MXPA05004288A - Composiciones para tratar o inhibir los estados patologicos asociados con la respuesta inflamatoria. - Google Patents

Composiciones para tratar o inhibir los estados patologicos asociados con la respuesta inflamatoria.

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Abstract

Se describe una formulacion natural de compuestos que pueden modular la inflamacion. La formulacion tambien puede inhibir la expresion de COX-2, inhibir la sintesis de prostaglandinas selectivamente en celulas diana, e inhibir la respuesta inflamatoria selectivamente en celulas diana. Las composiciones contienen al menos una fraccion aislada u obtenida de lupulos. Otras modalidades se refieren a combinaciones de los componentes, que incluyen al menos una fraccion aislada u obtenida de lupulos, triptantrin y conjugados de este, romero, un extracto o compuesto obtenido de romero, una especie triterpeno o una diterpeno lactona o derivados o conjugados de estos. (Ver formula).

Description

COMPOSICIONES PARA TRATAR O INHIBIR LOS ESTADOS PATOLÓGICOS ASOCIADOS CON LA RESPUESTA INFLAMATORIA Antecedentes de la Invención Campo de la Invención La presente invención se relaciona generalmente con composiciones que se pueden usar para tratar o inhibir condiciones patológicas asociadas con activación especifica de tejido de inflamación y/o NFkB, con métodos para modular la inflación, incluyendo en células, y con métodos para modular NFkB en células. Más específicamente, la invención se relaciona con una composición que comprende extractos de lúpulos o derivados de los mismos o una fracción aislada o derivada de lúpulos, que se puede combinar opcionalmente con un segundo componente, tal como romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especie de lactona de diterpeno, y triptantrina . La invención se relaciona además con métodos para usar las composiciones para inhibir expresión de ciclooxigenasa-2 (COX-2), inhibir síntesis de prostaglandinas selectivamente en células de meta, inhibir respuestas inflamatorias selectivamente en células de meta, y/o inhibir activación de NFkB selectivamente en células de meta . Descripción del Ramo Relacionado La ciclooxigenasa (síntasa de endoperóxido de prostaglandina, EC 1.14.991, COX) cataliza el paso de limitación de régimen en el metabolismo de ácido araquidónico a prostaglandina ¾ (PG¾), que se metaboliza adicionalmente a diversas prostaglandinas, prostaciclina y tromboxano A2 (c.f . Figura 1) . A principios de los años 1990, se estableció que COX existe en dos isoformas, comúnmente referidas como COX-1 y COX-2. Se determinó subsecuentemente que las proteínas COX-1 y COX-2 se derivan de distintos genes que divergen bien desde aves a mamíferos. Las prostaglandinas (PGs) generadas a través de las trayectorias de COX-1 y COX-2 son moléculas idénticas y por lo tanto tienen efectos biológicos idénticos. COX-1 y COX-2, sin embargo, pueden generar un patrón único y cantidades variables de eicosanoides; por lo tanto, diferencias relativas en la activación de estas isozimas pueden resultar en respuestas biológicas muy disimilares. Las diferencias en la distribución y regulación de tejido de COX-1 y COX-2 se consideran ahora cruciales para los efectos benéficos así como adversos de inhibidores de COS. El concepto generalmente mantenido (dogma COX) es que COX-1 se expresa constitutivamente en la mayoría de los tejidos, mientras que COX-2 es la enzima inducible disparada por estímulos pro-inflamatorios incluyendo mitógenos, citoquinas y lipopolisacárido bacterial (LPS) en células in vitro y en sitios inflamados in vivo. Basados principalmente en estas diferencias en expresión, COX-1 se ha caracterizado como una enzima doméstica y se cree que está involucrada en mantener funciones fisiológicas tales como citoprotección de la mucosa gástrica, regulación de flujo de sangre renal, y controle de agregado de plaquetas. COX-2 se considera que media principalmente la inflamación, aún cuando se encuentra expresión constitutiva en cerebro, riñon y el tracto gastrointestinal. Por lo tanto, seria deseable regular decentemente el tejido especifico o la expresión especifica de célula de COX-2. El ácido araquidónico sirve como el substrato primario para la biosintesis de todos los PGs. Los PGs son hormonas ubicuitas que funcionan tanto como mediadores de paracrina como de autocrina para efectuar una mirlada de cambios fisiológicos en el medio ambiente celular inmediato. Los efectos fisiológicos variados de PGs incluyen reacciones inflamatorias tales como artritis reumatoide y osteoartritis, control de presión de sangre, agregado de plaquetas, inducción de trabajo y agravamiento de dolor y fiebre. El descubrimiento hace 30 años de que la aspirina y otros analgésicos no esferoides inhiben la producción de PG identificó la síntesis de PG como una meta para desarrollo de droga. Hay cuando menos 16 PGs diferentes en nueve clases químicas diferentes, designadas PGA a PGI . Las PGs son parte de una familia mayor de compuestos que contienen 20 carbonos llamados eicosanoides; incluyen prostaciclinas, tromboxanos, y leucotrienos . La disposición de PGs producida varia dependiendo de la maquinaria enzimática corriente abajo presente en un tipo de célula particular. Por ejemplo, las células endoteliales producen principalmente PGI2, mientras que las plaquetas producen principalmente TXA2. Las prostaglandinas (PG) se cree que juegan un papel importante en el mantenimiento de homeóstasis mucosal gástrica humana. El dogma actual es que COX-1 es responsable por la síntesis de PG en mucosa gástrica normal a fin de mantener la homeóstasis mucosal y que COX-2 se exprese mediante mucosa gástrica normal a niveles bajos, con inducción de expresión durante la curación de úlcera, siguiendo exposición de endotoxina o estimulo de citoquina. Parece ahora que ambos COX-1 y COX-2 tienen papeles fisiológicos importantes en la mucosa gástrica normal. Los compuestos que inhiben la producción de PGs por COX se han hecho drogas importantes en el control de dolor e inflamación. Colectivamente estos agentes se conocen como drogas anti-inflamatorias no esteroides (NSAIDs) con sus indicaciones principales siento osteoartritis y artritis reumatoide. Sin embargo, el uso de NSAIDs, y en particular aspirina, se ha extendido a profilaxis de enfermedad cardiovascular. Durante la última década,- se ha dedicado esfuerzo considerable a desarrollar nuevas moléculas que son inhibidores directos de la actividad enzimática de COX-2, con la inferencia de que estos compuestos serian menos irritantes al estómago con uso crónico. Por lo tanto, seria deseable inhibir la respuesta de inflamación selectivamente en células de meta. La solicitud de patente de E.U.A. 2002/0086070A1 de Kuhrts titulada "FORMULACIONES ANTI-INFLAMATORIAS Y DE REPARACIÓN DE TEJIDO CONECTIVO" describe un componente de lúpulos que tiene una relación IC50-WHMA COX-2/COX-1 que varia de aproximadamente 0.23 a aproximadamente 3.33. El ejemplo 1 de la solicitud describe una composición que contiene un extracto obtenido a través de extracción supercritica de dióxido de carbono de lúpulos enteros (extracto de C02) que comprende 42% de humulona. La Patente de E.U.A. No. 6,391,346 titulada "COMPOSICIÓN HERBAL ANTI-INFLAMATORIA, QUE PROMUEVE EL SUEÑO Y MÉTODO DE USO" describe una composición oralmente administrada capaz de reducir la inflamación en animales, mientras que promueve el sueño para dichos animales . La composición contiene extracto hidroalcoholico de lúpulos y extracto de dióxido de carbono supercritico de lúpulos que se usan para promover el sueño. Una formulación ideal para el tratamiento de inflamación inhibiría la inducción y actividad de COX-2 sin inhibir la síntesis de PGE2 en células mucosales gástricas. Sin embargo, las drogas anti-inflamatorias no esferoides convencionales carecen de la especificidad de inhibir COX-2 sin afectar la síntesis de PGE2 gástrica y están en riesgo de causar daños en el sistema gastrointestinal, cuando se usan durante períodos prolongados. En realidad, aún las drogas anti-inflamatorias recientemente desarrolladas tales como rofecoxib y celexocib producen toxicidad gástrica desfavorable en la forma de sangrado espontáneo inducido y retraso de curación de úlcera gástrica. De esta manera, sería útil identificar una formulación de compuestos que inhiban específicamente o prevengan la síntesis de prostaglandinas por COX-2 con poco o ningún efecto sobre síntesis de PGE2 en la mucosa gástrica. Dicha formulación, que seria útil para conservar la saluda de tejidos de articulación, para tratar artritis u otras condiciones inflamatorias, no se ha descubierto previamente. El término "inhibidor de COX-2 específico o selectivo" se acuñó para abarcar compuestos o mezclas de compuestos que inhiben selectivamente COX-2 sobre COX-1.
Sin embargo, mientras que la implicación es que dicha selectividad calculada resultará en irritación gástrica inferior, a menos que los materiales de prueba se evalúen en células gástricas, el término "inhibidor de COX-2 selectivo" no lleva la afirmación de seguridad a -las células gastrointestinales. Solamente la prueba de acción de compuesto en tejidos de meta, células inflamatorias y células mucosales gástricas, identificará aquellos agentes con bajo potencial para irritación de estómago. El problema mayor asociado con asegurar la selectividad de COX-2 (es decir, baja irritación gástrica) es que las diferencias en la metodología de ensayo pueden tener efectos profundos en los resultados obtenidos . En el Cuadro 1 se ilustran las categorías de los numerosos ensayos in vitro que se han desarrollado para probar y comparación las actividades inhibitorias relativas de NSAID y compuestos naturales contra COX-1 y COX-2. Estos sistemas de prueba se pueden clasificar entres grupos: (1) sistemas que usan enzimas animales, células o líneas de células animales, 82) ensayos usando líneas de célula humanas, o plaquetas humanas y monocitos, y (3) modelos que se desprenden actualmente usando células humanas que son representativas de las células de meta para los efectos anti-inflamatorios y adversos de NSAID y suplementos dietéticos. Generalmente, los modelos que usan líneas de célula humana o plaquetas y monocitos humanos son la norma actual y los modelos de célula de meta validados no han llegado. Una línea de célula gástrica humana capas de determinar el potencial para irritación gástrica es una necesidad.
Cuadro 1. Clasificación de sistemas de prueba para ensayos in vitro que determinan selectividad de COX-2 de compuestos anti-inflamatorios* SISTEMAS DE PRUEBA ANIMAL HUMANO META Enzimas Enzimas Células de Mucosa Gástrica Humana Células Células Condrocitos Humanos Lineas de Lineas de Sinoviocitos Humanos Células Células OTRAS VARIABLES DE SISTEMA 1. Fuente de ácido araquidónico - endógena o exógena; 2. Diversos sistemas de expresión para réplica de gene de COX-1 y COX-2; 3. La presencia o ausencia de un agente inductor de COX-2 ; 4. Agentes inductores de COX-2 se administran a concentraciones diferentes y durante periodos de tiempo diferentes; 5. Duración de incubación con la droga o con ácido araquidónico, 6. .Variación en la concentración de proteina en el medio * Adaptado de Pairet, M y van Ryn, J. (1998) Modelos experimentales usados para investigar la inhibición diferencial de ciclooxigenasa-1 y ciclooxigenasa-2 mediante drogas anti-inflamatoriás no esferoides. Inflamm. Res 47, Supplement 2S93-S101 e incorporada en la presente por referencia . Las enzimas usadas pueden ser de origen animal o humano, pueden ser nativas o recombinantes, y se pueden usar ya sea como enzimas purificadas, en preparaciones microsomales, o en ensayos de célula entera. Otras variables de sistema incluyen la fuente de ácido araquidónico . La sintesis de PG se puede medir de ácido araquidónico endógenamente liberado o ácido araquidónico exógenamente añadido. En el último caso, se usan concentraciones diferentes en laboratorios diferentes. Segundo, existen varios sistemas de expresión para replicación de gene de enzimas COX-1 y COX-2 recombinantes. Además, las células transfectadas con el gene Cox-1 o Cox-2 pueden ser diversos orígenes, por ejemplo, líneas de célula de insecto o células COS. Tercero. La ausencia o presencia de un agente de inducción de COX-2 puede variar. Las células que se transfectan establemente con las enzimas recombinantes expresan esta enzima constitutivamente y no se usa agente inductor. Esto es en contraste fundamental con otras células en las que se tiene que inducir COX-2. La inducción de COX-2 se realiza comúnmente usando LPS bacteriales o diversas citoquinas tales como interleuquina-1/? o factor de necrosis de tumor. Adicionalmente, estas endotoxinas y citoquinas se administran a diversas concentraciones. Cuarto, la duración de la incubación con el agente de prueba, el agente de inducción de COX-2, o con ácido araquidónico varia entre diferentes laboratorios. Estas diferencias pueden influenciar el resultado cuantitativo del estudio, debido a que la inhibición de COX-2 depende del tiempo. Finalmente, la concentración de proteína del medio puede variar; esto es una importancia para compuestos que sé pueden ligar ávidamente a proteínas de plasma. Un ensayo útil para selectividad de COX-2 tendría las siguientes características: (1) células enteras se deben usar para contener enzimas humanas nativas bajo expresión respecto a control fisiológico normal; (2) las células también deben ser células de meta para los efectos anti-inflamatorios y adversos de los compuestos; (3) COX-2 se debe inducir, simulando de esta manera un proceso inflamatorio, en lugar de ser constitutivamente expresado; y (4) la síntesis de PG debe ser medida de ácido araquidónico liberado de almacenas endógenos más bien que de ácido araquidónico exógenamente añadido. Las diferencias en metodología pueden explicar una diferencia dramática en los resultados obtenidos para inhibición de COX. Por ejemplo, cuando se ensaya contra la enzima purificada, el ácido ursólido exhibió un IC50 de 130 uM, muy fuera de concentraciones fisiológicamente obtenibles posibles [Ringbom, T., y col. (1998) Ursolic acid from Plantago major, a selective inhibitor of ciclooxygenase-2 catalized prostaglandin biosynthesis . J Nat Prod 61, 1212-1215] . En la linea de macrofago de murina RAW 264.7, Sun y col., reportan un IC50 para ácido ursólico de aproximadamente 40 uM. [Suh, N. , y col. 81998) Novel triterpenoids suppress inducible nitric oxide synthase (iNOS) and inducible ciclooxygenase (COX-2) in mouse macrophages. Cáncer Res 58, 717-723]; y en células mamarias humanas estimuladas con 12-miristato 12-acetato de forbol, la concentración inhibitoria media aproximada de ácido ursólico fue 3.0 uM [Subbaramaiah, K. , y col. (2000) El ácido ursólico inhibe transcripción de ciclooxigenasa-2 en células epiteliales mamarias humanas. Cáncer Res 60, 2399-2404] . Ningún laboratorio ha desarrollado todavía un ensayo ideal para selectividad de COX-2. El sistema de célula completa más comúnmente usado para productos Rx y OTC es el ensayo de sangre entera humana desarrollado por el William Harvey Institute [Warner, T.D., y col. (1999) Nonsteroid drug selectivities for cyclo-oxygenase-1 rather than cycloi-oxygenase-2 are associated with human gastrointestinal toxicity: a full in vitro analysis. Proc Nati Acad Sci USA 96, 7563-7568] . A la fecha, este formato de ensayo ha desarrollado más datos que soportan importancia clínica que cualquier otro. Sin embargo, la nueva investigación en el papel de expresión constitutiva de COX-2 en mucosa gástrica normal necesita revisitar la relevancia del uso de plaquetas para modelar inhibición de COX-1 en ausencia de COX-2. La extrapolación de gastrotoxicidad de estudios de plaqueta ya no es una base molecular segura. La validación de una linea de célula mucosal gástrica humana para establecer la toxicidad de tejido de meta potencial de inhibidores de ciclooxigenasa representa una necesidad critica para el desarrollo de agentes anti-inflamatorios seguros y efectivos. NF-kB, un heterodimero de las proteinas p50 y RelA, es un complejo de proteina de enlace de ADN eucariótico inducible que se expresa ampliamente y juega un papel pivotal al regular respuestas biológicas múltiples tal como las respuestas inflamatorias e inmunes en células de mamífero. NF-kB regulan la expresión de genes que codifican citoquinas, quimoquinas, moléculas de adhesión, y péptidos antimicrobianos. Las metas de NF-kB incluyen IL-2, el receptor de IL-2, y proteinas de fase aguda del hígado. Además de su papel en respuestas inmunes, la activación de NF-kB supera la respuesta apoptotica a TNF y Fas, permitiendo proliferación en su lugar. Como se muestra en la Figura 9, NF-kB es citoplásmico cuando está inactivo, mantenido ahí por IkB. Diversos estímulos conducen a activación de IKK (Quinasa IkB) , que fosfórala IkB, marcándola para ubicuitinación y degradación. Una vez que se degrada IkB, NF-kB se libera para iniciar la transcripción. Después de la activación de transcripción de un gene, NF-kB también se degrada rápidamente . Por lo tanto, seria útil identificar una composición que modularla la expresión o actividad de NF-kB al principio de inflamación para disminuir la respuesta inflamatoria. Adicionalmente, las composiciones que actúa como moduladores de NF-kB pueden afectar una amplia variedad de desórdenes en un cuerpo mamífero. Como resultado de inhibir NFkB, que es un factor de transcripción para COX-2, la expresión de COX-2 se puede regular descendentemente. Una formulación ideal para el tratamiento de inflamación inhibiría la inducción y actividad de COX-2 sin inhibir la síntesis de PGE2 en células mucosales gástricas. Sin embargo, las drogas anti-inflamatorias no esferoides convencionales carecen de la especificidad de inhibir COX-2 sin afectar la síntesis de PGE2 gástrica y están en riesgo de ocasionar daños en el sistema gastrointestinal, cuando se usan durante períodos prolongados. En realidad, aún las drogas anti-inflamatorias recientemente desarrolladas tales como rofecoxib (Vioxx<R), Merck & Co., Inc.), y celexocib (Celebrex(R) , Pfizer, Inc.), producen toxicidad gástrica adversa en la , forma de sangrado espontáneo inducido y retraso de curación de úlcera, gástrica. De esta manera, seria útil identificar una formulación natural de compuestos que inhiban o prevengan específicamente la síntesis de prostaglandinas por COX-2 con poco o ningún efecto sobre la síntesis de PGE2 en la mucosa gástrica. Esta formulación, que sería útil para conservar la salud de tejidos de articulación, para tratar artritis u otras condiciones inflamatorias, no se ha descubierto previamente. El término "inhibidor de COX-2 específico o selectivo" fue acuñado para abarcar compuestos o mezclas de compuestos que inhiben selectivamente COX-2 sobre COX-1. Sin embargo, aún cuando la implicación es tal que dicha selectividad calculada resultará en irritación gástrica inferior, a menos que los materiales de prueba sean evaluados en células gástricas, el término "inhibidor de COX-2 selectivo" no lleva la afirmación de seguridad a las células gastrointestinales. Solamente probando acción de compuesto en tejidos de meta, las células inflamatorias y células mucosales gástricas identificarán aquellos agentes con bajo potencial para irritación del estómago. Mientras que la glucosamina está generalmente aceptada como siendo efectiva y segura para tratar osteoartritis, la intervención médica en el tratamiento de enfermedades de articulación degenerativas generalmente se restringe al alivio de sus síntomas agudos . Los doctores generalmente utilizan drogas anti-inflamatorias no esferoides y esferoides para tratamiento de osteoartritis. Estas drogas, sin embargo, no son apropiadas para terapia de término prolongado debido a que no solo carecen de la capacidad de proteger el cartílago, en realidad conducen a degeneración de cartílago o reducción de su síntesis. Además, la mayoría de las drogas anti-inflamatorias, no esferoides, dañan el sistema gastrointestinal cuando se usan durante períodos prolongados. De esta manera, se necesitan urgentemente tratamientos nuevos para artritis y osteoartritis que combinen agentes anti-inflamatorios con agentes de reconstrucción de cartílago. Las propiedades protectoras de articulación de glucosamina la harían un agente terapéutico atractivo para osteoartritis, excepto por dos desventajas: (1) el régimen de respuesta a tratamiento de glucosamina es más lento que para el tratamiento con drogas anti-inflamatorias, y (2) la glucosamina puede fallar en llenar la esperanza de remisión degenerativa. En estudios que comparan glucosamina con agentes anti-inflamatorios no esferoides, por ejemplo, un estudio ciego doble comparando 1500 mg de sulfato de glucosamina al día con 1200 mg de ibuprofen, demostraron que las marcas de dolor disminuyeron más rápido durante las primeras dos semanas en los pacientes de ibuprofen que en los pacientes tratados con glucosamina. Sin embargo, la reducción en marcas de dolor continuó a través del periodo de prueba en pacientes que reciben glucosamina y la diferencia entre los dos grupos se puso significativamente a favor de glucosamina en la semana ocho. López Vaz, A., evaluación clinica ciega doble de la eficacia relativa de ibuprofen y sulfato de glucosamina en el manejo de osteoartritis de la rodilla en pacientes externos, 8 Curr. Med Res Opin. 145-149 (1982). De esta manera, la glucosamina puede aliviar el dolor e inflamación de artritis, pero a un régimen más lento que las drogas anti-inflamatorias disponibles. Una formulación ideal -para la normalización de metabolismo de cartílago o tratamiento de osteoartritis sería proporcionar condroproteccion adecuada con actividad anti-inflamatoria potente. El suplemento dietético óptimo para osteoartritis debe mejorar las cualidades de reconstrucción de articulación generales ofrecidas por glucosamina y atenuar la respuesta inflamatoria sin introducir ningunos efectos laterales dañinos. Se debe fabricar económicamente y cumplir con todos los reglamentos gubernamentales . Sin embargo, las formulaciones de glucosamina actualmente disponibles no se han formulado para atacar de manera óptima y aliviar las causas subyacentes de osteoartritis y artritis reumatoide. Además, como con muchos suplementos herbales y dietéticos comerciales, las formulaciones disponibles no tienen una historia de uso, ni prueba clínica controlada, que puedan asegurar su seguridad y eficacia. Por lo tanto, sería útil identificar una composición que inhiba o prevenga específicamente la expresión de actividad enzimática de COX-2 en células inflamatorias, mientras que tiene poco o ningún efecto en síntesis de PGE2 en células mucosales gástricas de manera que estas formulaciones se puedan usar sin alteración gastrointestinal. Además, estas formulaciones deben permitir la curación de condiciones ulcerativas previamente existentes en el estómago. Compendio de la Invención De esta manera, sería útil identificar una formulación de compuestos que modulen una respuesta inflamatoria. También sería útil identificar una formulación de compuestos que module NFkB. Esta formulación tiene amplias aplicaciones . También sería útil identificar una formulación de compuestos que inhiban la expresión de COX-2, inhiban la síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, o inhiban la respuesta de inflamación selectivamente en células de metal. Por ejemplo, sería también útil identificar una formulación de compuestos que inhiba o prevenga específicamente la síntesis de prostaglandxnas por COX-2 en células inflamatorias con poco o ningún efecto sobre síntesis de PGE2 en células mucosales gástricas. Dicha formulación, que sería útil para conservar la saludad de tejidos de articulación, para tratar artritis u otras condiciones inflamatorias, no se ha descubierto previamente. De preferencia, las formulaciones tienen una concentración efectiva media para inhibición de COX-2 en células inflamatorias que de manera mínima es diez veces mayor que la concentración efectiva media para la inhibición de síntesis de PGE2 en células gástricas. Por ejemplo, si la concentración inhibitoria media de COX-2 de una formulación de prueba fue 0.2 ug/mL en el macrofagó de murina RAW 264.7, la formulación no se consideraría que tiene bajo potencial para irritación gástrica a menos que la concentración inhibitoria media para síntesis de PGE2 en células gástricas fuera igual o mayor a 2 ug/ml. Una modalidad preferida comprende composiciones que contienen cuando menos una fracción aislada o derivada de lúpulo (Humulus lupulus) . Los ejemplos de fracciones aisladas o derivadas de lúpulo son ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetrahidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. Los compuestos preferidos de fracciones aisladas o derivadas de lúpulo incluyen pero no están limitados a humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro, isocohumulona, dihidro, -adhumulona/ tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. Los compuestos preferidos también pueden contener substituyentes, tales como halógenos, éteres, y ésteres. Otras modalidades se relacionan con combinaciones de componentes . Una modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo y como un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en romero (Rosmarinus officinalis L.), un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, una especia de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma, y triptantrina o conjugados de la misma. Otra modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, triptantrina o conjugados de la misma y como un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo, romero, un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, y una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma. Como se usa en la presente, un extracto se refiere a un extracto que contiene un ingrediente activo que efectúa una actividad, por ejemplo, inhibir inflamación, inhibir inducibilidad o actividad de COX-2, inhibir síntesis de prostaglandina, modular NFkB, y lo semejante. Las composiciones preferidas pueden inhibir la inducibilidad o actividad de COX-2. Las composiciones de la invención también pueden funcionar para modular NFkB. Las composiciones preferidas también pueden inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta. Las composiciones preferidas también pueden inhibir respuesta de inflamación selectivamente en células de meta. Como se utiliza en la presente, un extracto se refiere a un extracto que contiene un ingrediente activo que efectúa una actividad, por ejemplo, inhibir inflamación, inhibir inducibilidad o actividad de COX-2, inhibir síntesis de prostaglandina, modular NFkB, y lo semejante. Las composiciones tienen aplicaciones amplias. Las composiciones preferidas pueden ser útiles para tratar condiciones, tales como cáncer, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, o enfermedades neurológicas y obesidad. Las composiciones preferidas también se cree que son útiles para tratar condiciones, tales como infecciones de HÍV-1, infecciones de rinovirus, y enfermedades cardiovasculares. Las composiciones preferidas serían útiles para, pero no limitadas a, el tratamiento de inflamación en un sujeto, y para tratamiento de otros desórdenes asociados con inflamación, tal como un analgésico en el tratamiento de dolor y dolores de cabeza, o como un antipirético para el tratamiento de fibra. Las composiciones preferidas serían útiles para tratar artritis, incluyendo pero no limitado a ' artritis reumatoide, espondiloatopatias, artritis de gota, osteoartritias, eritematosis de lupus sistémico, y artritis juvenil. Las composiciones preferidas serían útiles en el tratamiento de asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, y condiciones relacionadas con la piel tales como psoriasis, eczema, quemaduras y dermatitis. Las composiciones preferidas también serían útiles para tratar condiciones gastrointestinales tales como enfermedad de intestino inflamatorio, enfermedad de Crohn, gastritis, síndrome de intestino irritable y colitis ulcerativa y para la prevención o tratamiento de cáncer tal como cáncer colorectal.
Además, las composiciones preferidas serian útiles para tratar inflamación en enfermedades tales como enfermedades vasculares, dolores de cabeza de migraña, periarteritis nodosa, tiroiditis, anemia aplástica, enfermedad de Hodgkin, esclerodma, fiebre reumática, diabetes tipo I, miastenia grave, esclerosis múltiple, sacoidosis, síndrome nefrótico, síndrome de Behchef, polimiositis, gingivitis, hipersensibilidad, hinchazón que ocurre después de lesión, isquemia de miocardio, enfermedad peridontal, fibromialgia, dermatitis atópica, insulitis y lo semejante. Adicionalmente, las composiciones preferidas también serían útiles en el tratamiento de enfermedades oftálmicas, tales como retinopatías, conjuntivitis, uveitis, fotofobia ocular, y de lesión aguda al tejido del ojo. Las composiciones preferidas también serían útiles en el tratamiento de inflamación pulmonar, tal como aquella asociada con infecciones virales y fibrosis sística. Las composiciones preferidas también serían útiles para el tratamiento de ciertos desórdenes de sistema nervioso tal como demencias corticales incluyendo mal de Alzheimer. Como inhibidores .de biosíntesis mediada por COX-2 de PGE2 en células inflamatorias, estas composiciones también serían útiles en el tratamiento de rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterieesclerosis, y daño al sistema nervioso central que resulta de ataque, isquemia y trauma. Las modalidades preferidas proporcionan además una composición para aumentar el régimen al que la glucosamina o sulfato de condroitina funcionan para normalizar el movimiento de articulación o reducir los síntomas de osteoartritis . Las modalidades preferidas también proporcionan métodos para identificar composiciones que inhibirían o previnieran específicamente la síntesis de prostaglandinas por COX-2 en células inflamatorias con poco o ningún efecto sobre la síntesis de PGE2 en células mucosales gástricas. Además, las composiciones de la invención también serían útiles para el tratamiento de obesidad, síndrome X, y lo semejante, invirtiendo hiperglicemia, hiperinsulinemia y dislipidermia normalizando la activación de IkkB quinasa beta y por lo tanto, modulando apropiadamente su efecto sobre la transcripción de genes activados con NFkB, rompiendo efectivamente la citoquina (por ejemplo, lazo de retroalimentacion de factor alfa (TNFa) de necrosis de tumor que conduce a estas condiciones y enfermedades . Breve Descripción de los Dibujos La Figura 1 ilustra la inducción de ciclooxigenasa-2 y el metabolismo de ácido araquidónico a prostaglandinas y otros eicosanoides por las enzimas de ciclooxigeñasa. La acción de agentes anti-inflamatorios no esteroides es a través de inhibición directa de las enzimas de ciclooxigeñasa. La Figura 2 muestra un contorno de fracciones y compuestos que se pueden obtener de lúpulo. La Figura 3 ilustra [A] el género alfa-ácido (AA.) y humulona de especie representativa (R= -CH2CH (CH3) 2) , cohumulona (R=, -CH(CH3)2), y adhumulona (R= -CH (C¾) CH2CH3) ; [B] el género ácido isoalfa (???) e isohumulona de especie representativa (R= -CH3CH (CH3) 2) , isocohumulona (R= -CH(CH3)2), e isoadhumulona (R= -CH (CH3) CH2CH3) ; [C] el género isoalfa ácido isomerizado reducido (RIAA) y dihidro-isohumulona de especie representativa (R= ~CH2CH(C¾)2) , dihidro-isocohumulona (R=, -CH(CH3)2), y dihidro-adhumulona (R= -CH (CH3) CH2CH3) ; [D] el género ácido tetra-hidroisoalfa (THLAA) y tetra-hidro-isohumulona de especie representativa (R=, -CH(C¾)2), y tetra-hidro-adhumulona (R= -CH (CH3) C¾CH3) [E] y el género de ácido hexa-hidroisoalfa (HHIAA) con hexa-hidro-isohumulona de especie representativa (R= -CH2CH(CH3)2) hexa-hidro-isocohumulona (R=, -CH(C¾)2), y hexa-hidro-adhumulona (R= -CH (CH3) CH2CH3) . La Figura 4 ilustra la estructura química de triptantrina. · La Figura 5 ilustra las estructuras químicas generales del género triterpeno [A] y ácido rsólico [B] y ácido oleanólico [C] como una especie dentro de ese género. La Figura 6 [A] muestra inmunomanchas representativas que demuestran expresión COX-1 y COX-2 constitutiva en células mucosales gástricas humanas AGS. La linea de células gástricas humanas AGS se cultivó en placas de 6 pozos a 37°C con 5% de C02 en una incubadora humedecida durante 24 horas. Las células se lisaron en hielo en tampón de lisis y se determinó la concentración de proteina. Cincuenta ug de lisado de célula se solubilizaron, fraccionaron en un gel de 10% de poliacrilamida que contiene dodecilsulfato de sodio (SDS), y se transfirieron hacia una membrana de nitrocelulosa. Las membranas se incubaron en un tampón de bloqueo y luego se incubaron con el anticuerpo primario respectivo durante 1 hora a temperatura ambiente . Después de la incubación de anticuerpo primario, las manchas se lavaron tres veces con salina Tris-tamponada y luego se incubaron con el anticuerpo secundario durante 1 hora. Las bandas de proteina se visualizaron usando quimioluminiscencia mejorada. La Figura 6 [B] muestra análisis densitométrico de las inmunomanchas mostradas en la Figura 6A. Las intensidades de banda se evaluaron a través de análisis densitométrico, se computaron usando softwware ScanAnalysisÍR) (BIOSOFT, Ferguson, MO) , y se registraron como Unidades de Densidad (DU) arbitrarias. La Figura 7 [A] muestra el por ciento de inhibición de síntesis de PGE2 en células RAW 264.7 estimuladas con LPS mediante muestras de plasma de un -voluntario humano que recibe 880 mg t.i.d., de una formulación de derivado de lúpulo de prueba. Las barras blancas son medios de dato crudo y las barras oscuras son aquellos medios computados con la eliminación de externos (nunca más de dos de las ocho réplicas) . Las cápsulas de gel de la formulación de prueba contenían 200 mg de alfa-ácidos isomerizados reducidos, 200 mg de extracto de romero y 40 mg de ácido oleanólico. La Figura 7 [B] es un cálculo de las concentraciones de plasma de material de prueba en cada tiempo de post-dosificación capaz de inhibir síntesis de PGE2 en células RAW 264.7 estimuladas con LPS suponiendo una relación de componentes de 5:5:1 constante. La Figura 8 ilustra' la inducción de síntesis de PGE2 mediante alergénico de ácaro en células pulmonares A549 tratadas durante 24 horas. La Figura 9 muestra una trayectoria de activación de NF-kB. En el citoplasma, NF-kB se inhibe mediante IkB. Una señal de activación de corriente arriba puede ocasionar fosforilación de IkB mediante IKK (quinasa IkB) . Esto dispara la degradación de IkB a través del sistema ubícuito. Una vez liberado de IkB, el NF-kB libre puede luego tráslocarse a núcleos y activar la transcripción. La Figura 10 muestra inhibición relacionada con dosis de biosintesis de PGE2 para RIAA (barra sombreada) y IAA (barra blanca) de células RA.W 264.7 tratadas después de estímulo de LPS durante la noche antes de la adición del material de prueba. La Figura 11 muestra comparación de relaciones de IC5o lógicas y clasificación de gastropatía potencial. Las relaciones de IC50 lógicas usando el Ensayo Modificado de William Harvey (WHMA) se expresan WHMA COX-l/WHMA COX-2 de Warner, y col., (barras blancas) y Mitchell, y col., (barras oscuras) se muestran en [A} con relaciones de IC50 log (AGS/WHMA COX-2) para células AGS tratadas con A23187 [B], 100 uM de ácido araquidónico [C] , o 5 uM de ácido araquidónico [D] . Los valores a la derecha de 0 indican probabilidad disminuida de gastropatía, mientras que los valores a la izquierda de 0 indican probabilidad aumentada de gastropatía. Descripción Detallada de la Modalidad Preferida La presente invención se relaciona con el descubrimiento de que un supragénero de componentes aislados o derivados de lúpulo y otros compuestos resultan en inhibición específica de tejido o especifico de célula de expresión de COX-2. De manera importante, estos compuestos no se cree que inhiban directamente COX-2 u otras enzimas dentro de la trayectoria de síntesis de prostaglandina. Las modalidades preferidas proporcionan composiciones y métodos para inhibir expresión de COX-2, inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en tejidos o células de meta, o inhibir respuesta de inflamación selectivamente en tejidos o células de meta. Las composiciones y métodos de la invención también pueden modular NFkB. Una modalidad preferida comprende composiciones que contienen fracciones o compuestos aislados o derivados de lúpulo. Los ejemplos de fracciones aisladas o derivadas de lúpulo son alfa ácidos, isoalfa ácidos, isoalfa ácidos reducidos, tetra-hidroisoalfa ácidos, hexa-hidroisoalfa ácidos, ácidos beta, y lúpulo agotado. Los compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulos se pueden representar mediante un supragénero abajo: (Supragénero) , en donde R1 se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2CH3; y en donde R, T, X y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble. Otros compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar mediante un género a continuación: (Género A) , En donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2 y CH (C¾) CH2CH3. Otros compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden presentar mediante un género a continuación: (Género B) , en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2C¾ . Los ejemplos de compuestos preferidos de un ingrediente aislado o derivado de lúpulo, incluyen, pero no están limitados a, umulona, co umuloiia, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, di idro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . Los compuestos preferidos pueden contener substituyentes, como se muestra en la fórmula anterior. Otra modalidad comprende composición que contiene triptentrina y conjugados de la misma. Otras modalidades se relacionan con combinaciones de componentes. En modalidades particulares, las composiciones de la invención pueden funcionar para inhibir específicamente expresión de COX-2, para modular NFkB, para inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, o para inhibir respuesta de inflamación selectivamente en células de meta. Las composiciones pueden exhibir actividad sinergística. Una modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo y como un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en romper, un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma, y triptantrina o conjugados de la misma. Otra modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, triptantrina o conjugados de la misma y como un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo, romero, un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, y una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma. Como se utiliza en la presente, el término "suplemento dietético" se refiere a composiciones consumidas para afectar cambios estructurales o funcionales en fisiología. El término "composición terapéutica" se refiere a cualesquiera compuestos administrados para tratar o prevenir una enfermedad. Como se utiliza en la presente, el término "cantidad efectiva" significa una cantidad necesaria para lograr un resultado seleccionado. Dicha cantidad se puede determinar fácilmente sin experimentación indebida por una persona de experiencia ordinaria en el ramo. Como se utiliza en la presente, el término "substancial" significa que es en gran parte, pero no totalmente aquello que se especifica. Como se utiliza en la presente, el término "inhibidor de COX" se refiere . a una composición de compuestos que es capaz de inhibir la actividad o expresión de enzimas de COX-2 o es capaz de inhibir o reducir la severidad, incluyendo dolor e hinchazón, de una respuesta inflamatoria severa. Como se utilizan en la presente, los términos "derivados" o una materia "derivada" se refieren a una substancia química estructuralmente relacionada con otra substancia y teóricamente obtenible de la misma, es decir, una substancia que se puede hacer de otra substancia. Los derivados pueden incluir compuestos obtenidos a través de una reacción química.
