JP2012031077A - 抗肥満剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】抗肥満剤の有効成分として、発芽期のイネ科植物、好ましくは発芽期のライ麦または小麦の抽出物、好ましくは、20〜28℃未満の発芽条件において発芽させる場合に、未発芽種子に吸水させてから12〜144時間経過したもの、または、12〜20℃未満の発芽条件において発芽させる場合に、未発芽種子に吸水させてから18〜192時間経過した発芽物の抽出物、或いは前記発芽物の芽の長さが、1mm以上180mm以下である発芽物の抽出物を用いる。
【選択図】なし
Description
(1)前記発芽期のイネ科植物は、20〜28℃未満の発芽条件において発芽させる場合に、未発芽種子に吸水させてから12〜144時間経過したもの、または、12〜20℃未満の発芽条件において発芽させる場合に、未発芽種子に吸水させてから18〜192時間経過したものである。
(2)前記発芽期のイネ科植物は、芽の長さが1mm以上180mm以下のものである。
(3)前記イネ科植物が、ライ麦または小麦である。
(4)前記抽出物が、前記発芽期のイネ科植物の乳酸菌発酵物または酵母発酵物の抽出物である。
(5)前記抽出物が、エタノール抽出物である。
したがって、前記発芽条件Aにおいて、未発芽種子に吸水させてから6〜192時間経過したもの、または、前記発芽条件Bにおいて、未発芽種子に吸水させてから6〜240時間経過したものであれば、抗肥満効果が高く、しかも用量と活性に相関性があって効果が実感しやすい抗肥満剤が得られる。
通常、種子が発芽するまで、即ち、発芽の状態が確認されるまでの期間は、周囲の環境や条件、種子の状態によって異なるものであるが、本発明における発芽期のイネ科植物には、種子の発芽が確認されてから実際に芽が伸長していく状態にあるものだけでなく、前記発芽条件Aにおいて、未発芽種子に吸水させてから6時間以上経過したもの、または前記発芽条件Bにおいて、未発芽種子に吸水させてから6時間以上経過したものであれば、実際に芽が伸長する前の状態のものも含まれる。
また、イネ科植物は、発芽処理に際しては、水洗して夾雑物を除去し、次亜塩素酸ナトリウム水溶液などで滅菌しておくことが好ましい。
、チゴサッカロマイセス・ルキシ(Zygosaccharomyces rouxii)、クリベロマイセス・ラクチス(Kluyveromyces lactis)などが挙げられる。これらは単独で用いてもよいし、2種以上を組み合わせて用いてもよい。
1.試料
使用した試料は下記の通りである。
小麦:ホクシン(未発芽)
ライ麦:ドイツ産ライ麦(未発芽)およびライモルト(発芽ライ麦市販品:Briess Industries製;芽の長さ1mm)
乳酸菌1:菌種ID「AYA」(FERM P21106)、種名「Lactobacillus plantarum」、入手先「オリエンタル酵母工業(株)」
乳酸菌2:菌種ID「L−010」(FERM P21534)、種名「Lactobacillus plantarum」、入手先「オリエンタル酵母工業(株)」
乳酸菌3:商品名「アクティブサワーR」(乳酸菌製剤:オリエンタル酵母工業(株))
酵母:菌種ID「P−544」、種名「Saccharomyces cerevisiae」、入手先「オリエンタル酵母工業(株)」
前記小麦粒またはライ麦粒50gを、1%次亜塩素酸ナトリウムおよび0.1%「TritonX−100」(商品名:非イオン性界面活性剤:GEヘルスケア ジャパン(株)製)水溶液300mLに10分間浸漬した後、水300mLで5回洗浄した。洗浄後の小麦粒またはライ麦粒を10gずつ9cm径のシャーレに入れ、水30mLを加えて(吸水開始)、4℃で一昼夜静置した後、15℃(前記発芽条件A)または25℃(前記発芽条件B)で数日間静置して発芽させた。吸水開始から24時間ごとに芽の長さを測定した。測定は、無作為に10本の発芽物を採取し、1mm刻みで測定し、平均値とした。
GYP培地で、前培養した菌体適当量を、20%(w/v)の前記ライモルト粉砕物(100μmスルー)の水懸濁液に添加して、30℃、24時間、120rpmで振とう培養して発酵処理を行うことにより乳酸菌発酵物を得た。
YPD培地およびYMPD培地で前培養した酵母適当量を、20%(w/v)の前記ライモルト粉砕物の水懸濁液に添加して、30℃、6時間または24時間、120rpmで振とう培養して発酵処理を行うことにより酵母発酵物を得た。
