ、Ｑ６５０Ｎ、Ｑ６５０Ｒ、Ｑ６５０Ｔ、Ｑ６５０Ｖ、Ｑ６５０Ｙ、Ｔ６６０Ｃ、Ｔ６６０Ｄ、Ｔ６６０Ｎ、Ｔ６６０Ｓ、Ｔ６６０Ｗ、Ｔ６６０Ｙ、Ｐ６６１Ａ、Ｐ６６１Ｃ、Ｐ６６１Ｄ、Ｐ６６１Ｅ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｈ、Ｐ６６１Ｉ、Ｐ６６１Ｋ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｍ、Ｐ６６１Ｑ、Ｐ６６１Ｒ、Ｐ６６１Ｓ、Ｐ６６１Ｔ、Ｐ６６１Ｖ、Ｐ６６１Ｗ、Ｇ６６２Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｇ６６２Ｈ、Ｇ６６２Ｉ、Ｇ６６２Ｎ、Ｑ６６３Ｅ、Ｔ６６６Ｃ、Ｔ６６６Ｄ、Ｔ６６６Ｎ、Ｒ６７２Ｃ、Ｒ６７２Ｄ、Ｒ６７２Ｇ、Ｒ６７２Ｌ、Ｒ６７２Ｍ、Ｒ６７２Ｎ、Ｒ６７２Ｔ、Ｒ６７２Ｖ、Ｒ６７３Ｇ、Ｒ６７３Ｋ、Ｒ６７３Ｌ、Ｒ６７３Ｎ、Ｒ６７３Ｓ、Ｒ６７３Ｔ、Ｒ６７４Ｔ、Ｒ６７４Ｙ、Ｄ６８０Ｃ、Ｄ６８０Ｆ、Ｄ６８０Ｉ、Ｄ６８０Ｍ、Ｄ６８０Ｑ、Ｄ６８０Ｖ、Ｄ６８０Ｙ、Ｔ６８１Ａ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｐ、Ｔ６８１Ｑ、Ｔ６８１Ｓ、Ｔ６８１Ｖ、Ｔ６８１Ｗ、Ｓ６８３Ｆ、Ｓ６８３Ｖ、Ｓ６８３Ｗ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｑ６８４Ｎ、Ｋ６８５Ａ、Ｋ６８５Ｅ、Ｋ６８５Ｆ、Ｋ６８５Ｇ、Ｋ６８５Ｉ、Ｋ６８５Ｌ、Ｋ６８５Ｍ、Ｋ６８５Ｑ、Ｋ６８５Ｓ、Ｋ６８５Ｔ、Ｋ６８５Ｗ、Ｋ６８５Ｙ、Ｓ６９２Ｃ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｉ、Ｓ６９２Ｌ、Ｓ６９２Ｍ、Ｓ６９２Ｖ、Ｓ６９２Ｗ、Ｒ７０２Ｃ、Ｒ７０２Ｄ、Ｒ７０２Ｆ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０２Ｈ、Ｒ７０２Ｓ、Ｒ７０２Ｔ、Ｒ７０２Ｖ、Ｒ７０５Ｆ、Ｒ７０５Ｉ、Ｒ７０５Ｌ、Ｒ７０５Ｍ、Ｒ７０５Ｓ、Ｒ７０５Ｔ、Ｒ７０５Ｖ、及びＲ７０５Ｗからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体はＰＡＳＣ加水分解活性が改善されている（ＰＩは１超である）。
同様に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体も提供し、置換は、次のもの：Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｆ、Ｋ０２２Ｇ、Ｋ０２２Ｗ、Ｎ０２４Ａ、Ｎ０２４Ｃ、Ｎ０２４Ｄ、Ｎ０２４Ｅ、Ｎ０２４Ｆ、Ｎ０２４Ｇ、Ｎ０２４Ｌ、Ｎ０２４Ｐ、Ｎ０２４Ｑ、Ｎ０２４Ｓ、Ｎ０２４Ｖ、Ｎ０２４Ｙ、Ｌ０２５Ｋ、Ｌ０２５Ｎ、Ｌ０２５Ｔ、Ｌ０２５Ｖ、Ｌ０２５Ｙ、Ｑ０２６Ｃ、Ｑ０２６Ｄ、Ｑ０２６Ｅ、Ｑ０２６Ｇ、Ｑ０２６Ｉ、Ｑ０２６Ｋ、Ｑ０２６Ｌ、Ｑ０２６Ｐ、Ｑ０２６Ｒ、Ｑ０２６Ｓ、Ｑ０２６Ｔ、Ｑ０２６Ｖ、Ｑ０２６Ｗ、Ｑ０２６Ｙ、Ｓ０３３Ｃ、Ｓ０３３Ｔ、Ｖ０３５Ｃ、Ｖ０３５Ｅ、Ｖ０３５Ｎ、Ｇ０３６Ｓ、Ｓ０５０Ｃ、Ｓ０５０Ｆ、Ｓ０５０Ｇ、Ｓ０５０Ｉ、Ｓ０５０Ｌ、Ｓ０５０Ｍ、Ｓ０５０Ｎ、Ｓ０５０Ｐ、Ｓ０５０Ｒ、Ｓ０５０Ｔ、Ｓ０５０Ｖ、Ｋ０５１Ａ、Ｋ０５１Ｃ、Ｋ０５１Ｄ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｉ、Ｋ０５１Ｌ、Ｋ０５１Ｑ、Ｋ０５１Ｒ、Ｋ０５１Ｓ、Ｋ０５１Ｔ、Ｋ０５１Ｖ、Ｒ０９１Ｄ、Ｒ０９１Ｅ、Ｒ０９１Ｆ、Ｒ０９１Ｇ、Ｒ０９１Ｈ、Ｒ０９１Ｉ、Ｒ０９１Ｋ、Ｒ０９１Ｌ、Ｒ０９１Ｎ、Ｒ０９１Ｑ、Ｒ０９１Ｔ、Ｒ０９１Ｖ、Ｒ０９１Ｗ、Ｒ０９１Ｙ、Ｅ０９２Ｃ、Ｅ０９２Ｄ、Ｅ０９２Ｆ、Ｅ０９２Ｈ、Ｅ０９２Ｋ、Ｅ０９２Ｌ、Ｅ０９２Ｎ、Ｅ０９２Ｑ、Ｅ０９２Ｒ、Ｅ０９２Ｔ、Ｅ０９２Ｖ、Ｅ０９２Ｙ、Ｒ０９３Ｋ、Ｅ０９９Ａ、Ｅ０９９Ｄ、Ｅ０９９Ｆ、Ｅ０９９Ｉ、Ｅ０９９Ｋ、Ｅ０９９Ｍ、Ｅ０９９Ｎ、Ｅ０９９Ｗ、Ｅ０９９Ｙ、Ｌ１６７Ｃ、Ｌ１６７Ｄ、Ｌ１６７Ｅ、Ｌ１６７Ｆ、Ｌ１６７Ｇ、Ｌ１６７Ｍ、Ｌ１６７Ｖ、Ｌ１６７Ｗ、Ｎ１６８Ａ、Ｎ１６８Ｄ、Ｎ１６８Ｅ、Ｎ１６８Ｇ、Ｎ１６８Ｑ、Ｎ１６８Ｙ、Ｅ１７０Ｄ、Ｅ１７０Ｆ、Ｐ１７６Ｅ、Ｐ１７６Ｆ、Ｐ１７６Ｇ、Ｐ１７６Ｈ、Ｐ１７６Ｌ、Ｐ１７６Ｍ、Ｐ１７６Ｑ、Ｐ１７６Ｒ、Ｐ１７６Ｓ、Ｐ１７６Ｔ、Ｐ１７６Ｖ、Ｐ１７６Ｗ、Ｐ１７６Ｙ、Ｄ１７７Ｆ、Ｄ１７７Ｋ、Ｄ１７７Ｌ、Ｄ１７７Ｍ、Ｄ１７７Ｎ、Ｄ１７７Ｑ、Ｄ１７７Ｒ、Ｄ１７７Ｖ、Ｄ１７８Ａ、Ｄ１７８Ｃ、Ｄ１７８Ｎ、Ｄ１７８Ｒ、Ｒ１７９Ａ、Ｒ１７９Ｃ、Ｒ１７９Ｇ、Ｒ１７９Ｉ、Ｒ１７９Ｋ、Ｒ１７９Ｍ、Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１７９Ｓ、Ｒ１７９Ｔ、Ｒ１７９Ｖ、Ｑ１９４Ａ、Ｑ１９４Ｃ、Ｑ１９４Ｅ、Ｑ１９４Ｆ、Ｑ１９４Ｇ、Ｑ１９４Ｈ、Ｑ１９４Ｋ、Ｑ１９４Ｌ、Ｑ１９４Ｍ、Ｑ１９４Ｒ、Ｑ１９４Ｔ、Ｑ１９４Ｗ、Ｑ１９４Ｙ、Ｎ１９６Ｅ、Ｎ１９６Ｈ、Ｎ１９６Ｌ、Ｎ１９６Ｒ、Ｎ１９６Ｔ、Ｓ１９９Ｇ、Ｓ１９９Ｎ、Ｓ１９９Ｔ、Ｓ１９９Ｖ、Ｔ２０９Ｃ、Ｔ２０９Ｄ、Ｔ２０９Ｅ、Ｔ２０９Ｇ、Ｔ２０９Ｈ、Ｔ２０９Ｉ、Ｔ２０９Ｋ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｍ、Ｔ２０９Ｑ、Ｔ２０９Ｖ、Ｔ２０９Ｗ、Ｔ２０９Ｙ、Ｅ２１４Ｄ、Ｄ２１５Ｃ、Ｄ２１５Ｌ、Ｄ２１５Ｍ、Ｄ２１５Ｓ、Ｄ２１５Ｗ、Ｑ２１６Ａ、Ｑ２１６Ｃ、Ｑ２１６Ｄ、Ｑ２１６Ｅ、Ｑ２１６Ｆ、Ｑ２１６Ｇ、Ｑ２１６Ｈ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｋ、Ｑ２１６Ｎ、Ｑ２１６Ｐ、Ｑ２１６Ｒ、Ｑ２１６Ｓ、Ｑ２１６Ｔ、Ｑ２１６Ｗ、Ｑ２１６Ｙ、Ｋ２２４Ｒ、Ｄ２２５Ａ、Ｄ２２５Ｃ、Ｄ２２５Ｆ、Ｄ２２５Ｇ、Ｄ２２５Ｈ、Ｄ２２５Ｉ、Ｄ２２５Ｌ、Ｄ２２５Ｍ、Ｄ２２５Ｑ、Ｄ２２５Ｓ、Ｄ２２５Ｔ、Ｄ２２５Ｖ、Ｄ２２５Ｗ、Ｄ２２５Ｙ、Ｑ２２６Ｃ、Ｑ２２６Ｄ、Ｑ２２６Ｅ、Ｑ２２６Ｆ、Ｑ２２６Ｈ、Ｑ２２６Ｉ、Ｑ２２６Ｋ、Ｑ２２６Ｌ、Ｑ２２６Ｍ、Ｑ２２６Ｎ、Ｑ２２６Ｒ、Ｑ２２６Ｔ、Ｑ２２６Ｖ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２３８Ａ、Ｎ２３８Ｃ、Ｎ２３８Ｇ、Ｎ２３８Ｍ、Ｎ２３８Ｓ、Ｔ２４２Ａ、Ｔ２４２Ｃ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｓ、Ｎ２４８Ｔ、Ｓ２４９Ａ、Ｓ２４９Ｇ、Ｎ２６３Ａ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｄ、Ｎ２６３Ｑ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６４Ｃ、Ｒ２６５Ａ、Ｒ２６５Ｅ、Ｒ２６５Ｉ、Ｒ２６５Ｌ、Ｒ２６５Ｍ、Ｒ２６５Ｙ、Ｎ２７６Ａ、Ｎ２７６Ｃ、Ｓ２７７Ａ、Ｓ２７７Ｃ、Ｓ２７７Ｄ、Ｓ２７７Ｅ、Ｓ２７７Ｆ、Ｓ２７７Ｇ、Ｓ２７７Ｈ、Ｓ２７７Ｉ、Ｓ２７７Ｍ、Ｓ２７７Ｐ、Ｓ２７７Ｑ、Ｓ２７７Ｗ、Ｓ２７７Ｙ、Ｎ２７８Ａ、Ｎ２７８Ｃ、Ｎ２７８Ｄ、Ｎ２７８Ｆ、Ｎ２７８Ｇ、Ｎ２７８Ｉ、Ｎ２７８Ｍ、Ｎ２７８Ｑ、Ｎ２７８Ｒ、Ｎ２７８Ｓ、Ｎ２７８Ｔ、Ｎ２７８Ｖ、Ｎ２７８Ｗ、Ｎ２７８Ｙ、Ｑ２７９Ｃ、Ｑ２７９Ｄ、Ｑ２７９Ｅ、Ｑ２７９Ｇ、Ｑ２７９Ｈ、Ｑ２７９Ｉ、Ｑ２７９Ｋ、Ｑ２７９Ｎ、Ｑ２７９Ｓ、Ｑ２７９Ｔ、Ｑ２７９Ｖ、Ｑ２７９Ｙ、Ｔ２８２Ｋ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｇ、Ｄ２８７Ｈ、Ｄ２８７Ｉ、Ｄ２８７Ｋ、Ｄ２８７Ｍ、Ｄ２８７Ｎ、Ｄ２８７Ｓ、Ｑ３０１Ａ、Ｑ３０１Ｅ、Ｑ３０１Ｇ、Ｑ３０１Ｋ、Ｑ３０１Ｒ、Ｄ３０２Ａ、Ｄ３０２Ｃ、Ｄ３０２Ｅ、Ｄ３０２Ｆ、Ｄ３０２Ｇ、Ｄ３０２Ｋ、Ｄ３０２Ｍ、Ｄ３０２Ｎ、Ｄ３０２Ｐ、Ｄ３０２Ｓ、Ｄ３０２Ｔ、Ｄ３０２Ｗ、Ｄ３０２Ｙ、Ｑ３０３Ｃ、Ｑ３０３Ｄ、Ｑ３０３Ｒ、Ｑ３０３Ｗ、Ｙ３０６Ｍ、Ｙ３０６Ｒ、Ｙ３０６Ｖ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｄ、Ｓ３１２Ｇ、Ｓ３１２Ｎ、Ｓ３１２Ｑ、Ｓ３１２Ｒ、Ｓ３１２Ｔ、Ｓ３１２Ｖ、Ｓ３１２Ｙ、Ｒ３１３Ａ、Ｒ３１３Ｃ、Ｒ３１３Ｄ、Ｒ３１３Ｇ、Ｒ３１３Ｋ、Ｒ３１３Ｎ、Ｑ３１６Ｋ、Ｑ３１６Ｌ、Ｑ３１６Ｍ、Ｑ３１６Ｒ、Ｑ３１６Ｔ、Ｑ３１６Ｙ、Ｋ３２０Ｃ、Ｋ３２０Ｇ、Ｋ３２０Ｎ、Ｋ３２０Ｐ、Ｋ３２０Ｓ、Ｋ３２０Ｙ、Ｒ３２４Ｃ、Ｒ３２４Ｄ、Ｒ３２４Ｅ、Ｒ３２４Ｆ、Ｒ３２４Ｈ、Ｒ３２４Ｉ、Ｒ３２４Ｋ、Ｒ３２４Ｌ、Ｒ３２４Ｍ、Ｒ３２４Ｑ、Ｒ３２４Ｖ、Ｒ３２４Ｗ、Ｒ３２４Ｙ、Ｒ３２８Ｃ、Ｒ３２８Ｋ、Ｒ３２８Ｓ、Ｄ３２９Ａ、Ｄ３２９Ｈ、Ｄ３２９Ｓ、Ｌ３３４Ａ、Ｌ３３４Ｃ、Ｌ３３４Ｆ、Ｌ３３４Ｍ、Ｌ３３４Ｔ、Ｌ３３４Ｖ、Ｌ３３４Ｗ、Ｋ３３５Ａ、Ｋ３３５Ｄ、Ｋ３３５Ｈ、Ｋ３３５Ｌ、Ｋ３３５Ｒ、Ｋ３３５Ｓ、Ｋ３３５Ｖ、Ｋ３３５Ｗ、Ｎ３３６Ａ、Ｎ３３６Ｃ、Ｎ３３６Ｇ、Ｎ３３６Ｈ、Ｎ３３６Ｌ、Ｎ３３６Ｍ、Ｎ３３６Ｑ、Ｎ３３６Ｒ、Ｎ３３６Ｔ、Ｎ３３６Ｖ、Ｎ３３６Ｙ、Ｄ３３７Ａ、Ａ３３８Ｃ、３３８Ｄ、Ａ３３８Ｅ、Ａ３３８Ｆ、Ａ３３８Ｇ、Ａ３３８Ｈ、Ａ３３８Ｉ、Ａ３３８Ｋ、Ａ３３８Ｌ、Ａ３３８Ｎ、Ａ３３８Ｐ、Ａ３３８Ｑ、Ａ３３８Ｒ、Ａ３３８Ｖ、Ａ３３８Ｗ、Ａ３３８Ｙ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４４Ｆ、Ｋ３４４Ｌ、Ｋ３４４Ｍ、Ｋ３４４Ｎ、Ｋ３４４Ｐ、Ｋ３４４Ｔ、Ｋ３４４Ｖ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｄ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｆ、Ｋ３４５Ｇ、Ｋ３４５Ｈ、Ｋ３４５Ｎ、Ｋ３４５Ｐ、Ｋ３４５Ｒ、Ｋ３４５Ｓ、Ｋ３４５Ｖ、Ｋ３４５Ｗ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｄ、Ａ３４７Ｆ、Ａ３４７Ｈ、Ａ３４７Ｉ、Ａ３４７Ｋ、Ａ３４７Ｌ、Ａ３４７Ｍ、Ａ３４７Ｐ、Ａ３４７Ｑ、Ａ３４７Ｒ、Ａ３４７Ｓ、Ａ３４７Ｙ、Ｈ３６１Ａ、Ｈ３６１Ｇ、Ｈ３６１Ｎ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｋ、Ｒ３６３Ｍ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｓ、Ｒ３６３Ｔ、Ｒ３６３Ｖ、Ｒ３６３Ｗ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｓ、Ｋ３７１Ｇ、Ｇ３７２Ａ、Ｄ３７４Ｃ、Ｄ３７４Ｆ、Ｄ３７４Ｎ、Ｄ３７４Ｓ、Ｙ３９６Ｄ、Ｙ３９６Ｅ、Ｙ３９６Ｆ、Ｙ３９６Ｇ、Ｙ３９６Ｈ、Ｙ３９６Ｋ、Ｙ３９６Ｌ、Ｙ３９６Ｍ、Ｙ３９６Ｎ、Ｙ３９６Ｑ、Ｙ３９６Ｒ、３９７Ｃ、Ｄ３９７Ｅ、Ｄ３９７Ｈ、Ｄ３９７Ｉ、Ｄ３９７Ｋ、Ｄ３９７Ｍ、Ｄ３９７Ｎ、Ｄ３９７Ｐ、Ｄ３９７Ｑ、Ｄ３９７Ｒ、Ｄ３９７Ｓ、Ｄ３９７Ｔ、Ｄ３９７Ｖ、Ｄ３９７Ｙ、Ａ３９８Ｃ、Ａ３９８Ｄ、Ａ３９８Ｅ、Ａ３９８Ｆ、Ａ３９８Ｇ、Ａ３９８Ｈ、Ａ３９８Ｉ、Ａ３９８Ｋ、Ａ３９８Ｌ、Ａ３９８Ｍ、Ａ３９８Ｎ、Ａ３９８Ｐ、Ａ３９８Ｑ、Ａ３９８Ｒ、Ａ３９８Ｓ、Ａ３９８Ｔ、Ａ３９８Ｖ、Ａ３９８Ｗ、Ａ３９８Ｙ、Ｉ３９９Ａ、Ｉ３９９Ｃ、Ｉ３９９Ｄ、Ｉ３９９Ｅ、Ｉ３９９Ｇ、Ｉ３９９Ｍ、Ｉ３９９Ｑ、Ｉ３９９Ｓ、Ｉ３９９Ｔ、Ｉ３９９Ｗ、Ｉ３９９Ｙ、Ｒ４０２Ａ、Ｒ４０２Ｃ、Ｒ４０２Ｇ、Ｒ４０２Ｓ、Ｑ４０９Ｄ、Ｖ４１０Ａ、Ｖ４１０Ｃ、Ｖ４１０Ｉ、Ｖ４１０Ｌ、Ｖ４１０Ｎ、Ｖ４１０Ｒ、Ｖ４１０Ｓ、Ｖ４１０Ｔ、Ｖ４１０Ｗ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｇ、Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｓ、Ｔ４１１Ｙ、Ｓ４２０Ｃ、Ｒ４２６Ａ、Ｒ４２６Ｅ、Ｒ４２６Ｆ、Ｒ４２６Ｉ、Ｒ４２６Ｋ、Ｒ４２６Ｎ、Ｒ４２６Ｐ、Ｒ４２６Ｑ、Ｒ４２６Ｓ、Ｒ４２６Ｗ、Ｒ４２６Ｙ、Ｇ４２７Ｃ、Ｇ４２７Ｅ、Ｇ４２７Ｆ、Ｇ４２７Ｈ、Ｇ４２７Ｋ、Ｇ４２７Ｎ、Ｇ４２７Ｑ、Ｇ４２７Ｒ、Ｇ４２７Ｓ、Ｇ４２７Ｔ、Ｇ４２７Ｖ、Ｋ４２８Ｃ、Ｋ４２８Ｄ、Ｋ４２８Ｅ、Ｋ４２８Ｆ、Ｋ４２８Ｇ、Ｋ４２８Ｈ、Ｋ４２８Ｉ、Ｋ４２８Ｌ、Ｋ４２８Ｍ、Ｋ４２８Ｎ、Ｋ４２８Ｐ、Ｋ４２８Ｑ、Ｋ４２８Ｒ、Ｋ４２８Ｓ、Ｋ４２８Ｔ、Ｋ４２８Ｖ、Ｋ４２８Ｗ、Ｋ４２８Ｙ、Ｔ４４５Ａ、Ｔ４４５Ｃ、Ｔ４４５Ｄ、Ｔ４４５Ｋ、Ｔ４４５Ｍ、Ｔ４４５Ｑ、Ｔ４４５Ｓ、Ｖ４４６Ｃ、Ｇ４４８Ａ、Ｇ４４８Ｃ、Ｇ４４８Ｄ、Ｇ４４８Ｅ、Ｇ４４８Ｆ、Ｇ４４８Ｎ、Ｇ４４８Ｓ、Ｇ４４８Ｔ、Ｇ４４８Ｙ、Ｎ４４９Ａ、Ｎ４４９Ｃ、Ｎ４５４Ｆ、Ｎ４５４Ｇ、Ｎ４５４Ｋ、Ｎ４５４Ｌ、Ｎ４５４Ｍ、Ｎ４５４Ｒ、Ｎ４５４Ｓ、Ｎ４５４Ｔ、Ｎ４５４Ｖ、Ｎ４５５Ａ、Ｎ４５５Ｄ、Ｎ４５５Ｅ、Ｎ４５５Ｆ、Ｎ４５５Ｇ、Ｎ４５５Ｈ、Ｎ４５５Ｉ、Ｎ４５５Ｌ、Ｎ４５５Ｍ、Ｎ４５５Ｓ、Ｎ４５５Ｔ、Ｎ４５５Ｖ、Ｎ４５５Ｗ、Ｎ４５５Ｙ、Ｑ４６７Ａ、Ｎ４７３Ａ、Ｎ４７３Ｃ、Ｎ４７３Ｅ、Ｎ４７３Ｆ、Ｎ４７３Ｇ、Ｎ４７３Ｈ、Ｎ４７３Ｋ、Ｎ４７３Ｌ、Ｎ４７３Ｍ、Ｎ４７３Ｐ、Ｎ４７３Ｑ、Ｎ４７３Ｒ、Ｎ４７３Ｓ、Ｎ４７３Ｔ、Ｎ４７３Ｖ、Ｎ４７３Ｗ、Ｓ４７４Ａ、Ｓ４７４Ｃ、Ｓ４７４Ｄ、Ｓ４７４Ｆ、Ｓ４７４Ｇ、Ｓ４７４Ｉ、Ｓ４７４Ｋ、Ｓ４７４Ｍ、Ｓ４７４Ｎ、Ｓ４７４Ｑ、Ｓ４７４Ｒ、Ｓ４７４Ｔ、Ｓ４７４Ｖ、Ｎ４７５Ｉ、Ｎ４７５Ｋ、Ｎ４７５Ｌ、Ｎ４７５Ｍ、Ｎ４７５Ｐ、Ｎ４７５Ｑ、Ｎ４７５Ｒ、Ｎ４７５Ｓ、Ｎ４７５Ｔ、Ｎ４７５Ｖ、Ｎ４７５Ｗ、Ｎ４７５Ｙ、Ｅ４８９Ｎ、Ｑ４９０Ｐ、Ｑ４９０Ｗ、Ｌ４９２Ａ、Ｌ４９２Ｄ、Ｌ４９２Ｆ、Ｌ４９２Ｉ、Ｌ４９２Ｍ、Ｌ４９２Ｑ、Ｌ４９２Ｔ、Ｌ４９２Ｗ、Ｑ４９６Ｇ、Ｑ４９６Ｓ、Ｑ４９６Ｗ、Ｖ４９７Ａ、Ｖ４９７Ｉ、Ｖ４９７Ｔ、Ｋ４９８Ａ、Ｋ４９８Ｆ、Ｋ４９８Ｈ、Ｋ４９８Ｉ、Ｋ４９８Ｎ、Ｋ４９８Ｑ、Ｄ５２１Ａ、Ｄ５２１Ｃ、Ｄ５２１Ｅ、Ｄ５２１Ｆ、Ｄ５２１Ｇ、Ｄ５２１Ｈ、Ｄ５２１Ｉ、Ｄ５２１Ｋ、Ｄ５２１Ｌ、Ｄ５２１Ｍ、Ｄ５２１Ｐ、Ｄ５２１Ｒ、Ｄ５２１Ｓ、Ｄ５２１Ｔ、Ｄ５２１Ｖ、Ｄ５２１Ｗ、Ｄ５２１Ｙ、Ｖ５２２Ａ、５２２Ｃ、Ｖ５２２Ｆ、Ｖ５２２Ｇ、Ｖ５２２Ｈ、Ｖ５２２Ｉ、Ｖ５２２Ｋ、Ｖ５２２Ｌ、Ｖ５２２Ｍ、Ｖ５２２Ｎ、Ｖ５２２Ｐ、Ｖ５２２Ｑ、Ｖ５２２Ｒ、Ｖ５２２Ｓ、Ｖ５２２Ｔ、Ｖ５２２Ｗ、Ｖ５２２Ｙ、Ｋ５３４Ｃ、Ｋ５３４Ｄ、Ｋ５３４Ｅ、Ｋ５３４Ｆ、Ｋ５３４Ｇ、Ｋ５３４Ｎ、Ｋ５３４Ｒ、Ｋ５３４Ｖ、Ｒ５４２Ａ、Ｒ５４２Ｃ、Ｒ５４２Ｄ、Ｒ５４２Ｅ、Ｒ５４２Ｆ、Ｒ５４２Ｇ、Ｒ５４２Ｈ、Ｒ５４２Ｉ、Ｒ５４２Ｋ、Ｒ５４２Ｌ、Ｒ５４２Ｍ、Ｒ５４２Ｎ、Ｒ５４２Ｐ、Ｒ５４２Ｑ、Ｒ５４２Ｓ、Ｒ５４２Ｔ、Ｒ５４２Ｖ、Ｒ５４２Ｗ、Ｒ５４２Ｙ、Ｇ５４７Ａ、Ｇ５４７Ｌ、Ｓ５４８Ｌ、Ｇ５５４Ａ、Ｇ５５４Ｃ、Ｇ５５４Ｄ、Ｇ５５４Ｆ、Ｇ５５４Ｈ、Ｇ５５４Ｌ、Ｇ５５４Ｖ、Ｇ５５４Ｗ、Ｌ５５５Ａ、Ｌ５５５Ｃ、Ｌ５５５Ｄ、Ｌ５５５Ｅ、Ｌ５５５Ｆ、Ｌ５５５Ｇ、Ｌ５５５Ｈ、Ｌ５５５Ｉ、Ｌ５５５Ｋ、Ｌ５５５Ｎ、Ｌ５５５Ｐ、Ｌ５５５Ｑ、Ｌ５５５Ｖ、Ｌ５５５Ｗ、Ｌ５５５Ｙ、Ｋ５６０Ｈ、Ｋ５６０Ｐ、Ｋ５６０Ｒ、Ｋ５６０Ｗ、Ｈ５６１Ａ、Ｈ５６１Ｃ、Ｈ５６１Ｄ、Ｈ５６１Ｅ、Ｈ５６１Ｆ、Ｈ５６１Ｇ、Ｈ５６１Ｉ、Ｈ５６１Ｍ、Ｈ５６１Ｎ、Ｈ５６１Ｑ、Ｈ５６１Ｓ、Ｈ５６１Ｖ、Ｈ５６１Ｗ、Ｄ５６３Ａ、Ｄ５６３Ｃ、Ｄ５６３Ｆ、Ｄ５６３Ｉ、Ｄ５６３Ｌ、Ｄ５６３Ｑ、Ｄ５６３Ｒ、Ｄ５６３Ｓ、Ｄ５６３Ｔ、Ｄ５６３Ｗ、Ｄ５６３Ｙ、Ｄ５６４Ａ、Ｄ５６４Ｃ、Ｄ５６４Ｆ、Ｄ５６４Ｋ、Ｄ５６４Ｌ、Ｄ５６４Ｒ、Ｄ５６４Ｔ、Ｄ５６４Ｖ、Ｒ５７０Ａ、Ｒ５７０Ｄ、Ｒ５７０Ｇ、Ｒ５７０Ｈ、Ｒ５７０Ｉ、Ｒ５７０Ｓ、Ｒ５７０Ｖ、Ｙ５７１Ｈ、Ｙ５７１Ｍ、Ｋ５８１Ｗ、Ｎ５８３Ａ、Ｎ５８３Ｃ、Ｎ５８３Ｄ、Ｎ５８３Ｅ、Ｎ５８３Ｆ、Ｎ５８３Ｇ、Ｎ５８３Ｈ、Ｎ５８３Ｉ、Ｎ５８３Ｋ、Ｎ５８３Ｌ、Ｎ５８３Ｍ、Ｎ
５８３Ｐ、Ｎ５８３Ｒ、Ｎ５８３Ｓ、Ｎ５８３Ｔ、Ｎ５８３Ｗ、Ｎ５８３Ｙ、Ｒ５８６Ｅ、Ｒ５８６Ｆ、Ｒ５８６Ｇ、Ｒ５８６Ｈ、Ｒ５８６Ｌ、Ｒ５８６Ｎ、Ｒ５８６Ｐ、Ｒ５８６Ｖ、Ｒ５８６Ｗ、Ｒ５８６Ｙ、Ｓ５９１Ｄ、Ｖ６０３Ａ、Ｖ６０３Ｄ、Ｖ６０３Ｇ、Ｖ６０３Ｈ、Ｖ６０３Ｎ、Ｖ６０３Ｑ、Ｖ６０３Ｒ、Ｖ６０３Ｙ、Ｆ６１１Ａ、Ｆ６１１Ｃ、Ｆ６１１Ｄ、Ｆ６１１Ｋ、Ｆ６１１Ｌ、Ｆ６１１Ｍ、Ｆ６１１Ｎ、Ｆ６１１Ｒ、Ｆ６１１Ｓ、Ｆ６１１Ｗ、Ｑ６１２Ｃ、Ｑ６１２Ｆ、Ｑ６１２Ｇ、Ｑ６１２Ｈ、Ｑ６１２Ｉ、Ｑ６１２Ｋ、Ｑ６１２Ｌ、Ｑ６１２Ｍ、Ｑ６１２Ｒ、Ｑ６１２Ｓ、Ｑ６１２Ｗ、Ａ６２２Ｈ、Ａ６２２Ｋ、Ｑ６２６Ｈ、Ｑ６２６Ｍ、Ｖ６２７Ｐ、Ｔ６３８Ａ、Ｔ６３８Ｄ、Ｔ６３８Ｅ、Ｔ６３８Ｆ、Ｔ６３８Ｇ、Ｔ６３８Ｉ、Ｔ６３８Ｋ、Ｔ６３８Ｌ、Ｔ６３８Ｍ、Ｔ６３８Ｐ、Ｔ６３８Ｑ、Ｔ６３８Ｒ、Ｔ６３８Ｓ、Ｔ６３８Ｖ、Ｔ６３８Ｗ、Ｔ６３８Ｙ、Ｓ６４２Ａ、Ｓ６４２Ｃ、Ｓ６４２Ｅ、Ｓ６４２Ｆ、Ｓ６４２Ｇ、Ｓ６４２Ｈ、Ｓ６４２Ｉ、Ｓ６４２Ｋ、Ｓ６４２Ｌ、Ｓ６４２Ｍ、Ｓ６４２Ｎ、Ｓ６４２Ｐ、Ｓ６４２Ｑ、Ｓ６４２Ｒ、Ｓ６４２Ｔ、Ｓ６４２Ｖ、Ｓ６４２Ｗ、Ｓ６４２Ｙ、Ａ６４３Ｃ、Ａ６４３Ｆ、Ａ６４３Ｇ、Ａ６４３Ｈ、Ａ６４３Ｋ、Ａ６４３Ｌ、Ａ６４３Ｍ、Ａ６４３Ｑ、Ａ６４３Ｒ、Ａ６４３Ｓ、Ａ６４３Ｔ、Ａ６４３Ｖ、Ａ６４３Ｙ、Ｒ６４５Ａ、Ｒ６４５Ｄ、Ｒ６４５Ｆ、Ｒ６４５Ｇ、Ｒ６４５Ｈ、Ｒ６４５Ｉ、Ｒ６４５Ｋ、Ｒ６４５Ｌ、Ｒ６４５Ｍ、Ｒ６４５Ｐ、Ｒ６４５Ｑ、Ｒ６４５Ｔ、Ｒ６４５Ｖ、Ｒ６４５Ｗ、Ｒ６４５Ｙ、Ｋ６４９Ａ、Ｋ６４９Ｃ、Ｋ６４９Ｆ、Ｋ６４９Ｌ、Ｋ６４９Ｎ、Ｋ６４９Ｑ、Ｋ６４９Ｓ、Ｋ６４９Ｔ、Ｋ６４９Ｙ、Ｑ６５０Ｃ、Ｑ６５０Ｄ、Ｑ６５０Ｅ、Ｑ６５０Ｆ、Ｑ６５０Ｇ、Ｑ６５０Ｈ、Ｑ６５０Ｉ、Ｑ６５０Ｋ、Ｑ６５０Ｌ、Ｑ６５０Ｍ、Ｑ６５０Ｎ、Ｑ６５０Ｒ、Ｑ６５０Ｖ、Ｑ６５０Ｙ、Ｔ６６０Ｃ、Ｔ６６０Ｗ、Ｔ６６０Ｙ、Ｐ６６１Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｈ、Ｐ６６１Ｉ、Ｐ６６１Ｋ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｍ、Ｐ６６１Ｑ、Ｐ６６１Ｒ、Ｐ６６１Ｔ、Ｐ６６１Ｖ、Ｐ６６１Ｗ、Ｇ６６２Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｇ６６２Ｈ、Ｇ６６２Ｉ、Ｇ６６２Ｋ、Ｇ６６２Ｒ、Ｇ６６２Ｙ、Ｑ６６３Ａ、Ｑ６６３Ｃ、Ｑ６６３Ｄ、Ｑ６６３Ｅ、Ｑ６６３Ｆ、Ｑ６６３Ｉ、Ｑ６６３Ｌ、Ｑ６６３Ｍ、Ｑ６６３Ｎ、Ｑ６６３Ｒ、Ｑ６６３Ｓ、Ｑ６６３Ｖ、Ｑ６６３Ｗ、Ｔ６６６Ａ、Ｔ６６６Ｃ、Ｔ６６６Ｈ、Ｔ６６６Ｋ、Ｔ６６６Ｎ、Ｔ６６６Ｒ、Ｔ６６６Ｗ、Ｒ６７２Ｃ、Ｒ６７２Ｄ、Ｒ６７２Ｇ、Ｒ６７２Ｉ、Ｒ６７２Ｋ、Ｒ６７２Ｖ、Ｒ６７２Ｗ、Ｒ６７３Ａ、Ｒ６７３Ｃ、Ｒ６７３Ｇ、Ｒ６７３Ｈ、Ｒ６７３Ｉ、Ｒ６７３Ｋ、Ｒ６７３Ｌ、Ｒ６７３Ｑ、Ｒ６７３Ｔ、Ｒ６７３Ｖ、Ｒ６７３Ｗ、Ｒ６７４Ｌ、Ｒ６７４Ｍ、Ｒ６７４Ｔ、Ｒ６７４Ｙ、Ｄ６７５Ｃ、Ｄ６８０Ａ、Ｄ６８０Ｃ、Ｄ６８０Ｅ、Ｄ６８０Ｆ、Ｄ６８０Ｈ、Ｄ６８０Ｉ、Ｄ６８０Ｋ、Ｄ６８０Ｌ、Ｄ６８０Ｍ、Ｄ６８０Ｎ、Ｄ６８０Ｑ、Ｄ６８０Ｒ、Ｄ６８０Ｓ、Ｄ６８０Ｖ、Ｄ６８０Ｗ、Ｄ６８０Ｙ、Ｔ６８１Ａ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｈ、Ｔ６８１Ｋ、Ｔ６８１Ｌ、Ｔ６８１Ｍ、Ｔ６８１Ｎ、Ｔ６８１Ｑ、Ｔ６８１Ｒ、Ｔ６８１Ｗ、Ｓ６８３Ａ、Ｓ６８３Ｃ、Ｓ６８３Ｄ、Ｓ６８３Ｆ、Ｓ６８３Ｇ、Ｓ６８３Ｉ、Ｓ６８３Ｌ、Ｓ６８３Ｐ、Ｓ６８３Ｒ、Ｓ６８３Ｖ、Ｓ６８３Ｗ、Ｑ６８４Ａ、Ｑ６８４Ｄ、Ｋ６８５Ａ、Ｋ６８５Ｆ、Ｋ６８５Ｇ、Ｋ６８５Ｉ、Ｋ６８５Ｌ、Ｋ６８５Ｍ、Ｋ６８５Ｎ、Ｋ６８５Ｑ、Ｋ６８５Ｒ、Ｋ６８５Ｓ、Ｋ６８５Ｔ、Ｋ６８５Ｖ、Ｋ６８５Ｗ、Ｋ６８５Ｙ、Ｓ６９２Ｅ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｋ、Ｓ６９２Ｌ、Ｓ６９２Ｑ、Ｓ６９２Ｔ、Ｓ６９２Ｖ、Ｓ６９２Ｗ、Ｒ７０２Ｃ、Ｒ７０２Ｄ、Ｒ７０２Ｆ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０２Ｈ、Ｒ７０２Ｉ、Ｒ７０２Ｋ、Ｒ７０２Ｌ、Ｒ７０２Ｍ、Ｒ７０２Ｎ、Ｒ７０２Ｑ、Ｒ７０２Ｓ、Ｒ７０２Ｔ、Ｒ７０２Ｖ、Ｒ７０２Ｗ、Ｒ７０５Ｃ、Ｒ７０５Ｆ、Ｒ７０５Ｈ、Ｒ７０５Ｉ、Ｒ７０５Ｌ、Ｒ７０５Ｍ、Ｒ７０５Ｐ、Ｒ７０５Ｓ、Ｒ７０５Ｔ、及びＲ７０５Ｗからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体はＰＣＳ加水分解活性が改善されている（ＰＩは１超である）。
更に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ａ、Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｆ、Ｋ０２２Ｐ、Ｋ０２２Ｑ、Ｎ０２４Ｃ、Ｎ０２４Ｐ、Ｎ０２４Ｑ、Ｌ０２５Ａ、Ｌ０２５Ｄ、Ｑ０２６Ｃ、Ｑ０２６Ｉ、Ｑ０２６Ｋ、Ｑ０２６Ｌ、Ｑ０２６Ｐ、Ｑ０２６Ｒ、Ｑ０２６Ｓ、Ｑ０２６Ｔ、Ｑ０２６Ｗ、Ｓ０３３Ｃ、Ｓ０３３Ｇ、Ｖ０３５Ｃ、Ｖ０３５Ｅ、Ｖ０３５Ｑ、Ｖ０３５Ｒ、Ｖ０３５Ｓ、Ｖ０３５Ｔ、Ｖ０３５Ｙ、Ｇ０３６Ｃ、Ｇ０３６Ｄ、Ｇ０３６Ｅ、Ｇ０３６Ｆ、Ｇ０３６Ｉ、Ｇ０３６Ｋ、Ｇ０３６Ｒ、Ｇ０３６Ｓ、Ｇ０３６Ｗ、Ｇ０３６Ｙ、Ｓ０５０Ｃ、Ｓ０５０Ｐ、Ｋ０５１Ａ、Ｋ０５１Ｃ、Ｋ０５１Ｄ、Ｋ０５１Ｇ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｍ、Ｋ０５１Ｑ、Ｋ０５１Ｔ、Ｋ０５１Ｖ、Ｒ０９１Ｄ、Ｒ０９１Ｇ、Ｒ０９１Ｋ、Ｒ０９１Ｎ、Ｒ０９１Ｑ、Ｅ０９２Ａ、Ｅ０９２Ｃ、Ｅ０９２Ｄ、Ｅ０９２Ｆ、Ｅ０９２Ｈ、Ｅ０９２Ｉ、Ｅ０９２Ｌ、Ｅ０９２Ｎ、Ｅ０９２Ｒ、Ｅ０９２Ｖ、Ｅ０９９Ｙ、Ｅ１００Ａ、Ｅ１００Ｇ、Ｅ１００Ｍ、Ｅ１００Ｔ、Ｅ１００Ｙ、Ｅ１６４Ｇ、Ｅ１６４Ｓ、Ｑ１６５Ｖ、Ｅ１６６Ｄ、Ｌ１６７Ｃ、Ｌ１６７Ｇ、Ｌ１６７Ｎ、Ｌ１６７Ｖ、Ｌ１６７Ｗ、Ｎ１６８Ａ、Ｎ１６８Ｄ、Ｎ１６８Ｅ、Ｎ１６８Ｇ、Ｎ１６８Ｈ、Ｎ１６８Ｑ、Ｎ１６８Ｒ、Ｎ１６８Ｔ、Ｎ１６８Ｙ、Ｅ１７０Ｆ、Ｐ１７６Ａ、Ｐ１７６Ｄ、Ｐ１７６Ｆ、Ｐ１７６Ｈ、Ｐ１７６Ｋ、Ｐ１７６Ｌ、Ｐ１７６Ｒ、Ｐ１７６Ｖ、Ｐ１７６Ｗ、Ｐ１７６Ｙ、Ｄ１７７Ｅ、Ｄ１７７Ｆ、Ｄ１７７Ｈ、Ｄ１７７Ｌ、Ｄ１７７Ｍ、Ｄ１７７Ｒ、Ｄ１７７Ｗ、Ｄ１７７Ｙ、Ｄ１７８Ｃ、Ｄ１７８Ｋ、Ｄ１７８Ｒ、Ｄ１７８Ｙ、Ｒ１７９Ｋ、Ｒ１７９Ｍ、Ｒ１７９Ｓ、Ｒ１７９Ｗ、Ｒ９４Ａ、Ｑ１９４Ｃ、Ｑ１９４Ｅ、Ｑ１９４Ｆ、Ｑ１９４Ｇ、Ｑ１９４Ｋ、Ｑ１９４Ｌ、Ｎ１９６Ｅ、Ｎ１９６Ｌ、Ｎ１９６Ｑ、Ｎ１９６Ｔ、Ｔ２０９Ｃ、Ｔ２０９Ｄ、Ｔ２０９Ｅ、Ｔ２０９Ｇ、Ｔ２０９Ｈ、Ｔ２０９Ｉ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｍ、Ｔ２０９Ｑ、Ｔ２０９Ｓ、Ｔ２０９Ｖ、Ｔ２０９Ｙ、Ｅ２１４Ｗ、Ｄ２１５Ｃ、Ｄ２１５Ｅ、Ｄ２１５Ｇ、Ｄ２１５Ｌ、Ｄ２１５Ｍ、Ｄ２１５Ｎ、Ｄ２１５Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｑ２１６Ａ、Ｑ２１６Ｃ、Ｑ２１６Ｆ、Ｑ２１６Ｇ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｋ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２１６Ｍ、Ｑ２１６Ｓ、Ｑ２１６Ｔ、Ｑ２１６Ｗ、Ｑ２１６Ｙ、Ｋ２２４Ｒ、Ｋ２２４Ｖ、Ｄ２２５Ｆ、Ｄ２２５Ｇ、Ｄ２２５Ｈ、Ｄ２２５Ｉ、Ｄ２２５Ｌ、Ｄ２２５Ｍ、Ｄ２２５Ｔ、Ｄ２２５Ｖ、Ｄ２２５Ｗ、Ｄ２２５Ｙ、Ｑ２２６Ａ、Ｑ２２６Ｃ、Ｑ２２６Ｆ、Ｑ２２６Ｉ、Ｑ２２６Ｌ、Ｑ２２６Ｍ、Ｑ２２６Ｎ、Ｑ２２６Ｒ、Ｑ２２６Ｖ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２３８Ａ、Ｎ２３８Ｃ、Ｎ２３８Ｅ、Ｔ２４２Ａ、Ｔ２４２Ｃ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｆ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ２４２Ｋ、Ｔ２４２Ｌ、Ｔ２４２Ｍ、Ｔ２４２Ｑ、Ｔ２４２Ｖ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４８Ｇ、Ｎ２４８Ｗ、Ｎ２４８Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｅ、Ｎ２６３Ｆ、Ｎ２６３Ｇ、Ｎ２６３Ｑ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６３Ｖ、Ｎ２６３Ｙ、Ｎ２６４Ｃ、Ｒ２６５Ｅ、Ｒ２６５Ｋ、Ｎ２７６Ｃ、Ｓ２７７Ａ、Ｓ２７７Ｃ、Ｓ２７７Ｆ、Ｓ２７７Ｉ、Ｓ２７７Ｍ、Ｓ２７７Ｐ、Ｓ２７７Ｒ、Ｓ２７７Ｗ、Ｓ２７７Ｙ、Ｎ２７８Ａ、Ｎ２７８Ｃ、Ｎ２７８Ｆ、Ｎ２７８Ｇ、Ｎ２７８Ｈ、Ｎ２７８Ｉ、Ｎ２７８Ｌ、Ｎ２７８Ｍ、Ｎ２７８Ｒ、Ｎ２７８Ｓ、Ｎ２７８Ｔ、Ｎ２７８Ｖ、Ｎ２７８Ｙ、Ｑ２７９Ｃ、Ｑ２７９Ｖ、Ｑ２７９Ｙ、Ｔ２８２Ｃ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｓ、Ｑ３０１Ｇ、Ｑ３０１Ｋ、Ｄ３０２Ａ、Ｄ３０２Ｃ、Ｄ３０２Ｆ、Ｄ３０２Ｇ、Ｑ３０３Ａ、Ｑ３０３Ｃ、Ｑ３０３Ｄ、Ｑ３０３Ｐ、Ｙ３０６Ｋ、Ｙ３０６Ｑ、Ｙ３０６Ｒ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｗ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｃ、Ｑ３１６Ｐ、Ｑ３１６Ｓ、Ｑ３１６Ｔ、Ｑ３１６Ｙ、Ｋ３２０Ｃ、Ｋ３２０Ｎ、Ｋ３２０Ｓ、Ｋ３２０Ｔ、Ｋ３２０Ｙ、Ｒ３２４Ｃ、Ｒ３２４Ｙ、Ｒ３２８Ｍ、Ｒ３２８Ｓ、Ｄ３２９Ａ、Ｄ３２９Ｇ、Ｄ３２９Ｎ、Ｄ３２９Ｓ、Ｌ３３４Ａ、Ｌ３３４Ｃ、Ｌ３３４Ｆ、Ｌ３３４Ｍ、Ｌ３３４Ｔ、Ｌ３３４Ｖ、Ｋ３３５Ｄ、Ｋ３３５Ｒ、Ｋ３３５Ｖ、Ｋ３３５Ｗ、Ｎ３３６Ｒ、Ｄ３３７Ｔ、Ｄ３３７Ｖ、Ａ３３８Ｃ、Ａ３３８Ｄ、Ａ３３８Ｇ、Ａ３３８Ｉ、Ａ３３８Ｖ、Ａ３３８Ｗ、Ｎ３３９Ｅ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４４Ｆ、Ｋ３４４Ｉ、Ｋ３４４Ｌ、Ｋ３４４Ｐ、Ｋ３４４Ｑ、Ｋ３４４Ｖ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｄ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｆ、Ｋ３４５Ｇ、Ｋ３４５Ｈ、Ｋ３４５Ｓ、Ｋ３４５Ｔ、Ｋ３４５Ｖ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｄ、Ａ３４７Ｙ、Ｈ３６１Ａ、Ｈ３６１Ｃ、Ｈ３６１Ｅ、Ｈ３６１Ｇ、Ｈ３６１Ｌ、Ｈ３６１Ｍ、Ｈ３６１Ｔ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｅ、Ｒ３６３Ｋ、Ｒ３６３Ｌ、Ｒ３６３Ｍ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｗ、Ｒ３６３Ｙ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｆ、Ｎ３６９Ｍ、Ｎ３６９Ｓ、Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｖ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｋ３７１Ｔ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ３７２Ｃ、Ｇ３７２Ｄ、Ｇ３７２Ｋ、Ｇ３７２Ｍ、Ｇ３７２Ｎ、Ｇ３７２Ｖ、Ｇ３７２Ｗ、Ｇ３７２Ｙ、Ｄ３７４Ｃ、Ｄ３７４Ｆ、Ｄ３７４Ｇ、Ｄ３７４Ｌ、Ｄ３７４Ｍ、Ｄ３７４Ｑ、Ｄ３７４Ｓ、Ｄ３７４Ｖ、Ｄ３７５Ｃ、Ｄ３７５Ｅ、Ｄ３７５Ｖ、Ｄ３７５Ｗ、Ｍ３８０Ｎ、Ｙ３９６Ｃ、Ｙ３９６Ｇ、Ｙ３９６Ｋ、Ｄ３９７Ａ、Ｄ３９７Ｃ、Ｄ３９７Ｅ、Ｄ３９７Ｆ、Ｄ３９７Ｈ、Ｄ３９７Ｉ、Ｄ３９７Ｋ、Ｄ３９７Ｌ、Ｄ３９７Ｍ、Ｄ３９７Ｎ、Ｄ３９７Ｐ、Ｄ３９７Ｑ、Ｄ３９７Ｒ、Ｄ３９７Ｓ、Ｄ３９７Ｔ、Ｄ３９７Ｖ、Ｄ３９７Ｙ、Ａ３９８Ｃ、Ａ３９８Ｄ、Ａ３９８Ｅ、Ａ３９８Ｆ、Ａ３９８Ｉ、Ａ３９８Ｋ、Ａ３９８Ｎ、Ａ３９８Ｐ、Ａ３９８Ｑ、Ａ３９８Ｒ、Ａ３９８Ｓ、Ａ３９８Ｔ、Ａ３９８Ｖ、Ａ３９８Ｗ、Ａ３９８Ｙ、Ｉ３９９Ａ、Ｉ３９９Ｃ、Ｉ３９９Ｄ、Ｉ３９９Ｅ、Ｉ３９９Ｆ、Ｉ３９９Ｑ、Ｉ３９９Ｓ、Ｉ３９９Ｔ、Ｉ３９９Ｖ、Ｉ３９９Ｙ、Ｒ４０２Ａ、Ｒ４０２Ｆ、Ｒ４０２Ｇ、Ｒ４０２Ｌ、Ｒ４０２Ｓ、Ｒ４０２Ｗ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｆ、Ｔ４１１Ｇ、Ｔ４１１Ｈ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｌ、Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｓ、Ｔ４１１Ｖ、Ｓ４２０Ｃ、Ｓ４２０Ｇ、Ｓ４２０Ｎ、Ｓ４２０Ｑ、Ｓ４２０Ｔ、Ｓ４２０Ｖ、Ｓ４２０Ｙ、Ｒ４２６Ａ、Ｒ４２６Ｆ、Ｒ４２６Ｎ、Ｒ４２６Ｑ、Ｒ４２６Ｔ、Ｒ４２６Ｗ、Ｇ４２７Ｃ、Ｇ４２７Ｆ、Ｇ４２７Ｙ、Ｋ４２８Ａ、Ｔ４４５Ａ、Ｔ４４５Ｃ、Ｔ４４５Ｅ、Ｔ４４５Ｆ、Ｔ４４５Ｇ、Ｔ４４５Ｉ、Ｔ４４５Ｋ、Ｔ４４５Ｌ、Ｔ４４５Ｍ、Ｔ４４５Ｎ、Ｔ４４５Ｐ、Ｔ４４５Ｑ、Ｔ４４５Ｒ、Ｔ４４５Ｓ、Ｔ４４５Ｖ、Ｔ４４５Ｙ、Ｖ４４６Ｋ、Ｖ４４６Ｑ、Ｖ４４６Ｒ、Ｇ４４８Ａ、Ｇ４４８Ｃ、Ｇ４４８Ｄ、Ｇ４４８Ｅ、Ｇ４４８Ｆ、Ｎ４４９Ａ、Ｎ４４９Ｃ、Ｎ４４９Ｇ、Ｎ４４９Ｈ、Ｎ４４９Ｋ、Ｎ４４９Ｐ、Ｎ４５４Ｆ、Ｎ４５５Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、Ｎ４５５Ｓ、Ｎ４５５Ｗ、Ｈ４６０Ａ、Ｈ４６０Ｃ、Ｈ４６０Ｄ、Ｈ４６０Ｅ、Ｈ４６０Ｆ、Ｈ４６０Ｇ、Ｈ４６０Ｉ、Ｈ４６０Ｋ、Ｈ４６０Ｌ、Ｈ４６０Ｍ、Ｈ４６０Ｑ、Ｈ４６０Ｒ、Ｈ４６０Ｓ、Ｈ４６０Ｗ、Ｈ４６０Ｙ、Ｓ４７４Ｃ、Ｓ４７４Ｄ、Ｓ４７４Ｆ、Ｓ４７４Ｇ、Ｓ４７４Ｉ、Ｓ４７４Ｋ、Ｓ４７４Ｌ、Ｓ４７４Ｍ、Ｓ４７４Ｎ、Ｓ４７４Ｐ、Ｓ４７４Ｒ、Ｓ４７４Ｔ、Ｓ４７４Ｖ、Ｎ４７５Ｉ、Ｎ４７５Ｋ、Ｎ４７５Ｌ、Ｎ４７５Ｍ、Ｎ４７５Ｐ、Ｎ４７５Ｑ、Ｎ４７５Ｒ、Ｎ４７５Ｓ、Ｎ４７５Ｔ、Ｎ４７５Ｖ、Ｎ４７５Ｗ、Ｎ４７５Ｙ、Ｑ４９０Ｃ、Ｑ４９０Ｌ、Ｑ４９０Ｖ、Ｑ４９０Ｗ、Ｑ４９０Ｙ、Ｌ４９２Ａ、Ｌ４９２Ｄ、Ｌ４９２Ｈ、Ｌ４９２Ｉ、Ｌ４９２Ｎ、Ｌ４９２Ｑ、Ｌ４９２Ｔ、Ｌ４９２Ｙ、Ｑ４９６Ｓ、Ｑ４９６Ｗ、Ｖ４９７Ｔ、Ｋ４９８Ｃ、Ｋ４９８Ｅ、Ｋ４９８Ｆ、Ｋ４９８Ｇ、Ｋ４９８Ｉ、Ｄ５２１Ｃ、Ｄ５２１Ｗ、Ｄ５２１Ｙ、Ｖ５２２Ａ、Ｖ５２２Ｃ、Ｖ５２２Ｆ、Ｖ５２２Ｇ、Ｖ５２２Ｋ、Ｖ５２２Ｌ、Ｖ５２２Ｍ、Ｖ５２２Ｎ、Ｖ５２２Ｐ、Ｖ５２２Ｑ、Ｖ５２２Ｒ、Ｖ５２２Ｓ、Ｖ５２２Ｔ、Ｖ５２２Ｗ、Ｖ５２２Ｙ、Ｋ５３４Ｃ、Ｋ５３４Ｄ、Ｋ５３４Ｅ、Ｋ５３４Ｆ、Ｋ５３４Ｇ、Ｋ５３４Ｖ、Ｒ５４２Ａ、Ｒ５４２Ｄ、Ｒ５４２Ｉ、Ｒ５４２Ｌ、Ｒ５４２Ｎ、Ｒ５４２Ｔ、Ｒ５４２Ｗ、Ｇ５４７Ａ、Ｓ５４８Ｃ、Ｓ５４８Ｅ、Ｓ５４８Ｆ、Ｓ５４８Ｌ、Ｓ５４８Ｎ、Ｓ５４８Ｑ、Ｓ５４８Ｔ、Ｓ５４８Ｗ、Ｇ５５４Ａ、Ｇ５５４Ｃ、Ｇ５５４Ｄ、Ｇ５５４Ｆ、Ｇ５５４Ｈ、Ｇ５５４Ｌ、Ｇ５５４Ｍ、Ｇ５５４Ｑ、Ｇ５５４Ｗ、Ｌ５５５Ｃ、Ｌ５５５Ｅ、Ｌ５５５Ｇ、Ｌ５５５Ｈ、Ｌ５５５Ｋ、Ｌ５５５Ｍ、Ｌ５５５Ｐ、Ｌ５５５Ｑ、Ｋ５６０Ｐ、Ｈ５６１Ｉ、Ｈ５６１Ｍ、Ｈ５６１Ｎ、Ｈ５６１Ｑ、Ｈ５６１Ｓ、Ｈ５６１Ｖ、Ｈ５６１Ｗ、Ｄ５６３Ａ、Ｄ５６３Ｉ、Ｄ５６３Ｌ、Ｄ５６３Ｑ、Ｄ５６３Ｒ、Ｄ５６３Ｓ、Ｄ５６３Ｔ、Ｄ５６３Ｖ、Ｄ５６３Ｗ、Ｄ５６３Ｙ、Ｄ５６４Ａ、Ｄ５６４Ｃ、Ｄ５６４Ｆ、Ｄ５６４Ｇ、Ｄ５６４Ｋ、Ｄ５６４Ｌ、Ｄ５６４Ｍ、Ｄ５６４Ｎ、Ｄ５６４Ｒ、Ｄ５６４Ｔ、Ｄ５６４Ｖ、Ｄ５６４Ｙ、Ｒ５７０Ａ、Ｒ５７０Ｃ、Ｒ５７０Ｄ、Ｒ５７０Ｅ、Ｒ５７０Ｉ、Ｒ５７０Ｍ、Ｒ５７０Ｑ、Ｒ５７０Ｔ、Ｒ５７０Ｖ、Ｙ５７１Ｈ、Ｙ５７１Ｍ、Ｙ５７１Ｎ、Ｙ５７１Ｒ、Ｋ５８１Ａ、Ｋ５８１Ｃ、Ｋ５８１Ｄ、Ｋ５８１Ｅ、Ｋ５８１Ｆ、Ｋ５８１Ｇ、Ｋ５８１Ｍ、Ｋ５８１Ｗ、Ｎ５８３Ａ、Ｎ５８３Ｃ、Ｎ５８３Ｄ、Ｎ５８３Ｇ、Ｎ５８３Ｖ、Ｒ５８６Ｄ、Ｒ５８６Ｆ、Ｒ５８６Ｎ、Ｒ５８６Ｐ、Ｒ５８６Ｖ、Ｒ５８６Ｗ、Ｒ５８６Ｙ、Ｖ６０３Ｃ、Ｖ６０３Ｅ、Ｖ６０３Ｇ、Ｖ６０３Ｈ、Ｖ６０３Ｙ、Ｆ６１１Ａ、Ｆ６１１Ｃ、Ｆ６１１Ｄ、Ｆ６１１Ｋ、Ｆ６１１Ｍ、Ｆ６１１Ｒ、Ｆ６１１Ｗ、Ｑ６１２Ｃ、Ｑ６１２Ｄ、Ｑ６１２Ｇ、Ｑ６１２Ｓ、Ａ６２２Ｅ、Ａ６２２Ｈ、Ｑ６２６Ｅ、Ｑ６２６Ｆ、Ｑ６２６Ｈ、Ｔ６３８Ａ、Ｔ６３８Ｄ、Ｔ６３８Ｇ、Ｔ６３８Ｍ、Ｔ６３８Ｑ、Ｔ６３８Ｒ、Ｔ６３８Ｓ、Ｔ６３８Ｖ、Ｔ６３８Ｗ、Ｔ６３８Ｙ、Ｓ６４２Ｃ、Ｓ６４２Ｅ、Ｓ６４２Ｆ、Ｓ６４２Ｇ、Ｓ６４２Ｈ、Ｓ６４２Ｉ、Ｓ６４２Ｌ、Ｓ６４２Ｍ、Ｓ６４２Ｐ、Ｓ６４２Ｑ、Ｓ６４２Ｔ、Ｓ６４２Ｖ、Ｓ６４２Ｗ、Ｓ６４２Ｙ、Ａ６４３Ｅ、Ａ６４３Ｆ、Ａ６４３Ｈ、Ａ６４３Ｋ、Ａ６４３Ｌ、Ａ６４３Ｍ、Ａ６４３Ｎ、Ａ６４３Ｔ、Ａ６４３Ｖ、Ａ６４３Ｙ、Ｒ６４５Ｇ、Ｒ６４５Ｋ、Ｒ６４５Ｍ、Ｒ６４５Ｗ、Ｒ６４５Ｙ、Ｋ６４９Ｃ、Ｋ６４９Ｎ、Ｋ６４９Ｓ、Ｑ６５０Ｃ、Ｑ６５０Ｄ、Ｑ６５０Ｔ、Ｑ６５０Ｖ、Ｑ６５０Ｙ、Ｔ６６０Ｃ、Ｔ６６０Ｆ、Ｔ６６０Ｎ、Ｔ６６０Ｓ、Ｔ６６０Ｗ、Ｔ６６０Ｙ、Ｐ６６１Ｃ、Ｐ６６１Ｄ、Ｐ６６１Ｅ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｈ、Ｐ６６１Ｉ、Ｐ６６１Ｋ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｍ、Ｐ６６１Ｑ、Ｐ６６１Ｒ、Ｐ６６１Ｓ、Ｐ６６１Ｔ、Ｐ６６１Ｖ、Ｐ６６１Ｗ、Ｇ６６２Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｇ６６２Ｉ、Ｑ６６３Ｄ、Ｑ６６３Ｅ、Ｑ６６３Ｇ、Ｑ６６３Ｉ、Ｔ６６６Ｃ、Ｔ６６６Ｎ、Ｒ６７２Ｃ、Ｒ６７２Ｄ、Ｒ６７２Ｅ、Ｒ６７２Ｆ、Ｒ６７２Ｇ、Ｒ６７２Ｈ、Ｒ６７２Ｉ、Ｒ６７２Ｋ、Ｒ６７２Ｌ、Ｒ６７２Ｍ、Ｒ６７２Ｎ、Ｒ６７２Ｔ、Ｒ６７２Ｖ、Ｒ６７２Ｗ、Ｒ６７３Ａ、Ｒ６７３Ｃ、Ｒ６７３Ｅ、Ｒ６７３Ｇ、Ｒ６７３Ｈ、Ｒ６７３Ｉ、Ｒ６７３Ｋ、Ｒ６７３Ｌ、Ｒ６７３Ｍ、Ｒ６７３Ｎ、Ｒ６７３Ｓ、Ｒ６７３Ｖ、Ｒ６７４Ｔ、Ｒ６７４Ｙ、Ｄ６８０Ａ、Ｄ６８０Ｃ、Ｄ６８０Ｅ、Ｄ６８０Ｆ、Ｄ６８０Ｈ、Ｄ６８０Ｉ、Ｄ６８０Ｍ、Ｄ６８０Ｑ、Ｄ６８０Ｒ、Ｄ６８０Ｖ、Ｄ６８０Ｗ、Ｄ６８０Ｙ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｈ、Ｔ６８１Ｋ、Ｔ６８１Ｌ、Ｔ６８１Ｍ、Ｔ６８１Ｐ、Ｔ６８１Ｑ、Ｔ６８１Ｓ、Ｔ６８１Ｖ、Ｔ６８１Ｗ、Ｔ６８１Ｙ、Ｓ６８３Ｃ、Ｓ６８３Ｄ、Ｓ６８３Ｅ、Ｓ６８３Ｆ、Ｓ６８３Ｇ、Ｓ６８３Ｉ、Ｓ６８３Ｍ、Ｓ６８３Ｐ、Ｓ６８３Ｑ、Ｓ６８３Ｖ、Ｓ６８３Ｗ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｑ６８４Ｎ、Ｋ６８５Ａ、Ｋ６８５Ｅ、Ｋ６８５Ｇ、Ｋ６８５Ｉ、Ｋ６８５Ｌ、Ｋ６８５Ｍ、Ｋ６８５Ｎ、Ｋ６８５Ｑ、Ｋ６８５Ｓ、Ｋ６８５Ｔ、Ｋ６８５Ｖ、Ｋ６８５Ｗ、Ｋ６８５Ｙ、Ｓ６９２Ｃ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｉ、Ｓ６９２Ｌ、Ｓ６９２Ｍ、Ｓ６９２Ｗ、Ｒ７０２Ｃ、Ｒ７０２Ｄ、Ｒ７０２Ｆ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０２Ｈ、Ｒ７０２Ｉ、Ｒ
７０２Ｋ、Ｒ７０２Ｌ、Ｒ７０２Ｎ、Ｒ７０２Ｑ、Ｒ７０２Ｓ、Ｒ７０２Ｔ、Ｒ７０２Ｖ、Ｒ７０２Ｗ、Ｒ７０５Ｉ、及びＲ７０５Ｖからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体はｐＨ ５でのセロビオース加水分解活性が改良されている（ＰＩは１超である）。
同様に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｆ、Ｋ０２２Ｈ、Ｋ０２２Ｐ、Ｋ０２２Ｑ、Ｋ０２２Ｒ、Ｎ０２４Ｃ、Ｎ０２４Ｑ、Ｌ０２５Ａ、Ｌ０２５Ｄ、Ｌ０２５Ｎ、Ｑ０２６Ｃ、Ｑ０２６Ｈ、Ｑ０２６Ｉ、Ｑ０２６Ｋ、Ｑ０２６Ｌ、Ｑ０２６Ｐ、Ｑ０２６Ｒ、Ｑ０２６Ｓ、Ｑ０２６Ｔ、Ｑ０２６Ｗ、Ｄ０２７Ｃ、Ｋ０２８Ｓ、Ｋ０２８Ｖ、Ｓ０３３Ｃ、Ｓ０３３Ｇ、Ｖ０３５Ｃ、Ｖ０３５Ｅ、Ｖ０３５Ｇ、Ｖ０３５Ｈ、Ｖ０３５Ｋ、Ｖ０３５Ｌ、Ｖ０３５Ｎ、Ｖ０３５Ｑ、Ｖ０３５Ｒ、Ｖ０３５Ｓ、Ｖ０３５Ｔ、Ｖ０３５Ｙ、Ｇ０３６Ｃ、Ｇ０３６Ｄ、Ｇ０３６Ｅ、Ｇ０３６Ｆ、Ｇ０３６Ｉ、Ｇ０３６Ｋ、Ｇ０３６Ｎ、Ｇ０３６Ｒ、Ｇ０３６Ｓ、Ｇ０３６Ｗ、Ｇ０３６Ｙ、Ｋ０５１Ｃ、Ｋ０５１Ｄ、Ｋ０５１Ｇ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｉ、Ｋ０５１Ｌ、Ｋ０５１Ｍ、Ｋ０５１Ｎ、Ｋ０５１Ｒ、Ｋ０５１Ｔ、Ｋ０５１Ｖ、Ｉ０５２Ｄ、Ｉ０５２Ｋ、Ｉ０５２Ｍ、Ｉ０５２Ｎ、Ｉ０５２Ｐ、Ｉ０５２Ｑ、Ｉ０５２Ｔ、Ｉ０５２Ｖ、Ｒ０９１Ｃ、Ｒ０９１Ｑ、Ｒ０９１Ｗ、Ｅ０９２Ｃ、Ｅ０９２Ｋ、Ｅ０９９Ｙ、Ｅ１００Ａ、Ｅ１００Ｇ、Ｅ１００Ｉ、Ｅ１００Ｍ、Ｅ１００Ｎ、Ｅ１００Ｑ、Ｅ１００Ｓ、Ｅ１００Ｔ、Ｅ１００Ｙ、Ｑ１６５Ｃ、Ｑ１６５Ｇ、Ｑ１６５Ｉ、Ｑ１６５Ｋ、Ｑ１６５Ｍ、Ｑ１６５Ｎ、Ｑ１６５Ｓ、Ｑ１６５Ｖ、Ｅ１６６Ｄ、Ｌ１６７Ｃ、Ｌ１６７Ｖ、Ｌ１６７Ｗ、Ｌ１６７Ｙ、Ｎ１６８Ａ、Ｎ１６８Ｄ、Ｎ１６８Ｅ、Ｎ１６８Ｇ、Ｎ１６８Ｙ、Ｅ１７０Ｆ、Ｅ１７０Ｙ、Ｐ１７６Ｆ、Ｐ１７６Ｈ、Ｐ１７６Ｋ、Ｐ１７６Ｌ、Ｐ１７６Ｒ、Ｐ１７６Ｖ、Ｐ１７６Ｗ、Ｐ１７６Ｙ、Ｄ１７７Ｅ、Ｄ１７７Ｆ、Ｄ１７７Ｈ、Ｄ１７７Ｌ、Ｄ１７７Ｍ、Ｄ１７７Ｑ、Ｄ１７７Ｒ、Ｄ１７７Ｖ、Ｄ１７７Ｗ、Ｄ１７７Ｙ、Ｄ１７８Ｙ、Ｒ１７９Ｍ、Ｒ１７９Ｓ、Ｒ１７９Ｔ、Ｒ１７９Ｗ、Ｑ１９４Ｌ、Ｎ１９６Ｌ、Ｎ１９６Ｔ、Ｎ２０８Ｋ、Ｔ２０９Ｃ、Ｔ２０９Ｄ、Ｔ２０９Ｅ、Ｔ２０９Ｇ、Ｔ２０９Ｈ、Ｔ２０９Ｉ、Ｔ２０９Ｋ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｍ、Ｔ２０９Ｑ、Ｔ２０９Ｓ、Ｔ２０９Ｖ、Ｔ２０９Ｙ、Ｅ２１４Ａ、Ｅ２１４Ｄ、Ｅ２１４Ｇ、Ｅ２１４Ｒ、Ｅ２１４Ｓ、Ｅ２１４Ｗ、Ｄ２１５Ｅ、Ｄ２１５Ｈ、Ｄ２１５Ｌ、Ｄ２１５Ｎ、Ｄ２１５Ｓ、Ｄ２１５Ｗ、Ｑ２１６Ａ、Ｑ２１６Ｄ、Ｑ２１６Ｆ、Ｑ２１６Ｇ、Ｑ２１６Ｈ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｋ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２１６Ｍ、Ｑ２１６Ｎ、Ｑ２１６Ｓ、Ｑ２１６Ｔ、Ｑ２１６Ｗ、Ｑ２１６Ｙ、Ｋ２２４Ｈ、Ｋ２２４Ｒ、Ｋ２２４Ｖ、Ｄ２２５Ｅ、Ｄ２２５Ｆ、Ｄ２２５Ｇ、Ｄ２２５Ｈ、Ｄ２２５Ｉ、Ｄ２２５Ｌ、Ｄ２２５Ｍ、Ｄ２２５Ｔ、Ｄ２２５Ｖ、Ｄ２２５Ｗ、Ｄ２２５Ｙ、Ｑ２２６Ａ、Ｑ２２６Ｃ、Ｑ２２６Ｄ、Ｑ２２６Ｆ、Ｑ２２６Ｉ、Ｑ２２６Ｌ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２３８Ａ、Ｎ２３８Ｃ、Ｎ２３８Ｅ、Ｔ２４２Ｃ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ２４２Ｑ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４８Ｇ、Ｎ２４８Ｗ、Ｎ２４８Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｇ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６４Ｃ、Ｎ２７６Ａ、Ｎ２７６Ｃ、Ｎ２７６Ｆ、Ｎ２７６Ｍ、Ｎ２７６Ｑ、Ｓ２７７Ｃ、Ｓ２７７Ｗ、Ｓ２７７Ｙ、Ｎ２７８Ｃ、Ｎ２７８Ｆ、Ｎ２７８Ｖ、Ｎ２７８Ｗ、Ｑ２７９Ｃ、Ｑ２７９Ｄ、Ｑ２７９Ｋ、Ｑ２７９Ｖ、Ｑ２７９Ｙ、Ｔ２８２Ｃ、Ｔ２８２Ｄ、Ｔ２８２Ｐ、Ｔ２８２Ｓ、Ｒ２８４Ｈ、Ｒ２８４Ｍ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｓ、Ｑ３０１Ｋ、Ｄ３０２Ａ、Ｄ３０２Ｃ、Ｄ３０２Ｅ、Ｄ３０２Ｆ、Ｄ３０２Ｇ、Ｄ３０２Ｌ、Ｄ３０２Ｍ、Ｄ３０２Ｎ、Ｑ３０３Ｃ、Ｙ３０６Ｋ、Ｙ３０６Ｍ、Ｙ３０６Ｑ、Ｙ３０６Ｒ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｋ、Ｓ３１２Ｗ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｃ、Ｑ３１６Ｄ、Ｑ３１６Ｇ、Ｑ３１６Ｈ、Ｑ３１６Ｉ、Ｑ３１６Ｋ、Ｑ３１６Ｐ、Ｑ３１６Ｒ、Ｑ３１６Ｓ、Ｑ３１６Ｔ、Ｑ３１６Ｙ、Ｋ３２０Ｃ、Ｋ３２０Ｅ、Ｋ３２０Ｈ、Ｋ３２０Ｌ、Ｋ３２０Ｍ、Ｋ３２０Ｐ、Ｋ３２０Ｑ、Ｋ３２０Ｒ、Ｋ３２０Ｓ、Ｋ３２０Ｔ、Ｒ３２４Ｃ、Ｒ３２４Ｙ、Ｒ３２８Ｃ、Ｒ３２８Ｅ、Ｒ３２８Ｆ、Ｒ３２８Ｇ、Ｒ３２８Ｉ、Ｒ３２８Ｋ、Ｒ３２８Ｌ、Ｒ３２８Ｍ、Ｒ３２８Ｑ、Ｒ３２８Ｓ、Ｒ３２８Ｖ、Ｒ３２８Ｙ、Ｄ３２９Ａ、Ｄ３２９Ｍ、Ｄ３２９Ｓ、Ｄ３２９Ｔ、Ｄ３２９Ｙ、Ｌ３３４Ａ、Ｌ３３４Ｔ、Ｋ３３５Ｎ、Ｋ３３５Ｖ、Ｄ３３７Ａ、Ｄ３３７Ｃ、Ｄ３３７Ｔ、Ｄ３３７Ｖ、Ａ３３８Ｃ、Ａ３３８Ｄ、Ａ３３８Ｆ、Ａ３３８Ｇ、Ａ３３８Ｉ、Ａ３３８Ｐ、Ａ３３８Ｖ、Ａ３３８Ｗ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４４Ｆ、Ｋ３４４Ｉ、Ｋ３４４Ｖ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｆ、Ｋ３４５Ｇ、Ｋ３４５Ｑ、Ｋ３４５Ｓ、Ｋ３４５Ｔ、Ｋ３４５Ｖ、Ｋ３４５Ｗ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ｈ３６１Ｃ、Ｈ３６１Ｇ、Ｈ３６１Ｍ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｅ、Ｒ３６３Ｇ、Ｒ３６３Ｋ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｓ、Ｒ３６３Ｔ、Ｒ３６３Ｗ、Ｒ３６３Ｙ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｆ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｋ３７１Ｔ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ３７２Ｋ、Ｇ３７２Ｍ、Ｇ３７２Ｗ、Ｇ３７２Ｙ、Ｄ３７４Ｃ、Ｄ３７４Ｆ、Ｄ３７４Ｇ、Ｄ３７４Ｉ、Ｄ３７４Ｌ、Ｄ３７４Ｍ、Ｄ３７４Ｑ、Ｄ３７４Ｓ、Ｄ３７４Ｔ、Ｄ３７４Ｖ、Ｄ３７４Ｙ、Ｄ３７５Ｃ、Ｄ３７５Ｅ、Ｄ３７５Ｈ、Ｄ３７５Ｉ、Ｄ３７５Ｒ、Ｄ３７５Ｖ、Ｄ３７５Ｗ、Ｍ３８０Ｉ、Ｍ３８０Ｎ、Ｍ３８０Ｔ、Ｍ３８０Ｖ、Ｍ３８０Ｙ、Ｗ３８２Ｆ、Ｙ３９６Ｃ、Ｙ３９６Ｄ、Ｙ３９６Ｅ、Ｙ３９６Ｆ、Ｙ３９６Ｇ、Ｙ３９６Ｈ、Ｙ３９６Ｉ、Ｙ３９６Ｋ、Ｙ３９６Ｌ、Ｙ３９６Ｍ、Ｙ３９６Ｎ、Ｙ３９６Ｑ、Ｙ３９６Ｒ、Ｙ３９６Ｓ、Ｙ３９６Ｖ、Ｙ３９６Ｗ、Ｄ３９７Ａ、Ｄ３９７Ｃ、Ｄ３９７Ｅ、Ｄ３９７Ｈ、Ｄ３９７Ｉ、Ｄ３９７Ｋ、Ｄ３９７Ｍ、Ｄ３９７Ｎ、Ｄ３９７Ｐ、Ｄ３９７Ｑ、Ｄ３９７Ｒ、Ｄ３９７Ｓ、Ｄ３９７Ｔ、Ｄ３９７Ｖ、Ｄ３９７Ｙ、Ａ３９８Ｋ、Ａ３９８Ｑ、Ａ３９８Ｒ、Ａ３９８Ｗ、Ｉ３９９Ａ、Ｉ３９９Ｃ、Ｉ３９９Ｄ、Ｉ３９９Ｅ、Ｉ３９９Ｇ、Ｉ３９９Ｑ、Ｉ３９９Ｓ、Ｉ３９９Ｔ、Ｉ３９９Ｖ、Ｉ３９９Ｙ、Ｒ４０２Ａ、Ｒ４０２Ｅ、Ｒ４０２Ｇ、Ｒ４０２Ｌ、Ｒ４０２Ｑ、Ｒ４０２Ｓ、Ｒ４０２Ｗ、Ｒ４０２Ｙ、Ｖ４１０Ｃ、Ｖ４１０Ｆ、Ｖ４１０Ｈ、Ｖ４１０Ｉ、Ｖ４１０Ｒ、Ｖ４１０Ｓ、Ｖ４１０Ｗ、Ｖ４１０Ｙ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｆ、Ｔ４１１Ｇ、Ｔ４１１Ｈ、Ｔ４１１Ｉ、Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｓ、Ｔ４１１Ｖ、Ｔ４１１Ｙ、Ｓ４２０Ｃ、Ｓ４２０Ｇ、Ｓ４２０Ｎ、Ｓ４２０Ｑ、Ｓ４２０Ｔ、Ｓ４２０Ｖ、Ｓ４２０Ｙ、Ｒ４２６Ａ、Ｒ４２６Ｌ、Ｒ４２６Ｔ、Ｒ４２６Ｙ、Ｇ４２７Ｃ、Ｇ４２７Ｆ、Ｇ４２７Ｐ、Ｇ４２７Ｖ、Ｋ４２８Ａ、Ｔ４４５Ａ、Ｔ４４５Ｃ、Ｔ４４５Ｆ、Ｔ４４５Ｇ、Ｔ４４５Ｍ、Ｔ４４５Ｎ、Ｔ４４５Ｐ、Ｔ４４５Ｖ、Ｔ４４５Ｙ、Ｖ４４６Ｋ、Ｖ４４６Ｑ、Ｖ４４６Ｒ、Ｅ４４７Ｋ、Ｅ４４７Ｌ、Ｅ４４７Ｓ、Ｅ４４７Ｖ、Ｅ４４７Ｙ、Ｇ４４８Ｃ、Ｇ４４８Ｙ、Ｎ４４９Ｃ、Ｎ４４９Ｈ、Ｎ４４９Ｋ、Ｎ４５４Ｆ、Ｎ４５４Ｖ、Ｎ４５５Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、Ｎ４５５Ｓ、Ｎ４５５Ｖ、Ｎ４５５Ｗ、Ｈ４６０Ａ、Ｈ４６０Ｃ、Ｈ４６０Ｅ、Ｈ４６０Ｆ、Ｈ４６０Ｇ、Ｈ４６０Ｉ、Ｈ４６０Ｋ、Ｈ４６０Ｌ、Ｈ４６０Ｍ、Ｈ４６０Ｎ、Ｈ４６０Ｑ、Ｈ４６０Ｒ、Ｈ４６０Ｓ、Ｈ４６０Ｗ、Ｈ４６０Ｙ、Ｎ４７３Ｗ、Ｓ４７４Ａ、Ｓ４７４Ｃ、Ｓ４７４Ｅ、Ｓ４７４Ｆ、Ｓ４７４Ｋ、Ｓ４７４Ｌ、Ｓ４７４Ｎ、Ｓ４７４Ｐ、Ｓ４７４Ｔ、Ｎ４７５Ｉ、Ｎ４７５Ｍ、Ｎ４７５Ｓ、Ｎ４７５Ｔ、Ｎ４７５Ｗ、Ｎ４７５Ｙ、Ｅ４８９Ｄ、Ｅ４８９Ｎ、Ｑ４９０Ｃ、Ｑ４９０Ｖ、Ｑ４９０Ｗ、Ｑ４９０Ｙ、Ｌ４９２Ａ、Ｌ４９２Ｄ、Ｌ４９２Ｆ、Ｌ４９２Ｈ、Ｌ４９２Ｉ、Ｌ４９２Ｎ、Ｌ４９２Ｒ、Ｌ４９２Ｔ、Ｌ４９２Ｙ、Ｑ４９６Ｗ、Ｋ４９８Ａ、Ｋ４９８Ｅ、Ｋ４９８Ｆ、Ｋ４９８Ｍ、Ｋ４９８Ｖ、Ｄ５２１Ｃ、Ｖ５２２Ａ、Ｖ５２２Ｃ、Ｖ５２２Ｇ、Ｖ５２２Ｋ、Ｖ５２２Ｌ、Ｖ５２２Ｍ、Ｖ５２２Ｑ、Ｖ５２２Ｒ、Ｖ５２２Ｓ、Ｖ５２２Ｔ、Ｖ５２２Ｗ、Ｖ５２２Ｙ、Ｋ５３４Ｃ、Ｋ５３４Ｄ、Ｋ５３４Ｅ、Ｋ５３４Ｒ、Ｋ５３４Ｖ、Ｒ５４２Ａ、Ｒ５４２Ｃ、Ｒ５４２Ｄ、Ｒ５４２Ｅ、Ｒ５４２Ｆ、Ｒ５４２Ｇ、Ｒ５４２Ｈ、Ｒ５４２Ｉ、Ｒ５４２Ｌ、Ｒ５４２Ｍ、Ｒ５４２Ｎ、Ｒ５４２Ｑ、Ｒ５４２Ｓ、Ｒ５４２Ｔ、Ｒ５４２Ｖ、Ｒ５４２Ｗ、Ｒ５４２Ｙ、Ｇ５４７Ａ、Ｇ５４７Ｃ、Ｓ５４８Ｔ、Ｅ５５３Ｉ、Ｅ５５３Ｙ、Ｇ５５４Ｃ、Ｇ５５４Ｄ、Ｇ５５４Ｆ、Ｇ５５４Ｈ、Ｇ５５４Ｑ、Ｇ５５４Ｗ、Ｌ５５５Ｄ、Ｌ５５５Ｅ、Ｌ５５５Ｆ、Ｌ５５５Ｇ、Ｌ５５５Ｈ、Ｌ５５５Ｋ、Ｌ５５５Ｍ、Ｌ５５５Ｐ、Ｌ５５５Ｑ、Ｌ５５５Ｔ、Ｌ５５５Ｖ、Ｌ５５５Ｗ、Ｌ５５５Ｙ、Ｈ５６１Ａ、Ｈ５６１Ｃ、Ｈ５６１Ｄ、Ｈ５６１Ｇ、Ｈ５６１Ｍ、Ｈ５６１Ｓ、Ｈ５６１Ｗ、Ｄ５６３Ａ、Ｄ５６３Ｅ、Ｄ５６３Ｌ、Ｄ５６３Ｍ、Ｄ５６３Ｑ、Ｄ５６３Ｓ、Ｄ５６３Ｔ、Ｄ５６３Ｖ、Ｄ５６３Ｗ、Ｄ５６３Ｙ、Ｄ５６４Ａ、Ｄ５６４Ｃ、Ｄ５６４Ｆ、Ｄ５６４Ｋ、Ｄ５６４Ｌ、Ｄ５６４Ｎ、Ｄ５６４Ｑ、Ｄ５６４Ｒ、Ｄ５６４Ｔ、Ｄ５６４Ｖ、Ｄ５６４Ｙ、Ｒ５７０Ａ、Ｒ５７０Ｃ、Ｒ５７０Ｄ、Ｒ５７０Ｅ、Ｒ５７０Ｍ、Ｒ５７０Ｑ、Ｒ５７０Ｓ、Ｒ５７０Ｔ、Ｒ５７０Ｖ、Ｙ５７１Ｎ、Ｋ５８１Ａ、Ｋ５８１Ｃ、Ｋ５８１Ｄ、Ｋ５８１Ｆ、Ｋ５８１Ｇ、Ｋ５８１Ｉ、Ｋ５８１Ｓ、Ｋ５８１Ｖ、Ｋ５８１Ｗ、Ｋ５８１Ｙ、Ｎ５８３Ａ、Ｎ５８３Ｃ、Ｎ５８３Ｄ、Ｎ５８３Ｅ、Ｎ５８３Ｆ、Ｎ５８３Ｇ、Ｎ５８３Ｈ、Ｎ５８３Ｉ、Ｎ５８３Ｋ、Ｎ５８３Ｌ、Ｎ５８３Ｍ、Ｎ５８３Ｐ、Ｎ５８３Ｒ、Ｎ５８３Ｓ、Ｎ５８３Ｔ、Ｎ５８３Ｖ、Ｎ５８３Ｗ、Ｎ５８３Ｙ、Ｒ５８６Ｄ、Ｒ５８６Ｆ、Ｒ５８６Ｇ、Ｒ５８６Ｌ、Ｒ５８６Ｎ、Ｒ５８６Ｐ、Ｒ５８６Ｖ、Ｒ５８６Ｗ、Ｒ５８６Ｙ、Ｓ５９１Ｄ、Ｖ６０３Ｃ、Ｖ６０３Ｄ、Ｖ６０３Ｆ、Ｖ６０３Ｇ、Ｖ６０３Ｈ、Ｖ６０３Ｍ、Ｖ６０３Ｎ、Ｖ６０３Ｐ、Ｖ６０３Ｑ、Ｖ６０３Ｒ、Ｖ６０３Ｓ、Ｖ６０３Ｔ、Ｖ６０３Ｗ、Ｖ６０３Ｙ、Ｆ６１１Ａ、Ｆ６１１Ｃ、Ｆ６１１Ｋ、Ｆ６１１Ｒ、Ｆ６１１Ｖ、Ｆ６１１Ｗ、Ｆ６１１Ｙ、Ｑ６１２Ｃ、Ｑ６１２Ｄ、Ｑ６１２Ｇ、Ｑ６１２Ｈ、Ｑ６１２Ｓ、Ａ６２２Ｄ、Ａ６２２Ｇ、Ａ６２２Ｈ、Ａ６２２Ｉ、Ａ６２２Ｋ、Ａ６２２Ｌ、Ａ６２２Ｍ、Ａ６２２Ｐ、Ａ６２２Ｓ、Ａ６２２Ｔ、Ａ６２２Ｖ、Ａ６２２Ｙ、Ｑ６２６Ｇ、Ｑ６２６Ｈ、Ｑ６２６Ｌ、Ｑ６２６Ｔ、Ｑ６２６Ｖ、Ｔ６３８Ａ、Ｔ６３８Ｄ、Ｔ６３８Ｇ、Ｔ６３８Ｍ、Ｔ６３８Ｑ、Ｔ６３８Ｒ、Ｔ６３８Ｓ、Ｔ６３８Ｖ、Ｔ６３８Ｗ、Ｔ６３８Ｙ、Ｓ６４２Ｃ、Ｓ６４２Ｅ、Ｓ６４２Ｆ、Ｓ６４２Ｈ、Ｓ６４２Ｌ、Ｓ６４２Ｐ、Ｓ６４２Ｑ、Ｓ６４２Ｔ、Ｓ６４２Ｗ、Ｓ６４２Ｙ、Ａ６４３Ｈ、Ａ６４３Ｋ、Ａ６４３Ｌ、Ａ６４３Ｑ、Ａ６４３Ｔ、Ａ６４３Ｖ、Ａ６４３Ｗ、Ａ６４３Ｙ、Ｒ６４５Ａ、Ｒ６４５Ｄ、Ｒ６４５Ｆ、Ｒ６４５Ｇ、Ｒ６４５Ｉ、Ｒ６４５Ｋ、Ｒ６４５Ｌ、Ｒ６４５Ｍ、Ｒ６４５Ｔ、Ｒ６４５Ｖ、Ｒ６４５Ｗ、Ｒ６４５Ｙ、Ｋ６４９Ｔ、Ｑ６５０Ｅ、Ｑ６５０Ｇ、Ｑ６５０Ｈ、Ｑ６５０Ｉ、Ｑ６５０Ｋ、Ｑ６５０Ｌ、Ｑ６５０Ｎ、Ｑ６５０Ｒ、Ｑ６５０Ｔ、Ｑ６５０Ｙ、Ｔ６６０Ｃ、Ｔ６６０Ｄ、Ｔ６６０Ｎ、Ｔ６６０Ｓ、Ｔ６６０Ｗ、Ｔ６６０Ｙ、Ｐ６６１Ａ、Ｐ６６１Ｃ、Ｐ６６１Ｄ、Ｐ６６１Ｅ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｇ、Ｐ６６１Ｈ、Ｐ６６１Ｉ、Ｐ６６１Ｋ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｍ、Ｐ６６１Ｑ、Ｐ６６１Ｒ、Ｐ６６１Ｓ、Ｐ６６１Ｔ、Ｐ６６１Ｖ、Ｐ６６１Ｗ、Ｇ６６２Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｇ６６２Ｉ、Ｑ６６３Ｃ、Ｑ６６３Ｄ、Ｑ６６３Ｅ、Ｑ６６３Ｆ、Ｑ６６３Ｇ、Ｑ６６３Ｈ、Ｑ６６３Ｉ、Ｔ６６６Ｃ、Ｔ６６６Ｎ、Ｔ６６６Ｒ、Ｒ６７２Ｃ、Ｒ６７２Ｄ、Ｒ６７２Ｅ、Ｒ６７２Ｆ、Ｒ６７２Ｇ、Ｒ６７２Ｈ、Ｒ６７２Ｉ、Ｒ６７２Ｋ、Ｒ６７２Ｌ、Ｒ６７２Ｍ、Ｒ６７２Ｎ、Ｒ６７２Ｔ、Ｒ６７２Ｖ、Ｒ６７２Ｗ、Ｒ６７２Ｙ、Ｒ６７３Ｅ、Ｒ６７３Ｇ、Ｒ６７３Ｉ、Ｒ６７３Ｌ、Ｒ６７３Ｍ、Ｒ６７３Ｑ、Ｒ６７３Ｓ、Ｒ６７４Ｔ、Ｒ６７４Ｙ、Ｄ６７５Ｌ、Ｄ６８０Ａ、Ｄ６８０Ｃ、Ｄ６８０Ｅ、Ｄ６８０Ｆ、Ｄ６８０Ｈ、Ｄ６８０Ｉ、Ｄ６８０Ｌ、Ｄ６８０Ｍ、Ｄ６８０Ｑ、Ｄ６８０Ｖ、Ｄ６８０Ｗ、Ｄ６８０Ｙ、Ｔ６８１Ａ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｈ、Ｔ６８１Ｋ
