JP2015180672A - アンドロゲン受容体調節物質としてのジアリールヒダントイン化合物 - Google Patents

Abstract

【課題】アンドロゲン受容体調節物質としてのジアリールヒダントイン化合物の提供。
【解決手段】本発明は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）に対して強力な拮抗活性と最小の作動活性を有する一連の化合物を提供する。これらの化合物は、ホルモン不応性前立腺癌の増殖を阻害する。本発明は、Ｒ_３が、水素、シアノ、ホルミルからなる群から選択され、Ｒ_１とＲ_２が一緒に８個以下の炭素原子を含み、アルキル置換アルキル及び、それらが結合した炭素と一緒に、シクロアルキル又は置換シクロアルキル基からなる群から選択される、ジアリールヒダントイン化合物、それを合成する方法、及びホルモン不応性前立腺癌の治療においてそれを使用する方法に関する。
【選択図】なし

Description

本発明は、ジアリールチオヒダントインを含むジアリールヒダントイン化合物、ならびにそれらを合成するための方法およびホルモン不応性前立腺癌の処置におけるそれらの使用に関する。本願は、２００７年１０月２６日に出願された米国仮特許出願第６０／９９６，０７６号の利益を主張する。米国仮特許出願第６０／９９６，０７６号の明細書は、参照として本明細書に援用される。

前立腺癌は、最も一般的に発生する癌であり、西欧の男性における癌死の２番目の主要原因である。前立腺癌は、限局しているときには、手術又は照射によって治療することができる。しかし、前立腺癌の３０％は、遠隔転移性疾患を伴って再発し、他は、診断時に進行性疾患を有する。進行性疾患は、性腺摘除及び／又は抗アンドロゲン薬投与、いわゆるアンドロゲン遮断療法によって治療される。性腺摘除は、アンドロゲン循環レベルを低下させ、アンドロゲン受容体（ＡＲ）活性を低下させる。抗アンドロゲン薬投与は、アンドロゲン結合と競合することによってＡＲ機能を遮断し、したがって、ＡＲ活性を低下させる。これらの治療は、初期には有効であるが、急速に作用しなくなり、癌はホルモン不応性になる。

ビカルタミドなどの非ステロイド系抗アンドロゲン薬は、前立腺癌用ステロイド系化合物よりも選択的であり、副作用が少ないので好ましい。このクラスの化合物は、参照によりそのすべてを本明細書に援用する特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４及び特許文献５、特許文献６などの特許に記載されている。ビカルタミド（商品名：Ｃａｓｏｄｅｘ）は最も一般的に使用される抗アンドロゲン薬である。ビカルタミドは、ホルモン感受性前立腺癌においてＡＲに対する阻害効果を有するが、癌がホルモン不応性になるとＡＲを抑制することができない。

特許文献７は、極めて多数の化合物を包含する広範な特許請求の範囲を含むが、合成経路は、これらの化合物のごく一部に対してしか示されず、薬理学的データは、そのうちの２種類に対してしか示されず、当業者は、他の具体的化合物を容易に予見することができない。特許文献７を参照により本明細書に援用する。

米国特許第４，０９７，５７８号明細書 米国特許第５，４１１，９８１号明細書 米国特許第５，７０５，６５４号明細書 国際公開第９７／０００７１号パンフレット 国際公開第００／１７１６３号パンフレット 米国特許出願公開第２００４／０００９９６９号明細書 米国特許第５，４３４，１７６号明細書

本発明は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）に対して強力な拮抗活性と最小の作動活性を有する一連の化合物を提供する。これらの化合物は、ホルモン不応性前立腺癌の増殖を阻害する。

本発明は、次式を有する化合物を含む。

Ｒ_１とＲ_２は一緒に８個以下の炭素原子を含むことができ、アルキル、置換アルキル及び、それらが結合した炭素と一緒に、シクロアルキル又は置換シクロアルキル基からなる群から選択することができる。Ｒ_３は水素、シアノ、ホルミル、

とすることができる。Ｒ_４は水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩとすることができる。Ｒ_１１とＲ_１２は、同じでも異なっていてもよく、水素又はメチルである。Ｒ_１３は水素又は−ＮＲ_１４Ｒ_１５とすることができる。Ｒ_１４とＲ_１５は、同じでも異なっていてもよく、水素又はメチルである。

例えば、Ｒ_１とＲ_２は独立にメチル又は、それらが結合した炭素と一緒に、シクロブチル若しくはシクロペンチルとすることができる。例えば、Ｒ_１１とＲ_１２は両方を水素又は両方をメチルとすることができる。例えば、Ｒ_１３は−ＮＨ（ＣＨ_３）又は−Ｎ（ＣＨ_３）_２とすることができる。例えば、Ｒ_４、Ｒ_１１及びＲ_１２が各々水素であるとき、かつＲ_１とＲ_２がそれらが結合した炭素と一緒にシクロブチルであるときには、Ｒ_３は、シアノ及び以下

以外とすることができ、ここでＲ_１３は、水素、−ＮＨ_２、−ＮＨ（ＣＨ_３）又は−Ｎ（ＣＨ_３）_２である。
本発明は、治療有効量の前述の化合物のいずれかによる化合物又は薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む、薬剤組成物を提供する。

本発明は、過剰増殖障害を治療する方法であって、かかる薬剤組成物をかかる治療を必要とする対象に投与し、それによって過剰増殖障害を治療することを含む、方法を包含する。過剰増殖障害は、ホルモン不応性前立腺癌であり得る。投与量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲、又は約１ｍｇ／ｋｇ体重／日とすることができる。

化合物は、静脈内注射によって、組織への注射によって、腹腔内に、経口的に、又は経鼻的に投与することができる。組成物は、溶液剤、分散液剤、懸濁液剤、散剤、カプセル剤、錠剤、丸剤、徐放性カプセル剤、徐放性錠剤及び徐放性丸剤からなる群から選択される剤形を有することができる。

本発明は、次式のジアリール化合物を合成する方法を提供する。

この方法は、化合物Ｉ

と化合物ＩＩ

を第１の極性溶媒中で混合して、混合物を形成することを含む。

この方法は、以下、すなわち、第１の極性溶媒と同じ又は異なる第２の極性溶媒及び酸水溶液を混合物に添加すること、混合物を還流させること、混合物を冷却し、水と組み合わせること、並びにジアリール化合物を混合物から分離することを更に含む。Ｒ_３１はシアノ、カルボキシ、

である。Ｒ_３２は、

である。Ｒ_１とＲ_２は一緒に８個以下の炭素原子を含み、アルキル、置換アルキル又は、それらが結合した炭素と一緒に、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル基である。Ｒ_３は水素、シアノ、ホルミル、

である。Ｒ_４は水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩである。Ｒ_１１とＲ_１２は、同じでも異なっていてもよく、水素又はメチルである。Ｒ_１３は水素又は−ＮＲ_１４Ｒ_１５である。Ｒ_１４とＲ_１５は、同じでも異なっていてもよく、水素又はメチルである。

示した化合物は、ホルモン不応性前立腺癌細胞に対して実質的なアンドロゲン受容体拮抗活性を有し、実質的な作動活性を持たないと予想される。

本発明は、少なくとも１種類のかかる化合物を用意すること、化合物のアンドロゲン受容体活性阻害を測定し、阻害が第１の所定レベルを超えるかどうかを判定すること、ホルモン不応性癌細胞における化合物のアンドロゲン受容体活性刺激を測定し、刺激が第２の所定レベル未満であるかどうかを判定すること、阻害が第１の所定レベルを超え、刺激が第２の所定レベル未満である場合に、化合物を選択することを含む、方法を包含する。各所定レベルは、ビカルタミドの各所定レベルとすることができる。阻害を測定するステップは、ＡＲ応答レポーター系又は前立腺特異抗原分泌系における抑制濃度（ＩＣ５０）を測定することを含むことができる。刺激を測定するステップは、ＡＲ応答レポーター系又は前立腺特異抗原分泌系において濃度を増加させることによって誘導倍率を測定することを含むことができる。阻害及び／又は刺激を測定する方法は、動物における腫よう増殖に対する化合物の効果を測定することを含むことができる。
本発明は、例えば、以下を提供する：
（項目１）
次式を有する化合物。

（式中、Ｒ_１とＲ_２は一緒に８個以下の炭素原子を含み、アルキル、置換アルキル及び、それらが結合した炭素と一緒に、シクロアルキル又は置換シクロアルキル基からなる群から選択され、
Ｒ_３は、水素、シアノ、ホルミル、

からなる群から選択され、
Ｒ_４は、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から選択され、
Ｒ_１１及びＲ_１２は、水素及びメチルからなる群から独立に選択され、
Ｒ_１３は、水素及び−ＮＲ_１４Ｒ_１５からなる群から選択され、
Ｒ_１４及びＲ_１５は、水素及びメチルからなる群から独立に選択される。）
（項目２）
項目１に記載の化合物であって、
Ｒ_１及びＲ_２が独立にメチル又は、それらが結合した炭素と一緒に、シクロブチル若しくはシクロペンチルであり、
Ｒ_３が、シアノ、ホルミル、

からなる群から選択され、
Ｒ_４が、水素及びフッ素からなる群から選択され、
Ｒ_１１及びＲ_１２が両方とも水素又は両方ともメチルであり、
Ｒ_１３が、−ＮＨ（ＣＨ_３）及び−Ｎ（ＣＨ_３）_２からなる群から選択される、
化合物。
（項目３）
項目２に記載の化合物であって、
Ｒ_１１及びＲ_１２が両方とも水素であり、
Ｒ_４が水素であるとき、かつＲ_１及びＲ_２がそれらが結合した炭素と一緒にシクロブチルであるときには、Ｒ_３はシアノでも

でもない、化合物。
（項目４）
項目１に記載の化合物であって、
Ｒ_４、Ｒ_１１及びＲ_１２がすべて水素であるとき、かつＲ_１及びＲ_２がそれらが結合した炭素と一緒にシクロブチルであるときには、Ｒ_３はシアノでも

でもない、化合物。
（項目５）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ_１とＲ_２が一緒に４個以下の炭素原子を含み、アルキル及び、それらが結合した炭素と一緒に、シクロアルキルからなる群から選択される、化合物。
（項目６）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ_１及びＲ_２が、水素及びメチルからなる群から独立に選択される、化合物。
（項目７）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ_１及びＲ_２が、それらが結合した炭素と一緒に、シクロブチル及びシクロプロピルからなる群から選択される、化合物。
（項目８）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ_３が、シアノ及びホルミルからなる群から選択される、化合物。
（項目９）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ_３が、

からなる群から選択される、化合物。
（項目１０）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ_３が、

からなる群から選択される、化合物。
（項目１１）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ_４が水素である、化合物。
（項目１２）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ_４がフッ素である、化合物。
（項目１３）
項目１に記載の化合物であって、Ｒ_４が塩素である、化合物。
（項目１４）
項目１に記載の化合物であって、次式

