JP2011236237A - 回収可能な形式での安定なタンパク質保管および安定な核酸保管 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ペプチド、および溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を含む組成物であって、該組成物は実質的に水分を含まず、該ペプチドは、該多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収され、該吸収されたペプチドは、吸収されないペプチドに比べて分解に耐性であり、該吸収されたペプチドの少なくとも一部は、該多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から回収可能である、組成物。
【選択図】なし
Description
本出願は、2004年5月24日米国特許出願第60/574,274号に対する優先権を主張する。なお、この出願の全体を引用することにより本出願に含める。
タンパクおよび核酸は、その起源、構造、および環境を踏まえて極めて多様な安定性を有することが知られる。あるタンパクは劣悪な環境でも極めて安定であり、例えば、消化酵素、または深海の噴気孔に生育する生物に認められる熱安定性タンパクがそれである。また別のあるもの、例えば、細胞膜タンパクは、溶液においては分単位で測定される半減期を有することがある。多くのタンパクは、中間の安定度を有するので、長期の安定性を維持するためには冷凍保管を必要とする。
本発明は、少なくとも一部は、回収可能な形で生体分子(例えば、ペプチドまたは核酸を単独、または組み合わせて)を保管可能にする組成物に基づく。本明細書に記載する通りに保管される生体分子(例えば、ペプチドまたは核酸)は、数日、数週、数ヶ月、およびそれよりさらに長い期間、例えば、数年に渡って保管することが可能である。生体分子(例えば、ペプチドまたは核酸)は、周囲温度度において、すなわち、冷凍または冷蔵を要することなく保管することが可能である。本発明はまた、少なくとも一部は、分解に耐性を示す形式で存在する保管生体分子(例えば、ペプチドまたは核酸)にも基づく、すなわち、この保管生体分子(例えば、ペプチドまたは核酸)は保管中維持される。生体分子は、その後の分析または応用のために生体分子の回収を可能にする保管形式において保管される。例えば、保管ペプチドは、数日、数週、数ヶ月、または数年の保管後に回収し、その後で分析することが可能である。保管ペプチドを90日間50°Cに加熱しても実質的に変性を生ずることはなかった。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
(項目1)
ペプチド、および溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を含む組成物であって、該組成物は実質的に水分を含まず、該ペプチドは、該多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収され、該吸収されたペプチドは、吸収されないペプチドに比べて分解に耐性であり、該吸収されたペプチドの少なくとも一部は、該多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から回収可能である、組成物。
(項目2)
前記分解に対する耐性は、ある一定期間にわたり、等量の非吸収されたペプチドと比較して、ペプチドの50〜75%未満、ペプチドの33〜50%未満、ペプチドの25〜33%未満、ペプチドの10〜25%未満、またはペプチドの5〜15%未満の損失を含む、項目1に記載の組成物。
(項目3)
前記分解に対する耐性は、ある一定期間にわたり、等量の非吸収されたペプチドと比較して、ペプチドの33〜50%、ペプチドの50〜75%、ペプチドの75〜90%、またはペプチドの90〜95%以上の保存を含む、項目1に記載の組成物。
(項目4)
前記分解に対する耐性は、ペプチドまたはペプチドの断片の量を定量することによって評価される、項目1に記載の組成物。
(項目5)
前記分解は、ペプチドまたはペプチドの断片のサイズ分別および相対量の定量によって評価される、項目1に記載の組成物。
(項目6)
前記分解は、ペプチドの断片化の直接的または間接的定量によって評価される、項目1に記載の組成物。
(項目7)
前記分解は、ペプチドのリン酸化またはプレニル化の量によって評価される、項目1に記載の組成物。
(項目8)
前記ペプチドは、5〜10日間、10〜20日間、20〜30日間、30〜50日間、50〜90日間、50〜150日間、150〜365日間、または何週間も分解に耐性である、項目1に記載の組成物。
(項目9)
前記ペプチドは、1年間、2年間、3年間、4年間、5年間、6年間、7年間、8年間、9年間、10年間、またはそれ以上の間分解に耐性である、項目1に記載の組成物。
(項目10)
前記ペプチドは、周囲温度において5〜10日間、10〜20日間、20〜30日間、30〜50日間、50〜90日間、50〜150日間、150〜365日間、または何週間も分解に耐性である、項目1に記載の組成物。
(項目11)
前記ペプチドは、−20℃、4℃、4〜10℃、10〜20℃、20〜30℃、30〜40℃、40〜50℃、50〜60℃、60〜70℃、または70〜80℃において、5〜10日間、10〜20日間、20〜30日間、30〜50日間、50〜90日間、50〜150日間、150〜365日間または何週間も分解に耐性である、項目1に記載の組成物。
(項目12)
前記基質に吸収される核酸をさらに含む、項目1に記載の組成物。
(項目13)
前記核酸は前記基質から回収可能である、項目12に記載の組成物。
(項目14)
前記核酸は、基質に吸収されない参照核酸と比較して、分解に対して耐性を示す、項目12に記載の組成物。
(項目15)
前記分解に対する耐性は、ある一定期間にわたり、等量の非吸収された核酸と比較して、核酸の50〜75%未満、核酸の33〜50%未満、核酸の25〜33%未満、核酸の10〜25%未満、または核酸の5〜15%未満の損失を含む、項目14に記載の組成物。
(項目16)
前記分解に対する耐性は、ある一定期間にわたり、等量の非吸収された核酸と比較して、核酸の33〜50%、核酸の50〜75%、核酸の75〜90%、または核酸の90〜95%以上の保存を含む、項目14に記載の組成物。
(項目17)
前記分解に対する耐性は、前記核酸または核酸の断片の量を定量することによって評価される、項目14に記載の組成物。
(項目18)
前記分解は、存在する前記核酸または核酸の断片のサイズ分別および相対量の定量によって評価される、項目14に記載の組成物。
(項目19)
前記分解は、前記核酸の断片化の定量によって評価される、項目14に記載の組成物。
(項目20)
前記核酸は、5〜10日間、10〜20日間、20〜30日間、30〜50日間、50〜90日間、50〜150日間、150〜365日間、または何週間も分解に耐性である、項目14に記載の組成物。
(項目21)
前記核酸は、1年間、2年間、3年間、4年間、5年間、6年間、7年間、8年間、9年間、10年間、またはそれ以上の間分解に耐性である、項目14に記載の組成物。
(項目22)
前記核酸は、周囲温度において5〜10日間、10〜20日間、20〜30日間、30〜50日間、50〜90日間、50〜150日間、150〜365日間、または数週間分解に耐性である、項目14に記載の組成物。
(項目23)
前記ペプチドは、−20℃、4℃、4〜10℃、10〜20℃、20〜30℃、30〜40℃、40〜50℃、50〜60℃、60〜70℃、または70〜80℃において、5〜10日間、10〜20日間、20〜30日間、30〜50日間、50〜90日間、50〜150日間、150〜365日間または何週間も分解に耐性である、項目14に記載の組成物。
(項目24)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、疎水性生体適合性材料を含む、項目1に記載の組成物。
(項目25)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、合成ポリマーまたは天然ポリマーを含む、項目1に記載の組成物。
(項目26)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、セルロース、ポリエステル、またはポリウレタンを含む、項目1に記載の組成物。
