JP2006508182A5 - - Google Patents

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炎症応答と関連した病理学的状態を処置または抑制する組成物。
本発明は一般的に炎症および／またはＮＦκＢの組織特異的活性化に関連する病理学的状態を治療または抑制するために使用できる組成物、細胞内の場合を含む炎症をモジュレートする方法、および細胞におけるＮＦκＢをモジュレートする方法に関する。より詳しくは、本発明は、場合により第２の成分、例えばローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトン物質種およびトリプトアンスリンと組み合わせることができる、ホップの抽出物またはその誘導体またはホップから単離または誘導された画分を含む組成物に関する。本発明は更に、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の発現を抑制するため、標的細胞において選択的にプロスタグランジンの合成を抑制するため、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制するため、および／または標的細胞において選択的にＮＦκＢの活性化を抑制するために組成物を使用する方法に関する。
シクロオキシゲナーゼ（プロスタグランジンエンドパーオキシドシンターゼ、ＥＣ１．１４．９９１，ＣＯＸ）はアラキドン酸からプロスタグランジンＨ２（ＰＧＨ２）への代謝における律速段階を触媒し、後者は更に代謝されて種々のプロスタグランジン、プロスタサイクリンおよびトロンボキサンＡ２（図１参照）となる。１９９０年代初頭にＣＯＸは２つのアイソフォーム、即ち一般的にＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２と称されるものとして存在することが明らかになった。その後ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の蛋白はトリと哺乳類よりもかなり以前に派生した異なる遺伝子から誘導されることがわかった。ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２経路から発生するプロスタグランジン類（ＰＧｓ）は同一の分子であり、従って、同一の生物学的作用を有する。しかしながら、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２は独特のパターンおよび種々の量のエイコサノイドを生成し得；従ってこれ等のアイソザイムの活性化における相対的な相違により極めて異なる生物学的応答がもたらされ得る。ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の組織分布および調節における相違は現在ではＣＯＸ阻害剤の有利な作用および有害な作用にとって重要であると考えられている。
一般的に捕らえられている概念（ＣＯＸ定説）はＣＯＸ−１が大部分の組織において構成的に発現されるのに対し、ＣＯＸ−２はインビトロの細胞内およびインビボの炎症部位において有糸分裂誘発物質、サイトカインおよび細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）を含むプロ炎症刺激物質によりトリガーされる誘導酵素であるという点である。発現におけるこのような相違に主に基づけば、ＣＯＸ−１はハウスキーピング酵素として特性化されており、そして胃粘膜の細胞保護、腎血流の調節および血小板凝固の制御のような生理学的機能の維持に関与していると考えられる。ＣＯＸ−２は、構成的発現が脳、腎臓および胃腸管において認められているものの、主に炎症を媒介すると考えられている。従って、ＣＯＸ−２の組織特異的または細胞特異的な発現をダウンレギュレートすることが望ましい。
アラキドン酸は全てのＰＧの生合成のための主要な基質として機能する。ＰＧは直面する細胞環境の生理学的な変化の多くに影響するパラクリンおよびオートクリンのメディエーターの両方として機能するユビキタスなホルモンである。ＰＧの種々の生理学的作用には炎症反応、例えば慢性関節リューマチおよび骨関節炎、血圧の制御、血小板凝固、分娩誘導および疼痛と発熱の悪化が包含される。アスピリンおよび他の非ステロイド鎮痛剤がＰＧ生産を抑制するという３０年前の発見によりＰＧの合成は薬剤開発の標的とみなされるようになった。ＰＧＡ〜ＰＧＩと命名された９種の異なる化学クラスに少なくとも１６種の異なるＰＧが存在する。ＰＧはエイコサノイドと称される２０炭素含有化合物のより大きいファミリーの部分であり；それらにはプロスタサイクリン、トロンボキサンおよびロイコトリエンが含まれる。生成されるＰＧのアレイは特定の細胞型に存在する下流の酵素的機序に依存して変動する。例えば内皮細胞は主にＰＧＩ２を生産するのに対し、血小板は主にＴＸＡ２を生産する。
プロスタグランジン（ＰＧ）はヒトの胃粘膜のホメオスタシスの維持において重要な役割を果たすと考えられている。現在の定説では、ＣＯＸ−１は粘膜ホメオスタシスの維持のための正常な胃粘膜におけるＰＧの合成に関与し、そしてＣＯＸ−２は内毒素曝露またはサイトカイン刺激の後の潰瘍の治癒の間の発現の誘導を伴いながら低濃度で正常胃粘膜により発現される。現在、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２は正常な胃粘膜において重要な生理学的役割を果たしていると考えられる。
ＣＯＸによるＰＧの生産を抑制する化合物は疼痛および炎症の制御において重要な薬剤となっている。総括してこれ等の薬剤は非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）として知られており、その主な適応症は骨関節炎および慢性関節リューマチである。しかしながら、ＮＳＡＩＤ、そして特にアスピリンの使用は心臓血管疾患の予防にまで拡張されている。過去１０年間に渡り、ＣＯＸ−２の酵素活性の直接の阻害剤である新しい分子は、これら化合物が長期使用において胃に対して刺激がより少ないという推察により、その開発に多大な努力が差し向けられてきた。従って、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制することが望ましい。
「抗炎症および結合組織修復製剤」と題されたＫｕｈｒｔｓの米国特許出願２００２／００８６０７０Ａ１は約０．２３〜約３．３３の範囲のＩＣ５０−ＷＨＭＡ ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比を有するホップ成分を記載している。出願の実施例１は４２％フムロンを含む全ホップの超臨界二酸化炭素抽出を介して得られた抽出物（ＣＯ２−抽出物）を含有する組成物を記載している。
「抗炎症性睡眠促進性の薬草組成物および使用方法」と題された米国特許６，３９１，３４６号は動物における炎症を低減しながら、その動物の睡眠を促進することができる経口投与組成物を記載している。組成物は睡眠を促進するために使用されているホップのヒドロアルコール抽出物およびホップの超臨界二酸化炭素抽出物を含有している。
炎症の治療のための理想的な製剤は胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２の合成を抑制することなくＣＯＸ−２の誘導および活性を抑制する。しかしながら、従来の非ステロイド抗炎症剤は胃のＰＧＥ ２ 合成に影響することなくＣＯＸ−２を阻害する特異性を欠いており、そして長期間使用された場合胃腸系に対する損傷をもたらす危険性がある。実際、ロフェコキシブやセレコキシブのような新しく開発された抗炎症剤でさえも誘導された自発的出血および胃潰瘍治癒の遅延の形態における望ましくない胃毒性を発生させる。
従って、胃粘膜におけるＰＧＥ ２ の合成に対して殆ど、または全く作用を有さないＣＯＸ−２によるプロスタグランジンの合成を特異的に抑制または防止する化合物の製剤を発見することが有用である。このような関節組織の健康を温存するため、関節炎または他の炎症性状態を治療するために有用である製剤はこれまで発見されていない。「特異的または選択的ＣＯＸ−２阻害剤」という用語はＣＯＸ−１よりも優先してＣＯＸ−２を選択的に阻害する化合物または化合物の混合物を包含するべく造語されたものである。しかしながら、このような計算された選択性がより低い胃刺激性をもたらすことを意味するものであっても、試験物質を胃細胞において評価しない限り、「選択的ＣＯＸ−２阻害剤」という用語はは胃腸細胞に対する安全性を確約するものではない。標的組織、炎症細胞および胃粘膜細胞における化合物の作用を試験することのみが、胃刺激に関する低い潜在性を有する薬剤を発見することになる。
ＣＯＸ−２選択性（即ち低い胃刺激性）を確認することに関わる主要な問題点は、試験の方法論の相違が得られる結果に重大な影響を与える場合がある点である。表１に示したものはＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２に対抗するＮＳＡＩＤおよび天然の化合物の相対的な阻害活性を試験し、比較するために開発された多くのインビトロの試験法の分類である。これ等の試験系は以下の３つのグループ、即ち（１）動物酵素、動物細胞または細胞株を使用する系、（２）ヒト細胞株またはヒト血小板および単球を使用する試験、および（３）ＮＳＡＩＤおよび食餌補給剤の抗炎症作用および副作用に関する標的細胞を代表するヒト細胞を用いた現在進展中のモデル、に分類される。一般的にヒト細胞株またはヒト血小板および単球を使用したモデルが現時点での標準であり、有効化された標的細胞のモデルは出現していない。胃刺激の潜在性を評価することができるヒト胃細胞株が求められている。
（表１ 抗炎症化合物のＣＯＸ−２選択性を評価するインビトロ試験に関する試験系の分類）
Figure 2006508182
†Ｐａｒｉｅｔ，Ｍ．ａｎｄ Ｖａｎ Ｒｙｎ，Ｊ．（１９９８）。非ステロイド抗炎症剤によるシクロオキシゲナーゼ−１およびシクロオキシゲナーゼ−２の識別的阻害を検討するために使用された実験モデル。Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．４７，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ２Ｓ９３−Ｓ１０１より採用、本明細書において参考として援用される。
使用する酵素は動物またはヒト起源のものであることができ、ネイティブまたは組み換え体であることができ、そして精製された酵素として、ミクロソーム調製物として、または全細胞試験として使用できる。他の系の変数にはアラキドン酸の原料が含まれる。ＰＧ合成は内因的に放出されたアラキドン酸または外因的に添加されたアラキドン酸から測定できる。後者の場合は、異なる実験室では異なる濃度が使用される。
第２に、組み換えＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２酵素の遺伝子複製のためには種々の発現系がある。更にＣｏｘ−１またはＣｏｘ−２遺伝子でトランスフェクトした細胞は多様な起源、例えば昆虫細胞株またはＣＯＳ細胞であることができる。第３にＣＯＸ−２誘導剤の有無も変動し得る。組み換え酵素により安定にトランスフェクトされる細胞はこの酵素を構成的に発現し、誘導剤は使用されない。これはＣＯＸ−２を誘導しなければならない他の細胞とは基本的に対照的である。ＣＯＸ−２の誘導は一般的には細菌ＬＰＳまたは種々のサイトカイン、例えばインターロイキン−１βまたは腫瘍壊死因子を用いて行われる。更に、これ等の内毒素およびサイトカインは種々の濃度で投与される。
第４に、被験薬剤、ＣＯＸ−２誘導剤またはアラキドン酸と共にインキュベートする期間は種々の実験室の間で異なっている。これ等の相違は、ＣＯＸ−２の阻害が時間依存性であるため、試験の定量的結果に影響する場合がある。最後に、培地の蛋白濃度が変動する場合があり；これは血漿中蛋白に強固に結合できる化合物に関する問題である。
ＣＯＸ−２の選択性に関わる有用な試験は以下の特性を有し、即ち（１）発現に関して正常な生理学的条件下でネイティブのヒト酵素を含有する全細胞を使用しなければならない；（２）細胞はまた化合物の抗炎症作用および副作用に関して標的細胞でなければならない；（３）ＣＯＸ−２は構成的に発現されるよりはむしろ炎症過程を刺激するために誘導しなければならない；そして、（４）ＰＧ合成は外因的に添加されたアラキドン酸からよりはむしろ内因的な貯留物から放出されたアラキドン酸から測定しなければならない。
方法論的な相違はＣＯＸ阻害に関して得られる結果の劇的な相違を説明することができる。例えば精製された酵素に対して試験する場合は、ウルソール酸は可能な生理学的に得られる濃度をはるかに超えた１３０μＭのＩＣ５０を示した［Ｒｉｎｇｂｏｍ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｕｒｓｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｆｒｏｍ Ｐｌａｎｔａｇｏ ｍａｊｏｒ，ａ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｊ Ｎａｔ Ｐｒｏｄ ６１，１２１２−１２１５］。ＲＡＷ２６４．７ネズミマクロファージ系統において、Ｓｕｈ等は約４０μＭのウルソール酸に関するＩＣ５０を報告しており［Ｓｕｈ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎｏｖｅｌ ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ（ｉＮＯＳ）ａｎｄ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ＣＯＸ−２）ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５８，７１７−７２３］；そして、ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート刺激ヒト乳房細胞においてウルソール酸の概ねメジアンの阻害濃度は３．０μＭであった［Ｓｕｂｂａｒａｍａｉａｈ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｕｒｓｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｍａｍｍａｒｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６０，２３９９−２４０４］。
ＣＯＸ−２の選択性に関する理想的な試験を開発した実験室はまだない。ＲｘおよびＯＴＣ産物のために最も一般的に使用されている全細胞系はＷｉｌｌｉａｍ Ｈａｒｖｅｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅにより開発されたヒト全血試験である［Ｗａｒｎｅｒ，Ｔ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄ ｄｒｕｇ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１ ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｙ： ａ ｆｕｌｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ９６，７５６３−７５６８］。今日まで、この試験フォーマットは他の何れのものよりも多くのデータにより裏付けられた臨床的妥当性をもたらしている。しかしながら、正常胃粘膜におけるＣＯＸ−２の構成的発現の役割における新しい研究はＣＯＸ−２の非存在下においてＣＯＸ−１阻害をモデル化するために血小板を使用することの妥当性を再検討する必要性をもたらした。血小板試験に基づく胃毒性の推定はもはや調和の取れた分子的根拠ではない。シクロオキシゲナーゼ阻害剤の潜在的標的組織毒性を明らかにするためのヒト胃粘膜細胞株の有効化は安全で効果的な抗炎症剤の開発のための重要な要件となっている。
ＮＦ−κＢ、即ち蛋白ｐ５０およびＲｅｌＡのヘテロ二量体は広範に発現され哺乳類細胞における炎症および免疫応答のような複数の生物学的応答を調節する際に重要な役割を果たしている誘導性の真核細胞ＤＮＡ結合蛋白複合体である。ＮＦ−κＢはサイトカイン、ケモカイン、接着分子および抗微生物ペプチドをコードする遺伝子の発現を調節する。ＮＦ−κＢの標的にはＩＬ−２、ＩＬ−２受容体および肝の急性期の蛋白が包含される。免疫応答におけるその役割のほかに、ＮＦ−κＢの活性化はＴＮＦおよびＦａｓへのアポトーシス応答を圧倒することにより、代わりに増殖を可能とする。
図９に示すとおり、ＮＦ−κＢは不活性である場合には原形質性であり、そこでＩκＢにより維持されている。種々の刺激がＩＫＫ（ＩκＢキナーゼ）の活性化をもたらし、これがＩκＢをホスホリル化し、ユビキチン化および分解のためにこれをマーキングする。ＩκＢが分解すると、ＮＦ−κＢは自由に転写を開始できる。遺伝子の転写活性化の後、ＮＦ−κＢもまた急速に分解する。
従って、炎症応答を低減するために炎症の発症時にＮＦ−κＢの発現または活性をモジュレートする組成物を発見することは有用である。更に、ＮＦ−κＢのモジュレートとして作用する組成物は哺乳類身体における広範な種類の障害に影響することができる。ＣＯＸ−２の転写因子であるＮＦκＢの抑制の結果としてＣＯＸ−２の発現はダウンレギュレートされ得る。
炎症の治療のための理想的な製剤は胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２の合成を抑制することなくＣＯＸ−２の誘導および活性を抑制する。しかしながら、従来の非ステロイド抗炎症剤は胃のＰＧＥ２合成に影響することなくＣＯＸ−２を阻害する特異性を欠いており、そして長期間使用された場合胃腸系に対する損傷をもたらす危険性がある。実際、ロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ（登録商標）、Ｍｅｒｃｋ＆ＣＯ．，Ｉｎｃ．）やセレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ）のような新しく開発された抗炎症剤でさえも誘導された自発的出血および胃潰瘍治癒の遅延の形態における望ましくない胃毒性を発生させる。
従って、胃粘膜におけるＰＧＥ２の合成に対して殆ど、または全く作用を有さないＣＯＸ−２によるプロスタグランジンの合成を特異的に抑制または防止する化合物の天然の製剤を発見することが有用である。このような関節組織の健康を温存するため、関節炎または他の炎症性状態を治療するために有用である製剤はこれまで発見されていない。「特異的または選択的ＣＯＸ−２阻害剤」という用語はＣＯＸ−１よりも優先してＣＯＸ−２を選択的に阻害する化合物または化合物の混合物を包含するべく造語されたものである。しかしながら、このような計算された選択性がより低い胃刺激性をもたらすことを意味するものであっても、試験物質を胃細胞において評価しない限り、「選択的ＣＯＸ−２阻害剤」という用語は胃腸細胞に対する安全性を確約するものではない。標的組織、炎症細胞および胃粘膜細胞における化合物の作用を試験することのみが、胃刺激に関する低い潜在性を有する薬剤を発見することになる。
グルコサミンは一般的に骨関節炎の治療のために有効であり安全であるものとして許容されているが、変形性関節疾患の治療への医療介入は一般的にはその急性の症状の緩解に限定されている。医師等は一般的には変形性関節症の治療のためには非ステロイドおよびステロイド性の抗炎症剤を使用する。しかしながら、これ等の薬剤はそれらが軟骨を保護する能力を欠いており、そしてそれらが実際に軟骨の変性またはその合成の低減をもたらす場合があるため、長期間の治療には適していない。更にまた、大部分の非ステロイド抗炎症剤は長期間使用した場合には胃腸系を損傷させる。即ち、軟骨再建剤に抗炎症剤を組み合わせた関節炎および骨関節炎の新しい治療が緊急に望まれている。
グルコサミンは以下の２つの欠点、即ち（１）グルコサミン治療への応答速度は抗炎症剤の治療の場合よりも遅延していること、および、（２）変性の軽減の期待を満足することができないことを除き、その関節保護作用のために魅力的な骨関節炎の治療薬である。グルコサミンと非ステロイド抗炎症剤を比較する試験において、例えば一日当たり１５００ｍｇグルコサミンスルフェートと１２００ｍｇイブプロフェンを比較する二重盲検試験はグルコサミン投与患者の場合よりもイブプロフェン患者において最初の２週間により早く疼痛スコアが低下したことを示していた。しかしながら疼痛スコアの低下はグルコサミンを投与されている患者では試験期間中を通して持続し、２群間の差は８週目までにグルコサミンに有意に有利なものに変化した。Ｌｏｐｅｓ Ｖａｚ，Ａ．，Ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ ｓｕｌｐｆａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｋｎｅｅ ｉｎ ｏｕｔｐａｔｉｅｎｔｓ，８ Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｏｐｉｎ．１４５−１４９（１９８２）。即ち、グルコサミンは関節炎の疼痛と炎症を緩解し得るが、使用可能な抗炎症剤よりもより緩徐な速度である。
軟骨の代謝の正常化または骨関節炎の治療のための理想的な製剤は強力な抗炎症活性と共に十分な軟骨保護作用を与えるものである。骨関節炎のための旨適食餌栄養補給剤はグルコサミンにより与えられる一般的な軟骨再建特性を増強し、如何なる有害な副作用も誘導することなく炎症応答を減衰させなければならない。安価に製造でき全ての政府規制に準拠しなければならない。
しかしながら、現在使用可能なグルコサミン製剤は骨関節炎および慢性関節リューマチの伏在する原因に対し旨適攻撃を行って軽減するためには製剤されていない。更に、多くの市販の薬草および食餌栄養補給剤の場合と同様、使用可能な製剤は使用の歴史を有さず、また、安全性と有効性を確認するコントロールされた臨床試験にも付されていない。
従って、炎症細胞におけるＣＯＸ−２酵素活性の発現を特異的に抑制または防止し、その一方で胃粘膜におけるＰＧＥ２合成には殆どまたは全く影響しないため胃腸の不快感を伴うことなく製剤を使用できるような組成物を発見することは有用である。更にまた、このような製剤は胃における既存の潰瘍性状態の治癒も可能とする。
従って、炎症応答をモジュレートする化合物の製剤を発見することは有用である。更にＮＦκＢをモジュレートする化合物の製剤を発見することも有用である。このような製剤は広範な用途を有する。
更に、ＣＯＸ−２の発現を抑制し、標的細胞において選択的にプロスタグランジンの合成を抑制し、または、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制する化合物の製剤を発見することは有用である。例えば、胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２の合成に対して殆どまたは全く影響することなく炎症細胞におけるＣＯＸ−２によるプロスタグランジンの合成を特異的に抑制または防止する化合物の製剤を発見することは有用である。このような、関節組織の健康を温存するため、関節炎または他の炎症性状態を治療するために有用である製剤は、これまで発見されていない。好ましくは、製剤は胃細胞におけるＰＧＥ２の合成の抑制のためのメジアン有効濃度よりも最低１０倍は高値である炎症細胞におけるＣＯＸ−２阻害のためのメジアン有効濃度を有する。例えば、被験処方のＣＯＸ−２に関するメジアン阻害濃度がネズミマクロファージＲＡＷ２６４．７において０．２μｇ／ｍｌである場合、胃細胞におけるＰＧＥ２の合成に関するメジアン阻害濃度が２μｇ／ｍｌ以上でない限り、製剤は潜在的に低い胃刺激性を有していると考えられる。
好ましい実施形態はホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ）から単離または誘導された画分少なくとも１つを含有する組成物を含む。ホップから単離または誘導された画分の例はアルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップである。ホップから単離または誘導された画分の好ましい化合物は、例えば、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンを含むが、これらに限定されない。好ましい化合物はまた、ハロゲン、エーテルおよびエステルのような置換基を担持することができる。
別の実施形態は成分の組み合わせに関する。１つの実施形態は、第１の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、および、第２の成分としてローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．）、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、ジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、および、トリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物に関する。別の実施形態は第１の成分としてトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲート、および、第２の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、ローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、および、ジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物に関する。本明細書においては、抽出物とはある活性、例えば炎症の抑制、ＣＯＸ−２の誘導性または活性の抑制、プロスタグランジン合成の抑制、ＮＦκＢのモジュレート等を起こす活性成分を含有する抽出物を指すものとする。
好ましい組成物はＣＯＸ−２の誘導性または活性を抑制することができる。本発明の組成物はまたＮＦκＢをモジュレートする機能も有し得る。好ましい組成物はまた標的細胞において選択的にプロスタグランジンの合成を抑制できる。好ましい組成物はまた標的細胞において選択的に炎症応答を抑制できる。本明細書においては、抽出物とは、ある活性、例えば炎症の抑制、ＣＯＸ−２の誘導性または活性の抑制、プロスタグランジン合成の抑制、ＮＦκＢのモジュレート等を起こす活性成分を含有する抽出物を指すものとする。
組成物は広範な用途を有する。好ましい組成物は癌、自己免疫疾患、炎症性疾患または神経学的疾患および肥満のような状態の治療のために有用であり得る。好ましい組成物はまたＨＩＶ−１感染、ライノウィルス感染および心臓血管疾患のような状態の治療にも有用であると考えられる。
好ましい組成物は例えば、疼痛および頭痛の治療における鎮痛剤または発熱の治療のための解熱剤のように、対象における炎症の治療のため、および他の炎症関連障害の治療のために（ただし、これに限定されない）有用である。好ましい組成物は関節炎（例えば慢性関節リューマチ、脊椎症、痛風関節炎、骨関節炎、全身性エリテマトーデス、および若年性の関節炎が挙げられるが、これらに限定されない）の治療に有用である。
好ましい組成物は、喘息、気管支炎、生理痛、腱炎、滑液包炎、皮膚関連状態、例えば乾癬、湿疹、熱傷および皮膚炎の治療において有用である。好ましい組成物はまた、胃腸状態、例えば炎症性腸疾患、クローン病、胃炎、刺激性腸症候群および潰瘍性結腸炎の治療、および、結腸直腸癌のような癌の予防または治療のために有用である。
更にまた、好ましい組成物は血管疾患、偏頭痛、結節性動脈周囲炎、甲状腺炎、再生不良性貧血、ホジキン病、硬皮症、リューマチ熱、Ｉ型糖尿病、重症筋無力症、多発性硬化症、サルコイドーシス、ネフローゼ症候群、ベーチェット症候群、多発性筋炎、歯肉炎、過敏症、傷害後の浮腫、心筋虚血、歯周病、腺維筋肉痛、アトピー性皮膚炎、インスリン炎等のような疾患における炎症の治療において有用である。
更に、好ましい組成物は網膜症、結膜炎、ブドウ膜炎、眼性光恐怖症、および眼組織の急性の傷害のような眼科疾患の治療においても有用である。好ましい実施形態はまたウィルス感染および嚢胞性線維症に関わるもののような肺炎症の治療において有用である。
好ましい組成物はまた、アルツハイマー病を含む皮質痴呆症のような特定の神経系の障害の治療のためにも有用である。炎症細胞におけるＰＧＥ２のＣＯＸ−２媒介生合成の阻害剤として、これ等の組成物はまた、アレルギー性鼻炎、呼吸窮迫症候群、内毒素ショック症候群、アテローム性動脈硬化症および卒中、虚血および外傷に起因する中枢神経損傷の治療においても有用である。
好ましい実施形態は更に、グルコサミンまたはコンドロイチンスルフェートが関節の運動を正常化するか、または、骨関節炎の症状を低減する機能を発揮する速度を大きくする組成物を提供する。
好ましい実施形態はまた胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２の合成に対して殆ど、または全く作用を有さない炎症細胞におけるＣＯＸ−２によるプロスタグランジンの合成を特異的に抑制または防止する組成物を発見する方法を提供する。
更に、本発明の組成物は高血糖症、高インスリン血症を逆行させることによる肥満およびＸ症候群などの治療、ＩｋｋＢキナーゼβの活性化の正常化およびこれによるＮＦκＢ−活性化遺伝子の転写に対するその作用を適切にモジュレートし、これ等の状態および疾患につながるサイトカイン（例えば腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα））フィードバックループを効果的に遮断することによる血中脂質不全の治療のために有用である。
（発明の詳細な説明）
本発明はホップから単離または誘導された成分の超属物質および他の成分がＣＯＸ−２発現の組織特異的または細胞特異的な抑制をもたらすという発見に関する。重要な点は、これ等の化合物がプロスタグランジン合成経路内でＣＯＸ−２または他の酵素を直接阻害しないと考えられる点である。好ましい実施形態はＣＯＸ−２発現の抑制、標的組織または細胞における選択的なプロスタグランジン合成の抑制、または、標的組織または細胞における選択的な炎症応答の抑制のための組成物および方法を提供する。本発明の組成物および方法はＮＦκＢをモジュレートすることもできる。
好ましい実施形態はホップから単離または誘導された画分または化合物を含有する組成物を含む。ホップから単離または誘導された画分の例は、アルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップである。ホップから単離または誘導された画分の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］の超属により示すことができる。
ホップから単離または誘導された画分の他の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］の属により示すことができる。
ホップから単離または誘導された画分の他の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］の属により示すことができる。
ホップから単離または誘導された成分の好ましい化合物の例は、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンを含むが、これらに限定されない。好ましい化合物は上記式に示すように置換基を担持していることができる。
別の実施形態はトリプトアンスリンおよびそのコンジュゲートを含有する組成物を含む。
他の実施形態は成分の組み合わせに関する。特定の実施形態において、本発明の組成物はＣＯＸ−２発現を特異的に抑制し、ＮＦκＢをモジュレートし、標的細胞において選択的にプロスタグランジン合成を抑制し、または、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制する機能を有し得る。組成物は相乗作用的活性を示す場合がある。
１つの実施形態は、第１の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、および、第２の成分としてローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、ジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、および、トリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物に関する。別の実施形態は第１の成分としてトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲート、および、第２の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、ローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、および、ジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物に関する。
本明細書において「食餌栄養補給物」という用語は生理学において構造的または機能的な変化に影響するために消費される組成物を指す。「治療用組成物」という用語は疾患の治療または予防のために投与される何れかの化合物を指す。
本明細書においては「有効量」という用語は選択された結果を達成するために必要な量を意味する。このような量は当業者により特段の実験を行うことなく容易に決定され得る。
本明細書においては「実質的」という用語は特定されるものの大半ではあるが全てではないことを意味する。
本明細書においては「ＣＯＸ阻害剤」という用語はＣＯＸ−２酵素の活性または発現を抑制することができるか、または、重症の炎症応答の疼痛および浮腫を含む重症性を抑制または低減することができる化合物の組成物を指す。
本明細書においては「誘導体」という用語または「誘導される」という表現は別の物質に構造的に関連するかこれより理論的に得ることができる化学物質、即ち別の物質から製造することができる物質を指す。誘導体は化学反応を介して得られる化合物を包含し得る。
本明細書においては「炎症細胞」という用語はインターロイキン、腫瘍壊死因子、ブラジキニン、ヒスタミンまたは細菌誘導成分のような炎症シグナルに応答したプロスタグランジンの合成に関与する免疫系の細胞メンバー、例えばＢおよびＴリンパ球、好中球またはマクロファージを指す。
本明細書においては「標的細胞」という用語はＰＧＥ２または他のプロスタグランジンの合成の抑制が望まれる細胞集団、例えば炎症細胞、腫瘍細胞または肺細胞を指す。あるいは、「非標的細胞」という用語はＰＧＥ２または他のプロスタグランジンの合成の抑制が望まれない細胞集団、例えば胃粘膜、神経または腎の細胞を意味する。
本明細書においては「ホップ抽出物」という用語は（１）ホップ植物産品を溶媒に曝露すること、（２）ホップ植物産品から溶媒を分離すること、および（３）溶媒を除去することにより得られる固体物質を指す。