を有する、化合物。
（項目１５）
項目１に記載の化合物であって、次式

を有する、化合物。
（項目１６）
項目１に記載の化合物であって、次式を有する、化合物。

（式中、Ｒ_２１は、

からなる群から選択される。）
（項目１７）
項目１に記載の化合物であって、次式を有する、化合物。

（式中、Ｒ_２１は、

からなる群から選択される。）
（項目１８）
項目１に記載の化合物であって、次式

を有する、化合物。
（項目１９）
項目１に記載の化合物であって、次式を有する、化合物。

（式中、Ｒ_２２は水素［ＮＤ−７］又はメチル［ＮＤ−８］である。）
（項目２０）
項目１に記載の化合物であって、次式

を有する、化合物。
（項目２１）
項目１に記載の化合物であって、次式

を有する、化合物。
（項目２２）
治療有効量の項目１に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩と、薬学的に許容される担体又は希釈剤とを含む、薬剤組成物。
（項目２３）
過剰増殖障害を治療する方法であって、項目２２に記載の薬剤組成物をかかる治療を必要とする対象に投与し、それによって上記過剰増殖障害を治療することを含む、方法。
（項目２４）
項目２３に記載の方法であって、上記組成物が、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲の上記化合物の投与量で投与される、方法。
（項目２５）
項目２３に記載の方法であって、上記組成物が、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲の上記化合物の投与量で投与される、方法。
（項目２６）
項目２３に記載の方法であって、上記組成物が、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日から約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲の上記化合物の投与量で投与される、方法。
（項目２７）
項目２３に記載の方法であって、上記組成物が約１ｍｇ／ｋｇ体重／日の上記化合物の投与量で投与される、方法。
（項目２８）
項目２３に記載の方法であって、上記過剰増殖障害がホルモン不応性前立腺癌である、方法。
（項目２９）
項目２３に記載の方法であって、上記組成物が静脈内注射によって、組織への注射によって、腹腔内に、経口的に、又は経鼻的に投与される、方法。
（項目３０）
項目２３に記載の方法であって、上記組成物が経口投与される、方法。
（項目３１）
項目２２に記載の方法であって、上記組成物が、溶液剤、分散液剤、懸濁液剤、散剤、カプセル剤、錠剤、丸剤、徐放性カプセル剤、徐放性錠剤及び徐放性丸剤からなる群から選択される剤形を有する、方法。
（項目３２）
項目２２に記載の方法であって、上記組成物が、カプセル剤、錠剤及び丸剤からなる群から選択される剤形を有する、方法。
（項目３３）
次式のジアリール化合物を合成する方法であって、

化合物Ｉ

と化合物ＩＩ

を第１の極性溶媒中で混合して、混合物を形成すること、
上記第１の極性溶媒と同じ又は異なる第２の極性溶媒及び酸水溶液を上記混合物に添加すること、
上記混合物を還流させること、
上記混合物を冷却し、水と組み合わせること、並びに
上記ジアリール化合物を上記混合物から分離すること
を含み、
式中、Ｒ_３１が、シアノ、カルボキシ、

からなる群から選択され、
Ｂｏｃは、ｔ−ブトキシカルボニルであり、
Ｒ_３２が、

からなる群から選択され、
Ｒ_１とＲ_２が一緒に８個以下の炭素原子を含み、アルキル、置換アルキル及び、それらが結合した炭素と一緒に、シクロアルキル又は置換シクロアルキル基からなる群から選択され、
Ｒ_３が、水素、シアノ、ホルミル、

からなる群から選択され、
Ｒ_４が、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から選択され、
Ｒ_１１及びＲ_１２が、水素及びメチルからなる群から独立に選択され、
Ｒ_１３が、水素及び−ＮＲ_１４Ｒ_１５からなる群から選択され、
Ｒ_１４及びＲ_１５が、水素及びメチルからなる群から独立に選択される、方法。
（項目３４）
項目１に記載の化合物であって、上記化合物が、ホルモン不応性前立腺癌細胞に対して実質的なアンドロゲン受容体拮抗活性を有し、実質的な作動活性を持たない、化合物。
（項目３５）
項目１に記載の少なくとも１種類の化合物を用意すること、
上記化合物のアンドロゲン受容体活性阻害を測定し、上記阻害が第１の所定レベルを超えるかどうかを判定すること、
ホルモン不応性癌細胞における上記化合物のアンドロゲン受容体活性刺激を測定し、上記刺激が第２の所定レベル未満であるかどうかを判定すること、
上記阻害が上記第１の所定レベルを超え、上記刺激が上記第２の所定レベル未満である場合に、上記化合物を選択すること
を含む、方法。
（項目３６）
項目３５に記載の方法であって、上記各所定レベルがビカルタミドの各所定レベルである、方法。
（項目３７）
項目３５に記載の方法であって、阻害を測定するステップが、ＡＲ応答レポーター系又は前立腺特異抗原分泌系における抑制濃度（ＩＣ５０）を測定することを含む、方法。
（項目３８）
項目３５に記載の方法であって、刺激を測定するステップが、ＡＲ応答レポーター系又は前立腺特異抗原分泌系において濃度を増加させることによって誘導倍率を測定することを含む、方法。
（項目３９）
項目３５に記載の方法であって、阻害及び／又は刺激を測定するステップが、動物における腫瘍増殖に対する上記化合物の効果を測定することを含む、方法。

本発明の実施形態を以下に詳細に考察する。記載する実施形態においては、理解しやすいように特定の用語を使用する。しかし、本発明は、そのように選択された特定の用語に限定されるものではない。当業者は、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、他の等価な要素を使用することができ、他の方法を開発できることを認識するであろう。本明細書で引用するすべての参考文献を、各々を個々に援用したかのごとく参照により本明細書に援用する。

最近、ＡＲの過剰発現がホルモン不応性前立腺癌の原因として特定され、確認された。参照により本明細書に援用する、Ｃｈｅｎ，Ｃ．Ｄ．，Ｗｅｌｓｂｉｅ，Ｄ．Ｓ．，Ｔｒａｎ，Ｃ．，Ｂａｅｋ，Ｓ．Ｈ．，Ｃｈｅｎ，Ｒ．，Ｖｅｓｓｅｌｌａ，Ｒ．，Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｍ．Ｇ．，ａｎｄ Ｓａｗｙｅｒｓ，Ｃ．Ｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ａｎｔｉａｎｄｒｏｇｅｎ ｔｈｅｒａｐｙ，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１０：３３−３９，２００４を参照されたい。ＡＲの過剰発現は、ホルモン不応性前立腺癌に感受性があるホルモンに起因する進行を引き起こすのに十分であり、現行薬物よりも優れたＡＲ阻害剤が前立腺癌の進行を遅延できることを示唆している。ＡＲ及びそのリガンド結合がホルモン不応性前立腺癌の増殖に必要であることが実証され、ＡＲが依然としてこの疾患の標的であることが示唆された。ＡＲの過剰発現はホルモン不応性前立腺癌において抗アンドロゲン薬を拮抗物質から作動物質に変換することも実証された（ＡＲ拮抗物質はＡＲ活性を阻害し、ＡＲ作動物質はＡＲ活性を刺激する。）。この研究のデータは、性腺摘除及び抗アンドロゲン薬が前立腺癌進行を防止することができない理由を説明し、ホルモン不応性前立腺癌の認識されていない諸性質を明らかにする。

現行の抗アンドロゲン薬の二つの欠点は、ホルモン感受性段階からホルモン不応性疾患への前立腺癌進行を防止することができず、ホルモン不応性前立腺癌を有効に治療することができないことによる。一つは、その弱い拮抗活性であり、もう一つは、ＡＲがホルモン不応性前立腺癌において過剰発現したときのその強い作動活性である。より強力な拮抗活性と最小の作動活性を有するより優れたＡＲ阻害剤が、疾患進行を遅延させ、致命的なホルモン不応性前立腺癌を治療するのに必要である。

ホルモン不応性前立腺癌の幾つかの新しい性質が、参照により本明細書に援用するＰＣＴ出願ＵＳ０４／４２２２１及びＵＳ０５／０５５２９に報告された。ＰＣＴ国際出願ＵＳ０５／０５５２９は、化合物のアンドロゲン受容体拮抗及び作動特性を確認する方法を示した。

ジアリールヒダントイン化合物の合成
本発明は、次式を有するジアリールチオヒダントイン化合物の合成を規定する。

Ｒ_１とＲ_２は一緒に８個以下の炭素原子を含むことができ、アルキル、置換アルキル又は、それらが結合した炭素と一緒に、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル基とすることができる。Ｒ_３は水素、シアノ、ホルミル、

とすることができる。Ｒ_４は水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩとすることができる。Ｒ_１１とＲ_１２は、同じでも異なっていてもよく、水素又はメチルとすることができる。Ｒ_１３は水素又は−ＮＲ_１４Ｒ_１５とすることができる。Ｒ_１４とＲ_１５は、同じでも異なっていてもよく、水素又はメチルとすることができる。

定義
本明細書では「アルキル」という用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉｓｏ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、２−メチルペンチル ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチルなど、好ましくは約１から約８個の炭素を有する、分枝又は非分枝炭化水素鎖を意味する。「置換アルキル」は、トリフルオロメチル、３−ヒドロキシヘキシル、２−カルボキシプロピル、２−フルオロエチル、カルボキシメチル、シアノブチルなどのアルキル基を形成する、ヒドロキシル、ブロモ、フルオロ、クロロ、ヨード、メルカプト又はチオ、シアノ、アルキルチオ、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボキシル、カルボアルコイル（ｃａｒｂａｌｋｏｙｌ）、アルキル、アルケニル、ニトロ、アミノ、アルコキシル、アミドなどのかかる鎖に結合し得る１個以上の官能基で場合によっては置換されたアルキル基を含む。

別段の記載がない限り、単独で又は別の基の一部として本明細書で使用される「シクロアルキル」という用語は、単環式アルキル、二環式アルキル及び三環式アルキルを含めて１から３個の環を含み、環を形成する合計３から２０個の炭素、好ましくは環を形成する３から１０個の炭素を含み、アリールについて記載する１又は２個の芳香環と縮合し得る、飽和又は（１個以上の二重結合を含む）部分不飽和の環状炭化水素基を含み、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル及びシクロドデシル、シクロヘキセニルが挙げられる。「置換シクロアルキル」は、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、アリール、アリールオキシ、アリールアルキル、シクロアルキル、アルキルアミド、アルカノイルアミノ、オキソ、アシル、アリールカルボニルアミノ、アミノ、ニトロ、シアノ、チオール及び／又はアルキルチオなどの１個以上の置換基で、及び／又は「置換アルキル」の定義に含まれる置換基のいずれかで、場合によっては置換された、シクロアルキル基を含む。例えば、以下など。