Como se utiliza en la presente, el término "célula inflamatoria" se refiere a aquellos miembros celulares del sistema inmune, por ejemplo linfocitos B y T, neutrófilos o macrófagos involucrados en sintesis de prostaglandinas en respuesta a señales inflamatorias tales como interleuquinaSf factor de necrosis de tumor, bradiquinina, histamina o componentes derivados de bacteria. Como se utiliza en la presente, el término "células de meta" se refiere a aquella población de células en la que se desea la inhibición de sintesis de PGE2 u otra prostaglandina, tal como células inflamatorias, células de tumor, o células pulmonares. Alternativamente, "células de no meta" se refiere a aquella población de células en la que no se desea la inhibición de sintesis de PGE2 u otra prostaglandina, tal como las células mucosales gástricas, neurales o renales . Como se utiliza en la presente, el término "extracto de lúpulo" se refiere al material sólido que resulta de (1) exponer un producto de planta de lúpulo a un solvente, (2) separar el solvente de los productos de planta de lúpulo, y (3) eliminar el solvente. Como se utiliza en la presente, el , término "solvente" se refiere a un liquido de naturaleza acuosa u orgánica que posee las características necesarias para extraer material sólido del producto de planta de lúpulo. Los ejemplos de solventes incluirían, pero no se limitan a, agua, vapor, agua sobrecalentada, metanol, etanol, hexano, cloroformo, C02 líquido, N2 líquido o cualesquiera combinaciones de dichos materiales . Como se utiliza en la presente, el término "extracto de C02" se refiere al material sólido que resulta de exponer un producto de planta de lúpulo a una preparación de C02 líquida o supercrítica seguido por remoción del C02. Como se utiliza en la presente, el término "lúpulo agotado" se refiere al residuo sólido e hidrofílico de extracto de lúpulo. Como se utiliza en la presente, el término "ácido alfa" se refiere a compuestos colectivamente conocidos como humulonas y se puede aislar de productos de planta de lúpulo incluyendo, entre otros, humulona, cohumulona, adhumulona, hulupona, e isoprehumulona. Como se utiliza en la presente, el término "ácido isoalfa" se refiere a compuestos aislados de productos de planta de lúpulo y que subsecuentemente se han isomerizado. La isomerización de ácidos alfa puede ocurrir térmicamente, tal como ebullición. Los ejemplos de ácidos isoalfa incluyen, pero no están limitados a, isohumulona, isocohumulona e isoadhumulona.
Como se utiliza en la presente, el término "ácido tetra-hidroixoalfa" se refiere a una cierta clase de ácido isoalfa reducido. Los ejemplos de ácido tetra-hidroisoalfa (THIAA) incluyen, pero no están limitados a tetra-hidro-isohumulona, tetra-hidro-isoco umulona y tetra-hidro-adhumulona . Como se utiliza en la presente, el término "ácido hexa-hidroisoalfa" se refiere a una cierta clase de ácido isoalfa reducido. Los ejemplos de ácidos hexa-hidroisoalfa (HHIAA.) incluyen, pero no están limitados a hexa-hidro-isohumulona, hexa-hidro-isocohumulona y hexa-hidro-adhumulona. Como se utiliza en la presente, el término "fracción de ácido beta" se refiere a compuestos colectivamente conocidos como lupulonas, incluyendo, entre otros, lupolona, colupulona, adlupulona, tetrahidroisohumulona y hexahidrocolupulona. Como se utiliza en la presente, el término "fracción de aceite esencial" se refiere a una mezcla de complejo de componentes que incluyen, entre otros, mirceno, humuleno, beta-cariofilina, undecan-2-ona, y 2-meti-but-3-en-ol . Como se utiliza en la presente, "conjugados" de compuestos significa compuestos covalentemente ligados o conjugados a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato y glutationa. De preferencia. El mono- o di-sacárido es un miembro seleccionado del grupo que consiste en glucosa, mañosa, ribosa, galactosa, ramnosa, arabinosa y fructosa. Como se utiliza en la presente, el término "grasas" se- refiere a ésteres de triacetilglicerol de ácidos grasos. Como se utiliza en la presente, el término "ceras" se refiere a éteres de triacilglicerol de o ésteres de aleonóles o ácidos grasos de cadena extremadamente larga (>25 carbonos) . Lúpulo La extracción de lúpulo en una forma u otra va a más de hace 150 años a principios de siglo diez y nueve cuando la extracción en agua y etanol se intentó primero. Aún en la actualidad un extracto de etanol está disponible en Europa, pero en mucho los extractos predominantes son extractos solventes orgánicos (hexano) y extractos de C02 (supercriticos y líquidos) . C02 (típicamente a 60 bars de presión y 50 a 10°C) está en un estado líquido y es un solvente relativamente suave, no polar, altamente especifico para resina suave de lúpulo y aceites. Más allá del punto crítico, típicamente a 300 bars de presión y 60°C, C02 tiene las propiedades de ambos un gas y un liquido y es un solvente mucho más fuerte. La composición de los diversos extractos se compara en el Cuadro 2. Cuadro 2. Extractos de Lúpulo (Por ciento P/P) Componente Lúpulo Solvente C02 Super- C02 Orgánico Critico Liquido Resinas totales 12 - 20 15 - 20 75 - 90 70 - 95 Ácidos alfa 2 - 12 8 - 45 27 - 55 30 - 60 Ácidos beta 2 - 10 8 - 20 23 - 33 15 - 45 Aceites esenciales 0.5 · - 1. 5 0 - '5 1 - 5 2 - 10 Resinas duras 2 - 4 2 - 10 5 - 11 Ninguno Taninos 4 - 10 0.5- 5 0.1 - 5 Ninguno Ceras 1 - 5 1 - 20 4 - 13 0 - 10 Agua 8 - 12 1 - 15 1 - 7 1 - 5 En su forma más simple, la extracción de lúpulo involucra molienda, granulación y remolienda de los lúpulos para dispersar la lupulina, hacer- pasar un solvente a través de una columna empacada para recoger los componentes de resina y finalmente, remoción del solvente para proporcionar un extracto de resina entero o "puro". Los extractores orgánicos principales son solventes fuertes y además de virtualmente todos los componentes de lupulino, extraen pigmentos de planta, ceras cuticulares, agua y materiales solubles en agua. C02 supercritico ,es más selectivo que los solventes orgánicos y extrae menos de los taninos y ceras y menos agua, y por lo tanto componentes solubles en agua. Extrae algunos de los pigmentos de planta como clorofila, pero más bien menos que lo hacen los solventes orgánicos. El . C02 liquido es el solvente más selectivo usado comercialmente para lúpulo y por lo tanto produce la resina entera más pura y extracto de aceite. Extrae duramente las resinas duras o taninos, niveles muy inferiores de ceras de planta, ningunos pigmentos de planta y menos agua y materiales solubles en agua. Como consecuencia de esta selectividad y las propiedades solventes más suaves, el rendimiento absoluto de C02 liquido, extracto por peso unitario de lúpulo es menor que cuando se usan los otros solventes mencionados. Adicionalmente, el rendimiento de ácidos alfa con C02 liquido (89-93%) es inferior a aquel de C02 supercritico (91-94%) o los solventes orgánicos (93-96%) . Después de la extracción está el proceso de remoción de solvente, que para solventes orgánicos involucra calentar para ocasionar la volatilización. A pesar de esto, cantidades vestigiales de solvente permanecen en el extracto. La remoción de C02, sin embargo, simplemente involucra una liberación de presión para volatilizar el C02. Como se muestra en la Figura 2, los extractos de C02 de lúpulo se pueden fraccionar en componentes, incluyendo aceites de lúpulo, ácidos beta, y ácidos alfa.
Los aceites de lúpulo incluyen, pero no están limitados a, humuleno, beta-cariofileno, micreno, farnesceno, gamma-cadineno, alfa-selineno, y alfa-cadineno . Los ácidos beta incluyen, pero no están limitados a, lupulona, colupulona, adlupulona, tetrahidroisohumulona, y hexahidrocolupulona, colectivamente conocidos como lupulonas . Los ácidos beta se pueden isomerizar y reducir. Los ácidos beta se reducen para proporcionar ácidos tetra-beta. Los ácidos alfa incluyen, pero no están limitados a, humulona, conumulona, adhumulona, hulupona, e isoprehumulona. Los ácidos alfa se pueden isomerizar para proporcionar ácidos isoalfa. Los ácidos iso-alfa se pueden reducir para proporcionar ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, y ácidos hexa-hidroisoalfa . Una modalidad preferida comprende composiciones qué contienen fracciones o compuestos aislados o derivados de lúpulo. Los ejemplos de fracciones aisladas o derivadas de lúpulo son ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. Los compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar mediante un supragénero a continuación: (Supragénero) en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, y y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un p orbital, entonces el R, T, X o Z adyacente también es p orbital, formando de esta manera un enlace doble . Otros compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar por un genero abajo: en donde R/ se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3CH2CH3. Otros compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar por el género abajo: (Género B) , en donde Rf se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. Como se muestra en la Figura 3, los ejemplos de compuestos preferidos de un ingrediente aislado o derivado de lúpulo, incluyen, pero no están limitados a, ñumulona, cohumulona, adhumulona, ísohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . Los compuestos preferidos pueden contener substituyentes, como se muestra en la fórmula anterior. La identificación de humulona de extracto de lúpulo como un inhibidor de resorción de hueso se reporta en Tobe, H y col. 1997. (Bone resorption Inhibitors from hope extract. Biosci. Biotech, Biochem 61(1)158-159.) Tobe y col., solamente describe el uso de humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona e isoadhumulona para tratar osteoporosis . Los estudios posteriores por el mismo grupo caracterizaron el mecanismo de acción de humulona como inhibición de transcripción de gene de COX-2 después de estimulo de TNFalfa de células MC3T3, El [Yamamoto, K. 2000. Supresión de transcripción de gene de ciclooxigenasa-2 por humulón de extracto de lúpulo de cerveza estudiado con referencia al receptor glucocorticoide. FEBS Letters 465:103-106]. Los autores concluyeron que la acción de humulona (también humulón) fue similar a aquella de glucocorticoides, pero que la humulona no funcionó a través del receptor de glucocorticoide. Mientras que estos resultados establecen que la humulona inhibe síntesis de PGE2 en células MC3T3 (osteoblastos) en el nivel de gene, un experto en el ramo no supondría que estos resultados ocurrirían necesariamente en células inflamatorias inmunes u otras lineas de células . El ejemplo 5 en la presente demuestra el alto grado de selectividad de tejido de compuestos de lúpulo y derivados. Las modalidades preferidas proporcionan composiciones y métodos para inhibir la expresión de COX-2, modular tejido NFkB específicamente y célula específicamente, inhibiendo síntesis de prostaglandinas selectivamente en células de meta, e inhibiendo la respuesta inflamatoria selectivamente en células de meta. Los métodos preferidos comprenden un paso de administrar a un mamífero una composición de las modalidades preferidas, las modalidades preferidas comprenden una fracción aislada o derivada de lúpulo. Una cierta composición comprende ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácido isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, o lúpulo agotado de extracto de lúpulo o derivados del mismo. Los compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar por un supragénero a continuación.
(Supragénero) , en donde R' se selecciona' del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH(C¾) CH2CH3; y en donde R, T, X y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un 7rorbital, entonces el R, T, X o Z adyacente también es un % orbital, formando de esta manera un enlace doble. Otros compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar por un género a continuación: (Género A) en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2CH3. Otros compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar por un género a continuación: (Género B) en donde R' ser selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. Las modalidades preferidas contemplan composiciones que comprenden ácidos beta o ácidos beta isomerizados o reducidos. De preferencia, el ácido alfa, ácido isoalfa, ácido isoalfa reducido, ácido tetra-hidroisoalfa, ácido hexa-hidroisoalfa, ácido beta, o lúpulo agotado de las modalidades preferidas se hace de extracto de lúpulo. Más preferentemente, el ácido alfa, ácido isoalfa, ácido isoalfa reducido, ácido tetra-hidroisoalfa, ácido hexa-hidroisoalfa, ácido beta, o lúpulo agotado de las modalidades preferidas se hace de extracto de C02 de lúpulo . Triptantrina Las modalidades preferidas pueden proporcionar composiciones y métodos para inhibir la expresión de COX-2, modular tejido NFkB específicamente e inhibir síntesis específicamente de célula de prostaglandinas selectivamente en células de meta, e · inhibir respuesta inflamatoria selectivamente en células de meta. Los métodos preferidos comprenden un paso de administrar a un mamífero una composición de las modalidades preferidas. Una cierta composición comprende triptantrina y conjugados de la misma . Ilustrada en la Figura 4, la triptantrina es un compuesto natural encontrado en ciertas hierbas, tales como Polygonum tinctorium e Isatis tinctoria. En la medicina china tradicional, esta hierba se conoce como Da Qing Ye o Qing Dai . La hierba ha demostrado actividad antibacterial y antiviral. Tiene propiedades antipiréticas, antiinflamatorias y coleréticas . La actividad fagocítica aumentada de leucocitos y relajamiento de músculo suave intestinal son propiedades adicionales de Qing Dai. Romero Ciertas de las modalidades preferidas también incluyen entregar una cantidad efectiva de romero, extracto de romero, o compuestos derivados de romero con la fracción aislada o derivada de lúpulo o triptantrina. Las adiciones preferidas incluyen, pero' no están limitadas a, romero, extracto de romero, o aquellos compuestos conocidos por encontrarse en romero o extractos de romero. Estos incluyen 1,8-cineol, ácido 19-alfa-hidroxiursólico, ácido 2-/?-hidroxioleanólico, ácido 3-0-acetiloleanólico, ácido 3-0-acetilursólicof 6-metoxi-luteolin-7-glucósido, 6-metoxiluteolina, 6-metoxiluteolin-7-glucosida, metoxiluteolin-7-metiléter, 7-etoxi-rosmanol, alfa-amirina, alfa-humuleno, ácido alfa-hidroxihidrocafeico, alfa-pineno, alfa-terpineno, acetato de alfa-terpinenilo, alfa-terpineol, alfa-tujona, apigenina, apigenin-7-glucosido, curcumeno, alcohol de bencilo, ß -amirenona, ?-andrina, yS-elemeno, jS-pineno, betulin**, ácido betulinico**, borneol, · nornil-acetato, ácido cafeico, canfeno, canfor, ácido carnósico**, carnosol**, carvacrol**, carvona, cariofileno, cariofileno-óxido, ácido clorogénico** , diosmetina**, gamma-terpineno, hesperidin, isoborneol, limoneno*, luteolin*, luteolin-3' -0- (3"-0-acetil) -?-D-glucuronida, luteolin-3' -0- (4"-0-acetil) -/?-D-glucoronida, luteolin-3' -0-?-D-glucuroni-da, luteolin-7-glucosido, metil-eugenol, mirceno, ácido neo-clorogénico, nepetina, ácido octanoico, ácido oleanólico, p-cimeno, piperitenona, rosmanol, ácido rosmárico, rosmaricina, rosmaridifenol, ácido rosmarinico, rosmarinol, rosmariquinona, sabineno, acetato de sabinilo, salicilatos, ácido salicilico-2-bet-aD-glucosido, escualeno, texpinen-4-ol, perpinoleno, timol, trans-anetol, trans-carveol, ácido ursólido, verbenona, y zingibereno. De las especies enumeradas, aquellas que contienen cuando menos un asterisco (*) se prefieren y aquellas que contienen dos asteriscos (**) se prefieren particularmente. Triterpenos y Lactonas de Diterpeno Algunas de las modalidades preferidas también incluyen entregar una cantidad efectiva de una especie de triterpeno o especie de lactona de diterpeno con la fracción aislada o derivada de lúpulo o triptantrina . Los triterpenos preferidos incluyen ácido oleanólico, y ácido ursólico. Ambos ácido ursólico y oleanólico se encuentran en una amplia variedad de botánicos. Las lactonas de diterpeno, tales como andrografolida, se pueden obtener de Andrographis paniculata. Las especies de lactona de diterpeno, tales como andrografolida, y triterpenos, tales como ácido ursólico y ácido oleanólico, se encuentran comúnmente en plantas y se usan por sus propiedades antiinflamatorias. Los efectos antiinflamatorios de estos compuestos se han descrito en la literatura desde 1960. Su mecanismo de acción se cree que se debe (i) a la inhibición de liberación de histamina de células de castaña o (ii) a la inhibición de actividad de lipoxigenasa y ciclooxigenasa reduciendo de esta manera la síntesis de factores inflamatorios producidos durante la cascada de ácido araquidónico. Puesto que andrografolida y ácido oleanólico se ha encontrado que promueven la curación de úlceras estomacales, es improbable que la actividad de ciclooxigenasa que es inhibe sea COX-1. Asimismo, la andrografolida y ácido oleanólico son antioxidantes potentes, capaces de inhibir la generación intermediarios de oxigeno reactivos y restaurar niveles de glutationa de tejido después de esfuerzo. Por ejemplo, las fuentes botánicas para ácido ursólico se pueden seleccionar del grupo que consiste en Adina piluifera, Agrimonia eupatoria, Arbutus unedo, Arctostaphylos ura-ursi, Artocarpus heterophyllus, Catalpa bignoniodes, Catharanthus roseus, Chimaphila umbellata, cornus florida, Cornus officinalis, Crataegus cuneata, Crataegus leavigata, Cragáegus pinnatifida, Cryptostegia grandiflia, Elauagnus pungens, Eriobotrya japónica, Eucalyptus citriodora, Forsythia suspensa, Gaultheria fragrantissima, Glenchoma hederacea, Hedyotis diffusa, helichrysum angustifolium, Humulos lupulus, Hyssopus officinalis, Ilex paraguariensis, Lavandula angustifolia, Lavandula latifolia, Leonurus cardiaca, Ligustrum japonicum, Lintonia acidissima, Lycopus europeus, Malus domestica, Marubium vulgare, Melaleuca leucadendra, Melissa officinalis, Mentha spicata, Mentha x rotundifolia, Monarda didyma, Nerium oleander, Ocimum basilicum, Ocimum basilicum, Ocimum basilicum, Ocimum baslicum, Ocimum canum, Origanum majorana, Origanum vulgare, Plantago asiática, Plantago major, Plectranthus amboinicus, Prunell vulgaris, Prunella vulgaris, Prunus cerasus, Prunus laurocerasus, Prunus pérsica, Pronus serotipa spp serótina, Psidium guajava, Púnica granatum, Pyrus communis, Rhododendron dauricum, Rhododendron ferxugineurn, R ododendron ponticum, Rosmarinus officinalis, Rubus fruticosus, Salvia officinalis, Salvia sclarea, Salvia triloba, Sambucus nigra, Sanguisorba officinalis, Satureja hortensis, Satureja montana, Surbus aucabaria, Syringa vulgaris, Teucrium chamaedrys Tecrium polium, Teucrium spp, Thevetia peruviana, Thymus serpyllum, Thymus vulgaris, uncaria tomentosa, Vaccinium corymobosum, Vaccinium myrtillus, Vaccinium vitis idaea, Verbena officinalis, Viburnum opulus var. Opulus, Viburnum prunifoliu, Vinca minor y Zizyphus ju uba. De manera similar, el ácido oleanólico se encuentra en Achyranthes áspera, Achyranthes bidentiata, Adina piluifera, Ajpocynum cannabinum, Akebia quinata, Allium cepa, Allium sativum, Arctostaphylos uva-ursi, Caléndula officinalis, Catharanthus roseus, Centaurium erythraea, Chenopodium album, Citrullus colocynthis, Cnicus benedictus, Cornus officinalis, Crataegus pinnatifida Cyperus rotundus, Daernonorops draco, Diospyros kaki, Elaeagnus pungens, Eleutherococcus senticosus, Eribotrya japónica, Eugenia caryophyllata, Forsythia suspensa, Glechoma hederacea, Harpagophtum procumbens, Hederá helix, Hedyotis diffusa, helianthus annuus, Hemsleys amabilis, Humulus lupulus, Hyssopus officinalis, Ilex rotunda, Lavandula latifolia, Leonurus cardiaca, Ligustrum japonicum, Ligustrum licidum, Lquidambar orientalis, Liquidambar styraciflua, Loranthus parasiticus, Luffa aegyptiaca, Melaleuca leucadendra, melissa officinalis, Mentha spicata, Mentha x rotundifolia, Momordica cochinchinensis, Myristica fragrans, Myroxylon balsamum, Nerium oleander, Ocimum suave, Ociumum basilicum, Olea europaea, Origanum majorana, Origanum vulgare, Paederia scandens, Panbax · ginseg, Panax japonicus, Panax quiquefolius, Patrinia scabiosaefolia, Phytolacca americana, Plantago major, Plectranthus amboinicus, Prunella vulgaris, Prunus cerasus, Psidiura guajava, pulsatilla chinenisis, Quiqualis indica, Rosmarinus officinalis, Salvaia officinalis, Salvia sclarea, Salvia triloba, Sambucus nigra, Satureja hortensis, Satureja montana, S ertia chenensis, Swertia diluta, Swertia mileensis, Syzgium aromaticum, Thumus serpyllum, Thymus vulgaris, Trachycarpus fortunei, Uncaria tomentosa, Vaccinium corymbosum, vaccinium myrtillus, Viburnum prunifolium, Viscum álbum, Vitis vinifera, o Zizyphys jujuba.
Las fuentes botánicas preferidas para ácido ursólico es un miembro seleccionado del grupo que consiste en Ligustrum japonicum, Plantago asiática, Plantago major, Prunus species, Uncaria tomentosa, Zizyphus jujuba, Cornus officinalis, Eucalyptus citriodora, Forsyt ia suspensa, Lavandula latifolia, Malus domestica, Neium oleander, Ocimum baslicum, Púnica granatum, Pyrus communis, Rosmarinus officinalis, Salvia triloba, Sorbus aucabaria, Vaccinium myrtillus, Vaccinium vitisidaea, y Viburnum opulus var. opulus . Las fuentes botánicas más preferidas para ácido ursólico es un miembro seleccionado del grupo que consiste en Ligustrum japonicum, Plantago asiática, Plantago major, Prunus species, Uncaria tomentosa y Zizyphus jujuba. La fuente botánica preferida para ácido oleanólico es un miembro seleccionado del grupo que consiste en Eleutherococcus sneticosus, Ligustrum japonicum, Ligustrum lucidum, Panax ginseng, Panax japonicus, Panax quinquefolius, Plantago major, Prunella vulgaris, Vitis -vinifera, Zizyphus jujuba, Achyranthes bidentiata, Allium cepa, Allium sativum, Cornus officinalis, Daemonorops draco, Forsythia suspensa, Prunus cerasus, Quisqualis indica, Rosmarinus officinalis, Salvia tribloba, Zyzygium aromaticum, Thymus vulgaris, Uncaria tomentosa, Viccinium corymbosum, y Vaccinium myrtillus. La fuente botánica más preferida para ácido oleanólico es un miembro seleccionado del grupo que consiste en Eleutherococcus senticosus, Ligustrum japonicum, Ligustrum lucidum, Panax ginseng, Panax japonicus, Panax quinquefolius, Plantago major, Prunella vulgaris Vitis vinifera y Zizyphus jujuba. La Figura 5 ilustra las estructuras químicas generales del género triterpeno y ácido ursólico y ácido oleanólico como una especie con ese género. Los terpenoides representativos dentro del género son ácido 18-a-glicirretínico**, ácido 18-/?-glicirretínico** ácido 2-a-3-a-dihidrooxiurs-12-3n-28-ónico*, ácido 3-a-hidroxiursólico*, ácido 3-oxo-ursólico*, butilina**, ácido betulinico**, celastrol*, ácido eburicoico, friedelina*, glicirrizina, gipsogenina, ácido oleanólico**, ácido oleanólico-3-acetato, ácido paquímico, ácido pinocólico, soforadiol, soyasapogenol A, soyasapogenol B, tripterina**, triptofenolida*, ácido tumulósico, ácido ursólico**, ácido ursólico-3-acetato, uvaol*, y ß -sitosterol. De las especies listadas, aquellas que contienen cuando menos un asterisco (*) se prefieren y aquellos que contienen dos asteriscos (**) se prefieren particularmente. Ejemplos de especies de lactona de diterpeno incluyen, pero no están limitados a, andrografolida, dehidroandrografolida, desoxiandrografolida, neoandrografolida, selenoandrografolida, homoandrografolida, andrografán, amdrografón, andrografosterina, 1, 4-desoxi-l-oxoandrografolida, 14-desoxi-ll, 12-didehidroandrografolida, andrografisida, y lactona de edelina. Composiciones y Combinaciones Sinergisticas Las composiciones preferidas pueden funcionar para inhibir específicamente expresión de COX-2, para modular NFkB, para inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, o para inhibir respuesta de inflamación selectivamente en células de meta. Las modalidades preferidas incluyen composiciones que contienen fracciones o compuestos aislados o derivados de lúpulo o composiciones que contienen trxptantrina y conjugados de la misma. Una modalidad preferida comprende composiciones que contienen fracciones o compuestos aislados o derivados de lúpulo. Los ejemplos de fracciones aisladas o derivados de lúpulo son ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos ísoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. Los compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar mediante un supragénero a continuación: (Supragénero) en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, idroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH(CH3)CH2CH3; y en donde R, T, X y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un p orbital,, entonces el R. T. X, o Z adyacente también es un % orbital, formando de esta manera un enlace doble. Otros compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar por un género a continuación: (Género A) , en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(C¾)2, y CH(CH3)CH2CH3. Otros compuestos preferidos de las fracciones aisladas o derivadas de lúpulo se pueden representar por un género a continuación: (Género B) , en donde R' se selecciona a partir del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, C¾CH(CH3)2, y CH {CH3) CH2CH3. Los ejemplos de compuestos preferidos de un ingrediente aislado o derivado de lúpulo, incluyen, pero no están limitados a, humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. Los compuestos preferidos pueden contener substituyentes, como se muestra en la fórmula anterio . Otra modalidad comprende composición que contiene triptantrina y conjugados de la misma. Otras modalidades se relacionan con combinaciones de componentes. Las composiciones preferidas pueden funcionar para inhibir específicamente expresión de COX-2, para modular NFkB, para inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células meta, o para inhibir respuesta de inflamación selectivamente en células de meta, incluyendo efectos sinergísticos . Una modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo y como un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste de romero, un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma, y triptantrina o conjugados de los mismos. Otra modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, triptantrina o conjugados del mismo y como un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste de un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo, romero, un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma. Dosificación El nivel de dosificación seleccionado dependerá de la actividad de la composición particular, la ruta de administración, la severidad de la condición que se está tratando o previniendo, y la condición e historia médica anterior del paciente que se está tratando. Sin embargo, queda dentro de la experiencia en el ramo empezar dosis de la composiciones a niveles inferiores a los requeridos para lograr el efecto , terapéutico deseado y aumentar .gradualmente la dosificación hasta que se alcanza el efecto deseado. Si se desea, la dosis diaria efectiva se puede dividir en múltiples dosis para propósitos de administración, v.gr., dos a cuatro dosis separadas al dia. Se entenderá, sin embargo, que el nivel de dosis especifico para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores que incluyen peso corporal, salud general, dieta, tiempo y ruta de administración, combinación con otras composiciones y la severidad de la condición particular que se está tratando o previniendo.
