JP2010065008A

JP2010065008A - 抗男性ホルモン剤、及び毛乳頭細胞増殖促進剤、並びに頭皮頭髪用外用剤

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Publication number: JP2010065008A
Application number: JP2008235411A
Authority: JP
Inventors: Nobuaki Oto; 信明大戸
Original assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2008-09-12
Filing date: 2008-09-12
Publication date: 2010-03-25
Anticipated expiration: 2028-09-12
Also published as: JP5889506B2

Abstract

【課題】テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性に優れた抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤の提供。
【解決手段】バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、及びキンミズヒキの抽出物の少なくとも１種を含有する抗男性ホルモン剤、及びバイベリーの抽出物、及びブルーベリーの抽出物の少なくとも１種を含有する毛乳頭細胞増殖促進剤、並びにこれらを含有する頭皮頭髪用外用剤である。
【選択図】なし

Description

本発明は、抗男性ホルモン剤、及び毛乳頭細胞増殖促進剤、並びに該抗男性ホルモン剤、及び毛乳頭細胞増殖促進剤の少なくともいずれかを含む頭皮頭髪用外用剤に関する。

多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−レダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）に還元されてから受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。

前記アンドロゲンは重要な男性ホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等のさまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、従来、これらの各種症状を改善するために過剰のアンドロゲンの作用を抑制する方法、具体的には、（１）テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−レダクターゼの作用を阻害することにより、活性な５α−ＤＨＴが生じるのを抑制する方法や、（２）テストステロンから生じた５α−ＤＨＴが受容体と結合するのを阻害することによりアンドロゲン活性を発現させない方法が提案されている。
前記（１）のテストステロン−５αリダクターゼ活性阻害作用を有する生薬の抽出物としては、例えば、ウルシ科Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属植物の抽出物（特許文献１参照）、マジトの抽出物及びカチュアの抽出物（特許文献２参照）、五斂子の抽出物（特許文献３参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓、及び穿心蓮から選択されるいずれかの抽出物（特許文献４参照）、などが提案されている。
前記（２）の５α−ＤＨＴとその受容体との結合を阻害する作用を有する植物抽出物としては、例えば、マジト及びカチュアの少なくともいずれかの抽出物などが知られている（特許文献５参照）。

また、毛髪の成長は、成長期、退行期、休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期へかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖乃至分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞へ働きかけてその増殖を促す等の、毛髪への分化に重要な役割を担っている（非特許文献１参照）。
このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖乃至分化及び毛髪の形成において最も重要な役割を果たしており、例えば、毛乳頭細胞に対象物質を接触させて、その細胞の増殖活性の有無、あるいは強弱を特定することで、その対象物質の育毛効果を検定する方法が提案されている（特許文献６参照）。また、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する生薬としては、例えばハトムギ抽出物、ワイルドタイム抽出物、スギナ抽出物、ショウブ抽出物、ローズマリー抽出物、ウコン抽出物、シラカバ抽出物、コウチャ抽出物などが提案されている（特許文献７参照）。

しかしながら、現在までのところ、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、味、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、頭皮頭髪用外用剤に広く使用可能な抗男性ホルモン剤、及び毛乳頭細胞増殖促進剤は未だ提供されておらず、その速やかな提供が強く求められているのが現状である。

特開２００３−０５５１６２号公報特開２００２−２４１２９７号公報特開２００２−２４１２９６号公報特開２００２−０８７９７６号公報特開２００２−２４１２９７号公報特開平１０−２２９９７８号公報特開２００６−２１９４０７号公報「ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ」，１９９２年，第８巻，ｐ．５６−６１

本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、第１に、優れたテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲン受容体拮抗作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系の抗男性ホルモン剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第２に、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系の毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することを目的とする。
本発明は、第３に、本発明の前記抗男性ホルモン剤、及び前記毛乳頭細胞増殖促進剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した頭皮頭髪用外用剤を提供することを目的とする。

前記課題を解決するため本発明者が、入手が容易で安価であり、安全性の高い天然物系のものであって、匂い、使用感等の点で添加対象物の品質に悪影響を及ぼさず、頭皮頭髪用外用剤に広く使用可能な抗男性ホルモン剤及び毛乳頭細胞増殖促進剤について鋭意検討を重ねた結果、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物の少なくとも１種が、（１）優れたテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲン受容体拮抗作用の少なくともいずれかを有し、抗男性ホルモン剤として有用であること、及び（２）優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有し、毛乳頭細胞増殖促進剤として有用であることを、それぞれ知見した。

