ES2574956T3 - Estabilización y aislamiento de ácidos nucleicos extracelulares - Google Patents
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Abstract
Un recipiente adecuado para recoger una muestra que contiene celulas, preferentemente una muestra de sangre, plasma o suero, que comprende - una composicion estabilizante adecuada para estabilizar una poblacion de acidos nucleicos extracelulares comprendida en la muestra que contiene celulas, en donde dicha composicion estabilizante comprende un inhibidor de las caspasas, y - al menos un compuesto segun la formula 1,**Fórmula** en la que R1 es un residuo de hidrogeno o un residuo de alquilo, preferentemente un residuo de alquilo C1-C5, mas preferido un residuo de metilo, R2 y R3 son residuos de hidrocarburo identicos o diferentes con una longitud de la cadena de carbono de 1 - 20 atomos dispuestos de una manera lineal o ramificada, y R4 es un residuo de oxigeno, azufre o selenio.
Description
producen enlaces covalentes inter- o intra-moleculares entre moléculas de ácidos nucleicos o entre ácidos nucleicos y proteínas. Este efecto puede conducir a una recuperación reducida de tales ácidos nucleicos estabilizados y parcialmente reticulados después de una purificación o extracción de una muestra biológica compleja. Como, por ejemplo, la concentración de ácidos nucleicos circulantes en una muestra de sangre completa es ya relativamente 5 baja, debe evitarse cualquier medida que reduzca adicionalmente el rendimiento de tales ácidos nucleicos. Esto puede ser de importancia particular cuando se detectan y analizan moléculas de ácidos nucleicos muy raras derivadas de tumores malignos o de un feto en desarrollo en el primer trimestre de embarazo. Por tanto, según una realización, ningún liberador de formaldehído está comprendido en la composición estabilizante, respectivamente no se usa adicionalmente para la estabilización. Según una realización, el inhibidor de la apoptosis que se usa en las
10 composiciones según la presente invención no está seleccionado del grupo que consiste en ácido aurintricarboxílico, fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), leupeptina y clorhidrato de Nα-Tosil-Lys clorometil cetona (TLCK). Según una realización, el inhibidor de la apoptosis no está seleccionado de dicho grupo en particular si el inhibidor de la apoptosis no se usa en combinación con un agente hipertónico como estabilizador adicional.
15 Los intervalos numéricos son incluyentes de los números que definen el intervalo. Los encabezamientos proporcionados en el presente documento no son limitaciones de los diversos aspectos o realizaciones de la presente invención que pueden leerse por referencia a la memoria descriptiva en conjunto.
El término “solución” como se usa en el presente documento en particular se refiere a una composición líquida,
20 preferentemente una composición acuosa. Puede ser una mezcla homogénea de solo una fase, pero también está dentro del alcance de la presente invención que una solución comprenda aditivos sólidos tales como, por ejemplo, precipitados.
Los tamaños, respectivamente intervalos de tamaño, indicados en el presente documento con referencia a
25 nucleótidos nt, se refieren a la longitud de cadena y así se usan con el fin de describir la longitud de moléculas monocatenarias, además de bicatenarias. En moléculas bicatenarias dichos nucleótidos están emparejados.
Según una realización, la materia descrita en el presente documento como que comprende ciertas etapas en el caso de métodos o como que comprende ciertos componentes en el caso de composiciones, soluciones y/o tampones se
30 refiere a materia que consiste en las etapas o componentes respectivos. Se prefiere seleccionar y combinar realizaciones preferidas descritas en el presente documento y la materia específica de una combinación respectiva de realizaciones preferidas también pertenece a la presente divulgación.
Tabla 1: Visión general de inhibidores de la apoptosis
- Inhibidor de la apoptosis
- Descripción
- 1. Inhibidores metabólicos
- AICA-ribósido, acadesina, AlCAr, 5aminoimidazol-4-carboxamida-1-βribósido, Z-ribósido
- Ofrece protección contra la muerte celular inducida por la privación de glucosa
- Inhibidor II de la apoptosis, compuesto de diarilurea
- Previene la formación de complejos de apoptosoma activo de ~700 kDa
- Bloqueante del canal Bax, (±)-1-(3,6-
- Un derivado de dibromocarbazolo-piperazinilo permeable a las células
- dibromocarbazol-9-il)-3-piperazin-1-il
- que muestra propiedades antiapoptósicas. Bloquea eficazmente la
- propan-2-ol, bis TFA, iMAC1
- liberación de citocromo c inducida por Bid de mitocondrias de células HeLa (~80 % de inhibición a 5 µM), inhibiendo la actividad de formación de canales Bax (CI50 = 520 nM en un ensayo de canales de liposomas).
- Péptido inhibidor de Bax, V5
- Un pentapéptido permeable a las células basado en el dominio
- Secuencia de péptidos:
- inhibidor de Ku70-Bax que ofrece citoprotección. Funciona tan
- H-Val-Pro-Met-Leu-Lys-OH
- eficazmente como el inhibidor de la caspasa VI (Z-VAD-FMK; Cat. N.º 219007) para la apoptosis mediada por Bax (~50-200 µM). También bloquea eficazmente la muerte celular necrótica independiente de caspasas. Se muestra que son competitivos para Ku70, interaccionan con Bax, previenen su cambio conformacional y translocación mitocondrial. Muestra estabilidad prolongada en medio de cultivo (~3 días). También está disponible péptido de control negativo
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- Bcl-xL BH44-23, humano, permeable a las células
- Un péptido permeable a las células que previene la muerte de células apoptósicas uniéndose directamente al canal de aniones dependiente de tensión (VDAC) y bloqueando su actividad. Conduce a la inhibición de la liberación de citocromo c y pérdida del potencial de membrana mitocondrial (∆ψm). Contiene el dominio de homología del extremo N conservado (BH4) de Bcl-xL (aminoácidos 4 -23), que se ha mostrado que es esencial para inhibir la actividad de VDAC en liposomas y en mitocondrias aisladas. El dominio BH4 está asociado a un péptido portador, una secuencia de VIH-TAT48-57 de 10 aminoácidos con un residuo de β-alanina como espaciador para flexibilidad máxima. Tras su captación, se localiza principalmente en las mitocondrias
- Ácido bongkrékico, sal de triamonio
- Actúa de ligando del translocador del nucleótido adenina. Un potente inhibidor del megacanal mitocondrial (poro de transición de permeabilidad). Reduce significativamente los signos de apoptosis inducida por óxido nítrico. Previene la rotura apoptósica del potencial transmembranario mitocondrial interno (∆ψm), además de varios otros fenómenos asociados a la apoptosis
- Daunorubicina, clorhidrato
- Potente agente antineoplásico permeable a las células cuyo posible sitio diana puede ser citocromo c oxidasa mitocondrial. Se ha mostrado que inhibe la síntesis de ARN y ADN. Inhibe las topoisomerasas I y II eucariotas. Induce roturas monocatenarias de ADN. También induce la apoptosis en células tumorales HeLa S3. Según una realización, dicho compuesto no se usa como estabilizador según la presente invención.