別段の記載がない限り、単独で又は別の基の一部として本明細書では「アルケニル」という用語は、ビニル、２−プロペニル、３−ブテニル、２−ブテニル、４−ペンテニル、３−ペンテニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、２−ヘプテニル、３−ヘプテニル、４−ヘプテニル、３−オクテニル、３−ノネニル、４−デセニル、３−ウンデセニル、４−ドデセニル、４，８，１２−テトラデカトリエニルなど、直鎖中１個以上の二重結合を含む、直鎖中２から２０個の炭素、好ましくは２から１２個の炭素、より好ましくは２から８個の炭素の直鎖又は分枝鎖基を指す。「置換アルケニル」は、上記「置換アルキル」及び「置換シクロアルキル」の定義に含まれる置換基などの１個以上の置換基で場合によっては置換されたアルケニル基を含む。

別段の記載がない限り、単独で又は別の基の一部として本明細書では「アルキニル」という用語は、２−プロピニル、３−ブチニル、２−ブチニル、４−ペンチニル、３−ペンチニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、２−ヘプチニル、３−ヘプチニル、４−ヘプチニル、３−オクチニル、３−ノニニル、４−デシニル、３−ウンデシニル、４−ドデシニルなど、直鎖中１個以上の三重結合を含む、直鎖中２から２０個の炭素、好ましくは２から１２個の炭素、より好ましくは２から８個の炭素の直鎖又は分枝鎖基を指す。「置換アルキニル」は、上記「置換アルキル」及び「置換シクロアルキル」の定義に含まれる置換基などの１個以上の置換基で場合によっては置換されたアルキニル基を含む。

単独で又は別の基の一部として使用される「アリールアルキル」、「アリールアルケニル」及び「アリールアルキニル」という用語は、アリール置換基を有する上記アルキル、アルケニル及びアルキニル基を指す。アリールアルキルの代表例としては、ベンジル、２−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、フェネチル、ベンズヒドリル、及びナフチルメチルなどが挙げられるが、それだけに限定されない。「置換アリールアルキル」は、上記「置換アルキル」及び「置換シクロアルキル」の定義に含まれる置換基などの１個以上の置換基でアリール部分が場合によっては置換されたアリールアルキル基を含む。

単独で又は別の基の一部として使用される「アリールアルキル」、「アリールアルケニル」及び「アリールアルキニル」という用語は、アリール置換基を有する上記アルキル、アルケニル及びアルキニル基を指す。アリールアルキルの代表例としては、ベンジル、２−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、フェネチル、ベンズヒドリル、及びナフチルメチルなどが挙げられるが、それだけに限定されない。「置換アリールアルキル」は、上記「置換アルキル」及び「置換シクロアルキル」の定義に含まれる置換基などの１個以上の置換基でアリール部分が場合によっては置換されたアリールアルキル基を含む。

単独で又は別の基の一部として本明細書では「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、塩素、臭素、フッ素及びヨウ素を指す。

単独で又は別の基の一部として本明細書では「ハロゲン化アルキル」、「ハロゲン化アルケニル」及び「アルキニル」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選択される１個以上の原子で置換された「アルキル」、「アルケニル」及び「アルキニル」を指す。

別段の記載がない限り、単独で又は別の基の一部として本明細書で使用される「アリール」又は「Ａｒ」という用語は、（フェニル、又は１−ナフチル及び２−ナフチルを含めたナフチルなどの）環部分に６から１０個の炭素を含み、（アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、又はシクロヘテロアルキル環などの）炭素環又は複素環と縮合した１から３個の追加の環を場合によっては含むことができる、単環式及び多環式の芳香族基を指す。

「置換アリール」は、ハロ、ハロアルキル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルケニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルキニル、シクロアルキル−アルキル、シクロヘテロアルキル、シクロヘテロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、アリールアルコキシ、アルコキシカルボニル、アリールカルボニル、アリールアルケニル、アミノカルボニルアリール、アリールチオ、アリールスルフィニル、アリールアゾ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、アミノ、アミノが（アルキル、アリール又は本定義に記載の任意の他のアリール化合物である）１又は２個の置換基を含む置換アミノ、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールチオアルキル、アルコキシアリールチオ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールスルフィニル、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアミノ、又はアリールスルホンアミノカルボニルなどの１個以上の官能基で、及び／又は本明細書に記載するアルキル置換基のいずれかで、場合によっては置換された、アリール基を含む。

別段の記載がない限り、本明細書では「複素環式」又は「複素環」という用語は、飽和でも不飽和でもよく、炭素原子及びＮ、Ｏ又はＳから選択される１から４個のヘテロ原子からなり、窒素及び硫黄ヘテロ原子は場合によっては酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は場合によっては四級化されていてもよい、安定な５から１０員の非置換又は置換単環式環系を表す。複素環は、安定構造を形成する任意のヘテロ原子又は炭素原子において結合することができる。かかる複素環式基の例としては、ピペリジニル、ピペラジニル、オキソピペラジニル、オキソピペリジニル、オキソピロリジニル、オキソアゼピニル、アゼピニル、ピロリル、ピロリジニル、フラニル、チエニル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、テトラヒドロピラニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン及びオキサジアゾリルが挙げられるが、それだけに限定されない。単独で又は別の基の一部として本明細書では「複素環式芳香族」という用語は、窒素、酸素、又は硫黄などの１、２、３又は４個のヘテロ原子を含む５又は７員の芳香環、及びアリール、シクロアルキル、ヘテロアリール又はヘテロシクロアルキル環と縮合したかかる環（例えば、ベンゾチオフェニル、インドリル）を指し、可能なＮ酸化物を含む。「置換ヘテロアリール」は、上記「置換アルキル」及び「置換シクロアルキル」の定義に含まれる置換基などの１から４個の置換基で場合によっては置換されたヘテロアリール基を含む。ヘテロアリール基の例としては以下などが挙げられる。

材料を供給業者から入手し、更に精製せずに使用した。空気又は水分に敏感な反応は、アルゴン雰囲気下で、乾燥器で乾燥させたガラス製品及び標準シリンジ／セプタム技術を使用して、実施された。反応をシリカゲルＴＬＣプレートを用いてＵＶ光（２５４ｎｍ）下でモニターし、続いてｐ−アニスアルデヒド又はニンヒドリン染色溶液を用いて可視化した。カラムクロマトグラフィーをシリカゲル６０上で実施した。別段の記載がない限り、^１Ｈ ＮＭＲスペクトルをＣＤＣｌ_３中で４００ＭＨｚで測定し、データを内部標準（ＴＭＳ、０．０ｐｐｍ）からのｐｐｍ（δ）単位で以下のように報告した：化学シフト（多重度、積分、Ｈｚ単位の結合定数）。

ＮＤ−１の合成
４−［４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）フェニル］ブタン酸（１００）
ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（０．７３ｇ、３．３５ｍｍｏｌ）を、４−（４−アミノフェニル）酪酸（０．５ｇ、２．７９ｍｍｏｌ）と水酸化ナトリウム（０．１４ｇ、３．３５ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（５ｍＬ）と水（５ｍＬ）の溶液に０℃で添加した。混合物を室温に加温し、９時間撹拌した。混合物をジエチルエーテル（２０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）で分配し、次いで水層を１Ｎ ＫＨＳＯ_４溶液によってｐＨ２〜３に酸性化した。混合物水溶液を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出し、有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮して、粗製４−［４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）フェニル］ブタン酸（１００）（０．７３ｇ、９４％）を得た。それを更に精製せずに使用した。

４−［４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）フェニル］ブタンアミド（９９）
塩化チオニル（０．２２ｍＬ、３．０１ｍｍｏｌ）を、−５℃で冷却された４−［４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）フェニル］ブタン酸（１００）（０．７０ｇ、２．５１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に徐々に添加した。混合物を−５℃で更に１時間撹拌した。（その水溶液から新しく蒸留された）過剰のアンモニアを反応媒体に添加した。第２の混合物を更に１時間撹拌した。酢酸エチル（５０ｍＬ）を混合物に添加し、それを塩水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９：１）によって精製して、４−［４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）フェニル］ブタンアミド（９９）（０．５７ｇ、８２％）を白色固体として得た。

４−［４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）フェニル］ブタンニトリル（９８）
ＤＭＳＯ（０．１３ｍＬ、１．８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）溶液を塩化オキサリル（０．１２ｍＬ、１．３８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）撹拌溶液に−７８℃で添加した。１５分後、２（０．３２ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍＬ）溶液を反応混合物に添加した。撹拌を−７８℃で２０分間続け、次いでトリエチルアミン（０．４８ｍＬ、３．４５ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、反応混合物を室温に加温し、次いで反応をＮＨ_４Ｃｌ飽和水溶液でクエンチした。混合物をジエチルエーテル（３０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、４：１）によって精製して、４−［４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）フェニル］ブタンニトリル（９８）（０．２２ｇ、７３％）を白色固体として得た。

４−（４−アミノフェニル）ブタンニトリル（９７）
ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸の０．２５Ｍ溶液（５ｍＬ、１．２５ｍｍｏｌ）を４−［４−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）フェニル］ブタンニトリル（９８）（０．２２ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）に添加した。３０分後、反応を１Ｎ ＮａＯＨ溶液でクエンチした。混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）で分配した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮して、４−（４−アミノフェニル）ブタンニトリル（９７）（０．１６ｇ、９９％）を得た。それを更に精製せずに使用した。

４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）
４−アミノ−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（２．２３ｇ、１２ｍｍｏｌ）を、水（２２ｍＬ）中のチオホスゲン（１ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）の十分撹拌された不均一混合物に室温で１５分間分割添加した。撹拌を更に１時間続けた。反応媒体をクロロホルム（３×１５ｍＬ）で抽出した。混合有機相をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、減圧下で蒸発乾固させて、所望の生成物４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）（２．７２ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、９９％）を茶色がかった固体として得、更に精製せずに使用した。

４−［４−（１−シアノジメチルアミノ）フェニル］ブタンニトリル（９５）
４−（４−アミノフェニル）ブタンニトリル（９７）（５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、アセトンシアノヒドリン（０．１５ｍＬ、１．５８ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃に加熱し、１２時間撹拌した。媒体に酢酸エチル（２０ｍＬ）を添加し、次いで水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、１：１）によって精製して、４−［４−（１−シアノジメチルアミノ）フェニル］ブタンニトリル（９５）（５２ｍｇ、８７％）を白色固体として得た。

４−（３−（４−（３−シアノプロピル）フェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソ−イミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（９４）［ＮＤ−１］
４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）（３２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）と４−［４−（１−シアノジメチルアミノ）フェニル］ブタンニトリル（９５）（１６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中の混合物をマイクロ波照射下で８０℃で６時間加熱した。この混合物にメタノール（１０ｍＬ）及び１Ｎ ＨＣｌ水溶液（３ｍＬ）を添加した。第２の混合物を１．５時間還流させた。室温に冷却後、反応混合物を冷水（２０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、２：１）によって精製して、４−（３−（４−（３−シアノプロピル）フェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソ−イミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（９４）［ＮＤ−１］（２０ｍｇ、６２％）を白色固体として得た。

