JP2018528960A - Ｃ−ｃモチーフケモカイン２２（ｃｃｌ２２）またはこのフラグメントを含むワクチン組成物 - Google Patents

Ｃ−ｃモチーフケモカイン２２（ｃｃｌ２２）またはこのフラグメントを含むワクチン組成物 Download PDF

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Abstract

本開示は癌の免疫抑制におけるＴ細胞標的としてのＣＣＬ２２に関する。
【選択図】なし

Description

本発明は、癌の予防および治療の分野に関する。特に、タンパク質Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２（ＣＣＬ２２）または抗癌免疫応答を誘発できるそのペプチドフラグメントが提供される。具体的には、本発明は癌治療のためのＣＣＬ２２またはこれに由来するペプチドあるいはＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の使用に関する。このため、本発明は任意に他の免疫療法と組み合わせて使用され得る抗癌ワクチン、および癌治療としてワクチン接種によって養子移入またはインビボで誘発されるＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞に関する。本明細書で提供される医薬品が癌化学療法と組み合わせて使用され得ることは本発明の態様である。さらなる態様は、上記と同じ手段による感染症の予防および治療に関する。
癌および感染症の治療、診断および予後診断におけるＣＣＬ２２およびその免疫原性ペプチドフラグメントの使用も提供される。
免疫系は、危険であると判断されるすべての成分の排除によって生物の完全性を維持する、細胞および分子の複合的なアレンジメントである。いくつかの調節機構が抗原に対する免疫応答を終結するように機能し、抗原が排除された後に免疫系を基底状態に戻し、かつ自己抗原に対する不応答性または寛容を維持する。残念なことに、自己免疫を防止する機構のいくつかは、癌によってハイジャックされて免疫回避に至る。実際に、ＨａｎａｈａｎおよびＷｅｉｎｂｅｒｇによる「Ｈａｌｌｍａｒｋ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ（癌の特徴）」で、免疫破壊からの回避が、出現する特徴として現在示されている（Ｎｏｍｉら，２００７）。この免疫破壊からの回避は、いくつかの機構に基づいている。固形腫瘍は癌性細胞それ自体から、ならびに支持構造を提供するだけでなく免疫回避を可能にする間質細胞からなる。この目的のため、腫瘍は、免疫寛容微小環境を作り出し維持する免疫適格性細胞を誘引および／または変質させる。これらの免疫適格性細胞は、免疫恒常性を維持する中枢のおよび末梢の寛容機構の精巧なネットワークに通常含まれ、因子フォークヘッドボックスＰ３（Ｆｏｘｐ３）陽性調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ＮＫＴ細胞、樹状細胞サブタイプ、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、Ｍ２（腫瘍関連としても知られている）、マクロファージ、および顆粒球を含む。ＣＣＬ２２が癌で作用すると考えられる機構を図１で説明する。
この免疫回避は癌免疫療法の状況において有害である。このため、１つ以上の免疫抑制経路の標的化は、抗癌免疫療法との組み合わせで非常に有用であり得、そこで免疫抑制機構は必要とされる効果に拮抗する。癌における免疫抑制を標的とするいくつかの異なる可能性のある治療方法、特にモノクローナル抗体を用いた阻害経路のブロッキングが、研究下にある。
本発明は請求項で定められる通りである。
ＣＣＬ２２の発現および起こり得るＣＣＬ２２誘発性癌免疫抑制は、癌の治療における問題を提起する。
癌免疫抑制の問題が本発明によって解決され、これは新規Ｔ細胞標的としてＣＣＬ２２を提供する。
したがって、本発明はＣＣＬ２２発現癌細胞を直接的に標的にすることによる、およびＣＣＬ２２発現癌細胞を殺すことによる癌疾患の治療のための材料および方法を提供する。これはＴ細胞を、ＣＣＬ２２発現細胞を認識できるようにすることによってなされる。興味深いことに、本発明は、ＣＣＬ２２発現細胞が他の免疫療法の所望の効果と拮抗し得るときでさえ、ＣＣＬ２２発現細胞に対する細胞毒性免疫応答を高め得ることを開示する。したがって、ＣＣＬ２２がＴｒｅｇなどの免疫抑制細胞を誘引することによって腫瘍回避を可能にするという事実に関わらず、本発明は、免疫系がケモカインに対して反応でき、ＣＣＬ２２に対する特異的免疫応答を高めることができることを示す。これは、例えば腫瘍およびＣＣＬ２２発現癌細胞への免疫抑制細胞の動員を阻害することによって癌を治療する新規機構を提供する。
同様に、本発明は免疫応答を通常引き起こし得る他の疾患、例えば感染症の治療のための材料および方法を提供する。本発明の方法では、Ｔ細胞がＣＣＬ２２を発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）および／または樹状細胞（ＤＣ）を殺すことができる。
したがって、本発明は癌細胞中の免疫抑制ケモカインＣＣＬ２２の発現を利用しこれらのＣＣＬ２２発現細胞を標的にする。
自己タンパク質ＣＣＬ２２に対する免疫応答を驚くべきことに生じる得るワクチン組成物を提供することが本発明の一つの態様である。
本明細書では医薬品として使用するための、
ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２のアミノ酸の連続した配列を含むＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、
（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントである、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なフラグメント、
（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）に基づくポリペプチドの機能的ホモログであって、ここで当該機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％配列同一性を共有し、および／または当該機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸の連続配列に同一な配列からなるが、ただし最大で２個のアミノ酸など、最大で１個のアミノ酸など、最大で３個のアミノ酸が置換されている免疫原性的に活性なポリペプチドである機能的ホモログ、
（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）に基づくポリペプチドのいずれかを含むポリペプチド、
（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）に基づくポリペプチドのいずれかをコードする核酸、
の１つ以上、ならびに
ｂ）アジュバント
を含むワクチン組成物が提供される。
ワクチン組成物は、医薬品として使用され得、および例えばＣＣＬ２２が発現される癌疾患の治療のため、または抗原提示細胞（ＡＰＣ）中でＣＣＬ２２発現を生じる感染症の治療のためのものであり得る。
本発明はまた、ワクチン組成物および第二有効成分を含む構成要素からなるキットを提供する。
本発明はまた、ＣＣＬ２２のペプチドフラグメント、およびクラスＩ ＨＬＡもしくはクラスＩＩ ＨＬＡ分子、またはそのような分子のフラグメントの複合体を説明する。当該ペプチドフラグメントは、例えば、本明細書においてセクション「ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント」、「ＣＣＬ２２またはそのフラグメントを含むポリペプチド」および「ＭＨＣ」で後述されるＣＣＬ２２のペプチドフラグメントのいずれかであり得る。
本発明はさらに、臨床症状を有する個体においてＣＣＬ２２反応性Ｔ細胞の存在を検出する方法を開示し、当該方法は腫瘍組織または血液サンプルを、上記ＣＣＬ２２のペプチドフラグメントを含む複合体と接触させること、および複合体の当該組織または血液細胞への結合を検出することを含む。
本発明はまた、例えば本明細書においてセクション「ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント」、「ＣＣＬ２２またはそのフラグメントを含むポリペプチド」および「ＭＨＣ」で後述されるＣＣＬ２２のペプチドフラグメントのいずれかである、ＣＣＬ２２のペプチドフラグメントに特異的に結合できる分子を開示する。
本発明はまた、ＣＣＬ２２の発現によって特徴付けられる臨床症状を治療する方法を提供し、当該方法は、臨床症状を有する個体に、本発明のワクチン組成物の、本発明の構成要素からなるキットの、本発明の組成物の、および／または例えば本明細書においてセクション「ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント」、「ＣＣＬ２２またはそのフラグメントを含むポリペプチド」および「ＭＨＣ」で後述されるＣＣＬ２２のペプチドフラグメントのいずれかである、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントの治療上効果的な量を投与することを含む。
本発明はまた、臨床症状、例えば癌および／または炎症の治療または予防のための医薬品の製造における、本発明のワクチン組成物の使用を提供する。
本発明はまた、免疫付与をモニタリングするための方法を提供し、本方法は、
ａ）個体からの血液サンプルを提供する、
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２の連続した配列を含む免疫原性的に活性なペプチドフラグメントまたはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２と少なくとも７０％同一性を有するその機能的ホモログ、または当該ペプチドフラグメントもしくは機能的ホモログをコードする核酸を提供する、
ｃ）血液サンプルが当該タンパク質またはペプチドを特異的に結合する抗体またはＴ細胞受容体を含むＴ細胞を含むかどうか決定する
段階を含み、
これによって当該タンパク質またはペプチドに対する免疫応答が当該個体で上昇しているかどうか決定する。
さらに、本発明は、癌および／または感染症などのＣＣＬ２２の発現と関連する臨床症状の治療または予防に使用するための、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＣＣＬ２２フラグメントの連続した配列を含む免疫原性的に活性なＣＣＬ２２ペプチドフラグメント、または最大３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドであるその機能的ホモログ、またはＣＣＬ２２ポリペプチドフラグメントをコードする核酸を提供する。
癌におけるＣＣＬ２２の作用を示す図である。 末梢血液に存在するＣＣＬ２２特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を示す図である。Ａ：ＩＦＮγおよびＴＮＦα放出に関する細胞内染色は、ＣＣＬ２２−３ペプチドエピトープに対してＣＤ８＋（左図）が反応し、ＣＤ４＋（右図）は反応しないことを示す。Ｂ：左図：ＣＣＬ２２−３ペプチド反応性Ｔ細胞は、ペプチドパルスされた自家ＤＣによる刺激によってメラノーマ癌患者の末梢血液から豊富化され得る。右図：分離された四量体および迅速に増殖されたＣＣＬ２２−３特異的Ｔ細胞培養。 ＣＣＬ２２反応性Ｔ細胞が細胞毒性であることを示す図である。Ａ：ＣＣＬ２２−３パルスされたＴ２細胞はＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞によって溶解されるが、ＨＩＶパルスＴ２細胞は溶解されない。Ｂ：ＣＣＬ２２ｌｏｎｇペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）はＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞によって認識される。従って、ＣＣＬ２２ｌｏｎｇおよびＣＣＬ２２−３によってパルスされたＴ２細胞は認識され死滅させられる。コントロールペプチドでパルスされたＴ２細胞はＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞によって認識されない。Ｃ：ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の細胞毒性活性はＨＬＡ依存性である。従って、ＨＬＡ−Ａ２でトランスフェクションされＣＣＬ２２−３ペプチドでパルスされたＫ５６２細胞は認識されて死滅させられる。Ｋ５６２細胞、ＣＣＬ２２−３でパルスされたＫ５６２細胞、またはＨＬＡ−Ａ２でトランスフェクションされたＫ５６２細胞は認識されない。Ｄ：ＣＣＬ２２−３ペプチドは９マーＣＣＬ２２−２ペプチドよりもよく認識される。ＣＣＬ２２−３およびＣＣＬ２２−２ペプチドのペプチド力価測定は、ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞は交差反応するが、ＣＣＬ２２−３をより高い結合活性で認識することを示した。 ＣＣＬ２２反応性Ｔ細胞がＣＣＬ２２発現癌細胞株を認識し殺すことができることを示す図である。ＩＦＮγ未処理または前処理した癌細胞株の５１Ｃｒ放出アッセイ：ＳＷ４８０−結腸直腸腺癌（Ａ）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１−乳腺癌（Ｂ）、Ｕｋｅ−１−急性骨髄性白血病（Ｃ）、ＴＨＰ−１−急性単球性白血病（Ｄ）、ＲＰＭＩ６６６６−ホジキンリンパ腫（Ｅ）、Ｓｅｔ２−本態性血小板血症（Ｆ）。エフェクター細胞として同じエフェクターＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞培養を使用した。Ｇ：ＣＣＬ２２ ｓｉＲＮＡトランスフェクションまたは偽トランスフェクションされたＩＦＮγ誘発ＴＨＰ−１細胞の、ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞による溶解。アッセイはトランスフェクションの４８時間後に実施された。Ｈ−エレクトロポレーションの４８時間後に、偽コントロールでトランスフェクションされたＴＨＰ−１細胞と比較した、ｓｉＲＮＡトランスフェクションしたＴＨＰ−１細胞からの上清中のＣＣＬ２２発現のＥＬＩＳＡ分析。 ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の細胞毒性がＣＣＬ２２依存性であることを示す図である。Ａ：ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の細胞毒性はＣＣＬ２２の発現の低下とともに減少する。このため、ＣＣＬ２２ｓｉＲＮＡトランスフェクションされたＴＨＰ−１細胞の溶解は、偽トランスフェクションされた細胞よりも低い。Ｂ：ｓｉＲＮＡトランスフェクションの４８時間後の、ＴＨＰ−１細胞の上清中のＣＣＬ２２発現のＥＬＩＳＡ分析。Ｃ−ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞はＣＣＬ２２依存的に樹状細胞を認識する。従って、フローサイトメトリーを用いて、ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞をＣＣＬ２２ ｓｉＲＮＡによるトランスフェクションを有しまたは有さずに自家樹状細胞とともにインキュベーションした場合のＴＮＦ−αおよびＣＤ１０７αの放出を試験した。 健常ドナーの末梢血液における自発的ＣＣＬ２２−３応答を示す図である。Ａ：ＩＮＦγＥＬＩＳＰＯＴによって示される、ＣＣＬ２２−３ペプチドの有無における健常ドナーのＰＢＭＣから得られるＥＬＩＳＰＯＴ応答の例。Ｂ：ＣＣＬ２２−３ペプチドまたはＨＩＶコントロールペプチドのいずれかを加えたＩＬ−２による刺激後の同一ドナーから得られるＰＢＭＣの上清中のＣＣＬ２２発現。Ｃ：ＣＣＬ２２−３ペプチドまたはＨＩＶコントロールペプチドのいずれかを加えたＩＬ−２による刺激後の同一ドナーから得られるＰＢＭＣ由来の上清中のＩＬ−６およびＴＮＦα。Ｄ：ＣＣＬ２２−３／ＨＬＡ−Ａ２四量体豊富化（左図）またはＤ−ＣＣＬ２２−３／ＨＬＡ−Ａ２四量体枯渇化（右図）のいずれかの後の、同一ドナーからのＰＢＭＣ由来のＩＬ−２刺激したＰＭＢＣ上清中のＣＣＬ２２発現。 卵巣癌腹水細胞によるＣＣＬ２２発現量はＣＣＬ２２−３ペプチドの添加によって影響を受けることを示す図である。卵巣癌を有する患者から分離された腹水細胞の細胞培養を、ＩＬ２の添加とともにＣＣＬ２２−３またはＨＩＶペプチドで刺激した２日後（Ａ）および７日後（Ｂ）の上清のＥＬＩＳＡ分析。 ＣＣＬ２２３〜１２反応性Ｔ細胞が健常ドナーおよび癌患者に存在することを示す図である。Ａ：メラノーマ患者（ＭＭ）３名および健常ドナー（ＨＤ）２名におけるｐＣＣＬ２２３〜１２エピトープに対するＴ細胞応答を示すＩＦＮγ ＥＬＩＳＰＯＴ例。 ＣＣＬ２２３〜１２反応性Ｔ細胞が健常ドナーおよび癌患者に存在することを示す図である。Ｂ：癌患者および健常ドナーにおけるｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチド特異的ＩＮＦγ ＥＬＩＳＰＯＴ応答。ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的スポットの平均数（添加ペプチドを有さないウェルにおけるスポットを減じた後）を、各ドナーについて３×１０５個ＰＢＭＣあたりで計算した。 ＣＣＬ２２３〜１２反応性Ｔ細胞が健常ドナーおよび癌患者に存在することを示す図である。Ｃ：ＰＢＭＣにおけるｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞枯渇化／豊富化の実験的設定。健常ドナーからのＰＢＭＣをｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドで２回刺激してから、抗ＰＥ磁性ビーズと組み合わせてｐＣＣＬ２２３〜１２−ＰＥ−四量体を用いてｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞（抗ＣＣＬ２２Ｔ細胞）を分離した。残存する枯渇化ＰＢＭＣを２つの培養に分けてから、ｐＣＣＬ２２３〜１２−四量体分離細胞をこれらの１つに加えて四量体豊富化培養を得た。四量体豊富化培養中のＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞はＣＣＬ２２産生Ｔ細胞を標的にする（黒色矢印によって示される）。 ＣＣＬ２２３〜１２反応性Ｔ細胞が健常ドナーおよび癌患者に存在することを示す図である。Ｄ：経時間的に四量体枯渇化ＰＢＭＣ培養と比べた、ｐＣＣＬ２２３〜１２−四量体豊富化ＰＢＭＣ培養由来の上清中のＣＣＬ２２のＥＬＩＳＡ分析。 ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の活性が微小環境中のＣＣＬ２２量とともに低下することを示す図である。Ａ：ＣＣＬ２２ ＥＬＩＳＡによって測定された、ｐＣＣＬ２２３〜１２またはＨＩＶペプチドのいずれかによる刺激後の健常ドナーから分離されたＰＢＭＣ由来の上清中のＣＣＬ２２量（＊、Ｐ＝０．０１、ｎｓ−有意でない、ｔ検定）。実験は各ペプチドについて三重測定で実施した。 ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の活性が微小環境中のＣＣＬ２２量とともに低下することを示す図である。Ｂ：７日目にＣＣＬ２２ ＥＬＩＳＡによって測定された、ＨＩＶコントロールペプチドと比べた、ｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドによる刺激後の１１名の健常ドナーＰＢＭＣから分離されたＰＢＭＣ由来の上清中のＣＣＬ２２量の変動。 ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の活性が微小環境中のＣＣＬ２２量とともに低下することを示す図である。Ｃ：７日目にＣＣＬ２２ ＥＬＩＳＡによって測定された、ＨＩＶコントロールペプチドと比べた、ｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドによる刺激後の癌患者１３名から分離されたＰＢＭＣ由来の上清中のＣＣＬ２２量の変動。実験は各ペプチドについて三重または二重測定で実施した。 ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の活性が微小環境中のＣＣＬ２２量とともに低下することを示す図である。Ｄ：ＣＣＬ２２ ＥＬＩＳＡによって測定された、ｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドまたはＨＩＶペプチドのいずれかによる刺激後の卵巣癌患者２名から分離された卵巣癌復水から分離された細胞由来の上清中のＣＣＬ２２量。 ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の刺激がＰＢＭＣサイトカインプロファイルに影響を及ぼすことを示す図である。Ａ：ＨＩＶコントロールペプチド刺激と比較したｐＣＣＬ２２３〜１２刺激後の癌患者１１名（左図）または健常ドナー１０名（右図）から分離されたＰＢＭＣ由来の上清中のＩＬ−６発現の全体的な変化（それぞれＰ＝０．０２およびＰ＝０．０６、ペアードｔ検定）。Ｂ：ＨＩＶコントロールペプチド刺激と比較したｐＣＣＬ２２３〜１２刺激後の癌患者１１名（左図）または健常ドナー１０名（右図）から分離されたＰＢＭＣ由来の上清中のＴＮＦα発現の全体的な変化（それぞれＰ＝０．１６およびＰ＝０．７、ペアードｔ検定）。 免疫応答がインビボで上昇され得ることを示す図である。上部パネルに示すように、マウスをｍＣＣＬ２２ｌｏｎｇ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）またはｍＣＣＬ２２ｓｈｏｒｔ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）のいずれかの皮下注射によって３週間にわたって１週間に１回ワクチン接種し、最後の接種１週後に屠殺した。屠殺したマウスの脾臓から調製した脾臓細胞でＥＬＩＳＰＯＴアッセイを実施した。ネズミＣＣＬ２２ペプチドに対するＩＦＮｙ応答を試験するため、細胞をこのペプチド（５μＭ）またはコントロールとしてＲ１０とともに３７℃で１８〜２０時間インキュベーションした。ＥＬＩＳＰＯＴを、緩衝液（ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡおよびＮａＮ３）中の１μｇ／ｍＬ濃度のマウスＩＦＮｙ特異的検出Ａｂ（Ｒ４−６Ａ２−ビオチン、Ｍａｂｔｅｃｈ）で室温で２時間反応させ、続いてＰＢＳで６回洗浄した。次に、緩衝液中にストレプトアビジン−ＡＬＰ（１：１０００、Ｍａｂｔｅｃｈ）を室温で１時間加えた。基質溶液ＢＣＩＰ／ＮＢＴ（Ｍａｂｔｅｃｈ）を加えることによってＳｐｏｔを発色させ、水道水で洗浄して停止した。ＥＬＩＳＰＯＴをＥＬＩＳＰＯＴリーダー（ＣＴＬ−Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ）によって分析した。結果は、ワクチン接種されたマウスが増加した免疫応答を現わすことを示す。
定義
アジュバント：投与される免疫原性決定基／抗原／核酸構築体とのその混合が当該決定基に対する免疫応答を増加する、さもなければ改変する任意の物質。
抗原：クローン的に分布した免疫受容体（Ｔ細胞またはＢ細胞受容体）に結合できる任意の物質。通常はペプチド、ポリペプチドまたは多量体ポリペプチド。抗原は、好ましくは、免疫応答を誘発できる。
ＡＰＣ：抗原提示細胞。ＡＰＣは、その表面上にＭＨＣと複合体化した抗原を提示する細胞である。Ｔ細胞は、そのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこの複合体を認識できる。ＡＰＣはプロフェッショナル（樹状細胞、マクロファージおよびＢ細胞の３つのタイプがある）またはノンプロフェッショナル（ナイーブＴ細胞との相互作用に必要な主要組織適合性複合体タンパク質を構成的に発現せず、これらはＩＦＮ−γなどの特定のサイトカインによるノンプロフェッショナルＡＰＣの刺激でのみ発現される）の２つのカテゴリーに分類される。
ブースト：ブースターショットまたは投与によってブーストすることは、ワクチンなどの免疫剤の追加用量を投与することであり、初期用量の後に投与されて同じ薬剤の以前の用量によって誘発された免疫応答を維持する。
キャリア：抗原が結合されて、免疫応答の誘発を補助する実体または化合物。
ＣＣＬ：Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２。ＣＣＬ２２の野生型ヒト配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２で示される。
ＣＣＬ２２ｘｘ〜ｙｙ：本明細書で使用されるとき、この専門用語は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸ｘｘ〜ｙｙからなるＣＣＬ２２のポリペプチドフラグメントを指す。ｍＣＣＬ２２はネズミＣＣＬ２２を指し、ｍＣＣＬ２２ｘｘ〜ｙｙはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸ｘｘ〜ｙｙからなるｍＣＣＬ２２のポリペプチドフラグメントを指す。
キメラタンパク質：２つ以上の完全なまたは部分的な遺伝子あるいは一連の（非）ランダムな核酸の継ぎ合わせによって作製されるヌクレオチド配列によってコードされる遺伝子工学処理されたタンパク質。
臨床症状：医学的配慮を必要とする症状、本明細書では特に、ＣＣＬ２２の発現と関連する症状。このような症状の例は、癌および感染症などの増殖性障害を含む。
補体：その作用が抗体の作業を「補う」、血液タンパク質の複雑な系。補体は細菌を破壊し、炎症を生じ、免疫反応を調節する。
ＣＴＬ：細胞毒性Ｔリンパ球。Ｔ細胞受容体とともにＣＤ８を発現するＴ細胞のサブ群であり、従ってクラスＩ分子によって提示される抗原に応答できる。
送達ベヒクル：それによりヌクレオチド配列またはポリペプチドあるいは両方を少なくとも１つのメディアから他へ輸送できる実体。
ＤＣ：樹状細胞。ＤＣは免疫細胞であり、哺乳動物の免疫系の一部を形成する。それらの主な機能は、抗原物質を処理してそれを表面で免疫系の他の細胞に提示することであり、これによって抗原提示細胞（ＡＰＣ）として機能する。
フラグメント：核酸またはポリペプチドの非全長部分を示すために使用される。したがって、フラグメントもそれ自体がそれぞれ核酸またはポリペプチドである。
機能的ホモログ：機能的ホモログはポリペプチドの野生型版と少なくともある程度の配列同一性を示し元の機能性の少なくとも１つの特性を維持している任意のポリペプチドであり得る。本明細書において、ＣＣＬ２２またはその免疫原性ペプチドフラグメントの機能的ホモログは、ＣＣＬ２２またはそのフラグメントと少なくともある程度配列同一性を共有するポリペプチドであり、それはＣＣＬ２２を発現する細胞に対する免疫応答を誘発する能力を有する。
免疫原性的に活性なペプチド：少なくとも１つの個体中で、当該個体に投与された後に免疫応答を誘発できるペプチド。
個体：一般的に鳥類、哺乳動物、魚類、両生類、または爬虫類の任意の種または亜種、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒト。
感染症：本明細書において、用語「感染」は、疾患原因となる媒介物によるホスト生物への侵入を含む任意の種類の臨床症状に関連する。特に、感染症は、病原体による個体への侵入を含む臨床症状を指す。
分離された：本明細書で開示される核酸、ポリペプチド、および抗体と関連して使用され、「分離された」は、これらが、それらの本来の、一般的には細胞の環境の成分から特定されならびに分離されおよび／または回収されていることを意味する。本発明の核酸、ポリペプチド、および抗体は好ましくは分離されており、本発明のワクチンおよび他の組成物は分離された核酸、ポリペプチドまたは分離された抗体を好ましくは含む。
ＭＨＣ：主要組織適合性複合体であり、ＭＨＣの２種の主なサブクラスであるクラスＩおよびクラスＩＩが存在する。
核酸：遺伝情報を運ぶヌクレオチドの鎖または配列。本発明に関して、核酸は一般的にデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）である。
核酸構築体：遺伝子工学操作された核酸。一般的には、遺伝子またはそのフラグメント、ｃＤＮＡ、プロモーター、エンハンサー、ターミネーター、ポリＡタイル、リンカー、ポリリンカー、操作リンカー、多クローニング部位（ＭＣＳ）、マーカー、ストップコドン、他の調節エレメント、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）または他などのいくつかのエレメントを含む。
操作リンカー：核酸構築体または（キメラ）ポリペプチドの２つの部分を、当該核酸またはポリペプチドの生物学的処理を確実にする方法で結合するヌクレオチドまたはアミノ酸残基の配列。
病原体：疾患の特定の原因となる媒介物、特に、ホストに疾患を引き起こすことができるウイルス、細菌、プリオン、または寄生虫などの生物学的媒体物であり、感染性媒介物とも呼ばれる。
ＰＢＬ：末梢血細胞は、赤血球、白血球、および血小板からなる血液の細胞成分であり、血液の循環プール内で認められ、リンパ系、脾臓、肝臓、または骨髄内に隔離されない。
ＰＢＭＣ：末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、リンパ球または単球などの、球状核を有する血液細胞である。これらの血液細胞は、感染と戦い侵入物に適応するための免疫系における重要成分である。リンパ球集団はＴ細胞（ＣＤ４およびＣＤ８陽性、約７５％）、Ｂ細胞およびＮＫ細胞（併せて約２５％）からなる。
