JP4086468B2 - 血球の計数を行う方法 - Google Patents

Description

【０００１】
（発明の背景） （技術分野） 本発明は全血サンプルの分析方法及び装置、並びに白血球や血小板のような全血サンプル内の成分を評価する方法及び装置に関する。
【０００２】
（背景情報） 分析血液学の最近の進歩により、患者の血液サンプルから入手できる情報の量と質は増大した。その結果、診断手段として患者の血液サンプルを使用する医療機関の関心もまた増大した。しかしながら、血液サンプルを分析する方法は、あらゆる場合において入手可能な情報についていけなかった。歴史的に、血液サンプルは、スライド上に少量の無希釈血液を塗抹し、乾燥、固定及び染色しついで顕微鏡下で塗抹を調べて評価してきた。合理的な結果がそのような塗抹から得ることができるが、データの正確さと信頼性は、技術者の経験と技術に大きく依存する。それに加えて、血液の塗抹は労働力を要しかつコストが高いから、一般に工業的応用には向かない。
【０００３】
全血サンプルを評価する別の公知方法は、多量の全血を希釈し、それをチャンバ内に入れ、そして希釈サンプル内の成分細胞を手動的に評価することである。全血中の赤血球（ＲＢＣ）の数と濃度は、他の成分細胞よりも非常に数が多いために、希釈が必要である。一般的な個体からの全血のサンプルでは、例えば、血液サンプルマイクロリットル（μｌ）当たり約４．５×１０⁶ＲＢＣがあるが、全血μｌ当り僅かに約０．２５×１０⁶の血小板と０．００７×１０⁶の白血球（ＷＢＣ）があるだけである。ＷＢＣカウントを測定するためには、全血サンプルは、使用される実際の技術に依存して、約１部の血液対２０部の希釈剤（１：２０）から約１：２５６の希釈までの範囲内に希釈しなければならなく、また一般に１種またはそれ以上の試薬でＲＢＣを選択的に溶解しなければならない。ＲＢＣを溶解すると、視野からそれを効果的に除き、ＷＢＣを見ることができる。血小板のカウントを測定するために、血液サンプルは、約１：１００〜約１：５０，０００の範囲内に希釈しなければならない。しかしながら、血小板のカウントは、サンプル中のＲＢＣを分解する必要はない。この全血サンプルの評価方法の欠点は、希釈工程が時間消費的で高価であることである。その上、全血サンプルに希釈剤を加えると、サンプルデータ内の誤差確率が増大する。
【０００４】
血液サンプルを評価する現代的方法は、インピーダンスまたは光学的流動細胞計測法（フローサイトメトリー）である。フローサイトメトリーは、１つ以上の小径オリフィスを通して希釈血液サンプルを循環するものであり、オリフィスの単一縦列を通るとき構成細胞を評価する、インピーダンス型か光学型のセンサに隣接する。ここに再び、血液サンプルは、ＷＢＣと血小板に対するＲＢＣの圧倒的な数を軽減するために、希釈しなければならない。上記の方法よりもいっそう適切で一貫しているけれども、フローサイトメトリーにも、多数の欠点がある。これらの欠点のいくつかは、センサ手段にサンプルを運ぶために必要とされる配管系統、及びセンサ手段を通る流体流量を制御するために必要な流体制御器から生じる。サンプルの流れの正確な制御は、フローサイトメータの運転に不可欠である。フローサイトメータ内の配管系統は、しばしば漏れを生じ、この装置の精度と安全性を潜在的に危くする。一方、流体流動制御器と希釈装置は、周期的再検定を必要とする。再検定の必要性は、フローサイトメータを使用する多くの現在利用できる血液学分析器と共に存在する、不正確な結果と望ましくない運転コストに対する可能性を示す。別の欠点は、必要とされる試薬の量である。大きな希釈率を使用するために、対応する大容積の液体試料が必要である。大量の試薬容積は試験のコストを増大し、廃棄物の問題を生じる。
