JP2007530568A

JP2007530568A - ゴシポール共結晶およびその使用

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Publication number: JP2007530568A
Application number: JP2007505135A
Authority: JP
Inventors: シャオメンウォン; デジョンヤン
Original assignee: University of Michigan
Current assignee: University of Michigan
Priority date: 2004-03-25
Filing date: 2005-03-24
Publication date: 2007-11-01
Also published as: CN1960719A; CA2561303A1; US7432300B2; CN1960719B; EA200601562A1; US7342046B2; US20070293585A1; KR100906843B1; EA011218B1; EP1732529A4; AU2005228998B2; US20050234135A1; BRPI0509182A; ZA200607956B; NO20064829L; US20090082445A1; CA2561303C; EP1732529A1; AU2009200387A1; SG151299A1

Abstract

本発明は、Bcl-2ファミリー蛋白質の阻害剤として有用な、C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸との(-)-ゴシポールの共結晶を含む組成物に関する。本発明はまた、細胞においてアポトーシスを誘導するため、および細胞をアポトーシス細胞死の誘導に感作させるためのC_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸との(-)-ゴシポールの共結晶の使用に関する。

Description

発明の分野
本発明は、医化学分野に属する。特に、本発明は、Bcl-2ファミリー蛋白質の阻害剤として有用な、C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸との(-)-ゴシポールの共結晶を含む組成物に関する。本発明はまた、細胞におけるアポトーシスを誘導するための、およびアポトーシス細胞死の誘導に対し細胞を感作させるための、C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸との(-)-ゴシポールの共結晶の使用に関する。

関連技術
高悪性度癌細胞表現型は、細胞内シグナル伝達経路の調節解除に至る様々な遺伝子変化およびエピジェネティック変化の結果である(Ponder, Nature 411:336(2001)(非特許文献1))。しかしながら、全ての癌細胞に共通しているのは、アポトーシスプログラムを実行できないことであり、正常なアポトーシス機構の欠陥のために適当なアポトーシスが欠如することが癌の顕著な特徴である(Lowe et al., Carcinogenesis 21:485 (2000)(非特許文献2))。化学療法薬、放射線、および免疫療法を含む現在の癌治療のほとんどが、癌細胞において間接的にアポトーシスを誘導することにより功を奏している。このように癌細胞が、正常なアポトーシス機構の欠陥のためにアポトーシスプログラムを実行できないのは、しばしば、化学療法、放射線、または免疫療法により誘導されるアポトーシスに対する抵抗性が増加することと関連する。異なる起源由来のヒトの癌の、アポトーシス欠陥による現在の治療プロトコルに対する原発性または獲得抵抗性は、現在の癌治療において重要な問題である(Lowe et al., Carcinogenesis 21:485 (2000)(非特許文献2);Nicholson, Nature 407:810(2000)(非特許文献3))。したがって、癌患者の生存率および生活の質を改善するための新規分子標的-特異的抗癌治療の設計および開発に向けた現在および将来の努力は、特異的にアポトーシスに対する癌細胞抵抗性を標的とする戦略を含まなければならない。この点に関し、癌細胞のアポトーシスを直接阻害する際に中心的役割を果たす重要な負の調節因子を標的とするのは、新規抗癌剤設計に対し非常に有望な治療戦略を示す。

2つのクラスのアポトーシスの負の中心的調節因子が識別されている。第1のクラスの調節因子は、アポトーシス蛋白質の阻害剤(IAP)である(Deveraux et al., Genes Dev. 13:239(1999)(非特許文献4); Salvesen et al., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 3:401(2002)(非特許文献5))。IAP蛋白質は、癌細胞における化学療法薬、放射線、および免疫療法を含む様々なアポトーシス刺激により誘導されるアポトーシスを強く抑制する。

第2のクラスのアポトーシスの負の中心的調節因子は、Bcl-2ファミリーの蛋白質である（Adams et al., Science 281:1322(1998)(非特許文献6); Reed, Adv. Pharmacol. 41:501(1997)(非特許文献7); Reed et al., J. Cell. Biochem. 60:23(1996)(非特許文献8)）。Bcl-2はファミリーの創立メンバーであり、腫瘍遺伝子の産物として最初に単離された。Bcl-2ファミリーは現在、Bcl-2およびBcl-X_Lなどの抗アポトーシス分子およびBax、Bak、Bid、およびBadなどのアポトーシス促進性分子の両方を含む。Bcl-2およびBcl-X_Lは、Bcl-2の過剰発現に至る染色体転座(t14、18)により引き起こされる非ホジキンリンパ腫を含む、多くの型のヒト癌(例えば、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌、肺癌など)において過剰発現される。これにより、多くの癌細胞型が、癌細胞または前癌細胞として規定し、同時に、アポトーシス経路を実行させる他の細胞の乱れから生存するには、Bcl-2および/またはBcl-X_Lの上昇したレベルに依存することが示唆される。また、Bcl-2ファミリー蛋白質の発現の増加は、様々な様式で腫瘍細胞における細胞死を誘導するように作用する癌治療剤および放射線への抵抗性の発現の根拠として認識されている。

Bcl-2およびBcl-X_Lは、腫瘍細胞の遊走および浸潤、そのため、転移において重要な役割を果たすと考えられる。Amberger et al, Cancer Res. 58:149(1998)(非特許文献9); Wick et al., FEBS Lett, 440:419(1998)(非特許文献10); Mohanam et al., Cancer Res. 53:4143(1993)(非特許文献11); Pedersen et al., Cancer Res., 53:5158(1993)(非特許文献12)。Bcl-2ファミリー蛋白質は、腫瘍細胞に、新しい非許容環境(例えば、転移部位)で生存するための機構を提供し、臨床的転移癌伝播の器官特異的パターンに寄与すると考えられる。Rubio, Lab Invest. 81:725(2001)(非特許文献13); Fernandez et al., Cell Death Differ. 7:350(2000)(非特許文献14))。Bcl-2および/またはBcl-X_Lなどの抗アポトーシス蛋白質もまた、例えば、細胞表面インテグリンの調節を介して、細胞-細胞相互作用を調節すると考えられる。Reed, Nature 387:773(1997)(非特許文献15);Frisch et al., Curr. Opin. Cell Biol. 9:701(1997)(非特許文献16); Del Bufalo et al., FASEB J. 11:947(1997)(非特許文献17)。

癌細胞感受性を回復させ、癌細胞のアポトーシスに対する耐性を克服するように、癌中のBcl-2およびBcl-X_Lを標的とするための治療戦略が広く概説されている(Adams et al., Science 281:1322(1998)(非特許文献6); Reed, Adv. Pharmacol. 41:501(1997)(非特許文献7); Reed et al., J. Cell. Biochem. 60:23(1996)(非特許文献8))。現在、Bcl-2アンチセンス療法が、固形および非固形腫瘍の治療のためのいくつかの第III相臨床試験中である。

ゴシポールは粗綿実油由来の天然の複ビフェノール化合物である(Gossypium sp.)。男性用避妊薬としてのゴシポールのヒト試験により、これらの化合物の長期投与の安全性が証明されている(Wu, Drugs 38:333(1989)(非特許文献18))。より最近では、ゴシポールはいくらかの抗増殖性効果を有することが示されている(Flack et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 76:1019(1993)(非特許文献19); Bushunow et al., J. Neuro-Oncol. 43:79,(1999)(非特許文献20); Van Poznak et al, Breast Cancer Res. Treat. 66:239 (2001)(非特許文献21))。(-)-ゴシポールおよびその誘導体は最近、Bcl-2およびBcl-X_Lの強力な阻害剤であること、強い抗癌活性を有することが示されている(米国特許出願第2003/0008924(特許文献1))。

ラセミゴシポールおよび酢酸を含む組成物が当技術分野では公知である(Sigma-Aldrich Corp., St. Louis, MO)。(-)-ゴシポールを結晶化しようとする前の試みでは、X線分析には質が悪すぎる結晶(Gdaniec et al., “Gossypol,”in Comprehensive Supramolecular Chemistry (Atwood et al., eds.), Vol. 6, Pergamon(非特許文献22))、またはアセトンに溶解したラセミゴシポール酢酸溶液を使用した場合の(-)-ゴシポールおよびアセトンの共結晶が得られている(Dowd et al., J. Am. Oil Chem. Soc. 76:1343(1999)(非特許文献23))。