本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、及びキンミズヒキの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする抗男性ホルモン剤である。
＜２＞テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲン受容体拮抗作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗男性ホルモン剤である。
＜３＞バイベリーの抽出物、及びブルーベリーの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤である。
＜４＞毛乳頭細胞増殖促進作用を有する前記＜３＞に記載の毛乳頭細胞増殖促進剤である。
＜５＞前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の抗男性ホルモン剤、及び前記＜３＞から＜４＞のいずれかに記載の毛乳頭細胞増殖促進剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする頭皮頭髪用外用剤である。

本発明によると、第１に、優れたテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲン受容体拮抗作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗男性ホルモン剤を提供することができる。
また、本発明によると、第２に、優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系毛乳頭細胞増殖促進剤を提供することができる。
また、本発明によると、第３に、本発明の前記抗男性ホルモン剤、及び前記毛乳頭細胞増殖促進剤の少なくともいずれかを有効成分として配合した頭皮頭髪用外用剤を提供することができる。

（抗男性ホルモン剤及び毛乳頭細胞増殖促進剤）
本発明の抗男性ホルモン剤は、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、及びキンミズヒキの抽出物の少なくとも１種を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記抗男性ホルモン剤は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲン受容体拮抗作用の少なくともいずれかに基づく抗男性ホルモン作用を有するものである。
前記バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、及びキンミズヒキの抽出物の各抽出物が含有する、抗男性ホルモン作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物抽出物がこのような優れた作用を有し、抗男性ホルモン剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、バイベリーの抽出物、及びブルーベリーの抽出物の少なくとも１種を含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記バイベリーの抽出物、及びブルーベリーの抽出物の各抽出物が含有する、毛乳頭細胞増殖促進作用を発揮する物質の詳細については不明であるが、前記各植物抽出物がこのような優れた作用を有し、毛乳頭細胞増殖促進剤として有用であることは、従来には全く知られておらず、本発明者らによる新たな知見である。

前記バイベリー（学名：Ｍｙｒｉｃａｃｅｒｉｆｅｒａ）は、シロヤマモモとも呼ばれるヤマモモ科ヤマモモ属の植物である。
抽出原料として使用する前記バイベリーの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、根皮が特に好ましい。
前記フウトウカズラ（学名：Ｐｉｐｅｒｋａｄｚｕｒａ）は、コショウ科コショウ属の植物であり、本州（関東南部以西）〜沖縄に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記フウトウカズラの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、茎が特に好ましい。
前記キンミズヒキ（学名：Ａｇｒｉｍｏｎｉａｐｉｌｏｓａ）は、バラ科キンミズヒキ属の多年草であり、本州、四国、九州などの林の縁、原野、路傍に生息しており、容易に入手可能である。
抽出原料として使用する前記キンミズヒキの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、全草が好ましい。
前記ブルーベリー（学名：Ｖａｃｃｉｎｉｕｍｓｐｐ．）は、ツツジ科スノキ属に分類される北アメリカ原産の落葉低木果樹の総称である。
抽出原料として使用する前記ブルーベリーの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、花、蕾、果実、果皮、種子、種皮、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根、根茎、根皮、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、葉が好ましい。

抽出原料である前記各植物は、例えば、乾燥した後に、そのままの状態で又は粗砕機等を用いて粉砕した状態で、溶媒抽出に供することができる。中でも、前記抽出原料としては、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記各植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、前記各植物の極性溶媒による抽出処理を、効率よく行うことができる。

前記各植物の抽出物は、植物の抽出に一般に用いられる方法を利用することによって、容易に得ることができる。また、前記各植物の抽出物としては、市販品を使用してもよい。なお、前記各植物の抽出物には、前記各植物の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又は、これらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。

前記抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。前記各植物に含まれる抗男性ホルモン作用又は毛乳頭細胞増殖促進作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって、容易に抽出することができる。

前記抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

前記抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒なども用いることができる。なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。

抽出原料である前記各植物から、各抽出物を抽出するにあたって、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、前記各抽出原料を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜４時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物を得ることができる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０℃〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０℃〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分として用いることができる。

抽出により得られる前記各植物の抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るため、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。なお、得られる前記各植物の抽出液は、そのままでも抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、抽出原料である前記各植物は特有の匂いと味を有している場合があり、そのため、前記各植物の抽出物に対しては、生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、例えば頭皮頭髪用外用剤に添加する場合などには大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。