(項目27)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、非圧縮状態の容量の1/2、1/5、1/10、1/25、1/50、または1/100に圧縮可能な材料、または非圧縮状態の容量の2倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍に拡張可能な材料を含む、項目1に記載の組成物。
(項目28)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、開放気泡フォーム、独立気泡フォーム、またはそれらの組み合わせを含む、項目1に記載の組成物。
(項目29)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、1/3〜10ポンド/フィート 3 の密度を有する、項目1に記載の組成物。
(項目30)
前記溶出可能なエラストマー基質に流体を適用することによって、ペプチドまたは核酸の少なくとも30〜50%、50〜65%、65〜80%、80〜90%、またはそれ以上が、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から溶出または回収される、項目1または12に記載の組成物。
(項目31)
前記流体は水性液体を含む、項目30に記載の組成物。
(項目32)
前記水性液体は水を含む、項目31に記載の組成物。
(項目33)
前記水性液体は5.0〜9.0の範囲内のpHを有する、項目31に記載の組成物。
(項目34)
前記水性液体のpHは安定化される、項目31に記載の組成物。
(項目35)
前記水性液体のpHは両性イオンによって安定化される、項目31に記載の組成物。
(項目36)
前記水性液体のpHは、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン塩酸塩(TRIS)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−2−エタンスルホン酸(HEPES)、3−(N−モルホリノ)プロパンスルホン酸(MOPS)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、N−トリス[ヒドロキシメチル]メチル−2−アミノエタンスルホン酸(TES)、N−[カルボキシメチル]−2−アミノエタンスルホン酸(ACES)、N−[2−アセトアミド]−2−イミノ二酢酸(ADA)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、N−[2−ヒドロキシエチル]ピペラジン−N’−[2−ヒドロキシプロパンスルホン酸](HEPPSO)、N−トリス[ヒドロキシメチル]メチルグリシン(TRICINE)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]グリシン(BICINE)、4−(シクロヘキシルアミノ)−1−ブタンスルホン酸(CABS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、3−(シクロヘキシルアミノ−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(3−プロパンスルホン酸)(EPPS)、ピペラジン−N,N’−ビス(2−エタンスルホン酸(PIPES)、[(2−ヒドロキシ−1,1−ビス[ヒドロキシメチル]エチル)アミノ]−1−プロパンスルホン酸(TAPS)、2−アミノ−2−メチル−1−プロパノール(AMP)、3−[(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、エタノールアミン、または3−アミノ−1−プロパンスルホン酸によって安定化される、項目31に記載の組成物。
(項目37)
前記水性液体は、pH10〜12、pH11〜12、pH11.3〜11.8、またはpH11.4〜11.7の範囲内のpH、あるいは約11.4、11.5、11.6、11.7、または11.8のpHを有するアルカリ性溶液を含む、項目31に記載の組成物。
(項目38)
前記ペプチド、核酸、および溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質を含む組成物であって、該組成物は実質的に水分を含まず、該ペプチドおよび該核酸は、該基質に吸収され、該吸収されたペプチドまたは該吸収された核酸は、吸収されないペプチドまたは吸収されない核酸に比べて分解に耐性であり、該吸収されたペプチドまたは該吸収された核酸の少なくとも一部は、該溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質から回収可能である、組成物。
(項目39)
前記分解に対する耐性は、ある一定期間にわたり、非吸収されたペプチドまたは等量の非吸収された核酸と比較して、ペプチドまたは核酸の50〜75%未満、ペプチドまたは核酸の33〜50%未満、ペプチドまたは核酸の25〜33%未満、ペプチドまたは核酸の10〜25%未満、またはペプチドまたは核酸の5〜15%未満の損失を含む、項目38に記載の組成物。
(項目40)
前記分解に対する耐性は、ある一定期間にわたり、非吸収されたペプチドまたは等量の非吸収された核酸と比較して、ペプチドまたは核酸の33〜50%、ペプチドまたは核酸の50〜75%、ペプチドまたは核酸の75〜90%、またはペプチドまたは核酸の90〜95%以上の保存を含む、項目38に記載の組成物。
(項目41)
前記分解に対する耐性は、ペプチドまたは核酸、あるいはペプチドまたは核酸の断片の量を定量することによって評価される、項目38に記載の組成物。
(項目42)
前記分解は、ペプチドまたは核酸、あるいはペプチドまたは核酸の断片のサイズ分別および相対量の定量によって評価される、項目38に記載の組成物。
(項目43)
前記分解は、ペプチドまたは核酸の断片化の定量によって評価される、項目38に記載の組成物。
(項目44)
前記分解は、ペプチドのリン酸化またはプレニル化の量によって評価される、項目38に記載の組成物。
(項目45)
前記ペプチドまたは核酸は、5〜10日間、10〜20日間、20〜30日間、30〜50日間、50〜90日間、50〜150日間、150〜365日間、または何週間も分解に耐性である、項目38に記載の組成物。
(項目46)
前記ペプチドまたは核酸は、1年間、2年間、3年間、4年間、5年間、6年間、7年間、8年間、9年間、10年間、またはそれ以上の間分解に耐性である、項目38に記載の組成物。
(項目47)
前記ペプチドまたは核酸は、周囲温度において5〜10日間、10〜20日間、20〜30日間、30〜50日間、50〜90日間、50〜150日間、150〜365日間、または何週間も分解に耐性である、項目38に記載の組成物。
(項目48)
前記ペプチドまたは核酸は、−20℃、4℃、4〜10℃、10〜20℃、20〜30℃、30〜40℃、40〜50℃、50〜60℃、60〜70℃、または70〜80℃において、5〜10日間、10〜20日間、20〜30日間、30〜50日間、50〜90日間、50〜150日間、150〜365日間または数週間も分解に耐性である、項目38に記載の組成物。
(項目49)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質は、セルロース、ポリエステル、またはポリウレタンを含む、項目38に記載の組成物。
(項目50)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質は、FTA(登録商標)、ラグペーパー、またはIsocode(登録商標)を含む、項目38に記載の組成物。
(項目51)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質は、多価化合物によって処理されていない、項目49または50に記載の組成物。
(項目52)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質は、実質的に多価化合物を含まない、項目49または50に記載の組成物。
(項目53)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質は、全質量の約0.25%(重量/重量)未満の量の多価化合物を有する、項目49または50に記載の組成物。
(項目54)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質は、実質的にガラスまたはガラス繊維を含まない、項目38に記載の組成物。
(項目55)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質は、エラストマー系である、項目38に記載の組成物。
