JP2008531010A - デコリン遺伝子を含む遺伝子伝達システム及びこれを含む薬剤学的抗腫瘍組成物 - Google Patents
デコリン遺伝子を含む遺伝子伝達システム及びこれを含む薬剤学的抗腫瘍組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2008531010A JP2008531010A JP2007556977A JP2007556977A JP2008531010A JP 2008531010 A JP2008531010 A JP 2008531010A JP 2007556977 A JP2007556977 A JP 2007556977A JP 2007556977 A JP2007556977 A JP 2007556977A JP 2008531010 A JP2008531010 A JP 2008531010A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- adenovirus
- tumor
- decorin
- gene
- δe1b
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000738 Decorin Proteins 0.000 title claims abstract description 153
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 20
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 title claims description 10
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title abstract description 28
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 title description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims abstract description 313
- 102000004237 Decorin Human genes 0.000 claims abstract description 123
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 45
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 45
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 42
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 claims abstract description 42
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000010189 intracellular transport Effects 0.000 claims abstract description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 267
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 208
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 193
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 113
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 84
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 65
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 57
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 53
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 42
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 33
- 101150075174 E1B gene Proteins 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 230000035699 permeability Effects 0.000 claims description 22
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 10
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 9
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 7
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 7
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 claims description 7
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 claims description 6
- 230000037387 scars Effects 0.000 claims description 6
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 4
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 3
- 230000007903 penetration ability Effects 0.000 claims description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 claims description 3
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 claims description 2
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010023421 Kidney fibrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 claims description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 2
- 206010058990 Venous occlusion Diseases 0.000 claims description 2
- 208000012871 acute dyspnea Diseases 0.000 claims description 2
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 claims description 2
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002793 renal fibrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 101150005585 E3 gene Proteins 0.000 claims 2
- 206010011732 Cyst Diseases 0.000 claims 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 claims 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 claims 1
- 239000008196 pharmacological composition Substances 0.000 abstract 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 70
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 60
- 210000001117 keloid Anatomy 0.000 description 48
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 40
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 35
- 208000002260 Keloid Diseases 0.000 description 32
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 31
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 31
- 206010023330 Keloid scar Diseases 0.000 description 31
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 31
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 31
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 26
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 25
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 25
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 20
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 15
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 15
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 13
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 13
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 11
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 description 10
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 10
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 10
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 10
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 9
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 9
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 9
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 9
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 9
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 9
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 9
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 9
- KIAJWKWOKTWTIZ-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxonaphthalene-2,3-dicarbonitrile Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C#N)=C(C#N)C(=O)C2=C1 KIAJWKWOKTWTIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 8
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 8
- 101000721661 Homo sapiens Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 7
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 7
- 210000003815 abdominal wall Anatomy 0.000 description 7
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 7
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 7
- GURKHSYORGJETM-WAQYZQTGSA-N irinotecan hydrochloride (anhydrous) Chemical compound Cl.C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 GURKHSYORGJETM-WAQYZQTGSA-N 0.000 description 7