ポリペプチド：配列を定めかつアミド結合によって連結される複数の共有結合したアミノ酸残基。本用語はオリゴペプチドおよびペプチドと類似的に使用される。用語ポリペプチドはまた、従来技術で知られているように、化学的反応または酵素触媒反応によって導入される翻訳後修飾も包含する。本用語はポリペプチドの変異体またはフラグメントを指してもよい。
医薬品用担体：賦形剤または安定化剤とも呼ばれ、使用される投与量および濃度でこれらに暴露される細胞または個体に対して非毒性である。しばしば医薬品用担体は水性のｐＨ緩衝化溶液である。医薬品用担体の例は、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含むモノサッカライド、ジサッカライド、および他の炭水化物；ＥＤＴＡのようなキレート剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤を含む。
複数：少なくとも２つ。
増殖性障害：本明細書において、いかなる前新生物または新生物疾患、良性または悪性であろうと、ここでは「新生物」は細胞の異常な増殖を指す。増殖性障害の非限定例は癌である。
プロモーター：そこでＲＮＡポリメラーゼが結合して近辺の１つ以上の構造的遺伝子によるメッセンジャーＲＮＡの転写を開始する、ＤＮＡ鎖中の結合部位。
シグナルペプチド：細胞中のタンパク質の最終的な位置を決定するアミノ酸の短い配列であり、仕分けペプチドとも呼ばれる。
界面活性剤：それが溶解される液体の表面張力を低減できる表面活性剤。界面活性剤は親水性である極性基、および疎水性でありしばしば脂肪鎖からなる非極性基を含む化合物である。
Ｔｒｅｇ：調節Ｔ細胞／Ｔリンパ球。
治療：本明細書で使用される用語「治療」は、根治的治療および／または改善的治療および／または疾患の症状を低減する治療および／または疾患の進行を遅延する治療を指す。
ワクチン：個体において、特に哺乳動物において、好ましくはヒトにおいて免疫応答を誘発できる物質または組成物。また、本文脈中で免疫原性組成物とも呼ばれる。本発明によるワクチンは、しばしば、少なくともアジュバントおよび免疫原性ペプチドを含む組成物であり得る。媒介物に対する免疫応答は、生物における体液性、抗体および／または細胞応答誘発性記憶であり、その結果当該媒介物は一次応答よりもむしろ二次応答で対処され、このためホスト生物に対するその影響を低減する。このような媒介物は病原体であり得る。本発明の文脈では、媒介物は好ましくは癌細胞である。本発明のワクチンは、臨床症状が出現するリスクを低減するために予防法として、および／または臨床症状の治療のための治療用医薬品として与えられ得る。組成物は、抗原、１つ以上の抗原をコードする核酸構築体、キャリア、アジュバントおよび医薬品用担体の１種類以上を含み得る。
変異体：所定の対照核酸またはポリペプチドの「変異体」は、この対照核酸またはポリペプチドに対しある程度の配列類似性／同一性を示すが、この対照核酸またはポリペプチドとは同一でない核酸またはポリペプチドを指す。
本発明の詳細な説明
本開示は医薬品として使用するための、
ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２のアミノ酸の連続した配列を含むＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、
（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントである、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なフラグメント、
（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）に基づくポリペプチドの機能的ホモログであって、ここで当該機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％配列同一性を共有し、および／または当該機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸の連続配列に同一な配列からなるが、ただし最大で２個のアミノ酸など、最大で１個のアミノ酸など、最大で３個のアミノ酸が置換されている免疫原性的に活性なポリペプチドである機能的ホモログ、
（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）に基づくポリペプチドのいずれかを含むポリペプチド、
（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）に基づくポリペプチドのいずれかをコードする核酸、
の１つ以上、ならびに
ｂ）アジュバント
を含むワクチン組成物に関する。
本開示はまた、本明細書で説明されるワクチン組成物、および第二有効成分を含む構成要素からなるキットに関する。
さらに別の態様では、本開示は本明細書で定められるペプチドフラグメントおよびクラスＩ ＨＬＡもしくはクラスＩＩ ＨＬＡ分子またはそのような分子のフラグメントの複合体に関する。
さらに別の態様では、本開示は臨床症状を有する個体においてＣＣＬ２２反応性Ｔ細胞の存在を検出する方法に関し、本方法は腫瘍組織または血液サンプルを本開示の複合体と接触させることおよび組織または血液細胞への複合体の結合を検出することを含む。
さらに別の態様では、本明細書で定められるペプチドフラグメントに特異的に結合できる分子が開示される。
さらに別の態様では、本明細書で定められるペプチドフラグメントに特異的に結合できる分子の結合をブロッキングできる分子が開示される。
さらに別の態様では、ＣＣＬ２２の発現によって特徴付けられる臨床症状を治療または予防する方法であって、この臨床症状を有する個体に本明細書で説明される組成物、分子、または構成要素からなるキットの効果的な量を投与することを含む方法が開示される。
さらに別の態様では、本開示は臨床症状の治療または予防のための医薬品の製造における、本明細書で説明されるワクチン組成物、構成要素からなるキットまたは分子の使用に関する。
さらに別の態様では、本開示は免疫付与をモニタリングする方法に関し、本方法は、
ａ）個体からの血液サンプルを提供する、
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の連続した配列を含む免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％同一性を有するその機能的ホモログ、または当該ペプチドフラグメントもしくは機能的ホモログをコードする核酸を提供する、
ｃ）当該血液サンプルが当該タンパク質またはペプチドを特異的に結合する抗体またはＴ細胞受容体を含むＴ細胞を含むかどうか決定する
段階を含み、
これによって当該タンパク質またはペプチドに対する免疫応答が当該個体で上昇されたか決定する。
さらに別の態様では、本開示は、癌および／または炎症などの、ＣＣＬ２２の発現と関連する臨床症状の治療または予防に使用するための、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の連続した配列を含む免疫原性的に活性なＣＣＬ２２ペプチドフラグメント、または最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一配列のポリペプチドであるその機能的ホモログ、または当該ＣＣＬ２２ペプチドフラグメントをコードする核酸に関する。
ワクチン組成物
下記の：
（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２のアミノ酸の連続した配列を含むＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、
（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントである、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、
（ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）に基づくポリペプチドの機能的ホモログであって、ここで当該機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％配列同一性を共有し、および／または当該機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸の連続した配列と同一な配列からなるが、ただし最大で２個のアミノ酸など、最大で１個のアミノ酸など、最大で３個のアミノ酸が置換されている免疫原性的に活性なポリペプチドである機能的ホモログ、
（ｉｖ）（ｉ）、（ＩＩ）、または（ｉｉｉ）に基づくポリペプチドのいずれかを含むポリペプチド、
（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、または（ｉｉｉ）に基づくポリペプチドのいずれかをコードする核酸、
の１つ以上を含むワクチン組成物を提供することが本発明の態様の一つである。
前述に加え、ワクチン組成物は好ましくはアジュバントも含み、それは例えば本明細書においてセクション「アジュバント」で後述されるアジュバントのいずれかであり得る。
本発明のワクチン組成物で使用され得る機能的ホモログは、本明細書においてセクション「Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２」「ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント」、「機能的ホモログ」および「ＣＣＬ２２またはそのフラグメントを含むポリペプチド」で後述される。
Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２（ＣＣＬ２２）
Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２は、ヒトではＣＣＬ２２遺伝子によってコードされるタンパク質である。ヒトＣＣＬ２２のアミノ酸配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２で示され、ネズミＣＣＬ２２の配列はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で示される。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、樹状細胞およびマクロファージによって分泌され、その標的細胞に対するその効果を、ＣＣＲ４などの細胞表面ケモカイン受容体と相互作用することによって誘発する。ＣＣＬ２２の遺伝子は、ＣＸ３ＣＬ１およびＣＣＬ１７と呼ばれる他のケモカインを伴うクラスター中のヒト染色体１６に位置する。ＣＣＬ２２はＣＣＲ４を発現するＣＤ２５＋ＣＤ４＋Ｔｒｅｇを化学誘引し動員する。ＣＣＬ２２の発現は、卵巣、前立腺、食道、胃、および乳房の癌においてＦｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの蓄積を引き起こすことが既に示されている。
本開示によるＣＣＬ２２は任意の有用なＣＣＬ２２であり得る。本開示全体を通して、用語「ＣＣＬ２２」はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２で示されるヒトＣＣＬ２２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で示されるネズミＣＣＬ２２などの、全長ＣＣＬ２２を指す。一般的に、ＣＣＬ２２は本開示のワクチン組成物による治療が意図される同じ種のものであることが好ましい。本開示の好ましい実施形態では、ワクチン組成物はヒトへの投与が意図されており、従ってＣＣＬ２２はヒトＣＣＬ２２であり得る。野生型ヒトＣＣＬ２２のアミノ酸配列は、本明細書においてＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２として示される。他の実施形態では、ＣＣＬ２２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で示されるネズミＣＣＬ２２であり得る。
したがって、ＣＣＬ２２は好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＣＣＬ２２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＣＣＬ２２と少なくとも７０％の配列同一性を共有するその機能的ホモログであり得、従って、機能的ホモログは好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のヒトＣＣＬ２２と少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％の配列同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば９９％の配列同一性を有する。
ＣＣＬ２２は、他の実施形態において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２と少なくとも７０％の配列同一性を共有するその機能的ホモログであり得、従って、機能的ホモログは好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のヒトＣＣＬ２２と少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％の配列同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば９９％の配列同一性を有する。
ＣＣＬ２２の機能的ホモログおよび配列同一性を決定するための方法は、本明細書において後述のセクション「機能的ホモログ」でさらに詳細に説明される。
ＣＣＬ２２は望ましくない活性を潜在的に有する可能性があるため、本開示の一つの実施形態では、ワクチン組成物は変異体ＣＣＬ２２を含み、それはＣＣＲ４を発現するＣＤ２５＋ＣＤ４＋Ｔｒｅｇを化学誘引し動員できない、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＣＣＬ２２の最大で１０％の活性でそれをできるのみである。このような変異体ＣＣＬ２２は特にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＣＣＬ２２であり得、ここでアミノ酸の１つ以上が別のアミノ酸に変異されているか欠失されている。変異体ＣＣＬ２２はまた、変異体ＣＣＬ２２フラグメントであり得、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６の変異フラグメントであり得、ここでアミノ酸の１つ以上が別のアミノ酸に変異されているか欠失されている。本発明の文脈では、ＣＣＬ２２の「機能的フラグメント」は変異体ＣＣＬ２２であり得、それは野生型ＣＣＬ２２の触媒活性を有さないが、ＣＣＬ２２を発現する細胞に対する免疫応答を誘発する能力を有する。
ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント
野生型ヒトＣＣＬ２２、すなわち自然に発生する非変異型のタンパク質はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２で特定される。野生型ネズミＣＣＬ２２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で特定される。本発明は、ヒトまたはネズミＣＣＬ２２；ヒトまたはネズミＣＣＬ２２の免疫学的に活性なペプチドフラグメント；最大で２個のアミノ酸が置換されているヒトまたはネズミＣＣＬ２２のペプチドフラグメント；および／またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の配列同一性を含むヒトまたはネズミＣＣＬ２２の機能的ホモログを含むワクチン組成物を網羅する。用語ペプチドフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の少なくとも一部から直接的に得られる、または同一であるように合成されるアミノ酸残基の任意の非全長の（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と比べて）一連を定めるために本明細書で使用される。ペプチドフラグメントは、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の５〜２４個のアミノ酸の範囲の連続配列であり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の５〜２２個のアミノ酸など、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の８〜２２個のアミノ酸であり得、例えばペプチドフラグメントはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６を含み得る。
機能的ホモログは、野生型ヒトまたはネズミＣＣＬ２２などの野生型ＣＣＬ２２とは配列が異なるＣＣＬ２２の全長またはフラグメントとして定められてよいが、癌細胞およびＤＣなどのＣＣＬ２２発現細胞に対する免疫応答を依然として誘発できる。これらの細胞中で発現されるＣＣＬ２２は、野生型であるか内因的に変異され得る（先天的変異体あるいは細胞分裂または他の際に誘発された変異など）。機能的ホモログは、野生型ＣＣＬ２２の変異版または別のスプライス変異体であり得る。別の態様では、ＣＣＬ２２の機能的ホモログは本明細書において後述されるように定められる。機能的ホモログは、限定されないが、１つ以上の変異および／または１つ以上の配列欠失および／または生体外で導入された付加を有する全長のまたはフラグメント化されたＣＣＬ２２の組換え版であり得る。
従って、特定の実施形態では、本発明の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で特定されるＣＣＬ２２の最大で９０個の連続したアミノ酸残基からなり、最大で８０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で７０個の連続したアミノ酸残基、最大で６０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で５０個の連続したアミノ酸残基、最大で４５個の連続したアミノ酸残基、最大で４０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で３５個の連続したアミノ酸残基、最大で３０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で２５個の連続したアミノ酸残基、１８〜２５個の連続したアミノ酸残基など、あるいはそれらの機能的ホモログからなり；機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。免疫原性的に活性なペプチドフラグメントはまた、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で特定されるＣＣＬ２２の最大で８０個の連続したアミノ酸残基からなり、例えば最大で７０個の連続したアミノ酸残基、最大で６０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で５０個の連続したアミノ酸残基、最大で４５個の連続したアミノ酸残基、最大で４０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で３５個の連続したアミノ酸残基、最大で３０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で２５個の連続したアミノ酸残基、１８〜２５個の連続したアミノ酸残基などからなり、ここで１つ以上のアミノ酸は別のアミノ酸に変異されるか欠失されている。
本発明の一つの好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で特定されるＣＣＬ２２の１８〜２５個のアミノ酸、好ましくは２２個の連続したアミノ酸、またはその機能的ホモログからなり、機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。
従って、別の特定の実施形態では、本発明の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２からの最大で２５個のアミノ酸残基からなり、最大で２４個のアミノ酸残基など、最大で２３個のアミノ酸残基など、最大で２２個のアミノ酸残基など、最大で２１個のアミノ酸残基など、最大で２０個のアミノ酸残基など、例えば最大で１９個のアミノ酸残基、最大で１８個のアミノ酸残基など、例えば最大で１７個のアミノ酸残基、最大で１６個のアミノ酸残基など、例えば最大で１５個のアミノ酸残基、最大で１４個のアミノ酸残基など、例えば最大で１３個のアミノ酸残基、最大で１２個のアミノ酸残基など、例えば最大で１１個のアミノ酸残基、８〜１０個の連続したアミノ酸など、あるいはそれらの機能的ホモログからなり、機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。
本発明の一つの好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＣＣＬ２２からの最大で１０個の連続したアミノ酸残基を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で特定されるＣＣＬ２２からの最大で９個の連続したアミノ酸残基など、８個の連続したアミノ酸残基など、７個の連続したアミノ酸残基など、またはそれらの機能的ホモログを含み、機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。特に、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２からの１０個の連続したアミノ酸残基からなり得、あるいは免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２からの９個の連続したアミノ酸残基からなり得る。
本発明の別の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントから最大で１１個の連続したアミノ酸残基を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１で特定されるＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの最大で１０個の連続したアミノ酸残基など、最大で９個の連続したアミノ酸残基など、８個の連続したアミノ酸残基など、７個の連続したアミノ酸残基など、またはそれらの機能的ホモログを含み、機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。特に、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの１０個の連続したアミノ酸残基からなり得、あるいは、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの９個の連続したアミノ酸残基からなり得る。
特に、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの１０個の連続したアミノ酸残基からなり得、あるいは、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの９個の連続したアミノ酸残基からなり得る。
本発明の別の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの最大で１１個の連続したアミノ酸残基を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で特定されるＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの最大で１０個の連続したアミノ酸残基など、最大で９個の連続したアミノ酸残基など、８個の連続したアミノ酸残基など、７個の連続したアミノ酸残基など、またはそれらの機能的ホモログを含み、機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。特に、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの１０個の連続したアミノ酸残基からなり得、あるいは、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの９個の連続したアミノ酸残基からなり得る。
本発明の別の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの最大で１１個の連続したアミノ酸残基を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１で特定されるＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの最大で１０個の連続したアミノ酸残基など、最大で９個の連続したアミノ酸残基など、８個の連続したアミノ酸残基など、７個の連続したアミノ酸残基など、またはこれらの機能的ホモログを含み、機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。特に、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの１０個の連続したアミノ酸残基からなり得、あるいは、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントからの９個の連続したアミノ酸残基からなり得る。
いくつかの実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドフラグメントは、ＶＸＬＶＬＬＡＶＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）を含む、またはこれからなり、特にペプチドフラグメントはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６を含む、またはこれからなり、ここでＸはバリン残基またはアラニン残基であり、Ｙはロイシン残基またはイソロイシン残基である。したがっていくつかの実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６を含む最大で１１個の連続したアミノ酸残基を含み、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６からなる最大で１０個の連続したアミノ酸残基などを含む。
本発明のいくつかの実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、表１に列挙されたペプチドまたはその機能的ホモログからなる群から選択され得、機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。
本発明のいくつかの実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、表１に列挙されたペプチドまたはその機能的ホモログからなる群から選択され得、機能的ホモログはそれらと少なくとも７０％の配列同一性のポリペプチドであり、それらと少なくとも７５％の配列同一性など、少なくとも８０％の配列同一性など、少なくとも８５％の配列同一性など、少なくとも９０％の配列同一性など、少なくとも９５％の配列同一性など、少なくとも９６％の配列同一性など、少なくとも９７％の配列同一性など、少なくとも９８％の配列同一性など、少なくとも９９％の配列同一性などのポリペプチドである。
従って、好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントまたはその機能的ホモログであり得、機能的フラグメントはそれらと少なくとも７０％の配列同一性のポリペプチドであり、それらと少なくとも７５％の配列同一性など、少なくとも８０％の配列同一性など、少なくとも８５％の配列同一性など、少なくとも９０％の配列同一性など、少なくとも９５％の配列同一性など、少なくとも９６％の配列同一性など、少なくとも９７％の配列同一性など、少なくとも９８％の配列同一性など、少なくとも９９％の配列同一性などのポリペプチドである。
別の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントまたはその機能的ホモログであり得、機能的フラグメントはそれらと少なくとも７０％の配列同一性のポリペプチドであり、それらと少なくとも７５％の配列同一性など、少なくとも８０％の配列同一性など、少なくとも８５％の配列同一性など、少なくとも９０％の配列同一性など、少なくとも９５％の配列同一性など、少なくとも９６％の配列同一性など、少なくとも９７％の配列同一性など、少なくとも９８％の配列同一性など、少なくとも９９％の配列同一性などのポリペプチドである。
別の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントまたはその機能的ホモログであり得、機能的フラグメントはそれらと少なくとも７０％の配列同一性のポリペプチドであり、それらと少なくとも７５％の配列同一性など、少なくとも８０％の配列同一性など、少なくとも８５％の配列同一性など、少なくとも９０％の配列同一性など、少なくとも９５％の配列同一性など、少なくとも９６％の配列同一性など、少なくとも９７％の配列同一性など、少なくとも９８％の配列同一性など、少なくとも９９％の配列同一性などのポリペプチドである。
別の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントまたはその機能的ホモログであり得、機能的フラグメントはそれらと少なくとも７０％の配列同一性のポリペプチドであり、それらと少なくとも７５％の配列同一性など、少なくとも８０％の配列同一性など、少なくとも８５％の配列同一性など、少なくとも９０％の配列同一性など、少なくとも９５％の配列同一性など、少なくとも９６％の配列同一性など、少なくとも９７％の配列同一性など、少なくとも９８％の配列同一性など、少なくとも９９％の配列同一性などのポリペプチドである。