【０００５】
細胞分析の別の方法は、例えば、米国特許第５，５４７，８４９号明細書及び同第５，５８５，２４６号明細書に記載されるような容積測定毛管スキャニングである。そこでは、全血の比較的無希釈サンプルを既知容積と厚さの毛管中に入れ、血液が静止状態のままに試験される。この技術は、ＲＢＣが比較的透明に見えるものに対し走査波長を制限することにより、ＲＢＣの存在を扱い、ＲＢＣが測定工程の間凝集しないように、サンプルを処理する必要がある。したがって、この技術は長波長の蛍光の使用に制限され、ＲＢＣと血小板の試験または任意の細胞形態学の試験に対する規定もない。
【０００６】
必要とされるものは、１）正確な結果を提供しうる、２）分析の前にＲＢＣの除去を必要としない、３）サンプルの試験のために広範囲の光励起源の使用を可能にし、４）大容積の試薬を使用しない、５）分析の間にサンプル流体の流動を必要としない、６）サンプル中の細胞と粒子の全てまたはほとんど全てを分析しうる、そして７）コスト効率的である、実質的に無希釈の抗凝固化全血のサンプルを評価する方法と装置である。
【０００７】
（発明の開示）
本発明の目的は、実質的に無希釈の抗凝固化全血のサンプルの成分を正確に評価する方法を提供することである。
【０００８】
別の目的は、実質的な希釈を必要としない全血のサンプルを評価する方法と装置を提供することである。
別の目的は、大容量の液状試薬の使用を必要としない全血のサンプルを評価する方法と装置を提供することである。
別の目的は、評価の間にサンプル流体の流動を必要としない全血のサンプルを評価する方法と装置を提供することである。
【０００９】
別の目的は、分析の前にＲＢＣの大部分の除去を必要としない全血のサンプルを評価する方法と装置を提供することである。
別の目的は、サンプルの成分の全てまたはほとんど全てを評価できるサンプルの評価方法と装置を提供することである。
別の目的は、使用が単純である全血のサンプルを評価する方法と装置を提供することである。
【００１０】
本発明は、チャンバ内に含まれる、静止状態の実質的に無希釈の抗凝固化全血サンプルから情報を得て試験することに使用する方法と装置に関する。本発明において使用する語句「実質的に無希釈の」は、約１：１以下に、好ましくは更に小さく希釈される血液サンプルをいう。一般に、本発明の方法を実行するのに使用される全ての試薬は、染料、染色剤及び抗凝血物質であって、これらの試薬はサンプルを希釈するために添加するものでなく、むしろうまく試験を促進する反応、効果などをもたらすために添加される。
【００１１】
本発明によれば、実質的に無希釈の抗凝固化全血のサンプルの成分を評価する方法が提供される。この方法は、ａ）サンプルチャンバを供し、ｂ）感受性着色剤と全血のサンプルを混合し、ｃ）混合サンプルをチャンバ中に挿入し、ｄ）混合サンプルをチャンバ内に連銭（rouleaux）と小窩（lacunae）がサンプル内に生成するまで静止的に保持し、ｅ）小窩内に配置された標的成分を評価するという工程を含む。本発明書で使用する、用語着色剤は、装置により定量化できる、蛍光発光により、または特定の波長での光の吸収により感じやすい信号を生じる任意の試薬を意味する。
【００１２】
本発明の方法の利点は、実質的に無希釈の抗凝固化全血のサンプルの成分を評価する方法が、正確な情報を供給することを提供されることである。具体的には、本発明の方法は、流体の流動の制御とサンプルの希釈に対する必要性、従ってそれらの関連する誤差確率を起こらないようにする。
【００１３】