(項目56)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、親水性生体適合性材料である、項目55に記載の組成物。
(項目57)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、合成ポリマーまたは天然ポリマーを含む、項目55に記載の組成物。
(項目58)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、セルロース、ポリエステル、またはポリウレタンを含む、項目55に記載の組成物。
(項目59)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、非圧縮状態の容量の1/2、1/5、1/10、1/25、1/50、または1/100に圧縮可能な材料、または非圧縮状態の容量の2倍、5倍、10倍、25倍、50倍、または100倍に拡張可能な材料を含む、項目55に記載の組成物。
(項目60)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、開放気泡フォーム、独立気泡フォーム、またはそれらの組み合わせを含む、項目55に記載の組成物。
(項目61)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、1/3〜10ポンド/フィート 3 の密度を有する、項目55に記載の組成物。
(項目62)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質に流体を適用することによって、前記吸収されたペプチドまたは前記吸収された核酸の少なくとも5〜10%、10〜25%、25〜50%、50〜65%、65〜80%、80〜90%、またはそれ以上が、溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質から溶出または回収される、項目38に記載の組成物。
(項目63)
前記流体は水性液体を含む、項目62に記載の組成物。
(項目64)
前記水性液体は水を含む、項目63に記載の組成物。
(項目65)
前記水性液体は5.0〜9.0の範囲内のpHを有する、項目63に記載の組成物。
(項目66)
前記水性液体のpHは安定化される、項目63に記載の組成物。
(項目67)
前記水性液体のpHは両性イオンによって安定化される、項目63に記載の組成物。
(項目68)
前記水性液体のpHは、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン塩酸塩(TRIS)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−2−エタンスルホン酸(HEPES)、3−(N−モルホリノ)プロパンスルホン酸(MOPS)、2−(N−モルホリノ)エタンスルホン酸(MES)、N−トリス[ヒドロキシメチル]メチル−2−アミノエタンスルホン酸(TES)、N−[カルボキシメチル]−2−アミノエタンスルホン酸(ACES)、N−[2−アセトアミド]−2−イミノ二酢酸(ADA)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]−2−アミノエタンスルホン酸(BES)、N−[2−ヒドロキシエチル]ピペラジン−N’−[2−ヒドロキシプロパンスルホン酸](HEPPSO)、N−トリス[ヒドロキシメチル]メチルグリシン(TRICINE)、N,N−ビス[2−ヒドロキシエチル]グリシン(BICINE)、4−(シクロヘキシルアミノ)−1−ブタンスルホン酸(CABS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、3−(シクロヘキシルアミノ−2−ヒドロキシ−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、2−(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸(CHES)、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン−N’−(3−プロパンスルホン酸)(EPPS)、ピペラジン−N,N’−ビス(2−エタンスルホン酸(PIPES)、[(2−ヒドロキシ−1,1−ビス[ヒドロキシメチル]エチル)アミノ]−1−プロパンスルホン酸(TAPS)、2−アミノ−2−メチル−1−プロパノール(AMP)、3−[(1,1−ジメチル−2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(AMPSO)、エタノールアミン、または3−アミノ−1−プロパンスルホン酸によって安定化される、項目63に記載の組成物。
(項目69)
前記水性液体は、pH10〜12、pH11〜12、pH11.3〜11.8、またはpH11.4〜11.7の範囲内のpH、あるいは約11.4、11.5、11.6、11.7、または11.8のpHを有するアルカリ性溶液を含む、項目63に記載の組成物。
(項目70)
さらに低水分吸収性糖類を含む、項目38に記載の組成物。
(項目71)
前記低水分吸収性糖類は非還元糖を含む、項目70に記載の組成物。
(項目72)
前記非還元糖は、トレハロース、トレハロースアナログ、またはトレハロース誘導体を含む、項目71に記載の組成物。
(項目73)
前記トレハロースアナログは6−アジド−6−デオキシトレハロースを含み、前記トレハロース誘導体はトレハロース−6−リン酸を含む、項目72に記載の組成物。
(項目74)
前記低水分吸収性糖類は、マロデキストリン、単糖類、または二糖類を含む、項目70に記載の組成物。
(項目75)
前記単糖類はフコースを含む、項目74に記載の組成物。
(項目76)
前記低水分吸収性糖類は、L型またはD型である、項目70に記載の組成物。
(項目77)
前記低水分吸収性糖類は、60℃を超える、65℃を超える、70℃を超える、または75℃を超えるガラス転移温度を有する、項目70に記載の組成物。
(項目78)
前記低水分吸収性糖類は、15%未満の吸湿性(25℃、94%推定相対湿度における重量増加%)、10%未満、5%未満、または1%未満の吸湿性を有する、項目70に記載の組成物。
(項目79)
前記吸収されたペプチドと低水分吸収性糖類、または前記吸収された核酸と低水分吸収性糖類とは、約1:0.5〜約1:10の質量比で存在する、項目70に記載の組成物。
(項目80)
前記溶出可能な基質から、前記吸収されたペプチドの少なくとも一部または前記吸収された核酸の少なくとも一部を溶出または回収するための水性液体をさらに含む、項目1または38に記載の組成物。
(項目81)
前記吸収されたペプチドの少なくとも一部を溶出または回収するための水性液体は、水を含む、項目80に記載の組成物。
(項目82)
前記吸収されたペプチドの少なくとも一部を溶出または回収するための水性液体は、5.0〜9.0の範囲のpHを有する、項目80に記載の組成物。
(項目83)
前記水性液体のpHは安定化されている、項目82に記載の組成物。
(項目84)
前記吸収されたペプチドの少なくとも一部または前記吸収された核酸の少なくとも一部を溶出または回収するための水性液体は、pH10〜12、pH11〜12、pH11.3〜11.8、またはpH11.4〜11.7の範囲内のpHを有するアルカリ性溶液を含む、項目80に記載の組成物。
(項目85)
前記吸収されたペプチドの少なくとも一部または前記吸収された核酸の少なくとも一部を溶出または回収するための水性液体は、11.4、11.5、11.6、11.7、または11.8のpHを有するアルカリ性溶液を含む、項目80に記載の組成物。
(項目86)
前記組成物の水分含量は、質量比として約5%、5〜10%、10〜15%、15〜20%、または20〜25%未満である、項目1または38に記載の組成物。
(項目87)
前記吸収されたペプチドまたは吸収された核酸は生物学的サンプルを含む、項目1または38に記載の組成物。
(項目88)
前記生物学的サンプルは、全血、血清、血漿、生検細胞または組織、痰、粘液、脳脊髄液、毛髪、尿、大便、または精液を含む、項目87に記載の組成物。
(項目89)
前記生物学的サンプルは、細胞、細菌、ウイルス、酵母、またはマイコプラズマを含む、項目87に記載の組成物。
(項目90)
前記生物学的サンプルは被験体由来である、項目87に記載の組成物。
(項目91)
前記被験体は哺乳動物である、項目90に記載の組成物。
(項目92)
前記被験体はヒトである、項目90に記載の組成物。
(項目93)