、Ｔ６８１Ｌ、Ｔ６８１Ｍ、Ｔ６８１Ｎ、Ｔ６８１Ｐ、Ｔ６８１Ｑ、Ｔ６８１Ｓ、Ｔ６８１Ｖ、Ｔ６８１Ｗ、Ｓ６８３Ｅ、Ｓ６８３Ｆ、Ｓ６８３Ｉ、Ｓ６８３Ｌ、Ｓ６８３Ｍ、Ｓ６８３Ｐ、Ｓ６８３Ｖ、Ｓ６８３Ｗ、Ｑ６８４Ａ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｋ６８５Ｉ、Ｋ６８５Ｌ、Ｋ６８５Ｍ、Ｋ６８５Ｎ、Ｋ６８５Ｓ、Ｋ６８５Ｔ、Ｋ６８５Ｖ、Ｋ６８５Ｗ、Ｋ６８５Ｙ、Ｓ６９２Ｃ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｉ、Ｓ６９２Ｍ、Ｓ６９２Ｔ、Ｓ６９２Ｖ、Ｓ６９２Ｗ、Ｒ７０２Ｃ、Ｒ７０２Ｄ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０２Ｌ、Ｒ７０２Ｑ、Ｒ７０２Ｓ、Ｒ７０２Ｔ、Ｒ７０２Ｖ、Ｒ７０２Ｗ、Ｒ７０５Ｆ、Ｒ７０５Ｈ、Ｒ７０５Ｉ、Ｒ７０５Ｌ、Ｒ７０５Ｓ、Ｒ７０５Ｔ、Ｒ７０５Ｖ、及びＲ７０５Ｗからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体はｐＨ ６でのセロビオース加水分解活性が改良されている（ＰＩは１超である）。
更に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ａ、Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｆ、Ｋ０２２Ｐ、Ｎ０２４Ａ、Ｎ０２４Ｃ、Ｎ０２４Ｑ、Ｌ０２５Ａ、Ｌ０２５Ｄ、Ｌ０２５Ｓ、Ｑ０２６Ｃ、Ｑ０２６Ｄ、Ｑ０２６Ｅ、Ｑ０２６Ｋ、Ｑ０２６Ｓ、Ｑ０２６Ｔ、Ｑ０２６Ｗ、Ｄ０２７Ａ、Ｄ０２７Ｌ、Ｄ０２７Ｍ、Ｄ０２７Ｑ、Ｄ０２７Ｓ、Ｓ０３３Ｃ、Ｖ０３５Ｃ、Ｖ０３５Ｅ、Ｖ０３５Ｇ、Ｇ０３６Ｄ、Ｇ０３６Ｅ、Ｇ０３６Ｓ、Ｇ０３６Ｙ、Ｓ０５０Ｃ、Ｓ０５０Ｌ、Ｋ０５１Ｃ、Ｋ０５１Ｄ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｔ、Ｉ０５２Ａ、Ｉ０５２Ｄ、Ｉ０５２Ｎ、Ｉ０５２Ｐ、Ｉ０５２Ｖ、Ｒ０９１Ｄ、Ｒ０９１Ｅ、Ｒ０９１Ｆ、Ｒ０９１Ｎ、Ｅ０９２Ａ、Ｅ０９２Ｃ、Ｅ１００Ａ、Ｅ１００Ｇ、Ｅ１００Ｍ、Ｅ１００Ｎ、Ｅ１００Ｓ、Ｅ１００Ｙ、Ｌ１６７Ｃ、Ｌ１６７Ｗ、Ｎ１６８Ｙ、Ｐ１７６Ａ、Ｐ１７６Ｆ、Ｐ１７６Ｋ、Ｐ１７６Ｒ、Ｐ１７６Ｓ、Ｐ１７６Ｖ、Ｐ１７６Ｗ、Ｐ１７６Ｙ、Ｄ１７７Ｅ、Ｄ１７７Ｆ、Ｄ１７７Ｍ、Ｄ１７７Ｎ、Ｄ１７７Ｖ、Ｄ１７７Ｗ、Ｄ１７８Ａ、Ｑ１９４Ａ、Ｑ１９４Ｃ、Ｎ１９６Ｅ、Ｎ１９６Ｌ、Ｔ２０９Ｃ、Ｔ２０９Ｄ、Ｔ２０９Ｅ、Ｔ２０９Ｇ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｓ、Ｔ２０９Ｖ、Ｔ２０９Ｗ、Ｔ２０９Ｙ、Ｅ２１４Ｄ、Ｅ２１４Ｖ、Ｄ２１５Ｃ、Ｄ２１５Ｅ、Ｄ２１５Ｎ、Ｄ２１５Ｓ、Ｑ２１６Ａ、Ｑ２１６Ｇ、Ｑ２１６Ｈ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２１６Ｓ、Ｑ２１６Ｗ、Ｑ２１６Ｙ、Ｄ２２５Ｅ、Ｄ２２５Ｇ、Ｄ２２５Ｈ、Ｄ２２５Ｉ、Ｄ２２５Ｌ、Ｄ２２５Ｔ、Ｄ２２５Ｗ、Ｄ２２５Ｙ、Ｑ２２６Ｃ、Ｑ２２６Ｄ、Ｑ２２６Ｆ、Ｑ２２６Ｎ、Ｑ２２６Ｒ、Ｑ２２６Ｓ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２３８Ａ、Ｔ２４２Ｃ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ２４２Ｌ、Ｔ２４２Ｓ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４８Ｃ、Ｎ２４８Ｗ、Ｎ２６３Ａ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｄ、Ｎ２６３Ｅ、Ｎ２６３Ｇ、Ｎ２６３Ｈ、Ｎ２６３Ｌ、Ｎ２６３Ｑ、Ｎ２６３Ｒ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６４Ｃ、Ｎ２７６Ａ、Ｎ２７６Ｃ、Ｎ２７６Ｆ、Ｎ２７６Ｋ、Ｓ２７７Ｃ、Ｓ２７７Ｗ、Ｎ２７８Ｆ、Ｎ２７８Ｗ、Ｑ２７９Ｃ、Ｔ２８２Ｃ、Ｔ２８２Ｌ、Ｔ２８２Ｐ、Ｒ２８４Ｍ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｋ、Ｄ３０２Ａ、Ｄ３０２Ｃ、Ｄ３０２Ｅ、Ｄ３０２Ｆ、Ｄ３０２Ｇ、Ｑ３０３Ｃ、Ｙ３０６Ｃ、Ｙ３０６Ｇ、Ｙ３０６Ｍ、Ｙ３０６Ｑ、Ｙ３０６Ｖ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｄ、Ｓ３１２Ｗ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｃ、Ｑ３１６Ｐ、Ｑ３１６Ｓ、Ｑ３１６Ｔ、Ｑ３１６Ｙ、Ｋ３２０Ｃ、Ｋ３２０Ｎ、Ｒ３２４Ｃ、Ｒ３２８Ｓ、Ｄ３２９Ａ、Ｄ３２９Ｓ、Ｋ３３５Ｄ、Ｎ３３６Ａ、Ｎ３３６Ｃ、Ｎ３３６Ｈ、Ｄ３３７Ａ、Ｄ３３７Ｃ、Ｄ３３７Ｋ、Ｄ３３７Ｍ、Ｄ３３７Ｔ、Ａ３３８Ｃ、Ａ３３８Ｄ、Ａ３３８Ｅ、Ａ３３８Ｆ、Ａ３３８Ｇ、Ａ３３８Ｋ、Ａ３３８Ｌ、Ａ３３８Ｍ、Ａ３３８Ｐ、Ａ３３８Ｖ、Ａ３３８Ｗ、Ａ３３８Ｙ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４４Ｆ、Ｋ３４４Ｇ、Ｋ３４４Ｌ、Ｋ３４４Ｑ、Ｋ３４４Ｒ、Ｋ３４４Ｖ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｆ、Ｋ３４５Ｓ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ｈ３６１Ｄ、Ｈ３６１Ｇ、Ｒ３６３Ａ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｅ、Ｒ３６３Ｇ、Ｒ３６３Ｋ、Ｒ３６３Ｍ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｔ、Ｒ３６３Ｖ、Ｒ３６３Ｗ、Ｒ３６３Ｙ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｗ、Ｋ３７１Ａ、Ｋ３７１Ｌ、Ｋ３７１Ｔ、Ｇ３７２Ａ、Ｄ３７４Ｃ、Ｄ３７４Ｌ、Ｄ３７４Ｍ、Ｄ３７４Ｓ、Ｄ３７５Ｃ、Ｍ３８０Ｔ、Ｍ３８０Ｖ、Ｇ３８１Ｈ、Ｗ３８２Ｆ、Ｄ３９７Ｃ、Ｄ３９７Ｎ、Ｄ３９７Ｒ、Ｄ３９７Ｔ、Ｄ３９７Ｖ、Ｄ３９７Ｙ、Ａ３９８Ｒ、Ａ３９８Ｗ、Ｉ３９９Ｌ、Ｉ３９９Ｖ、Ｒ４０２Ａ、Ｒ４０２Ｉ、Ｖ４１０Ｆ、Ｖ４１０Ｒ、Ｖ４１０Ｓ、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｈ、Ｔ４１１Ｎ、Ｓ４２０Ｃ、Ｓ４２０Ｄ、Ｓ４２０Ｇ、Ｓ４２０Ｎ、Ｓ４２０Ｔ、Ｓ４２０Ｖ、Ｒ４２６Ａ、Ｇ４２７Ｃ、Ｇ４２７Ｅ、Ｇ４２７Ｆ、Ｇ４２７Ｈ、Ｇ４２７Ｌ、Ｇ４２７Ｙ、Ｔ４４５Ａ、Ｔ４４５Ｃ、Ｔ４４５Ｄ、Ｔ４４５Ｅ、Ｔ４４５Ｆ、Ｔ４４５Ｇ、Ｔ４４５Ｉ、Ｔ４４５Ｍ、Ｔ４４５Ｐ、Ｔ４４５Ｖ、Ｔ４４５Ｙ、Ｖ４４６Ａ、Ｖ４４６Ｃ、Ｇ４４８Ｃ、Ｇ４４８Ｆ、Ｇ４４８Ｈ、Ｎ４４９Ａ、Ｎ４４９Ｃ、Ｎ４５４Ｆ、Ｎ４５５Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、Ｎ４５５Ｗ、Ｈ４６０Ｄ、Ｈ４６０Ｆ、Ｈ４６０Ｇ、Ｈ４６０Ｋ、Ｈ４６０Ｑ、Ｓ４７４Ａ、Ｓ４７４Ｃ、Ｓ４７４Ｅ、Ｓ４７４Ｆ、Ｓ４７４Ｉ、Ｓ４７４Ｍ、Ｓ４７４Ｎ、Ｓ４７４Ｔ、Ｓ４７４Ｖ、Ｓ４７４Ｙ、Ｎ４７５Ｓ、Ｑ４９０Ｃ、Ｑ４９０Ｅ、Ｑ４９０Ｇ、Ｑ４９０Ｈ、Ｑ４９０Ｌ、Ｑ４９０Ｖ、Ｑ４９０Ｗ、Ｑ４９０Ｙ、Ｖ４９７Ｔ、Ｋ４９８Ａ、Ｋ４９８Ｅ、Ｋ４９８Ｍ、Ｄ５２１Ａ、Ｄ５２１Ｓ、Ｄ５２１Ｗ、Ｄ５２１Ｙ、Ｖ５２２Ｃ、Ｖ５２２Ｓ、Ｖ５２２Ｗ、Ｖ５２２Ｙ、Ｋ５３４Ｃ、Ｋ５３４Ｅ、Ｋ５３４Ｆ、Ｋ５３４Ｎ、Ｋ５３４Ｖ、Ｒ５４２Ａ、Ｒ５４２Ｃ、Ｒ５４２Ｄ、Ｒ５４２Ｅ、Ｒ５４２Ｆ、Ｒ５４２Ｇ、Ｒ５４２Ｋ、Ｒ５４２Ｌ、Ｒ５４２Ｍ、Ｒ５４２Ｎ、Ｒ５４２Ｑ、Ｒ５４２Ｔ、Ｒ５４２Ｖ、Ｒ５４２Ｗ、Ｇ５４７Ａ、Ｓ５４８Ｃ、Ｓ５４８Ｅ、Ｓ５４８Ｆ、Ｓ５４８Ｗ、Ｅ５５３Ｎ、Ｇ５５４Ｃ、Ｇ５５４Ｆ、Ｇ５５４Ｑ、Ｇ５５４Ｗ、Ｋ５６０Ｈ、Ｈ５６１Ｆ、Ｈ５６１Ｇ、Ｈ５６１Ｉ、Ｈ５６１Ｍ、Ｈ５６１Ｎ、Ｈ５６１Ｓ、Ｈ５６１Ｔ、Ｈ５６１Ｖ、Ｈ５６１Ｗ、Ｄ５６３Ａ、Ｄ５６３Ｓ、Ｄ５６４Ａ、Ｄ５６４Ｆ、Ｄ５６４Ｓ、Ｄ５６４Ｔ、Ｋ５８１Ａ、Ｋ５８１Ｃ、Ｋ５８１Ｄ、Ｋ５８１Ｆ、Ｋ５８１Ｇ、Ｋ５８１Ｈ、Ｋ５８１Ｐ、Ｋ５８１Ｓ、Ｋ５８１Ｔ、Ｋ５８１Ｖ、Ｋ５８１Ｗ、Ｎ５８３Ａ、Ｎ５８３Ｃ、Ｎ５８３Ｄ、Ｒ５８６Ｄ、Ｒ５８６Ｎ、Ｒ５８６Ｐ、Ｒ５８６Ｖ、Ｒ５８６Ｙ、Ｖ６０３Ａ、Ｖ６０３Ｃ、Ｖ６０３Ｄ、Ｖ６０３Ｅ、Ｖ６０３Ｆ、Ｖ６０３Ｇ、Ｖ６０３Ｈ、Ｖ６０３Ｙ、Ｆ６１１Ａ、Ｑ６１２Ｃ、Ａ６２２Ｄ、Ａ６２２Ｅ、Ａ６２２Ｆ、Ａ６２２Ｇ、Ａ６２２Ｈ、Ａ６２２Ｍ、Ａ６２２Ｎ、Ａ６２２Ｒ、Ａ６２２Ｓ、Ａ６２２Ｔ、Ａ６２２Ｖ、Ｑ６２６Ｅ、Ｑ６２６Ｆ、Ｑ６２６Ｇ、Ｑ６２６Ｈ、Ｑ６２６Ｍ、Ｔ６３８Ａ、Ｔ６３８Ｇ、Ｔ６３８Ｗ、Ｓ６４２Ｆ、Ｓ６４２Ｌ、Ｓ６４２Ｗ、Ａ６４３Ｖ、Ｒ６４５Ｇ、Ｋ６４９Ａ、Ｋ６４９Ｃ、Ｋ６４９Ｓ、Ｑ６５０Ｅ、Ｑ６５０Ｇ、Ｑ６５０Ｈ、Ｑ６５０Ｖ、Ｑ６５０Ｙ、Ｔ６６０Ｗ、Ｐ６６１Ａ、Ｐ６６１Ｃ、Ｐ６６１Ｄ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｉ、Ｐ６６１Ｋ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｍ、Ｐ６６１Ｑ、Ｐ６６１Ｒ、Ｐ６６１Ｓ、Ｐ６６１Ｔ、Ｐ６６１Ｖ、Ｐ６６１Ｗ、Ｇ６６２Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｄ、Ｇ６６２Ｆ、Ｑ６６３Ａ、Ｑ６６３Ｃ、Ｑ６６３Ｄ、Ｑ６６３Ｅ、Ｑ６６３Ｆ、Ｑ６６３Ｇ、Ｑ６６３Ｈ、Ｑ６６３Ｌ、Ｑ６６３Ｎ、Ｑ６６３Ｒ、Ｑ６６３Ｓ、Ｑ６６３Ｖ、Ｔ６６６Ａ、Ｔ６６６Ｃ、Ｔ６６６Ｎ、Ｒ６７２Ｃ、Ｒ６７２Ｋ、Ｒ６７２Ｔ、Ｒ６７３Ａ、Ｒ６７３Ｃ、Ｒ６７３Ｇ、Ｒ６７３Ｈ、Ｒ６７３Ｉ、Ｒ６７３Ｋ、Ｒ６７３Ｌ、Ｒ６７３Ｍ、Ｒ６７３Ｓ、Ｒ６７３Ｔ、Ｒ６７３Ｖ、Ｒ６７３Ｗ、Ｒ６７４Ｍ、Ｒ６７４Ｔ、Ｒ６７４Ｖ、Ｄ６８０Ａ、Ｄ６８０Ｃ、Ｄ６８０Ｍ、Ｄ６８０Ｑ、Ｄ６８０Ｖ、Ｄ６８０Ｗ、Ｄ６８０Ｙ、Ｔ６８１Ａ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｋ、Ｔ６８１Ｌ、Ｔ６８１Ｍ、Ｔ６８１Ｐ、Ｔ６８１Ｑ、Ｔ６８１Ｓ、Ｔ６８１Ｖ、Ｔ６８１Ｗ、Ａ６８２Ｍ、Ｓ６８３Ｅ、Ｓ６８３Ｍ、Ｓ６８３Ｖ、Ｓ６８３Ｗ、Ｑ６８４Ａ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｑ６８４Ｎ、Ｋ６８５Ａ、Ｋ６８５Ｅ、Ｋ６８５Ｉ、Ｋ６８５Ｌ、Ｋ６８５Ｍ、Ｋ６８５Ｓ、Ｋ６８５Ｔ、Ｋ６８５Ｗ、Ｋ６８５Ｙ、Ｓ６９２Ｃ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｉ、Ｓ６９２Ｌ、Ｓ６９２Ｍ、Ｓ６９２Ｐ、Ｓ６９２Ｖ、Ｓ６９２Ｗ、Ｒ７０２Ｃ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０２Ｓ、Ｒ７０５Ｃ、Ｒ７０５Ｉ、Ｒ７０５Ｔ、及びＲ７０５Ｖからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体は、アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸の存在下での、セロビオース加水分解性能が改良されている（ＰＩは１超である）。
同様に、本開示は、置換を含むβ−グルコシダーゼ変異体を提供し、置換は次のもの：Ｋ０２２Ａ、Ｋ０２２Ｅ、Ｋ０２２Ｆ、Ｋ０２２Ｇ、Ｋ０２２Ｈ、Ｋ０２２Ｐ、Ｋ０２２Ｑ、Ｋ０２２Ｒ、Ｋ０２２Ｓ、Ｋ０２２Ｖ、Ｋ０２２Ｗ、Ｋ０２２Ｙ、Ｎ０２４Ａ、Ｎ０２４Ｃ、Ｎ０２４Ｄ、Ｎ０２４Ｅ、Ｎ０２４Ｆ、Ｎ０２４Ｇ、Ｎ０２４Ｌ、Ｎ０２４Ｐ、Ｎ０２４Ｑ、Ｎ０２４Ｒ、Ｎ０２４Ｓ、Ｎ０２４Ｖ、Ｎ０２４Ｙ、Ｌ０２５Ａ、Ｌ０２５Ｄ、Ｌ０２５Ｆ、Ｌ０２５Ｇ、Ｌ０２５Ｉ、Ｌ０２５Ｋ、Ｌ０２５Ｎ、Ｌ０２５Ｑ、Ｌ０２５Ｒ、Ｌ０２５Ｓ、Ｌ０２５Ｔ、Ｌ０２５Ｖ、Ｌ０２５Ｗ、Ｌ０２５Ｙ、Ｑ０２６Ｃ、Ｑ０２６Ｄ、Ｑ０２６Ｅ、Ｑ０２６Ｇ、Ｑ０２６Ｈ、Ｑ０２６Ｉ、Ｑ０２６Ｋ、Ｑ０２６Ｌ、Ｑ０２６Ｐ、Ｑ０２６Ｒ、Ｑ０２６Ｓ、Ｑ０２６Ｔ、Ｑ０２６Ｖ、Ｑ０２６Ｗ、Ｑ０２６Ｙ、Ｄ０２７Ａ、Ｄ０２７Ｃ、Ｄ０２７Ｅ、Ｄ０２７Ｌ、Ｄ０２７Ｍ、Ｄ０２７Ｑ、Ｄ０２７Ｓ、Ｄ０２７Ｔ、Ｄ０２７Ｖ、Ｋ０２８Ｓ、Ｋ０２８Ｖ、Ｓ０３３Ｃ、Ｓ０３３Ｇ、Ｓ０３３Ｔ、Ｖ０３５Ｃ、Ｖ０３５Ｅ、Ｖ０３５Ｇ、Ｖ０３５Ｈ、Ｖ０３５Ｋ、Ｖ０３５Ｌ、Ｖ０３５Ｎ、Ｖ０３５Ｐ、Ｖ０３５Ｑ、Ｖ０３５Ｒ、Ｖ０３５Ｓ、Ｖ０３５Ｔ、Ｖ０３５Ｙ、Ｇ０３６Ｃ、Ｇ０３６Ｄ、Ｇ０３６Ｅ、Ｇ０３６Ｆ、Ｇ０３６Ｉ、Ｇ０３６Ｋ、Ｇ０３６Ｎ、Ｇ０３６Ｒ、Ｇ０３６Ｓ、Ｇ０３６Ｗ、Ｇ０３６Ｙ、Ｗ０３７Ｖ、Ｗ０３７Ｙ、Ｓ０５０Ａ、Ｓ０５０Ｃ、Ｓ０５０Ｆ、Ｓ０５０Ｇ、Ｓ０５０Ｉ、Ｓ０５０Ｌ、Ｓ０５０Ｍ、Ｓ０５０Ｎ、Ｓ０５０Ｐ、Ｓ０５０Ｒ、Ｓ０５０Ｔ、Ｓ０５０Ｖ、Ｋ０５１Ａ、Ｋ０５１Ｃ、Ｋ０５１Ｄ、Ｋ０５１Ｅ、Ｋ０５１Ｇ、Ｋ０５１Ｈ、Ｋ０５１Ｉ、Ｋ０５１Ｌ、Ｋ０５１Ｍ、Ｋ０５１Ｎ、Ｋ０５１Ｑ、Ｋ０５１Ｒ、Ｋ０５１Ｓ、Ｋ０５１Ｔ、Ｋ０５１Ｖ、Ｉ０５２Ａ、Ｉ０５２Ｄ、Ｉ０５２Ｋ、Ｉ０５２Ｍ、Ｉ０５２Ｎ、Ｉ０５２Ｐ、Ｉ０５２Ｑ、Ｉ０５２Ｔ、Ｉ０５２Ｖ、Ｒ０６７Ａ、Ｒ０６７Ｃ、Ｒ０６７Ｄ、Ｒ０６７Ｆ、Ｒ０６７Ｇ、Ｒ０６７Ｎ、Ｒ０６７Ｐ、Ｒ０６７Ｑ、Ｒ０６７Ｓ、Ｒ０６７Ｗ、Ｒ０９１Ａ、Ｒ０９１Ｃ、Ｒ０９１Ｄ、Ｒ０９１Ｅ、Ｒ０９１Ｆ、Ｒ０９１Ｇ、Ｒ０９１Ｈ、Ｒ０９１Ｉ、Ｒ０９１Ｋ、Ｒ０９１Ｌ、Ｒ０９１Ｎ、Ｒ０９１Ｑ、Ｒ０９１Ｔ、Ｒ０９１Ｖ、Ｒ０９１Ｗ、Ｒ０９１Ｙ、Ｅ０９２Ａ、Ｅ０９２Ｃ、Ｅ０９２Ｄ、Ｅ０９２Ｆ、Ｅ０９２Ｈ、Ｅ０９２Ｉ、Ｅ０９２Ｋ、Ｅ０９２Ｌ、Ｅ０９２Ｎ、Ｅ０９２Ｑ、Ｅ０９２Ｒ、Ｅ０９２Ｔ、Ｅ０９２Ｖ、Ｅ０９２Ｙ、Ｒ０９３Ｋ、Ｅ０９９Ａ、Ｅ０９９Ｄ、Ｅ０９９Ｆ、Ｅ０９９Ｉ、Ｅ０９９Ｋ、Ｅ０９９Ｍ、Ｅ０９９Ｎ、Ｅ０９９Ｗ、Ｅ０９９Ｙ、Ｅ１００Ａ、Ｅ１００Ｇ、Ｅ１００Ｉ、Ｅ１００Ｍ、Ｅ１００Ｎ、Ｅ１００Ｑ、Ｅ１００Ｓ、Ｅ１００Ｔ、Ｅ１００Ｙ、Ｋ１５８Ｈ、Ｋ１５８Ｔ、Ｅ１６４Ｇ、Ｅ１６４Ｓ、Ｑ１６５Ｃ、Ｑ１６５Ｆ、Ｑ１６５Ｇ、Ｑ１６５Ｈ、Ｑ１６５Ｉ、Ｑ１６５Ｋ、Ｑ１６５Ｌ、Ｑ１６５Ｍ、Ｑ１６５Ｎ、Ｑ１６５Ｒ、Ｑ１６５Ｓ、Ｑ１６５Ｔ、Ｑ１６５Ｖ、Ｑ１６５Ｗ、Ｑ１６５Ｙ、Ｅ１６６Ｄ、Ｅ１６６Ｋ、Ｅ１６６Ｌ、Ｅ１６６Ｐ、Ｅ１６６Ｑ、Ｅ１６６Ｒ、Ｅ１６６Ｔ、Ｌ１６７Ａ、Ｌ１６７Ｃ、Ｌ１６７Ｄ、Ｌ１６７Ｅ、Ｌ１６７Ｆ、Ｌ１６７Ｇ、Ｌ１６７Ｍ、Ｌ１６７Ｎ、Ｌ１６７Ｑ、Ｌ１６７Ｒ、Ｌ１６７Ｓ、Ｌ１６７Ｖ、Ｌ１６７Ｗ、Ｌ１６７Ｙ、Ｎ１６８Ａ、Ｎ１６８Ｄ、Ｎ１６８Ｅ、Ｎ１６８Ｇ、Ｎ１６８Ｈ、Ｎ１６８Ｑ、Ｎ１６８Ｒ、Ｎ１６８Ｔ、Ｎ１６８Ｙ、Ｅ１７０Ｄ、Ｅ１７０Ｆ、Ｅ１７０Ｙ、Ｐ１７６Ａ、Ｐ１７６Ｄ、Ｐ１７６Ｅ、Ｐ１７６Ｆ、Ｐ１７６Ｇ、Ｐ１７６Ｈ、Ｐ１７６Ｋ、Ｐ１７６Ｌ、Ｐ１７６Ｍ、Ｐ１７６Ｑ、Ｐ１７６Ｒ、Ｐ１７６Ｓ、Ｐ１７６Ｔ、Ｐ１７６Ｖ、Ｐ１７６Ｗ、Ｐ１７６Ｙ、Ｄ１７７Ｅ、Ｄ１７７Ｆ、Ｄ１７７Ｈ、Ｄ１７７Ｋ、Ｄ１７７Ｌ、Ｄ１７７Ｍ、Ｄ１７７Ｎ、Ｄ１７７Ｑ、Ｄ１７７Ｒ、Ｄ１７７Ｖ、Ｄ１７７Ｗ、Ｄ１７７Ｙ、Ｄ１７８Ａ、Ｄ１７８Ｃ、Ｄ１７８Ｋ、Ｄ１７８Ｎ、Ｄ１７８Ｑ、Ｄ１７８Ｒ、Ｄ１７８Ｙ、Ｒ１７９Ａ、Ｒ１７９Ｃ、Ｒ１７９Ｇ、Ｒ１７９Ｉ、Ｒ１７９Ｋ、Ｒ１７９Ｍ、Ｒ１７９Ｑ、Ｒ１７９Ｓ、Ｒ１７９Ｔ、Ｒ１７９Ｖ、Ｒ１７９Ｗ、Ｑ１９４Ａ、Ｑ１９４Ｃ、Ｑ１９４Ｅ、Ｑ１９４Ｆ、Ｑ１９４Ｇ、Ｑ１９４Ｈ、Ｑ１９４Ｋ、Ｑ１９４Ｌ、Ｑ１９４Ｍ、Ｑ１９４Ｒ、Ｑ１９４Ｔ、Ｑ１９４Ｗ、Ｑ１９４Ｙ、Ｎ１９６Ｅ、Ｎ１９６Ｈ、Ｎ１９６Ｌ、Ｎ１９６Ｑ、Ｎ１９６Ｒ、Ｎ１９６Ｔ、Ｓ１９９Ａ、Ｓ１９９Ｇ、Ｓ１９９Ｎ、Ｓ１９９Ｔ、Ｓ１９９Ｖ、Ｙ２０４Ｆ、Ｎ２０８Ｋ、Ｔ２０９Ｃ、Ｔ２０９Ｄ、Ｔ２０９Ｅ、Ｔ２０９Ｇ、Ｔ２０９Ｈ、Ｔ２０９Ｉ、Ｔ２０９Ｋ、Ｔ２０９Ｌ、Ｔ２０９Ｍ、Ｔ２０９Ｑ、Ｔ２０９Ｒ、Ｔ２０９Ｓ、Ｔ２０９Ｖ、Ｔ２０９Ｗ、Ｔ２０９Ｙ、Ｅ２１４Ａ、Ｅ２１４Ｃ、Ｅ２１４Ｄ、Ｅ２１４Ｇ、Ｅ２１４Ｈ、Ｅ２１４Ｌ、Ｅ２１４Ｍ、Ｅ２１４Ｎ、Ｅ２１４Ｑ、Ｅ２１４Ｒ、Ｅ２１４Ｓ、Ｅ２１４Ｔ、Ｅ２１４Ｖ、Ｅ２１４Ｗ、Ｅ２１４Ｙ、Ｄ２１５Ｃ、Ｄ２１５Ｅ、Ｄ２１５Ｇ、Ｄ２１５Ｈ、Ｄ２１５Ｌ、Ｄ２１５Ｍ、Ｄ２１５Ｎ、Ｄ２１５Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｄ２１５Ｗ、Ｑ２１６Ａ、Ｑ２１６Ｃ、Ｑ２１６Ｄ、Ｑ２１６Ｅ、Ｑ２１６Ｆ、Ｑ２１６Ｇ、Ｑ２１６Ｈ、Ｑ２１６Ｉ、Ｑ２１６Ｋ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２１６Ｍ、Ｑ２１６Ｎ、Ｑ２１６Ｐ、Ｑ２１６Ｒ、Ｑ２１６Ｓ、Ｑ２１６Ｔ、Ｑ２１６Ｗ、Ｑ２１６Ｙ、Ｋ２２４Ｈ、Ｋ２２４Ｒ、Ｋ２２４Ｖ、Ｄ２２５Ａ、Ｄ２２５Ｃ、Ｄ２２５Ｅ、Ｄ２２５Ｆ、Ｄ２２５Ｇ、Ｄ２２５Ｈ、Ｄ２２５Ｉ、Ｄ２２５Ｌ、Ｄ２２５Ｍ、Ｄ２２５Ｑ、Ｄ２２５Ｓ、Ｄ２２５Ｔ、Ｄ２２５Ｖ、Ｄ２２５Ｗ、Ｄ２２５Ｙ、Ｑ２２６Ａ、Ｑ２２６Ｃ、Ｑ２２６Ｄ、Ｑ２２６Ｅ、Ｑ２２６Ｆ、Ｑ２２６Ｈ、Ｑ２２６Ｉ、Ｑ２２６Ｋ、Ｑ２２６Ｌ、Ｑ２２６Ｍ、Ｑ２２６Ｎ、Ｑ２２６Ｒ、Ｑ２２６Ｓ、Ｑ２２６Ｔ、Ｑ２２６Ｖ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２３８Ａ、Ｎ２３８Ｃ、Ｎ２３８Ｅ、Ｎ２３８Ｇ、Ｎ２３８Ｍ、Ｎ２３８Ｓ、Ｎ２３８Ｔ、Ｔ２４２Ａ、Ｔ２４２Ｃ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｆ、Ｔ２４２Ｇ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ２４２Ｉ、Ｔ２４２Ｋ、Ｔ２４２Ｌ、Ｔ２４２Ｍ、Ｔ２４２Ｎ、Ｔ２４２Ｑ、Ｔ２４２Ｒ、Ｔ２４２Ｓ、Ｔ２４２Ｖ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４８Ａ、Ｎ２４８Ｃ、Ｎ２４８Ｆ、Ｎ２４８Ｇ、Ｎ２４８Ｔ、Ｎ２４８Ｗ、Ｎ２４８Ｙ、Ｓ２４９Ａ、Ｓ２４９Ｇ、Ｓ２４９Ｍ、Ｓ２４９Ｖ、Ｎ２６３Ａ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｄ、Ｎ２６３Ｅ、Ｎ２６３Ｆ、Ｎ２６３Ｇ、Ｎ２６３Ｈ、Ｎ２６３Ｌ、Ｎ２６３Ｑ、Ｎ２６３Ｒ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ２６３Ｖ、Ｎ２６３Ｙ、Ｎ２６４Ｃ、Ｒ２６５Ａ、Ｒ２６５Ｅ、Ｒ２６５Ｉ、Ｒ２６５Ｋ、Ｒ２６５Ｌ、Ｒ２６５Ｍ、Ｒ２６５Ｎ、Ｒ２６５Ｑ、Ｒ２６５Ｙ、Ｎ２７６Ａ、Ｎ２７６Ｃ、Ｎ２７６Ｆ、Ｎ２７６Ｋ、Ｎ２７６Ｍ、Ｎ２７６Ｑ、Ｓ２７７Ａ、Ｓ２７７Ｃ、Ｓ２７７Ｄ、Ｓ２７７Ｅ、Ｓ２７７Ｆ、Ｓ２７７Ｇ、Ｓ２７７Ｈ、Ｓ２７７Ｉ、Ｓ２７７Ｍ、Ｓ２７７Ｐ、Ｓ２７７Ｑ、Ｓ２７７Ｒ、Ｓ２７７Ｗ、Ｓ２７７Ｙ、Ｎ２７８Ａ、Ｎ２７８Ｃ、Ｎ２７８Ｄ、Ｎ２７８Ｆ、Ｎ２７８Ｇ、Ｎ２７８Ｈ、Ｎ２７８Ｉ、Ｎ２７８Ｌ、Ｎ２７８Ｍ、Ｎ２７８Ｑ、Ｎ２７８Ｒ、Ｎ２７８Ｓ、Ｎ２７８Ｔ、Ｎ２７８Ｖ、Ｎ２７８Ｗ、Ｎ２７８Ｙ、Ｑ２７９Ｃ、Ｑ２７９Ｄ、Ｑ２７９Ｅ、Ｑ２７９Ｇ、Ｑ２７９Ｈ、Ｑ２７９Ｉ、Ｑ２７９Ｋ、Ｑ２７９Ｎ、Ｑ２７９Ｓ、Ｑ２７９Ｔ、Ｑ２７９Ｖ、Ｑ２７９Ｙ、Ｔ２８２Ｃ、Ｔ２８２Ｄ、Ｔ２８２Ｋ、Ｔ２８２Ｌ、Ｔ２８２Ｐ、Ｔ２８２Ｓ、Ｒ２８４Ｈ、Ｒ２８４Ｍ、Ｄ２８７Ｃ、Ｄ２８７Ｅ、Ｄ２８７Ｇ、Ｄ２８７Ｈ、Ｄ２８７Ｉ、Ｄ２８７Ｋ、Ｄ２８７Ｍ、Ｄ２８７Ｎ、Ｄ２８７Ｓ、Ｑ３０１Ａ、Ｑ３０１Ｅ、Ｑ３０１Ｇ、Ｑ３０１Ｋ、Ｑ３０１Ｌ、Ｑ３０１Ｎ、Ｑ３０１Ｒ、Ｑ３０１Ｓ、Ｑ３０１Ｔ、Ｑ３０１Ｖ、Ｄ３０２Ａ、Ｄ３０２Ｃ、Ｄ３０２Ｅ、Ｄ３０２Ｆ、Ｄ３０２Ｇ、Ｄ３０２Ｋ、Ｄ３０２Ｌ、Ｄ３０２Ｍ、Ｄ３０２Ｎ、Ｄ３０２Ｐ、Ｄ３０２Ｓ、Ｄ３０２Ｔ、Ｄ３０２Ｗ、Ｄ３０２Ｙ、Ｑ３０３Ａ、Ｑ３０３Ｃ、Ｑ３０３Ｄ、Ｑ３０３Ｅ、Ｑ３０３Ｈ、Ｑ３０３Ｉ、Ｑ３０３Ｋ、Ｑ３０３Ｌ、Ｑ３０３Ｍ、Ｑ３０３Ｎ、Ｑ３０３Ｐ、Ｑ３０３Ｒ、Ｑ３０３Ｓ、Ｑ３０３Ｔ、Ｑ３０３Ｖ、Ｑ３０３Ｗ、Ｑ３０３Ｙ、Ｙ３０６Ｃ、Ｙ３０６Ｇ、Ｙ３０６Ｉ、Ｙ３０６Ｋ、Ｙ３０６Ｌ、Ｙ３０６Ｍ、Ｙ３０６Ｎ、Ｙ３０６Ｐ、Ｙ３０６Ｑ、Ｙ３０６Ｒ、Ｙ３０６Ｓ、Ｙ３０６Ｔ、Ｙ３０６Ｖ、Ｓ３１２Ｃ、Ｓ３１２Ｄ、Ｓ３１２Ｇ、Ｓ３１２Ｋ、Ｓ３１２Ｎ、Ｓ３１２Ｑ、Ｓ３１２Ｒ、Ｓ３１２Ｔ、Ｓ３１２Ｖ、Ｓ３１２Ｗ、Ｓ３１２Ｙ、Ｒ３１３Ａ、Ｒ３１３Ｃ、Ｒ３１３Ｄ、Ｒ３１３Ｇ、Ｒ３１３Ｋ、Ｒ３１３Ｎ、Ｑ３１６Ｃ、Ｑ３１６Ｄ、Ｑ３１６Ｇ、Ｑ３１６Ｈ、Ｑ３１６Ｉ、Ｑ３１６Ｋ、Ｑ３１６Ｌ、Ｑ３１６Ｍ、Ｑ３１６Ｐ、Ｑ３１６Ｒ、Ｑ３１６Ｓ、Ｑ３１６Ｔ、Ｑ３１６Ｙ、Ｋ３２０Ｃ、Ｋ３２０Ｅ、Ｋ３２０Ｇ、Ｋ３２０Ｈ、Ｋ３２０Ｌ、Ｋ３２０Ｍ、Ｋ３２０Ｎ、Ｋ３２０Ｐ、Ｋ３２０Ｑ、Ｋ３２０Ｒ、Ｋ３２０Ｓ、Ｋ３２０Ｔ、Ｋ３２０Ｙ、Ｒ３２４Ｃ、Ｒ３２４Ｄ、Ｒ３２４Ｅ、Ｒ３２４Ｆ、Ｒ３２４Ｈ、Ｒ３２４Ｉ、Ｒ３２４Ｋ、Ｒ３２４Ｌ、Ｒ３２４Ｍ、Ｒ３２４Ｑ、Ｒ３２４Ｖ、Ｒ３２４Ｗ、Ｒ３２４Ｙ、Ｒ３２８Ｃ、Ｒ３２８Ｅ、Ｒ３２８Ｆ、Ｒ３２８Ｇ、Ｒ３２８Ｉ、Ｒ３２８Ｋ、Ｒ３２８Ｌ、Ｒ３２８Ｍ、Ｒ３２８Ｑ、Ｒ３２８Ｓ、Ｒ３２８Ｔ、Ｒ３２８Ｖ、Ｒ３２８Ｙ、Ｄ３２９Ａ、Ｄ３２９Ｅ、Ｄ３２９Ｇ、Ｄ３２９Ｈ、Ｄ３２９Ｍ、Ｄ３２９Ｎ、Ｄ３２９Ｑ、Ｄ３２９Ｓ、Ｄ３２９Ｔ、Ｄ３２９Ｙ、Ｌ３３４Ａ、Ｌ３３４Ｃ、Ｌ３３４Ｆ、Ｌ３３４Ｍ、Ｌ３３４Ｔ、Ｌ３３４Ｖ、Ｌ３３４Ｗ、Ｋ３３５Ａ、Ｋ３３５Ｄ、Ｋ３３５Ｆ、Ｋ３３５Ｈ、Ｋ３３５Ｉ、Ｋ３３５Ｌ、Ｋ３３５Ｍ、Ｋ３３５Ｎ、Ｋ３３５Ｒ、Ｋ３３５Ｓ、Ｋ３３５Ｔ、Ｋ３３５Ｖ、Ｋ３３５Ｗ、Ｎ３３６Ａ、Ｎ３３６Ｃ、Ｎ３３６Ｇ、Ｎ３３６Ｈ、Ｎ３３６Ｌ、Ｎ３３６Ｍ、Ｎ３３６Ｑ、Ｎ３３６Ｒ、Ｎ３３６Ｔ、Ｎ３３６Ｖ、Ｎ３３６Ｙ、Ｄ３３７Ａ、Ｄ３３７Ｃ、Ｄ３３７Ｅ、Ｄ３３７Ｇ、Ｄ３３７Ｈ、Ｄ３３７Ｋ、Ｄ３３７Ｌ、Ｄ３３７Ｍ、Ｄ３３７Ｎ、Ｄ３３７Ｒ、Ｄ３３７Ｓ、Ｄ３３７Ｔ、Ｄ３３７Ｖ、Ｄ３３７Ｗ、Ｄ３３７Ｙ、Ａ３３８Ｃ、Ａ３３８Ｄ、Ａ３３８Ｅ、Ａ３３８Ｆ、Ａ３３８Ｇ、Ａ３３８Ｈ、Ａ３３８Ｉ、Ａ３３８Ｋ、Ａ３３８Ｌ、Ａ３３８Ｍ、Ａ３３８Ｎ、Ａ３３８Ｐ、Ａ３３８Ｑ、Ａ３３８Ｒ、Ａ３３８Ｖ、Ａ３３８Ｗ、Ａ３３８Ｙ、Ｎ３３９Ｅ、Ｎ３３９Ｇ、Ｎ３３９Ｈ、Ｎ３３９Ｋ、Ｎ３３９Ｌ、Ｋ３４４Ｄ、Ｋ３４４Ｅ、Ｋ３４４Ｆ、Ｋ３４４Ｇ、Ｋ３４４Ｉ、Ｋ３４４Ｌ、Ｋ３４４Ｍ、Ｋ３４４Ｎ、Ｋ３４４Ｐ、Ｋ３４４Ｑ、Ｋ３４４Ｒ、Ｋ３４４Ｓ、Ｋ３４４Ｔ、Ｋ３４４Ｖ、Ｋ３４５Ａ、Ｋ３４５Ｄ、Ｋ３４５Ｅ、Ｋ３４５Ｆ、Ｋ３４５Ｇ、Ｋ３４５Ｈ、Ｋ３４５Ｎ、Ｋ３４５Ｐ、Ｋ３４５Ｑ、Ｋ３４５Ｒ、Ｋ３４５Ｓ、Ｋ３４５Ｔ、Ｋ３４５Ｖ、Ｋ３４５Ｗ、Ｋ３４５Ｙ、Ａ３４７Ｄ、Ａ３４７Ｆ、Ａ３４７Ｈ、Ａ３４７Ｉ、Ａ３４７Ｋ、Ａ３４７Ｌ、Ａ３４７Ｍ、Ａ３４７Ｐ、Ａ３４７Ｑ、Ａ３４７Ｒ、Ａ３４７Ｓ、Ａ３４７Ｙ、Ｈ３６１Ａ、Ｈ３６１Ｃ、Ｈ３６１Ｄ、Ｈ３６１Ｅ、Ｈ３６１Ｇ、Ｈ３６１Ｌ、Ｈ３６１Ｍ、Ｈ３６１Ｎ、Ｈ３６１Ｔ、Ｒ３６３Ａ、Ｒ３６３Ｃ、Ｒ３６３Ｅ、Ｒ３６３Ｇ、Ｒ３６３Ｋ、Ｒ３６３Ｌ、Ｒ３６３Ｍ、Ｒ３６３Ｑ、Ｒ３６３Ｓ、Ｒ３６３Ｔ、Ｒ３６３Ｖ、Ｒ３６３Ｗ、Ｒ３６３Ｙ、Ｎ３６９Ｃ、Ｎ３６９Ｄ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｆ、Ｎ３６９Ｌ、Ｎ３６９Ｍ、Ｎ３６９Ｓ、Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｖ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｄ３７０Ｅ、Ｄ３７０Ｆ、Ｄ３７０Ｇ、Ｄ３７０Ｓ、Ｄ３７０Ｗ、Ｄ３７０Ｙ、Ｋ３７１Ａ、Ｋ３７１Ｆ、Ｋ３７１Ｇ、Ｋ３７１Ｌ、Ｋ３７１Ｎ、Ｋ３７１Ｑ、Ｋ３７１Ｒ、Ｋ３７１Ｓ、Ｋ３７１Ｔ、Ｋ３７１Ｖ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ３７２Ｃ、Ｇ３７２Ｄ、Ｇ３７２Ｅ、Ｇ３７２Ｋ、Ｇ３７２Ｌ、Ｇ３７２Ｍ、Ｇ３７２Ｎ、Ｇ３７２Ｔ、Ｇ３７２Ｖ、Ｇ３７２Ｗ、Ｇ３７２Ｙ、Ｄ３７４Ｃ、Ｄ３７４Ｆ、Ｄ３７４Ｇ、Ｄ３７４Ｉ、Ｄ３７４Ｌ、Ｄ３７４Ｍ、Ｄ３７４Ｎ、Ｄ３７４Ｑ、Ｄ３７４Ｓ、Ｄ３７４Ｔ、Ｄ３７４Ｖ、Ｄ３７４Ｙ、Ｄ３７５Ａ、Ｄ３７５Ｃ
、Ｄ３７５Ｅ、Ｄ３７５Ｈ、Ｄ３７５Ｉ、Ｄ３７５Ｒ、Ｄ３７５Ｖ、Ｄ３７５Ｗ、Ｍ３８０Ｉ、Ｍ３８０Ｌ、Ｍ３８０Ｎ、Ｍ３８０Ｑ、Ｍ３８０Ｓ、Ｍ３８０Ｔ、Ｍ３８０Ｖ、Ｍ３８０Ｙ、Ｇ３８１Ｈ、Ｗ３８２Ｆ、Ｙ３９６Ａ、Ｙ３９６Ｃ、Ｙ３９６Ｄ、Ｙ３９６Ｅ、Ｙ３９６Ｆ、Ｙ３９６Ｇ、Ｙ３９６Ｈ、Ｙ３９６Ｉ、Ｙ３９６Ｋ、Ｙ３９６Ｌ、Ｙ３９６Ｍ、Ｙ３９６Ｎ、Ｙ３９６Ｑ、Ｙ３９６Ｒ、Ｙ３９６Ｓ、Ｙ３９６Ｔ、Ｙ３９６Ｖ、Ｙ３９６Ｗ、Ｄ３９７Ａ、Ｄ３９７Ｃ、Ｄ３９７Ｅ、Ｄ３９７Ｆ、Ｄ３９７Ｈ、Ｄ３９７Ｉ、Ｄ３９７Ｋ、Ｄ３９７Ｌ、Ｄ３９７Ｍ、Ｄ３９７Ｎ、Ｄ３９７Ｐ、Ｄ３９７Ｑ、Ｄ３９７Ｒ、Ｄ３９７Ｓ、Ｄ３９７Ｔ、Ｄ３９７Ｖ、Ｄ３９７Ｙ、Ａ３９８Ｃ、Ａ３９８Ｄ、Ａ３９８Ｅ、Ａ３９８Ｆ、Ａ３９８Ｇ、Ａ３９８Ｈ、Ａ３９８Ｉ、Ａ３９８Ｋ、Ａ３９８Ｌ、Ａ３９８Ｍ、Ａ３９８Ｎ、Ａ３９８Ｐ、Ａ３９８Ｑ、Ａ３９８Ｒ、Ａ３９８Ｓ、Ａ３９８Ｔ、Ａ３９８Ｖ、Ａ３９８Ｗ、Ａ３９８Ｙ、Ｉ３９９Ａ、Ｉ３９９Ｃ、Ｉ３９９Ｄ、Ｉ３９９Ｅ、Ｉ３９９Ｆ、Ｉ３９９Ｇ、Ｉ３９９Ｌ、Ｉ３９９Ｍ、Ｉ３９９Ｑ、Ｉ３９９Ｓ、Ｉ３９９Ｔ、Ｉ３９９Ｖ、Ｉ３９９Ｗ、Ｉ３９９Ｙ、Ｒ４０２Ａ、Ｒ４０２Ｃ、Ｒ４０２Ｅ、Ｒ４０２Ｆ、Ｒ４０２Ｇ、Ｒ４０２Ｉ、Ｒ４０２Ｌ、Ｒ４０２Ｑ、Ｒ４０２Ｓ、Ｒ４０２Ｗ、Ｒ４０２Ｙ、Ｑ４０９Ｄ、Ｑ４０９Ｇ、Ｖ４１０Ａ、Ｖ４１０Ｃ、Ｖ４１０Ｆ、Ｖ４１０Ｈ、Ｖ４１０Ｉ、Ｖ４１０Ｌ、Ｖ４１０Ｎ、Ｖ４１０Ｒ、Ｖ４１０Ｓ、Ｖ４１０Ｔ、Ｖ４１０Ｗ、Ｖ４１０Ｙ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｔ４１１Ｆ、Ｔ４１１Ｇ、Ｔ４１１Ｈ、Ｔ４１１Ｉ、Ｔ４１１Ｋ、Ｔ４１１Ｌ、Ｔ４１１Ｎ、Ｔ４１１Ｑ、Ｔ４１１Ｒ、Ｔ４１１Ｓ、Ｔ４１１Ｖ、Ｔ４１１Ｙ、Ｓ４２０Ｃ、Ｓ４２０Ｄ、Ｓ４２０Ｇ、Ｓ４２０Ｈ、Ｓ４２０Ｋ、Ｓ４２０Ｎ、Ｓ４２０Ｑ、Ｓ４２０Ｔ、Ｓ４２０Ｖ、Ｓ４２０Ｙ、Ｒ４２６Ａ、Ｒ４２６Ｅ、Ｒ４２６Ｆ、Ｒ４２６Ｉ、Ｒ４２６Ｋ、Ｒ４２６Ｌ、Ｒ４２６Ｎ、Ｒ４２６Ｐ、Ｒ４２６Ｑ、Ｒ４２６Ｓ、Ｒ４２６Ｔ、Ｒ４２６Ｗ、Ｒ４２６Ｙ、Ｇ４２７Ｃ、Ｇ４２７Ｄ、Ｇ４２７Ｅ、Ｇ４２７Ｆ、Ｇ４２７Ｈ、Ｇ４２７Ｋ、Ｇ４２７Ｌ、Ｇ４２７Ｍ、Ｇ４２７Ｎ、Ｇ４２７Ｐ、Ｇ４２７Ｑ、Ｇ４２７Ｒ、Ｇ４２７Ｓ、Ｇ４２７Ｔ、Ｇ４２７Ｖ、Ｇ４２７Ｙ、Ｋ４２８Ａ、Ｋ４２８Ｃ、Ｋ４２８Ｄ、Ｋ４２８Ｅ、Ｋ４２８Ｆ、Ｋ４２８Ｇ、Ｋ４２８Ｈ、Ｋ４２８Ｉ、Ｋ４２８Ｌ、Ｋ４２８Ｍ、Ｋ４２８Ｎ、Ｋ４２８Ｐ、Ｋ４２８Ｑ、Ｋ４２８Ｒ、Ｋ４２８Ｓ、Ｋ４２８Ｔ、Ｋ４２８Ｖ、Ｋ４２８Ｗ、Ｋ４２８Ｙ、Ｔ４４５Ａ、Ｔ４４５Ｃ、Ｔ４４５Ｄ、Ｔ４４５Ｅ、Ｔ４４５Ｆ、Ｔ４４５Ｇ、Ｔ４４５Ｉ、Ｔ４４５Ｋ、Ｔ４４５Ｌ、Ｔ４４５Ｍ、Ｔ４４５Ｎ、Ｔ４４５Ｐ、Ｔ４４５Ｑ、Ｔ４４５Ｒ、Ｔ４４５Ｓ、Ｔ４４５Ｖ、Ｔ４４５Ｙ、Ｖ４４６Ａ、Ｖ４４６Ｃ、Ｖ４４６Ｋ、Ｖ４４６Ｑ、Ｖ４４６Ｒ、Ｅ４４７Ｋ、Ｅ４４７Ｌ、Ｅ４４７Ｓ、Ｅ４４７Ｖ、Ｅ４４７Ｙ、Ｇ４４８Ａ、Ｇ４４８Ｃ、Ｇ４４８Ｄ、Ｇ４４８Ｅ、Ｇ４４８Ｆ、Ｇ４４８Ｈ、Ｇ４４８Ｎ、Ｇ４４８Ｓ、Ｇ４４８Ｔ、Ｇ４４８Ｙ、Ｎ４４９Ａ、Ｎ４４９Ｃ、Ｎ４４９Ｅ、Ｎ４４９Ｆ、Ｎ４４９Ｇ、Ｎ４４９Ｈ、Ｎ４４９Ｋ、Ｎ４４９Ｍ、Ｎ４４９Ｐ、Ｎ４４９Ｔ、Ｎ４４９Ｖ、Ｎ４５４Ｆ、Ｎ４５４Ｇ、Ｎ４５４Ｋ、Ｎ４５４Ｌ、Ｎ４５４Ｍ、Ｎ４５４Ｒ、Ｎ４５４Ｓ、Ｎ４５４Ｔ、Ｎ４５４Ｖ、Ｎ４５５Ａ、Ｎ４５５Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、Ｎ４５５Ｅ、Ｎ４５５Ｆ、Ｎ４５５Ｇ、Ｎ４５５Ｈ、Ｎ４５５Ｉ、Ｎ４５５Ｌ、Ｎ４５５Ｍ、Ｎ４５５Ｓ、Ｎ４５５Ｔ、Ｎ４５５Ｖ、Ｎ４５５Ｗ、Ｎ４５５Ｙ、Ｈ４６０Ａ、Ｈ４６０Ｃ、Ｈ４６０Ｄ、Ｈ４６０Ｅ、Ｈ４６０Ｆ、Ｈ４６０Ｇ、Ｈ４６０Ｉ、Ｈ４６０Ｋ、Ｈ４６０Ｌ、Ｈ４６０Ｍ、Ｈ４６０Ｎ、Ｈ４６０Ｑ、Ｈ４６０Ｒ、Ｈ４６０Ｓ、Ｈ４６０Ｗ、Ｈ４６０Ｙ、Ｑ４６７Ａ、Ｑ４６７Ｐ、Ｑ４６７Ｓ、Ｎ４７３Ａ、Ｎ４７３Ｃ、Ｎ４７３Ｅ、Ｎ４７３Ｆ、Ｎ４７３Ｇ、Ｎ４７３Ｈ、Ｎ４７３Ｋ、Ｎ４７３Ｌ、Ｎ４７３Ｍ、Ｎ４７３Ｐ、Ｎ４７３Ｑ、Ｎ４７３Ｒ、Ｎ４７３Ｓ、Ｎ４７３Ｔ、Ｎ４７３Ｖ、Ｎ４７３Ｗ、Ｓ４７４Ａ、Ｓ４７４Ｃ、Ｓ４７４Ｄ、Ｓ４７４Ｅ、Ｓ４７４Ｆ、Ｓ４７４Ｇ、Ｓ４７４Ｉ、Ｓ４７４Ｋ、Ｓ４７４Ｌ、Ｓ４７４Ｍ、Ｓ４７４Ｎ、Ｓ４７４Ｐ、Ｓ４７４Ｑ、Ｓ４７４Ｒ、Ｓ４７４Ｔ、Ｓ４７４Ｖ、Ｓ４７４Ｙ、Ｎ４７５Ｉ、Ｎ４７５Ｋ、Ｎ４７５Ｌ、Ｎ４７５Ｍ、Ｎ４７５Ｐ、Ｎ４７５Ｑ、Ｎ４７５Ｒ、Ｎ４７５Ｓ、Ｎ４７５Ｔ、Ｎ４７５Ｖ、Ｎ４７５Ｗ、Ｎ４７５Ｙ、Ｅ４８９Ｄ、Ｅ４８９Ｎ、Ｑ４９０Ａ、Ｑ４９０Ｃ、Ｑ４９０Ｅ、Ｑ４９０Ｆ、Ｑ４９０Ｇ、Ｑ４９０Ｈ、Ｑ４９０Ｋ、Ｑ４９０Ｌ、Ｑ４９０Ｐ、Ｑ４９０Ｒ、Ｑ４９０Ｓ、Ｑ４９０Ｔ、Ｑ４９０Ｖ、Ｑ４９０Ｗ、Ｑ４９０Ｙ、Ｌ４９２Ａ、Ｌ４９２Ｄ、Ｌ４９２Ｆ、Ｌ４９２Ｈ、Ｌ４９２Ｉ、Ｌ４９２Ｍ、Ｌ４９２Ｎ、Ｌ４９２Ｑ、Ｌ４９２Ｒ、Ｌ４９２Ｔ、Ｌ４９２Ｗ、Ｌ４９２Ｙ、Ｑ４９６Ｇ、Ｑ４９６Ｓ、Ｑ４９６Ｗ、Ｖ４９７Ａ、Ｖ４９７Ｃ、Ｖ４９７Ｉ、Ｖ４９７Ｍ、Ｖ４９７Ｔ、Ｋ４９８Ａ、Ｋ４９８Ｃ、Ｋ４９８Ｅ、Ｋ４９８Ｆ、Ｋ４９８Ｇ、Ｋ４９８Ｈ、Ｋ４９８Ｉ、Ｋ４９８Ｌ、Ｋ４９８Ｍ、Ｋ４９８Ｎ、Ｋ４９８Ｑ、Ｋ４９８Ｔ、Ｋ４９８Ｖ、Ｋ４９８Ｙ、Ｄ５２１Ａ、Ｄ５２１Ｃ、Ｄ５２１Ｅ、Ｄ５２１Ｆ、Ｄ５２１Ｇ、Ｄ５２１Ｈ、Ｄ５２１Ｉ、Ｄ５２１Ｋ、Ｄ５２１Ｌ、Ｄ５２１Ｍ、Ｄ５２１Ｐ、Ｄ５２１Ｒ、Ｄ５２１Ｓ、Ｄ５２１Ｔ、Ｄ５２１Ｖ、Ｄ５２１Ｗ、Ｄ５２１Ｙ、Ｖ５２２Ａ、Ｖ５２２Ｃ、Ｖ５２２Ｆ、Ｖ５２２Ｇ、Ｖ５２２Ｈ、Ｖ５２２Ｉ、Ｖ５２２Ｋ、Ｖ５２２Ｌ、Ｖ５２２Ｍ、Ｖ５２２Ｎ、Ｖ５２２Ｐ、Ｖ５２２Ｑ、Ｖ５２２Ｒ、Ｖ５２２Ｓ、Ｖ５２２Ｔ、Ｖ５２２Ｗ、Ｖ５２２Ｙ、Ｋ５３４Ｃ、Ｋ５３４Ｄ、Ｋ５３４Ｅ、Ｋ５３４Ｆ、Ｋ５３４Ｇ、Ｋ５３４Ｎ、Ｋ５３４Ｒ、Ｋ５３４Ｖ、Ｒ５４２Ａ、Ｒ５４２Ｃ、Ｒ５４２Ｄ、Ｒ５４２Ｅ、Ｒ５４２Ｆ、Ｒ５４２Ｇ、Ｒ５４２Ｈ、Ｒ５４２Ｉ、Ｒ５４２Ｋ、Ｒ５４２Ｌ、Ｒ５４２Ｍ、Ｒ５４２Ｎ、Ｒ５４２Ｐ、Ｒ５４２Ｑ、Ｒ５４２Ｓ、Ｒ５４２Ｔ、Ｒ５４２Ｖ、Ｒ５４２Ｗ、Ｒ５４２Ｙ、Ｇ５４７Ａ、Ｇ５４７Ｃ、Ｇ５４７Ｌ、Ｇ５４７Ｐ、Ｓ５４８Ｃ、Ｓ５４８Ｅ、Ｓ５４８Ｆ、Ｓ５４８Ｈ、Ｓ５４８Ｉ、Ｓ５４８Ｌ、Ｓ５４８Ｍ、Ｓ５４８Ｎ、Ｓ５４８Ｑ、Ｓ５４８Ｒ、Ｓ５４８Ｔ、Ｓ５４８Ｖ、Ｓ５４８Ｗ、Ｓ５４８Ｙ、Ｅ５５３Ｉ、Ｅ５５３Ｎ、Ｅ５５３Ｙ、Ｇ５５４Ａ、Ｇ５５４Ｃ、Ｇ５５４Ｄ、Ｇ５５４Ｆ、Ｇ５５４Ｈ、Ｇ５５４Ｌ、Ｇ５５４Ｍ、Ｇ５５４Ｑ、Ｇ５５４Ｖ、Ｇ５５４Ｗ、Ｌ５５５Ａ、Ｌ５５５Ｃ、Ｌ５５５Ｄ、Ｌ５５５Ｅ、Ｌ５５５Ｆ、Ｌ５５５Ｇ、Ｌ５５５Ｈ、Ｌ５５５Ｉ、Ｌ５５５Ｋ、Ｌ５５５Ｍ、Ｌ５５５Ｎ、Ｌ５５５Ｐ、Ｌ５５５Ｑ、Ｌ５５５Ｔ、Ｌ５５５Ｖ、Ｌ５５５Ｗ、Ｌ５５５Ｙ、Ｋ５６０Ａ、Ｋ５６０Ｅ、Ｋ５６０Ｇ、Ｋ５６０Ｈ、Ｋ５６０Ｐ、Ｋ５６０Ｒ、Ｋ５６０Ｗ、Ｈ５６１Ａ、Ｈ５６１Ｃ、Ｈ５６１Ｄ、Ｈ５６１Ｅ、Ｈ５６１Ｆ、Ｈ５６１Ｇ、Ｈ５６１Ｉ、Ｈ５６１Ｍ、Ｈ５６１Ｎ、Ｈ５６１Ｑ、Ｈ５６１Ｓ、Ｈ５６１Ｔ、Ｈ５６１Ｖ、Ｈ５６１Ｗ、Ｄ５６３Ａ、Ｄ５６３Ｃ、Ｄ５６３Ｅ、Ｄ５６３Ｆ、Ｄ５６３Ｉ、Ｄ５６３Ｌ、Ｄ５６３Ｍ、Ｄ５６３Ｑ、Ｄ５６３Ｒ、Ｄ５６３Ｓ、Ｄ５６３Ｔ、Ｄ５６３Ｖ、Ｄ５６３Ｗ、Ｄ５６３Ｙ、Ｄ５６４Ａ、Ｄ５６４Ｃ、Ｄ５６４Ｆ、Ｄ５６４Ｇ、Ｄ５６４Ｋ、Ｄ５６４Ｌ、Ｄ５６４Ｍ、Ｄ５６４Ｎ、Ｄ５６４Ｑ、Ｄ５６４Ｒ、Ｄ５６４Ｓ、Ｄ５６４Ｔ、Ｄ５６４Ｖ、Ｄ５６４Ｙ、Ｒ５７０Ａ、Ｒ５７０Ｃ、Ｒ５７０Ｄ、Ｒ５７０Ｅ、Ｒ５７０Ｇ、Ｒ５７０Ｈ、Ｒ５７０Ｉ、Ｒ５７０Ｍ、Ｒ５７０Ｑ、Ｒ５７０Ｓ、Ｒ５７０Ｔ、Ｒ５７０Ｖ、Ｙ５７１Ｈ、Ｙ５７１Ｍ、Ｙ５７１Ｎ、Ｙ５７１Ｒ、Ｙ５７１Ｗ、Ｋ５８１Ａ、Ｋ５８１Ｃ、Ｋ５８１Ｄ、Ｋ５８１Ｅ、Ｋ５８１Ｆ、Ｋ５８１Ｇ、Ｋ５８１Ｈ、Ｋ５８１Ｉ、Ｋ５８１Ｌ、Ｋ５８１Ｍ、Ｋ５８１Ｎ、Ｋ５８１Ｐ、Ｋ５８１Ｒ、Ｋ５８１Ｓ、Ｋ５８１Ｔ、Ｋ５８１Ｖ、Ｋ５８１Ｗ、Ｋ５８１Ｙ、Ｎ５８３Ａ、Ｎ５８３Ｃ、Ｎ５８３Ｄ、Ｎ５８３Ｅ、Ｎ５８３Ｆ、Ｎ５８３Ｇ、Ｎ５８３Ｈ、Ｎ５８３Ｉ、Ｎ５８３Ｋ、Ｎ５８３Ｌ、Ｎ５８３Ｍ、Ｎ５８３Ｐ、Ｎ５８３Ｒ、Ｎ５８３Ｓ、Ｎ５８３Ｔ、Ｎ５８３Ｖ、Ｎ５８３Ｗ、Ｎ５８３Ｙ、Ｒ５８６Ｄ、Ｒ５８６Ｅ、Ｒ５８６Ｆ、Ｒ５８６Ｇ、Ｒ５８６Ｈ、Ｒ５８６Ｌ、Ｒ５８６Ｎ、Ｒ５８６Ｐ、Ｒ５８６Ｖ、Ｒ５８６Ｗ、Ｒ５８６Ｙ、Ｓ５９１Ｄ、Ｖ６０３Ａ、Ｖ６０３Ｃ、Ｖ６０３Ｄ、Ｖ６０３Ｅ、Ｖ６０３Ｆ、Ｖ６０３Ｇ、Ｖ６０３Ｈ、Ｖ６０３Ｍ、Ｖ６０３Ｎ、Ｖ６０３Ｐ、Ｖ６０３Ｑ、Ｖ６０３Ｒ、Ｖ６０３Ｓ、Ｖ６０３Ｔ、Ｖ６０３Ｗ、Ｖ６０３Ｙ、Ｆ６１１Ａ、Ｆ６１１Ｃ、Ｆ６１１Ｄ、Ｆ６１１Ｋ、Ｆ６１１Ｌ、Ｆ６１１Ｍ、Ｆ６１１Ｎ、Ｆ６１１Ｒ、Ｆ６１１Ｓ、Ｆ６１１Ｖ、Ｆ６１１Ｗ、Ｆ６１１Ｙ、Ｑ６１２Ｃ、Ｑ６１２Ｄ、Ｑ６１２Ｆ、Ｑ６１２Ｇ、Ｑ６１２Ｈ、Ｑ６１２Ｉ、Ｑ６１２Ｋ、Ｑ６１２Ｌ、Ｑ６１２Ｍ、Ｑ６１２Ｒ、Ｑ６１２Ｓ、Ｑ６１２Ｗ、Ａ６２２Ｄ、Ａ６２２Ｅ、Ａ６２２Ｆ、Ａ６２２Ｇ、Ａ６２２Ｈ、Ａ６２２Ｉ、Ａ６２２Ｋ、Ａ６２２Ｌ、Ａ６２２Ｍ、Ａ６２２Ｎ、Ａ６２２Ｐ、Ａ６２２Ｒ、Ａ６２２Ｓ、Ａ６２２Ｔ、Ａ６２２Ｖ、Ａ６２２Ｙ、Ｑ６２６Ｅ、Ｑ６２６Ｆ、Ｑ６２６Ｇ、Ｑ６２６Ｈ、Ｑ６２６Ｌ、Ｑ６２６Ｍ、Ｑ６２６Ｔ、Ｑ６２６Ｖ、Ｖ６２７Ｐ、Ｔ６３８Ａ、Ｔ６３８Ｄ、Ｔ６３８Ｅ、Ｔ６３８Ｆ、Ｔ６３８Ｇ、Ｔ６３８Ｉ、Ｔ６３８Ｋ、Ｔ６３８Ｌ、Ｔ６３８Ｍ、Ｔ６３８Ｐ、Ｔ６３８Ｑ、Ｔ６３８Ｒ、Ｔ６３８Ｓ、Ｔ６３８Ｖ、Ｔ６３８Ｗ、Ｔ６３８Ｙ、Ｓ６４２Ａ、Ｓ６４２Ｃ、Ｓ６４２Ｅ、Ｓ６４２Ｆ、Ｓ６４２Ｇ、Ｓ６４２Ｈ、Ｓ６４２Ｉ、Ｓ６４２Ｋ、Ｓ６４２Ｌ、Ｓ６４２Ｍ、Ｓ６４２Ｎ、Ｓ６４２Ｐ、Ｓ６４２Ｑ、Ｓ６４２Ｒ、Ｓ６４２Ｔ、Ｓ６４２Ｖ、Ｓ６４２Ｗ、Ｓ６４２Ｙ、Ａ６４３Ｃ、Ａ６４３Ｅ、Ａ６４３Ｆ、Ａ６４３Ｇ、Ａ６４３Ｈ、Ａ６４３Ｋ、Ａ６４３Ｌ、Ａ６４３Ｍ、Ａ６４３Ｎ、Ａ６４３Ｑ、Ａ６４３Ｒ、Ａ６４３Ｓ、Ａ６４３Ｔ、Ａ６４３Ｖ、Ａ６４３Ｗ、Ａ６４３Ｙ、Ｒ６４５Ａ、Ｒ６４５Ｄ、Ｒ６４５Ｆ、Ｒ６４５Ｇ、Ｒ６４５Ｈ、Ｒ６４５Ｉ、Ｒ６４５Ｋ、Ｒ６４５Ｌ、Ｒ６４５Ｍ、Ｒ６４５Ｐ、Ｒ６４５Ｑ、Ｒ６４５Ｔ、Ｒ６４５Ｖ、Ｒ６４５Ｗ、Ｒ６４５Ｙ、Ｋ６４９Ａ、Ｋ６４９Ｃ、Ｋ６４９Ｆ、Ｋ６４９Ｉ、Ｋ６４９Ｌ、Ｋ６４９Ｍ、Ｋ６４９Ｎ、Ｋ６４９Ｑ、Ｋ６４９Ｓ、Ｋ６４９Ｔ、Ｋ６４９Ｗ、Ｋ６４９Ｙ、Ｑ６５０Ａ、Ｑ６５０Ｃ、Ｑ６５０Ｄ、Ｑ６５０Ｅ、Ｑ６５０Ｆ、Ｑ６５０Ｇ、Ｑ６５０Ｈ、Ｑ６５０Ｉ、Ｑ６５０Ｋ、Ｑ６５０Ｌ、Ｑ６５０Ｍ、Ｑ６５０Ｎ、Ｑ６５０Ｒ、Ｑ６５０Ｔ、Ｑ６５０Ｖ、Ｑ６５０Ｙ、Ｔ６６０Ｃ、Ｔ６６０Ｄ、Ｔ６６０Ｆ、Ｔ６６０Ｉ、Ｔ６６０Ｎ、Ｔ６６０Ｓ、Ｔ６６０Ｗ、Ｔ６６０Ｙ、Ｐ６６１Ａ、Ｐ６６１Ｃ、Ｐ６６１Ｄ、Ｐ６６１Ｅ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｇ、Ｐ６６１Ｈ、Ｐ６６１Ｉ、Ｐ６６１Ｋ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｍ、Ｐ６６１Ｑ、Ｐ６６１Ｒ、Ｐ６６１Ｓ、Ｐ６６１Ｔ、Ｐ６６１Ｖ、Ｐ６６１Ｗ、Ｇ６６２Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｄ、Ｇ６６２Ｆ、Ｇ６６２Ｈ、Ｇ６６２Ｉ、Ｇ６６２Ｋ、Ｇ６６２Ｎ、Ｇ６６２Ｒ、Ｇ６６２Ｔ、Ｇ６６２Ｗ、Ｇ６６２Ｙ、Ｑ６６３Ａ、Ｑ６６３Ｃ、Ｑ６６３Ｄ、Ｑ６６３Ｅ、Ｑ６６３Ｆ、Ｑ６６３Ｇ、Ｑ６６３Ｈ、Ｑ６６３Ｉ、Ｑ６６３Ｋ、Ｑ６６３Ｌ、Ｑ６６３Ｍ、Ｑ６６３Ｎ、Ｑ６６３Ｒ、Ｑ６６３Ｓ、Ｑ６６３Ｖ、Ｑ６６３Ｗ、Ｔ６６６Ａ、Ｔ６６６Ｃ、Ｔ６６６Ｄ、Ｔ６６６Ｈ、Ｔ６６６Ｋ、Ｔ６６６Ｎ、Ｔ６６６Ｒ、Ｔ６６６Ｗ、Ｒ６７２Ｃ、Ｒ６７２Ｄ、Ｒ６７２Ｅ、Ｒ６７２Ｆ、Ｒ６７２Ｇ、Ｒ６７２Ｈ、Ｒ６７２Ｉ、Ｒ６７２Ｋ、Ｒ６７２Ｌ、Ｒ６７２Ｍ、Ｒ６７２Ｎ、Ｒ６７２Ｔ、Ｒ６７２Ｖ、Ｒ６７２Ｗ、Ｒ６７２Ｙ、Ｒ６７３Ａ、Ｒ６７３Ｃ、Ｒ６７３Ｅ、Ｒ６７３Ｇ、Ｒ６７３Ｈ、Ｒ６７３Ｉ、Ｒ６７３Ｋ、Ｒ６７３Ｌ、Ｒ６７３Ｍ、Ｒ６７３Ｎ、Ｒ６７３Ｑ、Ｒ６７３Ｓ、Ｒ６７３Ｔ、Ｒ６７３Ｖ、Ｒ６７３Ｗ、Ｒ６７４Ｌ、Ｒ６７４Ｍ、Ｒ６７４Ｔ、Ｒ６７４Ｖ、Ｒ６７４Ｙ、Ｄ６７５Ｃ、Ｄ６７５Ｅ、Ｄ６７５Ｈ、Ｄ６７５Ｌ、Ｄ６７５Ｓ、Ｄ６７５Ｙ、Ｄ６８０Ａ、Ｄ６８０Ｃ、Ｄ６
８０Ｅ、Ｄ６８０Ｆ、Ｄ６８０Ｈ、Ｄ６８０Ｉ、Ｄ６８０Ｋ、Ｄ６８０Ｌ、Ｄ６８０Ｍ、Ｄ６８０Ｎ、Ｄ６８０Ｑ、Ｄ６８０Ｒ、Ｄ６８０Ｓ、Ｄ６８０Ｖ、Ｄ６８０Ｗ、Ｄ６８０Ｙ、Ｔ６８１Ａ、Ｔ６８１Ｇ、Ｔ６８１Ｈ、Ｔ６８１Ｋ、Ｔ６８１Ｌ、Ｔ６８１Ｍ、Ｔ６８１Ｎ、Ｔ６８１Ｐ、Ｔ６８１Ｑ、Ｔ６８１Ｒ、Ｔ６８１Ｓ、Ｔ６８１Ｖ、Ｔ６８１Ｗ、Ｔ６８１Ｙ、Ａ６８２Ｍ、Ｓ６８３Ａ、Ｓ６８３Ｃ、Ｓ６８３Ｄ、Ｓ６８３Ｅ、Ｓ６８３Ｆ、Ｓ６８３Ｇ、Ｓ６８３Ｉ、Ｓ６８３Ｌ、Ｓ６８３Ｍ、Ｓ６８３Ｐ、Ｓ６８３Ｑ、Ｓ６８３Ｒ、Ｓ６８３Ｖ、Ｓ６８３Ｗ、Ｑ６８４Ａ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｄ、Ｑ６８４Ｇ、Ｑ６８４Ｎ、Ｑ６８４Ｐ、Ｋ６８５Ａ、Ｋ６８５Ｅ、Ｋ６８５Ｆ、Ｋ６８５Ｇ、Ｋ６８５Ｉ、Ｋ６８５Ｌ、Ｋ６８５Ｍ、Ｋ６８５Ｎ、Ｋ６８５Ｑ、Ｋ６８５Ｒ、Ｋ６８５Ｓ、Ｋ６８５Ｔ、Ｋ６８５Ｖ、Ｋ６８５Ｗ、Ｋ６８５Ｙ、Ｓ６９２Ｃ、Ｓ６９２Ｅ、Ｓ６９２Ｈ、Ｓ６９２Ｉ、Ｓ６９２Ｋ、Ｓ６９２Ｌ、Ｓ６９２Ｍ、Ｓ６９２Ｎ、Ｓ６９２Ｐ、Ｓ６９２Ｑ、Ｓ６９２Ｔ、Ｓ６９２Ｖ、Ｓ６９２Ｗ、Ｒ７０２Ｃ、Ｒ７０２Ｄ、Ｒ７０２Ｆ、Ｒ７０２Ｇ、Ｒ７０２Ｈ、Ｒ７０２Ｉ、Ｒ７０２Ｋ、Ｒ７０２Ｌ、Ｒ７０２Ｍ、Ｒ７０２Ｎ、Ｒ７０２Ｑ、Ｒ７０２Ｓ、Ｒ７０２Ｔ、Ｒ７０２Ｖ、Ｒ７０２Ｗ、Ｒ７０５Ｃ、Ｒ７０５Ｆ、Ｒ７０５Ｈ、Ｒ７０５Ｉ、Ｒ７０５Ｌ、Ｒ７０５Ｍ、Ｒ７０５Ｐ、Ｒ７０５Ｓ、Ｒ７０５Ｔ、Ｒ７０５Ｖ、及びＲ７０５Ｗからなる群のうちの１つ以上を含み、ここで、置換は、それぞれの位置での単独の置換だけから構成され、位置は、配列番号３として示される参照β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）のアミノ酸配列と対応させて番号付けされるものである。実験の項で記載されるように、例示的なβ−グルコシダーゼ変異体はβ−グルコシダーゼ活性が改良されている（ｐＨ ５でのＣＮＰＧ、ＰＡＳＣ、ＰＣＳ、Ｇ２、ｐＨ ６でのＧ２、又はＧ２＋ＣＣのいずれについてもＰＩは１超である）。
更なる実施形態では、本開示は、先行する任意の要約の段落に関する、β−グルコシダーゼ変異体を提供し、ここで、この変異体は単離されたものである。本開示は、β−グルコシダーゼ変異体を含む組成物を提供する。好ましい実施形態では、組成物はβ−グルコシダーゼ変異体を豊富に含む。
加えて、本開示は、先行する任意の要約の段落に関する、β−グルコシダーゼ変異体をコードする核酸を単離したものを提供する。好ましい実施形態では、本開示は、制御配列と制御可能なように連結させた核酸を単離したものを含む、発現ベクターを提供する。他の実施形態では、本開示は、発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。更に、本開示は、β−グルコシダーゼ変異体を産生するのに好適な条件下で、培養培地中で宿主細胞を培養することを含む、β−グルコシダーゼ変異体の産生方法を提供する。そのため、別の実施形態では、本開示は宿主細胞及び培養培地を含む、組成物を提供する。同様に、本開示は、培養培地の上清中にβ−グルコシダーゼ変異体を含む、組成物も提供する。
更に、本開示は、先行する任意の要約の段落に関する、β−グルコシダーゼ変異体を、バイオマスに接触させることを含む、バイオマスを糖へと変換させる方法を提供する。更に、本開示は、バイオマス組成物を、先行する任意の要約の段落項に関する、β−グルコシダーゼ変異体を含む組成物と接触させて、糖溶液を生成することと、燃料を産生させるのに十分な条件下で、発酵微生物を含む糖溶液を培養することを含む、燃料の製造方法を提供する。
成熟型の様々なセルラーゼのアミノ酸配列のアラインメントを提供する：ＴｒｉｒｅＢＧＬ１，ヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）（トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）としても既知）Ｑ１２７１５ β−Ｄ−グルコシドグルコヒドロラーゼ１（配列番号３）；ＨａｎａｎＢｇｌｕ，ハンセヌラ・アノマラ（Hansenula anomala）Ｐ０６８３５ β−グルコシダーゼ（配列番号４）；ＰｉｒｓｐＢｇｌｕ，ピロマイセス（Piromyces）ｓｐ．Ｅ２ Ｑ８７５Ｋ３ β−グルコシダーゼ（配列番号５）；ＣｏｃｉｍＢｇｌｕ，コクシジオイデス・イミチス（Coccidioides immitis）Ｏ１４４２４ β−グルコシダーゼ（配列番号６）；ＳａｃｆｉＢｇｌｕ２，サッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Saccharomycopsis fibuligera）β−グルコシダーゼ２（配列番号７）；ＳａｃｆｉＢｇｌｕ１，サッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Saccharomycopsis fibuligera）Ｐ２２５０６ β−グルコシダーゼ１（配列番号８）；ＳｅｐｌｙＢｇｌｕ，セプトリア・リコペルシシ（Septoria lycopersici）Ｑ９９３２４ β−１，２−Ｄ−グルコシダーゼ（配列番号９）；ＫｕｒｃａＢｇｌｕ，クライシア カプシュラタ（Kuraishia capsulata）Ｑ１２６５３ β−グルコシダーゼ（配列番号１０）；ＴｒｉｒｅＢＧＬ７，トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）Ｑ７Ｚ９Ｍ０ β−グルコシダーゼ７（配列番号１１）；ＵｒｏｆａＢｇｌｕ，ウロマイセス・ファバエ（Uromyces fabae）Ｑ７０ＫＱ７ β−グルコシダーゼ（配列番号１２）；ＡｓｐｔｅＢｇｌｕ，アスペルギルス・テレウス（Aspergillus terreus）（ｓｔｒａｉｎ ＮＩＨ ２６２４ ／ ＦＧＳＣ Ａ１１５６）Ｑ０ＣＥＦ３ β−グルコシダーゼ（配列番号１３）；ＣｈａｇｌＢｇｌｕ，ケトミウム・グロボサム（Chaetomium globosum）Ｑ２ＧＺ５４ Ｐｕｔａｔｉｖｅ β−グルコシダーゼ（配列番号１４）；ＴｒｉｒｅＢＧＬ３，トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）Ｑ７Ｚ９Ｍ５ β−グルコシダーゼ３（配列番号１５）；ＰｅｎｂｒＢＧＬ，ペニシリウム・ブラシリアナム（Penicillium brasilianum）ＧＨ３ β−グルコシダーゼ（配列番号１６）；ＰｅｒｓｐＢｇｌｕ，ペリコニアｓｐ．（Periconia sp.）ＢＣＣ ２８７１ Ａ９ＵＩＧ０ β−グルコシダーゼ（配列番号１７）；ＰｈａａｖＢｇｌｕ，ファエオスファエリア・アベナリア（Phaeosphaeria avenaria）Ｑ９Ｐ８７９ β−グルコシダーゼ（配列番号１８）；ＡｓｐｆｕＢＧＬ，アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus fumigatus）Ｂ０ＸＰＥ１ β−グルコシダーゼ（配列番号１９）；ＡｓｐｏｒＢＧＬ１，アスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）Ｑ２ＵＵＤ６ β−グルコシダーゼ（配列番号２０）；ＡｓｐａｃＢＧＬ１，アスペルギルス・アキュリタス（Aspergillus aculeatus）β−グルコシダーゼ（配列番号２１）；ＡｓｐｎｉＢＧＬアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）Ｑ９Ｐ８Ｆ４ β−グルコシダーゼ（配列番号２２）；ＴａｌｅｍＢｇｌｕ，タラロマイセス・エメルソニイ（Talaromyces emersonii）Ｑ８ＴＧＩ８ β−グルコシダーゼ（配列番号２３）；及びＴｈｅａｕＢＧＬ，サーモアスカス・アウレンティアクス（Thermoascus aurentiacus）β−グルコシダーゼ（配列番号２４）。 本明細書に記載されるようなデスティネーションベクターｐＴＴＴ−ｐｙｒＧ１３及び発現ベクターｐＴＴＴ−ｐｙｒＧ−ｂｇｌ１を描く。
本開示は、概して酵素を目的とし、具体的には、β−グルコシダーゼ変異体を目的とする。同様に、β−グルコシダーゼ変異体をコードする核酸、β−グルコシダーゼ変異体を含む組成物、β−グルコシダーゼ変異体の使用方法、並びに更なる有用なβ−グルコシダーゼ変異体の同定方法も開示する。
上記の概要に関する記述、及び以降の詳細な説明はどちらも例示的なものであり、説明目的のみのものであり、本明細書に記載される組成物及び方法を制限するものではない。本明細書において別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術及び科学用語は、本開示の属する技術分野の業者により一般に理解される意味と同様の意味を持つ。本開示において、単数形の使用には別途記載のない限り複数形も包含する。「又は」の使用は、別途記載のない限り「及び／又は」を意味する。同様に、用語「含む（comprise）」、「含む（comprising）」、「含む（comprises）」、「包含する（include）」、「包含する（including）」及び「包含する（includes）」も限定することを意図するものではない。本明細書で参照されるすべての特許及び出版物、及びこのような特許及び出版物に包含されるすべてのアミノ酸配列及びヌクレオチド配列は、参照により例示的に組み込まれる。本明細書で提供される見出しは本開示の様々な態様、又は実施形態を制限するものではなく、総じて本明細書において参照として用いられ得るものである。したがって、本明細書中の用語は、明細書を参照することで概してより十分に定義される。
本明細書において別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術及び科学用語は、本開示の属する技術分野の業者により一般に理解される意味と同様の意味を持つ。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら、ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）及びＨａｌｅ ＆ Ｍａｒｈａｍ，ＴＨＥ ＨＡＲＰＥＲ ＣＯＬＬＩＮＳ ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｈａｒｐｅｒ Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ，ＮＹ（１９９１）は、本開示で使用される用語の多くに関する、一般的な辞書を当業者に提供する。本明細書に記載のものと同様の、又は本明細書に記載のものに相当する任意の方法及び材料を、本開示を実施、又は試験するために使用できるが、好ましい方法及び材料が記載される。数量範囲には、範囲を定義する数値も包含する。別途記載のない限り、核酸は左から右に向かって５’から３’配向になるように、アミノ酸配列は左から右に向かってアミノ基からカルボキシル基という配向になるように、それぞれ記載される。実務者には、技術の定義及び技術用語に関し、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ（Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．，１９８９、及びＡｕｓｕｂｅｌ ＦＭら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９３が参考になる。記載される特定の方法論、プロトコル及び試薬は変更することができることから、本開示は、記載される特定の方法論、プロトコル及び試薬に制限されるものではないことが理解される。
Ｉ．定義
下記用語は、総じて明細書を参照することでより十分に定義される。
本明細書で使用するとき、用語「ポリペプチド」は、ペプチド結合により連結されたアミノ酸残基の単鎖からなる化合物を指す。本明細書で使用するとき、用語「タンパク質」は、用語「ポリペプチド」と同義であり得る。
「変異体」は、次の１つ以上により前駆体タンパク質（例えば、未変性タンパク質）から誘導されるタンパク質を意味する：Ｃ−末端、Ｎ−末端、及びアミノ酸配列内の部位（１箇所又は複数箇所）のうちの１つ以上への１つ以上のアミノ酸の付加；アミノ酸配列内の部位（１箇所又は複数箇所）での１つ以上のアミノ酸の置換；Ｃ−末端、Ｎ−末端、及びアミノ酸配列内の部位での１つ以上のアミノ酸欠失。β−グルコシダーゼ変異体の調製は、当業者に既知の任意の手段により実施することができる。好ましい実施形態では、β−グルコシダーゼ変異体は、未変性タンパク質をコードするＤＮＡ配列を改変し、改変したＤＮＡ配列により好適な宿主を形質転換し、改変したＤＮＡ配列を発現させて、変異体酵素を生成することで調製される。本開示のβ−グルコシダーゼ変異体としては、前駆体酵素のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸配列に変更があるペプチドが挙げられ、β−グルコシダーゼ変異体は、前駆体酵素の特徴的なβ−グルコシダーゼ活性を保有するが、一部の特定の態様において特性が変更されている可能性がある。例えば、β−グルコシダーゼ変異体は、参照β−グルコシダーゼの発現、活性及び安定性のレベルが変更され得る。本開示に従う変異体は、セルラーゼ変異体をコードするＤＮＡ断片から誘導され得ることが企図され、ここで、発現されるセルラーゼ変異体の機能活性は保有される。例えば、セルラーゼをコードするＤＮＡ断片は、更にＤＮＡ配列、又はセルラーゼＤＮＡ配列の５’、又は３’末端のいずれかに結合しているヒンジ、又はリンカーをコードしている部分を含んでもよく、ここで、コードされたセルラーゼドメインの機能活性は保有される。用語「変異体」及び「誘導体」は、本明細書において互換的に使用され得る。加えて、本明細書で使用するとき、「変異体」は、野生型ポリペプチドとは異なる配列を有する任意のポリペプチドも指し得る。例えば、ＢＧＬ１変異体ポリペプチドは、変異体の配列、及び本明細書に記載の１つ以上の特定の置換に基づき、新規に合成することができる。そのため、本開示のβ−グルコシダーゼ変異体としては、野生型ＢＧＬ１アミノ酸配列と比較したときにアミノ酸配列に変更があるポリペプチドが挙げられる。