別の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントまたはその機能的ホモログであり得、機能的フラグメントはそれらと少なくとも７０％の配列同一性のポリペプチドであり、それらと少なくとも７５％の配列同一性など、少なくとも８０％の配列同一性など、少なくとも８５％の配列同一性など、少なくとも９０％の配列同一性など、少なくとも９５％の配列同一性など、少なくとも９６％の配列同一性など、少なくとも９７％の配列同一性など、少なくとも９８％の配列同一性など、少なくとも９９％の配列同一性などのポリペプチドである。
別の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントまたはその機能的ホモログであり得、機能的フラグメントはそれらと少なくとも７０％の配列同一性のポリペプチドであり、それらと少なくとも７５％の配列同一性など、少なくとも８０％の配列同一性など、少なくとも８５％の配列同一性など、少なくとも９０％の配列同一性など、少なくとも９５％の配列同一性など、少なくとも９６％の配列同一性など、少なくとも９７％の配列同一性など、少なくとも９８％の配列同一性など、少なくとも９９％の配列同一性などのポリペプチドである。
別の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントまたはその機能的ホモログであり得、機能的フラグメントはそれらと少なくとも７０％の配列同一性のポリペプチドであり、それらと少なくとも７５％の配列同一性など、少なくとも８０％の配列同一性など、少なくとも８５％の配列同一性など、少なくとも９０％の配列同一性など、少なくとも９５％の配列同一性など、少なくとも９６％の配列同一性など、少なくとも９７％の配列同一性など、少なくとも９８％の配列同一性など、少なくとも９９％の配列同一性などのポリペプチドである。
Figure 2018528960
本発明の好ましい実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＣＣＬ２２１〜２２）、
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３（ＣＣＬ２２３〜１１）、
ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（ＣＣＬ２２３〜１２）、
ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１（ＣＣＬ２２１〜２４）、
ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４（ＣＣＬ２２１０〜１９）、および
ｆ）ａ）〜ｄ）のいずれかによるポリペプチドの機能的ホモログ、
からなる群から選択され；機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。
本発明の他のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２の４〜９０個、好ましくは５〜８０個、より好ましくは１０〜７０個、さらにより好ましくは１２〜６０個、さらにより好ましくは１５〜４０個、例えば１８〜２５個などの連続したアミノ酸配列、あるいは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、さらにより好ましくは少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９８％、例えば少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの機能的ホモログを含む（または好ましくは、これらからなる）。
機能的ホモログ
ＣＣＬ２２またはその免疫原性的に活性なフラグメントの機能的ホモログはポリペプチドであり、それらはまた免疫原性的に活性であり、かつＣＣＬ２２、特にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２と少なくともある程度の配列同一性を共有する。
５０個のアミノ酸より短いポリペプチドなど、２５個のアミノ酸より短いなどの、より短いポリペプチドでは、機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列の免疫原性的に活性なポリペプチドであり得る。
あるいは、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２と少なくとも７０％の配列同一性を共有する免疫原性的に活性なポリペプチドであり得、従って、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のヒトＣＣＬ２２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と好ましくは少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％の配列同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、少なくとも９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば少なくとも９９％の配列同一性などを有する。
好ましい実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと少なくとも７０％の配列同一性を共有する免疫原性的に活性なポリペプチドであり、従って、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと好ましくは少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％の配列同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、少なくとも９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば少なくとも９９％の配列同一性などを有する。
好ましい実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと少なくとも７０％の配列同一性を共有する免疫原性的に活性なポリペプチドであり、従って、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと好ましくは少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％の配列同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、少なくとも９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば少なくとも９９％の配列同一性などを有する。
別の好ましい実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと少なくとも７０％の配列同一性を共有する免疫原性的に活性なポリペプチドであり、従って、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと好ましくは少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％の配列同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、少なくとも９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば少なくとも９９％の配列同一性などを有する。
別の好ましい実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと少なくとも７０％の配列同一性を共有する免疫原性的に活性なポリペプチドであり、従って、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと好ましくは少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％の配列同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、少なくとも９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば少なくとも９９％の配列同一性などを有する。
別の好ましい実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと少なくとも７０％の配列同一性を共有する免疫原性的に活性なポリペプチドであり、従って、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと好ましくは少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％の配列同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、少なくとも９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば少なくとも９９％の配列同一性などを有する。
別の好ましい実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと少なくとも７０％の配列同一性を共有する免疫原性的に活性なポリペプチドであり、従って、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと好ましくは少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％の配列同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、少なくとも９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば少なくとも９９％の配列同一性などを有する。
別の好ましい実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと少なくとも７０％の配列同一性を共有する免疫原性的に活性なポリペプチドであり、従って、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと好ましくは少なくとも７５％の配列同一性を有し、例えば少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも８５％の配列同一性など、例えば少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９１％配列の同一性など、例えば少なくとも９１％の配列同一性、少なくとも９２％の配列同一性など、例えば少なくとも９３％の配列同一性、少なくとも９４％の配列同一性など、例えば少なくとも９５％の配列同一性、少なくとも９６％の配列同一性など、例えば少なくとも９７％の配列同一性、少なくとも９８％の配列同一性など、例えば少なくとも９９％の配列同一性などを有する。
いくつかの実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと、少なくとも２個のアミノ酸など、少なくとも３個のアミノ酸など、少なくとも１個のアミノ酸だけ異なる免疫原性的に活性なポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと、少なくとも２個のアミノ酸など、少なくとも３個のアミノ酸など、少なくとも１個のアミノ酸だけ異なる免疫原性的に活性なポリペプチドである。
別の実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと、少なくとも２個のアミノ酸など、少なくとも３個のアミノ酸など、少なくとも１個のアミノ酸だけ異なる免疫原性的に活性なポリペプチドである。
別の実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと、少なくとも２個のアミノ酸など、少なくとも３個のアミノ酸など、少なくとも１個のアミノ酸だけ異なる免疫原性的に活性なポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと、少なくとも２個のアミノ酸など、少なくとも３個のアミノ酸など、少なくとも１個のアミノ酸だけ異なる免疫原性的に活性なポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと、少なくとも２個のアミノ酸など、少なくとも３個のアミノ酸など、少なくとも１個のアミノ酸だけ異なる免疫原性的に活性なポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントと、少なくとも２個のアミノ酸など、少なくとも３個のアミノ酸など、少なくとも１個のアミノ酸だけ異なる免疫原性的に活性なポリペプチドである。
配列同一性は、多くの良く知られているアルゴリズムを用いて、多くの異なるギャップペナルティーを適用して計算できる。配列同一性は、例えば全長ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に対してなど、全長対照配列に対して計算される。任意の配列アラインメントツールが、限定されないがＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＬＡＬＩＧＮなどが、ホモログの探索および配列同一性の計算に使用され得る。さらに、適切な場合、限定されないがＰＡＭ、ＢＬＯＳＳＵＭ、またはＰＳＳＭマトリックスなどの、いずれかの一般的に知られる置換マトリックスが探索アルゴリズムとともに適用され得る。例えば、ＰＳＳＭ（位置特異的スコア化マトリックス）がＰＳＩ−ＢＬＡＳＴプログラムを介して適用され得る。さらに、配列アラインメントは、ギャップの開設および伸長に関する様々なペナルティーを用いて実施され得る。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは５〜１２の範囲でのギャップ開設ペナルティー、および１〜２の範囲でのギャップ伸長ペナルティーとともに使用され得る。
機能的ホモログは、ユビキチン化、標識（例えば、放射性核種、様々な酵素など）、ペグ化（ポリエチレングリコールによる誘導体化）、またはオルニチンなどのアミノ酸の挿入による（または化学合成による置換）などの化学的修飾をさらに含み得るが、これらはヒトタンパク質では通常発生しないが、機能的同等物は化学的修飾を含まないことが好ましい。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２と比べて、あるいはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＣＣＬ２２フラグメントと比べて、アミノ酸残基の配列になされるいずれかの変異は、好ましくは保存的置換である。従来技術の当業者は「保存的」アミノ酸置換を作製して評価する方法を理解しており、これによって１つのアミノ酸は１つ以上の共通の化学的特性および／または物理的特性を有する別のものに置換される。保存的アミノ酸置換はタンパク質の機能性に影響しにくい。アミノ酸は共通の特性に従ってグループ分けされ得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸の所定グループ内の１つのアミノ酸の同一グループ内の他のアミノ酸への置換であり、ここで所定グループ内のアミノ酸は、類似のまたは実質的に類似の特性を示す。
したがって、本発明の一つの実施形態では、ワクチン組成物は８〜５０個のアミノ酸の範囲で、好ましくは８〜１０または２０〜２５個のアミノ酸の範囲でＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２の保存配列からなるポリペプチドを含み、ここで最大で３個のアミノ酸が置換されており、置換は好ましくは保存的である。
ＣＣＬ２２を含むポリペプチドまたはそのフラグメント
本発明のワクチン組成物がＣＣＬ２２またはそのフラグメントのいずれかを含むポリペプチドを含み得ることも、本発明内に含まれる。したがって、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントは、例えば、本明細書において本セクションで説明されるポリペプチドのいずれかであるＣＣＬ２２フラグメントを含むポリペプチドであり得る。
特に、このようなポリペプチドは、セクション「Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２」で本明細書において前述されるＣＣＬ２２のいずれかなどの全長ＣＣＬ２２を含み得る。例えば、ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２、あるいはそれと少なくとも７０％、少なくとも８０％など、例えば少なくとも９０％、少なくとも９５％などの配列同一性を共有する機能的ホモログを含み得る。特に、このようなポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２に加えて、最大で９０個、最大で５０個など、例えば最大で２５個、最大で１０個などのアミノ酸などを含み得る。
ワクチン組成物が、セクション「ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント」で本明細書において前述されるフラグメントのいずれかなどの、ＣＣＬ２２のフラグメントを含むポリペプチドを含み得ることも本発明内に含まれる。このポリペプチドはＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントのいずれかも含み得、これはセクション「ＭＨＣ」で説明されるＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントのいずれかなどの、ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントである。
したがって、当該ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸の連続した配列を含む最大で４００個のアミノ酸のポリペプチドであり得、最大で３００個のアミノ酸など、例えば最大で２００個のアミノ酸、最大で１００個のアミノ酸など、例えば最大で５０個のアミノ酸のポリペプチドであり、ここでＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸のこの連続した配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２からの最大で５０個のアミノ酸残基またはその機能的ホモログからなり、例えば最大で４５個のアミノ酸残基、最大で４０個のアミノ酸残基など、例えば最大で３５個のアミノ酸残基、最大で３０個のアミノ酸残基など、例えば最大で２５個のアミノ酸残基、１８〜２５個の範囲でなど、８〜１０個の範囲で連続したアミノ酸などからなる。
特に、当該ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で特定されるＣＣＬ２２の最大で１００個のアミノ酸残基のポリペプチドであり得、最大で９０個の連続したアミノ酸残基など、最大で８０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で７０個の連続したアミノ酸残基、最大で６０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で５０個の連続したアミノ酸残基、例えば４５個の連続したアミノ酸残基、最大で４０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で３５個の連続したアミノ酸残基、最大で３０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で２５個の連続したアミノ酸残基、１８〜２５個の連続したアミノ酸残基など、２０個の連続したアミノ酸などのポリペプチドあるいはそれらの機能的ホモログであり得、
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＣＣＬ２２１〜２２）、
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３（ＣＣＬ２２３〜１１）、
ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（ＣＣＬ２２３〜１２）、
ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１（ＣＣＬ２２１〜２４）、
ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４（ｍＣＣＬ２２１０〜１９）、
ｆ）表１に記載された配列のいずれか、および
ｇ）ａ）〜ｄ）のいずれかによるポリペプチドの機能的ホモログ、
からなる群から選択される免疫原性的に活性なペプチドを含み、
機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に示される配列を含み、すなわち配列ＶＸＬＶＬＬＡＶＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）を有し、ここでＸはバリンおよびアラニンからなる群から選択され、Ｙはイソロイシンおよびロイシンからなる群から選択される。
当該ポリペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の連続配列を含む、最大で１００個のアミノ酸のポリペプチドでもあり得、最大で５０個のアミノ酸など、例えば最大で３０個のアミノ酸、最大で２０個のアミノ酸など、例えば最大で１５個のアミノ酸のポリペプチドであり、ここでＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸の当該連続配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２からの８〜１０個の範囲で、９または１０個の連続したアミノ酸などからなり、またはこれらの機能的ホモログからなる。したがって、当該ポリペプチドは、
ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＣＣＬ２２１〜２２）、
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３（ＣＣＬ２２３〜１１）、
ｃ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（ＣＣＬ２２３〜１２）、
ｄ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１（ＣＣＬ２２１〜２４）、
ｅ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４（ｍＣＣＬ２２１０〜１９）、
ｆ）表１に記載された配列のいずれか、および
ｇ）ａ）〜ｃ）のいずれかによるポリペプチドの機能的ホモログ、
からなる群から選択される免疫原性的に活性なペプチドを含む、最大で１００個のアミノ酸のポリペプチドであり得、最大で５０個のアミノ酸など、例えば最大で３０個のアミノ酸、最大で２０個のアミノ酸など、例えば最大で１５個のアミノ酸などのポリペプチドであり、機能的ホモログは最大で２個のアミノ酸が置換されているなど、最大で１個のアミノ酸が置換されているなど、最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、免疫原性的に活性なペプチドは、ＶＸＬＶＬＬＡＶＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）のアミノ酸配列を含む最大で１００個のアミノ酸からなり、最大で５０個のアミノ酸など、例えば最大で３０個のアミノ酸、最大で２０個のアミノ酸など、例えば最大で１５個のアミノ酸からなる。特に、当該ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５で特定されるＣＣＬ２２の最大で１００個の連続したアミノ酸残基のポリペプチドであり得、最大で９０個の連続したアミノ酸残基など、最大で８０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で７０個の連続したアミノ酸残基、最大で６０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で５０個の連続したアミノ酸残基、例えば最大で４５個の連続したアミノ酸残基、最大で４０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で３５個の連続したアミノ酸残基、最大で３０個の連続したアミノ酸残基など、例えば最大で２５個の連続したアミノ酸残基、１８〜２５個の連続したアミノ酸残基など、２０個の連続したアミノ酸などのポリペプチドまたはその機能的ホモログであり得、ここで連続した配列はＶＸＬＶＬＬＡＶＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）を含む。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６内で、Ｘはバリンおよびアラニンからなる群から選択され、Ｙはイソロイシンおよびロイシンからなる群から選択されることが好ましい。
ＭＨＣ
ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントが、本セクションで説明されるＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントのいずれかなどの、ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントであり得ることは、本発明内に含まれる。
２つのタイプのＭＨＣ分子があり、ＭＨＣクラスＩ分子およびＭＨＣクラスＩＩ分子である。ＭＨＣクラスＩ分子は、適応免疫反応の主要なエフェクター細胞であるＣＤ８Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面で主に発現され、ＡＰＣの最も重要なものは樹状細胞であると考えられる。ＡＰＣはナイーブＴ細胞、ならびに免疫系における他の細胞を刺激する。それらはＣＤ８Ｔ細胞およびＣＤ４Ｔ細胞の両方を刺激する。
一つの実施形態では、本発明は免疫原性的に活性なＣＣＬ２２ペプチド（より大きなペプチドおよび／またはワクチン組成物中に任意に含まれる）を提供し、ここで当該免疫原性的に活性なＣＣＬ２２ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２由来の８〜１０個の連続したアミノ酸であるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のペプチドフラグメントまたはその機能的フラグメントなどからなるＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントであり、ここで、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６の最大で２個のアミノ酸が置換されており、それらはいくつかの特性の少なくとも１つを有することによって特徴付けられ、その一つはクラスＩ ＨＬＡ分子に結合する能力であり、この分子への結合は、クラスＩ ＨＬＡ分子の最大量の半分を回収できるペプチド量（Ｃ５０値）によって測定されるようなアフィニティーで制限され、これは本明細書で説明されるアセンブリ結合アッセイによって測定される場合に最大５０μＭである。このアセンブリアッセイは、ペプチドトランスポーター欠如細胞株Ｔ２へのペプチドの負荷後のＨＬＡ分子の安定化に基づく。続いて、正しく折り畳まれた安定なＨＬＡ重鎖が構造依存的抗体を用いて免疫沈澱され、ペプチド結合が定量される。この実施形態のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＣＣＬ２２の最大で１００個、好ましくは最大で５０個、より好ましくは最大で２５個、さらにより好ましくは最大で２０個、さらになおより好ましくは最大で１５個、最大で１０個など、例えば８〜１０個の連続したアミノ酸あるいはそれらの機能的ホモログを含み（またはより好ましくは、これらからなる）、ここでＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の最大で２個のアミノ酸が置換されている。
このアッセイは、候補ペプチドを上記アフィニティーで対象のＨＬＡ対立遺伝子分子に結合するそれらの能力についてスクリーニングする簡単な手段を提供する。好ましい実施形態では、本発明のペプチドフラグメントは、最大で３０μＭであるＣ５０値、最大で１０μＭ、最大で５μＭおよび最大で２μＭのＣ５０値を含む最大で２０μＭであるＣ５０値などを有するものである。