Las modalidades preferidas incluyen entregar una cantidad efectiva de fracciones de lúpulo, compuestos de lúpulo, o derivados de lúpulo solos o en combinación con otros ingredientes activos. De preferencia, la dosis diaria de las composiciones preferidas se formularían ara entregar aproximadamente 0.5 a 10,000 mg de ácido alfa, ácido isoalfa, ácido isoalfa reducido, ácido tetra-hidroisoalfa, ácido hexa-hidroisoalfa, ácido beta, o lúpulo agotado por día. Más preferentemente, una dosis diaria efectiva de composiciones preferidas se formularía para entregar aproximadamente 50 a 7500 mg, aproximadamente 100 a 5000 mg, aproximadamente 200 a 3000 mg, o aproximadamente 500 a 2000 mg de ácidos alfa, ácido isoalfa, ácido isoalfa reducido, ácido tetra-hidroisoalfa, ácido hexa-hidroisoalfa, ácido beta, o lúpulo agotado por día. De preferencia, la dosis diaria efectiva se administra una vez o dos veces al día. Una cierta modalidad proporciona una composición que comprende alrededor de 0.5 a 800 mg de ácido isoalfa o ácido isoalfa reducido, más preferentemente alrededor de 50 a 400 mg o alrededor de 100 a 200 mg de ácido isoalfa o ácido isoalfa reducido al día. Otra cierta modalidad proporciona una composición que comprende aproximadamente 10 a 3000 mg de ácido isoalfa reducido, ácido tetra-hidroisoalfa, o ácido hexa-hidroisoalfa al día, más preferentemente alrededor de 50 a 2000 mg, alrededor de 100 a 1500 mg, o alrededor de 200 a 1000 mg, de ácido isoalfa reducido, ácido tetra-hidroisoalfa, o ácido hexa- idroisoalfa por dia. Todavía otra cierta modalidad proporciona una composición que comprende aproximadamente 50 a 7500 mg de lúpulo agotado por dia, de preferencia aproximadamente 100 a 6000 mg, aproximadamente 200 a 5000 mg, o aproximadamente 500 a 3000 mg de lúpulo agotado al día. Las modalidades preferidas incluyen entregar una cantidad efectiva de triptantrina o conjugados de la misma solos o en combinación con otros ingredientes activos. De preferencia, una dosis diaria de composiciones preferidas se formularían para entregar aproximadamente 0.0005 a 50 mg de triptantrina/kg de pero corporal por día. Más preferentemente, una dosis diaria efectiva de composiciones preferidas se formularían para entregar aproximadamente 0.01 a 10 mg o aproximadamente 0.1 A 5 mg de triptantrina/kg de peso corporal por día. De preferencia, una dosis diaria de composiciones preferidas se formularían para entregar aproximadamente 0.035 a 3500 mg de triptantrina por día. Más preferentemente, una dosis diaria efectiva de composición preferida se formularía para entregar aproximadamente 0.7 a 700 mg, aproximadamente 1 a 500 mg o aproximadamente 10 a 100 mg de triptantrina por día. De preferencia, la dosis diaria efectiva se administra una o dos veces al dia. Las modalidades preferidas incluyen entregar una cantidad efectiva de romero o un extracto o derivado compuesto de romero en combinación con otros ingredientes activos. De preferencia, una dosis diaria de composiciones preferidas se formularia para entregar aproximadamente 0.5 a 5000 mg de romero, un extracto de romero, o compuesto derivado de romero por dia. Más preferentemente, una dosis diaria efectiva de composición preferida se formularia para entregar aproximadamente 5 a 2000 mg o aproximadamente 100 a 1000 mg de romero, un extracto de romero, o compuesto derivado de romero por dia. De preferencia, la dosis diaria efectiva se administra una o dos veces al dia. Una cierta modalidad proporciona una composición que comprende aproximadamente 75 mg de extracto de romero o compuesto derivado de romero o derivado, que se administra una o dos veces al dia. Las modalidades preferidas incluyen entregar una cantidad efectiva de un triterpeno o especia de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de los mismos en combinación con otros ingredientes activos . De preferencia, una dosis diaria de composiciones preferidas se formularia para entregar aproximadamente 0.0005 a 50 mg de triterpeno o lactona de diterpeno/kg de peso corporal por dia. Más preferentemente, una dosis diaria efectiva de composiciones preferidas se formularían para entregar aproximadamente 0.01 a 10 mg o aproximadamente 0.1 a 1 mg de triterpeno o lactona de diterpeno/kg de peso corporal por día. De preferencia, una dosis diaria de composiciones preferidas se formularían para entregar aproximadamente 0.035 a 3500 mg de triterpeno o especie de lactona de diterpeno por día. Más preferentemente, una dosis diaria de composiciones preferidas se formularía para entregar aproximadamente 0.7 a 700 mg de triterpeno o especie de lacto de diterpeno por día. De preferencia, la dosis diaria efectiva se administra una o dos veces al día. De preferencia, una modalidad proporciona una composición que contiene un extracto de romero y un triterpeno, tal como ácido oleanólico, junto con un ingrediente activo, tal como una fracción aislada o derivada de lúpulo o triptantrina o conjugada del mismo. De preferencia, una modalidad proporciona una composición que comprende aproximadamente 0.01 a 500 mg de extracto de romero y aproximadamente 0.01 a 500 mg de ácido oleanólico. De preferencia, una modalidad proporciona una composición capaz de producir concentraciones en tejidos de meta de 0.1 a 10 ug/g de tejido de extracto de romero y aproximadamente 0.1 a 25 ug/g de tejido de ácido oleanólico. Una composición de modalidades preferidas para aplicación tópica contendría aproximadamente 0.001 a 10 por ciento en peso, de preferencia aproximadamente 0.1 a 1 por ciento en peso de un componente de extracto de lúpulo o derivado o triptantrina o conjugado de la misma. Las modalidades preferidas producirían concentraciones de suero en la escala de aproximadamente 0.0001 a .10 uM, de preferencia aproximadamente 0.01 a 1 uM de una fracción aislada o derivada de lúpulo o triptantrina o conjugado de la misma. Las modalidades preferidas para aplicación tópica pueden comprender además un ingrediente adicional seleccionado de romero, un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma, una fracción aislada o derivada de lúpulo o triptantrina o conjugados de la misma, a concentraciones de cada componente de 0.001 a 10 por ciento en peso, de preferencia 0.1 a 1 por ciento en peso. Las modalidades preferidas producirían concentraciones de suero en las escalas de aproximadamente 0.001 a 50 uM, de preferencia aproximadamente 0.1 uM a 5 uM del ingrediente adicional . Una cierta composición comprende un primer componente seleccionado de una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente que comprende un extracto o compuesto derivado de romero, un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivado o conjugados del mismo, una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma, o triptantrina o conjugados de la misma. De preferencia, la relación en peso del primer comppnente, es decir, una fracción aislada o derivada de lúpulo al segundo componente, es decir un extracto o compuesto derivado de romero, un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma, o triptantrina o conjugados de la misma, está dentro de una escala de alrededor de 100.1 a alrededor de 1:100; de preferencia de alrededor de 50:1 a alrededor de 5:50, más preferentemente alrededor de 10:1 a alrededor de 1:10. Una cierta composición comprende un primer componente de triptantrina y jugados de la misma, y un segundo componente que comprende fracción de lúpulo, compuesto de lúpulo, derivado de lúpulo, romero, un extracto o compuesto derivado de romero, o especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, o una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma. De preferencia, la relación en peso del primer componente, es decir, triptantrina y conjugados de la misma, al segundo componente, es decir, fracción de lúpulo, compuesto de lúpulo, derivado de lúpulo, romero, un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, o una especie de lactona de diterpeno o derivados o conjugados de la misma, está dentro de una escala de alrededor de 100:1 a alrededor de 1:100, de preferencia alrededor de 50:1 a alrededor de 1:50; más preferentemente alrededor de 10:1 a alrededor de 1:10, aún más preferentemente alrededor de 1:1. Se entiende que un experto en el ramo puede usar fácilmente las cantidades arriba descritas o cantidades intermedias apropiadas que son efectivas para una actividad deseada. Aplicaciones de Composiciones Preferidas Como se manifestó anteriormente, el concepto generalmente mantenida (dogma COX) es que COX-1 se expresa constitutivamente en la mayoría de los tejidos mientras que COX-2 es la enzima inducible disparada por estímulos proinflamatorios que incluyen mitógenos, citoquinas y lipopolisacárido bacterial (LPS) en células in vitro y en sitios inflamados in vivo. Basados principalmente en estas diferencias en expresión, COX-1 se ha caracterizado como una enzima de manejo de casa y se piensa que está involucrada en mantener funciones fisiológicas tales como citoprotección. de la mucosa gástrica, regulación de flujo de sangre renal, y control de agregado de plaqueta. COX-2 se considera que media principalmente la inflamación, aún cuando se encuentra expresión constitutiva en el cerebro, riñon y el tracto gastrointestinal. Por lo tanto, seria deseable regular descendentemente la expresión de COX-2 específicamente de tejido o específicamente de célula. Esta regulación descendente se puede lograr modulando NFkB. Ejemplos de células de meta incluyen, pero no están limitadas a, células inflamatorias, células pulmonares, células de microglia y tumor. Los ejemplos de células de no meta incluyen, pero no están limitadas a, células mucosales gástricas, neurales, y renales. Las composiciones tienen aplicaciones amplias. Las composiciones preferidas pueden ser útiles para tratar condiciones, tales como cáncer, enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades neurológicas . Las composiciones preferidas también se cree que son útiles para tratar condiciones, tales como infecciones de HIV-1, infecciones de rinovirus y enfermedades cardiovasculares. Las modalidades preferidas serian útiles para, pero no limitadas a un número de condiciones inflamatorias y pueden incluir condiciones asociadas con activación específica de tejido de NFkB. De esta manera, la invención incluye tratamiento de inflamación en un sujeto, y tratamiento de otros desórdenes asociados con inflamación, tales como, como un analgésico en el tratamiento de dolor y dolores de cabeza, o como un antipirético para el tratamiento de fiebre. Ejemplos adicionales de estas modalidades preferidas serian útiles para tratar artritis, incluyendo pero no limitado a artritis reumatoide, espondiloatopatias, artritis de gota, osteoartritis, eritematosis de lupus sistémico, y artritis juvenil. Estas modalidades preferidas serian útiles en el tratamiento de asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis y condiciones relacionadas con la piel tales como psoriasis, eczema, quemaduras y dermatitis. Las modalidades preferidas también serian útiles para tratar condiciones gastrointestinales tales como enfermedad de intestino inflamatorio, enfermedad de Crohn, gastritis, síndrome de intestino irritable y colitis ulcerativa y para la prevención o tratamiento de cáncer tal como cáncer colorectal . Las modalidades preferidas serian útiles para tratar inflamación en enfermedades tales como enfermedades vasculares, dolores de cabeza de migraña, periarteritis nodosa, tiroiditis, anemia aplástica, enfermedad de Hodgkin, escleroma, fiebre reumática, diabetes tipo I, miastenia grave, esclerosis múltiple, sacoidosis, síndrome nefrótico, síndrome de Behchet, polimiositis, gingivitis, hipersensibilidad, hinchazón que ocurre después de lesión isquemia de miocardio, enfermedad periodontal, insulitis y lo semejante. Las modalidades preferidas también serian útiles en el tratamiento de enfermedades oftálmicas, tales como retinopatías, conjuntivitis, uveitis, fotofobia ocular, y de lesión aguda del tejido de ojo. Las modalidades preferidas también serian útiles en el tratamiento de inflamación pulmonar, tal como aquella asociada con infecciones virales y fibrosis cistica. Las modalidades preferidas también serian útiles en el tratamiento de asma. Las modalidades preferidas también serian útiles para el tratamiento de ciertos desórdenes del sistema nervioso tales como demencias corticales incluyendo mal de Alzheimer. Las modalidades preferidas son útiles como agentes antiinflamatorios, tal como para el tratamiento de artritis, con el beneficio adicional de tener efectos laterales significativamente menos dañinos. Como inhibidores de biosintesis mediada de COX-2 de PGE2, estas composiciones también serian útiles en el tratamiento de rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterieesclerosis, y daño de sistema nervioso central que resulta de ataque, isquemia y trauma. Las modalidades preferidas también serína útiles para el tratamiento de fibromialgia . Puesto que COX-2 también puede jugar un papel en la regulación de función osteoblástica, las modalidades preferidas también pueden ser útiles para tratar y prevenir osteoporosis . Kanematsu y col. (J Bone Miner Res 1997 Nov;12 (11) .1789-96) describe que la interluequina 1 (IL-1) y factor alfa de necrosis de tumor (TNF-alfa) se han implicado en la patogénesis de osteoporosis . Estas citoquinas proinflamatorias inducen ambos COX-2 y sintasa de óxido nítrico (iNOS) con la liberación de PGE2 y NO, respectivamente. Determinaron la interacción entre trayectorias de COX y NOS y su papel en la regulación de función osteoblástica en células MC353-E1. De conformidad con modalidades preferidas, el animal puede ser un miembro seleccionado del grupo que consiste en humanos, primates no humanos, perros, gatos, aves, cabellos, rumiantes y otros animales de sangre caliente. Las modalidades- preferidas están dirigidas principalmente al tratamiento de seres humanos. La administración puede ser mediante cualquier método disponible al artesano experto, por ejemplo, por rutas oral, tópica, transdérmica, transmucosa, o parenteral. Además de ser útil para tratamiento humano, las modalidades preferidas también son útiles para tratamiento de otros animales, incluyendo caballos., perros, gatos, aves, ovejas, cerdos, etc. Una cierta formulación para el tratamiento de inflamación inhibiría la inducción y actividad de COX-2 con poco efecto sobre la síntesis de PGE2 en la mucosa gástrica. Históricamente, los NSAIDs usados para tratamiento de inflamación carecían de la especificidad de inhibir COX-2 sin afectar la síntesis de PGE2 en células mucosales gástricas. Por lo tánto, estas drogas irritaban y dañaban el sistema gastrointestinal cuando se usan durante períodos prolongados . Las composiciones preferidas también pueden modular NF-kB. La modulación de NF-kB puede incluir regular niveles de NF-kB para tratar o inhibir una condición patológica en un mamífero. Por ejemplo, niveles anormales, tales como niveles aumentados, de NF-kB se pueden asociar con enfermedades y condiciones indeseables . NF-kB regula la expresión de gene de COX-2. ' Por lo tanto, las composiciones preferidas que modulan NF-kB también pueden afectar la expresión de COX-2. Los resultados presentados en la presente indican que la modulación de NF-kB resulta en modulación de expresión de COX-2 en células de meta solamente, sin ninguna inhibición directa significativa de COX-2 u otras enzimas con trayectoria de PG. Por lo tanto, por ejemplo, las composiciones preferidas ofrecen la ventaja de efectos antiinflamatorios sin los efectos laterales de dañar mucosa gástrica, que están presentes en muchos NSAIDs existentes. Los NSAIDs existentes, tales como rofecoxib y celxobib, se suponen que inhiben la síntesis de prostaglandinas inhibiendo selectivamente la enzima COX-2. Sin embargo, todavía ocurren efectos laterales con estos NSAIDs existentes debido a la falta de inhibición selectiva total de COX-2. Los NSAIDs existentes pueden ser todavía promiscuos y afectar enzimas distintas a COX-2 para resultar en efectos laterales. Modulando NF-kB, las composiciones de modalidades preferidas actúan en una posición de corriente arriba y pueden inhibir la síntesis de COX-2 selectivamente en células de meta. Sin COX-2 en células de meta, la síntesis de prostaglandinas dirigida a reacciones inflamatorias también se pueden inhibir. Por lo tanto, la reacción inflamatoria se puede prevenir o detener. Mientras que COX-2 en células de meta se afecta, COX-1 y COX-2 en células de no meta permanecen sin afectar y continúan manteniendo funciones fisiológicas, tales como citoprotección de mucosa gástrica, regulación de flujo de sangre renal, y control de agregado de plaqueta. Puesto que las composiciones preferidas pueden afectar NF-kB, las modalidades preferidas también pueden ser útiles para tratar y prevenir una variedad de desórdenes incluyendo, pero no limitado a enfermedades autoinmunes, inflamatorias, neurológicas y cardiovasculares, y cáncer. Las modalidades preferidas pueden ser útiles para tratar y prevenir una condición patológica asociada con activación específica de tejido de NF-kB. NF-kB se puede encontrar en numerosos tipos de células y se encuentra que se activa por una amplia variedad de inductores. Durante la activación y transporte a los núcleos, NF-kB puede iniciar o regular una transcripción de gene de respuesta temprana ligando a motivos encontrados en las regiones de promotor o mejorador de genes específicos. La respuesta de NF-kB ocurre virtualmente en todos los tipos de célula en combinación con una variedad de coactivadores. Sin embargo, debido a que NF-kB solo no es capaz de activar sus genes cuando se liga a ADN, los genes exactos activados variarán dependiendo del contexto celular. Los coactivadores se cree que enlazan factores de transcripción ligados a mejorador, como NF-kB, a componentes de la maquinaria de transcripción basa, que luego transcriben el gene para generar la copia de mRNA. Por lo tanto, NF-kB se puede modular especifreamente en tejido o célula de manera de tratar y/o inhibir una variedad de condiciones patológicas . Por lo tanto, las composiciones que inhiben o activan metas específicas en la trayectoria de NF-kB proporcionan nuevos acercamientos en el tratamiento o prevención de un número de enfermedades serias, incluyendo cáncer y desórdenes inflamatorios. NF-kB es un factor de transcripción que está involucrado en una gama de fenómenos celulares, incluyendo inflamación, presentación de antígeno, inmunidad, producción de citoquina, apoptosis y cáncer. Por ejemplo, ya que NF-kB afecta las células pulmonares, una condición patológica se puede manifestar como asma ?/u otras condiciones pulmonares. NF-kB también está involucrado en condiciones colorectales, mamarias y de próstata, tales como cáncer, como mediado por PGE2. NF-kB está involucrado en estos cánceres y otros cánceres, como mediado por adhesión de célula a célula. NF-kB también está involucrado en réplica de HIV-1, resfrio y gripes. Como se manifiesta arriba, NF-kB se ha implicado en condiciones, tales como enfermedades autoinmunes, inflamatorias, neurológicas y cardiovasculares, y cáncer. Formulaciones Las composiciones preferidas se pueden administrar en la forma de un suplemento dietético o composición terapéutica. Las composiciones se pueden administrar oralmente, tópicamente, transdermalmente, transmucosalmente, parenteralmente, etc., en unidades de dosificación apropiadas, como se desee. Las composiciones preferidas para aplicación dietética pueden incluir diversos aditivos tales como otros componentes naturales o metabolismo intermediario, vitaminas y minerales, asi como ingredientes inertes tales como talco y estearato de magnesio que son excipientes convencionales en la fabricación de tabletas y cápsulas. Por ejemplo, una modalidad comprende ingredientes activos de composiciones preferidas en combinación con glucosamina o sulfato de condrotina. Como se utiliza en la presente, "portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, revestimientos agentes de retardo isotónicos y de absorción, edulcorantes y lo semejante. Estos portadores farmacéuticamente aceptables se pueden preparar de una amplia variedad de materiales incluyendo, pero no limitado a diluyentes, aglutinantes y adhesivos, lubricantes desintegrantes, agentes colorantes, agentes de volumen, agentes saborizantes, agentes edulcorantes y materiales diversos tales como tampones y absorbentes que se pueden necesitar a fin de preparar una composición terapéutica particular. El uso de estos medios y agentes para substancias farmacéuticamente activas es bien conocido en el ramo. Excepto en lo que se refiere a cualquier medio o agente convencional que es incompatible con los ingredientes activos, su uso en las composiciones preferidas se contempla. En una modalidad, se incluyen talco y estearato de magnesio en la formulación. Otros ingredientes conocidos para afectar la fabricación de esta composición como una barra dietética o alimento funcional pueden incluir saborizantes, azúcares, aminoazúcares, proteínas y/o almidones modificados, asi como grasas y aceites . Los suplementos dietéticos, lociones o composiciones terapéuticas de modalidades preferidas se pueden formar de cualquier forma conocida por uno de experiencia en el ramo. En una modalidad, la composición se formula en una cápsula o tableta usando técnicas disponibles a uno experto en el ramo. En forma de cápsula o tableta, la dosis diaria recomendada para un humano adulto o animal de preferencia estarla contenida en una a seis cápsulas o tabletas. Sin embargo, las composiciones preferidas también se pueden formular en otras formas convenientes, tales como una solución o suspensión inyectable, una solución o suspensión de aerosol, una loción, goma, pastilla, alimento o articulo de comida. El alimento, botana, goma o pastilla puede incluir cualquier ingrediente ingerible, incluyendo edulcorantes, saborizantes, aceites, almidones, proteínas, frutas o extractos de fruta, vegetales o extractos de vegetal, granos, grasas animales o proteínas. De esta manera, las composiciones preferidas se pueden formular en cereales, artículos de botana tales como hojuelas, barras, gomas, dulces masticables o pastillas de disolución lenta. Las modalidades preferidas contemplan el tratamiento de todos tipos de enfermedades basadas en inflamación, tanto agudas como crónicas. Las formulaciones preferidas reducen la respuesta inflamatoria y de esta manera promueven la curación de, o previenen el daño adicional al tejido afectado. Una portador farmacéuticamente aceptable también se puede utilizar en las composiciones y formulaciones preferidas . Ensayo usando Linea de Células AGS A fin de identificar drogas de COX-2 selectivas, ha sido práctica común utilizar el Ensayo de Sangre Entera Modifcada/Célula de T.D. Warner y col., Selectividades de droga no esferoide para ciclooxigenasa-1 en lugar de ciclooxigenasa-2 están asociadas con toxicidad gastrointestinal humana: Un análisis in vitro completo, Proc. Nati. Sci. USA 96:7563-7568 (1999). Cuando fracciones de lúpulo se prueban de conformidad con este procedimiento, los extractos de lúpulo no proporcionan valores de IC50 en la escala de ug/ L necesaria, puesto que no son inhibidores directos de COX-2. Esta falta de inhibición directa de COX-2 se demostró por Tobe, H., y col. 1997. (Bone resorption Inhibitors form hop extract. Biosci. Biotech. Biochem 61(1)158-159) usando enzima de COX-2 purificada. De manera similar, el EJEMPLO 4 de esta solicitud demuestra que, cuando se prueba de conformidad con el Ensayo de Sangre Entera Modificada/Célula, los compuestos de lúpulo y derivados producen concentraciones inhibitorias medias mayores a 25 ug/mL. Estas concentraciones inhibitorias medias elevadas son farmacológicamente inapropiadas . Por lo tanto, el Ensayo de Sangre entera Modificada como se describe por Warner es un procedimiento inválido para formular combinaciones potencialmente efectivas terapéuticamente que contienen lúpulo o derivados de lúpulo. El descubrimiento de COX-2 hizo posible el diseño de drogas que reducen la inflamación sin remover los PGs protectores en el estómago y riñon hechos por COX-1. Uno de nuestros acercamientos es tamizar composiciones de las modalidades preferidas usando células animales in vitro para determinar la actividad inhibitoria de COX-2 y COX-1 empleando PGE2, que tiene acciones citoprotectoras y juega un papel al mantener la integridad de la mucosa gastrointestinal, como en punto final. De manera secundaria, diferentes tipos de célula se usan para confirmar resultados. El proceso de tamizado indicaría composiciones que tienen actividad COX-2 especifica e inhibición de COX-1 limitada. Las composiciones de modalidades preferidas se pueden probar en dos tipos de células: 1) células pulmonares humanas u otra línea de células para determinar o identificar las cantidades y relaciones óptimas para composiciones que comprenden más de un componente; y 2) células epiteliales gástricas humanas (línea de células AGS), una línea de células de tracto gastrointestinal y un sistema de modelo para determinar la toxicidad que está típicamente relacionada con inhibición de COX-1 que se requiere para curar heridas (tales como úlceras) . Por lo tanto, las composiciones de modalidades preferidas que pueden inhibir COX-2 o inducción de COX-2 se pueden tamizar seleccionando composiciones que tienen baja o ninguna actividad en células AGS y buena actividad en células pulmonares humanas u otra linea de células . En modalidades particulares, la invención proporciona una composición que comprende, como un primer componente, una fracción derivada de lúpulo; y como un segundo componente, cuando menos un miembro seleccionado a partir del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especie de lactona de dxterpeno, y triptantrina. La fracción derivada de lúpulo se puede extraer con CO2. La fracción derivada de lúpulo también se puede seleccionar a partir del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hcxa-hidroisoalfa, y lúpulo agotado. En otra modalidad, una composición de la invención puede contener una fracción derivada de lúpulo, que comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2 y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X y Z son independientemente seleccionados del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I y p orbital, con la condición de que uno de R. T, X o Z es un p orbital, entonces el R, T, X o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble. En todavía otra modalidad, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y En donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. En todavía otra modalidad, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde Rf se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2CH3. En una composición de la invención, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . En una composición de la invención, un segundo componente puede ser un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo de consiste en 1.8-cineol, ácido 19-alfa-hidroxiursólico, ácido 2-beta-hidroxioleanólico, ácido 3-0-acetiloleanólico, ácido 3-0-acetilursólico, 6-metoxi-luteolin-7-glucosido, 6-metoxiluteolina, 6-metoxiluteolin-7-glucósido, metoxiluteolin-7-metiléter, 7-etoxi-rosmanol, 7-metoxi-rosmanol, alfa-artiirina, alfa- umuleno, ácido alfa-hidroxihidrocafeicof alfa-pineno, alfa-terpineno, acetato de alfa-perpinenilo, alfa-terpineol, alfa-tujona, apigenina, apigenin-7-glucosido, curcumeno, alcohol de bencilo, beta-amirenona, beta-amirina, beta-elemeno, beta-pineno, betulina, ácido betulínico, borneol, acetato de bornilo, ácido cafeico, anfeno, canfor, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, carvona, cariofileno, óxido de cariofileno, ácido clorogénico, diosmetina, gamma-terpineno, hesperidina, isoborneol, limoneno, luteolina, luteolin-3'' -O- (3"-0-acetil) -S-D-glucorinida, luteolin-3' -O- (4"-0-acetil) -?-D-glucuronida, luteolin-3' -0-?-D-gluconida, luteolin-7-glucosido, metil-eugenol, mirceno, ácido neo-clorogénico, nepetina, ácido octanoico, ácido oleanólico, p-cimeno, piperitenona, rosmanol, ácido rosmárico, rositiariciña, rosmaridifenol, ácido rosemarinico, rosmarinol, rosmariq inona, sabineno, acetato de sabinilo, salicilatos ácido salicilico-2-beta-D-glucosido, escualeno, terpinen-4-ol, terpinoleno, timol, trans-anetol, trans-carveol, ácido ursólico, verbenona y zingibereno. En otra modalidad, el segundo componente puede ser un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en betulina, ácido betulinico, ácido carnósico, . carnosol, carvacrol, ácido clorogénico, diosmetina, limonerío y luteolina. En una modalidad todavia adicional, el segundo componente puede ser una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que consiste en ácido 18-a-glicirretínico, ácido 18-?glicirretínico, ácido 2-a-3-a-di idrooxiurs-12-3n-28-ónico, ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulinico, celastrol, ácido eburicoico, friedelina, glicirrizina, gipsogenina, ácido oleanólico, ácido oleanólico-3-acfetato, ácido paquimico, ácido pinicólico, soforadiol, soyasapogenol A, soyasapogenol B, tripterina, trptofenolida, ácido tumulósico, ácido ursólico, ácido ursólico-3-acetato, uraol, y ?-sitosterol . Además, el segundo componente puede ser una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que consiste en ácido 18-a-glicirretínico, ácido 18-?glicirretínico, ácido 2-a-3-a-dihidrooxiurs-12-3n-28-ónico, ácido 3-a- idroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulinico, celastrol, friedelina, ácido oleanólico, tripeterina, triptofenolida, ácido ursólico, y uvaol. Además, el segundo componente puede ser triptantrina, una especie de triterpeno, o una especie de lactona de diterpeno que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. Una composición de la invención también puede comprender aproximadamente 0.5 a 10000 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo o aproximadamente 50 a 7500 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. Una composición de la invención puede comprender adicionalmente alrededor de 0.035 a 3500 mg de triptantrina, o aproximadamente 017 a 700 mg de triptantrina, en donde el segundo componente es triptantrina. Una composición de la invención también puede comprender aproximadamente 0.5 a 5000 mg del segundo componente, o aproximadamente 5 a 2000 mg del segundo componente, en donde el segundo componente se selecciona a partir del grupo que consiste en romero, extracto derivado de romero, y un compuesto derivado de romero. Adicionalmente, una composición de la invención puede comprender aproximadamente 0.035 a 3500 mg de una especie de triterpeno, o aproximadamente 0.7 a 700 mg de una especie de triterpeno, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno. En todavía otra modalidad, una composición puede comprender alrededor de 0.001 a 10 por ciento en peso del primer componente, o alrededor de 0.1 a 1 por ciento en peso del primer componente. Además, una composición puede comprender alrededor de 0.001 a 10 por ciento en peso del segundo componente, o alrededor de 0.1 a 1 por ciento en peso del segundo componente. En una composición de la invención, la relación del primer componente al segundo componente puede estar en la escala de alrededor de 100:1 a alrededor de 1:100, o alrededor de 50:1 a alrededor de 1:50. Cualquiera de las composiciones de la invención pueden comprender además un portador farmacéuticamente aceptable, y dicha composición que comprende un portador farmacéuticamente aceptable se puede usar en los métodos de la invención. La invención también proporciona una composición que comprende como un primer componente, una fracción aislada o derivada de lúpulo; y como un segundo componente, cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, y triptantrina. La fracción aislada o derivada de lúpulo se puede extraer con CO2. La fracción aislada o derivada de lúpulo se puede seleccionar del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. la fracción aislada o derivada de lúpulo puede comprender un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2C¾; y en donde R, T, X y Z son independientemente seleccionados a partir del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y % orbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un % orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble. La fracción aislada o derivada de lúpulo también puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona a partir del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y e donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. La fracción aislada o derivada de lúpulo adicionalmente puede comprender un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona a partir del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. La fracción aislada o derivada de lúpulo puede comprender adicionalmente un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, di idro-isocohumulona, di idro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . Adicionalmente, el segundo componente de dicha composición puede ser un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en 1,8-cineol, ácido 19-alfa-hidroxiursólido, ácido 2-?-hidroxioleanólico, ácido 3-O-acetiloleanólico, ácido 3-O-acetilursólico, 6-metoxi-luteolin-7-glucósido, 6-metoxiluterolin, 6-metoxiluterolin-7-glucosido, metoxiluteolin-7-metiléter, 7-etoxi-rosmanol, 7-metoxi-rosmanol, alfa-amirina, alfa-humuleno, ácido alfa-hidroxihidrocafeico, alfa-pineno, alfa-terpineno, acetato de alfa-terpinenilo, alfa-terpnineol, alfa-tu oña, apigenina, apigenin-7-glucosido, curcumeno, alcohol de bencilo, beta-amirenona, beta-amirina, beta-elmeno, beta-pineno, betulina, ácido betulinico, borneol, acetato de bornilo, ácido faceico, canfeno, canfor, ácido carnósico, carnasol, carvacrol, carvona, cariofileno, óxido de cariofileno, ácido clorogénico, diosmetina, gamma-terpinena, hesperidina, isoborneol, limoneno, luteolina, luteolin-3' -0- (3"-0-acetil) -beta-D-glucoronida, luteolin-3' -0- (4"-0-acetil ) -beta-D-glucoronida, luteolin-3' -O-beta-D-glucoronida, luteolin-7-glocosido, metil-eugenol, mirceno, ácido neo-clorogénico, nepetina, ácido octanoico, ácido oleanólido, p-cimeno, piperitenona, rosmanol, ácido rosmárico, rosmaricina, rosmaridifenol, ácido rosemarinico, rosmarinol, rosmariquinona, sabineno, acetato de sabinilo, salicilatos, ácido salicilico-2-beta-D-glucosido, escualeno, terpinen-4-ol, pterpinoleno, timol, trans-anetol, trans-carveol, ácido ursólico, verbenona y zinzibereno. El segundo componente también puede ser un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo de consiste en betulina, ácido betulinico, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, ácido clorogénico, diosmetina, limoneno y luteolina. Adicionalmente, el segundo componente puede ser triptantrina que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. En una modalidad particular, la composición puede comprender aproximadamente 0.5 a 10000 mg o aproximadamente 50 a 70 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. Además, la composición puede comprender aproximadamente 0.35 a 3500 mg de triptantrina, o aproximadamente 0.7 a 700 mg de triptantrina, en donde el segundo componente es triptantrina. Además, la composición puede comprender alrededor de 0.5 a 5000 mg del segundo componente, o alrededor de 5 a 2000 mg del segundo componente, en donde el segundo componente se selecciona del grupo que consiste en romero, extracto derivado de romero, y un compuesto derivado de romero. Además, la composición puede comprender aproximadamente 0.001 a 10 por ciento en peso del primer componente, o aproximadamente 0.1 a l por ciento en peso del primer componente. Asimismo, la composición puede comprender aproximadamente 0.001 a 10 por ciento en peso del segundo componente, aproximadamente 0.1 a 1 por ciento en peso del segundo componente. En otra modalidad, una relación del primer componente al segundo componente puede estar en la escala de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 1:100, o en la escala de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 1:50. La composición puede comprender además un portador farmacéuticamente aceptable. En todavía otra modalidad, la invención proporciona un método para modular respuesta inflamatoria en células, el método comprendiendo poner en contacto las células con una composición de la invención. Por ejemplo, el método se puede llevar a cabo usando una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especie de lactona de diterpeno, y triptantrina. La invención también proporciona un método para tratar o inhibir una condición patológica en un mamífero asociada con activación específica de tejido de inflamación, el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especia de lactona de diterpeno, y triptantrina. En dicho método para tratar o inhibir una condición patológica, la composición puede contener una fracción aislada o derivada de lúpulo que se puede seleccionar del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. En otra modalidad del método, la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . En el método, la fracción aislada o derivada de lúpulo también puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; Y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2 y CH (CH3) CH2C¾; En todavía otra modalidad del método, la fracción aislada o derivada de lúpulo puede comprender adicionalmente un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; Y En donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2C¾ . En todavía otra modalidad del método, la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, di idro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-ad umulona. En una modalidad particular, la composición puede comprender aproximadamente 0.5 a 10000 mg o aproximadamente 50 a 7500 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. Además, la composición puede comprender alrededor de 0.001 a 10 por ciento en peso o alrededor de 0.1 a 1 por ciento en peso de la fracción aislada o derivada de lúpulo. En una modalidad particular, el segundo componente es romero. En otra modalidad, el segundo componente es un extracto derivado de romero. En todavía otra modalidad, el segundo componente es una especie de triterpeno. En un método de la invención, la composición puede comprender además un tercer componente diferente al segundo componente, en donde el tercer componente se selecciona del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especie de lactona de diterpeno, y triptantrina. En una modalidad particular, el segundo y tercer componentes son un extracto derivado de romero y triptantrina, respectivamente. En otra modalidad del método, el segundo componente puede ser un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en 1,8-cineo, ácido 19-alfa-hidroxiursólico, ácido 2-beta-hidroxioleanólico, ácido 3-0-aceloleanólico, ácido 3-0-acetilursólico, 6-metoxi-luteolin-7-glucosido, 6-raetoxiluteolina, 6-metoxiluteolin-7-glucósido, metoxiluterin-7-metiléter, 7-etoxi-rosmanol, 7-metoxi-rosmanol, alfa-amirina, alfa-humuleno, ácido alfa-hidroxihidrocafeico, alfa-pineno, alfa-terpineno, acetato de alfa-terpinenilo, alfa-terpineol, alfa-tujona, apigenina, apigenin-7-glucosido, curcumeno, alcohol de bencilo, beta-amirenona, beta-amirina, beta-elemeno, beta-pineno, betulina, ácido betulinico, borneol, acetato de bornilo, ácido cafeico, canfeno, canfor, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, carvona, cariofileno, ácido de cariofileno, ácido clorogénico, diosmetina, gamma-terpineno, hesperidina, isoborneol, limoneno, luteolina, luterolin-3' -0- (3"-0-acetil) -beta-D-glucoronida, luteolin-3' -0- (4"-0-acetil) -beta-D-glucuronida, luteolin-3' -O-beta-D-glucoronida, luteolin-7-glucosido, metileugenol, mjirceno, ácido neo-clorogénico, nepentina, ácido octanoico, ácido oleanólico, p-cimeno, piperitenona, ¦rosmanol, ácido rosmárico, rosmaricina, rosmaridifenil, ácido rosmarínico, rosmarinol, rosmariquinona, sabineno, acetato de sabinilo, salicilatos, ácido salicilico-2-beta-D-glucosido, escualeno, perpinen-4-ol, terpineleno, timol, trans-anetol, trans-cerveol, ácido ursólico, verbenona y zingibereno. En dicho método de la invención, el segundo componente también puede ser un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en betulina, ácido betulinico, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, ácido clorogénico, diosmetina, limoneno, y luteolina. la composición utilizada en el método puede comprender alrededor de 0.5 a 5000 mg del segundo componente, o alrededor de 5 a 2000 mg del segundo componente, en donde el segundo componente se selecciona del grupo que consiste en romero, extracto derivado de romero, y un compuesto derivado de romero. En todavia otra modalidad, el segundo componente utilizado en un método de la invención puede ser una especia de triterpeno o una especie de lactona de diterpeno que se conjuga a un miembro-seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos; aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato y glutationa . En todavia otra modalidad de un método de la invención, el segundo componente puede ser una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que consiste en ácido 18-a-glicirretinico, ácido 18-beta-glicirretinico, ácido 2-a-3-a-dihidrooxiurs-12-3n-28-ónico, ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulinico, celastrol, ácido eburicoico, friedelina, glicirrizina, gipsogenina, ácido oleanólico, ácido oleanólico-3-acetato, ácido paquímico, ácido pinicólico, soforadiol, soyasapogenol A, soyasapogenol B, tripterina, tritofenolida, ácido tumulósico, ácido ursólico, ácido ursólico-3-acetato, uvaol, y beta-sitoesterol. Además, el segundo componente puede ser una especie de triterpeno que se selecciona a partir del grupo que consiste en ácido 18-a-glicirretínico, ácido 18-beta-glicirretinico, ácido 2-a-3-a dihidrooxiurs-12-3n-28-ónico, ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulinico, celastrol, friedelina, ácido oleanólico, tripterina, triptofenolida, ácido ursólido, y uvaol. En una modalidad particular de un método de la invención, la composición puede comprender alrededor de 0.035 a 3500 mg de una especie de triterpeno o alrededor de 0.7 a 700 mg de una especie de triterpeno, en donde el segundo componente es una especia de triterpeno. En otra modalidad del método, el segundo componente es triptantrina que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. En todavía otra modalidad de un método de la invención, la composición puede comprender aproximadamente 0.035 a 3500 mg de triptantrina, o aproximadamente 0.7 a 700 mg de triptantrina, en donde el segundo componente es triptantrina . Además, la composición utilizada en un método puede comprender aproximadamente 0.001 a 10 por ciento en peso del segundo componente o aproximadamente 0.1 a 1 por ciento en peso del segundo componente. Además, una relación del primer componente al segundo componente puede estar en la escala de alrededor de 100:1 a alrededor de 1:100 o en la escala de alrededor de 50:1 a alrededor de 1:50. En dicho método para tratar e inhibir una condición patológica, la condición patológica se puede seleccionar del grupo que consiste en enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades neurológicas, y cáncer. Además, la condición patológica se puede seleccionar del grupo que consiste en inflamación, desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel condiciones gastrointestinales, cáncer, desórdenes oftálmicos, inflamación pulmonar, desórdenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterieesclerosis y daño del nervioso central. En métodos de la invención, la composición se puede administrar en una variedad de formas, incluyendo oralmente, tópicamente, parenteralmente o rectalmente . La invención proporciona además un método para modular la cantidad de actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2) en células de meta sin modular substancialmente la actividad de COX-2 en células de no meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especie de lactona de diterpeno, y triptantrina. En dicho método de la invención, las células de no meta también se pueden poner en contacto con una fracción aislada o derivada de lúpulo. El paso de contacto se puede realizar in vivo. En un método de la invención, la actividad de COX-2 se puede modular mediante inhibición del gene de COX-2. Adicionalmente, la invención proporciona un método para tratar o inhibir una condición patológica en un mamífero que involucra inhibir la inducibilidad o actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2), el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero,. una especie de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina. En dicho método de la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo se puede seleccionar del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalf reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. Si se desea, en dicho método de la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragenero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona a partir del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo, en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un % orbital, entonces el R, T, X o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . En dicho método de la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo, también puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo Y en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, C¾CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3 En dicho método de la invención, la fracción aislada y derivada de lúpulo también puede comprender un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3CH2CH3. En dicho método de la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo puede comprender un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoad umulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohuruulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-admumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . Además, el segundo componente puede ser un extracto derivado de romero. Además, el segundo componente puede ser una especie de triterpeno. En otra modalidad de un método de la invención, la composición puede comprender además un tercer componente diferente al segundo componente, el tercer componente estando seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una lactona de diterpeno, ,y triptantrina. En una modalidad particular, el segundo y tercer componentes son un extracto derivado de romero y triptantrina, respectivamente.