- Humanina, humana, sintética
- Un péptido antiapoptósico de 24 residuos que, cuando se expresa intracelularmente, ofrece protección contra la apoptosis neuronal inducida por presenilina y mutantes de APP (proteína precursora de amiloide) asociados a la enfermedad de Alzheimer (AD) familiar. Se muestra que reduce la liberación de citocromo c in vitro uniéndose directamente a Bax (proteína X asociada a Bcl-2; Kid ~ 2 nM) y previniendo su asociación con mitocondrias aisladas
- Forbol-12-miristato-13-acetato
- El éster de forbol más comúnmente usado. Promotor de tumores de piel de ratón extremadamente potente. Activa a la proteína cinasa C in vivo e in vitro, incluso a concentraciones nM. Promueve la expresión de NOS inducible en hepatocitos cultivados. Activa Ca2+-ATPasa y potencia la formación AMPc inducida por forskolina. Inhibe la apoptosis inducida por el antígeno Fas, pero induce la apoptosis en células de leucemia promielocítica HL-60. Su unión es reversible
- Pifitrina-α
- Un inhibidor químico permeable a las células de p53. Inhibe reversiblemente la transactivación dependiente de p53 de genes sensibles a p53 y bloquea reversiblemente la apoptosis mediada por p53. Inhibe la detención del crecimiento dependiente de p53 de fibroblastos diploides humanos en respuesta a daño del ADN, pero no tiene efecto sobre fibroblastos deficientes en p53. Protege tejidos normales de los efectos secundarios perjudiciales de la quimioterapia. Se ha informado que protege neuronas contra el péptido β-amiloide y la apoptosis inducida por glutamato.
- Pifitrina-µ
- Una sulfonamida permeable a las células que bloquea la interacción de p53 con Bcl-xL y proteínas Bcl-2 e inhibe selectivamente la translocación de p53 a mitocondrias sin afectar la función de transactivación de p53. Protege eficazmente contra la muerte de células inducida por radiación γ in vitro y la letalidad animal in vivo. Debido a que la pifitrina-µ se dirige solo a la rama mitocondrial de la vía de p53 sin afectar las importantes funciones transcripcionales de p53, es superior a la pifitrina-α (Cat. N.º 506132) en estudios in vivo. Se muestra que interacciona selectivamente con HSP70 inducible y altera sus funciones
- Pifitrina-α, cíclica-
- Un análogo permeable a las células y muy estable de pifitrina-α (Cat. N.º 506132), con función biológica similar, pero con citotoxicidad reducida. Un inhibidor químico de p53. Inhibe reversiblemente la transactivación dependiente de p53 de genes sensibles a p53; también bloquea reversiblemente la apoptosis mediada por p53. Actúa de modulador de P-gp cambiando la especificidad de sustrato relativa del transportador. Se ha informado que este compuesto es un potente inhibidor transcripcional de STAT6
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- Pifitrina-α, p-Nitro
- Un inhibidor de p53 permeable a las células que sirve de forma de profármaco de pifitrina-α, p-nitro, cíclica (Cat. N.º 506154). Aunque su eficacia in vitro (DE50 = 0,3 µM en proteger la muerte de neuronas corticales inducida por etopósido) es similar a la de la pifitrina-α (Cat. N.º 506132), es 100 veces más potente que la pifitrina-α cuando se administra en ratas in vivo debido a su conversión estacionaria de larga duración en la forma cíclica correspondiente del compuesto activo en sistemas biológicos (t1/2 = 8 h en medio de cultivo de neuronas a 37 ºC).
- Pifitrina-α, p-nitro, cíclica
- Un inhibidor de p53 permeable a las células que presenta 10 veces mayor potencia (DE50 = 30 nM en proteger la muerte de neuronas corticales inducida por etopósido) y 50 % de semivida más larga (t1/2 = 6 h en medio de cultivo de neuronas a 37 ºC) que la pifitrina-α (Cat. N.º 506132). Sin embargo, a pesar de su eficacia in vitro, este inhibidor no es eficaz cuando se administra en ratas in vivo. Para aplicaciones in vivo, por favor, considérese pifitrina-α, p-nitro (Cat. N.º 506152).
- Péptido inhibidor de STAT3 Secuencia de péptidos: Ac-Pro-Tyr(P03H2)-Leu-Lys-Thr-Lys-OH
- Un fosfopéptido de unión al dominio Stat3-SH2 que actúa de inhibidor selectivo de la señalización de Stat3 (transductores de señal y activadores de la transcripción 3) con una DB50 de 235 µM (concentración de péptido a la que la actividad de unión a ADN se inhibe el 50 %). Reduce significativamente la actividad de unión a ADN de Stat3 formando un complejo de Stat3:péptido inactivo y reduce los niveles de dímeros Stat3:Stat3 activos que pueden unirse a ADN. Muestra mayor afinidad por Stat3, y a un menor grado Stat1, con respecto a Stat5. Se suministra como una sal de trifluoroacetato.
- Péptido inhibidor de STAT3, permeable a las células Secuencia de péptidos: Ac-Pro-Tyr(P03H2)-Leu-Lys-Thr-Lys-OH
- Un análogo permeable a las células del fosfopéptido de unión al dominio Stat3-SH2 (Cat. N.º 573095) que contiene una mts (secuencia de translocación de membrana) del extremo C y actúa de potente bloqueante altamente selectivo de la activación de Stat3. También suprime la transformación constitutiva de Src dependiente de Stat-3 sin efecto sobre la transformación de Ras independiente de Stat-3. El péptido de control inactivo no fosforilado también está disponible bajo Cat. N.º 573105. Se suministra como una sal de trifluoroacetato.
- CAY10500, 6,7-dimetil-3-{[metil-[1-(3-
- Inhibidor del factor de necrosis tumoral α (TNFα) que previene la unión
- trifluorometil-fenil)-1H-indol-3-ilmetil]
- al receptor 1 de TNF (TNFR1).6 Se une al trímero de TNFα
- amino}-etil)-amino]-metil}-cromon-4
- biológicamente activo y promueve el desplazamiento acelerado de una
- ona
- única subunidad para inactivar rápidamente la citocina. En un ensayo basado en células, el compuesto inhibió la estimulación mediada por TNFα de la degradación de IKB.
- Amida gambógica
- Un agonista selectivo para TrkA que imita las acciones de NGF. Este compuesto posee robusta actividad neurotrófica, mientras que previene la muerte celular 1 neuronal.
