JP2009108072A

JP2009108072A - ２，３−ジアミノベンズアミド及びその合成並びに使用

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Publication number: JP2009108072A
Application number: JP2008284436A
Authority: JP
Inventors: Wilfried Lubisch; ルービッシュヴィルフリート; Michael Kock; コックミヒャエル; Thomas Hoeger; ヘーガートーマス
Original assignee: Abbott GmbH and Co KG
Current assignee: Abbott GmbH and Co KG
Priority date: 1998-11-03
Filing date: 2008-11-05
Publication date: 2009-05-21
Also published as: ATE284392T1; HUP0200312A3; EP1391457B1; EP1127052B1; US7781596B1; AU1266500A; SK5952001A3; IL142917A0; EP1127052A1; CA2349227C; TR200200972T2; BR9915013A; ES2234318T3; BG105515A; DE59911249D1; CN1331682A; PT1127052E; EP1391457A1; HUP0200312A2; TR200101239T2

Abstract

【課題】新規ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）抑制物質の提供。
【解決手段】一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）：

［式中、Ｒ１は、水素原子、アルキル基等を示し、Ｒ２は、水素原子、ハロゲン原子等を示し、Ｘは，０，１又は２であり、Ｒ３は、置換基を有するアルコキシ基を示し、Ｒ４は、水素原子、ハロゲン原子等を示す］で表される２−フェニルベンズイミダゾール誘導体。
【選択図】なし

Description

本発明は、式ＸＸ、ＸＸＩの２，３−ジアミノベンズアミド及びその合成並びに中間生成物としての使用に関するものでもある。

ポリ（ＡＤＰ−リボース）シンターゼ（ＰＡＲＳ）とも呼ばれるポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）は、細胞核中に見出される調節酵素である（Ｋ．Ｉｋａｉ他、Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．１９８３、３１、１２６１〜１２６４）。ＰＡＲＰは、ＤＮＡ切断の修復において必要とされていると見なされている（Ｍ．Ｓ．Ｓａｔｏｈ他、Ｎａｔｕｒｅ１９９２、３５６、３５６〜３５８）。ＤＮＡ鎖における損傷又は切断は、酵素ＰＡＲＰを活性化させるが、これが活性化されると、ＮＡＤからのＡＤＰ−リボースの転移を触媒するのである（Ｓ．Ｓｈａｗ、Ａｄｖ．Ｒａｄｉａｔ．Ｂｉｏｌ．、１９８４、１１、１〜６９）。この間、ニコチンアミドが、ＮＡＤから放出される。ニコチンアミドは、別の酵素によってエネルギ−担体ＡＴＰを消費して、ＮＡＤに再変換される。従って、ＰＡＲＰの過剰活性化は、ＡＴＰの非生理学的に大きな消費となり、これにより、極端な場合には、細胞損傷及び細胞死にいたる。

フリーラジカル、例えばスーパーオキシドアニオン、ＮＯ及び過酸化水素が、細胞中のＤＮＡ損傷を招来し、従って、ＰＡＲＰを活性化させることがあるということは公知である。大量のフリーラジカルの形成は、多数の病態生理学的状態に見られ、このフリーラジカルの蓄積は、観察された細胞又は器官の損傷を招来するか又はその一因となっていると見なされている。これには、例えば卒中、心筋梗塞のような器官の虚血状態（Ｃ．Ｔｈｉｅｍｅｒｍａｎｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９７、９４、６７９〜６８３）又は腎臓の虚血が含まれるが、例えば心筋梗塞の消散後に生じる潅流障害も含まれる（上記：Ｃ．Ｔｈｉｅｍｅｒｍａｎｎ他参照）。従って、酵素ＰＡＲＰの抑制は、前記の損傷の少なくとも部分的な予防又は減速の手段であるかもしれない。従って、ＰＡＲＰ抑制物質は、多数の疾患の治療のための新規治療原理の再現であるかもしれない。

酵素ＰＡＲＰは、ＤＮＡ損傷の修復に影響を及ぼすものであり、従って、腫瘍組織により大きな活動電位が、細胞分裂阻止活性を有する物質と組み合わせた場合に観察された（Ｇ．Ｃｈｅｎ他、ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９８８、２２、３０３）ので、癌治療において１つの役割を果たすかもしれない。

限定するものではないが、腫瘍の例は、白血病、グリア芽種、リンパ腫、黒色腫及び乳癌並びに子宮頚癌である。

更に、ＰＡＲＰ抑制物質は、免疫抑制効果を示すことがあることも見出された（Ｄ．Ｗｅｌｔｉｎ他、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９５、１７、２６５〜２７１）。

同様に、ＰＡＲＰが、免疫系が重要な役割を果たす免疫障害又は免疫疾患、例えばリウマチ性関節炎及び敗血症性ショックに関与していること及びＰＡＲＰ抑制物質が、前記疾患の経過に有益な作用を示すこともあることが見出された（Ｈ．Ｋｒｏｅｇｅｒ他、Ｉｎｆａｍｍａｔｉｏｎ１９９６、２０、２０３〜２１５；Ｗ．Ｅｈｒｌｉｃｈ他、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｉｎｔ．１９９５、１５、１７１〜１７２；Ｃ．Ｓｚａｂｏ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１９９８、９５、３８６７〜３８７２；Ｓ．Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ他、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９８、３４２、６７〜７６）。

ＰＡＲＰとは、本発明の目的のため、上記のＰＡＲＰ酵素のアイソエンザイムを含むものとする。かかるアイソエンザイムは、例えばＰＡＲＰＩＩ及びＰＡＲＰＩＩＩである。

更に、ＰＡＲＰ抑制物質、３−アミノベンズアミドは、循環不全の１つのモデルに保護効果を示した（Ｓ．Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ他、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７、１２１、１０６５〜１０７４）。

２−フェニルベンズイミダゾールは、数多く記載されてきた。従って、ドイツ連邦共和国特許第３８３００６０号には、赤血球凝集の抑制物質としてのアルキル化した誘導体が開示されている。ドイツ連邦共和国特許第３５２２３０号には、血小板凝集の抑制物質としての２−フェニルベンズイミダゾールのエステル誘導体が記載されている。フェニル環に置換されたアミン基を有するハロゲン置換された２−フェニルベンズイミダゾールは、国際公開番号ＷＯ９８／０６７０３中にＭＣＰ−１−拮抗物質として記載されている。

同様に、ベンズイミダゾール基がアミド基によって置換されている２−フェニルベンズイミダゾールも公知である。フェニル環にアルコキシ基を有する２−フェニルベンズイミダゾールの５−アミド誘導体は、国際公開番号ＷＯ９４／１２４６１号中にｃＡＭＰ−ホスホジエステラーゼの抑制物質として記載されている。ドイツ連邦共和国特許第３５４６５７５号（例えば例１５）には、類縁誘導体について、これらの化合物がプラスの変力効果を誘発することが見出された。３位にピリジル基を有する４−アミド誘導体は、同様に、国際公開番号ＷＯ９７／４８６９７号中にｃＡＭＰ−ホスホジエステラーゼの抑制物質として記載されている。

２−フェニルベンズイミダジル−４−アミドの合成は、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ１、１９７９、２３０３〜２３０７中に記載されている。アミド基に置換されたアルキル鎖を有し、細胞毒作用を有することが記載されている類縁化合物は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９０、３３、８１４〜８１９中に記載されている。国際公開番号ＷＯ９７／０４７７１号には、ＰＡＲＳを抑制するベンズイミダゾル−４−アミドが記載されている。特に、これらに、活性であるとして記載された誘導体は、２位にフェニル環を有しており、該フェニル環は、ニトロ、メトキシ及びＣＦ_３のような単純な置換基によって置換されていてもよい。これらの物質のいくつかは、酵素ＰＡＲＰの良好な抑制を示し、これらに記載された誘導体は、前記物質が水溶液中に僅かな可溶性示すか又は可溶性を示さず、従って、水溶液として投与することができないという欠点を有している。

多くの治療、例えば卒中の場合、作用物質は、輸液として静脈内投与される。前記の目的のためには、生理的ｐＨ値又はこれに近いｐＨ値（例えば、５〜８のｐＨ値）で十分な水溶性を有し、輸液を製造することができる物質、この場合は、ＰＡＲＰ抑制物質が入手可能でなければならない。しかしながら、前記のＰＡＲＰ抑制物質の多く、殊により有効なＰＡＲＰ抑制物質には、これらが、前記ｐＨ値でごく僅かな水溶性を有するか又は水溶性を有しておらず、従って、静脈内投与には不適当であるという欠点がある。このタイプの作用物質は、水中での溶解を促進することが意図された補助的物質を用いてのみ投与することができる（国際公開番号ＷＯ９７／０４７７１号参照）。これらの補助的物質、例えばポリエチレングリコール及びジメチルスルホキシドは、副作用を生じるか又は許容されないことが多い。十分な水溶性を有する極めて有効なＰＡＲＰ抑制物質は、これまでに記載されていなかった。

驚異的なことに、フェニル環上でアルコキシ基によって置換されており、従って、アルコキシ側鎖上にアミン基を有する２−フェニル−ベンズイミダゾールは、極めて有効な抑制物質であるが、しかし、脂肪族アミンの組み込みの結果、酸との塩を形成することができ、従って、明らかに改善された水溶性を示すことが見出された。

本発明は、前記化合物に比して有利であり、強力なＰＡＲＰ抑制物質であると同時に輸液として投与できる十分な水溶性を示す一般式Ｉの新規２−フェニルベンズイミダゾール誘導体を記載している。

本発明は、一般式Ｉ又はＩＩ：

〔式中、
Ｒ^１は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、アルキル基の１個のＣ原子については、ＯＲ^１１又は基Ｒ^５を有していることが可能であり、この場合、Ｒ^１１は、水素又はＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
Ｒ^２は、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＦ_３、ニトロ、ＮＨＣＯＲ^２１、ＮＲ^２２Ｒ^２３ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニル、ＮＨ_２、フェニルであり、フェニル環については、多くの場合に２個の基Ｒ^２４によって置換されていることが可能であり、Ｒ^２１とＲ^２２は、互いに独立に水素又はＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、Ｒ^２３は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル又はフェニルであり、Ｒ^２４は、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＦ_３、ニトロ、ＮＨ_２であり、
ｘは、０、１又は２であり、
Ｒ^３は、−Ｄ−（Ｆ^１）_ｐ−（Ｅ）_ｑ−（Ｆ^２）_ｒ−Ｇ（この場合、ｐ、ｑ及びｒは、同時に０であってはならない）又は−Ｅ−（Ｄ）_ｕ−（Ｆ^２）_ｓ−（Ｇ）_ｖであり、基Ｅについては、１個又は２個の置換基Ａによって置換されていることが可能であり、Ｒ^３は、Ｂであり、
Ｒ^４は、水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、ＯＨ、ニトロ、ＣＦ_３、ＣＮ、ＮＲ^４１Ｒ^４２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ^４３、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、この場合、
Ｒ^４１及びＲ^４２は、互いに独立に水素又はＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
Ｒ^４３は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニル又はフェニルであり、
Ｄは、Ｓ又はＯであり、
Ｅは、フェニル、イミダゾール、ピロール、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ピペラジン、ピラジン、フラン、チアゾール、イソキサゾール、ピロリジン、ピペリジン、トリヒドロアゼピンであり、
Ｒ^１は、１〜８個の炭素原子の連鎖であり、該連鎖の１個の炭素原子については、ＯＨ又はＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル基を有していることが可能であり、
Ｆ^２は、１〜８個の炭素原子の連鎖であり、該連鎖の１個の炭素原子については、ＯＨ又はＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル基を有していることが可能であり、
ｐは、０又は１であってもよく、
ｑは、０又は１であってもよく、
ｒは、０又は１であってもよく、
ｓは、０又は１であってもよく、
ｕは、０又は１であってもよく、
ｖは、０又は１であってもよく、
Ｇは、ＮＲ^５１Ｒ^５２又は