前記被験体は、遺伝的疾患または生理的障害、または遺伝的疾患または生理的障害に対する素因についてスクリーニングされる、請求項90に記載の組成物。
(項目94)
前記被験体は、ある疾患または生理的障害を有するか、またはある疾患または生理的障害を有する危険性がある、項目90に記載の組成物。
(項目95)
前記疾患または生理的障害は、遺伝的疾患、過剰増殖性障害、免疫障害または微生物感染を含む、項目90に記載の組成物。
(項目96)
前記被験体は投獄されているか、投獄されたことがあるか、または投獄の危険性がある、項目90に記載の組成物。
(項目97)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質、あるいは溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質は、緩衝液、キレート剤、変性剤、界面活性剤、還元剤、抗酸化剤、プロテアーゼインヒビター、ヌクレアーゼインヒビター、抗菌剤、または低水分吸収性糖類によって処理されている、項目1または38に記載の組成物。
(項目98)
前記緩衝液はpH安定化剤を含む、項目97に記載の組成物。
(項目99)
前記pH安定化剤は、pHをpH5.0〜pH9.0に維持する、項目98に記載の組成物。
(項目100)
前記pH安定化剤は、塩化カリウム、クエン酸、フタル酸水素カリウム、ホウ酸、リン酸二水素カリウム、ジエタノールアミン、クエン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、四ホウ酸ナトリウム、カコジル酸、イミダゾール、または2−アミノ−2−メチル−1−プロパンジオールを含む、項目98に記載の組成物。
(項目101)
前記キレート剤は、EDTA(エチレンジアミン四酢酸)、EGTA(エチレングリコール−O,O’−ビス(2−アミノエチル)−N,N,N’,N’−四酢酸)、GEDTA(グリコールエーテルジアミン四酢酸)、HEDTA(N−(2−ヒドロキシエチル)エチレンジアミン−N,N’,N’−三酢酸)、NTA(ニトリロ三酢酸)、サリチル酸、またはトリエタノールアミンを含む、項目97に記載の組成物。
(項目102)
前記変性剤または界面活性剤は、陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、または両性イオン性界面活性剤を含む、項目97に記載の組成物。
(項目103)
前記界面活性剤は、SDS、ラウリル硫酸ナトリウム、NP40、トリトンX−100、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、塩化ベンゼトニウム、CTAB(セチルトリメチルアンモニウムブロミド)、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、またはN,N−ジメチルデシルアミン−N−オキシドを含む、項目97に記載の組成物。
(項目104)
前記還元剤または抗酸化剤はフリーラジカル捕捉剤を含む、項目97に記載の組成物。
(項目105)
前記還元剤または抗酸化剤は、DTT(ジチオスレイトール)、ジチオエリスリトール、尿素、尿酸、メルカプトエタノール、システイン、ビタミンE、ビタミンC、亜ジチオン酸塩、チオグリコール酸、またはピロ亜硫酸塩を含む、項目97に記載の組成物。
(項目106)
前記プロテアーゼインヒビターは、セリンプロテアーゼインヒビターまたはシステインプロテアーゼインヒビターを含む、項目97に記載の組成物。
(項目107)
前記プロテアーゼインヒビターは、PMSF、PMSF Plus、APMSF、抗トロンビンIII、アマスタチン、アンチパイン、アプロチニン、ベスタチン、ベンザミジン、キモスタチン、カルパインインヒビターIおよびカルパインインヒビターII、E−64、3,4−ジクロロイソクマリン、DFP、エラスタチナル、ロイペプチン、ペプスタチン、1,10−フェナントロリン、フォスフォラミドン、TIMP−2、TLCK、TPCK、トリプシンインヒビター(大豆または鶏卵の卵白)、ヒルスタシン、アルファ−2−マクログロブリン、4−(2−アミノエチル)−ベンゼンスルホニルフルオリド塩酸塩(AEBSF)、またはKunitz型プロテアーゼインヒビターを含む、項目97に記載の組成物。
(項目108)
前記抗菌剤は、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、または抗寄生虫剤を含む、項目97に記載の組成物。
(項目109)
前記抗生物質または抗真菌剤は、ベータラクタム類;半合成ペニシリン類;モノバクタム類;カルボキシペネム類;アミノグリコシド類;グリコペプチド類;グルカン合成インヒビター;リンコマイシン類;マクロライド類;ポリペプチド;アリルアミン類;アゾール類;ポリエン類;スルホンアミド類;ピリミジン類;テトラエン類;チオカルバメート類;安息香酸化合物、その複合体および誘導体;リファマイシン類;ならびにテトラサイクリン類から選択されるクラスのメンバーである、項目108に記載の組成物。
(項目110)
前記抗生物質は、ペニシリン、セファロスポリン、アンピシリン、アモキシシリン、アズトレオナム、クラブラン酸、イミペネム、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、バンコマイシン、クリンダマイシン、ポリミキシン、エリスロマイシン、バシトラシン、アンホテリシン、ナイスタチン、リファンピシン、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリン、ドキシサイクリン、およびクロラムフェニコールから選択される、項目108に記載の組成物。
(項目111)
前記抗真菌剤は、アムロールフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン、ケトコナゾール、フルコナゾール、エルビオール、エコナゾール、エコナキソール、イトラコナゾール、イソコナゾール、イミダゾール、ミコナゾール、スルコナゾール、クロトリマゾール、エニルコナゾール、オキシコナゾール、チオコナゾール、テルコナゾール、ブトコナゾール、チアベンダゾール、ボリコナゾール、サペルコナゾール、セルタコナゾール、フェンチコナゾール、ポサコナゾール、ビフォナゾール、フルトリマゾール、ナイスタチン、ピマリシン、アンホテリシンB、フルシトシン、ナタマイシン、トルナフテート、マフェニド、ダプソン、カスポファンジン、アクトフニコン、グリセオフルビン、ヨウ化カリウム、ゲンチアナバイオレット、シクロピロックス、シクロピロックスオラミン、ハロプロジン、ウンデシレネート、スルファジアジン銀、ウンデシレン酸、ウンデシレンアルカノールアミド、および石炭酸フクシンから選択される、項目108に記載の組成物。
(項目112)
前記抗ウイルス剤は、逆転写酵素インヒビター、プロテアーゼインヒビター、チミジンキナーゼインヒビター、糖または糖タンパク合成インヒビター、構造タンパク合成インヒビター、ヌクレオシドアナログ、およびウイルス成熟インヒビターから選択されるクラスのメンバーである、項目108に記載の組成物。
(項目113)
前記抗ウイルス剤は、ネビラピン、デラビルジン、エファビレンツ、サキナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、ジドブジン(AZT)、スタブジン(d4T)、ラルニブジン(3TC)、ジダノシン(DDI)、ザルシタビン(ddC)、アバカビル、アシクロビル、ペンシクロビル、バラシクロビル、およびガンシクロビルから選択される、項目108に記載の組成物。
(項目114)
前記低水分吸収性糖類は非還元性糖を含む、項目97に記載の組成物。
(項目115)
前記非還元糖は、トレハロース、トレハロースアナログ、またはトレハロース誘導体を含む、項目114に記載の組成物。
(項目116)
前記低水分吸収性糖類は、マロデキストリン、単糖類、または二糖類を含む、項目114に記載の組成物。
(項目117)
前記単糖類はフコースを含む、項目116に記載の組成物。
(項目118)
前記低水分吸収性糖類は、L型またはD型である、項目114に記載の組成物。
(項目119)
前記低水分吸収性糖類は、60℃を超える、65℃を超える、70℃を超える、または75℃を超えるガラス転移温度を有する、項目114に記載の組成物。
(項目120)
前記低水分吸収性糖類は、15%未満の吸湿性(25℃、94%推定相対湿度における重量増加%)、10%未満、5%未満、または1%未満の吸湿性を有する、項目114に記載の組成物。
(項目121)
項目1に記載の組成物、および前記吸収されたペプチドの少なくとも一部を前記基質から溶出または回収するためのデバイスを備えるキット。
