JP2007529531A - 免疫、炎症または神経保護応答のための方法 - Google Patents
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Abstract
Description
樹状細胞(DCs)は最も有力な抗原呈示細胞であり、免疫の発生および調節において非常に重要な役割を演じる(非特許文献1)。それらの初回刺激は成熟時に取得され転写因子の活性化、抗原処理、転移のコントロールおよび炎症性応答の制御に特徴がある(非特許文献2)。DCsの制御された転移は生理学的免疫応答の誘発に中心がある。抗原−呈示因子に対して重大な意味をもつ既知のDCsの表面分子の発現はHLA−DR、CD40、CD83、CXCR4およびCD80およびCD86を含み、そしてこれは増加したサイトカインおよびケモカイン生成および刺激性の能力と関連する。
サイトカインは免疫および炎症性反応を調節するタンパク質である。サイトカインは生得的および後天性の両方の免疫応答の活性化および維持に必要な役割を演じる。サイトカインおよびケモカインは伝統的およびDNAの両方のワクチンとともにワクチンアジュバントとして用いられてきた。サイトカインは小さいタンパク質であり(〜25kDa)身体の種々の細胞によって遊離し、通常活性化刺激に応答し、特異的受容体に結合して応答を誘発する。自己分泌法で作用し、サイトカインを放出する細胞の挙動に影響し、またはパラ分泌法において、隣接細胞の挙動に影響を与える。若干のサイトカインは内分泌法で作用し、循環に入る能力および半減期に依るが、遠い細胞の挙動に影響する。
同時刺激の分子はT細胞活性化の重要な制御因子であり、従って免疫応答の治療学的処置に対する有利な標的である。鍵となる同時刺激受容体の一つはT細胞リガンド、CD28、およびCTLA−4を結合するCD80である。同時刺激分子のCD80、CD86およびCD83の発現はアジュバント活性の重要な役割を演じることが示され、CD86の発現はCT−ベースのアジュバントの特色であることが知られている(Lyke,2004)。従って、CD80発現に影響する分子または化合物は保護免疫を誘発する有望な新規の治療学的免疫療法剤を示す。多数の免疫調節治療は臨床応用のために開発されている。これらは抗原呈示および同時刺激を標的とするアプローチ、T細胞活性化、炎症誘発性媒介物の作用およびサイトカインバランスを調節することを含む(Asadullah et al.,2002)。腫瘍壊死因子(TNFs)はマクロファージおよびリンパ球によって生成された細胞毒性のサイトカインであることが知られており、癌患者または妊娠中の人々では抑制されていることが見出されている。
免疫抑制は男性では進行性悪性の特徴である(Lents,1999)。免疫療法は癌を攻撃するために免疫システムを用いる癌治療に与えられた名前である。すなわち、免疫システムは癌の成長と進行を遅くするように刺激することができる。一定のサイトカインおよび抗体を含む免疫治療は現在標準癌治療の一部となっている。癌の免疫治療はウイリアム・コーリー博士が癌はバクテリア生成物およびコーリーの毒として知られた成分の注射によって調整できることを示したとき、ほぼ100年前に始まった。現在コーリーの毒の活性抗癌成分は細菌性のオリゴヌクレオチドであることが知られている。
薬物−耐性マイコバクテリウム結核菌感染の増加する罹患率に戦うために、新しい薬物が開発されている。一の約束する戦略は免疫調節するサイトカイン(特にTh−1およびTh−1−様サイトカイン、例えばIL−12および炎症誘発性のサイトカイン、例えばTNF−α)を用いるようにマイコバクテリア感染に応答してサイトカインネットワークを動態化するため、適当な免疫調節体と組み合わせて通常のアンチミコバクエリア薬剤を用いる抵抗性ミコバクテリアを用いて患者を治療することである(Tomioka 2004)。Th−1応答は細胞介在免疫に関係し細胞内病原体およびビールスによる感染を調整する際に基本的である。
癌の治療または予防の際にメチル化していない(CpG)オリゴヌクレオチドの使用が報告された。適当な側方領域(CpGモチーフ)をもつCpGを含む合成オリゴヌクレオチドはマクロファージ、樹状細胞および、IL−6、IL−12、IL−18およびガンマインターフェロンのような種々の免疫調節性サイトカインを分泌するB細胞を活性化することが見出された(Krieg, 2002)。CpG DNAはまたCD80およびCD86のような刺激分子を活性化することが示された。CpG DNAは粘膜表面で強い生得的免疫を誘発する。CpG