米国特許出願第2003/0008924 Ponder, Nature 411:336(2001) Lowe et al., Carcinogenesis 21:485 (2000) Nicholson, Nature 407:810(2000) Deveraux et al., Genes Dev. 13:239(1999) Salvesen et al., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 3:401(2002) Adams et al., Science 281:1322(1998) Reed, Adv. Pharmacol. 41:501(1997) Reed et al., J. Cell. Biochem. 60:23(1996) Amberger et al, Cancer Res. 58:149(1998) Wick et al., FEBS Lett, 440:419(1998) Mohanam et al., Cancer Res. 53:4143(1993) Pedersen et al., Cancer Res., 53:5158(1993) Rubio, Lab Invest. 81:725(2001) Fernandez et al., Cell Death Differ. 7:350(2000) Reed, Nature 387:773(1997) Frisch et al., Curr. Opin. Cell Biol. 9:701(1997) Del Bufalo et al., FASEB J. 11:947(1997) Wu, Drugs 38:333(1989) Flack et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 76:1019(1993) Bushunow et al., J. Neuro-Oncol. 43:79,(1999) Van Poznak et al, Breast Cancer Res. Treat. 66:239 (2001) Gdaniec et al., "Gossypol,"in Comprehensive Supramolecular Chemistry (Atwood et al., eds.), Vol. 6, Pergamon Dowd et al., J. Am. Oil Chem. Soc. 76:1343(1999)

発明の概要
本発明は、C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸との(-)-ゴシポール(化学式I)の共結晶(「(-)-ゴシポール共結晶」)を含む組成物に関する。これらの組成物は、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の活性を阻害し、細胞のアポトーシスを誘導し、細胞のアポトーシス誘導物質への感受性を増加させるのに有用である。

癌細胞またはそれらの支持細胞が、遺伝子病変またはアポトーシス誘導物質(例えば抗癌剤および放射線)への曝露に応じてアポトーシスを受けることができないことが、癌の発病および進行において重要な要因であることは、一般に認められている。癌細胞またはそれらの支持細胞(例えば、腫瘍血管系における新生血管細胞)におけるアポトーシスの誘導は、今日、市場に出回っている、または実際の、有効な癌治療薬または放射線治療の実質的に全てに対する共通の作用機構であると考えられる。細胞がアポトーシスを受けることができない1つの理由は、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の発現および蓄積の増加である。

本発明は、癌を患う動物を、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の機能を阻害する治療的有効量の(-)-ゴシポール共結晶に曝露すると、癌細胞または支持細胞が完全に殺され(生存し続ける細胞は、Bcl-2ファミリー蛋白質の過活性に依存する)、および/またはそのような細胞が、癌治療薬または放射線治療の細胞死誘導活性により感受性の高い群となることを考慮する。本発明は、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質機能に依存する癌細胞のアポトーシスを誘導する単剤投与治療として投与されると、または、癌細胞または支持細胞のアポトーシスプログラムを実行する割合が、癌治療薬または放射線治療のみで治療した動物における対応する細胞の割合に比べて大きくなるように、他の細胞死誘導癌治療薬または放射線治療との時間的関係において投与されると、(-)-ゴシポール共結晶が複数の癌型の治療のための満たされていない要求を満たすことを考慮する。

本発明の特定の態様において、治療的有効量の本発明の組成物および抗癌剤または照射線の過程による動物の併用治療ではそのような動物において、組成物または抗癌剤/放射線のみで治療した動物に比べ、より大きな腫瘍応答および臨床利益が得られることが期待される。言い換えれば、組成物は抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質を発現する細胞全てのアポトーシス閾値を低下させるので、抗癌剤/放射線のアポトーシス誘導活性に応答してアポトーシスプログラムをうまく実行する細胞の割合が増加する。また、本発明の組成物により、より低用量の、そのためより毒性が低く、より許容される抗癌剤および/または放射線の投与で、抗癌剤/放射線のみの従来用量と同じ腫瘍応答/臨床利益が得られると予測される。認可された全ての抗癌剤および放射線治療に対する用量は公知であるので、本発明は、公知の薬剤/治療と本発明の組成物との様々な組み合わせによる併用療法を企図する。また、本発明の組成物は、少なくとも部分的には、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質を阻害することにより作用するので、癌細胞および支持細胞を治療的有効量の組成物に曝露すると、抗癌剤または放射線療法に応答してアポトーシスプログラムを実行する細胞の試みと時間的に適合する。このように、いくつかの態様では、本発明の組成物を一定の時間的関係に関連して投与すると、特に有効な治療行為が得られる。

(-)-ゴシポール共結晶は、アポトーシス細胞死の誘導に応答する疾患、例えば、癌などの過剰増殖性疾患を含むアポトーシスの調節不全により特徴づけられる疾患の治療、寛解または予防に有用である。特定の態様において、(-)-ゴシポール共結晶を使用して、癌治療に対する耐性(例えば、化学耐性、放射線耐性、ホルモン耐性など)により特徴付けられる癌を治療、寛解、または予防することができる。別の態様では、(-)-ゴシポール共結晶を使用して、転移癌を治療、寛解、または予防することができる。別の態様では、(-)-ゴシポール共結晶を使用して、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の過剰発現により特徴づけられる過剰増殖性疾患を治療することができる。

本発明は、動物に治療的有効量の(-)-ゴシポール共結晶を投与する段階を含む、動物における、ウイルス、細菌、または寄生虫感染を治療する方法を提供する。

本発明は、(-)-ゴシポール共結晶および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。

本発明はさらに、(-)-ゴシポール共結晶を、細胞のアポトーシスを誘導するまたは細胞をアポトーシス誘導物質に感作させる治療的有効量で、薬学的に許容される担体と共に組み合わせる段階を含む薬学的組成物を製造する方法を提供する。

本発明はさらに、(-)-ゴシポール共結晶および組成物を動物に投与するための取扱説明書を備えるキットを提供する。キットは任意で、他の治療薬、例えば抗癌剤を含んでもよい。

本発明はまた、(-)-ゴシポール共結晶を製造する方法を提供する。例えば、共結晶は、(-)-ゴシポールをアセトンに溶解し溶液を形成させる段階、溶液を濾過する段階、C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸を溶液が混濁するまで混合しながら溶液中に添加する段階、混濁溶液を室温で、その後低温で放置し共結晶を形成させる段階、共結晶を収集する段階、共結晶を溶媒で洗浄する段階、および共結晶を乾燥する段階を含む方法により調製してもよい。

発明の詳細な説明
本発明は、C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸との(-)-ゴシポールの共結晶(「(-)-ゴシポール共結晶」)を含む、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の阻害剤として有用な組成物に関する。抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質を阻害することにより、(-)-ゴシポールは細胞を、アポトーシス誘導物質に対し感作させ、場合によっては、それ自体がアポトーシスを誘導する。そのため、本発明は、(-)-ゴシポール共結晶を単独でまたはアポトーシス誘導物質と組み合わせて投与する段階を含む、細胞をアポトーシス誘導物質に対し感作させる方法および細胞のアポトーシスを誘導する方法に関する。本発明はさらに、動物に(-)-ゴシポール共結晶およびアポトーシス誘導物質を投与する段階を含む、動物においてアポトーシスの誘導に応答する疾患を治療、寛解、または予防する方法に関する。そのような疾患としては、アポトーシスの調節不全により特徴づけられる疾患および抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の過剰発現により特徴づけられる疾患が挙げられる。

