JP2009509559A - 細胞培養方法およびそれを実施するための装置 - Google Patents
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Abstract
Description
下部および上部に壁を備えており、各々の壁が基本的に細胞を含まない培養液を移動を可能とする開口部を有する培養区画を通って、培養液を循環させる培養液循環手段と、
を備えた装置を用いた細胞の培養に関する。
・基部モジュールm0の底部(m0a)は、バッフル25により制限されている、磁石デバイスの回転する区画を有している。この図におけるバッフル25の間の空間13は、培養液の排出口である。これは、磁石デバイスの回転により生じるサイフォンにより吸い込まれた培養液が、バッフル25の間の開口部13を介して、バッフル25により区切られている区画の外側27(実質的な円形区画)へと放出されるからである。
・基部モジュールm0の上部(m0b)は、実質的な管状の形状である培養液流入口11を有している。これらの流入口11は、本発明に係る装置1における第4培養液移動区画5からもたらされる培養液を、磁石デバイス7の回転により生じたサイフォンに導く。磁石デバイスが回転するとき、実質的な円形領域27に位置している培養液は、穿孔26に流入する。上記の穿孔26は、本発明に係る装置における第1培養液移動区画3(特に、第1培養液移動区画における実質的な筒部)に流通させる区画30に培養液を送出する。
・図3の説明において詳述した第1培養モジュールm1
・第2培養モジュールm2(図3参照)
・頭部モジュールは、培養液に沈められた光学センサー23を備えた凹部33を有しており、第2培養モジュールm2における第2培養区画5の上部壁16の一部に接続された固定手段22を有するカバー19を備えている。
2 培養容器
3 第1培養液移動区画
3a 第1培養液移動区画の底部
3b 第1培養液移動区画の上部円筒部
4 第3培養液移動区画
4a 第3培養液移動区画の底部
4b 第3培養液移動区画の上部円筒部
5 第2培養区画
6 第4培養液移動区画
7 磁石デバイス
8 中心回転軸
9 上部固定手段
10 底部固定手段
11 培養液流入口
12 バッフル
13 培養液流出口
14 培養液誘導手段
15 第2培養区画の底部壁
16 第2培養区画の上部壁
17 第2培養区画の上部および底部壁における開口部
18 傾斜壁
19 培養容器のカバー
20 気体注入口
21 気体排気口
22 第2培養区画の頂部壁に対してカバーを固定するための手段
23 センサー
24 組立手段
24a 第1組立手段
24b 第2組立手段
25 基部モジュールのバッフルまたは壁
26 基部モジュールの貫通孔
27 実質的な円形区画
28 溝
29 循環手段を密着させるための凹部
30 第1培養液移動区画に培養液を流通させる区画
31 開口部20に接続するための凹部
32 気体供給管
33 センサーに対するカバー凹部
34 円形シール
m0 基部モジュール
m1〜mn 培養モジュール
mt 頭部モジュール
M 培養液
C 細胞
D 第4培養区画の壁の頂部
Claims (26)
- 基本的に細胞を含まない培養液の移動区画である少なくとも1つの第1の区画(3)および細胞培養区画である少なくとも1つの第2の区画(5)を有しており、上記第1の区画(3)が上記第2の区画の内部に設けられている、カバー(19)を備えた培養容器(2)と、
下部の壁(15)および上部の壁(16)を備えており、かつ、各々の壁(15、16)が基本的に細胞を含まない培養液の移動を可能にする開口部(17)を有する培養区画(5)を通って、培養液を循環させる培養液循環手段と、を備えている細胞培養装置(1)であって、
いずれもが基本的に細胞を含まない培養液移動区画である、少なくとも1つの第3の区画(4)および少なくとも1つの第4の区画(6)をさらに備えており、