本明細書においては「溶媒」という用語はホップ植物産品から固体物質を抽出するために必要な特性を有する水性または有機性の液体を指す。溶媒の例は、水、水蒸気、超加熱水、メタノール、エタノール、ヘキサン、クロロホルム、液体ＣＯ２、液体Ｎ２、またはこれ等の物質の何れかの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書においては「ＣＯ２抽出物」という用語は液体または超臨界ＣＯ２調製物にホップ植物産品を曝露し、その後ＣＯ２を除去することにより得られる固体物質を指す。
本明細書においては「使用済みホップ」という用語はホップの抽出による固体および親水性の残渣を指す。
本明細書においては「アルファ酸」という用語はフムロン類と総称され、そしてホップ植物産品から単離できる化合物、例えば特に、フムロン、コフムロン、アドフムロン、フルポンおよびイソプレフムロンを指す。
本明細書においては「イソアルファ酸」という用語はホップ植物産品から単離され、その後異性化された化合物を指す。アルファ酸の異性化は、煮沸によるなど、熱的に行うことができる。イソアルファ酸の例はイソフムロン、イソコフムロンおよびイソアドフムロンが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書においては「還元イソアルファ酸」という用語はホップ植物産品から単離され、その後異性化され、そして還元された、シスおよびトランス型を含むアルファ酸を指す。還元イソアルファ酸（ＲＩＡＡ）の例はジヒドロ−イソフムロン、ジヒドロ−イソコフムロンおよびジヒドロ−アドフムロンが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書においては「テトラ−ヒドロイソアルファ酸」という用語は還元イソアルファ酸の特定のクラスを指す。テトラ−ヒドロイソアルファ酸（ＴＨＩＡＡ）の例はテトラ−ヒドロ−イソフムロン、テトラ−ヒドロ−イソコフムロンおよびテトラ−ヒドロアドフムロンが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書においては「ヘキサ−ヒドロイソアルファ酸」という用語は還元イソアルファ酸の特定のクラスを指す。ヘキサ−ヒドロイソアルファ酸（ＨＨＩＡＡ）の例はヘキサ−ヒドロ−イソフムロン、ヘキサ−ヒドロ−イソコフムロンおよびヘキサ−ヒドロアドフムロンが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書においては「ベータ酸画分」という用語はルプロン類と総称される化合物を指し、そして特にルプロン、コルプロン、アドルプロン、テトラヒドロイソフムロンおよびヘキサヒドロコルプロンを包含する。
本明細書においては「精油画分」という用語は、成分の複合混合物を指し、例えば特に、ミルセン、フムレン、ベータ−カリオフィリーン、ウンデカン−２−オンおよび２−メチル−ブタ−３−エン−オールを包含する。
本明細書においては化合物の「コンジュゲート」とは単糖類または２糖類、アミノ酸、スルフェート、スクシネート、アセテートおよびグルタチオンよりなる群から選択されるメンバーに共有結合またはコンジュゲートした化合物を意味する。好ましくは単糖類または２糖類はグルコース、マンノース、リボース、ガラクトース、ラムノース、アラビノース、マルトースおよびフラクトースよりなる群から選択されるメンバーである。
本明細書において「脂肪」という用語は脂肪酸のトリアシルグリセロールエステルを指す。
本明細書においては「ワックス」という用語は極めて長鎖（＞２５炭素原子）の脂肪アルコールまたは脂肪酸のトリアシルグリセロールエーテルまたはエステルを指す。
ホップ
何れかの形態のホップ抽出は１５０年以上もさかのぼって１９世紀初頭に起こり、水およびエタノール中への抽出がまず試みられた。今日においても、エタノール抽出は欧州で行われているが、はるかに優勢な抽出物は有機溶媒抽出物（ヘキサン）およびＣＯ２抽出物（超臨界および液体）である。ＣＯ２（典型的には圧力６０ｂａｒ、５０〜１０℃）は液体状態にあり、比較的穏やかな非極性の溶媒であり、ホップの軟質の樹脂および油状物に対して高度に特異的である。典型的には３００ｂａｒ圧および６０℃である臨界点を超えると、ＣＯ２は気体および液体の両方の性質を有するようになり、そしてはるかに強力な溶媒となる。種々の抽出物の組成物を表２において比較する。
（表２ ホップ抽出物（重量％））
Figure 2006508182
最も単純には、ホップの抽出には、ホップをミリング、ペレッティング、および再ミリングしてルプリンを展開すること、充填カラムに溶媒を通して樹脂成分を採取すること、および、最後に溶媒を除去して全体または「純粋な」樹脂の抽出物を得ることが含まれる。
主な有機抽出媒体は強力な溶媒であり、本質的に全てのルプリン成分に加えて植物色素、クチクラワックス、水および水溶性物質も抽出する。
超臨界ＣＯ２は有機溶媒よりも選択的であり少量のタンニンおよびワックスおよび少量の水、従って水溶性物質を抽出する。クロロフィルのような植物色素も一部抽出するが有機溶媒の場合よりも少量である。液体ＣＯ２はホップで商業的に使用されている最も選択的な溶媒であり、従って、最も純粋な全樹脂および油性抽出物をもたらす。硬質樹脂やタンニンは殆ど抽出せず、植物ワックスははるかに低値であり、植物色素は含まれず、水分および水溶性物質の量も少ない。
この選択性およびより穏やかな溶媒特性の結果、液体ＣＯ２の絶対収率、即ちホップの単位重量あたりの抽出物は他の上記した溶媒を使用した場合よりも少ない。更に、液体ＣＯ２を使用した場合のアルファ酸の収率（８９〜９３％）は超臨界ＣＯ２（９１〜９４％）または有機溶媒（９３〜９６％）を使用した場合よりも低値である。抽出の後、溶媒を除去する工程があり、これは、有機溶媒の場合は加熱して蒸発させるものである。これにもかかわらず、痕跡量の溶媒が抽出物中に残存する。しかしながらＣＯ２の除去は単に圧力の開放によりＣＯ２を揮発させることである。
図２に示すとおり、ホップのＣＯ２抽出物はホップオイル、ベータ酸およびアルファ酸を含む成分に分画できる。ホップオイルには例えばフムレン、ベータ−カリオフィレン、ミルセン、ファルネセン、ガンマ−カジネン、アルファ−セリネンおよびアルファ−カジネンが包含されるが、これらに限定されない。ベータ酸には例えばルプロン、コルプロン、アドルプロン、テトラヒドロイソフムロンおよびヘキサヒドロコルプロンが包含されるがこれらに限定されず、これ等は総称してルプロン類と称される。ベータ酸は異性化して還元することができる。ベータ酸は還元されるとテトラ−ベータ酸となる。アルファ酸には例えばフムロン、コフムロン、アドフムロン、フルポンおよびイソプレフムロンが包含されるが、これらに限定されない。アルファ酸を異性化するとイソアルファ酸を生じ得る。イソアルファ酸を還元すると還元イソアルファ酸、テトラ−ヒドロイソアルファ酸およびヘキサ−ヒドロイソアルファ酸を生じ得る。
好ましい実施形態はホップから単離または誘導された画分または化合物を含有する組成物を含む。ホップから単離または誘導された画分の例は、アルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップである。ホップから単離または誘導された画分の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］の超属により示すことができる。
ホップから単離または誘導された画分の他の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］の属により示すことができる。
ホップから単離または誘導された画分の他の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］の属により示すことができる。
図３に示すとおり、ホップから単離または誘導された成分の好ましい化合物の例は、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい化合物は上記式に示すように置換基を担持していることができる。
骨再吸収の抑制剤としてのホップ抽出物からのフムロンの発見はＴｏｂｅ，Ｈ．等、１９９９（Ｂｏｎｅ ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｒｏｍ ｈｏｐ ｅｘｔｒａｃｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ６１（１）１５８−１５９）が報告している。Ｔｏｂｅ等は単に骨粗鬆症の治療のためのフムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロンおよびイソアドフムロンの使用を開示しているのみである。同グループによるその後の試験により、ＭＣ３Ｔ３、ＥＬ細胞のＴＮＦアルファ刺激の後のＣＯＸ−２遺伝子転写の抑制としてフムロンの作用機序が特性化されている［Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｋ．２０００．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｂｙ ｈｕｍｕｌｏｎ ｏｆ ｂｅｅｒ ｈｏｐ ｅｘｔｒａｃｔ ｓｔｕｄｉｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｔｏ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４６５：１０３−１０６］。著者等はフムロンの作用はグルココルチコイドと同様であるが、フムロンはグルココルチコイド受容体を介して機能しないと結論している。これ等の結果はフムロンが遺伝子レベルにおいてＭＣ３Ｔ３細部（骨芽細胞）におけるＰＥＧ２合成を抑制することを明らかにしているものの、当業者はこれ等の結果が免疫炎症細胞または他の細胞株において必ずしも起こるとは推定できない。本明細書に記載した実施例５はホップ化合物および誘導体の高い水準の組織選択性を明らかにしている。
好ましい実施形態はＣＯＸ−２の発現を抑制し、組織特異的または細胞特異的にＮＦκＢをモジュレートし、標的細胞において選択的にプロスタグランジンの合成を抑制し、そして、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制するための組成物および方法を提供する。好ましい方法は好ましい実施形態の組成物を哺乳類に投与することを含む。好ましい実施形態はホップから単離または誘導された画分を含む。特定の組成物はホップ抽出物またはその誘導体から得られたアルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップを含む。ホップから単離または誘導された画分の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］の超属により示すことができる。ホップから単離または誘導された画分の他の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］の属により示すことができる。ホップから単離または誘導された画分の他の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］の属により示すことができる。好ましい実施形態はベータ酸または異性化または還元されたベータ酸を含む組成物を意図する。より好ましくは、好ましい実施形態のアルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップはホップの抽出物から作成される。より好ましくは、好ましい実施形態のアルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップはホップのＣＯ ２ 抽出物から作成される。
トリプトアンスリン
好ましい実施形態はＣＯＸ−２の発現を抑制し、組織特異的そして細胞特異的にＮＦκＢをモジュレートし、標的細胞において選択的にプロスタグランジンの合成を抑制し、そして、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制するための組成物および方法を提供し得る。好ましい方法は好ましい実施形態の組成物を哺乳類に投与することを含む。特定の組成物はトリプトアンスリンおよびそのコンジュゲートを含む。
図４に示すとおり、トリプトアンスリンはＰｏｌｙｇｏｎｕｍ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｍおよびＩｓａｔｉｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉａのような特定の薬草中に存在する天然の化合物である。漢方薬のほかに、この薬草はＤａ Ｑｉｎｇ Ｙｅ またはＱｉｎｇ Ｄａｉとして知られている。薬草は抗細菌および抗ウィルス活性を有することが明らかにされている。解熱、抗炎症および胆汁分泌促進特性を有する。白血球の増大した食細胞活性および腸平滑筋の弛緩はＱｉｎｇ Ｄａｉの別の特性である。
ローズマリー
好ましい実施形態の特定のものはまた、ホップから単離または誘導された画分またはトリプトアンスリンと共にローズマリー、ローズマリー抽出物またはローズマリーから誘導された化合物の有効量をデリバリーすることを包含する。好ましい添加物は例えばローズマリー、ローズマリー抽出物またはローズマリーまたはローズマリー抽出物中に存在することがわかっている化合物が挙げられるが、これらに限定されない。これ等には、１，８−シネオール、１９−アルファ−ヒドロキシウルソール酸、２−ベータ−ヒドロキシオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルウルソール酸、６−メトキシ−ルテオリン−７−グルコシド、６−メトキシルテノリン、６−メトキシルテノリン−７−グルコシド、メトキシルテノリン−７−メチルエーテル、７−エトキシ−ロスマノール、７−メトキシ−ロスマノール、アルファ−アミリン、アルファ−フムレン、アルファ−ヒドロキシヒドロカフェイン酸、アルファ−ピネン、アルファ−テルピネン、アルファ−テルピネニルアセテート、アルファ−テルピネオール、アルファ−スジョン、アピゲニン、アピゲニン−７−グルコシド、クルクメン、ベンジルアルコール、β−アミレノン、β−アミリン、β−エレメン、β−ピネン、ベツリン＊＊、ベツリン酸＊＊、ボルネオール、ボルニル−アセテート、カフェイン酸、カンフェン、カンファー、カルノシン酸＊＊、カルノゾール＊＊、カルバクロール＊＊、カルボン、カリオフィレン、カリオフィレン−オキシド、クロロゲン酸＊＊、ジオスメチン＊＊、ガンマ−テルピネン、ヘスペリジン、イソボルネオール、リモネン＊、ルテオリン＊、ルテオリン−３’−Ｏ−（３’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−（４’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオニン−７−グルコシド、メチル−オイゲノール、ミルセン、ネオクロロゲン酸、ネプチン、オクタン酸、オレアノール酸、ｐ−シメン、ピペリテノン、ロスマノール、ロスマリン酸、ロスマリシン、ロスマリジフェノール、ロセマリン酸、ロスマリノール、ロスマリキノン、サビネン、サビニルアセテート、サリシレート、サリチル酸−２−β−Ｄ−グルコシド、スクワレン、テルピネン−４−オール、テルピノレン、チモール、トランスアネトール、トランスカルベオール、ウルソール酸、ベルベノンおよびジンギベレンが包含される。列挙した物質種の内、少なくとも１つのアスタリスクを含むもの（＊）が好ましく２つのアスタリスクを含むもの（＊＊）が特に好ましい。
トリテルペンおよびジテルペンラクトン
好ましい実施形態の特定のものはまた、ホップから単離または誘導された画分またはトリプトアンスリンと共にトリテルペン分子種またはジテルペンラクトン分子種の有効量をデリバリーすることを包含する。好ましいトリテルペンはオレアノール酸およびウルソール酸を包含する。ウルソール酸およびオレアノール酸は共に広範な種類の植物中に存在する。アンドログラホリドのようなジテルペンラクトンはＡｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ ｐａｎｉｃｕｌａｔｅから得ることができる。
アンドログラホリドのようなジテルペンラクトンおよびウルソール酸およびオレアノール酸のようなトリテルペンは植物中に一般的に存在し、その抗炎症作用のために使用されている。これらの化合物の抗炎症作用は１９６０年から文献に記載されている。それらの作用機序は（ｉ）肥満細胞からのヒスタミンの放出の抑制、または（ｉｉ）リポキシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼの活性の抑制によるアラキドン酸カスケードの間に生産される炎症因子の合成の低減に起因すると考えられている。アンドログラホリドおよびオレアノール酸は胃潰瘍の治癒を促進することがわかっているため、阻害されるシクロオキシゲナーゼ活性がＣＯＸ−１であるとは考えにくい。更にまた、アンドログラホリドおよびオレアノール酸は強力な抗酸化剤であり、反応性酸素中間体の発生を抑制し、そしてストレス後の組織のグルタチオン濃度を回復させることができる。
例えば、ウルソール酸の植物原料はＡｄｉｎａ ｐｉｌｕｉｆｅｒａ（アディナ・ピルイフェラ）、Ａｇｒｉｍｏｎｉａ ｅｕｐａｔｏｒｉａ（セイヨウキンミズヒキ）、Ａｒｂｕｔｕｓ ｕｎｄｅｏ（イチゴノキ）、Ａｒｃｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ ｕｖａ−ｕｒｓｉ（クマコケモモ（ウバウルシ））、Ａｔｒｏｃａｒｐｕｓ ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌｕｓ、Ｃａｔａｌｐａ ｂｉｇｎｏｎｉｏｄｅｓ（アメリカキササゲ）、Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕｓ（ニチニチソウ）、Ｃｈｉｍａｐｈｉｌａ ｕｍｂｅｌｌａｔａ（オオウメガサソウ）、Ｃｏｒｎｕｓ ｆｌｏｒｉｄａ（アメリカヤマボウシ）、Ｃｏｒｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（サンシュユ）、Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｃｕｎｅａｔａ（サンザシ）、Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｌａｅｖｉｇａｔａ（セイヨウサンザシ）、Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ（ミサンザシ）、Ｃｒｙｐｔｏｓｔｅｇｉａ ｇｒａｎｄｉｆｏｌｉａ（オオバナアサガオ）、Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｐｕｎｇｅｎｓ（ナワシログミ）、Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａ ｊａｐｏｎｉｃａ（ビワ）、Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ（ユウカリノキ）、Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ ｓｕｓｐｅｎｓａ（シナレンギョウ）、Ｇａｕｌｔｈｅｒｉａ ｆｒａｇｒａｎｔｉｓｓｉｍａ（ウインターグリーン）、Ｇｌｅｃｈｏｍａ ｈｅｄｅｒａｃｅａ（カキドオシ）、Ｈｅｄｙｏｔｉｓ ｄｉｆｆｕｓａ（フタバムグラ）、Ｈｅｌｉｃｈｒｙｓｕｍ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｍ（ムギワラギク）、Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ（ホップ）、Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（ヒソップ）、Ｉｌｅｘ ｐａｒａｇｕａｒｉｅｎｓｉｓ（マテ）、Ｌａｖａｎｄｕｌａ ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ（真正ラベンダー）、Ｌａｖａｎｄｕｌａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ（スパイクラベンダー）、Ｌｅｏｎｕｒｕｓ ｃａｒｄｉａｃａ（メハジキ）、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ（ネズミモチ）、Ｌｉｍｏｎｉａ ａｃｉｄｉｓｓｉｍａ（リモニア・アシディシマ）、Ｌｙｃｏｐｕｓ ｅｕｒｏｐｅｕｓ（リコパス・ユーロペウス）、Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ（セイヨウリンゴ）、Ｍａｒｕｂｉｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ（マルビウム・ブルガレ）、Ｍｅｌａｌｅｕｃａ ｌｅｕｃａｄｅｎｄｒａ（カユブテ）、Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（セイヨウヤマハッカ）、Ｍｅｎｔｈａ ｓｐｉｃａｔａ（オランダハッカ）、Ｍｅｎｔｈａ ｘ ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉａ（シロハッカ）、Ｍｏｎａｒｄａ ｄｉｄｙｍａ（タイマツバナ）、Ｎｅｒｉｕｍ ｏｌｅａｎｄｅｒ（キョウチクトウ）、Ｏｃｉｍｕｍ ｂａｓｉｌｉｃｕｍ（メボウキ）、Ｏｃｉｍｕｍ ｃａｎｕｍ（ヒメボウキ）、Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｍａｊｏｒａｎａ（マヨナラ）、Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ（ハナハッカ）、Ｐｌａｎｔａｇｏ ａｓｉａｔｉｃａ（オオバコ）、Ｐｌａｎｔａｇｏ ｍａｊｏｒ（セイヨウオオバコ）、Ｐｌｅｃｔｒａｎｔｈｕｓ ａｍｂｏｉｎｉｃｕｓ（アンボイニクス）、Ｐｒｕｎｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ（プルネラ・ブルガリス）、Ｐｒｕｎｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ（セイヨウウツボグサ）、Ｐｒｕｎｕｓ ｃｅｒａｓｕｓ（オウトウ）、Ｐｒｕｎｕｓ ｌａｕｒｏｃｅｒａｓｕｓ（セイヨウバクチノキ）、Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ（モモ）、Ｐｒｕｎｕｓ ｓｅｒｏｔｉｎａ ｓｐｐ ｓｅｒｏｔｉｎａ（ワイルドチェリー）、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ（グワバ）、Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔｕｍ（ザクロ）、Ｐｙｒｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ（セイヨウナシ）、Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｄａｕｒｉｃｕｍ（エゾムラサキツツジ）、Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｆｅｒｒｕｇｉｎｅｕｍ（ロードデンドロン・フェルギネウム）、Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｐｏｎｔｉｃｕｍ（ロードデンドロン・ポンティカム）、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（マンネンロウ）、Ｒｕｂｕｓ ｆｒｕｔｉｃｏｓｕｓ（セイヨウヤブイチゴ）、Ｓａｌｖｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（ヤクヨウサルビア）、Ｓａｌｖｉａ ｓｃｌａｒｅａ（オニサルビア）、Ｓａｌｖｉａ ｔｒｉｌｏｂａ（サルビア・トリロバ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｎｉｇｒａ（セイヨウニワトコ）、Ｓａｎｇｕｉｓｏｒｂａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（ワレモコウ）、Ｓａｔｕｒｅｊａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ（ヤマキダチハッカ）、Ｓａｔｕｒｅｊａ ｍｏｎｔａｎａ（キダチハッカ）、Ｓｏｒｂｕｓ ａｕｃｕｂａｒｉａ（ソルブス・オークバリア）、Ｓｙｒｉｎｇａ ｖｕｌｇａｒｉｓ（ムラサキハシドイ）、Ｔｅｕｃｒｉｕｍ ｃｈａｍａｅｄｒｙｓ（ウォール・ジャーマンダー）、Ｔｅｕｃｒｉｕｍ ｐｏｌｉｕｍ（ニガグサ）、Ｔｅｕｃｒｉｕｍ ｓｐｐ（ジャーマンダー種）、Ｔｈｅｖｅｔｉａ ｐｅｒｕｖｉａｎａ（キョウチクトウ）、Ｔｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ（イブキジャコウソウ）、Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ（タチジャコウソウ）、Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（キャッツクロー）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｃｏｒｙｍｏｂｏｓｕｍ（ワクシニウム・コリモノサム）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ（ビルベリー）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｖｉｔｉｓ ｉｄａｅａ（コケモモ）、Ｖｅｒｂｅｎａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（クマツヅラ）、Ｖｉｂｕｒｎｕｍ ｏｐｕｌｕｓ ｖａｒ．ｏｐｕｌｕｓ（カンボク）、Ｖｉｂｕｒｎｕｍ ｐｒｕｎｉｆｏｌｉｕｍ（サクラバカンボク）、Ｖｉｎｃａ ｍｉｎｏｒ（ヒメツルニチニチソウ）およびＺｉｚｙｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ（ナツメ）よりなる群から選択することができる。
同様に、オレアノール酸は、Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓ ａｓｐｅｒａ（イノコズチ）、Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓ ｂｉｄｅｎｔｉａｔａ（アキランテス・ビデンチアタ）、Ａｄｉｎａ ｐｉｌｕｉｆｅｒａ（アディナ・ピルイフェエラ）、Ａｊｐｏｃｙｎｕｍ Ｃａｎｎａｂｉｎｕｍ（アポンキナム・カンナビナム），Ａｋｅｂｉａ ｑｕｉｎａｔａ（アケビ），Ａｌｌｉｕｍ ｃｅｐａ（タマネギ）、Ａｌｌｉｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ（ニンニク）、Ａｒｃｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ ｕｖａ−ｕｒｓｉ（クマコケモモ（ウバウルシ））、Ｃａｌｅｎｄｕｌａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（キンセンカ）、Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ ｒｏｓｅｕｓ（ニチニチソウ）、Ｃｅｎｔａｕｒｉｕｍ ｅｒｙｔｈｒａｅａ（ベニハナセンブリ）、Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ ａｌｂｕｍ（シロザ）、Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｃｏｌｏｃｙｎｔｈｉｓ（コロシントウリ）、Ｃｎｉｃｕｓ ｂｅｎｅｄｉｃｔｕｓ（クニクスベンジクトス）、Ｃｏｒｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（サンシュユ）、Ｃｒａｔａｅｇｕｓ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ（ミサンザシ）、Ｃｙｐｅｒｕｓ ｒｏｔｕｎｄｕｓ（ハスマゲ）、Ｄａｅｍｏｎｏｒｏｐｓ ｄｒａｃｏ（デモノロプス・ドラコ）、Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ ｋａｋｉ（カキ）、Ｅｌａｅａｇｎｕｓ ｐｕｎｇｅｎｓ（ナワシログミ）、Ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ（エゾウコギ）、Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａ ｊａｐｏｎｉｃａ（ビワ）、Ｅｕｇｅｎｉａ ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌａｔａ（チョウジ）、Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ ｓｕｓｐｅｎｓａ（レンギョウ）、Ｇｌｅｃｈｏｍａ ｈｅｄｅｒａｃｅａ（カキドオシ）、Ｈａｒｐａｇｏｐｈｔｕｍ ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｓ（ハルパゴフタム・プロクンベンス））、Ｈｅｄｅｒａ ｈｅｌｉｘ（セイヨウキズタ）、Ｈｅｄｙｏｔｉｓ ｄｉｆｆｕｓａ（フタバムグラ）、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓ（ヒマワリ）、Ｈｅｍｓｌｅｙｓ ａｍａｂｉｌｉｓ（ヘムスリー・アマビリス）、Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ（ホップ）、Ｈｙｓｓｏｐｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（ヒソップ）、Ｉｌｅｘ ｒｏｔｕｎｄａ（クロガネモチ）、Ｌａｖａｎｄｕｌａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ（スパイクラベンダー）、Ｌｅｏｎｕｒｕｓ ｃａｒｄｉａｃａ（メハジキ）、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ（ネズミモチ）、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ ｌｕｃｉｄｕｍ（トウネズミモチ）、Ｌｉｑｕｉｄａｍｂａｒ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ（スズカケノキ）、Ｌｉｑｕｉｄａｍｂａｒ ｓｔｙｒａｃｉｆｌｕａ（アメリカフウ）、Ｌｏｒａｎｔｈｕｓ ｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ（ヤドリギ）、Ｌｕｆｆａ ａｅｇｙｐｔｉａｃａ（ヘチマ）、Ｍｅｌａｌｅｕｃａ ｌｅｕｃａｄｅｎｄｒａ（カユブテ）、Ｍｅｌｉｓｓａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（セイヨウヤマハッカ）、Ｍｅｎｔｈａ ｓｐｉｃａｔａ（オランダハッカ）、Ｍｅｎｔｈａ ｘ ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉａ（シロハッカ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｏｃｈｉｎｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（ナンバンキカラスウリ）、Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ ｆｒａｇｒａｎｓ（ニクズク）、Ｍｙｒｏｘｙｌｏｎ ｂａｌｓａｍｕｍ（トゥルーバルサム）、Ｎｅｒｉｕｍ ｏｌｅａｎｄｅｒ（キョウチクトウ）、Ｏｃｉｍｕｍ ｓｕａｖｅ（オシマム・スアベ）、Ｏｃｉｕｍｕｍ ｂａｓｉｌｉｃｕｍ（メボウキ）、Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ（オリーブ）、Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｍａｊｏｒａｎａ（マヨナラ）、Ｏｒｉｇａｎｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ（ハナハッカ）、Ｐａｅｄｅｒｉａ ｓｃａｎｄｅｎｓ（ヘクソカズラ）、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ（オタネニンジン）、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ（トチバニンジン）、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ（アメリカニンジン）、Ｐａｔｒｉｎｉａ ｓｃａｂｉｏｓａｅｆｏｌｉａ（オミナエシ）、Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ（アメリカヤマゴボウ）、Ｐｌａｎｔａｇｏ ｍａｊｏｒ（セイヨウオオバコ）、Ｐｌｅｃｔｒａｎｔｈｕｓ ａｍｂｏｉｎｉｃｕｓ（アンボイニクス）、Ｐｒｕｎｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ（プルネラ・ブルガリス）、Ｐｒｕｎｕｓ ｃｅｒａｓｕｓ（オウトウ）、Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ（グワバ）、Ｐｕｌｓａｔｉｌｌａ ｃｈｉｎｅｎｉｓｉｓ（プルサチラ・シネニシス）、Ｑｕｉｓｑｕａｌｉｓ ｉｎｄｉｃａ（シクンシ）、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（マンネンロウ）、Ｓａｌｖｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（ヤクヨウサルビア）、Ｓａｌｖｉａ ｓｃｌａｒｅａ（オニサルビア）、Ｓａｌｖｉａ ｔｒｉｌｏｂａ（サルビア・トリロバ）、Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｎｉｇｒａ（セイヨウニワトコ）、Ｓａｔｕｒｅｊａ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ（ヤマキダチハッカ）、Ｓａｔｕｒｅｊａ ｍｏｎｔａｎａ（キダチハッカ）、Ｓｗｅｒｔｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（スウェルチア・シネンシス）、Ｓｗｅｒｔｉａ ｄｉｌｕｔａ（イヌセンブリ）、Ｓｗｅｒｔｉａ ｍｉｌｅｅｎｓｉｓ（スウェルチア・ミレンシス）、Ｓｙｚｙｇｉｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ（チョウジノキ）、Ｔｈｙｍｕｓ ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ（イブキジャコウソウ）、Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ（タチジャコウソウ）、Ｔｒａｃｈｙｃａｒｐｕｓ ｆｏｒｔｕｎｅｉ（シュロ）、Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（キャッツクロー）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｃｏｒｙｍｏｂｏｓｕｍ（ワクシニウム・コリモノサム）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ（ビルベリー）、Ｖｉｂｕｒｎｕｍ ｐｒｕｎｉｆｏｌｉｕｍ（サクラバカンボク）、Ｖｉｓｃｕｍ ａｌｂｕｍ（ヤドリギ）、Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ（ヨーロッパブドウ）またはＺｉｚｙｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ（ナツメ）中に存在する。
