JP2012529913A5 - - Google Patents
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Description
LC−PUFA生合成の改良(LA % TFAの低下、EPA % TFAの増加及びΔ9エロンガーゼ変換効率の増加として計測される)は、複製プラスミド上のヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8406株に形質転換されたときのScLPAATS及びYlLPAATの双方について同程度であるため、双方のLPLAATとも宿主染色体に安定的に組み込まれた場合には同様に機能し得ると予想される。従って、ScLPAATSは、宿主染色体に安定的に組み込まれた場合、実施例9での観察と同様に脂質プロファイルを改良する可能性が高い。
本発明の例示的態様を以下に列挙する。
(1)(a)全脂肪酸の重量パーセントとして計測して少なくとも50重量パーセントのエイコサペンタエン酸、
を含む油であって、
(b)前記油は、全脂肪酸の重量パーセントとして計測したエイコサペンタエン酸の、全脂肪酸の重量パーセントとして計測したリノール酸に対する比が少なくとも3.1である、
油を産生する組換えヤロウイア・エスピー(Yarrowia sp.)宿主細胞。
(2)(a)少なくとも1つのΔ8デサチュラーゼに連結された少なくとも1つのΔ9エロンガーゼを有するポリペプチドを含む少なくとも1つのマルチザイムと、
(b)発現が下方制御された少なくとも1つのペルオキシソーム生合成因子タンパク質と、
(c)マロニルCoAシンテターゼ及びアシルCoAリゾリン脂質アシルトランスフェラーゼからなる群から選択される酵素をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列を含む少なくとも1つの組換えコンストラクトと、
を含む、(1)に記載の組換えヤロウイア・エスピー(Yarrowia sp.)宿主細胞。
(3)前記マロニルCoAシンテターゼが、配列番号40及び配列番号42からなる群から選択される配列から本質的になる、(2)に記載の組換え宿主細胞。
(4)前記アシルCoAリゾリン脂質アシルトランスフェラーゼが、配列番号15、配列番号17、配列番号25、配列番号29、配列番号31及び配列番号32からなる群から選択される配列から本質的になる、(2)に記載の組換え宿主細胞。
(5)前記マルチザイムリンカーが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6及び配列番号7からなる群から選択される、(2)に記載の組換え宿主細胞。
(6)前記マルチザイムが、配列番号9、配列番号11及び配列番号13からなる群から選択される配列から本質的になる、(2)に記載の組換え宿主細胞。
(7)エイコサペンタエン酸を含む微生物油の作製方法であって、
a)(1)〜(5)のいずれかに記載の宿主細胞を培養するステップであって、エイコサペンタエン酸を含む微生物油が産生されるステップと、
b)ステップ(a)の前記微生物油を回収してもよいステップと、
を含む方法。
(8)ステップ(b)の前記回収された油がさらに処理される、(7)に記載の方法。
(9)全脂肪酸の重量パーセントとして計測して少なくとも50重量パーセントのエイコサペンタエン酸を含む油を産生するための組換え宿主細胞であって、ATCC指定番号ATCC PTA−10025を有するヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8406;ATCC指定番号ATCC PTA−10026を有するヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8412;及びATCC指定番号ATCC PTA−10027を有するヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8259からなる群から選択される宿主細胞。
本発明の例示的態様を以下に列挙する。
(1)(a)全脂肪酸の重量パーセントとして計測して少なくとも50重量パーセントのエイコサペンタエン酸、
を含む油であって、
(b)前記油は、全脂肪酸の重量パーセントとして計測したエイコサペンタエン酸の、全脂肪酸の重量パーセントとして計測したリノール酸に対する比が少なくとも3.1である、
油を産生する組換えヤロウイア・エスピー(Yarrowia sp.)宿主細胞。
(2)(a)少なくとも1つのΔ8デサチュラーゼに連結された少なくとも1つのΔ9エロンガーゼを有するポリペプチドを含む少なくとも1つのマルチザイムと、
(b)発現が下方制御された少なくとも1つのペルオキシソーム生合成因子タンパク質と、
(c)マロニルCoAシンテターゼ及びアシルCoAリゾリン脂質アシルトランスフェラーゼからなる群から選択される酵素をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列を含む少なくとも1つの組換えコンストラクトと、
を含む、(1)に記載の組換えヤロウイア・エスピー(Yarrowia sp.)宿主細胞。
(3)前記マロニルCoAシンテターゼが、配列番号40及び配列番号42からなる群から選択される配列から本質的になる、(2)に記載の組換え宿主細胞。
(4)前記アシルCoAリゾリン脂質アシルトランスフェラーゼが、配列番号15、配列番号17、配列番号25、配列番号29、配列番号31及び配列番号32からなる群から選択される配列から本質的になる、(2)に記載の組換え宿主細胞。
(5)前記マルチザイムリンカーが、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6及び配列番号7からなる群から選択される、(2)に記載の組換え宿主細胞。
(6)前記マルチザイムが、配列番号9、配列番号11及び配列番号13からなる群から選択される配列から本質的になる、(2)に記載の組換え宿主細胞。
(7)エイコサペンタエン酸を含む微生物油の作製方法であって、
a)(1)〜(5)のいずれかに記載の宿主細胞を培養するステップであって、エイコサペンタエン酸を含む微生物油が産生されるステップと、
b)ステップ(a)の前記微生物油を回収してもよいステップと、
を含む方法。
(8)ステップ(b)の前記回収された油がさらに処理される、(7)に記載の方法。
(9)全脂肪酸の重量パーセントとして計測して少なくとも50重量パーセントのエイコサペンタエン酸を含む油を産生するための組換え宿主細胞であって、ATCC指定番号ATCC PTA−10025を有するヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8406;ATCC指定番号ATCC PTA−10026を有するヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8412;及びATCC指定番号ATCC PTA−10027を有するヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8259からなる群から選択される宿主細胞。
Claims (3)
- (a)全脂肪酸の重量パーセントとして計測して少なくとも50重量パーセントのエイコサペンタエン酸、
を含む油であって、
(b)前記油は、全脂肪酸の重量パーセントとして計測したエイコサペンタエン酸の、全脂肪酸の重量パーセントとして計測したリノール酸に対する比が少なくとも3.1である、
油を産生する組換えヤロウイア・エスピー(Yarrowia sp.)宿主細胞。 - エイコサペンタエン酸を含む微生物油の作製方法であって、
a)請求項1記載の宿主細胞を培養するステップであって、エイコサペンタエン酸を含む微生物油が産生されるステップと、
b)ステップ(a)の前記微生物油を回収してもよいステップと、
を含む方法。 - 全脂肪酸の重量パーセントとして計測して少なくとも50重量パーセントのエイコサペンタエン酸を含む油を産生するための組換え宿主細胞であって、ATCC指定番号ATCC PTA−10025を有するヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8406;ATCC指定番号ATCC PTA−10026を有するヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8412;及びATCC指定番号ATCC PTA−10027を有するヤロウイア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)Y8259からなる群から選択される宿主細胞。
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