であってもよく、
Ｒ^５１は、水素であるか又は分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、（ＣＨ_２）_ｔ−Ｋであり、
Ｒ^５２は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、

であり、この場合、
Ｒ^５３は、分枝鎖状又は非分枝鎖状のＯ−Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、分枝鎖状又は非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニルであってもよいが、その際、Ｒ^５２及びＲ^５３の場合には、互いに独立にＣ_１〜Ｃ_６−アルキル基の１個の水素が、以下の基：ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、シクロヘキシル、シクロペンチル、テトラヒドロナフチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘプチル、ナフチル及びフェニルの１つによって置換されていてもよく、基Ｒ^５２及びＲ^５３の炭素環については、互いに独立に、以下の基：分枝鎖状又は非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、分枝鎖状又は非分枝鎖状のＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ_３、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＣ_１〜Ｃ_４−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、ＣＣｌ_３、Ｃ_１〜Ｃ_４−ジアルキルアミノ、ＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＳＯ_２フェニル、ＣＯＮＨ_２、ＣＯＮＨ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＯＮＨフェニル、ＣＯＮＨ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニル、ＮＨＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＮＨＳＯ_２フェニル、Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、

ＣＨＯ、ＣＨ_２−Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＳＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、−ＳＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニル、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２ＮＨ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル
の１つ又は２つを有していてもよく、
２個の基が、架橋成分−Ｏ−（ＣＨ_２）_１、２−Ｏ−を形成しており、
Ｂは、

であってもよく、
Ａは、水素、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＦ_３、ニトロ、ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニル、ＮＨ_２、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、ＣＮ、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ^３３であってもよいが、この場合、Ｒ^３３は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル又はフェニルであり、
Ｒ^３１は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、（ＣＨ_２）_ｔ−Ｋであり、
Ｒ^３２は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、−ＣＯ−Ｒ^８、ＳＯ_２−Ｒ^８、−（Ｃ＝Ｎ）−Ｒ^８、−ＣＯ−ＯＲ^８、−ＣＯ−ＮＨＲ^８及び−（Ｃ＝Ｎ）−ＮＨＲ^８であり、
Ｒ^３３は、水素及びＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
ｔは、０、１、２、３、４であり、
Ｋは、多くとも２個の基Ｒを有していてもよいフェニルであるか、ＮＲ^ｋ１Ｒ^ｋ２（この場合、Ｒ^ｋ１及びＲ^ｋ２は、それぞれ、Ｒ^４１及びＲ^４２について定義したものである）、ＮＨ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニル、ピロリジン、ピペリジン、１，２，５，６−テトラヒドロピリジン、モルホリン、トリヒドロアゼピン、ピペラジン（これらは、アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルによって置換されていてもよい）及びホモピペラジン（アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルによって置換されていてもよい）であり、
Ｒ^５は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、ＮＲ^７Ｒ^９及び

であり、
Ｒ^７は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニル、フェニルであり、環については、２個までの基Ｒ^７１によって置換されていてることが可能であり、
Ｒ^７１は、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＦ_３、ニトロ、ＮＨ_２であり、
Ｒ^８は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニルであり、環については、２個までの基Ｒ^８１によって置換されていることが可能であり、
Ｒ^８１は、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、塩素、臭素、ヨウ素、フッ素、ＣＦ_３、ニトロ、ＮＨ_２であり、
Ｒ^９は、水素、ＣＯＣＨ_３、ＣＯ−Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＯＣＦ_３、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル基の１個又は２個の水素については、その都度、以下の基：ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル及びフェニルの１つによって置換されていることが可能であり、フェニル環については、以下の基：ヨウ素、塩素、臭素、フッ素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、ニトロ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−ジアルキルアミノ、ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＮ、ＣＦ_３、ＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルの１つ又は２つを有していてもよい〕で示される置換された２−フェニルベンズイミダゾールその互変異性型、可能な鏡像異性体型及びジアステレオマー型、そのプロドラッグ及び薬理学的に認容性の塩に関するものである。

それぞれの基が、以下に定義されているものである化合物が有利である：
Ｒ^１は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、アルキル基の１個のＣ原子については、ＯＲ^１１又は基Ｒ^５を有していることが可能であり、この場合、
Ｒ^１１は、水素又はＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
Ｒ^２は、水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、ニトロ、ＣＦ_３、ＣＮ、ＮＲ^２１Ｒ^２２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ^２３、ＯＲ^２１であり、この場合、
Ｒ^２１及びＲ^２２は、互いに独立に、水素又はＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
Ｒ^２３は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル又はフェニルであり、
Ｒ^３は、−Ｏ−（ＣＨ_２）_ｏ−（ＣＨＲ^３１）_ｍ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｒ^５であり、この場合、
Ｒ^３１は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＯＨ及びＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
ｍ、ｏは、互いに独立に、０、１又は２であり、
ｎは、１、２、３又は４であり、
Ｒ^４は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、塩素、臭素、フッ素、ニトロ、シアノ、ＮＲ^４１Ｒ^４２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ^４３、ＯＲ^４１であり、
Ｒ^４１及びＲ^４２は、互いに独立に、水素又はＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
Ｒ^４３は、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル又はフェニルであり、
Ｒ^５は、ＮＲ^５１Ｒ^５２であるか又は以下の基：

であり、
この場合、
Ｒ^５１は、水素及び分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、
Ｒ^５２は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、

であり、この場合、
Ｒ^５３は、分枝鎖状又は非分枝鎖状のＯ−Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、フェニル、分枝鎖状又は非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_４−アルキル−フェニルであり、
この場合、Ｒ^５２及びＲ^５３中のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル基の１個の水素は、互いに独立に、以下の基：ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、シクロヘキシル、シクロペンチル、テトラヒドロナフチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘプチル、ナフチル及びフェニルの１つによって置換されていてもよく、この場合、Ｒ^５２基及びＲ^５３基の炭素環は、互いに独立に、以下の基：分枝鎖状又は非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、分枝鎖状又は非分枝鎖状のＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ_３、ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＣＮ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＣ_１〜Ｃ_４−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、ＣＣｌ_３、Ｃ_１〜Ｃ_４−ジアルキルアミノ、ＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＳＯ_２フェニル、ＣＯＮＨ_２、ＣＯＮＨ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＯＮＨフェニル、ＣＯＮＨ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル−フェニル、ＮＨＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＮＨＳＯ_２フェニル、Ｓ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、

ＣＨＯ、ＣＨ_２−Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル−フェニル、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＳＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、−ＳＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル−フェニル、ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２ＮＨ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル
の１つ又は２つを有していてもよく、
２個の基が、架橋成分−Ｏ−（ＣＨ_２）_１、２−Ｏ−を形成している。

一般式Ｉ又はＩＩにおけるＲ^２基の特に有利な位置は、ベンズイミダゾール環に対して３位及び４位である。ベンズイミダゾール環の３位又は４位は、Ｒ^３基にとっても同様に有利である。

Ｒ^１の特に有利な意味は、水素である。

Ｒ^２の特に有利な意味は、水素、分枝鎖状又は非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、ニトロ、ＣＮ、ＮＨ_２、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルである。

Ｒ^３の特に有利な意味は、ｐが２、３又は４である−Ｏ−（ＣＨ_２）_ｐ−Ｒ^５である。

Ｒ^５は、有利に６員環、特にピペラジンであり、
Ｒ^５２は、殊にＲ^５が６員環である場合に、有利に置換されていてもよいフェニル環である。

Ｒ^４の特に有利な意味は、水素である。

上記の有利な意味のそれぞれの組合せは、なかでも特に好ましい。

それぞれの置換基が、以下に定義されているものである化合物は有利である：
Ｒ^１は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、アルキル基の１つのＣ原子については、ＯＲ^１１又は基Ｒ^５を有していることが可能であり、この場合、
Ｒ^１１は、水素又はＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
Ｒ^２は、水素、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、ニトロ、ＣＦ_３、ＣＮ、ＮＲ^２１Ｒ^２２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ^２３、ＯＲ^２１であり、この場合、
Ｒ^２１及びＲ^２２は、互いに独立に、水素又はＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
Ｒ^２３は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル又はフェニルであり、
Ｒ^３は、

であり、
Ｒ^３１は、水素、ＣＨＯ及び−（ＣＨ_２）_ｏ−（ＣＨＲ^３２）_ｍ−（ＣＨ_２）_ｎ−Ｒ^５であり、この場合、
Ｒ^３２は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＯＨ及びＯ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、
ｍ、ｏは、互いに独立に、０、１又は２であり、
ｎは、１、２、３又は４であり、
Ｒ^４は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、塩素、臭素、フッ素、ニトロ、シアノ、ＮＲ^４１Ｒ^４２、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ^４３、ＯＲ^４１であり、この場合、
Ｒ^４１及びＲ^４２は、互いに独立に、水素又はＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
Ｒ^４３は、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル又はフェニルであり、
Ｒ^５は、ＮＲ^５１Ｒ^５２又は以下の基：

の１つであり、この場合、
Ｒ^５１は、水素及び分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、
Ｒ^５２は、水素、ＣＯＣＨ_３、ＣＯ−Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＯＣＦ_３、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル基の１つの水素については、以下の基：ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル及びフェニルの１つによって置換されていてもよく、フェニル環については、以下の基：塩素、臭素、フッ素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_４−アルキル、ニトロ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−ジアルキルアミノ、ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＮ、ＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルの１つ又は２つを有していてもよい。

式Ｉ又はＩＩにおける基Ｒ^２の特に有利な位置は、ベンズイミダゾール環に対して３位及び４位である。基Ｒ^３については、ベンズイミダゾール環に対して３位又は４位が有利である。

Ｒ^１の特に有利な意味は水素である。

Ｒ^２の特に有利な意味は、水素、分枝鎖状又は非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキル、ニトロ、ＣＮ、ＮＨ_２、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルである。特に有利にＲ^２は、水素である。

Ｒ^３が、

である場合、Ｒ^３１の特に有利な意味は、水素又は−（ＣＨ_２）_ｐ−Ｒ^５であり、この場合、
ｐは、１又は２であり、
Ｒ^５２は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであるが、この場合、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル基の１つの水素は、以下の基：ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル及びフェニルの１つによって置換されていてもよく、フェニル環は、以下の基：塩素、臭素、フッ素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_４−アルキル、ニトロ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−ジアルキルアミノ、ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＮ、ＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルの１つ又は２つを有していてもよい。

Ｒ^３が、

である場合、Ｒ^３１の特に有利な意味は、水素又は−（ＣＨ_２）_ｐ−Ｒ^５であり、この場合、
ｐは、１又は２であり、
Ｒ^５２は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであってもよいが、この場合、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルル基の１つの水素は、以下の基：ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル及びフェニルの１つによって置換されていてもよく、フェニル環は、以下の基：塩素、臭素、フッ素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_４−アルキル、ニトロ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−ジアルキルアミノ、ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＮ、ＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルの１つ又は２つを有していてもよい。