ウルソール酸の好ましい植物原料はＬｉｇｕｓｔｒｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ（ネズミモチ）、Ｐｌａｎｔａｇｏ ａｓｉａｔｉｃａ（オオバコ）、Ｐｌａｎｔａｇｏ ｍａｊｏｒ（セイヨウオオバコ）、スモモ種、Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（キャッツクロー）、Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ（ナツメ）、Ｃｏｒｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（サンシュユ）、Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｃｉｔｒｉｏｄｏｒａ（ユウカリノキ）、Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ ｓｕｓｐｅｎｓａ（シナレンギョウ）、Ｌａｖａｎｄｕｌａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ（スパイクラベンダー）、Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ（セイヨウリンゴ）、Ｎｅｒｉｕｍ ｏｌｅａｎｄｅｒ（キョウチクトウ）、Ｏｃｉｍｕｍ ｂａｓｉｌｉｃｕｍ（メボウキ）、Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔｕｍ（ザクロ）、Ｐｙｒｕｓ ｃｏｍｍｕｎｉｓ（セイヨウナシ）、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（マンネンロウ）、Ｓａｌｖｉａ ｔｒｉｌｏｂａ（サルビア・トリロバ）、Ｓｏｒｂｕｓ ａｕｃｕｂａｒｉａ（ソルブス・オークバリア）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ（ビルベリー）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｖｉｔｉｓ ｉｄａｅａ（コケモモ）およびＶｉｂｕｒｎｕｍ ｏｐｕｌｕｓ ｖａｒ．ｏｐｕｌｕｓ（カンボク）よりなる群から選択される。ウルソール酸の最も好ましい植物原料はＬｉｇｕｓｔｒｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ（ネズミモチ）、Ｐｌａｎｔａｇｏ ａｓｉａｔｉｃａ（オオバコ）、Ｐｌａｎｔａｇｏ ｍａｊｏｒ（セイヨウオオバコ）、プラナス種、Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（キャッツクロー）およびＺｉｚｙｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ（ナツメ）よりなる群から選択されるメンバーである。
オレアノール酸の好ましい植物原料はＥｌｅｕｔｈｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ（エゾウコギ）、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ（ネズミモチ）、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ ｌｕｃｉｄｕｍ（トウネズミモチ）、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ（オタネニンジン）、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ（トチバニンジン）、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ（アメリカニンジン）、Ｐｌａｎｔａｇｏ ｍａｊｏｒ（セイヨウオオバコ）、Ｐｒｕｎｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ（セイヨウウツボグサ）、Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ（ヨーロッパブドウ）、Ｚｉｚｙｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ（ナツメ）、Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓ ｂｉｄｅｎｔｉａｔａ（アキランテス・ビデンチアタ）、Ａｌｌｉｕｍ ｃｅｐａ（タマネギ）、Ａｌｌｉｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ（ニンニク）、Ｃｏｒｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（サンシュユ）、Ｄａｅｍｏｎｏｒｏｐｓ ｄｒａｃｏ（デモノロプス・ドラコ）、Ｆｏｒｓｙｔｈｉａ ｓｕｓｐｅｎｓａ（シナレンギョウ）、Ｐｒｕｎｕｓ ｃｅｒａｓｕｓ（オウトウ）、Ｑｕｉｓｑｕａｌｉｓ ｉｎｄｉｃａ（シクンシ）、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（マンネンロウ）、Ｓａｌｖｉａ ｔｒｉｌｏｂａ（サルビア・トリロバ）、Ｓｙｚｙｇｉｕｍ ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ（チョウジノキ）、Ｔｈｙｍｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ（タチジャコウソウ）、Ｕｎｃａｒｉａ ｔｏｍｅｎｔｏｓａ（キャッツクロー）、Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ ｃｏｒｙｍｏｂｏｓｕｍ（ワクシニウム・コリモノサム）およびＶａｃｃｉｎｉｕｍ ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ（ビルベリー）よりなる群から選択される。オレアノール酸の最も好ましい植物原料はＥｌｅｕｔｈｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ（エゾウコギ）、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ（ネズミモチ）、Ｌｉｇｕｓｔｒｕｍ ｌｕｃｉｄｕｍ（トウネズミモチ）、Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ（オタネニンジン）、Ｐａｎａｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ（トチバニンジン）、Ｐａｎａｘ ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｓ（アメリカニンジン）、Ｐｌａｎｔａｇｏ ｍａｊｏｒ（セイヨウオオバコ）、Ｐｒｕｎｅｌｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ（セイヨウウツボグサ）、Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ（ヨーロッパブドウ）およびＺｉｚｙｐｈｕｓ ｊｕｊｕｂａ（ナツメ）よりなる群から選択されるメンバーである。
図５はトリテルペン属およびその属内の物質種としてのウルソール酸およびオレアノール酸の一般的化学構造を示すものである。属内の代表的なテルペノイドは１８−ａ−グリチルレチン酸＊＊、１８−β−グリチルレチン酸＊＊、２−ａ−３−ａ−ジヒドロオキシウルサ−１２−３ｎ−２８−オン酸＊、３−ａ−ヒドロキシウルソール酸＊、３−オキソ−ウルソール酸＊、ベツリン＊＊、ベツリン酸＊＊、セラストロール＊、エブリコン酸、フリエデリン＊、グリチルリチン、ギプソゲニン、オレアノール酸＊＊、オレアノール酸−３−アセテート、パキム酸、ピニコール酸、ソホラジオール、ソヤサポゲノールＡ，ソヤサポゲノールＢ、トリプテリン＊＊、トリプトフェノリド＊、ツムロース酸、ウルソール酸＊＊、ウルソール酸−３−アセテート、ウバオール＊およびβ−シトステロールである。列挙した物質種の内、少なくとも１つのアスタリスクを含むもの（＊）が好ましく２つのアスタリスクを含むもの（＊＊）が特に好ましい。
ジテルペンラクトン物質種の例はアンドログラホリド、デヒドロアンドログラホリド、デオキシアンドログラホリド、ネオアンドログラホリド、セレノアンドログラホリド、ホモアンドログラホリド、アンドログラファン、アンドログラホン、アンドログラホステリン、１４−デオキシ−１１−オキソアンドログラホリド、１４−デオキシ−１１，１２−ジデヒドロアンドログラホリド、アンドログラフィシドおよびエデリンラクトンが挙げられるが、これらに限定されない。
組成物および相乗作用の組み合わせ
好ましい組成物は特にＣＯＸ−２発現を抑制し、ＮＦκＢをモジュレートし、標的細胞において選択的にプロスタグランジン合成を抑制し、または、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制する機能を果たし得る。好ましい実施形態はホップから単離または誘導された画分または化合物を含有する組成物またはトリプトアンスリンおよびそのコンジュゲートを含有する組成物を包含する。
好ましい実施形態はホップから単離または誘導された画分または化合物を含有する組成物を含む。ホップから単離または誘導された画分の例は、アルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップである。ホップから単離または誘導された画分の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］の超属により示すことができる。
ホップから単離または誘導された画分の他の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］の属により示すことができる。
ホップから単離または誘導された画分の他の好ましい化合物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］の属により示すことができる。
ホップから単離または誘導された成分の好ましい化合物の例は、限定はされないが、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンが挙げられる。好ましい化合物は上記式に示すように置換基を担持していることができる。
別の実施形態はトリプトアンスリンおよびそのコンジュゲートを含有する組成物を含む。
他の実施形態は成分の組み合わせに関する。好ましい組成物は、相乗効果的作用を含めて、ＣＯＸ−２発現を特異的に抑制し、ＮＦκＢをモジュレートし、標的細胞において選択的にプロスタグランジン合成を抑制し、または、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制する機能を有し得る。
１つの実施形態は、第１の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、および、第２の成分としてローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、ジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、および、トリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物に関する。別の実施形態は第１の成分としてトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲート、および、第２の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、ローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、および、ジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物に関する。
用量
選択される用量水準は特定の組成物の活性、投与経路、治療または予防すべき状態の重症度、および、治療すべき患者の状態および病歴により異なる。しかしながら、所望の治療効果を達成するために必要な量より低い濃度で組成物の投与を開始し、そして所望の作用が達成されるまで徐々に用量を増大させることは当業者の知るとおりである。所望により有効な一日当たり用量を投与の目的に応じた多用量、例えば一日当たり２〜４回の分割用量に分割してよい。しかしながら、何れかの特定の患者の特定の用量水準は種々の要因、例えば体重、全身状態、食餌、投与時間と経路、他の組成物との組み合わせおよび治療または予防すべき特定の状態の重症度に応じて変動することが理解される。
好ましい実施形態は単独または他の活性成分と組み合わせてホップ画分、ホップ化合物またはホップ誘導体の有効量をデリバリーすることを包含する。好ましくは、好ましい組成物の一日当たり用量は、一日当たり、アルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸または使用済みホップ約０．５〜１０，０００ｍｇをデリバリーするように製剤する。より好ましくは、好ましい組成物の有効な一日当たり用量は、一日当たり、アルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸または使用済みホップ約５０〜７５００ｍｇ、約１００〜５０００ｍｇ、約２００〜３０００ｍｇ、または、約５００〜２０００ｍｇをデリバリーするように製剤する。好ましくは有効な一日当たり用量を１日１回または２回投与する。特定の実施形態は１日当り、イソアルファ酸または還元イソアルファ酸約０．５〜８００ｍｇ、より好ましくはイソアルファ酸または還元イソアルファ酸約５０〜４００ｍｇまたは約１００〜２００ｍｇを含む組成物を提供する。別の特定の実施形態は、一日当たり、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸またはヘキサヒドロイソアルファ酸約１０〜３０００ｍｇ、より好ましくは一日当たり、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸またはヘキサヒドロイソアルファ酸約５０〜２０００ｍｇ、約１００〜１５００ｍｇまたは約２００〜１０００ｍｇを含む組成物を提供する。更に別の特定の実施形態は一日当たり使用済みホップ約５０〜７５００ｍｇ、好ましくは一日当たり約１００〜６０００ｍｇ、約２００〜５０００ｍｇ、または約５００〜３０００ｍｇの使用済みホップを含む組成物を提供する。
好ましい実施形態は単独または他の活性成分と組み合わせてトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートの有効量をデリバリーすることを包含する。好ましくは、好ましい組成物の一日当たり用量は、一日当たり、体重１ｋｇ当たりトリプトアンスリン約０．０００５〜５０ｍｇをデリバリーするように製剤する。より好ましくは、好ましい組成物の有効な一日当たり用量は、一日当たり体重１ｋｇ当たりトリプトアンスリン約０．０１〜１０ｍｇまたは約０．１〜５ｍｇをデリバリーするように製剤する。好ましくは、好ましい組成物の一日当たり用量は、一日当たりトリプトアンスリン０．０３５〜３５００ｍｇをデリバリーするように製剤する。より好ましくは、好ましい組成物の有効な一日当たり用量は、一日当たりトリプトアンスリン約０．７〜７００ｍｇ、約１〜５００ｍｇ、または約１０〜１００ｍｇをデリバリーするように製剤する。好ましくは、有効一日当たり用量は一日当たり１回または２回投与する。
好ましい実施形態はローズマリーまたはローズマリーから誘導された抽出物または化合物の有効量を他の活性成分と組み合わせてデリバリーすることを包含する。好ましくは、好ましい組成物の一日当たり用量は、一日当たり、ローズマリー、ローズマリーの抽出物またはローズマリー誘導化合物約０．５〜５０００ｍｇをデリバリーするように製剤する。より好ましくは、好ましい組成物の有効な一日当たり用量は、一日当たり、ローズマリー、ローズマリーの抽出物またはローズマリー誘導化合物約５〜２０００ｍｇ、または約１００〜１０００ｍｇをデリバリーするように製剤する。好ましくは、有効一日当たり用量は一日当たり１回または２回投与する。特定の実施形態は一日当たり１回または２回投与されるローズマリー抽出物またはローズマリー誘導化合物または誘導体約７５ｍｇを含む組成物を提供する。
好ましい実施形態は他の活性成分と組み合わせてトリテルペンまたはジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲートの有効量をデリバリーすることを包含する。好ましくは、好ましい組成物の一日当たり用量は、一日当たりｋｇ体重当り、トリテルペンまたはジテルペンラクトン約０．０００５〜５０ｍｇをデリバリーするように製剤する。より好ましくは、好ましい組成物の有効な一日当たり用量は、一日当たりｋｇ体重当りトリテルペンまたはジテルペンラクトン約０．０１〜１０ｍｇまたは約０．１〜１ｍｇをデリバリーするように製剤する。好ましくは、好ましい組成物の一日当たり用量は、一日当たりトリテルペンまたはジテルペンラクトン物質種約０．０３５〜３５００ｍｇをデリバリーするように製剤する。より好ましくは、好ましい組成物の有効な一日当たり用量は、一日当たりトリテルペンまたはジテルペンラクトン物質種約０．７〜７００ｍｇをデリバリーするように製剤する。好ましくは、有効一日当たり用量は一日当たり１回または２回投与する。
好ましくは、実施形態はローズマリーの抽出物およびトリテルペン、例えば、オレアノール酸を、ホップから単離または誘導された画分またはトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートのような活性成分と共に含有する組成物を提供する。好ましくは実施形態はローズマリー抽出物約０．０１〜５００ｍｇおよびオレアノール酸約０．０１〜５００ｍｇを含む組成物を提供する。好ましくは、実施形態はローズマリー抽出物０．１〜１０μｇ／ｇ組織およびオレアノール酸約０．１〜２５μｇ／ｇ組織の標的組織中濃度を与えることができる組成物を提供する。
局所適用用の好ましい実施形態の組成物はホップ抽出物成分または誘導体またはトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲート約０．００１〜１０重量％、好ましくは約０．１〜１重量％を含有する。好ましい実施形態はホップから単離または誘導された画分またはトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲート約０．０００１〜１０μＭ、好ましくは約０．０１〜１μＭの範囲の血清中濃度を与える。局所適用用の好ましい実施形態は更に、ローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、ジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、ホップから単離または誘導された画分またはトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートから選択される別の成分を、０．００１〜１０重量％、好ましくは０．１〜１重量％の各々の成分の濃度で含むことができる。好ましい実施形態は別の成分約０．００１〜５０μＭ、好ましくは約０．１μＭ〜５μＭの範囲の血清中濃度を与える。
特定の組成物はホップから単離または誘導された画分から選択される第１の成分、および、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、ジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、またはトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートを含む第２の成分を含む。好ましくは、第１の成分、即ちホップから単離または誘導された画分の第２の成分、即ちローズマリーから誘導された抽出物または化合物、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、ジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、またはトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートに対する重量比は約１００：１〜約１：１００、好ましくは約５０：１〜約１：５０、より好ましくは約１０：１〜約１：１０の範囲内である。
特定の組成物はトリプトアンスリンおよびそのコンジュゲートの第１の成分およびホップ画分、ホップ化合物、ホップ誘導体、ローズマリー、ローズマリーから誘導した抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、またはジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲートの第２の成分を含む。好ましくは、第１の成分、即ちトリプトアンスリンおよびそのコンジュゲートの、第２の成分、即ちホップ画分、ホップ化合物、ホップ誘導体、ローズマリー、ローズマリーから誘導した抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、またはジテルペンラクトン物質種またはその誘導体またはコンジュゲートに対する重量比は約１００：１〜約１：１００、好ましくは約５０：１〜約１：５０、より好ましくは約１０：１〜約１：１０、更に好ましくは約１：１の範囲内である。当業者は上記した量または所望の活性のために有効な適切な中間的な量を容易に使用できると考えられる。
好ましい組成物の用途
上記したとおり、一般的に捕らえられている概念（ＣＯＸ定説）はＣＯＸ−１が大部分の組織において構成的に発現されるのに対し、ＣＯＸ−２はインビトロの細胞内およびインビボの炎症部位において有糸分裂誘発物質、サイトカインおよび細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）を含むプロ炎症刺激物質によりトリガーされる誘導酵素であるという点である。発現におけるこのような相違に主に基づけば、ＣＯＸ−１はハウスキーピング酵素として特性化されており、そして胃粘膜の細胞保護、腎血流の調節および血小板凝固の制御のような生理学的機能の維持に関与していると考えられる。ＣＯＸ−２は、構成的発現が脳、腎臓および胃腸管において認められているものの、主に炎症を媒介すると考えられている。従って、ＣＯＸ−２の組織特異的または細胞特異的な発現をダウンレギュレートすることが望ましい。このようなダウンレギュレーションはＮＦκＢをモジュレートすることにより達成できる。標的細胞の例には炎症細胞、肺細胞、ミクログリア細胞および腫瘍細胞が包含されるがこれらに限定されない。非標的細胞には例えば胃粘膜、神経および腎の細胞が包含されるがこれらに限定されない。
組成物は広範な用途を有する。好ましい組成物は癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、神経学的疾患のような状態の治療のために有用であり得る。好ましい組成物はまたＨＩＶ−１感染、ライノウィルス感染および心臓血管疾患のような状態の治療にも有用であると考えられる。
好ましい実施形態は例えば、多くの炎症状態に対して有用であり（ただし、これに限定されない）、そして、ＮＦκＢの組織特異的活性化に関わる状態も包含され得る。即ち本発明は、疼痛および頭痛の治療における鎮痛剤または発熱の治療のための解熱剤のように、対象における炎症の治療のため、および他の炎症関連障害の治療を包含する。このような好ましい実施形態の別の例は関節炎、例えば慢性関節リューマチ、脊椎症、痛風関節炎、骨関節炎、全身性エリテマトーデス、および若年性の関節炎の治療に有用である。このような好ましい実施形態は、喘息、気管支炎、生理痛、腱炎、滑液包炎、皮膚関連状態、例えば乾癬、湿疹、熱傷および皮膚炎の治療において有用である。好ましい実施形態はまた、胃腸状態、例えば炎症性腸疾患、クローン病、胃炎、刺激性腸症候群および潰瘍性結腸炎の治療、および、結腸直腸癌のような癌の予防または治療のために有用である。好ましい実施形態は血管疾患、偏頭痛、結節性動脈周囲炎、甲状腺炎、再生不良性貧血、ホジキン病、硬皮症、リューマチ熱、Ｉ型糖尿病、重症筋無力症、多発性硬化症、サルコイドーシス、ネフローゼ症候群、ベーチェット症候群、多発性筋炎、歯肉炎、過敏症、傷害後の浮腫、心筋虚血、歯周病、インスリン炎等のような疾患における炎症の治療において有用である。
好ましい実施形態は網膜症、結膜炎、ブドウ膜炎、眼性光恐怖症、および眼組織の急性の傷害のような眼科疾患の治療においても有用である。好ましい実施形態はまたウィルス感染および嚢胞性線維症に関わるもののような肺炎症の治療において有用である。好ましい実施形態はまた喘息の治療に有用である。好ましい実施形態はまた、アルツハイマー病を含む皮質痴呆症のような特定の神経系の障害の治療のためにも有用である。好ましい実施形態は関節炎の治療のためのような抗炎症剤としても有用であり、有害な副作用が顕著に低下しているという付加的な利点もともなっている。ＰＧＥ２のＣＯＸ−２媒介生合成の阻害剤として、これ等の組成物はまた、アレルギー性鼻炎、呼吸窮迫症候群、内毒素ショック症候群、アテローム性動脈硬化症および卒中、虚血および外傷に起因する中枢神経損傷の治療においても有用である。好ましい実施形態はまた腺維筋肉痛の治療にも有用である。
ＣＯＸ−２は骨芽機能の調節において役割を果たすこともできるため、好ましい実施形態は骨粗鬆症の治療および予防のためにも有用であり得る。Ｋａｎｅｍａｔｓｕ等（Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ １９９７Ｎｏｖ；１２（１１）：１７８９−９６）はインターロイキン１（ＩＬ−１）および腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−アルファ）が骨粗鬆症の病因に関与していることを開示している。これ等のプロ炎症サイトカインはＣＯＸ−２および一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）の両方を誘導し、それぞれＰＧＥ２およびＮＯの放出を伴う。ＣＯＸおよびＮＯＳ経路と骨芽機能の調節におけるそれらの役割との間の相互作用がＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞において調べられている。
好ましい実施形態によれば、動物はヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、トリ、ウマ、反芻動物または他の温血動物よりなる群から選択されるメンバーであってよい。好ましい実施形態は人間の治療を主に指向している。投与は当業者が使用できる如何なる方法、例えば経口、局所、経皮、経粘膜または非経腸の経路を用いてよい。
ヒトの治療のために有用である以外に、好ましい実施形態はまたウマ、イヌ、ネコ、トリ、ヒツジ、ブタ等を含む他の動物の治療のために有用である。炎症の治療のための特定の製剤は胃粘膜のＰＧＥ２の合成に殆ど影響することなくＣＯＸ−２の誘導および活性を抑制する。歴史的に、炎症の治療のために使用されているＮＳＡＩＤは胃粘膜細胞のＰＧＥ２の合成に影響することなくＣＯＸ−２を阻害する特異性を欠いていた。従って、これ等の薬剤は長期間使用されると胃腸系を刺激し損傷を与えていた。
好ましい組成物はまたＮＦ−κＢもモジュレートすることができる。ＮＦ−κＢのモジュレーションは哺乳類における病理学的状態を治療または抑制するためにＮＦ−κＢの濃度を調節することを包含し得る。例えばＮＦκＢの異常な濃度、例えば上昇した濃度は疾患および望ましくない状態に関連している場合がある。ＮＦ−κＢはニューロンの生存、炎症応答および癌に関与しているとされている。ＮＦ−κＢはＣＯＸ−２遺伝子の発現を調節する。従ってＮＦ−κＢをモジュレートする好ましい組成物はＣＯＸ−２の発現にも影響することができる。
本明細書に示した結果はＮＦ−κＢのモジュレートが標的細胞のみにおいてＣＯＸ−２の発現をモジュレートし、ＰＧ経路に伴うＣＯＸ−２または他の酵素の直接の抑制を特に伴わないことを示している。従って、例えば好ましい組成物は多くの既存のＮＳＡＩＤに伴っていた胃粘膜の損傷という副作用を伴うことなく抗炎症作用の利点をもたらす。既存のＮＳＡＩＤ、例えばロフェコキシブおよびセレコキシブはＣＯＸ−２酵素を選択的に阻害することによりプロスタグランジンの合成を抑制すると考えられていた。しかしながら、副作用はこれ等の既存のＮＳＡＩＤにおいてはＣＯＸ−２の全体的選択的阻害の欠如のためなお起こっている。既存のＮＳＡＩＤはなお非選択的であり、ＣＯＸ−２以外の酵素に影響し、副作用をもたらす。ＮＦ−κＢをモジュレートすることにより好ましい実施形態の組成物は上流の位置で機能し、そして標的細胞において選択的にＣＯＸ−２の合成を抑制できる。標的細胞にＣＯＸ−２が存在しない場合、炎症応答に指向されたプロスタグランジンの合成も抑制できる。従って、炎症反応は防止され得るか停止され得る。標的細胞においてＣＯＸ−２が影響を受ける一方、非標的細胞においてはＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２は未影響のまま残存でき、胃粘膜の細胞保護、腎血流の調節および血小板凝固の制御のような生理学的機能を継続的に維持できる。
好ましい組成物はＮＦ−κＢに影響できるため、好ましい実施形態はまた種々の疾患、例えば自己免疫、炎症、神経および心臓血管の疾患および癌（ただし、これらに限定されない）の治療および予防に有用であり得る。
好ましい実施形態はＮＦ−κＢの組織特異的活性化に関連する病理学的状態を治療および予防するために有用であり得る。ＮＦ−κＢは多くの細胞型に存在し得、多様な範囲のインデューサーにより活性化されることがわかっている。活性化され核に輸送されると、ＮＦ−κＢは特定の遺伝子のプロモーターまたはエンハンサー領域に存在するモチーフに結合することにより早期応答遺伝子の転写を開始または調節することができる。
ＮＦ−κＢの応答は種々の同時活性化物質と組み合わせられて実質的に全ての細胞型で起こる。しかしながら、ＮＦ−κＢ単独ではＤＮＡと結合した場合にその遺伝子を活性化することができないため、厳密な活性化された遺伝子は細胞の内容に応じて変動する。同時活性化物質はＮＦ−κＢのようなエンハンサー結合転写因子を基本的転写機序の成分に連結させると考えられており、次にこれがこの遺伝子を転写してｍＲＮＡコピーを発生させる。従って、ＮＦ−κＢは組織または細胞特異的にモジュレートされ、これにより種々の病理学的状態を治療および／または抑制することができる。
従ってＮＦ−κＢ経路における特定の標的を抑制または活性化する組成物は癌および炎症性疾患を含む重篤な疾患の多くの治療または予防における新しい方法を提供する。ＮＦ−κＢは炎症、抗原提示、免疫、サイトカイン生産、アポトーシスおよび癌を含む一定範囲の細胞現象に関与する転写因子である。例えば、ＮＦ−κＢは肺細胞に影響するため、病理学的状態は喘息および／または他の肺の状態として顕在化され得る。ＮＦ−κＢはまた、ＰＧＥ２に媒介されるものとして、結腸直腸、乳房および前立腺の状態、例えば癌に関与している。ＮＦ−κＢは、細胞−細胞接着によって媒介される場合、これらの癌および他の癌に関連する。ＮＦ−κＢはまたＨＩＶ−１の複製、感冒および流行性感冒にも関与している。上記したとおり、ＮＦ−κＢは自己免疫、炎症、神経および心臓血管の疾患および癌のような状態に関与しているとされている。
製剤
好ましい組成物は食餌栄養補給物または治療用組成物の形態で投与することができる。組成物はまた、経口、局所、経皮、経粘膜、非経腸等で、適切な用量単位として所望に応じて投与してよい。
食餌用途のために好ましい組成物は種々の添加剤、例えば中間的な代謝の他の天然の成分、ビタミンおよび無機質、並びに錠剤およびカプセルの製造における標準的な賦形剤であるタルクおよびステアリン酸マグネシウムのような不活性の成分を含有してよい。例えば１つの実施形態はグルコサミンまたは硫酸コンドロチンと組み合わせて好ましい組成物の活性成分を含む。
本明細書においては「薬学的に許容される担体」とは何れかの、そして全ての溶媒、分散媒体、コーティング、等張性および吸収遅延性の物質、甘味料等を包含する。これ等の薬学的に許容される担体は広範な種類の物質、例えば希釈剤、バインダーおよび接着剤、潤滑剤、錠剤崩壊剤、着色剤、増量剤、フレーバー剤、甘味剤および多様な物質、例えば特定の治療用組成物の製造のために必要とされる場合がある緩衝剤および吸収剤（ただし、これらに限定されない）から製造してよい。薬学的に活性のある物質のためのこのような媒体および物質の使用は当該分野でよく知られている。何れかの従来の媒体または薬剤が活性成分と適合しない場合を除き、好ましい組成物におけるその使用は意図される。１つの実施形態において、タルクおよびステアリン酸マグネシウムを製剤中に含有させる。食餌用バーまたは機能性食品としてのこの組成物の製造に影響することがわかっている他の成分は、フレーバー、糖類、アミノ糖、蛋白および／または変性澱粉並びに脂質および油脂を包含し得る。
好ましい実施形態の食事用栄養補給剤、ローションまたは治療用組成物は当該分野で知られている何れかの方法で製剤できる。１つの実施形態においては、組成物は当該分野で使用できる手法を用いてカプセルまたは錠剤に製剤される。カプセルまたは錠剤の形態の場合、成体のヒトまたは動物に対する推奨一日当たり用量は好ましくは１〜６カプセルまたは錠剤に含有される。しかしながら、好ましい組成物は別の好都合な形態、例えば注射用溶液または懸濁液、スプレー溶液または懸濁液、ローション、ガム、ロゼンジ、食品またはスナック製品中に製剤することもできる。食品、スナック、ガムまたはロゼンジの製品は何れかの食用成分、例えば甘味料、フレーバー、オイル類、澱粉、蛋白、果実または果実エキス、野菜または野菜エキス、穀物、動物性脂肪または蛋白を含有できる。即ち、好ましい組成物はシリアル類、スナック製品、例えばチップス、バー、ガムドロップ、チュワブルキャンディーまたは遅延溶解性ロゼンジに製剤できる。好ましい実施形態は急性および慢性の両方の炎症に基づく疾患の全ての型の治療を意図している。好ましい製剤は炎症応答を低減することにより罹患組織の治癒を促進するか、それ以上の損傷を防止する。薬学的に許容される担体はまた好ましい組成物および製剤において使用できる。