本発明の方法の別の利点は、抗凝固化全血の試料内の成分が試料を実質的に希釈することなしに評価できることである。本発明の方法は、全血サンプルに比較的少量の感じやすい着色剤を添加することを要求し、それによりサンプルを実質的に無希釈のままにさせる。希釈に関連した費用と問題は、必然的に避けられる。例えば、本発明の方法では、有用な情報が食塩水に希釈した約１０μｌの着色剤、または１μｌ未満の無水試薬と混合された血液のサンプルの１００μｌの範囲内で獲得できる。
【００１４】
別の利点は、本発明の方法は、実質的に無希釈の抗凝固化全血サンプルの成分を評価するとき、多量の試薬を必要としないことである。当業者は、試薬の量の減少は、分析の初期材料コストと分析後の使用済み試薬を処理するコストの低減に役立つことを認識するであろう。
【００１５】
本発明方法の別の利点は、サンプル流体の流動が必要としないことである。本発明の方法は、血液サンプルを静止の（または「実質的に動かない」）状態のまま評価できる。血液サンプルの唯一の運動は、サンプル内に生成された成分のブラウン運動であり、この運動は、本発明の装置の使用を不可能にしない。その結果、配管系統の漏れ及びそのような漏れに関連した環境及び／または安全の問題も避けられる。その上、静止状態のままサンプルの評価は、流体流動の制御、従ってそのような制御の入手と維持のコストに対する必要性が起こらないようにもする。当業者は、多くのフローサイトメーターに関連した整備コストが相当なものであり、これらのコストを避けることが明らかな利点であることを認めるであろう。
【００１６】
本発明のこれら及び他の目的、特徴及び利点は、付随の図面に示されるとおりに、最良様式の実施態様の詳細な説明に照らして明らかになるであろう。
【００１７】
【発明を実施するための最良の態様】
以下に記載する実質的に無希釈の抗凝固化全血のサンプル内の白血球（ＷＢＣ）、血小板及び他の全血成分を評価する方法は、現在利用できる評価方法及び装置を越える多くの利点を提供する。本発明の方法は、ａ）サンプルチャンバ１０を準備し、ｂ）感受性着色剤と全血サンプルを混合し、ｃ）混合サンプルをサンプルチャンバ中に挿入し、ｄ）混合サンプルをチャンバ１０内に連銭３０と小窩３２（第６図参照）がサンプル内に生成するまで静止的に保持し、ｅ）小窩３２内の１種またはそれ以上の標的成分を評価するという工程を含む。
【００１８】
第１〜４図を参照して説明すると、サンプルチャンバ１０は、第１壁１６と透明な第２壁１８を有する。壁１６、１８は、測定可能な大きさの平面を貫く厚さ（through-plane thickness）２０により互いに分離される。本明細書で使用する、用語「平面を貫く厚さ」は、第１壁１６の内面２２と第２壁１８の内面２４の間の最短間隔に相当する直線長さ（line of sight）を意味する。第１の実施態様（第２図）において、壁１６、１８は実質的に平坦で互いに平行である。第２の実施態様（第２図と第４図）において、壁１６、１８は互いに向かって一点に集まり、それにより平面を貫く厚さ２０の勾配を形成する。第２の実施態様の壁１６、１８は、互いに交差（この場合には、平面を貫く厚さ２０は０になる）するか、壁１６、１８は最低量までに分離され続ける。第３の実施態様（第３図）において、壁１６、１８の一方または両方は、一つまたはそれ以上のステップを含む。各ステップ２６は、異なる平面を貫く厚さ２０を有する独立的領域を作る。全実施態様において、スペーサ２８は２枚の壁１６、１８の間の平面を貫く厚さ２０を作り／維持するために適当な場所に使用してもよく、壁１６、１８（またはステップ領域２６）は実質的に平坦かまたはアーチ形であってもよい。
【００１９】