Ｒ^３が、

である場合、
Ｒ^５２の特に有利な意味は、水素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_６−アルキルであってもよく、この場合、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル基の１つの水素は、以下の基：ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル及びフェニルの１つによって置換されていてもよく、フェニル環は、以下の基：塩素、臭素、フッ素、分枝鎖状及び非分枝鎖状のＣ_１〜Ｃ_４−アルキル、ニトロ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−ジアルキルアミノ、ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＮ、ＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルの１つ又は２つを有していてもよい。

Ｒ^４の特に有利な意味は、水素である。

上記の有利な意味のそれぞれの組合せは、なかでも特に有利である。

式Ｉの化合物は、ラセミ体、鏡像異性的に純粋な化合物又はジアステレオマーとして使用することができる。鏡像異性的に純粋な化合物が必要とされる場合には、これは、例えば適当な光学活性塩基又は酸を用いる式Ｉの化合物又はその中間生成物を用いる旧来のラセミ分割を実施することによって得ることができる。

また、本発明は、式Ｉの化合物のメソメリー又は互変異性体である化合物に関するものでもある。

更に、本発明は、化合物Ｉと適当な酸又は塩基との反応によって得ることができる式Ｉの化合物の生理学的に認容性の塩である。適当な酸及び塩基は、例えばＦｏｒｔｓｃｈｒｉｔｔｅｄｅｒＡｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ、１９６６、ＢｉｒｋｈａｅｕｓｅｒＶｅｒｌａｇ、第１０巻、第２２４〜２８５頁に一覧表にされている。これらには、例えば塩酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、ギ酸、マレイン酸、フマル酸等又は水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カリウム及びトリスが含まれる。

プロドラッグとは、生体内で代謝されて一般式Ｉ又はＩＩの化合物にされている化合物を意味する。代表的なプロドラッグは、アミノ酸のリン酸塩、カルバメート、エステル等である。

本発明による式Ｉ又はＩＩの２−フェニルベンズイミダゾールは、以下の反応式で概説されている種々の経路で調製することができる。

反応式１

フェニレンジアミンＶＩを用いるベンズアルデヒドＶの縮合は、有利に、高められた温度、通常８０〜１２０℃で、極性溶媒、例えばエタノール又はジメチルホルムアミドを使用し、酸、例えば酢酸を添加して、ベンズイミダゾールＶＩＩを生じる。水溶液として添加される弱い酸化剤、例えば銅（ＩＩ）塩を添加することは、この反応にとって有用である。

反応式２

フェニレンジアミンＶＩ中のＲがＮＨ_２である場合、縮合により、本発明による化合物Ｉが直接生じる。その他の点では、ＲがＯ−アルキルである場合には、高められた温度及び高められた圧力で前記エステルとアンモニアとを反応させて、アミドＩを生じさせることも可能である。また、エステルＸＩＩは、高められた温度、有利に８０〜１３０℃で、極性溶媒、例えばアルコールのブタノール及びエタノール中でヒドラジンと反応させるか、さもなければジメチルホルムアミド反応させて、ヒドラジンＸＩＩ（Ｒ＝ＮＨＮＨ_２）を生じさせ、これを、次に、還元条件下で、例えば還流下にアルコール中のラネー・ニッケルを用いて還元させてアミド位置にすることもできる。

式Ｉ（Ｒ^１＝Ｈ）におけるベンズイミダゾール基へのＲ^１基の導入は、反応成分Ｒ^１−Ｋ（Ｌ＝脱離基Ｃｌ、Ｂｒ及びＩ）を使用することを必要とするが、
例えばＪ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．１９９５、３２、７０７以降及びＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ１９９４、５０、５５３５中に記載されているように通常のアルキル化条件下に行われる。

反応式３

ベンズアルデヒドＶに対する選択しとして図式１中に示してあるように、ベンズアルデヒドの代わりに、安息香酸、例えばＸＩ（図式２を見よ）又はベンゾニトリル、例えばＸＩＩＩ（図式３を見よ）を使用することも可能である。前記誘導体の調製は、置換されたベンズアルデヒドＶの調製と類似している。ＸＩから出発して、ＶＩＩへの縮合は、２段階で行われる。第一に、安息香酸ＸＩが、ペプチド様のカップリングでアニリンＶＩと反応させられ、アミドＸＩＩが生じさせられる。このためには、例えばＨｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、ＭｅｔｈｏｄｅｎｄｅｒＯｒｇａｎｉｓｃｈｅｍＣｈｅｍｉｅ、第４版、Ｅ５、第Ｖ章又はＣ．Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ、ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＯｒｇａｎｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、ＶＣＨＰｕｂｌｉｓｈｅｒ、１９８９、第９７２頁以降に挙げられている通常の条件が用いられる。ベンズイミダゾールにするために行われる閉環は、高められた温度、例えば６０〜１８０℃で、溶媒、例えばジメチルホルムアミドを用いるか又は用いずに、酸、例えば酢酸を添加して又は酢酸自体の中で直接行われる。

同様に、フェニレンジアミンＶＩとベンゾニトリルＸＩＩＩとの反応は、通常の条件下で行われる。これは、例えば酸を添加して、高められた温度、例えば６０〜２００℃で、溶媒、ジメチルホルムアミド中で実施することができる。しかしながら、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、ＭｅｔｈｏｄｅｎｄｅｒｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎＣｈｅｍｉｅ、Ｅ５、第１３０４頁以降、Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５７、４２７及びＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８７、１０１７中に記載されているように、ベンゾニトリルからアミジンを製造するための通常の方法を使用することも可能である。

アミド基に置換されたアルキル連鎖を有するジアミノベンズアミドは、神経変性性疾患の治療につき、国際公開番号ＷＯ９６／３１４６２号中に開示されている。アミド基に置換されたアリール基を有するジアミノベンズアミドは、炎症及びアレルギーの治療につき、特公平０９−０５９２３６号公報中に開示されている。ＤＮＡ合成に対するベンゾヒドロキサム酸の作用は、Ｂｕｌｌ．Ｓｏｃ．Ｃｈｉｍ．Ｂｅｌｇ．１９９７、１０６、７６７において検討されていた。

アミノジベンゾジアゼピノンは、Ｐ．Ｖ．Ｋｈａｄｉｋａｒ他、Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．Ｃｈｅｍ．１９９８、３５、６７５中で調製されていた。２−フェニルベンズイミダゾリル−４−アミドの合成は、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ１、１９７９、２３０２〜２３０７中に記載されている。付加的にアミド基に置換されたアルキル連鎖を有し、細胞毒作用を有することが記載されている類縁化合物は、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９０、３３、８１４〜８１９に挙げられている。国際公開番号ＷＯ９７／０４７７１号ＩＩは、酵素ＰＡＲＰを抑制するベンズイミダゾール−４−アミドが一覧表にされている。特に、２位にフェニル環を有し、該フェニル環が、付加的に単純な置換基、例えばニトロ、メトキシ及びＣＦ_３によって置換されていてもよい誘導体は、活性であると記載されている。

国際公開番号ＷＯ９７／０４７７１号中の合成法を証明するために、反応式４は、例示的に、２−フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミドの合成を示している。

反応式４

ポリリン酸中でのジアミノ安息香酸メチルＩＶと安息香酸Ｖとの反応により、ベンズイミダゾール−４−カルボキシレートが２０％の収率で生じる。エステルＶＩは、引き続き、塩化アシルの形成を経て、アミドＶＩＩに変換される。この工程については、著者が６２％の収率を報告している。この合成順序の生じた全ての収率は、１２％である。国際公開番号ＷＯ９７／０４７７１号中で記載された他の全ての実施例の合成についての全ての収率は、５〜１９％の範囲内である。この合成法の１つの大きな欠点は、ＶＩに類似する化合物が、アミドへの引き続く変換を必要としており、該アミドのみが、活性ＰＡＲＰ抑制物質であるという事実である。

本発明により、式ＸＸ及びＸＸＩ：

〔式中、
Ｒ^４及びＲ^１は、上記のものである〕の２，３−ジアミノベンズアミド及びその塩が得られる。

化合物ＸＸ又はＸＸＩは、反応式５により、アルコール、例えばｎ−ブタノール中で１００℃でのヒドラジン水和物を用いる適切に置換されたエステルＶＩＩＩの加ヒドラジン分解、極性溶媒、例えばジメチルホルムアミド中で１００℃でのラネー・ニッケルを用いるヒドラジンの還元によって合成される。

反応式５

驚異的なことに、化合物ＸＸ又はＸＸＩからのベンズイミダゾール−４−アミドの合成により、更に、国際公開番号ＷＯ９７／０４７７１中に記載された合成よりも高い全収率で生じた。

式ＸＸ及びＸＸＩの化合物からのベンズイミダゾール−４−アミドの合成は、反応式６及び反応式７中にそれぞれ記載されている。

反応式６

適当なアルデヒドＯＨＣ−Ｂと化合物ＸＸ又はＸＸＩとの縮合により、ベンズイミダゾールＩが生じるが、この反応は、有利に極性溶媒、例えばエタノール又はジメチルホルムアミド中で、酸、例えば酢酸を添加して、高められた温度、通常８０〜１２０℃で実施される。水溶液として添加される弱い酸化剤、例えば銅（ＩＩ）塩の添加は、この反応に好ましい作用を有している。

反応式７

適当な酸ＨＯＯＣ−Ｂを用いて、最初に、化合物ＸＸ又はＸＸＩとのペプチド用のカップリングが行われる。この場合、例えばＨｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、ＭｅｔｈｏｄｅｎｄｅｒＯｒｇａｎｉｓｃｈｅｎＣｈｅｍｉｅ、第４版、Ｅ５、第Ｖ章又はＣ．Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ、ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＯｒｇａｎｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、ＶＣＨＰｕｂｌｉｓｈｅｒ、１９８９、第９７２頁以降に挙げられた通常の条件が使用される。次に、閉環が、高められた温度、例えば６０〜１８０℃で、溶媒、例えばジメチルホルムアミドの存在下又は不在で、酸、例えば酢酸を添加してか又は直接酢酸中で行われる。

この新規合成法の全収率と国際公開番号ＷＯ９７／０４７７１号における全収率とを比較するために、２−フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミドの合成を、反応式１１中に示してある。アミドＸＶを生じさせるためのエステルＸＩＶの反応は、７０％の収率で行われる。ベンズアルデヒドＸＶＩを用いるＸＶの縮合によるベンズイミダゾールＶＩＩの合成は、次に酸化を行うが、８５％の収率で行われる。６０％の生じた全収率は、対応する国際公開番号ＷＯ９７／０４７７１号における１２％の全収率を上回っている。

反応式８

本発明において構成された置換された２−フェニルベンズイミダゾールＩ又はＩＩは、酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ又はＰＡＲＰ（ＥＣ２．４．２．３０）の抑制物質である。