En todavía otra modalidad de dicho método de la invención, el segundo componente es un compuesto derivado de romero que se selecciona a partir del grupo que consiste en 1,8-cineol, ácido 19-alfa-hidroxiursólico, ácido 2-beta-hidroxioleanólico, ácido 3-0-acetioleanólico, ácido 3-O-acetilursólico, 6-metoxi-luteolin-7-glucosido, 6-metoxiluteolin, 6-metoxiluteolin-7-glucosido, metoxiluteolin-7-metiléter, 7-etoxi-rosmanol, 7-metoxi-rosmanol, alfa-amirina, alfa-humuleno, ácido alfa-hidroxihidrocafeico, alfa-pineno, alfa-terpineno, acetato de alfa-terpinenilo, alfa-terpineol, alfa-tujona, apigenina, apigenin^7-glucósido, curcumeno, alcohol de bencilo, beta-amirenona, beta-amirina, beta-elemeno, beta-pineno, betulina, ácido betulínico, borneol, acetato de bornilo, ácido cafeico, canfeno, canfor, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, carvona, cariofileno, óxido de cariofileno, ácido clorogénico, diosmetina, tamma-terpineno, hesperidina, isoborneol, limoneno, luteolina, luteolin-r3' -0- (3"-0-acetil) -beta-D-glucuronida, luteolin-3' -0- (4"-0-acetil) -÷beta-D-glucoronida, luteolin-3' -O-beta-D-glucuronida, luteolin-7-glucosido, metil-eugenol, mirceno, ácido neo-clorogénico, nepetina, ácido octanoico, ácido oleanólico, p-cimeno, piperitenona, rosmanol, ácido rosmárico, rosmaricina, rosmaridifenol, ácido rosmarinico, rosmarinol, rosmariquinona, sabineno, acetato de sabinilo, salicilatos, ácido salicilico-2-beta-D-glucosido, escualeno, terpinen-4-ol, terpinoleno, timol, trans-anetol, trans-carveol, ácido ursólico, verbenona, y zingibereno. En otra modalidad de dicho método de la invención, el segundo componente puede ser una especia de triterpeno o una especie de lactona de diterpeno que se conjuga a un miembro seleccionado a partir del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. Adicionalmente, el segundo componente puede ser una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que consiste en ácido 18-a-glicirretínico, ácido 18-beta-glicirretinico, ácido 2-a-3-a-dihidrooxiurs-12-3n-28-ónico, ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betuli'nico, celastrol, ácido eburicoico, friedelina, glicirrizina, diposegenina, ácido oleanólico, ácido oleanólico-3-acetato, ácido paquímico, ácido pinicólico, soforadiol, soyasapogenol A, soyasapogenol B, tripterina, triptofenolida, ácido tumulósico, ácido ursólico, ácido ursólico-3-acetato, uvarol, y beta-sitoesterol . Asimismo, el segundo componente puede ser triptantrina que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. Si se desea, en dicho método de la invención, una relación del primer componente al segundo componente que estar en la escalo de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 1:100 o en la escala de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 1:50. En una modalidad particular de un método de la invención, la condición patológica que inhibe la inducibilidad o actividad de COX-2 se puede seleccionar del grupo que consiste en inflamación desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel, condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmico, inflamación pulmonar, desórdenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterioesclerosis, y daño nervioso central. Asimismo, la invención proporciona un método para inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina. En dicho método de la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo se puede seleccionar del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. Además en dicho método de la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo puede comprender un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2CH3; y en donde R, T, . X y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble. En otra modalidad del método de la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH ( CH3 ) CH2CH3. En todavía otra modalidad de dicho método de la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y .en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH ( CH3) CH2CH3.
En otra modalidad de dicho método de la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo puede comprender un compuesto seleccionado del grupo que consiste en · humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, di idro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhhumulonaf tetrahidro, isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulon, a hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . En una modalidad adicional, la invención proporciona un método para inhibir una respuesta inflamatoria selectivamente en células de meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina . En dicho método, la fracción aislada o derivada de lúpulo se puede seleccionar del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. En dicho método, la fracción aislada o derivado de lúpulo puede comprender un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se seleccionas a partir del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH3CH2; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente de H, F, Cl, Br, I, y jcorbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . En otra modalidad de dicho método, la fracción aislada o derivado de lúpulo puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2C¾ . En todavía otra modalidad de dicho método, la fracción aislada o derivada de lúpulo puede comprender un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(C¾)2, y CH (C¾) CH2CH3. En dicho método de' la invención, la fracción aislada o derivada de lúpulo puede comprender un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-ad umulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . En todavía otra modalidad, la invención proporciona un método para modular la respuesta inflamatoria en células, el método comprendiendo poner en contacto las células con una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo. En una modalidad adicional, la invención proporciona un método para tratar o inhibir una condición patológica en un mamifero asociada con una activación especifica de tejido de inflamación, el método comprendiendo administrar al mamifero una composición que comprende una fracción derivada de lúpulo. En dicho método, la fracción derivada de lúpulo se puede seleccionar a partir del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. En una modalidad de dicho método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste de carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2,¾CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2C¾; y en donde R, T, X, y Z son independientemente seleccionados del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un % orbital, entonces el r, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble. En otra modalidad de dicho método de la invención, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH(CH3) CH2CH3. Además de dicho método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo, y en donde R' se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2CH3- En otra modalidad de dicho método de la invención, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. En una modalidad particular del método, la composición puede comprender alrededor de 0.5 a 10000 rag o alrededor de 50 a 7500 mg de la fracción derivada de lúpulo. Además, la composición pede comprender alrededor de 0.001 a 10 por ciento en peso o alrededor de 0.1 a 1 por ciento en peso de la fracción derivada de lúpulo. En dicho método de la invención, la' condición patológica se puede seleccionar del grupo que consiste en enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades neurológicas, y cáncer. En otra modalidad, la condición patológica se puede seleccionar del grupo que consiste en inflamación, desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel, condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmicas, inflamación pulmonar, desórdenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterioesclerosis, y daño nervioso central. En todavía otra modalidad, la invención proporciona un método para modular la cantidad de actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2) en las células de meta sin modular substancialmente actividad de COX-2 en células de no blanco, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción derivada de lúpulo. En dicho método de la invención, las células de no meta también se pueden poner en contacto con una fracción derivada de lúpulo. El paso de contacto se puede realizar in vivo. En el método de la invención, la actividad de COX-2 se puede modular mediante la inhibición del gene de COX-2. En todavía otra modalidad, la invención proporciona un método para tratar o inhibir una condición patológica en un mamífero que involucra inhibir la inducibilidad o actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2), el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción derivada de lúpulo. En dicho método, la fracción derivada de lúpulo se puede seleccionar del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. En otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CK(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un p orbital, entonces el R, T, X o Z adyacente también es un % orbital, formando de esta manera un enlace doble . dicho método, la fracción derivada de lúpulos puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste de carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R'* se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CE(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. En otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(C¾)2, y CH (C¾) CH2C¾. En todavía otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto seleccionado a partir del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, iso umulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. En dicho método de la invención, la condición patológica se puede seleccionar del grupo que consiste en inflam ción, desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel, condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmicas, inflamación pulmonar, desórdenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterioesclerosis, y daño nervioso central. Además, la invención proporciona un método para inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, el método comprendiendo poner en contacto con las células con una fracción derivada de lúpulo. En dicho método, la fracción derivada de lúpulo se puede seleccionar del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. En otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(C¾)2, y CH (C¾) CH2C¾; y en donde R, T, X y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un TI orbital, formando de esta manera un enlace doble . En todavía otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH(C¾)2, y CH (CH3) CH2CH3. En todavía otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2C¾ . En una modalidad adicional del método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, " tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . La invención proporciona además un método para modular NF-kB en células no asociadas con resorción de hueso, el método comprendiendo poner en contacto las células con una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo . La invención proporciona adicionalmente un método para tratar o inhibir una condición patológica distinta a osteoporosis en un mamífero asociada con activación específica de tejido de NF-kB, el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo. En dicho método, la fracción se puede derivar de lúpulo y seleccionar del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. En otra modalidad del método, la fracción se puede derivar de lúpulo y puede comprender un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona a partir del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R2 se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . En otra modalidad del método, la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. En todavía otra modalidad del método, la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona a partir del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, Y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona a partir del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. En todavía otra modalidad del método, la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, iso umulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . En una modalidad particular del método, la composición utilizada en un método de la invención puede comprender alrededor de 0.5 a 10000 mg o alrededor de 50 a 7500 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. Asimismo, la composición puede comprender alrededor de 0.001 a 10 por ciento en peso o alrededor de 0.1 a 1 por ciento en peso de la fracción aislada o derivada de lúpulo. En un método de la invención que modula NFkB, la condición patológica se puede seleccionar del grupo que consiste en enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades neurológicas, enfermedades cardiovasculares, y cáncer. Asimismo, la condición patológica en un método para modular NFkB se puede seleccionar del grupo que consiste en asma, réplica de HIV-1, resfrio, y gripe. En otra modalidad, la invención proporciona un método para modular la cantidad de actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2) en células de meta no asociadas con resorción de hueso sin modular substancialmente actividad de COX-2 en células de no meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción aislada o derivada de lúpulo. En el método, las células de no meta también se pueden poner en contacto con una fracción aislada o derivada ele lúpulo. El paso de contacto se puede realizar in vivo. En el método, la actividad de COX-2 se puede modular mediante inhibición del gene COX-2. Adicionalmente, la invención proporciona un método para tratar o inhibir una condición patológica distinta a osteoporosis en un mamífero, que involucra inhibir la inducibilidad o actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2), el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo. En una modalidad particular, la fracción se puede derivar de lúpulo y seleccionar del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. En otra modalidad del método, la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona a partir del grupo- que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo, en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH(CH3)CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble. En todavía otra modalidad del método, la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH(CH3)CH2CH3.
En todavía otra modalidad del método, la fracción se puede derivar de lúpulo y comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; Y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2C¾. En una modalidad particular del método, la fracción se puede derivar de lúpulo y puede comprender un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isoco umulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona .
En otra modalidad del método, la condición patológica se puede seleccionar del grupo que consiste en inflamación, desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmicas, inflamación pulmonar, desórdenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterieesclerosis, y daño del nervio central. Asimismo, la invención proporciona un método para inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, el método comprendiendo poner en contacto las. 'células con una fracción derivada de lúpulo. En dicho método, la fracción derivada de lúpulo se puede seleccionar a partir del grupo que consiste en ácidos de isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa- idroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. En dicho método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona a partir del grupo que consiste en carbonilo, idroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo, en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3, y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y % orbital, con la condición de que si uno de r, T, X, o Z es un % orbital, entonces el r, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . En otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3.
En todavía otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene una fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, O , y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. En todavía otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . Además, la invención proporciona un método inhibir una respuesta inflamatoria selectivamente en células de meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción derivada de lúpulo. En dicho método, la fracción derivada de lúpulo se puede seleccionar del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo -agotado . En dicho método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo, en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3, y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y % orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces los R, T, X, o Z adyacentes también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble .
En otra modalidad del método, la fracción derivada del lúpulo puede comprender un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo, y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, Y CH(CH3)C¾CH3. En todavía otra modalidad del método, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde Rf< se selecciona del grupo que consiste de CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) C¾CH3. En dicho método de la invención, la fracción derivada de lúpulo puede comprender un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . Se entiende que las composiciones de la invención descritas en la presente se pueden utilizar en los diversos métodos de la invención como se describe en la presente. La invención adicional proporciona un método para tratar o inhibir la obesidad en un mamifero, el método comprendiendo administrar al mamifero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina u otras composiciones de la invención, como se describe en la presente. Como se describe en la presente en los Ejemplos 1, 2 y 27, la linea de célula mucosal gástrica AGS puede funcionar como un sistema de modelo para determinar la toxicidad gastrointestinal potencial de agentes antiinflamatorios. En células AGS, COX-1 se expresa cuatro veces mayor que COX-2. La inhibición inferior de PGE2 en células AGS es favorable debido a que la línea de células AGS expresa más COX-1, que mantiene homeóstasis mucosal. La invención de esta manera también proporcionar un método para determinar toxicidad gastrointestinal potencial de un agente antiinflamatorio. El método puede incluir los pasos de poner en contacto una célula mucosal gástrica AGS con un agente antiinflamatorio; poner en contacto una célula inflamatoria de meta, por ejemplo, una célula A549, con el agente antiinflamatorio; determinar el 50% de concentración inhibitoria (IC50) de expresión de prostaglandina E2 (PGE2) para el agente antiinflamatorio en cada una de la célula AGS y la célula inflamatoria de meta; y determinar la relación del valor de IC5o de la célula AGS y el valor IC50 de la célula inflamatoria de meta, en donde una relación mayor de 1 indica toxicidad gastrointestinal potencial disminuida en una relación menos de 1 indica toxicidad gastrointestinal potencial aumentada. Como se describe en la presente, los ácidos alfa isomerizados reducidos y ácidos alfa isomerizados parecen inhibir expresión de COX-2 en lugar de directamente sobre PGE2 (ver Ejemplo 25) . Además, como se describe en la presente, el lúpulo no tiene efecto relacionado con dosis significativo sobre actividad de enzima de COX-1 o COX-2, soportando que el lúpulo y/o fracciones aisladas o derivadas de lúpulo afectan la expresión de COX-2 (ver Ejemplo 26) . La descripción a continuación es de ejemplos específicos que exponen modalidades preferidas y no se pretende que limiten el alcance. EJEMPLO 1 CÉLULAS MÜCOSALES GÁSTRICAS AGS EXPRESAN CONSTITUTIVAMENTE AMBAS CICLOOXIGENASA-1 Y CICLOOXIGENASA-2 Resumen - Este ejemplo demuestra que la línea de célula mucosal gástrica humana AGS, que posee expresión constitutiva de COX-1 y COX-2, tiene excelente potencial para servir como un modelo para determinar la toxicidad gastrointestinal de compuestos que inhiben ciclooxigenasa. El equipo utilizado en este ejemplo incluyó: una balanza analítica Modelo OHAS #E01140, un gabinete de bioseguridad Forma Modelo #F1214 (Marietta, Ohio) , diversas pipetas para entregar 0.1 a 100 uL (VWR, Rochester, NY) , un contador de tarja manual de célula (VWR Catálogo #23609-102, Rochester, NY) , una incubadora de C02, Forma Modelo #F3210 (Marietta, Ohio) , un hemacitómetro (Hausser Modelo #1492, Horsham, PA) , un microscopio invertido Leica Modelo #DM IL (Wetzlar, Alemania) , un Sistema de Pulido con Agua Plus PURELAB (U.S. Filter, Lowell, MA) , un refrigerador de 4°C (Forma Modelo #F3775, Marietta, Ohio), un mezclador de vórtice (VWR Catálogo #33994-306, Rochester, NY) , y un baño de agua de 37°C (Shel Lab Modelo #1203,· Cornelius, OR) . Químicos y reactivos - Juego de Prostaglandina E2 EIA Monoclonal se compró de cayman chemical (Ann Arbor, MI) . Antisueros policlonales de conejo antí-COX-1 y anti-COX-2 se obtuvieron de Upstate Biotechnology (CITY, NY) ; IgG-HRP anti-cabra de burro se obtuvo de San Cruz Biotechnology (City, CA) . Suero Bovino Fetal inactivado al calor (FBS-HI Cat. #35-011CV) , y Dulbeco's Modification of Eagle's Médium (DMEM Cat #10-013CV) se compró de Mediatech (herndon, VA) . Todos los reactivos convencionales se obtuvieron de Sigma (St. Louis, MO) y fueron los más puros comercialmente disponibles. Cultivó de Célula - La línea de célula mucosal gástrica humana AGS se obtuvo de American Type Culture Collection (ATCC número CRL-1739, Manassas, VA) y se subcultivó de conformidad con las instrucciones del proveedor. Las células se cultivaron rutinariamente a 37 °C con 5% de C02 en RPMI 1640 que contiene 10% de FBS, con 50 unidades de penicilina/mL, 50 ug de estreptomicina/mL, 5% de piruvato de sodio, y 5% de L-glutamina. Células que crecen exponencialmente se sembraron en placas de 6 pozos y se desarrollaron a confluencia. Una alícuota de 20 uL del medio sobrenadante se muestreó para determinación de contenido de PGE2. Luego las células se lavaron- en PBS, se rasparon y lisaron para inmunomanchado. Ensayo de proteína - Las concentraciones de proteína de lisados de célula se determinaron usando el Juego de cuantificación de Proteína NanoOrange con albúmina de suero bovino como la norma (Molecular Probes, Eugene, OE) de conformidad con el procedimiento proporcionado por el fabricante. La fluorescencia se determinó usando un Contador de Fluoro Packard, Modelo BF 10000 fluorómetro con el filtro de excitación ajustado a 485 nm y filtro de emisión ajustado a 570 nm usando la versión 3.0 de software de Packard PlateReader. El programa I-Smart provisto con la Packard PlateReader se usó para calcular la concentración de proteína. Inmunomanchado - se realizó manchado Western de COX-1 y COX-2 usando PAGErTM Gold Precast Gels (Bio Whittaker Molecular Applications (Rockland, ME) . Los lisados de célula AGS que contienen aproximadamente 60 ug de proteína se cargaron con Tampón de Muestra Laemmli hacia los pozos del gel en un volumen total de 30 uL. Las cámaras de electroforesis de minigel verticales se hicieron por Savant Instruments Inc. (Holbrook, NY) , modelo MV 120. Se corrieron geles a 40 mA/placa (corriente constante ( a temperatura ambiente hasta que la mancha azul de bromofenol alcanzó el fondo del gel, aproximadamente una hora. Los geles luego se mancharon en las membranas de transferencia de fluoruro de polivinilo (Pall Corporation, Ann Arbor, MI) , durante la noche, a 500 mñ. a 4°C. Marcadores de peso molecular Precisión Protein Standard, no manchados, escala amplia (BioRad, Hercules, CA) se usaron. El substrato quimiluminiscente de duración prolongada BioWest1®, un juego de substrato no isotópico, de peroxidasa de rábano para detección de mancha Western (Biolmaging Systems, Upland, CA) se usó para visualización de proteina. Las imágenes de manchas western se adquirieron usando una habitación oscura UVP Epi Chemi II (Biolmaging Systems), se analizaron y mejoraron mediante Software LabWorks1® Image Acquisition and Analysis (Biolmaging Systems) . Ensayo de PGE2 - Un procedimiento no radioactivo, comercial para cuantificación de PGE2 se empleó (Caymen Chemical, Ann Arbor, MI) y el procedimiento recomendado del fabricante se usó sin modificación. Brevemente, 25 uL del medio, junto con una dilución en serie de muestras convencionales de PGE2, se mezclaron con cantidades apropiadas de seguir etiquetado con acetilcolinesterasa y antisuero de PGE2, y se incubaron a temperatura ambiente durante 18 h. Después los pozos se vaciaron y enjuagaron con tampón de lavado, se añadieron 200 uL de substrato que contiene reactivo de Ellman para acetilcolinesterasa. La reacción se llevó a cabo en un agitador lento a temperatura ambiente durante 1 h y se determinó la absorción a 415 nm. La concentración de PGE2 se representó como picogramos por 105 células. Resultados - Como se ve en la Figura.6, la linea de célula AGS expresa constitutivamente ambos COX-1 y COX-2, con expresión de COX-1 aproximadamente 4 veces mayor que la expresión de COX-2. La síntesis de PGE2 en células de AGS durante 18 h fue 660 pg/105 células. De esta manera, este ejemplo demuestra que la linea de célula mucosal gástrica humana AGS, que posee expresión constitutiva de COX-1 y COX-2, tiene excelente potencial para servir como un modelo para determinar la toxicidad gastrointestinal de compuestos que inhiben la ciclooxigenasa . En el pasado, la hipótesis de COX-2 clásica se bajó al papel de expresión de COX-2 en la mucosa gastrointestinal. Mientras que en la mucosa gástrica normal COX-1 es la isozima COX predominante, como se demuestra en este ejemplo y en la literatura, hay evidente incrementante de que cantidad detectable de mRNA de COX-2 y proteina se expresan constitutivamente y son inducibles en ubicaciones especificas de la mucosa gástrica en ambos, animales y humanos [Halter, F., y col. (20' 01) cyclooxigenase 2-implications on maintenance of gastric mucosal integrity and ulcer healing: controversial issues and perspectives . Gut 49, 443-453] . Los estudios recientes en ratas han mostrado que mientras que la inhibición selectiva de, COX-1 o COX-2 no es ulcerogénica, la inhibición combinada de ambos COX-1 y COX-2 induce lesiones severas en el estómago e intestino delgado comparables con los efectos de NSAID tales como indometacina . Esta observación sugiere una contribución importante de COX-2 al mantenimiento de integridad mucosal gastrointestinal. EJEMPLO 2 INHIBICIÓN DE SÍNTESIS DE PGE2 EN CÉLULAS MUCOSALES GÁSTRICAS POR DROGAS ANTIINFLAMATORIAS NO ESTEROIDES Resumen - Este ejemplo ilustra que la inhibición de síntesis de PGE2 en células gástricas AGS por NSAIDs se correlaciona con su irritación gástrica clínica observada. Químicos - Se obtuvieron rofecoxib y celexocib. Diisofluorfosfato (DIFP) , nimensulida, ibuprofen, ácido salicílico, aspirina, indometacina y acetaminofen se compraron de Sigma (St. Louis, MO) . Todos los otros químicos se obtuvieron de proveedores como se describe en el Ejemplo 1. Células - Células A549 (epitelial pulmonar humana; ATCC numero CCL-185) y AGS (mucosa gástrica humana; ATCC número CRL-1739) se obtuvieron de American Type Culture Collection (Manassas, VA) y se subcultivaron de conformidad con las instrucciones del proveedor. Las células se cultivaron rutinariamente a 37 °C con 5% de C02 en RPMI 1640 que contiene 10% de FBS, con 50 unidades de penicilina/mL, 50 ug de estrptomicina/mL, 5% de piruvato de sodio, y 5% de L-glutamina. En el dia de los experimentos, células que crecen exponencialmente se cosecharon y lavaron con RPMI 1640 libre de suero. Las células A549 y AGS de fase log se colocaron en 8 x 104 células por pozo en 0.2 mL de medio de crecimiento por pozo en una placa de cultivo de tejido de 96 pozos. Para la determinación de inhibición de PGE2 por los compuestos de prueba en células A549, el procedimiento de Warner y col., también conocido como el protocolo WH A-COX-2 [Warner, T.D., y col. (1999) Nonsteroid drug selectivities for cyclo-oxygenase-1 rather than cyclo-oxygenase-2 are associated with human gastrointestinal toxicity: a full in vitro analysis. Proc Nati Acad Sci U S 96, 7563-7568] se siguió son modificaciones. Brevemente, 24 horas después de colocar en placas de las células A549, se añadió interleuquina-lbeta 810 ng/ml) para inducir la expresión de COX-2. Después de 24 horas, las células se lavaron con RPME 1640 libre de suero y los materiales de prueba, disueltos en DMSO y RPMI libre de suero, se añadieron a los pozos para lograr concentraciones finales de 25, 5.0, 0.5 y 0.05 ug/mL. Cada concentración se corrió en duplicado. Se añadió DMSO a los pozos de control en un volumen igual a aquel contenido en los pozos de prueba. Sesenta minutos después, se añadió A23187 (50 uM) a los pozos para liberar el ácido araquidónico . Veinticinco uL de medios se muestrearon de los pozos 30 minutos después para determinación de PGE2. Se utilizaron células AGS no estimuladas en estos estudios. Veinticuatro horas después de colocar en placas en las placas de microtitulo de 96 pozos, las células se lavaron con RPMI 1640 libre de suero y los materiales de prueba, de disolvieron en DMSO y RPMI libre de suero, se añadieron a los pozos para lograr las concentraciones finales de 25, 5.0, 0.5 y 0.05 ug/mL. Cada concentración se corrió en duplicado. Se añadió DMSO a los pozos de control en un volumen igual al contenido en los pozos de prueba. Sesenta minutos después, se añadió ácido araquidónico a los pozos para lograr una concentración final de 100 ?.?. Veinticinco uL de medio se muestraron de los pozos 30 minutos después de la adición de ácido araquidónico para determinación de PGE2.
Viabilidad de célula - Se determinó la viabilidad de célula mediante bromuro de 3- (4, 5-dimetiltiazol-2-) -il) -2, 5-difeniltetrazolio en ensayo colorimétrico basado en (MTT) (Sigma, St. Louis, MO) . La solución de MTT se añadió directamente a los pozos después de muestrear para determinación de PGE2. La absorción de cada pozo se leyó a 580 nm usando un lector de placa ELISA. No se observó toxicidad a las concentraciones más elevadas probadas para cualquiera de los compuestos . Cálculos - La concentración inhibitoria media (IC50) para síntesis de PGE2 se calculó usando CalcuSyn (BIOSOFT, Ferguson, MO) . Este paquete estadístico realiza múltiples cálculos de dosis de droga-efecto usando métodos de efecto medio descritos por T-C Chou y P. Talaly [(1984) Qunatitativa analysius of dose-effect relationships : the combined effects of múltiple drugs or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regul 22, 27-55] incorporada por la presente por referencia . Brevemente, el análisis correlaciona la "Dosis"' y el "Efecto" en la forma más simple posible: fa7fu = (C/Cm)m, en donde C es la concentración o dosis del compuesto y Cm es la dosis media-efectiva que significa la potencia. Cm se determina de la intercepción x- del trazo medio-efecto. La fracción afectada por la concentración del material de prueba es fa y la fracción no afectada por la concentración es fu (fu = 1 - fa) , El exponente m es el parámetro que significa la sigmoidicidad o forma de la curva de dosis-efecto. Se calcula por la inclinación del trazo de medio-efecto . La trazo de medio-efecto es una gráfica de x= log (C) vs y = log(fa/fu) y se basa en la forma logarítmica de la ecuación de medio-efecto de Chou. La bondad de ajuste para el dato a la ecuación de medio-efecto se representa por el coeficiente de correlación lineal r del trazo de medio-efecto. Usualmente, el dato experimental para sistemas de enzima o receptor tienen un r > 0.96, de cultivo de tejido un r > 0.90 y de sistemas animales un r > 0.85. En los estudios basados en células reportados aqui, todos los coeficientes de correlación lineal fueron mayores de 0.90. Los experimentos se repitieron tres veces en tres fechas diferentes . El por ciento de inhibición en cada dosis se promedio durante los tres experimentos independientes y se usó para calcular as concentraciones inhibitorias medias reportadas. Resultados - El inhibidor de COX-2 altamente especifico diisofluorfosfato exhibió una concentración inhibitoria media a células A549 de 1.19 ug/mL y no inhibió síntesis de PGE2 en células de AGS a la concentración más elevada probada de 25 ug/mL (Cuadro 3) . Rofecoxib y celexocib, drogas de COX-2 selectivas, fueron respectivamente 27- y 14-veces inhibidores más potentes de síntesis de PGE2 en las células A549 de meta que en las células mucosales gástricas AGS de no meta. Este descubrimiento demuestra no solamente la selectividad de COX-2, sino también la selectividad de tejido de meta consistente con su baja toxicidad gastrointestinal. Nimesulida, otro inhibidor de COX-2 selectivo, nuevo, fue igualmente potente en la inhibición de síntesis de PGE2 en ambas líneas de células. El agente antiinflamatorio acetaminofen, supuesto que inhiben una isozima no identificada de COX (COX-3) y que tiene baja toxicidad gastrointestinal, biosíntesis de PGE2 inhibida en células A549 pero no tuvo efecto sobre la síntesis de PGE2 en células mucosales gástricas AGS. Alternativamente y consistente con su toxicidad gástrica clínica demostrada, ibuprofen, aspirina e indometacina exhibieron todas más inhibición de síntesis de PGE2 en la línea de célula AGS que en las células A549 de meta. El ácido salicíclico, un agente antiinflamatorio que inhibe la expresión de COX-2 con poca irritación gástrica, fue inactivo en ambos modelos de célula. Cuadro 3. Concentraciones inhibitorias medias para compuestos de prueba en las líneas de célula A549 y AGS.