壁１６、１８間の平面を貫く厚さ２０は、既知の文献を使用して数学的に及び／または光学的に、あるいは比較的に決定することができる。例えば、壁１６、１８の傾斜が既知であって壁１６、１８が接触している（または既知の量、例えば、スペーサ２８だけ分離されている）ならば、その時は、接触の点（またはスペーサ２８）からの距離を与えるならば、任意の選ばれた点で数学的に算出することができる。平面を貫く厚さ２０はまた、限定されないが、干渉計使用法、共焦点顕微鏡法などを含む光学技術を使用して、決定することもできる。平面を貫く厚さ２０を決定する方法のいっそう完全な記述は、米国特許出願第 号（弁理士の事件要領書番号ＵＦＢ−０１３）に見出すことができる。使用される方法に関係なく、チャンバの平面を貫く厚さ２０は、チャンバ１０の製造工程の間に固定されて留意することができ、あるいはサンプルを挿入する前の時間のいっそう遅い時点で、またはサンプルが挿入された後（例えば、最終使用者で）で決定することができる。一般に、サンプルの標的成分及びヘマトクリットの寸法は、最も有利な平面を貫く厚さ２０を書き取らせる。成分と平面を貫く厚さ２０の間の関係は、以下に詳細に議論する。
【００２０】
全血サンプルは、細胞や粒子の視覚化を可能にするのに十分な、少量の少なくとも１種類の感受性着色剤と混合する。感受性着色剤は、１）全血サンプル内の標的成分を区別する、及び２）混合されたとき全血サンプルを実質的に希釈しない、いかなる材料であってもよい。感受性着色剤の例は、アクリジンオレンジ、塩基性オレンジ−２１、または蛍光顕微鏡を使用して見ることができる類似の染料のような、蛍光強調超生体染色剤である。ある場合に、単一着色剤を使用して種々の成分を固定することができる。他の場合には、複数の着色剤を使用して複数の成分を区別することができる。米国特許出願第 号（弁理士の事件要領書番号ＵＦＢ−０１６）に記載されるような、他の成分の評価は、別の感受性着色剤の添加により同時に行うことができる。感受性着色剤の添加は、全血のサンプルに液体形の少量の着色剤を添加して行うことができるから、サンプルの最小の希釈をするか、または着色剤は小さな錠剤のような乾燥形で添加してもよい。感受性着色剤を全血サンプルに混合する別法は、サンプルチャンバ１０の領域上で着色剤を乾燥することである。全血サンプルがチャンバ１０中に挿入されるとき、着色剤はサンプル中に拡散する。
【００２１】
チャンバの両壁１６、１８に接触するのに十分大きい量の混合全血サンプルがチャンバ１０中に挿入される。サンプルは、袋状物、毛管作用などの使用を含むさまざまな手段によりチャンバ１０中に挿入できる。サンプルのあふれに対する可能性を最小にする方法と装置が、環境と安全の理由のために好ましい。
【００２２】
第５図と第６図に言及して、チャンバ１０中に入れた後、サンプルは短時間静止的に保持して連銭３０と小窩３２（第６図参照）の生成を可能にする。先に述べたように、血液サンプルの唯一の運動は、サンプルの生成された成分のブラウン運動であり、その運動は本発明の装置を使用させなくさせるものではない。連銭３０は、実質的に動かない、抗凝固化全血中で同時に生じる赤血球（ＲＢＣ）のクラスターである。小窩は連銭３０の間に残った開放領域である。連銭３０と小窩３２の生成は、ＲＢＣを凝結させる引力が、それらが評価できる場合に、ＷＢＣ３４と血小板３６（第６図参照）のような他の成分を小窩３２中に押し込むから、抗凝固化全血中に自然に生じる。全血サンプルを約１５〜３０秒間実質的に動かなく維持することは、連銭３０と小窩３２の生成を可能にするためには普通は十分であるが、その時間はサンプルごとに変化しうる。連銭３０の生成も既知の凝結剤により早めることができ、その場合にＲＢＣの凝塊は凝集塊と言われる。そのような凝結剤の例は、デキストラン、ポリブレン及びこの２種の混合物、普通の赤血球抗原に対する抗体、並びに植物性レクチンなどである。