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 6
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 6
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100033254 Tumor suppressor ARF Human genes 0.000 description 6
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 6
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 6
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 5
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 5
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 5
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 5
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 5
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 5
- 108010027410 Adenovirus E3 Proteins Proteins 0.000 description 4
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 4
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 4
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 4
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- -1 IL -12 Proteins 0.000 description 4
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004335 litholrubine BK Substances 0.000 description 4
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 4
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 3
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 3
- 102000012406 Carcinoembryonic Antigen Human genes 0.000 description 3
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 3
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 3
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 101000978381 Homo sapiens C-C motif chemokine 14 Proteins 0.000 description 3
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 3
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 3
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 3
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 3
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 230000005880 cancer cell killing Effects 0.000 description 3
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 3
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 3
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 210000004901 leucine-rich repeat Anatomy 0.000 description 3
- 230000028550 monocyte chemotaxis Effects 0.000 description 3
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003411 telomere Anatomy 0.000 description 3
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 3
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 description 2
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 description 2
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 102100023703 C-C motif chemokine 15 Human genes 0.000 description 2
- 102100023701 C-C motif chemokine 18 Human genes 0.000 description 2
- 102100036842 C-C motif chemokine 19 Human genes 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108010082155 Chemokine CCL18 Proteins 0.000 description 2
- 108010082161 Chemokine CCL19 Proteins 0.000 description 2
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 description 2
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 2
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 108010009392 Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor p16 Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 102100033215 DNA nucleotidylexotransferase Human genes 0.000 description 2
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 102100037102 Homeobox protein MOX-2 Human genes 0.000 description 2
- 101710142888 Homeobox protein MOX-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000978376 Homo sapiens C-C motif chemokine 15 Proteins 0.000 description 2
- 101000980932 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A Proteins 0.000 description 2
- 101000733249 Homo sapiens Tumor suppressor ARF Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- 108010006444 Leucine-Rich Repeat Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 2
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 2
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 2
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 108700025701 Retinoblastoma Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000001732 Small Leucine-Rich Proteoglycans Human genes 0.000 description 2
- 108010040068 Small Leucine-Rich Proteoglycans Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 2
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 2
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 2
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003423 ankle Anatomy 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- RPLOSEMBQMPVEL-UHFFFAOYSA-N dec-1-yn-1-ol Chemical compound CCCCCCCCC#CO RPLOSEMBQMPVEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- DWCZIOOZPIDHAB-UHFFFAOYSA-L methyl green Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC(=CC=1)[N+](C)(C)C)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 DWCZIOOZPIDHAB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000000879 optical micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCGISRHGYLRXSR-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-7-[(5-hydroxy-7-sulfonaphthalen-2-yl)carbamoylamino]naphthalene-2-sulfonic acid Chemical compound OC1=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(NC(=O)NC=3C=C4C=C(C=C(C4=CC=3)O)S(O)(=O)=O)=CC=C21 PCGISRHGYLRXSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150008989 55 gene Proteins 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000006491 Acacia senegal Nutrition 0.000 description 1
- 102100036464 Activated RNA polymerase II transcriptional coactivator p15 Human genes 0.000 description 1
- 108010038310 Adenomatous polyposis coli protein Proteins 0.000 description 1
- 208000010370 Adenoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 108010056962 Adenovirus E4 Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010060931 Adenovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000012936 Angiostatins Human genes 0.000 description 1
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 description 1
- 238000012406 Annexin V-FITC/PI double staining Methods 0.000 description 1
- 108700020463 BRCA1 Proteins 0.000 description 1
- 102000036365 BRCA1 Human genes 0.000 description 1
- 101150072950 BRCA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700020462 BRCA2 Proteins 0.000 description 1
