JP2013535988A5 - - Google Patents
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以上、本発明を要約すると下記のとおりである。
1.(a)配列番号34[HxGx]に記載のアミノ酸モチーフと、
(b)配列番号1[HxxxH]に記載のアミノ酸モチーフと
を含んでなり、配列番号34[HxGx]が配列番号7[HPGG]と同一でなく、配列番号1[HxxxH]が配列番号8[HDASH]と同一でない、Δ5デサチュラーゼ活性を有する変異ポリペプチド。
2.(a)前記アミノ酸モチーフ(a)が、配列番号9[HgGG]、配列番号10[HhGG]、配列番号11[HPGs]、配列番号12[HcGG]、配列番号13[HwGG]、および配列番号14[HaGG]からなる群から選択され;
(b)前記アミノ酸モチーフ(b)が、配列番号15[HDgSH]、配列番号16[HDsSH]、配列番号17[HDAaH]、配列番号18[HDAgH]、および配列番号19[HeASH]からなる群から選択される、上記1に記載の変異ポリペプチド。3.前記変異ポリペプチドが、配列番号21、配列番号25、および配列番号29からなる群から選択される配列を有するポリペプチドと比べて、BLASTPアラインメント法に基づいて、少なくとも90%の配列同一性を有する、上記2に記載の変異ポリペプチド。
4.配列番号139[EgD5R*−34g157g]、配列番号141[EgD5R*−34g158a]、配列番号143[EgD5R*−34g158g]、配列番号145[EgD5R*−34h158a]、配列番号147[EgD5R*−34h158g]、配列番号149[EgD5R*−36s158a]、配列番号151[EgD5R*−36s158g]、配列番号153[EgD5M、(コドン最適化EgD5R*−34g158g)]、配列番号157[EgD5M1、(コドン最適化EgD5R*−34g158g347s)]、配列番号181[EgD5S−36s156e]、配列番号183[EgD5S−36s157g]、配列番号185[EgD5S−36s158a]、配列番号187[EgD5S−36s158g]、配列番号213[EaD5S−35a158g]、配列番号215[EaD5S−35a158s]、配列番号217[EaD5S−35a159g]、配列番号255[EgD5R−34g158g]、配列番号260[EgD5R−34g158a]、配列番号271[EaD5−35g159g]、および配列番号276[EaD5−35g159a]からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、上記3に記載の変異ポリペプチド。
5.前記変異ポリペプチドが、親ポリペプチドのジホモ−γ−リノレン酸からアラキドン酸への変換効率の少なくとも64%のジホモ−γ−リノレン酸からアラキドン酸への変換効率を有し、前記親ポリペプチドが、配列番号7[HPGG]と同一のアミノ酸モチーフおよび配列番号8[HDASH]と同一のアミノ酸モチーフを含んでなる、上記1〜4のいずれかに記載の変異ポリペプチド。
6.上記1に記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸分子。
7.配列番号138[EgD5R*−34g157g]、配列番号140[EgD5R*−34g158a]、配列番号142[EgD5R*−34g158g]、配列番号144[EgD5R*−34h158a]、配列番号146[EgD5R*−34h158g]、配列番号148[EgD5R*−36s158a]、配列番号150[EgD5R*−36s158g]、配列番号152[EgD5M、(コドン最適化EgD5R*−34g158g)]、配列番号156[EgD5M1、(コドン最適化EgD5R*−34g158g347s)]、配列番号180[EgD5S−36s156e]、配列番号182[EgD5S−36s157g]、配列番号184[EgD5S−36s158a]、配列番号186[EgD5S−36s158g]、配列番号212[EaD5S−35a158g]、配列番号214[EaD5S−35a158s]、配列番号216[EaD5S−35a159g]、配列番号254[EgD5R−34g158g]、配列番号2
59[EgD5R−34g158a]、配列番号270[EaD5−35g159g]、および配列番号275[EaD5−35g159a]からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する、上記6に記載の単離核酸分子。
8.上記1に記載のポリペプチドを発現する、形質転換宿主細胞。
9.微生物および植物からなる群から選択される、上記8に記載の形質転換宿主細胞。
10.前記微生物宿主細胞が油性酵母である、上記9に記載の形質転換宿主細胞。
11.前記油性酵母がヤロウィア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)である、上記10に記載の形質転換宿主細胞。
12.前記細胞が、配列番号152、配列番号156、配列番号182、および配列番号212からなる群から選択される遺伝子を含んでなる、遺伝子コンストラクトを含んでなる、上記9に記載の形質転換宿主細胞。
13.前記細胞が、配列番号153、配列番号157、配列番号183、および配列番号213からなる群から選択される配列を有するタンパク質を発現する、上記9に記載の形質転換宿主細胞。
14.前記宿主細胞が、ω−6脂肪酸およびω−3脂肪酸からなる群から選択される多価不飽和脂肪酸を産生する、上記8または11に記載の形質転換宿主細胞。
15.前記植物宿主細胞が、油料種子植物細胞である、上記9に記載の形質転換宿主細胞。
1.(a)配列番号34[HxGx]に記載のアミノ酸モチーフと、
(b)配列番号1[HxxxH]に記載のアミノ酸モチーフと