本明細書で使用されるように、「(-)-ゴシポール」または「(-)-ゴシポール化合物/組成物」という用語は、組成物を構成する活性分子が、偏光計で測定すると平面偏光を反時計回りに回転させる(例えば、左旋性分子)光学的に活性なゴシポール組成物を示す。好ましくは、(-)-ゴシポール化合物は1%〜100%の鏡像体過剰率を有する。1つの態様では、(-)-ゴシポール化合物は、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%または100%(-)-ゴシポールの鏡像体過剰率を有する。「(-)-ゴシポール化合物」の1つの例では、化合物の比旋光度(「α」_D)は約-350°〜約-390°、約-375°〜約-390°、または約-385°〜約-390°である(例えば、下記を参照のこと:Dowd, Chirality, 15:486(2003); Ciesielska et al., Chem. Phys. Lett. 353:69(1992); Freedman et al., Chirality, 15:196(2003); およびZhou et al., Kexue Tongbao, 28:1574(1983))。ラセミゴシポール化合物を実質的に純粋な(+)-または(-)-ゴシポールに分割するための方法は公知である(例えば、Zhou et al., Kexue Tongbao, 28:1574(1983)を参照のこと)(ここで、L-フェニルアラニンメチルエステルをゴシポールのアルデヒド基と混合すると、2つのジアステレオマーを有するシッフ塩基が形成され、その後、これを標準のシリカフラッシュクロマトグラフィーカラム上で分割した。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより、ヘキサン:EtOAc=3:1で溶離して精製すると、2つの画分が得られた。5N HCl:THF(1:5、室温、一晩中)で2つの画分を酸加水分解すると、それぞれ、個々のゴシポール鏡像異性体が再生した。より高いR_f値を有する第1の画分は(-)-ゴシポールを含み、より低いR_f値を有する第2の画分は(+)-ゴシポールを含んだ。粗ゴシポール画分を、反応混合物からTHFを除去した後、残渣からエーテル中に抽出した。その後、ゴシポール画分をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、ヘキサン:EtOAc(3:1比)で溶離すると、光学的に純粋なゴシポールが得られた。2つの段階での収率は30〜40%であった。これらの生成物に対する旋光分散値は、(-)-ゴシポールでは「α」_D=-352°(c=0.65、CHCl₃)、および「α」_D=+341°(c=0.53、CHCl₃)であった。)

本明細書で使用されるように、「C_1〜8カルボン酸」という用語は、直鎖または分枝、芳香族または非芳香族、飽和または不飽和、置換または非置換C_1〜8カルボン酸を示し、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、n-酪酸、t-酪酸、n-ペンタン酸、2-ペンタン酸、n-ヘキサン酸、2-ヘキサン酸、n-ヘプタン酸、n-オクタン酸、アクリル酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、および安息香酸が挙げられるが、それらに限定されない。

本明細書で使用されるように、「C_1〜8スルホン酸」という用語は、直鎖または分枝、芳香族または非芳香族、飽和または不飽和、置換または非置換C_1〜8スルホン酸を示し、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、n-プロパンスルホン酸、2-プロパンスルホン酸、n-ブタンスルホン酸、n-ペンタンスルホン酸、n-ヘキサンスルホン酸、n-ヘプタンスルホン酸、n-オクタンスルホン酸、およびベンゼンスルホン酸が挙げられるが、それらに限定されない。

本明細書で使用されるように、「(-)-ゴシポール共結晶」という用語は、(-)-ゴシポールおよびC_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸の共結晶を含む組成物を示す。

本明細書で使用されるように、「Bcl-2ファミリー蛋白質」という用語は、Bcl-2、Bcl-XL、Mcl-1、A1/BFL-1、BOO-DIVA、Bcl-w、Bcl-6、Bcl-8、およびBcl-yを含むがそれらに限定されないBcl-2ファミリーの抗アポトーシスメンバー、ならびにBak、Bax、Bad、tBid、Hrk、Bim、Bmf、を含むがそれらに限定されないBcl-2ファミリーのアポトーシス促進性メンバーの両方、ならびにゴシポール化合物により調節される他のBcl-2相同領域3(BH3)を含む蛋白質を示す。

本明細書で使用されるように、「抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の過剰発現」という用語は、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質をコードする基礎レベルのmRNAを発現するまたは基礎レベルの抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質を有する同様の対応する非病的細胞に比べた、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質をコードするmRNAのレベルの上昇(例えば、異常レベル)、および/または細胞における抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質のレベルの上昇を示す。細胞中の、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質をコードするmRNAのレベルまたは抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質のレベルを検出するための方法としては、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質抗体を使用するウエスタンブロッティング、免疫組織化学法、および核酸増幅または直接RNA検出の方法が挙げられるが、それらに限定されない。抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質を過剰発現していることを決定するには、細胞中の抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の絶対レベル、そのような分子内での、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の他のアポトーシス促進性シグナル伝達分子(例えば、アポトーシス促進性Bcl-2ファミリー蛋白質)に対する抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の相対レベルが同じくらい重要である。これらの2つの均衡が、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質のレベルがなく、アポトーシス促進性シグナル伝達分子は、細胞にアポトーシスを実行させ、死滅させるのに十分であるようなものである場合、そのような細胞はその生存については抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質に依存する。そのような細胞では、阻害有効量の抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質阻害剤に曝露することは、細胞にアポトーシスプログラムを実行させ、死滅させるのに十分であると考えられる。このように「抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の過剰発現」という用語は、また、相対レベルのアポトーシス促進性シグナルおよび抗アポトーシスシグナルの相対レベルにより、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の機能を阻害する阻害有効量の化合物に応答してアポトーシスを受ける細胞を示す。

本明細書で使用されるように、「抗癌剤」および「抗癌薬」という用語は、(例えば、哺乳類における)癌などの過剰増殖性疾患の治療において使用される、任意の治療薬(例えば、化学治療化合物および/または分子治療化合物)、放射線治療、または外科的処置を示す。

本明細書で使用されるように、「治療的有効量」とは、疾患の1つまたは複数の症状が寛解する、または疾患の進行を予防する、疾患の退行を引き起こすのに十分な治療薬の量を示す。例えば、癌の治療に関しては、治療的有効量は好ましくは、少なくとも5%、好ましくは少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%または少なくとも100%、腫瘍増殖速度を減少させる、腫瘤を減少させる、移転数を減少させる、腫瘍進行時間を増加させる、または生存時間を増加させる治療薬の量を示す。

本明細書で使用されるように、「感作させる」および「感作」という用語は、第1の薬剤(例えば、化学式Iの化合物)の投与により、動物または動物中の細胞の第2の薬剤の生物学的効果(例えば、細胞成長、増殖、浸潤、血管形成、またはアポトーシスを含むがそれらに限定されない細胞機能の局面の促進または遅延)に対する感受性または応答性を増大させることを示す。第1の薬剤の標的細胞への感作効果は、第2の薬剤を投与した時に観察される、第1の薬剤の投与の有無による目的とする生物学的効果(例えば、細胞成長、増殖、浸潤、血管形成、またはアポトーシスを含むがそれらに限定されない細胞機能の局面の促進または遅延)の差として測定することができる。感作細胞の応答は、第1の薬剤がない場合の応答に対し、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも100%、少なくとも150%、少なくとも200%、少なくとも350%、少なくとも300%、少なくとも350%、少なくとも400%、少なくとも450%、または少なくとも500%、増加させることができる。

本明細書で使用されるように、「アポトーシスの調節不全」という用語は、細胞がアポトーシスにより細胞死を受ける能力(例えば素因)の全ての異常を示す。アポトーシスの調節不全は、例えば、自己免疫疾患(例えば、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、移植片対宿主病、重症筋無力症、またはシェーグレン症候群)、慢性炎症状態(例えば、乾癬、喘息またはクローン病)、過剰増殖性疾患(例えば、腫瘍、B細胞リンパ腫、またはT細胞リンパ腫)、ウイルス感染（例えば、ヘルペス、パピローマ、またはHIV）、ならびに骨関節炎およびアテローム性動脈硬化症などの他の状態を含む、様々な状態と関連し、または様々な状態により誘導される。調節不全がウイルス感染により誘導され、ウイルス感染と関連する場合、ウイルス感染は、調節不全が生じた時、または観察された時に検出可能である場合もあり、そうでない場合もあることに注意すべきである。すなわち、ウイルスにより誘発された調節不全は、ウイルス感染の症状が消えた後でさえも起きる可能性がある。