- Ácido maslínico
- Un triterpeno pentacíclico con propiedades antioxidantes y antiinflamatorias. Se muestra que bloquea la generación de óxido nítrico e inhibe la secreción de IL-6 y TNF-α inducida por lipopolisacáridos
- Hidrato de naringina
- Un bioflavonoide de cítrico que se encuentra que inhibe la actividad de citocromo P450 monooxigenasa en hígado de ratón. Previene la rotura citoesquelética inducida por toxina y la muerte apoptósica de células del hígado.
- Necrostatina-1
- Un inhibidor de la necroptosis, una vía de muerte apoptósica no de células. No afecta la apoptosis desencadenada por Fas/TNFR. Según una realización, dicho compuesto no se usa como estabilizador según la presente invención.
- NSC348884 hidratado, N1,N2-bis((3imino-6-metil-3H-indol-2-il)metil)N1,N2-bis((6-metil-1Hbenzo[d]imidazol-2-il)metil)etano-1,2diamina hidratada
- Este producto es una fosfoproteína nucleolar que muestra varias actividades biológicas en la biogénesis de ribosomas, proliferación celular, transporte lanzadera citoplásmico/nuclear, unión a ácido nucleico, escisión ribonucleica, duplicación de centrosomas y acompañamiento molecular, y se encuentra en mayores niveles en células tumorales. Se ha mostrado que la expresión en exceso conduce a la inhibición de la apoptosis. NSC34884 regula por incremento p53.
- Ácido orselínico
- Ácido benzoico. Bloquea la apoptosis neuronal mediada por PAF. Muestra actividad secuestrante de radicales libres.
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- Ácido tetrametilnordihidroguaiarético
- Un derivado sintético de NDGA y un inhibidor no selectivo de lipoxigenasa. Inhibe la unión del factor de transcripción Sp1 en el promotor de repetición terminal largo del VIH y en el promotor de α-ICP4 (un gen esencial para la replicación del VHS).
- GW 4869, 3,3'-(1,4-fenilen)bis[N-[4(4,5-dihidro-1H-imidazol-2-il)fenil]clorhidrato-2-propenamida
- Un compuesto de dihidroimidazolo-amida simétrico permeable a las células que actúa de potente inhibidor no competitivo específico de N-SMasa (esfingomielinasa neutra) [CI50 = ~ µM, cerebro de rata; Km para esfingomielina ~13 µM]. No inhibe la A-SMasa (esfingomielinasa ácida) incluso a 150 µM. Inhibe débilmente las actividades de la proteína fosfatasa bovina 2A y liso-PAF PLC de mamífero, mientras que no se observa inhibición para PLC específica de fosfatidilcolina bacteriana. Se informó que ofrecía protección completa contra muerte celular inducida por TNF-α o diamina en células de cáncer de mama MCF7 a 20 µM. No modifica los niveles de glutatión intracelular o interfiere con los efectos de señalización mediada por TNF-α o diamina.
- SP 600125, 1,9-pirazoloantrona, antrapirazolona
- SP600125 es un inhibidor de JNK (CI50 = 40 nM para JNK-1 y JNK-2 y 90 nM para JNK-3). Este agente presenta selectividad superior a 300 veces para JNK contra las MAP cinasas relacionadas ERK1 y p38-2, y la serina treonina cinasa PKA. [1] SP600125 es un inhibidor competitivo de ATP reversible. En células, la dosis de SP600125 inhibió dependientemente la fosforilación de c-Jun, la expresión de genes inflamatorios COX-2, IL-2, IFN-y TNF-α, y previno la activación y diferenciación de cultivos de células CD4 humanas primarias
- Mdivi-1, 3-(2,4-dicloro-5-metoxifenil)-2,3-dihidro-2-tioxo-4(1H)quinazolinona, 3-(2,4-dicloro-5metoxifenil)-2-sulfanil-4(3H)quinazolinona
- Mdivi-1 es un inhibidor selectivo de la división mitocondrial en levadura y células de mamífero que actúa mediante la inhibición de la dinamina de división mitocondrial. En células, Mdivi-1 inhibe la apoptosis inhibiendo la permeabilización de la membrana externa mitocondrial. Mdivi-1 produce la rápida formación (<5 min) reversible y dependiente de la dosis de mitocondrias tipo red en células no mutantes con una CI50= ~10 µM. En levadura, la microscopía de fluorescencia de lapso de tiempo no reveló división mitocondrial detectable después del tratamiento con Mdivi-1
- Minociclina, clorhidrato
- Derivado de tetraciclina con actividad antimicrobiana. Inhibidor de la angiogénesis, apoptosis y poli(ADP-ribosa) polimerasa-1 (PARP-1). Antiinflamatorio y neuroprotector
- Ro 08-2750 (C13H10N4O3)
- Inhibidor de la apoptosis inducida por NGF.
- RKTS-33 (C7H8O4)
- Inhibición selectiva de la vía dependiente del ligando Fas sola
- 2. Ácidos nucleicos
- 3,4-Dicloroisocumarina
- Inhibidor de serina proteasas -> granzima B y bloquea la escisión de ADN internucleosómica apoptósica en timocitos sin la participación de endonucleasas. No afecta las tiol proteasas y metaloproteasas
- Actinomicina D, Streptomyces sp.
- También actúa de inhibidor competitivo de serina proteasas; fármaco antineoplásico clásico. Inductor citotóxico de la apoptosis contra células tumorales. Un inhibidor dependiente de ADN de la síntesis de ARN, la actinomicina promueve la inducción de la apoptosis por algunos estímulos específicos, por ejemplo, TRAIL y Fas (CD95). La actinomicina D también puede aliviar o bloquear el proceso apoptósico y disminuir la citotoxicidad inducida por varios estímulos tales como el inhibidor de dihidrofolato reductasa aminopterina y el derivado de prostaglandina 15-desoxi-D12,14-prostaglandina J2, así puede tener tanto actividades pro como antiapoptósicas en algunos sistemas. Según una realización, dicho compuesto no se usa como estabilizador según la presente invención.
- Ácido aurintricarboxílico
- Inhibidor de la ADN topoisomerasa II
- Baicaleína
- Una flavona permeable a las células que inhibe la actividad de 12lipoxigenasa (CI50 = 120 nM) y transcriptasa inversa. Protege a las neuronas corticales de la toxicidad inducida por β-amiloide. Reduce la biosíntesis de leucotrienos e inhibe la liberación de enzimas lisosómicas. También inhibe la captación y movilización de Ca2+ celular, y la artritis inducida por adyuvante. Se informó que inhibía la peroxidación de lípidos microsómicos formando un complejo de hierrobaicaleína. Inhibe la topoisomerasa II e induce muerte celular en líneas celulares de carcinoma hepatocelular. Potencia respuestas contráctiles a la estimulación nerviosa. Inhibe la proteína tirosina cinasa y la proteína cinasa C estimulada por PMA
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- Camptotecina, Camptotheca
- Un inhibidor de la ADN topoisomerasa I permeable a las células.