- 102000052609 BRCA2 Human genes 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101150008921 Brca2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100036841 C-C motif chemokine 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100023705 C-C motif chemokine 14 Human genes 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100036848 C-C motif chemokine 20 Human genes 0.000 description 1
- 101710155856 C-C motif chemokine 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 1
- 102000003805 Chemokine CCL19 Human genes 0.000 description 1
- 108010083700 Chemokine CCL20 Proteins 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102100031162 Collagen alpha-1(XVIII) chain Human genes 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 108010025464 Cyclin-Dependent Kinase 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000013701 Cyclin-Dependent Kinase 4 Human genes 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 108010008286 DNA nucleotidylexotransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 101100481408 Danio rerio tie2 gene Proteins 0.000 description 1
- AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N Deoxyuridine 5'-triphosphate Chemical compound O1[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 AHCYMLUZIRLXAA-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 101150029662 E1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710175001 E1B protein, small T-antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 description 1
- 101710139422 Eotaxin Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710089384 Extracellular protease Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101710155188 Hexon-interlacing protein Proteins 0.000 description 1
- 101000627872 Homo sapiens 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 1
- 101000713104 Homo sapiens C-C motif chemokine 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101100232904 Homo sapiens IL2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100232919 Homo sapiens IL4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000990902 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 101000835893 Homo sapiens Mothers against decapentaplegic homolog 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 101100321817 Human parvovirus B19 (strain HV) 7.5K gene Proteins 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 101150103227 IFN gene Proteins 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 102100025725 Mothers against decapentaplegic homolog 4 Human genes 0.000 description 1
- 101000713102 Mus musculus C-C motif chemokine 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000946797 Mus musculus C-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 description 1
- 101000740828 Mus musculus Protein C10 Proteins 0.000 description 1
- 101100481410 Mus musculus Tek gene Proteins 0.000 description 1
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000007530 Neurofibromin 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001028048 Nicola Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- 101000762949 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) Exotoxin A Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102100022151 Ragulator complex protein LAMTOR1 Human genes 0.000 description 1
- 108050002653 Retinoblastoma protein Proteins 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101150003725 TK gene Proteins 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000040856 WT1 Human genes 0.000 description 1
- 108700020467 WT1 Proteins 0.000 description 1
- 101150084041 WT1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 201000009628 adenosine deaminase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000011589 adenoviridae infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000002870 angiogenesis inducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N aspergillomarasmine B Natural products OC(=O)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000036556 autosomal recessive T cell-negative B cell-negative NK cell-negative due to adenosine deaminase deficiency severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 229960001714 calcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003340 calcium silicate Drugs 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000011254 conventional chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000002875 cyclin dependent kinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940043378 cyclin-dependent kinase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 108010041738 decorin receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940095399 enema Drugs 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 210000001723 extracellular space Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000005251 gamma ray Effects 0.000 description 1
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 238000007804 gelatin zymography Methods 0.000 description 1
- 230000007674 genetic toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000025 genetic toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003090 iliac artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229960004961 mechlorethamine Drugs 0.000 description 1
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical compound ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- OSTGTTZJOCZWJG-UHFFFAOYSA-N nitrosourea Chemical compound NC(=O)N=NO OSTGTTZJOCZWJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229960000624 procarbazine Drugs 0.000 description 1
- CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N procarbazine Chemical compound CNNCC1=CC=C(C(=O)NC(C)C)C=C1 CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000007727 signaling mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000012128 staining reagent Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000009452 underexpressoin Effects 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008478 viral entry into host cell Effects 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000007482 viral spreading Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000005727 virus proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 238000007805 zymography Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/861—Adenoviral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/16—Central respiratory analeptics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10033—Use of viral protein as therapeutic agent other than vaccine, e.g. apoptosis inducing or anti-inflammatory