高い抑制能（Ｋ_ｉ＜５０ｎｍ）及び良好な生物学的利用能を有するＰＡＲＰ抑制物質に対して大きな需要が存在している。かかる化合物の同定及びその最適化のための事前調整は、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼの活性を定量化するための迅速かつ効率的な評価分析システムである。今日までに使用できる全ての評価分析システムは、ＰＡＲＰのための基質としての放射性ＮＡＤの使用及びポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリマー中へ導入された放射活性の定量化を基礎としている。従って、［^１４Ｃ］ＮＡＤを用いるＰＡＲＰアッセイは、ＪＢＣ２５４：９、３６４７〜３６５１、１９７９；ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ４４：５、９４７〜９５３、１９９２；ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９５、２２７、１〜１３、１９９５；ＪＢＣ２６７：３、１５６９〜１５７５中又は［α^３２Ｐ］ＮＡＤを用いるＰＡＲＰアッセイは、ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９５、２２６〜２３１、１９９１；ＪＢＣ２６４：８、４３１２〜４３１７、１９８９；Ａｎｔｉ−ＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｅｓｉｇｎ１０、５０７〜５１４、１９９５中又は［3Ｈ］ＮＡＤを用いるＰＡＲＰアッセイは、ＪＢＣ２５３：１８、６４５９、６４６６、１９７８；ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ、１０２、４３〜５７、１９７９；ＪＣｌｉｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ７７、１３１２〜１３２０、１９８６中に記載されている。

これらの方法は、双方とも手が込んでおり、処理量が制限されており、使用した放射性物質のために環境及び操作の安全性において問題がある。従って、迅速で非放射性評価分析システムに対して大きな需要が存在している。

更に、本発明は、
ａ）ａ１）ＰＡＲＰ；
ａ２）ＰＡＲＰ活性化剤；及び
ａ３）ＰＡＲＰ抑制物質又は少なくとも１つのＰＡＲＰ抑制物質が疑われる分析物
からなる反応混合物と一緒に、支持されていないか又は支持されたポリＡＤＰ−リボシル化可能な標的を培養し；
ｂ）ポリＡＤＰ−リボシル化反応を実施し；
ｃ）抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体を用いる、標的のポリＡＤＰ−リボシル化を定性的又は定量的に測定すること
からなるＰＡＲＰ抑制物質のための均一又は不均一に実施することのできる試験管内検出法に関するものでもある。

この検出法は、ポリＡＤＰリボシル化を実施する前に、有利にＰＡＲＰ類似体をＰＡＲＰ−活性化剤及びＰＡＲＰ−抑制物質又は少なくとも１種のＰＡＲＰ−抑制物質であることが疑われる分析物と一緒に、例えば約１〜３０分間、予備培養することによって実施される。

一本鎖切断を有するＤＮＡ（本発明によれば「活性ＤＮＡ」と呼称する）による活性化後に、ＰＡＲＰは、多数の核タンパク質をＮＡＤの存在下にポリＡＤＰ−リボシル化する。これらのタンパク質には、一方ではＰＡＲＰ自体が含まれるが、ヒストン等も含まれる。

この検出法で有利に使用されるポリＡＤＰ−リボシル化可能な標的は、ヒストンタンパク質の天然形又はこれから誘導されるポリＡＤＰ−リボシル化可能な当量である。Ｓｉｇｍａによって提供されたヒストン調製物（ＳＩＧＭＡ、カタログ番号Ｈ−７７５５；子牛胸腺からのヒストンタイプＩＩ−ａｓ、ＬｕｃｋＪＭ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２３３、１４０７（１９５８）、ＳａｔａｋｅＫ．他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２３５、２８０１（１９６０））を例として使用した。原理的には、ＰＡＲＰによるポリＡＤＰ−リボシル化しうるタンパク質の全てのタイプ又はその一部を使用することが可能である。有利に核タンパク質、例えばヒストン、ＤＮＡ−ポリメラーゼ、テロメラーゼまたはＰＡＲＰ自体である。相応するタンパク質から誘導される合成ペプチドも標的として機能することができる。

ＥＬＩＳＡアッセイにおいては、０．１μｇ／ウェル〜１００μｇ／ウェル、有利に１μｇ／ウェル〜１０μｇ／ウェルの範囲内のヒストン量を使用することが可能である。ＰＡＲＰ酵素の量は、０．２ｐｍｏｌ／ウェル〜２ｎｍｏｌ／ウェル、有利に２ｐｍｏｌ／ウェル〜２００ｐｍｏｌ／ウェルの範囲内であり；この場合、反応混合物は、その都度、１００μｌ／ウェルからなる。より小さなウェル及び相応してより小さな反応容量への削減は可能である。ＨＴＲＦアッセイにおいては、同量のＰＡＲＰが使用され、ヒストン又は変性されたヒストンの量は、２ｎｇ／ウェル〜２５μｇ／ウェル、有利に２５ｎｇ／ウェル〜２．５μｇ／ウェルの範囲内であり、この場合、反応混合物は、その都度、５０μｌ／ウェルからなる。より小さなウェル及び相応するより小さな反応容量への削減は可能である。

本発明により使用したＰＡＲＰ−活性化剤は、有利に活性化ＤＮＡである。

損傷したＤＮＡの種々のタイプが活性化剤として機能することができる。ＤＮＡ損傷は、ＤＮＡａｓｅ又は別のＤＮＡ変性酵素（例えば制限エンドヌクレアーゼ）を用いる消化、照射又は別の物理的方法又はＤＮＡの化学的処理によって製造することができる。更に、合成オリゴヌクレオチドを用いることによってＤＮＡ損傷の状況を意図的な方法でシミュレートすることが可能である。例示されたアッセイにおいて、子牛胸腺からの活性化されたＤＮＡを使用した（ＳＩＧＭＡ、製品番号Ｄ４５２２、ＣＡＳ：９１０８０−１６−９、子牛胸腺ＤＮＡ（ＳＩＧＭＡＤ−１５０１）及びデオキシリボヌクレアーゼタイプＩ（Ｄ−４２６３）の使用下でのＡｐｏｓｈｉａｎ及びＫｏｒｎｂｅｒｇの方法により製造。ＡｐｏｓｈｉａｎＨＶ及びＫｏｒｎｂｅｒｇＡ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２３７、５１９（１９６２））。活性化したＤＮＡを、０．１〜１０００μｇ／ｍｌ、有利に１〜１００μｇ／ｍｌの濃度範囲で、反応工程で使用した。

ポリ−ＡＤＰ−リボシル化反応は、本発明による方法においては、ＮＡＤ^＋の添加によって開始される。

ＮＡＤの濃度は、０．１μＭ〜１０ｍＭ、有利に１０μＭ〜１ｍＭの範囲内であった。

上記方法の不均一に実施可能な変法によれば、支持された標的のポリ−ＡＤＰ−リボシル化は、抗ポリ−（ＡＤＰ−リボース）−抗体を用いて測定される。このために、反応混合物を支持された標的から分離、洗浄及び抗体と一緒に培養する。前記抗体は、それ自体が標識されていてもよい。しかしながら、有利に、結合した抗ポリ−（ＡＤＰ−リボース）−抗体の検出のために、標識された第二抗体又は相応する標識された抗体フラグメントを使用することが有利である。適当な標識は、例えば放射線標識、発色団標識又は蛍光団標識、ビオチニル化、化学的発光標識、常磁性金属を用いる標識、特に例えばセイヨウワサビペルオキシダーゼを用いる酵素標識である。適当な検出技術は、当業者には一般に公知である。

均一に実施することができる上記方法の変法においては、支持されていない標的が、受容体蛍光団を用いて標識されている。この場合に有利に使用されている標的は、ビオチニル化されたヒストンであり、この場合、受容体蛍光団は、アビジン又はストレプトアビジンを介してヒストンのビオチン基に結合している。フィコビリタンパク質（例えばフィコシアニン、フィコエリトリン）、例えばＲ−フィコシアニン（Ｒ−ＰＣ）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、Ｒ−フィコエリトリン（Ｒ−ＰＥ）、Ｃ−フィコシアニン（Ｃ−ＰＣ）、Ｂ−フィコエリトリン（Ｂ−ＰＥ）又はこれらの互いの組み合わせ物又は蛍光染料、例えばＣｙ５、Ｃｙ７又はテキサスレッドとの組み合わせ物（タンデムシステム）が、受容体蛍光団として特に適している。
（ＴｈａｍｍａｐａｌｅｒｄＮ．他、ＳｏｕｔｈｅａｓｔＡｓｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒｏｐｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ＆ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ．２７（２）：２９７〜３０３、１９９６；ＫｒｏｎｉｃｋＭ．Ｎ．他、ＣｌｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ．２９（９）：１５８２〜６、１９８３；ＨｉｃｋｓＪ．Ｍ．、ＨｕｍａｎＰａｔｈｏｌｏｇｙ．１５（２）：１１２〜６、１９８４）。この場合に使用された染料ＸＬ６６５は、架橋したアロフィコシアニンである（ＧｌａｚｅｒＡＮ、Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３６：１７３１９８（１９８２）；ＫｒｏｎｉｃｋＭ．Ｎ．、Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．９２：１１３（１９８６）；ＭａｃＣｏｌｌＲ．他、Ｐｈｙｃｏｂｉｌｉｐｒｏｔｅｉｎｓ、ＣＲＣＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、ＢｏｃａＲａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ．（１９８７）；ＭａｃＣｏｌｌＲ．他、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２０８：１：４２４８（１９８１））。

更に、均一法においては、ドナーとアクセプターとが、ポリＡＤＰ−リボシル化したヒストンに対する標識された抗体の結合により空間的に緊密になっている場合に、アクセプター蛍光団へエネルギーを伝達することができるドナー蛍光団で標識されている抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体を用いて、支持されていない標的のポリＡＤＰリボシル化を測定することが有利である。ユーロピウムクリプテートは、抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体のためのドナー蛍光団として有利に使用される。

使用されたユーロピウム以外に、別の化合物が潜在ドナー分子であることも可能である。これは、一方では、クリプテートケージの変性を必然的に伴うことがある。ユーロピウムの代わりに別の希土類金属、例えばテルビウムも考えられる。蛍光が時間的遅延を保証する長い継続時間を有することは重要である（ＬｏｐｅｚＥ．他、ＣｌｉｎＣｈｅｍ３９／２、１９６〜２０１、１９９３；米国特許第５５３４６２２号）。

上記の検出法は、ＰＡＲＰ活性と、ヒストン上に形成されたＡＤＰ−リボースポリマーの量との相関関係である原理を基礎としている。本願明細書中に記載されたアッセイは、ＥＬＩＳＡアッセイ及びＨＴＲＦ（均一性時間分解蛍光）アッセイの形で、特殊な抗体を用いてＡＤＰ−リボースポリマーを定量化することを可能にする。この２つのアッセイの特殊な実施態様は、以下の実施例において詳細に説明されている。

開発されたＨＴＲＦ（均一性時間分解蛍光）アッセイシステムは、特殊な抗体を用いてヒストン上のポリ（ＡＤＰ−リボース）の形成を測定する。ＥＬＩＳＡとは異なり、このアッセイは、均一相で、分離工程及び洗浄工程を用いずに実施される。これは、より高いサンプル処理量及びより小さなエラー発生度を可能にする。ＨＴＲＦは、２つの蛍光団の間の蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）を基礎としている。ＦＲＥＴアッセイの場合、励起されたドナー蛍光団は、アクセプター蛍光団に対して、この２つが互いに空間的に緊密である場合に、そのエネルギーを伝達することができる。ＨＴＲＦ技術において、ドナー蛍光団は、ユーロピウムクリプテート［（Ｅｕ）Ｋ］であり、アクセプターはＸＬ６６５、安定化されたアロフィコシアニンである。ユーロピウムクリプテートは、ＪｅａｎＭａｒｉｅＬｅｈｎ（ストラスバーグ）による研究を基礎としている。（ＬｏｐｅｚＥ．他、ＣｌｉｎＣｈｅｍ３９／２、１９６〜２０１、１９９３；米国特許第５５３４６２２号）。