本開示の目的に関し、多くの場合、変異体は、特定のアミノ酸残基における置換により示される。例えば、変異体は、記号「Ｘ（＃）Ｙ」として示すことができ、この記号は、残基番号「＃」で置換を含む変異体を示すものであり、Ｘ残基が野生型ポリペプチド中の残基であるのに対し、Ｙ残基は変異体中の同じ位置の残基である。したがって、ＢＧＬ１変異体Ｘ＃Ｙは、位置、又は残基番号＃にて置換を含むＢＧＬ１変異体を示し、この場合、野生型ＢＧＬ１参照酵素の残基Ｘが、残基Ｙで交換すなわち置換されている。複数の置換を含有する変異体は、変異体中の異なる置換間の「|」により指定される。
ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）ＢＧＬ１の特定の残基に関し、機能的に類似している等価な残基は、タンパク質構造を変更するか、修飾するか、又は構造に貢献するかのいずれかのような立体構造を取り得るβ−グルコシダーゼのアミノ酸として定義され、基質は、定義される及び帰属される様式で、ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）ＢＧＬ１の特定の残基に結合し、又は触媒作用する。一部の好ましい実施形態では、「等価な残基」は、ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）ＢＧＬ１のアミノ酸配列とアラインメントされる残基である。
用語「核酸分子」は、ＲＮＡ、ＤＮＡ及びｃＤＮＡ分子を包含する。遺伝暗号が縮重する結果、ＢＧＬ１などの所定のタンパク質及び／又はそれらの変異体をコードする多数のヌクレオチド配列が産生され得る。本開示は、ＢＧＬ１などのセルラーゼ変異体をコードする、すべての潜在的な変異体ヌクレオチド配列を想到し、それらのすべては、遺伝暗号の縮重により得られる可能性がある。
「非相同的な」核酸コンストラクト、又は配列は、発現する細胞に対して生来のものではない配列の一部を有する。制御配列に対し、「非相同」であるとは、自然下では同様の遺伝子を制御するように機能するものではないが、現在では同様の遺伝子の発現を制御している制御配列（すなわち、プロモータ又はエンハンサー）を指す。一般的に、非相同的な核酸配列は、細胞、又はそれらの存在するゲノムの一部にとって内因性のものではなく、感染、形質移入、形質転換、マイクロインジェクション、又は電気穿孔法などにより細胞に加えられたものである。「非相同的な」核酸コンストラクトは、生来の細胞に見られる制御配列／ＤＮＡコード配列の組み合わせと同様の、又はそれらとは異なる制御配列／ＤＮＡコード配列を含有し得る。
本明細書で使用するとき、用語「ベクター」は、異なる宿主細胞間を移動するよう設計された核酸コンストラクトを指す。「発現ベクター」は、非相同的なＤＮＡ断片を組み込み、異なる細胞（foreign cell）中で発現させることのできるベクターを指す。多くの原核生物発現ベクター及び真核生物発現ベクターが市販されている。適切な発現ベクターの選択は、当業者の有する知識の範囲内である。
適宜、「発現カセット」又は「発現ベクター」は、特定の核酸を標的細胞に転写させる、一連の特定の核酸要素を組み換えることで、又は合成することで生成される、核酸コンストラクトである。組み換え型発現カセットは、プラスミド、染色体、ミトコンドリアＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ウィルス、又は核酸断片に組み込むことができる。典型的には、発現ベクターの組み換え型発現カセット部分は、他の配列間で転写される核酸配列及びプロモーターを包含する。
本明細書で使用するとき、用語「プラスミド」は、クローニングベクターとして使用される、環状二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡコンストラクトを指し、このコンストラクトは多くのバクテリア及び同様の真核生物中で、染色体外で自己複製により遺伝因子を形成する。
本明細書で使用するとき、用語「選択マーカーをコードするヌクレオチド配列」は、細胞内で発現させることができるヌクレオチド配列を指し、ここで、この選択マーカーの発現は、発現した遺伝子を含有している細胞に対して、対応する選択剤の存在下、又は対応する選択的な増殖条件下での増殖能力を与える。
本明細書で使用するとき、用語「プロモーター」は、下流の遺伝子を直接転写させるよう機能する核酸配列を指す。概して、プロモーターは、標的遺伝子を発現させる宿主細胞にとって適切なものであり得る。他の転写及び翻訳制御核酸配列（「制御配列」とも呼ばれる）と共に、プロモーターは、所定の遺伝子を発現させるのに必要とされる。概して、転写及び翻訳制御配列としては、限定するものではないが、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始配列及び転写終結配列、及びエンハンサー配列、又は活性化配列が挙げられる。
本明細書で定義するとき、「キメラ遺伝子」又は「非相同的な核酸コンストラクト」は、調節エレメントを含む異なる遺伝子の部分からなる、非ネイティブな遺伝子（すなわち、宿主に組み込まれた遺伝子）を指す。宿主細胞を形質転換するためのキメラ遺伝子コンストラクトは、典型的には非相同的なタンパク質コード配列と制御可能なように連結された転写制御領域（プロモーター）からなり、又は選択マーカーのキメラ遺伝子内に存在し、例えば、抗菌剤耐性を形質転換細胞に付与するタンパク質をコードしている選択マーカー遺伝子と制御可能なように連結される。宿主細胞に形質転換するための、本開示の典型的なキメラ遺伝子には、常時発現性の、又は誘導可能な転写制御領域、タンパク質コード配列、及び転写終結配列が包含される。標的タンパク質を分泌させることが所望される場合、キメラ遺伝子コンストラクトには、シグナルペプチドをコードする第２のＤＮＡ配列も包含される。
核酸は、別の核酸配列と機能上関連のある場所に配置された場合に、「制御可能なように連結」されたことになる。例えば、ポリペプチドの分泌に関与するタンパク質として発現される場合には、分泌リーダー（secretory leader）をコードするＤＮＡが、ポリペプチドに関するＤＮＡに、制御可能なように連結され；配列の転写に影響する場合には、プロモーター、又はエンハンサーが、コード配列に、制御可能なように連結され；あるいは翻訳を促進するように配置される場合には、リボソーム結合部位が、コード配列に、制御可能なように連結される。一般的に、「制御可能なように連結」は、連結されているＤＮＡ配列が隣接していることを意味し、分泌リーダー配列（secretory leader）の場合には、隣接し、かつ読み枠中に存在していることを意味する。しかしながら、エンハンサーは隣接していない。都合の良い制限部位にてライゲーションすることで連結することができる。このような部位が存在しない場合、従来法に従って、合成オリゴヌクレオチドアダプター、リンカー、又はＰＣＲプライマーを使用する。
本明細書で使用するとき、用語「遺伝子」は、ポリペプチド鎖の産生に関与し、例えば、５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、又は「リーダー」配列、及び３’ＵＴＲ、又は「トレイラー」配列、並びに個々のコードセグメント（エクソン）間の介在配列（イントロン）といった、コード領域に先行する及び後続する領域を包含する、又は包含しないＤＮＡ断片を意味する。
概して、ＢＧＬ１などのセルラーゼ変異体をコードする核酸分子は、中度〜高度の厳密性条件下では、配列番号１として本明細書に提供されるような野生型配列とハイブリッド形成する。場合によっては、ＢＧＬ１をコードしているヌクレオチド配列は、実質的に異なるコドン出現頻度を保有するよう選択されるが、ＢＧＬ１をコードしているヌクレオチド配列によりコードされるタンパク質は、未変性タンパク質と同様の、又は実質的に同様のアミノ酸配列を有する。例えば、宿主により利用される特定のコドンの出現頻度に従って、特定の原核生物による発現系、又は真核生物による発現系でのＢＧＬ１のより迅速な発現が促進されるよう、コード配列を改変することができる（Ｔｅ’ｏら、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９０：１３〜１９，２０００は、例えば、糸状菌で発現させるのに最適な遺伝子を記載している）。
中度〜高度の厳密性のハイブリダイゼーション条件及び洗浄条件下で２つの配列が互いに特異的にハイブリッド形成する場合、核酸配列は参照核酸配列に対し「選択的なハイブリッド形成が可能」であるものと見なされる。ハイブリダイゼーション条件は、複合体、又はプローブに結合する核酸の融解温度（Ｔｍ）によって異なる。例えば、「最高の厳密性」は、典型的には約Ｔｍ−５℃（プローブのＴｍよりも５℃低い）；「高度の厳密性」は、Ｔｍよりも約５〜１０℃低い点で；「中度」又は「中間（intermediate）の厳密性」は、プローブのＴｍよりも約１０〜２０℃低い点で；並びに「低度に厳密性」は、プローブのＴｍよりも約２０〜２５℃低い点で生じる。機能的に、最高の厳密性条件を使用して、ハイブリダイゼーションプローブと厳密に同一である、又はほぼ厳密に同一である配列を同定することができる一方で、高度の厳密性条件を使用して、プローブと約８０％以上の配列同一性を有する配列を同定することもできる。
中度及び高度の厳密性のハイブリダイゼーション条件は、当該技術分野において周知である（例えば、本明細書に参照により明確に組み込まれるＳａｍｂｒｏｏｋら、１９８９，Ｃｈａｐｔｅｒｓ ９及び１１，及びＡｕｓｕｂｅｌら、１９９３中を参照されたい）。高度の厳密性条件の一例としては、５０％のホルムアミド、５Ｘ ＳＳＣ、５Ｘ Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ溶液、０．５％のＳＤＳ及び１００μｇ／ｍＬの変性させたキャリアＤＮＡで、約４２℃にてハイブリダイゼーションし、続いて、２Ｘ ＳＳＣ及び０．５％のＳＤＳによる室温で２回洗浄し、０．１Ｘ ＳＳＣ及び０．５％のＳＤＳで４２℃にて更に２回洗浄することが挙げられる。
用語「組み換え」は、例えば細胞、あるいは核酸、タンパク質、又はベクターを関連して使用する場合、非相同的な核酸、又はタンパク質を導入することで、あるいはネイティブな核酸、又はタンパク質を変更することで改質された細胞、核酸、タンパク質、又はベクターを指し、あるいはそのように改変された細胞から誘導された細胞を指す。したがって、例えば、組み換え細胞は、ネイティブな（非組み換え型）形態の細胞で見られる遺伝子を発現することができるものであり、あるいはネイティブな遺伝子を過剰発現しても、低発現しても、又は全く発現しなくてもよい。
本明細書で使用するとき、細胞に関連する用語「形質転換した」、「安定的に形質転換した」又は「トランスジェニック」は、細胞がそのゲノムに組み込まれた非ネイティブ（非相同）な核酸配列を有すること、あるいは多世代を通して維持されるエピソームプラスミドを有することを意味する。
本明細書で使用するとき、用語「発現」は、遺伝子の核酸配列に基づきポリペプチドが産生されるプロセスを指す。プロセスには転写及び翻訳の両方を包含する。
核酸配列を細胞内に挿入する文脈において、用語「導入された（introduced）」は、「形質移入」又は「形質転換」又は「形質導入」を意味し、核酸配列を真核細胞、又は原核細胞に組み込むことへの参照を包含し、ここで、核酸配列は、細胞のゲノム（例えば、染色体、プラスミド、プラスチド、又はミトコンドリアＤＮＡ）に組み込み、自己複製レプリコンに変換すること、又は一過性に発現させる（例えば、ｍＲＮＡの形質移入）ことができる。
それにともない、用語「ＢＧＬ１発現」は、ｂｇｌ１遺伝子、又はそれらの変異体の転写及び翻訳を指し、転写及び翻訳産物には、前駆体ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ポリペプチド、翻訳後修飾ポリペプチド、及びトリコデルマ・コニンギ（Trichoderma koningii）、ヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）（トリコデルマ・ロンギブラキアタム（Trichoderma longibrachiatum）、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）、又はトリコデルマ・ビリデ（Trichoderma viride）としても既知）、及びヒポクレア・シュワイニッチィー（Hypocrea schweinitzii）などの関連種由来のＢＧＬ１を含む、誘導体が包含される。ＢＧＬ１発現に関するアッセイの例としては、ＢＧＬ１タンパク質のウェスタンブロット及びＨＰＬＣ、ｂｇｌ１ ｍＲＮＡのノーザンブロット解析及び逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイがあげられる。
用語「選択的スプライシング」は、単一遺伝子から多数のポリペプチドのアイソフォームを生成するプロセスを指し、遺伝子の、転写物すべてではなく一部を加工する際に、不連続的なエクソンを一緒にスプライシングすることを包含する。したがって、特定のエクソンを、いくつかの選択的なエクソンのうちの任意の一つと連結して、メッセンジャーＲＮＡを生成する場合もある。選択的にスプライシングされたｍＲＮＡは、一部の部分は共通であるが、他の部分が異なるポリペプチド（「スプライス変異体」）を産生する。
用語「シグナル配列」は、成熟型のタンパク質を細胞外に分泌するのを促進する、タンパク質のＮ−末端部分のアミノ酸配列を指す。成熟型の細胞外タンパク質には、分泌プロセス時に切断されたシグナル配列は存在しない。
本開示に使用するための宿主細胞は、大腸菌などの原核細胞、又は酵母、植物、昆虫、両生類、又は哺乳類細胞などの真核細胞であり得る。
用語「糸状菌」は、当業者により認識される任意の及び全ての糸状菌を意味する。好ましい真菌は、アスペルギルス（Aspergillus）、トリコデルマ（Trichoderma）、フザリウム（Fusarium）、クリソスポリウム（Chrysosporium）、ペニシリウム（Penicillium）、ヒュミコラ（Humicola）、ニューロスポラ（Neurospora）、又は選択的有性形態のエメリセラ（Emericella）、ヒポクレアからなる群から選択される。無性の産業用真菌トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）は子嚢菌類のヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）のクローン誘導体であることがこれまでに例証されてきた（Ｋｕｈｌｓら、ＰＮＡＳ，９３：７７５５〜７７６０，１９９６を参照されたい）。
用語「セロオリゴ糖」は、２〜８個のグルコース単位を含有し、かつβ−１，４結合を有する、オリゴ糖群、例えばセロビオースを指す。
用語「セルラーゼ」、「セルロース分解酵素」又は「セルラーゼ酵素」は、セルロースポリマーをより短いセロ−オリゴ糖オリゴマー、セロビオース及び／又はグルコースへと加水分解することのできる分類の酵素を指す。エキソグルカナーゼ、エキソセロビオヒドロラーゼ、エンドグルカナーゼ、及びグルコシダーゼなどのセルラーゼの例が、セルロース分解性微生物、特に真菌、植物及びバクテリアから多数得られている。これらの微生物から製造された酵素は、セルロースをグルコースに変換するのに有用な３種の作用を持つタンパク質混合物（エンドグルカナーゼ（ＥＧ）、セロビオヒドロラーゼ（ＣＢＨ）、及びβ−グルコシダーゼ）である。これらの３種の異なる種類のセルラーゼ酵素は、相乗的に作用して、セルロースをその誘導体であるグルコースへと変換する。
本明細書で使用するとき、用語「β−グルコシダーゼ活性」は、セロビオース、ラミナリビオース、又はパラ−ニトロフェノール−β−Ｄ−グルコースなどのβ−Ｄ−グルコシド基質の加水分解を触媒して、β−Ｄ−グルコースを放出させることのできるポリペプチドを指すものである。例えば、β−グルコシダーゼ及びそれらの活性変異体は、セロオリゴ糖（例えば、セロビオース、セロトリオース、及びセロテトラオース）からグルコースモノマーを放出することができる。β−グルコシダーゼ活性は、限定するものではないが例としてパラ−ニトロフェニル−β−Ｄ−グルコピラノシドが挙げられる合成グルコシド基質を加水分解させて、グルコース及びパラ−ニトロフェノールを産生させることで、あるいはセロビオースを加水分解させて、グルコースを２分子産生させることで検出できる。例えば、β−グルコシダーゼ活性は、アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の存在下でのセロビアーゼ活性、又はＣＣ加水分解活性のいずれかを測定することにより、判定することができる。
木材腐朽菌トリコデルマ（Trichoderma）、堆肥微生物サーモモノスポラ（Thermomonospora）、バチルス（Bacillus）、及びセルロモナス（Cellulomonas）；ストレプトマイセス（Streptomyces）；及び真菌ヒュミコラ（Humicola）、アスペルギルス（Aspergillus）、クリソスポリウム（Chrysosporium）及びフザリウム（Fusarium）などの多くの微生物は、セルロースを加水分解する酵素を産生する。
本明細書で使用するとき、用語「セルロース結合ドメイン」は、セルラーゼのアミノ酸配列の一部、すなわち酵素のうちの、セルラーゼ、又はそれらの誘導体のセルロース結合活性に関与する領域を指す。セルロース結合ドメインは、概してセルラーゼと、セルロース、セルロース誘導体、又はそれらの他の多糖等価物とを非共有的に結合させるよう機能する。セルロース結合ドメインは、構造的に異なる触媒コア領域によりセルロース繊維を加水分解させ、又は加水分解を促進させるものであり、典型的には触媒コアとは独立して機能する。したがって、セルロース結合ドメインは、触媒コアに起因するような有意な加水分解活性を保有しない。言い換えれば、セルロース結合ドメインは、セルラーゼ酵素タンパク質の立体構造の構造要素であり、触媒活性を保有している構造要素とは区別される。セルロース結合ドメイン及びセルロース結合モジュールは、本明細書において同義的に使用され得る。
本明細書で使用するとき、用語「界面活性剤」は、当該技術分野で、界面活性の品質を有するものとして一般に認識されている任意の化合物を指す。したがって、例えば、界面活性剤には、洗剤中に一般的に見られるアニオン性、カチオン性及び非イオン性界面活性剤が含まれる。アニオン性界面活性剤としては、直鎖、又は分枝鎖アルキルベンゼンスルホネート；直鎖、又は分枝鎖アルキル基、又はアルケニル基を有する、アルキル、又はアルケニルエーテルスルフェート；アルキル、又はアルケニルスルフェート；オレフィンスルホネート；及びアルカンスルホネートが挙げられる。両性界面活性剤としては、第四級アンモニウム塩スルホネート、及びベタイン型両性界面活性剤が挙げられる。このような両性界面活性剤は、正及び負に帯電している基の両方を同一の分子内に有する。非イオン性界面活性剤は、ポリオキシアルキレンエーテル、並びに高級脂肪酸アルカノールアミド、又はそれらのアルキレンオキシド付加化合物、脂肪酸グリセリンモノエステル、及び同様物などが含まれ得る。
本明細書で使用するとき、用語「セルロース含有布」は、任意の縫製した布地及び未縫製の布地、天然セルロース及び合成セルロース（例えば、黄麻、亜麻、カラムシ、レーヨン、及びリオセル）を含む、綿含有若しくは綿非含有セルロース、又は綿含有若しくは綿不含有セルロースブレンドからなる糸、又は繊維を指す。
本明細書で使用するとき、用語「綿含有布」は、縫製した布地及び未縫製の布地、あるいは綿織布、綿編み物、綿製デニム、綿糸、未加工の綿及び同様物を含む高純度の綿、又は綿ブレンドからなる糸、又は繊維を指す。
本明細書で使用するとき、用語「ストーンウォッシュ組成物」は、セルロース含有布をストーンウォッシュするために使用する製剤を指す。ストーンウォッシュ組成物は、販売前に、すなわち、製造プロセス時にセルロース含有布を改良するために使用される。対照的に、洗剤組成物は、汚れた衣類を洗浄することを目的とするものであり、製造プロセス時には使用されない。
本明細書で使用するとき、用語「洗剤組成物」は、汚れたセルロース含有布を洗濯するための洗浄媒質に使用することを目的とする混合物を指す。本開示の文脈において、このような組成物には、セルラーゼ及び界面活性剤に加えて、追加の加水分解酵素、ビルダー、漂白剤、漂白活性化剤、青味剤（bluing agents）及び蛍光染料、ケーキング防止剤、マスキング剤、セルラーゼ活性化剤、抗酸化剤、及び可溶化剤を包含させてもよい。
本明細書で使用するとき、用語「ｂｇｌ１遺伝子の発現を減少させる、又は除去する」は、ｂｇｌ１遺伝子がゲノムから欠失していて、そのため組み換え宿主微生物により発現させることができないこと、又はｂｇｌ１酵素が宿主微生物により産生されなくなるように、若しくは未改変のＢＧＬ１遺伝子、又は転写物と比較して有意に濃度が低くなるようにｂｇｌ１遺伝子、又は転写物が改変されていること、を意味する。
用語「変異型ｂｇｌ１遺伝子」は、コード配列から除去する、コード配列に加える、及び／又はコード配列を操作することにより、ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）由来のｂｇｌ１遺伝子の核酸配列が変更されていることを意味する。
本明細書で使用するとき、用語「活性」及び「生物学的な活性」は、特定のタンパク質と関連付けられる生物活性を指し、本明細書において互換的に使用される。例えば、プロテアーゼに関連付けられる酵素活性はタンパク質分解であり、ひいては活性プロテアーゼはタンパク質分解活性を有する。それにともない、所定のタンパク質の生物活性とは、当業者により典型的に所定のタンパク質に帰属される任意の生物活性を指す。
本明細書で使用するとき、用語「豊富に含む（enriched）」は、ＢＧＬ１などのβ−グルコシダーゼの濃度が、野生型で見られる、又は天然に生じる真菌性セルラーゼ組成物で見られるＢＧＬ１濃度と比較して、高いことを意味する。用語「豊富に含ませた（enriched）」、「上昇した（elevated）」及び「増加した（enhanced）」は、本明細書において同義的に使用され得る。
野生型真菌セルラーゼ組成物は、天然に生じる真菌供給源により産生され、ＢＧＬ、ＣＢＨ及びＥＧ成分を１つ以上含むものであり、これらの成分のそれぞれは、真菌供給源により産生される比で見られる。したがって、ＢＧＬ１を豊富に含ませた組成物とは、他のセルラーゼ成分（すなわち、ＥＧ、ＣＢＨ及び他のエンドグルカナーゼ）に対するＢＧＬ１比が上昇するよう比率を変更させてＢＧＬ１を含むものである。この比は、ＢＧＬ１を増加させること、又は他の成分のうちの少なくとも１つを当該技術分野において既知である任意の手段により減少させる（又は除去する）ことのいずれかにより増加できる。
本明細書で使用するとき、用語「単離した」又は「精製した」は、天然に関連付けられる少なくとも１種の成分から取り出した、核酸、又はアミノ酸を指す。本開示の目的に関し、「単離した」は、ライブラリ（例えば、スクリーニングライブラリ）の一部ではない核酸、又はアミノ酸を指す。
したがって、例えば、天然に生じるセルラーゼ系は、好適なｐＨでのイオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、及び分子ふるいなどが挙げられる、論文でよく公開されている、広く認識されている分離技術により、実質的に純粋な成分へと精製することができる。例えば、イオン交換クロマトグラフィー（通常、アニオン交換クロマトグラフィー）では、ｐＨ勾配、又は塩勾配を用い、あるいはｐＨ勾配及び塩勾配の両方を用い溶出することで、セルラーゼ成分を分離することが可能である。次いで精製ＢＧＬ１を酵素溶液に加えることでＢＧＬ１を豊富に含む溶液が得られる。分子遺伝学的手法を用い、場合によっては、他のセルラーゼをコードしている遺伝子を１つ以上欠失させることと組み合わせて、ＢＧＬ１をコードしている遺伝子を過剰発現させることで、微生物により産生されるＢＧＬ１の量を増加させることも可能である。
真菌セルラーゼは、β−グルコシダーゼ成分を１種以上含有し得る。概して、異なる成分は異なる等電点を有することから、それらはイオン交換クロマトグラフィーなどにより分離することができる。単独のＢＧＬ１、又はＢＧＬ１成分の混合物の、いずれも酵素溶液に使用してよい。
酵素溶液に採用するとき、概して、ＢＧＬ１変異体成分は、可溶性の糖を最高率でバイオマスから放出させるのに十分な量で添加する。添加するＢＧＬ１変異体成分の量は、糖化させるバイオマスの種類によって異なり、当業者により容易に決定することができる。組成物中に存在するＢＧＬ１変異体成分の合計タンパク質の重量％は好ましくは０．１〜１００重量％であり、例示的には約０．１重量％、好ましくは約０．５重量％、１重量％、好ましくは約５重量％、好ましくは約１０重量％、好ましくは約１５重量％、又は好ましくは約２０重量％から、好ましくは約２５重量％、好ましくは約３０重量％、好ましくは約３５重量％、好ましくは約４０重量％、好ましくは約４５重量％、又は好ましくは約５０重量％までである。更に、好ましい範囲は約０．５〜約１５重量％、約０．５〜約２０重量％、約１〜約１０重量％、約１〜約１５重量％、約１〜約２０重量％、約１〜約２５重量％、約５〜約２０重量％、約５〜約２５重量％、約５〜約３０重量％、約５〜約３５重量％、約５〜約４０重量％、約５〜約４５重量％、約５〜約５０重量％、約１０〜約２０重量％、約１０〜約２５重量％、約１０〜約３０重量％、約１０〜約３５重量％、約１０〜約４０重量％、約１０〜約４５重量％、約１０〜約５０重量％、約１５〜約６０重量％、約１５〜約６５重量％、約１５〜約７０重量％、約１５〜約７５重量％、約１５〜約８０重量％、約１５〜約８５重量％、約１５〜約９５重量％であり得る。しかしながら、使用されるとき、セルラーゼ組成物中に存在する任意の（ＥＧ又はＣＢＨ型）酵素成分に対する、ＢＧＬ１変異体成分の重量％は、好ましくは約１重量％、好ましくは約５重量％、好ましくは約１０重量％、好ましくは約１５重量％、又は好ましくは約２０重量％から好ましくは約２５重量％、好ましくは約３０重量％、好ましくは約３５重量％、好ましくは約４０重量％、好ましくは約４５重量％、又は好ましくは約５０重量％までである。更に、好ましい範囲は約０．５〜約１５重量％、約０．５〜約２０重量％、約１〜約１０重量％、約１〜約１５重量％、約１〜約２０重量％、約１〜約２５重量％、約５〜約２０重量％、約５〜約２５重量％、約５〜約３０重量％、約５〜約３５重量％、約５〜約４０重量％、約５〜約４５重量％、約５〜約５０重量％、約１０〜約２０重量％、約１０〜約２５重量％、約１０〜約３０重量％、約１０〜約３５重量％、約１０〜約４０重量％、約１０〜約４５重量％、約１０〜約５０重量％、約１５〜約２０重量％、約１５〜約２５重量％、約１５〜約３０重量％、約１５〜約３５重量％、約１５〜約４０重量％、約１５〜約４５重量％、約１５〜約５０重量％であり得る。
組成物の一部としての、ＢＧＬ１変異体成分の重量％（合計タンパク質含量の重量％）は、好ましくは０．１〜１００重量％であり、例示的には約０．１重量％、好ましくは約０．５重量％、１重量％、好ましくは約５重量％、好ましくは約１０重量％、好ましくは約１５重量％、又は好ましくは約２０重量％から、好ましくは約２５重量％、好ましくは約３０重量％、好ましくは約３５重量％、好ましくは約４０重量％、好ましくは約４５重量％、又は好ましくは約５０重量％までである。更に、好ましい範囲は約０．５〜約１５重量％、約０．５〜約２０重量％、約１〜約１０重量％、約１〜約１５重量％、約１〜約２０重量％、約１〜約２５重量％、約５〜約２０重量％、約５〜約２５重量％、約５〜約３０重量％、約５〜約３５重量％、約５〜約４０重量％、約５〜約４５重量％、約５〜約５０重量％、約１０〜約２０重量％、約１０〜約２５重量％、約１０〜約３０重量％、約１０〜約３５重量％、約１０〜約４０重量％、約１０〜約４５重量％、約１０〜約５０重量％、約１５〜約６０重量％、約１５〜約６５重量％、約１５〜約７０重量％、約１５〜約７５重量％、約１５〜約８０重量％、約１５〜約８５重量％、約１５〜約９５重量％であり得る。しかしながら、使用されるとき、セルラーゼ組成物中に存在する任意の（ＥＧ又はＣＢＨ型）酵素成分に対する、ＢＧＬ１変異体成分の重量％は、好ましくは約１重量％、好ましくは約５重量％、好ましくは約１０重量％、好ましくは約１５重量％、又は好ましくは約２０重量％から好ましくは約２５重量％、好ましくは約３０重量％、好ましくは約３５重量％、好ましくは約４０重量％、好ましくは約４５重量％、又は好ましくは約５０重量％までである。更に、好ましい範囲は約０．５〜約１５重量％、約０．５〜約２０重量％、約１〜約１０重量％、約１〜約１５重量％、約１〜約２０重量％、約１〜約２５重量％、約５〜約２０重量％、約５〜約２５重量％、約５〜約３０重量％、約５〜約３５重量％、約５〜約４０重量％、約５〜約４５重量％、約５〜約５０重量％、約１０〜約２０重量％、約１０〜約２５重量％、約１０〜約３０重量％、約１０〜約３５重量％、約１０〜約４０重量％、約１０〜約４５重量％、約１０〜約５０重量％、約１５〜約２０重量％、約１５〜約２５重量％、約１５〜約３０重量％、約１５〜約３５重量％、約１５〜約４０重量％、約１５〜約４５重量％、約１５〜約５０重量％であり得る。
ＩＩ．ＢＧＬ１変異体
本発明は、とりわけ、野生型ＢＧＬ１よりも様々な活性が改良されたヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）変異体を提供する。改良される活性の例としては、限定するものではないが、（ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、（ｂ）セロビアーゼ活性、（ｃ）タンパク質発現、（ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の存在下でのセロビアーゼ活性、又は本明細書に記載の条件下でのＣＣ加水分解活性のいずれかで測定されるβ−グルコシダーゼ活性、（ｅ）６６℃での熱安定性、（ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、及び（ｇ）グルコース存在下での加水分解活性、が挙げられる。
一部の態様では、ＢＧＬ１変異体は単一置換を有する。他の態様では、ＢＧＬ１変異体は置換を２つ以上有する。他の態様では、ＢＧＬ１変異体は置換を２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個以上有する。これらの態様のうちいずれかのものでは、ＢＧＬ１変異体は、異なる活性及び活性の組み合わせを有し得る。
一部の態様では、単一置換を有するＢＧＬ１変異体は、（ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、（ｂ）セロビアーゼ活性、（ｃ）タンパク質発現、（ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の存在下でのセロビアーゼ活性、又は本明細書に記載されるようなＣＣ加水分解活性のいずれかにより測定されるβ−グルコシダーゼ活性、（ｅ）熱安定性、（ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、及び（ｇ）グルコース存在下での加水分解活性などの活性のうち、少なくとも２つの活性（２つの活性も含む）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良されている。
一部の態様では、単一置換を有するＢＧＬ１変異体は、少なくとも３つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されており、少なくとも４つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されされており、少なくとも５つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されされており、少なくとも６つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されされており、又は少なくとも７つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されている。
他の態様では、２つ以上の置換を含むＢＧＬ１変異体は、（ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、（ｂ）セロビアーゼ活性、（ｃ）タンパク質発現、（ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の存在下でのセロビアーゼ活性、又は本明細書に記載の方法によるＣＣ加水分解活性のいずれかにより測定されるβ−グルコシダーゼ活性、（ｅ）６６℃での熱安定性、（ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、及び（ｇ）グルコース存在下での加水分解活性などの活性のうち、少なくとも２つの活性（２つの活性も含む）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良されている。
他の態様では、置換の組み合わせを有するＢＧＬ１変異体は、少なくとも３つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されており、少なくとも４つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されされており、少なくとも５つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されされており、少なくとも６つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されされており、又は少なくとも７つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良されている。
したがって、一態様では、本発明は、（ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、（ｂ）セロビアーゼ活性、（ｃ）タンパク質発現、（ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の存在下でのセロビアーゼ活性、又はＣＣ加水分解活性のいずれかにより測定される、β−グルコシダーゼ活性（ｅ）熱安定性、（ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、及び（ｇ）グルコース存在下での加水分解活性からなる群から選択される少なくとも２つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良された、β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）変異体も提供し、ＢＧＬ１変異体は、表４−８、３−２、４−２、及び４−３に示す任意の変異体である。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｌ２６６Ａ、Ｉ５６７Ｅ、Ｓ２８３Ｆ、Ｓ２８３Ｐ、Ｔ２５８Ｅ、Ｔ２５８Ｉ、Ｔ２５８Ｋ、Ｔ２５８Ｑ、Ｐ５３６Ｔ、Ｐ５３６Ｗ、Ｉ５３２Ｙ、Ｙ５３０Ｔ、Ｐ６０７Ｄ、Ｑ４０６Ｍ、Ｑ４０６Ｓ、Ｖ６０２Ｔ、Ｇ３００Ｍ、Ａ６３０Ｓ、Ａ６３０Ｔ、Ｔ１８０Ｈ、Ｔ１８０Ｍ、Ａ４５０Ｍ、Ｉ４４４Ｅ、Ｉ４４４Ｆ、Ｉ４４４Ｎ、Ｉ４４４Ｗ、Ｉ４４４Ｙ、Ｖ５００Ｑ、Ａ６３３Ｉ、Ｓ４８２Ｐ、Ａ６６７Ｖ、Ａ４８５Ｌ、Ａ４８５Ｗ、Ｙ６７８Ｒ、Ｖ６０３Ｇ、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｆ２６０Ｗ、Ｙ５３０Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ａ６３０Ｙ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、活性（ｂ）及び（ｄ）の組み合わせが、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｐ６０７Ｈ、Ｔ０１１Ｅ、Ｔ０１１Ｙ、Ｎ１４６Ｅ、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、活性（ｂ）及び（ｅ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｎ２６１Ｃ、Ｔ２５８Ｃ、Ｆ３９２Ｑ、Ｓ６２４Ｅ、Ｐ６０７Ｃ、Ｐ６０４Ｍ、Ａ３７７Ｑ、Ｎ４６１Ａ、Ｎ４６１Ｆ、Ｎ４６１Ｐ、Ｔ４３６Ａ、Ｔ４３６Ｃ、Ｔ４３６Ｆ、Ｔ４３６Ｉ、Ｔ４３６Ｍ、Ｔ４３６Ｑ、Ｔ４３６Ｙ、Ｑ２２０Ｃ、Ａ６５５Ｌ、Ｔ６４６Ｈ、Ｙ６７８Ｆ、Ａ４６８Ｉ、Ｄ１７７Ｍ、Ｐ６６１Ｅ、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｔ４３６Ｅ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｗ、Ｙ５３０Ｆ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｅ１７０Ｆ、Ｓ５０７Ｇ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、活性（ｂ）及び（ｆ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｉ５６７Ｑ、Ａ５６５Ｆ、Ａ５６５Ｋ、Ａ５６５Ｑ、Ａ５６５Ｖ、Ｆ５５６Ｅ、Ｆ２６０Ｉ、Ｐ６０７Ｅ、Ｇ６０５Ｒ、Ｇ３００Ｃ、Ａ３７７Ｃ、Ａ３７７Ｄ、Ｓ３０８Ｃ、Ｎ１４６Ｈ、Ｎ１４６Ｓ、Ａ６５５Ｃ、Ａ６５５Ｇ、Ｐ１７６Ｌ、Ｔ２０９Ｉ、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ａ５６５Ｃ、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｙ６３９Ｖ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ｅ１７０Ｆ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、活性（ａ）及び（ｂ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｉ５６７Ｋ、Ｉ５６７Ｒ、Ａ５６５Ｅ、Ａ５６５Ｓ、Ａ５６５Ｙ、Ｆ３９２Ｙ、Ｑ４０６Ｈ、Ｑ４０６Ｔ、Ｐ６０４Ｃ、Ｎ０３８Ｆ、Ｔ５６８Ａ、Ｎ４６１Ｇ、Ｙ６３９Ｌ、Ｙ６３９Ｍ、Ｔ２４３Ａ、Ｔ２４３Ｃ、Ｑ２４５Ｈ、Ｑ２４５Ｍ、Ｑ２４５Ｔ、Ｔ６４６Ａ、Ｔ６４６Ｃ、Ｉ６７１Ｆ、Ｉ６７１Ｌ、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ａ５６５Ｃ、Ｙ６３９Ｇ、Ｙ５３０Ｆ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、Ｓ５０７Ｇ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、活性（ｂ）及び（ｃ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｉ５６７Ｓ、Ｇ６０６Ｅ、Ｇ６０６Ｈ、Ｇ６０６Ｎ、Ｇ６０６Ｓ、Ｌ２９３Ａ、Ｓ３０８Ｒ、Ｉ４４４Ｃ、Ｍ２０１Ｄ、Ｒ５４２Ｎ、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ｎ５６６Ｆ、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ｓ６９２Ｌ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、活性（ａ）及び（ｄ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｌ２６６Ｆ、Ｉ５６７Ｙ、Ａ２７０Ｒ、Ｓ３８４Ｃ、Ａ６３０Ｗ、Ｅ１２８Ｒ、Ｎ１４６Ｍ、Ｎ１４６Ｖ、Ｎ１４６Ｗ、Ｌ１８１Ｆ、Ｖ０４３Ｃ、Ｙ６３９Ｐ、Ｓ５０７Ｆ、Ｑ２４５Ｐ、Ｇ６６２Ｃ、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｐ６０７Ｆ、Ａ６３０Ｙ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６５５Ｄ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、活性（ｅ）及び（ｇ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｎ２６１Ｅ、Ｎ２６１Ｋ、Ｎ４００Ａ、Ｖ６０２Ｋ、Ｌ２９３Ｉ、Ｎ４６１Ｓ、Ｄ４５７Ａ、Ｖ０４３Ｑ、Ｑ３０３Ｎ、Ｋ３２０Ｓ、Ｇ６６２Ｄ、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ａ６０１Ｄ、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｄ５６４Ｔ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６５５Ｄ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、活性（ｃ）及び（ｅ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
ＢＧＬ１変異体（例えば、Ｎ５６６Ｌ、Ｎ５６６Ｐ、Ｎ５６６Ｗ、Ａ２７０Ｋ、Ａ２７０Ｎ、Ｆ５５６Ｈ、Ｆ５５６Ｋ、Ｐ６０４Ｎ、Ｎ４６１Ｄ、Ｎ４６３Ｅ、Ｋ２０６Ｇ、Ａ４６８Ｑ、Ａ４６８Ｙ、Ｎ５６６Ｆ、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ａ４６８Ｔ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｅ１７０Ｆ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、活性（ａ）及び（ｆ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｓ２８３Ｄ、Ａ２７０Ｄ、Ｎ１４６Ｙ、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ａ５６５Ｃ、Ｋ２０６Ｓ、Ｄ５６４Ｔ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、活性（ａ）及び（ｃ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｆ５５６Ｇ、Ｆ２６０Ｓ、Ｐ６０４Ｅ、Ｐ６０４Ｖ、Ｎ１４６Ｄ、Ｙ６３９Ｔ、Ｔ２２１Ｃ、Ｎ４７３Ｓ、Ｎ５８３Ｒ、Ｒ６４５Ｇ、Ｇ６６２Ｙ、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｓ６９２Ｌ、Ｄ５６４Ｔ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｔ５６８Ｅ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、活性（ａ）及び（ｅ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｄ２５９Ｓ、Ｔ２４３Ｖ、Ｙ５３０Ｆ、Ａ３３８Ｄ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、活性（ｃ）及び（ｄ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｓ５５０Ｑ、Ｐ６０７Ｒ、Ｎ４００Ｑ、Ｖ６０２Ｆ、Ａ６０１Ｇ、Ａ６０１Ｌ、Ｌ２９３Ｋ、Ｙ５７５Ｃ、Ｙ５７５Ｒ、Ａ４５０Ｑ、Ｉ４８６Ｃ、Ｉ４８６Ｙ、Ａ６５５Ｓ、Ｑ２４５Ｆ、Ｄ３２９Ａ、Ｐ５３６Ｇ、Ｐ６０７Ｑ、Ａ６５５Ｑ、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｓ６９２Ｌ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ａ３３８Ｄ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、活性（ｄ）及び（ｅ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｐ５３６Ｆ、Ｆ３９２Ｃ、Ｓ６２４Ｌ、Ｓ６２４Ｒ、Ｓ６２４Ｗ、Ｉ４８６Ｆ、Ｉ４８６Ｗ、Ａ６６７Ｇ、Ａ６６７Ｓ、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｎ５６６Ｆ、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｗ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、活性（ｄ）及び（ｆ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｓ３８４Ｇ、Ｓ３８４Ｗ、Ｎ０３８Ｅ、Ｎ０３８Ｍ、Ｎ０３８Ｐ、Ｖ０４３Ｈ、Ｖ０４３Ｗ、Ｙ０６８Ｅ、Ｙ０６８Ｇ、Ｙ０６８Ｍ、Ｌ１１０Ｃ、Ｌ１１０Ｇ、Ｌ１１０Ｑ、Ｌ１１０Ｗ、Ａ６５５Ｈ、Ｎ２６４Ｌ、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｙ６３９Ｇ、Ｋ２０６Ｓ、Ａ６５５Ｄ、又はＳ５０７Ｇを含む変異体）は、活性（ｃ）及び（ｇ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｇ６０６Ｄ、Ｙ０６８Ｖ、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ｆ２６０Ｗ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、活性（ｄ）及び（ｇ）を有し得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ３７７Ｉ、Ｎ４６１Ｙ、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ｔ４３６Ｅ、Ｙ６３９Ｇ、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ｙ６３９Ｖ、Ｆ２６０Ｗ、Ｐ６０７Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、Ｅ１７０Ｆ、Ｓ５０７Ｇ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、活性（ｂ）及び（ｇ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｋ２０６Ｄ、Ａ６０１Ｄ、Ｙ５３０Ｆ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｓ５０７Ｇ、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋを含む変異体）は、活性（ｃ）及び（ｆ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ４６８Ｇ、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ａ６０１Ｄ、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、活性（ｅ）及び（ｆ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