Compuesto IC50 A549 IC50 AGS IC50 AGS / [ug/mL] [ug/mL] IC50 a549 Diisofluorofosfato 1.19 >25 >21 Rofecoxib 0.081 2.21 27.3 Celexocib 0.004 0.055 13.8 Nimensu1ida 0.10 0.11 1.0 Ibuprofen 0.10 0.05 0.50 Aspirina 0.48 0.09 0.19 Indometacina 0.033 0.002 0.002 Ácido salicilico >25 >25 >1 Acetaminofen 0.607 >25 >41 Estos resultados validan el uso de la linea ce célula mucosal gástrica AGS para evaluar toxicidad gastrointestinal potencial de agentes antiinflamatorios capaz de inhibir la síntesis de PGE2. También demuestran especificidad celular en la acción de compuestos que inhiben COX- . Una relación de 1 para IC50 AGS/IC50 A549 indica que las IC50 que son las mismas para ambas, la célula AGS y células A549. Si la relación es superior a 1 para IC50 AGS/ICso A549, luego la inhibición de PGE2 es inferior para las células AGS. Una inhibición inferior de PGE2 en células AGS es favorable debido a que la línea de célula AGS expresa más COX-1, que mantiene homeóstasis mucosal. EJEMPLO 3 INHIBICIÓN DE SÍNTESIS DE PGE2 EN MACROFAGOS DE MURINA ESTIMULADOS Y NO ESTIMULADOS POR COMPUESTOS DE LEVADURA (Humulus lupulus) Y DERIVADOS Resumen - Este ejemplo ilustra la potencia de fracciones y derivados de lúpulo para inhibir síntesis de COX-2 de PGE2 de preferencia sobre síntesis de COX-1 de PGE2 en el modelo de macrofago de murina . Químicos y reactivos - El lipopolisacárido bacterial (LPS; B E. Coli 055 :B5) fue de Sigma (St. Louis, MO) . Fracciones de levadura (1) levadura alfa (1% de ácidos alfa; ??) , (2) aromalúpulo OE (10% de ácidos beta y 2% de ácidos alfa isomerizados, (3) isolúpulo (ácidos alfa isomerizados; IAA) , (4) solución de ácido beta (ácidos beta BA) , (5) hexalúpulo oro (ácidos alfa hexahidro isomerizados; HHIAA) , (6) redilúpulo (ácidos alfa isomerizados reducidos; RIAA) , (7) tetralúpulo (ácidos tetrañidro-iso-alfa THIAA) y ( 8 ) lúpulo agotado se obtuvieron de Betatech Hops Products (Washington, D.C., E.U.A. ) · Los lúpulos agotados se extrajeron dos veces con volúmenes iguales de etanol absoluto. El etanol se removió calentando a 40°C hasta que solamente un residuo pardo espeso permaneció. Este residuo se disolvió en DMSO se probó en células RAW 264.7. A menos que se anote de otra manera, todos los reactivos convencionales se obtuvieron de Sigma (St. Louis, MO) y fueron los más puros comercialmente disponibles. Todos los otros químicos y equipo fueron como se describen en los Ejemplos 1 y 2. Cultivo de célula - Células RAW 264.7, obtenidas de American Culture Collection (Catálogo #TIB-71, Manassas, VA), se desarrollaron en Dulbecco's odification of Eagle' s Médium (DMEM, Mediatech, Herndon, VA) y se mantuvo en fase log. El medio de. crecimiento de DMEM se hizo añadiendo 50 mL de FBS inacfivado con calor y 5 mL de penicilina/estreptomicina a una botella de 500 mL de DMEM y almacenando a 4°C. El medio de crecimiento se calentó a 37°C en baño de agua antes del uso. En el día uno del experimento, las células RAW 274.7 de fase log se colocaron en placas a 8 x 104 células por pozo en 0.2 mL de medio de crecimiento por pozo en una placa de cultivo de tejido de 96 pozos en la mañana. Al final del día uno (6 a 8 h después de colocar en placas), 100 uL de medio de crecimiento de cada pozo se removieron y reemplazaron con 100 uL de medio fresco. A 1.0 mg/mL de solución de material de LPS, usado para inducir la expresión de COX-2 en las células RAW 264.7, se preparó disolviendo 1.0 mg de LPS en 1 mL de DMSO. Se sometió a vórtice hasta que se disolvió y almacenó a 4°C. Antes del uso, se fundió a temperatura ambiente o en un baño de agua a 37 °C. En el día dos del experimento, los materiales de prueba se prepararon como 1000X de material en DMSO. En tubos centrífugos de 1.7 mL, 1 mi de DMEM sin FBS se añadió para concentraciones de prueba de 0.05, 0.0, 0.5 y 1.0 ug/mL. Dos uL del material 1000X DMSO del material de prueba se añadió al 1 mL de medio sin FBS . El tubo contenia la concentración final del material de prueba concentrado 2 veces y el tubo se colocó en una incubadora durante 10 minutos para equilibrar a 37 °C. Para síntesis de PGE2 asociada con COX-2, 100 uL de medio se removieron de cada pozo de las placas de célula preparadas en el día uno y se reemplazaron con 100 uL de concentración de 2X final equilibrada de los compuestos de prueba. Las células luego se incubaron durante 90 minutos. Veinte uL de LPS se añadieron a cada pozo de células para estimular para lograr una concentración final de 1 ug de LPS/mL y las células se incubaron durante 4 h. Las células se incubaron adicionalmente con 5 uM de ácido araquidónico durante 15 minutos. Veinticinco uL de medio sobrenadante para cada pozo se transfirió a un tubo de microfuga limpio para la determinación de PGE2 liberó hacia el medio. Después del estimulo de LPS, la apariencia de las células se observó y se determinó la viabilidad como se describe en el Ejemplo 2. No se, observó toxicidad a las concentraciones más elevadas probaras para cualquiera de los compuestos . Veinticinco uL de medio sobrenadante de cada pozo se transfirieron a un tubo de microfuga limpio para la determinación de PGE2 liberado hacia el medio. Se determinó PGE2 y se reportó como se describió previamente en el Ejemplo 1. Para síntesis de COX-2 asociada con PGE2, 100 uL de medio se removieron de cada pozo de las placas de célula preparadas en el dia uno y se reemplazaron con 100 uL de concentración 2X final equilibrada de los compuestos de prueba. Las células luego se incubaron durante 90 minutos. A continuación, en lugar de estímulo de LPS, las células se incubaron con 100 uM de ácido araquidónico durante 15 minutos. Veinticinco uL de medio sobrenadante de cada pozo se transfirió a un tubo de microfuga limpio para la determinación de PGE2 liberado hacia el medio. Se observó la apariencia de las células y se determinó la viabilidad como se describe en el Ejemplo 2. No se observó toxicidad a las concentraciones más elevadas probadas para cualquiera de los compuestos. Veinticinco uL de medio sobrenadante de cada pozo se transfirió a un tubo de microfuga limpio para la determinación de PGE2 liberado hacia el medio. Se determinó PGE2 y se reportó como se describió previamente en el Ejemplo 1. Las concentraciones inhibitorias medias (IC5o) para síntesis de PGE2 para ambos COX-2 y COX-1 se calcularon como se describe en el Ejemplo 2. Cuadro 2. Inhibición de COX-2 y COX-1 en células RAW 264.7 mediante fracciones de lúpulo y derivados Material de Prueba COX-2 IC50 COX-1 IC50 COX-1/COX' [ug/mL] [ug/mL] Lúpulo alfa (AA) 0.21 6.2 30 Aramalúpulo OE 1.6 4.1 2.6 Isolúpulo (IAA) 0.13 18 144 Ácidos beta (BA) 0.54 29 54 Hexalúpulo (HHIAA) 0.29 3.0 11 Redilúpulo (RIAA) 0.34 29 87 Tetralúpulo (?????) 0.20 4.0 21 Lúpulo agotado (EtOH) 0.88 21 24 Como se ve en el Cuadro 4, todas las fracciones de lúpulo y derivado inhibieron selectivamente COX-2 sobre COX-1 en este modelo de macrofago de meta. Este fue un descubrimiento novedoso e inesperada. La extensión de selectividad de COX-2 para los derivados de lúpulo IAA y RIAA, respectivamente, 144- y 87 veces, no se esperaba. Esta selectividad de COX-2 - elevada combinada con concentraciones inhibitorias medias bajas, no se ha reportado previamente para productos naturales de otras fuentes . EJEMPLO 4 COMPUESTOS Y DERIVADOS DE LÚPULO NO SON INHIBIDORES DIRECTOS DE ENZIMA DE CICLOOXIGENASA Resumen - Este ejemplo ilustra que los compuestos y derivados de lúpulo no inhiben síntesis de PGE2 en células epiteliales pulmonares A549 a concentraciones fisiológicamente importantes cuando se prueban usando el compuesto WHMA-COX-2. Químicos - Células A549 (epiteliales pulmonares humanas) se obtuvieron de la American type Culture Collection (Manassas, VA) y se subcultivaron de acuerdo con las instrucciones del proveedor. Las células se cultivan rutinariamente a 37°C con 5% de C02 en RPMI 1640 que contiene 10% de FBS, con 50 unidades de penilicina/mL, 50 ug de estrptomicina/mL, 5% de piruvato de sodio, y 5% de L-glutamina. En el dia de los experimentos células que crecen exponencialmente se cosecharon y lavaron con RPMI 1640 libre de suero. Las células A549 fase Log se colocan en placas a 8 x 10a células por pozo con 0.2 mL de medio de crecimiento por pozo en una placa de cultivo de tejido de 96 pozos. Para la determinación de inhibición de PGE2 por los compuestos de prueba, el procedimiento de Warner y col. [(1999) Selectividades de droga no esferoide para ciclooxigenasa-1 en lugar de ciclooxigenasa-2 están asociadas con toxicidad gastrointestinal humana; un análisis in vitro completo. Proc Nati Acad Sci U S A 96, 7563-7568] , también conocido como protocolo WHMA-COX-2 se siguió sin modificación. Brevemente, 24 horas después de colocar en placas las células A549, se añadió interleuquina-lbeta 810 ng/mL) para inducir la expresión de COX-2. Después de 24 horas, las células se lavaron con RPMI 1640 libre de suero y los materiales de prueba, disueltos en DMSO y RPMI libre de suero, se añadieron a los pozos para alcanzar concentraciones finales de 25, 5.0, 0.5 y 0.05 ug/mL. Cada concentración se corrió en duplicado. Se añadió DMSO a los pozos de control en un volumen igual al contenido en los pozos de prueba. Sesenta minutos después se añadió A23187 (50 uM) a los pozos para liberar ácido araquidónico . Veinticinco uL de medio se muestrearon de los pozos 30 minutos después para determinación de PGE2. La viabilidad de célula se determinó como se describió previamente en el Ejemplo 2. No se observó toxicidad a las concentraciones más elevadas probadas para cualquiera de los compuestos . PGE2 en el medio sobrenadante se determinó y se reportó como se describe previamente en el Ejemplo 1. La concentración inhibitoria media (IC5o) para síntesis de PGE2 se calculó como se describe previamente en el Ejemplo 2. Resultados - A la dosis probada, el protocolo experimental falló en capturar la concentración efectiva media de cualquiera de los extractos o derivados de lúpulo. Puesto que el protocolo requiere el estímulo de expresión de COX-2 antes de la adición de los compuestos de prueba, la contestación probable a la falla de los materiales de prueba en inhibir síntesis de PGE2 es que su mecanismo de acción es inhibir la expresión de la isozima COX-2 y no la actividad directamente. Mientras que alguna inhibición directa se puede observar usando el protocolo WHMA-COX-2, este procedimiento es inapropiado para evaluar las propiedades antiinflamatorias de compuestos de lúpulo o derivados de compuestos de lúpulo. EJEMPLO 5 CARENCIA DE INHIBICIÓN DE SÍNTESIS DE PGE2 EN CÉLULAS MUCOSALES GÁSTRICAS POR COMPUESTOS DE LÚPULO (Humulus lúpulos) Y DERIVADOS Resumen - Este ejemplo ilustra la falta de inhibición de PGE2 para fracciones de lúpulo y en la línea de célula mucosal gástrica humana AGS que implica bajo potencial de irritación gástrica de estos compuestos . Se utilizaron los químicos y reactivos como se describe en el Ejemplo 3. Las células AGS se desarrollaron y usaron para probar compuestos y derivados de lúpulo como se describe en el Ejemplo 2. Se determinó PGE2 y se reportó como se describe previamente en el Ejemplo 1. Las concentraciones inhibitorias medias (IC5o) para síntesis de PGE2 de células AGS se calcularon como se describe en el Ej emplo 2. Cuadro 5. Falta de inhibición de PGE2 en células mucosales gástricas AGS por fracciones y derivados de lúpulo. Material de Prueba IC50 AGS [ug/mL] Lúpulo alfa (AA) >25 Aromalúpulo OE >25 Isolúpulo (IAA) >25 Ácidos beta (BA) >25 Hexalúpulo (HHIAA) >25 Redilúpulo (RIAA) >25 Tetralúpulo (THIAA) >25 Lúpulo agotado (EtOH) >25 Como se ve en el Cuadro 5, todas las fracciones y derivados de lúpulo fueron incapaces de inhibir síntesis de PGE2 en 50% o más a las concentraciones más elevadas probadas en la línea de célula mucosal gástrica AGS . Basado en la potencia antiinflamatoria exhibida por estas fracciones en macrofagos de meta, este fue un descubrimiento novedoso e inesperado. EJEMPLO 6 INHIBICIÓN DE SÍNTESIS DE PGE2 POR EXTRACTO DE ROMERO Y COMPUESTOS' ENCONTRADOS EN ROMERO Resumen - Este ejemplo ilustra el efecto antiinflamatorio de extracto de romero y compuestos comúnmente encontrados en romero, ácido carnósico, ácido ursólico y ácido oleanólico en células de meta y el efecto de extracto de romero y ácido oleanólico en síntesis de PGE2 en células gastrointestinales . El equipo utilizado, químicos, manejo de célula y cálculo de concentraciones inhibitorias medias se realizaron como se describe previamente en los Ejemplos 1, 2 y 3. Se obtuvieron ácido carnósico, ácido ursólico y ácido oleanólico de Sigma (St. Louis, MO) . El extracto de romero fue un extracto de hexano obtenido de hojas seleccionadas de Rosmarinus officinalis por medios (95% +/-3% de extracto de romero) que cumplieron con el reglamento de E.U.A. (21 CFR 101-22). Se determinó mediante análisis de HPLC que el extracto contenía un mínimo de 11% de diterpenos fenólicos (consistiendo de ácido carnósico, carnosol, carnosato de metilo, rosemadial, ácido rosemarínico) , 4.5% min de ácido carnósico, y un mínimo de 7.6% la suma de carnosol + ácido carnósico. El ácido carnósico se compró de Sigma (St. Luis, MO) y el ácido oleanólico (80%) se obtuvo de Sabinsa (121 Ethel Road, West, Piscataway, NJ) . Cuadro 6. Inhibición de PGE2 en células RAW 264.7 y AGS por un extracto de romero, ácido carnósico, ácido ursólico, y ácido oleanólico. Material de Prueba RAW 264.7 RAW o AGS COX-l/COX-2 (COX-2/COX-1)* IC50 [ug/mL] IC50 [ug/mL] Extracto de romero (RAW/AGS) 0.51 4.0 7.8 Ácido carnósico (RAW/RAW) 0.50 231 , 470 Ácido ursólico (RAW/RAW) 1.91 33 17 Ácido oleanolico (RAW/RAW) 1.15 19 17 Ácido oleanolico (RAW/AGS) 1.15 5.0 4.3 * Indica las lineas de célula usadas para calcular efectos inhibidores , respectivamente en síntesis de COX-2 o COX-1 de PGE2. En todos los casos, las células RAW 264.7 estimuladas con LPS se usaron para determinar las concentraciones inhibitorias medias de síntesis de PGE2 mediada con COX-2. Para el cálculo de los efectos de materiales de prueba en síntesis mediada con COX-1, se usaron ya sea células RAW 264.7 no estimuladas o células AGS no estimuladas . Resultados - Todos los materiales de prueba exhibieron inhibición potente de síntesis de PGE2 en células RAW 264.7 estimuladas con LPS indicando inhibición de la isozima COX-2 (Cuadro 6) . Sorprendentemente, el extracto de romero fue más potente que los ácidos ursólico y oleanolico e igual a ácido carnósico puro en potencia con una concentración inhibitoria media de 0.5 ug de material de prueba/mL de medio. Puesto que el extracto de romero contenía solamente 11% de ácido carnósico o derivado, la inferencia es que la interacción de los derivados de ácido carnósico o la miríada de otros compuestos en el extracto de romero actuaron en concierto o sinergísticamente para proporcionar dicha inhibición potente de COX-2. Alternativamente, uno de los compuestos previamente identificados en romero y enumerado anteriormente tiene potencia extremadamente elevada para inhibir síntesis de PGE2 mediada con COX-2. En células RAW 264.7 no estimuladas, los compuestos puros fueron relativamente inactivos exhibiendo valores de IC50 de 231, 33 y 39 ug/mL, respectivamente, para ácidos carnósico, ursólico y oleanólico. Esto indicó una fuerte preferencia para inhibición de COX-2 sobre COX-1 para síntesis de PGE2 en el modelo de célula de meta RAW 264.7. Esta extensión se selectividad de ísozíma COX nunca se ha reportado en la literatura y fue un resultado inesperado en la línea de célula mucosal gástrica AGS, sin embargo, ambos el extracto de romero y ácido oleanólico exhibieron inhibición potente de síntesis de PGE2. EJEMPLO 7 INHIBICIÓN SINTERGÍSTICA DE SÍNTESIS DE PGE2 EN CÉLULAS DE META MEDIANTE EXTRACTO DE LÚPULO C02 EN COMBINACIÓN CON TRITERPENOIDES ÁCIDO OLEANÓLICO Y ÁCIDO URSÓLICO El equipo usado, químicos, manejo de célula y cálculo de concentraciones inhibitorias medias se realizaron como se describió previamente en los Ejemplos 1, 2 y 3. El extracto de lúpulo C02 se compró de Hopunion, (Yakama, WA) y contenía 30 a 60% de ácidos alfa y 15 a 45% de ácidos beta. Los ácidos oleanólico y ursólico se obtuvieron de Sigma (St. Louis, MO) y fueron de la más alta pureza comercialmente disponible (>98%) . La sinergia de los componentes de prueba se cuantificó usando el parámetro de Indice de combinación (CI). El CI de Chou-Talaly está basado en el efecto de droga múltiple y se deriva de modelos cinéticos de enzima (Chou, T.-C, y Talay, P. (1977) Una ecuación generalizada simple para el análisis de múltiples inhibiciones de sistemas cinéticos de Michaelis-Menten . J. Biol. Chem. 252:6438-6442). La ecuación determina solamente el efecto aditivo más bien que el sinergismo o antagonismo. Sin embargo, definimos sinergismo como un efectivo aditivo más que esperado, un antagonismo como un efecto aditivo menos del esperado como se propone por Chou y Talalay. Usando la designación de CI = 1 como el efecto aditivo, obtenemos para compuestos mutuamente exclusivas que tienen el mismo modo de acción o para drogas mutuamente no exclusivas que tienen modos de acción totalmente independientes las siguientes relaciones: CI <1 = 1, y >1 indicando sinergismo, capacidad de adición y antagonismo, respectivamente . Resultados - La combinación f:l (C02-extracto: triterpenoide) probada en células RAW 264.7 exhibió sinergia potente sobre la curva de respuesta de dosis completa. Los índices de combinación computados para ambos materiales de prueba en la IC5o/ IC75 e IC90 se presentan en el Cuadro 7. Como se describió en este ejemplo, la sinergia de estas combinaciones cubrió una escala de concentración de 0.001 a 50 ug/mL de cada componente de la combinación. Cuadro 7. índices de Combinación Computados para las curvas de dosis-respuesta de combinaciones 1:4 de un C02-extracto de lúpulo y los triterpenos de ácido oleanólico y ursólico Material de Prueba CI50 CI75 CI90 CI Medio C02-Extracto: ácido oleanólico [1:4] 0.514 0.461 0.414 0.463 C02-Extracto : ácido ursólico [1:4] 0.529 0.650 0.806 0.662 EJEMPLO 8 INHIBICIÓN SINTERGÍSTICA DE SÍNTESIS DE PGE2 POR COMBINACIONES DE LÚPULO CON UN EXTRACTO DE ROMERO EN CÉLULAS DE META Y NO META Resumen - Este ejemplo ilustra la sinergia de combinaciones de ácidos alfa isomerizados reducidos y extracto de romero en células A549 de meta y antagonismo sinergístico de Inhibición de romero de síntesis de PGE2 en células mucosales gástricas AGS. El equipo usado, químicos, manejo de célula y cálculo de concentraciones inhibitorias medias se realizaron como se describió previamente en los Ejemplos 1, 2, 3 y 4. Diversas diferencias en el protocolo para prueba en las células A549 se incorporaron en este ejemplo. Primero, los materiales de prueba se añadieron al medio 60 minutos antes del estimulo con TL-?ß. Segundo, en la determinación de curvas de dosis-respuesta, se usaron 5 uM de ácido araquidónico en lugar del ionoforo de calcio A23187. La sinergia de las combinaciones se computó como se describe en el Ejemplo 7. Resultados - El cuadro 8 muestra inhibición de PGE2 mediante ácidos alfa isomerizados reducidos, extracto de romero y una combinación 2:1 de ácidos alfa isomerizados reducidos y extracto de romero en células A549 estimuladas con IL-lL Esta linea de célula representa una célula de meta modelo para eficacia antiinflamatoria. Las concentraciones inhibitorias medias para ácidos alfa isomerizados reducidos y extracto de romero fueron independientemente, de manera respectiva, 0.84 y 1.3 ug/mL. La combinación de 2:1 de ácidos alfa isomerizados reducidos y extracto de romero exhibió sinergia a y por debajo de la concentración inhibitoria media de la combinación. El Cuadro 9 muestra inhibición de síntesis de PGE2 en las células AGS gástricas humanas. Estas células representan un modelo para toxicidad gastrointestinal de inhibidores de prostaglandina . Los materiales de prueba que exhiben inhibición de síntesis de PGE2 en las células se esperaría que demostraron irritación gástrica y ulceración con uso crónico. La inhibición de síntesis de PGE2 por extracto de romero fue sinergístreamente antagonizada por una combinación de 2:1 de ácidos alfa isomerizados reducidos y extracto de romero. Este resultado inesperado representa un descubrimiento novedoso de antagonismo sinergístico. Cuadro 8. Concentraciones inhibitorias medias e índice de combinación para inhibición de PGE2 mediante ácidos alfa isomerizados reducidos, extracto de romero y una combinación de ácidos alfa isomerizados y extracto de romero en células A549 estimuladas por L-?ß. Material de Prueba IC5o [ug/ml] índice de Combinación <1.0* [ug/mL] Ácidos alfa isomerizados reducidos (RIAA) 0.84 Extracto de romero 1.3 RIAA:Romero 2:1 0.48 A 0.48 y abajo * El índice de combinación fue menos de 1 sobre la porción de la curva de respuesta de dosis a y debajo del valor de IC50 indicando inhibición sínergística de síntesis de PGE2 por la combinación e estas concentraciones. Cuadro 9: Sinergia a una combinación de 1:1 de ácidos alfa isomerizados reducidos con extracto de romero resultando en una reducción de inhibición de PGE2 en células mucosales gástricas AGS . Material de Prueba IC50 [ug/ml] índice de Combinación Ácidos alfa isomerizados reducidos (RIAA) >25 ¦ Romero 4.0 . RIAA: Romero 1:1 >25 >1.0* * El índice de combinación fue mayor que 1 sobre la curva de respuesta de dosis entera indicando antagonismo sinergístico de inhibición de PGE2 por la combinación. Aún cuando este ejemplo solamente presenta la combinación de extracto de romero con uno de los derivados de lúpulo, ácidos alfa isomerizados reducidos, sería obvio para uno experto en el ramo asumir esperar los mismos resultados con otros derivados de lúpulo que tampoco muestran inhibición de PGE2 con células AGS a dosis tan elevada como 25 ug/mL. Los ejemplos de estos derivados de lúpulo incluirían ácidos alfa isomerizados, ácidos alfa hexahidro-isomerizados, ácidos tetrahidro-iso-alfa y extractos de lúpulo agotado. EJEMPLOS 9 INHIBICIÓN SINERGÍSTICA DE SÍNTESIS DE PGE2 MEDIANTE ÁCIDOS ALFA ISOMERIZADOS REDUCIDOS Y ÁCIDO OLEANÓLICO EN CÉLULAS DE META SIN EFECTO SOBRE SÍNTESIS DE PGE2 EN CÉLULAS DE NO META Resumen - Este ejemplo ilustra que los ácidos alfa isomerizados reducidos exhiben sinergia fuerte con ácido oleanolico de triterpeno en la inhibición de síntesis de PGE2 en las células ?549 de meta y antagonizan sinergisticamente la inhibición de ácido oleanolico de síntesis de PGE2 en células gástricas. El equipo usado, químicos, manejo de célula y cálculo de concentraciones inhibitorias medias se realizaron como se describió previamente en los Ejemplos 1, 2 , 3 y 4. Varias diferencias en el protocolo para probar en las células A549 se incorporaron en este ejemplo. Primero, los materiales de prueba se añadieron al medio 60 minutos antes del estímulo con IL-L/3. Segundo, en la determinación de las curvas de dosis-respuesta, las células A549 permanecieron en presencia de material de prueba durante la noche antes del · muestreo de medio para determinación de PGE2. La sinergia de las combinaciones se computó como se describe en el Ejemplo 7. Los ácidos alfa isomerizados reducidos se obtuvieron como una solución acuosa al uno por ciento de John Haas, Inc. (Yakima, WA) y el ácido oleanólico se obtuvo de Sabinsa (Piscata ay, NJ) y fue 80% puro. La sinergia de las combinaciones se computó como se describe en el Ejemplo 7. Resultados - El Cuadro 10 muestra la inhibición de PGE2 por ácido' oleanólico, ácidos alfa isomerizados reducidos y diversas combinaciones de ácidos alfa isomerizados reducidos y ácido oleanólico en células A549. Esta linea de célula representa una célula de meta modelo para eficacia antiinflamatoria. Las concentraciones inhibitorias medias para ácidos alfa isomerizados reducidos y ácido oleanólico independientemente fueron, respectivamente, 0.03 y 0.39 ug/mL. Las combinaciones de ácidos alfa isomerizados reducidos y ácido oleanólico que consisten de 10:1, 5:1 1:5, respectivamente, exhibieron sinergia en la curva de dosis-respuesta a concentraciones combinadas de 0.11, 0.38 y 0.76 ug/mL. De esta manera, cuando la suma de los dos componentes fue igual a o menor de 0.011, 0.38 o 0.76 ug/mL, su capacidad para inhibir síntesis de PGE2 fue mayor que la suma de sus actividades individuales . Cuadro 10. Concentraciones inhibitorias medias e índices de combinación para inhibición de PGE2 por ácidos alfa isomerizados reducidos, ácido oleanólico y cuatro combinaciones de ácidos alfa isomerizados y ácido oleanólico en células A549 estimuladas con IL-1?. Material de Prueba IC5o [ug/mL] índice de Combinación <1.0 Ácido oleanólico (80% Sabinsa) 0.390 Ácidos alfa isomerizados Reducidos (RIAA) 0..028 RIAA: ácido oleanólico [10:1] 0.042 A 0.11 ug/mL e inferior RIAA: ácido oleanólico [5:1] 0.059 A 0.38 ug/mL e inferior RIAA: ácido oleanólico [1:5] 0.022 A 0.76 ug/mL e inferior RIAA: ácido oleanólico [1:10] 0.166 No * El índice de combinación fue menos de 1 sobre la porción de la curva de dosis-respuesta en los valores tabulados indicando inhibición sinergística de síntesis de PGE2 por la combinación a e inferior a estas concentraciones. El Cuadro 11 muestra la inhibición de síntesis de PGE2 en las células AGS gástricas humanas . Estas células representan un modelo para toxicidad gastrointestinal de inhibidores de prostaglandina. Los materiales de prueba que exhiben inhibición de síntesis de PGE2 en estas células se esperaría que demostraran irritación gástrica y ulceración con uso crónico. la inhibición de síntesis de PGE2 por ácido oleanólico se antagonizó sinergísticamente por todas las combinaciones con ácidos alfa isomerizados reducidos. Este resultado inesperado representa un descubrimiento novedoso de antagonismo sinergístico. Cuadro 11. Sinergia de ácidos alfa isomerizados reducidos con ácido oleanólico que resulta en una reducción inhibición de PGE2 en células mucosales gástricas AGS . Material de Prueba IC5o Indice de Combinación [ug/mL] >1.0* Ácido oleanólico 5.0 Ácidos alfa isomerizados reducidos ( IAA) >25 RIAA:Ácido oleanólico [10:1] >25 Antagonismo RIAA:Ácido oleanólico - [5:1] >25 Antagonismo RIAA:Ácido oleanólico - [1:5] >25 Antagonismo RIAA: cido oleanólico - [1:10] >25 Antagonismo * Cuando CI>1.0 a la IC50, la combinación se dice que exhibe antagonismo en la inhibición de síntesis de PGE2 por células AGS . Mientras que este ejemplo solamente presenta la combinación de ácido oleanólico con uno de los derivados de lúpulo, ácidos alfa isomerizados reducidos, seria evidente para un experto en el ramo asumir esperar los mismos resultados con otros derivados de lúpulo que tampoco muestran inhibición de PGE2 con células AGS a dosis tan elevada como 25 ug/mL. Los ejemplos de estos derivados de lúpulo incluirían ácidos alfa isomerizados, ácidos alfa hexahidro-isomerizados, ácidos tetrahidro-iso-alfa y extractos de lúpulo agotado. EJEMPLO 10 INHIBICIÓN SINERGÍSTICA DE SÍNTESIS DE PGE2 MEDIANTE UNA COMBINACIÓN DE ÁCIDOS ALFA ISOMERIZADOS REDUCIDOS CON TRITANTRINA EN CÉLULAS DE META SIN EFECTO SOBRE SÍNTESIS DE PGE2 EN CÉLULAS DE NO META Resumen - Este ejemplo ilustra una sinergia potente de una combinación de 1:1 de ácidos alfa isomerizados reducidos y triptantrina en células A549 de meta y antagonismo sinergístico de inhibición de triptantrina de síntesis de PGE2 en células mucosales gástricas AGS - El equipo, químicos, manejo de célula y cálculo de concentraciones inhibitorias medias se realizaron como se describió previamente en los Ejemplos 1, 2, 3, 4 y 9. Los ácidos alfa isomerizados reducidos se obtuvieron como una solución acuosa al uno por ciento de John Haas, Inc. (Yakima, WA) y se obtuvo triptantrina de Waco Chemicals (Richmond, VA) y fue la pureza más elevada comercialmente disponible. Varias diferencias en el protocolo para prueba en las células A549 se incorporaron en este ejemplo. Primero, los materiales de prueba se añadieron al medio 60 minutos antes de estímulo con TL-?ß. Segundo, en la determinación de curvas de dosis-respuesta, las células A549 permanecieron en presencia de material de prueba durante la noche antes del muéstreo del medio para determinación de PGE2- La sinergia de las combinaciones se computó como se describe en el Ejemplo 7. Resultados - El Cuadro 12 muestra inhibición de PGE2 mediante ácidos alfa isomerizados reducidos, triptantrina y una combinación de 1:1 de ácidos alfa isomerizados reducidos y triptantrina en células A549 estimuladas con L-?ß. Esta linea de células representa una célula de meta modelo para eficacia antiinflamatoria. Las concentraciones inhibitorias medias para ácidos alfa isomerizados reducidos y triptantrina independientemente fueron, respectivamente, 0.028 y 0.30 ug/mL. La combinación de 1:1 de" ácidos alfa isomerizados reducidos y triptantrina exhibió sinergia sobre la curva de dosis-respuesta completa. El cuadro 13 muestra inhibición de síntesis de PGE2 en las células AGS gástricas humanas . Estas células representan un modelo para toxicidad gastrointestinal de inhibidores de prostaglandina . Los materiales de prueba que exhiben inhibición de síntesis de PGE2 en estas células se esperaría que demostrara irritación gástrica y ulceración con uso crónico. La inhibición de síntesis de PGE2 por triptantrina fue sinergísticamente antagonizada por una combinación de 1:1 de ácidos alfa isomerizados reducidos y triptantrina o conjugados de la misma. Este resultado inesperado representa un descubrimiento novedoso de antagonismo sinergistico . Cuadro 12. Concentraciones inhibitorias medias e Indice de combinación para inhibición de PGE2 por ácidos alfa isomerizados reducidos, triptantrina y una combinación de ácidos alfa isomerizados y triptantrina en células A549 estimuladas con TL-?ß. Material de Prueba IC5o índice de Combinación [ug/mL] Ácidos alfa isomerizados reducidos RIAA 0.028 Triptantrina 0.300 RIAA: Triptantrina [1:1] 3.1 x 10"' <1.0* * El Índice de combinación fue menos de 1 sobre la curva de dosis-respuesta completa indicando inhibición sinergística de síntesis de PGE2 por la combinación. Cuadro 13. Sinergia de combinaciones de ácidos alfa isomerizados reducidos con triptantrina resultando en una reducción de inhibición de PGE2 en células mucosales gástricas AGS Material de Prueba IC50 índice de Combinación [ug/mL] Ácidos alfa isomerizados reducidos (RIAA) >25 Triptantrina 4.2 RIAA: Triptantrina - [1:1] >25 >1.0* * El índice de combinación fue mayor de 1 sobre la curva de dosis-respuesta completa indicando antagonismo sinergistico de inhibición de PGE2 por la combinación. Mientras que este ejemplo solamente presenta la combinación de triptantrina con uno de los derivados de lúpulo, ácidos alfa isomerizados reducidos, sería evidente para un experto en el ramo asumir esperar los mismos resultados con otros derivados de lúpulo que tampoco muestran inhibición de PGE2 con células AGS a dosis tan elevadas como 25 ug/ L. Los ejemplos de estos derivados de lúpulo incluirían ácidos alfa isomerizados, ácidos alfa hexahidro-isomerizados, ácidos tetrahidro-iso-alfa y extractos de lúpulo agotado . EJEMPLO 11 INHIBICIÓN EX VIVO DE SÍNTESIS DE PGE2 POR UNA MUESTRA DE PLASMA DE UN HUMANO QUE RECIBE UNA COMBINACIÓN QUE CONTIENE DERIVADOS DE LÚPULO, UN EXTRACTO DE ROMERO Y ÁCIDO OLEANÓLICO Resumen - Este ejemplo demuestra la presencia de materiales de inhibición de PGE2 en un sujeto humano después de la ingestión de una combinación de 5:5:1 de ácidos alfa isomerizados reducidos, extracto de romero y ácido oleanólico tres veces al dia durante cinco dias . El equipo usado, químicos, manejo de célula RAW 264.7 y cálculo de concentraciones de PGE2 se realizaron como se describió previamente en los Ejemplos 1, 2 , y 3. Los ácidos alfa isomerizados reducidos, extracto de romero y ácido oleanólico fueron como se describe en los Ejemplos 3, 6 y 7, respectivamente. Se hicieron tapas de gel para contener 200 mg de ácidos alfa isomerizados reducidos, 200 mg de romero y 40 mg de ácido oleanólico en una base de aceite. Las muestras de plasma se obtuvieron de un voluntario humano antes de y cinco días después de consumir tres cápsulas al día durante cinco días. Las cápsulas se tomaron a intervalos de aproximadamente ocho horas durante el día. En el quinto día, se retiró sangre una hora antes de tomar la última cápsula y 1, 2, 4 y 7 horas después de la dosificación. Todos los ensayos de PGE2 en muestras de plasma se repitieron ocho veces . Externos de definieron y eliminaron si el valor fue más de tres desviaciones convencionales del grupo medio computado sin que el externo lo percibiera. Los datos brutos con y sin los externos se pusieron en gráficas. Las concentraciones de material de prueba en plasma relacionado con por ciento de inhibición de PGE2 se calcularon usando una curva convencional de la combinación en plasma comercial (Gibco, Grand Island, NY) . La Figura 7 [A] ilustra la inhibición de síntesis de PGE2 por las muestras de plasma en los tiempos indicados. Se observó un aumento de 9- a 3 veces en inhibición de PGE2 durante la primera hora después de dosificación. La vida media efectiva (tiempo para reducir la capacidad de inhibir la síntesis de PGE2 a la mitad) del material de prueba fue aproximadamente cuatro horas. Los cálculos de material de prueba relacionados con el porcentaje observado de inhibición de síntesis de PGE2 en células RA 2564.7 se presentan en la Figura 7 [B] . Usando solamente el dato con los externos removidos, se observó un aumento de 12.5 veces en concentración de material de prueba durante la primera hora. Una concentración máxima de 880 ng/mL de plasta se vio en ambas la 1 y 2 horas después de dosificación. La media vida de concentración fue aproximadamente 2.2 horas. La falta de consistencia entre la media vida efectiva y media vida de concentración se puede inferir que se, debe a la sinergia de componentes en la formulación. La eficacia se prolonga debido a interacciones positivas y sinergísticas entre los ácidos alfa ísomerizados, la miríada de compuestos en el extracto de romero y ácido oleanólico como se ha demostrado por los ejemplos en esta solicitud. EJEMPLO 12 NORMALIZACIÓN DE FUNCIÓN DE ARTICULACIÓN DESPUÉS DE TRAUMA Una composición representativa de las modalidades preferidas como un suplemento dietético seria en una formulación oral, es decir, tabletas o cápsulas de gel que suministrarían una de las siguientes combinaciones: 0.1 a 10 mg de isocohumulona/kg por día; 0.01 a 10 mg de dihidroadhumulona/kg por día; 0.01 a 10 mg de tetrahidro-isocohumulona/kg por día; 0.01 a 10 mg/kg por día de hexahidro-isohumulona/kg por día para una persona de 70 kg. la normalización de movimiento de articulación después del trauma físico debida a ejercicio o esfuerzo de movimiento repetitivo se esperaría que ocurrirá después de dos a diez dosis. Este resultado se esperaría en todos los animales . EJEMPLO 13 NORMALIZACIÓN DE FUNCIÓN DE ARTICULACIÓN DESPUÉS DE TRAUMA Una composición representativa de las modalidades preferidas como un suplemento dietético sería en una formulación oral, es decir, tabletas o cápsulas de gel que suministrarían una de las siguientes combinaciones: 17 mg de ácido alfa isomerizado reducido/kg por día, 17 mg de extracto de romero/kg por día y 17 mg de ácido ursólico/kg por día; 17 mg de ácido alfa isomerizado reducido/kg por día, 17 mg de extracto de romero/kg por día y 3.4 mg de ácido ursólico/kg por día; 34 mg de ácido alfa isomerizado reducido/kg por día, 34 mg de extracto de romero/kg por día y 3.4 mg de ácido ursólico/kg por día; 340 mg de ácido alfa isomerizado . reducido/kg por día, 340 mg de extracto de romero/kg por día y 3.4 mg de ácido ursólico/kg por día; 17 mg de ácido alfa isomerizado reducido/kg por día, 17 mg de extracto de romero/kg por día y 85 mg de ácido ursólico/kg por día; 17 mg de ácido alfa isomerizado reducido/kg por día, 17 mg de extracto de romero/kg por día y 170 mg de ácido ursólico/kg por día; o 17 mg de ácido alfa isomerizado reducido/kg por día, 17 mg de extracto de romero/kg por día y 1700 mg de ácido ursólico/kg por día para una persona de 70 kg. La normalización de movimiento de articulación después de trauma físico debido a ejercicio o esfuerzo de movimiento repetitivo se esperaría que ocurrirá después de dos a diez dosis. Este resultado se esperaría en todos los anímales . EJEMPLO 14 EFECTIVIDAD CLÍNICA DE FORMULACIONES DE LOCIÓN EN EL TRATAMIENTO DE ACNÉ ROSÁCEA Se aplica una loción diseñada para ' contener uno de los siguientes: 1. 0.1% en peso de la isocohumulona de ácido alfa isomerizado, 2 : 0.1% en peso de la dihidro-adhumulona de ácido alfa isomerizado reducido; 3. 0.1% en peso de tetrahidro-isocohumulona de ácido tetrahidroisoalfa; o 4. 0.1% en peso de hexahidro-isohumulona a áreas afectadas de pacientes que han exhibido acné rosácea como se diagnostica por su practicante de salud y se confirma por un dermatólogo certificado independiente. Pruebas de auto evaluación y se administran una semana antes del estudio para cuantificar el área superficial y rojez. Además, variables similares se marcan por el persona clínico profesional sin conocimiento del estado de tratamiento de pacientes. Estas evaluaciones se repiten en los Días 0, 7, 14 y 21. Los pacientes se asignan al azar a la formulación de prueba o placebo al principio del estudio. La formulación de prueba y placebo se aplican al área afectada una o dos veces al día. El tratamiento de condiciones de salud tales como diabetes, hipertensión, etc., se permite durante el estudio. Las marcas se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo para cada uno de los cuatro períodos de observación. Los pacientes tratados con la composición de las modalidades preferidas en una formulación de loción se consideran mejorados si las marcas de los pacientes mejoran en más de 20% de las marcas antes de prueba dentro de cada categoría evaluada. El porcentaje de personas que exhiben mejora se compara entre las formulaciones de combinación y el control de placebo. La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significativo si la probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando es verdadera es menos de cinco por ciento. EJEMPLO 15 EFECTIVIDAD CLÍNICA DE FOEMULACIONES DE LOCIÓN EN EL TRATAMIENTO DE ACNÉ ROSÁCEA Se aplica una loción diseñada para contener uno de los siguientes: 1. 0.1% en peso de la humulona de ácido alfa; 2. 0.1% en peso de la isocohumulona de ácido alfa isomerizado, 3. 0.1% en peso de la dihidro-adhumulona de ácido alfa isomerizado reducido; 4. 0.1% en peso de la tetrahidro-isocohumulona de ácido tetrahidroisoalfa; o 5. 0.1% en peso de la hexahidro-isohumulona de ácido hexahidroisoalfa a las áreas afectadas de pacientes que han exhibido acné rosácea como se diagnostica por el practicante de salud y se confirma por un dermatólogo certificado independiente. Pruebas de auto evaluación y se administran una semana antes del estudio para cuantificar el área superficial afectada y la rojez. Además, variables similares se marcan por el personal clinico profesional son conocimiento del estado de tratamiento de pacientes. Estas evaluaciones de repitieron en los Dias 0, 7, 14 y 21. Los pacientes se asignan al azar a la formulación de prueba o placebo al principio del estudio. La formulación de prueba y placebo se aplican al área afectada una o dos "veces al día. El tratamiento por condiciones de salud tales como diabetes, hipertensión, etc., se permite durante el estudio. Las marcas se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo para cada uno de los cuatro períodos de observación. Los pacientes tratados con la composición de las modalidades preferidas en una formulación de loción se consideran mejorados si las marcas de los pacientes mejoran en más de 20% de las marcas antes de prueba dentro de cada categoría evaluada. El porcentaje de personas que exhiben mejora se compara entre las formulaciones de combinación y el control de placebo. La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significativa si la probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando es verdad es menos de ci co por ciento.