DNAの免疫刺激性はそのアジュバント性により長期ワクチン様効果を生成する。CpGオリゴヌクレオチドは抗体および細胞介在免疫の両方に影響を与え、応用にはワクチナジュバント、馴化アレルギ反応および増強モノクローナル抗体および細胞障害性免疫細胞を含む。また化学療法剤の抗腫瘍効果を高め固体腫瘍の外科的薄切後の生存率を改善する(Weigel et al.,2003)。CpGオリゴヌクレオチドに対して、抗腫瘍効果は宿主免疫機構の活性化を仲介とし、直接抗腫瘍効果を通らない。データは炎症誘発性試薬の系統的応用が腫瘍組織へのエフェクター細胞の血管外遊走を亢進することを示し、臨床設定での固体腫瘍の免疫治療の一般的重要性が観察された(Garbi et al.,2004)。それらの免疫治療性に基づき、CpGオリゴヌクレオチドは種々の癌の治療と予防に用いられ、癌ワクチンに用いられた(特許文献1、米国特許番号:6,429,199;6,406,705;6,194,388)。
神経組織は中枢神経系および末梢神経系を含む。中枢神経系(CNS)は脳および脊髄からなり末梢神経系(PNS)は他の神経要素、すなわち脳および脊髄の外側に神経および神経節からなる。
T細胞クローンは健康体の免疫系に存在する(Burns,1983;Pette,M. Et al,1990;Martin et al.,1990;Schluesener et al.,1985)。活性化T細胞は、通常不活性中枢神経系をパトロールし、中枢神経系白色物質病変の部位で瞬間的に蓄積する(Hirschberg et al.,1998)。
ワクチン化は感染性薬剤によって引き起こされる疾病を防ぐ際に簡単なもっとも価値のあるツールである。種々の感染性疾病に対し保護するためのワクチン化は選択的に免疫調節性応答を刺激できるアジュバントを用いることによって高められる。抗原単独の注入と比較して、抗原の注入プラスアジュバントは一般的に非常に少量の抗原を使用でき抗体力価を増加する。合成ペプチド、サブユニットワクチン、多糖体、殺生細胞製剤およびプラスミドDNAのような他の抗原のように、弱毒化ウイルスおよび組換えタンパク質は免疫原生が乏しく効率的な免疫刺激にアジュバントを無条件に必要とする。例えば、破傷風毒素はアジュバントがないと免疫原生ではない。これら抗原の若干は細胞生成物からの汚染を避けるために必要な精製プロセスにより製造費のコストが高い。アジュバントは関心のある部位で抗原の持効性製剤を形成することによって免疫応答を助けることができ、直接または間接的に、抗原が濾胞性DCsによって捕捉される脾臓またはリンパ節に抗原を運ぶ助けとなるビヒクルとして働き、または免疫応答に含まれる種々の細胞を活性化することができる。多くのバクテリアは、免疫系の細胞を活性化する物質または生成物(例えば、内毒素または細胞壁)を含む。安全で強力な新しいアジュバントがワクチンに必要である。これらは粘膜表面で投与されるワクチンを含む。DCによる抗原提示を亢進する方法の開発は成功したワクチンは、特に免疫無防備状態の患者に必要である。DCsの活性化は腫瘍免疫で決定的な役割を持つ細胞毒性Tリンパ球(CTL)を準備刺激するために重大であり、アジュバントはDCsの活性化および細胞免疫の増強に必要であると考えられている。Th−1配向免疫応答は適当な細胞免疫応答、および自然感染またはワクチンを用いた予防接種によって誘発された保護に対して重要である。考慮されねばならない強力な持続した免疫刺激能とは別のアジュバントの望ましい性質はその安全性、生分解性、安定性、混合および使用の容易性、使用できる広い範囲の抗原および投与経路、およびその経済的な製造である。
DNA免疫刺激性応答はインヴィトロとインヴィヴォの間の研究からなる(Zelenay et al.,2003)。CpG DNAと種々のワクチンの同時投与は動物挑戦モデルでの保護免疫を改良し安全であり耐容性が良い(Klinman,2003)。CpGオリゴヌクレオチドは強力なワクチン免疫賦活剤として用いられるTh−1極性化剤として作用することを示すIL−2の強力な誘導物質である(Dalpke et al.,2002)。腫瘍免疫治療に取り組む研究はCpG
DNAの存在でTヘルパー細胞の同系の腫瘍細胞と抗原呈示細胞を用いた刺激が多数の強く極性化した腫瘍特異的Th−1細胞の産生を可能にすることを示し、炎症誘発性の応答を活性化しこの免疫刺激能に基づき確立された腫瘍とリンパ腫の根絶を示すことは、免疫治療において臨床的な有用性がある(Egeter et al,2000)。