加えて、ＢＧＬ１変異体は、少なくとも３つの活性を野生型ＢＧＬ１よりも改良することができる。例えば、一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、Ｎ４５５Ｄを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る一方で、他方（例えば、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｗ、Ｙ５３０Ｆ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、（ｂ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ｄ５６４Ｔ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、（ａ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る一方で、他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６５５Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｎ５６６Ｆ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、（ａ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｅ１７０Ｆ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ５６５Ｃ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｐ５３６Ｇ、Ｐ６０７Ｑ、Ａ６５５Ｑ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ａ６３０Ｙ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、（ｂ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。更に他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、（ｂ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ６０１Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋを含む変異体）は、（ｃ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、（ａ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ｐ６０７Ｆ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、（ｂ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、変異体はＳ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、又はＡ６５５Ｄを含む）は、（ｃ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｔ４３６Ｅ、Ｆ２６０Ｗ、Ｅ１７０Ｆ、Ｓ５０７Ｇ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、（ｂ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｙ６３９Ｇ、Ｐ６０７Ｆ、Ａ６５５Ｄ、又はＳ５０７Ｇを含む変異体）は、（ｂ）、（ｃ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｔ５６８Ｅ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｋ２０６Ｓ、又はＰ６０７Ｆを含む変異体）は、（ａ）、（ｃ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ｆ２６０Ｗ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ａ６３０Ｙ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、（ｂ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ４６８Ｔ、Ｅ１７０Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、（ａ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｓ６９２Ｌ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、（ａ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る一方で、他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｙ６３９Ｖ）は、（ａ）、（ｂ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、又はＳ６８３Ｗを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、又はＮ４００Ｓを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｆ２６０Ｗ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｙ５３０Ｆを含む変異体）は、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｐ６０７Ｆを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。一部のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｔ５６８Ｅ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｓ３０８Ｅを含む変異体）は、（ａ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ６３０Ｙ、又はＬ２９３Ｆを含む変異体）は、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ６５５Ｄを含む変異体）は、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｅ１７０Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ３３８Ｄ、又はＦ２６０Ｌを含む変異体）は、（ａ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｓ５０７Ｇを含む変異体）は、活性（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、又はＧ６６２Ｆを含む変異体）は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｆ２６０Ｌを含む変異体）は、活性（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ｌ２９３Ｆを含む変異体）は、活性（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）及び（ｇ）が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。他のＢＧＬ１変異体（例えば、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄを含む変異体）は、活性（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良され得る。
一態様では、好適なＢＧＬ１変異体は、次のもの：Ｌ２６６Ｙ、Ｉ５６７Ｓ、Ａ２７０Ｄ、Ｓ５５０Ｄ、Ｔ２５８Ｓ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｙ５３０Ｆ、Ｓ６２４Ｎ、Ｐ６０７Ｑ、Ｇ６０６Ｍ、Ｑ４０６Ｈ、Ｎ４００Ｑ、Ｇ３００Ｍ、Ｎ０３８Ｌ、Ｎ０３８Ｍ、Ａ６０１Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ｔ５６８Ｋ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ｎ４６１Ｄ、Ｎ１４６Ｄ、Ａ４５０Ｅ、Ｖ０４３Ｌ、Ｑ２２０Ａ、Ａ６５５Ｑ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｌ、Ａ４８５Ｔ、Ｋ２０６Ａ、又はＹ６７８Ｑのうちのいずれかであり得る。
本発明は、（ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、（ｂ）セロビアーゼ活性、（ｃ）タンパク質発現、（ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシの穂軸（ＣＣ）の加水分解活性により測定される、β−グリコシダーゼ活性、（ｅ）熱安定性、（ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、並びに（ｇ）グルコース存在下での加水分解活性からなる群から選択される少なくとも２つの活性が、野生型ＢＧＬ１よりも改良された、ＢＧＬ１変異体も提供し、ＢＧＬ１変異体は、表５−１の置換を２つ以上含む。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｃ）が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ、Ｄ１７８Ｋ｜Ａ３３８Ｋ｜Ｓ４７４Ｄ｜Ｇ６６２Ｌ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、及びＤ１７８Ｎ｜Ｎ２６４Ｋ｜Ａ３３８Ｄ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｋ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｆ）が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ２１５Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ、及びＱ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、及びＬ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｅ）及び（ｇ）が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜、Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｆ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｆ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｆ｜Ｒ２６５Ｍ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｔ２８２Ｉ｜Ｓ３１２Ｄ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｑ２１６Ｉ｜Ｔ２８２Ｋ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ａ６２２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ、Ａ３４７Ｙ｜Ｒ５４２Ｎ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｆ）が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｅ）が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｅ）が改良され、置換が、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｇ）が改良され、置換が、Ｅ１７０Ｆ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｓ３１２Ｙ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｇ）が改良され、置換が、Ｄ１７８Ｉ｜Ｑ３０３Ｅ｜Ａ３３８Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、及びＬ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｄ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７８Ｎ｜Ｎ２６４Ｋ｜Ａ３３８Ｄ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｋ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、置換が、Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２ＤＥ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｆ）及び（ｇ）のうちの任意の２つ、任意の３つ、又は４つすべてから選択され、る活性が改良され、置換が、Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、活性（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、置換が、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、及びＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、置換が、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ３つ、４つ、５つ、又は６つの活性が改良され、置換が、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの活性が改良され、置換が、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
他の態様では、本発明は、野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は７つの活性が改良され、置換が、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃである、上記及び本明細書全体にわたって記載されるような、ＢＧＬ１変異体を提供する。
ＩＩＩ．セルラーゼ
セルラーゼは、セルロース（β−１，４−グルカン、又はβＤ−グルコシド結合）を加水分解して、グルコース、セロビオース、セロオリゴ糖及び同様物を産生する酵素として当該技術分野において既知である。上記に説明されるように、セルラーゼは、慣習的に３つの主要な部類：エンドグルカナーゼ（ＥＣ ３．２．１．４）（「ＥＧ」）、エキソグルカナーゼ、又はセロビオヒドロラーゼ（ＥＣ ３．２．１．９１）（「ＣＢＨ」）及びβ−グルコシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．２１）（「ＢＧ」）に分類される。
特定の真菌は、エキソ−セロビオヒドロラーゼ、又はＣＢＨ型セルラーゼ、エンドグルカナーゼ、又はＥＧ型セルラーゼ、及びβ−グルコシダーゼ、又はＢＧ型セルラーゼを含む、全セルラーゼ系を産生する。しかしながら、時として、これらの系はＣＢＨ型セルラーゼ及び微生物セルラーゼを含まず、また、典型的にはＣＢＨ型セルラーゼをほとんど、又は全く含まない。加えて、ＥＧ成分及びＣＢＨ成分は、相乗的に相互作用して、セルロースをより効率的に分解することが示されてきた。異なる成分、すなわち多成分、又は全セルラーゼ系中の様々なエンドグルカナーゼ及びエキソセロビオヒドロラーゼは、概して異なる特性（例えば等電点、分子量、グリコシル化度、基質特異性及び酵素の作用様式）を有する。
エンドグルカナーゼ型セルラーゼは、セルロースの結晶化度の低い領域において、内部のβ−１，４−グルコシド結合を加水分解し、エキソ−セロビオヒドロラーゼ型セルラーゼは、セルロースの還元、又は非還元末端からセロビオースを加水分解すると考えられている。それにともない、エンドグルカナーゼ成分を作用させることで、エキソ−セロビオヒドロラーゼ成分により認識される新しい鎖末端が作り出され、エキソ−セロビオヒドロラーゼの作用を非常に促進することができる。更に、β−グルコシダーゼ型セルラーゼは、メチルβ−Ｄ−グルコシド及びｐ−ニトロフェニルグルコシドなどのアルキル及び／又はアリールβ−Ｄ−グルコシド、並びにセロビオースなどの炭水化物のみを含有しているグリコシドの加水分解を触媒することが示されている。この加水分解は、微生物に関する唯一の産物としてグルコースを生成し、セロビオヒドロラーゼ及びエンドグルカナーゼを阻害するセロビオースを減少させ、又は除去する。
セルラーゼは、洗剤組成物での様々な使用法も見出されており、例えば、柔軟化剤として洗浄能力を増加させる、及び綿布の肌触りをよくするなどのための使用が挙げられる（Ｈｅｍｍｐｅｌ，ＩＴＢ Ｄｙｅｉｎｇ／Ｐｒｉｎｔｉｎｇ／Ｆｉｎｉｓｈｉｎｇ ３：５〜１４，１９９１；Ｔｙｎｄａｌｌ，Ｔｅｘｔｉｌｅ Ｃｈｅｍｉｓｔ ａｎｄ Ｃｏｌｏｒｉｓｔ ２４：２３〜２６，１９９２；及びＫｕｍａｒら、Ｔｅｘｔｉｌｅ Ｃｈｅｍｉｓｔ ａｎｄ Ｃｏｌｏｒｉｓｔ，２９：３７〜４２，１９９７）。この機構は本開示の一部ではないが、セルラーゼの柔軟化及び色復元特性は、米国特許第５，６４８，２６３号、第５，６９１，１７８号、及び第５，７７６，７５７号に例示されるように、セルラーゼ組成物中のアルカリエンドグルカナーゼ成分に起因すると考えられ、これらの特許は、このような成分を豊富に含むものではないセルラーゼ組成物と比較して、被処理衣類の色を復元しかつ柔軟化を改善する、特定のアルカリエンドグルカナーゼ成分を豊富に含む、セルラーゼ組成物を含有する洗剤組成物を開示する。加えて、洗剤組成物にこのようなアルカリエンドグルカナーゼ成分を使用することで、洗剤組成物のｐＨ要件を補うことが示されてきた（例えば、米国特許第５，６４８，２６３号、第５，６９１，１７８号、及び第５，７７６，７５７号で記載されるように、ｐＨ ７．５〜１０のアルカリ条件で最大活性を呈する）。
セルラーゼ組成物は、綿含有布を分解して、布地の強度の低下を減少させることで（米国特許第４，８２２，５１６号）、商業的洗剤用途でのセルラーゼ組成物の使用を不本意なものにする一因となることも示されてきた。エンドグルカナーゼ成分を含むセルラーゼ組成物は、全セルラーゼ系を含む組成物と比較して、綿含有布の強度低下の減少を呈すると示唆されている。
セルラーゼは、餌添加物として使用する（国際公開第９１／０４６７３号）ための及び穀物の湿式ミリングに使用するための、機械的なパルプの処理時に、セルラーゼバイオマスをエタノールへと分解させる（この場合、セルラーゼがセルロースをグルコースへと分解し、酵母、又は他の微生物がグルコースをエタノールへと更に発酵させる）のに有用であることも示されている（Ｐｅｒｅら、Ｉｎ Ｐｒｏｃ．Ｔａｐｐｉ Ｐｕｌｐｉｎｇ Ｃｏｎｆ．，Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，Ｔｅｎｎ．，２７〜３１，ｐｐ．６９３〜６９６，１９９６）。
ほとんどのＣＢＨ及びＥＧは、リンカーペプチドによりセルロース結合ドメイン（ＣＢＤ）から分離されるコアドメインからなる、多ドメイン構造を有する（Ｓｕｕｒｎａｋｋｉら、２０００）。コアドメインは、活性部位を含有するのに対して、ＣＢＤは酵素をセルロースに結合させることで、セルロースと相互作用する（ｖａｎ Ｔｉｌｂｅｕｒｇｈら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２０４：２２３〜２２７，１９８６；Ｔｏｍｍｅら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７０：５７５〜５８１，１９８８）。ＣＢＤは、結晶質セルロースの加水分解に特に重要である。セロビオヒドロラーゼの結晶質セルロース分解能は、ＣＢＤが存在しない場合に明確に低下することが示されてきた（Ｌｉｎｄｅｒ及びＴｅｅｒｉ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５７：１５〜２８，１９９７）。しかしながらＣＢＤの正確な役割及び作用機構は未だに推測の域を出ない。ＣＢＤは、単にセルロース表面の有効酵素濃度を上昇させることで（Ｓｔａｈｌｂｅｒｇら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．９：２８６〜２９０，１９９１）、及び／又は、セルロース表面からセルロース単鎖を緩めることで（Ｔｏｒｍｏら、ＥＭＢＯ Ｊ．ｖｏｌ．１５，ｎｏ．２１，ｐｐ．５７３９〜５７５１，１９９６）、酵素活性を増加させることが示唆された。パパインによる限定的タンパク質分解によってコアタンパク質を容易に生成できることから、異なる基質に対するセルラーゼドメインの効果に関するほとんどの研究は、セロビオヒドロラーゼのコアタンパク質を用いて実施されてきた（Ｔｏｍｍｅら、１９８８）。多数のセルラーゼが科学文献に記載されており、例えば、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）由来のセルラーゼに関する文献としては、Ｓｈｏｅｍａｋｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１：６９１〜６９６，１９８３（ＣＢＨ１を記載する）；Ｔｅｅｒｉら、Ｇｅｎｅ，５１：４３〜５２，１９８７（ＢＧＬ１を記載する）が挙げられる。トリコデルマ（Trichoderma）以外の種由来のセルラーゼも記載されてきた。例えば、Ｏｏｉら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１８（１９）１９９０は、アスペルギルス・アキュリタス（Aspergillus aculeatus）により産生されるエンドグルカナーゼＦ１−ＣＭＣをコードしているｃＤＮＡ配列を開示している；Ｋａｗａｇｕｃｈｉら、Ｇｅｎｅ，１７３：２８７〜８，１９９６は、アスペルギルス・アキュリタス（Aspergillus aculeatus）のβ−グルコシダーゼ１をコードしているｃＤＮＡのクローン化及び配列決定を開示している；Ｓａｋａｍｏｔｏら、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．２７：４３５〜４３９，１９９５は、アスペルギルス・カワチ（Aspergillus kawachii）ＩＦＯ ４３０８のエンドグルカナーゼＣＭＣａｓｅ−１をコードしているｃＤＮＡ配列を開示している；Ｓａａｒｉｌａｈｔｉら、Ｇｅｎｅ，９０：９〜１４，１９９０は、エルウィニア・カロトボーラ（Erwinia carotovara）のエンドグルカナーゼを開示している；Ｓｐｉｌｌｉａｅｒｔら、Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２４：９２３〜３０，１９９４は、海産性好熱性細菌（Rhodothermus marinus）の熱安定性のβ−グルカナーゼをコードしているｂｇｌＡのクローン化及び配列決定を開示している；並びにＨａｌｌｄｏｒｓｄｏｔｔｉｒら、Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，４９：２７７〜８４，１９９８は、グリコシルヒドロラーゼファミリー１２の熱安定性セルラーゼをコードしている海産性好熱性細菌（Rhodothermus marinus）遺伝子のクローン化、配列決定及び過剰発現を開示している。しかしながら、熱ストレス条件下、又は界面活性剤の存在下での性能の改善、特定の活性の向上、基質分解パターンの変更、及び／又はインビトロでの高発現などのように、特性が改善された新規のセルラーゼを同定及び特徴付けすることが未だに必要とされている。
様々な量のＣＢＨ型、ＥＧ型及びＢＧ型セルラーゼを含む新しいかつ改良されたセルラーゼ組成物の進展は、（１）柔軟剤として機能する及び／又は綿布の肌触りをよくする（例えば、「ストーンウォッシング（stone washing）」又は「バイオポリッシング（biopolishing）」）などの洗浄性能の改良を呈する洗剤組成物、（２）木材パルプ、又は他のバイオマスを糖へと分解するための組成物（例えば、バイオ燃料を産生するため）、並びに／あるいは、（３）餌組成物に使用することを対象とする。
同様に、β−グルコシダーゼ変異体を１種以上含む酵素ブレンドも提供する。特定の態様では、酵素ブレンドは、β−グルコシダーゼ変異体を１種以上と、全セルラーゼを含む。本明細書で使用するとき、「全セルラーゼ」は、天然に生じる及び非天然に生じるセルラーゼを含有しており、少なくとも２種の異なる酵素型：（１）内部のβ−１，４結合を切断してより短いグルコオリゴ糖を生じる、エンドグルカナーゼ、（２）「エキソ」様式に作用してセロビオースユニット（β−１，４グルコース−グルコース二糖）を放出させる、セロビオヒドロラーゼ、並びに所望により（３）短鎖セロオリゴ糖（例えば、セロビオース）からグルコースモノマーを放出する、β−グルコシダーゼ、を含む組成物の両方を指す。
「天然に生じる」組成物は、天然に生じる供給源により産生されるものであり、セロビオヒドロラーゼ型を１種以上、エンドグルカナーゼ型を１種以上、及びβ−グルコシダーゼ成分を１種以上を含み、この場合、これらの成分のそれぞれは、供給源により産生される比で見られる。天然に生じる組成物は、セルロース分解性酵素に関して改変されていない微生物により産生されるものであり、成分酵素の比が、ネイティブな微生物により産生されるものと比べて変化していない。「非天然に生じる」組成物は：（１）セルロース分解性酵素成分を、天然に生じる比で、又は非天然に生じる、すなわち変更させた比で組み合わせることで、又は（２）１種以上のセルロース分解性酵素を過剰発現するよう、又は過小発現するよう微生物を改変することで、又は（３）少なくとも１種のセルロース分解性酵素が欠失するよう微生物を改変することで、産生される組成物を包含する。したがって、一部の実施形態では、全セルラーゼ調製物は、１種以上の様々なＥＧ及び／又はＣＢＨを有してよく、並びに／あるいは、β−グルコシダーゼが欠失しており、又は過剰発現している。
本開示では、全セルラーゼ調製物は、セルロース系材料の加水分解に有用な任意の微生物由来のものであり得る。一部の実施形態では、全セルラーゼ調製物は、糸状菌の全セルラーゼである。
一部の実施形態では、全セルラーゼ調製物は、アクレモニウム（Acremonium）、アスペルギルス（Aspergillus）、クリソスポリウム（Chrysosporium）、エメリセラ（Emericella）、フザリウム（Fusarium）、ヒュミコラ（Humicola）、ムコール（Mucor）、マイセリオフトラ（Myceliophthora）、ニューロスポラ、ペニシリウム、スシタリジウム（Scytalidium）、チエラビア（Thielavia）、トリポクラジウム（Tolypocladium）、又はトリコデルマ（Trichoderma）種由来のものであり得る。
一部の実施形態では、全セルラーゼ調製物は、アスペルギルス・アキュリタス（Aspergillus aculeatus）、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス・フォエチダス（Aspergillus foetidus）、アスペルギルス・ジャポニクス（Aspergillus japonicus）、アスペルギルス・ニデュランス（Aspergillus nidulans）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、又はアスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）の全セルラーゼである。別の態様では、全セルラーゼ調製物は、フザリウム・バクトリジオイデス（Fusarium bactridioides）、フザリウム・セレアリス（Fusarium cerealis）、フザリウム・クルックウェレンス（Fusarium crookwellense）、フザリウム・カルモラム（Fusarium culmorum）、フザリウム・グラミネアラム（Fusarium graminearum）、フザリウム・グラミナム（Fusarium graminum）、フザリウム・ヘテロスポラム（Fusarium heterosporum）、フザリウム・ネグンジ（Fusarium negundi）、フザリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporum）、フザリウム・レティクラタム（Fusarium reticulatum）、フザリウム・ロゼウム（Fusarium roseum）、フザリウム・サムブシナム（Fusarium sambucinum）、フザリウム・サルコクロム（Fusarium sarcochroum）、フザリウム・スポロトリキオイド（Fusarium sporotrichioides）、フザリウム・サルフレウム（Fusarium sulphureum）フザリウム・トルロサム（Fusarium torulosum）、フザリウム・トリコテシオイド（Fusarium trichothecioides）、又はフザリウム・ベネナタム（Fusarium venenatum）の全セルラーゼである。別の態様では、全セルラーゼ調製物は、ヒュミコラ・インソレン（Humicola insolens）、ヒュミコラ・ラヌギノサ（Humicola lanuginosa）、ムコール・ミエヘイ（Mucor miehei）、マイセリオフトラ・サーモフィラ（Myceliophthora thermophila）、ニューロスポラ・クラッサ（Neurospora crassa）、ペニシリウム・パープロゲナム（Penicillium purpurogenum）、ペニシリウム・フニクロサム（Penicillium funiculosum）、スシタリジウム・サーモフィラム（Scytalidium thermophilum）、又はチエラビア・テレストリス（Thielavia terrestris）の全セルラーゼである。更に別の態様では、全セルラーゼ調製物は、トリコデルマ・ハルジアナム（Trichoderma harzianum）、トリコデルマ・コニンギ（Trichoderma koningii）、トリコデルマ・ロンギブラキアタム（Trichoderma longibrachiatum）、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）（例えば、ＲＬ−Ｐ３７（Ｓｈｅｉｒ−Ｎｅｉｓｓら、Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０：４６〜５３，１９８４；及びＭｏｎｔｅｎｅｃｏｕｒｔ，Ｃａｎ．，１〜２０，１９８７）、ＱＭ９４１４（ＡＴＣＣ Ｎｏ．２６９２１）、ＮＲＲＬ １５７０９、ＡＴＣＣ １３６３１、５６７６４、５６４６６、５６７６７）、又はトリコデルマ・ビリデ（Trichoderma viride）、例えば、ＡＴＣＣ ３２０９８及び３２０８６の全セルラーゼである。
一部の実施形態では、全セルラーゼ調製物は、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）ＲｕｔＣ３０全セルラーゼであり、この製剤はｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎからトリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）ＡＴＣＣ ５６７６５として入手可能である。一部の実施形態では、全セルラーゼはペニシリウム・フニクロサム（Penicillium funiculosum）のものであり、このセルラーゼはｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎからペニシリウム・フニクロサム（Penicillium funiculosum）ＡＴＣＣ番号：１０４４６として入手可能である。
全セルラーゼ調製物は、供給業者から入手することもできる。本開示での使用に好適な市販のセルラーゼ調製物の例としては、例えば、ＣＥＬＬＵＣＬＡＳＴ（商標）及びＣＥＬＬＩＣ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓから入手可能）、並びにＬＡＭＩＮＥＸ（商標）ＢＧ、ＩＮＤＩＡＧＥ（商標）４４Ｌ、ＰＲＩＭＡＦＡＳＴ（商標）１００、ＰＲＩＭＡＦＡＳＴ（商標）２００、ＳＰＥＺＹＭＥ（商標）ＣＰ、ＡＣＣＥＬＬＥＲＡＳＥ（登録商標）１０００、及びＡＣＣＥＬＬＥＲＡＳＥ（登録商標）１５００（Ｄａｎｉｓｃｏ ＵＳ．Ｉｎｃ．、Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）が挙げられる。
本開示では、全セルラーゼ調製物は、セルロース系材料を加水分解することのできる酵素を発現を生じる、当該技術分野において既知である任意の微生物培養法由来のものであり得る。発酵は、フラスコ振盪培養法、セルラーゼを発現させる、又は単離するような好適な培地及び条件下で、実験室用発酵槽、又は工業用発酵槽での、連続式、バッチ、フェドバッチ、又は固体状態での発酵などといった、小規模、又は大規模発酵、を指す。
概して、微生物は、セルロース系材料を加水分解することのできる酵素の産生に好適な細胞培養培地で培養される。培養は、当該技術分野において既知の手順を用いて、炭素源及び窒素源並びに無機塩を含む好適な培養液中で行なわれる。増殖及びセルラーゼ産生に好適な培地、温度範囲及び他の条件が当該技術分野において既知である。非限定例として、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）がセルラーゼを産生する通常の温度範囲は、２４℃〜２８℃である。
概して、全セルラーゼ調製物は、全く若しくはほとんど回収及び／又は精製せずに、発酵により産生されたものとして使用される。例えば、細胞により細胞培養培地にセルラーゼが分泌されたならば、このセルラーゼを含有している細胞培養培地を使用することができる。一部の実施形態では、全セルラーゼ調製物は、馴化培地（cell culture medium）、細胞外酵素及び細胞を含む、発酵材料の未分画の内容物を含み得る。別の方法としては、全セルラーゼ調製物は、任意の都合の良い方法により、例えば、沈殿、遠心沈降、親和性、濾過、又は当該技術分野において既知である任意の他の方法により加工することができる。一部の実施形態では、全セルラーゼ調製物は、例えば、濃縮することができ、次いで更に精製せずに使用することができる。一部の実施形態では、全セルラーゼ調製物は、細胞生存率を低下させ、すなわち細胞を死滅させる化学剤を含む。一部の実施形態では、当該技術分野において既知の方法を用い、細胞を溶解させ、又は透過処理する。
全セルラーゼ調製物のエンドグルカナーゼ活性は、基質としてカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を用い測定することができる。全セルラーゼ活性の測定は、ＣＭＣ活性の観点から測定される。この方法は、酵素混合物がＣＭＣに対して作用することで生成される、還元末端の産生を測定し、ここで、１ユニットは１μｍｏｌ生成物／分を遊離する酵素量である（Ｇｈｏｓｅ，Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，Ｐｕｒｅ Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．，５９：２５７〜２６８，１９８７）。
特定の態様では、セルラーゼはβ−グルコシダーゼを豊富に含むセルラーゼである。β−グルコシダーゼは、概してβ−グルコシダーゼを含む全セルラーゼ、並びに全セルラーゼ調製物を増強させる。しかしながら、β−グルコシダーゼを増強した全セルラーゼ組成物は組み換え法により産生できることと理解される。例えば、微生物にβ−グルコシダーゼを発現させることで全セルラーゼを製造できる。一部の実施形態では、β−グルコシダーゼを増強した全セルラーゼ組成物は、全セルラーゼ調製物及びβ−グルコシダーゼを含む。特定の実施形態では、β−グルコシダーゼを増強した全セルラーゼ組成物は、タンパク質重量に基づいて少なくとも５重量％、少なくとも７重量％、少なくとも１０重量％、少なくとも１５重量％、又は少なくとも２０重量％及び最大で２５重量％、３０重量％、３５％、最大で４０重量％、又は最大で５０重量％のβ−グルコシダーゼを含む。
ＩＶ．ＢＧＬ１変異体核酸配列の製造方法
一部の実施形態では、本開示は、糸状菌内で機能するプロモーターの制御下での、ＢＧＬ１変異体遺伝子の発現を提供する。したがって、本開示は、遺伝子組み換え分野の通例技術を用いるものである（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ ｅｄ．，１９８９；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１９９０；及びＡｕｓｕｂｅｌら編、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４を参照されたい）。変異を導入することのできる、当該技術分野において既知の任意の方法が、本開示により想到されている。
本開示は、ＢＧＬ１変異体の発現、精製及び／又は単離、並びに使用に関する。これらの酵素は、好ましくは、ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）由来のｂｇｌ１遺伝子を用いる組み換え法により調製される。発酵ブロスは、精製して、又は精製せずに使用してよい。
ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）由来のｂｇｌ１遺伝子を単離及びクローニングした後、部位特異的変異誘導などの当該技術分野において既知の他の方法を使用して、発現させたｂｇｌ１変異体中の置換されたアミノ酸に相当する置換、付加、又は欠失を作製することができる。再度、部位特異的変異誘導、及び発現するタンパク質にアミノ酸変化をＤＮＡレベルで導入する他の方法は、当該技術分野において既知である（上掲Ｓａｍｂｒｏｏｋら；及び上掲Ａｕｓｕｂｅｌら）。
ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）ＢＧＬ１のアミノ酸配列変異体をコードするＤＮＡは、当該技術分野において既知の様々な方法で調製できる。これらの方法としては、限定するものではないが、部位特異的（又はオリゴヌクレオチド介在型）変異誘導、変異導入ＰＣＲ、及びより早期に調製された、ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）ＢＧＬ１をコードするＤＮＡの変異導入カセットが挙げられる。
部位特異的変異誘導は、置換変異体を調製するのに好ましい方法である。この技術は当該技術分野において周知である（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：４４３１〜４４４３，１９８５；及びＫｕｎｋｅｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：４８８；１９８７を参照されたい）。簡潔に言えば、ＤＮＡの部位特異的変異誘導を実行するにあたり、最初に、所望の変異をコードしているオリゴヌクレオチドを、開始ＤＮＡの一本鎖にハイブリダイズさせることで、開始ＤＮＡを変質させる。ハイブリダイズ後、ハイブリダイズさせたオリゴヌクレオチドをプライマーとして用い、かつ開始ＤＮＡの一本鎖をテンプレートとして用い、ＤＮＡポリメラーゼを使用して完全な２本鎖を合成する。したがって、所望の変異をコードしているオリゴヌクレオチドが、得られる二本鎖ＤＮＡに組み込まれることになる。
変異導入ＰＣＲも、開始ポリペプチド、すなわち、ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）ＢＧＬ１のアミノ酸配列変異体を製造するのに好適である（例えば、Ｈｉｇｕｃｈｉ，ｉｎ ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｐｐ．１７７〜１８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９０；Ｖａｌｌｅｔｔｅら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：７２３〜７３３，１９８９；及びＣａｄｗｅｌｌら、ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２：２８〜３３，１９９２を参照されたい）。簡潔に言えば、ＰＣＲで出発物質として使用されるテンプレートＤＮＡの量が少量である場合、テンプレートＤＮＡ中の相当する領域の配列とわずかに異なるプライマーを使用することで、テンプレートとは異なる部位のみが、テンプレート配列と異なる、特定のＤＮＡ断片を比較的多量に生成することができる。
変異体、変異導入カセットを製造するための他の方法は、Ｗｅｌｌｓら、Ｇｅｎｅ ３４：３１５〜３２３，１９８５に記載される技術に基づくものである。出発物質は、変異導入させる開始ポリペプチドＤＮＡを含む、プラスミド（又は他のベクター）である。変異導入される開始ＤＮＡのコドン（１つ又は複数）を同定する。ここで、制限エンドヌクレアーゼ部位は、同定される変異部位（１つ又は複数）のそれぞれに唯一のもので無くてはならない。このような制限部位が存在しない場合、制限部位は、上記のオリゴヌクレオチド介在型変異誘導法を用いることで、開始ポリペプチドＤＮＡ中の適切な位置に導入することができる。プラスミドＤＮＡはこれらの部位で切断され、直線化される。制限部位間のＤＮＡ配列をコードしているが、所望の変異（１つ又は複数）を含有している二本鎖オリゴヌクレオチドを、標準法を用い合成する。この場合、オリゴヌクレオチド２本鎖は、別個に合成し、次いで標準技術を用い互いにハイブリダイズさせる。この二本鎖オリゴヌクレオチドをカセットとして参照する。このカセットは、直線化させたプラスミドの末端と適合性があり、プラスミドと直接ライゲーションさせることができるような５’及び３’末端を有するよう、設計されている。このプラスミドは、変異を導入したＤＮＡ配列を含有することになる。
別の方法としては、又は加えて、ＢＧＬ１変異体をコードしている所望のアミノ酸配列を決定して、このような変異体のアミノ酸配列変異体をコードしている核酸配列を、合成により生成することができる。
このように調製したＢＧＬ１（１種又は複数種）変異体を、多くの場合、セルラーゼの使用目的に基づいて、更に改変することができる。このような改質には、更に、アミノ酸配列の変更、非相同的なポリペプチド（１種又は複数種）との融合及び／又は共有結合修飾が包含される。
Ｖ．ｂｇｌ１核酸及びＢＧＬ１ポリペプチド
Ａ．ｂｇｌ１変異体核酸
野生型ｂｇｌ１の核酸配列を配列番号１で示す。本開示は、本明細書に記載のβ−グルコシダーゼ変異体をコードしている核酸分子を包含する。核酸は、ＤＮＡ分子であり得る。更に、本開示は、少なくとも約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０、１５００、１５５０、１６００、１６５０、１７００、１７５０、１８００、１８５０、１９００、１９５０、２０００個、又はそれ以上の残基にわたって、本明細書に記載のβ−グルコシダーゼ変異体をコードしている核酸配列と、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％；８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％以上の、又は完全な（１００％）配列相同性を有する、核酸配列を含む、単離された核酸、合成核酸、又は組み換え核酸を提供する。
本開示は、本開示の核酸、又はこれらの下位配列を含む発現カセットを提供する。一態様では、発現カセットは、プロモーターと制御可能なように連結された核酸を含み得る。プロモーターは、真菌、ウイルス、微生物、哺乳類、又は植物のプロモーターであってよい。プロモーターは、常時発現型プロモーター、又は誘導発現型プロモーターであり得る。一態様では、プロモーターは糸状菌、例えば、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）で発現させることができる。特定の実施形態では、プロモーターは糸状菌に由来し、例えば、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）セロビオヒドロラーゼＩ（「ＣＢＨＩ」）遺伝子プロモーターである。
本開示は、本開示の核酸、又は本開示の発現カセットを発現するよう遺伝子操作された組み換え細胞（例えば、宿主細胞）を提供する。特定の態様では、組み換え細胞は、バクテリア細胞、哺乳類細胞、真菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、又は植物細胞である。特定の態様では、組み換え細胞は、糸状菌細胞である。
本開示は、本開示の核酸、又は本開示の発現カセットを含むトランスジェニック植物を提供する。
ＢＧＬ１変異体をコードするＤＮＡ配列をＤＮＡコンストラクトにクローン化した後、このＤＮＡを使用して微生物を形質転換させる。本開示に従って、ｂｇｌ１変異体を発現させる目的で形質転換させる微生物には、トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．から誘導される株を有利に含み得る。したがって、本開示に従って、ＢＧＬ１セルラーゼ変異体を調製するのに好ましい様式には、ＢＧＬ１変異体の一部、又はすべてをコードしているＤＮＡフラグメントを少なくとも含むＤＮＡコンストラクトで、トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．宿主細胞を形質転換させることを含む。ＤＮＡコンストラクトは、概してプロモーターと機能的に連結される。次に、形質転換させた宿主細胞を、所望のタンパク質を発現するような条件下で増殖させる。続いて、所望のタンパク質産物を、実質的に均一になるよう精製してもよい。
しかしながら、実際の所、ＢＧＬ１変異体をコードしている所定のＤＮＡに最良の発現ビヒクル（expression vehicle）は、ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）とは異なる場合がある。したがって、ＢＧＬ１変異体に関し、元となる微生物と系統的に類似である形質転換体宿主で、タンパク質を発現させるのが、最も有利である場合がある。代替的な実施形態では、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）を発現ビヒクルとして使用できる。アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）を用いる形質転換法に関する説明については、国際公開第９８／３１８２１号を参照されたい（この開示は、参照により全体が組み込まれる）。
したがって、アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐｐ．発現系に関する本記述は、例示目的のためにのみ提供され、本開示のＢＧＬ１変異体を発現させるための１つの選択肢である。しかしながら、当業者は、適切とされるならば、ＢＧＬ１変異体をコードしているＤＮＡを異なる宿主細胞で発現させる傾向がある場合があり、ＢＧＬ１変異体の供給源は最適な発現宿主を決定するにあたり考慮すべきであることは理解すべきである。加えて、当該技術分野の当業者は、当該技術分野で利用することのできるツールを用い、所定の技法により、特定の遺伝子に最良の発現系を選択することができる。
Ｂ．ＢＧＬ１変異体ポリペプチド
本開示は、少なくとも約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０個、又はそれ以上の残基にわたって、あるいは未成熟なポリペプチドの全長、又は成熟ポリペプチドの全長にわたって、β−グルコシダーゼ変異体のポリペプチド配列と、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上の、又は完全な（１００％）配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された、合成、又は組み換えポリペプチドを提供する。
本開示のβ−グルコシダーゼ変異体は、ＢＧＬ１前駆体のアミノ酸配列から誘導されるアミノ酸配列を有する。前駆体のアミノ酸配列中の１個以上のアミノ酸が置換、欠失、又は挿入されていることから、ＢＧＬ１変異体のアミノ酸配列は、ＢＧＬ１前駆体のアミノ酸配列とは異なる。好ましい実施形態では、ＢＧＬ１前駆体はヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）ＢＧＬ１である。ヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）ＢＧＬ１の成熟アミノ酸配列を実施例２に示す（配列番号３）。したがって、本開示は、ヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）ＢＧＬ１に特に同定される残基に相当する位置にアミノ酸残基を含有している、ＢＧＬ１変異体を目的とする。ヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）ＢＧＬ１の残基の特定の残基、又は一部の残基と相同である（すなわち、一次構造、又は立体構造のいずれかの位置で対応する）か、あるいは機能的に類似している（すなわち、結合、反応、又は化学的相互作用若しくは構造的相互作用をするための同様の、又は類似の機能的能力を有する）かのいずれかである場合、ＢＧＬ１の相同体の残基（アミノ酸）は、ヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）ＢＧＬ１の残基と等価である。本明細書で使用するとき、番号付与は、ＢＧＬ１の成熟アミノ酸配列（配列番号３）に相当させたものであることが意図される。
