JP2013512683A5

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Publication number: JP2013512683A5
Application number: JP2012542505A
Authority: JP
Filing date: 2010-12-07
Publication date: 2013-11-28
Anticipated expiration: 2030-12-07

Claims

検出可能な親和性を有する所定の非天然標的に結合することができ、ヒトリポカリン２（Ｌｃｎ２、ｈＮＧＡＬ）に由来する突然変異タンパク質の生成方法であって、
ヒトＬｃｎ２タンパク質をコードする核酸分子を、ヒトＬｃｎ２の直鎖状ポリペプチド配列における配列位置９６、１００、及び１０６に対応する配列位置のうちのいずれかの少なくとも１つをコードするヌクレオチドトリプレットで突然変異誘発させて、１つ又はそれ以上の突然変異タンパク質核酸分子を生じるステップ（ａ）を備えている方法。
請求項１の方法において、
ステップ（ａ）で得られた１つ以上の突然変異タンパク質核酸分子を適切な発現系で発現させるステップ（ｂ）と、
所定の標的に対して検出可能な結合親和性を有する１つ又はそれ以上の突然変異タンパクを、選択及び／又は単離によって濃縮するステップ（ｃ）とをさらに備えている方法。
請求項１又は２の方法において、
前記核酸分子を、ｈＬｃｎ２の直鎖状ポリペプチド配列における配列位置３６、４０、４１、４９、５２、６８、７０、７２、７３、７７、７９、８１、１０３、１２５、１２７、１３２及び１３４のいずれかをコードする少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６又は１７全てのヌクレオチドトリプレットで突然変異誘発させることをさらに備えている方法。
請求項１〜３のいずれか１項の方法により得られるＬｃｎ２タンパク質由来の突然変異タンパク質。
Ｌｃｎ２タンパク質由来の突然変異タンパク質であって、
Ｌｃｎ２の直鎖状ポリペプチド配列における配列位置９６、１００、及び１０６に対応する配列位置のうちのいずれかにおける少なくとも１つの突然変異したアミノ酸残基を備え、検出可能な親和性を有する所定の非天然標的に結合することができる突然変異タンパク質。
請求項５の突然変異タンパク質において、
Ｌｃｎ２の直鎖状ポリペプチド配列における配列位置９６、１００、及び１０６に２つ又は３つの突然変異したアミノ酸残基を備えている突然変異タンパク質。
請求項４〜６のいずれか１項の突然変異タンパク質において、
ｈＬｃｎ２の直鎖状ポリペプチド配列における配列位置３６、４０、４１、４９、５２、６８、７０、７２、７３、７７、７９、８１、１０３、１２５、１２７、１３２及び１３４に対応する配列位置のいずれかで少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６又は１７の突然変異したアミノ酸残基をさらに備えている突然変異タンパク質。
請求項４〜７のいずれか１項の突然変異タンパク質において、
前記非天然標的はペプチド、タンパク質、タンパク質のフラグメント又はドメイン、及び有機小分子からなる群から選択される、又は前記ペプチドはアミロイドベータペプチドを含み、かつ、前記タンパク質はフィブロネクチン又はそのドメインを含む、突然変異タンパク質。
請求項４〜８のいずれか１項の突然変異タンパク質において、
成熟ｈＬｃｎ２の野生型アミノ酸配列について、Ｌｅｕ３６→Ｖａｌ又はＣｙｓ、Ａｌａ４０→Ｔｙｒ又はＬｙｓ又はＶａｌ、Ｉｌｅ４１→Ｔｈｒ又はＳｅｒ又はＬｅｕ、Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ又はＴｒｐ、Ｌｅｕ７０→Ｇｌｙ、Ａｒｇ７２→Ｇｌｙ又はＡｓｐ、Ｌｙｓ７３→Ｌｅｕ又はＴｈｒ又はＡｓｐ、Ａｓｐ７７→Ａｓｎ又はＨｉｓ又はＬｅｕ、Ｔｒｐ７９→Ｌｙｓ、Ａｓｎ９６→Ｉｌｅ又はＡｒｇ、Ｔｙｒ１００→Ｇｌｎ又はＡｒｇ又はＧｌｕ、Ｌｅｕ１０３→Ｍｅｔ又はＡｒｇ又はＧｌｙ、Ｔｙｒ１０６→Ｔｙｒ又はＡｌａ又はＴｒｐ、Ｌｙｓ１２５→Ｔｈｒ又はＶａｌ又はＧｌｕ、Ｓｅｒｌ２７→Ｇｌｙ又はＧ
ｌｎ又はＡｌａ、Ｔｙｒ１３２→Ｍｅｔ又はＳｅｒ又はＴｈｒ、及びＬｙｓ１３４→Ａｓｎからなる群から選択される、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸置換を含む突然変異タンパク質。
