JP2008500514A - 倒立顕微鏡を用いた血液構成要素の識別 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2004年2月13日に出願した米国仮特許出願第60/544,377号明細書、及び2005年2月11日に出願した米国特許出願で出願番号が未定の出願に対して優先権を主張し、本出願の内容に援用する。
MCV=Hct×1,000/RBC(マイクロリットル当りの百万個)
平均細胞ヘモグロビン(MCH)もまた算出され、平均赤血球のなかでのHbの含有量であり、下式を用いて、Hb濃度及びRBCから算出される:
MCH=Hb(リットル当りのグラム数)/RBC(マイクロリットル当りの百万個)
Hb及びHctから算出し得る他の指数は、平均細胞ヘモグロビン濃度(MCHC)である。この指数は、与えられたHbの平均濃度である。下式を用いて算出される:
MCHC=Hb(デシリットル当りのグラム)/Hct
試料:
抗凝血性を有する血液試料(抗凝血剤としてヘパリン又はEDTAを使用)は、1)指の突き刺し、又は2)静脈切開によりベクトン ディケンソン(Becton Dickenson) バキュタイナ(例えば、BD#8002561)へ入れた血液。
試料を分析する前には、試料は室温に保ちながら、従来の自動CBC装置とともに穏やかな揺れ動作を保持しなければならない。一定分量は、血液試料から吸引される。一定分量は、1滴又は約25マイクロリットルであり、10マイクロリットルから200マイクロリットルの範囲内であることが好ましい。
下記のいずれかを実施することができる:
1.希釈しない血液が用いられる。
2.血液に緩衝剤の一定分量を加える。緩衝剤は、いろいろなPHの0.9N生理生成水であっても良い。
3.血液に緩衝剤と染色液との混合剤の一定分量を加える。緩衝剤は0.9N生理生成水であっても良く、染色液は、ライトージーマス(Wright−Giemas)(シグマ ダイアゴノスティックス(Sigma Diagnostics),セントルイス、ミズリー(MO))であり、緩衝剤と染色剤とが1:1から1:5であって、好ましくは2:1(緩衝剤:染色剤)であっても良い。
4.血液に染色剤の一定分量のみを加える。染色液は、ライトージーマス(Wright−Giemas)(シグマ ダイアゴノスティックス(Sigma Diagnostics),セントルイス、ミズリー(MO))であっても良い。
混合物の1つの滴下(5から100マイクロリットル、好ましくは50マイクロリットル)が、極めて薄いガラス基板(例えば、カバースリップ、第0番又は第00番の厚み、22X40mm、エリー・サイエンティフィック(Erie Scientific)、ポーツマス(Portsmouth)、ニューハンプシャ(NH))に移される。小滴は、一定の周囲温度及び湿度でスライド上に保持される。細胞が底部に層を形成し、そこに細胞の極めて小さな動きがあり、すなわち、小滴の底部に単一層、層又はマトリックスに新たな細胞が極めてゆっくりと加わるのに十分な時間(10秒間から2分間)、好ましくは30秒間が許容される。
本発明の顕微鏡光学器により作成されたイメージは、ビデオカメラにより観察することができる(カラー又は白黒のいずれでも)。光源は白色光又は1つ以上の固有の色であり得る。ビデオカメラのイメージは、デジタル・イメージに変換できる。基板を動かすことで複数の視野が観察可能である。例えば、モータで制御されたステージは、基板を動かすことができ、CBCの要素のそれぞれについて十分な数の分析を供給するため、小滴の十分な領域を観察することかできる。1つ以上のイメージが、それぞれの視野からデジタル化され得る。イメージがデジタル化されることで、それぞれのイメージに対し、単一の照明モード又はモードの組合せが適用される。それぞれの視野に対して1つ以上の倍率(すなわち、目的物)が用いられる。イメージがデジタル化されることで、単一色、多重色、又は白色が適用され得る。異なる照明モード及び色彩(又は、多くの組合せ)を用いた数個のイメージは、色彩又は照明モードが変わるたびに、いずれデジタル化される。
赤血球(RBC)パラメータ:
a.直接計数による赤血球数。RBC数は、小滴の血液の容積と層に含まれる細胞との経験的な関係から算出できる;
b.平均赤血球容積(MCV)は、個々の細胞の直接測定及び計算により決定され得る;
c.血中赤血球容積(Hct)は、MCV×RBC/1000から算出できる;
d.ヘモグロビン(Hb)は、反射又は透過分光法、又は公式Hb=MCH×RBCの計算により決定され得る。個々の細胞のHbは、シーンの選択及び対象物の識別を伴い、それぞれについての反射分光法により決定され得る;
e.平均赤血球ヘモグロビン量(MCH)は、個々の細胞のHb/RBCの多くの測定、又は計算により直接決定され得る;
f.個々の細胞の直接測定又はHb/Hctの計算から平均赤血球ヘモグロビン濃度(MCHC);そして、
g.RBCの形態;個々のRBCsのイメージ分析(dにおける)と、それに続く大きさと形状の決定とにより、赤血球不同症及び変形赤血球症等の慣習上の形態特性が供給できる。
a.直接計数による白血球数;RBCと同様な原理が適用される;及び
b.イメージ分析による白血球百分率(WBCsの異なるタイプの数え上げ)
c.異常なWBCのタイプの識別
RBCと同様な原理が適用され、すなわち直接計数及び小滴の容量と、層における血小板との経験的な関係による。