EJEMPLO 16 EFECTIVIDAD CLÍNICA DE FORMULACIONES DE LOCIÓN EN EL TRATAMIENTO DE ACNÉ ROSÁCEA Se aplica una loción diseñada para contener uno de los siguientes: 1. 0.1% en peso de la humulona de ácido alfa y 0.1% de triptantrina; 2. 0.1% en peso de la isocohumulona de ácido alfa isomerizado y 0.1% de triptantrina; 3. 0.1% en peso de la dihidro-adhumulona de ácido alfa isomerizado reducido y 0.1% de triptantrina; 4. 0.1% en peso de la tetrahidro-isocohumulona de ácido tetrahidroisoalfa y 0.1% de triptantrina; o 5. 0.1% en peso de la hexahidro-isohumulona de ácido hexahidroisoalfa y 0.1% de triptantrina a áreas afectadas de pacientes que han exhibido acné rosácea como se diagnostica por su practicante de salud y se confirma por un dermatólogo certificado independiente. Pruebas de auto evaluación y se administran una semana antes del estudio para cuantificar el área superficial afectada y rojez. Además, variables similares se marcan por el personal clínico profesional sin conocimiento del estado de tratamiento de pacientes. Estas evaluaciones se repiten en los Dias 0, 7, 14 y 21. Los pacientes se asignan al azar a la formulación de prueba o placebo al principio del estudio. La formulación de prueba y placebo se aplican al área afectada una o dos veces al día. El tratamiento para condiciones de salud tales como diabetes, hipertensión, etc., se permite durante el estudio. las marcas se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo para cada uno de los cuatro períodos de observación. Los pacientes tratados con la composición de las modalidades preferidas en una formación de loción se consideran mejorados si las marcas de los pacientes mejoran en más de 20% de las marcas antes de prueba dentro de cada categoría evaluada. El porcentaje de personas que exhiben mejora se compara entre la combinación de formulaciones y el control de placebo. La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significativa si la probabilidad de rechazo de la hipótesis nula cuando es verdad es menos de cinco por ciento. EJEMPLO 17 EFECTIVIDAD CLÍNICA DE UNA FORMULACIÓN DE LOCIÓN EN EL TRATAMIENTO DE PSORIASIS Este ejemplo se realizó de la misma manera que la descrita en los Ejemplos 14, k 15 y 16, excepto que la composición se aplica a áreas afectadas de pacientes que han exhibido psoriasis como se diagnostica por su propio practicante y se confirma por un dermatólogo certificado independiente. Pruebas de auto evaluación se administra una semana antes del estudio para cuantificar el área superficial afectada y la condición de la piel. Además, variables similares se marcan por el personal clínico profesional sin conocimiento del estado de tratamiento de pacientes. Estas evaluaciones se repiten en los Días 0, 7, 30 y 60. los pacientes se asignan al azar a la formulación de prueba o placebo al principio del estudio. La formulación de prueba y placebo se aplican al área afectada una o dos veces al día. El tratamiento para condiciones de saluda tales como diabetes, hipertensión, etc., se permite durante el estudio. Las marcas se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el place para cada uno de los cuatro períodos de observación. Los pacientes tratados con la composición de las modalidades preferidas como la formulación de loción de prueba se considera mejorados si las marcas de los pacientes mejoran en más del 20% de las marcas antes de prueba dentro de cada categoría evaluada. El porcentaje de personas que exhiben mejora se compara entre la formulación de prueba y el control de placebo. La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significativa si la probabilidad de rechazar la hipótesis nula cuando es verdad es menos del cinco por ciento.
EJEMPLO 18 EFECTIVIDAD CLÍNICA DE UNA FORMULACIÓN EN EL TRATAMIENTO DEL MAL DE ALZHEIMER Una formulación oral como se describe en los Ejemplos 12 y 13 se administra a pacientes que han manifestado una etapa temprana de Mal de Alzheimer (AD) , como se diagnóstico por su practicante y se confirmó por un neurólogo certificado independiente. Dos semanas antes de la prueba clínica, los pacientes se someten a pruebas psiconeurológicas apropiadas tales como el Examen de Estado Mini Mental (MMSE) , la Escala de Determinación de Mal de Alzheimer (ADAS), la prueba de Nombramiento de Boston (BNT), y la Prueba Token (TT) . Las pruebas neuropsicológicas se repiten en el Día 0, 6 semanas y 3 meses de la prueba clínica. Las pruebas se realizan mediante neuropsicólogos que desconocen el régimen de tratamiento del paciente. Los pacientes se asignan al azar a la formulación de prueba o placebo al principio del estudio. La formulación de pruebo y placebo se toman oralmente una o dos veces al día. El tratamiento para condiciones tales como diabetes, hipertensión, etc., se permite durante el estudio. Las marcas se comparan estadísticamente entre la formulación de prueba y el placebo para cada uno de los tres períodos de observación. Sin tratamiento, el curso natural de AD es deterioro significativo en las marcas de prueba durante el curso de la prueba clínica. Los pacientes tratados con la composición de las modalidades preferidas como la formulación de prueba se consideran mejorados si las marcas de los pacientes permanecen iguales o mejoran durante el curso de la prueba clínica. EJEMPLO 19 FORMULACIÓN ORAL EN EL TRATAMIENTO Y PREVENCIÓN DE CÁNCER DE COLON Una formulación oral como se describe en los Ejemplos 12 y 13 se administra a pacientes que han manifestado una etapa temprana de cáncer de colon como se diagnosticó por su propio practicante y confirmó por un oncólogo certificado independiente. Los pacientes se asignan al azar a la formulación de prueba o un placebo al principio del estudio. La formulación de prueba y placebo se toman oralmente una o dos veces por día. El tratamiento para condiciones tales como diabetes, hipertensión, etc., se permite durante el estudio. Las evaluaciones endoscópicas se hacen en los meses uno, dos, seis y doce. La evidencia de reaparición del tumor durante cualquiera de las cuatro visitas clínicas de seguimiento se considera una falla de tratamiento. El porcentaje de fallas de tratamiento se compara entre la formulación de prueba y el control de placebo. Bajo las condiciones experimentales descritas, el material de prueba se espera que disminuya la incidencia de tumor con respecto al grupo de control . La diferencia entre los dos grupos se considera estadísticamente significativa si la probabilidad de rechazo de hipótesis nula cuando es verdad es menor del cinco por ciento. EJEMPLO 20 FORMULACIÓN ORAL PARA EL TRATAMIENTO DE SÍNDROME DE INTESTINO IRRITABLE Una formulación oral como se describe en los Ejemplos 12 y 13 se administra a pacientes que ha manifestado síndrome de intestino irritable como se diagnosticó por su practicante . El funcionamiento de intestino normal se restaura dentro de 48 horas. EJEMPLO 21 NORMALIZACIÓN DE FUNCIONAMIENTO DE ARTICULACIÓN EN OSTEOARTRITIS Usando composiciones descritas en los Ejemplos 12 y 13 la normalización de rigidez de articulación debida a osteoartriticos ocurre después de cinco a veinte dosis, en presencia o ausencia de glucosamina o sulfato de condroitina. Además, la composición no interfiere con los efectos de reconstrucción de articulación normales de dos constituyentes de proteoglicán, a diferencia de agentes antiinflamatorios no esferoides tradicionales.
EJEMPLO 22 ALERGENOS DE POLVO DE ACARO ACTIVAN BIOSINTESIS DE PGE2 EN CÉLULAS PULMONARES A549 Resumen - Este ejemplo ilustra que los alérgenos de polvo de ácaro doméstico pueden inducir biosintesis de PGE2 en células epiteliales pulmonares. Antecedentes La sensibilidad a alérgenos es un problema para un número incrementante de consumidores. Este asunto se ha complicado por un aumento sorprendente en asma durante los pasados pocos años . Los que sufren asma son especialmente sensibles a- alérgenos llevados por el aire. Las regímenes de alergia también están en elevación. Esto da lugar a conocimiento aumentado de las causas de síntomas de alergia y cómo disminuir la incomodidad asociada. Aproximadamente 105 de la población se hipersensibiliza (alérgica) durante exposición a antígenos de una variedad de fuentes ambientales. Esos antígenos que inducen tipos inmediatos y/o retrasados dé hipersensibilidad se conocen como alérgenos. Estos incluyen productos de pastos, árboles, hierbas, caspa animal, insectos, alimentos, drogas y productos químicos . La predisposición genética de un individuo se cree que juega un papel en el desarrollo de respuestas alérgicas inmediatas tales como atopia y anafilaxis cuyos síntomas incluyen fiebre de heno, asma, y urticaria. Muchos alérgenos son moléculas basadas en proteína, y estos alérgenos de proteina se pueden originar de muchas fuentes . Se ha sabido durante algún tiempo que una de las fuentes más comunes de alérgenos en una casa es de ácaros de polvo. Desde luego, como es el caso con todos los alérgenos, solamente cierta gente es alérgica a los alérgenos de ácaro de polvo. Pero este grupo de gente puede ser muy grande en muchas áreas, especialmente en áreas húmedas calientes. Por ejemplos en el sureste de los Estados Unidos de América, en donde es tanto caliente como húmedo durante gran parte del año, la incidencia de alergias de ácaro de polvo doméstico en la población general puede ser tan elevado como 25%. Los ácaros de polvo doméstico habitan en alfombras peludas, tapicería demasiado rellena, acomodos de cama de cojín y lo semejante . Métodos Aislamiento de alérgeno de polvo de ácaro dermatophagoídes farinae son el ácaro de, polvo de casa americano. D. Fariae se cultivaron en una relación de 1:1 de Purina Laboratory Chow (Ralston Purina, Co., St.. Louis, MO) y levadura seca granulada de Fleischmann (Standard Brands, Inc. New York, NY) a temperatura ambiente y 75% de humedad. Los ácaros vivos se aspiraron del recipiente de cultivo a medida que migraron del medio, se exterminaron mediante congelación, disecaron y almacenaron a 0% de humedad. El componente alergénico del polvo de ácaro se extrajo con agua a temperatura ambiente. Quinientos mg de polvo de ácaro se añadieron a 5 mL de agua (1:10 p/v) en un tubo centrifugo cónico de 15 mL (VWR, Rochester, NY) , se agitó durante un minuto y se dejó reposar durante la noche a temperatura ambiente. Al siguiente día, la fase acuosa se filtró usando un filtro de jeringa desechable de 0.2 um (Nalgene, Rochester, NY) . El filtrado se denominó alérgeno de polvo de ácaro y se usó para probar inducción de biosintesis de PGE2 en células epiteliales pulmonares A549. Cultivo de célula y tratamiento - Este experimento involucró una linea de células epiteliales de vía de aire humana, A549 (American Type Culture Collection, Bethesda, MD) . Las células se cultivaron y trataron como se describió previamente en el Ejemplo 2. El alérgeno de ácaro se añadió al medio de cultivo para lograr una concentración final de 1000 ng/mL. Veinticuatro horas más tarde, el medio de cultivo se muestreó para concentración de PGE2. Ensayo de PGE2 - La determinación de PGE2 en el medio de cultivo se realizó como se describió previamente en el Ejemplo 1. Análisis estadístico - Medios de ocho réplicas por tratamiento se computaron usando hojas de dispersión Excel(R) (Microsoft, Redmond, A) . Resultados El tratamiento de alérgeno de acaro, aumentó la biosintesis de PGE2 6 veces en células A549 con relación a los controles tratados con solvente (Figura 8) . EJEMPLO 23 DERIVADOS DE LÚPULO INHIBEN ACTIVACIÓN DE ALERGENO DE POLVO DE ACARO DE BIOSINTESIS DE PGE2 EN CÉLULAS PULMONARES A549 Resumen - Este ejemplo ilustra que derivados de lúpulo son capaces de inhibir los efectos estimulatorios de PGE2 de alérgenos de polvo de acaro en células pulmonares A549. Métodos La linea de célula y los procedimientos de prueba son como se describen en el Ejemplo 22. Además de alérgeno de polvo de ácaro, los materiales de prueba incluyeron fracciones de Lúpulo (1) lúpulo alfa (1% de ácidos alfa; ??) , (2) armoalúpulo OE (10% de ácidos beta y 2% de ácidos alfa isomerizados, 83) isolúpulo (ácidos alfa isomerizados; IAA) , (4) solución de ácido beta (ácidos beta BA) , (5) hexalúpulo oro (ácidos alfa isomerizados hexahidro; HHIAA) , (6) redilúpulo (ácidos alfa isomerizados reducidos; RIAA) , y (7) tetralúpulo (ácidos tetrahidro-iso-alfa (THIAA) . Los materiales de prueba a una concentración final de 10 ug/mL se añadieron GO minutos antes de la adición del alérgeno de polvo de ácaro. Resultados El Cuadro 15 ilustra la extensión de inhibición de biosintesis de PGE2 por derivados de lúpulo en células pulmonares A549 estimuladas por alérgeno de polvo de ácaro. Todos los derivados de lúpulo fueron capaces de inhibir significativamente los efectos estimulatorios de alérgenos de polvo de ácaro. Cuadro 15. Inhibición de PGE2 por derivados de lúpulo en células epiteliales pulmonares A549 estimuladas por alérgeno de polvo de ácaro Material de Prueba Por ciento de inhibición de Biosintesis de PGE2 Lúpulo alfa (AA) 81 Aroitialúpulo OE 84 Isolúpulo (IAA) 78 Ácidos beta (BA) 83 Hexalúpulo (HHIAA) 82 Redilúpulo (RIAA) 81 Tetralúpulo (THIAA) 76 En conclusión, seria también útil identificar una formulación natural de compuestos que inhibirían la expresión de COX-2, inhibirían la síntesis de prostaglandana selectivamente en células de meta, o inhibirían la respuesta de inflamación selectivamente en células de meta. Una modalidad preferida comprende composiciones que contienen cuando menos una fracción aislada o derivada de lúpulo (Humulus lupulus) . Los ejemplos de fracciones aisladas o derivadas de lúpulo son ácidos alfa- ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. Los compuestos preferidos de fracciones aisladas o derivadas de lúpulo, incluyen, pero no están limitados a, ñumulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhum lona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . Los compuestos preferidos también contienen substituyentes, tales como halógenos, éteres y ésteres. Otra modalidad comprende la composición que contiene triptantrina y conjugados de la misma. Otras modalidades se relacionan con combinaciones de componentes. Una modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo y como un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en romero (Rosmarinus officinalis L.), un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo, y triptantrina o conjugados de la misma. Otra modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, triptantrina o conjugados de la misma y un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste de un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo, romero, un extracto o compuesto derivado de romero, y una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo. EJEMPLO 24 EFECTO DE COMPONENTE DE LÚPULO MODIFICADO EN NF-kB Como se manifestó arriba, NF-kB, un heterodímero de las proteínas p50 y RelA, es una proteína de enlace de ADN eucariótica inducible compleja que se expresa ampliamente y juega un papel pivotal al regular múltiples respuestas biológicas, tales como respuestas inflamatorias e inmunes en células de mamífero. Las metas de NF-kB incluyen IL-2, el receptor de IL-2, y proteínas de fase aguda del hígado. Además de su papel en respuestas inmune, la activación de NF-kB sobrepasa la respuesta apoptótica a TNF y Fas, permitiendo la proliferación en su lugar. NF-kB es citoplásmica cuando está inactiva, mantenida ahí por I-kB. Como se muestra en la Figura 9, diversos estímulos conducen a activación de IKK (IkB Quinasa) , que fosforila IkB, marcándola para ubicuitinación y degradación. Una vez que IkB se degrada, NF-kB se libera para iniciar transcripción. Después de activación de transcripción de un gene, NF-kB también se degrada rápidamente. La capacidad de detectar NF-kB activado o no degradado es una función de tiempo. Después del estimulo de citoquina de una célula, el NF-kB activado se puede detectar dentro de 30 minutos. Dentro de horas, el NF-kB activado se degrada y solamente permanece NF-kB no activado, en complejo. En este ejemplo, NF-kB de célula entero se determinó 24 horas después de estímulos trivalentes de Interluquina-1^ (IL-?ß) , y-interferón (IFN) , y TNFa, Para este momento, el NF-kB activado se ha degradado y solamente permanece NF-kB ligado, no activado. El inhibidor IkB se separa con tapón de lisis y NF-kB se cuantifica mediante inmunoensayo de enzima después de la captura por dsADN que contiene el elemento de respuesta de NF-kB. Los compuestos o mezclas que inhiben activación de NF-kB se pueden identificar como que producen un aumento en desarrollo de color asociado con NF-kB en Usados de célula que se han tratado con citoquinas y el material de prueba. Puesto que NF-kB juega un papel clave al regular respuestas tanto inflamatorias como inmunes en células de mamífero, asi como contribuye a crecimiento de célula de cáncer y réplica aumentada de diversos virus como HIV-1, el desarrollo de agentes que dañan la activación o función de NF-kB podría tener aplicaciones terapéuticas importantes. Métodos Químicos - Juegos EIA de NF-kB se obtuvieron de Active Motif (Carlsbad, CA) . Suero Bovino Fetal inactivado con calor (FBS-HI Cat. #35-011CV) , y Dulbeco's Modification of Eagle's Médium (DMEM Cat #10-013CV) se compraron de Mediatech (Herndon, VA) . Se obtuvieron ácidos alfa isomerizados reducidos (RIAA) de John y. Haas, Inc., Yakima, WA. Interluquina-ly? (IL-1/?) , y-interferón (IFN), TNFa, vitamina D3 (VD3) y todos los químicos convencionales se obtuvieron de Sigma (St Louis, MO) y fueron de la pureza más elevada comercialmente disponible. Cultivo de célula y tratamiento de células - La línea de células monocíticas humana Ü937 se obtuvo de la American Type Culture Collection (Manasas, VA) y se subcultivó de conformidad con instrucciones del proveedor. Las células se cultivaron rutinariamente a 37 °C con 5% de C02 en RPMI 1640 (Life Technologies, Grand island, NY) conteniendo 10% de FBS, con 50 unidades de penicilina/mL, 50 ug de estreptomicina/mL, 5% de piruvato de sodio, y 5% de L-glutamina (Life Technologies) . Para el experimento, se cultivaron células U937 en placas de 6 pozos a 37°C con 5% de C02 en una incubadora humidificada durante 24 horas antes de tratamiento con agentes de prueba. Se añadió RLAA en sulfóxido de dimetilo (10 uL) a las células para alcanzar una concentración final de 10 ug de RIAA./mL 60 minutos antes del estimulo con VD3 (100 nM) o VD3 y la mezcla de citoquina (25 ng IL-1? , 150 ng IFN, y 20 ng de TNFa/mL) . Veinticuatro horas después, las células se lavaron y Usaron con reactivos suministrados con el equipo TransAm NFkB Chemi. Ensayo de proteina - Las concentraciones de proteína en lisados de célula se determinaron usando el Equipo de cuantificación de Proteína NanoOrange con albúmina de suero bovino como la norma (Molecular probes, Eugene, OE) de conformidad con el procedimiento suministrado por el fabricante. La fluorescencia se determinó usando un fluorómetro Packard FluoroCount, Modelo BF 10000 con el filtro de excitación ajustado a 485 nm y filtro de emisión ajustado a 570 nm usando la versión 3.0 de software de Packard PlateReader. El programa I-Smart provisto con el Packard PlateReader se usó para calcular la concentración de proteína. Ensayo de NF-kB - El equipo TransAm NFkB Chemi (Active Motiff) se usó para detectar NF-kB p 50 no degradado en las células U937. Las instrucciones del proveedor se siguieron sin modificación. Un lector de placa ELISA de Bio-tek Instruments se usó para registrar la densidad óptica a 405 nm, NF-kB se cuantificó y tabuló como unidades de mOD^os- Análisis estadístico - Medios de cuatro a ocho réplicas por tratamiento e intervalos de seguridad de 95% se computaron usando la fórmula estadística convencional en hojas de dispersión Excel(R> (Microsoft, Redmond, WA) . Resultados Después de 24 horas de estímulo con el coctel de citoquina, la cantidad de NF-kB no degradado en las células U/937 se esperaría que disminuyera. Como se muestra en el Cuadro 16, los controles (330 unidades mOD) y tratamientos de VD3 contenidos aproximadamente el doble de la cantidad de NF-kB como aquellas células estimuladas con el coctel de citoquina o VD3 más coctel de citoquina. La adición de RIAA, sin embargo, impidió la activación y degradación subsecuente de NF-kB (281 contra 122 unidades mOD) . Esto fue un descubrimiento novedoso e inesperado. La falta de activación de NF-kB es favorable debido que la activación de NF-kB sobrepasa la respuesta apoptótica a TNF y Fas y puede ocasionar una variedad de desórdenes. Asimismo mostrado en el Cuadro 16, con RIAA solo, no hubo activación del complejo de NF-kB. Por lo tanto, los componentes de lúpulo o componentes de lúpulo modificados, tales como RIAA pueden servir para afectar desórdenes asociados con activación de NF-kB puesto que estos componentes no activan NF-kB o impiden la activación · de NF-kB. Cuadro 16 Tratamiento NF-kB [unidades mOD]* Control (controles de solvente de Sulfóxido de dimetilo) 330 Vitamina D3 (100 nM) 391 (261 - 420) IL-l^/y-interferón/TNFa (25/150/20 ng/ml) 167 (110 - 224) VD3 más IL-l/?/y-interferón/TNFa 122 (79 - 165) Ácidos alfa isomerizados reducidos (RIAA)'IO ug/mL) 362 (301 - 422) RIAA/VD3/IL-l?/y-interferón/TNFa 281 (241 - 321) * Los valores entre paréntesis son intervalos de seguridad de 95%. En conclusión, seria útil identificar una formulación natural de compuestos que modularian NF-kB. Dicha formulación tiene aplicaciones amplias. También seria útil identificar una formulación natural de compuestos que inhiban la expresión de COX-2, inhiban la síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, o inhiben respuesta' de inflamación selectivamente en células de meta. EJEMPLO 25 FALTA DE INHIBICIÓN DIRECTA DE PGE2 POR ÁCIDOS ALFA ISOMERIZADOS REDUCIDOS O ÁCIDOS ALFA ISOMERIZADOS EN CÉLULAS RAW 264.7 ESTIMULADAS CON LPS Este ejemplo describe la prueba de post inducción de COX-2 (ciclooxigenasa-2 ) con liberación de ácido araquidónico A23187. El objetivo de este estudio fue determinar la capacidad de los derivados de lúpulo RIAA (ácidos alfa isomerizados reducidos) (Redhilúpulo (ácidos rho-iso-alfa (RIAA), 29.5 - 30.5%,. <0.2% ácidos iso-alfa) e IAA (ácidos alfa isomerizados) (Isolúpulo; ácidos iso-alfa ( AA) , 29.5 - 30.5%) para funcionar independientemente como inhibidores directos de COX-2 mediados por biosíntesis de PGE2 en el modelo de inflamación de célula RAW 264.7. Se utilizaron los siguientes métodos y procedimientos. El cultivo de célula y tratamiento con material de prueba - células RAW 264.7 (ATCC número TIB-71) se obtuvieron de la American Type Culture Collection (Manassas, VA) y se subcultivaron de conformidad con las instrucciones del proveedor. En preparación para prueba, se desarrollaron células en medio de crecimiento Dulbecco' s Modification of Eagle's médium (DMEM) con 105 de suero bovino fetal, se activaron con calor (FBS-HI) con penicilina/estreptomicina y se mantuvo en fase log antes del ajuste experimental. En el día dos del experimento, las células se colocaron en placas a 8 x 104 células por pozo en una placa de cultivo de tejido de 96 pozos con 200 uL de medio de crecimiento por pozo. Después de incubación durante la noche a 37°C con 5% de C02, el medio de crecimiento se aspiró y reemplazó con 200 uL de D EM sin FBS o penicilina/estroptomicina. Células RAW 264.7 se estimularon con lipopolisacárido (LPS) (10 ng/ml de concentración final) y se incubaron durante la noche para inducir la expresión COX-2. Diez y ocho horas después de estimulo con LPS, el material de prueba se añadió seguido 60 minutos después por la adición de A23187. Los materiales de prueba se disolvieron en sulfóxido de dimetilo (DMSO) como una solución de 250 veces de material. Cuatro uL de esta preparación de material de prueba de 250 veces el material se añadieron a 1 mL de DMEM, y 200 uL de esta solución se añadieron a ocho pozos para cada dosis de material de prueba. El medio sobrenadante se muestreó para determinación de prostaglandina E2 (PGE2) después de 30 minutos . Las concentraciones inhibitorias medias se computaron de un mínimo de cuatro concentraciones durante dos experimentos independientes. Los índices de combinación (CIs) se computaron como se describe abajo en métodos estadísticos. El Cuadro 17 describe los materiales de prueba utilizados en cada uno de dos ensayos independientes que se realizaron.