ＡＧＳ細胞株を使用した試験
選択的ＣＯＸ−２薬剤を発見するためにはＴ．Ｄ．Ｗａｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄ ｄｒｕｇ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１ ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｙ： Ａ ｆｕｌｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ｓｃｉ ＵＳＡ９６，７５６３−７５６８（１９９９）のＭｏｄｉｆｉｅｄ Ｗｈｏｌｅ Ｂｌｏｏｄ／Ｃｅｌｌ Ａｓｓａｙを使用することが一般的であった。ホップ画分をこの操作法に従って試験する場合、ホップ抽出物はそれらが直接のＣＯＸ−２阻害剤ではないため、必要なμｇ／ｍｌの範囲のＩＣ５０値をもたらさない。このようなＣＯＸ−２直接阻害の欠如は精製されたＣＯＸ−２酵素を用いてＴｏｂｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．１９９７（Ｂｏｎｅ ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｏｒｍ ｈｏｐ ｅｘｔｒａｃｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ６１（１）１５８−１５９）により明らかにされている。同様に、本出願の実施例４はＭｏｄｉｆｉｅｄ Ｗｈｏｌｅ Ｂｌｏｏｄ／Ｃｅｌｌ Ａｓｓａｙにより試験した場合、ホップ化合物および誘導体は２５μｇ／ｍｌより高いメジアン阻害濃度を示している。このような高いメジアン阻害濃度は薬理学的には不適当である。従って、Ｗａｒｎｅｒの記載したＭｏｄｉｆｉｅｄ Ｗｈｏｌｅ Ｂｌｏｏｄ Ａｓｓａｙはホップまたはホップ誘導体を含有する潜在的に治療上有効な組み合わせを製剤するためには非有効な操作法である。
ＣＯＸ−２の発見はＣＯＸ−１により製造された胃および腎における保護性ＰＧを除去することなく炎症を低減する薬剤の設計を可能にした。本発明者等の方法の１つは、細胞保護作用を有し、エンドポイントとして胃腸粘膜の一体性を維持する際に役割を果たすＰＧＥ ２ を用いたＣＯＸ−２およびＣＯＸ−１の抑制活性を評価するためにインビトロの動物細胞を使用して好ましい実施形態の組成物をスクリーニングすることである。第２に、異なる細胞型を用いて結果を確認している。スクリーニング方法は特異的なＣＯＸ−２活性および制限されたＣＯＸ−１抑制を示す組成物を示す。好ましい実施形態の組成物は２つの細胞型、即ち１）成分１つより多くを含む組成物に関する旨適な量および比を決定および発見するためのヒト肺細胞または他の細胞株；および、２）創傷治癒（潰瘍等）に必要とされるＣＯＸ−１の抑制に典型的に関連する毒性を評価するためのヒト胃上皮細胞（ＡＧＳ細胞株）、胃腸管細胞株およびモデル系において試験することができる。従って、ＣＯＸ−２またはＣＯＸ−２の誘導を抑制することができる好ましい実施形態の組成物は、ＡＧＳ細胞において低活性または無活性でありヒト肺細胞または他の細胞株において高活性を示す組成物を選択することによりスクリーニングできる。
特定の実施形態において、本発明は第１の成分としてホップから誘導された画分；および第２の成分としてローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトン物質種およびトリプトアンスリンよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物を提供する。ホップから誘導された画分はＣＯ２で抽出することができる。ホップから誘導された画分はイソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸および使用済みホップよりなる群から選択できる。
別の実施形態においては、本発明の組成物は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むホップから誘導された画分を含有し得る。
更に別の実施形態においては、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
更に別の実施形態においては、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
本発明の組成物において、ホップから誘導された画分はコフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンからなる群より選択される化合物を含有できる。
本発明の組成物において、第２の成分は、１，８−シネオール、１９−アルファ−ヒドロキシウルソール酸、２−ベータ−ヒドロキシオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルウルソール酸、６−メトキシ−ルテオリン−７−グルコシド、６−メトキシルテノリン、６−メトキシルテノリン−７−グルコシド、メトキシルテノリン−７−メチルエーテル、７−エトキシ−ロスマノール、７−メトキシ−ロスマノール、アルファ−アミリン、アルファ−フムレン、アルファ−ヒドロキシヒドロカフェイン酸、アルファ−ピネン、アルファ−テルピネン、アルファ−テルピネニルアセテート、アルファ−テルピネオール、アルファ−スジョン、アピゲニン、アピゲニン−７−グルコシド、クルクメン、ベンジルアルコール、β−アミレノン、β−アミリン、β−エレメン、β−ピネン、ベツリン、ベツリン酸、ボルネオール、ボルニル−アセテート、カフェイン酸、カンフェン、カンファー、カルノシン酸、カルノゾール、カルバクロール、カルボン、カリオフィレン、カリオフィレン−オキシド、クロロゲン酸、ジオスメチン、ガンマ−テルピネン、ヘスペリジン、イソボルネオール、リモネン、ルテオリン、ルテオリン−３’−Ｏ−（３’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−（４’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオニン−７−グルコシド、メチル−オイゲノール、ミルセン、ネオクロロゲン酸、ネプチン、オクタン酸、オレアノール酸、ｐ−シメン、ピペリテノン、ロスマノール、ロスマリン酸、ロスマリシン、ロスマリジフェノール、ロセマリン酸、ロスマリノール、ロスマリキノン、サビネン、サビニルアセテート、サリシレート、サリチル酸−２−β−Ｄ−グルコシド、スクワレン、テルピネン−４−オール、テルピノレン、チモール、トランスアネトール、トランスカルベオール、ウルソール酸、ベルベノンおよびジンギベレンよりなる群から選択されるローズマリーから誘導された化合物であることができる。
別の実施形態においては、第２の成分はベツリン、ベツリン酸、カルノシン酸、カルノゾール、カルバクロール、クロロゲン酸、ジオスメチン、リモネンおよびルテオリンよりなる群から選択されるローズマリーから誘導された化合物であることができる。更に別の実施形態においては、第２の成分は１８−ａ−グリチルレチン酸、１８−β−グリチルレチン酸、２−ａ−３−ａ−ジヒドロオキシウルサ−１２−３ｎ−２８−オン酸、３−ａ−ヒドロキシウルソール酸、３−オキソ−ウルソール酸、ベツリン、ベツリン酸、セラストロール、エブリコン酸、フリエデリン、グリチルリチン、ギプソゲニン、オレアノール酸、オレアノール酸−３−アセテート、パキム酸、ピニコール酸、ソホラジオール、ソヤサポゲノールＡ，ソヤサポゲノールＢ、トリプテリン、トリプトフェノリド、ツムロース酸、ウルソール酸、ウルソール酸−３−アセテート、ウバオールおよびβ−シトステロールよりなる群から選択されるトリテルペン物質種であることができる。更にまた第２の成分は１８−ａ−グリチルレチン酸、１８−β−グリチルレチン酸、２−ａ−３−ａ−ジヒドロオキシウルサ−１２−３ｎ−２８−オン酸、３−ａ−ヒドロキシウルソール酸、３−オキソ−ウルソール酸、ベツリン、ベツリン酸、セラストロール、フリエデリン、オレアノール酸、トリプテリン、トリプトフェノリド、ウルソール酸およびウバオールよりなる群から選択されるトリテルペン物質種であることができる。更に、第２の成分は単糖類または２糖類、アミノ酸、スルフェート、スクシネート、アセテートおよびグルタチオンよりなる群から選択されるメンバーにコンジュゲートしているトリプトアンスリン、トリテルペン物質種またはジテルペンラクトン物質種であることができる。
本発明の組成物はホップから単離または誘導された画分約０．５〜１００００ｍｇ、またはホップから単離または誘導された画分約５０〜７５００ｍｇを含むことができる。本発明の組成物は更に、第２の成分がトリプトアンスリンの場合は、トリプトアンスリン約０．０３５〜３５００ｍｇ、トリプトアンスリン約０．７〜７００ｍｇを含むことができる。本発明の組成物は第２の成分がローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物およびローズマリーから誘導された化合物よりなる群から選択される場合には第２の成分約０．５〜５０００ｍｇ、または第２の成分約５〜２０００ｍｇを含むことができる。更にまた本発明の組成物は第２の成分がトリテルペン物質種である場合はトリテルペン物質種約０．０３５〜３５００ｍｇ、またはトリテルペン物質種約０．７〜７００ｍｇを含むことができる。
更に別の実施形態においては、組成物は、第１の成分約０．００１〜１０重量％、または第１の成分約０．１〜１重量％を含むことができる。更に、組成物は第２の成分約０．００１〜１０重量％、または第２の成分約０．１〜１重量％を含むことができる。本発明の組成物においては第１の成分：第２の成分の比は約１００：１〜約１：１００、または約５０：１〜約１：５０の範囲にあることができる。本発明の組成物のいずれかは更に、薬学的に許容される担体を含むことができ、そして薬学的に許容される担体を含むそのような組成物は本発明の方法において使用できる。
本発明はまた、第１の成分としてホップから単離または誘導された画分；および第２の成分としてローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物およびトリプトアンスリンよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物を提供する。ホップから単離または誘導された画分はＣＯ２で抽出することができる。ホップから単離または誘導された画分は、アルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択することができる。
ホップから単離または誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むことができる。
ホップから単離または誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
ホップから単離または誘導された画分はまた下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
ホップから単離または誘導された画分はフムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を更に含むことができる。
更にまた、このような組成物の第２の成分は、１，８−シネオール、１９−アルファ−ヒドロキシウルソール酸、２−ベータ−ヒドロキシオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルウルソール酸、６−メトキシ−ルテオリン−７−グルコシド、６−メトキシルテノリン、６−メトキシルテノリン−７−グルコシド、メトキシルテノリン−７−メチルエーテル、７−エトキシ−ロスマノール、７−メトキシ−ロスマノール、アルファ−アミリン、アルファ−フムレン、アルファ−ヒドロキシヒドロカフェイン酸、アルファ−ピネン、アルファ−テルピネン、アルファ−テルピネニルアセテート、アルファ−テルピネオール、アルファ−スジョン、アピゲニン、アピゲニン−７−グルコシド、クルクメン、ベンジルアルコール、β−アミレノン、β−アミリン、β−エレメン、β−ピネン、ベツリン、ベツリン酸、ボルネオール、ボルニル−アセテート、カフェイン酸、カンフェン、カンファー、カルノシン酸、カルノゾール、カルバクロール、カルボン、カリオフィレン、カリオフィレン−オキシド、クロロゲン酸、ジオスメチン、ガンマ−テルピネン、ヘスペリジン、イソボルネオール、リモネン、ルテオリン、ルテオリン−３’−Ｏ−（３’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−（４’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオニン−７−グルコシド、メチル−オイゲノール、ミルセン、ネオクロロゲン酸、ネプチン、オクタン酸、オレアノール酸、ｐ−シメン、ピペリテノン、ロスマノール、ロスマリン酸、ロスマリシン、ロスマリジフェノール、ロセマリン酸、ロスマリノール、ロスマリキノン、サビネン、サビニルアセテート、サリシレート、サリチル酸−２−β−Ｄ−グルコシド、スクワレン、テルピネン−４−オール、テルピノレン、チモール、トランスアネトール、トランスカルベオール、ウルソール酸、ベルベノンおよびジンギベレンよりなる群から選択されるローズマリーから誘導された化合物であることができる。第２の成分はまたベツリン、ベツリン酸、カルノシン酸、カルノゾール、カルバクロール、クロロゲン酸、ジオスメチン、リモネンおよびルテオリンよりなる群から選択されるローズマリーから誘導された化合物であることができる。更にまた第２の成分は単糖類または２糖類、アミノ酸、スルフェート、スクシネート、アセテートおよびグルタチオンよりなる群から選択されるメンバーにコンジュゲートしているトリプトアンスリンことができる。
好ましい実施形態においては、組成物は、ホップから単離または誘導された画分約０．５〜１００００ｍｇまたは約５０〜７５００ｍｇを含むことができる。更にまた、組成物は、第２の成分がトリプトアンスリンである場合は、トリプトアンスリン約０．３５〜３５００ｍｇ、またはトリプトアンスリン約０．７〜７００ｍｇを含むことができる。更にまた、組成物は、第２の成分がローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物およびローズマリーから誘導した化合物よりなる群から選択される場合は、第２の成分約０．５〜５０００ｍｇまたは第２の成分約５〜２０００ｍｇを含むことができる。更にまた組成物は第１の成分約０．００１〜１０重量％、または第１の成分約０．１〜１重量を含むことができる。更にまた組成物は第２の成分約０．００１〜１０重量％、第２の成分約０．１〜１重量％を含むことができる。別の実施形態においては、第１の成分：第２の成分の比は約１００：１〜約１：１００の範囲、または約５０：１〜約１：５０の範囲であることができる。組成物は更に薬学的に許容される担体を含むことができる。
更に別の実施形態においては、本発明は、細胞における炎症応答をモジュレートする方法を提供し、方法は本発明の組成物に細胞を接触させることを含む。例えば方法は、ホップから単離または誘導された画分およびローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトン物質種およびトリプトアンスリンよりなる群から選択される第２の成分を含む組成物を使用して実行することができる。本発明はまた、炎症の組織特異的活性化に関連した哺乳類における病理学的状態を治療または抑制する方法であって、方法はホップから単離または誘導された画分およびローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトン物質種およびトリプトアンスリンよりなる群から選択される第２の成分を含む組成物を哺乳類に投与することを含む上記方法を提供する。
病理学的状態を治療または抑制するこのような方法において、組成物は、アルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択できるホップから単離または誘導された画分を含有できる。方法の別の実施形態においては、ホップから単離または誘導された画分は、下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含む。
方法においては、ホップから単離または誘導された画分はまた下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
方法の更に別の実施形態においては、ホップから単離または誘導された画分は更に下記
式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
方法の更に別の実施形態においては、ホップから単離または誘導された画分はフムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含む。特定の実施形態においては、組成物はホップから単離または誘導された画分約０．５〜１００００ｍｇ、または約５０〜７５００ｍｇを含むことができる。更にまた、組成物はホップから単離または誘導された画分約０．００１〜１０重量％、または約０．１〜１重量％を含むことができる。特定の実施形態においては第２の成分はローズマリーである。別の実施形態においては，第２の成分はローズマリーから誘導された抽出物である。更に別の実施形態においては、第２の成分はトリテルペン物質種である。本発明の方法において、組成物は第２の成分とは異なる第３の成分を更に含み得、該第３の成分はローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトン物質種およびトリプトアンスリンよりなる群から選択される。特定の実施形態においては、第２および第３の成分はそれぞれローズマリーから誘導された抽出物およびトリプトアンスリンである。
方法の別の実施形態においては、第２の成分は、１，８−シネオール、１９−アルファ−ヒドロキシウルソール酸、２−ベータ−ヒドロキシオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルウルソール酸、６−メトキシ−ルテオリン−７−グルコシド、６−メトキシルテノリン、６−メトキシルテノリン−７−グルコシド、メトキシルテノリン−７−メチルエーテル、７−エトキシ−ロスマノール、７−メトキシ−ロスマノール、アルファ−アミリン、アルファ−フムレン、アルファ−ヒドロキシヒドロカフェイン酸、アルファ−ピネン、アルファ−テルピネン、アルファ−テルピネニルアセテート、アルファ−テルピネオール、アルファ−スジョン、アピゲニン、アピゲニン−７−グルコシド、クルクメン、ベンジルアルコール、β−アミレノン、β−アミリン、β−エレメン、β−ピネン、ベツリン、ベツリン酸、ボルネオール、ボルニル−アセテート、カフェイン酸、カンフェン、カンファー、カルノシン酸、カルノゾール、カルバクロール、カルボン、カリオフィレン、カリオフィレン−オキシド、クロロゲン酸、ジオスメチン、ガンマ−テルピネン、ヘスペリジン、イソボルネオール、リモネン、ルテオリン、ルテオリン−３’−Ｏ−（３’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−（４’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオニン−７−グルコシド、メチル−オイゲノール、ミルセン、ネオクロロゲン酸、ネプチン、オクタン酸、オレアノール酸、ｐ−シメン、ピペリテノン、ロスマノール、ロスマリン酸、ロスマリシン、ロスマリジフェノール、ロセマリン酸、ロスマリノール、ロスマリキノン、サビネン、サビニルアセテート、サリシレート、サリチル酸−２−β−Ｄ−グルコシド、スクワレン、テルピネン−４−オール、テルピノレン、チモール、トランスアネトール、トランスカルベオール、ウルソール酸、ベルベノンおよびジンギベレンよりなる群から選択されるローズマリーから誘導された化合物であることができる。
本発明のこのような方法において、第２の成分はまたベツリン、ベツリン酸、カルノシン酸、カルノゾール、カルバクロール、クロロゲン酸、ジオスメチン、リモネンおよびルテオリンよりなる群から選択されるローズマリーから誘導された化合物であることができる。方法において使用される組成物は、第２の成分約０．５〜５０００ｍｇ、または約５〜２０００ｍｇを含むことができ、第２の成分がローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物およびローズマリーから誘導した化合物よりなる群から選択される。更に別の実施形態においては本発明の方法において使用される第２の成分は、単糖類または２糖類、アミノ酸、スルフェート、スクシネート、アセテートおよびグルタチオンよりなる群から選択されるメンバーにコンジュゲートしているトリテルペン物質種またはジテルペンラクトン物質種であることができる。
本発明の方法の更に別の実施形態においては、第２の成分は１８−ａ−グリチルレチン酸、１８−β−グリチルレチン酸、２−ａ−３−ａ−ジヒドロオキシウルサ−１２−３ｎ−２８−オン酸、３−ａ−ヒドロキシウルソール酸、３−オキソ−ウルソール酸、ベツリン、ベツリン酸、セラストロール、エブリコン酸、フリエデリン、グリチルリチン、ギプソゲニン、オレアノール酸、オレアノール酸−３−アセテート、パキム酸、ピニコール酸、ソホラジオール、ソヤサポゲノールＡ，ソヤサポゲノールＢ、トリプテリン、トリプトフェノリド、ツムロース酸、ウルソール酸、ウルソール酸−３−アセテート、ウバオールおよびβ−シトステロールよりなる群から選択されるトリテルペン物質種であることができる。更に、第２の成分は１８−ａ−グリチルレチン酸、１８−β−グリチルレチン酸、２−ａ−３−ａ−ジヒドロオキシウルサ−１２−３ｎ−２８−オン酸、３−ａ−ヒドロキシウルソール酸、３−オキソ−ウルソール酸、ベツリン、ベツリン酸、セラストロール、フリエデリン、オレアノール酸、トリプテリン、トリプトフェノリド、ウルソール酸およびウバオールよりなる群から選択されるトリテルペン物質種であることができる。
本発明の方法の特定の実施形態において、組成物は、トリテルペン物質種約０．０３５〜３５００ｍｇまたはトリテルペン物質種約０．７〜７００ｍｇを含有することができ、第２の成分がトリテルペン物質種である。方法の別の実施形態においては、第２の成分は単糖類または２糖類、アミノ酸、スルフェート、スクシネート、アセテートおよびグルタチオンよりなる群から選択されるメンバーにコンジュゲートしているトリプトアンスリンである。本発明の方法の更に別の実施形態においては、組成物は、第２の成分がトリプトアンスリンである場合は、トリプトアンスリン約０．０３５〜３５００ｍｇ、またはトリプトアンスリン約０．７〜７００ｍｇを含むことができる。更に、方法において使用される組成物は第２の成分約０．００１〜１０重量％、または第２の成分約０．１〜１重量％を含むことができる。更にまた、第１の成分：第２の成分の比は約１００：１〜約１：１００の範囲、または約５０：１〜約１：５０の範囲であることができる。
病理学的状態を治療または抑制するためのこのような方法において、病理学的状態は自己免疫疾患、炎症性疾患、神経学的疾患および癌よりなる群から選択されることができる。更にまた、病理学的状態は炎症、炎症関連障害、関節炎、喘息、気管支炎、生理痛、腱炎、滑液包炎、皮膚関連状態、胃腸状態、癌、眼科疾患、肺炎症、神経系障害、アレルギー性鼻炎、呼吸窮迫症候群、内毒素ショック症候群、アテローム性動脈硬化症および中枢神経損傷よりなる群から選択されることができる。本発明の方法においては、組成物は経口、局所、非経腸または直腸を含む種々の経路で投与することができる。
本発明は更に、標的細胞におけるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性の量を、非標的細胞におけるＣＯＸ−２活性を実質的にモジュレートすることなく、モジュレートする方法であって、方法はホップから単離または誘導された画分およびローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトン物質種およびトリプトアンスリンよりなる群から選択される第２の成分を含む組成物に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。本発明のこのような方法においては、非標的細胞もまたホップから単離または誘導された画分に接触させることができる。接触工程はインビボで行うことができる。本発明の方法において、ＣＯＸ−２活性はＣＯＸ−２遺伝子の抑制によりモジュレートできる。
更にまた、本発明はシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の誘導性または活性を抑制することを含む哺乳類における病理学的状態を治療または抑制する方法であって、方法がホップから単離または誘導された画分およびローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトン物質種およびトリプトアンスリンよりなる群から選択される第２の成分を含む組成物を哺乳類に投与することを含む上記方法を提供する。本発明のそのような方法において、ホップから単離または誘導された画分はアルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択することができる。
本発明のこのような方法において所望により、ホップから単離または誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含む。
本発明のこのような方法において、ホップから単離または誘導された画分はまた下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
本発明のこのような方法において、ホップから単離または誘導された画分はまた下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
本発明のこのような方法においては、ホップから単離または誘導された画分はフムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含むことができる。更にまた、第２の成分はローズマリーから誘導された抽出物であることができる。更に、第２の成分はトリテルペン物質種であることができる。
本発明の方法の別の実施形態においては、組成物は第２の成分とは異なる第３の成分を更に含むことができ、第３の成分はローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトンおよびトリプトアンスリンよりなる群から選択される。特定の実施形態においては、第２および第３の成分はそれぞれローズマリーから誘導された抽出物およびトリプトアンスリンである。
本発明のこのような方法の更に別の実施形態においては、第２の成分は、１，８−シネオール、１９−アルファ−ヒドロキシウルソール酸、２−ベータ−ヒドロキシオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルウルソール酸、６−メトキシ−ルテオリン−７−グルコシド、６−メトキシルテノリン、６−メトキシルテノリン−７−グルコシド、メトキシルテノリン−７−メチルエーテル、７−エトキシ−ロスマノール、７−メトキシ−ロスマノール、アルファ−アミリン、アルファ−フムレン、アルファ−ヒドロキシヒドロカフェイン酸、アルファ−ピネン、アルファ−テルピネン、アルファ−テルピネニルアセテート、アルファ−テルピネオール、アルファ−スジョン、アピゲニン、アピゲニン−７−グルコシド、クルクメン、ベンジルアルコール、β−アミレノン、β−アミリン、β−エレメン、β−ピネン、ベツリン、ベツリン酸、ボルネオール、ボルニル−アセテート、カフェイン酸、カンフェン、カンファー、カルノシン酸、カルノゾール、カルバクロール、カルボン、カリオフィレン、カリオフィレン−オキシド、クロロゲン酸、ジオスメチン、ガンマ−テルピネン、ヘスペリジン、イソボルネオール、リモネン、ルテオリン、ルテオリン−３’−Ｏ−（３’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−（４’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオニン−７−グルコシド、メチル−オイゲノール、ミルセン、ネオクロロゲン酸、ネプチン、オクタン酸、オレアノール酸、ｐ−シメン、ピペリテノン、ロスマノール、ロスマリン酸、ロスマリシン、ロスマリジフェノール、ロセマリン酸、ロスマリノール、ロスマリキノン、サビネン、サビニルアセテート、サリシレート、サリチル酸−２−β−Ｄ−グルコシド、スクワレン、テルピネン−４−オール、テルピノレン、チモール、トランスアネトール、トランスカルベオール、ウルソール酸、ベルベノンおよびジンギベレンよりなる群から選択されるローズマリーから誘導された化合物である。
本発明のこのような方法の別の実施形態においては、第２の成分は単糖類または２糖類、アミノ酸、スルフェート、スクシネート、アセテートおよびグルタチオンよりなる群から選択されるメンバーにコンジュゲートしているトリテルペン物質種またはジテルペンラクトン物質種であることができる。更にまた、第２の成分は１８−ａ−グリチルレチン酸、１８−β−グリチルレチン酸、２−ａ−３−ａ−ジヒドロオキシウルサ−１２−３ｎ−２８−オン酸、３−ａ−ヒドロキシウルソール酸、３−オキソ−ウルソール酸、ベツリン、ベツリン酸、セラストロール、エブリコン酸、フリエデリン、グリチルリチン、ギプソゲニン、オレアノール酸、オレアノール酸−３−アセテート、パキム酸、ピニコール酸、ソホラジオール、ソヤサポゲノールＡ，ソヤサポゲノールＢ、トリプテリン、トリプトフェノリド、ツムロース酸、ウルソール酸、ウルソール酸−３−アセテート、ウバオールおよびβ−シトステロールよりなる群から選択されるトリテルペン物質種であることができる。更にまた、第２の成分は単糖類または２糖類、アミノ酸、スルフェート、スクシネート、アセテートおよびグルタチオンよりなる群から選択されるメンバーにコンジュゲートしているトリプトアンスリンであることができる。本発明のこのような方法において所望により、第１の成分：第２の成分の比は約１００：１〜約１：１００の範囲、または、約５０：１〜約１：５０の範囲であることができる。
本発明の方法の特定の実施形態においては、ＣＯＸ−２の誘導性または活性を抑制することが関わる病理学的状態は、炎症、炎症関連障害、関節炎、喘息、気管支炎、生理痛、腱炎、滑液包炎、皮膚関連状態、胃腸状態、癌、眼科疾患、肺炎症、神経系障害、アレルギー性鼻炎、呼吸窮迫症候群、内毒素ショック症候群、アテローム性動脈硬化症および中枢神経損傷よりなる群から選択することができる。
更にまた、本発明は標的細胞において選択的にプロスタグランジンの合成を抑制する方法であって、方法がホップから単離または誘導された画分、および、ローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトン物質種およびトリプトアンスリンよりなる群から選択される第２の成分に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。本発明のこのような方法において、ホップから単離または誘導された画分はアルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択することができる。
本発明のこのような方法において更に、ホップから単離または誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むことができる。
本発明の方法の別の実施形態においては、ホップから単離または誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
本発明のこのような方法の更に別の実施形態においては、ホップから単離または誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含む。
本発明のこのような方法の別の実施形態においては、ホップから単離または誘導された画分はフムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含むことができる。
別の実施形態において、本発明は、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制する方法であって、方法がホップから単離または誘導された画分、および、ローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトン物質種およびトリプトアンスリンよりなる群から選択される第２の成分に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。このような方法において、ホップから単離または誘導された画分はアルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択されることができる。
このような方法において、ホップから単離または誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むことができる。
このような方法の別の実施形態において、ホップから単離または誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
このような方法の更に別の実施形態において、ホップから単離または誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
本発明のこのような方法において、ホップから単離または誘導された画分は、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含むことができる。
更に別の実施形態において、本発明は、細胞における炎症応答をモジュレートする方法であって、方法がホップから単離または誘導された画分を含む組成物に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。別の実施形態において、本発明は炎症の組織特異的活性化に関連した哺乳類における病理学的状態を治療または抑制する方法であって、方法はホップから誘導された画分を含む組成物を哺乳類に投与することを含む上記方法を提供する。このような方法において、ホップから誘導された画分はイソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択され得る。
このような方法の１つの実施形態において、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むことができる。
本発明のこのような方法の別の実施形態においては、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
このような方法においてさらに、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
本発明のこのような方法の別の実施形態においては、ホップから誘導された画分はコフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含むことができる。方法の特定の実施形態においては、組成物はホップから誘導された画分約０．５〜１００００ｍｇ、または約５０〜７５００ｍｇを含むことができる。更に、組成物はホップから誘導された画分約０．００１〜１０重量％、または約０．１〜１重量％を含むことができる。