【００２３】
評価される全血サンプルの平面を貫く厚さ２０は、サンプルの成分を評価する上に重要である。例えば、実質的に無希釈の抗凝固化全血の１００μ（１μ＝１×１０^-6ｍ）の厚さの層が顕微鏡によって試験されるならば、ＲＢＣが連銭３０の生成を可能にするかどうかに関係なく、光が層を十分に透過できないため、サンプルは乳白色（第５図に図示するように）に見える。しかしながら、サンプル層の厚さが約７０μ以下に減少するならば、そして好ましくは４μ〜５０μに減少するならば、十分量の光が通過し、小窩３２が、ＷＢＣ３４と血小板３６が区別されて評価できる透明なレーキのように見える。小窩３２内の成分の評価を可能にする最適サンプル層の厚さは、サンプルの元のヘマトクリットによって左右される。全血容積の百分率としてのＲＢＣの数を意味するヘマトクリットは、最適サンプル層の厚さと逆比例にあり、すなわち一般に典型的よりも高いヘマトクリットは、典型的よりも薄い最適サンプル層と関連する。しかしながら、全ての場合に、サンプル層は合理的な数の粒子や細胞を供するために十分厚くなければならない。問題のすべての単一成分が、小窩３２中に押し込まれるとは限らないことに留意されたい。統計学的や臨床的に些細な数の成分がＲＢＣ凝集塊によりはっきりしないとしても、この発明を不可能にすることではない。問題の１種以上の成分がＲＢＣの凝集塊の頂上に横たわることも可能であるが、これらの成分は見ることができる（垂直顕微鏡の場合には）から、それらは蛍光により完全に評価できるであろう。
【００２４】
標的成分は、さまざまな技術を使用して評価できる。例えば、標的成分が蛍光染料で着色されるならば、小窩３２は市販の蛍光顕微鏡によって検査できる。蛍光顕微鏡は、標的成分と反応する蛍光染料を照射し、それによりサンプル内にそれを区別する。蛍光顕微鏡で得られた画像はイメージディセクタ（例えば、ＣＣＤカメラ）中に記録でき、その画像は手動式に評価でき、または画像は電子ファイル中でディジタル化して記憶できる。電子ファイルは、例えば、特定の成分を同定し、特定の成分の出現を数えあげ、そして成分の特性を評価する能力を有する解析ソフトウエアを使用して解釈することができる。市販の解析ソフトウエアの例は、米国バージニア州ビエナのシグナル・アナリティクス社により市販されているもの、または他のそのようなイメージ処理装置である。そのようなイメージ評価装置のより完全な記述は、本出願人の同時係属米国特許出願第 号（弁理士の事件要領書番号ＵＦＢ−０１７）に示されている。
【００２５】
次の実施例は、いかに個々の全血サンプルの成分が、本発明の方法と装置を使用して評価できるかを説明する。
実施例１
第５図と第６図を参照して説明すると、少量の感受性着色剤と混合した抗凝固化全血サンプル内のＷＢＣ３４は、チャンバ１０の至る所かチャンバ１０の一部で、約２０μに等しい平面を貫く厚さ２０（第２〜４図参照）を有するサンプルチャンバ１０中で評価できる。ＥＤＴＡは、使用できる抗凝結剤の一例であり、アクリジンオレンジ、塩基性オレンジ−２１など、蛍光性強調超生体染色剤は使用できる感受性着色剤の例である。約２０μのチャンバの平面を貫く厚さは、２つの理由で選ぶ。第１に、評価容積は試験のために有用な数のＷＢＣ３４を含有し、第２に、２０μの平面を貫く厚さ２０は連銭３０の生成のために最適チャンバを一般に供する。評価されるサンプルの容積は一般に、サンプルの平面を貫く厚さ２０と評価の場３８の断面積により定められる。先に述べたように、チャンバ１０内の場３８の正確な平面を貫く厚さ２０は、特定の場３８内の標的成分の占有数が統計的に評価され、そして他の場３８が必要に応じて評価され、占有数を増加または減少させる、反復工程を含む、いくつかの技術を使用して最適化できる。