ビス(3’‐‐>5’)−環状ジグアニル酸(c−ジ−GMP)、環状ジヌクレオチド、は本発明方法で用いられる好適例である。c−ジ−GMPの化学構造を以下に示す。
prooligoと命名された。MeSATEヌクレオシドモノホスフェートもまた合成された(Peyrottes et al., 2004)。
末梢血単核細胞(PBMC)を、ローマ・ラ・サピエンツァ大学の輸血センターの健康な血液ドナーボランティアから得た軟膜から、フィコール−ハイパーク法の傾斜分離によって単離した。DCsを、j磁気細胞分離カラムおよびCD14マイクロビーズを使用した正の選択によってPBMCから精製した単球から産生した。高濃単球(>95%、CD14+)を、15%牛胎児熱不活性化血清(FCS)、L−グルタミンおよびペニシリン−ストレプトマイシンならびに250ng/ml顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)および500U/mlインターロイキン(IL)−4を添加したRPMI1640培地6×105/mlで、37℃にて5日間培養した。DCの分化を、形態学的観察およびフローサイトメトリー法による特異的表在マーカーの検出によって評価した。これらの細胞は、未成熟DC表現型に一致したCD14−、CD1a+、HLA−DR中間体、HLA−ABC中間体、CD80low、CD86lowであった。非処理未成熟DCを対照といて使用した。5日間の培養後、c−di−GMPおよび/またはリポポリサッカライド(LPS)(大腸菌抗原型0111:B4)200ng/mlを非処理未成熟DCに加えた。LPS処理DCは刺激/活性化され、成熟DC表現型に一致して、CD83+、HLA−DRhigh、HLA−ABChighを産生した。
c−di−GMPはヒト樹状細胞を刺激および活性化する
c−di−GMPはDCエンドサイトーシス活性を調節しない
c−di−GMPは樹状細胞によるサイトカイン産生を刺激/アップレギュレートする。
c−di−GMPは樹状細胞の免疫刺激能をアップレギュレートする
c−di−GMPは樹状細胞のアポトーシスは調節しない
表1に示したとおり、c−di−GMPがDCアポトーシスに影響を与えるかは明らかではない。c−di−GMPは24時間処理後のアネキシンV+/PI−(初期アポトーシス)およびアネキシンV+/PI+DS(後期アポトーシス)の割合を調節しなかった。これらの結果は、抗炎症反応性反応の欠如を示し、そしてDCがc−di−GMPに対して耐性がないことを示す。これらの結果は、c−di−GMPが免疫刺激性分子であり、炎症反応性反応を活性化するという、先のデータに一致する。
c−di−GMPは神経保護作用性をもつ
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Claims (33)
- 環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体の有効量を患者にその必要に応じて投与し免疫または炎症性の応答を刺激または亢進することからなる、免疫または炎症性の応答を刺激または亢進する方法。
- 環状ジ−GMPの有効量をその必要に応じて投与する、請求項1記載の方法。
- 環状ジヌクレオチド類似体の有効量をその必要に応じて投与する、請求項1記載の方法。
- 前記その環状ジヌクレオチド類似体が環状ジヌクレオチド化合物(I)−(XX)からなる群から選択される、請求項3記載の方法。
- 刺激または亢進する免疫応答がTh1配向免疫応答を含む、請求項1記載の方法。
- 免疫または炎症性の応答を刺激または亢進することによって免疫学的または炎症性の障害または疾病を治療する、請求項1記載の方法。
- 免疫学的または炎症性の障害が関節炎、癌、自己免疫性障害または疾病、アレルギー反応、慢性的感染性疾病、生成した病原体または毒素が免疫応答を減ずる感染性疾病、および免疫不全疾病または障害からなる群から選択される、請求項6記載の方法。
- ワクチンまたは抗原の有効量をその必要に応じて環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体の有効量と組み合わせて投与する、ワクチンへの免疫応答を亢進する請求項1記載の方法。
- 免疫応答が細胞性の応答である、請求項8記載の方法。
- ワクチンがタンパク質ワクチン、多糖体ワクチン、DNAワクチン、生弱毒ワクチン、および殺生ワクチンからなる群から選択される、請求項8記載の方法。