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/022—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from an adenovirus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
Abstract
【選択図】図11a
Description
アデノウイルスは、中間程度のゲノムサイズ、操作の便宜性、高いタイター、広範囲のターゲット細胞、及び優れた感染性から、遺伝子伝達ベクターとしてよく利用されている。ゲノムの両末端は、100〜200bpのITR(inverted terminal repeat)を含み、これは、DNA複製及びパッケージングに必須的なシスエレメントである。ゲノムのE1領域(E1A及びE1B)は、転写及び宿主細胞遺伝子の転写を調節する蛋白質をコーディングする。E2領域(E2A及びE2B)は、ウイルスDNA複製に関与する蛋白質をコーディングする。
レトロウイルスは、自分の遺伝子を宿主のゲノムに挿入させて、大量の外来遺伝物質を運搬することができ、感染できる細胞のスペクトルが広いため、遺伝子伝達ベクターとしてよく利用されている。
アデノ関連ウイルス(AAV)は、非分裂細胞を感染させることができて、多様な種類の細胞に感染できる能力を有しているため、本発明の遺伝子伝達システムに適している。AAVベクターの製造及び用途に対する詳細な説明は、米国特許第5,139,941号及び第4,797,368号に詳細に開示されている。
他のウイルスベクターも、本発明の遺伝子伝達システムとして利用することができる。ワクシニアウイルス(Puhlmann M. et al., Human Gene Therapy 10:649-657(1999); Ridgeway, "Mammalian expression vectors," In: Vectors: A survey of molecular cloning vectors and their uses. Rodriguez and Denhardt, eds. Stoneham: Butterworth, 467-492(1988); Baichwal and Sugden, "Vectors for gene transfer derived from animal DNA viruses: Transient and stable expression of transferred genes," In: Kucherlapati R, ed. Gene transfer. New York: Plenum Press, 117-148( 1986)及びCoupar et al., Gene, 68:1-10(1988))、レンチウイルス(Wang G. et al., J. Clin. Invest. 104(11):R55-62(1999))、または単純ヘルペスウイルス(Chamber R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA 92:1411-1415(1995))由来のベクターも、デコリン遺伝子及び運搬しようとする目的ヌクレオチド配列を細胞内に運搬できる運搬システムとして利用することができる。
リポソームは、水上に分散されたリン脂質により自然に形成される。外来DNA分子をリポソームにより成功的に細胞内に運搬した例は、Nicolau及びSene, Biochim. Biophys. Acta, 721:185-190(1982)、及びNicolau et al., Methods Enzymol., 149:157-176(1987)に開示されている。一方、リポソームを利用した動物細胞の形質転換に最もよく利用される試薬としては、Lipofectamine(Gibco BRL)がある。デコリン遺伝子及び運搬しようとする目的ヌクレオチド配列を内包したリポソームは、エンドサイトーシス、細胞表面への吸着またはプラズマ細胞膜との融合などのメカニズムを通じて細胞と相互作用し、細胞内にデコリン遺伝子及び運搬しようとする目的ヌクレオチド配列を運搬する。
1.対象細胞株及び細胞の培養
本発明の実験に使用された細胞株は、人体脳癌細胞株(U343及びU87MG)、子宮頸部癌細胞株(C33A)、肝癌細胞株(Hep3B)、肺癌細胞株(A549)とマウス黒色腫(B16BL6)のような癌細胞株、人体正常細胞株(CBHEL, MRC5, IMR90及びWI38)及びアデノウイルス初期発現遺伝子であるE1部位が宿主遺伝体内に内在されている293細胞株である。B16BL6を除いた全ての細胞株は、ATCC(American Type Culture Collection; Manassas, VA, USA)から購入し、B16BL6マウス黒色腫細胞株は、大韓民国のヨンセ大学校(Yonsei University)のボクヨンソク教授チームから提供してもらった。
生体内抗腫瘍実験は、6〜8週齢の雄ヌードマウス(BALB/c-nu)とC57BL/6 マウスをCharles River Korea(Seoul, Korea)で購入して行った。動物飼育室の温度は、22±2℃、湿度は、55〜60%に維持して、明暗循環が12時間単位で調節されるようにし、放射線照射で滅菌した固形飼料(Orient, Seoul, Korea)と滅菌された給水を自由に摂取するようにした。
(1)複製不能アデノウイルスの製作
LacZ遺伝子を標識遺伝子として発現し且つデコリン遺伝子を発現する、E1とE3遺伝子の消失された複製不能アデノウイルスを製作した。まずvmdl324BstB(Heider, H. et al., Biotechniques, 28(2):260-270(2000))ベクターの消失されたE1部位に標識遺伝子のLacZ遺伝子を挿入し、pdl−LacZウイルスベクターを製作した。このために、まず、LacZを発現するpcDNA−hygro−LacZ(Invitrogen, Carlsbad, CA,米国) プラスミドからCMVプロモーター、LacZ、及びpolA部位をHindIIIとNaeIとで処理し分離した後、これをE1アデノウイルスシャトルベクターであるpΔE1sp1Aに挿入し、pΔE1sp1A/CMV−LacZシャトルベクターを製作した。製作されたpΔE1sp1A/CMV−LacZシャトルベクターをXmnI制限酵素で切断した後、BstBI制限酵素により一本鎖となったアデノウイルスvmdl324BstBと共に大腸菌BJ5183(S.B. Verca, University of Fribourgh, Switzerland)で同時形質転換させて、遺伝子相同組み換えを誘導し、pdl−LacZアデノウイルスを製作した。
デコリン遺伝子を発現する腫瘍特異的殺傷アデノウイルスを製作した。具体的には、上記で製作したアデノウイルスE3シャトルベクターpSP72ΔE3−DCNG、pSP72ΔE3−DCNQ及びpSP72ΔE3−DCNKのそれぞれを制限酵素PvuIまたはXmnIでそれぞれ処理して線形化させた後、制限酵素SpeIを処理して線形化されたpAd−ΔE1Bアデノウイルストータルベクター(E1B 19kDa遺伝子とE1B 55kDa遺伝子とが共に消失された腫瘍特異的殺傷アデノウイルス)と共に大腸菌BJ5183で同時形質転換させて、アデノウイルスベクターAd−ΔE1B−DCNG、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKをそれぞれ製作した(図1a及び図1b)。相同性組み換えされたアデノウイルスベクターを制限酵素HindIIIで処理し、相同性組み換え有無を確認した。相同性組み換えが確認されたプラスミドは、PacI制限酵素で切断した後、293細胞株に形質転換して、アデノウイルスを生産した(図1a及び図1b)。
本発明で製作したアデノウイルスにより誘導されるデコリンの発現様相を調べるために、デコリン遺伝子が挿入された腫瘍特異的殺傷アデノウイルス(Ad-ΔE1B-DCNG, Ad-ΔE1B-DCNQ及びAd-ΔE1B-DCNK)及び対照群としてAd−ΔE1Bアデノウイルスを、それぞれ3MOIで人体肝癌細胞株であるHep3Bに感染させた。感染48時間後、細胞から培地を回収し、SDS−PAGE(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)電気泳動を行った。電気泳動後、ゲルにあるタンパク質をPVDFメンブレインに電気−伝達させた後、デコリン(D.G. Seidler, University Hospital of Munster、ドイツ)及びβ−アクチン(Sigma, St. Louis, MO, USA)を特異的に認知する抗体を一次抗体で結合させて、HRP(horse radish peroxidase)が結合された二次抗体(sc-2004; Santa Cruz Biotech., Santa Cruz, CA)をさらに結合させた後、ECL検出キット(sc-2004; Santa Cruz Biotech)を利用して、デコリンタンパク質の発現様相を究明した。
LacZを発現する複製不能アデノウイルスの遺伝子伝達効率を検証するために、数種の人体腫瘍細胞株(U343, U87MG, C33A, Hep3B及びA549)と、人体正常細胞株(CBHEL, IMR90及びWI38)とを24−ウェルプレートに分株した後、dl−LacZ、dl−LacZ−DCNG、dl−LacZ−DCNQ及びdl−LacZ−DCNKウイルスを0.1〜100MOI(multiplicity of infection)でそれぞれ感染させた。ウイルス感染二日後、X−Gal試薬(PBS containing 1mg/ml, 5mM K3Fe(CN)6, 5mM K4Fe(CN)6及び2mM MgCl2)で37℃で6時間反応し、X−Gal染色することにより、デコリン遺伝子の発現によるLacZ遺伝子の伝達効率を確認した。
約6〜8週齢のヌードマウスの腹壁に人体腫瘍細胞株(U343、U87MG、C33A、及びA549)をそれぞれ1×107個皮下注射した後、腫瘍の大きさが約150〜200mm3程度になった時、腫瘍を摘出した。摘出した腫瘍を約1〜2mm径の切片にして、0.75%アガロースでコーティングされた培養器で、5%牛胎児血清と抗生剤ペニシリン/ストレプトマイシンとが含有されたDMEMを添加して培養した。培養液は、一週間に約1〜2回入れ替えて、1週間以上腫瘍球を培養した。アデノウイルスを感染させる前に、約2mm径の腫瘍球を0.75%アガロースのコーティングされた48ウェルプレートに移した後、5%牛胎児血清を含むDMEM150μlを添加して、1×106、1×107、及び1×108PFU(plaque-forming unit)のアデノウイルスをそれぞれ添加した。アデノウイルスを添加した後三日頃に培地を除去して、腫瘍球を固定溶液に入れて固定させた後、X−gal染色を施した。立体顕微鏡(Olympus optical Co., LTD, Tokyo, Japan)を利用して、X−gal染色された腫瘍球の表面を観察した後、O.C.T.コンパウンド(Sakura Finetec, Torrance, CA)で凍結薄片した後、10μm厚に切断して、ゼラチンのコーティングされたスライドガラス上に付着し光学顕微鏡で観察して、アデノウイルスの腫瘍球内への浸透程度を確認した。また、腫瘍球内のX−gal染色された部分の比率は、MetaMorphプログラム(Meta imaging series, Version 6.1, Universal imaging corporation TM, Downingtown, PA)を利用して算出した。
約6〜8週齢のヌードマウスの腹壁に数種の人体腫瘍細胞株(U343、U87MG、C33A及びHep3B)を皮下注射した後、腫瘍の大きさが約150〜200mm3程度になった時、アデノウイルスdl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGをそれぞれ5×107〜5×108PFUの力価で腫瘍内に5回投与した。A549 xenograft modelの場合は、A549細胞株を皮下注射した後、腫瘍の大きさが約150〜200mm3程度になった時、アデノウイルスdl−LacZ、dl−LacZ−DCNG、dl−LacZ−DCNQ及びdl−LacZ−DCNKをそれぞれ5×108PFUの力価で腫瘍内に5回投与した。ウイルス投与後3日頃に腫瘍を摘出して、4%パラホルムアルデヒド(PFA)溶液に入れ、4℃で4〜8時間固定させた後、30%スクロース溶液で12時間程度脱水させた。脱水された組織をO.C.T.コンパウンドで凍結薄片した後、上述の腫瘍球内組織浸透性の検証実験と同様な方法により、X−gal染色を行った。
デコリンを発現する腫瘍特異的殺傷アデノウイルスの癌細胞殺傷能を検証するために、数種の人体腫瘍細胞株(U343, U87MG, C33A, Hep3B及びA549)と、人体正常細胞株(CBHEL, MRC5, IMR90及びWI38)を48−ウェルプレートに分株して、24時間後、Ad−ΔE1、Ad−ΔE1B、Ad−ΔE1B−DCNG、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKなどのアデノウイルスを0.1〜100MOIでそれぞれ処理した。一実験で処理された数種のウイルスの中でいずれか一つのウイルスが、最も低い力価で細胞をほとんどアポトーシスさせた時点で、全ての培地を除去し、0.5%クリスタルバイオレット( in 50%メタノール)で細胞を固定させて染色した後、残存した細胞を分析した。