ＮＤ−２の合成
４−［４−（１−シアノシクロペンチルアミノ）フェニル］ブタンニトリル（９３）
４−（４−アミノフェニル）ブタンニトリル（９７）（５２ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、シクロペンタノン（０．０７ｍＬ、０．５５ｍｍｏｌ）及びＴＭＳＣＮ（０．０５ｍＬ、０．５５ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃に加熱し、１３時間撹拌した。媒体に酢酸エチル（２×２０ｍＬ）を添加し、次いで水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、１：１）によって精製して、４−［４−（１−シアノシクロペンチルアミノ）フェニル］ブタンニトリル（９３）（７０ｍｇ、定量）を白色固体として得た。

４−（１−（４−（３−シアノプロピル）フェニル）−４−オキソ−２−チオキソ−１，３−ジアザスピロ［４．４］ノン−３−イル）−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９２）［ＮＤ−２］
４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）（３６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）と４−［４−（１−シアノシクロペンチルアミノ）フェニル］ブタンニトリル（９３）（２０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中の混合物をマイクロ波照射下で８０℃で６時間加熱した。この混合物にメタノール（１０ｍＬ）及び１Ｎ ＨＣｌ水溶液（３ｍＬ）を添加した。第２の混合物を１．５時間還流させた。室温に冷却後、反応混合物を冷水（２０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、２：１）によって精製して、４−（１−（４−（３−シアノプロピル）フェニル）−４−オキソ−２−チオキソ−１，３−ジアザスピロ［４．４］ノン−３−イル）−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９２）［ＮＤ−２］（２５ｍｇ、６５％）を白色固体として得た。

ＮＤ−１４の合成
４−（３−（４−（３−シアノプロピル）−３−フルオロフェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソ−イミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１０３）
４−（３−（４−（３−シアノプロピル）−３−フルオロフェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソ−イミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１０３）［ＮＤ−１４］は、合成（９２）［ＮＤ−２］と類似の様式で合成することができる。溶媒、例えばＤＭＦ中の４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）と４−（４−（２−シアノプロパン−２−イルアミノ）−２−フルオロフェニル）ブタンニトリル（１０１）の混合物をマイクロ波照射下で８０℃で６時間加熱する。

この混合物にアルコール、例えばメタノール、及び酸、例えば塩酸水溶液を添加する。第２の混合物を１．５時間還流させる。室温に冷却後、反応混合物を冷水に注ぎ、例えば酢酸エチルで抽出する。有機層を（例えば、ＭｇＳＯ_４を用いて）乾燥させ、濃縮し、例えばヘキサン：酢酸エチル（２：１）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、残留物を精製して、４−（３−（４−（３−シアノプロピル）−３−フルオロフェニル）−４，４−ジメチル−５−オキソ−２−チオキソ−イミダゾリジン−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１０３）［ＮＤ−１４］を得る。

ＮＤ−３の合成
４−［４−（１−シアノシクロブチルアミノ）−フェニル］−酪酸（９１）
トリメチルシリルシアニド（０．５０ｇ、５ｍｍｏｌ）を４−（４−アミノフェニル）−酪酸（０．５３７ｇ、３ｍｍｏｌ）、シクロブタノン（０．３５ｇ、５ｍｍｏｌ）及び硫酸ナトリウム（１ｇ）の１，４−ジオキサン（１０ｍｌ）中の混合物に滴下した。混合物を１５時間撹拌した。硫酸ナトリウムをろ過除去後、媒体を減圧濃縮して、褐色液体を得た。それをクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、５０：５０）に供して、４−［４−（１−シアノシクロブチルアミノ）−フェニル］−酪酸（９１）（０．６６５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ、８６％）を黄色がかった固体として得た。

４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−酪酸メチルエステル（９０）［ＮＤ−４］
４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）（０．５４７ｇ、２．４ｍｍｏｌ）と４−［４−（１−シアノシクロブチルアミノ）−フェニル］−酪酸（９１）（０．３４２ｇ、１．５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２ｍｌ）中の混合物を室温で１５時間撹拌した。この混合物にメタノール（１０ｍＬ）及びＨＣｌ水溶液（５ｍｌ、２Ｍ）を添加した。第２の混合物を３時間還流させた。室温に冷却後、反応混合物を冷水（１０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、クロマトグラフィー（ジクロロメタン）によって分離して、４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−酪酸メチルエステル（９０）［ＮＤ−４］（０．５９４ｇ、１．１８ｍｍｏｌ、７９％）を白色粉末として得た。

４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザ−スピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−酪酸（８９）［ＮＤ−５］
４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−酪酸メチルエステル（９０）［ＮＤ−４］（０．５０１ｇ、１ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）溶液と水酸化ナトリウム溶液（１０ｍｌ、２Ｍ）中の混合物を室温で５時間撹拌した。メタノールを蒸発させた。残留物をＨＣｌ水溶液（２Ｍ）でｐＨ＝５に調節し、次いで媒体を酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮乾固させて、４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザ−スピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−酪酸（８９）［ＮＤ−５］（０．４８２ｇ、０．９９ｍｍｏｌ、９９％）を得た。その構造を式８９に示す。

４２−５） ４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザ−スピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−ブチルアミド（８８）［ＮＤ−６］
ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザ−スピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−酪酸（８９）（０．０９７ｇ、０．２ｍｍｏｌ）懸濁液に塩化チオニル（０．０１９ｍｌ、０．２６ｍｍｏｌ）を−５℃で添加した。媒体を−５℃で１時間撹拌した。次いで、メチルアミンを混合物中に−５℃で３０分間バブリングさせた。媒体をろ過した。ろ液を濃縮し、クロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、７５：２５）によって分離して、４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザ−スピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−ブチルアミド（８８）［ＮＤ−６］（０．０９５ｇ、０．１９ｍｍｏｌ、９５％）をオフホワイト粉末として得た。

４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）フェニル）−Ｎ−メチルブタンイミドアミド（８７）［ＮＤ−３］
４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザ−スピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−ブチルアミド（８８）［ＮＤ−６］（４．０ｍｇ、０．００８ｍｍｏｌ）とピリジン（１．９４μＬ、０．０２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）溶液に−４０℃でトリフリック酸無水物（Ｔｆ_２Ｏ、１．７５μＬ、０．０１ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。混合物を０℃に３時間かけて加温した。次いで、溶液を−４０℃に冷却し、アンモニアをバブリングによって導入した。次いで、反応物を室温に加温し、終夜撹拌した。水系での後処理なしに、１０％メタノールの酢酸エチル溶液を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって、４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）フェニル）−Ｎ−メチルブタンイミドアミド（８７）［ＮＤ−３］（２．９ｍｇ、７２％）を無色オイルとして得た。

ＮＤ−７及びＮＤ−８の合成
ジメチル２−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）マロナート（８６）
無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の水素化ナトリウム（ＮａＨ、６０％、０．４０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）懸濁液にマロン酸ジメチル（１．０４ｍＬ、９．１ｍｍｏｌ）を氷冷下で滴下し、続いて１−ブロモ−２−フルオロ−４−ニトロベンゼン（１．００ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液をアルゴン雰囲気下で滴下した。生成した混合物を７０℃で終夜撹拌し、次いで２１℃に冷却した。反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌでクエンチし、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、２：１）によって精製して、ジメチル２−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）マロナート（８６）（０．９０ｇ、７３％）を淡黄色がかった固体として得た。

トリメチル１−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）プロパン−１，１，３−トリカルボキシラート（８５）
ニトロジエステル、ジメチル２−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）マロナート（８６）（０．４４ｇ、１．６２ｍｍｏｌ）及びアクリル酸メチル（０．２２ｍＬ、２．４３ｍｍｏｌ）の無水メタノール（５ｍＬ）溶液に、触媒作用量のナトリウムメトキシドを２１℃でアルゴン下で添加した。反応混合物を同じ温度で４０時間撹拌し、次いでジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈した。生成した混合物を水、塩水で洗浄し、乾燥させた。溶媒蒸発後に得られた残留物をシリカゲル（ヘキサン：酢酸エチル、８：１）で精製して、トリメチル１−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）プロパン−１，１，３−トリカルボキシラート（８５）（０．４９ｇ、８５％）を得た。

メチル４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタノアート（８４）
化合物トリメチル１−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）プロパン−１，１，３−トリカルボキシラート（８５）（０．２３ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、塩化ナトリウム（０．１１ｇ、１．９０ｍｍｏｌ）及び水（０．１５ｍＬ）の蒸留ジメチルスルホキシド（４ｍＬ）溶液を１５５℃に終夜加熱した。反応混合物を２１℃に冷却し、次いで水を添加し酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出して処理した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、８：１）によって精製して、所望のメチル４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタノアート（８４）（６９ｍｇ、４５％）及びジメチル２−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ペンタンジオアート（８３）（７２ｍｇ、３８％）を得た。

４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタン酸（８２）
メチル４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタノアート（８４）（４３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のメタノール（１ｍＬ）と水（３ｍＬ）の溶液に水酸化ナトリウム（０．１８ｇ、４．５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２１℃で終夜撹拌した。反応混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液でクエンチし、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮して、４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタン酸（８２）（４０ｍｇ、９８％）を得た。残留物を更に精製せずに使用した。

４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（８１）
塩化チオニル（０．０１ｍＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を、−５℃で冷却された４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタン酸（８２）（２０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に徐々に添加した。混合物を−５℃で更に１時間撹拌した。（その４０％水溶液から新しく蒸留された）過剰のメチルアミンを反応媒体に添加した。第２の混合物を更に１時間撹拌した。酢酸エチル（３０ｍＬ）を混合物に添加し、それを塩水（２×３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮して、４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（８１）（１８ｍｇ、８５％）を得た。

４−（４−アミノ−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（８０）
化合物４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（８１）（１８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、Ｆｅ（３０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）及びＡｃＯＨ（１ｍＬ）の酢酸エチル（３ｍＬ）溶液を２時間加熱還流した。反応混合物を２１℃に冷却し、次いでろ過した。有機層を濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９：１）によって精製して、所望の４−（４−アミノ−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（８０）（１４ｍｇ、８６％）を得た。

４−（４−（１−シアノシクロブチルアミノ）−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（７９）
４−（４−アミノ−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（８０）（８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）、シクロブタノン（５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及びトリメチルシリルシアニド（ＴＭＳＣＮ、８ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃に加熱し、１５時間撹拌した。媒体に酢酸エチル（２×２０ｍＬ）を添加し、次いで水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９：１）によって精製して、４−（４−（１−シアノシクロブチルアミノ）−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（７９）（１０ｍｇ、９２％）を得た。