別の好ましい実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４などのＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２の新規ＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントまたはその機能的ホモログが提供され、ここでＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の最大で２個のアミノ酸が置換されており（「ペプチド」とも本明細書で呼ばれる）、それらは本明細書で後述されるいくつかの特性の少なくとも１つを有することによって特徴付けられる。この実施形態のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２の４〜９３個、好ましくは８〜９０個、より好ましくは１０〜７５個、なおより好ましくは１２〜６０個、さらにより好ましくは１５〜４０個、１８〜２５個の連続したアミノ酸など、あるいはそれらのホモログを含み（またはより好ましくは、これらからなり）、ここでＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の最大で２個、好ましくは最大で１個のアミノ酸が置換されている。好ましい実施形態では、ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントの４〜１５個、好ましくは５〜１４個、より好ましくは６〜１３個、なおより好ましくは７〜１２個、さらにより好ましくは８〜１１個、８〜１０個など、９個などの連続したアミノ酸を含む（またはより好ましくは、これらからなる）。別の好ましい実施形態では、ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントの４〜９個、好ましくは５〜９個、より好ましくは６〜９個、なおより好ましくは７〜８個、８または９個などの連続したアミノ酸を含む（またはより好ましくは、これらからなる）。別の好ましい実施形態では、ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントの４〜１０個、好ましくは５〜１０個、より好ましくは６〜１０個、なおより好ましくは７〜９個、９または１０個などの連続したアミノ酸を含む（またはより好ましくは、これらからなる）。なお別の好ましい実施形態では、ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントの４〜１５個、好ましくは５〜１４個、より好ましくは６〜１３個、なおより好ましくは７〜１２個、さらにより好ましくは８〜１１個、８〜１０個など、９個などの連続したアミノ酸を含む（またはより好ましくは、これらからなる）。好ましい実施形態では、ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントの４〜１５個、好ましくは５〜１４個、より好ましくは６〜１３個、なおより好ましくは７〜１２個、さらにより好ましくは８〜１１個、８〜１０個など、９個などの連続したアミノ酸を含む（またはより好ましくは、これらからなる）。なお別の好ましい実施形態では、ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントの４〜１０個、好ましくは５〜１０個、より好ましくは６〜１０個、なおより好ましくは７〜１０個、８または９個などの連続したアミノ酸を含む（またはより好ましくは、これらからなる）。なお別の好ましい実施形態では、ペプチドはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＣＣＬ２２ペプチドフラグメントの４〜１０個、好ましくは５〜１０個、より好ましくは６〜１０個、なおより好ましくは７〜１０個、８または９個などの連続したアミノ酸を含む（またはより好ましくは、これらからなる）。
したがって、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２の８〜１０個のアミノ酸の新規ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたは１８〜２５個のアミノ酸の新規ＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントあるいはそれらの機能的ホモログが提供され、ここでＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の最大で２個のアミノ酸が置換されており、それらは本明細書で後述されるいくつかの特性の少なくとも１つを有することによって特徴付けられ、その１つは、それが制限されるクラスＩまたはクラスＩＩ ＨＬＡ分子に結合する能力である。
特定の実施形態では、ペプチドフラグメントが提供され、それは以下の特性：
（ｉ）ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定される場合、１０４個ＰＢＬあたり少なくとも１個の頻度で少なくとも１名の癌患者のＰＢＬ集団中のＩＮＦ−γ産生細胞を誘発できる、および／または
（ｉｉ）エピトープペプチドと反応性であるＣＴＬの腫瘍組織中でｉｎ ｓｉｔｕで検出できる、
（ｉｉｉ）ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の増殖を誘発できる、
の少なくとも１つを有するＭＨＣクラスＩ制限ペプチドまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドである。
本発明によるより好ましいペプチドは、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、例えば本明細書において例１で後述されるＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定されるように特異的Ｔ細胞反応を高めることができるペプチドである。いくつかのペプチドは、それらは高アフィニティーでＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩを結合しないが、ＥＬＩＳＰＯＴによって測定されるときにＴ細胞反応を依然として上昇させ得る。高アフィニティーでＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩを結合できる他のペプチドも、ＥＬＩＳＰＯＴによって測定されるときにＴ細胞反応を上昇させる。両種のペプチドは、本発明による好ましいペプチドである。
従って、本発明による好ましいペプチドは、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定されるときに特異的Ｔ細胞反応を高めることができるペプチドであり、ここで、細胞１０８個あたり、より好ましくは１０７個あたり、さらにより好ましくは１０６個あたり、なおより好ましくは１０５個あたり、１０４個あたりなどで５０個を超えるペプチド特異的スポットが測定される。
本発明による最も好ましいペプチドは、ＣＣＬ２２の発現によって特徴付けられる臨床症状を有する個体における細胞免疫反応を誘発できるペプチドであり、臨床症状は好ましくは癌または感染症、最も好ましくは癌である。
前述のように、ＨＬＡ系はヒト主要組織適合性（ＭＨＣ）系を表す。一般的に、ＭＨＣ系は様々な特性：移植抗原、胸腺依存性免疫反応、特定の補体因子および特定疾患における素因を制御する。より具体的には、ＭＨＣは異なる３種の分子、すなわちクラスＩ、ＩＩおよびＩＩＩ分子をコードし、それはＭＨＣのより全般的な特性を決定する。これらの分子のうち、クラスＩ分子はいわゆるＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＢおよびＨＬＡ−Ｃ分子であり、大部分の核化された細胞および血小板の表面に提示される。
本発明のペプチドは、特定のＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ分子に結合する（によって制限される）それらの能力によって特徴付けられる。したがって、一つの実施形態では、ペプチドは、ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ９、ＨＬＡ−Ａ１０、ＨＬＡ−Ａ１１、ＨＬＡ−Ａｗ１９、ＨＬＡ−Ａ２３（９）、ＨＬＡ−Ａ２４（９）、ＨＬＡ−Ａ２５（１０）、ＨＬＡ−Ａ２６（１０）、ＨＬＡ−Ａ２８、ＨＬＡ−Ａ２９（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａ３０（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａ３１（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａ３２（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａｗ３３（ｗ１９）、ＨＬＡ−Ａｗ３４（１０）、ＨＬＡ−Ａｗ３６、ＨＬＡ−Ａｗ４３、ＨＬＡ−Ａｗ６６（１０）、ＨＬＡ−Ａｗ６８（２８）、ＨＬＡ−Ａ６９（２８）を含むＭＨＣクラスＩＨＬＡ−Ａ分子によって制限されるものである。さらに簡単な呼称が文献全体を通して使用され、例えばＨＬＡ−Ａｗ１９およびＨＬＡ−Ａ２４（４９）の代わりにそれぞれＨＬＡ−１９またはＨＬＡ−Ａ２４のように、主たる数字指定のみが使用される。特定の実施形態では、本発明のペプチドはＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ１１およびＨＬＡ−Ａ２４からなる群から選択されるＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ種で制限される。特定の実施形態では、本発明のペプチドはＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ種であるＨＬＡ−Ａ２またはＨＬＡ−Ａ３によって制限される。
さらに有用な実施形態では、本発明のペプチドは、ＨＬＡ−Ｂ５、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ１２、ＨＬＡ−Ｂ１３、ＨＬＡ−Ｂ１４、ＨＬＡ−Ｂ１５、ＨＬＡ−Ｂ１６、ＨＬＡ−Ｂ１７、ＨＬＡ−Ｂ１８、ＨＬＡ−Ｂ２１、ＨＬＡ−Ｂｗ２２、ＨＬＡ−Ｂ２７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ３７、ＨＬＡ−Ｂ３８、ＨＬＡ−Ｂ３９、ＨＬＡ−Ｂ４０、ＨＬＡ−Ｂｗ４１、ＨＬＡ−Ｂｗ４２、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ４５、ＨＬＡ−Ｂｗ４６およびＨＬＡ−Ｂｗ４７のいずれかを含むＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ−Ｂ分子によって制限されるペプチドである。本発明の特定の実施形態では、本発明のペプチドが結合できるＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ−Ｂ種は、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ１５、ＨＬＡ−Ｂ２７およびＨＬＡ−Ｂ５１から選択される。
さらに有用な実施形態では、本発明のペプチドは、ＨＬＡ−Ｃｗ１、ＨＬＡ−Ｃｗ２、ＨＬＡ−Ｃｗ３、ＨＬＡ−Ｃｗ４、ＨＬＡ−Ｃｗ５、ＨＬＡ−Ｃｗ６、ＨＬＡ−Ｃｗ７およびＨＬＡ−Ｃｗ１のいずれかを含むが限定されないＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ−Ｃ分子によって制限されるペプチドである。
さらに有用な実施形態では、本発明のペプチドは、ＨＬＡ−ＤＰＡ−１、ＨＬＡ−ＤＰＢ−１、ＨＬＡ−ＤＱＡ１、ＨＬＡ−ＤＱＢ１、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＬＡ−ＤＲＢおよびこれらの群におけるすべての対立遺伝子ならびにＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯのいずれかを含むが限定されないＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ分子によって制限されるペプチドである。
特定のＨＬＡ分子に結合する能力を有する可能性があるペプチドの選択は、対象の特定ＨＬＡ分子に結合する既知配列のアラインメントによって行い、これによってペプチド中の特定位置でのいくつかの関連するアミノ酸の優位を明らかにできる。このような優位なアミノ酸残基は本明細書で、「アンカー残基」または「アンカー残基モチーフ」とも呼ばれる。利用可能なデータベースで見出される既知の配列データに基づくそのような比較的簡単な方法によって、特定のＨＬＡ分子に結合する可能性があるペプチドがＣＣＬ２２から導き出される。様々なＨＬＡ分子に関するこのような分析の代表的な例を下表に示す。
Figure 2018528960
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したがって、例として、ＨＬＡ−Ａ３に結合する能力を有する可能性があるナノペプチドは、Ｘａａ−Ｌ−Ｙ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｋ、Ｘａａ−Ｌ−Ｙ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｙ、Ｘａａ−Ｌ−Ｙ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−ＦまたはＸａａ−Ｖ−Ｙ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ｋの配列の一つを有する（Ｘａａはいずれかのアミノ酸残基を示す）。同様な方法で、任意の他のＨＬＡ分子に結合する能力を有する可能性がある配列を設計できる。従来技術の当業者は、対象のＨＬＡ分子に関するさらなる「アンカー残基モチーフ」を特定できるものと認識されるであろう。
本発明のペプチドは、それが由来するＣＣＬ２２の天然の配列である配列を有し得る。しかし、いずれかの対象のＨＬＡ分子に高いアフィニティーを有するペプチドは、例えば前述の方法に基づいて、少なくとも１つのアミノ酸を置換する、欠失させるまたは付加することにより配列を改変することによってそのような天然の配列などから導き出され得、これによって、対象のＨＬＡ分子についてアンカー残基モチーフが特定される。
したがって、有用な実施形態では、本発明のポリペプチドはペプチドを含み、その配列は表に列挙される特定のＨＬＡ対立遺伝子のそれぞれについて、表に示されるようなアミノ酸残基のいずれかを含む。
したがって、本発明のペプチドは、ＣＣＬ２２の連続した配列を含む上記ペプチドのいずれかであり得、ここで、１〜１０個の範囲で、好ましくは１〜５個の範囲で、より好ましくは１〜３個の範囲で、さらにより好ましくは１〜２個の範囲で、なおさらに好ましくは１個のアミノ酸が他のアミノ酸に、好ましくはペプチドが上の表で示される対象のＨＬＡ−Ａ特異的ペプチドの１つ以上の、好ましくはすべてのアンカー残基を含むような方法で交換されている。
本発明の好ましいペプチドが制限される好ましいＨＬＡ種の例は、ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ３、ＨＬＡ−Ａ１１およびＨＬＡ−Ａ２４からなる群から選択されるＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ種を含み、より好ましくはペプチドはＨＬＡ−Ａ３またはＨＬＡ−Ａ２によって制限される。あるいは、好ましいＨＬＡ種はＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ３５、ＨＬＡ−Ｂ４４、ＨＬＡ−Ｂ８、ＨＬＡ−Ｂ１５、ＨＬＡ−Ｂ２７およびＨＬＡ−Ｂ５１からなる群から選択されるＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ−Ｂ種を含む。
本発明のポリペプチドを特定する方法は以下のステップ：特定のＨＬＡ分子、例えば対象集団中で高率で発生する分子を選択するステップ、前述のようにアラインメント分析を実施してＣＣＬ２２タンパク質中の「アンカー残基モチーフ」を特定するステップ、特定されたアンカー残基の１つ以上を含む適切なサイズのペプチドを分離するまたは構築するステップおよび例１で説明されるＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定されるときに１０４個ＰＢＬあたり少なくとも１個の頻度で癌患者のＰＢＬ集団中でＩＮＦ−γ産生細胞を誘発するペプチドの能力について得られるペプチドを試験するステップ、を含む。例えば、癌患者のＰＢＭＣ集団中でＩＮＦ−γ産生細胞を誘発するペプチドの能力は、１０４個のＰＢＭＣあたり少なくとも１個の頻度を有する。
本発明の一つの態様では、８〜１０個のアミノ酸残基よりも長いＣＣＬ２２由来ペプチドが提供される。８〜１０個のアミノ酸よりも長いポリペプチドは、ＨＬＡ分子への結合のためにより短い長さへとプロテアソームによって処理される。このため、８〜１０個のアミノ酸残基長よりも長いポリペプチドを投与するとき、ＣＣＬ２２の「長い」ポリペプチド／タンパク質／タンパク質フラグメント／変異体は、プロテアソームによってサイトゾル中の一連の小さいペプチドへとインビボで処理され得る。プロテアソームによって様々の異なるより短いペプチドへと処理され得る長いペプチドを用いることの利点は、特定のＨＬＡクラスに制限される８〜１０個のアミノ酸の１つのペプチドよりも、より多くのＨＬＡクラスが１つのペプチドによって標的化され得ることである。
驚くべきことに、本発明のペプチドのいくつかは、置換を不必要にするのに十分高いアフィニティーでＭＨＣ分子に結合し、ここで提示されるようにそのまま抗原として使用される。好ましくは、本発明のワクチン組成物は、ＣＣＬ２２タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、全長および部分長ＣＣＬ２２からのポリペプチドフラグメント、さらに変異体、機能的ホモログ、ＣＣＬ２２の連続したペプチドおよびこれらの機能的ホモログの１つ以上を含む。より好ましくは、ワクチン組成物は表１に列挙された配列のいずれかを含む。特に好ましくは、ワクチン組成物はペプチドであるＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＣＣＬ２２１〜２２）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３（ＣＣＬ２２３〜１１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４（ＣＣＬ２２３〜１２）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１ （ＣＣＬ２２１〜２４）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３（ｍＣＣＬ２２１〜２２）またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４（ｍＣＣＬ２２１〜２４）を含む。
本発明のペプチドの重要な特性は、癌および／または感染症（標的細胞）を有する個体のＡＰＣまたは腫瘍／新生物細胞で、ＩＮＦ−γ産生応答性Ｔ細胞、すなわち、ＰＢＬ集団中の特定のペプチドを特異的に認識する細胞毒性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を認識または誘発するその能力である。この活性は個体由来のＰＢＬ、ＰＢＭＣ、ＡＰＣまたは腫瘍細胞をＥＬＩＳＰＯＴアッセイに供することによって容易に測定される。アッセイ前に、アッセイする細胞を試験するペプチドと接触させることにより細胞を刺激することは有効であり得る。好ましくは、本明細書で使用されるＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定されるときに１０４個ＰＢＭＣあたり少なくとも１個の頻度などの１０４個ＰＢＬあたり少なくとも１個の頻度で、ペプチドはＩＮＦ−γ産生Ｔ細胞を誘発または認識できる。より好ましくは、頻度は１０４個ＰＢＬあたり少なくとも５個、最も好ましくは１０４個ＰＢＬあたり少なくとも１０個、１０４個ＰＢＬあたり少なくとも５０または１００個などである。例えば、頻度は１０４個ＰＢＭＣあたり少なくとも５個、最も好ましくは１０４個ＰＢＭＣあたり少なくとも１０個、１０４個ＰＢＭＣあたり少なくとも５０〜１００個などである。
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイはＣＣＬ２２ペプチド特異的Ｔ細胞反応をモニタリングする強力なツールである。ここでの発見が主に意味することは、本発明のペプチドが癌細胞および／またはＣＣＬ２２発現ＡＰＣで発現されＨＬＡ分子と複合体化されるということである。これは、これらの癌細胞をＣＴＬによる破壊に対して感受性にし、癌および感染症と戦うためのＣＣＬ２２免疫の有用性を強調する。ＨＬＡ制限ＣＣＬ２２由来ペプチドエピトープに対するメラノーマ患者由来のＰＢＬ中の自発的ＣＴＬ反応の存在は、ＣＣＬ２２免疫原性ペプチドの免疫療法的可能性を示す。
本発明の実施形態では、本発明のペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＣＣＬ２２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２と少なくとも７０％の同一性を有するその機能的ホモログが発現される臨床症状を有する個体のＰＢＬ集団中でＩＮＦ−γ産生細胞を誘発できる。臨床症状は、好ましくは癌および／または感染症、および最も好ましくは癌である。
個体
本発明のワクチン組成物で治療されるべき個体は、臨床症状を有する個体である。個体は、好ましくは哺乳動物種、最も好ましくはヒトである。個体は任意の年齢であってよく、若年または老年であり得、雄または雌のいずれかであり得る。個体が有する臨床症状は、癌などの新生物疾患、あるいは微生物感染症またはウイルス感染症、例えばＨＩＶなどの感染症であり得る。
本発明の実施形態は、癌の治療、リスクの低下、安定化または予防のためのワクチンを提供する。別の実施形態では、本発明は微生物感染症またはウイルス感染症などの感染症に起因する疾患の治療、リスクの低下、安定化または予防のためのワクチンを提供する。
癌
本発明のワクチン組成物は、臨床症状を予防する、そのリスクを低下する、または治療するために使用され得る。好ましくは、臨床症状はＣＣＬ２２の発現と関連するまたはこれによって特徴付けられる。ＣＣＬ２２はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２で特定されるＣＣＬ２２であり得、または野生型のこれらと少なくとも７０％の同一性を共有するホモログであり得るが、必ずしも機能的である必要はない。従って、ＣＣＬ２２の発現量（発現は、例えばｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡ、前駆体タンパク質、完全に処理されたタンパク質の発現である）は、臨床症状を有さない個体と同等以上である。
本発明の一つの実施形態では、臨床症状は、前新生物または新生物障害などの増殖性障害である。本発明の好ましい実施形態では、臨床症状は癌である。癌（悪性新生物）は、一群の細胞が制御不能な増殖（正常限度を超えた増殖および分裂）、浸潤（隣接細胞への進入およびその破壊）、および時には転移（リンパまたは血液を介した体の他の部位への拡散）の特徴を示す疾患のクラスである。癌のこれらの３種の悪性特質は、それらを良性腫瘍と区別し、良性腫瘍は自己限定的であり、侵入または転移しない。ほとんどの癌は腫瘍を形成するが、白血病などある種のものは形成しない。
本発明のワクチンの投与によって治療され、管理されおよび／または予防され得る癌の例として示される癌の非限定的な群は、結腸癌、乳癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛上皮腫、精上皮腫、胚性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリア芽腫、ニューロノーマ、頭蓋咽頭腫、神経鞘腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽腫、網膜芽腫、白血病およびリンパ腫、急性リンパ性白血病および急性骨髄球性真性赤血球増加症、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、および重鎖病、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、直腸癌、尿生殖器癌、子宮癌、口腔癌、皮膚癌、胃癌、脳腫瘍、肝臓癌、喉頭癌、食道癌、乳房腫瘍、小児無効急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、胸腺ＡＬＬ、Ｂ細胞ＡＬＬ、急性骨髄性白血病、骨髄単球性白血病、急性巨核球性白血病、バーキットリンパ腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、Ｔ細胞白血病、小型および大型非小細胞肺癌、急性顆粒球性白血病、胚細胞腫瘍、子宮内膜癌、胃癌、頭頸部癌、慢性リンパ性白血病、有毛細胞性白血病ならびに甲状腺癌を含む。
好ましい実施形態では、本発明によるワクチン組成物は被験体において臨床応答を誘発でき、ここで、臨床応答は安定型疾患によって特徴付けられ得、好ましい実施形態では、臨床応答は部分奏効によって特徴付けられ得、または好ましくは臨床応答は癌の完全寛解によって特徴付けられ得る。好ましくは、癌は、メラノーマ、乳癌、卵巣癌、肺癌、膵臓癌、血液癌（白血病など）、結腸癌および腎細胞癌からなる群から選択される。
本発明の一つの態様では、ワクチン組成物は個体において臨床応答を誘発できる。一つの実施形態では、臨床応答は安定型疾患（さらに悪化または進行しない）によって特徴付けられ得、好ましい実施形態では、臨床応答は部分奏効によって特徴付けられ得、好ましくは臨床応答は癌または感染症の完全寛解によって特徴付けられ得る。臨床応答は本明細書において後述されるように測定され得る。
本発明の別の態様では、ワクチン組成物は被験体において臨床応答を誘発でき、ここで臨床応答は最大標的病変の最長直径の合計の低下によって特徴付けられる。低下は本明細書において後述されるように測定され得る。
すべての病変器官を代表する、器官あたり最大で５個の病変および合計で１０個の病変までのすべての測定可能な病変が、標的病変として特定され、記録されベースラインで測定されなければならない。
・標的病変はそれらのサイズ（最長直径を有する病変）および正確な反復測定（画像技術によるまたは臨床的にいずれか）に関するそれらの適合性に基づいて選択される。
・すべての標的の最長直径（ＬＤ）の合計が計算され、ベースライン合計ＬＤとして報告される。ベースライン合計ＬＤは対象腫瘍を特徴付けする対照として使用される。
・すべての他の病変（または疾患部位）が非標的病変として特定され、ベースラインとして記録もされる。これらの病変の測定は必要とされないが、それぞれの有無は経過観察を通して注意されるべきである。
標的病変の評価
・完全奏効（ＣＲ）：すべての標的病変の消失
・部分奏効（ＰＲ）：ベースライン合計ＬＤを対照としたとき、標的病変のＬＤ合計における少なくとも３０％の低下
・進行疾患（ＰＤ）：治療が開始されてから記録されたＬＤの最小合計を対照として、標的病変のＬＤ合計における少なくとも２０％の増加、または１つ以上の新規病変の出現
・安定疾患（ＳＤ）：治療が開始されてからＬＤの最小合計を対照として、ＰＲとみなすには縮小が十分でなく、ＰＤとみなすには増加が十分でない
非標的病変の評価
・完全奏効（ＣＲ）：すべての非標的病変の消失および腫瘍マーカー量の正常化
・不完全奏効／安定疾患（ＳＤ）：１つ以上の非標的病変の持続、および／または正常限度を超える腫瘍マーカー量の維持
・進行疾患（ＰＤ）：１つ以上の新規病変の出現、および／または現存非標的病変の明白な進行
本発明の一つの実施形態では、本明細書で言及されるタンパク質および／またはポリペプチドのいずれかを含むワクチン組成物は、被験体において臨床応答を誘発でき、ここで臨床応答は最大標的病変の最長直径の合計における低下によって特徴付けられる。
本発明のワクチン組成物は、ＣＣＬ２２を発現する癌を有する個体に投与された場合、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のＣＣＬ２２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２と少なくとも７０％の同一性を有するその機能的ホモログを発現する癌に対する免疫応答を誘発できると考えられる。本発明のワクチン組成物は、ワクチン接種された個体中で、癌細胞であるＣＣＬ２２発現ＡＰＣに対する細胞毒性効果を有するエフェクターＴ細胞の産生を誘発でき、および／または被験体における腫瘍間質での抗原特異的Ｔ細胞の浸潤を誘発できる。
ＰＢＬ集団中の免疫応答を誘発するそれらの能力に加え、本発明のペプチドはｉｎ ｓｉｔｕで、すなわち固形腫瘍組織中で細胞溶解性免疫応答を誘発できることも考慮される。これは、例えば多量体化され検出可能な標識を備えたＨＬＡ−ペプチド複合体を調製すること、および免疫組織化学染色用のこのような複合体を用いて腫瘍組織中の本発明のエピトープペプチドと反応性であるＣＴＬを検出することによって実証され得る。従って、本発明のペプチドのさらなる重要な特性は、エピトープペプチドと反応性であるＣＴＬを腫瘍組織中でｉｎ ｓｉｔｕ検出できることである。
本発明のペプチドが、ＨＬＡ分子へ結合し細胞表面上でＨＬＡとペプチドの複合体の提示をもたらし、この複合体が今度は細胞溶解性Ｔ細胞のエピトープまたは標的として作用する、それらの能力に加え、複合体に対する抗体の産生および／または遅延型過敏性（ＤＴＨ）反応を生じるＢ細胞応答などの、他のタイプの免疫応答を誘発し得るということもまた考慮される。免疫応答の後者のタイプは、本発明のペプチドの注入部位での発赤および触知可能な硬化として特徴付けられる。
癌の予防、リスクの低下または治療のために、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣ−Ｃモチーフケモカイン２２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の同一性を有するそれらの機能的ホモログ、またはこのＣＣＬ２２の連続した配列を含む免疫原性的に活性なペプチドフラグメントまたはそれらの機能的ホモログ、あるいはこのＣＣＬ２２またはこのペプチドフラグメントをコードする核酸、ならびにアジュバントを含むワクチン組成物を提供することが本発明の目的である。
癌併用療法
いくつかの例では、本発明の治療方法を、化学療法、放射線療法、免疫刺激物質による治療、遺伝子療法、抗体による治療および樹状細胞を用いる治療などのさらなる癌治療と組み合わせることが適切である。