本発明のこのような方法においては、病理学的状態は自己免疫疾患、炎症性疾患、神経学的疾患および癌よりなる群から選択することができる。別の実施形態においては、病理学的状態は炎症、炎症関連障害、関節炎、喘息、気管支炎、生理痛、腱炎、滑液包炎、皮膚関連状態、胃腸状態、癌、眼科疾患、肺炎症、神経系障害、アレルギー性鼻炎、呼吸窮迫症候群、内毒素ショック症候群、アテローム性動脈硬化症および中枢神経損傷よりなる群から選択することができる。
更に別の実施形態において、本発明は標的細胞におけるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性の量を、非標的細胞におけるＣＯＸ−２活性を実質的にモジュレートすることなく、モジュレートする方法であって、方法はホップから誘導された画分に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。本発明のこのような方法においては、非標的細胞もまたホップから誘導された画分に接触させることができる。接触工程はインビボで実施できる。本発明の方法において、ＣＯＸ−２活性はＣＯＸ−２遺伝子の抑制によりモジュレートされ得る。
更に別の実施形態において、本発明はシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の誘導性または活性を抑制することを含む哺乳類における病理学的状態を治療または抑制する方法であって、方法がホップから誘導された画分を含む組成物を哺乳類に投与することを含む上記方法を提供する。このような方法において、ホップから誘導された画分はイソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択することができる。
方法の別の実施形態において、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むことができる。
このような方法において、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
方法の別の実施形態において、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
方法の更に別の実施形態においては、ホップから誘導された画分はコフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含むことができる。
本発明のこのような方法において、病理学的状態は、炎症、炎症関連障害、関節炎、喘息、気管支炎、生理痛、腱炎、滑液包炎、皮膚関連状態、胃腸状態、癌、眼科疾患、肺炎症、神経系障害、アレルギー性鼻炎、呼吸窮迫症候群、内毒素ショック症候群、アテローム性動脈硬化症および中枢神経損傷よりなる群から選択することができる。
更にまた、本発明は標的細胞において選択的にプロスタグランジンの合成を抑制する方法であって、方法がホップから誘導された画分に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。このような方法において、ホップから誘導された画分はイソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択することができる。
方法の別の実施形態においては、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むことができる。
方法の更に別の実施形態においては、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含む。
方法の更に別の実施形態においては、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
方法の別の実施形態においては、ホップから誘導された画分はコフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含むことができる。
本発明は更に、骨再吸収に関連しない細胞におけるＮＦ−κＢをモジュレートする方法であって、方法がホップから単離または誘導された画分を含む組成物に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。本発明は更にＮＦ−κＢの組織特異的活性化に関連する哺乳類における骨粗鬆症以外の病理学的状態を治療または抑制する方法であって、方法がホップから単離または誘導された画分を含む組成物を哺乳類に投与することを含む上記方法を提供する。このような方法において、画分はホップから誘導されることができ、そしてイソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択できる。
方法の別の実施形態においては、画分はホップから誘導され、そして下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むことができる。
方法の別の実施形態においては、画分はホップから誘導され、そして下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含む。
方法の更に別の実施形態においては、画分はホップから誘導され、そして下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含む。
方法の更に別の実施形態においては、画分はホップから誘導され、そしてコフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含む。
方法の特定の実施形態においては、本発明の方法で使用される組成物はホップから単離または誘導された画分約０．５〜１００００ｍｇ、または約５０〜７５００ｍｇを含むことができる。更にまた、組成物はホップから単離または誘導された画分約０．００１〜１０重量％、または約０．１〜１重量％を含むことができる。
ＮＦ−κＢをモジュレートする本発明の方法において、病理学的状態は自己免疫疾患、炎症性疾患、神経学的疾患、心臓血管疾患および癌よりなる群から選択することができる。更にまた、ＮＦ−κＢをモジュレートする方法において、病理学的状態は炎症、喘息、ＨＩＶ−１複製、風邪および流行性感冒よりなる群から選択することができる。
別の実施形態においては、本発明は、骨再吸収に関連しない標的細胞におけるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性の量を、非標的細胞におけるＣＯＸ−２活性を実質的にモジュレートすることなく、モジュレートする方法であって、方法はホップから単離または誘導された画分に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。方法においては、非標的細胞もまたホップから単離または誘導された画分に接触させることができる。接触工程はインビボで行うことができる。方法において、ＣＯＸ−２活性はＣＯＸ−２遺伝子の抑制によりモジュレートすることができる。
更にまた、本発明は、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の誘導性または活性を抑制することを含む哺乳類における骨粗鬆症以外の病理学的状態を治療または抑制する方法であって、方法がホップから単離または誘導された画分を含む組成物を哺乳類に投与することを含む上記方法を提供する。特定の実施形態において、画分はホップから誘導され得、そしてイソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択することができる。
方法の別の実施形態においては、画分はホップから誘導され、そして下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含む。
方法の更に別の実施形態においては、画分はホップから誘導され、そして下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含む。
方法の更に別の実施形態においては、画分はホップから誘導され得、そして下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
方法の特定の実施形態においては、画分はホップから誘導され得、そしてコフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含むことができる。
方法の別の実施形態においては、病理学的状態は炎症、炎症関連障害、関節炎、喘息、気管支炎、生理痛、腱炎、滑液包炎、皮膚関連状態、胃腸状態、癌、眼科疾患、肺炎症、神経系障害、アレルギー性鼻炎、呼吸窮迫症候群、内毒素ショック症候群、アテローム性動脈硬化症および中枢神経損傷よりなる群から選択することができる。
更にまた、本発明は、標的細胞において選択的にプロスタグランジンの合成を抑制する方法であって、方法がホップから誘導された画分に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。このような方法において、ホップから誘導された画分はイソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択することができる。
このような方法において、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むことができる。
方法の別の実施形態においては、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
方法の更に別の実施形態においては、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含む。
方法の更に別の実施形態においては、ホップから誘導された画分はコフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含むことができる。
更にまた、本発明は、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制する方法であって、方法がホップから誘導された画分に細胞を接触させることを含む上記方法を提供する。このような方法において、ホップから誘導された画分は、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップよりなる群から選択することができる。
このような方法において、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択され；そして、
Ｒ、Ｔ、ＸおよびＺは独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよびπ軌道よりなる群から選択されるが、ただしＲ、Ｔ、ＸまたはＺの１つがπ軌道である場合は、隣接するＲ、Ｔ、ＸまたはＺもまたπ軌道であり、これにより二重結合を形成する］を有する超属の化合物を含むことができる。
方法の別の実施形態において、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、
Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ａの化合物を含むことができる。
方法の更に別の実施形態において、ホップから誘導された画分は下記式：
Figure 2006508182
［式中、Ｒ’はカルボニル、ヒドロキシル、ＯＲおよびＯＣＯＲよりなる群から選択され、ここでＲはアルキルであり；そして、 Ｒ’’はＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３よりなる群から選択される］を有する属Ｂの化合物を含むことができる。
本発明のこのような方法において、ホップから誘導された画分はコフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンよりなる群から選択される化合物を含むことができる。本明細書に開示した本発明の組成物は本明細書に開示される本発明の種々の方法において使用できるものとする。
本発明は更に、哺乳類における肥満を治療または抑制する方法であって、方法はホップから単離または誘導された画分およびローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、トリテルペン物質種、ジテルペンラクトンおよびトリプトアンスリンよりなる群から選択される第２の成分を含む組成物、または本明細書に開示される本発明の他の組成物を哺乳類に投与することを含む上記方法を提供する。
実施例１、２および２７において開示する通り、ＡＧＳ胃粘膜細胞株は抗炎症剤の潜在的胃腸毒性を測定するためのモデル系として機能することができる。ＡＧＳ細胞において、ＣＯＸ−１はＣＯＸ−２よりも４倍高値に発現される。ＡＧＳ細胞においてＰＧＥ２の抑制が低値であることは。ＡＧＳ細胞株がより高度にＣＯＸ−１を発現し、これが粘膜のホメオスタシスを維持するため、好ましいものである。即ち本発明は抗炎症剤の潜在的胃腸毒性を測定する方法を提供する。方法は以下の工程、即ち、ＡＧＳ胃粘膜細胞を抗炎症剤に接触させること；標的炎症細胞、例えばＡ５４９細胞を抗炎症剤に接触させること；ＡＧＳ細胞および標的炎症細胞の各々における抗炎症剤に対するプロスタグランジンＥ２（ＰＥＧ２）の発現の５０％抑制濃度（ＩＣ５０）を測定すること；およびＡＧＳのＩＣ５０値の標的炎症細胞のＩＣ５０値に対する比を求めること、ここで１より大きい比は低減した潜在的胃腸毒性を示し、１より小さい比は増大した潜在的胃腸毒性を示ものであること；を包含し得る。
本明細書に開示したとおり、還元異性化アルファ酸および異性化アルファ酸はＰＥＧ２に対して直接ではなくＣＯＸ−２の発現を抑制すると考えられる（実施例２５参照）。更に本明細書に開示するとおり、ホップはＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２の酵素活性に対して有意な用量関連の作用を有しておらず、ホップおよび／またはホップから単離または誘導された画分がＣＯＸ−２発現に影響していることを裏付けている（実施例２６参照）。
以下に記載するものは好ましい実施形態を示す特定の実施例であり、範囲を限定する意図はない。
ＡＧＳ胃粘膜細胞はシクロオキシゲナーゼ−１およびシクロオキシゲナーゼ−２の両方を構成的に発現する。
要約 − 本実施例はＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の構成的発現を示すＡＧＳヒト胃粘膜細胞株がシクロオキシゲナーゼ阻害化合物の胃腸毒性を評価するためのモデルとして機能する優れた能力を有することを明らかにする。
本実施例で使用した装置はＯＨＡＳ Ｍｏｄｅｌ＃Ｅ０１１４０分析用天秤、Ｆｏｒｍａ Ｍｏｄｅｌ ＃Ｆ１２１４バイオセイフティーキャビネット（Ｍａｒｉｅｔｔａ，Ｏｈｉｏ）、０．１〜１００μｌを添加するための種々のピペット類（ＶＷＲ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）、セルハンドタリーカウンター（ＶＷＲ Ｃａｔａｌｏｇ＃２３６０９−１０２、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）、Ｆｏｒｍａ Ｍｏｄｅｌ＃Ｆ３２１０ＣＯ２インキュベーター（Ｍａｒｉｅｔｔａ，Ｏｈｉｏ）、血球メーター（Ｈａｕｓｓｅｒ Ｍｏｄｅｌ＃１４９２、Ｈｏｒｓｈａｍ，ＰＡ）、Ｌｅｉｃａ Ｍｏｄｅｌ＃ＤＭＩＬ倒立顕微鏡（Ｗｅｔｚｌａｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＰＵＲＥＬＡＢ Ｐｌｕｓ Ｗａｔｅｒ Ｐｏｌｉｓｈｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＵＳ Ｆｉｌｔｅｒ，Ｌｏｗｅｌｌ，ＭＡ）、４℃冷蔵庫（Ｆｏｒｍａ Ｍｏｄｅｌ＃Ｆ３７７５，Ｍａｒｉｅｔｔａ，Ｏｈｉｏ）、回転混合器（ＶＷＲ Ｃａｔａｌｏｇ＃３３９９４−３０６、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）、および３７℃ウォーターバス（Ｓｈｅｌ Ｌａｂ Ｍｏｄｅｌ ＃１２０３，Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ，ＯＲ）を含んでいた。
薬品および試薬 − プロスタグランジンＥ２ＥＩＡキットモノクローナルはＣａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）から購入した。抗ＣＯＸ−１および抗ＣＯＸ−２ウサギポリクローナル抗血清はＵｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＣＩＴＹ，ＮＹ）より入手し；ロバ抗ヤギＩｇＧ−ＨＲＰはＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃｉｔｙ，ＣＡ）より購入した。熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ−ＨＩ、Ｃａｔ．＃３５−０１１ＣＶ）およびダルベッコの変性イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｃａｔ．＃１０−０１３ＣＶ）はＭｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）より購入した。全ての標準試薬はＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手し、最高純度の市販品を用いた。
細胞培養 − ヒト胃粘膜細胞株ＡＧＳはＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１７３９；Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）より入手し、供給元の取扱説明書に従って継代した。細胞は日常的には１０％ＦＢＳ、５０単位ペニシリン／ｍｌ、５０μｇストレプトマイシン／ｍｌ、５％ピルビン酸ナトリウムおよび５％Ｌ−グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０中５％ＣＯ２下３７℃で培養した。指数生育期の細胞を６穴プレートに播種し、コンフルエントとなるまで生育させた。上澄み培地２０μ分を採取してＰＧＥ２の含量の測定用とした。次に細胞をＰＢＳで洗浄し、掻き取り、溶解してイムノブロッティング用とした。
蛋白試験 − 細胞溶解物の蛋白濃度は製造元により供給された操作法に従って、ウシ血清アルブミンを標準物質（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＥ）として用いながら、ＮａｎｏＯｒａｎｇｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて測定した。蛍光はＰａｃｋａｒｄ ＰｌａｔｅＲｅａｄｅｒバージョン３．０のソフトウエアを用いながら、４８５ｎｍにセットした励起フィルター、５７０ｎｍにセットした発光フィルターと共にＰａｃｋａｒｄ ＦｌｕｏｒｏＣｏｕｎｔ，Ｍｏｄｅｌ ＢＦ１００００フロリメーターを用いて測定した。Ｐａｃｋａｒｄ ＰｌａｔｅＲｅａｄｅｒと共に提供されたＩ−Ｓｍａｒｔプログラムを用いて蛋白濃度を計算した。
イムノブロッティング − ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２のウエスタンブロッティングはＰＡＧＥｒＴＭ Ｇｏｌｄ Ｐｒｅｃａｓｔ Ｇｅｌｓ（Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＭＥ））を用いて実施した。蛋白約６０μｇを含有するＡＧＳ細胞溶解物を３０μＬの総容量でゲルのウェル内にＬａｅｍｍｌｉ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒと共にロードした。垂直ミニゲル電気泳動チャンバーはＳａｖａｎｔ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．（Ｈａｌｂｒｏｏｋ，ＮＹ）製のモデルＭＶ１２０とした。ゲルは、ゲルの底部にブロモフェノールブルーの染色部が到達するまで、約１時間、室温で４０ｍＡ／プレート（一定電流）で泳動した。次にゲルを５００ｍＡおよび４℃で一夜、ポリビニルフロリド転移メンブレン（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）上にブロットした。広範囲の未染色の精密蛋白標準分子量マーカー（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用した。ＢｉｏＷｅｓｔＴＭ長時間ケミルミネセント基質、非同位体セイヨウワサビパーオキシダーゼ基質キット、ウエスタンブロット検出用（ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｕｐｌａｎｄ，ＣＡ）を用いて蛋白を可視化した。ウエスタンブロットの画像はＵＶＰ Ｅｐｉ Ｃｈｅｍｉ ＩＩ Ｄａｒｋｒｏｏｍ（ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて獲得し、ＬａｂＷｏｒｋｓＴＭＩｍａｇｅ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて分析し、増強した。
ＰＧＥ２試験 − ＰＧＥ２の定量用の市販の非放射性の操作法（Ｃａｙｍｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）を用い、そして製造元の推奨する操作法を変更することなく使用した。慨すれば、培地２５μＬを連続希釈したＰＧＥ２標準試料と共に、適切な量のアセチルコリンエステラーゼ標識トレーサーおよびＰＧＥ２抗血清と混合し、１８時間室温でインキュベートした。ウェルをカラにし、洗浄緩衝液で洗浄した後、アセチルコリンエステラーゼの基質を含有するＥｌｌｍａｎ試薬２００μｌを添加した。反応は１時間室温で緩徐な振とう器上で行い、４１５ｎｍの吸光度を測定した。ＰＧＥ２濃度は１０５細胞当りのピコグラムとして表示した。
結果 − 図６に示す通り、ＡＧＳ細胞株はＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の両方を構成的に発現し、ＣＯＸ−１の発現がＣＯＸ−２の発現よりもほぼ４倍高値であった。１８時間に渡るＡＧＳ細胞中のＰＧＥ２合成は６６０ｐｇ／１０５個であった。即ち、本実施例はＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の構成的発現を示すＡＧＳヒト胃粘膜細胞株がシクロオキシゲナーゼ阻害化合物の胃腸毒性を評価するためのモデルとして機能する優れた能力を有することを明らかにしている。
過去において、伝統的なＣＯＸ−２仮説は胃腸粘膜におけるＣＯＸ−２の発現の役割を軽視していた。正常な胃粘膜においてはＣＯＸ−１が優勢なＣＯＸアイソザイムであるが、本実施例および文献において明らかにされている通り、検出可能な量のＣＯＸ−２ｍＲＮＡおよび蛋白が両方とも動物およびヒトの胃粘膜の特定の位置において構成的に発現され誘導されることを示す多くの証拠がある［Ｈａｌｔｅｒ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ ２−ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｍｕｃｏｓａｌ ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ ａｎｄ ｕｌｃｅｒ ｈｅａｌｉｎｇ： ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓｉａｌ ｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ．Ｇｕｔ ４９，４４３−４５３］。ラットにおける最近の研究によればＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２の選択的阻害は潰瘍誘発性はないものの、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の両方を複合的に阻害するとインドメタシンのようなＮＳＡＩＤの作用に匹敵するほどの胃および小腸の重度の傷害が誘発されることがわかった。この観察結果は胃腸粘膜の一体性の維持に対するＣＯＸ−２の重要な寄与を示唆するものである。
非ステロイド抗炎症剤による胃粘膜細胞におけるＰＧＥ ２ 合成の抑制
要約 − 本実施例はＮＳＡＩＤによるＡＧＳ胃細胞におけるＰＧＥ２合成の抑制はその観察される臨床的な胃刺激と相関することを示すものである。
薬品 − ロフェコキシブおよびセレコキシブを入手した。ジイソフルオロホスフェート（ＤＩＦＰ）、ニメンスリド、イブプロフェン、サリチル酸、アスピリン、インドメタシンおよびアセトアミノフェンはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より購入した。他の薬品は全て、実施例１に記載の供給元より入手した。
細胞 − Ａ５４９（ヒト肺上皮；ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−１８５）およびＡＧＳ細胞（ヒト胃粘膜；ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ−１７３９）はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）より入手し、供給元の取扱説明書に従って継代した。細胞は日常的には１０％ＦＢＳ、５０単位ペニシリン／ｍｌ、５０μｇストレプトマイシン／ｍｌ、５％ピルビン酸ナトリウムおよび５％Ｌ−グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０中５％ＣＯ２下３７℃で培養した。実験当日、指数生育期の細胞を採取し、血清非含有のＲＰＭＩ１６４０で洗浄した。
対数期のＡ５４９およびＡＧＳ細胞を９６穴の組織培養プレート中、ウェル当り０．２ｍｌ生育培地中、ウェル当り８ｘ１０４個でプレーティングした。Ａ５４９細胞における被験化合物によるＰＧＥ２抑制の測定のために、Ｗａｒｎｅｒ等の操作法、即ち、ＷＨＭＡ−ＣＯＸ−２プロトコル［Ｗａｒｎｅｒ，Ｔ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄ ｄｒｕｇ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１ ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｙ： ａ ｆｕｌｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ９６，７５６３−７５６８］に変更を加えることなく準じて行った。慨すればＡ５４９細胞のプレーティング後２４時間に、インターロイキン−１β（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加することによりＣＯＸ−２の発現を誘導した。２４時間後、細胞を血清非含有のＲＰＭＩ１６４０で洗浄し、ＤＭＳＯおよび血清非含有ＲＰＭＩ中に溶解した試験物質を終濃度２５、５．０、０．５および０．０５μｇ／ｍｌとなるようにウェルに添加した。各濃度は２連で行った。被験ウェルに含まれる量と等しい量のＤＭＳＯを対照ウェルに添加した。６０分後、Ａ２３１８７（５０μＭ）をウェルに添加することによりアラキドン酸を遊離させた。培地２５μＬを３０分後にウェルから採取し、ＰＧＥ２測定用とした。
非刺激ＡＧＳ細胞をこれ等の試験において使用した。９６穴マイクロプレートにプレーティングした２４時間後に、細胞を血清非含有ＲＰＭＩ１６４０で洗浄し、ＤＭＳＯおよび血清非含有ＲＰＭＩ１６４０に溶解した試験物質を終濃度２５、５．０、０．５および０．０５μｇ／ｍｌとなるようにウェルに添加した。各濃度は２連で行った。被験ウェルに含まれる量と等しい量のＤＭＳＯを対照ウェルに添加した。６０分後、アラキドン酸をウェルに添加して終濃度１００μＭとした。アラキドン酸添加後３０分に培地２５μＬをウェルから採取し、ＰＧＥ２測定用とした。
細胞の生存性 − 細胞の生存性は３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）系比色試験により試験した（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。ＰＧＥ２測定用の試料採取後にＭＴＴ溶液を直接ウェルに添加した。各ウェルの吸光度はＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて５８０ｎｍで読み取った。何れの化合物についても試験した最高濃度において毒性は観察されなかった。
計算 − ＰＧＥ２合成に関するメジアン阻害濃度（ＩＣ５０）はＣａｌｃｕＳｙｎ（ＢＩＯＳＯＦＴ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）を用いて計算した。この統計パッケージは参考として本明細書に援用されるＴ−Ｃ Ｃｈｏｕ ａｎｄ Ｐ．Ｔａｌａｌｙ［（１９８４）Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ： ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ ２２，２７−５５］の記載したメジアン有効法を用いた複数の薬剤の用量作用計算を行うものである
慨すれば、分析は最も単純な可能な式：ｆａ／ｆｕ＝（Ｃ／Ｃｍ）ｍにおいて「用量」と「作用」を相関付けるものであり、ここで式中、Ｃは化合物の濃度または用量であり、Ｃｍは薬効を示すメジアン有効用量である。Ｃｍはメジアン−作用プロットのｘ切片から求める。試験物質の濃度により影響を受ける部分がｆａであり、濃度に影響されない部分がｆｕ（ｆｕ＝１−ｆａ）である。指数ｍは用量−作用曲線のジグモイド度または形状を示すパラメーターである。これはメジアン−作用プロットの傾きにより推定される。
メジアン−作用プロットはｘ＝ｌｏｇ（Ｃ）ｖｓｙ＝ｌｏｇ（ｆａ／ｆｕ）のグラフであり、Ｃｈｏｕのメジアン−作用等式の対数型に基づく。メジアン−作用等式へのデータのフィットの良好度はメジアン−作用プロットの一次相関係数ｒにより表される。通常は、酵素または受容体系の実験データはｒ＞０．９６、組織培養ではｒ＞０．９０、そして動物系ではｒ＞０．８５となる。本明細書において報告する細胞系の試験においては、全ての一次相関係数は０．９０より大きくなった。実験は異なる３日に３回反復した。各用量における％抑制を３つの独立した実験にわたって平均し、報告したメジアン阻害濃度の計算に用いた。
結果 − 高度に特異的なＣＯＸ−２阻害剤のジイソフルオロホスフェートは１．１９μｇ／ｍｌのＡ５４９細胞におけるメジアン阻害濃度を示し、そして、２５μｇ／ｍｌの試験した最高濃度でＡＧＳ細胞のＰＧＥ２合成を抑制しなかった（表３）。選択的ＣＯＸ−２剤であるロフェコキシブおよびセレコキシブは、それぞれ２７倍および１４倍、非標的のＡＧＳ胃粘膜細胞よりも標的のＡ５４９細胞においてＰＧＥ２合成のより強力な阻害剤であった。この所見は低い胃腸毒性と合致してＣＯＸ−２選択性のみならず標的組織選択性も示している。別の新しい選択的ＣＯＸ−２阻害剤であるニメンスリドは両方の細胞株においてＰＧＥ２合成の抑制において等しく強力であった。ＣＯＸの未同定のアイソザイム（ＣＯＸ−３）を阻害し、低い胃腸毒性を有するとされている抗炎症剤アセトアミノフェンはＡ５４９細胞においてはＰＧＥ２生合成を抑制したが、ＡＧＳ胃粘膜細胞においてはＰＧＥ２合成に対して作用を有していなかった。
或は、そして明らかにされた臨床胃毒性と合致して、イブプロフェン、アスピリンおよびインドメタシンは全て標的Ａ５４９細胞よりもＡＧＳ細胞株においてＰＧＥ２合成のより強力な抑制を示した。胃刺激を殆ど伴うことなくＣＯＸ−２の発現を抑制する抗炎症剤であるサリチル酸は両方の細胞モデルにおいて不活性であった。
（表３ Ａ５４９およびＡＧＳ細胞株における被験化合物に関するメジアン阻害濃度）
Figure 2006508182
これ等の結果はＰＧＥ２の合成を抑制することができる抗炎症剤の潜在的胃腸毒性を評価するためのＡＧＳ胃粘膜細胞株の使用を有効化するものである。これらはまた、ＣＯＸ阻害化合物の作用における細胞特異性を明らかにしている。ＩＣ５０ＡＧＳ／ＩＣ５０Ａ５４９の比が１であることは、ＡＧＳ細胞とＡ５４９細胞の両方について同じであるＩＣ５０を示している。ＩＣ５０ＡＧＳ／ＩＣ５０Ａ５４９の比が１より大きいことは、ＰＧＥ２の抑制がＡＧＳ細胞で低値であることを示している。ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２抑制がより低いことは、ＡＧＳ細胞株が粘膜ホメオスタシスを維持するＣＯＸ−１をより高度に発現することから、好ましいことである。
ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ）化合物および誘導体による刺激および非刺激ネズミマクロファージにおけるＰＧＥ ２ 合成の抑制
要約 − 本実施例はネズミマクロファージモデルにおいてＰＧＥ２のＣＯＸ−１合成よりも優勢にＰＧＥ２のＣＯＸ−２合成を抑制するホップ画分および誘導体の力価を示すものである。
薬品および試薬 − 細菌リポ多糖類（ＬＰＳ；Ｂ Ｅ．ｃｏｌｉ０５５：Ｂ５）はＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手した。ホップ画分（１）アルファホップ（１％アルファ酸；ＡＡ）、（２）アロマホップＯＥ（１０％ベータ酸および２％異性化アルファ酸）、（３）イソホップ（異性化アルファ酸；ＩＡＡ）、（４）ベータ酸溶液（ベータ酸ＢＡ）、（５）ヘキサホップゴールド（ヘキサヒドロ異性化アルファ酸；ＨＨＩＡＡ）、（６）レジホップ（還元異性化アルファ酸；ＲＩＡＡ）、（７）テトラホップ（テトラヒドロ−イソ−アルファ酸ＴＨＩＡＡ）および（８）使用済みホップはＢｅｔａｔｅｃｈ Ｈｏｐｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ＵＳＡ）より入手した。使用済みホップは無水エタノール等量を用いて２回抽出した。エタノールは濃厚な茶色の残留物のみが残存するまで４０℃で加熱することにより除去した。この残留物をＤＭＳＯに溶解してＲＡＷ２６４．７細胞の試験用とした。特段の記載がない限り、全ての標準試薬はＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手し、最高純度の市販品を用いた。他の薬品および装置は全て実施例１および２に記載したものと同様である。
細胞培養 − Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｃａｔａｌｏｇ＃ＴＩＢ−７１，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）より入手したＲＡＷ２６４．７細胞はダルベッコの変性イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）中で生育させ、対数期に維持した。ＤＭＥＭ生育培地は熱不活性化ＦＢＳ５０ｍｌおよびペニシリン／ストレプトマイシン５ｍｌをＤＭＥＭの５００ｍｌビンに添加し、４℃で保存することにより作成した。生育培地は使用前にウォーターバスで３７℃に加温した。