前記の小麦およびライ麦の未発芽物、小麦およびライ麦の発芽物、ならびにライモルトの乳酸菌および酵母発酵物を凍結乾燥して(ただし、前記未発芽物および発芽物は、マルチビーズショッカー(多検体細胞破砕機/MB301(S):安井器械株式会社製)で粉砕した後)、各試料に5倍量のエタノールを添加して、150rpm、室温の条件で、2時間振とう抽出した。次いで、3500rpm、室温の条件で、15分間遠心分離して、上清を遠心濃縮機で乾燥した。得られた濃縮物の重量を測定して、100mg/mLとなるようにエタノールに溶解して、各試料のエタノール抽出物を得た。得られた各試料について、下記の方法により、脂肪細胞分化抑制性および脂肪蓄積抑制性を評価した。
マウス前駆脂肪細胞3T3−L1を、10% fetal bovine serum(FBS)、10U/mL penicillin、10μg/mL streptomycinを含むダルベッコ変法イーグル培地(グルコース4.5g/L、DMEM、Sigma-Aldrich社製)に、4×104cells/mLの密度で浮遊させ、24ウェルプレートに1mLずつ播種した。次いで、5%CO2存在下、37℃で、3日間の培養後、コンフルエントになったことを顕微鏡下で確認してから、脂肪細胞への分化を誘導するため、培地を10μg/mLインスリン(ヒト由来)、250nMデキサメタゾン、500μM 3−イソブチル−1−メチルキサンチンを含む10%FBS−DMEM(分化誘導培地)に置換し、分化誘導2日後、培地を10μg/mLインスリンを含む10%FBS−DMEM(維持培地)に置換して、さらに、5日または6日間培養した。各試料のエタノール抽出物は分化誘導培地および維持培地に添加して培養した。各培養細胞の脂肪細胞分化抑制作用を顕微鏡下で観察し、また細胞内の脂肪蓄積抑制性を、下記トリグリセライド量の測定によって評価した。なお、陽性対照として塩化ベルベリン(Sigma-Aldrich社製)を用いた。結果は、無添加におけるトリグリセライド産生量を100とした%で表す。トリグリセライド量の結果は、〔表1−1〕、〔表1−2〕、〔表2〕、〔表3〕及び〔表4〕と、〔図1−1〕、〔図1−2〕、〔図2〕、〔図3〕及び〔図4〕に示す。尚、表及び図の番号は、それぞれ同一の評価結果に対応している。また、3T3−L1細胞における分化抑制作用の観察結果を、〔図5〕に示す。
上記培養後の3T3−L1細胞をPBS(−)500μL/wellで2回洗浄した後、2−プロパノール300μLを加えて、80rpmで、20分間振とうして細胞内のトリグリセライドを抽出した。抽出したトリグリセライド量を、トリグリセライドE−テストワコー(和光純薬工業製)を用いて定量を行った。
〔表1−2〕及び〔図1−2〕の結果から、ライ麦の発芽物の代わりに、小麦の発芽物を用いても同様の効果が得られることが確認された。
〔表2〕及び〔図2〕の結果から、発芽温度を25℃とした場合(前記発芽条件B)でも、発芽処理を行ったライ麦では、時間の経過と共に、脂肪蓄積抑制作用を増大させることが確認された。また、細胞に添加する試料の濃度を減少させると、脂肪蓄積抑制作用は、発芽開始から144時間、すなわち6日後に最大値を示し、以降は作用が減少することが確認された。
〔表3〕及び〔図3〕の結果から、ライモルト(ライ麦の発芽物)の脂肪蓄積抑制作用が用量依存的であること、また、その作用は塩化ベルベリンと同様に非常に強力なものであることが確認された。
〔表4〕及び〔図4〕の結果から、ライモルト(ライ麦の発芽物)は、乳酸菌または酵母により発酵させることで、脂肪蓄積抑制作用が強化され、より少ない添加量で脂肪蓄積抑制作用を示すことが確認された。
また、脂肪細胞分化抑制作用および脂肪蓄積抑制作用は、発芽の段階が進むにつれて増強される。
また、脂肪細胞分化抑制作用および脂肪蓄積抑制作用は、乳酸菌または酵母による発酵によっても増強される。
Claims (7)
- 発芽期のイネ科植物の抽出物を有効成分として含有する抗肥満剤。
- 前記発芽期のイネ科植物は、20〜28℃未満の発芽条件において発芽させる場合に、未発芽種子に吸水させてから12〜144時間経過したもの、または、12〜20℃未満の発芽条件において発芽させる場合に、未発芽種子に吸水させてから18〜192時間経過したものである請求項1記載の抗肥満剤。
- 前記発芽期のイネ科植物は、芽の長さが1mm以上180mm以下のものである請求項1または2記載の抗肥満剤。
- 前記イネ科植物が、ライ麦または小麦である請求項1〜3のいずれか1項に記載の抗肥満剤。
- 前記抽出物が、前記発芽期のイネ科植物の乳酸菌発酵物または酵母発酵物の抽出物である請求項1〜4のいずれか1項に記載の抗肥満剤。
- 前記抽出物が、エタノール抽出物である請求項1〜5のいずれか1項に記載の抗肥満剤。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載の抗肥満剤を含有する飲食品または動物用飼料。
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