(項目122)
項目12または38に記載の組成物、および前記基質から前記吸収されたペプチドの少なくとも一部を溶出または回収するためか、前記吸収された核酸の少なくとも一部を溶出または回収するためか、あるいは該吸収された核酸の少なくとも一部の溶出または回収と組み合わせて該吸収されたペプチドの少なくとも一部を溶出または回収するためのデバイス、を備えるキット。
(項目123)
前記デバイスは、前記基質を導入または保持するのに十分な物理的サイズを有し、開口端部、開口可能な端部、取り外し可能な端部を有し、該プランジャーが該基質の圧縮を生じ得るように該デバイスにプランジャーを挿入するのに適した物理的寸法を有する、項目121または122に記載のキット。
(項目124)
前記デバイスは、実質的に図2または図3に示す通りである、項目121または122に記載のキット。
(項目125)
前記デバイスはスピンカラムを備える、項目121または122に記載のキット。
(項目126)
前記吸収されたペプチドまたは前記吸収された核酸は生物学的サンプルを含む、項目121または122に記載のキット。
(項目127)
項目1に記載の組成物、および前記基質から前記吸収されたペプチドの少なくとも一部を溶出または回収するための指示書を備えるキット。
(項目128)
項目12または38に記載の組成物、および前記基質から前記吸収されたペプチドの少なくとも一部を溶出または回収するための指示書、前記吸収された核酸の少なくとも一部を溶出または回収するための指示書、あるいは該吸収された核酸の少なくとも一部の溶出または回収と組み合わせて該吸収されたペプチドの少なくとも一部を溶出または回収をするための指示書、を備えるキット。
(項目129)
前記溶出または回収のための指示書は、前記基質からの前記吸収されたペプチドの優先的または選択的な溶出または回収を含む、項目128に記載のキット。
(項目130)
前記溶出または回収のための指示書は、前記基質からの前記吸収されたペプチドの少なくとも一部の溶出または回収、および前記吸収された核酸の少なくとも一部の溶出または回収を含む、項目128に記載のキット。
(項目131)
前記基質から前記吸収されたペプチドを優先的または選択的に溶出または回収する水性液体をさらに含む、項目128に記載のキット。
(項目132)
前記基質から前記吸収されたペプチドの少なくとも一部、および前記吸収された核酸の少なくとも一部を同時に溶出または回収する水性液体をさらに含む、項目128に記載のキット。
(項目133)
前記吸収されたペプチドの少なくとも一部および前記吸収された核酸の少なくとも一部を、継時的に回収するための指示書をさらに含む、項目128に記載のキット。
(項目134)
複数の区画、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質、および該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に対してペプチドまたは核酸を吸収させるための指示書、を有する保管ユニットであって、各区画は、個々の溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を保持するのに十分な物理的サイズを有し、該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、ペプチドまたは核酸を吸収し、吸収されたペプチドまたは吸収された核酸を溶出または回収するのに適切である、保管ユニット。
(項目135)
前記保管ユニットが、前記吸収されたペプチドまたは吸収された核酸を前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から溶出または回収するための指示書;あるいは吸収されたペプチドまたは吸収された核酸を該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から溶出または回収するための水性液体を調製するための指示書をさらに含む、項目134に記載の保管ユニット。
(項目136)
吸収されたペプチドまたは吸収された核酸を前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から溶出または回収するための水性液体をさらに含む、項目134に記載の保管ユニット。
(項目137)
前記ハウジングは、マルチウェルプレートを含む、項目134に記載の保管ユニット。
(項目138)
前記マルチウェルプレートが、2〜6個、6〜12個、12〜24個、24〜96個、またはそれ以上のウェルを含む、項目137に記載の保管ユニット。
(項目139)
前記マルチウェルプレートの1個以上のウェルは、約10〜50μl、50〜100μl、100〜250μl、250〜500μl、0.5〜1.0ml、1.0〜2.0ml、2.0〜3.0ml、3.0〜5.0ml、または5.0〜10.0mlの容量を有する、項目137に記載の保管ユニット。
(項目140)
項目1、12、または38に記載の複数の組成物を含む保管ユニット。
(項目141)
複数の区画を有する保管ユニットであって、該区画はそれぞれ、個々の溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を保持するのに十分な物理的サイズを有し、該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、ペプチドまたは核酸を吸収するため、および吸収されたペプチドまたは吸収された核酸を溶出または回収するために適切であり、そしてペプチドまたは核酸が1個以上の該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収される、保管ユニット。
(項目142)
前記組成物のうちの少なくとも二つは、異なる吸収されたペプチドまたは異なる吸収された核酸を含む、項目141に記載の保管ユニット。
(項目143)
前記組成物のうちの少なくとも二つは、異なる吸収された生物学的サンプルを含む、項目142に記載の保管ユニット。
(項目144)
項目1の組成物を備える保管装置であって、該保管装置は、組成物を、約−20℃、4℃、4〜10℃、10〜20℃、20〜30℃、30〜40℃、40〜50℃、50〜60℃、60〜70℃、または70〜80℃の温度に維持し得る、保管装置。
(項目145)
項目1、12、または38に記載の組成物を含むライブラリーであって、前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質のうちの少なくとも二つは、該基質に吸収される異なるペプチドまたは異なる核酸を有する、ライブラリー。
(項目146)
10〜50、50〜100、100〜500、500〜2500、2500〜10,000、10,000〜50,000、50,000〜250,000種の異なるペプチドまたは異なる核酸を含む、項目145に記載のライブラリーであって、それぞれが、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収される、ライブラリー。
(項目147)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収される異なるペプチドまたは異なる核酸の一つ以上が生物学的サンプルを含む、項目146に記載のライブラリー。
(項目148)
安定化ペプチドまたは保存ペプチドを溶出可能な形態または回収可能な形態として生成する方法であって、
(a)溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を提供する工程であって、該基質は該基質に吸収されるアミノ酸配列の溶出を可能にする、工程;
(b)該基質に対する該ペプチドの吸収を可能にする条件下で、該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質をペプチドと接触させる工程;および
(c)必要な場合、該接触させた基質から、水分量を、質量比で約5%、5〜10%、10〜15%、15〜20%、または20〜25%未満に減少させ、それによって安定化ペプチドまたは保存ペプチドを溶出可能な形態または回収可能な形態で生成する工程、
を包含する、方法。
(項目149)
前記基質に対する核酸の吸収を可能にする条件下で、前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を核酸に接触させ、それによって安定化または保存された核酸を溶出可能な形態または回収可能な形態として生成することをさらに含む、項目148に記載の方法。
(項目150)
