JP2009159971A5 - - Google Patents

Claims (44)

1. プレｍＲＮＡ分子における異常スプライシング過程を阻害するための医薬として使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、
   前記スプライシング過程はスプライシング因子により行われ、
   前記プレｍＲＮＡ分子は、スプライシング因子に結合し、かつ、イントロンを規定するスプライス要素のセットを含み、ここで、前記イントロンはスプライシングにより除去され非天然のタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子を生成し、
   前記医薬は、
   スプライシングが可能な条件下で、前記プレｍＲＮＡ分子にハイブリッドすることができ、二本鎖分子を生じるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、
   ここで、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅＨを活性化せず、前記スプライス要素の構成要素をブロックして、
   その結果、スプライシング過程を仲介するスプライシング因子の結合及び／又は機能を妨害する
   ことを特徴とするアンチセンスオリゴヌクレオチド。
2. 天然のタンパク質の遺伝子発現をアップレギュレートするための医薬として使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、
   前記遺伝子はプレｍＲＮＡ分子をコードし、前記プレｍＲＮＡは変異を有し、かつ、イントロンを規定するスプライス要素の第一のセットを含み、ここで、前記イントロンはスプライシングにより除去され天然のタンパク質をコードする第一のｍＲＮＡ分子を生成し、
   前記プレｍＲＮＡは、前記イントロンとは異なる第二のイントロンを規定するスプライス要素の第二のセットをさらに含み、ここで、第二のイントロンは、スプライシングにより除去されて前記第一のｍＲＮＡ分子とは異なる第二のｍＲＮＡ分子を生成し、
   前記医薬は、
   スプライシングが可能な条件下で、前記プレｍＲＮＡ分子にハイブリッドすることができ、二本鎖分子を生じるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、
   ここで、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅＨを活性化せず、スプライス要素の前記第二のセットの構成要素をブロックして、
   その結果、前記第一のイントロンがスプライシングにより除去され、タンパク質をコードする前記第一のｍＲＮＡ分子が作成され、前記ハイブリダイゼーション過程は細胞内で行われ、前記第一のｍＲＮＡは前記天然のタンパク質に翻訳されることを特徴とするアンチセンスオリゴヌクレオチド。
3. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、天然のスプライス要素をブロックする請求項１又は２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
4. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、５’スプライス部位をブロックする請求項１又は２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
5. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、３’スプライス部位をブロックする請求項１又は２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
6. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、分岐点をブロックする請求項１又は２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
7. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、８〜５０ヌクレオチド長である請求項１又は２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
8. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、メチルホスホネート類、メチルホスホノチオエート類、ホスホロモルホリデート類、ホスホロピペラジデート類およびホスホラミデート類からなる群から選択される修飾されたヌクレオチド間架橋燐酸残基を含む請求項１又は２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
9. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、その２’位に低級アルキル置換基を持つヌクレオチドを含む請求項１又は２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
10. 細胞が、酵母、昆虫、哺乳類の細胞からなる群から選択される真核細胞である請求項２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
11. in vivoでプレｍＲＮＡ分子におけるスプライシング過程を阻害するための、生理学的に許容可能な水性担体溶液中のアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、
    前記スプライシング過程はスプライシング因子により仲介され、
    前記プレｍＲＮＡ分子は、スプライシング因子に結合し、イントロンを規定するスプライス要素のセットを含み、ここで、前記イントロンはスプライシングにより除去され、天然のタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子を生成し、
    前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
    ｉ）プレｍＲＮＡにハイブリッド形成して二本鎖分子を形成し、
    ｉｉ）ＲＮａｓｅを活性化せず、
    ｉｉｉ）前記スプライス要素の構成要素をブロックする
    ことを特徴とするアンチセンスオリゴヌクレオチド。
12. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、８〜５０ヌクレオチド長である請求項１１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
13. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、メチルホスホネート類、メチルホスホノチオエート類、ホスホロモルホリデート類、ホスホロピペラジデート類およびホスホラミデート類からなる群から選択される修飾されたヌクレオチド間架橋燐酸残基を含む請求項１２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
14. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、その２’位に低級アルキル置換基を持つヌクレオチドを含む請求項１２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
15. 脂質小胞中にある請求項１２に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
16. 異常スプライシング過程が関与する疾患の治療のための医薬の製造のための、請求項１に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用。
