JP2014502149A5 - - Google Patents

Claims (20)

1. ｈＮＧＡＬの突然変異タンパク質において、前記突然変異タンパク質は、ｈＮＧＡＬの直鎖状ポリペプチド配列（配列番号：２７）の配列位置３６、４０、４１、４９、５２、６８、７０、７２、７３、７７、７９、８１、９６、１００、１０３、１０６、１２５、１２７、１３２および１３４に対応する配列位置のいずれかの９またはそれ以上のアミノ酸置換を含むことで特徴づけられるとともに、グリピカン−３（ＧＰＣ３）を、表面プラズモン共鳴により測定された親和性であって約１０ｎＭまたはそれ未満のＫ_Ｄによる親和性で結合することが可能であることを特徴とする突然変異タンパク質。
2. 前記突然変異タンパク質は、前記ｈＮＧＡＬの直鎖状ポリペプチド配列に関し、Ｌｅｕ３６→Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ａｒｇ、ＭｅｔまたはＳｅｒ；Ａｌａ４０→Ｔｒｐ、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、ＧｌｙまたはＴｙｒ；Ｉｌｅ４１→Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ａｒｇ、ＧｌｎまたはＳｅｒ；Ｇｌｎ４９→Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、ＡｒｇまたはＴｒｐ；Ｔｙｒ５２→Ａｒｇ、Ｔｈｒ、Ｈｉｓ、ＳｅｒまたはＡｓｎ；Ｓｅｒ６８→Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ａｓｎ、ＡｌａまたはＬｙｓ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｇｌｎ、ＴｈｒまたはＰｈｅ；Ａｒｇ７２→Ａｓｐ、Ｔｒｐ、ＡｌａまたはＳｅｒ；Ｌｙｓ７３→Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｍｅｔ、ＬｅｕまたはＨｉｓ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、ＳｅｒまたはＴｙｒ；Ｔｒｐ７９→Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、ＳｅｒまたはＩｌｅ；Ａｒｇ８１→Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、ＴｙｒまたはＴｒｐ；Ａｓｎ９６→Ｖａｌ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、ＧｌｙまたはＰｈｅ；Ｔｙｒ１００→Ａｒｇ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、ＩｌｅまたはＡｓｎ；Ｌｅｕ１０３→Ｉｌｅ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、ＡｓｐまたはＴｒｐ；Ｔｙｒ１０６→Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、ＰｈｅまたはＬｅｕ；Ｌｙｓ１２５→Ｐｈｅ、Ｇｌｕ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、ＧｌｙまたはＴｒｐ；Ｓｅｒ１２７→Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、ＩｌｅまたはＡｓｐ；Ｔｙｒ１３２→Ｔｒｐ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、ＧｌｎまたはＶａｌ；Ｌｙｓ１３４→Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＩｌｅまたはＳｅｒ：で構成する群から選択された１またはそれ以上のアミノ酸置換を含むことを特徴とする請求項１に記載の突然変異タンパク質。
3. 前記突然変異タンパク質のアミノ酸配列は、前記ｈＮＧＡＬの直鎖状ポリペプチド配列に関し、
   （ａ）Ｌｅｕ３６→Ｉｌｅ；Ａｌａ４０→Ｔｒｐ；Ｇｌｎ４９→Ｐｒｏ；Ｔｙｒ５２→Ａｒｇ；Ｓｅｒ６８→Ａｒｇ；Ｌｅｕ７０→Ｐｈｅ；Ａｒｇ７２→Ａｓｐ；Ｌｙｓ７３→Ｇｌｕ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｙ；Ｔｒｐ７９→Ｇｌｙ；Ａｒｇ８１→Ａｌａ；Ａｓｎ９６→Ｖａｌ；Ｔｙｒ１００→Ａｒｇ；Ｌｅｕ１０３→Ｉｌｅ；Ｔｙｒ１０６→Ａｓｐ；Ｌｙｓ１２５→Ｐｈｅ；Ｓｅｒ１２７→Ｌｙｓ；Ｌｙｓ１３４→Ｇｌｙ；
   
   （ｂ）Ｌｅｕ３６→Ｖａｌ；Ｉｌｅ４１→Ｍｅｔ；Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ；Ｔｙｒ５２→Ａｒｇ；Ｓｅｒ６８→Ｇｌｙ；Ｌｅｕ７０→Ｓｅｒ；Ａｒｇ７２→Ｔｒｐ；Ｌｙｓ７３→Ａｒｇ；Ａｓｐ７７→Ｈｉｓ；Ｔｒｐ７９→Ｌｙｓ；Ａｒｇ８１→Ｇｌｙ；Ａｓｎ９６→Ａｓｐ；Ｔｙｒ１００→Ｇｌｙ；Ｌｅｕ１０３→Ｇｌｎ；Ｔｙｒ１０６→Ａｓｎ；Ｌｙｓ１２５→Ｇｌｕ；Ｓｅｒ１２７→Ａｒｇ；Ｔｙｒ１３２→Ｔｒｐ；Ｌｙｓ１３４→Ａｌａ；
   