均一アッセイにおいては、全ての成分が、測定の間にも存在している。これは、このアッセイを実施するための利点（迅速性、複雑性）を有しているのに対して、アッセイ成分による干渉（固有蛍光、染料による消失等）が起きないようにすることが必要である。ＨＴＲＦは、２つの波長（６６５ｎｍ、６２０ｎｍ）での遅延された測定による前記の干渉が起きないようにする。ＨＴＲＦ蛍光は、極めて長い減衰時間を有しており、従って、遅延された測定が可能である。もはや短命の背景蛍光からのいかなる干渉（例えばアッセイ成分又は物質バンクの抑制物質からのもの）も存在しない。更に、測定は、着色された物質の消失効果を補償するために常に２つの波長で実施される。ＨＴＲＦアッセイは、例えば９６−ウェル又は３８４−ウェルの微量滴定プレートフォーマット中で実施することができ、ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＨＴＲＦＭｉｃｒｏｐｌａｔｅＡｎａｌｙｚｅｒ（ＰａｃｋａｒｄＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて評価される。

また、本発明によれば、ＰＡＲＰのための結合成分についての試験管内スクリーニング法で以下のものが得られる。

第一の変法は、
ａ１）支持体上でＰＡＲＰを固定化し；
ｂ１）固定化されたＰＡＲＰ相導体を、少なくとも１つの結合成分が疑われる分析物と接触させ；
ｃ１）固定化されたＰＡＲＰに結合した分析物成分を適当な培養期間後に測定すること
によって実施される。

第二の変法は、
ａ２）ＰＡＲＰのための少なくとも１つの可能な結合成分を含む分析物を支持体上に固定し；
ｂ２）固定化された分析物を、結合成分が求められている少なくとも１つのＰＡＲＰと接触させ；
ｃ２）ＰＡＲＰの結合について適当な培養期間後に、固定化された分析物を試験すること
を必要とする。

酵素及びＰＡＲＰ様酵素の活性及びＰＡＲＰ及びＰＡＲＰ様酵素に対するエフェクターの抑制作用を測定するためのアッセイシステム。

ａ）ポリ（ＡＤＰ−リボース）に対する抗体の製造
ポリ（ＡＤＰ−リボース）を、抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体の発生に対する抗原として使用することが可能である。抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体の製造は、文献（ＫａｎａｉＹ．他、（１９７４）ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍ５９：１、３００〜３０６；ＫａｗａｍａｉｔｓｕＨ．他（１９８４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２３，３７７１〜３７７７；ＫａｎａｉＹ．他（１９７８）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ３４，５０１〜５０８）中に記載されている。

就中、次のものを使用した：抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体（ポリクローナル抗血清、イエウサギ）、ＢＩＯＭＯＬ；注文番号ＳＡ−２７６。抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体（モノクローナル、マウス；クローン１０Ｈ；ハイブリドーマ上清、親和性精製）。

ハイブリドーマ培養上清から得られた抗血清又はモノクローナル抗体を、当業者に周知の方法でタンパク質Ａアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。

ｂ）ＥＬＩＳＡアッセイ
材料：
ＥＬＩＳＡ呈色試薬：ＴＭＢミックス、ＳＩＧＭＡＴ−８５４０
９６−ウェルの微量滴定プレート（ＦＡＬＣＯＮＭｉｃｒｏ−ＴｅｓｔＩＩＩａｅＦｌｅｘｉｂｌｅＡｓｓａｙＰｌａｔｅ、＃３９１２）をヒストン（ＳＩＧＭＡ、Ｈ−７７５５）で被覆した。ヒストンを、この目的のために、５０μｇ／ｍｌの濃度で炭酸緩衝液（０．０５ＭのＮａ_２ＨＣＯ_３；ｐＨ９．４）中に溶解させた。微量滴定プレートの個々のウェルを、それぞれ、前記ヒストン溶液１５０μｌと一緒に室温で少なくとも２時間又は４℃で一晩培養した。次に、これらのウェルを、室温で２時間、炭酸緩衝液中の１％濃度のＢＳＡ溶液（ＳＩＧＭＡ、Ａ−７８８８）１５０μｌを添加してブロックした。この後、洗浄緩衝液（１×ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ１０；ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水；Ｇｉｂｃｏ、注文番号１００１０）：０．２１ｇ／ｌＫＨ_２ＰＯ_４、９ｇ／ｌＮａＣｌ、０．７２６ｇ／ｌＮａ_２ＨＰＯ_４・７Ｈ_２Ｏ、ｐＨ７．４）を用いる３回の洗浄工程を続けた。洗浄工程を、微量滴定プレート洗浄装置中で全て実施した（「Ｃｏｌｕｍｂｕｓ」微量滴定プレート洗浄機、ＳＬＴ−Ｌａｂｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、オーストリア在）。

酵素反応のためには、その都度、事前に混合したものとしての酵素反応溶液及び基質溶液が必要とされる。前記溶液の絶対量は、アッセイウェルの意図された数に左右される。

ウェル１個当たりの酵素反応溶液の組成：
− ＰＡＲＰ反応緩衝液（１ＭのトリスーＨＣｌ、ｐＨ８．０、１００ｍＭのＭｇＣｌ_２、１０ｍＭのＤＴＴ）４μｌ
− ＰＡＲＰ（ヒト又はウシ）２０ｎｇ
− 活性ＤＮＡ（１ｍｇ／ｍｌ；ＳＩＧＭＡ、Ｄ−４５２２）４μｌ
− Ｈ_２Ｏ更に４０μｌ
ウェル１個当たりの基質溶液の組成：
− ＰＡＲＰ反応緩衝液（１０×）５μｌ
− ＮＡＤ溶液（１０ｍＭ、ＳＩＧＭＡＮ−１５１１）０．８μｌ
− Ｈ_２Ｏ４４μｌ
抑制物質を、１×ＰＡＲＰ反応緩衝液中に溶解させた。場合により、より高い濃度の抑制物質を溶解させるために使用したＤＭＳＯは、２％の最終濃度にまで問題なかった。酵素反応のために、酵素反応溶液４０μｌをそれぞれのウェルに導入し、抑制物質溶液１０μｌと一緒に１０分間培養した。次に、酵素反応を、ウェル１個当たりに基質溶液５０μｌを添加して開始させた。この反応を、室温で３０分間実施し、次に、洗浄緩衝液で３回洗浄することによって停止させた。

使用した一次抗体は、１：５０００の希釈度での特異性抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体であった。希釈を抗体緩衝液（ＰＢＳ中１％のＢＳＡ；Ｔｗｅｎｎ２００．０５％）。一次抗体の培養時間は、室温で１時間であった。引き続き、洗浄緩衝液で３回の洗浄後に、培養を、室温で１時間、抗体緩衝液中で１：１００００の希釈度の二次抗体（抗マウスＩｇＧ、Ｆａｂフラグメント、ペルオキシダーゼ結合、ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ、注文番号１５００．６８６；抗イエウサギＩｇＧ、ペルオキシダーゼ結合、ＳＩＧＭＡ、注文番号Ａ−６１５４）を用いて実施した。洗浄緩衝液で３回の洗浄の後に、ウェル１個当たりに呈色試薬（ＴＭＢミックス、ＳＩＧＭＡ）１００μｌを用いる呈色反応を室温で約１５分間続けた。この呈色反応を、２ＭのＨ_２ＳＯ_４１００μｌの添加によって停止させた。この後、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（ＳＬＴ−Ｌａｂｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、オーストリア在のＥＡＲ３４０ＡＴ「ＥａｓｙＲｅａｄｅｒ」）中での直接測定を続けた（４５０ｎｍ対６２０ｎｍ）。

抑制物質のＫ_ｉを測定するために、種々の濃度を、用量−効果ブロットを構成させるために使用した。これらの値は、特定の抑制物質濃度につき三倍にして得られた。相加平均を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ^（ｃ）Ｅｘｃｅｌを用いて求めた。ＩＣ_５０を、Ｍｉｃｒｏｃａｌ^（ｃ）ＯｒｉｇｉｎＳｏｆｔｗａｒｅ（バージョン５．０）（「ＳｉｇｍｏｉｄａｌＦｉｔ」）を用いて求めた。こうして算出されたＩＣ_５０値のＫ_ｉ値への変換を、「較正抑制物質」を用いて行った。該「較正抑制物質」も、それぞれの分析において求めた。「較正抑制物質」のＫ_ｉ値を、同じアッセイシステムにおいて当業者に周知の方法でディクソンダイアグラムの分析によって求めた。

ｂ）ＨＴＲＦ（均一性時間分解蛍光）アッセイ
ＨＴＦＲＰＡＲＰアッセイにおいて、ＰＡＲＰによる変性のための標的タンパク質としてのヒストンに、ＸＬ６６５蛍光団で間接的に標識をつけた。抗体には、ユーロピウムクリプテートで直接標識をつけた。ＸＬ６６５−蛍光団が、ヒストン上のポリ（ＡＤＰ−リボース）への結合によって保証される空間的に直接近接している場合には、エネルギー伝達が可能である。従って、６６５ｎｍでの放射は、結合抗体の量に直接比例しているが、これは、更にポリ（ＡＤＰ−リボース）の量に相応している。従って、測定した信号は、ＰＡＲＰ活性に相応している。使用した材料は、明記していないが、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて使用されるものと同じである（上記参照）。

ヒストンを、ヘペス緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ＝７．５）中に３ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させた。ビオチニル化を、スルホ−ＮＨＳ−ＬＣ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ、＃２１３３５Ｔ）を用いて行った。ヒストン１当たりビオチン４のモル比を使用した。培養時間は、９０分間であった（ＲＴ）。次に、ビオチニル化したヒストンを、過剰量のビオチニル化試薬を除去するために、Ｇ２５ＳＦＨＲ１０／１０カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、１７−０５９１−０１）によりへパス緩衝液（５０ｍＭ、ｐＨ＝７．０）中で精製した。抗ポリ（ＡＤＰ−リボース）抗体に、二官能性カップリング剤を用いて、ユーロピウムクロプテートで標識をつけた（ＬｏｐｅｚＥ．他、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３９／２、１９６〜２０１、１９９３、米国特許第５５３４６６２号）。精製を、Ｇ２５ＳＦＨＲ１０／３０カラムにより行った。３：１のクリプテート対抗体のモル比を達成した。収率は、２５％であった。共役物を−８０℃で、リン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ＝７）中の０．１％のＢＳＡの存在下に貯蔵した。

酵素反応のために、以下のものをそれぞれのウェルの中にピペットで入れた：
− ＰＡＲＰ（ヒト又はウシ）２０ｎｇを有するＰＡＲＰＨＴＲＦ反応緩衝液（５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ）中のＰＡＲＰ溶液１０μｌ
− ＰＡＲＰＨＴＲＦ反応緩衝液（５０μｇ／ｍｌ）中の活性ＤＮＡ１０μｌ
− ＰＡＲＰＨＴＲＦ反応緩衝液（１．２５μＭ）中のビオチニル化したヒストン１０μｌ
− ＰＡＲＰＨＴＲＦ反応緩衝液中の抑制物質１０μｌ。

