JP2012502659A5 - - Google Patents
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Description
野生型ＲＤ５Ｓ（すなわちＲＤ５Ｓ−ＨＣＧＧおよびＲＤ５Ｓ−ＨＷＧＧ（配列番号１７９））の転換率以上に機能するこれらの変異の定量分析は、先にＥｇＤ５ＳおよびＥａＤ５Ｓ変異体について記載したように実施される。ＲＤ５Ｓ−ＨＣＧＧをコードする適切なヌクレオチド配列は配列番号１９４で記載され、ＲＤ５Ｓ−ＨＷＧＧをコードする適切なヌクレオチド配列は配列番号１９５で記載される。
本発明のいくつかの実施態様を以下に例示する。
（１） Δ５デサチュラーゼ活性を有して、配列番号１８３（ＨＧＧＧ）、配列番号１８４（ＨＨＧＧ）、配列番号１８６（ＨＣＧＧ）、配列番号１８７（ＨＷＧＧ）、および配列番号１８５（ＨＰＧＳ）からなる群から選択されるアミノ酸モチーフを含んでなる、変異ポリペプチド。
（２） 配列番号５８（ＥｇＤ５Ｓ−ＨＧＧＧおよびＥｇＤ５Ｓ−ＨＨＧＧ）、配列番号９７（ＥｇＤ５Ｓ−ＨＰＧＳ）、配列番号１３９（ＥａＤ５Ｓ−ＨＣＧＧ）、および配列番号１７９（ＲＤ５Ｓ−ＨＣＧＧおよびＲＤ５Ｓ−ＨＷＧＧ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、（１）に記載の変異ポリペプチド。
（３） 親ポリペプチドのジホモ−γ−リノレン酸からアラキドン酸への転換効率を超えるジホモ−γ−リノレン酸からアラキドン酸への転換効率を有する、（１）に記載の変異ポリペプチド。
（４） （１）に記載のポリペプチドを実質的にコードする、単離された核酸分子。
（５） 配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、および配列番号１９５からなる群から選択される、（４）に記載の単離された核酸。
（６） （１）に記載のポリペプチドを発現する微生物宿主細胞。
（７） 細菌、酵母、藻類、ユーグレナ属、ストラメノパイル、卵菌綱、および真菌からなる群から選択される（６）に記載の微生物宿主細胞。
（８） 微生物宿主細胞が油性酵母である、（７）に記載の微生物宿主細胞。
（９） 油性酵母が、ヤロウィア（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、ロドスポリジウム（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）、およびリポマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）からなる群から選択される、（８）に記載の微生物宿主細胞。
（１０） ジホモ−γ−リノレン酸の存在下で、（１）に記載のポリペプチドを発現する微生物宿主細胞を増殖させるステップを含んでなり、前記ジホモ−γ−リノレン酸がアラキドン酸に変換される、アラキドン酸を生成する方法。
（１１） エイコサテトラエン酸の存在下で（１）に記載のポリペプチドを発現する微生物宿主細胞を増殖させるステップを含んでなり、前記エイコサテトラエン酸がエイコサペンタエン酸に変換される、エイコサペンタエン酸を生成する方法。
（１２） 宿主細胞がω−６脂肪酸およびω−３脂肪酸からなる群から選択される多価不飽和脂肪酸を産生する、（６）に記載の微生物宿主細胞。
本発明のいくつかの実施態様を以下に例示する。
（１） Δ５デサチュラーゼ活性を有して、配列番号１８３（ＨＧＧＧ）、配列番号１８４（ＨＨＧＧ）、配列番号１８６（ＨＣＧＧ）、配列番号１８７（ＨＷＧＧ）、および配列番号１８５（ＨＰＧＳ）からなる群から選択されるアミノ酸モチーフを含んでなる、変異ポリペプチド。
（２） 配列番号５８（ＥｇＤ５Ｓ−ＨＧＧＧおよびＥｇＤ５Ｓ−ＨＨＧＧ）、配列番号９７（ＥｇＤ５Ｓ−ＨＰＧＳ）、配列番号１３９（ＥａＤ５Ｓ−ＨＣＧＧ）、および配列番号１７９（ＲＤ５Ｓ−ＨＣＧＧおよびＲＤ５Ｓ−ＨＷＧＧ）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、（１）に記載の変異ポリペプチド。
（３） 親ポリペプチドのジホモ−γ−リノレン酸からアラキドン酸への転換効率を超えるジホモ−γ−リノレン酸からアラキドン酸への転換効率を有する、（１）に記載の変異ポリペプチド。
（４） （１）に記載のポリペプチドを実質的にコードする、単離された核酸分子。
（５） 配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、および配列番号１９５からなる群から選択される、（４）に記載の単離された核酸。
（６） （１）に記載のポリペプチドを発現する微生物宿主細胞。
（７） 細菌、酵母、藻類、ユーグレナ属、ストラメノパイル、卵菌綱、および真菌からなる群から選択される（６）に記載の微生物宿主細胞。
（８） 微生物宿主細胞が油性酵母である、（７）に記載の微生物宿主細胞。
（９） 油性酵母が、ヤロウィア（Ｙａｒｒｏｗｉａ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、ロドトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）、ロドスポリジウム（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）、およびリポマイセス（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ）からなる群から選択される、（８）に記載の微生物宿主細胞。
（１０） ジホモ−γ−リノレン酸の存在下で、（１）に記載のポリペプチドを発現する微生物宿主細胞を増殖させるステップを含んでなり、前記ジホモ−γ−リノレン酸がアラキドン酸に変換される、アラキドン酸を生成する方法。
（１１） エイコサテトラエン酸の存在下で（１）に記載のポリペプチドを発現する微生物宿主細胞を増殖させるステップを含んでなり、前記エイコサテトラエン酸がエイコサペンタエン酸に変換される、エイコサペンタエン酸を生成する方法。
（１２） 宿主細胞がω−６脂肪酸およびω−３脂肪酸からなる群から選択される多価不飽和脂肪酸を産生する、（６）に記載の微生物宿主細胞。
Claims (5)
- Δ５デサチュラーゼ活性を有して、配列番号１８３（ＨＧＧＧ）、配列番号１８４（ＨＨＧＧ）、配列番号１８６（ＨＣＧＧ）、配列番号１８７（ＨＷＧＧ）、および配列番号１８５（ＨＰＧＳ）からなる群から選択されるアミノ酸モチーフを含んでなる、変異ポリペプチド。
- 請求項１に記載のポリペプチドを実質的にコードする、単離された核酸分子。
- 請求項１に記載のポリペプチドを発現する微生物宿主細胞。
- ジホモ−γ−リノレン酸の存在下で、請求項１に記載のポリペプチドを発現する微生物宿主細胞を増殖させるステップを含んでなり、前記ジホモ−γ−リノレン酸がアラキドン酸に変換される、アラキドン酸を生成する方法。
- エイコサテトラエン酸の存在下で請求項１に記載のポリペプチドを発現する微生物宿主細胞を増殖させるステップを含んでなり、前記エイコサテトラエン酸がエイコサペンタエン酸に変換される、エイコサペンタエン酸を生成する方法。
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