本明細書で使用されるように、「過剰増殖性疾患」という用語は、動物中の増殖細胞の局所群が、正常な成長の通常の制限により支配されない任意の状態を示す。過剰増殖性疾患の例としては、腫瘍、新生物、リンパ腫などが挙げられる。新生物は、浸潤または転移を受けなければ良性であり、どちらか受けると悪性となると言われている。「転移」細胞は、細胞が隣の身体構造に浸潤し、破壊することができることを意味する。過形成は、構造または機能に有意の変化のない、組織または器官中の細胞数の増加が関与する細胞増殖形態である。異形成は、完全に分化した細胞の1つの型が分化した細胞の別の型にとって代わる制御された細胞成長の型である。

活性化リンパ細胞の病的増殖により、しばしば自己免疫疾患または慢性炎症状態となる。本明細書で使用されるように、「自己免疫疾患」という用語は、生物が、生物自身の分子、細胞または組織を認識する抗体または免疫細胞を産生する任意の状態を示す。自己免疫疾患の非制限的な例としては、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、バーガー病またはIgA腎症、セリアック病、慢性疲労症候群、クローン病、皮膚筋炎、線維筋痛、移植片対宿主病、グレーブス病、橋本病、特発性血小板減少性紫斑病、扁平苔癬、多発性硬化症、重症筋無力症、乾癬、リウマチ熱、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、I型糖尿病、潰瘍性大腸炎、白斑などが挙げられる。

本明細書で使用されるように、「新生物疾患」という用語は、良性(非癌性)または悪性(癌性)である細胞の任意の異常増殖を示す。

本明細書で使用されるように、「抗新生物薬」という用語は、標的(例えば悪性)新生物の増殖、成長、または拡散を遅延させる任意の化合物を示す。

本明細書で使用されるように、「予防する」、「予防の」および「予防」という用語は、動物における病的細胞(例えば、過剰増殖性または新生物細胞)の発生の減少を示す。予防は完全であってもよく、例えば、被験者において病的細胞が完全に存在しない。予防はまた、部分的であってもよく、そのため、被験者における病的細胞の発生率は、本発明無しでの発生率より低い。

本明細書で使用されるように、「相乗」という用語は、(-)-ゴシポール共結晶および第2の薬剤を共に(例えば、同時にまたは順に)投与した際に得られる、(-)-ゴシポール共結晶および第2の薬剤を単独で投与した特に得られる効果の和よりも大きな効果を示す。相乗効果により、(-)-ゴシポール共結晶および/または第2の薬剤の投与量を低下させることができ、または同じ用量でより大きな効果が得られる。得られる相乗効果は、(-)-ゴシポール共結晶および第2の薬剤を単独で投与した特に得られる効果の和よりも少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも100%、少なくとも125%、少なくとも150%、少なくとも175%、少なくとも200%、少なくとも250%、少なくとも300%、少なくとも350%、少なくとも400%、または少なくとも500%高くすることができる。例えば、癌の治療に関しては、相乗効果は、腫瘍増殖速度の減少、腫瘤の減少、転移数の減少、腫瘍進行時間の増加、または生存時間の増加とすることができる。(-)-ゴシポール共結晶および抗癌剤の同時投与により、(-)-ゴシポール共結晶および/または抗癌剤の使用用量を低下させることができ、そのため、被験者に対する実質的な毒性を避けながら、癌が効果的に治療される。

本明細書で使用されるように、「約」という用語は、列挙した数字+/-10%を含む。このように、「約0.5」は0.45〜0.55を意味する。

本発明の抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の阻害剤は、C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸との(-)-ゴシポールの共結晶(「(-)-ゴシポール共結晶」)を含む組成物である。(-)-ゴシポールの共結晶は、(-)-ゴシポール単独よりも安定であると予測される。当業者であれば、薬学的組成物の製造、貯蔵、出荷、および/または取扱においては化合物の安定性が重要であることを認識すると思われる。本発明の組成物は、前に記述した(-)-ゴシポールを含む組成物よりも安定であると予測される。本発明では、(-)-ゴシポールを安定化させることができる任意のC_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸を使用することができる。(-)-ゴシポール共結晶におけるカルボン酸またはスルホン酸に対する(-)-ゴシポールのモル比は、約10:1〜約1:10、好ましくは約2:1〜約1:2、より好ましくは1:1である。いくつかの態様では、(-)-ゴシポール共結晶におけるカルボン酸またはスルホン酸に対する(-)-ゴシポールのモル比は、約10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1.5:1、1:1、1:1.5、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9または1:10とすることができる。

本発明の1つの態様では、C_1〜8カルボン酸は酢酸である。別の態様では、(-)-ゴシポール共結晶は約1:1のモル比の(-)-ゴシポールおよび酢酸を含む。好ましい態様では、(-)-ゴシポールおよび酢酸の1:1共結晶は、黄色または淡黄色の針状結晶の形態である。別の好ましい態様では、共結晶は、酢酸の1つのメチルシグナルであるδ2.11(s,3H)およびゴシポールの2つのメチルシグナルであるδ2.18(s,6H)での¹H NMRスペクトルの積分により特徴づけられる。

本発明の組成物は、当業者に公知の方法を用いて、実施例で開示されているように調製してもよい。1つの態様では、共結晶は、(-)-ゴシポールをアセトンに溶解し溶液を形成させ、溶液を濾過し、溶液が混濁するまで混合しながらC_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸を溶液に添加し、混濁溶液を室温で、その後低温で放置し共結晶を形成させ、共結晶を収集し、共結晶を溶媒で洗浄し、および共結晶を乾燥させることにより調製する。1つの態様では、溶液を絶えず撹拌しながら混合する。低温は約20℃未満、好ましくは約0〜15℃、より好ましくは約4℃である。共結晶形成時間は1時間〜1日の範囲としてもよく、好ましくは、時間は約1〜4時間である。共結晶は、濾過を含む任意の適した手段により収集してもよい。共結晶を洗浄するための溶媒は任意の適した溶媒、例えば、ヘキサン、ペンタン、ベンゼン、トルエン、または石油エーテルとしてもよい。洗浄した共結晶は室温で、好ましくは遮光容器中で乾燥させてもよい。共結晶はまた、真空乾燥機中で、好ましくは高温で(例えば、約30〜60℃、より好ましくは約40℃)、約6〜72時間、好ましくは約12〜48時間乾燥させてもよい。

(-)-ゴシポールはBH3結合溝でBcl-2およびBcl-X_Lに結合すること、著しい抗癌活性を有することが示されている(米国特許出願第2003/0008924号)。本発明の重要な局面は、(-)-ゴシポール共結晶が、ゴシポールと同様に、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質に結合し、阻害するということである。しかしながら、(-)-ゴシポール共結晶は(-)-ゴシポールよりも安定であると予測される。さらに、(-)-ゴシポールはラセミゴシポールよりも強力な阻害剤である。このように、(-)-ゴシポール共結晶を含む組成物を使用してアポトーシスを誘導し、アポトーシス誘導シグナルに応えるアポトーシスの誘導を増強してもよい。これらの組成物が、誘導物質に対し耐性のある細胞を含む、細胞をアポトーシス誘導物質に対し感作させることも企図される。本発明の組成物を使用して、アポトーシスの誘導により治療、寛解、または予防することができる任意の疾患においてアポトーシスを誘導することができる。このように、本発明は、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の過剰発現により特徴づけられる動物を標的とするための組成物および方法を提供する。いくかの態様では、細胞(例えば、癌細胞)は、非病的試料(例えば、非癌性細胞)に比べ、1または複数の抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の上昇した発現レベルを示す。別の態様では、細胞は操作上、阻害効果量の(-)-ゴシポール共結晶の投与に応えるアポトーシスプログラムおよび死を実行することにより、抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質の上昇した発現レベルを示す。そのような応答は、少なくとも部分的には、そのような細胞における、生存のための抗アポトーシスBcl-2ファミリー蛋白質機能への依存性により生じる。