Cuadro 17. Matriz de dosificación para células RAW 264.7 estimuladas con LPS seguido por tratamiento con material de prueba PRUEBA PARA ACTIVIDAD DE INHIBICIÓN DE COX-2 DIRECTA Ensayo PGE2 no diluido y dilución de 1.20 - 2 placas de 9.08.03-células RAW 264.7 tratadas con LPS incubadas durante la noche luego tratadas con material de prueba durante 60 min seguido por A23187 durante 30 minutos. Compuesto Fracción C3 C4 C5 C6 No. de RIAA [ug/mL] [ug/mL] [ug/mL] [ug/mL] Sem 1. BetaTech RIAA 1.00 100 10 1.0 0.10 Compuesto Fracción C7 C8 C9 CIO No. De IAA [ug/mL] [ug/mL] [ug/mL] [ug/mL] Sem 2. BetaTech IAA 1.00 100 10 1.0 0.10 8 CU Aspirina 1.00 10 1.0 0.10 0.010 8 C12 APHS 10 1.0 0.10 0.010 8 Determinación de PGE2 Un procedimiento radioactivo, comercial, para cuantificación se PGE2 empleó (Caymen Chemical, Ann Arbor, MI ( ) para determinación de PGE2 y el procedimiento recomendado por el fabricante se usó sin modificación. En resumen, 50 uL del medio de cultivo sobrenadante se diluyeron con cantidades apropiados de investigador etiquetado acetilcolinesterasa y antisuero de PGE2, y se incubó a temperatura ambiente durante 18 h. Posteriormente, los pozos en la placa de microtitulo de ensayo de PGE2 se vaciaron y enjuagaron con tarapón de lavado; doscientos uL de reactivo de Ellman que contiene substrato para acetilcolinesterasa se añadieron luego. La reacción se mantuvo en un agitador lento a temperatura ambiente durante 1 h y la absorción a 415 se determinó en lector de placa de ensayo inmunosorbente enlazado con enzima de Bio-tek Instruments (Modelo #Elx800, Winooski, VGT) (ELISA) . Las especificaciones del fabricante para este ensayo incluyen un coeficiente de intra-ensayo de variación de <10%, reactividad cruzada con PGD2 y PGF2 de menos de 1% y linealidad a través de la escala de 10 - 1000 pg mL_I. La concentración de PGE2 se computó como pg de PGE2 por 105 células. Viabilidad de célula - La viabilidad de célula se determinó mediante inspección microscópica de células antes de o inmediatamente después del muestreo del medio para ensayo de PGE2. La mortalidad de célula se anotó cuando se observó. Los siguientes materiales se usaron y obtuvieron por los fabricantes indicados. Lipopolisacárido bacterial (LPS; B E coli 055:B55) fue de Sigma (St. Louis, MO) : equipo de anticuerpo monoclónal de prostaglandina E2 se compró de Cayman Chemical (Ann Arbor, MI) . Suero Bovino Fetal inactivado con calor (FBS-HI Cat.- #35-011CV y Dulbecco's Modification of Eagle's Médium (DMEM Cat #10-1013CV) se compró de Mediatech (Herndon, VA) . A menos que se anote de otra manera, todos los reactivos convencionales se obtuvieron de Sigma (St. luis, MO) y fueron los más puros comercialmente disponibles . Las substancias de prueba incluyeron RIAA e IAA obtenidas de Betatech Hops Products (Washington, DC) . Se utilizaron los siguientes métodos estadísticos. Un mínimo de cuatro concentraciones (cuadro 1) se usó para computar curvas de dosis-respuesta y concentraciones inhiborias de medio (IC5o) para PGE2 con 95% de intervalos de seguridad usando CalcuSyn (BIOSOFT, Ferguson, MO) . Este paquete estadístico realiza múltiples cálculos de dosis-efecto de droga usando los métodos de Median Effect descritos por T-C Chou y P. Talaly, Análisis cuantitativo de relaciones de dosis-efecto: los efectos combinados de múltiples drogas o inhibidores de enzima: Adv Enzyme Regul 22, 27-55 (1984). Brevemente, el análisis correlaciona la "Dosis" y el "Efecto" en la forma más sencilla posible: f /fu = (C/Cm)m, en donde C es la concentración o dosis del compuesto y Cm es la dosis efectiva media que significa la potencia. Cm se determina de la intercepción x- del trazo de " efecto medio. La fracción afectada por la concentración del material de prueba es fa y la fracción no afectada por la concentración es fu (fu = 1 - fa) . El exponen m es el parámetro que significa la sigmoicidad o forma de la curva de dosis-efecto. Se calcula por la inclinación del trazo de efecto medio. El trazo de efecto medio es una gráfica de x= log(C) contra y = log(fa/fu) y se basa en la forma logarítmica de la ecuación de efecto medio de Chou. La bondad de ajuste para el dato a la ecuación de efecto medio se representa por el coeficiente de correlación lineal r del trazo de efecto medio. Usualmente, el dato experimental de sistemas de enzima o receptor tienen un r >0.96, de cultivo de tejido un r > 0.90 y de sistemas animales un r > 0.85. En los estudios basados en células reportados aquí, todos los coeficientes de correlación lineal fueron mayores a 0.90. Para los resultados más fuertes, se repiten experimentos un mínimo de tres veces en tres fechas diferentes. El por ciento de inhibición en cada dosis se promedia sobre los tres experimentos independientes y se usa para calcular las concentraciones inhibitorias medias reportadas. La sinergia de componentes de prueba se cuantifica usando el parámetro de índice de combinación (CI) . El CI de Chou-Talaly se basa en el efecto de droga múltiple y se deriva de modelos cinéticos de enzima (Chou, T.-C, y Talalay, P. Una ecuación generalizada simple para el análisis de múltiples inhibiciones de sistemas cinéticos de ichaelis- enten. J. Biol. Chem. 252:6438-6442 (1977). La ecuación determina solamente el efecto aditivo más bien que el sinergismo o antagonismo. Sin embargo, el sinergismo se define en este caso como un efecto aditivo más que esperado, un antagonismo es un efecto aditivo menos del esperado como se propone por Chou y Talalay. Utilizando la designación de CI = 1 como el efecto aditivo, se obtuvieron las siguientes relaciones para compuestos mutuamente exclusivos que tienen el mismo modo de acción o para drogas mutuamente no exclusivas que tienen modos totalmente independientes de acción: CI <1, = 1, y > 1 indicando sinergismo, aditividad y antagonismo, respectivamente . Se aplicaron dos transformaciones de datos cuando se garantizaron. La primera transformación consistió en computar el por ciento de inhibición de la producción de PGE2 más elevada producida de la concentración de prueba más baja cuando la producción de PGE2 de estas dosis bajas excedió la producción de PGE2 del control estimulado por LPS. Este proceso controla la variabilidad de respuesta y gradientes a través de la placa. La segunda transformación de dato ajustada para variación en respuesta en las dosis graduadas. Las simulaciones de Monte Cario utilizando la variación histórica entre pozos predijo que las curvas de dosis-respuesta aparecen graduadas solamente 40% del tiempo cuando se utilizan pozos duplicados por concentración en una curva de dosis-respuesta de cuatro puntos. De esta manera, clasificando la respuesta por concentración antes de calcular la IC5o se hizo en aquellas situaciones en las que la respuesta no apareció graduada. Utilizando el protocolo arriba delineado, el estimulo de LPS de producción de PGE2 en células RAW 264.7 dispuestas de 1.4 veces a 2.1 veces con relación a células no estimuladas y fue algo dependiente de la dilución de medios para el ensayo de PGEa. El valor de IC50 de 8., 7 jg/mL (95% CL (limite de confianza) = 3.9 - 19) computado para el control positivo de aspirina fue consistente con los valores publicados para inhibición de COX-2 directa que varia de 1.4 a 50 ug/iaL (Mitchell, J.A. , y col. Selectivity of nonsteroidal anti-inflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase . Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:11693-11697 (1994); aner, T.D., y col., Nonsteroidal drug selectivities for cyclo-oxigenase-1 rather than cyclo-oxygenase-2 are associated with human gastrointestinal toxicity: A full in vitro analysis. Proc. Nati. Acad. Sci. USA 96:7563:7568 (1999)) y resultados previso de 3.2 ug/mL (95% CL = 0.55 - 19) en la linea de células A549. Células RAW 264.7 se estimularon con LPS y se incubaron durante la noche antes de inducir la expresión COX-2 (Figura 10) . Diez y ocho horas después de estimulo con LPS, el material de prueba se añadió seguido 60 minutos después por la adición de A23187. El medio sobrenadante se muestreó para determinación de PGE2 después de 30 minutos. Los valores en por ciento medio de inhibición de PGE2 se computaron desde un minimo de ocho réplicas sobre cuatro concentraciones y dos experimentos independientes (Figura 10) . Ambos RIAA e IAA produjeron inhibición relacionada con dosis modesta de PGE2 en células RAW 264.7 estimuladas con LPS (Figura 10) . Sobre el aumento de 1000 veces en concentración de material de prueba, solamente un aumento de 14 a 10 por ciento en inhibición se observó, respectivamente, para RIAA e IAA. Lo poco profundo de las inclinaciones de dosis-respuesta resultó en valores de IC5o (Cuadro 18) en la escala de mg/mL para RIAA (36 mg/mL) e IAA (>1000 mg/mL) . Este cambio minimo en respuesta sobre tres unidades log de dosis implica que el efecto inhibitoria observado de los derivados de lúpulo en este ensayo basado en células es probablemente un efecto secundario sobre las células y no inhibición directa de COX. Una posible explicación es que los derivados de lúpulo interfieren con liberación de ácido araquidónico mediada por A23187 de las membranas celulares. Células RAW 264.7 se estimularon con LPS y se incubaron durante la noche para inducir expresión de COX-2. Diez y ocho horas después de estímulo con LPS, el material de prueba se añadió seguido 60 minutos después por la adición de A23187. El medio sobrenadante se muestreó para determinación de PGE2 después de 30 minutos. Las concentraciones inhibitorias medias se computador de un mínimo de ocho réplicas a cuatro concentraciones sobre dos experimentos independientes (Cuadro 18). Cuadro 18. Concentraciones inhibitorias medias para RIAA, IAA en células RAW 264.7 cuando el material de prueba se añade después de la noche de estimulo de LPS. Material de Prueba IC5o 95% de Intervalo de Confianza [mg/mL] [mg/mL] RIAA 36 17 - 19 IAA >1000 Control Positivo IC5o 95% de Intervalo de Confianza [ug/mL] [ug/mL] Aspirina 8.7 3.9 - 19 Los resultados de probar RIAA e IAA por su capacidad de inhibir t directamente biosíntesis de PGE2 de COX-2 produjo solamente una inhibición modesta, relacionada con dosis de PGE2 en células RAW 264.7 estimuladas con LPS.
Lo poco profundo de las inclinaciones de dosis-respuesta resultó en valores de IC5o en la escala de mg/mL para RIAA (36 mg/mL) e IAA (>1000 mg/mL) . El efecto inhibitoria observado de los derivados de lúpulo en este ensayo a base de célula es probablemente un efecto secundario sobre las células y no inhibición directa de COX. Una posible explicación es que los derivados de lúpulo interfieren con liberación de ácido araquidónico mediada por A23187 de membranas celulares . EJEMPLO 26 ANÁLISIS DE ACTIVIDAD DE LÚPULO EN UN SISTEMA DE ENSAYO COX LIBRE DE CÉLULA Este ejemplo describe el efecto de lúpulo sobre actividad de enzima COX. El efecto de lúpulo sobre actividad de enzima COX se probó en un sistema de ensayo de COX libre de célula. El ensayo se realizó usando el equipo de Ensayo de Tamizado de Inhibidor de COX de Cayman Chemical (Catálogo #560131; Cayman Chemical Co., Ann Arbor MI). Brevemente, la enzima se pre-incuba con inhibidor durante diez minutos a 37°C, luego · la reacción se inició con la adición de ácido araquidónico. Después de dos minutos, la reacción se detuvo mediante la adición de HC1. El PGH2 se redujo a PGA2 alfa, que luego se cuantificó usando un inmunoensayo de enzima competitiva (EIA) . Cada concentración se probó con dos reacciones separadas, que luego se probaron cada una en duplicado durante el paso de EIA. Los resultados del ensayo de enzima de COX se muestran en el Cuadro 19. Como se puede ver, IAA y RIAA no tuvieron esencialmente efecto sobre actividad de enzima de COX-1 o COX-2. En contraste, la indometacina inhibidora de COX inhibió ambos, COX-1 y COX-2. Cuadro 19. Inhibición de IAA y RIAA de actividad COX Indometacina IAA RIAA COX 1 COX 1 COX 1 Ug/ml % Inhibición ug/ml % Inhibición ug/ml % Inhibición 10 .60.6 200 . 9.6 200 2.9 1 . 34.6 100 3 100 0.5 0.01 28.2 10 4.2 10 2.5 0.001· -2.8 1 2.1 1 1.9 COX 2 COX 2 COX 2 Ug/ml % Inhibición ug/ml % Inhibición ug/ml % Inhibición 100 48.4 200 0.3 200 1.9 50 77.6 100 -3.6 100 -0.7 0.5 67.5 10 -2 10 2.7 0.05 3.4 1 0.9 1 2.8 Estos resultados demuestran que el lúpulo no tiene actividad de enzima COX significativa. Por lo tanto, el lúpulo probablemente actúa como el nivel de presión de COX-2. EJEMPLO 27 MODELO' DE CÉLULA MUCOSA GÁSTRICO PARA CALCULAR TOXICIDAD GASTROINTESTINAL RELATIVA DE NSAIDS Este ejemplo describe el uso de una linea de célula mucosal gástrica (células GAS) para determinar toxicidad gastrointestinal potencial de drogas antiinflamatorias no esteroides. Como se describe en los Ejemplos 1 y 2, las células AGS proporcionan un sistema modelo para determinar toxicidad gastrointestinal potencial. El objetivo de este estudio fue caracterizar adicionalmente la linea de célula mucosal gástrica humana AGS como un modelo para calcular la toxicidad GI relativa (gastropatia) de compuestos inhibitorios de COX. Las células AGS se caracterizaron adicionalmente como un modelo para toxicidad gastrointestinal esencialmente como se describe en el Ejemplo 2. Brevemente, los químicos utilizados en los ensayos se obtuvieron como sigue. Formulaciones comerciales de tabletas de rofecoxib y cápsulas de celecoxib se usaron. Equipos de PGE2 EIA se obtuvieron de Cayman Chemical (Ann Arbor, MI) . Se obtuvieron antisueros policlonales de conejo anti-COX-1 y anti-COX-2 de Upstate Biotechnology (Waltham, MA) , e IgG-HRP mono y anti-cabra se obtuvo de Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) . Suero Bovino Fetal inactivado con calor (FBS-HI Cat. #35-011CV) y Dulbecco's Modification of Eagle' s Médium (DMEM Cat #10-013CV) se compró de Mediatech (Herndon, VA) .
Interleuquina-1? (IL-ljff) y todos los químicos convencionales y drogas antiinflamatorias no esferoides (NSAIDs), a menos que se anote, se obtuvieron de Sigma (St Louis, MO) y fueron de la pureza más elevada comercialmente disponible. Para cultivo de célula, células epiteliales de vía aérea humana A549 se obtuvieron de la American Type Culture Collection (Manassas, VA) y se subcultivaron de conformidad con las instrucciones del proveedor. Las células se cultivaron rutinariamente a 37 °C con 5% de C02 en RPMI 1640 que contiene 10% de FBS con 50 unidades de penicilina/mL, 50 ug de estreptomicina/mL, 5% de piruvato de sodio, y 9% de L-glutamina. Para tratamiento de las células con compuestos de prueba, se usó el Ensayo Modificado de William Harvey (WHMA) para determinación de inhibición de COX-2 sin modificaciones [Warner TD, Biuliano F, Vojnovic I, Bukasa A, Mitchell JA, Vane JR. (1999) Selectividades de droga no esferoide para ciclooxigenasa-1 en lugar de ciclooxigenasa-2 están asociadas con toxicidad gastrointestinal humana: Un análisis in vitro completo.
Proc. Nati. Acad. Sci. EUA. 96:7563-7568]. Brevemente, las células A549 se expusieron a TL-?ß durante 24 h, el medio se removió y se añadió plasma humano (100 uL) junto con agentes de prueba o el vehículo DMSO. Para experimentos iniciales, las concentraciones de agente de prueba fueron 25, 5, 0.5, y 0.05 ug/mL. DMSO en cada pozo de microtitulo fue menos de 1% de los 200 uL de volumen; 60 min después, se añadió A23187 (50 uM) ; después de 30 min, 50 uL del medio sobrenadante de cultivo se muestreo y se ensayó inmediatamente para PGE2 como se detalla en otro lugar. La linea de célula mucosal gástrica humana AGS (American Type Culture Collection, Manassas, VA) también se cultivó y mantuvo de conformidad con la metodología recomendada por ATCC. Las células de AGS subcultivadas se desarrollaron en IMDM con 20% de FBS con 50 unidades de penicilina/mL y 50 ug de estreptomicina/mL; las células se mantuvieron en fase log antes de cada experimento. Para ensayos de PGE2, aproximadamente 105 células por pozo se colocaron en placas de 96 pozos en 200 uL de medio de crecimiento por pozo. Las células se desarrollaron a 805 de confluencia y se lavaron 3 veces con medio IMDA antes de adición de agente de prueba. Se añadieron NSAIDs en 200 uL de medio de IMDA que no contiene FBS ni penicilina/estreptomicina. Sesenta minutos después de la adición de los materiales de prueba, ácido araquidónico (AA) se indujo con adición del ionóforo de calcio A23187, o se añadió exógenamente a 100 o 5 uM AA en DMSO. La incubación a 37 °C se llevó a cabo durante 30 minutos adicionales. Cincuenta microlitros de medio se muestrearon para determinación de PGE2. Para determinación de PGE2, se empleó un procedimiento no radioactivo, comercial para cuantificación de PGE2 (Cayrnan Chemical, Ann Arbor, MI) para la determinación de PGE2 y el procedimiento recomendado del fabricante se usó sin modificación. Brevemente, 50 uL del medio de cultivo sobrenadante, junto con una dilución en serie de muestras convencionales de PGE2, se mezclaron con cantidades apropiadas de investigador etiquetado acetilcolinesterasa y antisuero de PGE2 y se incubaron a temperatura ambiente durante 18 h. Después, los pozos en la placa de microtitulo de ensayo de PGE2 se vaciaron y enjuagaron con tampón de lavado, y 200 uL de reactivo de Ellman que contiene substrato para acetilcolinesterasa se ' añadieron luego. La reacción se realizó en un agitador lento a temperatura ambiente durante 1 h, después de lo cual se determinó la absorbencia a 415 nm en un lector de placa ELISA de Bio-Tek Instrument (Modelo #Elx800, Winooski, V ) . Las especificaciones del fabricante para este ensayo incluyen un coeficiente de intra-ensayo de variación de <10%, reactividad cruzada con EGD2 y PGF2a de menos de 1%, y linealidad a través de la escala de 10-1000 pg/mL. La concentración de PGE2 se registró como pg PGE2 por 105 células. Para cálculos de ensayo, un mínimo de cuatro concentraciones cada una, con dos réplicas por concentración durante tres experimentos independientes, se usaron para computar concentraciones inhibitorias medias (IC5o) y sus límites de confianza de 95% para la inhibición de biosintesis de PQE2 (CalcuSyn, BIOSOFT, Ferguson, MO) . Las curvas de dosis-respuesta completas con coeficientes de determinación >0.9 se obtuvieron para todos los compuestos de prueba, excepto ácido salicílico y acetaminofén para células A549 y AGS y diisopropilfluorofosfato para células AGS con 100 Urn de ??. El Índice terapéutico (TI) para seguridad gastrointestinal se computó como el log (AGS IC50/A549 IC50) · Mientras que se ha recomendado que la IC8o se deben usar para el componente de eficacia (es decir, inhibición de síntesis de PGE2 en células A549) en el cálculo del TI, errores grandes se asocian con cálculos en los extremos de la curva de dosis-respuesta. De esta manera, existe mayor incertidumbre en relaciones en las que se utilizan estos cálculos. TI positivo indica potencial bajo para toxicidad de GI, mientras de TI negativo indica un potencial superior para toxicidad de GI . El coeficiente r5 de correlación de rango de Spearman fue computado para cuantificar el grado de asociación entre clasificación de TI previamente publicación usando células de no meta y el modelo de AGS/A549. El parámetro rs también se usó para determinar el grado de asociación entre clasificación in vitro de TI y clasificación de gastropatía de NSAID clínicamente determinada. La probabilidad de un error Tipo I se ajustó al nivel nominal de 5%. La línea de células gástricas humanas AGS se cultivó en placas de seis pozos a 37°C con 5% de C02 en una incubadora humidificada durante 24 h. Las células de lisaron sobre hielo en tampón de lisis y concentración de proteina determinada. Cincuenta microgramos de lisado de célula se solubilizaron y fraccionaron en un gel de 10% de poliacrilamida que contiene dodecilsulfato de sodio. Para inmunomanchado, se realizó manchado Western de COX-1 y COX-2 usando Geles premoldeados PAGEr*® Gold (Bio Whittaker Molecular Applications, Rockland, ME) . Lisados de célula RAW 264.7 que contienen aproximadamente 60 ug de proteína se cargaron - con tampón de muestra de laemmli hacia los pozos en un volumen total de 30 uL. Las cámaras de electroforesis de minigel verticales usadas se hicieron por Savant Instrument, Inc. (Modelo MV120; Holbrook, NY) . Los geles se corrieron a 40 mA/placa (corriente constante) a temperatura ambiente hasta que la mancha azul de bromofenol alcanzó el fondo del gel, que tomó aproximadamente 1 h. Los geles luego se mancharon sobre membranas de transferencia de fluoruro de polivinilo (PVDF) (Pall Corporation, Ann Arbor, MI), durante la noche, a 500 mA y 4°C. Los marcadores de peso molecular usados estuvieron sin manchar. Normas de Proteína de Precisión de escala amplia (Bio Rad, hércules, CA) . El substrato quimiluminiscente de duración prolongada BioWestm (Biolmaging Systems, Upland, CA) , un equipo de substrato de peroxidasa de rábano, no isotópico, para detección de Mancha Western, se usó para visualización de proteína. Las imágenes de Manchas Western se adquirieron usando Cuarto Oscuro UVP Epi Chemi II (Biolmaging Systems), y se analizaron y mejoraron por LabWorks1 Image Acquisition and Analysis Software (Biolmaging Systems) . Las intensidades de banda se evaluaron a través de análisis densitométrico, computadas usando software ScanAnalysis(R) (BIOSOFT, Ferguson, MO) , y se registraron como Unidades de Densidad arbitrarias (DU) . La línea de célula AGS expresó constitutivamente ambas COX-1 y COX-2, con la expresión de COX-1 aproximadamente 4 veces mayor ' que la expresión de COX-2 (ver el Ejemplo 1) . Estos resultados están de acuerdo con el trabajo recientemente publicado (Fan y col., Interleukin-lbeta induces ciclo-oxygenase-2 expression in gastric cáncer cells by the p38 and p44/42 mitogen-activated protein kinase signaling pathways, J.
Gastroenterol Hepatol. 16:1098-104 (2001)) usando la línea de célula AGS, en la que la expresión constitutiva de ambas enzimas de ciclooxigenasa se demostró. El Cuadro 20 muestra la concentración inhibitoria media (IC50) para biosíntesis de PGE2 de NSAID seleccionadas en el modelo de célula A549 y AGS. Cuadro 20. Concentraciones inhibitorias medias (IC50) para biosintesis de PGE2 de NSAID selectas en un modelo de célula A5 y AGS.* Compuestos A549 Células Mucosales Gástricas AGS A23187 A23187 100 uM 5 uM [uM] [uM] Araquidonato Araquidonato [uM] [uM] DIFP^ 6.5 359 >136 217 (1.5-28) 125-1022) (141-185) Rofecoxib 0.24 5.5 12 ' 21 (0.15-0.45] (2.7-11) (2.3-64) (5.8-79) Celecoxib 0.21 0.063 17 9.4 (0.01-4.2) (0.02-0.22; (2.5-113) (3.9-23) Nimensulida 0.32 0.12 73 75 (0.16-0.65) (0.0081-1.7) (25-211; (52-104) Naproxeno 28 0.83 167 313 ;i.3-600) (0.24-2.8) (16-1735] (91-1039) Ibuprofen 12 2..8 6.3 107 (6.8-19) (1.3-5.8) (1.4-29) (38-291) Aspirina 18 2.9 6.0 18 (3.0-106) (1.4-5.6) (2.9-12) (9.4-37) Ácido salicilico 4246 1065 112 7848 (355-50971) (94-122217) (69-181) (1775-34565] Acetaminofen 238 535 346 3815 (6.62.-9589) (179-1616) (192-609) (1252-12649) Indometacina 8.1 0.0042 0.0025 0.0056 (2.6-26) (0.00042-0.039) (0.000028-0.20) (0.002.0.011) * Los valores entre paréntesis son intervalos de confianza de 95% del cálculo de IC5 DIFP = diisofluorfosfato La Figura 11 muestra una comparación de relaciones Log IC50 y grado de gastropatia potencia. Las relaciones Log ICso que usan el Ensayo Modificado de William Harvey (WHMA) se expresan WHMA C0X-1/WHMA COX-2 de Warner, y col. (Nonsteroidal drug selectivities for cyclo-oxygenase-1 rather than cyclo-oxygenase-2 are associated with human gastrointestinal toxicity: A full in vitro analysis. Proc. Nati. Acad. Sci. USA. 96:7563-7568 (1999)) (barras blancas) y Mitche, y col. (Selectivity of nonsteroidal antiinflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase . Proc. Nati. Acad. Sci. USA. 90:11693-11697 (1994)) (barras azules) se muestran en la figura 11A con relaciones log IC50 (AGS/WHMA COX-2) para células AGS tratadas con. A23187 Figura 11B) , 100 uM de ácido araquidónico (Figura 11C) , o 5 uM de ácido araquidónico (Figura 11D) . Los valores a la derecha de 0 indican probabilidad disminuida de gastropatia, mientras que los valores a la izquierda de 0 indican probabilidad aumentada de gastropatia. Como se muestra en la Figura 11, la relación entre el dato previamente publicado y los tres protocolos AGS se examinó. Los protocolos de log[IC50 relación) WHMA C0X-1/WHMA COX-2)] se computó de datos publicados (Figura 11A) y se comparó con log[IC50 relaciones (AGS7WHMA COX-2)] para la A23187 (Figura 11B) , 100 uM de ácido araquidónico (Figura 11C) , y 5 uM de ácido araquidónico (Figura 11D) . La clasificación de compuestos desde el potencial de toxicidad de GI más bajo al mayor fue sorprendentemente similar entre los modelos y dentro de los protocolos AGS. De manera interesante, solamente rofecoxib e indometacina mostraron la toxicidad GI menor y más potencial, respectivamente, en todos los protocolos AGS. Los cálculos de clasificación de TI fueron similares a la clasificación TI computada usando plaquetas (COX-1) y células A549 (COX-2) con rs=0.903, p<0.01 para A23187; 0.733, p=p.02 para 100 uM de AA; y 0.77, p<0.02 para 5 uM de AA. Cuantitativamente, sin embargo, el modelo AGS/A549 exhibió TI inferior que el modelo plaqueta/A549. La liberación de AA mediada con A23187, adición de 100 uM de AA, y adición de 5 uM de AA proporcionó cálculos de clasificación de toxicidad TI significativamente asociados con rangos clínicos de gastropatía de NSAID, respectivamente (rs=0.933, p<0.01; 0.783, p<0.01; 0.683, p=0.05). AS23187 que clasifica NSAIDs desde el potencial más bajo a mayor para toxicidad de GI fue rofecoxib < acetaminofén < nimensulida < celecoxib < ácido salicilico < ibuprofen < aspirina < naproxeno < indometacina . Como se describió en el ejemplo 1 y como se ve en células mucosales gástricas normales, la linea de células AGS constitutivamente expresa ambos COX-1 y COX-2. El uso de células AGS y A549 proporcionó cálculos de rango de TI que fueron cualitativamente similares al rango TI computado usando plaquetas (COX-1) y células A549 con rs = 0.903, p<0.01 para A23187; 0.733, p=0.02 para 100 uM de AA, y 0.770, p<0.02 para 5 uM de AA. Cuantitativamente, el modelo de AGS/A549 exhibió TI inferior que el modelo de plaqueta/A5 9. La liberación de AA mediada por A23187, asi como los protocolos de adición de 100 uM y 5 uM de AA proporcionaron cálculos de rango de toxicidad de GI significativamente asociados con rangos clínicos de gastropatia de NSAID, a rs=0.933, p<0.01; 0.783, p<0.01; y 0.683, p=0.05, respectivamente. La clasificación de A23187 de NSAIDs de potencial más bajo a mayor para toxicidad de GI fue rofecoxib < acetaminofen < nimensulida < celecoxib < ácido salicilico < ibuprofen < aspirina < naproxeno < indometacina. Estos resultados demuestran adicionalmente que la línea de célula mucosal gástrica humana AGS puede servir como un modelo para determinar los efectos gastrointestinales de compuestos de inhibición de COX. Los datos derivados de AGS indican que la inhibición de biosíntesis de PGE2 gástrica sostiene la gastropatia humana de NSAIDs. Una modalidad preferida comprende composiciones que contienen cuando menos una fracción aislada o derivada de lúpulo (Humulus lupulus) . Los ejemplos de fracciones aisladas o derivadas de lúpulo son ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. Los compuestos preferidos de fracciones aisladas o derivadas de lúpulo, incluyendo, pero no están limitados a humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, di idro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. Los compuestos preferidos también pueden contener substituyentes, tales como halógenos, éteres, y ésteres. Otra modalidad comprende composición que contiene triptantrina y conjugados de la misma. Otras modalidades se relacionan con combinaciones de componentes . Una modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo y como un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en romero ( osmarinus officinalis L.), un extracto o compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno o derivados o conjugados de la misma, y triptantrina o conjugados de la misma. Otra modalidad se relaciona con composiciones que incluyen, como un primer componente, triptantrina o conjugados de la misma y como un segundo componente cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en un ingrediente activo aislado o derivado de un extracto de lúpulo, romero, un extracto o compuesto derivado de romero, y una especie de triterpeno o derivados o conjugados del mismo. Será fácilmente evidente a aquellos expertos* en el ramo que diversos cambios y modificaciones de una naturaleza obvia se pueden hacer sin abandonar el espíritu de la invención, y todos estos cambios y modificaciones se considera que quedan dentro del alcance de la invención como se define por las reivindicaciones anexas . Estos cambios y modificaciones incluirían, pero no se limitan a, los ingredientes incipientes añadidos para efectuar el proceso de fabricación de cápsula, tableta, loción, alimento o barra así como vitaminas, hierbas, saborizantes y portadores. Otros cambios o modificaciones incluirían el uso de otras hierbas o productos botánicos que contienen las combinaciones de las modalidades preferidas arriba descritas. Muchas modificaciones y variaciones adicionales de las modalidades descritas en la presente se pueden hacer sin abandonar el alcance, como es evidente a aquellos expertos en el ramo. Las modalidades especificas descritas en la presente se ofrecen por via de ejemplo solamente.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES 1. - Una composición que comprende como un primer componente, una fracción aislada o derivada de lúpulo; y como un segundo componente, cuando menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpina, una especie de lactona ,de diterpina, y triptantrina. · 2. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo se extrae con C02. 3. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo se selecciona del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta y lúp lo agotado . 4. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, eri donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un % orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 5.- La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde Rr se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)j>, C¾CH(CH3)2 y CH (C¾) CH2CH3. 6.- La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula : en donde Rf se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. 7.- La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-ad umulona, tetrahidro-isohumulona, _ tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . 8. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde el segundo componente es un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en 1,8-cineol, ácido 19-alfa-hidroxiursólico, acido 2-?-hidroxioleanólico, ácido 3-0-acetiloleanólico, -ácido 3-0-acetilursólico, 6-metoxi-leuteolin-7~glucosido, 6-metoxiluteolina, 6-metoxiluteolin-7-glucosido, metoxiluteolin-7-metiléter, 7-etoxi-rosmanol, 7-metoxi-rosmanol, alfa-amirina, alfa-humuleno, ácido alfa-hidroxihidrocafeicof alfa-pineno,. ' alfa-terpineno, alfa-acetato de terpinenilo, alfa-terpineol, alfa-tujona, apigenina, apigenin-^7-glucosido, curcumeno, alcohol de bencilo, ?-elemeno, /?-pineno, betulina, ácido betulinico, borneol, acetato de bornilo, ácido cafeico, canfeno, canfor, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, carvona, carioflleno, óxido cariofileno, ácido clorogénico, diosmetina, gamma-terpineno, hesperidina, isoborneol, limoneno, luteolina, luteolin-3' -O- ( 3"-0-acetil ) -/?gluconido luteolin-3' -O- ( 4"-0-acetil ) -ß luteolin-3' -O- (4"-0-acetil) —D-glucuronida, luteolin-3' -0-ß -D-glucuronida, luteolin-7-glucosido, metil-eugenol, mirceno, ácido neo-clorogénico, nepetina, ácido octanoico, ácido oleanólico, p-cimeno, piperitenona, rosmanol, ácido rosmárico, rosmaricina, rosmaridifenol, ácido rosmarinico, rosmarinol, rosmariqumona, sabineno, acetato de sabxnilo, salicilatos, ácido salicilico-2-?-D-glucosido, escualeno, terpinen-4-ol, terpinoleno, timol, trans-anetol, trans-carveol, ácido ursólico, verbenona y zingibereno. 9. - La composición de conformidad con la reivindicación 8, en donde el segundo componente es un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en betulina, ácido betulinico, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, ácido clorogénico, diosmetina, limoneno, y luteolina. 10. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que consiste en ácido 18-a-glicirretínico, ácido 18-/? -glicirretinico, ácido 2-a~3-a-dihidrooxiurs-12-3n-28-ónico Ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulinico, celastrol, ácido eburicoico, friedelina, glicirrizina, gipsogenina, ácido oleanólico, ácido oleanólico-3-acetato, ácido paquímico, ácido pinicólico, soforadiol, soyasapogenol A, soyasapogenol B, tripterina, triptofenolida, ácido tumulósico, ácido ursólico, ácido ursólico-3-acetato, uvaol, y /?-sitoesterol . 11. - La composición de conformidad con la reivindicación 10, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que comprende ácido 18-a-glicirretínico, ácido 18-ß -glicirretinico, ácido 2-a-3-a-dihidrooxiurs-12-3n-28-ónico Ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulinico, celastrol, firedelina, ácido oleanólico, tripterina, triptofenolida, ácido ursólico, y uvaol. 12. - la composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde el segundo componente es triptantrina, una especie de triterpeno, o una especie de lactona de diterpeno que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. 13. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición comprende aproximadamente 0.5 a 10000 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 14. - La composición de conformidad con la reivindicación 13, en donde la composición comprende aproximadamente 50 a 7500 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 15. - la composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición comprende aproximadamente 0.35 a 3500 mg de triptantrina, en donde el segundo componente es triptantrina. 16. - La composición de conformidad con la reivindicación 15, en donde la composición comprende aproximadamente 0.7 a 700 mg de triptantrina, en donde el segundo componente es triptantrina. 17. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición comprende aproximadamente 0.5 a 5000 mg del segundo componente, en donde el segundo componente se selecciona del grupo que consiste en romero, extracto derivado de romero, y un compuesto derivado de romero. 18.- La composición de conformidad con la reivindicación 17, en donde la composición comprende aproximadamente 5 a 2000 mg del segundo componente, en donde el segundo componente se selecciona del grupo que consiste en romero, extracto derivado de romero, y un compuesto derivado de romero. 19. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición comprende aproximadamente 0.035 a 3500 mg de una especie de triterpeno, en donde el segundo componente es una especie - de triterpeno . 20. - La composición de conformidad con la reivindicación 19, en donde la composición comprende aproximadamente 0.7 a 700 mg de una especie de triterpeno, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno . 21.- La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición comprende aproximadamente 0.001 a 10 por ciento en peso del primer componente . 22.- La. composición de conformidad con la reivindicación 21, en donde la composición comprende aproximadamente 0.1 a 1 por ciento en peso del primer componente . 23. - la composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición comprende aproximadamente 0.001 a 10 por ciento en peso del segundo componente . 24. - La composición de conformidad con la reivindicación 23, en donde la composición comprende aproximadamente 0.1 a 1 por ciento en peso del segundo componente . 25. - la composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde una relación del primer componente al segundo componente está en la escala de alrededor de 100:1 a alrededor de 1:100. 26. - La composición de conformidad con la reivindicación 25, en donde la relación del primer componente al segundo componente está en la escala de alrededor de 50:1 a alrededor de 1:50. 27.- La composición de conformidad con la reivindicación 1, en donde la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 28. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, la composición comprendiendo una fracción aislada o derivada de lúpulo extraído con C02, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 29. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, la composición comprendiendo ácidos isoalfa reducidos, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero . 30. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, que comprende además glucosamina. 31. - Un método para modular respuesta inflamatoria en células, el método comprendiendo poner en contacto las células con una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especie de lactona de diterpeno, y triptantrina . 32. - El método de conformidad con la reivindicación 31, en donde la composición comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo extraída con CO2, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 33.- El método de conformidad con la reivindicación 31, en donde la composición comprende ácidos isoalfa reducidos, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 34. - El método de conformidad con la reivindicación 31, en donde la composición comprende además glucosamina. 35. - Un método para tratar o inhibir una condición patológica en un mamífero asociada con activación específica de tejido . de inflamación, el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especie de lactona de diterpeno, y triptantrina. 36. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo se selecciona del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo, agotado. 37. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto de ún supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X o Z es un p orbital, entonces el R, T, X o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 38.- El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2C¾- 39.- E método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde Rr( se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(C¾)2, y CH (CH3) CH2C¾ . 40.- El método de conformidad 'con la reivindicación 35, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro, isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-ad umulona, hexahidro-isohumulona, ñexahidro-isocohumulona, y hexa idro-adhumulona . 41.- Ei método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende aproximadamente 0.5 a 10000 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 42. - El método de conformidad con la reivindicación 41, en donde la composición comprende aproximadamente 50 a 7500 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 43. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende aproximadamente 0.001 a 10 por ciento en peso de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 44. - El método de conformidad con la reivindicación 43, en donde la composición comprende aproximadamente 0.1 a 1 por ciento en peso de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 45. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el segundo componente es romero . 46. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el . segundo componente es un extracto derivado de romero . 47. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno. 48. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende además un tercer componente diferente al segundo componente, el tercer componente se selecciona del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especie de lactona de diterpeno, y triptantrina. 49. - El método de conformidad con la reivindicación 48, en donde el segundo y tercer componentes son un extracto derivado de romero y triptantrina, respectivamente . 50. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el segundo componente es un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en 1,7-cineol, ácido 19-alfa-hidroxiursólico, ácido 2-?-hidroxioleanólico, ácido 3-O-adetiloleanólico, ácido 3-O-acetiloleanólido, ácido 3-O-acetilursólico, 6-metoxi-luteolin-7-glucosido, 6-metoxiluteolina, 6-metoxiluteolin-7-glucosido, metoxiluteolin-7-metil éter, 7-etoxi-rosmano, 7-metoxi-rosmanol, alfa-amirina, alfa-humuleno, ácido alfa-hidroxihidrocafeico, alfa-pineno, alfa-terpineno, alfa-acetato de terpinenilo, alfa-terpineol, alfa-tujona, apegenina, apigenin-7-glucosido, curcumeno, alcohol de bencilo, ^-mirenona, andrina, /?-elemeno, /?