を含んでなり、配列番号34[HxGx]が配列番号7[HPGG]と同一でなく、配列番号1[HxxxH]が配列番号8[HDASH]と同一でない、Δ5デサチュラーゼ活性を有する変異ポリペプチド。
2.(a)前記アミノ酸モチーフ(a)が、配列番号9[HgGG]、配列番号10[HhGG]、配列番号11[HPGs]、配列番号12[HcGG]、配列番号13[HwGG]、および配列番号14[HaGG]からなる群から選択され;
(b)前記アミノ酸モチーフ(b)が、配列番号15[HDgSH]、配列番号16[HDsSH]、配列番号17[HDAaH]、配列番号18[HDAgH]、および配列番号19[HeASH]からなる群から選択される、上記1に記載の変異ポリペプチド。3.前記変異ポリペプチドが、配列番号21、配列番号25、および配列番号29からなる群から選択される配列を有するポリペプチドと比べて、BLASTPアラインメント法に基づいて、少なくとも90%の配列同一性を有する、上記2に記載の変異ポリペプチド。
4.配列番号139[EgD5R*−34g157g]、配列番号141[EgD5R*−34g158a]、配列番号143[EgD5R*−34g158g]、配列番号145[EgD5R*−34h158a]、配列番号147[EgD5R*−34h158g]、配列番号149[EgD5R*−36s158a]、配列番号151[EgD5R*−36s158g]、配列番号153[EgD5M、(コドン最適化EgD5R*−34g158g)]、配列番号157[EgD5M1、(コドン最適化EgD5R*−34g158g347s)]、配列番号181[EgD5S−36s156e]、配列番号183[EgD5S−36s157g]、配列番号185[EgD5S−36s158a]、配列番号187[EgD5S−36s158g]、配列番号213[EaD5S−35a158g]、配列番号215[EaD5S−35a158s]、配列番号217[EaD5S−35a159g]、配列番号255[EgD5R−34g158g]、配列番号260[EgD5R−34g158a]、配列番号271[EaD5−35g159g]、および配列番号276[EaD5−35g159a]からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、上記3に記載の変異ポリペプチド。
5.前記変異ポリペプチドが、親ポリペプチドのジホモ−γ−リノレン酸からアラキドン酸への変換効率の少なくとも64%のジホモ−γ−リノレン酸からアラキドン酸への変換効率を有し、前記親ポリペプチドが、配列番号7[HPGG]と同一のアミノ酸モチーフおよび配列番号8[HDASH]と同一のアミノ酸モチーフを含んでなる、上記1〜4のいずれかに記載の変異ポリペプチド。
6.上記1に記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸分子。
7.配列番号138[EgD5R*−34g157g]、配列番号140[EgD5R*−34g158a]、配列番号142[EgD5R*−34g158g]、配列番号144[EgD5R*−34h158a]、配列番号146[EgD5R*−34h158g]、配列番号148[EgD5R*−36s158a]、配列番号150[EgD5R*−36s158g]、配列番号152[EgD5M、(コドン最適化EgD5R*−34g158g)]、配列番号156[EgD5M1、(コドン最適化EgD5R*−34g158g347s)]、配列番号180[EgD5S−36s156e]、配列番号182[EgD5S−36s157g]、配列番号184[EgD5S−36s158a]、配列番号186[EgD5S−36s158g]、配列番号212[EaD5S−35a158g]、配列番号214[EaD5S−35a158s]、配列番号216[EaD5S−35a159g]、配列番号254[EgD5R−34g158g]、配列番号2
59[EgD5R−34g158a]、配列番号270[EaD5−35g159g]、および配列番号275[EaD5−35g159a]からなる群から選択されるヌクレオチド配列を有する、上記6に記載の単離核酸分子。
8.上記1に記載のポリペプチドを発現する、形質転換宿主細胞。
9.微生物および植物からなる群から選択される、上記8に記載の形質転換宿主細胞。
10.前記微生物宿主細胞が油性酵母である、上記9に記載の形質転換宿主細胞。
11.前記油性酵母がヤロウィア・リポリティカ(Yarrowia lipolytica)である、上記10に記載の形質転換宿主細胞。
12.前記細胞が、配列番号152、配列番号156、配列番号182、および配列番号212からなる群から選択される遺伝子を含んでなる、遺伝子コンストラクトを含んでなる、上記9に記載の形質転換宿主細胞。
13.前記細胞が、配列番号153、配列番号157、配列番号183、および配列番号213からなる群から選択される配列を有するタンパク質を発現する、上記9に記載の形質転換宿主細胞。
14.前記宿主細胞が、ω−6脂肪酸およびω−3脂肪酸からなる群から選択される多価不飽和脂肪酸を産生する、上記8または11に記載の形質転換宿主細胞。
15.前記植物宿主細胞が、油料種子植物細胞である、上記9に記載の形質転換宿主細胞。
Claims (3)
- (a)配列番号34[HxGx]に記載のアミノ酸モチーフと、
(b)配列番号1[HxxxH]に記載のアミノ酸モチーフと
を含んでなり、配列番号34[HxGx]が配列番号7[HPGG]と同一でなく、配列番号1[HxxxH]が配列番号8[HDASH]と同一でない、Δ5デサチュラーゼ活性を有する変異ポリペプチド。 - 請求項1に記載のポリペプチドをコードする、単離された核酸分子。
- 請求項1に記載のポリペプチドを発現する、形質転換宿主細胞。
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