請求項８の突然変異タンパク質において、
配列番号３９（Ｓ１−Ａ４）又は配列番号４１（ＵＳ７）又は配列番号４３（Ｈ１−Ｇ１）の配列を有する突然変異タンパク質。
請求項４〜８のいずれか１項の突然変異タンパク質において、
成熟ｈＬｃｎ２の野生型アミノ酸配列について、Ｌｅｕ３６→Ｌｙｓ又はＧｌｕ又はＡｒｇ又はＡｌａ、Ａｌａ４０→Ｈｉｓ又はＭｅｔ又はＴｈｒ又はＳｅｒ、Ｉｌｅ４１→Ａｓｐ又はＡｒｇ又はＴｒｐ又はＬｅｕ、Ｇｌｎ４９→Ａｒｇ又はＡｌａ又はＴｙｒ、Ｌｅｕ７０→Ｌｅｕ又はＡｒｇ又はＭｅｔ、Ａｒｇ７２→Ｖａｌ又はＡｒｇ又はＧｌｎ又はＭｅｔ、Ｌｙｓ７３→Ｈｉｓ又はＡｒｇ又はＳｅｒ、Ａｓｐ７７→Ａｓｎ又はＨｉｓ又はＬｙｓ又はＡｒｇ、Ｔｒｐ７９→Ａｒｇ又はＭｅｔ又はＬｅｕ、Ａｓｎ９６→Ｌｙｓ又はＡｌａ又はＳｅｒ、Ｔｙｒ１００→Ｔｒｐ又はＰｒｏ又はＬｙｓ、Ｌｅｕ１０３→Ｈｉｓ又
はＰｒｏ、Ｔｙｒ１０６→Ｐｈｅ又はＴｒｐ又はＴｈｒ、Ｌｙｓ１２５→Ａｒｇ又はＨｉｓ又はＴｈｒ、Ｓｅｒ１２７→Ｔｈｒ又はＰｈｅ又はＡｌａ、Ｔｙｒ１３２→Ｌｅｕ又はＰｈｅ、Ｌｙｓ１３４→Ｇｌｕ又はＨｉｓ又はＧｌｙ又はＰｈｅ、及びＳｅｒ１４６→Ａｓｎからなる群から選択される、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２のアミノ酸置換を含む突然変異タンパク質。
請求項１１の突然変異タンパク質において、
配列番号２０（Ｎ７Ａ）又は配列番号２２（Ｎ７Ｅ）又は配列番号２４（Ｎ９Ｂ）又は配列番号２６（Ｎ１０Ｄ）の配列を有する突然変異タンパク質。
請求項４〜１２のいずれか１項の突然変異タンパク質において、
有機分子、酵素標識、放射性標識、呈色標識、蛍光標識、発色標識、発光標識、ハプテン、ジゴキシゲニン、ビオチン、細胞増殖抑制剤、毒素、金属錯体、金属及びコロイド金からなる群から選択される化合物に接合された突然変異タンパク質。
請求項４〜１３のいずれか１項の突然変異タンパク質において、
融合パートナーであるタンパク質、タンパク質ドメイン、又はペプチドに、そのＮ末端及び／又はそのＣ末端で融合された突然変異タンパク質。
請求項４〜１３のいずれか１項の突然変異タンパク質において、
血清半減期を延長する化合物に接合された突然変異タンパク質。
請求項４〜１６のいずれか１項の突然変異タンパク質において、
１μＭ若しくはそれ以下、１００μＭ若しくはそれ以下、１μＭ若しくはそれ以下、５００ｎＭ若しくはそれ以下、２００ｎＭ若しくはそれ以下、１００ｎＭ若しくはそれ以下、５０ｎＭ若しくはそれ以下、１０ｎＭ若しくはそれ以下、又は１ｎＭ若しくはそれ以下のＫＤ値で非天然標的に結合する突然変異タンパク質。
請求項４〜１６のいずれか１項の突然変異タンパク質をコードするヌクレオチド配列を備えている核酸分子。
請求項１７の核酸分子を含む宿主細胞。
請求項４〜１６のいずれか１項の突然変異タンパク質の産生方法であって、
前記突然変異タンパク質、前記突然変異タンパク質のフラグメント、又は前記突然変異タンパク質と他のポリペプチドとの融合タンパク質は、遺伝子工学的方法によって、前記突然変異タンパク質をコードする核酸から産生される方法。
請求項４〜１６のいずれか１項の少なくとも１つの突然変異タンパク質を含む医薬組成物。
所定の標的を結合して検出するための請求項４〜１６のいずれか１項の突然変異タンパク質の使用であって、
前記標的を含むと予想される試験サンプルに前記突然変異タンパク質を接合するステップ（ａ）と、
適切なシグナルによって前記突然変異タンパク質／標的複合体を検出するステップ（ｂ）とを備えている突然変異タンパク質の使用。
事前選択された部位を化合物が標的とするための請求項４〜１６のいずれか１項の突然変異タンパク質の使用であって、
前記化合物に前記突然変異タンパク質を接合するステップ（ａ）と、
前記事前選択された部位に前記突然変異タンパク質／化合物複合体を送達するステップ（ｂ）とを備えている突然変異タンパク質の使用。
医薬組成物の製造のための請求項４〜１６のいずれか１項の突然変異タンパク質の使用。
請求項２３の使用において、
前記医薬組成物は、神経変性疾患の治療、癌の治療、線維症の治療、神経変性疾患を含む疾患の治療、又は炎症の治療に用いられる突然変異タンパク質の使用。
請求項４〜１６のいずれか１項の突然変異タンパク質を含む診断又は分析キット。
請求項４〜１６のいずれか１項の突然変異タンパク質の有効量を非ヒト哺乳類に投与することを含む神経変性疾患、哺乳類の癌、線維症及び炎症からなる群から選択される疾患の治療方法。