腫瘍細胞におけるＣＣＬ２２の高発現は免疫系の阻害をもたらすため、本発明によって開示されるＣＣＬ２２をベースとした免疫療法と細胞毒性化学療法および／または別の抗癌免疫療法治療との組み合わせは、癌を治療する効果的な方法である。これらの治療薬は本明細書において、「第二有効成分」とも呼ばれる。
本発明のワクチン組成物との併用投与（連続的または同時的）について関連する化学療法剤の例は、限定されないが、全トランスレチノイン酸、アクチミド、アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロスポラミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エリルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イリノテカン、レナリドマイド、ロイコボリン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、レブリミド、テモゾロミド、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビンを含む。一つの実施形態では、本薬剤の組み合わせで使用するための化学療法剤は、それ自体、異なる化学療法剤の組み合わせであり得る。適切な組み合わせは、ＦＯＬＦＯＸおよびＩＦＬを含む。ＦＯＬＦＯＸは５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、およびオキサリプラチンを含む組み合わせである。ＩＦＬ治療はイリノテカン、５−ＦＵ、およびロイコボリンを含む。
別の第二有効成分は、腫瘍の治療における別々の、同時の、または組み合わせた使用のためのキナーゼ阻害剤であり得る。適切なキナーゼ阻害剤は、抗腫瘍活性を有することが認められているもの（ゲフィチニブ（イレッサ）およびエルロチニブ（タルセバ）など）およびペプチドと組み合わせて使用され得るものが含まれる。腎細胞癌の治療に効果的であることが認められているリンゴ酸スニチニブおよびソラフェニブなどの、受容体チロシンキナーゼ阻害剤も第二有効成分として使用されるのに適している。
第二有効成分のさらなる例は、サイトカインおよび抗体などの免疫刺激物質である。このようなサイトカインは、限定されないが、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｉ型ＩＦＮ、インターロイキン２１、インターロイキン２、インターロイキン１２およびインターロイキン１５からなる群から選択され得る。抗体は、好ましくは、抗ＣＤ４０または抗ＣＴＬＡ−４抗体などの免疫刺激抗体である。免疫刺激物質は、免疫阻害細胞（調節Ｔ細胞など）または因子を枯渇させることができる物質でもあり得、この物質は例えばＥ３ユビキチンリガーゼであり得る。Ｅ３ユビキチンリガーゼ（ＨＥＣＴ、ＲＩＮＧおよびＵ−ｂｏｘタンパク質）は、免疫細胞機能の主要分子調節因子として浮上しており、それぞれはタンパク質溶解性破壊のために特異的阻害分子を標的にすることによって感染の際に免疫応答の調節に含まれ得る。
いくつかのＨＥＣＴおよびＲＩＮＧ Ｅ３タンパク質は、免疫自己寛容の誘発および維持と現在結び付けられてもおり、ｃ−Ｃｂｌ、Ｃｂｌ−ｂ、ＧＲＡＩＬ、ＩｔｃｈおよびＮｅｄｄ４はそれぞれ、Ｔ細胞増殖因子の産生および増殖を負に調節する。
一つの実施形態では、ＣＣＬ２２由来ポリペプチドを含む本発明のワクチン組成物は、免疫刺激物質のような第二有効成分と組み合わせて投与される。免疫刺激物質は、好ましくは、ＩＬ−２１またはＩＬ−２などのインターロイキンあるいは化学療法剤である。
本発明のワクチン組成物は、ＣＣＬ２２に加えてさらに１種類以上の追加抗原も含み得る。当該抗原は、例えば、癌関連タンパク質由来の免疫原性的に活性なペプチドであり得る。
したがって、本発明のワクチン組成物は、ＣＣＬ２２および／またはその免疫原性的に活性なペプチドフラグメントに加えて、
１）インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）
２）ＩＤＯの免疫原性的に活性なペプチドフラグメント
３）１）または２）の機能的ホモログ
４）１）、２）または３）を含むポリペプチド
５）１）、２）、３）または４）のいずれかをコードする核酸
の１つ以上も含み得る。
このＩＤＯは、特に、ＷＯ２００９／１４３８４３のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＩＤＯ、ＷＯ２００９／１４３８４３のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のＩＤＯ、ＷＯ２００９／１４３８４３のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のＩＤＯ、ＷＯ２００９／１４３８４３のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＩＤＯまたはＷＯ２００９／１４３８４３のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６のＩＤＯであり得る。ＩＤＯの有用な免疫原性的に活性なペプチドフラグメントは、本発明のワクチン組成物中に含まれてよく、ＷＯ２００９／１４３８４３に記載されている。
本発明のワクチン組成物は、ＣＣＬ２２および／またはこの免疫原性的に活性なペプチドフラグメントに加えて、
１）ＰＤ−Ｌ１
２）ＰＤ−Ｌ１の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント
３）１）または２）の機能的ホモログ
４）１）、２）または３）を含むポリペプチド
５）１）、２）、３）または４）のいずれかをコードする核酸
の１つ以上も含み得る。
このＰＤ−Ｌ１は、特に、ＷＯ２０１３／０５６７１６のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＰＤ−Ｌ１であり得る。ＰＤ−Ｌ１の有用な免疫原性的に活性なペプチドフラグメントは、本発明のワクチン組成物中に含まれてよく、ＷＯ２０１３／０５６７１６に記載されている。
本発明のワクチン組成物は、ＣＣＬ２２および／またはこの免疫原性的に活性なペプチドフラグメントに加えて、
１）トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＴＤＯ）
２）ＴＤＯの免疫原性的に活性なペプチドフラグメント
３）１）または２）の機能的ホモログ
４）１）、２）または３）を含むポリペプチド
５）１）、２）、３）または４）のいずれかをコードする核酸
の１つ以上も含み得る。
このＴＤＯは、特に、本発明者らによって出願された係属出願「Ｖａｃｃｉｎｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ２，３−ｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｏｒ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｔｈｅｒｅｏｆ（トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼまたはこのフラグメントを含むワクチン組成物）」のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＴＤＯであり得る。ＴＤＯの有用な免疫原性的に活性なペプチドフラグメントは、本発明のワクチン組成物中に含まれてよく、当該係属出願に記載されている。
感染症
本発明の別の実施形態では、本明細書で開示されるワクチン組成物は炎症性症状の治療または予防のためのものである。
本明細書で使用される用語「炎症性症状」は、炎症などの、免疫応答を引き起こすあらゆる種類の臨床症状に関連し、従って感染性疾患、慢性感染症、自己免疫症状およびアレルギー性炎症を含む。このため、感染性疾患、慢性感染症、自己免疫症状およびアレルギー性炎症などの炎症性症状は、すべて本発明と関連する臨床症状であり、同様にこの記載に従って扱われる。
炎症は病原体、損傷した細胞、または刺激物質などの有害な刺激に対する血管組織の複合的な生物学的応答である。それは、有害な刺激を取り除きかつ組織に関する治癒過程を開始するための、生物による防護的試みである。炎症は急性または慢性のいずれかに分類できる。急性炎症は有害な刺激に対する体の最初の応答であり、リンパ漿および白血球の血液から損傷組織への増加した移動によって達成される。生化学的事象のカスケードは、局所血管系、免疫系、および損傷組織内の様々な細胞を含む炎症応答を増加させ成熟させる。長期化した炎症は慢性炎症として知られ、炎症部位に存在するタイプの細胞に進行性変化をもたらし、かつ炎症過程からの組織の同時的な破壊および治癒によって特徴付けられる。いずれの場合でも、ＣＣＬ２２はＡＰＣなどの免疫系の細胞によって発現され、従って感染症および炎症は、本発明のワクチン組成物の投与によって、治療され、予防され、またはそのリスクが低下され得る臨床症状である。ワクチン組成物は、好ましくは、ＣＣＬ２２タンパク質、それに由来するタンパク質フラグメント、ポリペプチドまたはペプチド、あるいはこれらのいずれかの機能的ホモログを含む。
本発明と関連する炎症を伴う障害の例は、限定されないが、アレルギー性炎症、喘息、自己免疫疾患、慢性炎症、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、感染性疾患、炎症性大腸疾患、骨盤炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、移植拒絶、および血管炎を含む。
慢性炎症
慢性炎症は、本発明に特に関連するものである。慢性炎症は、同時的な活動性炎症、組織破壊、および修復の試みによって特徴付けられる病的状態である。慢性的に炎症化した組織は、単核免疫細胞（単球、マクロファージ、リンパ球、および形質細胞）の浸潤、組織破壊、および治癒の試みによって特徴付けられ、これは血管形成および線維化を含む。
急性炎症では、刺激の除去が炎症化組織への単球（これは適切な活性化によってマクロファージになる）の動員を休止させ、現存するマクロファージがリンパ管を介して組織から出ていく。しかし慢性的な炎症化組織では、刺激が持続し、従って単球の動員が維持され、現存するマクロファージが所定の部位に係留され、かつマクロファージの増殖が刺激される（特にアテローム性プラークにおいて）。
慢性炎症の予防、リスクの低下または治療のために、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の同一性を有するそれらの機能的ホモログ、またはこのＣＣＬ２２の連続した配列を含む免疫原性的に活性なペプチドフラグメントまたはそれらの機能的ホモログ、またはこのＣＣＬ２２もしくはこのペプチドフラグメントをコードする核酸、ならびにアジュバントを含むワクチン組成物を提供することが本発明の目的である。
感染性疾患
本発明のワクチン組成物は、臨床症状を予防する、臨床症状からのリスクを低下するまたは臨床症状を治療するために使用され得る。本発明の好ましい実施形態では、臨床症状は感染性疾患である。感染性疾患は、感染性疾患を有する個体におけるＣＣＬ２２の発現増加を誘発できる細菌、ウイルス、寄生虫および／または真菌などのいずれかの感染性媒介物によって増進され得、好ましくは、感染性疾患は慢性疾患であり、あるいは慢性疾患になるリスクがある。本発明の背景で説明されたように、ＣＣＬ２２の発現増加は、ＣＣＬ２２を発現する生体の付近の微生物病原体に、それからトリプトファンを奪うことによって迅速な効果を有する。しかし、この方法は、ＣＣＬ２２発現細胞がＡＰＣである場合、増加したＣＣＬ２２発現がＴｒｅｇ細胞の活性阻害を誘発するので逆効果になる。従って、感染性病原体によって生じる疾患の治療、（重篤度を低下させる）安定化の改善および／または予防のために、ＣＣＬ２２タンパク質、タンパク質フラグメント、ペプチドおよび／またはそれらのいずれかの変異体を含むワクチン組成物を提供することが本発明の一つの態様である。
感染性疾患はウイルスによって生じ得、本発明のワクチン組成物がその治療で投与され得るウイルス性疾患は、限定されないが以下ののウイルス性疾患：ＨＩＶ、ＡＩＤＳ、ＡＩＤＳ関連合併症、水痘（水疱瘡）、感冒、サイトメガロウイルス感染症、コロラドダニ熱、デング熱、エボラ出血性熱、手足口病、肝炎、単純疱疹、帯状疱疹、ＨＰＶ（ヒトパピローマウイルス）、インフルエンザ（Ｆｌｕ）、ラッサ熱、はしか、マールブルグ出血熱、感染性単核症、おたふくかぜ、ノロウイルス、ポリオ、進行性多巣性白質脳症、狂犬病、風疹、ＳＡＲＳ、天然痘（痘瘡）、ウイルス性脳炎、ウイルス性胃腸炎、ウイルス性髄膜炎、ウイルス性肺炎、西ナイル病、および黄熱病を含む。好ましくは、ワクチン組成物は、ＨＩＶ／ＡＩＤＳおよび癌を生じ得るウイルス性感染症を有する個体に投与される。ヒト癌と関連する主なウイルスは、ヒトパピローマウイルス、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、およびヒトＴリンパ球向性ウイルスであり、このためこれらのウイルス感染症の治療または治療の一部として投与されることが本発明の目的である。
本発明と関連する細菌感染の例は、限定されないが、炭疽病、細菌性髄膜炎、ボツリヌス菌中毒、ブルセラ症、カンピロバクター感染症、猫スクラッチ病、コレラ、ジフテリア、流行性発疹チフス、淋病、膿痂疹、レジオネラ症、ライ病（ハンセン病）、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病、類鼻疽、リューマチ熱、ＭＲＳＡ感染症、ノカルジア症、パータシス（百日咳）、ペスト、肺炎球菌肺炎、オウム病、Ｑ熱、ロッキー山脈脳脊髄膜炎（ＲＭＳＦ）、サルモネラ症、猩紅熱、細菌性赤痢、梅毒、破傷風、トラコーマ、結核、野兎病、腸チフス、発疹チフス、および泌尿器管感染症を含む。細菌性感染症の治療および／または予防および／またはリスクの低下のためにワクチンを提供することが本発明の目的である。
限定されないが、アフリカトリパノソーマ症、アメーバ症、回虫病、バベシア症、シャガス病、肝吸虫症、クリプトスポリジウム症、嚢虫症、裂頭条虫症、メジナ虫症、エキノコックス症、蟯虫症、肝蛭症、肥大吸虫症、フィラリア病、自由生活アメーバ感染症、ランブル鞭毛虫症、顎口虫症、膜様条虫症、イソスポーラ症、カラアザール、リーシュマニア症、マラリア、横川吸虫症、ハエウジ病、オンコケルカ症、シラミ寄生症、ギョウチュウ感染症、疥癬、住血吸虫病、条虫症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、旋毛虫症、旋回虫病、鞭虫症、トリコモナス症、およびトリパノソーマ症などの寄生虫感染病；限定されないが、アスペルギルス症、分芽菌症、カンジダ症、コクシジオイデス、クリプトコッカス症、ヒストプラスマ症、足白癬などの真菌感染病；限定されないが、伝染性海綿状脳症、牛海綿状脳症、クロイツフェルト−ヤコブ病、クールー−家族性致死性不眠症、およびアルパース症候群などのプリオン伝染病の治療および／または予防および／またはリスクの低下のためにワクチン組成物を提供することが本発明のさらなる態様であり、このため、これらの寄生虫、真菌またはプリオンによって生じる感染症の治療または治療の一部として投与されることが本発明の目的である。
感染性疾患併用療法
本発明に従うワクチン組成物の投与によるいずれかの感染性疾患の治療が、さらなる（第二）有効成分と併用して、あるいは抗生物質治療、化学療法、免疫刺激物質による治療、樹状細胞を用いる治療、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤などのさらなる治療と組み合わせて与えられ得ることがさらに提供される。
本発明のワクチンと組み合わせて感染性疾患の治療で使用され得る第二有効成分の例は、限定されないが、抗生物質を含む。本明細書において用語抗生物質は抗細菌、抗真菌、抗ウイルスおよび／または抗寄生虫活性を有する物質を指し、本発明と関連する例は、限定されないが、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルミシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、エルタペネム、イミペネム、メロペネム、クロラムフェニコール、フルオロキノロン、シプロフロキサシン、ガチフロキサイシン、ゲミフロキサシン、グレパフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モルキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、トロバフロキサシン、グリコペプチド、バンコマイシン、リンコサミド、クリンダマイシン、マクロライド／ケトライド、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファロチン、セファピリン、セフラジン、セファクロール、セファマンドール、セフォニシド、セフォテタン、セホキシチン、セフプロジル、セフロキシム、ロラカルベフ、セフジニル、セフジトレン、セフィキシム、セホペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフェピム、モノバクタム、アズトレオナム、ニトロイミダゾール、メトロニダゾール、オキサゾリジノン、リネゾリド、ペニシリン、アモキシシリン、アモキシシリン／クラブラン酸、アンピシリン、スルバクタム、バカンピシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、メチシリン、メズロシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ピペラシリン／タゾバクタム、チカルシリン、チカルシリン／クラブラン酸、ストレプトグラミン、キノプリスチン、ダルフォプリスチン、スルフォンアミド／スルファメトキサゾール、トリメトプリム、テトラサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、テトラサイクリン、アゾール抗真菌剤クロトリマゾールフルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、ボリコナゾール、アンホテリシンＢ、ナイスタチン、エキノカンディン、カスポファンギン、ミカファンギン、シクロピロックス、フルシトシン、グリセオフルビン、およびテルビナフィンを含む。さらに関連するものは、ビダラビン、アシクロビル、ガンシクロビル、およびバルサイト（バルガンシクロビル）、ヌクレオシドアナログ逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）であるＡＺＴ（ジドブジン）、ｄｄＩ（ディダノシン）、ｄｄＣ（ザルシタビン）、ｄ４Ｔ（スタブジン）、３ＴＣ（ラミブジン）、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）であるネビラピン、デラビルジン、プロテアーゼ阻害剤であるサキナビル、リトナビル、インジナビル、ネルフィナビル、リバビリン、アマンタジン／リマンタジン、リレンザおよびタミフル、プレコナリル、インターフェロンなどの抗ウイルス剤である。
一つの実施形態では、本発明は少なくとも１種類の抗生物質と組み合わせた感染性疾患の治療のための、ＣＣＬ２２由来タンパク質、ポリペプチドおよび／またはそれらの機能的ホモログを含むワクチン組成物に関する。好ましくは、本発明のワクチン組成物はＨＩＶなどの慢性感染症の治療のために使用され、従って抗ウイルス剤などの上に列挙した抗生物質のいずれかと組み合わせて使用される。
自己免疫疾患
自己免疫疾患は、生物がそれ自体の構成部分（分子以下レベルまで）を自己として認識できない場合に起こり、これはそれ自体の細胞および組織に対する免疫応答をもたらす。このような異常な免疫応答から生じるあらゆる疾患は自己免疫疾患と呼ばれ、本発明と関連するものである。この例は、限定されないが、セリアック病、１型糖尿病（ＩＤＤＭ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、多発性硬化症（ＭＳ）、橋本甲状腺炎、グレーブス病、特発性血小板減少症紫斑病、および関節リウマチ（ＲＡ）を含む。
自己免疫疾患の予防、自己免疫疾患からのリスクの低下または自己免疫疾患の治療のために、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の同一性を有するそれらの機能的ホモログ、またはこのＣＣＬ２２の連続した配列を含む免疫原性的に活性なペプチドフラグメントまたはそれらの機能的ホモログ、またはこのＣＣＬ２２もしくはこのペプチドフラグメントをコードする核酸、ならびにアジュバントを含むワクチン組成物を提供することが本発明の目的である。
自己免疫疾患併用治療
自己免疫疾患の現在の治療は通常、免疫抑制、抗炎症、または緩和である。食事操作はセリアック病の重篤度を制限する。ステロイドまたはＮＳＡＩＤ治療は多くの疾患の炎症徴候を制限する。免疫グロブリンの静脈内調製物（ＩＶＩＧ）は慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）およびギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）に使用される。ＴＮＦα拮抗剤エタネルセプトなどの、より特定的な免疫調節療法は、ＲＡを治療するのに有用であることが示されている。これらの免疫療法は、感染に対する感受性などの、有害影響のリスク増加と関連し得る。
寄生虫療法はこれらの観察に基づいて開発され、特定の腸管寄生線虫（蠕虫類）による個体の接種を含む。現在２種の密接に関連した利用可能な治療があり、鉤虫として一般的に知られているアメリカ鉤虫、またはブタ鞭中卵として一般的に知られているトリクリス・スイス卵のいずれかによる接種である。この方法がクローン病、潰瘍性大腸炎、喘息、アレルギー、多発性硬化症、および慢性炎症性障害を含む、様々な自己免疫障害を治療するのに非常に効果的であることを実証する調査が入手可能である。
一つの実施形態では、本明細書で開示されるワクチンは、自己免疫疾患に対する上記薬剤および治療のいずれかなどの第二有効成分と組み合わせて使用される。
アレルギー性炎症
アレルギーはしばしばアトピーとも呼ばれる免疫系の障害である。アレルギー反応はアレルゲンとして知られる環境物質に対して生じ、これらの反応は後天的で予測可能であり急激である。厳密には、アレルギーは過敏症の４つの型の一つであり、Ｉ型（または即時型）過敏症と呼ばれる。それは、ＩｇＥとして知られる抗体型による、マスト細胞および好塩基球と呼ばれる特定の白血球細胞の過剰な活性化によって特徴付けられ、極度の炎症応答を生じる。一般的なアレルギー反応は、湿疹、じんま疹、花粉症、喘息、食物アレルギー、およびスズメバチおよびミツバチなどの刺咬昆虫の毒液に対する反応が含まれる。
アレルギー性炎症は、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎およびいくつかの眼のアレルギー疾患を含むいくつかの障害または医学的状態の重要な病態生理学的特性である。
アレルギー性炎症の予防、アレルギー性炎症からのリスクの低下またはアレルギー性炎症の治療のために、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の同一性を有するそれらの機能的ホモログ、またはこのＣＣＬ２２の連続した配列を含む免疫原性的に活性なペプチドフラグメントまたはそれらの機能的ホモログ、またはこのＣＣＬ２２もしくはこのペプチドフラグメントをコードする核酸、ならびにアジュバントを含むワクチン組成物を提供することが本発明の目的である。
アレルギー性炎症併用治療
２つのタイプの治療がアレルギー性炎症の治療に利用可能であり、薬物療法および免疫療法である。
薬物療法は、アレルギーメディエーターの作用をブロックするため、または細胞の活性化および脱顆粒化過程の活性化を防止するための拮抗剤の利用である。これらは、抗ヒスタミン剤、コルチゾン、デキサメタゾン、ハイドロコルチゾン、エピネフリン（アドレナリン）、テオフェリン、クロモリンならびに、モンテルカスト（シングレア）またはザフィルルカスト（アコレート）などの抗ロイコトリエン剤を含み、抗コリン剤、充血緩和剤、マスト細胞安定化剤、および好酸球化学遊走を低下すると考えられる他の化合物も一般的に使用される。
免疫療法は、個体が問題のアレルゲンを漸進的に増加する用量で徐々にワクチン接種される、脱感作化または減感作化治療である。免疫療法の第二のタイプは、モノクローナル抗ＩｇＥ抗体の静脈内注入を含む。第三のタイプである舌下免疫療法は、食物および常在菌などの非病原性抗原に対する経口免疫寛容を利用する経口投与療法である。
一つの実施形態では、本明細書で開示されるワクチンは、アレルギー性炎症に対する上記の薬剤または治療のいずれかなどの第二有効成分と組み合わせて使用される。
医薬組成物
本発明は、個体においてＣＣＬ２２と関連する臨床障害を治療、そのリスクを低下および／または予防できる医薬組成物に関する。当該医薬組成物は特にワクチン組成物であり得る。本発明のワクチン組成物はタンパク質、ポリペプチドおよび／または核酸分子などの抗原を含む「伝統的」ワクチン組成物であり得る。それらは、個体に由来し後に処理される改変細胞などの細胞を含む組成物、あるいは抗体またはＴＣＲなどの複合体分子を含む組成物の形態であってもよい。
一般的に、ワクチンは、個体中で免疫応答を誘発できる物質または組成物である。本組成物は以下の：抗原（例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、核酸など）などの「活性成分」、いくつかのエレメントの中で特に１種類以上の抗原を含む核酸構築体、細胞（例えば負荷ＡＰＣ、養子移入ａｓｏ用のＴ細胞）、複合分子（抗体、ＴＣＲおよびＭＨＣ複合体など）、キャリア、アジュバントおよび医薬品用担体の１種類以上を含み得る。次に、本発明によるワクチン組成物の様々な成分がより詳細に開示される。
本発明のワクチン組成物は、癌および／または感染症（ＣＣＬ２２の発現をもたらす）を有する個体に投与された場合、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の同一性を有するその機能的ホモログを発現する癌、ＤＣまたはＡＰＣに対する免疫応答を誘発できる。好ましい実施形態では、臨床症状は癌である。本発明のワクチン組成物は、ワクチン接種された個体において、癌細胞に対する細胞毒性効果を有するエフェクターＴ細胞、ならびにＣＣＬ２２を発現するＡＰＣおよびＤＣの産生を誘発でき、および／または被験体中の腫瘍間質で抗原特異的Ｔ細胞浸潤を誘発できる。
抗原および他の活性成分
タンパク質／ポリペプチドをベースとしたワクチン組成物
本発明のペプチドは、それらが本明細書で提示されるように抗原としてそのまま使用できる。好ましくは、本発明のワクチン組成物は以下の：
１）本明細書においてセクション「Ｃ−Ｃモチーフケモカイン２２」で説明されるＣＣＬ２２のいずれか、特にヒトまたはネズミＣＣＬ２２であり得るＣ−Ｃモチーフケモカイン２２（ＣＣＬ２２）；
２）本明細書において後述のセクション「ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント」で説明されるペプチドのいずれかであり得る、ＣＣＬ２２のアミノ酸の連続した配列を含むＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント；
３）セクション「ＭＨＣ」で説明されるＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントのいずれかなどの、ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントである、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント；
４）１）、２）および３）に基づくポリペプチドの機能的ホモログ；
５）本明細書においてセクション「ＣＣＬ２２またはこのフラグメントを含むポリペプチド」で後述されるポリペプチドのいずれかであり得る、１）、２）、３）および４）に基づくポリペプチドのいずれかを含むポリペプチド；
６）１）、２）、３）および４）に基づくポリペプチドのいずれかをコードする核酸、
の１種類以上を含む。
本発明のワクチン組成物における抗原の選択は、従来技術の当業者によって測定可能なパラメータに依存する。言及されているように、本発明の異なるペプチドのそれぞれは、特定のＨＬＡ分子によって細胞表面に提示される。そのため、治療される被験体がＨＬＡ表現型に関してタイプ化されている場合、その特定のＨＬＡに結合することが知られている１つのペプチド／複数のペプチドが選択される。あるいは、対象の抗原は所定の集団中の様々なＨＬＡ表現型の優勢度に基づいて選択される。例として、ＨＬＡ−Ａ２は白色人種集団中で最も優勢な表現型であり、従って、ＨＬＡ−Ａ２に結合するペプチドを含む組成物がこの集団の大部分で有効である。さらに、本発明の抗原／ペプチドは表２に示されるアンカー残基モチーフによって改変されて特定のＨＬＡ分子への結合を強化し得る。
本発明の組成物は、例えば、セクション「ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント」、「ＣＣＬ２２またはこのフラグメントを含むポリペプチド」および「ＭＨＣ」で説明されるペプチドのいずれかである、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントの２種類以上の組み合わせも含み得る。このＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントは、標的集団の大部分を網羅するように異なるＨＬＡ分子とそれぞれ特異的に相互作用し得る。したがって、例として、本医薬組成物はＨＬＡ−Ａ分子によって制限されるペプチドとＨＬＡ−Ｂ分子によって制限されるペプチドの組み合わせを含み得、例えば標的集団中のＨＬＡ表現型の優勢度と一致するこれらのＨＬＡ−ＡおよびＨＬＡ−Ｂ、例えばＨＬＡ−Ａ２およびＨＬＡ−Ｂ３５などを含む。さらに、本組成物はＨＬＡ−Ｃ分子によって制限されるペプチドを含み得る。