デコリン発現によるプラークの大きさの変化を観察するために、6ウェルプレートに3×105個のHep3B細胞株を分株して、翌日アデノウイルスAd−ΔE1B、Ad−ΔE1B−DCNG、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKを1×10-4PFUの力価で処理した。ウイルス感染後約4時間頃に、37℃の2×DMEM(10%牛胎児血清と抗生剤ペニシリン/ストレプトマイシン含み)と42℃の1.4%UltraPureTMアガロース(Invitrogen, Carsbad, CA)とを1:1で混合したアガロース−DMEM溶液を、感染された細胞株上に添加した後培養した。培養後、約4〜16日頃に、プレートに形成されたプラークの大きさを確認し、アガロースオーバーレイ(overlay)上に10%トリクロロ酢酸(trichloroacetic acid)を1ml入れて30分間放置した後、アガロースオーバーレイを除去し、0.5%クリスタルバイオレット(in 50%メタノール)で固定させて染色し、形成されたプラークの個数を算出した。
デコリンの発現により誘導される細胞アポトーシスを確認するために、人体腫瘍細胞株のU343、U87MG、C33A、Hep3B、及びA549を25T培養器にそれぞれ分株した後、24時間頃にそれぞれのアデノウイルスを0.5〜50MOIでそれぞれ感染させた。陽性対照群としては、細胞アポトーシスを誘導する物質であるカンプトテシン(camptothecin)−11(CPT)を0.1〜1μm処理して、陰性対照群としては、PBSを処理した。48時間、72時間、そして96時間後に感染された細胞を回収し、70%エタノールで4℃で24時間以上固定させた。固定が終わった後、PI(propidium iodide, 50μg/μl)とRNase(ribonuclease)とが混合された溶液500μlを入れて、4℃で15分間反応させた後、フローサイトメトリー分析(FACS analysis)を行った。
数種の人体腫瘍細胞株U343(5x104)、U87MG(5x104)、C33A(5x105)、Hep3B(4x105)、及びA549(5x104)をそれぞれ2-ウェルチャンバースライドに分株して、アデノウイルスを0.2〜20MOIで感染させた後、24時間と48時間頃に培地を除去して、ApopTagキット(intergen, Purchase, NY)を用いて、製造会社が提示した方法にしたがってTUNEL(terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling)分析を行った。発色有無を確認するために、ペロキシダーゼと結合されたアビジンを使用して、DAB(3,3' diaminobenzine; Dako, Carpinteria, CA)と反応させた後、細胞が褐色に変わるのが肉眼で確認されたら、0.5%メチルグリーンで10分間染色して、顕微鏡で観察した。顕微鏡上で四ヶ所以上の部位をランダムに選定して、全体細胞の中で染色された細胞の比率を算出した。
ヌードマウスに形成された人体癌腫塊の成長に、デコリンを発現するアデノウイルスが及ぼす影響を検証した。具体的には、生後6〜8週のヌードマウス(Charles River Japan Inc.)の腹壁に、皮下に1×107個の人体腫瘍細胞株(U343、U87MG、C33A、Hep3B、及びA549)をそれぞれ100μlのHBSS(Hanks' balanced salt solution, Gibco BRL)に浮遊して皮下注射した。腫瘍が約50〜80mm3程度に成長した時、1×108〜5×108PFUのアデノウイルスをそれぞれ二日間隔で3回腫瘍に直接注射した後、腫瘍の成長と生存率を観察した。陰性対照群としては、PBSを注射した。腫瘍の容積は、バーニヤキャリパスを利用して腫瘍の長軸と短軸を測定した後、次の数学式で算出した。
腫瘍の容積=(短軸mm)2×長軸mm×0.523
ヌードマウスの腹壁に形成されたU343、U87MG、C33A、Hep3B、またはA549腫瘍が約50〜80mm3程度に成長した時、1×108〜5×108PFUのアデノウイルスをそれぞれ3回腫瘍内注射した後、三日後に腫瘍組織を摘出してパラフィンブロックを製作した。陰性対照群としては、PBSを注射した。製作されたパラフィンブロックを3μm厚のスライドに切断した後、これを、キシレン、100%、95%、80%、及び70%エタノール溶液に順に浸してパラフィンを除去(deparafinization)した後、ヘマトキシリンとエオシン(H & E)で染色した。生体内結締組織の構成成分であるコラーゲンの分布を観察するためには、3μm厚のパラフィンブロックスライドをボウイン(bouin)、ヘマトキシリン及びMasson'sトリクロム(biebrich's scarlet acid fuchsin)でそれぞれ染色して観察した。前記染色試薬は、DAKO ARK(Dako, Carpinteria, CA)から購入した。また、同一部位のパラフィンブロックを利用して、アデノウイルスのヘキソン(hexon)部位を検出できる免疫組織化学分析(immunohistochemistry, IHC)を行った。上記のような方法によりスライドのパラフィンを除去した後、アデノウイルスのヘキソン部位と選択的に結合する抗体(MAB 8052 chemicon, Temecula, CA)を一次抗体として、そして、ヤギanti−ラビットIgG−HRP(Sata Cruz Biotechnology)を二次抗体として反応させて、DABを添加し発色させて観察した。
MMP活性変化を観察するために、数種の人体腫瘍細胞株(U343, U87MG, C33A, Hep3B及びA549)を75T培養器に分株して、24時間後にPBS、Ad−ΔE1B及びAd−ΔE1B−DCNGアデノウイルスをそれぞれ1〜100MOIで添加し、48時間培養した。その後、牛胎児血清の含まれていないDMEMに入れ替えて、24時間培養した後、培地を回収して濃縮し、濃縮された培地のタンパク質濃度は、タンパク質分析キット(Bio-Rad, Hercules, CA, USA)を利用して定量した後、同量のタンパク質をゼラチン−基質ゲルに電気泳動した。電気泳動した後、ゲルを37℃で18時間ゼラチン溶解(gelatinolysis)反応が起こるようにした後、クマシーブルーで染色して、MMP−2とMMP−9の発現を観察した。また、各実験は、3回以上行って、QuntityOne2.1プログラム(BIO-Rad Laboratories, Hercules, CA)を利用して、バンド厚を比較検証した。
デコリンの高発現による癌転移能(metastatic potential)の変化を調べるために、まず、B16BL6細胞(2×105/マウス)を6〜8週齢の雄性C57BL/6マウス(Charles River Korea, Seoul, Korea)の後ろ右足パッドに皮下投与して、一次腫瘍(primary tumor)を形成した。一次腫瘍の大きさが約100〜200mm程度になった時、PBS、Ad−ΔE1B及びAd−ΔE1B−DCNGをそれぞれ二日間隔で腫瘍内に3回投与した。最後の投与後、5日頃にマウスの右足首以下を切断し一次腫瘍を除去した後、20日頃にマウスを全部犠牲させて、肺に転移された腫塊の重量を測定した。
乳房癌患者から腫瘍組織及びその周辺の正常組織を採取した後、約1〜2mm径の切片にして、24−ウェルプレート培養器で、5%牛胎児血清と10μM/Lインシュリンと1μM/Lヒドロコルチゾン(hydrocortisone)を含むIMDM(Isocove's Modified Dulbecco's Medium)を添加して、4時間培養した。乳房癌組織が入っている培養器に1×108PFUのdl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGアデノウイルスをそれぞれ添加し、5%CO2、37℃恒温器で5日間培養した。培養後、培地を除去して、乳房癌組織を固定溶液に入れて固定させた後、X−gal染色を行い、立体顕微鏡(Olympus optical Co., LTD, Tokyo, Japan)を利用して、X−gal染色された腫瘍球の表面を観察した。
ケロイド(Keloid)患者の組織から採取した一次ケロイド細胞株(2継代培養)を24−ウェルプレートに分株して、dl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGアデノウイルスを0.1〜50MOIの力価でそれぞれ感染させて、5%CO2、37℃恒温器で培養した。ウイルス感染後、48時間頃にX−gal染色を行って、アデノウイルスの遺伝子伝達効率を観察した。
ケロイド患者の組織から採取した継代培養2世代の一次ケロイド細胞(1×105個)を15mlファルコン(falcon)チューブに入れて、500gで5分間遠心分離し、スフェロイド(spheroid)を作った後、これを24−ウェルプレートに入れて37℃培養器で5日間培養した。その後、ケロイドスフェロイドを0.75%アガロースコーティングされた48−ウェルプレートに移した後、150μlのDMEM培地(5%の牛胎児血清含有)を添加して、1×107PFUのdl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGアデノウイルスをそれぞれ培地に添加した。ウイルス感染後3日頃に培地を除去して、ケロイドスフェロイドを固定溶液に入れて固定させた後、X−gal染色を行い、X−gal染色された腫瘍球を立体顕微鏡を利用して表面を観察した。
ケロイド患者の組織から採取したケロイド組織を約1〜2mm径の切片にして、0.75%アガロースコーティングされた培養器で、5%牛胎児血清の含有されたDMEMと抗生剤ペニシリン/ストレプトマイシンとを添加して培養した。培養液は、一週間に約1〜2回入れ替えて、1週間以上ケロイド組織を培養した。アデノウイルスを感染させる前に、約2mm程度の直径を有するケロイド組織を、0.75%アガロースでコーティングされた48−ウェルプレートに移した後、150μlのDMEM培地(5%の牛胎児血清)を添加して、1×108PFUのdl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGアデノウイルスをそれぞれ培地に添加した。ウイルス感染後3日頃に培地を除去して、ケロイド組織を固定溶液に入れて固定させた後、X−gal染色を施した。X−gal染色されたケロイド組織を、立体顕微鏡を利用して表面を観察した後、アデノウイルスのケロイド組織内浸透程度を確認するために、O.C.T.コンパウンドで凍結薄片した後、10μm厚に切断して、ゼラチンのコーティングされたスライド上に付着し、光学顕微鏡で観察した。
1.デコリンを発現するアデノウイルスの製作及びデコリンの発現様相の究明
デコリン遺伝子の発現による組織内浸透力の変化を可視的に観察するために、標識遺伝子としてLacZ遺伝子を発現する複製不能アデノウイルスdl−LacZ−DCNG、dl−LacZ−DCNQ及びdl−LacZ−DCNKを製作した。また、アデノウイルスの組織内拡散及び浸透力を向上させるために、腫瘍特異的殺傷アデノウイルスAd−ΔE1B−DCNG、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKを製作した(図1a及び1b)。 複製不能アデノウイルスdl−LacZは、E1部位が欠失されて、欠失されたE1部位に挿入されたCMVプロモーターの調節下でLacZ遺伝子を発現する;腫瘍特異的殺傷アデノウイルスAd−ΔE1Bは、正常的なE1A遺伝子は含んでいるが、E1B 19kDa及びE1B 55kDa遺伝子が欠失されている。複製不能アデノウイルスdl−LacZ−DCNG、dl−LacZ−DCNQ及びdl−LacZ−DCNKと腫瘍特異的殺傷アデノウイルスAd−ΔE1B−DCNG、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKは、CMVプロモーターの調節下でE3部位に挿入されたデコリン遺伝子を発現する。デコリン遺伝子の点突然変異DCNK及びDCNQは、タイプIコラーゲンフィブリルとデコリンとの結合に非常に重要な作用をする部位を置換したものである。
デコリンを発現して、LacZを発現する複製不能アデノウイルスの遺伝子伝達効率を検証するために、数種の人体腫瘍細胞株(U343, U87MG, C33A, Hep3B及びA549)と、人体正常細胞株(CBHEL, IMR90及びWI38)にdl−LacZ、dl−LacZ−DCNG、dl−LacZ−DCNQ及びdl−LacZ−DCNKウイルスを0.1〜100MOIでそれぞれ感染させて、48時間後にX−gal染色法を行って、LacZの発現様相を比較観察した。その結果、本発明で使用された全ての癌細胞株において、dl−LacZ−DCNG感染によるLacZ発現程度が、対照群であるdl−LacZに比べ増加し、デコリンの発現により遺伝子伝達効率が大いに増加することを確認した。ところが、高力価の複製不能ウイルスを処理した場合は、細胞が死滅されることを観察することができて、特に、C33A細胞株を10MOI以上のdl−LacZ−DCNGウイルスで感染させた場合は、全ての細胞が完全に死滅され、デコリンが高発現する時に細胞を死滅することができることが分かった(図3a及び3b)。しかしながら、コラーゲンフィブリルとデコリンとの結合に非常に重要な作用をする部位を置換したDCNK及びDCNQ点突然変異がデコリン遺伝子を発現する場合は、コラーゲンとの結合力が野生型に比べ弱化されたデコリン変異体DCNQを発現するdl−LacZ−DCNQの遺伝子伝達効率が、対照群ウイルスdl−LacZに比べ若干増加した反面、コラーゲンとの結合能が完全に消失されたデコリン変異体DCNKを発現するdl−LacZ−DCNKの遺伝子伝達効率は、dl−LacZの遺伝子伝達効率とほぼ等しいことを観察した。こうような結果から、野生型デコリンの発現により、遺伝子伝達効率が増加することが分かった。これに比べ、正常細胞では、デコリンの発現によるLacZ遺伝子の伝達効率が大いに増加されなかったが、このような結果は、デコリンの癌細胞特異性を意味する。