これらの試薬を、２分間、予備培養してから、
− ＰＡＲＰＨＴＲＦ反応緩衝液（４１μＭ／ｍｌ）中のＮＡＤ溶液１０μｌ
を添加することによって反応を開始させる。反応時間は、室温で３０分間であった。

次のこの反応を、
− 「顕色」緩衝液（１００ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．２、０．２ＭのＫＦ、０．０５％ＢＳＡ）中のＰＡＲＰ抑制物質（２０μＭ、Ｋ_ｉ＝１０ｎＭ）１０μｌ
を添加することによって停止させた。

次に、以下のもの：
− ＥＤＴＡ溶液（ＳＩＧＭＡ、Ｅ−７８８９、Ｈ_２Ｏ中で０．５Ｍ）１０μｌ
− 「顕色」緩衝液（１５〜３１．２５ｎＭ）中のＳａ−ＸＬ６６５（ＰａｃｋａｒｄＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）１００μｌ
− 「顕色」緩衝液（１．６〜３．３ｎＭ）中の抗ＰＡＲＰクリプテート５０μｌ
を添加した。

この後、測定は、３０分後に（４時間まで）可能であった。測定を「ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＨＴＲＦＭｉｃｒｏｐｌａｔｅＡｎａｌｙｚｅｒ」（ＰａｃｋａｒｄＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）中で行った。Ｋ_ｉ値を、ＥＬＩＳＡアッセイについて説明したように算出した。

水溶性の測定
測定すべき化合物を、水の固定した容量中に直接溶解させ、生じた溶液を、酢酸ナトリウム溶液でｐＨ５〜６に調節して、試験すべき活性成分濃度に到達させる。測定した物質が、水溶性の塩の形ではない場合には、最小量のジメチルスルホキシド中に溶解させ、次に、水で希釈し（最終ジメチルスルホキシド濃度≦１％）、この後、ｐＨを再度調節した。潜在ＰＡＲＰ抑制物質ＮＵ１０７６（国際公開番号ＷＯ９７／０４７７１号）は、＜０．０１％の溶解度を示したのに対して、本発明による例２は、＞０．５％の溶解度を有している。

一般式Ｉの置換された２−フェニルベンズイミダゾールは、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の抑制物質であり、そのままポリ（ＡＤＰ−リボース）シンターゼ（ＰＡＲＳ）とも呼称されており、従って、前記酵素の活性の増大と関連した疾病の治療及び予防に使用することができる。

式Ｉの化合物は、種々の器官における虚血症に引き続く損傷の治療及び予期された虚血症の予防のための医薬を製造するために使用することができる。

従って、一般式Ｉの前記２−フェニルベンズイミダゾールは、虚血症、外傷（頭部外傷）、大量出血、クモ膜下出血及び卒中後に生じる神経変性性疾患及び多梗塞性痴呆症、アルツハイマー病、ハンチントン病及びてんかん、殊に汎発性てんかん発作、例えばプチマル及び緊張間発作及び部分てんかん発作、例えばテンポラルロープ（Ｔｅｍｐｏｒａｌｌｏｐｅ）及び複雑部分発作の治療及び予防及び心臓虚血症後の心臓に対する損傷及び腎性虚血症、例えば急性腎機能不全、急性腎不全後の腎臓に対する損傷又は腎臓移植の間又は後に生じる損傷の治療及び予防に使用することができる。一般式Ｉの化合物は、急性心筋梗塞及びその医学的消散（例えばＴＰＡ、レテプラーゼ（Ｒｅｔｅｐｌａｓｅ）、ストレプトキナーゼ又は機械的にレーザー又はロータブレーター（Ｒｏｔａｂｌａｔｏｒ）を用いる）の間又は後に生じる損傷及び心臓弁交換、動脈瘤切除及び心臓移植の間及び後の微小梗塞の治療に使用することができる。同様に、限界まで狭窄した冠状動脈の血管再生の場合、例えばＰＣＴＡ及びバイパス手術及び限界まで狭窄した末梢動脈、例えば脚部動脈における治療のために前記２−フェニルベンズイミダゾールＩを使用することも可能である。更に、２−フェニルベンズイミダゾールＩは、腫瘍及びその転移の化学療法において有用であることもあり、炎症及びリウマチ性疾患、例えばリウマチ性関節炎を治療するために使用することもできる。

新規ＰＡＲＰ抑制物質は、適切な薬理学的モデルにおいて検査された治療学的有効性を有していることがある。若干の適当なモデルの例は、表１中に一覧にしてある。

本発明による医薬調剤は、通常の製薬学的補助物質以外に、治療学的有効量の化合物Ｉを含む。

例えば散布剤、軟膏又はスプレー剤での局所的外用には、作用物質は、通常の濃度で存在していてもよい。該作用物質は、通常、０．００１〜１質量％、有利に０．００１〜０．１質量％の量で存在している。

内服の場合、調剤は、一回量で投与される。一回量で、体重１ｋｇあたり、０．１〜１００ｍｇが投与される。該調剤は、疾患の性質及び症状の重さに応じて一日に１回又はそれ以上の配量で投与してもよい。

必要とされる投与法に応じて、本発明による医薬調剤は、作用物質以外に、通常の賦形剤及び希釈剤を含む。局所的外用のためには、製薬学的補助物質、例えばエタノール、イソプロパノール、エトキシル化されたひまし油、エトキシル化された水素添加ひまし油、ポリアクリル酸、ポリエチレングリコール、ステアリン酸ポリエチレングリコール、エトキシル化された脂肪アルコール、パラフィン油、ペトロラタム及び羊毛脂を使用することが可能である。内服に適する例は、例えば乳糖、プロピレングリコール、エタノール、デンプン、タルク及びポリビニルピロリドンである。

また、酸化防止剤、例えばトコフェロール及びブチル化したヒドロキシアニソール及びブチル化したヒドロキシトルエン、矯味剤、安定化剤、乳化剤及び潤滑剤が存在していることも可能である。

作用物質以外に調剤中に存在する物質及び医薬調剤の製造において使用される物質は、毒物学的に認容性であり、特に作用物質と相容性である。該医薬調剤は、常法で、例えば作用物質と通常の賦形剤及び希釈剤とを混合することによって製造される。

該医薬調剤は、種々の方法で、例えば経口、腸管外、例えば点滴による静脈内、皮下及び局所的に投与することができる。従って、可能な形態は、錠剤、エマルジョン、輸液及び注射液、ペースト、軟膏、ジェル、クリーム、ローション、散布剤及びスプレー剤である。

実施例
例１
２−（４−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ−１−イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

ａ）４−（２−N,N-ジエチルアミノエチ-1-イルオキシ）ベンズアルデヒド
４−ヒドロキシベンズアルデヒド１５ｇ（１２２mmol）、Ｎ−（２−クロロエチル）−N,N−ジエチルアミン１６．７ｇ（１２２mmol）および炭酸カリウム３３．９ｇ（２４６mmol）をエチルメチルケトン３００ｍｌ中のスパチュラ先端量の１８−クラウン−６と一緒に、６時間還流した。濾過した後に、真空中で濃縮した。残留物をエーテルと２Ｍ水酸化ナトリウム溶液の間で分け、かつエーテル相を分離し、乾燥しかつ真空中で濃縮した。中間生成物２４．８ｇが得られた。
ｂ）エチル２−（４−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキシレート
エチル２，３−ジアミノベンゾエート２ｇ（１１mmol）および濃酢酸１．４ｍｌをメタノール２５ｍｌ中に溶解した。次にメタノール５０ｍｌ中に溶解した中間生成物１a ３．２ｇ（１４．４mmol）を３０分間にわたり滴加した。引き続き、温水３７．５ｍｌ中に溶解した酢酸銅（II）２．９ｇ（１４．４mmol）を瞬時に滴加し、次に該混合物を２０分間還流した。反応溶液を５０℃まで冷却し、かつ３２％塩酸４．５ｍｌを添加した。次に水２５ｍｌ中の硫化ナトリウム水和物４．３ｇを注意深く滴加し、かつ該混合物を１５分間撹拌した。反応溶液を氷水中に注ぎ、得られた沈殿物を吸引濾過した。濾液を炭酸水素ナトリウム水溶液でアルカリ性にし、数回酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル相を分離し、乾燥しかつ真空中で濃縮した。中間生成物４．４ｇが得られた。
ｃ）２−（４−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボヒドラジド
ヒドラジン水和物２．７ｇ（５４mmol）をエタノール３０ｍｌ中の中間生成物１ｂ４．１ｇ（１０．７mmol）に添加し、かつ混合物を１０時間環流した。次に有機溶剤を真空中で除去し、かつ濾液を水と酢酸エチルの間で分けた。酢酸エチル相を分離し、乾燥しかつ真空中で濃縮した。次にこのように得られた残留物をエーテルで処理し、再び吸引濾過した。これにより中間生成物１．７ｇが得られた。
ｄ）２−（４−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
ラニーニッケル約１．６ｇをジメチルホルムアミド／水（２／１）４５ｍｌ中の中間生成物１ｃ１．６ｇ（４．５mmol）に添加し、かつ該混合物を１００℃で６時間加熱した。次に反応混合物を濾過し、かつ濾液を大量の水で希釈し、その結果、生成物が沈殿した。生成物１．２ｇが得られた。

例２
２−（４−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２塩酸塩

例１の生成物０．２ｇを酢酸エチルと少量のテトラヒドロフランとの混合物中に溶解し、かつエーテル性塩化水素溶液を添加して沈殿物を形成した。この沈殿物を吸引濾過し、アセトン中で懸濁させ再び吸引濾過し、生成物約２００ｍｇが得られた。

例３
２−（３−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

ａ）３−（２−N,N-ジエチルアミノエチ-1-イルオキシ）ベンズアルデヒド
３−ヒドロキシベンズアルデヒド６．１ｇ（５０mmol）をエタノール１００ｍｌ中に溶解しかつナトリウムエタノラート３．５ｇ（５０mmol）を添加した。混合物を１５分間撹拌した。次に、Ｎ−（２−クロロエチル）−N,N-ジエチルアミン７．５ｇ（５５mmol）を添加し、かつ該混合物を１２時間環流した。次に反応混合物を真空中で濃縮した。次に残留物をエーテルと１Ｍ水酸化ナトリウム溶液の間で分け、エーテル相を分離し、乾燥しかつ真空中で濃縮した。中間生成物約７．６ｇが得られた。
ｂ）エチル２−（３−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキシレート
エチル２，３−ジアミノベンゾエート１ｇ（５．５mmol）および濃酢酸０．６８ｍｌをメタノール２０ｍｌ中に溶解した。次にメタノール３０ｍｌ中に溶解した中間生成物３a １．６ｇ（７．２mmol）を３０分間にわたり滴加した。引き続き、温水１９ｍｌ中に溶解した酢酸銅（II）１．１ｇ（５．５mmol）を瞬時に滴加し、次に該混合物を２０分間還流した。反応溶液を５０℃まで冷却し、かつ３２％塩酸２．２５ｍｌを添加した。次に水１５ｍｌ中の硫化ナトリウム水和物２．１３ｇの溶液を注意深く滴加し、かつ該混合物を１５分間撹拌した。反応溶液を氷水中に注ぎ、得られた沈殿物を吸引濾過した。濾液を炭酸水素ナトリウム水溶液でアルカリ性にし、数回酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル相を分離し、乾燥しかつ真空中で濃縮した。中間生成物２．４ｇが得られた。
ｃ）２−（３−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボヒドラジド
ヒドラジン水和物１．５ｇ（３０mmol）をブタノール３０ｍｌ中の中間生成物３ｂ２．３ｇ（６．０mmol）に添加し、かつ混合物を１２０℃で１０時間
加熱した。次に反応混合物を大量の水で希釈しかつ酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル相を分離し、乾燥しかつ真空中で濃縮した。中間生成物１．７ｇが得られた。
ｄ）２−（３−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
ラニーニッケル約１．５ｇをジメチルホルムアミド／水（２／１）３０ｍｌ中の中間生成物３ｃ１ｇ（２．７mmol）に添加し、かつ該混合物を１００℃で６時間加熱した。次に反応混合物を濾過し、かつ濾液を大量の水で希釈し、生成物を沈殿させた。生成物０．７４ｇが得られた。