いくつかの態様では、本発明の組成物および方法を使用して、動物(例えば、ヒトおよび獣医学的動物を含むがそれらに限定されない哺乳類被験者)における罹患細胞、組織、器官、または病的状態および/または疾患状態を治療する。この点に関し、様々な疾患および病状が、本発明の方法および組成物を使用した治療または予防に適している。これら疾患および状態の非制限的な例示的リストとしては、乳癌、前立腺癌、リンパ腫、皮膚癌、膵癌、結腸癌、メラノーマ、悪性メラノーマ、卵巣癌、脳腫瘍、原発性脳腫瘍、頭頸部癌、神経膠腫、グリア芽腫、肝癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、頭部または頸部癌腫、乳癌腫、卵巣癌腫、肺癌腫、小細胞肺癌腫、ウイルムス腫瘍、子宮頸癌、睾丸癌、膀胱癌腫、膵癌腫、胃癌、結腸癌腫、前立腺癌腫、泌尿生殖器癌、甲状腺癌、食道癌、骨髄腫、多発性骨髄腫、副腎癌、腎細胞癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド癌、絨毛癌、菌状息肉腫、悪性高カルシウム血症、子宮頸部過形成、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性顆粒球性白血病、ヘアリー細胞白血病、神経芽細胞腫、黄紋筋肉腫、カポジ肉腫、真性赤血球増加症、本態性血小板血症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、原発性マクログロブリン血症、および網膜芽腫などの癌;TおよびB細胞媒介自己免疫疾患、炎症性疾患、感染、過剰増殖性疾患、AIDS、変性状態、血管疾患、などが挙げられるが、それらに限定されない。いくつかの態様では、治療される癌細胞は転移性である。別の態様では、治療される癌細胞は抗癌剤耐性である。

いくつかの態様では、本発明の組成物および方法を用いた治療に適した感染としては、ウイルス、細菌、真菌、寄生虫、マイコプラズマ、プリオンなどにより引き起こされる感染が挙げられるが、それらに限定されない。

本発明のいくつかの態様は、有効量の(-)-ゴシポール共結晶および少なくとも1つの追加の治療薬(化学療法薬、抗新生物薬、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗炎症剤を含むが、それらに限定されない)および/または治療技術(例えば、外科的処置、および/または放射線療法)を投与するための方法を提供する。いくつかの態様では、(-)-ゴシポール共結晶および1または複数の治療薬を組み合わせると、いずれかの化合物を単独で投与した場合に比べより大きな効果が得られる。別の態様では、(-)-ゴシポール共結晶および1または複数の治療薬を組み合わせると、いずれか1つを単独で投与した場合に比べ相乗効果(すなわち、それらの効果の和を超える)が得られると予測される。

本発明の方法において使用するために、多くの適した抗癌剤が企図されている。実際、本発明は、下記のような多くの抗癌剤の投与を企図しているが、それらに限定されない:アポトーシスを誘導する薬剤;ポリヌクレオチド(例えば、アンチセンス、リボザイム、siRNA);ポリペプチド(例えば、酵素および抗体);生物学的模倣薬(例えば、ゴシポールまたはBH3模倣薬);BaxなどのBcl-2ファミリー蛋白質と結合する(例えば、オリゴマー化または錯化する)薬剤;アルカロイド;アルキル化剤;抗腫瘍抗生剤;代謝拮抗剤;ホルモン;白金化合物;モノクローナルまたはポリクローナル抗体(例えば、抗癌剤、トキシン、デフェンシンとコンジュゲートした抗体);トキシン;放射性核種;生物反応修飾物質(例えば、インターフェロン(例えば、IFN-α)およびインターロイキン(例えば、IL-2));養子免疫療法剤;造血成長因子;腫瘍細胞分化を誘導する薬剤(例えば、全トランスレチノイン酸);遺伝子療法剤(例えば、アンチセンス療法剤およびヌクレオチド);腫瘍ワクチン;血管形成阻害剤;プロテオソーム阻害剤;NF-κBモジュレータ;抗CDK化合物;HDAC阻害剤;など。開示した化合物との同時投与に適した化学療法化合物および抗癌療法の多くの他の例は、当業者に公知である。

好ましい態様では、抗癌剤はアポトーシスを誘導または刺激する薬剤を含む。アポトーシスを誘導する薬剤としては下記が挙げられるが、それらに限定されない:放射線(例えば、X線、γ線、UV);キナーゼ阻害剤(例えば、上皮増殖因子受容体(EGFR)キナーゼ阻害剤、血管成長因子受容体(VGFR)キナーゼ阻害剤、線維芽細胞増殖因子受容体(FGFR)キナーゼ阻害剤、血小板由来増殖因子受容体(PDGFR)キナーゼ阻害剤、およびBcr-Ablキナーゼ阻害剤(例えばGLEEVEC));アンチセンス分子;抗体(例えば、HERCEPTIN、RITUXAN、ZEVALIN、BEXXAR、およびAVASTIN);抗エストロゲン薬(例えば、ラロキシフェンおよびタモキシフェン);抗アンドロゲン薬(例えば、フルタミド、ビカルタミド、フィナステリド、アミノグルテタミド、ケトコナゾール、およびコルチコステロイド);シクロオキシゲナーゼ2(COX-2)阻害剤(例えば、セレコキシブ、メロキシカム、NS-398、および非ステロイド性抗炎症剤);抗炎症薬(例えば、ブタゾリジン、DECADRON、DELTASONE、デキサメタゾン、デキサメタゾンインテンソール、DEXONE、HEXADROL、ヒドロキシクロロキン、METICORTEN、ORADEXON、ORASONE、オキシフェンブタゾン、PEDIAPRED、フェニルブタゾン、PLAQUENIL、プレニソロン、プレドニソン、PRELONE、およびTANDEARIL);および癌化学療法薬(例えば、イリノテカン(CAMPTOSAR)、CPT-11、フルダラビン(FLUDARA)、ダカルバジン、デキサメタゾン、ミトキサントロン、MYLOTARG、VP-16、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、5-FU、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ボルテゾミブ、ゲフィチニブ、ベバシズマブ、TAXOTEREまたはTAXOL);細胞シグナル伝達分子;セラミドおよびサイトカイン;スタウロスポリン、など。

さらに別の態様では、本発明の組成物および方法は、(-)-ゴシポール共結晶および、例えばアルキル化剤、代謝拮抗剤、および天然産物(例えば、ハーブおよび他の植物および/または動物由来化合物)から選択された少なくとも1つの抗過剰増殖薬または抗新生物薬を提供する。

本発明の組成物および方法において使用するのに適したアルキル化剤としては、下記が挙げられるが、それらに限定されない:1)ナイトロジェンマスタード(例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファラン(L-サクロリシン)およびクロラムブシル);2)エチレンイミンおよびメチルメラミン(例えば、ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ);3)アルキルスルホネート(例えば、ブスルファン);4)ニトロソ尿素(例えば、カルムスチン(BCNU));ロムスチン(CCNU);セムスチン(メチル-CCNU);およびストレプトゾシン(ストレプトゾトシン);および5)トリアゼン(例えば、デカルバジン(ジメチルトリアゼノイミド-アゾレカルボキサミド)。

いくつかの態様では、本発明の組成物および方法で使用するのに適した代謝拮抗剤としては下記が挙げられるが、それらに限定されない:葉酸類似体(例えば、メトトレキセート(アメトプテリン));2)ピリミジン類似体(例えば、フルオロウラシル(5-フルオロウラシル)、フロクスウリジン(フルオロード-オキシウリジン)、およびシタラビン(シトシンアラビノシド));および3)プリン類似体(例えば、メルカプトプリン(6-メルカプトプリン)、チオグアニン(6-チオグアニン)、およびペントスタチン(2'-デオキシコホルマイシン)。

さらに別の態様では、本発明の組成物および方法において使用するのに適した化学療法薬としては下記が挙げられるが、それらに限定されない:ビンカ・アルカロイド(例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン);2)エピポドフィロトキシン(例えば、エトポシドおよびテニポシド);3)抗生物質(例えば、ダクチノマイシン(アクチノマイシンD)、ダウノルビシン(ダウノマイシン;ルビドマイシン)、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン(ミトラマイシン)、およびミトマイシン(ミトマイシンC);4)酵素(例えば、L-アスパラギナーゼ);5)生物反応修飾物質(例えば、インターフェロン-α);6)白金配位錯体(例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン);7)アントラセンジオン(例えば、ミトキサントロン);8)置換尿素(例えば、ヒドロキシ尿素);9)メチルヒドラジン誘導体(例えば、プロカルバジン(N-メチルヒドラジン));10)副腎皮質抑制剤(例えば、ミトタン(o,p'-DDD)およびアミノグルテチミド);11)副腎皮質ステロイド(例えば、プレドニソン);12)プロゲスチン(例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、および酢酸メゲストロール);13)エストロゲン(例えば、ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール);14)抗エストロゲン薬(例えば、タモキシフェン);15)アンドロゲン(例えば、プロピオン酸テストステロンおよびフルオキシメステロン);16)抗アンドロゲン薬(例えば、フルタミド);および17)ゴナドトロピン放出ホルモン類似体(例えば、ロイプロリド)。