アデノウイルスの腫瘍球内への遺伝子伝達効率と組織拡散及び浸透性を調べるために、数種の人体腫瘍細胞株をヌードマウスに皮下注射した後、腫瘍の大きさが約150〜200mm3になった時、腫瘍を摘出した。摘出された腫瘍組織を1〜2mm程度の直径になるように細かく切って培養液に入れた後、1×106、1×107及び1×108PFUのアデノウイルスをそれぞれ培地に添加して、48時間後にX−gal染色を施した。腫瘍球を光学顕微鏡で観察した結果、1×106PFUのdl−LacZ、dl−LacZ−DCNK及びdl−LacZ−DCNQアデノウイルスを投与した場合に比べ、同力価のdl−LacZ−DCNGアデノウイルスを投与した腫瘍球の表面にX−galが濃く染色されたことを観察することができ、1×107PFU以上のアデノウイルスを培地に添加した場合は、全ての腫瘍球の表面全体がX−galで濃く染色されていることを観察した(図4)。また、アデノウイルスの腫瘍球内への浸透程度をより綿密に観察するために、X−gal染色された腫瘍球を凍結薄片して観察した。その結果、1×106、1×107及び1×108PFUのdl−LacZ、dl−LacZ−DCNK及びdl−LacZ−DCNQを投与した癌組織の場合、LacZの発現程度が微弱であり、ウイルスが腫瘍球表面に留まっている反面、同力価のdl−LacZ−DCNGを投与した癌組織におけるLacZ発現度がdl−LacZ、dl−LacZ−DCNK及びdl−LacZ−DCNQの場合より著しく高くて、アデノウイルスが腫瘍球表面に局限されず、腫瘍球の内側部位へウイルスが広がっていくことを確認することができた(図4)。また、本実施例でも、上述の遺伝子伝達効率の比較検証の実施例と同様に、コラーゲンとの結合力が野生型に比べ弱化されたデコリン変異体DCNQを発現するdl−LacZ−DCNQ及びコラーゲンとの結合能が完全に消失されたデコリン変異体DCNKを発現するdl−LacZ−DCNKの組織浸透力が、コラーゲンとの結合力が完全な野生型DCNGを発現するdl−LacZ−DCNGに比べ、大いに弱化されて、弱化された程度は、コラーゲンとの結合力と反比例することが分かった。このような実験結果を通じて、野生型デコリンを発現するdl−LacZ−DCNGアデノウイルスの遺伝子伝達効率及び組織浸透力が、腫瘍球内において、対照群dl−LacZ、dl−LacZ−DCNK及びdl−LacZ−DCNQに比べ、大いに増加されたことが分かった。
生体外腫瘍球を利用した実験結果を通じて確認したdl−LacZ−DCNGアデノウイルスの増加された組織浸透力を、異種移植(xenograft)生体モデルを利用して検証してみた。ヌードマウスの腹壁に形成されたU343、U87MG、C33A及びHep3B腫瘍に、dl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGアデノウイルスのそれぞれを1×108〜5×108PFUの力価で腫瘍内に直接注射した後、三日頃に腫瘍を摘出して凍結薄片した後、X−gal染色を施した。その結果、dl−LacZを投与した腫瘍組織の場合は、LacZの発現程度が微弱であり、染色部位がウイルスの投与された組織付近に限定されている反面、dl−LacZ−DCNGを投与した腫瘍組織のLacZ発現度は、dl−LacZを投与した場合に比べ著しく高く、X−galで染色された部位がウイルスの投与された部位に局限されず、広い部位に広がっていることが確認できた(図5)。特に、U87MG及びC33A異種移植の場合は、dl−LacZ−DCNGを投与した時、腫瘍組織全体でLacZが発現されて、濃いブルーに染色されたことを確認することができた。また、dl−LacZ、dl−LacZ−DCNG、dl−LacZ−DCNK及びdl−LacZ−DCNQアデノウイルスを投与したA549腫瘍の場合は、dl−LacZ−DCNGを投与した腫瘍組織の場合のLacZ発現程度及び発現された腫瘍部位が、dl−LacZ、dl−LacZ−DCNK及びdl−LacZ−DCNQを投与した場合に比べ、大いに増大したことを確認することができた。このような実験結果を通じて、生体内でも、腫瘍球を利用した実験と同様に、dl−LacZ−DCNGアデノウイルスの組織内拡散及び浸透性が、デコリンを発現しない対照群アデノウイルスのdl−LacZに比べ、大いに増加したことが分かった。
先行の実験から既に確認されたコラーゲンとの結合能を有したデコリンの発現によるアデノウイルスの組織内拡散の増加により、腫瘍特異的殺傷アデノウイルスの細胞殺傷能が増加されるかどうかを調べるために、CPE分析を行った。陰性対照群として複製不能アデノウイルスのdl−LacZ、実験群として腫瘍特異的殺傷アデノウイルスであるAd−ΔE1B、Ad−ΔE1B−DCNG、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKアデノウイルスを、それぞれ0.1〜100MOIで人体腫瘍細胞株(U343、U87MG、C33A、Hep3B、及びA549)と人体正常細胞株(CBHEL, MRC5, IMR90, WI38)をそれぞれ感染させた後、細胞の殺傷程度を比較観察した。図6から分かるように、陰性対照群のdl−LacZで感染された種々の癌細胞では、ウイルスの増殖による細胞殺傷効果が観察されなかったが、Ad−ΔE1B−DCNGで感染された場合は、デコリンを発現しない対照群ウイルスのAd−ΔE1Bに比べ、約10〜20倍程度高い癌細胞殺傷効果が観察された。即ち、Hep3BとU87MG細胞株では、Ad−ΔE1B−DCNGアデノウイルスがAd−ΔE1Bアデノウイルスに比べ約20倍程度高い癌細胞殺傷効果を誘導し、U343、C33A、及びA549細胞株では、約10倍程度高い癌細胞殺傷効果を誘導した。このような実験結果から、デコリンの発現がアデノウイルスの複製能に否定的な影響を及ぼさないばかりか、却ってデコリンの発現により癌細胞特異的殺傷アデノウイルスの細胞殺傷能が増加されることが分かった。また、先行の実施例等と同様に、コラーゲンとの結合能が弱化または消失されたAd−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKの癌細胞殺傷能がAd−ΔE1B−DCNGに比べ著しく低くて、その低い程度は、コラーゲンとの結合能と反比例することを確認することができた。しかしながら、正常細胞の場合は、Ad−ΔE1B−DCNGアデノウイルスの細胞殺傷効果が対照群ウイルスのAd−ΔE1Bに比べ増加しなかった。したがって、このような結果から、DCNGの発現による細胞殺傷能増大効果が癌細胞では誘導されたが、正常細胞では誘導されず、癌細胞特異的であることを確認することができた。
デコリンの発現が細胞殺傷と周辺細胞へのウイルス拡散に及ぼす影響を可視化するために、アデノウイルスの増殖と周辺細胞への拡散によるプラークの形成をアガロースの含有された固体培地で比較検証した。Ad−ΔE1B、Ad−ΔE1B−DCNG、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKアデノウイルスをそれぞれHep3B細胞株に感染させて、プラーク形成の進行速度を観察した。図7a及び7bから分かるように、対照群ウイルスのAd−ΔE1B、Ad−ΔE1B−DCNK、またはAd−ΔE1B−DCNQに感染された場合に比べ、Ad−ΔE1B−DCNGで感染されたHep3B細胞株でプラークの形成が速く進行されて、形成されたプラークの大きさも増加したことを観察することができた。即ち、Ad−ΔE1Bアデノウイルスを投与した場合は、ウイルス感染後13〜16日が経ってからプラークの形成を肉眼で確認することができたのに比べ、Ad−ΔE1B−DCNGを感染させた場合は、ウイルス感染後4日頃から、プラークが形成されたことを確認することができた。また、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKのプラーク形成速度がAd−ΔE1B−DCNGに比べ大いに減少したが、その減少された程度は、コラーゲンとの結合能と反比例することを観察した。このような結果は、デコリンとの結合能を有したデコリンを発現するアデノウイルスの増加された細胞殺傷能と、隣接した細胞へのウイルス拡散によりプラークの形成が速く進行されて、また形成されたプラークの大きさが増加したことを意味する。
デコリンの発現様相及びこれによる遺伝子伝達効率の変化を調べるために進行された実験(実験結果2)で、高力価の複製不能アデノウイルスのdl−LacZ−DCNGで細胞を感染させた場合、細胞が死滅されて細胞培養プレートの底から離れていくことが観察されたため、デコリンにより細胞殺傷が誘導されるかどうかをより綿密に調べた。これのために、まず、細胞アポトーシスが誘導されるとDNAが無作為的に切片化されて現れるsubG1細胞群の増加率を、PI染色後フローサイトメトリー分析を行って測定した。種々の人体腫瘍細胞株を腫瘍特異的殺傷アデノウイルスAd−ΔE1B、Ad−ΔE1B−DCNG、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKでそれぞれ感染させて、48〜96時間後に細胞を回収してsubG1細胞群の増加を観察した。細胞アポトーシスを誘導する陽性対照群としては、細胞アポトーシス誘導化学物質であるCPTを使用した。対照群のAd−ΔE1Bにより感染されたA549細胞の場合、subG1細胞群が約3.11%であるのに対し、Ad−ΔE1B−DCNGにより感染された場合は、subG1細胞群が約26.52%に大きく増加した。このようなAd−ΔE1B−DCNGアデノウイルス感染によるsubG1細胞群の増加は、他の種類の細胞株(U343、U87MG、C33A、及びHep3B)でも観察された(図8a、表1)。また、Ad−ΔE1B−DCNQ及びAd−ΔE1B−DCNKウイルス感染によるsubG1細胞群の増加は、Ad−ΔE1B−DCNGに比べ減少したが、その減少程度は、コラーゲンとの結合能が低いほどさらに大きいことを、先行の実施例等の結果と同様に、確認することができた。
野性型デコリンを発現するAd−ΔE1B−DCNGアデノウイルスの生体内抗腫瘍効果を検証するために、種々の人体腫瘍細胞株をヌードマウスに接種した後、形成された腫瘍に1×108〜5×108PFUのAd−ΔE1B及びAd−ΔE1B−DCNGアデノウイルスのそれぞれを、陰性対照群のPBSと共に二日間隔で3回腫瘍内投与した後、腫瘍の成長を観察した。人体脳腫瘍U87MGの場合、PBSを投与された時は、ウイルス投与後19日頃に腫瘍の大きさが約1089.22mm3で、腫瘍が急激に成長した反面、腫瘍特異的殺傷アデノウイルスのAd−ΔE1BまたはAd−ΔE1B−DCNGを投与された時は、それぞれ115.70mm3及び11.87mm3で、腫瘍の成長が顕著に遅延されることを観察することができた(図11a)。即ち、Ad−ΔE1B及びAd−ΔE1B−DCNGアデノウイルスを投与された腫瘍の方が、PBSを投与された場合に比べ、明らかな抗腫瘍効果を示した。
数種の癌細胞株(U343, U87MG, C33A, Hep3B及びA549)をヌードマウスの腹壁皮下に接種した後、形成された腫瘍にAd−ΔE1B及びAd−ΔE1B−DCNGアデノウイルスを陰性対照群のPBSと共に3回腫瘍内注射した後、三日後に腫瘍組織を摘出してヘマトキシリンとエオシンでH&E染色し、組織の状態を検証した。図12a〜12eから分かるように、Ad−ΔE1Bアデノウイルスを投与した腫瘍の場合は、腫塊の中心部位から自然に発生する細胞壊死と、ウイルスが投与された腫塊の縁の局所的部位でのみ細胞壊死が進行された反面、Ad−ΔE1B−DCNGアデノウイルスを投与した腫瘍の場合は、腫塊の中心部位だけではなく、ウイルスが投与された腫瘍の縁まで、さらに広い部位で細胞壊死が非常に活発に進行されることを確認した。また、腫瘍組織内における癌細胞特異的殺傷アデノウイルスの複製様相を検証するために、アデノウイルスのヘキソン部位と選択的に結合する抗体を利用して、IHCを行った。図12a〜12eから分かるように、Ad−ΔE1Bを投与した場合に比べ、Ad−ΔE1B−DCNGを投与した腫瘍の場合に腫瘍のさらに広い部位からアデノウイルスを検出することができて、細胞アポトーシスを確認できるTUNEL分析を行った場合も、アデノウイルスが検出された部位と同じ部位で細胞アポトーシスが活発に進行されることを確認することができた。以上の結果をまとめてみると、Ad−ΔE1B−DCNGアデノウイルスが投与された腫塊部位でウイルスの複製が活発に起こって且つさらに広い部位に広がっていくことができ、その結果、細胞アポトーシス及び細胞壊死が非常に活発に且つ広範囲で誘導されることが分かった。
人体脳癌細胞株U343をヌードマウスに接種した後、形成された腫瘍にAd−ΔE1B及びAd−ΔE1B−DCNGアデノウイルスを3回腫瘍内注射した後、三日後に腫瘍組織を摘出しマッソン・トリクロームで染色して、青色に染色される細胞外基質の主成分のコラーゲンの分布を観察した。その結果、Ad−ΔE1Bアデノウイルスを投与したU343腫瘍の場合は、腫瘍内部において、青色染色が腫瘍細胞の間で多く観察された反面、Ad−ΔE1B−DCNGアデノウイルスを投与した場合は、腫瘍内部では青色がほとんど観察されず、腫瘍の周囲を囲んでいる正常組織でのみコラーゲンカプセルのような形態を観察することができた(図13のAパネル)。このような結果から、癌細胞特異的殺傷アデノウイルスのAd−ΔE1B−DCNGによるデコリンの発現が癌細胞特異的に誘導されて、癌組織内部のコラーゲンの発現のみを阻害し、周辺の正常組織のコラーゲンの発現様相には、影響を及ぼさないことが分かった。
デコリンの発現による細胞外基質の減少が、MMP発現により誘導されるものであるかを確認するために、MMP−2とMMP−9の活性をザイモグラフィにより検証した(図14)。数種の細胞株(U343, U87MG, C33A, Hep3B及びA549)を様々な力価のアデノウイルス(Ad-ΔE1B及びAd-ΔE1B-DCNG)で感染させて、培地を回収し、MMP−2とMMP−9の発現を観察した結果、PBS及びAd−ΔE1B対照群に比べ、Ad−ΔE1B−DCNGアデノウイルスにより感染された場合に、MMP−2とMMP−9の活性が大きく増加した。このようなMMP−2とMMP−9の活性増加現象は、実験に使用された5種類の人体腫瘍細胞株(U343, U87MG, C33A, Hep3B及びA549)でほぼ等しく観察された。前記結果から、デコリンの発現により、MMP−2とMMP−9の活性が増加されたことが分かった。