- ワクチンが癌ワクチンである、請求項8記載の方法。
- 癌ワクチンがオートローガス癌ワクチンである、請求項11記載の方法。
- 癌ワクチンがアロジェニック癌ワクチンである、請求項11記載の方法。
- 樹状細胞またはT細胞を抗原または環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体を用いて活性化し、免疫応答を刺激または亢進するように細胞ワクチンとして活性化樹状細胞またはT細胞を投与してなる、免疫応答を刺激または亢進する方法。
- その必要に応じて環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体の有効量を投与して、神経細胞の変性となる傷害、疾病、障害または健康状態の影響を阻害、治療、または寛解させてなる、神経細胞の変性となる傷害、疾病、障害または健康状態の影響を阻害、治療、または寛解させる方法。
- 環状ジ−GMPの有効量をその必要に応じて投与する、請求項15記載の方法。
- 環状ジヌクレオチド類似体の有効量をその必要に応じて投与する、請求項15記載の方法。
- 前記その環状ジヌクレオチド類似体が環状ジヌクレオチド化合物(I)−(XX)からなる群から選択される、請求項17記載の方法。
- 傷害、疾病、障害または健康状態が脊椎損傷、鈍的外傷、鋭的外傷、出血性脳卒中、および虚血性脳梗塞からなる群から選択される、請求項15記載の方法。
- 傷害、疾病、障害または健康状態が神経変性疾病、障害または健康状態である、請求項15記載の方法。
- 神経変性疾病、障害、または健康状態が緑内障、アルツハイマー病、パーキンソン病、および筋萎縮性側索硬化症からなる群から選択される、請求項20記載の方法。
- 製薬学的に受容できる担体、賦形剤または希釈剤および有効量の環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体からなる、免疫または炎症性の応答を刺激または亢進するための製薬組成物。
- ワクチンまたは抗原および環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体からなる、免疫化組成物。
- 免疫または炎症性の応答を刺激または亢進するための薬剤の調製において環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体の使用。
- 環状ジ−GMPの環状ジヌクレオチド類似体が環状ジヌクレオチド化合物(I)−(XX)からなる群から選択される、請求項24記載の使用。
- 免疫または炎症性の応答を刺激または亢進するための薬剤が、関節炎、癌、自己免疫障害または疾病、アレルギー反応、慢性感染性疾病、生成した病原体または毒素が免疫応答を損なう感染性疾病、および免疫不全病または障害からなる群から選択された免疫学的または炎症性障害に対して用いられる、請求項24記載の使用。
- 薬剤がワクチンであり、環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体が前記ワクチン用免疫賦活剤である、請求項24記載の使用。
- ワクチンがタンパク質ワクチン、多糖体ワクチン、DNAワクチン、生弱毒ワクチン、またはウイルス性ワクチン、殺細菌性またはウイルス性ワクチン、および癌ワクチンからなる群から選択される、請求項27記載の使用。
- 樹状細胞またはT細胞を活性化するための環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体および抗原の使用。
- 神経変性となる傷害、疾病、障害または健康状態の影響を抑制、治療、または寛解させるため環状ジ−GMPまたはその環状ジヌクレオチド類似体の使用。
- 傷害、疾病、障害または健康状態が脊椎損傷、平滑末端化外傷、貫通性外傷、出血性脳卒中、および虚血性脳卒中からなる群から選択される、請求項30記載の使用。
- 疾病、障害または健康状態が、緑内障、アルツハイマー病、パーキンソン病、および筋萎縮性側索硬化症傷害からなる神経変性疾病、障害、または健康状態の群から選択される、請求項30記載の使用。
- 環状ジ−GMPの環状ジヌクレオチド類似体が環状ジヌクレオチド化合物(I)−(XX)からなる群から選択される、請求項24−32のいずれか1項に記載の使用。
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