癌治療の状況において通常使用される任意の腫瘍退縮性薬は、本発明の組成物および方法においても使用される。例えば、米国食品医薬品局は、米国で使用することが認可された腫瘍退縮性薬の処方を維持している。U.S.F.D.Aに対する国際的な同等機関は同様の処方を維持する。表1は、米国において使用が認可されている例示的な抗新生物薬のリストを示したものである。当業者ではれば、米国で認可された化学療法薬全てで必要とされる「製品ラベル」は、例示的な薬剤に対する、認可された表示、用量情報、毒性データなどを記述していることを認識すると思われる。

本発明の化合物と共に投与するための好ましい従来の抗癌剤としては、アドリアマイシン、5-フルオロウラシル、エトポシド、カンプトテシン、アクチノマイシンD、ミトマイシンC、シスプラチン、ドセタキセル、ゲミシタビン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ボルテゾミブ、ゲフィチニブ、およびベバシズマブが挙げられるが、それらに限定されない。これらの薬剤は、併用療法組成物において、キットにおいて、または免疫治療薬と組み合わせてなどで、調製することができ、単独で使用することができる。

抗癌剤および他の治療薬のより詳細な説明については、当業者は、Physician's Desk RefereneceおよびGoodman and Gilman's “Pharmaceutical Basis of Therapeutics”ninth edition, Eds. Hardman et al., 1996を含むがそれらに限定されないかなりの数の指示マニュアルを参照する。

本発明は、(-)-ゴシポール共結晶を放射線療法と共に投与するための方法を提供する。本発明は、治療線量の放射線を動物に送達させるのに使用する型、量、または送達および投与システムにより限定されない。例えば、動物は光子照射療法、粒子線放射療法、放射性同位体療法(例えば、モノクローナル抗体との放射線コンジュゲート)、他の型の放射線療法、およびそれらの組み合わせを受けてもよい。いくつかの態様では、放射線は、線形加速器を用いて動物に送達させる。さらに別の態様では、放射線はγナイフを用いて送達される。

放射線源は、動物の外部または内部に存在させてもよい。外部放射線療法が最も一般的であり、高エネルギー放射線ビームを、例えば線形加速器を用い皮膚を介して腫瘍部位に誘導する段階を含む。放射線ビームを腫瘍部位に局在化する間、正常な健康な組織の曝露を避けることはほとんど不可能である。しかしながら、外部放射線は、通常患者に許容される。内部放射線療法では、癌細胞を特異的に標的とする送達システムの使用(例えば、癌細胞結合リガンドに結合させた粒子の使用)を含む、放射線放出源、例えば、ビーズ、ワイヤ、ペレット、カプセル、粒子などを、体内、または腫瘍部位の近くに移植する段階が必要である。そのようなインプラントは治療後除去することができ、または体内に不活性なまま残すことができる。内部放射線療法の型としては、近接照射療法、組織内照射、腔内照射、放射免疫療法などが挙げられるが、これらに限定されない。

動物は任意で、放射線増感剤(例えば、メトロニダゾール、ミソニダゾール、動脈内Budr、静脈内インドデオキシウリジン(IudR)、ニトロイミダゾール、5-置換-4-ニトロイミダゾール、2H-イソインドールジオン、[[(2-ブロモエチル)-アミノ]メチル]-ニトロ-1H-イミダゾール-1-エタノール、ニトロアニリン誘導体、DNA-親和性低酸素選択的細胞毒、ハロゲン化DNAリガンド、1,2,4-ベンゾトリアジンオキシド、2-ニトロイミダゾール誘導体、フッ素含有ニトロアゾール誘導体、ベンズアミド、ニコチンアミド、アクリジン-インターカレーター、5-チオトレトラゾール誘導体、3-ニトロ-1,2,4-トリアゾール、4,5-ジニトロイミダゾール誘導体、ヒドロキシル化テキサフリン、シスプラチン、ミトマイシン、チリパザミン、ニトロソ尿素、メルカプトプリン、メトトレキセート、フルオロウラシル、ブレオマイシン、ビンクリスチン、カルボプラチン、エピルビシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンデシン、エトポシド、パクリタキセル、熱(温熱療法)、など)、放射線防護薬(例えば、システアミン、アミノアルキルジヒドロジェンホスホロチオエート、アミホスチン(WR 2721)、IL-1、IL-6など)を摂取してもよい。放射線増感剤は、腫瘍細胞の死滅を増強する。放射線防護薬は、健全な組織を放射線の有害な影響から防護する。

許容できない負の副作用がなく、放射線量が患者により許容される限り、任意の型の放射線を患者に照射することができる。放射線療法の適した型としては、例えば、イオン化(電磁)放射線療法(例えば、X線またはγ線)または粒子ビーム放射線療法(例えば、高線形エネルギー放射線)が挙げられる。イオン化放射線は、イオン化、すなわち電子の獲得または損失を引き起こすのに十分なエネルギーを有する粒子または光子を含む放射線として規定される(例えば、U.S. 5,770,581に記述、全体が参照により本明細書に組み入れられる)。放射線の効果は、臨床医により少なくとも部分的に制御することができる。放射線量は、標的細胞曝露を最大とし、毒性を減少させるために、好ましくは分割される。

動物に照射した放射線の総線量は好ましくは約.01Gray(Gy)〜約100Gyである。より好ましくは、約10Gy〜約65Gy(例えば約15Gy、20Gy、25Gy、30Gy、35Gy、40Gy、45Gy、50Gy、55Gy、または60Gy)が治療過程にわたり照射される。いくつかの態様では、1日の過程のわたり完全な放射線量を照射することができるが、総線量は分割し、数日にわたり照射することが理想的である。望ましくは、放射線療法は、少なくとも約3日、例えば、少なくとも5、7、10、14、17、21、25、28、32、35、38、42、46、52または56日(約1〜8週)の過程にわたり実施される。したがって、放射線の1日量は、約1〜5Gy(例えば、約1Gy、1.5Gy、1.8Gy、2Gy、2.5Gy、2.8Gy、3Gy、3.2Gy、3.5Gy、3.8Gy、4Gy、4.2Gy、または4.5Gy)、好ましくは1〜2Gy(例えば、1.5〜2Gy)を含んでもよい。1日の放射線量は標的細胞の破壊を誘導するのに十分であるべきである。一定期間にわたり引き延ばす場合、放射線は好ましくは毎日照射されず、これにより動物は休息することができ、治療の効果が実現される。例えば、放射線は、治療の各1週間の間、5日間連続して照射されるが、2日間連続して照射されないのが望ましく、これにより、1週間につき2日間の休憩が得られる。しかしながら、動物の反応性および任意の可能性のある副作用によっては、放射線を1日/週、2日/週、3日/週、4日/週、5日/週、6日/週、または全7日/週照射することができる。放射線療法は治療期間中のいずれの時点でも開始することができる。好ましくは、放射線は第1週または第2週に開始し、治療期間の残りの期間中照射する。例えば、固形腫瘍を治療するためには、例えば、6週間の治療期間の1〜6または2〜6週、放射線を照射する。または、放射線は5週間の治療期間の1〜5または2〜5週照射する。しかしながら、これらの例示的な放射線療法実施スケジュールは本発明を制限するものではない。

抗菌治療薬もまた、本発明における治療薬として使用してもよい。細菌を死滅させ、その機能を阻害し、またはそうでなければ弱毒化することができる任意の薬剤、ならびにそのような活性を有するように企図された任意の薬剤を使用してもよい。抗菌剤としては、単独または組み合わせて使用される、天然および合成抗生物質、抗体、阻害蛋白質(例えば、デフェンシン)、アンチセンス核酸、膜破壊剤などが挙げられるが、それらに限定されない。実際、任意の型の抗菌剤を使用してもよく、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、などが挙げられるが、それらに限定されない。