- acuminata
- Presenta propiedades antileucémicas y antitumorales. Induce la apoptosis en células HL-60 y timocitos de ratón. Detiene células en la fase G2/M
- Diisopropilfluorofosfato
- Inhibidor de serina proteasas
- Fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF)
- Inhibidor irreversible de serina proteasas. Su mecanismo de acción es análogo al del diisopropilfluorofosfato. PMSF produce la sulfonilación de los residuos de serina de sitio activo. También se informó que inhibía la fragmentación internucleosómica de ADN en timocitos inmaduros. Para un inhibidor más estable relacionado, véase AEBSF
- (-)-Huperzina A
- Un inhibidor de AChE. Antagonista de receptores de NMDA. Protege contra la excitotoxicidad mediada por glutamato.
- Razoxano
- Inhibe la topoisomerasa II sin inducir roturas de cadenas de ADN (inhibidor catalítico de topo II).
- Suptopina-2
- Supresor de la inhibición de topoisomerasa II. Invierte la detención del ciclo celular; evita la función del punto de regulación. Tiene fluorescencia inherente y una ventaja distinta en la identificación de dianas de molécula; concentración eficaz en el intervalo de µM.
- 3. Enzimas
- 3.1. Caspasas
- Inhibidor de la apoptosis; 2-(pmetoxibencil)-3,4-pirrolidindiol-3acetato
- Efectos atribuibles a la inhibición de la activación de caspasa-3
- clAP-1, humano, recombinante, E. coli
- clAP-1 humano recombinante (aminoácidos 1-618) fusionado con la secuencia de péptidos MATVIDH10SSNG en el extremo N y expresado en E. coli. clAP es un miembro del inhibidor de la familia de apoptosis de proteínas que inhibe la actividad proteolítica de caspasas maduras por interacción del dominio de BIR con la caspasa activa
- CrmA, recombinante
- CrmA (modificador A de la respuesta de serpina citocinas virales de la viruela vacuna) se purifica de E. coli transformado con una construcción que contiene la región codificante de longitud completa del gen CrmA y 7 aminoácidos adicionales que no afectan la actividad. CrmA es un inhibidor natural de caspasa-1 humana y granzima B, enzimas que participan en la apoptosis
- Inhibidor de la caspasa I del grupo III
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de
- Secuencia de péptidos:
- caspasas del grupo III (caspasa-6, -8, -9 y -10), aunque más eficaz
- Ac-Ile-Glu-Pro-Asp-CHO, Ac-IEPD
- hacia las caspasas-6 y -8. También inhibe la caspasa-1 y la caspasa-3.
- CHO,
- Si se usa con enzima nativa o recombinante purificada, se requiere
- Inhibidor III de la caspasa-8
- pretratamiento con una esterasa.
- Campferol
- Un fitoestrógeno permeable a las células que inhibe la religación de ADN catalizada por topoisomerasa I en células HL-60. Ofrece protección contra la muerte celular inducida por Aβ25-35 en neuronas corticales neonatales. Sus efectos protectores son comparables a los del estradiol. Bloquea la activación inducida por Aβ de caspasa-2, -3, -8 y -9, y reduce la apoptosis neuronal inducida por NMDA. Se informó que era un potente inhibidor de monoamina oxidasas. Actúa de inhibidor de la actividad de COX-1 (CI50 = 180 µM), y de la activación transcripcional de COX-2 (CI50<15 µM
- Q-VD-OPH
- General, Pancaspasa
- Boc-D(OMe)-FMK
- General, Pancaspasa
- Z-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK
- Caspasa 3, 7
- Z-LE(OMe)TD(OMe)-FMK
- Caspasa 8
- Z-YVAD(OMe)-FMK
- Caspasa 1, 4
- Z-FA-FMK
- Inhibe catepsina B
- Z-FF-FMK
- Catepsina B, L
- Mu-PheHphe-FMK
- Catepsina B, L
- Z-AE(OMe)VD(OMe)-FMK
- Caspasa 10
- Z-ATAD(OMe)-FMK
- Caspasa 12
- Z-VK(Biotina)-D(OMe)-FM K
- Caspasa general
- Z-LE(OMe)VD(OMe)-FMK
- Caspasa 4
- Z-VAM-FMK
- Inhibidor de péptidos antivirales, inhibe HRV2 y HRV14
- 4'-Azidocitidina
- Inhibidor del VHC
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- Inhibidor I de la caspasa-13 Secuencia de péptidos: Ac-Leu-Glu-Glu-Asp-CHO
- Un potente inhibidor reversible de la caspasa-13 (ERICE).
- Inhibidor II de la caspasa-13
- Un inhibidor irreversible permeable a las células de caspasa-13. Si se
- Secuencia de péptidos:
- usa con enzima nativa o recombinante purificada, se requiere
- Z-Leu-Glu(OMe)-Glu(OMe)
- pretratamiento con una esterasa.
- Asp(OMe)-FMK
- Inhibidor I de la caspasa-1
- Un inhibidor potente, específico y reversible de la caspasa-1 (Ki = 200
- Secuencia de péptidos:
- pM para caspasa-1 recombinante humana), caspasa-4 y caspasa-5.
- Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-CHO
- Inhibe fuertemente la apoptosis inducida por anti-APO-1 en células L929-APO-1.
- Inhibidor I de la caspasa-1,
- Un inhibidor permeable a las células de la caspasa-1 (ICE; enzima
- permeable a las células
- conversora de interleucina-1β), caspasa-4 y caspasa-5. La secuencia
- Secuencia de péptidos:
- YVAD-CHO del extremo C de este péptido es un inhibidor altamente
- Ac-Ala-Ala-Val-Ala-Leu-Leu-Pro-Ala
- específico, potente y reversible de la caspasa-1 (Ki = 1 nM). La
- Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Leu-Ala-Pro
- secuencia del extremo N (residuos de aminoácidos 1-16) se
- Tyr-Val-Ala-Asp-CHO
- corresponde con la región hidrófoba (región h) del péptido señal del factor de crecimiento de fibroblastos de Kaposi (K-FGF) y confiere permeabilidad celular al péptido
- Inhibidor II de la caspasa-1 Secuencia de péptidos: Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-CMK
- Un inhibidor permeable a las células e irreversible de la caspasa-1 (Ki = 760 pM), caspasa-4 y caspasa-5. Inhibe la apoptosis mediada por Fas y la activación de esfingomielinasa ácida
- Inhibidor IV de la caspasa-1
- Un inhibidor altamente selectivo, competitivo, permeable a las células e
- Secuencia de péptidos:
- irreversible de la caspasa-1, caspasa-4 y caspasa-5. Inactiva la enzima
- Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-AOM (AOM =
- con una tasa limitada por difusión y es relativamente inerte hacia otros
- 2,6-dimetilbenzoiloximetilcetona)
- bionucleófilos tales como glutatión, haciéndolo un candidato excelente para estudios in vivo de inhibición de enzimas
- Inhibidor V de la caspasa-1 Secuencia de péptidos: Z-Asp-CH2-DCB
- Un potente inhibidor de proteasas del tipo caspasa-1. Bloquea la muerte celular apoptósica en células U937 de leucemia mieloide humana y bloquea la fragmentación de ADN inducida por etopósido
- Inhibidor VI de la caspasa-1 Secuencia de péptidos: Z-Tyr-Val-Ala-Asp(OMe)-CH2F*
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de la caspasa-1 (ICE), caspasa-4 y caspasa-5
- Inhibidor de la caspasa-2
- Un inhibidor permeable a las células e irreversible de la caspasa-2
- Secuencia de péptidos:
- (ICH-1
- Z-Val-Asp(OMe)-Val-Ala-Asp(OMe)-
- CH2F*
- Inhibidor II de la caspasa-2 Secuencia de péptidos: Ac-Leu-Asp-Glu-Ser-Asp-CHO
- Un inhibidor reversible de caspasa-2 y caspasa-3
- Inhibidor I de caspasa-3/7
- Un inhibidor reversible potente, permeable a las células y específico de
- Secuencia de péptidos:
- la caspasa-3 (Ki = 60 nM) y caspasa-7 (Ki = 170 nM).