以上のようにして得られる前記各植物の抽出物は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有し、これらの作用に基づき、本発明の抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤の有効成分として好適に利用可能なものである。
前記抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤中の前記各植物の抽出物の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤は、前記各植物の抽出物そのものであってもよい。
また、前記抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤中、前記各植物の抽出物は、いずれか１種のみが含まれていてもよいし、２種以上が含まれていてもよい。前記抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤中に２種以上の植物抽出物が含まれる場合の、各々の含有量比としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

また、前記抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤中に含まれ得る、前記各植物の抽出物以外のその他の成分としても、本発明の効果を損なわない範囲内であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記各植物の抽出物を所望の濃度に希釈等するための、生理食塩液などが挙げられる。また、前記抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤中の前記その他の成分の含有量にも、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
また、前記抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤は、必要に応じて製剤化することにより、粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。

本発明の抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤は、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有すると共に、安全性に優れるため、例えば、後述する本発明の頭皮頭髪用外用剤などへの利用に好適である。

（頭皮頭髪用外用剤）
本発明の頭皮頭髪用外用剤は、本発明の前記抗男性ホルモン剤又は前記毛乳頭細胞増殖促進剤を含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。

前記抗男性ホルモン剤又は前記毛乳頭細胞増殖促進剤に含まれるバイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、キンミズヒキの抽出物、及びブルーベリーの抽出物の少なくともいずれかは、優れた抗男性ホルモン作用又は毛乳頭細胞増殖促進作用を有すると共に、使用感や安全性に優れているため、頭皮頭髪用外用剤に配合することによって、該頭皮頭髪用外用剤にテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを付与することができる。

前記頭皮頭髪用外用剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどが挙げられる。

前記頭皮頭髪用外用剤は、更に必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、その頭皮頭髪用外用剤の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他成分を添加することができる。

−その他の成分−
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、抗酸化剤、活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。

前記頭皮頭髪用外用剤中の前記抗男性ホルモン剤又は前記毛乳頭細胞増殖促進剤の含有量としては、特に制限はなく、頭皮頭髪用外用剤の種類や抽出物の生理活性等によって適宜選択することができるが、前記各抽出物に換算して０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜１質量％がより好ましい。

なお、本発明の抗男性ホルモン剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、及び頭皮頭髪用外用剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り特に制限はなく、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。

以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。

（製造例１）
−各植物の水抽出物の製造−
下記表１に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の水を加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の水抽出物（凍結乾燥品）を得た。
得られた各植物の水抽出物の「抽出率」を表１に示す。

（製造例２）
−各植物の５０質量％エタノール抽出物の製造−
下記表２に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の５０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の５０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。
得られた各植物の５０質量％エタノール抽出物の「抽出率」を表２に示す。

（製造例３）
−各植物の８０質量％エタノール抽出物の製造−
下記表３に示す各植物の粉砕物に、質量比で１０倍量（質量比）の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。残渣に同量の８０質量％エタノールを加え、８０℃で２時間加熱し、ろ過した。ろ液を濃縮、凍結乾燥して、各植物の８０質量％エタノール抽出物（凍結乾燥品）を得た。
得られた各植物の８０質量％エタノール抽出物の「抽出率」を表３に示す。

（実施例１）
−テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用試験−
前記バイベリーの５０質量％エタノール抽出物、前記フウトウガズラの５０質量％エタノール抽出物、及び前記キンミズヒキの５０質量％エタノール抽出物を被験試料として用い、下記の試験法によりテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を試験した。
まず、秤量蓋付Ｖ底試験管にて、プロピレングリコールで調製した４．２ｍｇ／ｍＬのテストステロン２０μＬ、及び１ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨ含有５ｍｍｏｌ／ＬのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬを混合した。これに、各被験試料溶液８０μＬ、及びラット肝ホモジネート（Ｓ−９）７５μＬを加え、再び混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止した。これを遠心分離（１６００×ｇ、１０分間）し、塩化メチレン層を下記の条件でガスクロマトグラフィー分析した。また、同様の方法で空試験を行った。

−ガスクロマトグラフィー分析−
予め、３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及びテストステロンの標準品の塩化メチレン溶液を同様にガスクロマトグラフィー分析し、これら３つの化合物の精秤量とピーク面積よりピーク面積あたりの化合物量を算出しておき、ラット肝ホモジネート（Ｓ−９）による反応後の３α−アンドロスタンジオール、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）、及びテストステロンのピーク面積あたりの濃度をそれぞれ求めた（下記数式１参照）。その後、下記数式２に従って、各試料溶液の変換率を求めた。得られた変換率に基づいて、下記数式３からテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率を求めた。