ペプチドをベースとしたワクチンの場合は、エピトープは「ＭＨＣ−ｒｅａｄｙ」型で投与でき、これは抗原取り込みの独立した外因性負荷による提示およびホスト抗原提示細胞による処理を可能にする。本発明のペプチドは、短い「ＭＨＣ−ｒｅａｄｙ」型およびプロテアソームによる処理を必要とするより長い型の両ペプチドを含み、したがって複数の腫瘍抗原を標的にできるより複雑なワクチン組成物を提供する。多くの異なるＨＬＡ基がワクチンによって標的化され、より可能性の高いワクチンが多様な集団中で機能する。
マルチエピトープワクチン組成物
本発明は高度な免疫原性マルチエピトープワクチンにも関する。好ましくは、このようなワクチンは任意に他の適切なペプチドおよび／または後述されるアジュバントと組み合わせて、ＣＣＬ２２の最適な免疫原性的に活性なペプチドフラグメントの同時送達を促進するように設計される。本発明は、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントを任意にＣＣＬ２２に属さないまたはＣＣＬ２２由来でないさらなるタンパク質またはペプチドおよび／または後述されるアジュバントと組み合わせて含むマルチエピトープワクチンなどを包含する。より複雑な組成物を有するワクチンの開発を駆り立てる重要な要因は、複数の腫瘍抗原を標的とする願望であり、例えば、注意深く選択されたＣＴＬおよびＴｈ細胞エピトープのコレクションを含むまたはコードするワクチンを設計することによる。本発明はしたがって一つの態様では、クラスＩおよびクラスＩＩの両方で規定されるＣＣＬ２２エピトープを含むワクチン組成物に関する。
本発明のペプチドはしたがって短い「ＭＨＣ−ｒｅａｄｙ」型（クラスＩ制限）、およびプロテアソームによる処理を必要とするより長い型（クラスＩＩ制限）の両ペプチドを含む。したがって、本発明による組成物は、前述で定められるクラスＩ拘束性エピトープおよび／またはクラスＩＩ拘束性エピトープを含むマルチエピトープワクチンとして提供され得る。
核酸をベースとしたワクチン組成物
本発明によるワクチン組成物は、ＣＣＬ２２ポリペプチドまたはその免疫学的に活性なペプチドフラグメントをコードする核酸を含み得る。当該核酸はしたがって上記タンパク質およびペプチドフラグメントのいずれかをコードし得る。核酸は例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡ、ＨＮＡ、ＰＮＡであり得、好ましくは核酸はＤＮＡまたはＲＮＡである。
本発明の核酸は、発現ベクターなどの任意の適切なベクター内に含まれ得る。多くのベクターが利用可能であり、従来技術の当業者は特定の目的のために有用なベクターを選択できる。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子または人工染色体の形態であってよい。適切な核酸配列が様々な手順によってベクター中に挿入され得、例えば、ＤＮＡは従来技術で良く知られている技術を用いて適切な制限エンドヌクレアーゼ部位に挿入され得る。本発明による核酸配列とは別に、ベクターはさらにシグナル配列、複製の起点、１種類以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列の１つ以上を含み得る。ベクターは、エンハンサー、ポリ−Ａタイル、リンカー、ポリリンカー、操作リンカー、多重クローニング部位（ＭＣＳ）、ストップコドン、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）および統合または他の所定のエレメントのためのホスト相同配列などの追加配列も含み得る。核酸構築体を操作するための方法は、従来技術で良く知られている（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（分子クローニング：検査室マニュアル），Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９を参照する）。ベクターは好ましくは発現ベクターであり、適切な細胞中でそれらの発現を指示する調節核酸配列に動作可能に連結された核酸を含む。本発明の範囲内で、この調節核酸配列は一般的に、哺乳動物細胞、好ましくはヒト細胞、より好ましくは抗原提示細胞中で発現を指示できる。
一つの好ましい実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。ベクターは、弱化細菌ベクターなどの、細菌ベクターであり得る。弱化細菌ベクターを使用して、感染および持続の部位での継続的な粘膜免疫応答を誘発し得る。異なる組換え細菌をベクターとして使用でき、例えば、細菌ベクターはサルモネラ、ラクトコッカス、およびリステリアからなる群から選択され得る。一般的に、異種抗原ＨＰＶ１６ Ｌ１またはＥ７に対する免疫の誘発は、マウス中で強いＣＴＬ誘発および腫瘍退縮を伴い、示され得た。ベクターはさらにＴ細胞刺激ポリペプチドをコードする核酸を含み得る。
負荷ＡＰＣ
有用な実施形態では、癌疾患に対する免疫原性応答は、個体由来の抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のＭＨＣクラスＩまたはクラスＩＩ分子を負荷することによって、個体からＰＢＬを分離することおよび細胞をペプチドとインキュベーションしてから個体に細胞を注入して戻すことによって、または個体から前駆体ＡＰＣを分離することおよびサイトカインおよび抗原を用いて細胞をプロフェッショナルＡＰＣに分化させてから個体中に細胞を注入して戻すことによってのいずれかで本発明のペプチドを投与することにより誘発される。
したがって、ＣＣＬ２２またはその免疫学的に活性なペプチドフラグメント、またはこのペプチドもしくはこの免疫学的に活性なペプチドフラグメントをコードする核酸を含む抗原提示細胞を含むワクチン組成物を提供することが本発明の一つの態様である。抗原提示細胞は抗原をＴ細胞に提示できる任意の細胞であり得る。好ましい抗原提示細胞は樹状細胞である。樹状細胞（ＤＣ）を調製して、例えば本明細書で後述されるように、いずれかの適切なプロトコルに従った治療方法で使用し得る。プロトコルが異なるＨＬＡ型および異なる疾患を有する個体で使用するために適応され得ることは、従来技術の当業者によって認識される。
樹状細胞（ＤＣ）は５０μｇ／ｍＬのＨＬＡ制限ペプチド（ＧＭＰ品質で合成）で３７℃にて１時間パルスされ得、５×１０６個の細胞を１日目および１４日目、続いて４週毎に皮下投与し、５回のワクチン接種後にさらに白血球除去を行う。臨床使用および品質管理用のＤＣ産生は、Ｎｉｃｏｌｅｔｔｅら（２００７）で報告されているように実質的に実施できる。
したがって、本発明の一つの実施形態では、ＣＣＬ２２の発現によって特徴付けられる臨床症状を有する、好ましくは臨床症状が癌または感染症である個体を治療するための方法は、ペプチドを体外で個体の抗原提示細胞（ＡＰＣ）に提示することにより、続いてこのように処理されたＡＰＣを個体に注入して戻すことによりペプチドが投与される方法である。これを実施する少なくとも２つの別の方法がある。一つの選択肢は個体からＡＰＣを分離して、ＭＨＣクラスＩ分子をペプチドとインキュベーション（負荷）することである。ＭＨＣクラスＩ分子を負荷することは、ＡＰＣをペプチドとインキュベーションし、ペプチドに特異的なＭＨＣクラスＩ分子を有するＡＰＣがペプチドを結合してそれをＴ細胞に提示できるようにすることを意味する。続いて、ＡＰＣを個体中に再注入する。別の選択肢となる方法は、樹状細胞生物学の分野でなされた最近の発見に基づく。この場合、単球（樹状細胞前駆体である）を個体から分離し、サイトカインおよび抗原を用いてプロフェッショナルＡＰＣ（または樹状細胞）へとインビトロで分化させる。続いて、インビトロで産生したＤＣをペプチドでパルスし、個体に注入する。
養子免疫療法／養子移入
本発明の一つの重要な態様は、ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞をインビトロで培養し、これらを個体に養子移入することに関する。養子移入は、特異的免疫応答を生じることがすでにできる免疫系の実際の成分を医師が個体に直接的に移入することを意味する。
ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞を提供することが本発明の一つの目的であり、それは例えば養子移入に有用であり得る。ＣＣＬ２２ペプチド／ＭＨＣクラスＩまたはＣＣＬ２２ペプチド／ＭＨＣクラスＩＩ複合体に特異的に結合できるＴ細胞受容体を含む分離されたＴ細胞は、個体に養子移入でき、このＴ細胞は好ましくはインビトロで増殖されているＴ細胞であり、ここでＣＣＬ２２ペプチドは本明細書で前述されたＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントのいずれかであってよい。Ｔ細胞をインビトロで増殖する方法は、従来技術の当業者に良く知られている。本発明はまた、ＭＨＣ制限ＣＣＬ２２ペプチド複合体に特異的に結合できるＴ細胞受容体を含むＴ細胞を、癌疾患を有するヒトなどの個体に投与することを含む治療方法に関し、ここでＣＣＬ２２由来ペプチドは本明細書で前述されたＣＣＬ２２ペプチドのいずれかであってよい。本発明はさらに、癌または感染症の治療用医薬品の調製のために、ＣＣＬ２２またはそのペプチドフラグメントに特異的に結合できるＴ細胞受容体を含むＴ細胞の利用に関する。自家Ｔ細胞移入は実質的にＷａｌｔｅｒら（１９９５）で報告されるように実施され得る。
ＴＣＲ移入
さらに別の実施形態では、このようなＴ細胞を養子移入前に放射線照射して個体中での増殖を制御してよい。ＴＣＲ遺伝子移入によってＴ細胞の特異性を遺伝子工学操作できる（Ｅｎｇｅｌｓら、２００７）。これはＣＣＬ２２ペプチド特異性を有するＴ細胞の個体中への移入を可能にする。一般的に、養子免疫療法のためのＴ細胞の使用は魅力的であり、なぜならそれは腫瘍またはウイルスが存在しない環境でのＴ細胞の増殖を可能にし、かつ注入前にＴ細胞機能の分析を可能にするためである。
養子移入におけるＴＣＲ遺伝子改変Ｔ細胞（異種ＴＣＲの発現を指示する発現構築体で形質転換されたＴ細胞など）の適用は、Ｔ細胞株の移入と比べていくつかの利点を有する：（ｉ）再指示されたＴ細胞の産生が一般的に適用可能である。（ｉｉ）高いアフィニティーまたは非常に高いアフィニティーＴＣＲが選択または作製でき、Ｔ細胞を操作するために使用できる。（ｉｉｉ）コドンを最適化したまたはマウス化したＴＣＲを用いて高結合活性Ｔ細胞を作製でき、安定化ＴＣＲのよりよい表面発現を可能にする。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子移入によるＴ細胞特異性の遺伝子工学操作は、実質的にＭｏｒｇａｎら（２００６）で報告されているように実施され得る。
ＴＣＲトランスフェクション
既知の抗腫瘍活性を有するＴＣＲは、初代ヒトＴリンパ球中に遺伝子導入できる。腫瘍特異的ＣＴＬクローン由来のＴＣＲアルファおよびベータをコードする遺伝子は、初代Ｔ細胞にトランスフェクションでき、この方法で腫瘍抗原に対する特異性を有するＴ細胞を再プログラミングする。ＴＣＲ ＲＮＡはエレクトロポレーションによってＰＢＬにトランスフェクションされる（Ｓｃｈａｆｔら、２００６）。あるいは、Ｔ細胞はレトロウイルスベクターを用いるＴＣＲ遺伝子移入によって新規特異性を与えられる（Ｍｏｒｇａｎら、２００６）。しかし、レトロウイルスベクター由来のプロウイルスは、トランスフェクションされた細胞のゲノム中でランダムに統合し、続いて細胞増殖を妨害し得る。ＴＣＲコードＲＮＡでのＴ細胞のエレクトロポレーションは、ＲＮＡがトランスフェクションされた細胞に一時的にのみ存在してゲノム中に統合されないため、この欠点を克服する（Ｓｃｈａｆｔら、２００６）。さらに、細胞のトランスフェクションは実験室で日常的に使用される。
アジュバントおよびキャリア
本発明によるワクチン組成物は、好ましくはアジュバントおよび／またはキャリアを含む。有用なアジュバントおよびキャリアの例は、本明細書において後述される。したがってＣＣＬ２２ポリペプチド、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントまたはその機能的ホモログ、これらを含むポリペプチドまたはこれらをコードする核酸は、本発明の組成物においてアジュバントおよび／またはキャリアと関連付けられる。
アジュバントは、ワクチン組成物中へのその混合がＣＣＬ２２またはＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントに対する免疫応答を増加する、さもなければ改善する物質であり、下記をさらに参照されたい。キャリアは足場構造、例えばポリペプチドまたはポリサッカライドであり、これにＣＣＬ２２またはそのペプチドフラグメントが結合でき、これは特に本発明のペプチドの提示に役立つ。
本発明のペプチドの多くは比較的小分子であり、従って本明細書で説明される組成物中で、ペプチドをアジュバントおよび／またはキャリアなどの様々な物質と組み合わせてワクチン、免疫原性組成物などを調製することが必要とされ得る。アジュバントは、広い意味で、免疫応答を促進する物質である。アジュバントの一般的な議論は、Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（モノクローナル抗体）：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（原理と実際）（２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８６） ６１−６３ページで示される。Ｇｏｄｉｎｇは、対象の抗原が小分子量である、または免疫原性に乏しい場合、免疫原性キャリアへの結合が推奨される、と記している。このようなキャリア分子の例は、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、オブアルブミンおよび家禽免疫グロブリンを含む。様々なサポニン抽出物も免疫原性組成物中のアジュバントとして有用であることが示唆されている。アジュバントとして、良く知られたサイトカインである顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を使用することが提唱されている（ＷＯ９７／２８８１６）。
キャリアはアジュバントとは独立して存在し得る。キャリアの機能は、例えば、特定のペプチドフラグメントの分子量を増加して、これらの活性または免疫原性を増加する、安定性を付与する、生物学的活性を増加する、または血清半減期を延長することであってよい。さらに、キャリアはＣＣＬ２２タンパク質、ポリペプチド、機能的ホモログ、またはそれらのペプチドフラグメントをＴ細胞に提示するのに役立ち得る。キャリアは、従来技術の当業者によって知られている、例えばタンパク質または抗原提示細胞の任意の適切なキャリアであってよい。キャリアタンパク質は、限定されないが、キーホールリンペットヘモシアニン、血清タンパク質であるトランスフェリン、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、サイログロブリンまたはオブアルブミンなど、免疫グロブリン、あるいはインスリンまたはパルミチン酸などのホルモンであってよい。ヒトの免疫付与では、キャリアはヒトに容認できる生理学的に許容可能なキャリアであり、安全でなければならない。しかし、破傷風トキソイドおよび／またはジフテリアトキソイドは本発明の一つの実施形態で適切なキャリアである。あるいは、キャリアは、セファロースなどのデキストランであってよい。
したがって本組成物中の本明細書から得られるＣＣＬ２２タンパク質、ポリペプチドフラグメント、変異体またはペプチドが、前述のタンパク質などのキャリアまたは樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞と関連付けられることは、本発明の一つの態様である。
アジュバントは、例えばＡｌＫ（ＳＯ４）２、ＡｌＮａ（ＳＯ４）２、ＡｌＮＨ４（ＳＯ４）、シリカ、ミョウバン、Ａｌ（ＯＨ）３、Ｃａ３（ＰＯ４）２、カオリン、炭素、水酸化アルミニウム、ムラミルジペプチド、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＤＭＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ＣＧＰ１１６８７、ｎｏｒ−ＭＤＰとも呼ばれる）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｎ−アラニン−２−（１’２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＣＧＰ１９８３５Ａ、ＭＴＰ−ＰＥとも呼ばれる）、２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ−８０（商標）エマルションにおけるＲＩＢＩ（ＭＰＬ＋ＴＤＭ ＋ＣＷＳ）、リピドＡを含むリポポリサッカライドおよびその様々な誘導体、フロインド完全アジュバント（ＦＣＡ）、フロイント不完全アジュバント、Ｍｅｒｃｋ Ａｄｊｕｂａｎｔ６５、ポリヌクレオチド（例えば、ポリＩＣおよびポリＡＵ酸）、結核菌由来のワックスＤ、結核、コリネバクテリウム・パルバム、ボルデテラ・ペルツシス、およびブルセラ属のメンバーで認められる物質、Ｔｉｔｅｒｍａｘ、ＩＳＣＯＭＳ、ＱｕｉｌＡ、ＡＬＵＮ（米国特許第５８７６７号および第５，５５４，３７２号を参照）、リピドＡ誘導体、コレラトキシン誘導体、ＨＳＰ誘導体、ＬＰＳ誘導体、合成ペプチドマトリックスまたはＧＭＤＰ、インターロイキン１、インターロイキン２、モンタナイドＩＳＡ−５１およびＱＳ−２１からなる群から選択できる。本発明で使用される好ましいアジュバントは、モンタナイドアジュバント（Ｓｅｐｐｉｃから入手可能、ベルギー）、好ましくはモンタナイドＩＳＡ−５１などのオイル／界面活性剤をベースとしたアジュバントを含む。他の好ましいアジュバントは細菌ＤＮＡに基づくアジュバントであり、ＣｐＧオリゴヌクレオチド配列を含むアジュバントなどである。さらに他の好ましいアジュバントはウイルスｄｓＲＮＡをベースとしたアジュバントであり、ポリＩ：Ｃなどである。イミダゾチニリンは好ましいアジュバントのさらに別の例である。最も好ましいアジュバントはヒト使用に適したアジュバントである。
モンタナイドアジュバント（Ｓｅｐｐｉｃからすべて入手可能、ベルギー）は、モンタナイドＩＳＡ−５１、モンタナイドＩＳＡ−５０、モンタナイドＩＳＡ−７０、モンタナイドＩＳＡ−２０６、モンタナイドＩＳＡ−２５、モンタナイドＩＳＡ−７２０、モンタナイドＩＳＡ−７０８、モンタナイドＩＳＡ−７６３Ａ、モンタナイドＩＳＡ−２０７、モンタナイドＩＳＡ−２６４、モンタナイドＩＳＡ−２７、モンタナイドＩＳＡ−３５、モンタナイドＩＳＡ ５１Ｆ、モンタナイドＩＳＡ ０１６ＤおよびモンタナイドＩＭＳからなる群から、好ましくはモンタナイドＩＳＡ−５１、モンタナイドＩＭＳおよびモンタナイドＩＳＡ−７２０からなる群から、より好ましくはモンタナイドＩＳＡ−５１からなる群から選択され得る。モンタナイドＩＳＡ−５１（Ｓｅｐｐｉｃ，Ｉｎｃ）はオイル／界面活性剤をベースとしたアジュバントであり、ここで異なる界面活性剤が非代謝性ミネラルオイル、代謝性オイル、またはこの２種の混合と組み合わされる。これらは、ＣＣＬ２２またはそのペプチドフラグメントを含む水溶液とともにエマルションとして使用するために調製される。界面活性剤はオレイン酸マンニドである。ＱＳ−２１（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ； Ａｑｕｉｌａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，フライミングハム，ＭＡ）は、水溶液として扱われる高度に精製された水溶性サポニンである。ＱＳ−２１およびモンタナイドＩＳＡ−５１アジュバントは、無菌の単回使用バイアル中で提供され得る。
良く知られているサイトカインＧＭ−ＣＳＦは本発明の別のアジュバントである。ＧＭ−ＣＳＦは十年間アジュバントとして使用されており、好ましくはＷＯ９７／２８８１６に記載されるようなＧＭ−ＣＳＦであり得る。
本発明に従って使用できるアジュバントの望ましい機能性を下表に列挙する。
Figure 2018528960
本発明によるワクチン組成物は、１種類以上のアジュバントを含み得る。さらに、本発明は、上記のいずれかまたはそれらの組み合わせを含む任意のアジュバント物質および／またはキャリアをさらに含む治療用組成物を包含する。ＣＣＬ２２タンパク質、それらの変異体またはペプチドフラグメント、およびアジュバントは任意の適切な順序で別々に投与できる。好ましくは、本発明のワクチン組成物は、モンタナイドＩＳＡ−５１またはモンタナイドＩＳＡ−７２０などのモンタナイドアジュバントあるいはＧＭ−ＣＳＦアジュバントを含む。
従って、本発明は、上記のいずれかまたはそれらの組み合わせを含むアジュバント物質をさらに含む治療用組成物を包含する。抗原、すなわち本発明のペプチドおよびアジュバントは、同時にまたは任意の適切な順序で別々に投与できることも考慮される。
適用量および投与
ワクチン組成物中の本発明のＣＣＬ２２またはＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントの量は、特定の適用に応じて変化し得る。しかし、ペプチド組成物の単回用量は、好ましくは約１０〜約５０００μｇの範囲、より好ましくは約１００〜約１０００μｇなどの約５０〜約２５００μｇである。特に、治療される個体がヒトである本発明の実施形態では、単回用量は、ＣＣＬ２２またはＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメントの５０〜５００μｇの範囲であり、例えば８０〜３００μｇの範囲で、１００〜２５０μｇの範囲などであり得る。しばしば、ワクチン組成物は経時的に繰り返し投与される。例えば、ワクチン組成物は少なくとも２回、好ましくは少なくとも５回、より好ましくは少なくとも１０回、１０〜２０回の範囲などで投与され得る。ワクチン組成物は連続的にも投与され得る。投与は任意の有用な頻度で繰り返され得る。したがって、例えば、ワクチン組成物は毎週１回、２週に１回など、３週に１回など、１ヶ月に１回など、２ヶ月に１回など、３ヶ月に１回など、半年に１回など、１年に１回などで投与され得る。特に、ワクチン組成物は連続的に投与され得る。投与の頻度は、この期間中に変わり得る。一つの実施形態では、ワクチン組成物は１〜３ヶ月に１回、連続して投与される。投与方式は、皮内、皮下および静脈内投与、持続放出製剤の剤形での埋め込みなどを含む。従来技術で知られている投与のありとあらゆる剤形が本明細書で包含される。また、注射可能な免疫原性ペプチド組成物を製剤化するのに適していることが従来技術で知られているありとあらゆる従来の投与剤形が包含され、必要に応じて従来の医薬品として許容可能な担体、希釈剤、保存剤、アジュバント、緩衝成分などを含む、凍結乾燥剤形ならびに溶液、懸濁液またはエマルション剤形などが挙げられる。
医薬組成物は従来技術の当業者によって知られているいずれかの従来のプロトコルを用いて調製および投与され得る。実施例３〜５では、本発明によるワクチン組成物の調製の非限定例、ならびにワクチンなどの投与の非限定例が示される。プロトコルは本明細書で説明されるワクチン組成物のいずれかに容易に適応され得るということは、従来技術の当業者によって認識される。本発明のさらなる実施形態では、本発明の医薬組成物は、癌および感染症などのＣＣＬ２２の発現によって特徴付けられる臨床症状を有する個体を治療するのに有用である。
本発明の組成物の免疫防御効果は、従来技術の当業者によって知られているいくつかの方法を用いて測定できる。うまくいった免疫応答も、ワクチン組成物のペプチドを特異的に認識する抗体の免疫および／または検出の後のＤＴＨ反応の出現によって測定され得る。
本発明によるワクチン組成物は、治療上効果的な量で個体に投与され得る。効果的な量は、個体の症状、体重、性別および年齢などの様々な要因に従って変わり得る。他の要因は投与方式を含む。
本医薬組成物は、皮下、局所、経口および筋肉内などの様々な経路によって個体に与えられ得る。医薬組成物の投与は、経口または非経口によって達成される。非経口送達の方法は、局所、動脈内（組織に直接的）、筋肉内、皮下、髄内、髄腔内、脳室内、静脈内、腹腔内、または鼻腔内投与を含む。本発明はまた、ワクチン組成物による予防および治療の方法での使用のために適切な局所の、経口の、全身のおよび非経口の医薬組成物を提供する目的を有する。
例えば、ワクチン組成物は錠剤、カプセル（それぞれ徐放および持続放出製剤を含む）、ピル、粉末、顆粒、エリキシル、チンキ、溶液、懸濁液、シロップおよびエマルションなどの経口投与剤形、または注射によって投与できる。同様に、それらは医薬品の従来技術における当業者に良く知られている剤形を用いてすべて、静脈内（ボーラスおよび注入の両方）、腹腔内、皮下、閉塞を伴うもしくは伴わない局所、または筋肉内剤形で投与され得る。本明細書で説明される化合物のいずれかを含む、ワクチンの効果的であるが非毒性な量が、予防剤または治療剤として使用できる。また、注射可能な免疫原性ペプチド組成物を製剤化するのに適していることが従来技術で知られているありとあらゆる従来の投与剤形が包含され、必要に応じて従来の医薬品として許容可能な担体、希釈剤、保存剤、アジュバント、緩衝成分などを含む、凍結乾燥剤形ならびに溶液、懸濁液またはエマルション剤形などが挙げられる。
本発明によるワクチン組成物の投与の好ましい方式は、限定されないが、全身投与を含み、静脈内または皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、経口投与、直腸投与、膣投与、肺投与および粘膜投与の一般的な任意の剤形などが挙げられる。さらに、本明細書で言及される投与剤形のいずれかのための手段が本発明に含まれることは、本発明の範囲内である。
本発明によるワクチンは、１回、または２、３、４もしくは５回などのいずれかの回数で投与できる。１回を超えてワクチンを投与することは、得られる免疫応答をブーストする効果を有する。ワクチンは、前回の投与と異なる剤形または体の部分でワクチンを投与することによって、さらにブーストできる。ブースターショットは、同種または異種ブースターショットのいずれかである。同種ブースターショットは、初回およびその後のワクチン接種が同じ構築体およびより具体的には同じ送達ベヒクル、特に同じウイルスベクターを含む。異種ブースターショットは、同一構築体が異なるウイルスベクター内に含まれる。
第二有効成分
本明細書で提供されるワクチン組成物が第二有効成分と組み合わせて使用されることは本発明の一つの態様である。ワクチン組成物および第二有効成分の投与は、連続的であるか組み合わされてよい。第二有効成分の例は癌および感染症の両方について前述されている。ワクチン組成物が治療される対象の臨床症状と関連する他の療法と組み合わせて使用され得るされることはさらなる態様である。このような療法は、手術、化学療法、または遺伝子療法、免疫刺激物質あるいは抗体を含み得、従来技術の当業者は所定の計画のために適切な併用治療を決定できる。
いくつかの例では、本発明の治療方法を、化学療法、放射線療法、免疫刺激物質による治療、遺伝子療法、抗体および／または抗生物質による治療ならびに樹状細胞を用いる治療などのさらなる医学的処置と組み合わせることが適切である。
免疫付与のモニタリング
好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物はワクチン組成物である。従って、本発明のワクチン組成物が投与された個体における免疫付与をモニタリングすることが、本発明の目的および一つの態様である。本医薬組成物はしたがって、癌および／または感染症に対する免疫応答を誘発できる免疫原性組成物またはワクチンであってよい。本明細書で使用されるとき、表現「免疫原性組成物またはワクチン」は癌細胞、ＡＰＣまたはＤＣなどのＣＣＬ２２発現細胞に対する免疫応答の少なくとも１つのタイプを誘発する組成物を指す。したがって、そのような免疫応答は以下の：細胞表面に提示されるＨＬＡ／ペプチド複合体を認識できるＣＴＬが産生されその結果として細胞溶解を生じるＣＴＬ応答、すなわちワクチンが、ワクチン接種された被験体中で癌細胞に対する細胞毒性効果を有するエファクターＴ細胞の産生を誘発する；抗癌抗体の産生を高めるＢ細胞応答；および／またはＤＴＨタイプの免疫応答のいずれかであり得る。本発明の組成物を個体に投与した後に上記反応のいずれかをモニタリングすることにより当該個体の免疫付与を監視することが本発明の目的である。
一つの態様において、本発明は免疫付与をモニタリングする方法に関し、当該方法は、
ｉ）個体からの血液サンプルを供給するステップ、
ｉｉ）ＣＣＬ２２またはそのペプチドフラグメントを供給するステップであり、ここで当該タンパク質またはペプチドは本明細書で説明されるタンパク質またはペプチドのいずれかであり得るステップ、
ｉｉｉ）当該血液サンプルがタンパク質またはペプチドを特異的に結合する抗体またはＴ細胞受容体を含むＴ細胞を含むかどうか測定するステップ、
ｉｖ）これによって当該個体中で当該タンパク質またはペプチドに対する免疫応答が上昇しているかどうか決定するステップ、
を含む。
個体は好ましくはヒトであり、例えば、ＣＣＬ２２またはＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、または当該タンパク質もしくはペプチドをコードする核酸で免疫されているヒトである。
構成要素からなるキット
本発明はまた、
・本明細書で説明されるワクチン組成物のいずれか、ならびに／または
・ＣＣＬ２２タンパク質もしくはその機能的ホモログ、ならびに／または
・ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、その機能的ホモログ、および／もしくは本明細書で説明されるものに由来するペプチド、ならびに／または
・上記２項のタンパク質をコードする核酸のいずれか、
ならびに構成要素からなるキットの使用方法に関する取扱説明書、
を含む構成要素からなるキットに関する。
本発明はまた、
・本明細書で説明されるワクチン組成物のいずれか、ならびに／または
・ＣＣＬ２２タンパク質もしくはその機能的ホモログ、ならびに／または
・ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、その機能的ホモログ、および／もしくは本明細書で説明されるものに由来するペプチド、ならびに／または
・上記２項のタンパク質をコードする核酸のいずれか、
ならびに第二有効成分、
を含む構成要素からなるキットに関する。
好ましくは、第二有効成分は治療すべき臨床症状に対応して選択され、癌が治療される場合、第二有効成分は、例えば、上記で挙げられた化学療法剤の中から選択される。同様に、微生物／ウイルス感染症を治療する場合、第二有効成分は好ましくは、抗生物質および／または抗ウイルス剤である。
構成要素からなるキットの成分は、好ましくは個別の組成物中に含まれるが、構成要素からなるキットの成分すべてが同一組成物内に含まれることも、本発明の範囲内である。構成要素からなるキットの成分はしたがって、同時にまたは任意の順序で連続して投与され得る。
Figure 2018528960
例
本発明は次の例によってさらに説明されるが、それらは本発明を限定するものと解釈されるべきではない。
例１−方法
ＰＢＭＣ−患者材料
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を健常な個体および癌患者（メラノーマ、腎細胞癌および乳癌の患者）から収集した。血液サンプルは、いずれかの種類の抗癌療法の終了後最低で４週間に採取した。ＰＢＭＣをＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（商標）分離を用いて分離し、ＨＬＡ型付けし、１０％ＤＭＳＯを添加したＦＣＳ中で凍結した。新鮮な卵巣性復水を７０μｍフィルターでろ過し、細胞を遠心分離（１５００ＲＰＭＩ−１６４０、５分）によって分離した。復水が多量の赤血球を含んだ場合、それらを、細胞に溶解緩衝液（Ｏｒｔｈｏ−Ｍｕｎｅ Ｌｙｓｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を加えて３〜５分インキュベーションすることにより取り除いた。溶解緩衝液を素早く洗い流し、細胞を、使用するまで１０％ＤＭＳＯを添加したヒト血清中で−１４０℃にて凍結保存した。プロトコルはデンマーク首都圏における科学倫理委員会（ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｃａｐｉｔａｌ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ Ｄｅｎｍａｒｋ）によって承認され、ヘルシンキ宣言の規定に従って実施した。試験登録前に患者からの文書によるインフォームドコンセントを得た。
抗原特異的Ｔ細胞培養の確立
ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞培養を、放射線照射したｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチド負荷自家ＤＣまたはＰＢＭＣによる癌患者ＰＢＭＣの刺激によって確立した。翌日に、ＩＬ−７およびＩＬ−１２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、ロンドン、英国）を添加した。培養の刺激を、ＣＣＬ２２３〜１２ペプチド負荷した放射線照射自家ＤＣ、続いてｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチド負荷した放射線照射自家ＰＢＭＣによって８日毎に実施した。ペプチド刺激の翌日に、ＩＬ−２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、ロンドン、英国）を添加した。合計で４回のＤＣ刺激および１回のＰＢＭＣ刺激を実施した。
ＤＣの産生
ＤＣを、ＲＰＭＩ−１６４０中で３７℃にて１〜２時間の培養皿上の付着によってＰＢＭＣから産生した。付着単球をＩＬ−４（２５０Ｕ／ｍＬ）およびＧＭ−ＣＳＦ（１０００Ｕ／ｍＬ）の存在下で１０％ウシ胎児血清添加したＲＰＭＩ−１６４０中で６日間培養した。ＤＣをＩＬ−β（１０００Ｕ／ｍＬ）、ＩＬ−６（１０００Ｕ／ｍＬ）、ＴＮＦ−α（１０００Ｕ／ｍＬ）およびＰＧＥ２（１μｇ／ｍＬ）の添加によって成熟させた。
細胞毒性アッセイ
ＣＴＬ仲介細胞毒性についての従来の５１Ｃｒ放出アッセイを、他（Ａｎｄｅｒｓｅｎら、１９９９）で報告されているように実施した。標的細胞はＴ２細胞（ＡＴＣＣ）、ＨＬＡ−Ａ２＋ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞株（ＲＰＭＩ１６６６６）、ＡＭＬ細胞（ＵＫＥ−１およびＴＨＰ１）、結腸癌細胞（ＳＷ４８０）、メラノーマ細胞株（ＦＭ５５−Ｍ２）、乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ２３１であり、ＩＦＮ−γ（１００Ｕ／ｍＬ）の添加または無添加で２日間の後に細胞毒性アッセイを実施した。
ペプチド力価の細胞毒性アッセイでは、Ｔ２細胞を標的細胞として使用し、エフェクター対標的の一定の比３：１をすべてのペプチド濃度について使用した。ｐＣＣＬ２２３〜１２およびｐＣＣＬ２２３〜１１の１０−２〜１０−９ｍＭの範囲でペプチドの１０倍連続希釈物を調製した。
ｓｉＲＮＡ仲介ＣＣＬ２２サイレンシング
ＣＣＬ２２の標的化サイレンシングのための一連の３種のＳｔｅａｌｔｈ ｓｉＲＮＡ二本鎖（ＨＳＳ１０９５７８、ＨＳＳ１８４５５１、ＨＳＳ１８４５５２）をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ペイズリー、英国）から得た。ＣＣＬ２２サイレンシング実験では、ＴＨＰ−１細胞を、既に報告されているように（Ｍｅｔら、２０１１、Ｈｏｂｏら、２０１０）エレクトロポレーションパラメータを用いてＣＣＬ２２ ｓｉＲＮＡでトランスフェクションした。
フローサイトメトリー分析
フローサイトメトリー分析をＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標） ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ ＣＡ，ＵＳＡ）で実施し、細胞ソーティングをＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ ＣＡ，ＵＳＡ）で実施した。
ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞培養の細胞内染色を、細胞をＨＩＶまたはｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドで５時間刺激した後に実施した（ＢＤ ＧｏｌｇｉＰｕｌｇ（商標）を最初の１時間後に加えた）。細胞を次いで表面マーカーについて染色し、ついで製造業者の取扱説明書に従って、Ｆｉｘａｔｉｏｎ（固定）／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ（透過）およびＰｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ（透過化）緩衝液（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて洗浄し透過化した。使用した抗体：ＩＦＮγ−ＰＥ−Ｃｙ７、ＴＮＦα−ＡＰＣ、ＣＤ４−ＰｅｒＣＰ、ＣＤ８−ＦＩＴＣ（すべてＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅから入手）。死んだ細胞を、製造業者の取扱説明書に従ってＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標） Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ−ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ Ｋｉｔ（固定可能な近赤外死細胞染色キット）を用いて染色した。
四量体染色およびソーティングのため、ＨＩＶまたはｐＣＣＬ２２３〜１２を添加したＰＥおよびＡＰＣ結合ＨＬＡ−Ａ２マルチマーを、ＣＤ４−ＰｅｒＣＰおよびＣＤ８−ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に加えて使用した。ＨＬＡ−Ａ２マルチマーは、既に報告されているＭＨＣペプチド交換技術（１５）を用いて自家で調製した。
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
本試験では、ＥＬＩＳＰＯＴをＣＩＰによって提供されているガイドライン（ｈｔｔｐ：／／ｃｉｍｔ．ｅｕ／ｃｉｍｔ／ｆｉｌｅｓ／ｄｌ／ｃｉｐ＿ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．ｐｄｆ）に従って実施した。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して、既に報告されているように（Ｓｏｒｅｎｓｅｎら、２０１２）、サイトカイン（ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１０）を放出するペプチドエピトープ特異的エファクター細胞を定量した。いくつかの実験では、分析の前にＰＢＭＣをペプチドによってインビトロで一度刺激した。いくつかの実験では、１０４個の自家ＤＣを抗原提示細胞としてウェルに加えた。スポットを、ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ Ｓｅｒｉｅｓ ２．０ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｃ．Ｔ．Ｌ．−Ｅｕｒｏｐｅ，ボン，ドイツ）を用いて計数した。いくつかの実験では、ＣＤ４＋細胞を、製造業者の取扱説明書に従ってＥａｓｙＳｅｐヒトＣＤ４＋Ｔ細胞豊富化キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，グレノーブル，フランス）によって分離した。これは高純度培養（＞９７％ＣＤ４＋）を生じ、このことは細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）およびフローサイトメトリー（ＦＣＭ）に関して後述されるように表面抗体での染色によって確証された。
ＰＢＭＣを、ＩＦＮ−γ捕捉Ａｂ（Ｍａｂｔｅｃｈ）でプレコーティングされたＥＬＩＳＰＯＴプレート（ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ ＭＡＩＰ Ｎ４５、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅによるニトロセルロース底９６ウェルプレート）の底に置き、ペプチドを５μｇ／ｍＬで加えた。各患者からのＰＢＭＣをペプチドおよびコントロール刺激について二重または三重測定で設定した。細胞を抗原の存在下でＥＬＩＳＰＯＴプレート中で１４〜１６時間インキュベーションし、その後それらを洗い流し、二次ビオチニル化Ａｂ（Ｍａｂｔｅｃｈ）を加えた。２時間のインキュベーション後に、未結合の二次抗体を洗い流し、ストレプトアビジン共役体化アルカリホスファターゼ（ＡＰ）（Ｍａｂｔｅｃｈ）を１時間加えた。次に、未結合の共役体化酵素を洗い流し、アッセイをＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質（Ｍａｂｔｅｃｈ）を加えることによって発色させた。発色したＥＬＩＳＰＯＴプレートを、ＣＴＬ ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔ Ｓ６ Ｕｌｔｉｍａｔｅ−Ｖ分析装置によって、Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔソフトウェアｖ５．１を用いて分析した。応答を、ｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドで刺激されたウェルおよびコントロールウェル中のスポットの平均数の差として計算した。
ＣＣＬ２２発現の分析
ＰＢＭＣ、癌細胞株および復水細胞培養ならびにｓｉＲＮＡトランスフェクションしたＴＨＰ−１細胞からの細胞培養上清を、製造業者の取扱説明書に従ってＨｕｍａｎ ＣＣＬ２２／ＭＤＣ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて分析した。
ＰＢＭＣおよび復水細胞のペプチド刺激
健常ドナーまたは癌患者由来のＰＢＭＣを解凍し、Ｘ−ＶＩＶＯ１５（商標）（Ｌｏｎｚａ）中に４時間置いてから、５％ヒト血清を添加したＸ−Ｖｉｖｏ培地中で細胞を２×１０６個／ウェルで２４ウェルプレートに準備した。ＤＭＳＯ中のｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドまたは無菌水中のＨＩＶペプチドの２０μｇ／ｍＬを各ウェルに加えた。適量のＤＭＳＯをＨＩＶコントロールウェルに加えてｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドの溶媒について調整した。翌日、ＩＬ−２を最終濃度の１２０Ｕ／ｍＬ（腹水細胞刺激用に３６０Ｕ）に加えた。上清サンプルを培養の２〜７日後に収集した。細胞を２回刺激してからＥＬＩＳＰＯＴアッセイで試験した。
サイトカイン発現ＬＵＭＩＮＥＸ
ＣＣＬ２２−３またはＨＩＶペプチドで刺激されたＰＢＭＣまたは復水細胞からの細胞培養上清を、Ｂｉｏ−ＲａｄのＢｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｐｒｏ（商標）ヒトケモカインアッセイキットを用いてＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＬ−１βについて分析した。サンプルをＢｉｏ Ｐｌｅｘ ２００システムで得て、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｍａｎａｇｅｒ（商標）ｖ６を用いて分析した。
統計学的分析
ｔ検定を、ｐＣＣＬ２２３〜１２刺激をＨＩＶコントロールと比較する際に癌患者および健常ドナーからのＥＬＩＳＡサンプルの統計学的分析について使用した。同じ分析を使用して、ｐＣＣＬ２２３〜１２刺激後のＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−１０発現をＨＩＶコントロールと比較した。ウィルコクスンの符号付順位検定を、多重ゼロ値によるＩＬ−１０発現の統計学的分析のために使用した。
例２−結果
ＣＣＬ２２由来ＨＬＡ結合ペプチドのパネルをＳＹＦＰＥＩＴＨＩデータベース（ｗｗｗ．ｓｙｆｐｅｉｔｈｉ．ｄｅ）を用いて予測した：
Figure 2018528960
癌患者からのＰＢＭＣを、これらのペプチドエピトープに対する応答についてＩＦＮγ ＥＬＩＳＰＯＴによってスクリーニングした。ＣＣＬ２２ペプチドＣＣＬ２２−３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）に対する特異的応答の指標が多くのメラノーマ患者で認められた。
メラノーマ患者からのＰＢＭＣを、ＣＣＬ２２−３ペプチドでパルスした自家ＤＣによって刺激した。５回の刺激後、Ｔ細胞培養はＣＣＬ２２−３パルスＴ２細胞を特異的に認識し溶解することが認められた（図３Ａ）。
ＣＣＬ２２特異的細胞を次いで四量体染色によって分離し増殖させ、ＣＣＬ２２−３：四量体陽性集団の明確な集団を得た（図２Ｂ）。
ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の性質および反応性を細胞内染色によって評価し、ＣＤ８＋Ｔ細胞がＣＣＬ２２−３ペプチド刺激に応答してＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αを分泌していたことが認められたが、一方ＣＤ４＋Ｔ細胞からは反応性が認められなかった（図２Ａ）。
ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞のＨＬＡ−Ａ２制限反応性が、クロム放出アッセイでの標的としてＨＬＡ−Ａ２陰性で安定にトランスフェクションされたＫ５６２細胞を用いることによって示された（図３）。
ＣＣＬ２２特異的培養を、いくつかの異なる癌細胞、すなわち白血病細胞（ＴＨＰ−１、ＲＰＭＩ６６６６、ＵＫＥ−１）、結腸癌（ＳＷ４８０）ならびに乳癌（ＭＤＡ）に対する反応性について試験した。
ＣＣＬ２２−３に反応性であるＴ細胞は、クロム放出アッセイによって示されるように、ＣＣＬ２２発現癌細胞株を認識し溶解することができた（図４）。また、ＣＣＬ２２ペプチド特異的細胞が、ＩＦＮ−γによる治療の有無に関わらず、様々な癌細胞株を溶解できたことを認めた（図４）。
ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞による標的細胞の死滅は、標的細胞によるＣＣＬ２２発現に依存した。したがって、ＴＨＰ−１細胞のｓｉＲＮＡトランスフェクションによる低下したＣＣＬ２２発現は、Ｔ細胞仲介溶解を低下させた（図５）。
例３−ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞
本発明者らは、ｗｗｗ．ｓｙｆｐｅｉｔｈｉ．ｄｅで利用できるＳＹＦＰＥＩＴＨＩエピトープ予測アルゴリズムを用いて、ＨＬＡ−Ａ２が結合する可能性があるペプチドエピトープについてヒトＣＣＬ２２タンパク質のアミノ酸配列をスクリーニングした。興味深いことに、すべての高スコアのエピトープは、タンパク質が分泌される前に切断される、シグナルペプチド部分の配列に位置した。高スコアＣＣＬ２２由来ペプチドの一つは、以後ｐＣＣＬ２２３〜１２と呼ばれるＲＬＱＴＡＬＬＶＶＬだった。ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞を特徴付けするため、メラノーマ患者からＰＢＭＣを得、ｐＣＣＬ２２３〜１２エピトープでパルスした自家ＤＣまたはＰＢＭＣを用いてこれらの細胞を刺激した。５回の刺激後、ｐＣＣＬ２２３〜１２四量体染色を実施し、これは、四量体陽性細胞の小さいが異なる集団を示した（図２Ａ、左図）。四量体陽性集団をうまく分離し、迅速増殖プロトコルを用いて増殖させた（図２Ｂ、右図）。増殖した培養で、ペプチド刺激に応答するＩＮＦγおよびＴＮＦαについて細胞内染色を実施した。ＣＤ８＋細胞の約３０％がｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチド刺激に応答してＩＮＦγおよびＴＮＦαを分泌した（図２Ａ）。ＣＤ８＋Ｔ細胞のみがｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドに応答してＩＮＦγおよびＴＮＦαを分泌し、ＣＤ４＋Ｔ細胞から応答は検出されなかった。同様な結果が、四量体の分離および増殖の前の細胞内染色で認められた（データは示さず）。
例４−ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞はＨＬＡ−Ａ２制限致死を示す
次に、ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の細胞毒性能力を試験した。ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞はｐＣＣＬ２２３〜１２パルスＴ２細胞を溶解できたが、ＨＩＶからの陰性コントロールペプチドによってパルスされたＴ２細胞を認識しなかった（図３Ａ）。ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞のＨＬＡ−Ａ２制限反応性を確証するため、標的としてｐＣＣＬ２２３〜１２の添加または無添加でパルスしたＨＬＡ−Ａ２トランスフェクションＫ５６２細胞を使用し（図３Ｂ）、Ｔ細胞がｐＣＣＬ２２３〜１２でパルスされたＫ５６２−Ａ２細胞のみを認識したことを認めた。追加コントロールとして、非トランスフェクションＨＬＡ陰性Ｋ５６２細胞を試験し、これらの細胞はｐＣＣＬ２２３〜１２でパルスされた場合でさえ、ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞によって認識されなかったことを決定した。
ｐＣＣＬ２２３〜１２エピトープがＣＣＬ２２タンパク質の２２マーシグナルペプチド配列（ＣＣＬ２２シグナルペプチドと呼ばれる；ＭＤＲＬＱＴＡＬＬＶＶＬＶＬＬＡＶＡＬＱＡＴ）から交差提示され得るかどうかさらに試験した。実際に、ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞はＣＣＬ２２シグナルペプチドでパルスされたＴ細胞を溶解し（図３Ｃ）、Ｔ２細胞が、これらの細胞中でＴＡＰ発現がたとえなくても、ｐＣＣＬ２２３〜１２エピトープを交差提示できたことを示した。次に、ｐＣＣＬ２２３〜１２よりもアミノ酸が１つ短くコンピュータアルゴリズムによってＨＬＡ−Ａ２に高いアフィニティーで結合することが予測されたｐＣＣＬ２２３〜１１ペプチド（ＲＬＱＴＡＬＬＶＶ）に対する、ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞のＴ細胞結合活性を試験した。Ｔ細胞は両ペプチドに対して反応したが、これらはデカマーｐＣＣＬ２２３〜１２エピトープに対して最も高い結合活性を示した（図３Ｄ）。
例５−ＣＣＬ２２発現癌細胞に対する細胞毒性
ＣＣＬ２２特異的細胞毒性Ｔ細胞リンパ球（ＣＴＬ）培養を、白血病細胞株であるＴＨＰ−１、ＲＰＭＩ６６６６、ＵＫＥ−１、およびＳＥＴ−２；結腸癌細胞株であるＳＷ４８０；乳癌細胞株であるＭＤＡ；およびメラノーマ細胞株であるＦＭ５５−Ｍ２に対する反応性について試験した。ＳＥＴ−２は弱いバンドのみ示したが、ＰＣＲ分析は、ＦＭ５５−Ｍ２以外のこれらの細胞株すべてにおけるＣＣＬ２２発現を示した（データは示さず）。ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的細胞は、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）による前処理の有無に関わらず、試験したほとんどの癌細胞株を溶解したことを認めた（図４Ａ〜Ｅ）。ＩＮＦ−γは報告によると、癌細胞株中でＣＣＬ２２発現を誘発し、ＨＬＡの表面発現を増加する。クロム放出アッセイはＳＥＴ−２細胞が死滅させられなかったことを示し、ＰＣＲでＣＣＬ２２ ｍＲＮＡについてわずかな弱い陽性だった（図４Ｆ）。さらに、メラノーマ細胞株ＦＭ５５−Ｍ２はＰＣＲでＣＣＬ２２ ｍＲＮＡを示さず、これらの細胞はＣＣＬ２２特異的ＣＴＬによって溶解されなかった（データは示さず）。ＣＣＬ２２特異的ＣＴＬによる癌細胞の致死が実際にＣＣＬ２２発現に依存したことを確証するため、ｓｉＲＮＡトランスフェクションを使用してＩＦＮγ前処理したＴＨＰ−１細胞中のＣＣＬ２２発現を阻害した。このトランスフェクションはＴ細胞が仲介する溶解からこれらの細胞を救済した（図４Ｇ）。図４Ｈは、上清からのＥＬＩＳＡによって測定した、ｓｉＲＮＡトランスフェクション後のＴＨＰ−１細胞中のＣＣＬ２２阻害を示す。
例６−ＣＣＬ２２に対する自発的なＴ細胞応答
次に癌患者１３名および健常者１０名からＰＢＭＣを得、これらの細胞を低用量ＩＬ−２の存在下でｐＣＣＬ２２３〜１２で２週間刺激した。ＩＦＮ−γ酵素結合ＩｍｍｕｎｏＳＰＯＴ（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイを使用してｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドに対する反応性を分析した。ｐＣＣＬ２２３〜１２に対する自発的な特異的Ｔ細胞反応性が多くのメラノーマ患者および健常ドナーで検出された（図８Ａ）。特に、総体的な応答は健常ドナーと癌患者で類似していると思われる（図８Ｂ）。
例７−微小環境におけるＣＣＬ２２量のＴ細胞仲介性低下
ＥＬＩＳＰＯＴにおけるｐＣＣＬ２２３〜１２応答を示したドナーＰＢＭＣを次にＩＬ−２の存在下でｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドで２回刺激した。次いで培養から、ＨＬＡ−Ａ２／ｐＣＣＬ２２３〜１２四量体および磁性粒子を用いてｐＣＣＬ２２３〜１２反応性Ｔ細胞を枯渇させた。このＴ細胞枯渇化培養を２つに分け、ＨＬＡ−Ａ２／ｐＣＣＬ２２３〜１２四量体分離Ｔ細胞をこれらの１つに戻して加えた（図８Ｃ）。両培養の上清中のＣＣＬ２２濃度を次いでモニタリングした。特に、ＣＣＬ２２量はわずか１日後にｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞を添加した培養でより低く、この差は培養期間にわたって増加した。培養の９日後、ＣＣＬ２２濃度は、四量体豊富化培養と比べて四量体枯渇化培養でほぼ３倍高かった（図８Ｄ）。
例８−ｐＣＣＬ２２３〜１２刺激は微小環境においてＣＣＬ２２量を低下した
癌患者がＣＣＬ２２由来ペプチドでワクチン接種される設定を模倣するため、ＰＭＢＣをインビトロでｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドエピトープおよびＩＬ−２で刺激した。ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞のこの活性化がＰＭＢＣにおける全体的なＣＣＬ２２濃度に影響したかどうか次いで検討した。最初に、ＥＬＩＳＰＯＴでｐＣＣＬ２２３〜１２応答を示したドナーＰＢＭＣをｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドを用いて刺激し、上清中のＣＣＬ２２濃度を１週間にわたって測定した（図９Ａ）。ＣＣＬ２２発現は、ＨＩＶコントロールペプチドで刺激された培養に比べてｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドで刺激された培養で低かった。この差は培養の２日後で明らかであり、１週間後に有意に達した（Ｐ＝０．０１）。
続いて、ｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドまたはＨＩＶコントロールペプチドを使用して健常ドナー１１名および癌患者１３名からのＰＢＭＣを刺激し、刺激の１週間後に上清中のＣＣＬ２２濃度を次いで測定した。健常者ドナー由来のＰＢＭＣ中で、ＣＣＬ２２濃度はｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドによる刺激後に有意に低下した（Ｐ＝０．０２）（図９Ｂ）。他方で、癌患者由来のＰＢＭＣ中では、ｐＣＣＬ２２３〜１２による刺激後のＣＣＬ２２濃度の総体的な低下は有意に至らなかった（Ｐ＝０．１７）（図９Ｃ）。癌患者由来のＰＢＭＣを低ＣＣＬ２２発現（≦２０００ｐｇ／ｍＬ）および高ＣＣＬ２２発現（≧５０００ｐｇ／ｍＬ）によって層別したとき（図９Ｃ）、高発現群はｐＣＣＬ２２３〜１２刺激後にＣＣＬ２２濃度の有意な低下を示した（Ｐ＝０．００５）。
卵巣性腹水液は報告によると、高量のＣＣＬ２２とともに、癌細胞および免疫浸潤性細胞の混合物を含む。ｐＣＣＬ２２３〜１２特異的Ｔ細胞が腫瘍微小環境においてＣＣＬ２２濃度に直接的に影響し得るかどうか試験するため、ＨＬＡ−Ａ２陽性上皮卵巣癌を有する患者５名から腹水液を収集し、腹水細胞を分離した。これらの患者２名からの腹水細胞は低い生存能力を示し、そのため、患者３名からの細胞のみ分析できた。これらの患者の１名からの腹水細胞はいずれのＴリンパ球も含まなかった。残りの卵巣患者２名からの腹水細胞をｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドで刺激し、これは刺激１週後に上清中の総体的なＣＣＬ２２量の低下をもたらした（図９Ｄ）。
例８−ｐＣＣＬ２２３〜１２刺激はサイトカイン環境に影響した
癌患者１１名および健常ドナー１０名からのＰＢＭＣ上清を、ｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチドによる刺激の１週後のサイトカイン量の変化について、ＨＩＶコントロールペプチドと比較してさらに試験した。ＣＣＬ２２ペプチドで刺激された癌患者由来のＰＢＭＣはＩＬ−６量の有意な増加を示した（Ｐ＝０．０２）。同様な増加が健常ドナー由来のＰＭＣの培養物中で認められたが、この変化は有意には至らなかった（Ｐ＝０．０６）（図１０Ａ）。健常ドナー（１０名中７名）および癌患者（１１名中７名）由来のＰＢＭＣの培養物中のＴＮＦα量の低下傾向も認められたが、これらの変化は有意には達しなかった（それぞれＰ＝０．７およびＰ＝０．１６）（図１０Ｂ）。培養上清中のＩＬ−１β、ＩＬ−１０、およびＩＦＮ−γの濃度をさらに試験した。ｐＣＣＬ２２３〜１２ペプチド対コントロールペプチドで刺激された培養物間でこれらのサイトカインに明らかな差は検出されなかった。刺激後、ＩＬ−１０は上清中でほとんど検出できず、ＩＬ−１βはｐＣＣＬ２２３〜１２による刺激後に、癌患者１名および健常ドナー２名のみで誘発された（データは示さず）。
例９−結論
本発明者らの本結果は、特異的Ｔ細胞がＣＣＬ２２発現細胞を標的にできたことを実証した。
本発明者らはＴ細胞がＨＬＡ制限ＣＣＬ２２由来ペプチドエピトープを認識できたことを実証し、したがってインビトロでＣＣＬ２２ペプチドによるＰＢＭＣの再刺激によってＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞を拡張できた。クロム放出細胞毒性アッセイの結果はＣＣＬ２２発現癌細胞（乳癌および結腸癌細胞、ならびに白血病細胞）の特異的認識および溶解をさらに実証した。さらに、ｓｉＲＮＡトランスフェクションによるＣＣＬ２２ノックダウンは、細胞をＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞による致死から救済した。これらの結果は、ＣＣＬ２２発現細胞中で、シグナルペプチドが分解されエピトープが続いて処理され、ＨＬＡ−Ａ２分子に制限された細胞表面で提示されることを示唆する。ＣＣＬ２２シグナルペプチドが取り上げられ非プロフェッショナル抗原提示細胞の表面で交差提示され得ることも認めた。