- 5-[(S)-(+)-2
- (Metoximetil)pirrolidino]sulfonilisatina
- Inhibidor I de la caspasa-3 Secuencia de péptidos: Ac-Asp-Glu-Val-Asp-CHO
- Un inhibidor muy potente, específico e reversible de la caspasa-3 (CI50 = 200 pM), caspasa-6, caspasa-7, caspasa-8 y caspasa-10.
- Inhibidor I de la caspasa-3, permeable a las células Secuencia de péptidos: Ac-Ala-Ala-Val-Ala-Leu-Leu-Pro-Ala-Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Leu-Ala-Pro-Asp-Glu-Val-Asp-CHO
- Un inhibidor permeable a las células de la caspasa-3, además de caspasa-6, caspasa-7, caspasa-8 y caspasa-10. La secuencia DEVD-CHO del extremo C de este péptido es un inhibidor altamente específico, potente y reversible de la caspasa-3 (Ki < 1 nM) que también se ha mostrado que inhibe fuertemente la escisión de PARP en extractos de células de osteosarcoma humano cultivado (CI50 = 200 pM). La secuencia del extremo N (residuos de aminoácidos 1-16) se corresponde con la región hidrófoba (región h) del péptido señal del factor de crecimiento de fibroblastos de Kaposi (K-FGF) y confiere permeabilidad celular al péptido. También está disponible una solución 5 mM (1 mg/100 µl) de inhibidor I de la caspasa-3, permeable a las células (Cat. N.º 235427) en DMSO.
- Inhibidor II de la caspasa-3 Secuencia de péptidos: Z-Asp(OCH3)-Glu(OCH3)-Val-Asp(OCH3)-FMK
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de la caspasa-3, además de caspasa-6, caspasa-7, caspasa-8 y caspasa-10. Si se usa con enzima nativa o recombinante purificada, se requiere pretratamiento con una esterasa. También está disponible una solución 5 mM (250 µg/75 µl) de Z-DEVD-FMK (Cat. N.º 264156) en DMSO
32
- Inhibidor III de la caspasa-3 Secuencia de péptidos: Ac-Asp-Glu-Val-Asp-CMK
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de la caspasa-3, además de caspasa-6, caspasa-7, caspasa-8 y caspasa-10
- Inhibidor IV de la caspasa-3
- Un inhibidor específico de la caspasa-3. Este inhibidor de tetrapéptido
- Secuencia de péptidos.
- se ha usado con el inhibidor de la caspasa-6 Ac-VEID-CHO para
- Ac-Asp-Met-Gln-Asp-CHO
- analizar minuciosamente la vía de activación de la caspasa en células de Jurkat estimuladas por Fas
- Inhibidor V de la caspasa-3 Secuencia de péptidos: Z-Asp(OMe)-Gln-Met-Asp(OMe)-CH2F*
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de la caspasa-3, también reconoce caspasa-1. Si se usa con enzima nativa o recombinante purificada, se requiere pretratamiento con una esterasa.
- Inhibidor VII de la caspasa-3 Secuencia de péptidos: Acetato de 2-(4-metil-8-(morfolin-4ilsulfonil)-1,3-dioxo-1,3-dihidro-2Hpirrolo[3,4-c]quinolin-2-il)etilo
- Un compuesto de pirroloquinolina no de peptidilo permeable a las células que actúa de inhibidor potente, reversible y no competitivo de la caspasa-3 (CI50 = 23 nM) con selectividad 10-100 veces mayor. Se muestra que presenta mayor actividad antiapoptósica que Z-VAD-FMK (Cat. N.º 627610) en un modelo de apoptosis inducida por estaurosporina (Cat. N.º 569397) en linfocitos T de Jurkat humanos.
- Inhibidor I de la caspasa-4 Secuencia de péptidos: Ac-Leu-Glu-Val-Asp-CHO
- Un inhibidor reversible de la caspasa-4
- Inhibidor I de la caspasa-4,
- Un inhibidor potente, permeable a las células y reversible de la
- permeable a las células
- caspasa-4. La secuencia del extremo N (residuos de aminoácidos 1-16)
- Secuencia de péptidos:
- se corresponde con la región hidrófoba del péptido señal del factor de
- Ac-Ala-Ala-Val-Ala-Leu-Leu-Pro-Ala
- crecimiento de fibroblastos de Kaposi y confiere permeabilidad celular
- Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Leu-Ala-Pro
- al péptido.