４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（７８）［ＮＤ−７］
４−（４−（１−シアノシクロブチルアミノ）−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（７９）（７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）と４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）（１２ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中の混合物を８０℃に１６時間マイクロ波加熱した。この混合物にメタノール（３ｍＬ）及び１Ｎ ＨＣｌ水溶液（３ｍＬ）を添加した。第２の混合物を１．５時間還流させた。室温に冷却後、反応混合物を冷水（３０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９５：５）によって精製して、４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）−２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチルブタンアミド（７８）［ＮＤ−７］（８ｍｇ、６２％）を淡黄色がかった固体として得た。

４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７７）
塩化チオニル（０．０１ｍＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を、−５℃で冷却された４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタン酸（８２）（１８ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）溶液に徐々に添加した。混合物を−５℃で更に１時間撹拌した。（その４０％水溶液から新しく蒸留された）過剰のジメチルアミンを反応媒体に添加した。第２の混合物を更に１時間撹拌した。酢酸エチル（３０ｍＬ）を混合物に添加し、それを塩水（２×３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮して、４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７７）（１８ｍｇ、８７％）を得た。

４−（４−アミノ−２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７６）
化合物４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７７）（１５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）、Ｆｅ（２０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）及び酢酸（１ｍＬ）の酢酸エチル（３ｍＬ）溶液を２時間加熱還流した。反応混合物を２１℃に冷却し、次いでろ過した。有機層を濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９：１）によって精製して、所望の４−（４−アミノ−２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７６）（１２ｍｇ、８７％）を得た。

４−（４−（２−シアノプロパン−２−イルアミノ）−２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７５）
４−（４−アミノ−２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７６）（１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、シクロブタノン（６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）及びトリメチルシリルシアニド（ＴＭＳＣＮ、９ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃に加熱し、１５時間撹拌した。媒体に酢酸エチル（２×２０ｍＬ）を添加し、次いで水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９：１）によって精製して、４−（４−（２−シアノプロパン−２−イルアミノ）−２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７５）（１２ｍｇ、８９％）を得た。

４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）−２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７４）［ＮＤ−８］
４−（４−（２−シアノプロパン−２−イルアミノ）−２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７５）（７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）と４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）（１２ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中の混合物を８０℃に１６時間マイクロ波加熱した。この混合物にメタノール（３ｍＬ）及び１Ｎ ＨＣｌ水溶液（３ｍＬ）を添加した。第２の混合物を１．５時間還流させた。室温に冷却後、反応混合物を冷水（３０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９５：５）によって精製して、４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）−２−フルオロフェニル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルブタンアミド（７４）［ＮＤ−８］（８ｍｇ、６５％）を淡黄色がかった固体として得た。

ＮＤ−９の合成
ジメチル２−（２−シアノエチル）−２−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）マロナート（７３）
ニトロジエステル、ジメチル２−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）マロナート（８６）（０．４ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）及びアクリロニトリル（０．１１ｍＬ、１．６２ｍｍｏｌ）の無水メタノール（５ｍＬ）溶液に、触媒作用量のナトリウムメトキシドを２１℃でアルゴン下で添加した。反応混合物を同じ温度で４０時間撹拌し、次いでジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈した。生成した混合物を水、塩水で洗浄し、乾燥させた。溶媒蒸発後に得られた残留物をシリカゲル（ヘキサン：酢酸エチル、８：１）で精製して、ジメチル２−（２−シアノエチル）−２−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）マロナート（７３）（０．２５ｇ、５２％）を得た。

４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタンニトリル（７２）
化合物ジメチル２−（２−シアノエチル）−２−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）マロナート（７３）（０．１９ｇ、０．５９ｍｍｏｌ）、塩化ナトリウム（０．１０ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）及び水（０．１５ｍＬ）の蒸留ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、４ｍＬ）溶液を１５５℃に終夜加熱した。反応混合物を２１℃に冷却し、次いで水を添加し酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出して処理した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、８：１）によって精製して、所望の４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタンニトリル（７２）（７９ｍｇ、６５％）を得た。

４−（４−アミノ−２−フルオロフェニル）ブタンニトリル（７１）
化合物４−（２−フルオロ−４−ニトロフェニル）ブタンニトリル（７２）（４７ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）、Ｆｅ（７８ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）及び酢酸（１ｍＬ）の酢酸エチル（３ｍＬ）溶液を２時間加熱還流した。反応混合物を２１℃に冷却し、次いでろ過した。有機層を濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９：１）によって精製して、所望の４−（４−アミノ−２−フルオロフェニル）ブタンニトリル（７１）（３３ｍｇ、８３％）を得た。

１−（４−（３−シアノプロピル）−３−フルオロベンジル）シクロブタンカルボニトリル（７０）
４−（４−アミノ−２−フルオロフェニル）ブタンニトリル（７１）（３０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、シクロブタノン（２４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）及びトリメチルシリルシアニド（ＴＭＳＣＮ、３３ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃に加熱し、１５時間撹拌した。媒体に酢酸エチル（２×２０ｍＬ）を添加し、次いで水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９：１）によって精製して、１−（４−（３−シアノプロピル）−３−フルオロベンジル）シクロブタンカルボニトリル（７０）（４０ｍｇ、９２％）を得た。

４−（５−（４−（３−シアノプロピル）−３−フルオロフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（６９）［ＮＤ−９］
１−（４−（３−シアノプロピル）−３−フルオロベンジル）シクロブタンカルボニトリル（７０）（３２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）と４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）（６２ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中の混合物を８０℃に１６時間マイクロ波加熱した。この混合物にメタノール（３ｍＬ）及び１Ｎ ＨＣｌ水溶液（３ｍＬ）を添加した。第２の混合物を１．５時間還流させた。室温に冷却後、反応混合物を冷水（３０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９５：５）によって精製して、４−（５−（４−（３−シアノプロピル）−３−フルオロフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（６９）［ＮＤ−９］（４８ｍｇ、８０％）を淡黄色がかった固体として得た。

ＮＤ−１１及びＮＤ−１０の合成
４−（８−オキソ−５−（４−（４−オキソブチル）フェニル）−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（６８）［ＮＤ−１０］
４−｛４−［７−（４−シアノ−３−トリフルオロメチルフェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−５−イル］−フェニル｝−酪酸メチルエステル（６７）［ＮＤ−４］（６１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）撹拌溶液に、１Ｍ水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）のヘキサン溶液（０．１６ｍＬ、０．１６ｍｍｏｌ）を−７８℃で添加した。３０分後、反応混合物を飽和ロッシェル塩溶液でクエンチした。生成した混合物を、両方の相が明瞭に分離し、有機層が透明になるまで、２１℃で撹拌した。抽出後、分離した有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮した。（６６）と（６８）の粗製混合物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、４：１）によって精製して、４−（８−ヒドロキシ−５−（４−（４−オキソブチル）フェニル）−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）（６６）（２０ｍｇ、３５％）及び４−（８−オキソ−５−（４−（４−オキソブチル）フェニル）−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（６８）［ＮＤ−１０］（２３ｍｇ、４０％）を得た。

４−（５−（４−（３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）プロピル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザ−スピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（６５）［ＮＤ−１１］
４−（８−オキソ−５−（４−（４−オキソブチル）フェニル）−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（６８）［ＮＤ−１０］（１５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）とエチレンジアミン（２μＬ、０．０４ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（３ｍＬ）中の混合物を０℃でアルゴン下で３０分間撹拌した。Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ、６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を混合物に添加し、生成した溶液を２１℃で終夜撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を添加して反応をクエンチした。混合物をジクロロメタンで抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（エタノール：酢酸エチル、１：４）によって精製して、４−（５−（４−（３−（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）プロピル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザ−スピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（６５）［ＮＤ−１１］（６ｍｇ、３５％）を得た。

ＮＤ−１２の合成
４−（４−ニトロフェニル）ブタナール（６４）
メチル４−（４−ニトロフェニル）ブタノアート（６３）（０．４５ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）撹拌溶液に、１Ｍ水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）のヘキサン溶液（２．６２ｍＬ、２．６２ｍｍｏｌ）を−７８℃で添加した。３０分後、反応混合物を飽和ロッシェル塩溶液でクエンチした。生成した混合物を、両方の相が明瞭に分離し、有機層が透明になるまで、２１℃で撹拌した。抽出後、分離した有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮した。粗製４−（４−ニトロフェニル）ブタナール（６４）をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル、８：１）によって精製して、４−（４−ニトロフェニル）ブタナール（６４）（０．２８ｇ、７２％）を得た。

２−（３−（４−ニトロフェニル）プロピル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（６２）
４−（４−ニトロフェニル）ブタナール（６４）（０．２８ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）とエチレンジアミン（０．１ｍＬ、１．５９ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の混合物を０℃でアルゴン下で３０分間撹拌した。ＮＢＳ（０．２６ｇ、１．５９ｍｍｏｌ）を混合物に添加し、生成した溶液を２１℃で終夜撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を添加して反応をクエンチした。混合物をジクロロメタンで抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（エタノール：酢酸エチル：トリエチルアミン、１：１：０．２）によって精製して、２−（３−（４−ニトロフェニル）プロピル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（６２）（０．２６ｇ、７６％）を得た。

２−（３−（４−ニトロフェニル）プロピル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（６２）をメチル４−（４−ニトロフェニル）ブタノアート（６３）から合成する代替経路も使用した。それは以下のとおりである。エチレンジアミン（０．１ｍＬ、１．５９ｍｍｏｌ）をトリメチルアルミニウム（１．５９ｍｍｏｌ）のトルエン２ｍＬ撹拌溶液に温度が１０℃を超えないように滴下した。メタン発生の最後にエステル（６３）（０．２２ｇ、１．００ｍｍｏｌ）を室温で徐々に添加した。反応混合物を３時間還流させた。冷却後、溶液を水１ｍＬで滴下処理し、メタノール３ｍＬ及び塩化メチレン３ｍＬで希釈し、水蒸気浴上で１５分間還流させた。ＭｇＳＯ_４でろ過し、溶媒蒸発後、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（エタノール：酢酸エチル：トリエチルアミン、１：１：０．２）によって精製して、２−（３−（４−ニトロフェニル）プロピル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（６２）（０．１０ｇ、４５％）を得た。

ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（４−ニトロフェニル）プロピル）−１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシラート（６１）
ジクロロメタン（５ｍＬ）とジメチルスルホキシド（０．０６ｍＬ、０．７９ｍｍｏｌ）の溶液に塩化オキサリル（０．０７ｍＬ、０．７９ｍｍｏｌ）を−７８℃でアルゴン雰囲気下で添加した。２０分間撹拌後、２−（３−（４−ニトロフェニル）プロピル）−４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール（６２）（７４ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液を反応混合物に添加した。５０分間撹拌後、トリエチルアミン（０．２２ｍＬ、１．５９ｍｍｏｌ）を添加し、次いで反応混合物を室温に加温した。５０分間撹拌後、アンモニア水溶液（１０ｍＬ）を添加し、生成した混合物をクロロホルム（２０ｍＬ）で抽出した。混合有機層を塩水で洗浄し、乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール、１０：１）によって精製して、対応するイミダゾール（６１ｍｇ、８３％）を得た。イミダゾール（５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）溶液にトリエチルアミン（０．０４ｍＬ、０．２６ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル無水物（Ｂｏｃ_２Ｏ、５７ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２１℃で終夜撹拌した。反応混合物をジクロロメタン（２０ｍＬ）で抽出した。有機層を塩水で洗浄し、乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール、２０：１）によって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（４−ニトロフェニル）プロピル）−１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシラート（６１）（７２ｍｇ、定量）を得た。

ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（４−（１−シアノシクロブチルアミノ）フェニル）プロピル）−１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシラート（６０）
ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（４−ニトロフェニル）プロピル）−１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシラート（６１）（７２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（５ｍＬ）溶液に触媒作用量のＰｄ／Ｃの存在下で水素ガスを導入した。反応終了後、反応混合物をろ過し、濃縮し、次いでフラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール、１０：１）によって精製して、対応するアミン（５９ｍｇ、９０％）を得た。

アミン（５５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、シクロブタノン（２６ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及びトリメチルシリルシアニド（ＴＭＳＣＮ、３６ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃に加熱し、１５時間撹拌した。媒体に酢酸エチル（２×２０ｍＬ）を添加し、次いで水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９：１）によって精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（４−（１−シアノシクロブチルアミノ）フェニル）プロピル）−１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシラート（６０）（５７ｍｇ、８２％）を得た。

４−（５−（４−（３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）プロピル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（５９）［ＮＤ−１２］
ｔｅｒｔ−ブチル２−（３−（４−（１−シアノシクロブチルアミノ）フェニル）プロピル）−１Ｈ−イミダゾール−１−カルボキシラート（６０）（２２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）と４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）（２６ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中の混合物を８０℃に１６時間マイクロ波加熱した。この混合物にメタノール（３ｍＬ）及び１Ｎ ＨＣｌ水溶液（３ｍＬ）を添加した。第２の混合物を１．５時間還流させた。室温に冷却後、反応混合物を冷水（３０ｍＬ）に注ぎ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で処理し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４を用いて乾燥させ、濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン、９：１）によって精製して、４−（５−（４−（３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イル）プロピル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（５９）［ＮＤ−１２］（２９ｍｇ、５２％）を淡黄色がかった固体として得た。

当業者は、本明細書に記載の合成を改変し、及び／又は組み合わせて、別のジアリールヒダントイン化合物を製造することができる。

ＮＤ−１３の合成
４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）−２−フルオロフェニル）−２，２−ジメチル−Ｎ−メチルブタンアミド（１１３）
予見される別の化合物は、４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）−２−フルオロフェニル）−２，２−ジメチル−Ｎ−メチルブタンアミド（１１３）［ＮＤ−１３］である。

４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）−２−フルオロフェニル）−２，２−ジメチル−Ｎ−メチルブタンアミド（１１３）［ＮＤ−１３］を製造する合成経路の一例は、以下である。

あるいは、４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）−２−フルオロフェニル）−２，２−ジメチル−Ｎ−メチルブタンアミド（１１３）［ＮＤ−１３］は、合成（９２）［ＮＤ−２］と類似の様式で合成することができる。溶媒、例えばＤＭＦ中の４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル（９６）と４−（４−（１−シアノシクロブチルアミノ）フェニル）−Ｎ，２，２−トリメチルブタンアミド（１１１）の混合物をマイクロ波照射下で８０℃で６時間加熱する。

この混合物にアルコール、例えばメタノール、及び酸、例えば塩酸水溶液を添加する。第２の混合物を１．５時間還流させる。室温に冷却後、反応混合物を冷水に注ぎ、例えば酢酸エチルで抽出する。有機層を、例えばＭｇＳＯ_４を用いて、乾燥させ、濃縮し、残留物を、例えばヘキサン：酢酸エチル（２：１）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、精製して、４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタ−アン−５−イル）−２−フルオロフェニル）−２，２−ジメチル−Ｎ−メチルブタンアミド（１１３）［ＮＤ−１３］を得る。

発明化合物は、以下の式の化合物も含む。

Ｒ_１とＲ_２は一緒に８個以下の炭素原子を含むことができ、アルキル、置換アルキル又は、それらが結合した炭素と一緒に、シクロアルキル若しくは置換シクロアルキル基とすることができる。Ｒ_３は水素、シアノ、ホルミル、

とすることができる。Ｒ_４は水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩとすることができる。Ｒ_１１とＲ_１２は、同じでも異なっていてもよく、水素又はメチルとすることができる。Ｒ_１３は水素又は−ＮＲ_１４Ｒ_１５とすることができる。Ｒ_１４とＲ_１５は、同じでも異なっていてもよく、水素又はメチルとすることができる。

化合物の薬理学的検討
合成経路について上で述べた化合物を、参照により本明細書に援用するＰＣＴ出願番号ＵＳ０４／４２２２１、ＵＳ０５／０５５２９及びＵＳ０６／１１４１７並びに米国特許出願第１１／４３３，８２９号に類似したスクリーニング手順を利用して、ホルモン不応性前立腺癌細胞についてＡＲに対する拮抗及び作動活性をスクリーニングすることによって評価することができる。

ｉｎ ｖｉｔｒｏバイオアッセイ
レポーターアッセイによるＡＲに対する化合物の効果
例えば、化合物は、ホルモン不応性前立腺癌細胞系における人工アンドロゲン受容体（ＡＲ）応答レポーター系を使用した試験に供することができる。前立腺癌ＬＮＣａＰ細胞は、内因性レベルの約５倍のＡＲを安定に発現するように操作されている。外因性ＡＲは、どちらも合成アンドロゲンＲ１８８１によって安定化される点で、内因性ＡＲに類似した諸性質を有する。ＡＲが過剰発現された細胞は、ＡＲ応答レポーターを安定に取り込むようにも操作されており、この細胞のレポーター活性は、ホルモン不応性前立腺癌の特徴を示す。この細胞は、低濃度の合成アンドロゲンＲ１８８１に応答し、高濃度のビカルタミドによってのみ阻害され、ビカルタミドによって作動活性を示す。ビカルタミドは、ＡＲ応答レポーターを阻害し、ホルモン感受性前立腺癌細胞において作動活性を持たない。

合成について上で述べた化合物の拮抗活性は、１００ｐＭのＲ１８８１の存在下で調べることができる。操作されたＬＮＣａＰ細胞（ＬＮＣａＰ−ＡＲ、ＬＮ−ＡＲとも略記する。）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含むイスコフ培地中で維持する。薬物処理の２日前に、１０％チャコール処理ＦＢＳ（ＣＳ−ＦＢＳ）を含むイスコフ培地中で細胞を増殖させて、アンドロゲンを取り除く。細胞を分割し、１０％ＣＳ−ＦＢＳを含むイスコフ培地中で１００ｐＭ Ｒ１８８１及び漸増濃度の試験化合物と一緒に増殖させる。２日間インキュベーション後、レポーター活性を評価する。ビカルタミドを対照物質として使用する。

ホルモン不応性前立腺癌におけるＡＲ過剰発現のこれまで認識されていない一性質は、拮抗物質を作動物質に切り換えるその能力である。したがって、作動活性が最小の化合物又は作動活性のない化合物のみが、この疾患に対する抗アンドロゲン薬に適格である。種々の化合物の作動活性を求めるために、ＬＮ−ＡＲ系における尺度としてＡＲ応答レポーターを使用して、Ｒ１８８１の非存在下で、アンドロゲン受容体（ＡＲ）に対する刺激活性を調べることができる。ビカルタミドは、ホルモン不応性前立腺癌においてＡＲを活性化し得る。ＲＵ５９０６３及び米国特許第５，７０５，６５４号に例として列挙された他の抗アンドロゲン化合物は、ホルモン不応性前立腺癌においてＡＲを活性化し得る。

ＡＲ阻害剤の特異性を調べるために、核内受容体ファミリーにおけるＡＲの最も近いメンバーであるグルココルチコイド受容体（ＧＲ）を過剰発現するＬＮＣａＰ細胞において化合物を試験することができる。この細胞は、ＧＲ応答レポーターを保有することもでき、レポーター活性は、ＧＲ作動物質であるデキサメタゾンによって誘導することができ、誘導は、ＧＲ阻害剤であるＲＵ４８６によって遮断することができる。

前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の分泌レベルを測定することによるＡＲに対する化合物の効果
ＰＳＡレベルは、前立腺癌におけるアンドロゲン受容体（ＡＲ）活性の指標である。化合物が生理学的環境においてＡＲ機能に影響を及ぼすかどうかを調べるために、ＡＲが過剰発現されたＬＮＣａＰ細胞（ＬＮＣａＰ−ＡＲ、ＬＮ−ＡＲとも略記する。）においてＲ１８８１によって誘導される内因性ＰＳＡの分泌レベルを測定することができる。ＬＮＣａＰ−ＡＲ細胞は、アンドロゲン受容体を発現させるプラスミドを導入した前立腺細胞のリンパ節癌腫の一系統である。ＬＮＣａＰ−ＡＲ細胞は、１０％ＦＢＳを含むイスコフ培地中で維持される。薬物処理の２日前に、１０％ＣＳ−ＦＢＳを含むイスコフ培地中で細胞を増殖させて、アンドロゲンを取り除く。細胞を分割し、１０％ＣＳ−ＦＢＳを含むイスコフ培地中で適切な濃度のＲ１８８１及び試験化合物と一緒に増殖させる。４日間のインキュベーション後、分泌ＰＳＡレベルをＰＳＡ ＥＬＩＳＡキット（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｑｕａｌｅｘ、Ｓａｎ Ｃｌｅｍｅｎｔｅ、ＣＡ）を用いて分析する。

ＬＮＣａＰ−ＡＲ細胞の分泌ＰＳＡレベルは、２５ｐＭ Ｒ１８８１によって強力に誘導される。対照的に、ＰＳＡは、親ＬＮＣａＰ細胞ではＲ１８８１濃度が１００ｐＭに達するまで誘導されない。したがって、ホルモン不応性前立腺癌におけるＡＲは、アンドロゲンに対して高感受性である。ＡＲ活性に対する用量依存的阻害を実施して、ＰＳＡ発現の阻害における種々の化合物のＩＣ５０を測定する。

ホルモン不応性前立腺癌におけるＡＲに対する選択化合物の作動活性は、分泌ＰＳＡを代用マーカーとして使用して調べることができる。そのために、アンドロゲンを欠乏させたＡＲが過剰発現されたＬＮＣａＰ細胞を、合成について上で述べた漸増濃度の化合物と一緒にＲ１８８１の非存在下でインキュベートし、培地中の分泌ＰＳＡを４日後に測定する。