安定化ペプチドまたは保存ペプチドを溶出可能な形態または回収可能な形態として生成する方法であって、
(a)低水分吸収性糖類によって処理されているが、アルコール、グリセロール、スクロース、カラゲーナン、キサンタンゴムまたはペクチンでは処理されていない溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質を提供する工程;
(b)基質に対するペプチドの吸収を可能にする条件下で該基質に接触させる工程;および
(c)必要な場合、該接触させた基質から、水分量を、質量比にして約5%、5〜10%、10〜15%、15〜20%、または20〜25%未満に減少させ、それによって安定化ペプチドまたは保存ペプチドを溶出可能な形態または回収可能な形態として生成する工程、
を包含する、方法。
(項目151)
前記基質に対する核酸の吸収を可能にする条件下で該基質を該核酸に接触させ、それによって安定化核酸または保存核酸を溶出可能な形態または回収可能な形態として生成する工程をさらに包含する、項目150に記載の方法。
(項目152)
ペプチドを溶出可能な形態または回収可能な形態で保管する方法であって、
(a)溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を提供する工程であって、該基質は該基質に吸収されるアミノ酸配列の溶出を可能にする、工程;
(b)該基質に対する該ペプチドの吸収を可能にする条件下で、該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質をペプチドと接触させる工程;および
(c)必要な場合、該接触された溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から、水分量を、質量比にして約5%、5〜10%、10〜15%、15〜20%、または20〜25%未満に減少させ、それによって保管ペプチドを溶出可能な形態または回収可能な形態で生成する工程、
を包含する、方法。
(項目153)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に対する核酸の吸収を可能にする条件下で、該基質を該核酸に接触させ、それによって保管核酸を溶出可能な形態または回収可能な形態として生成する工程をさらに包含する、項目152に記載の方法。
(項目154)
ペプチドを溶出可能な形態または回収可能な形態として保管する方法であって、
(a)低水分吸収性糖類によって処理されているが、アルコール、グリセロール、スクロース、カラゲーナン、キサンタンゴムまたはペクチンでは処理されていない溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質を提供する工程;
(b)該基質に対するペプチドの吸収を可能にする条件下で該基質を接触させる工程;および
(c)必要な場合、該接触させた基質から、水分量を、質量比にして約5%、5〜10%、10〜15%、15〜20%、または20〜25%未満に減少させ、それによって保管ペプチドを溶出可能な形態または回収可能な形態として生成する工程、
を包含する、方法。
(項目155)
前記基質に対する核酸の吸収を可能にする条件下で該基質を該核酸に接触させ、それによって保管核酸を溶出可能な形態または回収可能な形態として生成する工程をさらに包含する、項目154に記載の方法。
(項目156)
溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収されたペプチドを溶出する方法であって、
(a)実質的に水分を含まない、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収されたペプチドを提供する工程;
(b)該吸収されたペプチドの少なくとも一部を該基質から溶出する条件下で、該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を液体で水和する工程;および
(c)該吸収されたペプチドの少なくとも一部を該基質から溶出するために、該水和した溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を攪拌、インキュベート、または圧縮し、それによって、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収されたペプチドを溶出する工程、
を包含する、方法。
(項目157)
溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収されたペプチドを回収する方法であって、
(a)実質的に水分を含まない、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収されたペプチドを提供する工程;
(b)該吸収されたペプチドの少なくとも一部を該基質から溶出する条件下で、該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を液体で水和する工程;
(c)該吸収されたペプチドの少なくとも一部を該基質から溶出するために、該水和した溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質を攪拌、インキュベート、または圧縮する工程;および
(d)該溶出液を収集し、それによって、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収されたペプチドを回収する工程、
を包含する、方法。
(項目158)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質は、該基質に吸収された核酸を有する、項目156または157に記載の方法。
(項目159)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質が、該基質から該吸収されたペプチドの少なくとも一部、または該基質から該吸収された核酸の少なくとも一部を溶出する条件下で、水性液体と接触され、それによって該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収されたペプチドまたは核酸を溶出または回収する、項目158に記載の方法。
(項目160)
前記吸収されたペプチドまたは吸収された核酸が生物学的サンプルを含む、項目148〜159に記載の方法。
(項目161)
前記生物学的サンプルは、全血、血清、血漿、生検細胞または組織、痰、粘液、脳脊髄液、尿、大便、または精液を含む、請求項160に記載の方法。
(請求項162)
前記生物学的サンプルは、細胞、細菌、ウイルス、酵母、またはマイコプラズマを含む、請求項160に記載の方法。
(請求項163)
前記生物学的サンプルは被験体由来である、請求項160に記載の方法。
(請求項164)
前記被験体は哺乳動物である、請求項160に記載の方法。
(請求項165)
前記被験体はヒトである、項目160に記載の方法。
(項目166)
前記被験体が、遺伝的疾患または生理的障害、または遺伝的疾患または生理的障害に対する素因についてスクリーニングされる、項目160に記載の方法。
(項目167)
前記被験体は、疾患または生理的障害を有するか、または疾患または生理的障害を有する危険性がある、項目160に記載の方法。
(項目168)
前記遺伝的疾患または生理的障害は、遺伝的疾患、過剰増殖性障害、免疫障害または微生物感染を含む、項目167に記載の方法。
(項目169)
前記被験体は投獄されているか、投獄されたことがあるか、または投獄の危険性がある、項目160に記載の方法。
(項目170)
実質的に水分を含まない、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収される生物学的サンプルを含む組成物であって、該吸収された生物学的サンプルの少なくとも一部は、該基質から回収可能である、組成物。
(項目171)
基質に吸収される生物学的サンプルを含む組成物であって、該基質は、実質的に水分を含まない、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質からなり、該吸収された生物学的サンプルの少なくとも一部は該基質から回収可能である、組成物。
(項目172)
前記生物学的サンプルは単離されるか精製される、項目170または171に記載の組成物。
(項目173)