- Leu-Glu-Val-Asp-CHO
- Inhibidor I de la caspasa-5
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de la
- Secuencia de péptidos:
- caspasa-5. Inhibe fuertemente la caspasa-1. También inhibe la
- Z-Trp-Glu(OMe)-His-Asp(OMe)
- caspasa-4 y la caspasa-8
- CH2F*
- Inhibidor I de la caspasa-6 Secuencia de péptidos: Z-Val-Glu(OMe)-Ile-Asp(OMe)-CH2F*
- Un inhibidor irreversible permeable a las células de la caspasa-6. Si se usa con enzima nativa o recombinante purificada, se requiere pretratamiento con una esterasa
- Inhibidor II de la caspasa-6,
- Un inhibidor potente, permeable a las células y reversible de la
- permeable a las células
- caspasa-6. La secuencia del extremo N (aminoácidos 1-16) se
- Secuencia de péptidos:
- corresponde con la región hidrófoba del péptido señal del factor de
- Ac-Ala-Ala-Val-Ala-Leu-Leu-Pro-Ala
- crecimiento de fibroblastos de Kaposi y confiere permeabilidad celular
- Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Leu-Ala-Pro
- al péptido
- Val-Glu-Ile-Asp-CHO
- Inhibidor I de la caspasa-8,
- Un inhibidor potente, permeable a las células y reversible de la
- permeable a las células
- caspasa-8 y la granzima B. La secuencia del extremo N (aminoácidos
- Secuencia de péptidos:
- 1-16) se corresponde con la región hidrófoba del péptido señal del
- Ac-Ala-Ala-Val-Ala-Leu-Leu-Pro-Ala
- factor de crecimiento de fibroblastos de Kaposi y confiere
- Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Leu-Ala-Pro-Ile
- permeabilidad celular al péptido
- Glu-Thr-Asp-CHO
- Inhibidor II de la caspasa-8 Secuencia de péptidos: Z-Ile-Glu(OMe)-Thr-Asp(OMe)-CH2F*
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de la caspasa-8 y la granzima B. Inhibe eficazmente la apoptosis inducida por el virus de la gripe en células HeLa. También inhibe la granzima B. Si se usa con enzima nativa o recombinante purificada, se requiere pretratamiento con una esterasa. También está disponible una solución 5 mM (250 µg/76 µl) de Z-IETD-FMK (Cat. N.º 218840) en DMSO.
- Inhibidor I de la caspasa-9 Secuencia de péptidos: Z-Leu-Glu(OMe)-His-Asp(OMe)-CH2F*
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de la caspasa-9. También puede inhibir la caspasa-4 y la caspasa-5. Si se usa con enzima nativa o recombinante purificada, se requiere pretratamiento con una esterasa. También está disponible una solución 5 mM (250 µg/72 µl) de Z-LEHD-FMK (Cat. N.º 218841) en DMSO
- Inhibidor II de la caspasa-9, permeable a las células Secuencia de péptidos: Ac-Ala-Ala-Val-Ala-Leu-Leu-Pro-Ala-Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Leu-Ala-Pro-Leu-Glu-His-Asp-CHO
- Un inhibidor potente, permeable a las células y reversible de la caspasa-9. También puede inhibir la caspasa-4 y la caspasa-5. La secuencia del extremo N (aminoácidos 1-16) se corresponde con la región hidrófoba del péptido señal del factor de crecimiento de fibroblastos de Kaposi y confiere permeabilidad celular al péptido
- Inhibidor III de la caspasa-9 Secuencia de péptidos: Ac-Leu-Glu-His-Asp-CMK
- Un potente inhibidor irreversible de la caspasa-9. Se informó que reducía el tamaño del infarto de miocardio durante la reperfusión (~70 nM).
33
- Inhibidor de la caspasa I
- Un inhibidor irreversible permeable a las células de la pan-caspasa.
- Secuencia de péptidos:
- Inhibe la apoptosis mediada por Fas en células de Jurkat y muerte
- Z-Val-Ala-Asp(OMe)-CH2F*
- celular inducida por estaurosporina en células epiteliales de la córnea. Si se usa con enzima nativa o recombinante purificada, se requiere pretratamiento con una esterasa.
- Inhibidor de la caspasa II Secuencia de péptidos: Ac-Val-Ala-Asp-CHO
- Un inhibidor potente y reversible de la pan-caspasa.
- Inhibidor de la caspasa II, permeable a las células Secuencia de péptidos: Ac-Ala-Ala-Val-Ala-Leu-Leu-Pro-Ala-Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Leu-Ala-Pro-Val-Ala-Asp-CHO
- Un inhibidor reversible permeable a las células de la pan-caspasa producido uniendo la secuencia del extremo N (aminoácidos 1-16) del péptido de señalización del factor de crecimiento de fibroblastos de Kaposi, que confiere permeabilidad celular al péptido VAD.
- Inhibidor de la caspasa III Secuencia de péptidos: Boc-Asp(OMe)-CH2F*
- Un inhibidor permeable a las células, irreversible, de amplio espectro de la caspasa.
- Inhibidor de la caspasa IV Secuencia de péptidos: Boc-Asp(OBzI)-CMK
- Un inhibidor irreversible general de la caspasa.
- Inhibidor de la caspasa VI
- Un inhibidor general irreversible de la caspasa. Útil para estudios que
- Secuencia de péptidos:
- implican enzimas caspasas recombinantes, aisladas y purificadas. A
- Z-Val-Ala-Asp-CH2F*
- diferencia del inhibidor de la caspasa I (Cat. N.º 627610), este inhibidor no requiere pretratamiento con esterasa para estudios in vitro. También está disponible una solución 10 mM (1 mg/221 µl) de inhibidor de la caspasa VI (Cat. N.º 219011) en DMSO
- Inhibidor de la caspasa VIII Secuencia de péptidos: Ac-Val-Asp-Val-Ala-Asp-CHO
- Un inhibidor reversible potente de la caspasa-2 (Ki = 3,5 nM), caspasa3 (Ki = 1 nM) y caspasa-7 (Ki = 7,5 nM). También sirve de inhibidor de DRONC (caspasa de Drosophila), una glutamato/aspartato proteasa.