例４
２−（３−（２−N,N-ジエチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２塩酸塩

例３からの生成物０．２ｇを酢酸エチルとテトラヒドロフランとの混合物中に溶解し、かつエーテル性塩化水素溶液を添加して沈殿物を形成させた。この沈殿物を吸引濾過し、アセトン中で懸濁させ再び吸引濾過し、生成物約２００ｍｇが得られた。

続いて、例１と同様に繰り返した。

例５
２−（３−（２−N,N-ジメチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例６
２−（３−（２−N,N-ジメチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）−４−メトキシ−フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例７
２−（３−（２−N,N-ジメチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）−４−メトキシ−フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例８
２−（２−（２−N,N-ジメチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例９
２−（３−（２−N,N-ジメチルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２塩酸塩

例１０
２−（３−（３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロピ-1-イルオキシ）フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例１１
２−（３−（３−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチ-1-イルオキシ）フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例１２
２−（３−（３−（４−（３−クロロフェニル）−１−ピペラジニル）プロピ-1-イルオキシ）フェニル）−ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例１３
２−（３−（３−（N,N-ジエチルアミノ）プロピ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例１４
２−（３−（３−アミノプロピ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例１５
２−（３−（２−アミノエチ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

以下の例は、上記の方法と同様に製造することができる：
例１６
２−（４−（３−N,N−ジエチルアミノ）プロピ−１−イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例１７
１−（３−（N,N-ジエチルアミノ）プロピ-1-イル）−２−（４−（３−N,N-ジエチルアミノ）プロピ−イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例１８
２−（４−（２−ピロリジン−１−イル）エチ−１−イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例１９
１−（３−（ピロリジン−１−イル）プロピ−１−イル）−２−（４−（２−（ピロリジン−１−イル）エチ−１−イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例２０
２−（４−（３−（N,N-ジエチルメチルアミノ）プロピ-1-イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例２１
１−（３−（N,N-ベンジルメチルアミノ）プロピ-1-イル）−２−（４−（３−（N,N-ベンジルメチルアミノ）プロピ−１−イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ
ＭＳ：ｍ／ｅ＝５７５（Ｍ^＋）

例２２
２−（４−（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピ−１−イルオキシ）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×３ＨＣｌ
ＭＳ：ｍ／ｅ＝３９３（Ｍ^＋）

例２３
２−（３−（２−（N,N-ベンジルメチルアミノ）エチ−１−イルオキシ）−４−ニトロフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例２４
２−（４−（３−トリフルオロアセトアミドメチルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

ａ）エチル２−（４−ニトロフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキシレート
エチル２，３−ジアミノベンゾエート１．５ｇ（８．３mmol）および濃酢酸１．１ｍｌをメタノール５０ｍｌ中に溶解した。次にメタノール１５０ｍｌ中に溶解した４−ニトロベンズアルデヒド１．６ｇ（１０．８mmol）を３０分間にわたり滴加した。引き続き、温水１００ｍｌ中に溶解した酢酸銅（II）２．２ｇ（１０．８mmol）を瞬時に滴加し、引き続き全混合物を２０分間還流した。反応溶液を５０℃まで冷却し、かつ３２％塩酸３ｍｌを添加した。次に水５０ｍｌ中の硫化ナトリウム水和物３．１ｇの溶液を注意深く滴加し、かつ全混合物を１５分間撹拌した。反応溶液を氷水中に注ぎ、得られた沈殿物を吸引濾過した。濾液を炭酸水素ナトリウム水溶液でアルカリ性にし、酢酸エチルで繰り返し抽出した。酢酸エチル相を分離し、乾燥しかつ減圧下で濃縮した。これにより中間生成物２．２ｇが得られた。
ｂ）２−（４−（４−ニトロフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボヒドラジド
ヒドラジン水和物１．７ｍｌ（３４mmol）をエタノール２５ｍｌ中の中間生成物２４a ２．１ｇ（６．７mmol）に添加し、かつ全混合物を４時間還流した。引き続き、有機溶剤を減圧下で除去し、かつ残留物を水と酢酸エチルの間で分けた。酢酸エチル相を分離し、乾燥しかつ減圧下で濃縮した。次に得られた残留物をエーテルで処理し、再び吸引濾過し、中間生成物１．７ｇが得られた。
ｃ）２−（４−（４−アミノフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
炭素上のパラジウム（１０％）約１ｇをエタノール／酢酸（５／１）１２０ｍｌ中の中間生成物２４ｂ１．７ｇ（５．７mmol）に添加し、全混合物を水素で水素化した。次に反応混合物を濾過しかつ濾液を減圧下で濃縮した。残留物をジメチルホルムアミドおよび水（7/3）の混合物７０ｍｌ中に取った。次にラニーニッケル２ｇを添加しかつ全混合物を１００℃で４時間加熱した。次に反応混合物を濾過し、かつ濾液を減圧下で濃縮した。得られた残留物をエーテル中に懸濁させ、吸引濾過して生成物１．５ｇが得られた。
ｄ）２−（４−（３−トリフルオロアセトアミドメチルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
中間生成物２４ｃ１．４ｇ（５．６mmol）および２，５−ジメトキシ−３−（トリフルオロアセトアミドメチル）テトラヒドロフラン１．８ｇ（６．９mmol）を濃酢酸５０ｍｌ中に添加し、かつ該混合物を１０分間還流した。引き続き全混合物を減圧下で濃縮し、かつ得られた残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより、酢酸エチルを移動相として用いて精製した。これにより生成物１．９ｇが得られた。

例２５
２−（４−（３−アミノメチルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例２４からの化合物１．７ｇ（４mmol）をテトラヒドロフラン７０ｍｌ中に溶解し、かつ水２５ｍｌ中の水酸化リチウム０．３８ｇ（１５．９mmol）の溶液と混合した。全混合物を室温で２時間撹拌した。次に反応混合物を希塩酸で中和し、かつ有機溶剤を減圧下で除去した。得られた沈殿物を吸引濾過しかつ乾燥させた。これにより生成物０．８７ｇが得られた。

例２６
２−（４−（３−アミノメチルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２メタンスルホン酸

例２５からの生成物０．１ｇをテトラヒドロフラン２ｍｌ中に溶解し、かつメタンスルホン酸２０．５μｌと混合し、水５ｍｌで希釈した。引き続き混合物を水で希釈し、かつ得られた溶液を凍結乾燥して生成物１１７ｍｇが得られた。

例２７
２−（４−（１−イミダゾリル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキシレート

ａ）エチル２−（４−（１−イミダゾリル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
エチル２，３−ジアミノベンゾエート１ｇ（５．５mmol）および濃酢酸０．７ｍｌをメタノール１３ｍｌ中に溶解した。メタノール２５ｍｌ中に溶解した４−イミダゾール−１−イルベンズアルデヒド１．２４ｇ（７．２mmol）を３０分間にわたり滴加した。温水１９ｍｌ中に溶解した酢酸銅（II）１．４ｇ（７．２mmol）を瞬時に滴加し、引き続き全混合物を２０分間還流した。反応溶液を５０℃まで冷却し、かつ３２％塩酸２．２５ｍｌを添加した。続いて水１５ｍｌ中の硫化ナトリウム水和物２．１３ｇの溶液を注意深く滴加し、全混合物を１５分間撹拌した。反応溶液を氷水中に注ぎ、得られた沈殿物を吸引濾過した。濾液を炭酸水素ナトリウム水溶液でアルカリ性にし、酢酸エチルで繰り返し抽出した。酢酸エチル相を分離し、乾燥しかつ減圧下で濃縮した。これにより中間生成物１．７ｇが得られた。
ｂ）２−（４−（１−イミダゾリル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボヒドラジド
ヒドラジン水和物５ｍｌをブタノール３０ｍｌ中の中間生成物２７ａ１．６ｇ（５．０mmol）中に添加し、かつ全混合物を８時間還流した。次に該反応混合物を減圧下で濃縮し、残留物を水と酢酸エチルの間で分けた。酢酸エチル相を分離し、乾燥しかつ減圧下で濃縮した。これにより中間生成物０．５５ｇが得られた。
ｃ）２−（４−（１−イミダゾリル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
ラニーニッケル約１．５ｇをジメチルホルムアミド／水（２／１）３５ｍｌ中の中間生成物２７ｂ０．５３ｇ（１．７mmol）中に添加し、かつ全反応混合物を１００℃で８時間加熱した。次に反応混合物を濾過し、かつ濾液を大量の水で希釈し、生成物の沈殿が生じた。これにより生成物０．１９ｇが得られた。

例２８
２−（４−（１−イミダゾリル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２メタンスルホン酸

手順２６aと同様に、例４からの化合物５０ｍｇをビスメタンスルホネートに転換しかつ凍結乾燥した。これにより生成物６０ｍｇが得られた。

例２９
２−（３−（３−トリフルオロアセトアミドメチルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

ａ）エチル２−（３−ニトロフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキシレート
エチル２，３−ジアミノベンゾエート４．２ｇ（２３mmol）および濃酢酸３．１ｍｌをメタノール１００ｍｌ中に溶解した。メタノール１５０ｍｌ中に溶解した４−ニトロベンズアルデヒド４．５ｇ（３０mmol）を３０分間にわたり滴加した。温水１５０ｍｌ中に溶解した酢酸銅（II）６ｇ（３０mmol）を瞬時に滴加し、引き続き全混合物を２０分間還流した。反応溶液を５０℃まで冷却し、かつ濃塩酸８．３ｍｌを添加した。続いて水１００ｍｌ中の硫化ナトリウム水和物８．６ｇの溶液を注意深く滴加し、全混合物を１５分間撹拌した。反応溶液を氷水中に注ぎ、得られた沈殿物を吸引濾過した。濾液を炭酸水素ナトリウム水溶液でアルカリ性にし、酢酸エチルで繰り返し抽出した。酢酸エチル相を分離し、乾燥しかつ減圧下で濃縮した。これにより中間生成物６．１ｇが得られた。
ｂ）２−（３−ニトロフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボヒドラジド
ヒドラジン水和物４．８ｇ（９６mmol）をエタノール７０ｍｌ中の中間生成物２９ａ６ｇ（１９．３mmol）中に添加し、かつ全混合物を３時間還流した。引き続き、該反応混合物を水に注ぎ、得られた沈殿物を吸引濾過した。これにより中間生成物４．８ｇが得られた。
ｃ）２−（３−アミノフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
炭素上のパラジウム（１０％）約０．５ｇをエタノール４００ｍｌ中の中間生成物２９ｂ４．７ｇ（１５．８mmol）に添加し、全反応混合物を水素で水素化した。次に反応混合物を濾過しかつ減圧下で濃縮した。残留物をジメチルホルムアミド１００ｍｌ中に取り、次に水７０ｍｌで希釈した。次にラニーニッケル１０ｇを添加しかつ全混合物を９０℃で２時間加熱した。引き続き混合物を濾過し、かつ濾液を減圧下で濃縮した。得られた残留物を酢酸エチル／エーテルから結晶させ、生成物３．１ｇが得られた。
ｄ）２−（３−（３−トリフルオロアセトアミドメチルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
中間生成物２９ｃ２．２ｇ（８．７mmol）および２，５−ジメトキシ−３−（トリフルオロアセトアミドメチル）テトラヒドロフラン２．８ｇ（１０．９mmol）を濃酢酸７５ｍｌ中に添加し、かつ該混合物を１５分間還流した。引き続き全混合物を減圧下で濃縮し、かつ得られた残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより、酢酸エチル／メタノール（１０／１）を移動相として用いて精製した。これにより生成物２．５ｇが得られた。
ＭＳ：ｍ／ｅ＝４２７(M^＋)