   （ｃ）Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ａｌａ４０→Ｖａｌ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｇｌｎ４９→Ｐｒｏ；Ｔｙｒ５２→Ａｒｇ；Ｓｅｒ６８→Ａｓｎ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ａｒｇ７２→Ａｌａ；Ｌｙｓ７３→Ｍｅｔ；Ａｓｐ７７→Ｍｅｔ；Ｔｒｐ７９→Ｓｅｒ；Ａｒｇ８１→Ｇｌｙ；Ａｓｎ９６→Ｇｌｎ；Ｔｙｒ１００→Ｇｌｕ；Ｌｅｕ１０３→Ａｓｎ；Ｔｙｒ１０６→Ａｓｎ；Ｌｙｓ１２５→Ｇｌｕ；Ｓｅｒ１２７→Ｔｙｒ；Ｔｙｒ１３２→Ｉｌｅ；Ｌｙｓ１３４→Ｐｈｅ；
   
   （ｄ）Ｌｅｕ３６→Ｍｅｔ；Ｉｌｅ４１→Ａｒｇ；Ｇｌｎ４９→Ｖａｌ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ７３→Ｌｅｕ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｎ；Ｔｒｐ７９→Ｇｌｙ；Ａｒｇ８１→Ｔｈｒ；Ａｓｎ９６→Ａｓｐ；Ｔｙｒ１００→Ｉｌｅ；Ｔｙｒ１０６→Ｍｅｔ；Ｌｙｓ１２５→Ａｒｇ；Ｓｅｒ１２７→Ａｒｇ；Ｔｙｒ１３２→Ｐｈｅ；Ｌｙｓ１３４→Ａｓｐ；
   
   （ｅ）Ｌｅｕ３６→Ｓｅｒ；Ａｌａ４０→Ｈｉｓ；Ｉｌｅ４１→Ａｒｇ；Ｇｌｎ４９→Ａｒｇ；Ｔｙｒ５２→Ｈｉｓ；Ｓｅｒ６８→Ａｓｎ；Ｌｅｕ７０→Ｔｈｒ；Ｌｙｓ７３→Ｇｌｕ；Ａｓｐ７７→Ｈｉｓ；Ｔｒｐ７９→Ｓｅｒ；Ａｒｇ８１→Ｇｌｙ；Ａｓｎ９６→Ｌｙｓ；Ｔｙｒ１００→Ａｓｎ；Ｌｅｕ１０３→Ｍｅｔ；Ｔｙｒ１０６→Ｐｈｅ；Ｓｅｒ１２７→Ｈｉｓ；Ｔｙｒ１３２→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ａｓｎ；
   
   （ｆ）Ｌｅｕ３６→Ｉｌｅ；Ａｌａ４０→Ｇｌｙ；Ｉｌｅ４１→Ｇｌｎ；Ｇｌｎ４９→Ｔｒｐ；Ｔｙｒ５２→Ｓｅｒ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｌｙｓ７３→Ｌｅｕ；Ａｓｐ７７→Ｓｅｒ；Ａｒｇ８１→Ｔｙｒ；Ａｓｎ９６→Ｇｌｙ；Ｔｙｒ１００→Ａｓｎ；Ｌｅｕ１０３→Ａｓｐ；Ｔｙｒ１０６→Ａｓｎ；Ｌｙｓ１２５→Ｔｙｒ；Ｓｅｒ１２７→Ｉｌｅ；Ｔｙｒ１３２→Ｔｒｐ；Ｌｙｓ１３４→Ｉｌｅ；
   
   （ｇ）Ｌｅｕ３６→Ｍｅｔ；Ｉｌｅ４１→Ｓｅｒ；Ｇｌｎ４９→Ａｒｇ；Ｔｙｒ５２→Ａｓｎ；Ｓｅｒ６８→Ｌｙｓ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ａｒｇ７２→Ｔｒｐ；Ｌｙｓ７３→Ｈｉｓ；Ａｓｐ７７→Ｔｙｒ；Ｔｒｐ７９→Ｓｅｒ；Ａｒｇ８１→Ｔｈｒ；Ａｓｎ９６→Ａｓｐ；Ｌｅｕ１０３→Ｔｒｐ；Ｌｙｓ１２５→Ｇｌｙ；Ｓｅｒ１２７→Ａｒｇ；Ｔｙｒ１３２→Ｔｒｐ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；
   