ＲＵ５９０６３及び米国特許第５，７０５，６５４号に例として列挙された他の抗アンドロゲン化合物は、ホルモン不応性前立腺癌においてＰＳＡ発現を刺激し得る。

ＭＴＳアッセイによるＡＲミトコンドリア活性に対する化合物の効果
ＬＮＣａＰ−ＡＲ細胞は、１０％ＦＢＳを含むイスコフ培地中で維持することができる。ホルモン不応性前立腺癌細胞の増殖に対するその効果について化合物を調べる。過剰発現されたＬＮＣａＰ細胞を使用する。というのは、この細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでホルモン不応性前立腺癌細胞として挙動するからである。ＭＴＳアッセイによるミトコンドリア活性を増殖の代わりに測定する。過剰発現されたＡＲを有するＬＮＣａＰ細胞（ＬＮ−ＡＲ）を１０％ＦＢＳを含むイスコフ培地中で維持する。薬物処理の２日前に、１０％ＣＳ−ＦＢＳを含むイスコフ培地中で細胞を増殖させて、アンドロゲンを取り除く。次いで、細胞を分割し、１０％ＣＳ−ＦＢＳを含むイスコフ培地中で適切な濃度のＲ１８８１及び漸増濃度の試験化合物と一緒に増殖させる。４日間インキュベーション後、細胞増殖をＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）によってモニターする。

レポーターアッセイ及びＰＳＡアッセイと一致して、ＡＲが過剰発現されたＬＮＣａＰの増殖は、２５μＭのＲ１８８１によって刺激されるが、親細胞はＲ１８８１濃度が１００μＭに達するまで刺激されない。１００ｐＭ Ｒ１８８１の存在下でホルモン不応性前立腺癌の増殖に対する化合物の阻害効果を測定する。ビカルタミドは、ホルモン不応性前立腺癌を阻害しない。

ＭＴＳアッセイにおける増殖阻害がＡＲを標的にすることによって起こるかどうかを調べるために、ＡＲ発現のない前立腺癌細胞系であるＤＵ−１４５細胞において化合物を試験することができる。２種類の一般に使用される乳癌細胞であるＭＣＦ７及びＳｋＢｒ３、又は正常なマウス線維芽細胞系である３Ｔ３など、ＡＲが発現された前立腺癌細胞以外の細胞を阻害するその能力について化合物を試験することができる。

種々のアッセイによる観測結果に基づいて、化合物をその活性順に位置づけることができる。

ホルモン不応性前立腺癌異種移植腫ように対する阻害効果
ホルモン不応性前立腺癌に対する化合物のｉｎ ｖｉｖｏ効果を調べることができる。ＡＲが過剰発現されたＬＮＣａＰ細胞から樹立された異種移植腫ように対する化合物の効果を調べることができる。Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）中の操作された細胞を、去勢された雄性ＳＣＩＤマウスの側腹部に皮下注射する。腫ようサイズをノギスを用いて３次元的に毎週測定する。異種移植腫ようが樹立された（例えば、少なくとも４０ｍｍ^３の腫ようサイズ）後、腫ようを有するマウスを無作為化し、異なる用量の化合物で経口的に１日１回処置する。ビカルタミドは、ホルモン不応性前立腺癌の増殖を阻害せず、ビヒクルと同じである。

ホルモン不応性前立腺癌の別の異種移植モデルであるホルモン不応性ＬＡＰＣ４において化合物を試験することもできる。このモデルは、去勢マウスにおけるホルモン感受性前立腺癌の継代培養から樹立され、前立腺癌の臨床的進行を模倣する。ビカルタミドは、ホルモン不応性ＬＡＰＣ４異種移植モデルにおける増殖及びＰＳＡ発現を阻害せず、ビヒクルと同じである。

ホルモン感受性前立腺癌細胞の増殖に対する阻害効果
化合物がホルモン感受性前立腺癌細胞を阻害するかどうかを判定するために、ミトコンドリア活性のＭＴＳを測定することによって、ＬＮＣａＰ細胞の増殖に対する化合物の効果を調べることができる。ビカルタミドは、ホルモン感受性ＬＮＣａＰ細胞を用量依存的に軽度に阻害する。

ｉｎ ｖｉｖｏバイオアッセイ
ｔｈｅ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ａｔ Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓの指針に従って動物実験を実施する。動物をＴａｃｏｎｉｃから購入し、層流塔中の明確な細菌叢コロニー中で維持する。ＬＮＣａＰ−ＡＲ及びＬＮＣａＰ−ベクター細胞を１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ培地中で維持する。ＭａｔｒｉｇｅｌとＲＰＭＩの１：１培地１００μｌ中の１０^６個の細胞を、無処置の又は去勢された雄性ＳＣＩＤマウスの側腹部に皮下注射する。腫ようサイズをノギスを用いて３次元的（長さ×幅×深さ）に毎週測定する。腫ようサイズが約１００ｍｍ^３に達した後、マウスを投与群に無作為化する。薬物を１０ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇで毎日経口投与する。薬力学的読み出し（ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ ｒｅａｄｏｕｔ）を得るために、最後の処理から３時間後に動物を光学ＣＣＤカメラによって画像化する。光子／秒単位のルシフェラーゼ活性測定のために、ＲＯＩを腫よう全面にわたって抜き出す。

ビカルタミド及び試験化合物の薬物動態学を、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した８週齢ＦＶＢマウスを使用してｉｎ ｖｉｖｏで評価する。マウスを各時点で３グループに分割する。２匹のマウスを薬物処理せず、２匹の別のマウスをビヒクル溶液で処理する。各グループを１０ｍｇ／キログラム体重で処理する。

薬物をＤＭＳＯ：ＰＥＧ４００：Ｈ_２Ｏの１：５：１４混合物（ビヒクル溶液）に溶解させ、マウスの尾静脈から投与する。マウスを処理前に加熱ランプ下で約２０分間加温して、その尾静脈を拡張させる。各マウスをマウス拘束装置（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉ．Ｃａｔ＃０１−２８８−３２Ａ）に配置し、薬物のビヒクル溶液２００μｌを拡張された尾静脈に注射する。薬物投与後、動物を異なる時点、すなわち５ｍｎ、３０ｍｎ、２時間、６時間、１６時間でＣＯ_２吸入によって安楽死させる。ＣＯ_２に曝露後、心臓穿刺（１ｍｌ ＢＤシリンジ＋２７Ｇ ５／８針）によって動物からすぐに採血する。経口投与の場合には、給餌シリンジを介した経口投与前に薬物をＤＭＳＯ：カルボキシメチルセルロース：Ｔｗｅｅｎ８０：Ｈ_２Ｏの５０：１０：１：９８９混合物に溶解させる。

血清試料をＨＰＬＣによって分析して薬物濃度を測定する。ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ６００ポンプ、Ｗａｔｅｒｓ６００制御器及びＷａｔｅｒｓ２４８７検出器）はＡｌｌｔｉｍａ Ｃ１８カラム（３μ、１５０ｍｍ×４．６ｍｍ）を備える。例えば、試験化合物は波長２５４ｎｍで検出することができ、ビカルタミドは波長２７０ｎｍで検出することができる。

ＨＰＬＣ分析用試料を以下の手順に従って調製する。

− 血球を血清から遠心分離によって分離する。

− 血清４００μｌに１０μＭ内部標準溶液８０μｌ及びアセトニトリル５２０μｌを添加する。沈殿を注視する。

− 混合物を３分間ボルテックス撹拌し、次いで超音波下に３０分間置く。

− 固体粒子をろ別し、又は遠心分離によって分離する。

− ろ液をアルゴン気流下で乾燥させる。ＨＰＬＣ分析して薬物濃度を測定する前にアセトニトリルで８０μｌに試料を戻す。

− 薬物検量線を使用して、精度を向上させる。

化合物の定常状態濃度（Ｃｓｓ）を測定し、ビカルタミドのそれと比較することができる。

化合物の順位
化合物を順位づけるために、以下のデータを考慮することができる：ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（ＬＮＣａＰ細胞系におけるＡＲ応答レポーター系、ＰＳＡレベル測定、ＭＴＳミトコンドリアアッセイ）及びｉｎ ｖｉｖｏ実験（直接測定される、又はルシフェラーゼレポーター遺伝子によって誘発される発光によって測定される腫ようサイズ、血しょうレベルに基づく薬物動態学的アッセイ）。順位を確定するのに考慮される諸特性としては、アンドロゲン受容体（ＡＲ）拮抗作用活性、ホルモン不応性細胞におけるＡＲアゴニズムの欠如、腫よう増殖の防止、腫ようの縮小、及び薬物動態学的挙動を挙げることができ、血中の滞留時間が長いほど有利である。

高い順位がつけられた化合物は、ＡＲ拮抗物質として、さらにホルモン不応性前立腺癌治療薬としての使用に有利であり得る。この化合物は、良性前立腺肥大、脱毛、アクネなどの他のＡＲ関連疾患又は症状を治療するのに有用であり得る。高い順位がつけられた化合物は、グルココルチコイド受容体、エストロゲン受容体、及びペルオキシソーム増殖因子活性化受容体などの他の核内受容体の調節物質として、さらに、乳癌、卵巣癌、糖尿病、心疾患、及び代謝関連疾患などの核内受容体がある役割を果たす疾患の治療薬としても、有用であり得る。この化合物はアッセイにおいて、例えば、標準として、又は中間体若しくはプロドラッグとして、有用であり得る。

本願の化合物は、前立腺癌治療においてビカルタミドよりも優れる可能性がある。

薬剤組成物及び投与
本発明の化合物は、治療有効量の本明細書に定義された本発明の化合物と薬学的に許容される担体又は希釈剤とを用いて調製された、薬剤組成物として有用である。

本発明のジアリールヒダントイン化合物は、薬剤組成物として処方することができ、治療を必要とする対象、例えばヒト患者などのほ乳動物に、選択された投与経路に適合した種々の形態で、例えば、経口、経鼻、腹腔内若しくは非経口的に、静脈内、筋肉内、局所若しくは皮下経路によって、又は組織への注射によって、投与することができる。

したがって、本発明のジアリールヒダントイン化合物は、例えば、経口的に、不活性希釈剤、若しくは同化可能な食用担体などの薬学的に許容されるビヒクルと組み合わせて、又は吸入若しくは通気によって、全身投与することができる。本発明のジアリールヒダントイン化合物は、硬ゼラチンカプセル剤若しくは軟ゼラチンカプセル剤に封入することができ、圧縮して錠剤にすることができ、又は患者の食事の食品に直接組み入れることができる。経口治療投与の場合、ジアリールヒダントイン化合物は、１種類以上の賦形剤と組み合わせることができ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ剤、ウェーハ剤などの剤形で使用することができる。ジアリールヒダントイン化合物は、ｆｍｅ不活性粉末担体と組み合わせることができ、対象が吸入することができ、又は吹き込むことができる。かかる組成物及び調製物は、少なくとも０．１％のジアリールヒダントイン化合物を含むべきである。組成物及び調製物の割合は、変わり得ることは言うまでもなく、好都合には、所与の単位剤形重量の約２％から約６０％の間であり得る。治療上有用であるかかる組成物中のジアリールヒダントイン化合物量は、有効投与レベルが得られるような量である。

錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などは以下を含むこともできる：トラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチ、若しくはゼラチンなどの結合剤、リン酸二カルシウムなどの賦形剤、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、及びスクロース、フルクトース、ラクトース、若しくはアスパルテームなどの甘味剤、又はペパーミント、冬緑油、若しくはサクランボ香味剤などの香味剤。単位剤形がカプセル剤であるときには、単位剤形は、上記タイプの材料に加えて、植物油、又はポリエチレングリコールなどの液状担体を含むことができる。種々の他の材料が、剤皮として、又は固体単位剤形の物理的形態を改変するために、存在することができる。例えば、錠剤、丸剤又はカプセル剤は、ゼラチン、ワックス、シェラック、又は糖などで被覆することができる。シロップ剤又はエリキシル剤は、活性化合物、甘味剤としてスクロース又はフルクトース、防腐剤としてメチル及びプロピルパラベン、色素、並びにサクランボ、又はオレンジ風味などの香味剤を含むことができる。任意の単位剤形を調製するのに使用される任意の材料が、薬学的に許容され、使用量で実質的に無毒であるべきことは言うまでもない。さらに、ジアリールヒダントイン化合物は、徐放性調製物及び装置に組み入れることができる。例えば、ジアリールヒダントイン化合物を徐放性カプセル剤、徐放性錠剤及び徐放性丸剤に組み入れることができる。

ジアリールヒダントイン化合物は、注入又は注射によって静脈内又は腹腔内投与することもできる。ジアリールヒダントイン化合物溶液は、場合によっては無毒界面活性剤と混合して、水中で調製することができる。分散液剤は、グリセロール、液状ポリエチレングリコール、トリアセチン及びその混合物中、並びにオイル中で調製することもできる。通常の貯蔵及び使用条件下では、これらの調製物は、微生物の増殖を防止するために防腐剤を含むことができる。

注射又は注入に適切な医薬剤形としては、場合によってはリポソーム中に封入された、無菌注射又は注入用の液剤又は分散液剤を即座に調製できるようになされた、ジアリールヒダントイン化合物を含む無菌水溶液剤若しくは分散液剤又は無菌散剤を挙げることができる。いずれの場合においても、最終剤形は、製造及び貯蔵条件下で無菌で、流動性で、安定であるべきである。液状担体又はビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど）、植物油、無毒グリセリルエステル及びその適切な混合物を含む、溶媒又は液状分散媒とすることができる。適切な流動性は、例えば、リポソームの形成によって、分散液剤の場合には必要な粒径を維持することによって、又は界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって防止することができる。多くの場合において、等張化剤、例えば、糖、緩衝剤又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを、組成物中に使用することによって延長することができる。

無菌注射液は、必要量のジアリールヒダントイン化合物を、必要に応じて上で列挙した種々の別の成分と一緒に、適切な溶媒に組み入れ、続いてフィルター滅菌することによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌散剤の場合、好ましい調製方法は真空乾燥及び凍結乾燥技術であり、あらかじめ無菌ろ過された溶液中に存在する活性成分と任意の追加の所望の成分との粉末を生成する。

局所投与の場合には、ジアリールヒダントイン化合物を純粋な形態で適用することができる。しかし、一般に、固体でも液体でもよい皮膚科学的に許容される担体と組み合わせて、ジアリールヒダントイン化合物を組成物又は製剤として皮膚に投与することが望ましい。

有用な固体担体としては、タルク、クレイ、微結晶セルロース、シリカ、アルミナなどの微粉固体が挙げられる。別の固体担体としては、無毒の重合体のナノ粒子又は微粒子が挙げられる。有用な液状担体としては、水、アルコール若しくはグリコール又は水／アルコール／グリコールのブレンドが挙げられ、ジアリールヒダントイン化合物を、場合によっては無毒界面活性剤を用いて、有効なレベルで溶解又は分散させることができる。芳香剤及び追加の抗菌剤などのアジュバントを、所与の用途に対して諸特性を最適化するために添加することができる。得られる液体組成物は、吸収剤パッドから適用することができ、包帯及び他の手当用品に含浸させるのに使用することができ、又はポンプ型若しくはエアロゾル噴霧器を用いて患部に噴霧することができる。

合成高分子、脂肪酸、脂肪酸塩及びエステル、脂肪アルコール、変性セルロース、又は改質無機材料などの増粘剤も液状担体と一緒に使用して、使用者の皮膚に直接塗布するための展性のあるペースト剤、ゲル剤、軟膏剤、石鹸などを形成することができる。

ジアリールヒダントイン化合物を皮膚に送達するのに使用することができる有用な皮膚用組成物の例は、当分野で公知であり、例えば、そのすべてを参照により本明細書に援用する、Ｊａｃｑｕｅｔ他（米国特許第４，６０８，３９２号）、Ｇｅｒｉａ（米国特許第４，９９２，４７８号）、Ｓｍｉｔｈ他（米国特許第４，５５９，１５７号）及びＷｏｒｔｚｍａｎ（米国特許第４，８２０，５０８号）を参照されたい。

式Ｉの化合物の有用な投与量は、そのｉｎ ｖｉｔｒｏ活性と動物モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ活性を比較することによって決定することができる。マウス及び他の動物における有効投与量をヒトに外挿する方法は、当分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に援用する米国特許第４，９３８，９４９号を参照されたい。

例えば、ローション剤などの液体組成物中のジアリールヒダントイン化合物の濃度は、約０．１〜２５重量％又は約０．５〜１０重量％とすることができる。ゲル又は粉体などの半固体又は固体組成物中の濃度は、約０．１〜５重量％又は約０．５〜２．５重量％とすることができる。

治療に使用するのに必要なジアリールヒダントイン化合物の量は、選択された特定の塩だけでなく、投与経路、治療する症状の性質、並びに患者の年齢及び症状に応じても変動し、最終的には主治医又は臨床医の判断である。

本発明の薬剤の有効な投与量及び投与経路は慣例的なものである。薬剤の正確な量（有効量）は、例えば、対象の種、年齢、体重及び全身又は臨床症状、治療する任意の障害の重症度又は機序、使用する特定の薬剤又はビヒクル、投与方法及び計画などに応じて、対象ごとに異なる。治療有効量は、当業者に公知の従来手順によって、経験的に決定することができる。例えば、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，ｅｄｓ．，Ｍａｃｍｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。例えば、有効量は、細胞培養アッセイ又は適切な動物モデルにおいて最初に推定することができる。動物モデルを使用して、適切な濃度範囲及び投与経路を決定することもできる。次いで、かかる情報を使用して、ヒトにおける投与の有用な用量及び経路を決定することができる。治療量は、類似の治療薬の投与量との類似性によって選択することもできる。

特定の投与方法及び投与計画は、症例の詳細（例えば、関係する対象、疾患、病態、及び治療が予防的かどうか）を考慮して、担当臨床医によって選択される。治療は、数日から数か月、さらには数年の期間にわたる化合物（単数又は複数）の１日１回投与又は１日複数回投与を含むことができる。

しかしながら、一般に、適切な用量は、約０．００１から約１００ｍｇ／ｋｇの範囲、例えば、約０．１ｍｇ／キログラムを超える用量などの約０．０１から約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、又は約１から約１０ｍｇ／キログラムレシピエント体重／日の範囲である。例えば、適切な用量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇ体重／日とすることができる。

ジアリールヒダントイン化合物は、例えば、活性成分０．０５から１００００ｍｇ、０．５から１００００ｍｇ、５から１０００ｍｇ、又は約１００ｍｇ／単位剤形を含む、単位剤形で好都合には投与される。

ジアリールヒダントイン化合物は、例えば、約０．５から約７５μＭ、約１から５０μＭ、約２から約３０μＭ、又は約５から約２５μＭのピーク血しょう中濃度が得られるように投与することができる。例示的な望ましい血しょう中濃度としては、少なくとも又はせいぜい０．０１、０．０２５、０．０５、０．１、０．２５、０．５、１、５、１０、２５、５０、７５、１００又は２００μＭが挙げられる。例えば、血しょう中レベルは、約１から１００マイクロモル濃度又は約１０から約２５マイクロモル濃度とすることができる。これは、例えば、場合によっては生理食塩水中の、０．０５から５％ジアリールヒダントイン化合物溶液の静脈内注射によって達成することができ、又はジアリールヒダントイン化合物約１〜１００ｍｇを含むボーラスとして経口投与することができる。望ましい血中レベルは、約０．００００５〜５ｍｇ／ｋｇ体重／時間、例えば、少なくとも又はせいぜい０．００００５、０．０００５、０．００５、０．０５、０．５又は５ｍｇ／ｋｇ／時間を与える持続注入によって維持することができる。あるいは、かかるレベルは、約０．０００２〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、ジアリールヒダントイン化合物少なくとも又はせいぜい０．０００２、０．００２、０．０２、０．２、２、２０又は５０ｍｇ／ｋｇ体重を含む、断続的注入によって得ることができる。

ジアリールヒダントイン化合物は、好都合には、単一用量で、又は適切な間隔で投与される分割用量として、例えば２、３、４回／日以上の分割用量として、提供することができる。分割用量自体を、例えば、吸入器からの複数回吸入など、幾つかの別個の大ざっぱに間隔をおいた投与に更に分割することができる。

幾つかの上記化合物は、ホルモン不応性前立腺癌細胞に対してほとんど又は全く作動活性を示さない。これらの化合物は、強力なアンドロゲン受容体（ＡＲ）阻害剤であるので、前立腺癌の治療だけでなく、良性前立腺肥大、脱毛、アクネなどの他のＡＲ関連疾患又は症状の治療にも使用することができる。ＡＲは核内受容体ファミリーに属するので、これらの化合物は、エストロゲン受容体、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体などの他の核内受容体を標的にした薬物合成の足場として役立ち得る。したがって、これらの化合物は、さらに、乳癌、卵巣癌、糖尿病、心疾患、代謝関連疾患などの核内受容体がある役割を果たす他の疾患用に開発することもできる。

本明細書で説明及び考察した実施形態は、本発明を構成し、使用する、本発明者らに既知の最良の方法を当業者に教示することのみを意図するものである。本明細書における何ものも本発明の範囲を限定するとみなすべきでない。示した実施例はすべて代表的なものであり、非限定的なものである。上記教示に照らして当業者に理解されるように、本発明の上記実施形態は、本発明から逸脱することなく改変又は変更することができる。したがって、特許請求の範囲及びその等価物の範囲内で、具体的記述とは別な方法で本発明を実施できることを理解されたい。

Claims (1)

1. 明細書に記載の発明。