基質に吸収されるペプチド組成物であって、該基質は、実質的に水分を含まない、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質からなり、該吸収されたペプチドの少なくとも一部は該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から回収可能である、組成物。
(項目174)
基質に吸収される核酸組成物であって、該基質は、実質的に水分を含まない、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質からなり、該吸収された核酸の少なくとも一部は該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から回収可能である、組成物。
(項目175)
基質に吸収される生物学的サンプルから成る組成物であって、該基質は、実質的に水分を含まない、溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質からなり、該吸収された生物学的サンプルの少なくとも一部は該基質から回収可能である、組成物。
(項目176)
複数の保管ペプチドまたは保存ペプチドを収容する保管ユニットであって、各ペプチドはそれぞれ、実質的に水分を含まない、溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収され、該吸収されたペプチドの少なくとも一部は該溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質から回収可能である、保管ユニット。
(項目177)
前記基質に吸収される前記複数の保管または保存ペプチドは、それぞれ、前記保管ユニット内に規定された場所またはアドレスを有する、項目176に記載の保管ユニット。
(項目178)
溶出可能な多孔性基質または半多孔性エラストマー基質に吸収される核酸をさらに含む、項目176に記載の保管ユニット。
(項目179)
前記吸収されたペプチドは生物学的サンプルを含む、項目176に記載の保管ユニット。
(項目180)
複数の異なる保管または保存ペプチドまたは核酸を含むライブラリーであって、各ペプチドまたは核酸はそれぞれ、実質的に水分を含まない溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質に吸収され、該吸収されたペプチドまたは吸収された核酸の少なくとも一部は、該溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質から回収可能である、ライブラリー。
(項目181)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質に吸収される複数のペプチドは、それぞれ、ライブラリー内に規定された位置またはアドレスを有する、項目180に記載のライブラリー。
(項目182)
前記吸収されたペプチドが生物学的サンプルを含む、項目180に記載のライブラリー。
(項目183)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質がエラストマー系である、項目180に記載のライブラリー。
(項目184)
複数の保管生物学的サンプルを含むライブラリーを生成する方法であって、
(a)溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質を、該基質に対する第1の生物学的サンプルの吸収を可能にする条件下で、該第1生物学的サンプルと接触させる工程;
(b)必要な場合、該接触させた基質から、水分量を、質量比にして約5%、5〜10%、10〜15%、15〜20%、または20〜25%未満に減少させ、それによって該第1の生物保管サンプルを生成すること;および
(c)異なる溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質に吸収された第2またはその後の生物学的サンプルについて、工程a)およびb)を少なくとも1回繰り返し、それによって複数の保管生物学的サンプルを含むライブラリーを生成する工程、
を包含する、方法。
(項目185)
前記第1または第2の吸収生物学的サンプルの少なくとも一部は、前記溶出可能なエラストマー基質から回収可能である、項目184に記載の方法。
(項目186)
前記第1または第2の吸収生物学的サンプルの生体分子は、前記基質に吸収されない第1または第2の生物学的サンプルに比べて、該基質への吸収後に分解に耐性である、項目184に記載の方法。
(項目187)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質はエラストマー系である、項目184に記載の方法。
(項目188)
複数の保管ペプチドを含むライブラリーを生成する方法であって、
(a)溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質を、該基質に対する第1のペプチドの吸収を可能にする条件下で、該第1ペプチドに接触させる工程;
(b)必要な場合、該接触させた基質から、水分量を、質量比にして約5%、5〜10%、10〜15%、15〜20%、または20〜25%未満に減少させ、それによって第1の保管ペプチドを生成する工程;および
(c)異なる溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質に吸収された第2またはその後のペプチドについて、工程a)およびb)を少なくとも1回繰り返し、それによって複数の保管ペプチドを含むライブラリーを生成する工程、
を包含する、方法。
(項目189)
前記第1または第2の吸収されたペプチドの少なくとも一部は、該溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質から回収可能である、項目188に記載の方法。
(項目190)
前記第1または第2の吸収されたペプチドは、基質に吸収されない第1または第2のペプチドに比べて、該基質への吸収後に分解に耐性である、項目188に記載の方法。
(項目191)
前記溶出可能な多孔性基質または半多孔性基質はエラストマー系である、項目188に記載の方法。
本発明は、生体分子保管のための組成物および方法を提供する。生体分子は、少なくとも1個の生体分子を含む液体を、多孔性基質または半多孔性基質に吸収させることによって保管する。生体分子が吸収される基質は、実質的に水分を含まなくなるように乾燥される。吸収された生体分子は、将来のある時点で必要に応じて任意に基質から溶出または回収され、その後の分析または応用に用いられる。従って、保管用基質に吸収される生体分子は、少なくとも一部は、基質から回収することが可能である。保管用基質に吸収される生体分子はまた、必要に応じて任意に保存されてもよい。すなわち、吸収された生体分子は、分解に対して耐性を示す、または抵抗力がある。保存される生体分子は、その後の分析または応用にとって有用である。保管用の、必要に応じて任意に防腐用の基質に対し液体として吸収されるのに向いている生体分子としては、特に、ペプチド、核酸、炭水化物、糖類、脂肪酸、脂質が挙げられる。基質に吸収される生体分子は、生存、または非生存生物体、例えば、細胞、器官、または組織サンプル、例えば、血液、血清、または血漿から得られるサンプル、それらから生産されるサンプル、またはそれらから誘導されるサンプルであってもよい。ことため、保管用基質に吸収されるのに適切な生体分子としては、さらに生物材料および生物学的サンプルが挙げられる。
Probes,Inc.,Eugene、オレゴン州)を用いて計算によって求めることが可能である。従って、基質に吸収された生体分子の保存の程度は簡単に確認することが可能である。
本実施例は、トレハロース単独、および他の材料と組み合わせて基質に吸収されたペプチドが、室温においても、さらに高温においても、ペプチドの安定性を増すことを示す実験を記載する。
本実施例は、FTA基質と他の成分に関するタンパク質保管実験を記載する。
凍結されFTAに吸収された血漿タンパク質の、様々な温度数値における保管結果
値は、回収されたタンパク質を示す(μg単位)
本実施例は、タンパク質を安定化するために様々な処理を行った場合のさらなるタンパク質保管実験を記載する。
乾燥、室温タンパク質保管に及ぼす添加物の結果
血清タンパク質安定実験−総タンパク質のアッセイ:BCA法(0.4ml)
本実施例は、溶出可能なエラストマー基質(ポリエステルスポンジ)にサンプル(血清または血液)を吸収させ、その後、その基質からサンプルを溶出および回収するための例示のプロトコールを記載する。本実施例はまた、溶出可能なエラストマー基質(ポリエステルスポンジ)に核酸を吸収させ、その後、基質から核酸を溶出および回収するための例示のプロトコールを記載する。本実施例はさらに、溶出可能なエラストマー基質(ポリエステルスポンジ)にペプチドを吸収させ、その後、その基質からペプチドを溶出および回収し、次いで同じ基質から核酸を溶出および回収するための例示のプロトコールを記載する。