上記第3の区画(4)は上記第2の区画(5)の内部、かつ、上記第1の区画(3)の外部に設けられており、上記第4の区画(6)は上記第2の区画(5)の外部に設けられており、
上記第3の区画(4)は、上記第1の区画(3)および上記第2の区画(5)との間において培養液を流通させ、上記第4の区画(6)は、上記第2の区画(5)(上記培養区画(5))との間において培養液を流通させると共に、上記培養液循環手段を介して、上記第1の区画(3)(上記培養液移動区画(3))との間において培養液を流通させ、
上記培養液循環手段は、上記第2の培養区画(5)において、下から上へ培養液を循環させることを特徴とする細胞培養装置。 - 上記培養液循環手段が、上記培養装置(1)の下部に配置された遠心力ポンプから成り、
上記遠心力ポンプは、実質的な中心回転軸(8)を中心として回転可能である少なくとも1つの磁石デバイス(7)を備えると共に、少なくとも1つの流入口(11)および少なくとも1つの培養液流出口(13)を有しており、
上記循環手段は、上記磁石デバイス(7)の回転により生じるサイフォンにより培養液を吸引し、培養液を上記磁石デバイス(7)の外部の区画に位置する上記培養液出口(13)を通じて送出し、
上記遠心力ポンプは、上記装置(1)の外部とやりとりすることなく培養液の循環を生じさせる回転式の磁石のモーターにより駆動され、
上記流出口(13)を通って、上記容器(2)の上部へと送られる培養液を誘導する少なくとも1つの誘導手段(12、14、25)が備えられている、請求項1に記載の装置。 - 一連の培養モジュール(m1、...、mn)を備えており、
各モジュールは、上記第1の区画(3)、上記第2の区画(5)、上記第3の区画(4)および上記第4の区画(6)を有しており、かつ、上記一連の培養モジュールにおいて互いに隣接するモジュールは、培養液を流通させており、
各モジュールにおける上記第1の区画(3)および上記第4の区画(6)は、直接的または間接的に上記循環手段に連通している、請求項1または2に記載の装置。 - 上記循環手段は、基部モジュール(m0)に備えられており、
上記基部モジュール(m0)は、少なくとも1つの第1の培養液移動区画(3)と少なくとも1つの第4の培養液移動区画(6)との間において、直接的または間接的に培養液を流通している、請求項1から3のいずれか1項に記載の装置。 - 頭部モジュール(mt)をさらに備えており、
上記頭部モジュール(mt)は、少なくとも上記カバー(19)を備えている、請求項1から4のいずれか1項に記載の装置。 - 少なくとも1つの上記第4の区画(6)は、略垂直であるか、または傾斜した少なくとも1つの流壁(18)を備えている、請求項1から5のいずれか1項に記載の装置。
- 略垂直であるか、または傾斜した上記流壁(18)は、親水性の膜を備えている、請求項5に記載の装置。
- 少なくとも1つの気体注入口(20)および1つの排気口(21)を有する、請求項1から7のいずれか1項に記載の装置。
- 上記気体注入口(20)は、少なくとも1つの第4の培養液移動区画(6)に連通している、請求項7に記載の装置。
- 上記気体注入口(20)は、多孔分散管と接続されている、請求項5または6に記載の装置。
- 上記培養容器(2)の上記カバー(19)は、少なくとも1つの第2の培養区画(5)における上記上部壁(16)の少なくとも一部に接続されている、請求項1から10のいずれか1項に記載の装置。
- 移動する培養液(M)を加熱する加熱手段をさらに備えている、請求項1から11のいずれか1項に記載の装置。
- 培養のパラメータを測定するためのセンサー(23)をさらに備えており、
上記センサー(23)は上記培養液(M)に接している、請求項1から12のいずれか1項に記載の装置。 - 上記センサー(23)は、使い捨ての光学のセンサーであり、上記培養容器(2)を通じて測定される上記パラメータを表す光学シグナルを、上記装置(1)の外部に備えられた光学シグナル受信機に伝達するために備えられている、請求項13に記載の装置。
- 一連の培養モジュール(m0、...、mn)を備えており、