実験当日、対数期のＲＡＷ２６４．７細胞を午前中に９６穴組織培養プレート中ウェル当り０．２ｍｌの生育培地中、ウェル当り８ｘ１０４個でプレーティングした。第１日の終了時（プレーティング後６〜８時間）に、各ウェルから生育培地１００μｌを取り出し、１００μＬの新しい培地と交換した。
ＲＡＷ２６４．７細胞においてＣＯＸ−２の発現を誘導するために使用したＬＰＳの１．０ｍｇ／ｍｌ保存溶液は、ＤＭＳＯ１ｍＬ中にＬＰＳ１．０ｍｇを溶解することにより製造した。これを溶解するまで混合し４℃で保存した。これは使用前に室温で、または、３７℃のウォーターバスで溶融させた。
実験の第２日に試験物質をＤＭＳＯ中１０００Ｘ保存溶液として調製した。１．７ｍｌのマイクロ遠沈管中、ＦＢＳを含有しないＤＭＥＭ１ｍｌを試験濃度０．０５、０．１０、０．５および１．０μｇ／ｍｌとなるように添加した。試験物質の１０００ＸＤＭＳＯ保存溶液２μＬをＦＢＳを含有しない培地１ｍｌに添加した。試験管は２倍濃縮された試験物質の終濃度を有しており、試験管は３７℃で平衡となるように１０分間インキュベーター中に入れた。
ＣＯＸ−２関連ＰＧＥ２合成については、第１日に調製した細胞プレートの各ウェルから培地１００μｌを取り出し、１００μｌの平衡化した２Ｘ終濃度の被験化合物と交換した。次に細胞を９０分間インキュベートした。ＬＰＳ２０μＬを刺激すべき細胞の各ウェルに添加し、終濃度を１μｇＬＰＳ／ｍｌとし、そして細胞を４時間インキュベートした。細胞を更に１５分間５μＭアラキドン酸と共にインキュベートした。各ウェルの上澄み培地２５μｌを清潔なマイクロ遠沈管に移して培地へのＰＧＥ２放出の測定に付した。
ＬＰＳ刺激の後に、細胞の外観を観察し、実施例２に記載の通り生存性を測定した。何れの化合物についても、試験した最高濃度において毒性は観察されなかった。各ウェルの上澄み培地２５μｌを清潔なマイクロ遠沈管に移して培地へのＰＧＥ２放出の測定に付した。実施例１に記載の通りＰＧＥ２を測定して報告した。
ＣＯＸ−１関連ＰＧＥ２合成については、第１日に調製した細胞プレートの各ウェルから培地１００μｌを取り出し、１００μｌの平衡化した２Ｘ終濃度の被験化合物と交換した。次に細胞を９０分間インキュベートした。次に、ＬＰＳ刺激の代わりに、細胞を１５分間１００μＭアラキドン酸と共にインキュベートした。各ウェルの上澄み培地２５μｌを清潔なマイクロ遠沈管に移して培地へのＰＧＥ２放出の測定に付した。細胞の外観を観察し、実施例２に記載の通り生存性を測定した。何れの化合物についても、試験した最高濃度において毒性は観察されなかった。各ウェルの上澄み培地２５μｌを清潔なマイクロ遠沈管に移して培地へのＰＧＥ２放出の測定に付した。実施例１に記載の通りＰＧＥ２を測定して報告した。ＣＯＸ−２およびＣＯＸ−１の両方のＰＧＥ２合成に関するメジアン阻害濃度（ＩＣ５０）を実施例２に記載の通り計算した。
（表４ ホップ画分および誘導体によるＲＡＷ２６４．７細胞におけるＣＯＸ−２およびＣＯＸ−１の阻害）
Figure 2006508182
表４から明らかなとおり、全てのホップ画分および誘導体は本標的マクロファージモデルにおいてＣＯＸ−１よりもＣＯＸ−２を選択的に阻害した。このことは新しく、予測できなかった所見である。ホップ誘導体ＩＡＡおよびＲＩＡＡのＣＯＸ−２選択性の程度である、それぞれ１４４および８７倍は、予測できないものであった。低いメジアン阻害濃度と組み合わせられたこのように高いＣＯＸ−２選択性は他の原料から得た天然産物についてはこれまで報告されていない。
ホップ化合物および誘導体は直接のシクロオキシゲナーゼ酵素阻害剤ではない。
要約 − 本実施例はホップ化合物および誘導体はＷＨＭＡ−ＣＯＸ−２プロトコルを用いて試験した場合に生理学的に妥当な濃度においてＡ５４９肺上皮細胞におけるＰＧＥ２合成を抑制しないことを示している。
薬品 − 本実施例において使用したホップおよびホップ誘導体は実施例３において前述したものである。他の全ての薬品は実施例１および２に記載した供給元から入手した。
細胞 − Ａ５４９（ヒト肺上皮）細胞はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）より入手し、供給元の取扱説明書に従って継代した。細胞は日常的には１０％ＦＢＳ、５０単位ペニシリン／ｍｌ、５０μｇストレプトマイシン／ｍｌ、５％ピルビン酸ナトリウムおよび５％Ｌ−グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０中５％ＣＯ２下３７℃で培養した。実験当日、指数生育期の細胞を採取し、血清非含有のＲＰＭＩ１６４０で洗浄した。
対数期のＡ５４９細胞を９６穴の組織培養プレート中、ウェル当り０．２ｍｌ生育培地中、ウェル当り８ｘ１０４個でプレーティングした。被験化合物によるＰＧＥ２抑制の測定のために、Ｗａｒｎｅｒ等の操作法、［（１９９９）Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄ ｄｒｕｇ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１ ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｙ： ａ ｆｕｌｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ９６，７５６３−７５６８］、即ち、ＷＨＭＡ−ＣＯＸ−２プロトコルに変更を加えることなく準じて行った。慨すればＡ５４９細胞のプレーティング後２４時間に、インターロイキン−１β（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加することによりＣＯＸ−２の発現を誘導した。２４時間後、細胞を血清非含有のＲＰＭＩ１６４０で洗浄し、ＤＭＳＯおよび血清非含有ＲＰＭＩ中に溶解した試験物質を終濃度２５、５．０、０．５および０．０５μｇ／ｍｌとなるようにウェルに添加した。各濃度は２連で行った。被験ウェルに含まれる量と等しい量のＤＭＳＯを対照ウェルに添加した。６０分後、Ａ２３１８７（５０μＭ）をウェルに添加することによりアラキドン酸を遊離させた。培地２５μＬを３０分後にウェルから採取し、ＰＧＥ２測定用とした。
細胞の生存性は実施例２において前述したとおり評価した。何れの化合物についても試験した最高濃度において毒性は観察されなかった。実施例１において前述したとおり、上澄み培地中のＰＧＥ２を測定して報告した。
ＰＧＥ２合成に関するメジアン阻害濃度（ＩＣ５０）は実施例２において前述したとおり計算した。
結果 − 試験した用量において、実験プロトコルはホップの抽出物または誘導体の何れのメジアン有効濃度を捕獲することができなかった。プロトコルは被験化合物の添加の前にＣＯＸ−２の発現の刺激を必要とするため、試験物質がＰＧＥ２合成を抑制できないことに対する可能な回答は、その作用機序がＣＯＸ−２のアイソザイムの発現を抑制し、活性を直接抑制するわけではないという点である。一部の直接の抑制がＷＨＭＡ−ＣＯＸ−２プロトコルを用いて観察される場合があるが、この操作法はホップ化合物またはホップ化合物の誘導体の抗炎症特性を評価する場合には不適切である。
ホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ）化合物および誘導体による胃粘膜細胞におけるＰＧＥ ２ 合成の抑制の欠如
要約 − 本実施例はホップ画分による、そして、ＡＧＳヒト胃粘膜細胞株における、ＰＧＥ２ 抑制の欠如を示し、これ等の化合物の低い胃刺激性を示唆するものである。
薬品および試薬は実施例３に記載の通り使用した。ＡＧＳ細胞は実施例２に記載の通り成育させ、ホップ化合物および誘導体の試験のために使用した。ＰＧＥ２は実施例１において前述した通り測定して報告した。ＡＧＳ細胞からのＰＧＥ２合成に対するメジアン阻害濃度（ＩＣ５０）は実施例２に記載の通り計算した。
（表５ ホップ画分および誘導体によるＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２抑制の欠如）
Figure 2006508182
表５から明らかなとおり、全てのホップ画分および誘導体はＡＧＳ胃粘膜細胞株において試験した最高濃度において５０％以上ＰＧＥ２合成を抑制することができなかった。標的マクロファージにおいてこれ等の画分により示された抗炎症力価に基づけば、これは新しく意外な所見であった。
ローズマリー抽出物およびローズマリー中に存在する化合物によるＰＧＥ ２ 合成の抑制
要約 − 本実施例は標的細胞中のローズマリーの抽出物およびローズマリー中に一般的に存在する化合物、カルノシン酸、ウルソール酸およびオレアノール酸の抗炎症作用および胃腸細胞におけるＰＧＥ２合成に対するローズマリー抽出物およびオレアノール酸の作用を示すものである。
使用した装置、薬品、細胞の取り扱い方およびメジアン阻害濃度の計算は実施例１、２および３において前述したとおりである。カルノシン酸、ウルソール酸およびオレアノール酸はＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手した。ローズマリー抽出物は合衆国規制法（２１ＣＦＲ１０１−２２）に合致した平均値（９５％±３％ローズマリー抽出物）までＲｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓの選択された葉から得られたヘキサン抽出物である。抽出物が最低１１％のフェノール性ジテルペン（カルノシン酸、カルノソール、メチルカルノセート、ロセマジアール、ロセマリン酸よりなる）、４．９％のカルノシン酸、および最低７．６％のカルノソール＋カルノシン酸の合計を含有することはＨＰＬＣ分析により測定した。カルノシン酸はＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より購入し、オレアノール酸（８０％）はＳａｂｉｎｓａ（１２１Ｅｔｈｅｌ Ｒｏａｄ Ｗｅｓｔ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）より入手した。
（表６ ローズマリー抽出物、カルノシン酸、ウルソール酸およびオレアノール酸によるＲＡＷ２６４．７およびＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２の抑制）
Figure 2006508182
†はＰＧＥ２のＣＯＸ−２またはＣＯＸ−１合成に対するそれぞれの阻害剤作用を推定するために使用した細胞株を示す。全ての場合において、ＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７細胞を用いてＣＯＸ−２媒介ＰＧＥ２合成のメジアン阻害濃度を求めた。ＣＯＸ−１媒介合成に対する試験物質の作用の推定のためには、非刺激ＲＡＷ２６４．７または非刺激ＡＧＳ細胞の何れかを使用した。
結果 − 全ての試験物質は、ＣＯＸ−２のアイソザイムの阻害を示す、ＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＰＧＥ２合成の強力な抑制を示していた（表６）。意外にも、ローズマリー抽出物はウルソール酸およびオレアノール酸よりも強力であり、純粋なカルノシン酸とは力価において等しく、０．５μｇ試験物質／ｍｌ培地のメジアン阻害濃度を有していた。ローズマリー抽出物はカルノシン酸または誘導体を僅か１１％しか含有していないため、カルノシン酸誘導体またはローズマリー抽出物中の多数の他の成分の相互作用が調和または相乗作用してＣＯＸ−２の強力な抑制をもたらしたと考えられる。或は、ローズマリー中に以前から発見されておりより早期に列挙されていた化合物の１つがＰＧＥ２のＣＯＸ−２媒介合成を抑制するための極めて高い力価を有している。
非刺激ＲＡＷ２６４．７細胞において、純粋な化合物は相対的に不活性であり、カルノシン、ウルソールおよびオレアノール酸でそれぞれ２３１、３３および１９μｇ／ｍｌのＩＣ５０値を示していた。このことはＲＡＷ２６４．７標的細胞モデルにおいてＰＧＥ２合成についてはＣＯＸ−１よりもＣＯＸ−２の阻害が強力に優先されることを示している。ＣＯＸアイソザイムの選択性がこの程度であることは文献に記載されておらず、予測されない結果であった。しかしながらＡＧＳ胃粘膜細胞株においてはローズマリーの抽出物およびオレアノール酸の両方ともＰＧＥ２合成の強力な抑制を示した。
トリテルペノイドオレアノール酸およびウルソール酸と組み合わせたホップＣＯ ２ 抽出物による標的細胞におけるＰＧＥ ２ 合成の相乗作用的抑制
使用した装置、薬品、細胞の取り扱い方およびメジアン阻害濃度の計算は実施例１、２および３において前述したとおりである。ホップＣＯ２抽出物はＨｏｐｕｎｉｏｎ（Ｙａｋａｍａ，ＷＡ）から入手したものであり、３０〜６０％アルファ酸および１５〜４５％ベータ酸を含有していた。オレアノール酸およびウルソール酸はＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手したものであり、最高純度の市販品であった（＞９８％）。
試験成分の相乗作用は組み合わせ指数（ＣＩ）のパラメーターを用いて定量した。Ｃｈｏｕ−ＴａｌａｌｙのＣＩは複数の薬剤−作用に基づいており、そして酵素の速度モデルから誘導される（Ｃｈｏｕ，Ｔ．−Ｃ．ａｎｄ Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．（１９７７）Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｅｎ ｋｉｎｅｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６４３８−６４４２）。等式は相乗作用または拮抗性よりはむしろ相加作用のみを求めるものである。しかしながら、本発明者等は、相乗作用は予測される付加的作用より大きいものとして、そして拮抗作用は予測される付加的作用より小さいものとして、Ｃｈｏ ａｎｄ Ｔａｌａｌａｙの提案どおりに定義している。ＣＩ＝１の表記を付加的作用として使用した場合、同じ作用様式を有する相互に排他的な化合物について、または完全に独立した作用様式を有する相互に非排他的な薬剤について、以下の関係、即ち、それぞれ相乗作用、相加作用および拮抗作用を示すＣＩ＜１，＝１および＞１が得られる。
結果 − ＲＡＷ２６４．７細胞において試験した４：１（ＣＯ２抽出：トリテルペノイド）の組み合わせは用量−応答曲線の全体に渡って強力な相乗作用を示した。ＩＣ５０、ＩＣ７５およびＩＣ９０において両方の試験物質に対して計算した組み合わせ指数を表７に示す。本実施例に記載するとおり、これ等の組み合わせの相乗作用は組み合わせの各成分の０．００１〜５０μｇ／ｍｌの濃度範囲をカバーしていた。
（表７ ホップのＣＯ２抽出物およびトリテルペン類オレアノール酸およびウルソール酸の１：４組成物の用量−応答曲線の計算された組み合わせ指数）
Figure 2006508182
標的および非標的細胞におけるローズマリーの抽出物とのホップの組み合わせによるＰＧＥ ２ 合成の相乗作用的抑制
要約 − 本実施例は標的Ａ５４９細胞に対する還元異性化アルファ酸およびローズマリー抽出物の組み合わせの相乗作用およびＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２合成のローズマリー抑制の相乗的拮抗作用を示す。
使用した装置、薬品、細胞の取り扱い方およびメジアン阻害濃度の計算は実施例１、２、３および４において前述したとおりである。Ａ５４９細胞における試験のプロトコルにおける幾つかの相違が本実施例に含まれる。第１に試験物質はＩＬ−１βによる刺激の６０分前に培地に添加した。第２に用量−応答曲線を求める際には、カルシウムイオノフォアＡ２３１８７の変わりに５μＭアラキドン酸を使用した。組み合わせの相乗作用は実施例７に記載したとおり計算した。
結果 − 表８はＩＬ−１β刺激Ａ５４９細胞における還元異性化アルファ酸、ローズマリー抽出物および還元異性化アルファ酸およびローズマリー抽出物の２：１組み合わせによるＰＧＥ２抑制を示す。本細胞株は抗炎症薬効に関するモデル標的細胞となる。還元異性化アルファ酸およびローズマリー抽出物の独立したメジアン阻害濃度はそれぞれ０．８４および１．３μｇ／ｍｌであった。還元異性化アルファ酸およびローズマリー抽出物の２：１組み合わせは組み合わせのメジアン阻害濃度以下で相乗作用を示した。
表９はヒト胃ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２合成の抑制を示す。これ等の細胞はプロスタグランジン抑制剤の胃腸毒性に関するモデルとなる。これ等の細胞においてＰＧＥ２合成の抑制を示す試験物質は長期使用の場合には胃刺激性および潰瘍形成性を示すと予測される。ローズマリー抽出物によるＰＧＥ２合成の抑制は還元異性化アルファ酸とローズマリー抽出物の２：１組み合わせにより相乗作用的に拮抗された。この予測できなかった結果は相乗作用的拮抗作用の新しい所見である。
（表８ ＩＬ−１β刺激Ａ５４９細胞における還元異性化アルファ酸、ローズマリー抽出物および異性化アルファ酸およびローズマリー抽出物の組み合わせによるＰＧＥ２抑制についてのメジアン阻害濃度ならびに組み合わせ指数）
Figure 2006508182
†組み合わせ指数はＩＣ５０値以下の用量−応答曲線の部分に渡り１未満であり、これ等の濃度における組み合わせによるＰＧＥ２合成の相乗作用的抑制が示されている。
（表９ ＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２抑制の低減をもたらすローズマリー抽出物との還元異性化アルファ酸の１：１組み合わせの相乗作用）
Figure 2006508182
†組み合わせ指数は用量−応答曲線の全体に渡り１より大きく、組み合わせによるＰＧＥ２阻害の相乗作用的拮抗作用が示されている。
本実施例はローズマリー抽出物とホップ誘導体の１つ、還元異性化アルファ酸の組み合わせのみを示しているが、２５μｇ／ｍｌもの高い用量においてＡＧＳ細胞でＰＧＥ２抑制をやはり示さない他のホップ誘導体でも同様の結果が予測されることは当業者の知るとおりである。これ等のホップ誘導体の例は異性化アルファ酸、ヘキサヒドロ異性化アルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸および使用済みホップの抽出物を包含する。
非標的細胞においてＰＧＥ ２ 合成に対する作用を有さない標的細胞における還元異性化アルファ酸およびオレアノール酸によるＰＧＥ ２ 合成の相乗作用的抑制
要約 − 本実施例は還元異性化アルファ酸が標的Ａ５４９細胞でＰＧＥ２合成の抑制においてトリテルペンオレアノール酸と強力な相乗作用を示し、そして胃細胞でのＰＧＥ２合成のオレアノール酸抑制には相乗作用的に拮抗することを示す。
使用した装置、薬品、細胞の取り扱い方およびメジアン阻害濃度の計算は実施例１、２、３および４において前述したとおりである。Ａ５４９細胞における試験のプロトコルにおける幾つかの相違が本実施例に含まれる。第１に試験物質はＩＬ−１βによる刺激の６０分前に培地に添加した。第２に用量−応答曲線を求める場合に、試験物質の存在下に一夜Ａ５４９細胞を維持した後に培地を採取してＰＧＥ２の測定に付した。組み合わせの相乗作用は実施例７に記載の通り計算した。還元異性化アルファ酸はＪｏｈｎ Ｈａａｓ，Ｉｎｃ．（Ｙａｋｉｍａ，ＷＡ）から１％水溶液として入手し、オレアノール酸はＳａｂｉｎｓａ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）から入手し、８０％純度であった。組み合わせの相乗作用は実施例７に記載の通り計算した。
結果 − 表１０はＡ５４９細胞におけるオレアノール酸、還元異性化アルファ酸および還元異性化アルファ酸とオレアノール酸の種々の組み合わせによるＰＧＥ２抑制を示す。この細胞株は抗炎症薬効に関するモデル標的細胞となる。還元異性化アルファ酸およびオレアノール酸の独立したメジアン阻害濃度はそれぞれ０．０３および０．３９μｇ／ｍｌであった。１０：１、５：１および１：５よりなる還元異性化アルファ酸とオレアノール酸の組み合わせはそれぞれ、０．１１、０．３８および０．７６μｇ／ｍｌの複合濃度において用量−応答曲線に対して相乗作用を示した。即ち、２種の成分の合計が０．１１、０．３８および０．７６μｇ／ｍｌ以下である場合、ＰＧＥ２合成を抑制するこれ等の能力はその個々の活性の合計より高値であった。
（表１０ ＩＬ−１β刺激Ａ５４９細胞における還元異性化アルファ酸、オレアノール酸および異性化アルファ酸とオレアノール酸の４種の組み合わせによるＰＧＥ２抑制に関するメジアン阻害濃度および組み合わせ指数）
Figure 2006508182
†組み合わせ指数は表中の値における用量−応答曲線の部分に渡り１未満であり、これ等の濃度未満における組み合わせによるＰＧＥ２合成の相乗作用的抑制が示されている。
表１１はヒト胃ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２合成の抑制を示している。これ等の細胞はプロスタグランジン抑制剤の胃腸毒性に関するモデルとなる。これ等の細胞においてＰＧＥ２合成の抑制を示す試験物質は長期使用の場合には胃刺激性および潰瘍形成性を示すと予測される。オレアノール酸によるＰＧＥ２合成の抑制は還元異性化アルファ酸との全ての組み合わせにより相乗作用的に拮抗された。この予測できなかった結果は相乗作用的拮抗作用の新しい所見である。
（表１１ ＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２抑制の低減をもたらすオレアノール酸との還元異性化アルファ酸の相乗作用）
Figure 2006508182
†ＩＣ５０においてＣＩ＞１である場合、組み合わせはＡＧＳ細胞によるＰＧＥ２合成の抑制において拮抗作用を示すということができる。
本実施例はオレアノール酸とホップ誘導体の１つ、還元異性化アルファ酸の組み合わせのみを示しているが、２５μｇ／ｍｌもの高い用量においてＡＧＳ細胞でＰＧＥ２抑制をやはり示さない他のホップ誘導体でも同様の結果が予測されることは当業者の知るとおりである。これ等のホップ誘導体の例は異性化アルファ酸、ヘキサヒドロ異性化アルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸および使用済みホップの抽出物を包含する。
非標的細胞におけるＰＧＥ ２ 合成に対する作用を有ない標的細胞におけるトリプトアンスリンとの還元異性化アルファ酸の組み合わせによるＰＧＥ ２ 合成の相乗作用的抑制
要約 − 本実施例は標的Ａ５４９細胞に対する還元異性化アルファ酸とトリプトアンスリンの１：１組み合わせの強力な相乗作用、および、ＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２合成のトリプトアンスリンの抑制の相乗作用的拮抗作用を示す。
使用した装置、薬品、細胞の取り扱い方およびメジアン阻害濃度の計算は実施例１、２、３、４および９において前述したとおりである。還元異性化アルファ酸はＪｏｈｎ Ｈａａｓ，Ｉｎｃ．（Ｙａｋｉｍａ，ＷＡ）から１％水溶液として入手し、トリプトアンスリンはＷａｃｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＶＡ）から入手し、最高純度の市販品であった。Ａ５４９細胞における試験のプロトコルにおける幾つかの相違が本実施例に含まれる。第１に試験物質はＩＬ−１βによる刺激の６０分前に培地に添加した。第２に用量−応答曲線を求める場合に、試験物質の存在下に一夜Ａ５４９細胞を維持した後に培地を採取してＰＧＥ２の測定に付した。組み合わせの相乗作用は実施例７に記載の通り計算した。
結果 − 表１２はＩＬ−１βで刺激したＡ５４９細胞における還元異性化アルファ酸、トリプトアンスリンおよび還元異性化アルファ酸とトリプトアンスリンの１：１組み合わせによるＰＧＥ２抑制を示す。この細胞株は抗炎症薬効に関するモデル標的細胞となる。還元異性化アルファ酸およびトリプトアンスリンの独立したメジアン阻害濃度はそれぞれ０．０２８および０．３０μｇ／ｍｌであった。還元異性化アルファ酸とトリプトアンスリンの１：１組み合わせは用量−応答曲線の全体に渡り相乗作用を示した。
表１３はヒト胃ＡＧＳ細胞におけるＰＧＥ２合成の抑制を示している、これ等の細胞はプロスタグランジン抑制剤の胃腸毒性に関するモデルとなる。これ等の細胞においてＰＧＥ２合成の抑制を示す試験物質は長期使用の場合には胃刺激性および潰瘍形成性を示すと予測される。トリプトアンスリンによるＰＧＥ２合成の抑制は還元異性化アルファ酸とのトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートの１：１の組み合わせにより相乗作用的に拮抗された。この予測できなかった結果は相乗作用的拮抗作用の新しい所見である。
（表１２ ＩＬ−１β刺激Ａ５４９細胞における還元異性化アルファ酸、トリプトアンスリンおよび異性化アルファ酸とトリプトアンスリンの組み合わせによるＰＧＥ２抑制に関するメジアン阻害濃度および組み合わせ指数）
Figure 2006508182
†組み合わせ指数は用量−応答曲線の全体に渡り１未満であり、組み合わせによるＰＧＥ２合成の相乗作用的抑制が示されている。
（表１３ ＡＧＳ胃粘膜細胞におけるＰＧＥ２抑制の低減をもたらすトリプトアンスリンとの還元異性化アルファ酸の組み合わせの相乗作用）
Figure 2006508182
†組み合わせ指数は用量−応答曲線の全体に渡り１より大きく、組み合わせによるＰＧＥ２阻害の相乗作用的拮抗作用が示されている。
本実施例はトリプトアンスリンとホップ誘導体の１つ、還元異性化アルファ酸の組み合わせのみを示しているが、２５μｇ／ｍｌもの高い用量においてＡＧＳ細胞でＰＧＥ２抑制をやはり示さない他のホップ誘導体でも同様の結果が予測されることは当業者の知るとおりである。これ等のホップ誘導体の例は異性化アルファ酸、ヘキサヒドロ異性化アルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸および使用済みホップの抽出物を包含する。
ホップ誘導体、ローズマリー抽出物およびオレアノール酸を含有する組み合わせを投与したヒトから採取した血漿試料によるＰＧＥ ２ 合成のエクスビボ抑制
要約 − 本実施例は還元異性化アルファ酸、ローズマリー抽出物およびオレアノール酸の５：５：１組み合わせを５日間一日当たり３回摂取した後のヒト対象におけるＰＧＥ２抑制物質の存在を示すものである。
使用した装置、薬品、ＲＡＷ２６４．７細胞の取り扱い方およびＰＧＥ２濃度の計算は実施例１、２および３において前述したとおりである。還元異性化アルファ酸、ローズマリー抽出物およびオレアノール酸はそれぞれ実施例３、６および７に記載の通りのものである。ゲルキャップは還元異性化アルファ酸２００ｍｇ、ローズマリー２００ｍｇおよびオレアノール酸４０ｍgを油性基剤中に含有するように製造した。血漿試料は５日間１日３カプセルを消費する前および５日後にヒトボランティアから採取した。カプセルは１日に渡りほぼ８時間間隔で服用した。第５日に最後のカプセルの服用の１時間前および投与の１、２、４および７時間後に採血した。血漿試料における全てのＰＧＥ２試験は８連で行った。除外例は、知覚した除外例を除いて計算した群平均から数値が３標準偏差を超えていた場合に該当するものとし、除外した。除外例を含む、または含まない生データをグラフ化した。パーセントＰＧＥ２抑制に関する血漿中の試験物質の濃度は市販の血漿（Ｇｉｂｃｏ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）と組み合わせた標準曲線を用いて推定した。
図７［Ａ］は所定時点における血漿試料によるＰＧＥ２合成の抑制を示す。投与後最初の１時間の間にはＰＧＥ２抑制の９〜３倍増大が観察された。試験物質の有効半減期（半分までＰＧＥ２合成を抑制する能力を低減するための時間）は約４時間であった。
ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＰＧＥ２合成の観察されたパーセント抑制に関する試験物質の推定値を図７［Ｂ］に示す。除外例を除外したデータのみを用いた場合、最初の１時間には試験物質濃度の１２．５倍増加が観察された。８８０ｎｇ／ｍｌ血漿の最大濃度は投与後１時間および２時間の両方に観察された。濃度の半減期は約２．２時間であった。有効半減期と濃度半減期との間の一貫性の欠如は製剤の成分の相乗効果によるものと考えられる。薬効は、本出願の実施例において明らかにされている通り、異性化アルファ酸、ローズマリー抽出物中の多くの成分およびオレアノール酸の間の陽性および相乗作用的な相互作用により延長される。
外傷後の関節機能の正常化
食餌栄養補給剤としての好ましい実施形態の代表的組成物は経口製剤、即ち、錠剤またはゲルキャップであり、これは以下の組み合わせの１つ、即ち、０．１〜１０ｍｇイソフムロン／ｋｇ／日；０．０１〜１０ｍｇジヒドロアドフムロン／ｋｇ／日；０．０１〜１０ｍｇテトラヒドロイソコフムロン／ｋｇ／日；０．０１〜１０ｍｇヘキサヒドロ−イソフムロン／ｋｇ／日を７０ｋｇのヒトに対して供給するものである。
練習運動または反復運動ストレスによる身体的外傷の後の関節の運動の正常化は２〜１０投薬の後に起こると期待される。この結果は全ての動物において期待される。
外傷後の関節機能の正常化
食餌栄養補給剤としての好ましい実施形態の代表的組成物は経口製剤、即ち、錠剤またはゲルキャップであり、これは以下の組み合わせの１つを、即ち：
１７ｍｇ還元異性化アルファ酸／ｋｇ／日、１７ｍｇローズマリー抽出物／ｋｇ／日、および、１７ｍｇウルソール酸／ｋｇ／日；
１７ｍｇ還元異性化アルファ酸／ｋｇ／日、１７ｍｇローズマリー抽出物／ｋｇ／日、および、３．４ｍｇウルソール酸／ｋｇ／日；
３４ｍｇ還元異性化アルファ酸／ｋｇ／日、３４ｍｇローズマリー抽出物／ｋｇ／日、および、３．４ｍｇウルソール酸／ｋｇ／日；
３４０ｍｇ還元異性化アルファ酸／ｋｇ／日、３４０ｍｇローズマリー抽出物／ｋｇ／日、および、３．４ｍｇウルソール酸／ｋｇ／日；
１７ｍｇ還元異性化アルファ酸／ｋｇ／日、１７ｍｇローズマリー抽出物／ｋｇ／日、および、８５ｍｇウルソール酸／ｋｇ／日；
１７ｍｇ還元異性化アルファ酸／ｋｇ／日、１７ｍｇローズマリー抽出物／ｋｇ／日、および、１７０ｍｇウルソール酸／ｋｇ／日；または、
１７ｍｇ還元異性化アルファ酸／ｋｇ／日、１７ｍｇローズマリー抽出物／ｋｇ／日、および、１７００ｍｇウルソール酸／ｋｇ／日；
を７０ｋｇのヒトに対して供給するものである。
練習運動または反復運動ストレスによる身体的外傷の後の関節の運動の正常化は２〜１０投薬の後に起こると期待される。この結果は全ての動物において期待される。
しゅさ性挫瘡の治療におけるローション製剤の臨床有効性
以下：
１．異性化アルファ酸イソフムロン０．１重量％；
２．還元異性化アルファ酸ジヒドロアドフムロン０．１重量％；
３．テトラヒドロイソアルファ酸テトラヒドロイソコフムロン０．１重量％；
または、
４．ヘキサヒドロイソフムロン０．１重量％、
の１つを含むように設計されたローションを担当医診断でしゅさ性挫瘡を示しており、そして、独立した広範に認可された皮膚科医師により確認されている患者の患部に適用する。
自己評価試験を試験の１週間前に実施し、罹患した表面積および赤色度を定量する。更に同様の変数を患者の治療状態を知らない専門臨床職員により評点させる。これ等の評価は第０日、７日、１４日および２１日に反復する。
患者は試験開始時に被験製剤またはプラセボに無作為に割り付ける。被験処方およびプラセボは一日当たり１回または２回、患部に適用する。糖尿病、高血圧等のような健康状態の処置は試験中可能とする。評点は被験製剤とプラセボとの間で、４回の観察期間の各々について比較する。ローション製剤の好ましい実施形態の組成物で治療した患者は、各評価カテゴリ内の試験前評点から２０％を超えて患者の評点が改善した場合に改善したとみなす。改善を示す人間の比率を複合製剤およびプラセボ対照との間で比較する。２群間の差は、真である場合に帰無仮説が棄却される確率が５％未満である場合に統計学的に有意とみなす。
しゅさ性挫瘡の治療におけるローション製剤の臨床有効性
以下：
１．アルファ酸フムロン０．１重量％；
２．異性化アルファ酸イソフムロン０．１重量％；
３．還元異性化アルファ酸ジヒドロアドフムロン０．１重量％；
４．テトラヒドロイソアルファ酸テトラヒドロイソコフムロン０．１重量％；
または、
５．ヘキサヒドロイソアルファ酸ヘキサヒドロイソフムロン０．１重量％、
の１つを含むように設計されたローションを担当医診断でしゅさ性挫瘡を示しており、そして、独立した広範に認可された皮膚科医師により確認されている患者の患部に適用する。
自己評価試験を試験の１週間前に実施し、罹患した表面積および赤色度を定量する。更に同様の変数を患者の治療状態を知らない専門臨床職員により評点させる。これ等の評価は第０日、７日、１４日および２１日に反復する。
患者は試験開始時に被験製剤またはプラセボに無作為に割り付ける。被験処方およびプラセボは一日当たり１回または２回、患部に適用する。糖尿病、高血圧等のような健康状態の処置は試験中可能とする。評点は被験製剤とプラセボとの間で、４回の観察期間の各々について比較する。ローション製剤の好ましい実施形態の組成物で治療した患者は、各評価カテゴリ内の試験前評点から２０％を超えて患者の評点が改善した場合に改善したとみなす。改善を示す人間の比率を複合製剤およびプラセボ対照との間で比較する。２群間の差は、真である場合に帰無仮説が棄却される確率が５％未満である場合に統計学的に有意とみなす。
しゅさ性挫瘡の治療におけるローション製剤の臨床有効性
以下：
１．アルファ酸フムロン０．１重量％および０．１％トリプトアンスリン；
２．異性化アルファ酸イソフムロン０．１重量％および０．１％トリプトアンスリン；
３．還元異性化アルファ酸ジヒドロアドフムロン０．１重量％および０．１％トリプトアンスリン；
４．テトラヒドロイソアルファ酸テトラヒドロイソコフムロン０．１重量％および０．１％トリプトアンスリン；
または、
５．ヘキサヒドロイソアルファ酸ヘキサヒドロイソフムロン０．１重量％および０．１％トリプトアンスリン、
の１つを含むように設計されたローションを担当医診断でしゅさ性挫瘡を示しており、そして、独立した広範に認可された皮膚科医師により確認されている患者の患部に適用する。
自己評価試験を試験の１週間前に実施し、罹患した表面積および赤色度を定量する。更に同様の変数を患者の治療状態を知らない専門臨床職員により評点させる。これ等の評価は第０日、７日、１４日および２１日に反復する。
患者は試験開始時に被験製剤またはプラセボに無作為に割り付ける。被験処方およびプラセボは一日当たり１回または２回、患部に適用する。糖尿病、高血圧等のような健康状態の処置は試験中可能とする。評点は被験製剤とプラセボとの間で、４回の観察期間の各々について統計学的に比較する。ローション製剤の好ましい実施形態の組成物で治療した患者は、各評価カテゴリ内の試験前評点から２０％を超えて患者の評点が改善した場合に改善したとみなす。改善を示す人間の比率を複合製剤およびプラセボ対照との間で比較する。２群間の差は、真である場合に帰無仮説が棄却される確率が５％未満である場合に統計学的に有意とみなす。
乾癬の治療におけるローション製剤の臨床有効性