【００２６】
第５図は、透過光でまたはより好ましくはその上に照射された蛍光により試験されたとき、サンプルが不透明に見える時にチャンバ１０に挿入直後のサンプルの場３８を画いている。不透明な外観は、連銭３０の生成前に一部重なり合う塊を生成するＲＢＣ３５によりもたらされる。サンプルの場３８の不透明な外観にもかかわらず、着色剤は若干のＷＢＣを僅かに区別することを可能にする。第６図は、約３０秒間実質的に動かない状態にあった後の同一のチャンバ１０を示す。ＲＢＣ３５は連銭３０中に自発的に群をなして集まり、連銭３０の間に小窩３２を残す。これらの小窩３２中に、他の全血サンプルの成分（例えばＷＢＣ３４と血小板３６）が区別及び評価することができる。ＷＢＣ３４の計数を望むならば、２０μ（０．０２μｌの容積の全血サンプルを含有する）の平面を貫く厚さ２０を有するチャンバ１０の領域内に１平方ｍｍの断面積を有する場３８が評価できる。０．０２μｌのサンプルはＷＢＣ３４の数を合理的なものに維持するために選ぶ。標準的な全血サンプルはサンプルのμｌ当り約７，０００個のＷＢＣを含有し、そして０．０２μｌの標準的な全血サンプルは約１４０個のＷＢＣを含有する。多くのこれらの場３８は、十分な細胞がカウントされるまで係数され、事実上約１０００の細胞である、十分統計的に正確な数を得る。追加のＷＢＣ３４の情報を捜し求めるならば、ＷＢＣ３４（リンパ球、顆粒球、単球など）が、更にチャンバの容積の中で評価することができる。例えば、全血サンプル内のＷＢＣ３４の型及び／またはそれらの頻度を分類することを望むならば、ＷＢＣは解析ソフトウエア付き／なしのイメージディセクタを使用して評価することができる。区別を示す計数は、収集したデータから決定することができる。この方法の更に完全な記述は、同時係属米国特許出願第 号（弁理士の事件要領書番号ＵＦＢ−０１１）に示されている。
【００２７】
サンプルの小窩が、多分典型的なヘマトクリットよりも高い結果、２０μの平面を貫く厚さのチャンバで部分的に不透明に見えるならば、２０μよりも小さい平面を貫く厚さを有するサンプルチャンバ１０内で、サンプルの場３８を評価することが望ましい。他方、サンプルのヘマトクリットが典型的なものよりも低いならば、各成分の占有数が大きいようなので、２０μよりも大きい平面を貫く厚さを有するサンプルの場３８を使用することが都合がよい。サンプルの平面を貫く厚さ２０は、成分の占有数を増大や減少する方法として変えることもできる。
【００２８】
実施例２
抗凝固化全血サンプル内の血小板３６を、実施例１に記述した技術を使用して評価することができる。血小板はＷＢＣ３４よりもずっと多い量で存在するから、厚さが約５μの平面を貫く厚さ２０を有するチャンバ領域が使用される。５μの平面を貫く厚さを有するチャンバ領域内に１平方ｍｍの断面積を有する各場３８は、０．００５μｌのサンプル容積を示し、従って標準的な個体においては約１２５０の血小板３６を含有する。血小板３６は、ＷＢＣ３４に対して使用したのと同一の蛍光強調超生体染色剤及び技術を使用して評価できる。血小板３６はＷＢＣを評価するために使用したものと同一のチャンバ１０中で評価することができる。但しチャンバが斜めの、階段のついた及びまたはアーチのある壁を持つ上記のもののような平面を貫く厚さの各種大きさ領域を有する。
【００２９】