(サンプル適用)
1.血液、血清または血漿のサンプルを用意する。
2.エラストマー基質を担持するプレートの各ウェルに150μLのサンプルを投下する。
3.調節雰囲気内で基質を乾燥させる。
4.各サンプル容器を、貫通可能な密栓材料によって密封し保管する。
5.プレートを保管ユニットに設置し保管する。
(タンパク質回収)
1.保管ユニットから、保管した血漿タンパク質の選択プレートを取り出し、保管した血漿タンパク質を含む、所望の数のサンプルバイアルを実験プレートに設置する。
2.各バイアルに150μLの水を加え、エラストマー基質をキャッププランジャーで数回圧縮し、基質の水和を確実にする。
3.エラストマー基質を室温で10分間水とインキュベートし、次に各サンプル上にプランジャーを完全に押し込み、基質から、プランジャーの中空バレル中へと血漿タンパク質を押し出す。
4.所望の量を取り出すため、プランジャーの頭部密栓を針またはピペットチップで貫通することによって、実験のための血漿タンパク質を含む水を回収する。
(サンプル適用)
1.スポンジを、適切な容器(例えば、図2および3に示す容器)に挿入し、ある容量(例えば、150μl)の核酸サンプルをスポンジに適用する。注意:サンプルはスポンジに直ちに吸収されなくてもよい。
2.核酸サンプルを、5分間サンプルに吸収させる。鋭利にした200μlピペットチップ(先端5mmを、清浄な剃刀の刃で切り落とす)を用い、スポンジを数回上下に圧縮し、核酸が完全にスポンジに吸収されることを確実にする。
3.安全フードの中でサンプルを一晩風乾させる。注意:湿った条件下では乾燥時間を増加させる必要があり得る。
(核酸回収)
1.pH11.7〜11.8のアルカリ性回収液150μLをスポンジ〜基質に加え、このスポンジをキャッププランジャーで数回圧縮して基質の水和を確実にする。
2.室温で10分アルカリ性回収液と基質をインキュベートし、次に各サンプル上にプランジャーを完全に押し込み、基質からプランジャーの中空バレル中へと核酸を押し出す。3.所望の量を取り出すため、実験用核酸を含むアルカリ液をピペットチップを用いて回収する。
4.必要に応じて、工程1〜3を合計2サイクル繰り返す。
5.全ての溶出液を合わせる。
(サンプル適用)
1.スポンジを適切な容器、例えば、スピンカラム(例えば、BioRadのマイクロスピンカラム、カタログ番号#732−6204の類似のスピンカラム)に挿入し、150μlのよく混合した血液(全血、血漿または血清)をスポンジに適用する。注意:サンプルはスポンジに直ちに吸収されなくてもよい。
2.血液を、5分間スポンジに吸収させる。鋭利にした200μlピペットチップ(先端5mmを、清浄な剃刀の刃で切り落とす)を用い、スポンジを数回上下に圧縮し、その血液が完全にスポンジに吸収されることを確実にする。
3.安全フードの中でサンプルを一晩空気乾燥させる。
注意:湿った条件下では乾燥時間を増加させることが必要となり得る。完全に乾燥したサンプルは圧縮が困難になり、色が目立って濃くなる。
(A.タンパク質)
1.溶出過程の間スピンカラムの底に蓋をする。
2.全体を、清潔な2ml微小遠心チューブに設置する。
3.150μlの超純水をスポンジに加える。
4.鋭利な200μlピペットチップで20回圧縮し、室温で10分インキュベートする。
5.工程4を2回、合計3サイクル繰り返す。
6.チューブから底のキャップを外し、微小遠心器で10,000×gで1分遠心分離する。
7.その後のタンパク質実験のため、溶出液を回収する。
8.DNA回収に備えてスピンカラム中にスポンジを保持する。
(B.DNA)
9.スピンカラムの底に再び蓋をし、溶出過程の間蓋をしたままとする。
10.スピンカラム全体を、清潔な2ml微小遠心チューブに設置する。
11.溶解緩衝液(例えば、Qiagen ATL緩衝液)に、150μlのプロテイナーゼK(20μg/μlの保管液)を、最終濃度が100μg/mlとなるように加える。
12.56℃で20分加熱する。
13.チューブから底のキャップを外し、微小遠心器で10,000×gで1分遠心分離し、液体を保持する。
14.スピンカラムの底に蓋をし、溶出過程の間蓋をしたままとする。
15.スピンカラム全体を、清潔な2ml微小遠心チューブに設置する。
16.pH11.7〜11.8のアルカリ性回収液200μlをスポンジに加える。
17.鋭利にした200μlピペットチップで20回圧縮し、室温で30分インキュベートする。
18.インキュベーション後20回圧縮する。
19.チューブから底のキャップを外し、微小遠心器で10,000×gで1分遠心分離する。
20.10μlのトリスHCLを加え高いpHを中和し、液体を保持する。
21.スピンカラムの底に蓋をし、溶出過程の間蓋をしたままとする。
22.全体を、清潔な2ml微小遠心チューブに設置する。
23.工程7〜12を合計2サイクル繰り返す。
24.保持した溶液(工程B.5、B.12−2回)を全て合わせ、磁気ビーズ手順(例えば、Invitrogen DRI磁気ビーズ精製キット、または、Qiagenから市販されるQIAmpマイクロキットおよびミニキット)によって回収過程を完了させる。
本実施例は、例示の容器保管ユニットを記載する。保管ユニット(容器またはチューブ)は、基質を収容し、サンプルを基質に吸収させ、吸収基質を保管し、かつ、吸収サンプルを基質から溶出または回収するのに適切である。
本実施例は、溶出可能なエラストマー基質に吸収された血液を様々な時間保管し、その後溶出、回収、および分析した実験を記載する。例示の実験は、吸収したポリエステルスポンジからタンパク質を溶出するために単一工程を用いる。
各種処理剤(下記を参照のこと)を有する多数のポリウレタン(ポリエステル)スポンジ(6mm×5mm円筒)に血液サンプルを吸収させ、室温で保管した。7日後、12日後、28日後、55日後、85日後、187日後、および209日後、血液を吸収したこのスポンジを水(150μl)で水和し、容器の中に収容されたスポンジをプランジャーを用いて圧縮することによって、このスポンジからタンパク質を溶出した。この手順は、実質的に実施例4に記載した通りである。
処理#1(GV1) 無処理
処理#2(GV2) TE
処理#3(GV3) TE+NP40
処理#4(GV4) トレハロース
処理#5(GV5) TE+トレハロース
処理#6(GV6) TE+NP40+トレハロース
処理#7(GV7) TE+システイン
処理#8(GV8) TE+NP40+システイン
凍結血清
新鮮な非凍結の時間0における血清。
Based Medicine(オースチン、テキサス州)からのビーズベースのイムノアッセイによって、確かめられる。これらのいずれも、他の処理に比べて、処理3、4、または5においてタンパク質量が系統的に減少するという証拠を示さなかった。従って、処理3、4、および5も保管ペプチドの保存を実現する可能性がある。
本実施例は、溶出可能なエラストマー基質に吸収された血液を様々な時間保管し、その後溶出、回収、および分析した実験を含む。例示の実験は、二つの連続工程を用いる。すなわち、1)ポリエステルスポンジに吸収された血液からのタンパク質の溶出、および2)同じポリエステルスポンジに吸収された血液からの核酸の溶出である。
この実験では、ポリエステルスポンジに吸収された血液を167日間保管した。保管後、タンパク質をスポンジ基質から溶出、回収し、次に、同じスポンジ基質から核酸を溶出、回収した。
処理#1 TE+NP40 =150,914
処理#2 TE+NP40+トレハロース =197,959
処理#3 TE+SDS =165,175
処理#4 TE+SDS+トレハロース =177,038
処理#5 トレハロースのみ =148,897
処理#6 添加剤無し =154,525
コントロールC1 凍結した全血 =191,028
コントロールC2 凍結した血清 =113,733
。
処理#1 TE+NP40 =100ng
処理#2 TE+NP40+トレハロース =750ng
処理#3 TE+SDS =10ng
処理#4 TE+SDS+トレハロース =100ng
処理#5 トレハロースのみ =750ng
処理#6 添加剤無し =100ng
コントロールQ1 凍結した全血 =1500ng
コントロールQ2 凍結した血清 =1500ng
。
Claims (1)
- 明細書に記載の発明。
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