本実施例は、担当医診断で乾癬を示しており、そして、独立した広範に認可された皮膚科医師により確認された患者の患部に組成物を適用する意外は、実施例１４、１５および１６に記載の方法と同様にして実施する。自己評価試験を試験の１週間前に実施し、罹患した表面積および皮膚状態を定量する。更に同様の変数を患者の治療状態を知らない専門臨床職員により評点させる。これ等の評価は第０日、７日、３０日および６０日に反復する。
患者は試験開始時に被験製剤またはプラセボに無作為に割り付ける。被験処方およびプラセボは一日当たり１回または２回、患部に適用する。糖尿病、高血圧等のような健康状態の処置は試験中可能とする。評点は被験製剤とプラセボとの間で、４回の観察期間の各々について統計学的に比較する。試験ローション製剤の好ましい実施形態の組成物で治療した患者は、各評価カテゴリ内の試験前評点から２０％を超えて患者の評点が改善した場合に改善したとみなす。改善を示す人間の比率を被験製剤およびプラセボ対照との間で比較する。２群間の差は、真である場合に帰無仮説が棄却される確率が５％未満である場合に統計学的に有意とみなす。
アルツハイマー病の治療における製剤の臨床有効性
実施例１２および１３に記載した経口製剤を担当医診断でアルツハイマー病（ＡＤ）の早期を顕在化しており、そして、独立した広範に認可された神経科医師により確認された患者に投与する。臨床治験の２週間前に、患者には、Ｍｉｎｉ Ｍｅｎｔａｌ Ｓｔａｔｕｓ Ｅｘａｍ（ＭＭＳＥ）、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｓｃａｌｅ（ＡＤＡＳ）、Ｂｏｓｔｏｎ Ｎａｍｉｎｇ Ｔｅｓｔ（ＢＮＴ）およびＴｏｋｅｎ Ｔｅｓｔ（ＴＴ）のような適切な精神神経学的試験を受けさせる。神経性神学的試験は臨床治験の第０日、６週および３ヶ月に反復する。試験は患者の治療計画を知らない神経精神科の医師により実施する。
患者は試験開始時に被験製剤またはプラセボに無作為に割り付ける。被験製剤およびプラセボは一日当たり１回または２回服用する。糖尿病、高血圧等のような健康状態の処置は試験中可能とする。評点は被験製剤とプラセボとの間で、３回の観察期間の各々について統計学的に比較する。治療を行わない場合、ＡＤの本来の経過は臨床治験の過程中に試験評点として顕著に悪化する。被験製剤としての好ましい実施形態の組成物で治療された患者は、臨床治験の過程中に患者の評点が不変または改善した場合に改善したとみなす。
結腸癌の治療および予防における経口製剤
実施例１２および１３に記載した経口製剤を、担当医診断で結腸癌の早期を顕在化しており、そして、独立した広範に認可された癌科医師により確認された患者に投与する。
患者は試験開始時に被験製剤またはプラセボに無作為に割り付ける。被験製剤およびプラセボは一日当たり１回または２回服用する。糖尿病、高血圧等のような健康状態の処置は試験中可能とする。内視鏡的評価を１ヶ月、２ヶ月、６ヶ月および１２ヶ月に行う。４回のフォローアップ来院の何れか１回の間に腫瘍の再出現の証拠があれば治療は失敗とみなす。治療失敗の比率を被験製剤とプラセボ対照との間で比較する。記載した実験条件下において、試験物質は対照群と比較して腫瘍の発生率を低下させることが期待される。２群間の差は、真である場合に帰無仮説が棄却される確率が５％未満である場合に統計学的に有意とみなす。
過敏性腸症候群の治療のための経口製剤
実施例１２および１３に記載した経口製剤を、担当医診断で過敏性腸症候群を顕在化している患者に投与する。正常な腸機能は４８時間以内に回復する。
骨関節炎における関節の機能の正常化
実施例１２および１３に記載した組成物を用いると、骨関節炎による関節のこわばりの正常化が５〜２０投薬の後に、グルコサミンまたは硫酸コンドロイチンの有無に関わらず起こる。更にまた、組成物は伝統的な非ステロイド抗炎症剤とは異なりこれ等の２種のプロテオグリカン成分の正常な関節再建作用を妨害しない。
Ａ５４９肺細胞においてダニアレルゲンはＰＧＥ ２ 生合成を活性化する。
要約 − 本実施例は肺上皮細胞におけるＰＧＥ２生合成をダニハウスダストアレルゲンが誘導する場合があることを示している。
背景
アレルゲンに対する感受性は漸増する消費者にとって問題となっている。この課題は過去数年間に渡る喘息の驚くべき増大と複合化している。喘息患者は空気中のアレルゲンに対して特に敏感である。アレルギーの比率が増大していることも知られている。これによりアレルギー症状の原因および関連する不快感を低減する方法が益々注目されている。集団の約１０％が種々の環境的原因から生じる抗原への曝露により過敏化（アレルギー化）される。即時および/または遅延型の過敏化を誘導するこれ等の抗原はアレルゲンとして知られている。これ等には草類、樹木、雑草、動物の外皮、昆虫、食品、薬品および化学物質が含まれる。個体の遺伝的素因が枯草熱、喘息および蕁麻疹のような症状を呈するアトピーおよびアナフィラキシーのような即時型アレルギー応答の発生において役割を果たしていると考えられている。
多くのアレルゲンが蛋白系の分子であり、これ等の蛋白アレルゲンは多くの原料から発生する。かなりの間、家屋内の大部分の一般的なアレルゲン原料のうちの１つはダストダニであると考えられていた。当然ながら全てのアレルゲンの場合と同様、特定の人間のみがダストダニのアレルゲンに対してアレルギー性となる。しかしながら、このグループの人間は多くの地域、特に高温多湿地域において極めて多数となり得る。例えば、一年の大半が高温多湿である合衆国南東部においては、一般的集団におけるハウスダストダニアレルギーの発生率は２５％もの高値であり得る。ハウスダストダニはフラシカーペット、過剰充填されたクッション類、ベッドクッションなどに生息している。
方法
ダニダストアレルゲンの単離 − コナヒョウダニ（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ ｆａｒｉｎａｅ）はアメリカのハウスダストダニである。Ｄ．ｆａｒｉｎａｅをＰｕｒｉｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｈｏｗ（Ｒａｌｓｔｏｎ Ｐｕｒｉｎａ，Ｃｏ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）およびＦｌｅｉｓｃｈｍａｎｎ顆粒化乾燥コウボ（Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｂｒａｎｄｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）の１：１比上、室温湿度７５％で培養した。生存ダニを培地から移行する際に培養容器から吸引し、凍結して死滅させ、乾燥し、０％湿度で保存した。ダニダストのアレルギー性成分を周囲温度の水で抽出した。５００ｍｇのダニ粉末を１５ｍｌ容の円錐型遠沈管（ＶＷＲ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）中水５ｍｌに添加し（１：１０ｗ／ｖ）、１分間振とうし、周囲温度で一夜放置した。翌日水層を０．２μｍの使い捨てシリンジフィルター（Ｎａｌｇｅｎｅ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）を用いて濾過した。濾液をダニダストアレルゲンと命名し、Ａ５４９肺上皮細胞においてＰＧＥ２生合成の誘導を調べる試験に用いた。
細胞培養および処理 − 本実験ではヒト気道上皮細胞株Ａ５４９（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）を用いた。実施例２において前記したとおり細胞を培養して処理した。ダニアレルゲンは終濃度１０００ｎｇ／ｍｌとなるように培地に添加した。２４時間後、培地を採取してＰＧＥ２濃度を調べた。
ＰＧＥ２試験 − 培地中のＰＧＥ２の測定は実施例１において前記したとおり実施した。
統計学的分析 − 処理当り８連の平均をＥｘｃｅｌ（登録商標）スプレッドシート（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）を用いて計算した。
結果
ダニアレルゲンの処理により、溶媒処理対照と比較してＡ５４９細胞においてＰＧＥ２生合成が６倍増大した（図８）。
ホップ誘導体はＡ５４９肺細胞におけるＰＧＥ ２ 生合成のダニダストアレルゲン活性化を抑制する。
要約 − 本実施例はホップ誘導体がＡ５４９肺細胞におけるダニダストアレルゲンのＰＧＥ２刺激作用を抑制できることを示す。
方法
細胞株および試験の操作法は実施例２２に記載したとおりである。ダニダストアレルゲン以外に、試験物質にはホップ画分（１）アルファホップ（１％アルファ酸；ＡＡ）、（２）アロマホップＯＥ（１０％ベータ酸および２％異性化アルファ酸）、（３）イソホップ（異性化アルファ酸；ＩＡＡ）、（４）ベータ酸溶液（ベータ酸ＢＡ）、（５）ヘキサホップゴールド（ヘキサヒドロ異性化アルファ酸；ＨＨＩＡＡ）、（６）レジホップ（還元異性化アルファ酸；ＲＩＡＡ）、（７）テトラホップ（テトラヒドロ−イソ−アルファ酸ＴＨＩＡＡ）が含まれていた。終濃度１０μｇ／ｍｌの試験物質をダニダストアレルゲンの添加の６０分前に添加した。
結果
表１５はダニダストアレルゲンで刺激したＡ５４９肺細胞におけるホップ誘導体によるＰＧＥ２生合成の抑制の程度を示す。全てのホップ誘導体はダニダストアレルゲンの刺激作用を有意に抑制することができた。
（表１５ ダニダストアレルゲンにより刺激されたＡ５４９肺上皮細胞におけるホップ誘導体によるＰＧＥ２抑制）
Figure 2006508182
結論として、ＣＯＸ−２の発現を抑制し、標的細胞において選択的にプロスタグランジン合成を抑制し、または、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制する化合物の天然の製剤を発見するために有用である。
好ましい実施形態はホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ）から単離または誘導された画分少なくとも１つを含有する組成物を含む。ホップから単離または誘導された画分の例はアルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップである。ホップから単離または誘導された画分の好ましい化合物は、例えば、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい化合物はまた、ハロゲン、エーテルおよびエステルのような置換基を担持することができる。
別の実施形態はトリプトアンスリンおよびそのコンジュゲートを含有する組成物を含む。
別の実施形態は成分の組み合わせに関する。１つの実施形態は、第１の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、および、第２の成分としてローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．）、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、および、トリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物に関する。別の実施形態は第１の成分としてトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲート、および、第２の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、ローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物およびトリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物に関する。
ＮＦ−κＢに対する修飾ホップ成分の作用
前述したとおり、ＮＦ−κＢ、即ち蛋白ｐ５０およびＲｅｌＡのヘテロ二量体は広範に発現され哺乳類細胞における炎症および免疫応答のような複数の生物学的応答を調節する際に重要な役割を果たしている誘導性の真核細胞ＤＮＡ結合蛋白複合体である。ＮＦ−κＢの標的にはＩＬ−２、ＩＬ−２受容体および肝の急性期の蛋白が包含される。免疫応答におけるその役割のほかに、ＮＦ−κＢの活性化はＴＮＦおよびＦａｓへのアポトーシス応答を圧倒することにより、代わりに増殖を可能とする。ＮＦ−κＢは不活性である場合には原形質性であり、そこでＩκＢにより維持されている。図９に示すとおり、種々の刺激がＩＫＫ（ＩκＢキナーゼ）の活性化をもたらし、これがＩκＢをホスホリル化し、ユビキチン化および分解のためにこれをマーキングする。ＩκＢが分解すると、ＮＦ−κＢは自由に転写を開始できる。遺伝子の転写活性化の後、ＮＦ−κＢもまた急速に分解する。
活性化または非分解のＮＦ−κＢを検出する能力は時間の関数である。細胞のサイトカイン刺激の後、活性化されたＮＦ−κＢは３０分以内に検出され得る。数時間以内に、活性化されたＮＦ−κＢは分解され、非活性化の複合体化ＮＦ−κＢのみが残存する。本実施例においては、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、ガンマ−インターフェロン（ＩＦＮ）およびＴＮＦαの３価の刺激の２４時間後に全細胞のＮＦ−κＢを測定した。この時点までに、活性化ＮＦ−κＢは分解し、非活性化の結合ＮＦ−κＢのみが残存する。ＩｋＢ阻害剤は溶解緩衝液で除去し、ＮＦ−κＢはＮＦ−κＢ応答エレメントを含有するｄｓＤＮＳで捕獲後に酵素イムノアッセイにより定量する。ＮＦ−κＢの活性化を抑制する化合物または混合物はサイトカインおよび試験物質で処理された細胞溶解物中のＮＦ−κＢ関連発色の増大をもたらすものとして発見できる。ＮＦ−κＢは哺乳類細胞において炎症性および免疫性の応答の両方を調節する際、並びに、癌細胞の成育およびＨＩＶ−１のような種々のウィルスの複製の増大に寄与する際において重要な役割を果たすため、ＮＦ−κＢの活性化または機能を損なう薬剤の開発は重要な治療上の用途を有する。
方法
薬品 − ＮＦ−κＢＥＩＡキットはＡｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）より入手した。熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ−ＨＩ、Ｃａｔ．＃３５−０１１ＣＶ）およびダルベッコの変性イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｃａｔ．＃１０−０１３ＣＶ）はＭｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）より購入した。還元異性化アルファ酸（ＲＩＡＡ）はＪｏｈｎ Ｉ．Ｈａａｓ，Ｉｎｃ．Ｙａｋｉｍａ，ＷＡから入手した。インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、ガンマ−インターフェロン（ＩＦＮ）、ＴＮＦα、ビタミンＤ３（ＶＤ３）および全ての標準試薬はＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手し、最高純度の市販品を用いた。
細胞培養および細胞の処理 − ヒト単球細胞株Ｕ９７３をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）より入手し、供給元の取扱説明書に従って継代した。細胞は日常的には１０％ＦＢＳ、５０単位ペニシリン／ｍｌ、５０μｇストレプトマイシン／ｍｌ、５％ピルビン酸ナトリウムおよび５％Ｌ−グルタミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含有するＲＰＭＩ１６４０（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｌｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中５％ＣＯ２下３７℃で培養した。実験に際しては、Ｕ９３７細胞を被験薬剤の処理前の２４時間湿潤インキュベーター中５％ＣＯ２下３７℃で６ウェルプレート中で培養した。ジメチルスルホキシド中ＲＩＡＡ（１０μＬ）を細胞に添加して終濃度を１０μｇＲＩＡＡ／ｍｌとし、その６０分後にＶＤ３（１００ｎＭ）またはＶＤ３とサイトカインの混合物（２５ｎｇＩＬ−１β、１５０ｎｇＩＦＮ、および２０ｎｇＴＮＦα／ｍｌ）で刺激した。２４時間後、細胞を洗浄し、ＴｒａｎｓＡＭ ＮＦκＢＣｈｅｍｉキットと共に供給された試薬を用いて細胞溶解した。
蛋白試験 − 細胞溶解物の蛋白濃度は製造元により供給された操作法に従って、ウシ血清アルブミンを標準物質（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＥ）として用いながら、ＮａｎｏＯｒａｎｇｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ Ｋｉｔを用いて測定した。蛍光はＰａｃｋａｒｄ ＰｌａｔｅＲｅａｄｅｒバージョン３．０のソフトウエアを用いながら、４８５ｎｍにセットした励起フィルター、５７０ｎｍにセットした発光フィルターと共にＰａｃｋａｒｄ ＦｌｕｏｒｏＣｏｕｎｔ，Ｍｏｄｅｌ ＢＦ１００００フロリメーターを用いて測定した。Ｐａｃｋａｒｄ ＰｌａｔｅＲｅａｄｅｒと共に提供されたＩ−Ｓｍａｒｔプログラムを用いて蛋白濃度を計算した。
ＮＦ−κＢ試験 − ＴｒａｎｓＡＭ ＮＦκＢＣｈｅｍｉキット（Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆｆ）を用いてＵ９３７細胞中の非分解ＮＦ−κＢｐ５０を検出した。製造元の取扱説明書に変更することなく準じた。Ｂｉｏ−ｔｅｋＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて４０５ｎｍの光学密度を記録した。ＮＦ−κＢはｍＯＤ４０５単位として定量し、表とした。
統計学的分析 − 処置当り４〜８連の平均および９５％信頼区間をＥｘｃｅｌ（登録商標）スプレッドシート（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）における標準的な統計書式を用いて計算した。
結果
サイトカインカクテルで刺激後２４時間後には、Ｕ９３７細胞における非分解ＮＦ−κＢの量は低下することが予測される。表１６に示す通り、対照群（３３０ｍＯＤ単位）およびＶＤ３処理群はサイトカインカクテルまたはＶＤ３＋サイトカインカクテルで刺激した細胞のほぼ２倍の量のＮＦ−κＢを含有していた。しかしながらＲＩＡＡを添加することによりＮＦ−κＢの活性化およびその後の分解が防止された（２８１ｖｓ１２２ｍＯＤ単位）。これは新しく、そして予測できなかった所見である。ＮＦ−κＢの活性化はＴＮＦおよびＦａｓへのアポトーシス応答を圧倒し、種々の障害を誘発し得ることから、ＮＦ−κＢの活性化がないことは好ましいことである。表１６に示す通り、ＲＩＡＡ単独のみではＮＦ−κＢ複合体の活性化は起こらなかった。従って、ＲＩＡＡのようなホップ成分または修飾ホップ成分は、これ等の成分がＮＦ−κＢを活性化せず、ＮＦ−κＢの活性化も防止しないため、ＮＦ−κＢの活性化に関連する疾患に影響することができる。
（表１６）
Figure 2006508182
†カッコ内の値は９５％信頼区間である。
結論として、ＮＦ−κＢをモジュレートする化合物の天然の製剤を発見することは有用である。このような製剤は広範な用途を有する。更に、ＣＯＸ−２の発現を抑制し、標的細胞において選択的にプロスタグランジン合成を抑制し、または、標的細胞において選択的に炎症応答を抑制する化合物の天然の製剤を発見することは有用である。
ＬＰＳ−刺激ＲＡＷ２６４．７細胞における還元異性化アルファ酸または異性化アルファ酸による直接のＰＧＥ ２ 抑制の欠如
本実施例はＡ２３１８７アラキドン酸放出を用いた後ＣＯＸ−２（シクロオキシゲナーゼ−２）誘導の試験を説明するものである。
本試験の目的はホップ誘導体ＲＩＡＡ（還元異性化アルファ酸）（レジホップ（ｒｈｏイソアルファ酸（ＲＩＡＡ）、２９．５〜３０．５％、＜０．２％イソアルファ酸）およびＩＡＡ（異性化アルファ酸）（イソホップ；イソアルファ酸（ＩＡＡ）、２９．５〜３０．５％）が炎症のＲＡＷ２６４．７細胞モデルにおいてＣＯＸ−２媒介のＰＧＥ２生合成の直接の抑制剤として独立して機能する能力を評価するためであった。
以下の方法および操作法を用いた。細胞培養および試験物質の処理 − ＲＡＷ２６４．７細胞（ＡＴＣＣ番号ＴＩＢ−７１）はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）より入手し、供給元の取扱説明書に従って継代した。試験の準備において、細胞は熱不活性化１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ−ＨＩ）およびペニシリン／ストレプトマイシンを添加したダルベッコの変性イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で生育させ、対数期に維持した後に実験セットアップに付した。実験第２日において、細胞をウェル当り２００μＬの生育培地の入った９６穴の組織培養プレート中、ウェル当り８ｘ１０４個となるようにプレーティングした。
５％ＣＯ２下３７℃で一晩インキュベートした後、生育培地を吸引し、ＦＢＳやペニシリン／ストレプトマイシンを添加しないＤＭＥＭ２００μＬと交換した。ＲＡＷ２６４．７細胞をリポ多糖類（ＬＰＳ）（１０ｎｇ／ｍｌ終濃度）で刺激し、一夜インキュベートしてＣＯＸ−２の発現を誘導した。ＬＰＳ刺激の１８時間後、試験物質を添加し、その６０分後、Ａ２３１８７を添加した。試験物質を２５０倍保存溶液としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解した。この２５０倍保存試験物質調製物の４μＬをＤＭＥＭ１ｍＬに添加し、この溶液２００μＬを試験物質の各用量について８ウェルに添加した。上澄みの培地を採取して３０分後にプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ ２）の測定に付した。メジアン阻害濃度は２つの独立した実験に渡る最低４濃度から計算した。組み合わせ指数（ＣＩ）は統計学的方法において以下に記載するとおり計算した。
表１７は実施した２つの独立した試験の各々で使用した試験物質を示す。
（表１７ ＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７細胞の投薬マトリックスとその後の試験物質投
与）
Figure 2006508182
ＰＧＥ２の測定 − ＰＧＥ２の定量のための市販の非放射線的な操作法を用いて（Ｃａｙｍｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）ＰＧＥ２を測定し、製造元の推奨する操作法を変更することなく使用した。要約すれば、上澄み培地５０μＬを適切な量のアセチルコリンエステラーゼ標識トレーサーおよびＰＧＥ２抗血清で稀釈し、１８時間室温でインキュベートした。その後、ＰＧＥ２試験マイクロタイタープレートのウェルを空にし、洗浄緩衝液で洗浄し；次にアセチルコリンエステラーゼに対する基質を含有する２００μＬのＥｌｌｍａｎ試薬を添加した。反応は１時間室温で緩徐な振とう器上で維持し、Ｂｉｏ−ｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｍｏｄｅｌ＃Ｅｌｘ８００，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）酵素結合免疫吸着試験（ＥＬＩＳＡ）プレートリーダーで４１５ｎｍの吸光度を測定した。本試験に関する製造元の仕様は試験内の変動係数＜１０％、ＰＧＤ２およびＰＧＦ２との交差反応性１％未満および１０〜１０００ｐｇｍＬ−１の範囲にわたる直線性となっている。ＰＧＥ２の濃度は、細胞１０５当たりのｐｇＰＧＥ２として測定した。
細胞の生存性 − 細胞の生存性はＰＧＥ２試験のための培地の採取の前またはその直後に細胞を顕微鏡観察することにより評価した。細胞の死滅は観察時に記録した。
以下の物質を使用し、記載された製造元により得た。細菌リポ多糖類（ＬＰＳ；Ｂ Ｅ．ｃｏｌｉ０５５：Ｂ５）をＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手した。プロスタグランジンＥ２モノクローナル抗体キットはＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）から購入した。熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ−ＨＩ、Ｃａｔ．＃３５−０１１ＣＶ）およびダルベッコの変性イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｃａｔ．＃１０−０１３ＣＶ）はＭｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）より購入した。特段の記載が無い限り、全ての標準試薬はＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手し、最高純度の市販品を用いた。試験物質にはＢｅｔａｔｅｃｈ Ｈｏｐｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）より入手したＲＩＡＡおよびＩＡＡが含まれた。
以下の統計学的方法を使用した。ＣａｌｃｕＳｙｎ（ＢＩＯＳＯＦＴ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）を使用しながら、９５％信頼区間でＰＧＥ２に関する用量応答曲線およびメジアン阻害濃度（ＩＣ５０）を最小４濃度（表１）を用いて計算した。この統計パッケージはＴ−Ｃ Ｃｈｏｕ ａｎｄ Ｐ．Ｔａｌａｌｙ、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ ２２，２７−５５（１９８４）の記載したメジアン有効法を用いた複数の薬剤の用量作用計算を行うものである。慨すれば、分析は最も単純な可能な式：ｆａ／ｆｕ＝（Ｃ／Ｃｍ）ｍにおいて「用量」と「作用」を相関付けるものであり、ここで式中、Ｃは化合物の濃度または用量であり、Ｃｍは薬効を示すメジアン有効用量である。Ｃｍはメジアン−作用プロットのｘ切片から求める。試験物質の濃度により影響を受ける部分がｆａであり、濃度に影響されない部分がｆｕ（ｆｕ＝１−ｆａ）である。指数ｍは用量−作用曲線のジグモイド度または形状を示すパラメーターである。これはメジアン−作用プロットの傾きにより推定される。
メジアン−作用プロットはｘ＝ｌｏｇ（Ｃ）ｖｓｙ＝ｌｏｇ（ｆａ／ｆｕ）のグラフであり、Ｃｈｏｕのメジアン−作用等式の対数型に基づく。メジアン−作用等式へのデータのフィットの良好度はメジアン−作用プロットの一次相関係数ｒにより表される。通常は、酵素または受容体系の実験データはｒ＞０．９６、組織培養ではｒ＞０．９０、そして動物系ではｒ＞０．８５となる。本明細書において報告する細胞系の試験においては、全ての一次相関係数は０．９０より大きくなった。最も頑健な結果を得るためには、実験は異なる３日において、最低３回反復する。各用量におけるパーセント阻害を３つの独立した実験にわたって平均し、報告されたメジアン阻害濃度を計算するために使用した。
試験成分の相乗作用は組み合わせ指数（ＣＩ）のパラメーターを用いて定量した。Ｃｈｏｕ−ＴａｌａｌｙのＣＩは複数の薬剤−作用に基づいており、そして酵素の速度モデルから誘導される（Ｃｈｏｕ，Ｔ．−Ｃ．ａｎｄ Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．（１９７７）Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｅｎ ｋｉｎｅｔｉｃ ｓｙｓｔｅｍ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６４３８−６４４２）。等式は相乗作用または拮抗性よりはむしろ相加作用のみを求めるものである。しかしながら、相乗作用はこの場合、予測される付加的作用より大きいものとして、そして拮抗作用は予測される付加的作用より小さいものとして、Ｃｈｏ ａｎｄ Ｔａｌａｌａｙの提案どおりに定義する。ＣＩ＝１の表記を付加的作用として使用した場合、同じ作用様式を有する相互に排他的な化合物について、または完全に独立した作用様式を有する相互に非排他的な薬剤について、以下の関係、即ち、それぞれ相乗作用、相加作用および拮抗作用を示すＣＩ＜１，＝１および＞１が得られる。
２種のデータの変換を適宜適用した。第１の変換は低被験用量のＰＧＥ２生産がＬＰＳ刺激対照のＰＧＥ２生産を超過した場合に、最低被験用量から得られた最高ＰＧＥ２生産からパーセント阻害を計算することであった。この方法はプレート全体にわたる応答の変動性および勾配について制御するものである。第２のデータ変換は等級付けされた用量において応答の変動について調節するものであった。ウェル間の歴史的変動を用いたモンテカルロシミュレーションによれば、用量−応答曲線は、４点用量−応答曲線において濃度当り２連でウェルを使用する場合には時間の僅か４０％のみ等級付けされると考えられる。即ちＩＣ５０の計算の前に濃度により応答を分類することは、応答が等級付けされないと考えられる状況において行った。
上記において概説したプロトコルを用いた場合、ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＬＰＳ刺激ＰＧＥ２生産は非刺激細胞と比較して１．４倍〜２．１倍の範囲であり、そしてＰＧＥ２試験用の培地の希釈度にある程度依存していた。アスピリン陽性対照に対して計算された８．７μｇ／ｍｌというＩＣ５０値（９５％ＣＬ（信頼限界）＝３．９〜１９）は１．４〜５０μｇ／ｍｌの範囲の直接ＣＯＸ−２阻害に関する報告されている数値（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：１１６９３−１１６９７（１９９４）；Ｗａｒｎｅｒ，Ｔ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄ ｄｒｕｇ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１ ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｙ：Ａ ｆｕｌｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ９６，７５６３−７５６８（１９９９））およびＡ５４９細胞株における３．２μｇ／ｍｌ（９５％ＣＬ＝０．５５〜１９）という以前の結果と合致していた。
ＲＡＷ２６４．７細胞をＬＰＳで刺激し、一夜インキュベートしてＣＯＸ−２発現を誘導した（図１０）。ＬＰＳ刺激１８時間後に、試験物質を添加し、その６０分後にＡ２３１８７を添加した。上澄み培地を採取して３０分後にプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ ２）の測定に付した。平均のＰＥＧ２ 抑制％は４濃度および２つの独立した実験に渡る最低８連のものから計算した（図１０）。
ＲＩＡＡおよびＩＡＡは両方ともＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７細胞において中等度の用量依存的ＰＧＥ ２阻害を示した（図１０）。試験物質の濃度の１０００倍上昇に渡り、ＲＩＡＡおよびＩＡＡについてそれぞれ僅か１４および１０パーセントの阻害増大しか観察されなかった。用量応答傾きが小さかったためＲＩＡＡ（３６ｍｇ／ｍｌ）およびＩＡＡ（＞１０００ｍｇ／ｍｌ）についてｍｇ／ｍｌ範囲のＩＣ５０値（表１８）となった。このように、用量の３対数単位に渡る小さな応答の変動は、この細胞系試験においてホップ誘導体の観察された抑制作用は細胞に対する二次的作用である可能性が高く、ＣＯＸの直接の阻害ではないことを示唆している。１つの可能性のある説明は、ホップ誘導体が細胞膜からのＡ２３１８７媒介アラキドン酸放出を妨害しているという点である。
ＲＡＷ２６４．７細胞をＬＰＳで刺激し、一夜インキュベートしてＣＯＸ−２発現を誘導した。ＬＰＳ刺激１８時間後に、試験物質を添加し、その６０分後にＡ２３１８７を添加した。上澄み培地を採取して３０分後にプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ ２）の測定に付した。メジアン阻害濃度は４濃度において２つの独立した実験に渡る最低８連のものから計算した（表１８）。
（表１８ 一夜ＬＰＳ刺激後に試験物質を添加した場合のＲＡＷ２６４．７細胞におけるＲＩＡＡ、ＩＡＡに関するメジアン阻害濃度）
Figure 2006508182
ＣＯＸ−２からのＰＧＥ２生合成を直接抑制する能力に関するＲＩＡＡおよびＩＡＡの試験の結果はＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７細胞において中等度の用量関連性のＰＧＥ２抑制を示したのみであった。用量応答傾きが小さかったためＲＩＡＡ（３６ｍｇ／ｍｌ）およびＩＡＡ（＞１０００ｍｇ／ｍｌ）についてｍｇ／ｍｌ範囲のＩＣ５０値となった。この細胞系試験においてホップ誘導体の観察された抑制作用は細胞に対する二次的作用である可能性が高く、ＣＯＸの直接の阻害ではないこと考えられる。１つの可能性のある説明は、ホップ誘導体が細胞膜からのＡ２３１８７媒介アラキドン酸放出を妨害しているという点である。
無細胞ＣＯＸ試験系におけるホップの活性の分析
本実施例はＣＯＸ酵素活性に対するホップの作用を説明するものである。
ＣＯＸ酵素活性に対するホップの作用は無細胞ＣＯＸ試験系において調べた。試験はＣａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＣＯＸ阻害剤スクリーニング試験キット（Ｃａｔａｌｏｇ＃５６０１３１；Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，；Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ ＭＩ）を用いて実施した。慨すれば、酵素を３７℃で１０分間阻害剤と共に予備インキュベートし、次にアラキドン酸を添加して反応を開始した。２分後、ＨＣｌを添加して反応を停止した。ＰＧＨ２が還元されてＰＧＡ２アルファとなり、次にこれを競合的酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）を用いて定量した。各濃度は２つの個別の反応で試験し、次にこれ等各々をＥＩＡ工程において２連で試験した。
ＣＯＸ酵素試験の結果を表１９に示す。これより明らかな通り、ＩＡＡおよびＲＩＡＡはＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の酵素活性の何れに対しても本質的に作用を有していなかった。これとは対照的に、ＣＯＸ阻害剤インドメタシンはＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の両方を阻害した。
（表１９ ＣＯＸ活性のＩＡＡおよびＲＩＡＡ抑制）
Figure 2006508182
これ等の結果はホップが有意なＣＯＸ酵素活性を有さないことを示している。従ってホップはＣＯＸ−２の発現濃度において作用すると考えられる。
ＮＳＡＩＤの相対的胃腸毒性を推定するための胃粘膜細胞モデル
本実施例は非ステロイド抗炎症剤の潜在的胃腸毒性を測定するための胃粘膜細胞株（ＡＧＳ細胞）の使用を説明するものである。
実施例１および２に記載したとおり、ＡＧＳ細胞は潜在的胃腸毒性を測定するためのモデル系となる。本試験の目的はＣＯＸ阻害化合物の相対的ＧＩ毒性（胃疾患）を推定するためのモデルとしてのＡＧＳヒト胃粘膜細胞株を更に特性化することであった。