相同性を判断するためのアミノ酸配列のアラインメントは、好ましくは「配列比較アルゴリズム」を用い判断される。比較に最適な配列のアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局地的相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントのアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法により、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ＧｅｎｅｔｉｃｓのソフトウェアパッケージのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）のコンピュータ制御された実装により、又は視覚的な比較により、実施することができる。視覚的な比較には、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（Ｍｏｎｔｒｅａｌ Ｃａｎａｄａ）のＭＯＥなどの画像処理パッケージを利用してもよい。
配列類似性を判断するのに好適なアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである。このアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０（１９９０）に記載される。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）により公的に入手可能である。このアルゴリズムは、まず始めに、データベース配列中の同じ長さのワードとアライメントさせた場合に、クエリー配列中の、何らかの正に値付けされた閾値スコアＴと一致するか、又は基準を満たす長さＷの短い配列を同定することで、ＨＳＰ（high scoring sequence pairs）を同定することを包含する。これらの最初に隣接するワードは、ヒットすると、それらのワードを含有しているより長いＨＳＰを発見するための開始点として機能する。ワードのヒットは、累積アライメントスコアが増加し得る限り、比較される２つの配列の各々の両方向に向かって進められる。ヒットするワードの延長は、累積アライメントスコアが、得られる最大の値から、数量Ｘだけ落ち込んだ場合、累積スコアが０以下になった場合、又はいずれかの配列が末端に達した場合に停止される。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ、及びＸは、アライメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴプログラムは、ワード長（Ｗ）１１、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５，１９８９を参照されたい）アラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ’５、Ｎ’−４、及び両鎖の比較をデフォルトとして使用する。
次に、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは２つの配列間の類似性について統計解析を実施する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３〜５７８７，１９９３を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムより提供される類似性測定法のうちの一つは、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、この確率は、２つのヌクレオチド配列、又はアミノ酸配列間に偶然一致が生じ得る確率の指標になる。例えば、アミノ酸配列は、試験アミノ酸配列と、プロテアーゼアミノ酸配列とを比較した場合に、最も少ない合計確率（sum probability）が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、及び最も好ましくは約０．００１未満であるプロテアーゼと類似するとみなすことができる。
本開示の目的に関し、相同性の程度は、当業者に既知のコンピュータープログラム手法により、例えばＧＣＧプログラムパッケージ（Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８，Ａｕｇｕｓｔ １９９４，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．，ＵＳＡ ５３７１１）（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４８，４４３〜４５，１９７０）で提供されるＧＡＰなどにより好適に決定することができる。核酸配列を比較するため、ＧＡＰには次の設定を用いる：ＧＡＰ開始ペナルティ（GAP creation penalty）５．０及びＧＡＰ伸長ペナルティ０．３。
トリコデルマ・リーゼイ（T. reesei）ＢＧＬ１及び他のセルラーゼを構造的にアラインメントさせることで、トリコデルマ・リーゼイ（T. reesei）ＢＧＬ１（配列番号３）と、例えば、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は更には９９％といった、中度〜高度の相同性を有する他のセルラーゼ中の等価な／相当する位置を同定することが出来る。構造アラインメントを得る方法のうちの１つは、ギャップペナルティにデフォルト値、すなわちギャップ開始ペナルティ（gap creation penalty）３．０及びギャップ伸長ペナルティ０．１を用い、ＧＣＧパッケージのＰｉｌｅ Ｕｐプログラムを使用するものである。他の構造アラインメント方法としては、疎水性クラスター解析（Ｇａｂｏｒｉａｕｄら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２２４：１４９〜１５５，１９８７）及びリバーズスレッディング（reverse threading）（Ｈｕｂｅｒ及びＴｏｒｄａ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，７：１４２〜１４９，１９９８）が挙げられる。
成熟型の様々な参照β−グルコシダーゼの例示的なアラインメントを図１として提供する。参照セルラーゼとしては：ＴｒｉｒｅＢＧＬ１，ヒポクレア・ジェコリナ（Hypocrea jecorina）（トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）としても既知）Ｑ１２７１５ β−Ｄ−グルコシドグルコヒドロラーゼ１（配列番号３）；ＨａｎａｎＢｇｌｕ，ハンセヌラ・アノマラ（Hansenula anomala）Ｐ０６８３５ β−グルコシダーゼ（配列番号４）；ＰｉｒｓｐＢｇｌｕ，ピロマイセス（Piromyces）ｓｐ．Ｅ２ Ｑ８７５Ｋ３ β−グルコシダーゼ（配列番号５）；ＣｏｃｉｍＢｇｌｕ，コクシジオイデス・イミチス（Coccidioides immitis）Ｏ１４４２４ β−グルコシダーゼ（配列番号６）；ＳａｃｆｉＢｇｌｕ２，サッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Saccharomycopsis fibuligera）β−グルコシダーゼ２（配列番号７）；ＳａｃｆｉＢｇｌｕ１，サッカロマイコプシス・フィブリゲラ（Saccharomycopsis fibuligera）Ｐ２２５０６ β−グルコシダーゼ１（配列番号８）；ＳｅｐｌｙＢｇｌｕ，セプトリア・リコペルシシ（Septoria lycopersici）Ｑ９９３２４ β−１，２−Ｄ−グルコシダーゼ（配列番号９）；ＫｕｒｃａＢｇｌｕ，クライシアカプシュラタ（Kuraishia capsulata）Ｑ１２６５３ β−グルコシダーゼ（配列番号１０）；ＴｒｉｒｅＢＧＬ７，トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）Ｑ７Ｚ９Ｍ０ β−グルコシダーゼ７（配列番号１１）；ＵｒｏｆａＢｇｌｕ，ウロマイセス・ファバエ（Uromyces fabae）Ｑ７０ＫＱ７ β−グルコシダーゼ（配列番号１２）；ＡｓｐｔｅＢｇｌｕ，アスペルギルス・テレウス（Aspergillus terreus）（ｓｔｒａｉｎ ＮＩＨ ２６２４／ＦＧＳＣ Ａ１１５６）Ｑ０ＣＥＦ３ β−グルコシダーゼ（配列番号１３）；ＣｈａｇｌＢｇｌｕ，ケトミウム・グロボサム（Chaetomium globosum）Ｑ２ＧＺ５４ Ｐｕｔａｔｉｖｅ β−グルコシダーゼ（配列番号１４）；ＴｒｉｒｅＢＧＬ３，トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）Ｑ７Ｚ９Ｍ５ β−グルコシダーゼ３（配列番号１５）；ＰｅｎｂｒＢＧＬ，ペニシリウム・ブラシリアナム（Penicillium brasilianum）ＧＨ３ β−グルコシダーゼ（配列番号１６）；ＰｅｒｓｐＢｇｌｕ，ペリコニア（Periconia）ｓｐ．ＢＣＣ ２８７１ Ａ９ＵＩＧ０ β−グルコシダーゼ（配列番号１７）；ＰｈａａｖＢｇｌｕ，ファエオスファエリア・アベナリア（Phaeosphaeria avenaria）Ｑ９Ｐ８７９ β−グルコシダーゼ（配列番号１８）；ＡｓｐｆｕＢＧＬ，アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus fumigatus）Ｂ０ＸＰＥ１ β−グルコシダーゼ（配列番号１９）；ＡｓｐｏｒＢＧＬ１，アスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）Ｑ２ＵＵＤ６ β−グルコシダーゼ（配列番号２０）；ＡｓｐａｃＢＧＬ１，アスペルギルス・アキュリタス（Aspergillus aculeatus）β−グルコシダーゼ（配列番号２１）；ＡｓｐｎｉＢＧＬ，アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）Ｑ９Ｐ８Ｆ４ β−グルコシダーゼ（配列番号２２）；ＴａｌｅｍＢｇｌｕ，タラロマイセス・エメルソニイ（Talaromyces emersonii）Ｑ８ＴＧＩ８ β−グルコシダーゼ（配列番号２３）；及びＴｈｅａｕＢＧＬ，サーモアスカス・アウレンチアクス（Thermoascus aurentiacus）β−グルコシダーゼ（配列番号２４）が挙げられる。配列は、ＣｌｕｓｔａｌＷ及びＭＵＳＣＬＥ多重配列アラインメントアルゴリズムを用い、アラインメントさせる。図１の配列アラインメントのβ−グルコシダーゼについて同一性（％）を示すマトリクスを表１に提供する。太字で記載される数は、トリコデルマ・リーゼイ（T. reesei）Ｂｇｌ１との同一性（％）を示す。
Figure 2015211678
＊最上列及び左側の欄中の数字は、図１のアラインメントした配列の配列番号に相当する。
（＋）アミノ酸配列が１００％同一であることを示す。
所定の核酸配列を、ＧｅｎＢａｎｋのＤＮＡ配列及び他の公共のデータベース中の核酸配列と比較して評価する場合、配列検索は、典型的にはＢＬＡＳＴＮプログラムを用い実施される。全ての読み枠が翻訳された核酸配列をＧｅｎＢａｎｋのタンパク質配列及び他の公共のデータベース中のアミノ酸配列に対し検索する場合には、ＢＬＡＳＴＸプログラムが好ましい。ＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＸはいずれもデフォルトのパラメータ、すなわちオープンギャップペナルティ（open gap penalty）：１１．０、及びギャップ伸長ペナルティ（extended gap penalty）：１．０を用い、ＢＬＯＳＵＭ−６２マトリックスを使用して実行する。（例えば，Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７を参照されたい）。
ＶＩ．組み換え型ｂｇｌ１変異体の発現
本開示は、更に、（ａ）本開示のβ−グルコシダーゼ変異体を発現するよう遺伝子操作された宿主細胞を培養すること；及び（ｂ）β−グルコシダーゼ変異体を回収すること、の工程を含む、組み換え型β−グルコシダーゼ変異体の製造方法を提供する。工程（ｂ）は、β−グルコシダーゼ変異体を含む発酵ブロスを回収することを必然的に伴う場合があり、及び所望により更に精製工程（１工程及び複数工程）を包含させることもできる。
本開示の方法は、ｂｇｌ１変異体を発現する細胞を使用することによるものであり、必要とされるｂｇｌ１を発現させる方法は特定の方法ではない。ＢＧＬ１変異体は、好ましくは細胞から分泌される。本開示は、ＢＧＬ１変異体をコードしている核酸配列を含む発現ベクターにより形質導入、形質転換、又は形質移入された、宿主細胞を提供する。温度及びｐＨなどの培養条件は、形質導入、形質転換、又は形質移入に先立ち、親宿主細胞に前もって用いられたものであり、当業者には明白なものであろう。
１つのアプローチでは、細胞株でｂｇｌ１変異体が発現されるように、プロモーター、又は生物学的に活性なプロモーター断片、又は宿主細胞株で機能する、ＢＧＬ１変異体をコードしているＤＮＡセグメントに制御可能なように連結された（例えば、一連の）エンハンサーを有する発現カセットにより、糸状菌細胞、又は酵母細胞を形質移入する。
Ａ．核酸コンストラクト／発現ベクター
ＢＧＬ１変異体をコードしている天然、又は合成ポリヌクレオチド断片（「ＢＧＬ１をコードしている核酸配列」）を、糸状菌、又は酵母細胞に導入し及び複製することのできる非相同的な核酸コンストラクト、又はベクターに組み込むことができる。本明細書に開示されるベクター及び方法は、ＢＧＬ１変異体を発現させる宿主細胞に使用するのに好適である。導入された細胞内で複製可能でありかつ実行可能であるならば、任意のベクターを使用することができる。多数の好適なベクター及びプロモーターが当業者に既知であり、市販されている。クローニングベクター及び発現ベクターは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９，Ａｕｓｕｂｅｌ Ｆ Ｍ ら、１９８９、及びＳｔｒａｔｈｅｒｎら、Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｙｅａｓｔ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ，１９８１にも記載されており、これらはそれぞれ、本明細書に参照により明確に組み込まれる。真菌に適した発現ベクターは、ｖａｎ ｄｅｎ Ｈｏｎｄｅｌら、（１９９１）Ｉｎ：Ｂｅｎｎｅｔｔ及びＬａｓｕｒｅ（編）Ｍｏｒｅ Ｇｅｎｅ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｆｕｎｇｉ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．３９６〜４２８に記載されている。適切なＤＮＡ配列を、様々な手法によりプラスミド又はベクター（本明細書において「ベクター」として総称）に挿入することができる。概して、標準法によりＤＮＡ配列を適切な制限エンドヌクレアーゼ部位（１箇所又は複数ヶ所）に挿入する。このような手順及び関連するサブクローニング法は、当業者の認識の範囲内のものであると判断される。
ｂｇｌ１変異体コード配列を含む組み換え糸状菌は、ｂｇｌ１変異体コード配列を含む非相同性の核酸コンストラクトを、糸状菌株から選択された細胞に導入することで作製され得る。
所望される形態のｂｇｌ１変異体核酸配列が得られたならば、様々な方法で改質することができる。非翻訳領域のフランキング領域を包含する配列の場合、フランキング領域を切除すること、及びフランキング領域に変異誘導することなどできる。したがって、天然に生じる配列に対し転移、塩基転換、欠失、及びは挿入を実施することができる。
選択されたｂｇｌ１変異体コード配列は、周知の組み換え法に従って、好適なベクターに挿入し、ｂｇｌ１を発現することのできる糸状菌を形質転換させるために使用することができる。遺伝コードには縮重が固有であることから、実質的に同様の、又は機能的に等価のアミノ酸配列をコードしている他の核酸配列を使用して、ｂｇｌ１変異体をクローン化し、発現させることもできる。したがって、コード領域内のこのような置換も、本開示により網羅される配列変異体の範囲内のものであると認識される。これらの変異体配列の任意の部分及び全てを、本明細書で、ＢＧＬ１をコードしている親核酸配列について記載されるものと同様の方法で使用することができる。
本開示は、上記のような、ＢＧＬ１変異体をコードしている核酸配列を１つ以上含む、組み換え核酸コンストラクトも包含する。コンストラクトは、順方向、又は逆方向で本開示の配列が挿入されたベクター、例えばプラスミド、又はウイルスベクターを含む。
非相同的な核酸コンストラクト、又はベクターは、（ｉ）単離形態で；（ｉｉ）融合タンパク質、又はシグナルペプチドコード配列などの追加のコード配列との組み合わせで（この場合、ｂｇｌ１コード配列は優性コード配列である）；（ｉｉｉ）好適な宿主でコード配列を発現させるのに有効な、プロモーター及びターミネータ領域あるいは５’及び／又は３’非翻訳領域などといった、イントロン及び調節領域などの非コード配列で；並びに／あるいは（ｉｖ）ｂｇｌ１コード配列が非相同的な遺伝子であるようなベクター環境、又は宿主環境で、ｂｇｌ１変異体コード配列を包含し得る。
本開示の一態様では、非相同的な核酸コンストラクトを使用することで、ＢＧＬ１変異体をコードしている核酸配列をインビトロで細胞に移入させる。細胞には樹立糸状菌株及び酵母株が好ましい。ＢＧＬ１変異体が長期間にわたって安定的に発現され、産生されることは好ましい。それにともない、安定な形質転換体を生成するのに有効な任意の方法を使用して、本開示を実施することもできる。
適切なベクターは、典型的には、選択マーカーをコードしている核酸配列、挿入部位、及び好適な調節領域、例えば、プロモーター及びターミネータ配列など、を備える。ベクターは、例えば、宿主細胞で（及び／又は通常、可溶性改変タンパク質抗体コード配列が発現されないベクター若しくは宿主細胞環境で）でコード配列を発現させるのに有効な、コード配列を制御できるよう連結されたイントロン及び調節領域などといった非コード配列、すなわち、プロモーター及びターミネータ領域あるいは５’及び／又は３’非翻訳領域などの制御配列を含み得る。多数の好適なベクター及びプロモーターが当業者に既知であり、そのうちの多くが市販され及び／又はＳａｍｂｒｏｏｋら（上掲）に記載されている。
例示的なプロモーターには、常時発現型プロモーター及び誘導型プロモーターのいずれもが包含され、これらのプロモーターの例としては、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶプロモーター、ＥＦ−１．アルファ．プロモーター、記載されるように（ＣｌｏｎＴｅｃｈ及びＢＡＳＦ）ｔｅｔ−ｏｎ又ｈｔｅｔ−ｏｆｆシステムにテトラサイクリン応答因子（ＴＲＥ）を含有しているプロモーター、βアクチンプロモーター及び特定の金属塩を添加することで上方制御することのできるメタロチオニン（metallothionine）プロモーターが挙げられる。プロモーター配列は、発現を行うために特定の糸状菌により認識されるＤＮＡ配列である。プロモーター配列は、制御可能であるようにＢＧＬ１変異体ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に連結される。このような連結は、開示される発現ベクター中で、ＢＧＬ１変異体ポリペプチドをコードしているＤＮＡ配列の開始コドンに対してプロモーターを配置することを含む。プロモーター配列は、ＢＧＬ１変異体ポリペプチドの発現を介在する、転写及び翻訳制御配列を含有する。例としては、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、アスペルギルス・アワモリ（A. awamori）、又はアスペルギルス・オリザエ（A. oryzae）グルコアミラーゼ、αアミラーゼ、又はαグルコシダーゼコード遺伝子由来のプロモーター；アスペルギルス・ニデュランス（A. nidulans）ｇｐｄＡ、又はｔｒｐＣ遺伝子由来のプロモーター；ニューロスポラ・クラッサ（Neurospora crassa）ｃｂｈ１、又はｔｒｐ１遺伝子由来のプロモーター；アスペルギルス・ニガー（A. niger）、又はリゾムコール・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）アスパラギン酸プロテアーゼコード遺伝子由来のプロモーター；ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）（トリコデルマ・リーゼイ（T. reesei））ｂｇｌ１、ｃｂｈ１、ｃｂｈ２、ｅｇｌ１、ｅｇｌ２、又は他のセルラーゼコード遺伝子由来のプロモーターが挙げられる。
適切な選択マーカーは、宿主細胞に基づき選択され、異なる宿主に対する適切なマーカーは当業者に周知である。典型的な選択可能なマーカー遺伝子としては、アスペルギルス・ニデュランス（A. nidulans）、又はトリコデルマ・リーゼイ（T. reesei）由来のａｒｇＢ、アスペルギルス・ニデュランス（A. nidulans）由来のａｍｄＳ、ニューロスポラ・クラッサ（Neurospora crassa）、又はトリコデルマ・リーゼイ（T. reesei）由来のｐｙｒ４、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、又はアスペルギルス・ニデュランス（A. nidulans）由来のｐｙｒＧが挙げられる。追加的な例示の選択マーカーとしては、限定するものではないが、ｔｒｐ−、ｐｙｒ−、及びｌｅｕ−などの変異株を形質転換するために使用される非相同的な核酸コンストラクトに含有される、ｔｒｐｃ、ｔｒｐ１、ｏｌｉＣ３１、ｎｉａＤ、又はｌｅｕ２が挙げられる。
このような選択マーカーは、通常は糸状菌により代謝されない代謝物を利用する能力を形質転換体に付与する。例えば、酵素アセトアミダーゼをコードする、ヒポクレア・ジェコリナ（H. jecorina）由来のａｍｄＳ遺伝子は、アセトアミドを窒素源として形質転換細胞を増殖させる。選択マーカー（例えばｐｙｒＧ）は、栄養要求性の変異株が選択最少培地で増殖するための能力を復元させる。すなわち、選択マーカー（例えばｏｌｉｃ３１）は、阻害剤、又は抗菌剤の存在下で増殖する能力を形質転換体に付与することができる。
選択マーカーコード配列は、当該技術分野で一般的に使用される方法を用い、任意の好適なプラスミドにクローン化される。例示的なプラスミドとしては、ｐＵＣ１８、ｐＢＲ３２２、ｐＲＡＸ、及びｐＵＣ１００が挙げられる。例えば、ｐＲＡＸプラスミドは、アスペルギルス・ニガー（A. niger）での複製を可能にする、アスペルギルス・ニデュランス（A. nidulans）由来のＡＭＡＬ配列を含有する。
本開示の実施は、別途記載のない限り、当該技術分野の範囲内のものである、分子生物学、微生物学、組み換えＤＮＡ及び免疫学に関する従来技術を使用する。このような技術は、文献中に十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ，１９８７；Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９３；及びＣｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９１を参照されたい。
Ｂ．ＢＧＬ１産生のための宿主細胞及び培養条件
（ｉ）糸状菌
したがって、本開示は、対応する形質転換させていない親真菌と比較して、ＢＧＬ１変異体を産生、又は発現させるのに効果的な方法で、改質され、選択され、培養された細胞を含む糸状菌を提供する。
ＢＧＬ１変異体を発現するよう処理及び／又は改変することのできる親糸状菌種の例としては、限定するものではないが、トリコデルマ（Trichoderma）、例えば、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）、トリコデルマ・ロンギブラキアタム（Trichoderma longibrachiatum）、トリコデルマ・ビリデ（Trichoderma viride）、トリコデルマ・コニンギ（Trichoderma koningii）；ペニシリウム（Penicillium）ｓｐ．、ヒュミコラ・インソレン（Humicola insolens）を含むヒュミコラ（Humicola）ｓｐ．；アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．、クリソスポリウム（Chrysosporium）ｓｐ．、フザリウム（Fusarium）ｓｐ．、ヒポクレア（Hypocrea）ｓｐ．、及びエメリセラ（Emericell）ｓｐが挙げられる。
親真菌株を培養するために典型的に使用される条件下で、ｂｇｌ１発現細胞を培養する。概して、細胞は、Ｐｏｕｒｑｕｉｅ、Ｊ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，Ａｕｂｅｒｔら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．７１〜８６、１９８８及びＩｌｍｅｎら、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６３：１２９８〜１３０６，１９９７に記載されるような、生理塩及び栄養素を含有する標準培地で培養する。培養条件は、標準的なものであり、例えば、培養物は、所望される程度にｂｇｌ１が発現するまで、培養用振盪器（shaker culture）、又は発酵槽で２８℃でインキュベーションされる。
所定の糸状菌に好ましい培養条件は、科学文献中に及び／又はｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／）などの真菌供給元から見出すことができる。真菌の増殖を樹立させた後、細胞を、ｂｇｌ１変異体の発現を引き起こす、又は可能にするのに有効な条件に晒す。
ＢＧＬ１をコードしている配列が、誘導型プロモーターの制御下にあるものである場合、ｂｇｌ１の発現を誘導するのに有効な濃度の誘導剤、例えば、糖、金属塩、又は抗菌剤を培地に添加する。
一実施形態では、株には、タンパク質を過剰発現させるのに有用な株であるアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）を含む。例えば、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）ｖａｒ ａｗａｍｏｒｉ ｄｇｒ２４６は、分泌セルラーゼ量が増加していることが知られている（Ｇｏｅｄｅｇｅｂｕｕｒら、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ（２００２）４１：８９〜９８）。アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）ｖａｒ ａｗａｍｏｒｉの他の株、例えば、ＧＣＤＡＰ３、ＧＣＤＡＰ４及びＧＡＰ３〜４が既知である（Ｗａｒｄら、１９９３，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３９：７３８〜７４３）。
別の実施形態では、株には、タンパク質を過剰発現させるのに有用な株であるトリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）を含む。例えば、Ｓｈｅｉｒ−Ｎｅｉｓｓら、Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：４６〜５３（１９８４）に記載されるＲＬ−Ｐ３７は、セルラーゼ酵素を多量に分泌することが既知である。機能的に等価であるＲＬ−Ｐ３７としては、トリコデルマ・リーゼイ（Trichoderma reesei）株ＲＵＴ−Ｃ３０（ＡＴＣＣ番号５６７６５）及びＱＭ９４１４（ＡＴＣＣ番号２６９２１）が挙げられる。これらの株は、ｂｇｌ１変異体を過剰発現させるのにも有用であることが想到される。
この場合、潜在的に有害なネイティブのセルロース分解活性が存在しないＢＧＬ１変異体を得ることが所望される。ＢＧＬ１変異体をコードするＤＮＡ断片を含有しているＤＮＡコンストラクト又はプラスミドを導入する前に、１つ以上のセルラーゼ遺伝子が欠失しているトリコデルマ宿主細胞株を得ることは有用である。このような株は、米国特許第５，２４６，８５３号及び国際公開第９２／０６２０９号に記載の方法により調製することができる（これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。セルラーゼ遺伝子を１つ以上欠失している宿主微生物でＢＧＬ１変異体セルラーゼを産生させることで、同定及びそれに続く精製手順が単純化される。クローン化されたトリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．の任意の遺伝子、例えば、ｂｇｌ１、ｃｂｈ１、ｃｂｈ２、ｅｇｌ１、及びｅｇｌ２遺伝子を、並びにＥＧ ＩＩＩ及び／又はＥＧ Ｖタンパク質をコードしている遺伝子を欠失させることができる（例えば、それぞれ米国特許第５，４７５，１０１号及び国際公開第９４／２８１１７号を参照されたい）。
遺伝子の欠失は、欠失又は破壊されることが所望される遺伝子を、当該技術分野において既知の方法によりプラスミドに挿入することで実行できる。次に、所望の遺伝子をコードしている領域の内部にある適切な制限酵素認識部位（一箇所又は複数ヶ所）で欠失プラスミドを切断し、遺伝子コード配列、又はその部分を選択マーカーで置換する。選択マーカー遺伝子の両側は残したまま、遺伝子座から隣接するＤＮＡ配列を好ましくは約０．５〜２．０ｋｂ欠失させ、又は破壊する。適切な欠失プラスミドは、概してプラスミド中に固有の制限酵素部位が存在するものであり、これにより、隣接するＤＮＡ配列を含む遺伝子欠失と、単鎖線状遺伝子として除去されることになる選択マーカー遺伝子と、を断片に含有させることができる。
選択マーカーは、形質転換させた微生物の検出を可能にするよう選択しなければならない。選択された微生物で発現させる任意の選択マーカー遺伝子は好適であり得る。例えば、アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．に関しては、選択マーカーは、形質転換体中の選択マーカーの存在が形質転換体に有意な影響を与えることのないように選択される。このような選択マーカーは、解析可能な産物をコードする遺伝子であり得る。例えば、アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．遺伝子の機能的な複製を使用すると、宿主株は、この複製を失った場合に栄養要求性の表現型を示すようになる。同様に、選択マーカーは、トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．にも存在する。
一実施形態では、アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．のｐｙｒＧ−誘導株は、形質転換に選択マーカーを提供するｐｙｒＧ機能性遺伝子で形質転換させる。ｐｙｒＧ−誘導株は、フルオロオロチン酸（ＦＯＡ）耐性のアスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．株を選別することで得られる。ｐｙｒＧ遺伝子は、ウリジンの生合成に必要とされる酵素、オロチジン−５’−リン酸デカルボキシラーゼをコードする。インタクトなｐｙｒＧ遺伝子を持つ株はウリジン欠乏培地で増殖するが、フルオロオロチン酸感受性である。ＦＯＡ耐性について選別することで、機能性のオロチジンリン酸デカルボキシラーゼ酵素が欠損しておりかつ増殖にウリジンを必要とするｐｙｒＧ−誘導株を選別することが可能である。ＦＯＡ選別法を用いることで、機能性のオロト酸ピロホスホリボシル転移酵素（orotate pyrophosphoribosyl transferase）を欠損しているウリジン要求株を得ることもできる。この酵素をコードしている遺伝子の機能性のコピーを用い、これらの細胞を形質転換することができる（Ｂｅｒｇｅｓ及びＢａｒｒｅａｕ，Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．１９：３５９〜３６５，１９９１；並びにｖａｎ Ｈａｒｔｉｎｇｓｖｅｌｄｔら、Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２０６：７１〜７５，１９８６）。誘導株は、上述したＦＯＡ耐性法を用い容易に選別することができ、したがって、ｐｙｒＧ遺伝子は好ましくは選択マーカーとして使用される。
第２の実施例では、形質転換の選択マーカーを提供する機能性ｐｙｒ４遺伝子によりヒポクレア（Hypocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）のｐｙｒ４−誘導株を形質転換させる。ｐｙｒ４−誘導株は、フルオロオロチン酸（ＦＯＡ）耐性のヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）株を選別することで得られる。ｐｙｒ４遺伝子は、ウリジンの生合成に必要とされる酵素、オロチジン−５’−リン酸デカルボキシラーゼをコードする。インタクトなｐｙｒ４遺伝子を持つ株はウリジン欠乏培地で増殖するが、フルオロオロチン酸感受性である。ＦＯＡ耐性について選別することで、機能性のオロチジンリン酸デカルボキシラーゼ酵素が欠損しておりかつ増殖にウリジンを必要とするｐｙｒ４−誘導株を選別することが可能である。ＦＯＡ選別法を用いることで、機能性のオロト酸ピロホスホリボシル転移酵素（orotate pyrophosphoribosyl transferase）を欠損しているウリジン要求株を得ることもできる。これらの細胞を、この酵素をコードしている遺伝子の機能性コピーにより形質転換することができる（Ｂｅｒｇｅｓ ａｎｄ Ｂａｒｒｅａｕ，１９９１）。誘導株は、上述したＦＯＡ耐性法を用い容易に選別することができ、したがって、ｐｙｒ４遺伝子は好ましくは選択マーカーとして使用される。
１つ以上のセルラーゼ遺伝子の発現能が欠損するよう、ｐｙｒＧ−アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．、又はｐｙｒ４−ヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）を形質転換させるため、次に、欠失プラスミドから、セルラーゼ遺伝子を破壊した、又は欠失させた単鎖ＤＮＡ断片を単離し、適切なｐｙｒ−アスペルギルス（Aspergillus）、又はｐｙｒ−トリコデルマ（Trichoderma）宿主への形質転換に用いた。次いで形質転換体を同定し、それぞれｐｙｒＧ、又はｐｙｒ４遺伝子産物の発現能について、ひいては宿主株のウリジン要求性について選別する。次に、適切なｐｙｒ選択マーカーにより遺伝子のゲノムコピーのコード領域の一部、又は全てを欠失させるよう置換する２重クロスオーバー組み換えイベントを同定及び確認するために、得られた形質転換体に対しサザンブロット解析を実施する。
ｐｙｒ−形質転換体の調製には上記の特定のプラスミドベクターが関連するものの、本開示はこれらのベクターに限定されない。上記の技術を用い、アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．、又はヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）株の様々な遺伝子を欠失させ及び置換することができる。加えて、任意の利用可能な選択マーカーを上記のように使用することができる。実際に、任意の宿主、例えば、アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．、又はヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．では、クローン化しひいては同定した遺伝子を、上記のストラテジーを用い、ゲノムから欠失させることができる。
使用する宿主株は、上記のように、選択された選択マーカーに相当する非機能性遺伝子が１つ以上欠失したヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）誘導体であり得る。例えば、ｐｙｒＧの選択マーカーがアスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．を選択するためものであった場合、次に、形質転換手順において特定のｐｙｒＧ−誘導株をレシピエントとして使用する。同様に、例えば、ｐｙｒ４の選択マーカーをヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．のために選択する場合、形質転換手順において特定のｐｙｒ４−誘導株をレシピエントとして使用する。同様に、アスペルギルス・ニデュランス遺伝子ａｍｄＳ、ａｒｇＢ、ｔｒｐＣ、ｎｉａＤに相当するヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）遺伝子を含む選択マーカーを使用することができる。したがって、相当するレシピエント株は、それぞれａｒｇＢ−、ｔｒｐＣ−、ｎｉａＤ−などの誘導株でなくてはならない。
次に、ＢＧＬ１変異体をコードするＤＮＡを調製して、適切な微生物に挿入する。本開示に従って、ＢＧＬ１変異体をコードするＤＮＡは、機能性のセルロース分解活性を有するタンパク質をコードするのに必要とされるＤＮＡを含む。ＢＧＬ１変異体をコードするＤＮＡ断片は、真菌プロモーター配列、例えば、アスペルギルスのｇｌａＡ遺伝子のプロモーター、又はトリコデルマのｃｂｈ１、又はｅｇｌ１遺伝子のプロモーターに機能的に連結させることができる。
ＢＧＬ１変異体をコードするＤＮＡの、１つ以上のコピーを株に組み込み、過剰発現を促進させることもできることも同様に想到される。変異体をコードしているＤＮＡを保有する発現ベクターを構成することで、ＢＧＬ１変異体をコードするＤＮＡを調製できる。ＢＧＬ１変異体をコードするＤＮＡ断片を挿入され、保有している発現ベクターは、所定の宿主微生物中で自己複製することのできる、又は宿主のＤＮＡを組み込むことのできる任意のベクターであってよく、典型的にはプラスミドである。好ましい実施形態では、遺伝子を発現させるための２種類の発現ベクターが想到される。第１のベクターは、配列中のプロモーター、遺伝子コード領域、及び転写ターミネータ配列のすべてが、発現させる遺伝子に由来するものであるＤＮＡ配列を含有する。望ましくないＤＮＡ配列（例えば、不要なドメインをコードしているＤＮＡ配列）を欠失させることで、所望の場所で遺伝子トランケーションを実施し、転写及び翻訳制御配列の制御下でドメインを発現させたままにする。選択マーカーをベクターに含有させることで、宿主への新規遺伝子配列の多様なコピーの組み込みについて選別することも可能になる。
第２のタイプの発現ベクターは、予め組み立てられているものであり、高レベルの転写に必要とされる配列及び選択マーカーを含有する。遺伝子、又はその一部のコード領域が発現カセットプロモーター及びターミネータ配列の転写制御下にあるよう、遺伝子、又はその一部のコード配列を汎用発現ベクターに挿入できることが想到される。
例えば、アスペルギルスでは、ｐＲＡＸはこのような汎用性の発現ベクターである。強力なｇｌａＡプロモーターの下流に遺伝子、又はその一部を挿入することができる。
例えば、ヒポクレアでは、ｐＴＲＥＸはこのような汎用性の発現ベクターである。強力なｃｂｈ１プロモーターの下流に遺伝子、又はその一部を挿入することができる。
ベクター中では、本開示のＢＧＬ１変異体をコードしているＤＮＡ配列は、制御可能であるように転写及び翻訳配列、すなわち、構造遺伝子に対する読み枠中の好適なプロモーター配列及びシグナル配列に連結される。プロモーターは、宿主細胞中で転写活性を示す任意のＤＮＡ配列であってよく、宿主細胞にとって相同の、又は非相同のいずれかであるタンパク質をコードしている遺伝子から誘導され得る。任意選択的なシグナルペプチドにより、ＢＧＬ１変異体は細胞外に産生される。シグナル配列をコードしているＤＮＡは、好ましくは、発現させる遺伝子に天然に関連付けられるものであるが、しかしながら、任意の好適な供給源由来のシグナル配列、例えば、トリコデルマ由来のエキソ−セロビオヒドロラーゼ、又はエンドグルカナーゼが本開示には想到される。プロモーターを用い、本開示のＢＧＬ１変異体をコードしているＤＮＡ配列を連結させ、好適なベクターに挿入するために用いる手順は、当業者に周知である。
形質転換、形質移入、マイクロインジェクション、マイクロポレーション（microporation）、遺伝子銃の撃ち込みなどの既知の技術に従い、上記のＤＮＡベクター、又はコンストラクトを宿主細胞に導入することができる。
好ましい形質転換技術においては、ヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）では、ＤＮＡに対する細胞壁の透過性が非常に低いことを考慮すべきである。したがって、所望のＤＮＡ配列、遺伝子、又は遺伝子断片の取り込みはごく少量である。形質転換プロセスに先立ち、誘導株（すなわち、使用される選択マーカーに相当する機能性遺伝子を欠損している）のヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）の細胞壁の透過性を増加させる、多数の方法が存在する。
特定の環境下では、プラスミドを用い発現させる場合と比較して、染色体に組み込むことにより、高発現、又はより効率的な発現が得られることは理解される。染色体に組み込むことによる発現も本明細書において想到される。
形質転換させるために、アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．、又はヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）を調製する、本開示の好ましい方法には、真菌の菌糸からプロトプラストを調製することを包含する（Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．１６：５３〜５６；１９８９を参照されたい）。菌糸は、出芽させた栄養胞子から得ることができる。細胞壁を消化する酵素（１種又は複数）により菌糸を処理することで、プロトプラストが得られる。次に、懸濁培地に浸透圧安定剤を存在させることでプロトプラストを保護する。これらの安定剤としては、ソルビトール、マンニトール、塩化カリウム、硫酸マグネシウム及び同様物が挙げられる。これらの安定剤の濃度は、通常、０．８Ｍ〜１．２Ｍの間で変化する。懸濁培地に溶解させた約１．２Ｍのソルビトール溶液を使用することが好ましい。
宿主株（アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．、又はヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．））へのＤＮＡの取り込みは、カルシウムイオン濃度に依存する。概して、約１０ｍＭのＣａＣｌ２〜５０ｍＭのＣａＣｌ２が取り込み用溶液に使用される。取り込み用溶液中にカルシウムイオンが必要とされるのに加えて、一般的に含有される他の品目は、ＴＥ緩衝液（１０ＭｍのＴｒｉｓ（ｐＨ ７．４）；１ｍＭのＥＤＴＡ）、又は１０ｍＭのＭＯＰＳ（モルホリノプロパンスルホン酸）緩衝液（ｐＨ ６．０）及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの緩衝系である。ポリエチレングリコールが細胞膜と融合するよう機能し、したがって、培地の内容物が透過し、宿主細胞、例えば、アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．株、又はヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．株のいずれかの細胞質に送達されることで、プラスミドＤＮＡが核に移行されるものと考えられる。この融合は、宿主の染色体に組み込まれたプラスミドＤＮＡの複数のコピーを高頻度に残すことになる。
通常、アスペルギルス（Aspergillus）ｓｐ．プロトプラスト、又は密度１０５〜１０６／ｍＬ、好ましくは２・１０５／ｍＬで透過処理を施した細胞を含有している懸濁液を、形質転換に使用する。同様に、ヒポクレア（Hyprocrea）ｓｐ．（トリコデルマ（Trichoderma）ｓｐ．）プロトプラスト、又は密度１０８〜１０９／ｍＬ、好ましくは１０８／ｍＬで２度透過処理を施した細胞を含有している懸濁液を、形質転換に使用する。適切な溶液（例えば、１．２Ｍのソルビトール；５０ｍＭのＣａＣｌ２）中の、これらのプロトプラスト、又は細胞１００μＬを、所望のＤＮＡと混合させる。概して、高濃度のＰＥＧが取り込み用溶液に加えられる。０．１〜１体積の２５％のＰＥＧ ４０００をプロトプラスト懸濁液に加えることができる。しかしながら、プロトプラスト懸濁液に対し、約０．２５体積で加えることが好ましい。ジメチルスルホキシド、ヘパリン、スペルミジン、及び塩化カリウムなどの添加剤も形質転換時に取り込み用溶液及び助剤に加えることができる。
概して、混合物は次におよそ０℃で１０〜３０分にわたってインキュベートする。次に、追加のＰＥＧを混合物に添加して、所望の遺伝子、又はＤＮＡ配列の取り込みを更に高める。概して、形質転換混合物の５〜１５倍の体積の２５％のＰＥＧ ４０００を加えるが、しかしながら、これよりも多量及び少量に添加することが好適である場合もある。２５％のＰＥＧ ４０００は、好ましくは形質転換混合物の約１０倍の体積である。ＰＥＧを加えた後、次にソルビトール及びＣａＣｌ２溶液を加える前に形質転換混合物を室温下、又は氷上のいずれかでインキュベートする。次に、プロトプラスト懸濁液を、増殖培地の溶解アリコート（molten aliquots）に更に加えた。この増殖培地は、形質転換体のみを増殖させるものである。本開示では、所望の形質転換体を増殖させるのに好適な任意の増殖培地を使用することができる。しかしながら、ｐｙｒ＋形質転換体を選別する場合、ウリジンを不含有の増殖培地を使用することが好ましい。後のコロニーをウリジンを含まない増殖培地に移し、精製する。
増殖率が速いことから、この段階で、安定な形質転換体は不安定な形質転換体から識別され、トリコデルマでは、例えば、ウリジンを不含有の固体培養培地上で、輪郭がギザギザというよりもなめらかな円形のコロニーが形成される。加えて、一部の場合では、非選別型（すなわち、ウリジンを含有している）の固体培地で形質転換体を増殖させ、この培養培地から胞子を回収し、これらの胞子が続いて出芽しかつウリジンを不含有の選択培地で増殖する割合を判定することで、安定性を更に試験する場合がある。
上述の方法の特定の実施形態では、ＢＧＬ１変異体の適切な翻訳後プロセシングの結果として、宿主細胞を液体培地で増殖させた後に活性型のＢＧＬ１変異体（１種又は複数種）を回収する。
（ｉｉ）酵母
本開示はまた、ＢＧＬ１産生のため宿主細胞として酵母を使用することも想到する。加水分解酵素をコードしている他の数種類の遺伝子が酵母サッカロマイセス・セレヴィシエ（S. cerevisiae）の変異株で発現した。これらとしては、トリコデルマ・リーゼイ由来の２種のエンドグルカナーゼ（Ｐｅｎｔｔｉｌａら、Ｙｅａｓｔ，３：１７５〜１８５，１９８７）、２種のセロビオヒドロラーゼ（Ｐｅｎｔｔｉｌａら、Ｇｅｎｅ，６３：１０３〜１１２，１９８８）及び１種のβ−グルコシダーゼ（Ｃｕｍｍｉｎｇｓ及びＦｏｗｌｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．２９：２２７〜２３３，１９９６）、Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｌｉｕｍ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ由来のキシラナーゼ（Ｌｉ及びＬｊｕｎｇｄａｈｌ，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６２：２０９〜２１３，１９９６）、小麦由来のα−アミラーゼ（Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎら、Ｇｅｎｅ ５５：３５３〜３５６，１９８７）などをコードしている配列が挙げられる。加えて、ブチビブリオ・フィブリソルベンス（Butyrivibrio fibrisolvens）エンド−［β］−１，４−グルカナーゼ（ＥＮＤ１）、ファネロカエテ・クリソスポリウム（Phanerochaete chrysosporium）セロビオヒドロラーゼ（ＣＢＨ１）、ルミノコッカス−フラヴェファシエンス（Ruminococcus flavefaciens）セロデキストリナーゼ（cellodextrinase）（ＣＥＬ１）及びエンドマイセス・フィブリリザー（Endomyces fibrilizer）セロビアーゼ（ＢＧＬ１）をコードしているセルラーゼ遺伝子カセットは、サッカロマイセス・セレヴィシエの実験室株で首尾よく発現している（Ｖａｎ Ｒｅｎｓｂｕｒｇら、Ｙｅａｓｔ，１４：６７〜７６，１９９８）。
Ｃ．宿主細胞ヘのＢＧＬ１−をコードしている核酸配列の導入
本開示は、更に、外因的に提供された、ＢＧＬ１変異体をコードしている核酸配列を含むよう、遺伝的に改質された細胞及び細胞組成物を提供する。親細胞、又は細胞株をクローニングベクター、又は発現ベクターにより遺伝的に改質（すなわち、形質導入、形質転換、又は形質移入）することもできる。例えば、ベクターは、更に上記されるようにプラスミド、ウィルス粒子、ファージなどの形態であってよい。
本開示の形質転換方法により、形質転換ベクターの全部、又は一部を糸状菌のゲノム中に安定的に組み込むことができる。しかしながら、形質転換により、染色体外の形質転換ベクターが自己複製で維持されることも想到される。