本発明のいくつかの態様では、(-)-ゴシポール共結晶および1または複数の治療薬もしくは抗癌剤を動物に、1または複数の下記条件下で投与する:異なる周期性、異なる期間、異なる濃度、異なる投与経路、など。いくつかの態様では、(-)-ゴシポール共結晶は治療薬または抗癌剤の前、例えば、治療薬または抗癌剤の投与前0.5、1、2、3、4、5、10、12または18時間、1、2、3、4、5または6日、1、2、3、または4週前に投与する。いくつかの態様では、(-)-ゴシポール共結晶は治療薬または抗癌剤の後、例えば、抗癌剤の投与後0.5、1、2、3、4、5、10、12または18時間、1、2、3、4、5または6日、1、2、3、または4週後に投与する。いくつかの態様では、(-)-ゴシポール共結晶および治療薬または抗癌剤を同時に、しかしながら異なるスケジュールで投与し、例えば、(-)-ゴシポール共結晶は毎日投与するが、治療薬または抗癌剤は1週間に1度、2週間に1度、3週間に1度、または4週間に1度投与する。別の態様では、(-)-ゴシポール共結晶は1週間に1度投与するが、治療薬または抗癌剤は毎日、1週間に1度、2週間に1度、3週間に1度、または4週間に1度投与する。

薬学的組成物は、細胞においてアポトーシスを誘導する、または細胞をアポトーシス誘導剤に感作させる治療的有効量の(-)-ゴシポール共結晶を薬学的に許容される担体と組み合わせることにより生成させることができる。本発明の新規薬学的組成物は完全な(-)-ゴシポール共結晶を含む。いくつかの態様では、薬学的組成物は(-)-ゴシポール共結晶を、共結晶が実質的に不溶性の液体(例えば、水)と共に含み、そのため、懸濁液が形成される。

本発明の範囲内にある組成物は、本発明の組成物が、その所期の目的を達成するのに有効な量で含まれる全ての組成物を含む。個人の要求は様々であるが、各成分の有効量の最適範囲の決定は当技術の範囲内である。典型的には、組成物を哺乳類、例えばヒトに、一日あたり、0.0025〜50mg/アポトーシスの誘導に応答する疾患を治療する哺乳類の体重kgの用量で、または等量の薬学的に許容されるその塩を経口投与してもよい。好ましくは、約0.01〜約10mg/kgを経口投与して、そのような疾患を治療、寛解または予防する。筋内注射では、用量は一般に経口用量の約2分の1である。例えば、適した筋内用量は約0.0025〜約25mg/kg、最も好ましくは約0.01〜約5mg/kgである。

単位経口用量は、約0.01〜約200mg、好ましくは約0.1〜約100mgの組成物を含んでもよい。単位用量は一日に1または複数回、各々が約0.1〜約100mg、便宜的には約0.25〜50mgの組成物を含む1または複数の錠剤もしくはカプセルとして投与してもよい。

局所用製剤中には、組成物は約0.01〜100mg/gの担体の濃度で存在してもよい。好ましい態様では、組成物は約0.07〜1.0mg/ml、より好ましくは約0.1〜0.5mg/ml、最も好ましくは約0.4mg/mlの濃度で存在する。

(-)-ゴシポール共結晶を生の化学薬品として投与する他に、薬学的に使用することができる調製物に組成物を加工するのを容易にする賦形剤および佐剤を含む適した薬学的に許容される担体を含む薬学的調製物の一部として本発明の組成物を投与してもよい。好ましくは、調製物、特に経口または局所投与することができ、好ましい型の投与のために使用することができる調製物、例えば錠剤、糖衣錠、持続放出ロゼンジおよびカプセル、口内洗浄剤および洗口剤、ゲル、懸濁液、ヘアリンス、ヘアジェル、シャンプー、ならびに直腸投与可能な調製物、例えば坐薬、ならびに注射により、局所または経口投与するために適した溶液は約0.01〜99%、好ましくは約0.25〜75%の活性化合物を賦形剤と共に含む。

本発明の薬学的組成物は、本発明の化合物の有用な効果を受ける可能性がある任意の動物に投与してもよい。そのような動物のうちの第1は哺乳類、例えばヒトであるが、本発明はそのように限定されるものではない。他の動物としては獣医学的動物が挙げられる(ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコなど)。

組成物およびその薬学的組成物は、所期の目的を達成する任意の手段により投与してもよい。例えば、投与は非経口、皮下、静脈内、筋内、腹腔内、経皮、口腔内、くも膜下、頭蓋内、鼻内、または局所経路により実施してもよい。その代わりに、または同時に、投与は経口経路により実施してもよい。投与用量はレシピエントの年齢、健康、および体重、もしあれば同時治療の種類、治療頻度、および所望の効果の性質に依存する。

本発明の薬学的調製物は、それ自体公知の様式で、例えば、従来の混合、顆粒化、糖衣錠製造、溶解、または凍結乾燥法により製造される。このように、経口用の薬学的調製物は、活性化合物を固体賦形剤と混合し、任意で、得られた混合物を顆粒化し、所望また必要であれば、適した佐剤を添加した後顆粒混合物を処理して錠剤または糖衣錠コアを提供することにより得ることができる。

特に、適した賦形剤は、単糖類などの充填材、例えば乳糖またはショ糖、マンニトールまたはソルビトール、セルロース調製物および/またはリン酸カルシウム、例えばリン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム、ならびに、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプンを使用するデンプンペースト、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および/またはポリビニルピロリドンなどの結合剤である。所望であれば、上記デンプンおよびカルボキシメチル-デンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤を添加してもよい。佐剤は、とりわけ、流量調整剤および潤滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸もしくはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、および/またはポリエチレングリコールである。糖衣錠コアには、所望であれば、胃液に耐性のある適したコーティングを提供する。この目的のために、濃単糖類溶液を使用してもよく、これは任意でアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび/または二酸化チタン、ラッカー溶液および適した有機溶媒または溶媒混合物を含んでもよい。胃液に対し耐性のあるコーティングを製造するために、適したセルロース調製物、例えばアセチルセルロースフタレートまたはヒドロキシプロピルメチル-セルロースフタレートの溶液を使用する。染料または顔料を錠剤または糖衣錠コーティングに、例えば、識別のために、または活性化合物用量の組み合わせを特徴づけるために添加してもよい。

経口で使用することができる別の薬学的調製物としては、ゼラチン製の押し込み型カプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤で製造されたソフト密閉カプセルが挙げられる。押し込み型カプセルは、乳糖などの充填材、デンプンなどの結合剤、および/またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および任意で、安定化剤と混合してもよい顆粒形態の活性化合物を含むことができる。ソフトカプセル中では、活性化合物は好ましくは適した液体、例えば脂肪油、または流動パラフィン中に溶解し、または懸濁させる。さらに、安定化剤を添加してもよい。

経直腸的に使用することができる可能のある薬学的調製物としては、例えば、1または複数の活性化合物と坐薬基剤の組み合わせから構成される坐薬が挙げられる。適した坐薬基剤は、例えば、天然または合成トリグリセリド、またはパラフィン炭化水素である。さらに、活性化合物と基剤の組み合わせから構成されるゼラチン直腸カプセルを使用することもできる。可能な基剤材料としては、例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレングリコール、またはパラフィン炭化水素が挙げられる。

非経口投与のために適した製剤としては、水溶性形態の活性化合物、例えば水溶性塩の水溶液およびアルカリ溶液が挙げられる。さらに、適当な油性注射懸濁液として、活性化合物の懸濁液を投与してもよい。適した親油性溶媒または媒質としては、脂肪油、例えば、ゴマ油、または合成脂肪油エステル、例えばオレイン酸エチルまたはトリグリセリドまたはポリエチレングリコール-400が挙げられる。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでもよく、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および/またはデキストランが挙げられる。任意で、懸濁液はまた安定化剤を含んでもよい。