ＡＧＳ細胞は本質的に実施例２に記載するとおり胃腸毒性に関わるモデルとして更に特性化した。慨すれば、試験に使用した薬品は以下の通り入手した。ロフェコキシブ錠剤およびセレコキシブカプセルの市販製剤を使用した。ＰＧＥ２ＥＩＡキットはＣａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）より入手した。抗ＣＯＸ−１および抗ＣＯＸ−２のウサギポリクローナル抗血清はＵｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）から入手し、そしてロバ抗ヤギＩｇＧ−ＨＲＰはＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）より購入した。熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ−ＨＩ、Ｃａｔ．＃３５−０１１ＣＶ）およびダルベッコの変性イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｃａｔ．＃１０−０１３ＣＶ）はＭｅｄｉａｔｅｃｈ（Ｈｅｒｎｄｏｎ，ＶＡ）より購入した。インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）および全ての標準試薬および非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）は特段の記載が無い限り、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より入手し、最高純度の市販品を用いた。
細胞培養に際しては、ヒト気道上皮細胞株Ａ５４９をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）より入手し、供給元の取扱説明書に従って継代した。細胞は日常的には１０％ＦＢＳ、５０単位ペニシリン／ｍｌ、５０μｇストレプトマイシン／ｍｌ、５％ピルビン酸ナトリウムおよび５％Ｌ−グルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０中５％ＣＯ２下３７℃で培養した。細胞の被験化合物での処置に際しては、Ｗｉｌｌｉａｍ Ｈａｒｖｅｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｓａｙ（ＷＨＭＡ）を変更せずに用いてＣＯＸ−２阻害剤を測定した［Ｗａｒｎｅｒ，ＴＤ，Ｇｉｕｌｉａｎｏ Ｆ，Ｖｏｊｎｏｖｉｃ Ｉ，Ｂｕｋａｓａ Ａ，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ ＪＡ，Ｖａｎｅ ＪＲ（１９９９）Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ ｄｒｕｇ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１ ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｙ：Ａ ｆｕｌｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ９６，７５６３−７５６８］。慨すれば、Ａ５４９細胞を２４時間ＩＬ−１βに曝露し、培地を除去し、ヒト血漿（１００μＬ）を被験薬剤またはＤＭＳＯベヒクルと共に添加した。初回の実験の場合は被験薬剤の濃度を２５、５、０．５および０．０５μｇ／ｍｌとした。ＤＭＳＯは各マイクロプレートウェル中２００μＬ容中１％未満とし；６０分後にＡ２３１８７（５０μＭ）を添加し；３０分後、培養上澄み培地５０μＬを採取し、即座に明細書記載の方法でＰＧＥ ２を測定した。ＡＧＳヒト胃粘膜細胞株（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）もまた培養し、推奨ＡＴＣＣ法に従って維持した。継代したＡＧＳ細胞を５０単位ペニシリン／ｍｌおよび５０μｇストレプトマイシン／ｍｌと共に２０％ＦＢＳを含有するＩＭＤＭ中に生育させ；細胞を対数期に維持した後に各実験に付した。ＰＧＥ２試験に際しては、ウェル当り約１０５個の細胞をウェル当り２００μＬの生育培地中、９６穴プレートにプレーティングした。細胞を８０％コンフルエントとなるまで生育させ、ＩＭＤＡ培地で３回洗浄した後に被験薬剤を添加した。ＮＳＡＩＤはＦＢＳやペニシリン／ストレプトマイシンを含有しないＩＭＤＡ培地２００μＬに添加した。試験物質添加の６０分後、アラキドン酸（ＡＡ）をカルシウムイオノフォアＡ２３１８７添加により誘導するか、ＤＭＳＯ中１００または５μＭＡＡで外因的に添加した。３７℃で更に３０分間インキュベートした。培地５０μＬを採取してＰＧＥ２測定に付した。
ＰＧＥ２の測定に際しては、ＰＧＥ２の定量のための市販の非放射線的な操作法を用いて（Ｃａｙｍｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）ＰＧＥ２を測定し、製造元の推奨する操作法を変更することなく使用した。慨すれば、上澄み培地５０μＬを、連続希釈したＰＧＥ２標準試料と共に、適切な量のアセチルコリンエステラーゼ標識トレーサーおよびＰＧＥ２抗血清と混合し、１８時間室温でインキュベートした。その後、ＰＧＥ２試験マイクロタイタープレートのウェルを空にし、洗浄緩衝液で洗浄し；次にアセチルコリンエステラーゼに対する基質を含有する２００μＬのＥｌｌｍａｎ試薬を添加した。反応は１時間室温で緩徐な振とう器上で維持し、Ｂｉｏ−ｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＥＬＩＳＡプレトリーダー（Ｍｏｄｅｌ＃Ｅｌｘ８００，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ）で４１５ｎｍの吸光度を測定した。本試験に関する製造元の仕様は試験内の変動係数＜１０％、ＰＧＤ２およびＰＧＦ ２αとの交差反応性１％未満および１０〜１０００ｐｇ／ｍＬの範囲にわたる直線性となっている。ＰＧＥ２の濃度は、細胞１０５当たりのｐｇＰＧＥ２として測定した。
試験の計算に際しては、３つの独立した実験に渡って濃度当り２連で各々最低４濃度を用いてＰＥＧ２生合成の抑制に関するメジアン阻害濃度（ＩＣ５０）およびその９５％信頼限界を計算した（ＣａｌｃｕＳｙｎ，ＢＩＯＳＯＦＴ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）。１００μＭＡＡではＡ５４９およびＡＧＳ細胞に対するサリチル酸およびアセトアミノフェンおよびＡＧＳ細胞に対するジイソプロピルフルオロホスフェート以外の全ての被験化合物について、測定の係数＞０．９を有する完全な用量−応答曲線が得られた。胃腸安全性に関する治療指数（ＴＩ）はｌｏｇ（ＡＧＳＩＣ５０／Ａ５４９ＩＣ５０）として計算した。ＴＩの計算において薬効（即ちＡ５４９におけるＰＧＥ２合成の抑制）の要素のためにはＩＣ ８０ を使用すべきことが推奨されているが、用量応答曲線の極値においては推定値に大きな誤差が伴う。即ち、これ等の推定値を用いる比においてより大きい不確実性が存在する。正のＴＩはＧＩ毒性の低い潜在性を示し、負のＴＩはＧＩ毒性のより高い潜在性を示す。Ｓｐｅａｒｍａｎの順位相関係数ｒＳを計算することにより、非標的細胞を用いた以前報告されたＴＩの順位とＡＧＳ／Ａ５４９モデルとの間の関連性の程度を定量した。パラメーターｒＳはまた、インビトロＴＩ順位と臨床的評価ＮＳＡＩＤの胃疾患の順位との間の関連性の程度を求めるためにも使用した。Ｉ型の誤りの確率は名目５％水準に設定した。
ＡＧＳヒト胃細胞株は２４時間湿潤インキュベーター中５％ＣＯ２下３７℃で６ウェルプレート中で培養した。細胞を溶解緩衝液中氷上において溶解させ、蛋白濃度を測定した。細胞溶解物５０μｇを可溶化し、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）含有１０％ポリアクリルアミドゲル上で分画した。イムノブロッティングに際しては、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２のウエスタンブロッティングはＰＡＧＥｒＴＭ Ｇｏｌｄ Ｐｒｅｃａｓｔ Ｇｅｌｓ（Ｂｉｏ Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＭＥ）を用いて実施した。蛋白約６０μｇを含有するＲＡＷ２６４．７細胞溶解物を３０μＬの総容量でウェル内にＬａｅｍｍｌｉ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒと共にロードした。使用した垂直ミニゲル電気泳動チャンバーはＳａｖａｎｔ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．（ＭＶ１２０型；Ｈａｌｂｒｏｏｋ，ＮＹ）製であった。ゲルは、ゲルの底部にブロモフェノールブルーの染色部が到達するまで、約１時間、室温で４０ｍＡ／プレート（一定電流）で泳動した。次にゲルを５００ｍＡおよび４℃で一夜、ポリビニルフロリド転移メンブレン（ＰＶＤＦ）（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）上にブロットした。使用した分子量マーカーは未染色の広範囲の精密蛋白標準（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）であった。ＢｉｏＷｅｓｔＴＭ長時間ケミルミネセント基質（ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｕｐｌａｎｄ，ＣＡ）、ウエスタンブロット検出用の非同位体セイヨウワサビパーオキシダーゼ基質キットを用いて蛋白を可視化した。ウエスタンブロットの画像はＵＶＰ Ｅｐｉ Ｃｈｅｍｉ ＩＩ Ｄａｒｋｒｏｏｍ（ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて獲得し、ＬａｂＷｏｒｋｓＴＭＩｍａｇｅ Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて分析し、増強した。バンドの強度は濃度計分析を介して評価し、ＳｃａｎＡｎａｌｙｓｉｓ（登録商標）ソフトウエア（ＢＩＯＳＯＦＴ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）を用いて計算し、任意の密度単位（ＤＵ）として記録した。
ＡＧＳ細胞株はＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の両方を構成的に発現し、ＣＯＸ−１の発現がＣＯＸ−２の発現よりもほぼ４倍高値であった（実施例１参照）。これ等の結果はＡＧＳ細胞株を用いた最近報告された研究（Ｆａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１ ｂｅｔａ ｉｎｄｕｃｅｓ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｈｅ ｐ３８ ａｎｄ ｐ４４／４２ ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ． Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ．１６：１０９８−１０４（２００１））と合致しており、そこでは両方のシクロオキシゲナーゼ酵素の構成的発現が明らかにされている。
表２０はＡ５４９およびＡＧＳ細胞モデルにおける選択ＮＳＡＩＤのＰＧＥ２生合成に関するメジアン阻害濃度（ＩＣ５０）を示す。
（表２０ Ａ５４９およびＡＧＳ細胞モデルにおける選択ＮＳＡＩＤのＰＧＥ２生合成に関するメジアン阻害濃度（ＩＣ５０）†）
Figure 2006508182
†カッコ内の値はＩＣ５０推定値の９５％信頼区間である。
††ＤＩＦＰ＝ジイソフルオロホスフェート
図１１はｌｏｇＩＣ５０比の比較および潜在的胃疾患の順位を示す。Ｗｉｌｌｉａｍ Ｈａｒｖｅｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｓａｙ（ＷＨＭＡ）を用いたｌｏｇＩＣ５０比は、ＷＨＭＡＣＯＸ−１／ＷＨＭＡＣＯＸ−２のＷａｒｎｅｒ等によるもの（Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄ ｄｒｕｇ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−１ ｒａｔｈｅｒ ｔｈａｎ ｃｙｃｌｏ−ｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｏｘｉｃｉｔｙ：Ａ ｆｕｌｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ９６，７５６３−７５６８（１９９９））（白棒グラフ）およびＭｉｔｃｈｅｌｌ等によるもの（Ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇｓ ａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ）で表される。Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：１１６９３−１１６９７（１９９４）（青棒グラフ）を図１１Ａに示し、Ａ２３１８７（図１１Ｂ），１００μＭアラキドン酸（図１１Ｃ）または５μＭアラキドン酸プロトコール（図１１Ｄ）で処理されたＡＧＳ細胞のｌｏｇＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＷＨＭＡＣＯＸ−２）も示した。０の右側の値は胃疾患の漸減する確率を示し、０の左側の値は胃疾患の漸増する確率を示す。
図１１に示されるとおり、以前に報告されたデータと３種のＡＧＳプロトコルとの間の関係を検討した。ｌｏｇ［ＩＣ５０比（ＷＨＭＡＣＯＸ−１／ＷＨＭＡＣＯＸ−２）］は公開されたデータ（図１１Ａ）から計算し、Ａ２３１８７（図１１Ｂ）、１００μＭアラキドン酸（図１１Ｃ）および５μＭアラキドン酸（図１１Ｄ）のプロトコルに関するｌｏｇ［ＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＷＨＭＡＣＯＸ−２）］と比較した。最低から最高のＧＩ毒性の潜在性を有する化合物の順位はモデルおよびＡＧＳプロトコルの間で明らかに同様であった。興味深いことに、ロフェコキシブとインドメタシンのみが全てのＡＧＳプロトコルにおいてそれぞれ最小および最大の潜在的ＧＩ毒性を示した。ＴＩの順位推定値は血小板（ＣＯＸ−１）およびＡ５４９細胞（ＣＯＸ−２）を用いて計算した順位ＴＩと同様であり、ｒ ＳはＡ２３１８７では０．９０３、ｐ＜０．０１；１００μＭＡＡでは０．７３３、ｐ＝０．０２；そして５μＭＡＡでは０．７７、ｐ＜０．０２であった。しかしながら定量的には、ＡＧＳ／Ａ５４９モデルは血小板／Ａ５４９モデルよりも低いＴＩを示した。Ａ２３１８７媒介ＡＡ放出、１００μＭＡＡ添加、および、５μＭＡＡ添加はそれぞれＮＳＡＩＤの胃疾患の臨床順位に有意に関連したＧＩ毒性の順位推定値をもたらした（ｒＳ＝０．９３３、ｐ＜０．０１；０．７８３、ｐ＜０．０１；０．６８３、ｐ＝０．０５）。ＧＩ毒性の最低から最高のＮＳＡＩＤのＡ２３１８７順位はロフェコキシブ＜アセトアミノフェン＜ニメンスリド＜セレコキシブ＜サリチル酸＜イブプロフェン＜アスピリン＜ナプロキセン＜インドメタシンであった。
実施例１に記載した通り、そして正常な胃粘膜細胞において観察された通り、ＡＧＳ細胞株はＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２を構成的に発現した。ＡＧＳおよびＡ５４９細胞の使用は血小板（ＣＯＸ−１）およびＡ５４９細胞を用いて計算した順位ＴＩと定性的には同様であるＴＩの順位推定値をもたらし、ｒＳはＡ２３１８７では０．９０３、ｐ＜０．０１；１００μＭＡＡでは０．７３３、ｐ＝０．０２；そして５μＭＡＡでは０．７７、ｐ＜０．０２であった。定量的には、ＡＧＳ／Ａ５４９モデルは血小板／Ａ５４９モデルよりも低いＴＩを示した。Ａ２３１８７媒介ＡＡ放出並びに１００μＭおよび５μＭのＡＡ添加のプロトコルはそれぞれｒＳ＝０．９３３、ｐ＜０．０１；０．７８３、ｐ＜０．０１；０．６８３、ｐ＝０．０５において、ＮＳＡＩＤの胃疾患の臨床順位に有意に関連したＧＩ毒性の順位推定値をもたらした。ＧＩ毒性の最低から最高のＮＳＡＩＤのＡ２３１８７順位はロフェコキシブ＜アセトアミノフェン＜ニメンスリド＜セレコキシブ＜サリチル酸＜イブプロフェン＜アスピリン＜ナプロキセン＜インドメタシンであった。
これ等の結果は更にＡＧＳヒト胃粘膜細胞株がＣＯＸ阻害化合物の胃腸作用を評価するためのモデルとして機能できることを示している。ＡＧＳ誘導データは胃のＰＧＥ２生合成の抑制がＮＳＡＩＤのヒト胃疾患の根底となっていることを示している。
好ましい実施形態はホップ（Ｈｕｍｕｌｕｓ ｌｕｐｕｌｕｓ）から単離または誘導された画分少なくとも１つを含有する組成物を含む。ホップから単離または誘導された画分の例はアルファ酸、イソアルファ酸、還元イソアルファ酸、テトラヒドロイソアルファ酸、ヘキサヒドロイソアルファ酸、ベータ酸および使用済みホップである。ホップから単離または誘導された画分の好ましい化合物は、例えば、フムロン、コフムロン、アドフムロン、イソフムロン、イソコフムロン、イソアドフムロン、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい化合物はまた、ハロゲン、エーテルおよびエステルのような置換基を担持することができる。
別の実施形態はトリプトアンスリンおよびそのコンジュゲートを含有する組成物を含む。
別の実施形態は成分の組み合わせに関する。１つの実施形態は、第１の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、および、第２の成分としてローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ．）、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物、トリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲート、および、トリプトアンスリンまたはそのコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバーの少なくとも１つを含む組成物に関する。別の実施形態は第１の成分としてトリプトアンスリンまたはそのコンジュゲート、および、第２の成分としてホップの抽出物から単離または誘導された活性成分、ローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物または化合物およびトリテルペン物質種またはその誘導体またはコンジュゲートよりなる群から選択されるメンバー少なくとも１つを含む組成物に関する。
当業者の知るとおり、自明の性質の種々の改変および変更が本発明の精神を外れることなく行われ、そしてこのような改変および変更の全ては添付の特許請求の範囲により定義される本発明の範囲内に属するものとみなす。このような改変および変化は例えばカプセル、錠剤、ローション、食品およびバー製品の製造工程並びにビタミン、薬草類、フレーバーおよび担体に作用するために添加される初歩的な成分を包含するが、これらに限定されない。他のこのような改変または変更は、上記した好ましい実施形態の組み合わせを含有する他の薬草または植物産品の使用を包含する。本明細書に記載した実施形態の多くの別の変更および多様化が上記範囲を外れることなく行えることは当業者の知るとおりである。本明細書に記載した特定の実施形態は単に例示のみのために示したものである。
図１はシクロオキシゲナーゼ−２の誘導およびシクロオキシゲナーゼ酵素によるプロスタグランジンおよび他のエイコサノイドへのアラキドン酸の代謝を説明するものである。非ステロイド抗炎症剤の作用はシクロオキシゲナーゼ酵素の直接の阻害による。 図２はホップから得ることができる画分および化合物の概説である。 図３は［Ａ］アルファ酸属（ＡＡ）および代表的な物質種のフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、コフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）およびアドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）；［Ｂ］イソアルファ酸属（ＩＡＡ）および代表的な物質種のイソフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、イソコフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）およびイソアドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）；［Ｃ］還元異性化イソアルファ酸属（ＲＩＡＡ）および代表的な物質種のジヒドロ−イソフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、ジヒドロ−イソコフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）およびジヒドロ−アドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）；［Ｄ］テトラ−ヒドロイソアルファ酸属（ＴＨＩＡＡ）および代表的な物質種のテトラ−ヒドロ−イソフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、テトラ−ヒドロ−イソコフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）およびテトラ−ヒドロ−アドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）；［Ｅ］およびヘキサ−ヒドロイソアルファ酸属（ＨＨＩＡＡ）および代表的な物質種のヘキサ−ヒドロ−イソフムロン（Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、ヘキサ−ヒドロ−イソコフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）２）およびヘキサ−ヒドロ−アドフムロン（Ｒ＝−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）を示す。 図４はトリプトアンスリンの化学構造を示す。 図５はトリテルペン属［Ａ］およびウルソール酸［Ｂ］およびオレアノール酸［Ｃ］のその属内の物質種としての一般的化学構造を示す。 図６［Ａ］はＡＧＳヒト胃粘膜細胞における構成的なＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の発現を示す代表的イムノブロットである。ＡＧＳヒト胃細胞株は２４時間湿潤インキュベーター中５％ＣＯ２下３７℃で６ウェルプレート中で培養した。細胞を溶解緩衝液中氷上において溶解させ、蛋白濃度を測定した。細胞溶解物５０μｇを可溶化し、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）含有１０％ポリアクリルアミドゲル上で分画し、ニトロセルロースメンブレンに転移させた。メンブレンをブロッキング緩衝液中でインキュベートし、次に室温で１時間それぞれの一次抗体と共にインキュベートした。一次抗体インキュベーションの後、ブロットをトリス緩衝食塩水で３回洗浄し、次に１時間二次抗体と共にインキュベートした。蛋白バンドを増強ケミルミネセンスを用いて可視化した。図６［Ｂ］は図６Ａに示したイムノブロットの濃度計分析を示す。バンドの強度は濃度計分析を介して評価し、ＳｃａｎＡｎａｌｙｓｉｓ（登録商標）ソフトウエア（ＢＩＯＳＯＦＴ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）を用いて計算し、任意の密度単位（ＤＵ）として記録した。 図７［Ａ］は被験ホップ誘導体製剤を８８０ｍｇｔ．ｉ．ｄ．投与されたヒトボランティアから得た血漿試料によるＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＰＧＥ２合成のパーセント抑制を示す。白い棒グラフは生データを示し、黒い棒グラフは例外（８複製物中２以下）を除外して計算した平均を示す。被験製剤のゲルカプセルは、還元された異性化α酸２００ｍｇ、ローズマリー抽出物２００ｍｇおよびオレアノール酸４０ｍｇを含む。図７［Ｂ］は一定５：５：１の成分比と仮定したＬＰＳ刺激ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＰＧＥ２合成を抑制することができる各投与後時間における試験物質の血漿中濃度の推定値である。 図８は２４時間処理したＡ５４９肺細胞におけるダニアレルゲンによるＰＧＥ２合成の誘導を示す。 図９はＮＦ−κＢの活性化の経路を示す。原形質内においてはＮＦ−κＢはＩκＢにより阻害される。上流の活性化シグナルはＩＫＫ（ＩκＢキナーゼ）によるＩκＢのホスホリル化を起こす場合がある。これがユビキチン系を介してＩκＢの分解をトリガーする。ＩκＢから遊離した後、遊離のＮＦ−κＢはその後核に転座し、転写を活性化する。 図１０は試験物質添加前に一夜ＬＰＳ刺激した後のＲＩＡＡ（斜線棒グラフ）およびＩＡＡ（白棒グラフ）で処理したＲＡＷ２６４．７細胞のＰＧＥ２合成の用量関連抑制を示す。 図１１はｌｏｇＩＣ５０比の比較および潜在的胃疾患の順位を示す。Ｗｉｌｌｉａｍ Ｈａｒｖｅｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｓａｙ（ＷＨＭＡ）を用いたｌｏｇＩＣ５０比を示す。ＷＨＭＡＣＯＸ−１／ＷＨＭＡＣＯＸ−２のＷａｒｎｅｒ等によるもの（白棒グラフ）およびＭｉｔｃｈｅｌｌ等によるもの（黒棒グラフ）を［Ａ］に示し、Ａ２３１８７［Ｂ］，１００μＭアラキドン酸［Ｃ］または５μＭアラキドン酸［Ｄ］を投与されたＡＧＳ細胞のｌｏｇＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＷＨＭＡＣＯＸ−２）も示した。０の右側の値は胃疾患の漸減する確率を示し、０の左側の値は胃疾患の漸増する確率を示す。 図１１はｌｏｇＩＣ５０比の比較および潜在的胃疾患の順位を示す。Ｗｉｌｌｉａｍ Ｈａｒｖｅｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｓａｙ（ＷＨＭＡ）を用いたｌｏｇＩＣ５０比を示す。ＷＨＭＡＣＯＸ−１／ＷＨＭＡＣＯＸ−２のＷａｒｎｅｒ等によるもの（白棒グラフ）およびＭｉｔｃｈｅｌｌ等によるもの（黒棒グラフ）を［Ａ］に示し、Ａ２３１８７［Ｂ］，１００μＭアラキドン酸［Ｃ］または５μＭアラキドン酸［Ｄ］を投与されたＡＧＳ細胞のｌｏｇＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＷＨＭＡＣＯＸ−２）も示した。０の右側の値は胃疾患の漸減する確率を示し、０の左側の値は胃疾患の漸増する確率を示す。 図１１はｌｏｇＩＣ５０比の比較および潜在的胃疾患の順位を示す。Ｗｉｌｌｉａｍ Ｈａｒｖｅｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｓａｙ（ＷＨＭＡ）を用いたｌｏｇＩＣ５０比を示す。ＷＨＭＡＣＯＸ−１／ＷＨＭＡＣＯＸ−２のＷａｒｎｅｒ等によるもの（白棒グラフ）およびＭｉｔｃｈｅｌｌ等によるもの（黒棒グラフ）を［Ａ］に示し、Ａ２３１８７［Ｂ］，１００μＭアラキドン酸［Ｃ］または５μＭアラキドン酸［Ｄ］を投与されたＡＧＳ細胞のｌｏｇＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＷＨＭＡＣＯＸ−２）も示した。０の右側の値は胃疾患の漸減する確率を示し、０の左側の値は胃疾患の漸増する確率を示す。 図１１はｌｏｇＩＣ５０比の比較および潜在的胃疾患の順位を示す。Ｗｉｌｌｉａｍ Ｈａｒｖｅｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ａｓｓａｙ（ＷＨＭＡ）を用いたｌｏｇＩＣ５０比を示す。ＷＨＭＡＣＯＸ−１／ＷＨＭＡＣＯＸ−２のＷａｒｎｅｒ等によるもの（白棒グラフ）およびＭｉｔｃｈｅｌｌ等によるもの（黒棒グラフ）を［Ａ］に示し、Ａ２３１８７［Ｂ］，１００μＭアラキドン酸［Ｃ］または５μＭアラキドン酸［Ｄ］を投与されたＡＧＳ細胞のｌｏｇＩＣ５０比（ＡＧＳ／ＷＨＭＡＣＯＸ−２）も示した。０の右側の値は胃疾患の漸減する確率を示し、０の左側の値は胃疾患の漸増する確率を示す。

Claims (20)

  1. 第１の成分としてホップから単離または誘導された画分；および第２の成分としてローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、およびトリテルペン物質種からなる群から選択されるメンバー少なくとも１つを含む、組成物。
  2. 前記ホップから単離または誘導された画分がＣＯ２で抽出される、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記ホップから単離または誘導された画分が、還元イソα酸である、請求項１に記載の組成物。
  4. 前記ホップから単離または誘導された画分が、ジヒドロイソフムロン、ジヒドロイソコフムロン、ジヒドロアドフムロン、テトラヒドロイソフムロン、テトラヒドロイソコフムロン、テトラヒドロアドフムロン、ヘキサヒドロイソフムロン、ヘキサヒドロイソコフムロンおよびヘキサヒドロアドフムロンからなる群から選択される化合物を含む、請求項１に記載の組成物。
  5. 前記第２の成分が、１，８−シネオール、１９−αヒドロキシウルソール酸、２−β−ヒドロキシオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルオレアノール酸、３−Ｏ−アセチルウルソール酸、６−メトキシ−ルテオリン−７−グルコシド、６−メトキシルテオリン、６−メトキシルオリン−７−グルコシド、メトキシルテオリン−７−メチルエーテル、７−エトキシ−ロスマノール、７−メトキシ−ロスマノール、α−アミリン、α−フムレン、α−ヒドロキシヒドロカフェー酸、α−ピネン、α−テルピネン、α−テルピネニルアセテート、α−テルピネオール、α−スジョン、アピゲニン、アピゲニン−７−グルコシド、クルクメン、ベンジルアルコール、β−アミレノン、β−アミリン、β−エレメン、β−ピネン、ベツリン、ベツリン酸、ボルネオール、ボルニル−アセテート、カフェー酸、カンフェン、カンファー、カルノシン酸、カルノゾール、カルバクロール、カルボン、カリオフィレン、カリオフィレン−オキシド、クロロゲン酸、ジオスメチン、ガンマ−テルピネン、ヘスペリジン、イソボルネオール、リモネン、ルテオリン、ルテオリン−３’−Ｏ−（３’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−（４’’−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオリン−３’−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニド、ルテオニン−７−グルコシド、メチル−オイゲノール、ミルセン、ネオクロロゲン酸、ネプチン、オクタン酸、オレアノール酸、ｐ−シメン、ピペリテノン、ロスマノール、ロスマリン酸、ロスマリシン、ロスマリジフェノール、ロセマリン酸、ロスマリノール、ロスマリキノン、サビネン、サビニルアセテート、サリシレート、サリチル酸−２−β−Ｄ−グルコシド、スクワレン、テルピネン−４−オール、テルピノレン、チモール、トランスアネトール、トランスカルベオール、ウルソール酸、ベルベノンおよびジンギベレンからなる群から選択されるローズマリーから誘導された化合物である、請求項１に記載の組成物。
  6. 前記第２の成分が１８−ａ−グリチルレチン酸、１８−β−グリチルレチン酸、２−ａ−３−ａ−ジヒドロオキシウルサ−１２−３ｎ−２８−オン酸、３−ａ−ヒドロキシウルソール酸、３−オキソ−ウルソール酸、ベツリン、ベツリン酸、セラストロール、エブリコン酸、フリエデリン、グリチルリチン、ギプソゲニン、オレアノール酸、オレアノール酸−３−アセテート、パキム酸、ピニコール酸、ソホラジオール、ソヤサポゲノールＡ，ソヤサポゲノールＢ、トリプテリン、トリプトフェノリド、ツムロース酸、ウルソール酸、ウルソール酸−３−アセテート、ウバオールおよびβ−シトステロールからなる群から選択されるトリテルペン物質種である、請求項１に記載の組成物。
  7. 前記組成物がホップから単離または誘導された画分約０．５〜１００００ｍｇを含む、請求項１に記載の組成物。
  8. 前記組成物が前記第２の成分約０．５〜５０００ｍｇを含み、該第２の成分がローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物およびローズマリーから誘導した化合物からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
  9. 前記組成物がトリテルペン物質種約０．０３５〜３５００ｍｇを含有し、前記第２の成分がトリテルペン物質種である、請求項１に記載の組成物。
  10. 前記組成物が前記第１の成分約０．００１〜１０重量％を含む、請求項１に記載の組成物。
  11. 前記組成物が、前記第２の成分約０．００１〜１０重量％を含む、請求項１に記載の組成物。
  12. 前記第１の成分：前記第２の成分の比が約１００：１〜約１：１００の範囲である請求項１に記載の組成物。
  13. 前記組成物が更に、薬学的に許容される担体を含む、請求項１に記載の組成物。
  14. 更にグルコサミンを含む、請求項１に記載の組成物。
  15. 細胞における炎症応答をモジュレートする方法であって、該方法は、ホップから単離または誘導された画分およびローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、およびトリテルペン物質種からなる群から選択される前記第２の成分を含む組成物に、細胞を接触させる工程を含む、方法。
  16. 前記組成物が更にグルコサミンを含む、請求項１５に記載の方法。
  17. 炎症の組織特異的活性化に関連した哺乳類における病理学的状態を治療または抑制するための組成物であって、該組成物はホップから単離または誘導された画分ならびにローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、およびトリテルペン物質種からなる群から選択される第２の成分を含む、組成物。
  18. 前記組成物がホップから単離または誘導された画分約０．５〜１００００ｍｇを含む、請求項１７に記載の組成物。
  19. 前記組成物がホップから単離または誘導された画分約０．００１〜１０重量％を含む、請求項１７に記載の組成物。
  20. 前記組成物が第２の成分とは異なる第３の成分を更に含み、該第３の成分はローズマリー、ローズマリーから誘導された抽出物、ローズマリーから誘導された化合物、およびトリテルペン物質種からなる群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
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