- Inhibidor de la caspasa X Secuencia de péptidos: BI-9B12
- Un compuesto de tiazolo 2,4-disustituido que contiene benzodioxano que actúa de inhibidor selectivo, reversible y competitivo de caspasas (Ki = 4,3 µM, 6,2 µM y 2,7 µM para caspasa-3, -7 y -8, respectivamente). Se muestra que el resto de benzodioxano se ajusta en el 'orificio de aspartato' de las caspasas y posiblemente rompe la escisión asistida por caspasa-8 de BID, una proteína proapoptósica. Afecta débilmente la actividad del factor letal del carbunco, una metaloproteasa, a ∼20 µM
- Inhibidores de la caspasa-1
- Que incluyen, pero no se limitan a Ac-N-Me-Tyr-Val-Ala-Asp-aldehído (pseudo ácido) Ac-Trp-Glu-His-Asp-aldehído (pseudo ácido) Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-aldehído (pseudo ácido) Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-clorometilcetona Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-2,6-dimetilbenzoiloximetilcetona Ac-Tyr-Val-Ala-Asp(OtBu)-aldehído-dimetilacetal Ac-Tyr-Val-Lys-Asp-aldehído (pseudo ácido) Ac-Tyr-Val-Lys(biotinil)-Asp-2,6-dimetilbenzoiloximetilcetona Biotinil-Tyr-Val-Ala-Asp-clorometilcetona Biotinil-Val-Ala-DL-Asp-fluorometilcetona Fluoresceína-6-carbonil-Tyr-Val-Ala-DL-Asp(OMe)-fluorometilcetona Fluoresceína-6-carbonil-Val-Ala-DL-Asp(OMe)-fluorometilcetona Z-Asp-2,6-diclorobenzoiloximetilcetona Z-Tyr-Val-Ala-Asp-clorometilcetona Z-Val-Ala-DL-Asp-fluorometilcetona Z-Val-Ala-DL-Asp(OMe)-fluorometilcetona
- Inhibidores de la caspasa-2
- Que incluyen, pero no se limitan a Ac-Val-Asp-Val-Ala-Asp-aldehído (pseudo ácido) Fluoresceína-6-carbonil-Val-Asp(OMe)-Val-Ala-DL-Asp(OMe)fluorometilcetona Z-Val-Asp(OMe)-Val-Ala-DL-Asp(OMe)-fluorometilcetona
- Inhibidores de proteasas del precursor de la caspasa-3
- Que incluyen, pero no se limitan a Ac-Glu-Ser-Met-Asp-aldehído (pseudo ácido) Ac-Ile-Glu-Thr-Asp-aldehído (pseudo ácido)
34
- Inhibidores de la caspasa-3
- Que incluyen, pero no se limitan a Ac-Asp-Glu-Val-Asp-aldehído (pseudo ácido) Ac-Asp-Met-Gln-Asp-aldehído (pseudo ácido) Biotinil-Asp-Glu-Val-Asp-aldehído (pseudo ácido) Inhibidor II de la caspasa-3/7 Fluoresceína-6-carbonil-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-DL-Asp(OMe)fluorometilcetona Z-Asp(OMe)-Gln-Met-DL-Asp(OMe)-fluorometilcetona Z-Asp-Glu-Val-Asp-clorometilcetona Z-Asp(OMe)-Glu(OMe)-Val-DL-Asp(OMe)-fluorometilcetona
- Inhibidores de la caspasa-4
- Que incluyen, pero no se limitan a Ac-Leu-Glu-Val-Asp-aldehído (pseudo ácido) Z-Tyr-Val-Ala-DL-Asp-fluorometilcetona
- Inhibidores de la caspasa-6
- Que incluyen, pero no se limitan a Ac-Val-Glu-Ile-Asp-aldehído (pseudo ácido) Fluoresceína-6-carbonil-Val-Glu(OMe)-Ile-DL-Asp(OMe)fluorometilcetona Z-Val-Glu(OMe)-Ile-DL-Asp(OMe)-fluorometilcetona
- Inhibidores de la caspasa-8
- Que incluyen, pero no se limitan a Ac-Ile-Glu-Pro-Asp-aldehído (pseudo ácido) Boc-Ala-Glu-Val-Asp-aldehído (pseudo ácido) Fluoresceína-6-carbonil-Ile-Glu(OMe)-Thr-DL-Asp(OMe)fluorometilcetona Fluoresceína-6-carbonil-Leu-Glu(OMe)-Thr-DL-Asp(OMe)fluorometilcetona Z-Ile-Glu(OMe)-Thr-DL-Asp(OMe)-fluorometilcetona Z-Leu-Glu(OMe)-Thr-DL-Asp(OMe)-fluorometilcetona Z-LE(OMe)TD(OMe)-FMK
- Inhibidores de la caspasa-9
- Que incluyen, pero no se limitan a Ac-Leu-Glu-His-Asp-aldehído (pseudo ácido) Ac-Leu-Glu-His-Asp-clorometilcetona Fluoresceína-6-carbonil-Leu-Glu(OMe)-His-DL-Asp(OMe)fluorometilcetona
- Inhibidores de la caspasa-10
- Que incluyen, pero no se limitan a Fluoresceína-6-carbonil-Ala-Glu(OMe)-Val-DL-Asp(OMe)fluorometilcetona Z-Ala-Glu-Val-DL-Asp-fluorometilcetona
- 3.2. Calpaína
- Inhibidor III de la calpaína Secuencia de péptidos: Z-Val-Phe-CHO
- Un potente inhibidor permeable a las células de la calpaína I y II (Ki = 8 nM). Reduce la muerte celular mediada por capsaicina en ganglios de la raíz dorsal cultivados. Se informa se bloquea la supresión inducida por A23187 del crecimiento hacia afuera de axones en neuronas piramidales hipocámpicas aisladas. Presenta efecto neuroprotector en toxicidad inducida por glutamato.
- Inhibidor IV de la calpaína Secuencia de péptidos: Z-Leu-Leu-Tvr-CH2F
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de la calpaína II (k2 = 28.900 M-1s-1). También actúa de inhibidor de la catepsina L (k2 = 680.000 M-1s-1).
- Inhibidor V de la calpaína
- Un inhibidor potente, permeable a las células e irreversible de la
- Secuencia de péptidos:
- calpaína
- Mu-Val-HPh-CH2F (Mu =
- morfolinoureidilo; HPh =
- homofenilalanilo)
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- Ac-Leu-Leu-Nle-al
- Inhibidor del péptido aldehído permeable a las células de la calpaína I (Ki=190nM), calpaína II (Ki=150nM), catepsina L (Ki=0,5nM) y otras cisteína proteasas neutras. Inhibe la progresión del ciclo celular en G1/S y la metafase/anafase en células CHO, inhibiendo la degradación de ciclina B. También estimula la transcripción de HMG-CoA sintasa, inhibiendo la degradación de SREBP-1 activo (proteína 1 de unión al regulador del elemento de esterol). Protege contra el daño neuronal producido por hipoxia e isquemia. Inhibe la apoptosis en timocitos y metamielocitos. También previene la producción de óxido nítrico por macrófagos activados, interfiriendo con la transcripción de óxido nítrico sintasa inducible (iNOS; NOS II). Inhibe la degradación proteolítica de IkBalfa e IkBß en macrófagos RAW inducida con LPS. También prolonga la asociación de moléculas de MHC clase I con los transportadores asociados al procesamiento de antígenos
- Z-LLY-FMK
- Calpaína
- N-Acetil-Leu-Leu-Met
- Calpaína I
- N-Acetil-Leu-Leu-Nle-CHO
- Calpaína I
- 3.3. Otros
- BAPTA/AM
- Forma permeable a la membrana de BAPTA. Puede cargarse en una amplia variedad de células, en las que se hidroliza por esterasas citosólicas y se atrapa intracelularmente como el quelante activo BAPTA. Previene las fibrilaciones ventriculares inducidas por la cocaína. Abole el aumento inducido por vitamina D3 en Ca2+ intracelular. Induce la inactivación de proteína cinasa C. También inhibe la apoptosis inducida por tapsigargina en timocitos de rata.
- Inhibidor I de la granzima B
- Un inhibidor débil de la granzima B humana y murina. También inhibe
- Secuencia de péptidos:
- la fragmentación de ADN relacionada con la apoptosis en linfocitos por
- Z-Ala-Ala-Asp-CH2Cl
- fragmentina 2, una proteasa de gránulos de linfocitos de rata homóloga a la granzima B (ID50 = 300 nM).