-pineno, betulina, ácido betulinico, borneol, bornil-acetato, ácido cafeico, canfeno, canfor, ácido carnósico, car osol, carvacrol, carvona, cariofileno, cariofileno-óxido, ácido clorogénico, diosinetina, gamma-terpineno, hesperidina, isoborneol, limoneno, luteolina, lutoeolin-3' -0- (3"-0-acetil) -ß-? -gluconida, luetolin-3' -0- ( 4"-0-acetil) -?-D-glucuronida, luteol-3' -0-?-D-glucuronida, luteolin-7-glucosida, metil-eugenol, mirceno, ácido neo-clorogénico, nepetina, ácido octanoico, ácido oleanólico, p-cimeno, piperitenona, rosmanol, ácido rosmárico, rosmaricina, rosmaridifenol, ácido rosmarinico, rosmarinol, rosmariquinona, sabineno, acetato de sabinilo, salicilatos, ácido salicilico-2-/?-D -glucósido, escualeno, terpinen-4-ol, terpinoleno, timol, trans-anetol, trans-carveol, ácido ursólico, verbenona, y zingibereno . 51.- El método de conformidad con la reivindicación 50, en donde el segundo componente es un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en betulina, ácido betulinico, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, ácido clorogénico, diosmetina, limoneno, y luteolina. 52. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende aproximadamente 0.5 a 5000 mg del segundo componente, en donde el segundo componente se selecciona del grupo que consiste de romero, extracto derivado de romero, y un compuesto derivado de romero. 53. - El método de conformidad con la reivindicación 52, en donde la composición comprende aproximadamente 5 a 2000 mg del segundo componente, en donde el segundo componente se selecciona del grupo que consiste en romero, extracto derivado de romero, y un compuesto derivado de romero. 54. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno, o una especie de lactona de diterpeno que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinatp, acetato, y glutationa. 55. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que consiste en -ácido 18-a-glicirretinico, ácido 18-beta-glicirretinico, ácido 2-a-3-a-dihidrooxiurs-12-3n-28-ónico, ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulínico, ¦ celastrol, ácido eburicoico, friedelina, glicirrizina, gipsogenina, ácido oleanólico, ácido oleanólico-3-acfetato, ácido paquimico, ácido pinílico, soforadiol, suyasapogenol A, soyasapogenol B, tripeterina, triptofenolida, ácido tumulósico, ácido ursólico, ácido ursólico-3-acetato, uvarol, y beta-sitoesterol . 56. - El método de conformidad con la reivindicación 55, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que consiste en ácido 18-a-glicirretinico, ácido 18-beta-glicirretinico, ácido 2-a-3-a-hidrooxiurs-13-3n-28--ónico, ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulínico, celastrol, friedelina, ácido oleanólico, tripterina, triptofenolida, ácido ursólico, y uvaol . 57. - Ei método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende aproximadamente 0.035 a 3500 mg de una especie de triterpeno, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno. 58. - El método de conformidad con la reivindicación 57, en donde la composición comprende aproximadamente 0.7 a 700 mg de una especie de triterpeno, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno . 59. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde el segundo componente es triptantrina que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato y glutationa. 60. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende aproximadamente 0.035 a 3500 mg de triptantrina, en donde el segundo componente es triptantrina. 61.- El método de conformidad con la reivindicación 60, en donde la composición comprende aproximadamente 0.7 a 700 mg de triptantrina, en donde el segundo componente es triptantrina. 62. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende aproximadamente 0.001 a 10 por ciento en peso del segundo componente. 63. - El método de conformidad con la reivindicación 62, en donde la composición comprende aproximadamente 0.1 a 1 por ciento en peso del segundo componente . 64. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde una relación del primer componente al segundo componente está en la escala de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 1:100. 65. - El método de conformidad con la reivindicación 64, en donde la relación del primer componente al segundo componente está en la escala de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 1:50. 66.- El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la condición patológica se selecciona del grupo que consiste en enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades neurológicas, y cáncer. 67. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la condición patológica se selecciona del grupo que consiste en inflamación, desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con . la piel condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmicas, inflamación pulmonar, desórdenes del ¦ sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterioesclerosis y daño nervioso central . 68. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 69. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición se administra oralmente, tópicamente, parenteralmente o rectalmente. 70. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo extraído con C02, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 71. - El método de conformidad con la reivindicación 35, en donde la composición comprende ácidos isoalfa reducidos, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero . 72.- El método de conformidad con la reivindicación.35, en donde la composición comprende además glucosamina. 73. - ün método para modular la cantidad de actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2) en células de meta sin modular substancialmente actividad de COX-2 en células de no meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una especie de lactona de diterpeno, y triptantrina. 74. - El método de conformidad con la reivindicación 73, en donde las células de no meta también se ponen en contacto con la fracción aislada o derivada de lúpulo . 75. - El método de conformidad con la reivindicación 73, en donde el paso de contacto es in vivo. 76. - El método de conformidad con la reivindicación 73, en donde la actividad de COX-2 se modula mediante inhibición de gene de COX-2. 77. - El método de conformidad con la reivindicación 73, en donde la composición comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo extraída con C02, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 78. - El método de conformidad con la reivindicación 73, en donde la composición comprende ácidos isoalfa reducidos, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 79. - El método de conformidad con la reivindicación 73, en donde la composición comprende además glucosamina . 80. - Un método para tratar o inhibir una condición patológica en un mamífero que involucra inhibir inducibilidad o actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2) , el método · comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina . 81. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo se selecciona' a partir del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-ñidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 82. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3, y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y % orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 83.- El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género ? que tiene la fórmula : en donde Rf se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y En donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CE (CH3 ) CH2CH3. 84.- El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)Z, CH2CH(CH3)2, Y CH (C¾) CH2CH3. 85. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, di idro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, diñidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetra idro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. 86. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde el segundo componente es un extracto derivado de romero. 87. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno. 88. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la composición comprende además un tercer componente diferente al segundo componente, el tercer componente se selecciona del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina. 89. - El método de conformidad con la reivindicación 88, en donde el segundo y tercer componentes son un extracto derivado de romero y triptantrina, respectivamente . 90. - El método de conformidad con la reivindicación 80, k en donde el segundo componente es un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en 1,8-cineol, ácido 19-alfa-hidroxiursólico, ácido 2-beta-hidroxiQleanólico, ácido 3-O-acetilolanilico, ácido 3-O-acetilursólico, 6-metoxi-luteolin-7-glucosido, 6-metoxiluteolina, 6-metoxiluteolin-7-glucosida, metoxiluteolin-7-metiléter, 7-etoxi-rosmanol , 7-metoxi-rosmanol, alfa-amarina, alfa-humuleno, ácido alfa-hidroxihidrocafeico, alfa-pineno, alfa-terpineno, alfa-acetato de terpinelo, alfa-terpineol, alfa-tujona, epigenina, epigenin-7-glucosido, curcumeno, alcohol de bencilo, beta-amirenona, beta-amarina, beta-elemeno, beta-pineno, butilina, ácido betulinico, borneol, acetato dé bornilo, ácido cafeico, canfeno, canfor, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, carvona, cariofileno, óxido de cariofileno, ácido clorogénico, diosmetina, gamma-terpineno, hesperidina, isoborneol, limoneno, luteolina, luteolin-3' -0- (3"-I-acetil) -beta-D-glucoronida, luteolin-3' -O- (4"-0-acetil) -beta-D-glucuronida, luteolin-3' -O-beta-D-glucuronida, luteolin-7-glucósido, metil-eugenol, mirceno, ácido neoclorogénico, nepentina, ácido octanoico, ácido oleanólico, p-cimeno, piperitenona, rosmanol, ácido rosmárico, rosmaricina, rosmaridifenol, ácido rosmarínico, rosmarinol, rosmariquinona, sabineno, acetato de sabinilo, salicilatos, ácido salicilico-2-beta-D-glucosido, escualeno, terpinen-4-ol, terpinoleno, timol, trans-anetol, trans-carveol, ácido ursólico, verbenona, y zingibereno. 91. - El método de conformidad con la reivindicación 90, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno o una especie de lactona de diterpeno que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. 92. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que consiste en ácido 18-a-glicirretinico, ácido 18-beta-glicirretinico, ácido 2-a-3-a-dihidrooxirus-12-3n-28-ónico, ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulinico, celastrol, ácido eburicoico, friedelina, glicirrizina, giposogenina, ácido oleanólico, ácido oleanólico-3-acetato, ácido paquimico, ácido pinicólico, soforadiol, soyaspogenol A, soyaspogenol B, tripterina, triptofenolida, ácido tumulósico, ácido ursólico, ácido ursólico-3-acetato, uvaol y beta-sitosterol . 93. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde el segundo componente es triptantrina que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. 94. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde una relación del primer componente al segundo componente está en la escala de alrededor de 100:1 a alrededor de 1:100. 95. - El método de la reivindicación 94, en donde la relación del primer componente al segundo componente está en la escala de alrededor de 50:1 a alrededor de 1:50. 96. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la condición patológica se selecciona del grupo que consiste en inflamación, desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmicas, inflamación pulmonar, desórdenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxína, arterieesclerosis, y daño nervioso central . 97. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 98. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la composición se administra oralmente, tópicamente, parenteralmente, o rectalmente. 99. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la composición comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo extraído con CO2, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 100. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la composición comprende ácidos isoalfa reducidos, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 101. - El método de conformidad con la reivindicación 80, en donde la composición comprende además glucosamina . 102. - Un método para inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina . 103. - El método de conformidad con la reivindicación 102, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo se selecciona del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa- idroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 104. - El método de conformidad con la reivindicación 102, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) C¾CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de Rf T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 105.- El método de conformidad con la reivindicación 102, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2C¾ . 106.- El método de conformidad con la reivindicación 102, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la formula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. 107. - El método de conformidad con la reivindicación 102, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, iso umulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, diñidro-isocohumulona, diñidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, ' tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. 108. - El método de conformidad con la reivindicación 102, en donde la composición comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo extraída con C02, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 109. - El método de conformidad con la reivindicación 102, en donde la composición comprende ácidos isoalfa reducidos, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 110. - El método de conformidad con la reivindicación 102, en donde la composición comprende además glucosamina. 111. - Un método para inhibir una respuesta inflamatoria selectivamente en células meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste, en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una · especie de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina. 112. - El método de conformidad con la reivindicación 111, en -donde la fracción aislada o derivada de lúpulo se selecciona del grupo que consiste de ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisolfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 113. - El método de conformidad con la reivindicación 111, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, o OCOR, en donde R es alquilo; en donde R/f se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2 y CH (CH3} CH2CH3; y en donde R, T, X y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Brf I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T. X, o Z adyacente también es un % orbital, formando de esta manera un enlace doble . 114.- El método ' de conformidad con la reivindicación ' 111, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórm la : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2 y CH (C¾) CH2CH3. 115.- El método de conformidad con la reivindicación 111, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; Y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(C¾)2 y CH (C¾) CH2C¾ . 116. - El método de conformidad con la reivindicación 111, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, di idro-isohumulona, di idro-isocohumulona, di idro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . 117. - el método de conformidad con la reivindicación 111, en donde la composición comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo extraído con C02f ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 118.- El método de conformidad con la reivindicación 111, en donde la composición comprende ácidos isoalfa reducidos, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 119.- El método de conformidad con la reivindicación 111, en donde la composición comprende además glucosamina. 120. - ün método para modular la respuesta inflamatoria en células, el método comprendiendo poner en contacto las células con una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo. 121. - Un método para tratar o inhibir una condición patológica en un mamífero asociada con activación específica de tejido de inflamación, el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción derivada de lúpulo. 122. - El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la fracción derivada de lúpulo se selecciona a partir del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 123.- El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente es un TL orbital, formando de esta manera un enlace doble. 12 . - El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(C¾)2, y CH (CH3) CH2CH3. 125.- El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se seleccionas del grupo que consiste en CH(CH3)2, C¾CH(CH3)2, CH (CH3} CH2CH3. 126.- El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la fracción derivada de lúpulo, comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohuimilona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, -hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. 127. - El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la composición comprende aproximadamente 0.5 a 10000 mg de la fracción derivada de lúpulo . 128. - El método de conformidad con la reivindicación 127, en donde la composición comprende aproximadamente 50 a 7500 mg de la fracción derivada de lúpulo . 129. - El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la composición comprende aproximadamente 0.001 10 por ciento en peso de la fracción derivada de lúpulo. 130. - El método de conformidad con la reivindicación 129, en donde la composición comprende aproximadamente 0.1 a 1 por ciento en peso de la fracción derivada de lúpulo. 131. - El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la condición patológica se selecciona del grupo que consiste en enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades neurológicas, y cáncer. 132. - El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la condición patológica se selecciona a partir del grupo que consiste en inflamación, desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmicas, inflamación pulmonar, desórdenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterieesclerosis, y daño nervioso central. 133. - El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 134. - El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la composición se administra oralmente, tópicamente, parenteralmente, o rectalmente. 135. - El método de conformidad con la reivindicación 121, en donde la composición comprende además glucosamina. 136.- Un método para modular la cantidad de actividad de ciclooxigenasa-2 (CQX-2 ) en células de meta sin modular substancialmente actividad de COX-2 en células de no meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción derivada de lúpulo. 137.- El método de conformidad con la reivindicación 136, en donde las células de no meta también se ponen en contacto con la fracción derivada de lúpulo. 138. - El método de conformidad con la reivindicación 136, en donde el paso de contacto es in vivo. 139. - El método de conformidad con la reivindicación 136, en donde la actividad COX-2 se modula mediante inhibición de gene de COX-2. 140. - El método de conformidad con la reivindicación 136, en donde la composición comprende además glucosamina. 141. - Un método para tratar o inhibir una condición patológica en un mamifero, que involucra inhibir la inducibilidad o actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2) , el método comprendiendo administrar al mamifero una composición que comprende una fracción derivada de lúpulo. 142. - El método de conformidad con la reivindicación 141, en donde la fracción derivada de lúpulo se selecciona a partir del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 143. - El método de conformidad con la reivindicación 141, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde Rr se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(C¾)2, y CH(CH3)CH2C¾; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital,, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, "o Z adyacente es entonces un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 144.- El método de conformidad con la reivindicación 141, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R'( se selecciona del grupo que consiste en CH'(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. 145.- El método de conformidad con la reivindicación 141, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2C¾ . 146.- El método de conformidad con la reivindicación 141, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahídro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona. hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-ad umulona . 147. - El método de conformidad con la reivindicación 141, en donde la condición patológica se selecciona a partir del grupo que consiste en inflamación, desórdenes asociados con inflamación,' artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmicas, inflamación pulmonar, desórdenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterioesclerosís, y daño nervioso central. 148. - El método de conformidad con la reivindicación 141, en donde la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 149. - El método de conformidad con la reivindicación 141, en donde la composición se administra oralmente, tópicamente, parenteralmente, o rectalmente. 150.- El método de conformidad con la reivindicación 141, en donde la composición comprende además glucosamina. 151.- Un método para inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción derivada de lúpulo. 152. - El método de conformidad con la reivindicación 151, en donde la fracción derivada de lúpulo se selecciona del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa- idroisoal a, ácidos beta, y lúpulo agotado. 153. - El método de conformidad con la reivindicación 151, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y % orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 154.- El método de conformidad con la reivindicación 151, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula en donde Rf se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; Y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. 155.- El método de conformidad con la reivindicación 151, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CE (C¾} C¾CH3. 156. - El método de conformidad con la reivindicación 151, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, di idro-isoco umulona, diíiidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, exahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . 157. - El método de conformidad con la reivindicación 151, en donde la composición comprende además glucosamina . 158. - Un método para modular NF-kB en células no asociadas con resorción de hueso, el método comprendiendo poner en contacto las células con una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo. 159. - Un método para tratar o inhibir una condición patológica distinta a osteoporosis en un mamífero asociada con activación específica de tejido de NF-kB, el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo. 160. - El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la fracción se deriva de lúpulo y se selecciona del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 161. - El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2,. CH2CH(CH3}2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el r, T, X, o Z adyacente es también un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 162.- El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. 163.- El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; Y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, Y CH (CH3) CH2CH3. 164. - El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la fracción se deriva de lúpulo Y comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-iso umulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. 165. - El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la composición comprende aproximadamente 0.5 a 10000 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 166. - El método de conformidad con la reivindicación 165, en donde la composición comprende aproximadamente 50 a 7500 mg de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 167. - El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la composición comprende aproximadamente O.O'Ol a 10 por ciento en peso de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 168. - El método de conformidad con la reivindicación 167, en donde la composición comprende aproximadamente 0.1 a 1 por ciento en peso de la fracción aislada o derivada de lúpulo. 169. - El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la condición patológica se selecciona del grupo que consiste en enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades neurológicas, enfermedades cardiovasculares, y cáncer. 170. - El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la condición patológica se selecciona del grupo que consiste en asma, réplica de HIV-1, resfrio y gripe. 171.- El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 172. - El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la composición se administra oralmente, tópicamente, parenteralmente, o rectalmente. 173. - El método de conformidad con la reivindicación 159, en donde la composición comprende además glucosamina . 174. - Un método para modular la cantidad de actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2) en células de meta no asociadas con resorción de hueso son modular substancialmente actividad de COX-2 en células de no meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción aislada o derivada de lúpulo. 175. - El método de conformidad con la reivindicación 174, en donde las células de no meta también se ponen en contacto con la fracción aislada o derivada de lúpulo . 176. - El método de conformidad con la reivindicación 174, en donde el paso de contacto es in vivo. 177. - El método de conformidad con la reivindicación 174, en donde la actividad de COX-2 se modula mediante inhibición de gene de COX-2. 178. - El método de conformidad con la reivindicación 174, en donde la composición comprende además glucosamina . 179. - Un método para tratar o inhibir una condición patológica distinta a osteoporosis en un mamífero, que involucra inhibir la inducibilidad o actividad de ciclooxigenasa-2 (COX-2) , el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo. 180. - El método de ' conformidad con la reivindicación 179, en donde la fracción se deriva de lúpulo y se selecciona a partir del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado . 181.- El método de conformidad con la reivindicación 179, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde r, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la' condición de que si uno de R, T, X, o Z es un % orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble. 182.- El método de conformidad con la reivindicación 179, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2CH3. 183.- El método de conformidad con la reivindicación 179, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) C¾CH3. 184.- El método de conformidad con la reivindicación 179, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, ad umulona, isohumulona, isocohumulcna, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrañidro-isohu ulona, tetrañidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona. 185.- El método de conformidad con la reivindicación 179, en donde la condición patológica se selecciona del grupo que consiste en inflamación, desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmicas, inflamación pulmonar, desórdenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia - respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterieesclerosis y daño nervioso central . 186.- El método de conformidad con la reivindicación 179, en donde la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 187.- El método de conformidad con la reivindicación 179, en donde la composición se administra oralmente, tópicamente, parenteralmente, o rectalmente. 188.- El método de conformidad con la reivindicación 179, en donde la composición comprende además glucosamina. 189. - Un método para inhibir síntesis de prostaglandina selectivamente en células de meta, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción derivada dé lúpulo. 190. - El método de conformidad con la reivindicación 189, en donde la fracción derivada de lúpulo se selecciona del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos exa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 191. - El método de conformidad con la reivindicación 189, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(C¾)2, y CH (CH3) CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 192. - El método de conformidad con la reivindicación 189, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR; Y OCOR, en donde R es alquilo; Y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2C¾ . 193.- El método de conformidad con la reivindicación 189, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(C¾)2, y CH (C¾) CH2CH3. 194. - El método de conformidad con la reivindicación 189, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, "adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isoco umulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . 195. - El método de conformidad con la reivindicación 194, en donde la composición comprende además glucosamina . 196. - Un método para inhibir una respuesta inflamatoria selectivamente en células de metal, el método comprendiendo poner en contacto las células con una fracción derivada de lúpulo. 197. - El método de conformidad con la reivindicación 196, en donde la fracción derivada de lúpulo se selecciona del grupo que consiste en ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra- idroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 198. - El método de conformidad con la reivindicación 196, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula : en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH(CH3)CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble. 199.- El método de conformidad con la reivindicación 196, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (CH3) CH2CH3. 200.- El método de conformidad con la reivindicación 196, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste de carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2C¾ . 201.- El método de conformidad con la reivindicación 196, en donde la fracción derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, diñidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . 202.- Un método para tratar o inhibir inflamación distinta a osteoporosis en un mamífero, el método comprendiendo administrar al mamifero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo . 203.- El método de conformidad con la reivindicación 202, en donde la fracción se deriva de lúpulo y se selecciona del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 204. - El método de conformidad con la reivindicación 202, en donde la fracción derivada de lúpulo se extrae con C02. 205. - El método de conformidad con la reivindicación 202, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)-2, CH2CH(CH3)2, y CH(CH3)CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, F, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de R, T, X, o Z es un p orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 206.- El método de conformidad con la reivindicación 202, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH{C¾)2, y CH (C¾) CH2C¾ . 207.- El método de conformidad con la reivindicación 202, en donde la fracción se deriva de lúpulo y. comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH(CH3)CH2CH3. 208. - El método de conformidad con la reivindicación 202, en donde la fracción se deriva de lúpulo y comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, dihidro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-adhumulona, tetrahidro-isohumulona, tetra idro-isocohumulona, tetrañidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexahidro-isocohumulona, y hexahidro-adhumulona . 209. - El método de conformidad con la reivindicación 202, en donde la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 210. - El método de conformidad con la reivindicación 202, en donde la composición se administra oralmente, tópicamente, parenteralmente, o rectalmente. 211. - El método de conformidad con la reivindicación 202, en donde la composición comprende además glucosamina. 212. - Un método para determinar la toxicidad gastrointestinal potencial de un agente antiinflamatoria, que comprende : (a) poner en contacto una célula mucosal gástrica AGS con un agente antiinflamatorio; (b) poner en contacto una célula inflamatoria de meta con el agente antiinflamatorio; (c) determinar el 50% de concentración inhibitoria (IC5o) de expresión de prostaglandina E2 (PGE2) para el agente inflamatorio en cada una de la célula AGS y la célula inflamatoria de meta; (d) determinar la relación del valor IC50 de la célula AGS al valor IC50 de la célula inflamatoria de meta, en donde una relación mayor de 1 indica toxicidad gastrointestinal potencial disminuida y una relación menor de 1 indica toxicidad gastrointestinal potencial aumentada. 213. - El método de conformidad con la reivindicación 212, en donde la célula inflamatoria de meta es una célula A549. 214. - Un método para tratar o inhibir obesidad en un mamífero, el método comprendiendo administrar al mamífero una composición que comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo y un segundo componente seleccionado del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especia de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina . 215. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo se selecciona del grupo que consiste en ácidos alfa, ácidos isoalfa, ácidos isoalfa reducidos, ácidos tetra-hidroisoalfa, ácidos hexa-hidroisoalfa, ácidos beta, y lúpulo agotado. 216.- El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto de un supragénero que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2CH3; y en donde R, T, X, y Z se seleccionan independientemente del grupo que consiste en H, f, Cl, Br, I, y p orbital, con la condición de que si uno de r, T, X, o Z es un % orbital, entonces el R, T, X, o Z adyacente también es un p orbital, formando de esta manera un enlace doble . 217.- EJl método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género A que tiene la fórmula: en donde Rr se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; Y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(CH3)2, CH2CH(CH3)2 y CH(CH3)CH2CH3. 218.- El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la fracción aislada o derivada de lúpulo comprende un compuesto del Género B que tiene la fórmula: en donde R' se selecciona del grupo que consiste en carbonilo, hidroxilo, OR, y OCOR, en donde R es alquilo; y en donde R" se selecciona del grupo que consiste en CH(C¾)2, CH2CH(CH3)2, y CH (C¾) CH2CH3. 219. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la fracción aislada y derivada de lúpulo comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en humulona, cohumulona, adhumulona, isohumulona, isocohumulona, isoadhumulona, di idro-isohumulona, dihidro-isocohumulona, dihidro-ad umulona, tetra idro-isohumulona, tetrahidro-isocohumulona, tetrahidro-adhumulona, hexahidro-isohumulona, hexañidro-isoco umulona, y ñexahidro-adhumulona. 220. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde el segundo componente es un extracto derivado de romero . 221. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno. 222. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la composición comprende además un tercer componente diferente al segundo componente, el tercer componente se selecciona del grupo que consiste en romero, un extracto derivado de romero, un compuesto derivado de romero, una especie .de triterpeno, una lactona de diterpeno, y triptantrina. 223. - El método de conformidad con la reivindicación 213, en donde el segundo y tercer componentes son un extracto derivado de romero y triptantrina, respectivamente. 224.- El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde el segundo componente es un compuesto derivado de romero que se selecciona del grupo que consiste en 1,8-cineol, ácido 19-alfa-hidroxiursólico, ácido 2-beta-hidroxioleanólico, ácido 3-0-acetiloleánico, ácido 3-0-acetilursólico, 6-metoxi-luteolin-7-glucosido, 6-metoxiluteolina, 6-metoxiluteolin-7-glucosido, metoxiluteolin-7-metil éter, 7-etoxi-rosmanol, 7-metoxi-rosmanol, alfa-amirina, alfa-humuleno, ácido alfa-hidroxihidrocafeico, alfa-pineno, alfa-terpineno, alfa-acetato de terpinenilo, alfa-terpineol, alfa-tujona, apigenina, apigenin-7-glucosido, curcumeno, alcohol de bencilo, beta-amirenona, beta-amirina, beta-elemeno, beta-pineno, betulina, ácido betulinico, borneol, bornil-acetato, ácido cafeico, canfeno, canfor, ácido carnósico, carnosol, carvacrol, carvona, cariofileno, óxido de cariofileno, acido clorogénico, diosmetina, gamma-terpineno, hesperidina, isoborneol, limoneno, luteolina, luteolin-3' -0- (3"-) -acetil) -beta-D-glucuronida, luteolin-3' -0- (4"-0-acetil) -beta-D-glucuronida, luteolin-3' -O-beta-D-glucuronida, luteolin-7-glucosida, metil-eugenol, mirceno, ácido neoclorogénico, nepentina, ácido octanoico, ácido oleanólico, p-cimeno, piperitenona, rosmanol, ácido rosrnárico, rositiariciña, rosmaridifenol, ácido rosmarinico, rosmarinol, rosmariqu nona, sabineno, acetato de sabinilo, salicilatos, ácido salicilico-2-beta-D-glucosida, escualeno, terpinen-4-ol, terpinoleno, timol, trans-anetol, trans-carveol, ácido ursólico, verbenona, y zingibereno. 225. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde el segundo componente es una especia de triterpeno o una especia de lactona de diterpeno que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste en mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. 226. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde el segundo componente es una especie de triterpeno que se selecciona del grupo que consiste en ácido 18-a-glicirretinico, ácido 18-beta-glicirretínico, ácido 2-a-3-a-dihidrooxiurs-12-3n-28-ónico, ácido 3-a-hidroxiursólico, ácido 3-oxo-ursólico, betulina, ácido betulinico, celastrol, ácido eburicoico, friedelina, glicirrizina, gipsogenina, ácido oleanólico, ácido oleanólico-3-acetato, ácido paquimico, ácido pinicólico, soforadiol, soyasapogenol A, soyasapogenol B, tripterina, triptofenolida, ácido tumulósico, ácido ursólico, ácido ursólico-3-acetato, uvaol, y beta-sitoesterol. 227. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde el segundo componente es triptantrina que se conjuga a un miembro seleccionado del grupo que consiste de mono- o di-sacáridos, aminoácidos, sulfatos, succinato, acetato, y glutationa. 228. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde una relación del primer componente al segundo componente está en la escala de alrededor de 100:1 a alrededor de 1:100. 229.- El método de conformidad con la reivindicación 228, en donde la relación del primer componente al segundo componente está en la escala de alrededor de 50:1 a alrededor de 1:50. 230.- El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la condición patológica se selecciona del grupo que consiste en inflamación, desórdenes asociados con inflamación, artritis, asma, bronquitis, calambres menstruales, tendonitis, bursitis, condiciones relacionadas con la piel, condiciones gastrointestinales, cáncer, enfermedades oftálmicas, inflamación pulmonar, desordenes del sistema nervioso, rinitis alérgica, síndrome de angustia respiratoria, síndrome de choque de endotoxina, arterioesclerosis y daño nervioso central. 231.- El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la composición comprende además un portador farmacéuticamente aceptable. 232. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la composición se administra oralmente, tópicamente, parenteralmente, o rectalmente. 233. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la composición comprende una fracción aislada o derivada de lúpulo extraída con C02, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 234. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la composición comprende ácidos isoalfa reducidos, ácido oleanólico y un extracto derivado de romero. 235. - El método de conformidad con la reivindicación 214, en donde la composición comprende además glucosamina.
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