例３０
２−（３−（３−アミノメチルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例２９からの化合物２．３ｇ（５．４mmol）をテトラヒドロフラン１００ｍｌ中に溶解し、かつ水５０ｍｌ中に溶解した水酸化リチウム０．２６ｇ（１０．８mmol）と混合した。全混合物を室温で２時間撹拌した。引き続き混合物を希塩酸の添加により中和し、かつ有機溶剤を減圧下で除去した。ゆっくりと析出した沈殿物を吸引濾過した。これにより生成物０．６１ｇが得られた。

例３１
２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

ａ）４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ベンズアルデヒド
４−フルオロベンズアルデヒド２０ｇ（１６１mmol）、１−メチルピペラジン４８．４ｇ（４８３mmol）および炭酸カリウム２２．３ｇ（１６１mmol）をジメチルホルムアミド５０ｍｌ中に添加し、かつ混合物を１３０℃で３６時間加熱した。引き続き、該混合物を減圧下で濃縮した。濾液を酢酸エチルと２Ｍ塩酸の間で分けた。水相を分離し、かつ炭酸水素ナトリウム水溶液を用いてアルカリ性にした。この水相を酢酸エチルで抽出し、かつ有機相を分離し、乾燥しかつ減圧下で濃縮した。これにより中間生成物４８．７ｇが得られた。
ｂ）エチル２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキシレート
エチル２，３−ジアミノベンゾエート１．５ｇ（８．３mmol）および中間生成物８ａ２．２ｇ（１０．８mmol）を手順６ａの方法により反応させ、シリカゲルクロマトグラフィーによる精製の後に生成物２．８ｇが得られた。
ｃ）２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボヒドラジド
手順６ｂの方法により、中間生成物２１ｂ１．３５ｇ（３．７mmol）をヒドラジンと反応させて生成物１．１ｇが得られた。
ｄ）２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
手順２９ｃの方法により、中間生成物をラニーニッケルで処理し、生成物を得た。

例３２
２−（３−（２−トリフルオロアセトアミドメチルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

上記の化合物を例２９と同様に、エチル２，３−ジアミノベンゾエート、３−ニトロベンズアルデヒドおよび２，５−ジメトキシ−２−（トリフルオロアセトアミドメチル）テトラヒドロフランから製造した。

例３３
２−（３−（３−ホルミルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

上記の化合物を例２９と同様に、エチル２，３−ジアミノベンゾエート、３−ニトロベンズアルデヒドおよび２，５−ジメトキシテトラヒドロフラニル−３−カルバルデヒドから製造した。

例３４
２−（３−（３−N,N-ベンジルメチルアミノメチル）ピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例３３からの化合物２．０ｇ（６．０mmol）、Ｎ−メチルベンジルアミン０．７４ｇ（６．０mmol）および氷酢酸０．４ｍｌ（６．０mmol）をエタノール１００ｍｌ中に溶解した。室温で、シアノホウ水素化ナトリウム０．３８ｇ（６．０mmol）を少しずつ同時に添加し、かつ全混合物を室温で１６時間撹拌した。引き続き、該混合物を炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈し、かつ酢酸エチルで抽出した。有機相を分離し、乾燥しかつ減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した（移動相：酢酸エチル／メタノール＝１０／１）。このように得られた生成物をアセトン中に溶解し、かつイソプロパノール性塩化水素溶液と混合し、かつ析出した生成物を吸引濾過した。これにより生成物０．９８ｇが得られた。

例３５
２−（３−（２−アミノメチルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例３２からの化合物１．０ｇ（２．３mmol）を水１００ｍｌ中に溶解し、かつ水２０ｍｌ中に溶解した水酸化リチウム０．５６ｇ（２３．４mmol）と混合した。全混合物を室温で９０分間撹拌した。引き続き、有機溶剤を減圧下で除去しかつ得られた水相を希塩酸を用いて注意深く中和した。得られた沈殿物を吸引濾過した。これにより生成物０．５５ｇが得られた。

例３６
２−（４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×３ＨＣｌ

例３１からの生成物０．２５ｇを酢酸エチル／テトラヒドロフラン（４／１）２５ｍｌ中に溶解し、かつエーテル性塩酸を滴加した。得られた沈殿物をアセトンで処理し、かつ吸引濾過した。これにより生成物０．２５ｇが得られた。

例３７
２−（４−（４−ｔ−ブチルオキシピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例３８
２−（４−（ピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例３９
２−（３−（２−アミノメチル）ピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例４０
２−（４−（３−ホルミルピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例４１
２−（４−（３−（N,N−ベンジルメチルアミノメチル）ピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ
ＭＳ：ｍ／ｅ＝４３５(M^＋)

例４２
２−（４−（３−（N,N−ジエチルアミノメチル）ピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ

例４３
２−（４−（３−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）ピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例４４
２−（４−（３−（４−ベンジルピペラジン−１−イルメチル）ピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例４５
２−（４−（３−（ピペラジン−１−イルメチル）ピロール−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例４６
２−（４−（４−ベンジルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×３ＨＣｌ

例４７
２−（４−（４−シクロヘキシルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例４８
２−（４−（４−エチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例４９
２−（４−（４−ｎ−ブチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例５０
２−（４−（４−ジフェニルメチルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例５１
２−（２−メチル−４−ピペラジン−１−イルフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×３ＨＣｌ
ＭＳ：ｍ／ｅ＝３３５(M^＋)

例５２
２−（３−ピペラジン−１−イルフェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×３ＨＣｌ

例５３
２−（４−（４−イソプロピルピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例５４
２−（４−（４−ｔ−ブチルオキシカルボニルホモピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例５５
２−（４−（ホモピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例５６
２−（４−（４−ピペリジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例５７
２−（４−（３−アミノピロリジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド×２ＨＣｌ
ＭＳ：ｍ／ｅ＝３２１(M^＋)

例５８
２−（４−（４−ベンジルホモピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例５９
２−（４−（４−メチルホモピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例６０
２−（４−（４−エチルホモピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例６１
２−（４−（４−イソプロピルホモピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例６２
２−（４−（４−ブチルホモピペラジン−１−イル）フェニル）ベンズイミダゾール−４−カルボキサミド

例６３
２−フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミドの合成
ａ）２，３−ジアミノベンズアミド×２塩酸塩
室温で、１−ブタノール１５００ｍｌ中のエチル２，３−ジアミノベンゾエート２００ｇ（１．１１mmol）の溶液を注意深くヒドラジン水和物４００ｍｌと混合した。該混合物を１００℃で１５時間加熱した。引き続きバッチをその体積の３分の１に濃縮した。この溶液を水５００ｍｌおよびジメチルホルムアミド１０００ｍｌ中のラニーニッケル約２００ｇの懸濁液にゆっくりと滴加した。該混合物を１００℃で２時間加熱した。１０℃まで冷却した後に、触媒を除去しかつ濾液を減圧下で濃縮した。得られた油をメタノール５００ｍｌ中に溶解しかつジエチルエーテルと混合した。メタノール中の得られた油の溶液を還流下に塩化水素／イソプロパノールと混合した。形成された沈殿物を冷却しながら吸引濾過し、ジエチルエーテル中で懸濁させ、再び吸引濾過した。これにより生成物１７２．２ｇが得られた。
ｂ）２−フェニルベンズイミダゾール−４−カルボキサミド
室温で、１ｂからの生成物１．６８ｇ（７．５mmol）をエタノール１００ｍｌ中の水酸化カリウム粉末０．８４ｇ（１５mmol）の溶液に添加した。５分間後に、氷酢酸１．３５ｇ（２２．５mmol）を添加し、かつエタノール２０ｍｌ中のベンズアルデヒド１ｇ（９．３８mmol）の溶液を３０分間にわたり滴加した。次に蒸留水２０ｍｌ中の酢酸銅（II）２．５９ｇ（１２．９７mmol）の溶液を瞬時に滴加した。該混合物を２時間環流した。バッチを水に注ぎ、濃アンモニア溶液を用いてアルカリ性にし、かつ酢酸エチルで抽出した。有機相を活性炭の添加を伴って水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。樹脂状の残留物をジエチルエーテルでこすり、かつ分離した結晶をジエチルエーテルで洗浄しかつ減圧下で乾燥した。これにより生成物１．５ｇが得られた。

Claims

式ＸＸまたはＸＸＩ

〔式中、Ｒ^４は、水素であり、Ｒ^１は、水素または分枝鎖状Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルまたは非分枝鎖状Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、この場合アルキル基の１個のＣ原子は、ＯＲ^１１または基Ｒ^５を有していてもよく、但し、Ｒ^１１は、水素またはＣ_１〜Ｃ_４−アルキルであり、
Ｒ^５は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、ＮＲ^７Ｒ^９または

であることができ、
Ｒ^７は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルフェニルまたはフェニルであり、この場合環は、２個までの基Ｒ^７１によって置換されていてもよく、
Ｒ^７１は、ＯＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、塩素、臭素、沃素、弗素、ＣＦ_３、ニトロまたはＮＨ_２であり、
Ｒ^９は、水素、ＣＯＣＨ_３、ＣＯ−Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＯＣＦ_３または分枝鎖状Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルまたは非分枝鎖状Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルであり、この場合Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルの１または２個の水素は、そのつど次の基：ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルまたはフェニルの中の１個によって置換されていてもよく、また、フェニル環は、次の基：沃素、塩素、臭素、弗素、分枝鎖状Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキルまたは非分枝鎖状Ｃ_１〜Ｃ_６−アルキル、ニトロ、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_４−ジアルキルアミノ、ＯＨ、Ｏ−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキル、ＣＮ、ＣＦ_３またはＳＯ_２−Ｃ_１〜Ｃ_４−アルキルの中の１または２個を有していてもよい〕で示される化合物またはその塩。
式ＸＸまたはＸＸＩの化合物またはその塩の製造法において、相応するエステルをヒドラジン水和物を用いてアルコール中でアミドＸＸまたはＸＸＩに変換し、その後にヒドラジンをラニーニッケルを用いて極性溶剤中で還元することを特徴とする、式ＸＸまたはＸＸＩの化合物またはその塩の製造法。
ＰＡＲＰ抑制剤の合成においての式ＸＸまたはＸＸＩの化合物の使用。