非相同タンパク質を多量に発現するトリコデルマ・リーゼイ細胞株を作製するために、多くの標準的な形質移入方法を使用することができる。トリコデルマのセルラーゼ産生株へのＤＮＡコンストラクトの導入に関し公開されている一部の方法としては、Ｌｏｒｉｔｏ，Ｈａｙｅｓ，ＤｉＰｉｅｔｒｏ及びＨａｒｍａｎ，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．２４：３４９〜３５６；Ｇｏｌｄｍａｎ，ＶａｎＭｏｎｔａｇｕ及びＨｅｒｒｅｒａ−Ｅｓｔｒｅｌｌａ，１９９０，Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．１７：１６９〜１７４；Ｐｅｎｔｔｉｌａ，Ｎｅｖａｌａｉｎｅｎ，Ｒａｔｔｏ，Ｓａｌｍｉｎｅｎ及びＫｎｏｗｌｅｓ，１９８７，Ｇｅｎｅ ６：１５５〜１６４，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓにおいては、Ｙｅｌｔｏｎ，Ｈａｍｅｒ及びＴｉｍｂｅｒｌａｋｅ，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：１４７０〜１４７４，Ｆｕｓａｒｉｕｍにおいては、Ｂａｊａｒ，Ｐｏｄｉｌａ及びＫｏｌａｔｔｕｋｕｄｙ，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８２０２〜８２１２，Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓにおいては、Ｈｏｐｗｏｏｄら、１９８５，Ｔｈｅ Ｊｏｈｎ Ｉｎｎｅｓ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｗｉｃｈ，ＵＫ及びＢａｃｉｌｌｕｓにおいては、Ｂｒｉｇｉｄｉ，ＤｅＲｏｓｓｉ，Ｂｅｒｔａｒｉｎｉ，Ｒｉｃｃａｒｄｉ及びＭａｔｔｅｕｚｚｉ，１９９０，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．５５：１３５〜１３８）が挙げられる。
非相同的な核酸コンストラクト（発現ベクター）を糸状菌（例えば、ヒポクレア・ジェコリナ）に導入する他の方法としては、限定するものではないが、粒子、又は遺伝子銃、形質転換プロセスに先立っての糸状菌細胞壁の透過処理（例えば、高濃度のアルカリ、例えば、０．０５Ｍ〜０．４ＭのＣａＣｌ２、又は酢酸リチウムを使用することによる）、プロトプラストの融合、又はＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ介在性の形質転換が挙げられる。ポリエチレングリコール及びＣａＣｌ２によりプロトプラスト、又はスフェロプラストを処理することで糸状菌を形質転換するための例示的な方法が記載される（Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．１６：５３〜５６，１９８９；及びＰｅｎｔｔｉｌａら、Ｇｅｎｅ，６３：１１〜２２，１９８８）。
外来性の核酸配列を宿主細胞に導入するための任意の周知の手法を使用することができる。これらには、リン酸カルシウム法による形質移入、ポリブレン、プロトプラストの融合、電気穿孔法、遺伝子銃、リポソーム、微量注入、プラズマベクター（plasma vectors）、ウイルスベクターの使用、並びにクローン化したゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ、又は他の外来性遺伝子材料を宿主細胞に導入するための任意の他の周知の方法が挙げられる（例えば，Ｓａｍｂｒｏｏｋら（上掲）を参照されたい）。同様に使用される方法は、米国特許第６，２５５，１１５号に記載のＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ介在型の形質移入方法である。使用される特定の遺伝子組み換え法が、非相同的な遺伝子を発現できる宿主細胞に、少なくとも１つの遺伝子を首尾よく導入できることのみを必要とする。
加えて、ＢＧＬ１変異体をコードしている核酸配列を含む非相同的な核酸コンストラクトは、インビトロで転写して、得られたＲＮＡを周知の方法、例えば、注入により宿主細胞に導入することができる。
本開示は更に、真菌にセルラーゼ組成物を産生させるために使用する、ヒポクレア・ジェコリナ及びアスペルギルス・ニガーなどの糸状菌の新規の及び有用な形質転換体を包含する。本開示は、糸状菌、特に、ｂｇｌ１変異体コード配列を含む、すなわち内在性のｂｇｌ１コード配列が欠失した糸状菌の形質転換体を包含する。
ｂｇｌ１変異体コード配列を含む非相同的な核酸コンストラクトの導入後、遺伝的に改質した細胞を、プロモーターの活性化、形質転換体の選択、又はｂｇｌ１変異体をコードしている核酸配列の発現の増幅に適切であるよう改変した従来法の栄養培地で培養することができる。温度及びｐＨなどの培養条件は、発現用に選択した宿主細胞に前もって使用されたものであり、当業者には明白であろう。
一般に、このような非相同的な核酸コンストラクトを導入された細胞の子孫は、非相同的な核酸コンストラクトに見られるｂｇｌ１変異体をコードしている核酸配列を含むものとみなされる。
本開示は更に、真菌セルラーゼ組成物の産生に使用するための、ヒポクレア・ジェコリナなどの新規の及び有効な糸状菌形質転換体を包含する。アスペルギルス・ニガーもまたＢＧＬ１変異体の産生に使用され得る。本開示は、糸状菌、特にｂｌｇ１変異体コード配列を含む、すなわち内在性のｂｇｌ１コード配列が欠失した真菌の形質転換体を包含する。
増殖率が速いことから、この段階で、糸状菌の安定な形質転換体は不安定な形質転換体から識別され、トリコデルマでは、例えば、固体培養培地上で、輪郭がギザギザというよりもなめらかな円形のコロニーが形成される。加えて、一部の場合では、非選別型の固体培地で形質転換体を増殖させ、この培養培地から胞子を回収し、これらの胞子が続いて出芽しかつ選択培地で増殖する割合を判定することで、安定性を更に試験する場合がある。
ＶＩＩ．組み換えＢＧＬ１タンパク質の単離及び精製
概して、細胞培養で産生されたＢＧＬ１変異体タンパク質は培地に分泌され、かつ例えば、細胞培養培地から不要な成分を除去することで、精製、又は単離することができる。しかしながら、一部の場合では、ＢＧＬ１変異体タンパク質は、細胞可溶化物から回収する必要がある細胞型形態（cellular form）で産生され得る。このような場合、ＢＧＬ１変異体タンパク質は、当該技術分野で慣習的に使用される技術を用い、変異体タンパク質を産生した細胞から精製される。例えば、限定するものではないが、アフィニティクロマトグラフィー（Ｔｉｌｂｅｕｒｇｈら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．１６：２１５，１９８４）、分離能の高い材料を用いるイオン交換クロマトグラフィー（Ｍｅｄｖｅら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ ８０８：１５３〜１６５，１９９８）を含む、イオン交換クロマトグラフィー方法（Ｇｏｙａｌら、Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌ．３６：３７〜５０，１９９１；Ｆｌｉｅｓｓら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３１４〜３１８，１９８３；Ｂｈｉｋｈａｂｈａｉら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６：３３６〜３４５，１９８４；Ｅｌｌｏｕｚら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ３９６：３０７〜３１７，１９８７）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（Ｔｏｍａｚ及びＱｕｅｉｒｏｚ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ ８６５：１２３〜１２８，１９９９）、及び二相分配（Ｂｒｕｍｂａｕｅｒら、Ｂｉｏｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ７：２８７〜２９５，１９９９）が挙げられる。
典型的には、ＢＧＬ１変異体タンパク質は、選択された特性、例えば、特定の結合剤（例えば、抗体、又は受容体）に対する結合親和性など、又は選択された分子量範囲、又は選択された等電点範囲を有するタンパク質を分離するよう画分される。
所定のＢＧＬ１変異体タンパク質が発現されたならば、産生されたＢＧＬ１タンパク質は細胞、又は細胞培養物から精製される。このような精製に好適な例示的な手順としては、次のもの：抗体アフィニティカラムクロマトグラフィー；イオン交換クロマトグラフィー；エタノール沈殿；逆相ＨＰＬＣ；シリカ、又はカチオン交換樹脂（ＤＥＡＥ）でのクロマトグラフィー；クロマトフォーカシング；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；硫酸アンモニウム沈殿；及び例えばＳｅｐｈａｄｅｘＧ−７５を用いるゲル濾過、などが挙げられる。様々なタンパク質精製方法を使用することができ、このような方法は当業者に既知であり、かつ例えばＤｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１８２：７７９，１９９０；Ｓｃｏｐｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．９０：４７９〜９１，１９８２に記載される。選択される精製工程（１工程又は複数工程）は、例えば、使用する産生プロセスの性質、及び産生された具体的なタンパク質に応じて異なる。
ＶＩＩＩ．ＢＧＬ１の利用及びＢＧＬ１
ｂｇｌ１変異体核酸、ＢＧＬ１変異体タンパク質、及びＢＧＬ１変異体タンパク質活性を含む組成物、が幅広い用途で有用であることは評価することができ、そのうちの一部を以下に記載する。
本開示は、β−グルコシダーゼ変異体、及びリグノセルロース材料を分解する酵素ブレンドも提供する。このような酵素の組み合わせ、又は混合物としては、本開示のβ−グルコシダーゼ変異体を少なくとも１種含有する多酵素組成物が挙げられる。相乗的な酵素の組み合わせ及び関連する方法が想到される。
ほとんどのバイオマス供給源が、セルロース、ヘミセルロース、ペクチン、リグニン、タンパク質、及び灰、その他の成分を含有する可能性があり、複雑な性質を有することから、特定の態様では、本開示の酵素ブレンドには、最も効率的な方法でバイオマスを発酵性の糖に分解するために協働する基質特異性範囲を有する酵素を含有させることができる。リグノセルロース糖化に関する多酵素複合物の一例は、セロビオヒドロラーゼ、キシラナーゼ、エンドグルカナーゼ、β−グルコシダーゼ、β−キシロシダーゼ、及び所望によりアクセサリタンパク質、の混合物である。
したがって、本開示は、キシランを加水分解し、ヘミセルロース及び／又はセルロースを加水分解する酵素の混合物を含む組成物（製造産物、酵素アンサンブル、すなわち「ブレンド」を含む）を提供し、これは少なくとも１種の、数種の、又はすべてのセルラーゼ、グルカナーゼ；セロビオヒドロラーゼ；Ｌ−α−アラビノフラノシダーゼ；キシラナーゼ；所望によりβ−グルコシダーゼ；β−キシロシダーゼを含み、好ましくは本開示のβ−グルコシダーゼ変異体を少なくとも１種含む。本開示は、非天然に生じる酵素ブレンドを提供する。本明細書で使用するとき、用語「ブレンド」は：（１）発酵ブロス形態のあるいは一部若しくは完全に単離、又は精製した形態のいずれかの成分酵素を組み合わせて調製した組成物；（２）酵素成分を１種以上発現するよう改質された微生物により産生された組成物（所望により、微生物はキシラン加水分解、ヘミセルロース加水分解及び／又はセルロース加水分解に影響を与えるタンパク質をコードしている遺伝子が所望により１つ以上欠失するよう改質されていてもよい）；（３）糖化反応、又は発酵反応と同時に、別個に又連続的に酵素成分を組み合わせることで調製される組成物；（４）（例えば、糖化、又は発酵反応時に）インサイツで調製された酵素混合物；並びに（５）上記（１）〜（４）の任意の、又はすべての組み合わせを指す。
本明細書で使用するとき、用語「発酵ブロス」は、発酵により産生され、全く、又はほとんど、回収及び／又は精製されていない酵素調製物を指す。例えば、微生物培養物は、炭素を制限した条件下でインキュベーションしタンパク質を合成（例えば、酵素を発現）させると増殖して飽和状態になる。細胞培養培地中に酵素が分泌されれば、発酵ブロスは使用できるようになる。例えば、発酵ブロスは、発酵終了時に得られる発酵材料の、分画されていない、又は分画された含有物を含有し得る。典型的には、発酵ブロスは分画されておらず、使用した培養培地、並びに微生物細胞（例えば、糸状菌細胞）後の細胞片、を含む。一部の実施形態では、発酵ブロスは、使用した細胞培養培地、細胞外酵素、及び微生物細胞の生細胞若しくは死細胞を含有する。一部の実施形態では、発酵ブロスは微生物細胞を除去するため分画され、培養に使用した細胞培養培地及び細胞外酵素を含むものである。
同様に、本明細書に具体的に記載されるいずれの酵素も、多酵素組成物を生成するために、本明細書に記載の任意の１種以上の酵素、又は任意のその他の利用可能でかつ好適な酵素と組み合わせることができることも理解される。本開示は、以下に列挙される特定の例示的な組み合わせに制限されず、すなわち限定されない。
本開示は、本開示の酵素混合物すなわち「ブレンド」などの本開示の酵素を用い、バイオマスを糖化するための方法及びプロセスを提供する。バイオマスには、セルロース及び／又はヘミセルロース（リグノセルロース系バイオマスはリグニンも含む）、例えば、種、穀物、芋、植物廃棄物、又は食品加工若しくは工業加工の副産物（例えば、茎）、トウモロコシ（穂軸、茎葉及び同様物）、草（例えば、パルマローザ（Indian grass）、例えばソルガストラム・ヌータンツ（Sorghastrum nutans）、又はスイッチグラス、例えば、キビ種、パニクム・バーガタム（Panicum virgatum）など）、木材（木片、加工廃棄物など）、紙、パルプ、再生紙（例えば新聞紙）を含む、任意の組成物を包含し得る。他のバイオマス材料としては、限定するものではないが、じゃがいも、ダイズ（菜種）、大麦、ライ麦、オーツ麦、小麦、ビーツ、又はサトウキビバガスが挙げられる。
本開示は、キシラン、ヘミセルロース、セルロース、又は発酵性糖を含む組成物を、本開示のβ−グルコシダーゼ、あるいは本開示の核酸によりコードされるポリペプチド、あるいは本開示の製造混合物、又は「ブレンド」又は産物のいずれか１つと接触させることを含む、糖化方法を提供する。
糖化させたバイオマス（例えば、本開示の酵素により加工されたリグノセルロース系材料）から、発酵により、微生物により及び／又は化学合成によりバイオ系製品を作製することができる。本明細書で使用するとき、発酵微生物は、バイオ系産物を産生するための所望の発酵プロセスで使用するのに好適な任意の微生物であり得る。発酵微生物の好適な非限定例としては、糸状菌、酵母、及びバクテリアが挙げられる。一部の実施形態では、糖化させたバイオマスを、発酵及び／又は化学合成により燃料（例えば、バイオエタノール、バイオブタノール、バイオメタノール、バイオプロパノール、バイオディーゼル、ジェット燃料、又は同様物などのバイオ燃料）にすることができる。一部の実施形態では、糖化させたバイオマスを発酵により及び／又は化学合成により、汎用化学物質（例えば、アスコルビン酸、イソプレン、１，３−プロパンジオール、脂質、アミノ酸、タンパク質及び酵素にすることができる。
バイオマスの糖化だけではなく、本開示の酵素及び酵素ブレンドは、工業用、農業用、食品及び餌並びに食品及び餌用サプリメント加工用プロセスに使用することができる。酵素の例示的な用途を以下に記載する。
本開示の酵素は、木材、木製品、木材廃棄物、又は副生成物、紙、紙製品、紙パルプ若しくは木材パルプ、クラフトパルプ、又は木材若しくは紙の再生利用処理、又は工業プロセス、例えば、任意の木材、木材パルプ、紙くず、紙若しくパルプ処理プロセス、又は木材若しくは紙脱インキプロセスに使用することができる。一態様では、本開示の酵素は紙パルプ、又は再生紙若しくは再生紙パルプ、及び同様物の処理／前処理に使用することができる。一態様では、本開示の酵素（１種又は複数種）を、紙パルプ、又は再生紙若しくは再生紙パルプ、及び同様物の処理／前処理に使用することで、紙の「輝度」を増加させる。紙の等級が高くなるほど輝度は高くなり、紙の輝度は光学走査装置の走査能に影響を与え得る。したがって、本開示の酵素及びプロセスを使用することで、光学走査装置で使用するための、例えば、インクジェット紙、レーザープリント用紙及びフォトプリント用紙などの高級で「輝度の高い」紙を製造することができる。本開示の酵素は、任意のセルロース系材料、例えば、木製、綿製、麻製、亜麻製（flax、又はlinen）を加工又は処理するために使用することができる。一態様では、本開示は、本開示の酵素を用いる木材、木材パルプ、紙、紙パルプ、紙くず、又は木材若しくは紙の再生利用処理プロセスを提供する。
本開示の酵素は、例えば新聞紙などの、印刷面を持つ紙ゴミの脱インキ、又は非接触式に印刷された印刷面を持つ紙ゴミ、例えば、乾式電子写真方式でレーザープリントされた印刷面を持つ紙ゴミの脱インキ、並びに接触式及び非接触式の印刷を組み合わせて印刷された印刷面を持つ紙ゴミの脱インキ（米国特許第６，７６７，７２８号及び同第６，４２６，２００号；並びにＮｅｏ，Ｊ．Ｗｏｏｄ Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．６：１４７，１９８６に記載）に使用することができる。本開示の酵素は、紙等級の広葉樹パルプ中に含有されるキシランを液相に抽出し、得られた液相に含有されるキシランを、キシランをキシロースへと加水分解させるのに十分な条件に晒し、キシロースを回収することにより、パルプからキシロースを産生するためのプロセスに使用することができる。ここで、抽出工程には、米国特許第６，５１２，１１０号に記載されるように、パルプの水性懸濁物、又はアルカリ溶解性材料を酵素で少なくとも１回処理することを包含する。本開示の酵素は、広葉樹繊維、広葉樹繊維及び針葉樹繊維の混合物、紙ゴミ、例えば、米国特許第６，２５４，７２２号に記載されるような、未印刷の封筒、脱インキした封筒、未印刷の帳簿用紙、脱インキした帳簿用紙、及び同様物、からなる再生紙製品などのセルロース系繊維から、パルプを溶解させるためのプロセスに使用することができる。
本開示は、本開示の酵素を１種以上用い繊維及び布地を処理する方法を提供する。酵素は、当該技術分野において周知である任意の繊維、又は布地処理方法に使用することができ、例えば、米国特許第６，２６１，８２８号；同第６，０７７，３１６号；同第６，０２４，７６６号；同第６，０２１，５３６号；同第６，０１７，７５１号；同第５，９８０，５８１号；米国特許出願第２００２０１４２４３８（Ａ１）号を参照されたい。例えば、本開示の酵素は繊維及び／又は布地の湯通しに使用することができる。一態様では、溶液中で布地を本開示の酵素と接触させることを含む方法により、布地の手触り及び外観が改良される。一態様では、布地は圧力下で溶液により処理される。例えば、本開示の酵素は、染み除去に使用することができる。
本開示の酵素は、繊維（例えば、綿、麻、又は亜麻製繊維）、縫製した布地及び未縫製の布地、例えば、編物、織布、デニム生地、糸、並びに綿製の、綿混の、又は天然の若しくは人工のセルロース若しくはこれらのブレンドから製造されたタオルを含む、任意のセルロース系材料を処理するために使用することができる。
本開示の繊維製品処理法（本開示の酵素を用いる）は、他の繊維製品処理法、例えば、こすり洗い及び漂白と組み合わせて使用することができる。こすり洗いは、綿繊維から非セルロース系材料、例えば、角質（主にワックスからなる）及び一次細胞壁（主にペクチン、タンパク質及びキシログルカンからなる）を除去する。
本開示の酵素は、食品加工業で多数の用途がある。例えば、一態様では、本開示の酵素は、含油量の多い植物材料由来の、例えば、含油量の多い種子由来の油、例えば、大豆由来の大豆油、オリーブ由来のオリーブ油、菜種由来の菜種油及び／又はヒマワリ種子由来のヒマワリ油の抽出を改良するために使用される。
本開示の酵素は、植物細胞材料の成分を分離するために使用することができる。例えば、本開示の酵素は、植物細胞を成分に分離するために使用することができる。一態様では、本開示の酵素は、作物を、有用なタンパク質、油、及び外皮画分に分離するために使用することができる。この分離プロセスは、当該技術分野において既知の方法を使用して実施することができる。
本開示の酵素は、収率を増加させるために、果汁、又は野菜汁、シロップ、抽出物及び同様物を調製する際に使用することができる。本開示の酵素は、植物細胞壁に由来する様々な材料、又は廃棄物、例えば、穀類（cereals）、穀物（grains）、ワイン、又はジュース製品、又は農業廃棄物、例えば、野菜のへた（hull）、豆のさや、サトウダイコンパルプ、オリーブパルプ、ポテトパルプ、及び同様物の酵素処理に使用することができる。本開示の酵素は、加工果実、又は加工野菜の固さ及び外見を改良するために使用することができる。本開示の酵素は、植物材料を処理して、植物材料、例えば食品などの加工を促進するために、植物成分の精製、又は抽出を促進するために使用することができる。本開示の酵素を使用することで、栄養価を改良すること、水結合能を低下させること、排水プラント中での分解性を改良すること、及び／又は植物材料をエンシレージに変換する変換効率を改良することなどが可能になる。
一態様では、本開示の酵素は、ベーキング用途、例えば、クッキー及びクラッカーに使用される。一態様では、本開示の酵素は、機械加工するのが難しくない、及びビスケットの大きさを減らすのが難しくない、粘り気の少ないパン生地を作製するために使用される。焼成した製品が急速に再水和することでサクサク感が損なわれたり、及び品質保持期限が短縮されるのを防ぐために、本開示の酵素を使用することでアラビノキシランを加水分解できる。一態様では、本開示の酵素は、パン生地の加工時に添加物として使用される。
本開示は、本開示の酵素を用い、動物用の飼料及び食料並びに食料、又は飼料添加物（サプリメント）を処理するための方法を提供する。動物には、哺乳類（例えば、ヒト）、鳥類、及び魚類などが挙げられる。本開示は、本開示の酵素を含む、動物用飼料、食料及び添加物（サプリメント）を提供する。一態様では、本開示の酵素を用い動物用飼料、食料及び添加物を処理することで、動物用飼料、又は添加物（サプリメント）中の栄養素の、例えば、デンプン、タンパク質、及び同様物の利用効率を補助することができる。分解するのが困難であるタンパク質を消化することで、又は間接的に若しくは直接的にデンプン（又は他の栄養素）を脱マスキングすることで、酵素は、栄養素を他の内在性、又は外因性の酵素にとって利用しやすいものにする。酵素は、容易に消化できかつ容易に吸収することのできる栄養素及び糖を、単に放出させることもできる。
動物用飼料に添加する場合、本開示の酵素は、腸の粘度を低下させることによりインビボでの植物細胞壁材料の分解性を改善し（例えば、Ｂｅｄｆｏｒｄら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ １ｓｔ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ ｏｎ Ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１９９３，ｐｐ．７３〜７７を参照されたい）、これにより植物栄養素を動物にとってより利用しやすいものにする。したがって、餌に本開示の酵素を使用することで、動物の成長速度及び／又は餌転換率（すなわち、体重増加に対する餌接種重量）が改良される。
本開示の動物用飼料用添加物は、餌成分と容易に混合することのできる粒状酵素製品であり得る。あるいは、本開示の食事用添加物は、プレミックス成分を形成し得る。本開示の粒状酵素製品は、コーティングしてもしなくてもよい。酵素粒剤の粒径は、餌及び予混合成分と混合可能なものである。このような酵素粒剤は、酵素を餌に組み込むのに安全でかつ簡便な手段を提供する。あるいは、本開示の動物用飼料添加物は、安定化された液体組成物であり得る。この液体組成物は、水系、又は油系スラリーであり得る。例えば、米国特許第６，２４５，５４６号を参照されたい。
別の態様では、本開示の酵素は、例えば、穀物、穀類、トウモロコシ、大豆、ナタネ、ルピナス及び同様物などの、遺伝子組み換え飼料作物（例えば、遺伝子組み換え植物、種及び同様物など）で直接発現させた酵素により供給され得る。上記のように、本開示は、本開示のポリペプチドをコードしている核酸配列を含む遺伝子組み換え植物、植物部位及び植物細胞を提供する。一態様では、核酸は、本開示の酵素が回収可能な量で産生されるように発現する。キシラナーゼは、任意の植物、又は植物部位から回収することができる。あるいは、組み換えポリペプチドを含有している植物、又は植物部位は、それ自体が、食品、又は飼料の品質の改善のために、例えば、栄養価、味、及びレオロジー特性が改善のために、又は栄養のない要素を破壊するために使用することもできる。
一態様では、本開示は、動物種により消費される前に、本開示の酵素を用いて餌からオリゴ糖を除去するような方法を提供する。このプロセスでは、代謝可能なエネルギー価が増加した餌が作製される。本開示の酵素に加え、ガラクトシダーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、及びこれらの組み合わせを使用することができる。
他の態様では、本開示は、本開示の組み換え酵素を含有している栄養補助サプリメントを調製し、栄養補助サプリメントを動物に投与することで、動物により消化される食物中に含有されているヘミセルラーゼの利用を増加させることにより、本開示の酵素を動物用飼料中の栄養サプリメントとして利用する方法を提供する。
本開示の酵素は、様々な他の工業用途、例えば、廃棄物処理に使用することができる。例えば、一態様では、本開示は、本開示の酵素を用いる固体ゴミの消化プロセスを提供する。この方法は、実質的に未処理の固体ゴミの質量及び体積を減少させることを含み得る。固体ゴミは、酵素溶液の存在下で（本開示の酵素を含む）、制御温度下での、酵素による消化プロセスにより処理することができる。この処理は、添加した微生物に由来する、感知され得るようなバクテリア発酵以外の反応によるものである。固体ゴミを、液化ゴミ及び任意の残渣固形ゴミに変換させる。生じる液化ゴミを、前述の任意の残渣固化ゴミから分離することができる。例えば、米国特許第５，７０９，７９６号を参照されたい。
本開示は、本開示の酵素を１種以上含む洗剤、殺菌剤、又はクレンザー（クリーニング、又はクレンジング）組成物、並びにこれらの組成物の製造方法及び使用方法を提供する。本開示は、洗剤、殺菌剤、又はクレンザー組成物のすべての製造方法及び使用方法を組み込むものであり、例えば、米国特許第６，４１３，９２８号；同第６，３９９，５６１号；同第６，３６５，５６１号；同第６，３８０，１４７号を参照されたい。
特定の実施形態では、洗剤、殺菌剤、又はクレンザー組成物は、１部及び２部式の水性組成物、非水性液体組成物、鋳造固体、顆粒形態、粒子形態、圧縮錠、ゲル及び／又はペースト及びスラリー形態であり得る。本開示の酵素は、固体又は液体形態の、洗剤、殺菌剤、又はクレンザー添加剤製品として使用することもできる。このような添加剤製品は、従来の洗剤組成物の性能を補う、又は強化することが意図されるものであり、クリーニングプロセスの任意の工程で添加することができる。
本開示は、硬質表面をクリーニングするための洗剤組成物、布地クリーニング用の洗剤組成物、食器洗浄用組成物、口腔洗浄用組成物、義歯洗浄用組成物、及びコンタクトレンズ洗浄液を包含するクリーニング組成物を提供する。
本開示の酵素が、洗濯機による洗浄法に使用するのに好適な組成物の成分である場合、組成物は、本開示の酵素に加え、界面活性剤及びビルダー化合物の両方を含み得る。これらには更に、１種以上の洗剤成分、例えば、有機高分子化合物、漂白剤、追加の酵素、抑泡剤、分散剤、酸化カルシウム石鹸分散剤（lime-soap dispersants）、汚れ懸濁剤及び再付着防止剤、並びに腐食防止剤を含み得る。
本開示の洗濯用組成物には、追加の洗剤成分として柔軟剤を含有させることもできる。カルボヒドラーゼを含有しているこのような組成物は、洗濯洗剤組成物として処方された場合に布地洗浄、染み除去、白色度の維持、柔軟化、顕色、移染防止及び衛生化を提供し得る。
ＢＧ型セルラーゼ、ＥＧ型セルラーゼ及びＣＢＨ型セルラーゼ変異体を様々な量で含む、新しくかつ改良されたセルラーゼ組成物は、改良された洗浄性能を示し、柔軟剤として機能し及び／又は綿布の肌触りをよくする（例えば、「ストーンウォッシング」又は「バイオポリッシング」）洗剤組成物、木材パルプを糖に分解するための組成物（例えば、バイオエタノール産生用組成物）、及び／又は餌用組成物において有用であることが見出される。各種セルラーゼを単離し、特性評価することで、このような組成物の態様を制御することができる。
ＢＧＬ１遺伝子の少なくとも１種の追加のコピーがゲノムに挿入された形質転換体を用いることで、セルロース産物の加水分解速度を増大させることができることから、セルロース、又はヘテログリカンを含有する産物はより速い速度で、より広範に分解される。紙、綿、セルロース製おむつ及び同様物などのセルロースから製造される製品は、ごみ廃棄場でより効率的に分解され得る。したがって、形質転換体から得られ得る発酵産物、又は形質転換体単独を組成物に使用することで、過密なごみ廃棄場に加えられる様々なセルロース製品を液化し、分解を助ける。
セルロース系原料は、農業ごみ、草及び木並びに他の低価値のバイオマス、例えば都市ごみ（例えば、再生紙、庭ごみなど）からなる。これらの任意のセルロース系原料を発酵させることでエタノールが製造され得る。しかしながら、セルロースは、エタノールへと変換する前にまず初めに糖へと分解しなくてはならない。
多種多様な原料を本発明のＢＧＬ１変異体と共に使用することができ、使用時に選択される原料は、変換を行う分野に依存して決まり得る。例えばアメリカ合衆国中西部では、麦わら、トウモロコシ茎葉及びバガスなどの農業廃棄物が主であり得る一方、カリフォルニアでは、稲わらが主であり得る。しかしながら、利用可能な任意のセルロース系バイオマスを任意の領域で使用することができることは理解すべきである。
本開示の方法は、有機産物、化学物質及び燃料、プラスチック及び他の生成物若しくは中間体を産生する微生物にとっての、化学原料、又は発酵原料としての、単糖、二糖、及び多糖を産生するのに使用できる。具体的には、加工する残渣（乾燥し蒸留した穀物、醸造より得られる使用済み穀物、サトウキビバガスなど）の価値は、セルロース又はヘミセルロースを不完全又は完全に可溶化させることで上昇することになる。エタノールに加え、セルロースから産生することのできる一部の化学物質としては、アセトン、アセテート、グリシン、リジン、有機酸（例えば、乳酸）、１，３−プロパンジオール、ブタンジオール、グリセロール、エチレングリコール、フルフラール、ポリヒドロキシアルカノエート、シス，シス−ムコン酸、動物用飼料及びキシロースが挙げられる。更に、セルロースからタンパク質及び細胞を調製することができる。
これに加え、ＢＧＬ１変異体核酸配列は、関連する核酸配列の同定及び特性評価に有用であると理解される。関連する遺伝子、又は遺伝子産物の機能を判定（予想、又は確認）するのに有用な様々な技術としては、限定するものではないが、（Ａ）ＤＮＡ／ＲＮＡ解析、例えば（１）過剰発現、異所性の発現、及び他の種での発現；（２）遺伝子ノックアウト（リバースジェネティクス、標的ノックアウト、ウイルスによる遺伝子サイレンシングの導入（ＶＩＧＳ，Ｂａｕｌｃｏｍｂｅ，１００ Ｙｅａｒｓ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｃａｌｉｓｈｅｒ及びＨｏｒｚｉｎｅｋ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．１５：１８９〜２０１，１９９９を参照されたい）；（３）遺伝子、特に隣接する制御領域のメチル化部位についての解析；及び（４）インサイツハイブリダイゼーション；（Ｂ）遺伝子産物の解析、例えば（１）組み換えタンパク質の発現；（２）抗血清産物、（３）免疫局在性；（４）触媒活性、又は他の活性についての生化学解析；（５）リン酸化部位；及び（６）酵母ツーハイブリッドによる他のタンパク質との相互作用；（Ｃ）表現型を過剰発現させることで、又は関連する遺伝子との配列相同性により、特定の生化学経路、又はシグナル伝達経路内に遺伝子、又は遺伝子産物を配置するなどの経路解析；並びに（Ｄ）特定の代謝経路、又はシグナル伝達経路において、単離した遺伝子の関与及びその産物を決定、又は確認し、遺伝子機能の決定を補助するために実施することのできる、他の解析法が挙げられる。
本開示は、以降の実施例により更に詳細に記載されるが、いかなる手段によっても、この記載により請求するものとして本開示の範囲が制限されることを意図するものではない。添付の図面は、本開示の明細書及び説明と不可分であるものとして考慮されることを意図するものである。以降の例は説明のため提供されるが、請求される本開示を限定するものではない。
以下の実験に関する開示において、次の略記を使用する：Ｍ（モル濃度）；ｍＭ（ミリモル濃度）；μＭ（マイクロモル濃度）；ｎＭ（ナノモル濃度）；ｍｏｌ（モル）；ｍｍｏｌ（ミリモル）；μｍｏｌ（マイクロモル）；ｎｍｏｌ（ナノモル）；ｇ及びｇｍ（グラム）；ｍｇ（ミリグラム）；μｇ（マイクログラム）；ｐｇ（ピコグラム）；Ｌ（リットル）；ｍｌ及びｍＬ（ミリリットル）；μｌ及びμＬ（マイクロリットル）；ｃｍ（センチメートル）；ｍｍ（ミリメートル）；μｍ（マイクロメートル）；ｎｍ（ナノメートル）；Ｕ（ユニット数）；Ｖ（ボルト）；ＭＷ（分子量）；ｓｅｃ（秒）；ｍｉｎ（ｓ）（分／分間）；ｈ（ｓ）及びｈｒ（ｓ）（時間（hour／hours））；℃（セルシウス度）；ＱＳ（十分量）；ＮＤ（実施せず（not done））；ＮＡ（適用不可）；ｒｐｍ（毎分回転）；Ｈ２Ｏ（水）；ｄＨ２Ｏ（脱イオン水）；ＨＣｌ（塩酸）；ａａ（アミノ酸）；ｂｐ（塩基対）；ｋｂ（キロ塩基対）；ｋＤ（キロダルトン）；ｃＤＮＡ（コピー、又は相補的ＤＮＡ）；ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）；ｓｓＤＮＡ（単鎖ＤＮＡ）；ｄｓＤＮＡ（二本鎖ＤＮＡ）；ｄＮＴＰ（デオキシリボヌクレオチド三リン酸）；ＲＮＡ（リボ核酸）；ＭｇＣｌ２（塩化マグネシウム）；ＮａＣｌ（塩化ナトリウム）；ｗ／ｖ（重量対体積）；ｖ／ｖ（体積対体積）；ｇ（比重）；ＯＤ（光学密度）；ＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾ−チアゾリン−６−スルホン酸）二アンモニウム塩；ＡＰＢ（酸で前処理したバガス）；ＢＧＬ（β−グルコシダーゼ）；ＣＮＰ（２−クロロ−４−ニトロフェノール）；ＣＮＰＧ（クロロ−ニトロ−フェニル−β−Ｄ−グルコシド）；ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）；ＰＡＧＥ（ポリアクリルアミゲル電気泳動）；ＰＡＳＣ（リン酸膨潤セルロース）ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）；ＰＣＳ（酸で前処理したトウモロコシ茎葉）；Ｐｉ、又はＰＩ（性能指数）；ＲＴ−ＰＣＲ（逆転写ＰＣＲ）；及びＳＥＬ（部位別評価ライブラリ）。
（実施例１）
アッセイ
以下のアッセイは、以下に記載の実施例に使用した標準アッセイ法である。所望により、特定のプロトコルは、これらの標準アッセイ由来の変法（deviations）であると呼ばれる。これらの場合、以下のこれらの標準解析プロトコル由来の変法を、実施例中に特定する。これらの実験では、反応完了後に形成される生成物の吸光度を、分光光度計を用い測定した。
グルコースの測定
Ａ．残存グルコースを測定するためのヘキソキナーゼアッセイ
ＢＧＬ変異体を発現しているヒポクレア・ジェコリナ培養上清由来の残存グルコースをヘキソキナーゼアッセイを用い測定した。９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ Ｆｌａｔ Ｂｏｔｔｏｍ ＰＳ）中の１９５μＬのグルコースヘキソキナーゼアッセイ用混合物（Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂｒｅｄａ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）に５μＬの上清を加えた。このプレートを室温で１５分にわたってインキュベートした。インキュベート後、上清の吸光度を３４０ｎｍで測定した。更なる実験のためプールした培養上清から残存グルコースを含有している培養上清を除外した。
Ｂ．グルコースを測定するためのＡＢＴＳアッセイ
β−グルコシダーゼ活性アッセイにより生じたグルコース単量体を、ＡＢＴＳアッセイを用い検出した。アッセイ用緩衝液としては、５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）に、２．７４ｇ／Ｌの２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾ−チアゾリン−６−スルホン酸）二アンモニウム塩（ＡＢＴＳ，Ｓｉｇｍａ，カタログ番号Ａ１８８８）、０．１Ｕ／ｍＬの西洋ワサビペルオキシダーゼＴｙｐｅ ＶＩ−Ａ（Ｓｉｇｍａ，カタログ番号Ｐ８３７５）、及び１Ｕｎｉｔ／ｍＬの食品等級のグルコースオキシダーゼ（ＧＥＮＥＮＣＯＲ）を含有させた。１０μＬの（希釈済）試料を１００μＬのＡＢＴＳアッセイ溶液に加えた。周囲温度（２２℃）下でＯＤ４２０にて５分にわたって動態力学的に反応を行った。各アッセイ条件には、グルコースの適切な校正曲線を常に包含させた。
タンパク質含量を測定するためのＨＰＬＣアッセイ
プールした培養上清由来のＢＧＬ変異体タンパク質の濃度を、Ｓｈｏｄｅｘ ＨＩＣ ＰＨ−８１４ ＰＨＭ ゲル７５×８ｍｍカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を取り付けたＡｇｉｌｅｎｔ １２００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）ＨＰＬＣにより測定した。５０μＬの試料を５０μＬの１．６Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４と混合し、５分後に減圧下で０．２２μｍ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ ＨＴＳ ９６ウェル濾過システムにより濾過した。４０μＬの濾過済み試料をカラムに充填した。２種の溶出緩衝液を使用して、溶出勾配を作り出した：（１）緩衝液Ａ：１６ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ ６．７５）、８００ｍＭ（ＮＨ４）２ＳＯ４；及び（２）緩衝液Ｂ：１６ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ ６．７５）。流速１．８ｍＬ／分で、次のプログラムを用い溶出を行った：０％〜５０％の緩衝液を０．２５分〜１．５分を用い、続いて緩衝液Ｂの勾配５０％〜１００％を１．５分〜４分用いる。１００％の緩衝液Ｂを４〜４．５分の間ポンプによりカラムに充填した。精製した野生型ＢＧＬ１を用いて作成した検量線から、ＢＧＬ変異体のタンパク質濃度を算出した（１５．６２５、３１．２５、６２．５、１２５、２５０、５００μｇ／ｍＬ）。ＢＧＬ変異体の濃度を、同様のプレートでの野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の平均値で除算して性能指数（ＰＩ）を計算した。
ＣＮＰＧアーゼ活性アッセイ
クロロ−ニトロフェノール−β−Ｄ−グルコシド（ＣＮＰＧ）に対するＢＧＬ変異体の活性を測定した。ＢＧＬ変異体を発現させた培養上清を、５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）で１０倍希釈した。希釈した培養上清の２５μＬのアリコートを、７５μＬの、１．３３ｍＭのＣＮＰＧ／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）（最終濃度１ｍＭのＣＮＰＧ）に加え、四つ組みで試料を調製した。マイクロタイタープレートリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用い、ＣＮＰの放出動態をＯＤ４０５で３分間記録した。平均ＣＮＰＧ加水分解活性をＢＧＬ濃度で除算することで、野生型ＢＧＬ１及びＢＧＬ変異体の平均比活性を計算した。同様のプレートを用い、ＢＧＬ変異体の比活性を野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の平均比活性で除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
熱安定性アッセイ
加熱インキュベーション後のＢＧＬ１ポリペプチド（野生型及び変異型を含む）の残効性を、ＣＮＰＧアッセイを用い判定した。ＢＧＬ１ポリペプチドを発現させた培養上清（野生型及び変異型を含む）を、５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）で１０倍希釈した。スカート付き（skirted）の９６ウェルＰＣＲプレートを用い、６６℃の熱循環器内で、５０μＬのアリコートを４つ組みで１時間インキュベートした。インキュベーション後、ＢＧＬ１ポリペプチドの残存比活性を上記のように判定した。変異型及び野生型酵素の残効性は、インキュベーション後の平均比活性及びインキュベーション前の平均比活性の比により判定した。ＢＧＬ変異体の残効性を野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の残効性により除算することで、ＢＧＬ変異体の性能指数（ＰＩ）を判定した。
グルコースによる阻害についてのアッセイ
上記のＣＮＰＧアーゼ活性アッセイを３．７５ｍＭのグルコースの存在下で再現することで、β−グルコシダーゼによる加水分解活性に対するグルコースの影響を判定した。変異型及び野生型タンパク質の残存活性を、グルコースの存在下での平均比活性及びグルコースの非存在下での平均比活性の比により判定した。ＢＧＬ変異体の残効性を野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の残効性により除算することで、ＢＧＬ変異体の性能指数（ＰＩ）を判定した。
リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解アッセイにおける比活性
公開されている方法に従ってＡｖｉｃｅｌによりリン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）を調製した（例えば、Ｗａｌｓｅｔｈ，Ｔａｐｐｉ，３５：２２８，１９７１；及びＷｏｏｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．，１２１：３５３〜３６２，１９７１を参照されたい）。この材料を緩衝液及び水で希釈し、酢酸ナトリウムの最終濃度が５０ｍＭ（ｐＨ ５．０）である１重量／体積％の混合物を得た。１５０μＬの、１％のＰＡＳＣ懸濁液／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）を９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ Ｆｌａｔ Ｂｏｔｔｏｍ ＰＳ）に分注した。０．７５ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含有している、ＢＧＬ１欠損株由来の培養上清１０μＬをＰＡＳＣ懸濁液に加えた。次に、野生型ＢＧＬ１、又は変異型ＢＧＬのいずれかを発現させたヒポクレア・ジェコリナ細胞由来の培養上清をプールし、４０倍希釈（５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）により希釈）したものを、ＰＡＳＣ／欠損変異体の培養上清混合物に５、１０、２０、又は４０μＬ加えた。合計量の違いを補正するため、酢酸緩衝液を加えた。マイクロタイタープレートをシールし、５０℃に温度設定したインキュベーターで、９００ｒｐｍで持続的に振盪させながらインキュベートした。２時間後、１００μＬの、１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ １０）を各ウェルに加え加水分解反応を停止させた。プレートをシールし、３，５００ｒｐｍで室温で５分間遠心処理した。上清中の加水分解反応産物をＡＢＴＳアッセイにより解析した。野生型ＢＧＬ１に関し、用量反応曲線を作成した。同様の用量を用い、変異型ＢＧＬにより産生される合計糖産量（平均）を、野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）による合計糖産量（平均）により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
希酸で前処理したトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）の加水分解アッセイにおける比活性
トウモロコシ茎葉を、２重量／重量％Ｈ２ＳＯ４（Ｓｃｈｅｌｌら、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１０５：６９〜８６，２００３を参照されたい）で前処理し、続いて脱イオン水で複数回洗浄することで、ｐＨ ４．５のペーストを得た。次に、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）を添加し（最終濃度が５０ｍＭの酢酸ナトリウムになるように）、必要に応じて、１ＮのＮａＯＨを用いこの混合物をｐＨ ５．０に滴定した。反応混合物中のセルロース濃度は約７％であった。このセルロース懸濁液を、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ Ｆｌａｔ Ｂｏｔｔｏｍ ＰＳ）に、ウェルあたり６５μＬ加えた。１０ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含有している、ＢＧＬ１欠損株由来の培養上清１０μＬをＰＡＳＣ懸濁液に加えた。次に、野生型ＢＧＬ１、又は変異型ＢＧＬのいずれかを発現させたヒポクレア・ジェコリナ細胞由来の培養上清をプールし、５倍希釈（５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）により希釈）したものを、ＰＣＳ／欠損変異体の培養上清混合物に５、１０、１５、又は２０μＬ加えた。合計量の違いを補正するため、酢酸ナトリウム緩衝液を加えた。プレートをシールした後で、５０℃に温度設定したインキュベーターで、９００ｒｐｍで持続的に振盪させながらプレートをインキュベートした。１６時間後に、プレートを氷上に取り５分置き、１００μＬの、１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ １０）を各ウェルに加え加水分解反応を停止させた。プレートをシールし、室温で５分にわたって３，０００ｒｐｍで遠心処理した。培養上清中の加水分解反応産物をＡＢＴＳアッセイにより解析した。野生型ＢＧＬ１タンパク質に関し、用量反応曲線を作成した。同様の用量を用い、変異型ＢＧＬにより産生される合計糖産量（平均）を、野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）による合計糖産量（平均）により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
セロビアーゼ活性アッセイ（ｐＨ ５）
ｐＨ ５．０での野生型ＢＧＬ１及び変異型ＢＧＬ１のセロビオース加水分解能を試験した。野生型ＢＧＬ１、又は変異型ＢＧＬのいずれかを発現させたヒポクレア・ジェコリナ細胞由来の培養上清をプールし、２０倍希釈（５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）により希釈）したものを、８０μＬの、１６．４ｍＭ（５．６３ｍｇ／ｍＬ）のセロビオース溶液／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）に様々な量（例えば、５、１０、１５、又は２０μＬ）加えた。合計量の違いを補正するため、酢酸ナトリウム緩衝液を加えた。マイクロタイタープレートをシールし、５０℃に温度設定したインキュベーターで、９００ｒｐｍで持続的に振盪させながらインキュベートした。３０分後、１００μＬの、１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ １０）を各ウェルに加え加水分解反応を停止させた。加水分解産物をＡＢＴＳアッセイにより解析した。野生型ＢＧＬ１に関し、用量反応曲線を作成した。同様の用量を用い、変異型ＢＧＬにより産生される合計糖産量（平均）を、野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）による合計糖産量（平均）により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
セロビアーゼ活性アッセイ（ｐＨ ６）