＜数式１＞
濃度（％）＝（試料溶液のピーク面積×標準品濃度）／標準品のピーク面積

＜数式２＞
変換率（％）＝（Ａ＋Ｂ）／（Ａ＋Ｂ＋Ｃ）
ただし、前記数式２中、Ａは、３α−アンドロスタンジオールの濃度を表す。Ｂは、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の濃度を表す。Ｃは、テストステロンの濃度を表す。

＜数式３＞
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率（％）＝（１−Ｅ／Ｄ）×１００
ただし、前記数式３中、Ｄは、空試験での変換率を表す。Ｅは、試料溶液添加での変換率を表す。

〔ガスクロマトグラフィーの条件〕
・使用機器：ＳｈｉｍａｄｚｕＧＣ−７Ａ（株式会社島津製作所製）
・カラム：ＤＢ−１７０１（直径０．５３ｍｍ×３０ｍ、膜厚：１．０μｍ）
・カラム温度／注入温度：２４０℃／３００℃
・検出器：ＦＩＤ
・キャリアガス：窒素ガス

次いで、各被験試料の試料濃度を段階的に減少させて、上記テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害率の測定を行い、テストステロン５α−レダクターゼ活性を５０％阻害する試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表４に示す。

表４の結果から、バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、及びキンミズヒキの抽出物が、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用を有することが分かった。また、テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認できた。

（実施例２）
−アンドロゲン受容体拮抗作用試験−
前記バイベリーの５０質量％エタノール抽出物を被験試料として用い、下記の試験法によりアンドロゲン受容体拮抗作用を試験した。
まず、マウス自然発生乳がん（シオノギ癌、ＳＣ１１５）よりクローニングされたＳＣ−３細胞を２質量％の活性炭処理ＦＢＳ、及び１０^−８ｍｏｌ／Ｌのテストステロン含有ＭＥＭを用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭで希釈し、９６穴マイクロプレートに１穴当たり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、１０^−９ｍｏｌ／Ｌのジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）を含む０．５質量％のＢＳＡ含有ＨａｍＦ１２＋ＭＥＭ（ＨＭＢ）に溶解した試料溶液を１００μＬ添加し、４８時間培養した。その後、終濃度０．４ｇ／ｍＬで活性炭処理ＦＢＳ含有ＭＥＭに溶解したＭＴＴを各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール２００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。空試験として、ＨＭＢのみで培養した細胞を、陽性対照として１０^−９ｍｏｌ／ＬのＤＨＴのみを含有したＨＭＢで培養した細胞を用い、同様の方法で試験を行って補正した。
これらの結果から、下記数式４により、アンドロゲン受容体拮抗率を算出した。
＜数式４＞
アンドロゲン受容体拮抗率（％）＝［１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）］×１００
ただし、前記数式４中、Ａは、ＤＨＴ添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍと６５０ｎｍにおける吸光度の差を表す。Ｂは、ＤＨＴ無添加、試料溶液無添加での５７０ｎｍと６５０ｎｍにおける吸光度の差を表す。Ｃは、ＤＨＴ添加、試料溶液添加での５７０ｎｍと６５０ｎｍにおける吸光度の差を表す。Ｄは、ＤＨＴ無添加、試料溶液添加での５７０ｎｍと６５０ｎｍにおける吸光度の差を表す。

次いで、各被験試料の試料濃度を段階的に減少させて、上記アンドロゲン受容体拮抗率の測定を行い、アンドロゲン受容体拮抗作用を５０％阻害する試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表５に示す。

表５の結果から、バイベリーの抽出物が、高いアンドロゲン受容体拮抗作用を有することが確認できた。また、アンドロゲン受容体拮抗作用の程度は、バイベリーの抽出物の濃度によって調節できることが確認できた。

（実施例３）
−毛乳頭細胞増殖促進作用試験−
前記バイベリーの５０質量％エタノール抽出物、及び前記ブルーベリーの５０質量％エタノール抽出物を被験試料として用い、下記の試験方法により、下記の試験法により毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＣＡ６０２０５）を、毛乳頭細胞増殖培地（ＴＯＹＯＢＯ社製、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞は１０質量％ＦＢＳ（ＦｅｔａｌＢｏｖｉｎｅＳｅｒｕｍ）含有ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓｍｏｄｉｆｉｅｄｍｉｎｉｍａｌｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｄｉｕｍ）を用いて１．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈した後、コラーゲンコートした９６穴プレートに１穴当り２００μＬ播種し、３日間培養した。培養後、培地を抜き、無血清ＤＭＥＭに溶解した被験試料溶液を各穴に２００μＬ添加し、更に４日間培養した。
毛乳頭細胞増殖作用はＭＴＴアッセイを用いて測定した。具体的には、培養終了後、培地を抜き、終濃度０．４ｍｇ／ｍＬで無血清のＤＭＥＭに溶解したＭＴＴ（（３−（４，５−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２，５−ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍＢｒｏｍｉｄｅ、同仁化学研究所製）を各穴に１００μＬ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。そして、下記数式５に従い毛乳頭細胞増殖促進率を算出した。試料濃度２５μｇ／ｍＬでの毛乳頭細胞増殖促進率を表６に示す。
＜数式５＞
毛乳頭細胞増殖促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
ただし、前記数式５中、Ａは試料溶液を添加した時の吸光度を表す。Ｂは試料溶液を添加しない時の吸光度を表す。