デコリンは、細胞外基質の構成成分と反応し、MMP−1とMMP−2などの発現を促進して細胞外基質を分解すると知られており、MMP−2の場合は、本研究の実験結果11でも確認された。したがって、デコリンの高発現による癌転移能(metastatic potential)の変化を、spontaneous癌転移モデルを利用して調べてみた。まず、B16BL6細胞をC57BL/6マウスの右後ろ足の裏に皮下投与した後、腫瘍の大きさが約100〜200mm程度に成長した時、PBS、Ad−ΔE1B、及びAd−ΔE1B−DCNGを二日間隔で3回腫瘍内投与した。最後の投与後5日頃にマウスの右足首以下を切断して、一次腫瘍を除去した後、20日頃にマウスを全部犠牲させて、肺に転移された腫塊の重量を測定した。図15から分かるように、Ad−ΔE1B及びAd−ΔE1B−DCNGを投与されたマウスの肺に転移された腫塊の平均重量は、それぞれ200±140mg及び130±160mgであって、PBSを投与された対照群マウスの肺に転移された腫塊の平均重量の250±140mgに比べ、著しく低いことが確認できた。さらに、PBSを投与された6匹のマウスの全部から肺転移が酷く起こったのに対し、Ad−ΔE1BまたはAd−ΔE1B−DCNGを投与された6匹のマウスの場合は、それぞれ1匹と2匹のマウスで癌転移が完全に抑制されたことを観察した。このような結果から、デコリンの発現により、対照群ウイルスに比べ、癌転移がさらに活発に抑制されることが確認できた。
先行の各種実験結果から確認された、デコリンを発現するアデノウイルスの向上された遺伝子伝達効率及び組織浸透性が、一次人体腫瘍組織でも確認できるかどうかを調べるために、実際の乳房癌患者から採取した癌組織及びその周辺の正常組織を約1〜2mm径の切片にして、0.75%アガロースでコーティングされた培養器で培養した後、1×108PFUのdl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGアデノウイルスをそれぞれ添加した。ウイルス添加後、約5日後にX−gal染色を行った結果、対照群ウイルスのdl−LacZを感染させた場合に比べ、dl−LacZ−DCNGアデノウイルスを感染させた場合の癌組織表面にX−galが濃く染色されたことを観察することができた(図16)。これとは対照的に、正常組織の場合は、dl−LacZまたはdl−LacZ−DCNGアデノウイルスを添加した全ての一次正常組織において、X−gal染色がほとんど起こらなかった。
ケロイドは、細胞外基質の過度なる形成により現れる疾患であって、デコリンの細胞外基質分解能を利用してケロイド疾患を治療できるかどうかを調べるために、まず、ケロイド患者の組織から採取した一次ケロイド細胞株に、dl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGアデノウイルスを0.1〜50MOIの力価でそれぞれ感染させて、二日後にX−gal染色を施して観察した結果、dl−LacZ−DCNG感染によるLacZ発現程度が、対照群のdl−LacZに比べ増加し、デコリンの発現により、ケロイド細胞への遺伝子伝達効率が大きく増加することを確認した(図17)。
デコリン発現によるアデノウイルスのケロイド組織における遺伝子伝達の増加を調べるために、ケロイド患者の組織から採取した継代培養2世代の一次ケロイド細胞を利用して製作されたケロイドスフェロイドを、1×107PFUのdl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGアデノウイルスでそれぞれ感染させた後、X−gal染色を施して組織表面を光学顕微鏡で観察した。その結果、対照群ウイルスのdl−LacZを投与した場合に比べ、野生型デコリンを発現するdl−LacZ−DCNGアデノウイルスを投与したケロイドスフェロイドの表面にX−galが非常に濃く染色されることを観察した(図18のパネルA)。
ケロイド細胞から構成されたケロイドスフェロイドを利用した先行の実施例を通じて確認したdl−LacZ−DCNGアデノウイルスの増加された遺伝子伝達効率が、実際のケロイド患者から採取したケロイド組織でも現れるのかを調べるために、ケロイド患者の組織から採取したケロイド組織を1×108PFUのdl−LacZ及びdl−LacZ−DCNGアデノウイルスでそれぞれ感染させて、X−gal染色を施した後、まず、ケロイド組織の表面を観察した。その結果、dl−LacZを投与したケロイド組織の場合は、LacZの発現程度が非常に微弱である反面、dl−LacZ−DCNGを投与したケロイド組織の表面は、X−galが濃く染色されたことを観察した(図18のパネルB)。また、アデノウイルスのケロイド組織内浸透程度を確認するために、O.C.T.コンパウンドで凍結薄片した後、光学顕微鏡で観察した結果、dl−LacZを投与したケロイド組織の場合は、表面と同様に、ケロイド組織の内部もほとんど染色されなかった反面、dl−LacZ−DCNGを投与した腫瘍組織のLacZ発現度は、dl−LacZを投与した場合に比べ著しく高く、X−galで染色された部位が、ウイルスの投与された部位に局限されず、広い部位に広がっていることを確認することができた(図18のパネルB)。このような結果から、細胞外基質の分解を誘導できるデコリンを発現するアデノウイルスを利用する場合、ケロイド組織における遺伝子伝達効率が著しく増大されるだけではなく、細胞外基質の分解により、ケロイド疾患治療剤として利用することができることを確認した。
Claims (16)
- 細胞内に運搬しようとする目的ヌクレオチド配列及びデコリン(decorin)−エンコーディングヌクレオチド配列を含み、前記デコリンは、前記目的ヌクレオチド配列の細胞内運搬効率を増加させる作用をすることを特徴とする遺伝子伝達システム。
- 前記細胞は、細胞外基質により連結された細胞からなる組織内の細胞であることを特徴とする請求項1に記載の遺伝子伝達システム。
- 前記組織は、腫瘍組織であることを特徴とする請求項2に記載の遺伝子伝達システム。
- 前記遺伝子伝達システムは、プラスミド、組み換えアデノウイルス、アデノ−関連ウイルス(Adeno-associated viruses: AAV)、レトロウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、リポソーム、またはネオソーム(neosome)であることを特徴とする請求項1に記載の遺伝子伝達システム。
- 前記遺伝子伝達システムは、組み換えアデノウイルスであることを特徴とする請求項4に記載の遺伝子伝達システム。
- 前記組み換えアデノウイルスは、E3領域が欠失されたものであって、前記デコリン−エンコーディングヌクレオチド配列は、E3領域の位置に挿入されたことを特徴とする請求項5に記載の遺伝子伝達システム。
- 請求項1〜6に記載の遺伝子伝達システムを、細胞を含むバイオサンプル(biosample)に接触させる段階を含むことを特徴とする遺伝子伝達方法。
- アデノウイルスのITR(inverted terminal repeat)ヌクレオチド配列及びデコリン−エンコーディングヌクレオチド配列を含み、前記デコリンは、アデノウイルスの腫瘍組織浸透能及び腫瘍細胞アポトーシス能を増大させる作用をすることを特徴とする組み換えアデノウイルス。
- 前記組み換えアデノウイルスは、E3遺伝子領域が欠失されたものであって、前記デコリン−エンコーディングヌクレオチド配列は、前記E3遺伝子領域の位置に挿入されたことを特徴とする請求項8に記載の組み換えアデノウイルス。
- 前記組み換えアデノウイルスは、非活性化されたE1B遺伝子、E1B55遺伝子、またはE1B遺伝子/E1B 55遺伝子を有することを特徴とする請求項8に記載の組み換えアデノウイルス。
- 前記組み換えアデノウイルスは、活性のE1A遺伝子を含むことを特徴とする請求項8に記載の組み換えアデノウイルス。
- (a)請求項8〜11のいずれか一つの項に記載の組み換えアデノウイルスの治療学的有効量、及び(b)薬剤学的に許容される担体を含むことを特徴とする薬剤学的抗腫瘍組成物。
- 請求項12に記載の薬剤学的組成物を動物に投与する段階を含むことを特徴とする癌の治療方法。
- (a)薬物の組織浸透性を改善するためのデコリンタンパク質、及び(b)薬剤学的に許容される担体を含む、改善された組織浸透性を有する薬剤学的組成物。
- (a)デコリン−エンコーディングヌクレオチド配列を含む遺伝子伝達システムまたはデコリンタンパク質の治療学的有効量、及び(b)薬剤学的に許容される担体を含む、細胞外基質の過度なる蓄積に係る疾患または状態の治療用薬剤学的組成物。
- 前記細胞外基質の過度なる蓄積に係る疾病または疾患は、斑痕、肝硬変症、肺線維症、糸球体腎炎、成人または急性呼吸困難症、肝線維症、腎線維症、後心筋梗塞線維症、 嚢胞性線維症、線維症癌、静脈閉塞症、または腎間質線維症であることを特徴とする請求項15に記載の薬剤学的組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2005-0015793 | 2005-02-25 | ||
KR1020050015793A KR100747646B1 (ko) | 2005-02-25 | 2005-02-25 | 데코린 유전자를 포함하는 유전자 전달 시스템 및 이를 포함하는 약제학적 항종양 조성물 |
PCT/KR2006/000657 WO2006091045A1 (en) | 2005-02-25 | 2006-02-24 | Gene delivery system containing decorin gene and pharmaceutical composition for treating cancer containing the system |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008531010A true JP2008531010A (ja) | 2008-08-14 |
JP4982680B2 JP4982680B2 (ja) | 2012-07-25 |
Family
ID=36927650
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007556977A Active JP4982680B2 (ja) | 2005-02-25 | 2006-02-24 | デコリン遺伝子を含む薬剤学的抗腫瘍組成物 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9468690B2 (ja) |
EP (1) | EP1869190B1 (ja) |
JP (1) | JP4982680B2 (ja) |
KR (1) | KR100747646B1 (ja) |
CN (1) | CN101128592B (ja) |
WO (1) | WO2006091045A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015182574A1 (ja) * | 2014-05-28 | 2015-12-03 | 国立大学法人岡山大学 | Reic遺伝子を発現する制限増殖型アデノウイルス |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2011101912A1 (ja) * | 2010-02-19 | 2013-06-17 | 国立大学法人 東京大学 | 組み換えヘルペスウイルス及び組換えヘルペスウイルスを含む医薬組成物 |
EP2971008B1 (en) | 2013-03-14 | 2018-07-25 | Salk Institute for Biological Studies | Oncolytic adenovirus compositions |
WO2015152609A1 (ko) * | 2014-03-31 | 2015-10-08 | 연세대학교 산학협력단 | GM-CSF 유전자; 데코린 유전자; TGF-β2 발현을 억제하는 shRNA; 및 FoxP3 발현을 억제하는 shRNA를 포함하는 항종양 조성물 |
KR101713873B1 (ko) * | 2014-03-31 | 2017-03-09 | 연세대학교 산학협력단 | GM-CSF 유전자; 데코린 유전자;TGF-β2 발현을 억제하는 shRNA; 및 FoxP3 발현을 억제하는 shRNA를 포함하는 항종양 조성물 |
KR102471633B1 (ko) | 2016-02-23 | 2022-11-25 | 솔크 인스티튜트 포 바이올로지칼 스터디즈 | 바이러스 동역학에 미치는 영향 최소화를 위한 치료용 아데노바이러스의 외인성 유전자 발현 |
EP3390428B1 (en) | 2016-02-23 | 2019-09-25 | Salk Institute for Biological Studies | High throughput assay for measuring adenovirus replication kinetics |
WO2017214706A1 (en) * | 2016-06-15 | 2017-12-21 | Tissue Regeneration Therapeutics Inc. | Anti-cancer use of genetically modified human umbilical cord perivascular cells (hucpvc) |
CN110582292A (zh) * | 2016-12-09 | 2019-12-17 | 基因药物株式会社 | 含有表达细胞外基质的降解因子的重组腺病毒的抗癌组合物 |
AU2017375633C1 (en) | 2016-12-12 | 2023-04-27 | Salk Institute For Biological Studies | Tumor-targeting synthetic adenoviruses and uses thereof |
AU2022229726A1 (en) * | 2021-03-01 | 2023-09-21 | Oncomyx Therapeutics, Inc. | Multi-armed myxoma virus |
AU2022381982A1 (en) * | 2021-11-05 | 2024-05-02 | Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) | Modulators of mesothelial ecm movement |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003034651A (ja) * | 1988-06-28 | 2003-02-07 | La Jolla Cancer Research Foundation | デコリンによる細胞増殖の抑制 |