ｐＨ ６．０での野生型ＢＧＬ１及び変異型ＢＧＬ１のセロビオース加水分解能を試験した。野生型ＢＧＬ１、又は変異型ＢＧＬのいずれかを発現させたヒポクレア・ジェコリナ細胞由来の培養上清をプールし、２０倍希釈（５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ６．０）により希釈）したものを、８０μＬの、１６．４ｍＭ（５．６３ｍｇ／ｍＬ）のセロビオース溶液／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ６．０）に様々な量（例えば、５、１０、１５、又は２０μＬ）加えた。合計量の違いを補正するため、クエン酸緩衝液を加えた。マイクロタイタープレートをシールし、５０℃に温度設定したインキュベーターで、９００ｒｐｍで持続的に振盪させながらインキュベートした。３０分後、１００μＬの、１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ １０）を各ウェルに加え加水分解反応を停止させた。加水分解産物をＡＢＴＳアッセイにより解析した。野生型ＢＧＬ１タンパク質に関し、用量反応曲線を作成した。同様の用量を用い、変異型ＢＧＬにより産生される合計糖産量（平均）を、野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）による合計糖産量（平均）により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の存在下でセロビアーゼ活性アッセイを測定することによる、β−グルコシダーゼ活性の測定
トウモロコシ穂軸を挽いて０．９ｍｍのスクリーンを通過させ、国際公開第２００６１１０９０１号に記載されるように前処理した。前処理したＣＣを７％のセルロース懸濁液／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）として使用した。ウェルあたり６５μＬの懸濁液を、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ Ｆｌａｔ Ｂｏｔｔｏｍ ＰＳ）に添加した。前処理したトウモロコシ穂軸に、４５μＬの３５．１ｍＭ（１２．０ｍｇ／ｍＬ）セロビオース溶液を加え、並びに野生型ＢＧＬ１、又は変異型ＢＧＬのいずれかを発現させたヒポクレア・ジェコリナ細胞由来の培養上清をプールし２０倍希釈（５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）により希釈）したものを様々な量（例えば、５、１０、１５、又は２０μＬ）加えた。合計量の違いを補正するため、酢酸緩衝液を加えた。マイクロタイタープレートをシールし、５０℃に温度設定したインキュベーターで、９００ｒｐｍで持続的に振盪させながらインキュベートした。３０分後、１００μＬの、１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ １０）を各ウェルに加え加水分解反応を停止させた。混合後、プレートを３，５００ｒｐｍで５分遠心処理した。加水分解産物をＡＢＴＳアッセイにより解析した。野生型ＢＧＬ１タンパク質に関し、用量反応曲線を作成した。同様の用量を用い、変異型ＢＧＬにより産生される合計糖産量（平均）を、野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）による合計糖産量（平均）により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
（実施例２）
ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１の部位別評価ライブラリ（「ＳＥＬ」）の作製
部位別評価ライブラリ（ＳＥＬ）を作製するにあたり、ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１タンパク質をコードしている配列（配列番号１）を含有させたｐＴＴＴｐｙｒＧ−ＢＧＬ１プラスミドを、様々なサプライヤー、例えば、ＢＡＳＥＣｌｅａｒ（Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ），ＧｅｎｅＡｒｔ ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、及びＳｌｏｎｉｎｇ ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＧｍｂＨ（Ｐｕｃｈｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に送付した。ＢＧＬ１タンパク質のアミノ酸配列の全長を配列番号２に示す。サプライヤーの作成した、ＢＧＬ１成熟タンパク質（配列番号３）の各部位の位置ライブラリを表２−１に示す。
配列番号１は、参照ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１をコードしているＤＮＡ配列を表記するものである：
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配列番号２は、ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１のタンパク質の全長を表記するものである：
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配列番号３は、ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１成熟タンパク質の配列を表記するものである：
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ＩＶＬＬＫＮＤＡＮＩＬＰＬＫＫＰＡＳＩＡＶＶＧＳＡＡＩＩＧＮＨＡＲＮＳＰＳＣＮＤＫＧＣＤＤＧＡＬＧＭＧＷＧＳＧＡＶＮＹＰＹＦＶＡＰＹ
ＤＡＩＮＴＲＡＳＳＱＧＴＱＶＴＬＳＮＴＤＮＴＳＳＧＡＳＡＡＲＧＫＤＶＡＩＶＦＩＴＡＤＳＧＥＧＹＩＴＶＥＧＮＡＧＤＲＮＮＬＤＰＷＨＮＧ
ＮＡＬＶＱＡＶＡＧＡＮＳＮＶＩＶＶＶＨＳＶＧＡＩＩＬＥＱＩＬＡＬＰＱＶＫＡＶＶＷＡＧＬＰＳＱＥＳＧＮＡＬＶＤＶＬＷＧＤＶＳＰＳＧＫＬ
ＶＹＴＩＡＫＳＰＮＤＹＮＴＲＩＶＳＧＧＳＤＳＦＳＥＧＬＦＩＤＹＫＨＦＤＤＡＮＩＴＰＲＹＥＦＧＹＧＬＳＹＴＫＦＮＹＳＲＬＳＶＬＳＴＡＫ
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Figure 2015211678
表２−１に列挙した１７８部位のそれぞれに関し、典型的には１４〜１６の置換変異体を得た。ＳＥＬ変異体（SEL variants）を、それぞれ指定の位置にＢＧＬ１変異体配列の置換をコードしている別個の精製済みプラスミドとして受け取った。
ＢＧＬ１変異体の産生
トリコデルマ・リーゼイでのＢＧＬ１及びＢＧＬ変異体タンパク質の発現を可能にさせるため、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ＬＲ組み換え反応によりＢＧＬ１コード配列をＧａｔｅｗａｙ ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｄｅｓｔｉｎａｔｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＴＴＴ−ｐｙｒＧ１３（図１０）にクローン化した。このベクターには、対象とする遺伝子の強発現誘導を可能にするトリコデルマ・リーゼイｃｂｈＩ由来のプロモーター及びターミネータ領域、唯一の窒素供給源としてアセトアミドを用いた場合に形質転換体に増殖性を付与するアスペルギルス・ニデュランスａｍｄＳ及びｐｙｒＧ選択マーカー、並びに真菌細胞中で非染色体プラスミドを維持させるトリコデルマ・リーゼイテロメア領域を含有させた。加えて、このベクターにより、ウリジン要求性を備えるトリコデルマ・リーゼイ株の選別が可能になる。ｃｂｈＩプロモーター及びターミネータ領域を、クロラムフェニコール耐性遺伝子ＣｍＲ、及びラムダバクテリオファージ特異的組み換え部位ａｔｔＲ１、ａｔｔＲ２に隣接させた致死性Ｅ．ｃｏｌｉ遺伝子、ｃｃｄＢにより分離した。このような構成により、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ＬＲ組み換え反応により、ＢＧＬ１遺伝子をｃｂｈＩ調節エレメント対照の下流右側に含有している組み換え体を直接的に選別することが可能になる。最終発現ベクターｐＴＴＴ−ｐｙｒＧ−ＢＧＬ１を図２に示す。
ＢＧＬ１変異体配列をコードしている遺伝子を発現させた精製ｐＴＴＴｐｙｒＧ−ＢＧＬ１プラスミド（ｐｃｂｈ１，ＡｍｐＲ，アセトアミダーゼ）を、上に列挙したサプライヤから得た。ヒポクレア・ジェコリナ株（Δｅｇ１，Δｅｇ２，Δｃｂｈ１，Δｃｂｈ２，Δｂｇｌ１）のプロトプラストを、別個のｐＴＴＴｐｙｒＧコンストラクト（形質転換あたり１種のＢＧＬ１変異体）で形質転換させ、アセトアミドを含有させた選択寒天培地で、前述のように、例えば、ＰＣＴ特許出願国際公開第２００９／０４８４８８号に記載のように２８℃で７日間にわたって増殖させた。ヒポクレア・ジェコリナプロトプラストを作製し、回収し、アセトアミド含有寒天培地に蒔き、２８℃にて７日間インキュベートした。１５％のグリセロールに胞子を回収し、−２０℃で保存した。ＢＧＬ１変異体産生の際、ＰＶＤＦフィルタプレート中で、１０μＬ容量の胞子懸濁液を、２％のグルコース／ソホロース混合物を含有させた２００μＬのグリシン含有最小培地に加えた。各ＢＧＬ１変異体を４つ組で増殖させた。酸素透過性の膜でプレートをシールした後、２２０ｒｐｍで振盪させながら、プレートを２８℃で６日間インキュベートした。減圧下で培養培地をマイクロタイタープレートに移すことで、濾液を回収した。実施例１Ａに記載されるようなヘキソキナーゼアッセイを用い残存グルコース測定した。
（実施例３）
ＢＧＬ１変異体の発現、活性及び性能
ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１ＳＥＬ変異体タンパク質を、対象とする様々な特性に関し試験した。具体的には、ＨＰＬＣアッセイ（ＨＰＬＣ）、ＣＮＰＧ加水分解活性（ＣＮＰＧ）、活性に対するグルコースの影響（Ｇｌｕｃ）、熱安定性（Ｈｅａｔ）、ＰＡＳＣ加水分解（ＰＡＳＣ）、ＰＣＳ加水分解（ＰＣＳ）、ｐＨ ５．０でのセロビアーゼ活性（Ｇ２ ｐＨ ５）、ｐＨ ６．０セロビアーゼ活性（Ｇ２ ｐＨ ６）、並びに実施例１により記載されるとおりの、アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（Ｇ２ ＣＣ）の存在下での、セロビアーゼ活性により測定されるβ−グルコシダーゼ活性、によりタンパク質発現についてβ−グルコシダーゼ変異体を試験した。表３−１に示すＢＧＬ１変異体に関する性能指数は、少数点第三位を四捨五入したものである。性能指数（ＰＩ）は、変異型ＢＧＬ１の性能対野生型ＢＧＬ１の性能の比である。０．０５以下の性能指数は、概して０．０５に固定した。しかしながら、ＨＰＬＣによるタンパク質の値が０．０であった場合には、すべての値は０．０４に固定した。野生型残基を有するＳＥＬ酵素に関するＰＩ値は、１．００に設定した。四捨五入の前に１を超えたＰＩ値は、イタリック体をボールド体にして表３−１に示す。
Figure 2015211678
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様々な用語、例えば、Ｈｅａｔ、ＣＮＰＧ、ＰＡＳＣ、ＰＣＳ、ＧＬＵＣ、Ｇ２ ｐＨ ５、Ｇ２ ｐＨ ６、Ｇ２ ＣＣを、上記表中の活性及び／又は安定性について変異体を記載するために使用する。有効な変異体は１以上のＰＩを有し；中立変異体は０．５以上のＰＩを有し；非有害変異は０．０５以上のＰＩ値を有し；及び有害な変異体は０．０５のＰＩを有する。変異が生じた位置により、次のように分類する：少なくとも１つの特性について少なくとも１つの中立変異を有する、完全に制限されていない部位、及びそれに対し、活性及び安定性について中立変異を有さない完全に制限されている部位。
本開示の展開中に決定されるように、ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１の位置４４１及び４５２は、完全に制限された位置である。表３−１に示されるデータは、任意のβ−グルコシダーゼを組み換えするために使用することができ、特定の位置のアミノ酸がヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１と異なるようなアミノ酸を有するようＢＧＬを組み替える場合でさえも使用することができる。例えば、表３−１のデータを使用すると、ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１野生型アミノ酸に対する置換を包含する、置換の、最良の選択を同定することで、ＢＧＬに所望される特性を変更し得る置換を見つけることができる。
すべてのＢＧＬ１変異体（３，１５３）は上記のように分類した。組み合わせ可能な変異は、１つ以上の所望の特性に関し適切な性能指数を有するタンパク質を供給できるよう組み合わせることのできる変異である。手短に言えば、少なくとも１つの特性についてＰＩが０．５以上である、適度に組み合わせ可能な２，６０９個の変異が同定された。加えて、すべての他の特性についてＰＩが少なくとも０．５である、高度に組み合わせ可能な３６５個の変異が同定された一方、高度に組み合わせ可能であるこれらの変異のうちの２１３個は、すべての特性についてＰＩが０．８を超えていることが判明した。組み合わせることのできない変異は、すべてのＰＩ値が≦０．０５のものである。ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１に対して上記の置換のうち１つを有する任意のＢＧＬ１変異体は、その位置で、組み合わせ可能な置換の内の一つへとアミノ酸を変異させることにより改良され得る。表３−１に列挙される３１５３個のＢＧＬ１変異のうち、２，２６８個以上の変異で少なくとも１つの特性についてＰＩが１．０以上であることが同定された上、１，８３６個以上の変異で少なくとも１つの特性についてＰＩが１．１超であることが同定された。
一部の実施形態では、変異体は、対象とする少なくとも１つの特性についてＰＩが１．０以上である改良された変異体である。しかしながら、他の実施形態では、対象とするＢＧＬ１変異体は、発現についてＰＩが０．１〜１．０のものである。特に、例えば、ＢＧＬ１変異体の中〜高レベルな発現が発酵槽においてタンパク質産生にとって有害である場合には、発現についてＰＩが０．１〜１．０である変異が望ましい。同様に、組み換え宿主細胞の培養培地に最適比の酵素濃度が所望されるような環境では、発現が、減少しているものの測定可能なレベルである（０．１＜ＰＩ＜１．０）変異型を利用することが望ましい場合もある。
更なる実施形態では、対象とするＢＧＬ１変異体は、熱安定性についてＰＩが０．１〜１．０のものである。例えば、野生型、又は参照ＢＧＬと比較して熱安定性が低下しているものの、対象とする条件下で改良された活性を有する変異型の場合には、変異体は熱安定性に関しＰＩが０．１〜１．０のものであることが望ましい。同様に、組み換え宿主細胞の培養培地に最適比の酵素活性が所望されるような環境では、熱安定性が、低下しているものの測定可能なレベルである（０．１＜ＰＩ＜１．０）変異型を利用することが望ましい。
同様に、一部の実施形態では、対象とするＢＧＬ１変異体は、活性についてＰＩが０．１〜１．０のものである。例えば、野生型、又は参照ＢＧＬと比較して熱安定性が低下しているものの、対象とする条件下で改良された活性を有する変異型の場合には、変異体は熱安定性に関しＰＩが０．１〜１．０のものであることが望ましい。同様に、組み換え宿主細胞の培養培地に最適比の酵素活性が所望されるような環境では、活性が、低下しているものの測定可能なレベルである（０．１＜ＰＩ＜１．０）変異型を利用することが望ましい場合もある。
表３−２は、多くの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良された上記の研究から、特に興味深く同定された変異の要約を提供する。
Figure 2015211678
Figure 2015211678
（実施例４）
更なるＢＧＬ変異体の発現、活性及び性能
４−１．アッセイ
改変したＨＰＬＣアッセイを使用することで、このライブラリでＢＧＬ変異体を実験した場合のタンパク質含量を実施例１に記載されるものと比較して測定した。具体的な手順を以下に記載する。グルコースによる阻害アッセイも改変した。用いた手順は以下に記載のものであった。
タンパク質含量を測定するためのＨＰＬＣアッセイ
プールした培養上清由来のＢＧＬ変異体の濃度を、５０℃で較正したＰｒｏｓｗｉｆｔ ＲＰ−２Ｈ ５０×４．６ｍｍカラム（Ｄｉｏｎｅｘ）を取り付けたＡｇｉｌｅｎｔ １２００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）ＨＰＬＣにより測定した。５０μＬの試料を５０μＬの１０％のアセトニトリルと混合し、５分後に減圧下で０．２２μｍ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ ＨＴＳ ９６ウェル濾過システムにより濾過した。１０μＬの濾過済み試料をカラムに充填した。２種類の緩衝液を使用して、流速１ｍＬ／分で、溶出勾配を構成した：（１）緩衝液Ａ：０．３％のＰＥＧ１０００及び０．１％のＴＦＡの脱イオン水溶液；及び（２）緩衝液Ｂ：６４．６３％のアセトニトリル、３５％の２−プロパノール、０．３％のＰＥＧ１０００及び０．０７％のＴＦＡの、脱イオン水溶液。次のプログラムを用い溶出を実施した：０分〜０．２５分は５％の緩衝液Ｂを用い、続く０．２５分〜１分は５％の緩衝液Ｂ〜３５％の緩衝液Ｂの勾配を用い、続く１分〜５分は３５％の緩衝液Ｂ〜５５％の緩衝液Ｂの勾配を用いた。精製した野生型ＢＧＬ１を用い、較正曲線を作成した。標準較正曲線を用い、ＢＧＬ変異体の濃度を測定した。ＢＧＬ変異体の濃度を、同様のプレートでの野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の平均濃度で除算して性能指数（ＰＩ）を計算した。
グルコースによる阻害アッセイ
上記のＣＮＰＧアーゼ活性アッセイを２．５ｍＭのグルコースの存在下で実施することで、β−グルコシダーゼによる加水分解活性に対するグルコースの影響を判定した。変異型及び野生型タンパク質の相対残存活性を、グルコースの存在下での平均比活性及びグルコースの非存在下での平均比活性の比により判定した。ＢＧＬ変異体の相対的な残効性を野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の相対的な残効性により除算することで、ＢＧＬ変異体の性能指数（ＰＩ）を判定した。
４−２．更なるヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１部位別評価ライブラリの作製
配列（配列番号１）をコードしている野生型ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬ１を含有しているｐＴＴＴｐｙｒＧ−ＢＧＬ１プラスミドをＢＡＳＥＣｌｅａｒ（Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）に送付した。ＢＡＳＥＣｌｅａｒが以下表４−１に記載の各部位で位置別ライブラリを作製した。部位は、配列番号３のＢＧＬ１成熟タンパク質の残基番号を参照して、番号付与した。
Figure 2015211678
表４−１中の７５部位のそれぞれについて、約１４〜１６の置換変異体を作成した。次いで、これらの変異体を実施例２に記載のように調製した。
４−３ ＢＧＬ１変異体の発現、安定性、活性及び性能
変異体の発現レベルを本明細書に記載のようにＨＰＬＣアッセイを用い測定した。ＰＩ値を算出し、表４−２の「ＨＰＬＣ」欄に掲載した。ＣＮＰＧ加水分解活性も測定した。対応するＰＩ値を算出し、結果を表４−２の「ＣＮＰＧ」欄に掲載した。活性に対するグルコースの影響、すなわちグルコースによる阻害も測定し、結果を「Ｇｌｕｃ」欄に掲載した。
熱安定性測定は、「Ｈｅａｔ」欄に掲載し、ＰＡＳＣの加水分解の比活性は「ＰＡＳＣ」欄に掲載し、及びＰＣＳの加水分解の比活性は「ＰＣＳ」欄に掲載した。これらの変異体のセロビアーゼ活性もｐＨ ５．０で測定し、結果を「Ｇ２ ｐＨ ５」欄に掲載した。アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の加水分解の比活性を同様に測定し、結果を「ＣＣ」欄に掲載した。表４−２に掲載しているＰＩは、表の下にある余白に記載されるように範囲に基づき分類される。具体的には、ＰＩは、親、又は参照β−グルコシダーゼの性能に対する変異体の性能の比である。
表４−２は、第２ＳＥＬライブラリで試験した追加の１５０１個の置換を掲載する。
Figure 2015211678
Figure 2015211678
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対象とする数種の変異体を手作業で選択した。表４−３は、第２ＳＥＬライブラリ由来の３５個の更なる変異体を含む。
Figure 2015211678
第１（実施例３）及び第２（実施例４）ＳＥＬによる選別で得られた置換結果を上記のような様々な活性について解析し、これらの変異体が活性を２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つ（又は６つ以上）有することに従ってグループ分けした。これらの複数の活性を保有している変異体を表４−４〜表４−７に示す：
Figure 2015211678
Figure 2015211678
Figure 2015211678
Figure 2015211678
要約すれば、表４−８は、（１）Ｈｅａｔ（熱安定性）、（２）ＨＰＬＣ（タンパク質発現）、（３）ＰＣＳ、（４）（ＰＡＳＣ）、（５）Ｇ２（セロビオヒドロラーゼ活性）、（６）Ｇ２＋ＣＣ、又はＣＣ加水分解により測定されるβ−グルコシダーゼ活性から選択される２つ以上の活性が改良されたすべての変異体を掲載する。
Figure 2015211678
（実施例５）
ＢＧＬ１のコンビナトリアルなライブラリ変異体及びそれらの活性
５．１アッセイ：
タンパク質含量を測定するためのＨＰＬＣアッセイ
プールした培養上清中の各ＢＧＬポリペプチド（野生型、又は変異型）の濃度を、３５℃で平衡化した、Ｓｈｏｄｅｘ ＨＩＣ ＰＨ−８１４ ＰＨＭゲル７５×８ｍｍカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を取り付けたＡｇｉｌｅｎｔ １２００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）ＨＰＬＣを用い測定した。４５μＬの上清を１５μＬの、遺伝子組み換えにより発現させた８０ｐｐｍのオハグロシドロ（Ｓ．ｐｌｉｃａｔｕｓ）グリコシダーゼＥｎｄｏＨ（例えばＮＥＢ Ｐ０７０２Ｌ）／２００ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）と共にインキュベートし、９００ｒｍｐで振盪させながら３７℃で一晩インキュベートした。６０μＬの１．６Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４を上清に加え、５分後、０．２２μｍのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ ＨＴＳ ９６ウェル濾過システムを用い混合物を減圧下で濾過した。４０μＬの濾過済み試料をカラムに充填した。２種の溶出緩衝液を使用して、溶出勾配を作り出した：（１）緩衝液Ａ：１６ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ ６．７５）、８００ｍＭ（ＮＨ４）２ＳＯ４；及び（２）緩衝液Ｂ：１６ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４（ｐＨ ６．７５）。流速１．８ｍＬ／分で、次のプログラムを用い溶出を実施した：０％の緩衝液Ｂを０分〜０．５分用い、続いて緩衝液Ｂの０％〜５０％の勾配を０．５分〜１分用い、続いて緩衝液Ｂの５０％〜１００％の勾配を１分〜６分用い、続いて１００％の緩衝液Ｂを６〜８分用いた。精製した野生型ＢＧＬ１により作製した較正曲線を用い、ＢＧＬ変異体のタンパク質濃度を測定した。ＢＧＬ変異体の濃度を、同様のプレートでの野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の平均濃度で除算して性能指数（ＰＩ）を計算した。
ＣＮＰＧアーゼ活性アッセイを用いる、アッセイに必要とされる試料溶出の測定
ＢＧＬ１産生レベルを測定するため、クロロ−ニトロフェノール−β−Ｄ−グルコシド（ＣＮＰＧ）に対するＢＧＬ変異体の活性を測定した。５μＬの上清を９５μＬの１ｍＭのＣＮＰＧ／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５）に加え、マイクロプレートリーダーで３分間ＯＤ４０５読み取り値を記録した。ＣＮＰＧ活性に基づき、並びに野生型ＢＧＬ１対照の活性と比較して、上清を２５〜３００ｐｐｍのＧＬ１のレベルに希釈した。
ＣＮＰＧアーゼ活性のアッセイ
クロロ−ニトロフェノール−β−Ｄ−グルコシド（ＣＮＰＧ）に対するＢＧＬ変異体の活性を測定した。ＢＧＬ変異体を発現させた培養上清を、０．１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有している５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）で、５、６．６７、１０及び２０倍に希釈した。希釈した上清の５０μＬのアリコートを５０μＬの２ｍＭのＣＮＰＧ／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）に加え、最終濃度１ｍＭのＣＮＰＧを得た。ＯＤ４０５をモニタリングすることでＣＮＰの放出動態を測定し、マイクロタイタープレートリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）で３分間記録した。平均ＣＮＰＧ加水分解活性をＢＧＬポリペプチド濃度で除算することで、野生型ＢＧＬ１及びＢＧＬ変異体の平均比活性を算出した。ＢＧＬ変異型の比活性を、同様のプレートでの野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の平均比活性により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
熱安定性アッセイ
加熱インキュベーション後のＢＧＬ１変異体の残効性をＣＮＰＧアッセイを用い判定した。ＢＧＬ変異体を発現させた培養上清を、０．１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡを含有している５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）で、５、６．６７、１０及び２０倍に希釈した。８０μＬのアリコート（４つ組み）を、６６℃の熱循環器内で、スカート付きの、９６ウェルＰＣＲプレートで１時間インキュベートした。氷上で５分冷却後、野生型及びＢＧＬ１変異体のそれぞれの残存比活性を上記のように測定した。変異体及び野生型ＢＧＬ１の残存活性を、インキュベーション後の平均比活性及びインキュベーション前の平均比活性の比により判定した。ＢＧＬ１変異体の残効性を野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の相対的な残効性により除算することで、ＢＧＬ変異体の性能指数（ＰＩ）を判定した。
グルコースによる阻害についてのアッセイ
上記のＣＮＰＧアーゼ活性アッセイを１８．７５ｍＭのグルコースの存在下で再現することで、β−グルコシダーゼによる加水分解活性に対するグルコースの影響を測定した。変異型及び野生型タンパク質の相対残存活性を、グルコースの存在下での平均比活性及びグルコースの非存在下での平均比活性の比により判定した。ＢＧＬ変異体の相対的な残効性を野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）の相対的な残効性により除算することで、ＢＧＬ変異体の性能指数（ＰＩ）を判定した。
リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解アッセイにおける比活性
公開されている方法に従ってＡｖｉｃｅｌによりリン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）を調製した（例えば、Ｗａｌｓｅｔｈ，Ｔａｐｐｉ，３５：２２８，１９７１；及びＷｏｏｄ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，１２１：３５３〜３６２，１９７１を参照されたい）。この材料を酢酸ナトリウム緩衝液及び水で希釈し、酢酸ナトリウムの最終濃度が５０ｍＭでかつｐＨが５．０の１重量／体積％の混合物を得た。１５０μＬのＰＡＳＣ／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）の１％懸濁液を９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｃｏｓｔａｒ Ｆｌａｔ Ｂｏｔｔｏｍ ＰＳ）に分注した。０．７５ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含有している、ＢＧＬ１−欠損株由来の１０μＬの培養上清をＰＡＳＣに添加した。次に、野生型ＢＧＬ１、又はＢＧＬ変異型のいずれかを発現しているヒポクレア・ジェコリナ細胞由来の培養上清をプールし、８倍希釈（５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）中）したもの５、１０、２０、又は４０μＬを、ＰＡＳＣ／欠失変異体上清混合物に添加した。合計量の違いを補正するため、酢酸ナトリウム緩衝液を加えた。マイクロタイタープレートをシールし、５０℃に温度設定したインキュベーターで、９００ｒｐｍで持続的に振盪させながらインキュベートした。２時間後、１００μＬの、１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ １０）を各ウェルに加え加水分解反応を停止させた。このプレートをシールし、室温で５分間３０００ｒｐｍで遠心処理した。培養上清中の加水分解産物をＡＢＴＳアッセイにより解析した。野生型ＢＧＬ１タンパク質に関し、用量反応曲線を作成した。同様の用量を用い、変異型ＢＧＬにより産生される合計糖産量（平均）を、野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）による合計糖産量（平均）により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
希酸で前処理したトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）の加水分解アッセイにおける比活性
トウモロコシ茎葉を、２重量／重量％のＨ２ＳＯ４（Ｓｃｈｅｌｌら、Ｊ Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１０５：６９〜８６，２００３を参照されたい）で前処理し、続いて脱イオン水により複数回洗浄することでｐＨ ４．５のプレートを得た。次に、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）を加え（最終濃度５０ｍＭの酢酸ナトリウムにする）、必要な場合、更に１ＮのＮａＯＨを用いこの混合物をｐＨ ５．０に滴定した。反応混合物中のセルロース濃度はおよそ７％であった。ウェルあたり６５μＬのセルロース懸濁液を、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ Ｆｌａｔ Ｂｏｔｔｏｍ ＰＳ）に添加した。１０ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含有している、ＢＧＬ１欠損株由来の培養上清１０μＬをＰＡＳＣ懸濁液に加えた。次に、野生型ＢＧＬ１、又はＢＧＬ変異型のいずれかを発現しているヒポクレア・ジェコリナ細胞由来の培養上清をプールし、２倍希釈（５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）中）したもの５、１０、２０、又は４０μＬを、ＰＣＳ／欠失変異体上清混合物に添加した。合計量の違いを補正するため、酢酸ナトリウム緩衝液を加えた。シール後、５０℃に温度設定したインキュベーターで、９００ｒｐｍで持続的に振盪させながらインキュベートした。１６時間後に、このプレートを氷上に５分間配置し、各ウェルに１００μＬの１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ １０）を添加することで加水分解反応を停止させた。このプレートをシールし、室温で５分間３，０００ｒｐｍで遠心処理した。上清中に存在する加水分解産物をＡＢＴＳアッセイ（上記）により解析した。精製した野生型ＢＧＬ１に関し、用量反応曲線を作成した。同様の用量を用い、変異型ＢＧＬにより産生される合計糖産量（平均）を、野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）による合計糖産量（平均）により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
セロビアーゼ活性アッセイ
ｐＨ ５．０での野生型ＢＧＬ１及び変異型ＢＧＬのセロビオース加水分解能を試験した。野生型ＢＧＬ１、又は変異型ＢＧＬのいずれかを発現させたヒポクレア・ジェコリナ細胞由来の培養上清をプールし、４倍希釈（５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）により希釈）したものを、８０μＬの、１６．４ｍＭ（５．６３ｍｇ／ｍＬ）のセロビオース溶液／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）に様々な量（例えば、５、１０、１５、又は２０μＬ）加えた。合計量の違いを補正するため、酢酸ナトリウム緩衝液を加えた。マイクロタイタープレートをシールし、５０℃に温度設定したインキュベーターで、９００ｒｐｍで持続的に振盪させながらインキュベートした。３０分後、プレートを氷上で冷却し、１００μＬの１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ １０）を各ウェルに添加した。加水分解産物をＡＢＴＳアッセイ（上記）により解析した。精製した野生型ＢＧＬ１を用い、用量反応曲線を作成した。同様の用量を用い、変異型ＢＧＬにより産生される合計糖産量（平均）を、野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）による合計糖産量（平均）により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸の加水分解アッセイにおけるβ−グルコシダーゼの比活性
トウモロコシ穂軸を挽いて０．９ｍｍのスクリーンを通過させ、国際公開第２００６１１０９０１号に記載されるように前処理した。前処理したトウモロコシ穂軸を７％セルロース懸濁液／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）として使用した。ウェルあたり６５μＬの懸濁液を、９６ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ Ｆｌａｔ Ｂｏｔｔｏｍ ＰＳ）に添加した。０．７６ｍｇ／ｍＬのタンパク質を含有している、トリコデルマ・リーゼイ（T. reesei）エンドキシラナーゼ遺伝子ｘｙｎ３、フザリウム・バーティシリオイデス（Fusarium verticillioides）β−キシロシダーゼ遺伝子Ｆｖ３Ａ、フザリウム・バーティシリオイデスβ−キシロシダーゼ遺伝子Ｆｖ４３Ｄ、及びフザリウム・バーティシリオイデスα−アラビノフラノシダーゼ遺伝子Ｆｖ５１Ａを過剰発現しているトリコデルマ・リーゼイ株／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）を前処理したトウモロコシ穂軸に１０μＬ添加した。野生型ＢＧＬ１、又はＢＧＬ変異体を発現しているヒポクレア・ジェコリナ細胞からプールした培養上清を様々な量（５、１０、２０、又は４０μＬ）添加した。合計量の違いを補正するため、酢酸ナトリウム緩衝液を加えた。マイクロタイタープレートをシールし、５０℃に温度設定したインキュベーターで、９００ｒｐｍで持続的に振盪させながらインキュベートした。２４時間後、１００μＬの１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ １０）を各ウェルに加え、加水分解反応を停止させた。混合後、プレートを３，０００ｒｐｍで５分間遠心処理した。加水分解産物をＡＢＴＳアッセイ（上記）により解析した。精製した野生型ＢＧＬ１を用い、用量反応曲線を作成した。同様の用量を用い、変異型ＢＧＬにより産生される合計糖産量（平均）を、野生型ＢＧＬ１（例えば、参照酵素）による合計糖産量（平均）により除算することで、性能指数（ＰＩ）を算出した。
５−２．ヒポクレア・ジェコリナＢＧＬのコンビナトリアルな変異体の作製
コンビナトリアルなＢＧＬ変異体を作製し、又は民間のメーカー、例えば、Ｓｌｏｎｉｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＧｍｂＨ（Ｐｕｃｈｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＢａｓｅＣｌｅａｒ（Ｌｅｉｄｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓｌａｎｄｓ）から購入した。表５−１は、ＢＧＬのコンビナトリアルなライブラリに包含させるための選択された置換を掲載する。アミノ酸残基数は、参照野生型ＢＧＬ１成熟アミノ酸配列、配列番号３を参照して割り当てた。
Figure 2015211678
ｐＴＴＴｐｙｒＧ−ｂｇｌ１から誘導されるコンビナトリアルな変異体をＥ．ｃｏｌｉで作製し、２ｘ ＴＹ寒天プレート（１６ｇ／ＬのＢａｃｔｏ Ｔｒｙｐｔｏｎｅ（Ｄｉｆｃｏ，ＵＳＡ），１０ｇ／ＬのＢａｃｔｏ Ｙｅａｓｔ抽出物（Ｄｉｆｃｏ，ＵＳＡ），５ｇ／ＬのＮａＣｌ，１６ｇ／ＬのＢａｃｔｏ Ａｇａｒ（Ｄｉｆｃｏ，ＵＳＡ）），１００μｇ／ｍＬのアンピシリン）に蒔いた。３７℃で一晩インキュベーションさせた後、１００μｇ／ｍＬのアンピシリンを含有している２ｘ ＴＹ寒天プレートから、ＢＧＬ１変異を持つＥ．ｃｏｌｉコロニーを回収し、１００μｇ／ｍＬのアンピシリン及び５０μｇ／ｍＬのカナマイシンを含有している１ｍＬの２ｘ ＴＹ培地を含有しているマイクロタイタープレート中で、３７℃で２４時間増殖させた。バクテリア培養物を用い、プラスミドＤＮＡを精製した。
精製した、ＢＧＬ１のコンビナトリアルな変異体をコードしているｐＴＴＴｐｙｒＧ−ｂｇｌ１誘導型プラスミドを、１５０〜３００ｎｇ／μＬの濃度でヒポクレア・ジェコリナ形質転換に用いた。ｃｂｈ１プロモーター下でＢＧＬ１変異体を発現しているこれらの複製プラスミドは、アセトアミド存在下で増殖させるためのヒポクレア・ジェコリナ形質転換細胞を与える。５μＬのプラスミドを使用して、例えば、米国特許出願公開第２００６／００９４０８０（Ａ１）号に記載されるように、真菌を形質転換させた。ヒポクレア・ジェコリナ株（Δｅｇ１，Δｅｇ２，Δｃｂｈ１，Δｃｂｈ２，Δｂｇｌ１）を、それぞれｐＴＴＴｐｙｒＧ−ＢＧＬ１コンストラクト（すなわち、形質転換あたり１種のＢＧＬ１変異体）により形質転換し、２４ウェルのマイクロタイタープレート中で、アセトアミドを含有している選択培地により２８℃で７日間増殖させた。
それぞれの変異を持つヒポクレア・ジェコリナ形質転換体の初期集団由来の胞子を回収し、アセトアミド寒天プレート上で再選別した。生理食塩水を用い胞子を回収し、９６ウェルマイクロタイタープレートに再配置させ、ＢＧＬ変異体試料を作製するための様々な産生培地への摂取に用いた。この目的のため、各ウェルに、４．７ｇ／Ｌの（ＮＨ４）２ＳＯ４；３３ｇ／Ｌの１，４−ピペラジンビス（プロパンスルホン酸）（ｐＨ ５．５）；６．０ｇ／Ｌのグリシン；５．０ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４；１．０ｇ／ＬのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ；１．０ｇ／ＬのＭｇＳＯ４×７Ｈ２Ｏ；５ｇ／ＬのＦｅＳＯ４×７Ｈ２Ｏ，１．４ｇ／ＬのＺｎＳＯ４×７Ｈ２Ｏ，１．６ｇ／ＬのＭｎＳＯ４×Ｈ２Ｏ，３．７ｇ／ＬのＣｏＣｌ２×６Ｈ２Ｏを含有している２．５ｍＬ／Ｌの４００Ｘトリコデルマ・リーゼイ微量成分；２０ｇ／Ｌのグルコース；及び６．５ｇ／Ｌのソホロースを含有させた２５０μＬのグリシン含有産生培地を含有している９６ウェルフィルタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ａｒｔ．Ｎｏ．３５０５）に、ヒポクレア・ジェコリナ形質転換体の胞子懸濁液を４つ組みで摂取した。プレートを２８℃及び８０％湿度で６〜８日間インキュベートした。真空濾過により培養上清を回収した。実施例１Ａに記載されるようなヘキソキナーゼアッセイを用い、これらの上清濾液中の残存グルコースを測定した。
置換の組み合わせを、上記のように様々な活性について試験した。この試験の結果を下表５−２に示す。
Figure 2015211678
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コンビナトリアルな置換結果を更に解析して、少なくとも２、３、４、５、又は６（又は６以上）の活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良された変異体を判定した。これらの複数の活性が改良された変異体を表５−３〜表５−６に示す：
Figure 2015211678
Figure 2015211678
Figure 2015211678
Figure 2015211678
（実施例６）
グルコースによる阻害が減少した、コンビナトリアルなＢＧＬ１変異体
多くのＢＧＬ変異体を選別し、グルコース存在下でのＣＮＰＧ加水分解能について、グルコースの濃度範囲を設定して試験した。野生型ＢＧＬ１、又はＢＧＬ変異体を産生するヒポクレア・ジェコリナ株の培養上清を、最小ＣＮＰＧ活性が２０ｍＯＤ／分になるよう希釈した。次に、野生型ＢＧＬ１、又はＢＧＬ変異体の上清を様々な量のグルコースと混合し、最終グルコース濃度０〜２５ｍＭを得た。
１ｍＭのＣＮＰＧ／５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ ５．０）を添加し、アッセイを開始した。ＯＤ４０５ｎｍをＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｖｉｃｅｓ）で３分間記録して動態測定をした。
式ｙ＝ａ／（１＋ｘ／ｂ）を用い、ＩＣ５０値を測定した。式中、ｙはＣＮＰＧ比活性（ｍＯＤ／分）を表し、ｘは阻害基質濃度を表し（ｍＭグルコース）、ａは最大反応速度を表し（ＣＮＰＧ活性，ｍＯＤ／分）、及びｂは酵素活性が半分に減少する阻害物質濃度を表わす。阻害率の減少を算出するために、所定のＢＧＬ変異体について得られたＩＣ５０値を、野生型ＢＧＬ１について得られたＩＣ５０値により除算した。
Figure 2015211678
＊「＋」、「＋＋」、「＋＋＋」、及び「＋＋＋＋」は、野生型ＢＧＬ１について観察されるグルコース阻害と比較したときに、グルコースによる阻害が１．２〜２倍、２〜３倍、３〜６倍、６〜１０倍減少したことを意味する。
本開示の様々な修正及び変更が、本開示の範囲及び精神から逸脱することなく、当業者には明らかになるであろう。本開示は特定の好ましい実施形態に関連付けて記載したが、本開示は、特定の実施形態に不当に制限されるよう請求されるものではないことは明白である。実際に、当業者により理解される本開示を実施するために記載された様式の様々な修正が、請求の範囲内に意図される。

Claims (108)

  1. （ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、
    （ｂ）セロビアーゼ活性、
    （ｃ）タンパク質発現、
    （ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の存在下でのセロビアーゼ活性又はＣＣ加水分解活性のいずれかにより測定されるβ−グルコシダーゼ活性、
    （ｅ）熱安定性、
    （ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、及び
    （ｇ）グルコース存在下での加水分解活性、
    からなる群から選択される少なくとも２つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良された、β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）変異体であって、上記ＢＧＬ１変異体が表４−８、３−２、４−２及び４−３に示されるような任意の変異体である、β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）変異体。
  2. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｄ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｌ２６６Ａ、Ｉ５６７Ｅ、Ｓ２８３Ｆ、Ｓ２８３Ｐ、Ｔ２５８Ｅ、Ｔ２５８Ｉ、Ｔ２５８Ｋ、Ｔ２５８Ｑ、Ｐ５３６Ｔ、Ｐ５３６Ｗ、Ｉ５３２Ｙ、Ｙ５３０Ｔ、Ｐ６０７Ｄ、Ｑ４０６Ｍ、Ｑ４０６Ｓ、Ｖ６０２Ｔ、Ｇ３００Ｍ、Ａ６３０Ｓ、Ａ６３０Ｔ、Ｔ１８０Ｈ、Ｔ１８０Ｍ、Ａ４５０Ｍ、Ｉ４４４Ｅ、Ｉ４４４Ｆ、Ｉ４４４Ｎ、Ｉ４４４Ｗ、Ｉ４４４Ｙ、Ｖ５００Ｑ、Ａ６３３Ｉ、Ｓ４８２Ｐ、Ａ６６７Ｖ、Ａ４８５Ｌ、Ａ４８５Ｗ、Ｙ６７８Ｒ、Ｖ６０３Ｇ、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｆ２６０Ｗ、Ｙ５３０Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ａ６３０Ｙ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１に記載のＢＧＬ１変異体。
  3. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｅ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｐ６０７Ｈ、Ｔ０１１Ｅ、Ｔ０１１Ｙ、Ｎ１４６Ｅ、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１又は２に記載のＢＧＬ１変異体。