- Inhibidor II de la granzima B Secuencia de péptidos: Ac-Ile-Glu-Thr-Asp-CHO
- Un potente inhibidor reversible de la granzima B y caspasa-8 (Ki = 1 nM). También inhibe caspasa-1 (<6 nM), caspasa-6 (5,6 nM) y caspasa-10 (27 nM).
- Inhibidor IV de la granzima B Secuencia de péptidos: Ac-Ile-Glu-Pro-Asp-CHO
- Un inhibidor reversible de la granzima B y la caspasa-8
- Leupeptin, hemisulfato, microbiano
- Un inhibidor reversible de proteasas del tipo tripsina y cisteína proteasas. También se sabe que inhibe la muerte celular programada inducida por la activación y restaura respuestas inmunitarias defectuosas de donantes VIH+
- N-Etilmaleimida
- Reactivo alquilante de sulfhidrilo que inhibe H+-ATPasa y suprime la corriente de cortocircuito (CI50 = 22 µM) en células del conducto pancreático. Inactiva la isocitrato deshidrogenasa dependiente de NADP. También un potente inhibidor de la fragmentación de ADN estimulada tanto con Mg2+ como Ca2+/Mg2+ en núcleos de hígado de rata. Estimula la liberación de ácido araquidónico mediante la activación de PLA2 en células endoteliales
- Clorhidrato de Nα-tosil-Lys clorometil cetona, (TLCK)
- Inhibe serina proteinasas del tipo tripsina. Inactiva irreversiblemente la tripsina sin afectar la quimotripsina. Previene la producción de óxido nítrico por macrófagos activados interfiriendo con la transcripción del gen iNOS. Bloquea la adhesión célula-célula y la unión del virus del VIH-1 a las células diana. En macrófagos, bloquea la óxido nítrico sintasa inducida por interferón-γ y lipopolisacáridos (EC50 = 80 µM). Previene la endonucleólisis que acompaña a la muerte apoptósica de células de leucemia HL-60 y timocitos normales
- Inhibidor de la proteasa Omi/HtrA2, Ucf-101
- Un compuesto de ácido furfurilidin-tiobarbitúrico permeable a las células que actúa de inhibidor potente, específico, competitivo y reversible de la serina proteasa mitocondrial inducible por calor proapoptósica Omi/HtrA2 (CI50 = 9,5 µM para His-Omi134-458). Muestra muy poca actividad contra diversas otras serina proteasas probadas (CI50 ≥ 200 µM). Se informa que bloquea la muerte celular inducida por Omi/HtrA2 en fibroblastos nulos para caspasa-9 (-/-).
36
- Fenilarsina óxido
- Un inhibidor de la proteína tirosina fosfatasa permeable a la membrana (CI50 = 18 µM). Estimula el transporte de 2-desoxiglucosa en músculo esquelético humano resistente a insulina y activa la proteína tirosina cinasa p56Ick. Bloquea la activación dependiente de TNF-α de NF-κB en células ML-1a mieloides humanas. La PAO inhibe las actividades de proteasas de caspasas humanas recombinantes, además de caspasas endógenas que son activas en extractos de células DU249 de pollo pre-apoptósicas (extractos S/M).
- Forbol-12,13-dibutirato
- Fuerte irritante para la piel de ratón, pero solo moderadamente activo como promotor tumoral. Activa la proteína cinasa C. Estimula la fosforilación de Na+,K+-ATPasa, inhibiendo así su actividad. Promueve la expresión de NOS inducible en hepatocitos cultivados. Se usa comúnmente en estudios de unión o en aplicaciones que requieren altas concentraciones de compuestos de forbol.
- Hipericina
- Inhibe PKC, CKII, MAP cinasa, insulina R, EGFR, PI-3 cinasa y también se observa que posee actividad antiviral.
- Butirolactona I
- Un inhibidor permeable a las células y altamente selectivo de proteínas cinasas dependientes de ciclina (Cdks) que inhibe la progresión del ciclo celular en las transiciones G1/S y G2/M. Inhibe p34cdk1/ciclina B (Cdk1; CI50 = 680 nM). También inhibe selectivamente Cdk2 y Cdk5 cinasas. Tiene poco efecto sobre la caseína cinasa I, caseína cinasa II, cinasa de receptor de EGF, MAP cinasa, PKA y PKC. Se muestra que previene la fosforilación de proteína del retinoblastoma e histona H1. También bloquea la apoptosis inducida por Fas en células HL-60 y muestra efectos antitumorales sobre líneas celulares de cáncer de pulmón humano
- Nilotinib
- Inhibidor específico de BCR-ABL-tirosina cinasa
- Quercetina (soforetina)
- La quercetina es un inhibidor de PI3K y PKC con CI50 de 3,8 µM y 15 µg/ml. Abolió fuertemente las cinasas PI3K y Src, inhibió moderadamente Akt1/2 y afectó ligeramente PKC, p38 y ERK1/2. [1][2] La quercetina es un inhibidor del transporte de auxina polar que existe de forma natural con CI50 de 0,8, 16,7, 6,1, 11,36 µM para la inhibición de la liberación en % de LDH , la inhibición de la adhesión PMN-EC inducida por TNF, inhibición inducida por TNF de la síntesis y proliferación de ADN. Es un tipo de producto químico basado en planta, o fitoquímico, conocido como flavonol y un flavonoide derivado de planta encontrado en frutas, verduras, hojas y granos. También puede usarse como componente en suplementos, bebidas o alimentos. En varios estudios, puede tener propiedades antiinflamatorias y antioxidantes, y está siendo investigada para una amplia variedad de posibles beneficios para la salud.
Ejemplos
Los ejemplos describen realizaciones, en tanto que estén englobadas por las reivindicaciones. Los restantes ejemplos ilustran la tecnología. Debe entenderse que estos ejemplos son para fin ilustrativo solo y no deben 5 interpretarse de ninguna manera como limitantes de la presente invención.
I. Materiales y métodos
Se diseñó un sistema de prueba, en el que muestras biológicas que contienen células, aquí muestras de sangre
10 completa, se incubaron a temperatura ambiente (TA) durante hasta 6 o 7 días. En este respecto, las propiedades estabilizantes de la muestra de los aditivos de la presente invención se probaron en el día 0, día 3 y día 6/7 en las muestras. Las muestras se procesaron según los siguientes protocolos, si procede (para detalles véanse también los ejemplos específicos en la sección de resultados):
15 1. Medición de la integridad de los glóbulos sanguíneos por citometría de flujo activada por fluorescencia (FACS)
20 -Transferir 2 ml de muestra de sangre a un tubo Falcon de 15 ml nuevo
-Adición de 5 veces tampón EL (QIAGEN)
-Invertir la muestra (10 X)
-Incubación sobre hielo (10 min)
-Centrifugación durante 10 min a 400 x g y 4 ºC
37
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-
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