本発明者らは、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用してＨＬＡ−Ａ２＋癌患者および健常者からのＰＢＭＣを、ＣＣＬ２２由来Ｔ細胞エピトープに対する反応性について試験し、Ｔ細胞がＣＣＬ２２由来ペプチドに自発的に反応することを認めた。四量体豊富化／枯渇化実験は、ＰＢＭＣへのＨＬＡ−Ａ２制限ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の添加が微小環境中でＣＣＬ２２量を低下させたことを示した。ペプチドエピトープによる刺激を介したＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の活性化が、健常ドナーおよび高いＣＣＬ２２産生を有する癌患者の両方からのＰＭＢＣでＣＣＬ２２を有意に低下させたことがさらに測定された。このような活性化は、卵巣癌患者から分離された腹水由来細胞の上清中のＣＣＬ２２低下ももたらした。これらの結果は、ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞を使用してＣＣＬ２２発現細胞を標的にし、かつこれによって腫瘍微小環境へのＣＣＬ２２仲介Ｔｒｅｇ移動を抑制し得ることを示す。
興味深いことに、ペプチド刺激によってＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞を活性化することは、ＰＭＢＣ上清へのＩＬ−６の放出増加をもたらし、ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞が全体的な前炎症微小環境に影響を及ぼし得ることを示した。ＥＬＩＳＰＯＴの結果は癌患者および健常ドナーの両方における自発的ＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞応答を示し、ＣＣＬ２２が正常免疫細胞中で多量に発現されているため、これは多少驚くべきことだった。
結論として、本発明者らの本結果は、ＣＤ８＋Ｔ細胞がＨＬＡ制限ＣＣＬ２２ペプチドエピトープを認識できたことを示す。これらのＴ細胞はＣＣＬ２２発現に依存する様式で様々な癌細胞株を認識し溶解し、かつ癌患者および健常者に自然に存在した。ＣＣＬ２２特異的細胞の活性化は、微小環境中のＣＣＬ２２濃度に直接的に影響し得る。
例１０−Ｃ５７ＢＬ／６マウスのネズミＣＣＬ２２ペプチドワクチン接種
マウス
Ｃ５７ＢＬ／６雌マウスをＴａｃｏｎｉｃＭ＆Ｂ（デンマーク）またはＪａｎｖｉｅｒ（フランス）から入手した。すべてのマウスを各実験の開始前に少なくとも１週間順化した。マウスは約８〜１４週齢で実験に加えた。実験手順は実験動物福祉に関する国家倫理委員会（ｔｈｅ ｎａｔｉｏｎａｌ ｅｔｈｉｃｓ ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｉｍａｌ ｗｅｌｆａｒｅ）によって承認され、デンマークガイドラインに従って実施した。
ペプチド
２種の異なるネズミＣＣＬ２２ペプチド：ここではｍＣＣＬ２２ｌｏｎｇと名付ける一つの長いペプチド（ＭＡＴＬＲＶＰＬＬＶＡＬＶＬＬＡＶＡＩＱＴＳ）、およびここではｍＣＣＬ２２ｓｈｏｒｔと名付ける一つの短いペプチド（ＶＡＬＶＬＬＡＶＡＩ、ｍＣＣＬ２２ｌｏｎｇの一部）をＴＡＧ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ（コペンハーゲン，デンマーク）によって合成した。
ペプチドワクチン接種
１０ｍＭ（ｍＣＣＬ２２ｓｈｏｒｔ）および５ｍＭ（ｍＣＣＬ２２ｌｏｎｇ）のネズミＣＣＬ２２ペプチド（ＴＡＧ Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，デンマーク）ストックをＤＭＳＯ中に調製した。全容量１００μＬ中の１：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ＩＦＡ／ＰＢＳのエマルションで１００μｇのペプチドによって、マウスを下背部で皮下（ｓ．ｃ．）にワクチン接種した。マウスを週に１回、３週間ワクチン接種し、最後のワクチン接種の１週後に屠殺した。
脾臓細胞単一細胞溶液の調製
屠殺したマウスから脾臓を取り出し、細胞ストレーナー（０．７μｍ）に通して粉砕し、１０％ＦＣＳ（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標）によるＧｉｂｃｏ（登録商標））を添加したＲ１０培地：ＰＲＭＩ１６４０（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標）によるＧｉｂｃｏ（登録商標））で洗浄した。２分間赤血球溶解緩衝液を加えることにより赤血球を溶解し、ついで１０ウシ胎児血清を添加したＲ１０で２回洗浄した。
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
ＥＬＩＳＰＯＴを製造業者の取扱説明書による説明に従って実施した。簡単に説明すると、９６ウェルＭＳＩＰＮ４Ｗ ＥＬＩＳＰＯＴプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を、ＰＢＳ中１２μｇ／ｍＬの濃度でマウスＩＦＮγ特異的捕捉Ａｂ（ＡＮ１８、Ｍａｂｔｅｃｈ）を用いて４℃にて一昼夜コーティングした。８×１０５または４×１０５個の脾臓細胞／ウェルをプレート中に三重測定で播種した。ネズミＣＣＬ２２ペプチドに対するＩＦＮγ応答を検討するため、細胞を異なるペプチド（５μＭ）またはコントロールとしてＲ１０とともに３７℃で１８〜２０時間インキュベーションした。ＥＬＩＳＰＯＴを緩衝液（ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡおよびＮａＮ３）中１μｇ／ｍＬの濃度でマウスＩＦＮγ特異的検出Ａｂ（Ｒ４−６Ａ２−ビオチン、Ｍａｂｔｅｃｈ）と室温で２時間反応させ、ついでＰＢＳで６回洗浄した。次いで、緩衝液中のストレプトアビジン−ＡＬＰ（１：１０００、Ｍａｂｔｅｃｈ）を室温で１時間加えた。スポットを、基質溶液ＢＣＩＰ／ＮＢＴ（Ｍｅｂｔｅｃｈ）を加えることによって発色させ、水道水で洗浄することにより停止した。
ＥＬＩＳＰＯＴをＥＬＩＳＰＯＴリーダー（ＣＴＬ−Ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔ）によって分析した。結果は図１１に示され、本開示のペプチドを用いて免疫応答をインビボで高めることができることを示した。
参考文献
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Claims (80)

  1. 医薬品としての使用のための、
    ａ）（ｉ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２のアミノ酸の連続した配列を含むＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、
    （ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ制限ペプチドフラグメントまたはＭＨＣクラスＩＩ制限ペプチドフラグメントである、ＣＣＬ２２の免疫原性的に活性なフラグメント、
    （ｉｉｉ）（ｉ）および（ｉｉ）に基づくポリペプチドの機能的ホモログであって、ここで前記機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の配列同一性を共有し、および／または前記機能的ホモログはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸の連続配列と同一の配列からなるが、ただし最大で２個のアミノ酸などの、最大で１個のアミノ酸などの、最大で３個のアミノ酸が置換されている免疫原性的に活性なポリペプチドである機能的ホモログ、
    （ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）に基づくポリペプチドのいずれかを含むポリペプチド、
    （ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）に基づくポリペプチドのいずれかをコードする核酸、
    の１つ以上、ならびに
    ｂ）アジュバント
    を含む、ワクチン組成物。
  2. 前記免疫原性的に活性なペプチドフラグメントが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の５〜２４個のアミノ酸の範囲で連続した配列、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の配列同一性を共有する機能的ホモログからなる、請求項１に記載のワクチン組成物。
  3. 前記免疫原性的に活性なペプチドフラグメントが、
    ａ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の９〜１０個のアミノ酸の連続した配列などの、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の８〜１１個のアミノ酸の範囲で連続した配列、または
    ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の２２〜２４個のアミノ酸の連続した配列などの、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２の２０〜２５個のアミノ酸の範囲で連続した配列、または
    ｃ）最大で２個のアミノ酸が置換されているａ）またはｂ）の機能的ホモログ、
    を含むまたはこれらからなる、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  4. 前記免疫原性的に活性なペプチドが、配列ＶＸＬＶＬＬＡＶＡＹ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）を含み、ここでＸはバリンおよびアラニンからなる群から選択され、かつＹはイソロイシンおよびロイシンからなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  5. 前記免疫原性的に活性なペプチドが、表１に記載された配列を含むまたはこの配列からなり、ここで最大で３個、最大で２個などの、例えば最大で１個のアミノ酸が置換されている、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  6. 前記免疫原性的に活性なペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６からなる群から選択される配列を含むまたはこの配列からなる、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  7. 前記免疫原性的に活性なペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２の最大で１００個の連続したアミノ酸またはその機能的ホモログからなり、ここでＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の最大で３個のアミノ酸が置換されている、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成。
  8. 前記ワクチン組成物が、ＣＣＬ２２の発現によって特徴付けられる臨床症状を有する個体に投与される場合、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２またはそれらと少なくとも７０％の同一性を共有する機能的ホモログを発現する癌および／または抗原提示細胞に対する免疫応答を誘発できる、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  9. 前記ワクチン組成物が、個体における細胞免疫応答を誘発できるおよび／またはＴｒｅｇ動員を抑制できる、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  10. 前記細胞免疫応答が、ＣＣＬ２２に対して特異的である、請求項９に記載のワクチン組成物。
  11. 前記医薬品が、癌の治療用である、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  12. 前記医薬品が、感染症の治療用である、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  13. 以下の特性：
    ａ）臨床症状を有する個体のＰＢＬ集団におけるＩＮＦ−γ産生細胞を、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定されるときに１０４個のＰＢＬあたり少なくとも１個の頻度で誘発できる、および／または
    ｂ）腫瘍組織中でエピトープペプチドと反応性であるＣＴＬ（細胞毒性Ｔ細胞）のｉｎ ｓｉｔｕ検出ができる、
    ｃ）インビボでＣＣＬ２２特異的Ｔ細胞の増殖を誘発できる、
    の少なくとも１つを有するＭＨＣクラスＩ制限ペプチドを含む、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  14. ＭＨＣクラスＩ分子によって制限されるペプチドフラグメントを含む、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  15. ＭＨＣクラスＩＩ分子によって制限されるペプチドフラグメントを含む、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  16. １０４個ＰＢＬあたり少なくとも１０個の頻度で臨床症状を有する個体のＰＢＬ集団中でＩＮＦ−γ産生細胞を誘発できるペプチドフラグメントを含む、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  17. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の同一性を共有するそれらの機能的ホモログが発現される臨床症状を有する個体のＰＢＬ集団中でＩＮＦ−γ産生細胞を誘発できるペプチドフラグメントを含む、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  18. 前記癌が、腫瘍形成癌である、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  19. 前記ペプチドフラグメントが、最大で５０個のアミノ酸残基からなり、例えば最大で４５個のアミノ酸残基、最大で４０個のアミノ酸残基など、例えば最大で３５個のアミノ酸残基、最大で３０個のアミノ酸残基など、例えば最大で２５個のアミノ酸残基、最大で２０〜２５個のアミノ酸残基など、最大で２４個のアミノ酸残基など、最大で２２個のアミノ酸残基など、最大で２０個のアミノ酸残基など、最大で１５個のアミノ酸残基など、最大で１０個のアミノ酸残基など、最大で９個のアミノ酸残基などからなる、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  20. 前記ペプチドフラグメントが、最大で２４個のアミノ酸残基からなり、最大で２２個のアミノ酸残基など、例えば最大で２１個のアミノ酸残基、最大で２０個のアミノ酸残基など、例えば最大で１９個のアミノ酸残基、最大で１８個のアミノ酸残基など、例えば最大で１７個のアミノ酸残基、最大で１６個のアミノ酸残基など、例えば最大で１５個のアミノ酸残基、最大で１４個のアミノ酸残基など、例えば最大で１３個のアミノ酸残基、最大で１２個のアミノ酸残基など、例えば最大で１１個のアミノ酸残基、８〜１０個のアミノ酸残基など、９〜１０個のアミノ酸残基などからなる、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  21. 前記ペプチドフラグメントが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６および前記のいずれかの機能的ホモログからなる群から選択され、前記機能的ホモログは同一の配列のポリペプチドでありここで最大で３個のアミノ酸が置換されている、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  22. 前記ペプチドフラグメントが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４またはそれらの機能的ホモログである、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  23. 前記ポリペプチドが、最大で１００個の連続したアミノ酸のポリペプチドであり、最大で９０個の連続したアミノ酸など、最大で８０個の連続したアミノ酸など、例えば最大で６０個の連続したアミノ酸、最大で４０個の連続したアミノ酸など、例えば最大３０個の連続したアミノ酸、最大で２５個の連続したアミノ酸など、例えば最大で２２個の連続したアミノ酸、最大で２０個の連続したアミノ酸など、例えば最大で１５個の連続したアミノ酸、最大で１０個の連続したアミノ酸など、例えば最大で９個の連続したアミノ酸のポリペプチドであり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸の連続した配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  24. 前記ポリペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸の連続した配列を含む最大で２４個の連続したアミノ酸のポリペプチドであり、最大で２２個の連続したアミノ酸など、例えば最大で２０個の連続したアミノ酸、最大で１５個の連続したアミノ酸などのポリペプチドである、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  25. アミノ酸配列の前記連続した配列が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４ならびに前記のいずれかの機能的ホモログからなる群から選択され、前記機能的ホモログは最大で３個のアミノ酸が置換または欠失されている以外は同一の配列のポリペプチドである、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  26. 前記ワクチンが、ワクチン接種された個体中でＣＣＬ２２発現癌細胞および／またはＣＣＬ２２抗原提示細胞に対する細胞毒性効果を有する調節Ｔ細胞の産生を誘発する、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  27. 前記ワクチン組成物が、被験体中で臨床応答を誘発でき、ここで前記臨床応答が安定な疾患、部分奏効または完全寛解によって特徴付けられる、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  28. ＣＣＬ２２ではないタンパク質またはペプチドフラグメントから選択される免疫原性的に活性なタンパク質またはペプチドフラグメントをさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  29. 前記アジュバントが、細菌ＤＮＡに基づくアジュバント、オイル／界面活性剤に基づくアジュバント、ウイルスｄｓＲＮＡに基づくアジュバントおよびイミダゾチニリンからなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  30. 前記アジュバントが、モンタナイドＩＳＡアジュバントである、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  31. 前記アジュバントが、モンタナイドＩＳＡ ５１またはＩＳＡ ７２０である、請求項３０に記載のワクチン組成物。
  32. 前記アジュバントが、モンタナイドＩＳＡ ５１である、請求項３１に記載のワクチン組成物。
  33. 前記アジュバントが、ＧＭ−ＣＳＦである、請求項１〜３２のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  34. 前記ワクチン組成物が、前記免疫原性的に活性なペプチドフラグメントまたは前記免疫原性的に活性なペプチドフラグメントをコードする核酸を含む抗原提示細胞を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  35. 前記抗原提示細胞が、樹状細胞である、請求項３４に記載のワクチン組成物。
  36. 前記核酸が、先行請求項のいずれか一項に記載のペプチドをコードする、請求項１に記載のワクチン組成物。
  37. 前記核酸が、ベクター内に含まれる、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  38. 前記ベクターが、ウイルスベクターおよび細菌ベクターからなる群から選択される、請求項３７に記載のワクチン組成物。
  39. 前記ベクターが、Ｔ細胞刺激ポリペプチドをコードする核酸をさらに含む、請求項３７または３８のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  40. 前記ワクチン組成物が、ＣＣＬ２２が発現される癌疾患の治療用である、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  41. 前記ワクチン組成物が、抗原提示細胞中でＣＣＬ２２発現を生じる炎症の治療用である、先行請求項のいずれか一項に記載のワクチン組成物。
  42. 請求項１〜４１のいずれか一項に記載のワクチン組成物、および第二有効成分を含む、構成要素からなるキット。
  43. 前記第二有効成分が、免疫刺激組成物である、請求項４２に記載の構成要素からなるキット。
  44. 前記さらなる免疫刺激組成物が、１種類以上のインターロイキンを含む、請求項４２または４３のいずれか一項に記載の構成要素からなるキット。
  45. 前記インターロイキンが、ＩＬ−２および／またはＩＬ−２１から選択される、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載の構成要素からなるキット。
  46. 前記第二有効成分が、抗癌剤である、請求項４２〜４５のいずれか一項に記載の構成要素からなるキット。
  47. 前記抗癌剤が、化学療法剤である、請求項４６に記載の構成要素からなるキット
  48. 前記化学療法剤が、アクチミド、アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロスポラミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エリルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イリノテカン、レナリドマイド、ロイコボリン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、レブリミド、テモゾロミド、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビンから選択される、請求項４７に記載の構成要素からなるキット。
  49. 前記第二有効成分が、抗生物質である、請求項４２〜４８のいずれか一項に記載の構成要素からなるキット。
  50. 前記抗生物質が、アモキシリン、ペニシリン、アシクロビルおよび／またはビダラビンから選択される、請求項４９に記載のワクチン組成物を含む構成要素からなるキット。
  51. 前記提供される組成物が、同時にまたは連続して投与される、請求項４２〜５０のいずれか一項に記載の構成要素からなるキット。
  52. 請求項１〜４１のいずれか一項で定められるペプチドフラグメントおよびクラスＩ ＨＬＡもしくはクラスＩＩ ＨＬＡ分子またはそのような分子のフラグメントの複合体。
  53. モノマーである、請求項５２に記載の複合体。
  54. マルチマーである、請求項５２に記載の複合体。
  55. 臨床症状を有する個体においてＣＣＬ２２反応性Ｔ細胞の存在を検出する方法であって、腫瘍組織または血液サンプルを請求項４８〜５０のいずれか一項の複合体と接触させること、および前記組織または前記血液細胞への前記複合体の結合を検出することを含む、方法。
  56. 請求項１〜４１のいずれか一項で定められるペプチドフラグメントに特異的に結合できる分子。
  57. 抗体またはそのフラグメントである、請求項５６に記載の分子。
  58. 前記分子が、Ｔ細胞受容体である、請求項５６または５７のいずれか一項に記載の分子。
  59. 請求項５６〜５８のいずれか一項の分子の結合をブロッキングできる分子。
  60. ＣＣＬ２２の発現によって特徴付けられる臨床症状を治療するまたは予防する方法であって、前記臨床症状を有する個体に請求項１〜４１のいずれか一項に記載の組成物、請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の分子または請求項４２〜５１のいずれか一項に記載の構成要素からなるキットの効果的な量を投与することを含む、方法。
  61. 治療されるまたは予防される前記臨床症状が、ＣＣＬ２２が発現される癌疾患である、請求項６０に記載の方法。
  62. さらなる癌治療と組み合わされる、請求項６１に記載の方法。
  63. 前記さらなる治療が、化学療法、放射線療法、免疫刺激物質による治療、遺伝子療法、抗体による治療および樹状細胞を用いる治療からなる群から選択される、請求項６２に記載の方法。
  64. 治療されるまたは予防される前記臨床症状が、抗原提示細胞中でＣＣＬ２２発現を生じる感染症である、請求項６０〜６３のいずれか一項に記載の方法。
  65. 前記感染症に対するさらなる治療と組み合わされる、請求項６４に記載の方法。
  66. 前記さらなる治療が、化学療法、免疫刺激物質による治療、遺伝子療法、抗体による治療および樹状細胞を用いる治療からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記ＣＣＬ２２またはＣＣＬ２２の前記免疫原性的に活性なペプチドフラグメントが、個体あたり５０〜５００μｇの範囲の投与量で投与され、例えば８０〜３００μｇの範囲で、１００〜２５０μｇの範囲などの投与量で投与され、ここで前記個体は好ましくはヒトである、請求項６０〜６６のいずれか一項に記載の方法。
  68. 臨床症状の治療用または予防用の医薬品の製造における請求項１〜４１のいずれか一項に記載のワクチン組成物、請求項４２〜５１のいずれか一項に記載の構成要素からなるキットまたは請求項５６〜５８のいずれか一項に記載の分子の使用。
  69. 治療されるまたは予防される前記疾患が、ＣＣＬ２２が発現される癌疾患である、請求項６８に記載の使用。
  70. さらなる癌治療と組み合わされる、請求項６８または６９のいずれか一項に記載の使用。
  71. 前記さらなる治療が、化学療法、放射線療法、免疫刺激物質による治療、遺伝子療法、抗体による治療および樹状細胞を用いる治療からなる群から選択される、請求項６８に記載の使用。
  72. 治療されるまたは予防される前記臨床症状が、抗原提示細胞中でＣＣＬ２２発現を生じる感染症である、請求項６８に記載の使用。
  73. 前記感染症に対するさらなる治療と組み合わされる、請求項７２に記載の使用。
  74. 前記さらなる治療が、化学療法、免疫刺激物質による治療、遺伝子療法、抗体による治療および樹状細胞を用いる治療からなる群から選択される、請求項７３に記載の使用。
  75. 免疫付与をモニタリングする方法であって、
    ａ）個体からの血液サンプルを提供する、
    ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のＣＣＬ２２、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の連続した配列を含む免疫原性的に活性なペプチドフラグメント、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも７０％の同一性を有するその機能的ホモログ、または前記ペプチドフラグメントもしくは機能的ホモログをコードする核酸を提供する、
    ｃ）前記血液サンプルがタンパク質またはペプチドを特異的に結合する抗体またはＴ細胞受容体を含むＴ細胞を含むかどうか決定する
    段階を含み、
    これによって前記個体中で前記タンパク質またはペプチドに対する免疫応答が高められているか決定する、方法。
  76. 前記ペプチドフラグメントが、請求項１〜４１のいずれか一項で定められるペプチドフラグメントである、請求項７５に記載の方法。
  77. 癌および／または炎症などの、ＣＣＬ２２の発現と関連する臨床症状の治療または予防において使用するためのＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５の連続した配列またはその機能的フラグメント、またはＣＣＬ２２ペプチドフラグメントをコードする核酸を含む免疫原性的に活性なＣＣＬ２２ペプチドフラグメントであって、前記機能的フラグメントが最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである、免疫原性的に活性なペプチドフラグメント。
  78. 前記ペプチドフラグメントが、請求項１〜４１のいずれか一項で定められるものである、請求項７７に記載のペプチドフラグメント。
  79. 癌の前記治療または予防における使用のための請求項７７または７８のいずれか一項に記載のペプチドフラグメント。
  80. 前記ペプチドフラグメントが、癌および／または炎症などの、ＣＣＬ２２の発現と関連する臨床症状の治療または予防において使用するためのＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、またはその機能的ホモログ、または前記ＣＣＬ２２ペプチドフラグメントをコードする核酸を含むまたはそれからなり、前記機能的ホモログは最大で３個のアミノ酸が置換されている以外は同一の配列のポリペプチドである、請求項７７〜７９のいずれか一項に記載にペプチドフラグメント。
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