本発明の局所用組成物は、好ましくは、適当な担体を選択することにより、オイル、クリーム、ローション、軟膏などとして製剤化する。適した担体としては植物油または鉱物油、白色ワセリン(白色ソフトパラフィン)、分枝鎖脂肪または油、獣脂および高分子量アルコール(C₁₂を超える)が挙げられる。好ましい担体は、活性成分が溶解可能なものである。乳化剤、安定化剤、湿潤剤および抗酸化剤、ならびに色または香味を付与する薬剤もまた、所望であれば含有させてもよい。さらに、経皮透過増強剤をこれらの局所製剤において使用することができる。そのような増強剤の例は、米国特許第3,989,816号および同第4,444,762号において見いだすことができる。

クリームは好ましくは、少量のアーモンド油などの油に溶解させた活性成分が混合された、鉱物油、自己乳化蜜蝋および水の混合物から製剤化される。そのようなクリームの典型的な例は、約40部の水、約20部の蜜蝋、約40部の鉱物油および約1部のアーモンド油を含むものである。

軟膏は、温かいソフトパラフィンを添加したアーモンド油などの植物油中に活性成分を懸濁液させたものを混合し、混合物を冷却することにより製剤化してもよい。そのような軟膏の典型的な例は、約30重量%のアーモンド油および約70重量%の白色ソフトパラフィンを含むものである。

ローションは、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどの適した高分子量アルコールに活性成分を懸濁させたものを調製することにより便宜的に調製してもよい。

下記実施例は本発明の方法および組成物の例示であり、それらを限定するものではない。臨床治療で通常見られ、当業者に明らかな様々な条件およびパラメータの他の適した変更および適合は、本発明の精神および範囲内にある。

実施例1
(-)-ゴシポール酢酸共結晶の調製
全ての化学薬品および試薬はAldrich Chemical Co. またはLancaster Synthesis Inc.から購入し、さらに精製せずに使用した。(-)-ゴシポール(1g)をアセトン(6ml)に溶解し、濾過した。酢酸を常時撹拌しながら、溶液が混濁するまで、濾液に添加した。混合物を室温で2時間、その後4℃で2時間放置した。減圧下でブフナー漏斗を使用し濾過により共結晶を収集し、少量のヘキサンで洗浄した。純粋な(-)-ゴシポール酢酸を最初、遮光容器中で乾燥させ、さらに、真空乾燥機中40℃で24時間乾燥させた。

実施例2
(-)-ゴシポール酢酸共結晶の特徴分析
(-)-ゴシポール酢酸共結晶は黄色または淡黄色であり、針状形態であった。共結晶は容易にアセトンおよびエーテルに溶解し、わずかにクロロホルムおよびエタノールに溶解し、石油にはあまり溶解しなかった。共結晶は水に不溶であった。共結晶の較正していない融点はMe1-Temp装置を用いて測定すると178〜180℃であった。

共結晶の¹Hおよび¹³C核磁気共鳴(NMR)スペクトルをBruker300機器で記録した(図1および2)。試料を適当な重水素化溶媒(CDCl₃)に溶解した。プロトン化学シフトを、内標準として使用したテトラメチルシラン(0.00ppm)に対するppm(δ)として報告した。¹³C NMRスペクトルに対する化学シフトを重水素化クロロホルムに対するδとして報告した(CDCl₃、77.0ppm)。

¹H NMRスペクトルに基づき、共結晶は、(-)-ゴシポールの酢酸とのモル比1:1の複合体であることが決定された。

共結晶の赤外線スペクトル(図3)をPerkin-Elmer FT-IR分光計で記録した。IR(KBr)3421、2959、2929、1710、1611、1577、1440、1379、1339、1269、1176、1052、841、772cm^-1。

共結晶のエレクトロスプレー質量スペクトル(図4)をMicromass AutoSpec Ultima Magneticセクタ質量分析計で実施した。MS m/z 541(M+Na)⁺。

共結晶のX線粉末回折スペクトル(図5)をScintag X線粉末回折計で記録した。スペクトルに基づき、共結晶は、(-)-ゴシポールの酢酸とのモル比1:1の複合体であることが決定された。

以上、本発明について詳細に記述してきたが、当業者であれば、本発明またはその任意の態様の範囲に影響することなく、条件、製剤化、および他のパラメータの広く、等価な範囲内で同じことを実施することができることは理解されると思われる。本明細書で引用した特許、特許出願および出版物は全て、参照により完全に本明細書に組み入れられる。

(-)-ゴシポール酢酸共結晶の¹H NMRスペクトルを示す図である。 (-)-ゴシポール酢酸共結晶の¹³C NMRスペクトルを示す図である。 (-)-ゴシポール酢酸共結晶の赤外線スペクトルを示す図である。 (-)-ゴシポール酢酸共結晶の質量スペクトルを示す図である。 (-)-ゴシポール酢酸共結晶のX線粉末回折スペクトルを示す図である。

Claims

C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸との(-)-ゴシポールの共結晶を含む組成物。
C_1〜8カルボン酸が、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、n-酪酸、t-酪酸、n-ペンタン酸、2-ペンタン酸、n-ヘキサン酸、2-ヘキサン酸、n-ヘプタン酸、n-オクタン酸、アクリル酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、および安息香酸からなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸が酢酸である、請求項2記載の組成物。
C_1〜8スルホン酸が、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、n-プロパンスルホン酸、2-プロパンスルホン酸、n-ブタンスルホン酸、n-ペンタンスルホン酸、n-ヘキサンスルホン酸、n-ヘプタンスルホン酸、n-オクタンスルホン酸、およびベンゼンスルホン酸からなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
(-)-ゴシポールおよびC_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸が、組成物中で約10:1〜約1:10の範囲のモル比で存在する、請求項1記載の組成物。
(-)-ゴシポールおよびC_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸が、組成物中で約1:1のモル比で存在する、請求項5記載の組成物。
(-)-ゴシポールおよび酢酸を1:1のモル比で含む、請求項6記載の組成物。
酢酸の1つのメチルシグナルであるδ2.11(s,3H)およびゴシポールの2つのメチルシグナルであるδ2.18(s,6H)での¹H NMRスペクトルの積分により特徴づけられる、請求項7記載の組成物。
(-)-ゴシポールをアセトンに溶解し溶液を形成させる段階、溶液を濾過する段階、C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸を溶液が混濁するまで混合しながら溶液中に添加する段階、混濁溶液を室温で、その後低温で放置し共結晶を形成させる段階、共結晶を収集する段階、共結晶を溶媒で洗浄する段階、および共結晶を乾燥する段階を含む、C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸との(-)-ゴシポールの共結晶を含む組成物の調製方法。
C_1〜8カルボン酸またはC_1〜8スルホン酸が酢酸である、請求項9記載の方法。
請求項1記載の組成物および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
請求項1記載の組成物を薬学的に許容される担体と組み合わせる段階を含む、薬学的組成物の調製方法。
動物に治療的有効量の請求項1記載の組成物を投与する段階を含む、動物における過剰増殖性疾患または癌を治療する方法。
動物にアポトーシス誘導物質を投与する段階をさらに含む、請求項13記載の方法。
アポトーシス誘導物質が化学療法薬である、請求項13記載の方法。
アポトーシス誘導物質が放射線である、請求項13記載の方法。
組成物をアポトーシス誘導物質の前に投与する、請求項13記載の方法。
組成物をアポトーシス誘導物質と同時に投与する、請求項13記載の方法。
組成物をアポトーシス誘導物質の後に投与する、請求項13記載の方法。
動物に治療的有効量の請求項1記載の組成物を投与する段階を含む、動物のウイルス、細菌または寄生虫感染を治療する方法。
動物に治療的有効量の請求項1記載の組成物を投与する段階を含む、動物においてアポトーシスの誘導に応答する疾患を治療、寛解または予防する方法。
動物にアポトーシス誘導物質を投与する段階をさらに含む、請求項21記載の方法。
請求項1記載の組成物および該組成物を動物に投与するための取扱説明書を含むキット。
組成物が薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物の形態である、請求項23記載のキット。
アポトーシス誘導物質をさらに含む、請求項23記載のキット。
アポトーシス誘導物質が化学療法薬である、請求項25記載のキット。
取扱説明書が、組成物を、過剰増殖性疾患を患う動物に投与するためのものである、請求項23記載のキット。
過剰増殖性疾患が癌である、請求項27記載のキット。