各培養モジュール(m0、...、mn)は、上記第1の区画(3)、上記第2の区画(5)、上記第3の区画(4)および上記第4の区画(6)を有しており、
上記一連の培養モジュール(m0、...、mn)において互いに隣接する培養モジュール(m0、...、mn)は、互いに培養液を流通させており、
各培養モジュール(m0、...、mn)における上記第1の区画(3)および上記第4の区画(6)は、上記循環手段と直接的または間接的に連通しており、
上記循環手段は、基部モジュール(m0)に収められており、
上記基部モジュール(m0)が、少なくとも1つの第1の培養液移動区画(3)および少なくとも1つの第4の培養液移動区画(6)との間において直接的または間接的に培養液を流通させている、請求項5から14のいずれか1項に記載の装置(1)であり、
各培養モジュール(m0、...、mn)は、その上部に第1の固定手段(24a)を備えていると共に、その下部に第2の固定手段(24b)を備えており、
上記基部モジュール(m0)は、その上部(m0b)に第1の固定手段(24a)を備えていると共に、上記頭部モジュール(mt)は、その底部に第2の固定手段(24b)を備えており、
上記第1の固定手段(24a)および上記第2の固定手段(24b)は、基部モジュール(m0)と、少なくとも1つの培養モジュール(m0、...、mn)と、頭部モジュール(mt)との下から上への一連の積み重ねを形成するための相補的な固定手段である、装置。 - 上記第1の固定手段(24a)および上記第2の固定手段(24b)は、上記の一連の積み重ねを、気体漏れおよび液体漏れのないように形成するための手段を有する、請求項15に記載の装置。
- 請求項1から16のいずれか1項に記載の、使い捨て装置。
- 細胞培養に用いる、請求項1から17のいずれか1項に記載の装置の使用方法。
- 固定床または流動床におけるマイクロキャリア上での細胞培養を目的とした、請求項18に記載の使用方法。
- 懸濁液中での細胞培養を目的とした、請求項18に記載の使用方法。
- 組み換え産物、ウイルス、および代謝産物などを生産することを目的とした、請求項18から20のいずれか1項に記載の使用方法。
- 培養液循環手段への培養液(M)導入工程と、
上記培養液循環手段からの培養液(M)放出工程と、
培養液(M)を、第1の培養液移動区画(3)へ上向きに移動させる、少なくとも1度の第1の移動工程と、
培養液(M)を、第2の細胞培養区画(5)へ移動させる、少なくとも1度の第2の移動工程と、を含む培養液循環機構を有する培養容器(2)における細胞培養方法であって、
上記第1の培養液移動工程の後に続けて、上記第1の培養液移動区画(3)から第3の培養液移動区画(4)へ培養液(M)をオーバーフローさせることにより、上記培養液(M)を上記第3の培養液移動区画(4)へ移動させる少なくとも1度の第3の培養液移動工程と、
上記第2の培養液移動工程の後に続けて、上記第2の培養区画(5)から第4の培養液移動区画(6)へ培養液(M)をオーバーフローさせることにより、培養液(M)を上記第4の培養液移動区画(6)へ移動させる少なくとも1度の第4の培養液移動工程と、をさらに含み、
上記第2の培養液移動工程は、下向きの培養液移動であることを特徴とする細胞培養方法。 - 1度以上の上記移動工程の間に、上記培養液に対して酸素添加する工程をさらに含む、請求項22に記載の細胞培養方法。
- 上記酸素添加は、1度以上の上記移動工程の間に、直接の気液接触により行われる、請求項22または23に記載の培養方法。
- 上記酸素添加は、上記第4の培養液移動工程中に行われ、
上記第4の培養液移動工程は、流壁(18)に沿った上記培養液(M)の流れである、請求項22から24のいずれか1項に記載の培養方法。 - 上記培養液(M)の流れは、親水性の壁に沿った流れである、請求項22から25のいずれか1項に記載の培養方法。
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