17. プレｍＲＮＡ分子の選択的スプライシングに対抗する方法であって、
    前記プレｍＲＮＡ分子は第一のイントロンを定義するスプライス要素の第一の組み合わせを含み、前記第一のイントロンは第一のタンパク質をコードする第一のｍＲＮＡを生成するためにスプライシングにより除去され、
    前記プレｍＲＮＡは前記第一のイントロンとは異なる別のイントロンを定義するスプライス要素の第二の組み合わせを含み、前記別のイントロンは前記第一のｍＲＮＡ分子とは異なる別の第二のｍＲＮＡ分子を生成するためにスプライシングにより除去され、
    前記方法は、スプライシングが可能な条件下で、アンチセンスオリゴヌクレオチドを前記プレｍＲＮＡ分子とハイブリッド形成させて二重鎖分子をつくるステップを含み、
    ここで、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リボヌクレアーゼＨを活性化せず、かつ、前記オリゴヌクレオチドは前記別のスプライス要素の第二の組み合わせの構成要素をブロックし、
    その結果、前記第一のイントロンがスプライシングにより除去され、タンパク質をコードする前記第一のｍＲＮＡ分子が生成される方法。
18. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが突然変異したスプライス要素をブロックする請求項１７に記載の方法。
19. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが天然のスプライス要素をブロックする請求項１７に記載の方法。
20. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが潜在スプライス要素をブロックする請求項１７に記載の方法。
21. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが５’スプライス部位をブロックする請求項１７に記載の方法。
22. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが３’スプライス部位をブロックする請求項１７に記載の方法。
23. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが分岐点をブロックする請求項１７に記載の方法。
24. 前記ハイブリッド形成させるステップが細胞内で行われ、前記第一のｍＲＮＡが前記天然のタンパク質へ翻訳される請求項１７に記載の方法。
25. 前記天然のタンパク質がβグロビンである請求項１７に記載の方法。
26. 前記天然のタンパク質がヒトβグロビンである請求項１７に記載の方法。
27. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが８〜５０ヌクレオチド長である請求項１７に記載の方法。
28. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、メチルホスホネート類、メチルホスホノチオエート類、ホスホロモルホリデート類、ホスホロピペラジデート類およびホスホラミデート類からなる群から選択される修飾されたヌクレオチド間架橋燐酸残基を含む請求項１７に記載の方法。
29. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、その２’位に低級アルキル置換基を持つヌクレオチドを含む請求項１７に記載の方法。
30. 異常スプライシングに関する疾患の治療に使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドであって、前記異常スプライシングが、ｍＲＮＡの天然の領域をスプライシング要素として活性化させ、かつ機能させる突然変異により生じ、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、活性化した天然の領域をブロックするアンチセンスオリゴヌクレオチド。
31. 異常スプライシングに関する疾患の治療のための薬剤であって、前記異常スプライシングが、ｍＲＮＡの天然の領域をスプライシング要素として活性化させ、かつ機能させる突然変異により生じ、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、活性化した天然の領域をブロックする薬剤。
32. 前記突然変異が、前記プレｍＲＮＡの不正確なスプライシングにより前記プレｍＲＮＡより通常生じるｍＲＮＡとは異なる異常なｍＲＮＡまたは異常なｍＲＮＡフラグメントを生成させる請求項３０に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
33. 前記突然変異が、置換変異または欠失変異である請求項３０または３２に記載のオリゴヌクレオチド。
34. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、完全にまたは部分的に前記活性化した天然の領域と重なり合うか、または、スプライス要素で起こる特定のスプライシング反応を通常媒介しているスプライシング因子の結合および機能を崩壊させるために、前記活性化した領域と十分に近い位置でプレｍＲＮＡと結合する請求項３０、３２、または３３に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
35. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、スプライシングが起こる条件下で前記プレｍＲＮＡと二本鎖分子を生成するようにハイブリダイズする請求項３０、３２〜３４のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
36. スプライシング中にイントロンが前記プレｍＲＮＡより取り除かれ、機能タンパク質が生成される請求項３５に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
37. ８〜５０ヌクレオチド長である請求項３０、３２〜３６のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
38. ＲＮａｓｅＨを活性化しない請求項３０、３２〜３７のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
39. メチルホスホネート類、メチルホスホノチオエート類、ホスホロモルホリデート類、ホスホロピペラジデート類およびホスホラミデート類からなる群から選択される修飾されたヌクレオチド間架橋燐酸残基を含む請求項３０、３２〜３８のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
40. その２’位に低級アルキル置換基を持つヌクレオチドを含む請求項３０、３２〜３９のいずれか一項に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
41. 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルーオリゴリボヌクレオチドである請求項３０、３２〜４０に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
42. 前記修飾されたヌクレオチド間架橋燐酸残基が、ホスホロモルホリデート類から選択される請求項３９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
43. 前記修飾されたヌクレオチド間架橋燐酸残基が、ホスホロピペラジデート類から選択される請求項３９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
44. 前記修飾されたヌクレオチド間架橋燐酸残基が、ホスホラミデート類から選択される請求項３９に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。