表６の結果から、バイベリーの抽出物及びブルーベリーの抽出物が、毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが確認できた。

（配合実施例１）
−ヘアトニック−
下記組成のヘアトニックを、常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・ニンジンエキス・・・０．５ｇ
・エタノール・・・２５．０ｇ
・バイベリーの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例２）
−ヘアトニック−
下記組成のヘアトニックを、常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・ニンジンエキス・・・０．５ｇ
・エタノール・・・２５．０ｇ
・フウトウカズラの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例３）
−ヘアトニック−
下記組成のヘアトニックを、常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・ニンジンエキス・・・０．５ｇ
・エタノール・・・２５．０ｇ
・キンミズヒキの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例４）
−ヘアトニック−
下記組成のヘアトニックを、常法により製造した。
・塩酸ピリドキシン・・・０．１ｇ
・レゾルシン・・・０．０１ｇ
・Ｄ−パントテニルアルコール・・・０．１ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・ｌ−メントール・・・０．０５ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・ニンジンエキス・・・０．５ｇ
・エタノール・・・２５．０ｇ
・ブルーベリーの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．２ｇ
・香料・・・適量
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例５）
−シャンプー−
下記組成のシャンプー（クリームシャンプー）を、常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・バイベリーの水抽出物（製造例１）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例６）
−シャンプー−
下記組成のシャンプー（クリームシャンプー）を、常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・フウトウカズラの水抽出物（製造例１）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例７）
−シャンプー−
下記組成のシャンプー（クリームシャンプー）を、常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・キンミズヒキの水抽出物（製造例１）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例８）
−シャンプー−
下記組成のシャンプー（クリームシャンプー）を、常法により製造した。
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム・・・３０．０ｇ
・ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸アンモニウム・・・２０．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン・・・６．０ｇ
・ヤシ油脂肪酸モジエタノールアミド・・・４．０ｇ
・ジステアリン酸エチレングリコール・・・２．０ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・ブルーベリーの水抽出物（製造例１）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例９）
−リンス−
下記組成のリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・バイベリーの８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例１０）
−リンス−
下記組成のリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・フウトウカズラの８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例１１）
−リンス−
下記組成のリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・キンミズヒキの８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

（配合実施例１２）
−リンス−
下記組成のリンスを、常法により製造した。
・塩化ステアリルトリメチルアンモニウム・・・１．５ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル・・・１．０ｇ
・セチルアルコール・・・２．０ｇ
・オクチルドデカノール・・・１．０ｇ
・カチオン化セルロース・・・０．５ｇ
・プロピレングリコール・・・５．０ｇ
・ブルーベリーの８０質量％エタノール抽出物（製造例３）・・・０．２ｇ
・ムクロジエキス・・・０．２ｇ
・黄杞エキス・・・０．５ｇ
・オウバクエキス・・・０．３ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．５ｇ
・香料・・・３．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００．０ｇとする）

本発明の抗男性ホルモン剤又は毛乳頭細胞増殖促進剤は、優れたテストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用、アンドロゲン受容体拮抗作用、及び毛乳頭細胞増殖促進作用の少なくともいずれかを有しており、例えば、ヘアトニック、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンス等の頭皮頭髪用外用剤に幅広く用いられる。

Claims

バイベリーの抽出物、フウトウカズラの抽出物、及びキンミズヒキの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする抗男性ホルモン剤。
テストステロン５α−リダクターゼ活性阻害作用及びアンドロゲン受容体拮抗作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の抗男性ホルモン剤。
バイベリーの抽出物、及びブルーベリーの抽出物の少なくとも１種を含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤。
毛乳頭細胞増殖促進作用を有する請求項３に記載の毛乳頭細胞増殖促進剤。
請求項１から２のいずれかに記載の抗男性ホルモン剤、及び請求項３から４のいずれかに記載の毛乳頭細胞増殖促進剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする頭皮頭髪用外用剤。