これらの基本的なパラメータにより、幾つかの異なる実施形態が可能である。時間は、希釈液を選択する一つの要素である。例えば、視野は、小滴が基板上に滴下された後の与えられた時間に分析され、低い希釈を用いると、その結果1つ以上の層が形成される。短い時間間隔では、細胞は蜜集せず分析を容易にする。時間間隔、希釈剤、及び時間に伴う沈殿のパターンを知ることで、観察する要素の全凝縮が計算できる。
Claims (25)
- 血液の一定分量内の要素を検査する方法であって、
要素を含む血液の一定分量を透明面に設置すること、
前記要素を前記透明面の前記表面に沈殿させること、及び、
前記透明面の底部から前記一定分量を検査すること、
を備えることを特徴とする方法。 - 請求項1に記載の方法において、前記一定分量は、染色され、希釈され、又はそれらの組み合わせであることを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の方法において、前記透明面は、ガラス又はプラスチックであることを特徴とする方法。
- 請求項3に記載の方法において、前記透明面は、カバースリップであることを特徴とする方法。
- 請求項3に記載の方法において、前記一定分量は、自然に形成された又は外部力により形成された安定した小滴であることを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の方法において、前記一定分量は、倒立顕微鏡又は他の同種の光学機器により検査されることを特徴とする方法。
- 請求項6に記載の方法において、前記一定分量は、反射光、透過光、又はそれらの組合せから成るグループから選択された少なくとも1つの光源を用いた照明の下で検査されることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法において、1つ以上の光源体を含む前記光源は、ガラス面に対して垂直であるか又は角度を有するかであり、又はそれらの組合せであることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法において、前記検査は、目視によるか、又はデジタル・イメージ分析法により完結されることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法において、白色光、1つ又は複数の波長を有する単色光、赤外線スペクトル及び偏光を通過した紫外線、から少なくとも1つの光源が選択されることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法において、前期透過光の光路は、縦列(column),環状(annulus)、又は1つの角度による単一の光源であることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法において、前記光源は並行して進むか、分岐して進むか、又は収束するかであることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法において、前記光源の組合せは、同時使用であるか、又は連続する使用であることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法において、照明の前記角度は、連続して変化することを特徴とする方法。
- 請求項6に記載の方法において、前記顕微鏡は、より小さい及びより大きい倍率を有する可変レンズか、又はより短い又はより長い被写界深度を有することを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の方法において、前記血液試料は、個々の細胞の波長の吸収又は反射の測定により決定されるヘモグロビンを内部に有することを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の方法において、赤血球、白血球、及び血小板の数が計数されることを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の方法において、血中赤血球容積が決定されることを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の方法において、白血球百分率及び/又は赤血球の形態の評価がなされることを特徴とする方法。
- 請求項1に記載の方法において、異常な白血球の評価がなされることを特徴とする方法。
- 請求項17に記載の方法において、赤血球指数は、ヘモグロビン評価を含んで得られることを特徴とする方法。
- 請求項17に記載の方法において、赤血球指数は、赤血球数を含んで得られることを特徴とする方法。
- 請求項17に記載の方法において、赤血球指数は、血中赤血球容積を含んで得られることを特徴とする方法。
- 請求項17に記載の方法において、前記血液の前記形成された細胞の構成要素の特徴は、光学機器を通じて直接目視により決定されるか、又はデジタル・イメージを用いるか、又は自動的にデジタル・イメージを分析することで決定されることを特徴とする方法。
- 請求項7に記載の方法において、前記反射光は、暗視野照明であることを特徴とする方法。
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