   （ｈ）Ｌｅｕ３６→Ｉｌｅ；Ａｌａ４０→Ｔｙｒ；Ｇｌｎ４９→Ｐｒｏ；Ｔｙｒ５２→Ａｒｇ；Ｓｅｒ６８→Ａｒｇ；Ｌｅｕ７０→Ｐｈｅ；Ａｒｇ７２→Ｓｅｒ；Ｌｙｓ７３→Ａｒｇ；Ｔｒｐ７９→Ｉｌｅ；Ａｒｇ８１→Ｔｒｐ；Ａｓｎ９６→Ｐｈｅ；Ｔｙｒ１００→Ａｓｎ；Ｔｙｒ１０６→Ｌｅｕ；Ｌｙｓ１２５→Ｔｒｐ；Ｓｅｒ１２７→Ａｓｐ；Ｔｙｒ１３２→Ｖａｌ；Ｌｙｓ１３４→Ｇｌｙ；
   
   で構成する群から選択されたアミノ酸置換の１セットを含むことを特徴とする請求項１に記載の突然変異タンパク質。
4. 前記突然変異タンパク質は、ＥＬＩＳＡ競合アッセイにおける約１ｎＭまたはそれ未満のＩＣ _５０ 値でＧＰＣ３に結合するために競合することを特徴とする請求項１に記載の突然変異タンパク質。
5. 配列番号：１〜配列番号：８および配列番号：２７並びにｈＮＧＡＬで構成する群から選択されたアミノ酸配列に対して、７０％の同一性を有する請求項１に記載の突然変異タンパク質。
6. 配列番号：１〜配列番号：８および配列番号：２７で構成する群から選択されたアミノ酸配列を含む請求項１に記載の突然変異タンパク質。
7. 前記突然変異タンパク質は、有機分子、酵素ラベル、放射性ラベル、着色ラベル、蛍光ラベル、発色ラベル、発光ラベル、ハプテン、ジゴキシゲニン、ビオチン、細胞増殖抑制剤、毒素、金属複合体、金属およびコロイド金で構成する群から選択された化合物と結合していることを特徴とする請求項１に記載の突然変異タンパク質。
8. 前記突然変異タンパク質は、そのＮ末端および／またはＣ末端で、タンパク質、タンパク質ドメインまたはペプチドである融合パートナと融合していることを特徴とする請求項１に記載の突然変異タンパク質。
9. 前記突然変異タンパク質は、該突然変異タンパク質の血清半減期を延長する化合物と結合していることを特徴とする請求項１に記載の突然変異タンパク質。
10. 前記血清半減期を延長する化合物は、ポリアルキレングリコール分子、ヒドロエチルでんぷん、免疫グロブリンのＦｃ部位、免疫グロブリンのＣＨ３ドメイン、免疫グロブリンのＣＨ４ドメイン、アルブミン結合ペプチドおよびアルブミン結合タンパク質で構成する群から選択されることを特徴とする請求項９に記載の突然変異タンパク質。
11. 請求項１に記載の突然変異タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。
12. 前記核酸分子は、前記核酸分子の発現を許容するために、制御配列と作動可能に結合されていることを特徴とする請求項１１に記載の核酸分子。
13. 前記核酸分子は、ベクタまたはファージミドベクタに含まれることを特徴とする請求項１１に記載の核酸分子。
14. 請求項１１に記載の核酸分子を含むホスト細胞。
15. 請求項１に記載の突然変異タンパク質を生成する方法であって、前記突然変異タンパク質は、前記突然変異タンパク質をコードする核酸から開始し、遺伝子工学的手法を用いて生成されることを特徴とする方法。
16. 前記突然変異タンパク質は、細菌性または真核性のホスト有機体に生成され、前記ホスト有機体またはその培養から分離されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
17. 請求項１に記載の突然変異タンパク質および薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的組成物。
18. 請求項１に記載の突然変異タンパク質を含む診断用または分析用キット。
19. ＧＰＣ３の存在を検出する方法であって、
    （ａ）請求項１に記載の突然変異タンパク質を、ＧＰＣ３を含むと思われるテストサンプルと接触させ、それにより該突然変異タンパク質およびＧＰＣ３間の複合体の形成を許容し、
    （ｂ）前記突然変異タンパク質およびＧＰＣ３間の複合体を適切なシグナルにより検出する、
    ステップを含むことを特徴とする方法。
20. 腫瘍の治療用または診断用の薬剤の製造のための請求項１に記載の突然変異タンパク質またはその融合タンパク質の使用。