  4. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｆ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｎ２６１Ｃ、Ｔ２５８Ｃ、Ｆ３９２Ｑ、Ｓ６２４Ｅ、Ｐ６０７Ｃ、Ｐ６０４Ｍ、Ａ３７７Ｑ、Ｎ４６１Ａ、Ｎ４６１Ｆ、Ｎ４６１Ｐ、Ｔ４３６Ａ、Ｔ４３６Ｃ、Ｔ４３６Ｆ、Ｔ４３６Ｉ、Ｔ４３６Ｍ、Ｔ４３６Ｑ、Ｔ４３６Ｙ、Ｑ２２０Ｃ、Ａ６５５Ｌ、Ｔ６４６Ｈ、Ｙ６７８Ｆ、Ａ４６８Ｉ、Ｄ１７７Ｍ、Ｐ６６１Ｅ、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｔ４３６Ｅ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｗ、Ｙ５３０Ｆ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｅ１７０Ｆ、Ｓ５０７Ｇ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  5. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｂ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｉ５６７Ｑ、Ａ５６５Ｆ、Ａ５６５Ｋ、Ａ５６５Ｑ、Ａ５６５Ｖ、Ｆ５５６Ｅ、Ｆ２６０Ｉ、Ｐ６０７Ｅ、Ｇ６０５Ｒ、Ｇ３００Ｃ、Ａ３７７Ｃ、Ａ３７７Ｄ、Ｓ３０８Ｃ、Ｎ１４６Ｈ、Ｎ１４６Ｓ、Ａ６５５Ｃ、Ａ６５５Ｇ、Ｐ１７６Ｌ、Ｔ２０９Ｉ、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ａ５６５Ｃ、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｙ６３９Ｖ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ｅ１７０Ｆ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  6. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｃ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｉ５６７Ｋ、Ｉ５６７Ｒ、Ａ５６５Ｅ、Ａ５６５Ｓ、Ａ５６５Ｙ、Ｆ３９２Ｙ、Ｑ４０６Ｈ、Ｑ４０６Ｔ、Ｐ６０４Ｃ、Ｎ０３８Ｆ、Ｔ５６８Ａ、Ｎ４６１Ｇ、Ｙ６３９Ｌ、Ｙ６３９Ｍ、Ｔ２４３Ａ、Ｔ２４３Ｃ、Ｑ２４５Ｈ、Ｑ２４５Ｍ、Ｑ２４５Ｔ、Ｔ６４６Ａ、Ｔ６４６Ｃ、Ｉ６７１Ｆ、Ｉ６７１Ｌ、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ａ５６５Ｃ、Ｙ６３９Ｇ、Ｙ５３０Ｆ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、Ｓ５０７Ｇ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  7. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｄ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｉ５６７Ｓ、Ｇ６０６Ｅ、Ｇ６０６Ｈ、Ｇ６０６Ｎ、Ｇ６０６Ｓ、Ｌ２９３Ａ、Ｓ３０８Ｒ、Ｉ４４４Ｃ、Ｍ２０１Ｄ、Ｒ５４２Ｎ、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ｎ５６６Ｆ、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ｓ６９２Ｌ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜６のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  8. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｅ）及び（ｇ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｌ２６６Ｆ、Ｉ５６７Ｙ、Ａ２７０Ｒ、Ｓ３８４Ｃ、Ａ６３０Ｗ、Ｅ１２８Ｒ、Ｎ１４６Ｍ、Ｎ１４６Ｖ、Ｎ１４６Ｗ、Ｌ１８１Ｆ、Ｖ０４３Ｃ、Ｙ６３９Ｐ、Ｓ５０７Ｆ、Ｑ２４５Ｐ、Ｇ６６２Ｃ、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｐ６０７Ｆ、Ａ６３０Ｙ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６５５Ｄ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  9. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｃ）及び（ｅ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｎ２６１Ｅ、Ｎ２６１Ｋ、Ｎ４００Ａ、Ｖ６０２Ｋ、Ｌ２９３Ｉ、Ｎ４６１Ｓ、Ｄ４５７Ａ、Ｖ０４３Ｑ、Ｑ３０３Ｎ、Ｋ３２０Ｓ、Ｇ６６２Ｄ、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ａ６０１Ｄ、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｄ５６４Ｔ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６５５Ｄ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  10. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｆ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｎ５６６Ｌ、Ｎ５６６Ｐ、Ｎ５６６Ｗ、Ａ２７０Ｋ、Ａ２７０Ｎ、Ｆ５５６Ｈ、Ｆ５５６Ｋ、Ｐ６０４Ｎ、Ｎ４６１Ｄ、Ｎ４６３Ｅ、Ｋ２０６Ｇ、Ａ４６８Ｑ、Ａ４６８Ｙ、Ｎ５６６Ｆ、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ａ４６８Ｔ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｅ１７０Ｆ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである請求項１〜９のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  11. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｃ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｓ２８３Ｄ、Ａ２７０Ｄ、Ｎ１４６Ｙ、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ａ５６５Ｃ、Ｋ２０６Ｓ、Ｄ５６４Ｔ、Ｎ４６１Ｖ Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  12. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｅ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｆ５５６Ｇ、Ｆ２６０Ｓ、Ｐ６０４Ｅ、Ｐ６０４Ｖ、Ｎ１４６Ｄ、Ｙ６３９Ｔ、Ｔ２２１Ｃ、Ｎ４７３Ｓ、Ｎ５８３Ｒ、Ｒ６４５Ｇ、Ｇ６６２Ｙ、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｓ６９２Ｌ、Ｄ５６４Ｔ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｔ５６８Ｅ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  13. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｃ）及び（ｄ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｄ２５９Ｓ、Ｔ２４３Ｖ、Ｙ５３０Ｆ、Ａ３３８Ｄ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  14. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｅ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｓ５５０Ｑ、Ｐ６０７Ｒ、Ｎ４００Ｑ、Ｖ６０２Ｆ、Ａ６０１Ｇ、Ａ６０１Ｌ、Ｌ２９３Ｋ、Ｙ５７５Ｃ、Ｙ５７５Ｒ、Ａ４５０Ｑ、Ｉ４８６Ｃ、Ｉ４８６Ｙ、Ａ６５５Ｓ、Ｑ２４５Ｆ、Ｄ３２９Ａ、Ｐ５３６Ｇ、Ｐ６０７Ｑ、Ａ６５５Ｑ、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｓ６９２Ｌ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ａ３３８Ｄ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  15. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｆ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｐ５３６Ｆ、Ｆ３９２Ｃ、Ｓ６２４Ｌ、Ｓ６２４Ｒ、Ｓ６２４Ｗ、Ｉ４８６Ｆ、Ｉ４８６Ｗ、Ａ６６７Ｇ、Ａ６６７Ｓ、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ｎ５６６Ｆ、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｗ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  16. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｃ）及び（ｇ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｓ３８４Ｇ、Ｓ３８４Ｗ、Ｎ０３８Ｅ、Ｎ０３８Ｍ、Ｎ０３８Ｐ、Ｖ０４３Ｈ、Ｖ０４３Ｗ、Ｙ０６８Ｅ、Ｙ０６８Ｇ、Ｙ０６８Ｍ、Ｌ１１０Ｃ、Ｌ１１０Ｇ、Ｌ１１０Ｑ、Ｌ１１０Ｗ、Ａ６５５Ｈ、Ｎ２６４Ｌ、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、Ｙ６３９Ｇ、Ｋ２０６Ｓ、Ａ６５５Ｄ、又はＳ５０７Ｇである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  17. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｇ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｇ６０６Ｄ、Ｙ０６８Ｖ、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ｆ２６０Ｗ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  18. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｇ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ３７７Ｉ、Ｎ４６１Ｙ、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ｔ４３６Ｅ、Ｙ６３９Ｇ、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ｙ６３９Ｖ、Ｆ２６０Ｗ、Ｐ６０７Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、Ｅ１７０Ｆ、Ｓ５０７Ｇ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  19. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｃ）及び（ｆ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｋ２０６Ｄ、Ａ６０１Ｄ、Ｙ５３０Ｆ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｓ５０７Ｇ、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  20. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｅ）及び（ｆ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ４６８Ｇ、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ａ６０１Ｄ、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  21. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｇ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｒ１７９Ｖ、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ｋ２０６Ｓ、Ａ４６８Ｔ、Ｙ６３９Ｖ、Ｐ６０７Ｆ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ｅ１７０Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  22. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｌ２６６Ｃ、Ｉ５６７Ｆ、Ｓ６２４Ｐ、Ｐ６０７Ｌ、Ｇ６０６Ｉ、Ｇ６０６Ｋ、Ｇ６０６Ｌ、Ｇ６０６Ｍ、Ｇ６０６Ｑ、Ｇ６０６Ｖ、Ｇ６０５Ｅ、Ｉ４４４Ｖ、Ａ６３３Ｖ、Ａ６５５Ｗ、Ｙ６７８Ｈ、Ｖ５２２Ｙ、Ｇ５５４Ｆ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  23. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｌ２６６Ｎ、Ｆ５５６Ｌ、Ｓ５５０Ｉ、Ｓ５５０Ｔ、Ｓ５５０Ｖ、Ｔ２５８Ｌ、Ｐ５３６Ｉ、Ｐ５３６Ｖ、Ｆ３９２Ｒ、Ｓ６２４Ｇ、Ｓ６２４Ｎ、Ｓ６２４Ｑ、Ｓ６２４Ｔ、Ａ６０１Ｍ、Ａ６３０Ｖ、Ｎ４６３Ｓ、Ａ４５０Ｆ、Ａ４５０Ｔ、Ａ４５０Ｖ、Ａ４５０Ｗ、Ｉ４８６Ｖ、Ｓ４８２Ｉ、Ｙ６７８Ｉ、Ｇ４２７Ｆ、Ｄ５６４Ｔ、Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６８４Ｇ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｆ２６０Ｗ、Ｙ５３０Ｆ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、Ｎ４５５Ｄ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  24. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｆ２６０Ａ、Ｓ４７４Ｒ、Ｄ５６４Ｔ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  25. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｉ５６７Ｖ、Ｎ５６６Ｇ、Ａ６３０Ｋ、Ｙ６３９Ｋ、Ｑ２４５Ｎ、Ｋ３２０Ｙ、Ａ３４７Ｙ、Ｔ５６８Ｅ、Ａ６５５Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  26. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｎ５６６Ｆ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜２５のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  27. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｎ５６６Ｈ、Ｆ５５６Ｖ、Ｐ６０４Ｙ、Ｌ２９３Ｖ、Ａ６３０Ｇ、Ｎ４６１Ｃ、Ｎ４６３Ｔ、Ｄ４５７Ｃ、Ｑ２２０Ｍ、Ｔ２２１Ａ、Ｔ２２１Ｇ、Ｔ２２１Ｉ、Ａ６５５Ｒ、Ａ４６８Ｆ、Ａ４６８Ｓ、Ｑ２１６Ｉ、Ｄ５６４Ｖ、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、Ｓ６８３Ｗ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｅ１７０Ｆ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  28. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ５６５Ｃ、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｔ５６８Ｅ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  29. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｐ５３６Ｇ、Ｐ６０７Ｑ、Ａ６５５Ｑ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ａ６３０Ｙ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、Ｆ２６０Ｌ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜２８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  30. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｐ５３６Ｑ、Ｎ３６９Ｅ、Ｎ３６９Ｗ、Ｎ３６９Ｙ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜２９のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  31. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｃ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ６０１Ｄ、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  32. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｌ２９３Ｍ、Ｑ２２０Ｐ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜３１のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  33. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｙ５７５Ａ、Ｙ５７５Ｋ、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  34. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ６３０Ｈ、Ｖ４６６Ｔ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ６３０Ｙ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜３３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  35. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｎ１４６Ａ、Ｎ１４６Ｑ、Ｐ６０７Ｋ、Ｎ３６９Ｔ、Ｐ６０７Ｆ、Ａ６３０Ｙ、Ａ６５５Ｄ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜３４のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  36. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｃ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｓ３８４Ｅ、Ｌ１８１Ｍ、Ｖ０４３Ａ、Ｖ０４３Ｇ、Ｖ０４３Ｎ、Ｑ０６０Ｄ、Ａ６５５Ｙ、Ｔ２４２Ｓ、Ｓ４７４Ｄ、又はＡ６５５Ｄである、請求項１〜３５のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  37. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｔ４３６Ｅ、Ｆ２６０Ｗ、Ｅ１７０Ｆ、Ｓ５０７Ｇ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  38. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｃ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｙ６３９Ｇ、Ｐ６０７Ｆ、Ａ６５５Ｄ、又はＳ５０７Ｇである、請求項１〜３７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  39. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ６５５Ｎ、Ｉ６７１Ｋ、Ｆ２６０Ｔ、Ｐ６０７Ｓ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｐ６０７Ｆ、Ｔ５６８Ｅ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜３８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  40. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｋ２０６Ｓ又はＰ６０７Ｆである、請求項１〜３９のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  41. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｙ５３０Ｓ、Ｑ６８４Ｎ、Ｆ２６０Ｗ、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ａ６３０Ｙ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜４０のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  42. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ４６８Ｔ、Ｅ１７０Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  43. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｓ６９２Ｌ、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、Ｎ４００Ｓ、Ｓ３０８Ｅ、Ａ３３８Ｄ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  44. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｙ６３９Ｖである、請求項１〜４３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  45. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ５６５Ｇ、Ａ２７０Ｃ、Ｔ２５８Ｓ、Ｔ２５８Ｖ、Ｐ５３６Ｄ、Ｐ５３６Ｅ、Ｓ６２４Ｆ、Ｓ６２４Ｉ、Ｓ６２４Ｖ、Ａ６０１Ｃ、Ａ６０１Ｙ、Ｓ３０８Ｈ、Ａ６３０Ｃ、Ａ６３０Ｄ、Ｎ４６３Ｋ、Ｎ４６３Ｒ、Ａ４５０Ｅ、Ｓ４８２Ａ、Ａ６６７Ｆ、Ａ６６７Ｌ、Ａ６６７Ｒ、Ａ６６７Ｙ、Ａ４８５Ｔ、Ｖ４６６Ｓ、Ｙ６７８Ａ、Ｙ６７８Ｃ、Ｙ６７８Ｑ、Ａ４６８Ｃ、Ｑ２２６Ｗ、Ｑ２２６Ｙ、Ｎ２６３Ｃ、Ｎ２６３Ｓ、Ｎ２７８Ｆ、Ｓ３１２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ、Ｋ３４５Ｅ、Ｇ４２７Ｃ、Ｐ６６１Ｆ、Ｐ６６１Ｌ、Ｐ６６１Ｑ、Ｔ６６６Ｃ、又はＳ６８３Ｗである、請求項１〜４４のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  46. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｆ２６０Ｄ、Ｆ２６０Ｇ、Ｆ２６０Ｑ、Ｐ６０７Ｇ、又はＮ４００Ｓである、請求項１〜４５のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  47. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｆ２６０Ｗ、Ｌ２９３Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜４６のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  48. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｙ５３０Ｆである、請求項１〜４７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  49. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｐ６０７Ｆである、請求項１〜４８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  50. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｑ４０６Ｄ、Ｇ６０５Ｃ、Ｎ２６３Ｔ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜４９のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  51. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｎ４６１Ｖ、Ｉ６７１Ｃ、Ｋ２０６Ａ、Ｆ２６０Ｅ、又はＴ５６８Ｋである、請求項１〜５０のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  52. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｐ６０７Ｉ、Ａ４５０Ｐ、Ｔ２４２Ｈ、Ｐ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、Ｇ６６２Ｆ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜５１のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  53. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｔ５６８Ｅ、Ｆ２６０Ｅ、Ｔ５６８Ｋ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜５２のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  54. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｓ３０８Ｅである、請求項１〜５３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  55. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ６３０Ｙ、又はＬ２９３Ｆである、請求項１〜５４のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  56. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ６５５Ｄである、請求項１〜５５のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  57. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｅ１７０Ｆ、Ａ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜５６のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  58. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ａ３３８Ｄ、又はＦ２６０Ｌである、請求項１〜５７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  59. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｓ５０７Ｇである、請求項１〜５８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  60. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｆ２６０Ｅ又はＴ５６８Ｋである、請求項１〜５９のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  61. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体がＰ５３６Ｃ、Ａ６３０Ｑ、Ｄ２１５Ｓ、Ｇ３７２Ａ、Ｇ５４７Ａ、Ｆ６１１Ａ、Ｇ６６２Ｃ、又はＧ６６２Ｆである、請求項１〜６０のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  62. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体がＦ２６０Ｌである、請求項１〜６１のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  63. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体がＬ２９３Ｆである、請求項１〜６２のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  64. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体がＡ６３３Ｃ、Ｓ３１２Ｃ、又はＮ４５５Ｄである、請求項１〜６３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  65. （ａ）前処理済みトウモロコシ茎葉（ＰＣＳ）加水分解活性、
    （ｂ）セロビアーゼ活性、
    （ｃ）タンパク質発現、
    （ｄ）アンモニアで前処理したトウモロコシ穂軸（ＣＣ）の加水分解活性により測定されるβ−グルコシダーゼ活性、
    （ｅ）熱安定性、
    （ｆ）リン酸膨潤セルロース（ＰＡＳＣ）加水分解活性、及び
    （ｇ）グルコース存在下での加水分解活性、
    からなる群から選択される少なくとも２つの活性が野生型ＢＧＬ１よりも改良された、β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）変異体であって、前記ＢＧＬ１が表５−１の置換を２つ以上含む、β−グルコシダーゼ１（ＢＧＬ１）変異体。
  66. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ａ）及び（ｃ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ、Ｄ１７８Ｋ｜Ａ３３８Ｋ｜Ｓ４７４Ｄ｜Ｇ６６２Ｌ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ，及びＤ１７８Ｎ｜Ｎ２６４Ｋ｜Ａ３３８Ｄ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｋ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５に記載のＢＧＬ１変異体。
  67. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｆ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ２１５Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ，及びＱ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ，及びＬ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５又は６６に記載のＢＧＬ１変異体。
  68. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｅ）及び（ｇ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｃ、Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｆ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｆ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｆ｜Ｒ２６５Ｍ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｎ２３８Ｗ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｔ２８２Ｉ｜Ｓ３１２Ｄ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｑ２１６Ｉ｜Ｔ２８２Ｋ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ａ６２２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ、Ａ３４７Ｙ｜Ｒ５４２Ｎ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜６７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  69. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｆ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜６８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  70. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｅ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜６９のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  71. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｅ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７０のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  72. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｂ）及び（ｇ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｅ１７０Ｆ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｓ３１２Ｙ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７１のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  73. 野生型ＢＧＬ１よりも活性（ｄ）及び（ｇ）が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｄ１７８Ｉ｜Ｑ３０３Ｅ｜Ａ３３８Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ及びＬ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７２のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  74. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  75. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｑ６８４Ｄ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７４のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  76. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７５のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  77. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７６のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  78. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｄ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７８Ｎ｜Ｎ２６４Ｋ｜Ａ３３８Ｄ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｋ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  79. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２Ｄ，｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  80. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜７９のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  81. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）及び（ｃ）から選択される２つ又は３つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８０のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  82. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｒ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８１のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  83. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ（所望により同様にＧ６６２Ｆ）、Ｎ２６４Ｌ｜Ａ３３８Ｉ｜Ｓ４７４Ｒ｜Ｇ６６２ＤＥ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８２のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  84. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  85. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ａ、Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ２２５Ｑ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８４のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  86. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８５のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  87. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｖ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ａ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８６のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  88. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  89. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｌ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  90. 野生型ＢＧＬ１よりも（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜８９のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  91. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、又は４つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ２４２Ｓ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｖ６０３Ｇ｜Ｐ６６１Ｆ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｔ２４２Ｓ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２２６Ｙ｜Ｔ６６６Ｃ、Ｑ２１６Ｅ｜Ｓ３１２Ｋ｜Ｓ６９２Ｋ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ、Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｑ２２６Ｗ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｖ５２２Ｙ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３２０Ｙ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｃ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜９０のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  92. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）及び（ｅ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｌ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜９１のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  93. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｅ１７０Ｆ｜Ｖ６０３Ｇ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜９２のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  94. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｅ１７０Ｆ｜Ｑ２２６Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｆ、Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６２６Ｆ｜Ｑ６８４Ｇ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜９３のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  95. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、又は５つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｌ１６７Ｗ｜Ｄ１７７Ｍ｜Ｄ５６４Ｔ｜Ｑ６８４Ｎ、Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜９４のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  96. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ３つ、４つ、５つ、又は６つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜９５のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  97. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｐ１７６Ｌ｜Ｑ３１６Ｔ｜Ｋ３２０Ｓ｜Ｒ３６３Ｅ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜９６のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  98. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）及び（ｆ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｐ６６１Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｋ４２８Ｎ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｐ６６１Ｅ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜９７のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  99. 野生型ＢＧＬ１よりも（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）及び（ｇ）から選択される２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、又は７つの活性が改良され、前記ＢＧＬ１変異体が、置換Ｎ２６３Ｃ｜Ｎ３６９Ｔ、Ｎ３６９Ｔ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｋ４２８Ｎ｜Ｓ６８３Ｗ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｃ｜Ｋ３４５Ｅ｜Ｎ３６９Ｅ｜Ｇ３７２Ａ｜Ｐ６６１Ｅ、又はＰ１７６Ｌ｜Ｑ２２６Ｗ｜Ｇ５４７Ａ｜Ｇ６６２Ｃを含む、請求項６５〜９８のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体。
  100. 野生型ＢＧＬ１と比較してグルコースによる阻害が減少し、前記ＢＧＬ１変異体が、Ｇ３７２Ａ、Ｎ２６３Ｔ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｇ３７２Ａ、Ｅ１７０Ｆ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２６３Ｔ｜Ｇ３７２Ａ、Ｒ２６５Ｍ｜Ｋ５６０Ｓ、Ｎ２６４Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ｜Ｄ３７０Ｗ、Ｒ１７９Ｖ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｓ３１２Ｙ｜Ｎ３６９Ｙ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｎ２６３Ｔ、Ｒ２６５Ｐ｜Ｄ３７０Ｗ｜Ｇ６６２Ｆ、Ｎ２３８Ｗ｜Ｒ２６５Ｐ｜Ｋ６５６Ｒ、Ｎ２３８Ｆ｜Ｎ２６４Ｍ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉ、Ｎ２３８Ｆ、Ｅ１７０Ｆ｜Ｎ２６３Ｔ｜Ｇ３７２Ａ、又はＮ２３８Ｆ｜Ｒ２６５Ｍ｜Ｎ３６９Ｉである、請求項６５〜９９のいずれか一項に記載のβ−グルコシダーゼ（ＢＧＬ１）変異体。
  101. 請求項１〜１００のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体を含む組成物。
  102. 前記組成物が、ＢＧＬ１変異体を豊富に含むものである、請求項１０１に記載の組成物。
  103. 請求項１〜１００のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体のうちの任意の１つをコードしている、単離核酸。
  104. 請求項１０３に記載の核酸を含む、発現ベクター。
  105. 前記単離核酸が制御可能に調節配列に連結されている、請求項１０４に記載の発現ベクター。
  106. 請求項１０３に記載の核酸を含む、宿主細胞。
  107. 前記変異体を産生するのに好適な条件下で、培養培地中で、請求項１０６に記載の宿主細胞を培養することを含む、ＢＧＬ１変異体の産生方法。
  108. 請求項１〜１００のいずれか一項に記載のＢＧＬ１変異体を、バイオマスに接触させることを含む、バイオマスを糖へと変換させる方法。
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