本発明を詳細な実施態様について示して説明してきたが、当業者は、形及び詳細のさまざまな変化が本発明の精神及び範囲を離れることなくなしうることを理解するであろう。例えば、サンプルチャンバは第１の壁と透明な第２の壁を有するものとして説明されている。透過率がサンプルを感知するための機構として蛍光の代わりに使用されるならば、その時は第１の壁と第２の壁の両方とも透明である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 サンプルチャンバの斜視図である。
【図２】 傾斜した平坦な第２壁を含むサンプルチャンバの断面図である。平面を貫く厚さの傾斜は、第１と第２の壁の間に形成される。
【図３】 複数のステップを有する第１壁上に配置された平坦な第２壁を含むサンプルチャンバの断面図である。
【図４】 第２壁に対しある角度で延びる表面を有する第１壁上に配置された平坦な第２壁を有するサンプルチャンバの断面図である。平面を貫く厚さの傾斜は、第１と第２の壁の間に形成される。
【図５】 連銭と小窩が形成される前の実質的に無希釈の、抗凝固化全血サンプルの視覚的に不透明な外観を図示するサンプルチャンバの線図である。
【図６】 チャンバ内の静止状態期間後に生成される実質的に無希釈の、抗凝固化前血サンプル内の連銭と小窩の外観を図示するサンプルチャンバの線図である。
【符号の説明】
１０ チャンバ
１６ 第１壁
１８ 第２壁
２０ 平面を貫く厚さ
２２ 第１壁の内面
２４ 第２壁の内面
２６ ステップ
２８ スペーサ

Claims (8)

1. 実質的に無希釈の抗凝固化全血サンプル中の白血球成分及び／または血小板成分を評価する方法において、
   第１の壁と透明な第２の壁の間に形成されるサンプルチャンバであって、これらの壁が前記チャンバの第１の領域中で第１の平面を貫く厚さにより分離されている、サンプルチャンバを設け、
   前記サンプル中の１種またはそれ以上の標的成分を識別する着色剤と、前記サンプルとの混合物を、前記チャンバの外側または内側で調製し、
   前記混合物は、前記混合物が前記チャンバの内側にあるとき、前記チャンバの前記第１の領域中において前記チャンバの前記第１と第２の壁と接触するように置かれ、
   １個またはそれ以上の連銭及び前記連銭の間に残る開放領域を形成するために十分な時間、前記混合物を前記チャンバ中に静止的に保持し、
   前記第１の領域内の前記開放領域内に存在する、前記着色剤によって識別される成分を試験して、前記白血球成分及び／または血小板成分を評価する、
   ことを含む、上記評価方法。
2. 前記チャンバに、前記第１の領域中の前記第１の平面を貫く厚さよりも大きい第２の平面を貫く厚さを有する、第２の領域を更に設け、
   前記第２の領域内における前記開放領域内に存在する、前記着色剤によって識別される成分を試験する工程を更に含む、請求項１記載の方法。
3. 前記チャンバに、前記第１の領域中の前記第１の平面を貫く厚さよりも小さい第２の平面を貫く厚さを有する、第２の領域を更に設け、
   前記第２の領域内における前記開放領域内に存在する、前記着色剤によって識別される成分を試験する工程を更に含む、請求項１記載の方法。
4. 前記第１の平面を貫く厚さが７０μよりも大きくない、請求項１記載の方法。
5. 前記第１の平面を貫く厚さが４μよりも小さくない、請求項１記載の方法。
6. 前記第１の平面を貫く厚さが５０μよりも大きくない、請求項１記載の方法。
7. 前記混合物が前記チャンバの外側で調製される、請求項１記載の方法。
8. 前記混合物が前記チャンバの内側で調製される、請求項１記載の方法。

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