US6524573B1 (en) * | 1997-12-30 | 2003-02-25 | Thomas Jefferson University | Method of suppressing tumor cell growth by administering a decorin gene or gene product |
JP2003532681A (ja) * | 2000-05-05 | 2003-11-05 | ジーティーシー バイオセラピューティックス インコーポレイテッド | 遺伝子導入により産生されたデコリン |
JP2008503205A (ja) * | 2004-05-31 | 2008-02-07 | ナショナル ユニヴァーシティ オブ シンガポール | デコリンロイシンリッチリピート由来のペプチドおよびその使用 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4797368A (en) | 1985-03-15 | 1989-01-10 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector |
US5139941A (en) | 1985-10-31 | 1992-08-18 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | AAV transduction vectors |
US5654270A (en) * | 1988-06-28 | 1997-08-05 | La Jolla Cancer Research Foundation | Use of fibromodulin to prevent or reduce dermal scarring |
EP0659209A1 (en) | 1991-07-26 | 1995-06-28 | The University Of Rochester | Cancer therapy utilizing malignant cells |
CA2140624C (en) | 1992-07-22 | 2001-05-01 | Arnold J. Levine | P53 vaccine |
US5631236A (en) | 1993-08-26 | 1997-05-20 | Baylor College Of Medicine | Gene therapy for solid tumors, using a DNA sequence encoding HSV-Tk or VZV-Tk |
US5824655A (en) * | 1995-02-15 | 1998-10-20 | The University Of Utah | Anti-transforming growth factor-β gene therapy |
FR2732357B1 (fr) | 1995-03-31 | 1997-04-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Vecteurs viraux et utilisation pour le traitement des desordres hyperproliferatifs, notamment de la restenose |
KR20030032591A (ko) * | 2001-10-18 | 2003-04-26 | 주식회사 엘지이아이 | 공기조화기의 콘트롤패널 구조 |
KR20020023760A (ko) * | 2001-12-15 | 2002-03-29 | 심재석 | 가상 CD ROM 드라이브 및 가상 Disk 드라이브를 이용한소프트웨어 설치, 실행 및 사용권 라이센스 관리 프로그램제작 방법 |
KR100528727B1 (ko) * | 2002-04-30 | 2005-11-15 | 윤채옥 | 종양 특이적이며 세포 고사를 유발하여 개선된 종양 살상효과를 나타내는 재조합 아데노바이러스 및 이를 포함하는약제학적 항종양 조성물 |
PL219321B1 (pl) * | 2002-10-15 | 2015-04-30 | Per Sonne Holm | Adenowirus, kodujący go kwas nukleinowy, zawierający je układ replikacyjny, wektor, komórka i organizm, ich zastosowanie oraz środek farmaceutyczny |
KR100523028B1 (ko) | 2003-02-27 | 2005-10-20 | 윤채옥 | 개선된 암세포 특이성과 활성을 가지는 사람 텔로미어역전사효소 프로모터 및 이를 포함하는 재조합 벡터 |
-
2005
- 2005-02-25 KR KR1020050015793A patent/KR100747646B1/ko active IP Right Grant
-
2006
- 2006-02-24 WO PCT/KR2006/000657 patent/WO2006091045A1/en active Application Filing
- 2006-02-24 JP JP2007556977A patent/JP4982680B2/ja active Active
- 2006-02-24 CN CN2006800061649A patent/CN101128592B/zh active Active
- 2006-02-24 EP EP06716107.5A patent/EP1869190B1/en active Active
- 2006-02-24 US US11/816,751 patent/US9468690B2/en active Active
-
2016
- 2016-03-25 US US15/081,110 patent/US10046067B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003034651A (ja) * | 1988-06-28 | 2003-02-07 | La Jolla Cancer Research Foundation | デコリンによる細胞増殖の抑制 |
US6524573B1 (en) * | 1997-12-30 | 2003-02-25 | Thomas Jefferson University | Method of suppressing tumor cell growth by administering a decorin gene or gene product |
JP2003532681A (ja) * | 2000-05-05 | 2003-11-05 | ジーティーシー バイオセラピューティックス インコーポレイテッド | 遺伝子導入により産生されたデコリン |
JP2008503205A (ja) * | 2004-05-31 | 2008-02-07 | ナショナル ユニヴァーシティ オブ シンガポール | デコリンロイシンリッチリピート由来のペプチドおよびその使用 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015182574A1 (ja) * | 2014-05-28 | 2015-12-03 | 国立大学法人岡山大学 | Reic遺伝子を発現する制限増殖型アデノウイルス |
KR20170012397A (ko) | 2014-05-28 | 2017-02-02 | 고꾸리츠 다이가꾸 호우징 오까야마 다이가꾸 | Reic 유전자를 발현하는 제한 증식형 아데노바이러스 |
JPWO2015182574A1 (ja) * | 2014-05-28 | 2017-05-25 | 国立大学法人 岡山大学 | Reic遺伝子を発現する制限増殖型アデノウイルス |
US10071126B2 (en) | 2014-05-28 | 2018-09-11 | National University Corporation Okayama University | Conditionally replicating adenovirus to express REIC gene |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US9468690B2 (en) | 2016-10-18 |
KR20060094630A (ko) | 2006-08-30 |
EP1869190A1 (en) | 2007-12-26 |
CN101128592B (zh) | 2013-02-27 |
EP1869190B1 (en) | 2015-07-15 |
US10046067B2 (en) | 2018-08-14 |
CN101128592A (zh) | 2008-02-20 |
WO2006091045A1 (en) | 2006-08-31 |
US20170080106A1 (en) | 2017-03-23 |
EP1869190A4 (en) | 2008-08-20 |
KR100747646B1 (ko) | 2007-08-08 |
JP4982680B2 (ja) | 2012-07-25 |
US20080132449A1 (en) | 2008-06-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4982680B2 (ja) | デコリン遺伝子を含む薬剤学的抗腫瘍組成物 | |
US20230054820A1 (en) | Gene delivery system containing relaxin gene and pharmaceutical composition using relaxin | |
JP3847334B2 (ja) | DNA損傷剤およびр53を含有する組成物 | |
Zhang et al. | Identification of human uroplakin II promoter and its use in the construction of CG8840, a urothelium-specific adenovirus variant that eliminates established bladder tumors in combination with docetaxel | |
ES2385347T3 (es) | Virus con potencia lítica mejorada | |
JP2012139220A (ja) | 複製欠損アデノウイルスtnfベクター | |
KR20130015270A (ko) | 종양 특이적 프로모터 및 이를 포함하는 종양살상 바이러스 벡터 | |
WO2015182574A1 (ja) | Reic遺伝子を発現する制限増殖型アデノウイルス | |
US20170275340A1 (en) | Anti-cancer compositions containing wnt decoy receptor | |
Doloff et al. | Human telomerase reverse transcriptase promoter-driven oncolytic adenovirus with E1B-19 kDa and E1B-55 kDa gene deletions | |
JP2022095954A (ja) | 遺伝子伝達用細胞シート | |
KR100969171B1 (ko) | 종양 특이적 발현이 개선된 유전자전달체 | |
KR100993881B1 (ko) | 유전자 전달체의 유전자 전달효율 개선 및 바이러스 보존용조성물 | |
Liu et al. | A novel conditionally replicating “armed” adenovirus selectively targeting gastrointestinal tumors with aberrant wnt signaling | |
JP2004033217A (ja) | Lipに対するlapの比率の調節 | |
KR20030081187A (ko) | 엘아이피에 대한 엘에이피 비율 조절방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100824 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20101124 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101201 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110124 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110131 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110224 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110920 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111205 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120228 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20120316 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120316 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20120316 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4982680 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150511 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |