JP2003508350A - 血液成分への結合体化を介するペプチダーゼ活性からの内因性治療用ペプチドの保護 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 インビボでペプチダーゼ活性からペプチドを保護するための方法であって、このペプチドは、２個と５０個との間のアミノ酸との間で構成されかつＣ末端およびＮ末端ならびにＣ末端アミノ酸およびＮ末端アミノ酸を有する、方法が記載される。この方法の第１工程において、このペプチドは、反応性基を、Ｃ末端アミノ酸、Ｎ末端アミノ酸、またはこのＮ末端とＣ末端との間に位置するアミノ酸に結合させることによって改変され、その結果、この改変されたペプチドは、血液成分上の反応性官能基とインビボで共有結合を形成し得る。次の工程において、共有結合は、反応性基と血液成分上の反応性官能基との間で形成され、ペプチド−血液成分結合体を形成し、それによってペプチターゼ活性からこのペプチドを保護する。この方法の最終工程は、ペプチド−血液成分結合体の安定性を分析し、ペプチターゼ活性からのこのペプチドの保護を評価する工程を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、改変された治療用ペプチドに関する。特に、本発明は、ペプチドが
選択的に血液成分に結合体化することを可能にする改変による、内因性治療用ペ
プチドの、ペプチダーゼ活性からの保護に関し、従って、ペプチダーゼ活性から
のペプチドの保護、および種々の障害を処置するための治療用ペプチドの作用の
持続時間の増加に関する。

【０００２】 （発明の背景） 多くの内因性ペプチドは、生物学的プロセスの主要な成分であると記載されて
きた。これらのペプチドのいくつかは、種々の障害の管理のための主要な治療薬
剤として、同定されてきた。一般に、内因性ペプチドは、非天然の配列を有する
合成ペプチドよりも、治療薬剤としてより所望される。なぜなら、内因性ペプチ
ドは、その内因性特性に起因して、免疫応答を生成しないからである。さらに、
内因性ペプチドは、その標的レセプターに対して非常に特異的であり、そして合
成および製造が容易である。しかし、このような治療用ペプチドの送達の主要な
困難は、これらの短い血清中半減期であり、これは主として、迅速な血清クリア
ランス、およびペプチダーゼの作用を介するタンパク質分解性分解に起因する。

【０００３】 ペプチダーゼは、結合を横切って水分子を挿入することによって、ペプチドに
おけるペプチド結合を破壊する。一般に、大部分のペプチドは、数分以下の様式
で、身体内においてペプチダーゼにより破壊される。さらに、いくつかのペプチ
ダーゼは、特定の型のペプチドに対して特異的であり、これらの分解をさらによ
り迅速にする。従って、ペプチドを治療薬剤として使用する場合には、その活性
は一般に減少される。なぜなら、このペプチドが、ペプチダーゼの作用に起因し
て、身体内で迅速に分解するからである。

【０００４】 この欠点を克服するための１つの方法は、大きな投薬量の目的の治療用ペプチ
ドを患者に投与し、これによって、ペプチドのいくらかが分解する場合でさえも
、治療的に効果的であるために十分に残るようにすることである。しかし、この
方法は、患者に対して非常に不快である。大部分の治療用ペプチドは経口投与さ
れ得ないので、治療用ペプチドが絶えず注入されなければならないか、静脈内注
射により頻繁に投与されなければならないか、または皮下注射という不都合な経
路によって頻繁に投与されなければならないかのいずれかである。頻繁な投与に
関する必要性はまた、多くの潜在的なペプチド治療剤が、処置の経過あたり受容
不可能に高い計画費用を有する結果となる。多量の分解したペプチドの存在はま
た、所望でない副作用を生じさせ得る。

【０００５】 投与の際の不快および高い費用は、魅力的な生物活性プロフィールを有する大
部分の治療用ペプチドが薬物候補物として開発されない２つの理由である。その
代わりに、これらの治療用ペプチドは、治療用ペプチドの代わりとなるペプチド
模倣物化合物の開発のためのテンプレートとして使用される。生体工学および大
きな製薬会社は、頻繁に、長く高価な最適化プログラムに着手して、受容不可能
な副作用プロフィールを招くことなく、治療用ペプチドにおいて見られる活性を
模倣する非ペプチドの有機化合物を開発することを試みる。例えば、環状ペプチ
ド、ペプチド模倣物ならびに高価なＳＡＲ（構造活性関係）および分子モデル化
試験から生じる小分子は、非常に多くのペプチド模倣物の開発をもたらした。し
かし、これらのペプチド模倣物は、いかなる様式においても、治療用ペプチドの
正確な最初の生物学的性質を反映せず、従って、治療薬剤として内因性治療用ペ
プチドに劣る。

【０００６】 ペプチド模倣物を作製することの代替は、ペプチダーゼの活性をブロックして
、治療用ペプチドの分解を防止すること、または治療用ペプチドの分解が減速さ
れながらもなお生物学的活性を維持する様式で治療用ペプチドを改変することで
ある。このような方法としては、ポリマー材料（例えば、デキストラン、ポリビ
ニルピロリドン、糖ペプチド、ポリエチレングリコールおよびポリアミノ酸）と
の結合体化、アドロイチン（ａｄｒｏｉｔｉｎ）サルフェートとの結合体化、な
らびに多糖類、低分子量化合物（例えば、アミノレシチン（ａｍｉｎｏｌｅｔｈ
ｉｃｉｎ）、脂肪酸、ビタミンＢ₁₂、およびグリコシド）との結合体化が挙げら
れる。しかし、これらの結合体は、依然として、しばしばプロテアーゼ活性に対
して感受性である。さらに、これらのペプチドの治療的活性は、しばしば、ポリ
マー材料の付加により減少する。最後に、この材料がインビボで注射される場合
に、これらの結合体が免疫応答を生じる危険性が存在する。いくつかの方法は、
キャリアタンパク質とエキソビボで結合体化し、ランダムな結合体の生成を生じ
ることを含む。結合体は製造が困難であるので、これらの興味は、キャリアが市
販で入手可能であること、およびこれらの乏しい薬経済学により制限される。

【０００７】 従って、治療用ペプチドを改変して、これらをペプチダーゼ活性から保護し、
そしてインビボでの作用のより長い持続時間を提供し、一方で低い毒性を維持し
、なお改変されたペプチドの治療の利点を保持するための、新規方法に関する必
要性が存在する。

【０００８】 （発明の要旨） 本発明は、目的の治療用ペプチドを改変し、そしてこのペプチドをタンパク質
キャリアに付着させ、その結果、ペプチダーゼの作用が防止されるか、または減
速されることにより、身体内でのペプチドの分解の問題を克服することに関する
。より特定すると、本発明は、血液タンパク質の利用可能な官能基と反応して共
有結合を形成し得る、治療用ペプチドの化学的に反応性の新規誘導体（特に、治
療用ペプチド−マレイミド誘導体）に関する。本発明はまた、このような治療用
ペプチドの化学的に反応性の新規な誘導体またはアナログに関する。本発明は、
さらに、このような化合物の治療的使用に関する。

【０００９】 本発明は、切断される最初の残基への合成的改変を利用して、治療用ペプチド
を改変し、そしてタンパク質キャリア（好ましくは、アルブミン）に、インビボ
またはエキソビボの技術を介して付着させて、ペプチダーゼの作用を防止または
減少させることに関する。治療用ペプチドは、通常、Ｎ末端部分、Ｃ末端部分、
またはペプチド鎖の内部の部分において、活性である。本発明の技術を使用して
、治療用ペプチドの活性部分以外の部位を、特定の反応性基により改変する。こ
れらの反応性基は、血液成分に存在する官能基と共有結合を形成し得る。この反
応性基は、治療用ペプチドが血液成分と結合する場合に、このペプチドが親化合
物の活性のかなりの割合を保持するような部位に位置する。

【００１０】 本発明において使用される化学的改変による、治療用ペプチドの改変は、全て
または大部分のペプチド特異性が、血液成分への付着にもかかわらず保存される
ような様式で、なされる。この治療用ペプチド−血液成分複合体は、ここで、ペ
プチダーゼにより分解されることなく、そしてこのペプチドがその治療的活性を
依然として維持しながら、種々の身体領域に移動し得る。本発明は、全ての公知
の治療用ペプチドに適用可能であり、そして遊離ペプチドと改変した治療用ペプ
チドとについての薬物動力学的パラメータを直接比較することにより、生理学的
条件下で容易に試験される。

【００１１】 本発明は、３と５０との間のアミノ酸からなる、ペプチダーゼに対して安定化
された治療用ペプチドを形成し得る、改変された治療用ペプチドに関する。この
ペプチドは、カルボキシ末端アミノ酸、アミノ末端アミノ酸、アミノ酸の治療的
に活性な領域およびアミノ酸の治療的活性の低い領域を有する。このペプチドは
、血液成分上のアミノ基、ヒドロキシル基、またはチオール基と反応して、安定
な共有結合を形成し、これによって、ペプチダーゼに対して安定化された治療用
ペプチドを形成する、反応性基を含む。本発明のペプチドにおいて、反応性基は
、スクシンイミジル基およびマレイミド基からなる群から選択され、そしてこの
反応性基は、アミノ酸の治療的により低い活性の領域に位置するアミノ酸に付着
される。

【００１２】 １つの実施形態において、ペプチドの治療的に活性な領域は、カルボキシ末端
アミノ酸を含み、そして反応性基は、上記アミノ末端アミノ酸に付着される。

【００１３】 別の実施形態において、ペプチドの治療的に活性な領域は、アミノ末端アミノ
酸を含み、そして反応性基は、カルボキシ末端アミノ酸に付着される。

【００１４】 別の実施形態において、ペプチドの治療的に活性な領域は、カルボキシ末端ア
ミノ酸を含み、そして反応性基は、アミノ末端アミノ酸とカルボキシ末端アミノ
酸との間に位置するアミノ酸に付着される。

【００１５】 なお別の実施形態において、治療的に活性な領域は、アミノ末端アミノ酸を含
み、そして反応性基は、アミノ末端アミノ酸とカルボキシ末端アミノ酸との間に
位置するアミノ酸に付着される。

【００１６】 本発明はまた、改変された治療用ペプチドを合成する方法に関する。この方法
は、以下の工程を包含する。第一工程において、治療用ペプチドがシステインを
含まない場合には、このペプチドをカルボキシ末端アミノ酸から合成し、そして
反応性基をこのカルボキシ末端アミノ酸に付加する。あるいは、末端リジンをカ
ルボキシ末端アミノ酸に付加させ、そして反応性基をこの末端リジンに付加する
。第二工程において、治療用ペプチドが１つのみのシステインを含む場合には、
このシステインを保護基と反応させ、その後、このペプチドの治療的により低い
活性の領域のアミノ酸に反応性基を付加する。第三工程において、治療用ペプチ
ドが２つのシステインをジスルフィド架橋として含む場合には、これら２つのシ
ステインを酸化して、反応性基を、この治療用ペプチドのアミノ末端アミノ酸、
もしくはカルボキシ末端アミノ酸、またはカルボキシ末端アミノ酸とアミノ末端
アミノ酸との間に位置するアミノ酸に付加させる。第四工程において、治療用ペ
プチドが２つより多いシステインをジスルフィド架橋として含む場合には、これ
らのシステインを、ジスルフィド架橋において連続的に酸化し、そしてこのペプ
チドを精製し、その後、反応性基をカルボキシ末端アミノ酸に付加する。

【００１７】 本発明はまた、治療用ペプチドをインビボでペプチダーゼ活性から保護するた
めの方法に関し、このペプチドは、３と５０との間のアミノ酸からなり、そして
カルボキシ末端およびアミノ末端、ならびにカルボキシ末端アミノ酸およびアミ
ノ末端アミノ酸を有する。この方法は、以下の工程を包含する： （ａ）反応性基を、カルボキシ末端アミノ酸、アミノ末端アミノ酸、またはア
ミノ酸末端アミノ酸とカルボキシ末端アミノ酸との間に位置するアミノ酸に付着
させることにより、ペプチドを改変する工程であって、その結果、この改変され
たペプチドが、血液成分の反応性官能基とインビボで共有結合を形成し得る、工
程； （ｂ）反応性基と血液成分の反応性官能基との間に共有結合を形成して、ペプ
チド−血液成分結合体を形成する工程であって、これによって、このペプチドを
ペプチダーゼ活性から保護する、工程；ならびに （ｃ）このペプチド−血液成分結合体の安定性を分析して、このペプチドのペ
プチダーゼ活性からの保護を評価する工程。 これらの工程は、インビボで実施してもエキソビボで実施してもいずれでもよい
。

【００１８】 本発明はまた、治療用ペプチドをペプチダーゼ活性からインビボで保護するた
めの方法に関し、このペプチドは、３と５０との間のアミノ酸からなり、そして
アミノ酸の治療的に活性な領域およびアミノ酸の治療的により低い活性の領域を
有する。この方法は、以下の工程を包含する： （ａ）アミノ酸の治療的に活性な領域を決定する工程； （ｂ）反応性基をアミノ酸に付着させて改変されたペプチドを形成することに
よって、アミノ酸の治療的により低い活性の領域に含まれるアミノ酸においてペ
プチドを改変する工程であって、その結果、この改変されたペプチドが治療的活
性を有し、そして血液成分の反応性官能基とインビボで共有結合を形成し得る、
工程； （ｃ）反応性実体と血液成分の反応性官能基との間に共有結合を形成して、ペ
プチド−血液成分結合体を形成する工程であって、これによって、このペプチド
をペプチダーゼ活性から保護する、工程；ならびに （ｄ）このペプチド−血液成分結合体の安定性を分析して、このペプチドのペ
プチダーゼ活性からの保護を評価する、工程。 これらの工程は、インビボで実施してもエキソビボで実施してもいずれでもよい
。

【００１９】 本発明の組成物および方法において有用なペプチドとしては、配列番号１〜配
列番号１６１７に提示されるペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。

【００２０】 （発明の詳細な説明） （定義） 本発明の完全な理解を確実にするために、以下の定義を提供する： 反応性基： 反応性基とは、共有結合を形成し得る実体である。このような反
応性基は、目的の治療用ペプチドに連結または結合される。反応性基は、一般に
、水性環境内で安定であり、そして通常、カルボキシ基、ホスホリル基、または
従来のアシル基であり、エステルまたは混合無水物のいずれか、あるいはイミデ
ートとして存在し、これによって、移動性の血液成分の標的部位の、アミノ基、
ヒドロキシまたはチオールのような官能基と共有結合を形成し得る。大部分にお
いて、これらのエステルは、フェノール性化合物を含むか、またはチオールエス
テル、アルキルエステル、リン酸エステルなどである。反応性基としては、スク
シンイミジル（ｓｕｃｃｉｍｉｄｙｌ）基およびマレイミド基が挙げられる。

【００２１】 官能基： 官能基とは、改変された治療用ペプチドの反応性基が反応して共有
結合を形成する、血液成分上の基であり、可動性タンパク質および固定タンパク
質を含む。官能基は、通常、エステル反応性基との結合のためのヒドロキシル基
、マレイミド、イミデートおよびチオールエステル基との結合のためのチオール
基；活性化カルボキシル基、ホスホリル基または反応性基上の他の任意のアシル
基との結合のためのアミノ基を含む。

【００２２】 血液成分： 血液成分は、固定されていても可動であってもいずれでもよい。
固定された血液成分は、非可動性の血液成分であり、そして組織、膜レセプター
、介在タンパク質、フィブリンタンパク質、コラーゲン、血小板、内皮細胞、上
皮細胞およびこれらが結合する膜および膜レセプター、身体の細胞（ｓｏｍａｔ
ｉｃ ｂｏｄｙ ｃｅｌｌ）、骨格細胞および平滑筋細胞、神経成分、骨細胞お
よび破骨細胞ならびに全ての身体組織（特に、循環系およびリンパ系に関連する
もの）を含む。可動性血液成分とは、いかなる延長した期間にわたっても（一般
的には５分を超えず、より通常には１分）固定された位置を有さない、血液成分
である。これらの血液成分は、膜結合しておらず、そして延長した期間にわたっ
て血液中に存在し、そして少なくとも０．１μｇ／ｍｌの最小濃度で存在する。
可動性血液成分としては、血清アルブミン、トランスフェリン、フェリチン、な
らびにＩｇＭおよびＩｇＧのような免疫グロブリンが挙げられる。可動性血液成
分の半減期は、少なくとも約１２時間である。

【００２３】 保護基： 保護基とは、ペプチド誘導体をそれ自体と反応しないよう保護する
ために利用される、化学部分である。種々の保護基が、米国特許第５，４９３，
００７号（これは、本明細書中に参考として援用される）に開示される。このよ
うな保護基としては、アセチル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏ
ｃ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃ
ｂｚ）などが挙げられる。特定の保護されたアミノ酸を、表１に示す。

【００２４】 連結基： 連結基とは、反応性基を治療用ペプチドに連結または接続する、化
学部分である。連結基は、１つ以上のアルキル基、アルコキシ基、アルケニル基
、アルキル基で置換されたアルキニル基またはアミノ基、シクロアルキル基、多
環式基、アリール基、ポリアリール基、置換アリール基、複素環式基、および置
換複素環式基を含み得る。連結基はまた、ＡＥＡ（（２−アミノ）エトキシ酢酸
）または好ましい連結基であるＡＥＥＡ（［２−（２−アミノ）エトキシ）］エ
トキシ酢酸）のような、ポリエトキシアミノ酸を含み得る。好ましい連結基は、
アミノエトキシエトキシ酢酸（ＡＥＥＡ）である。

【００２５】 感受性官能基： 感受性官能基とは、治療用ペプチドに潜在的な反応部位を提
供する、原子の群である。存在する場合には、感受性官能基は、リンカー−反応
性基改変のための付着点として、選択され得る。感受性官能基としては、カルボ
キシル基、アミノ基、チオール基、およびヒドロキシル基が挙げられるが、これ
らに限定されない。

【００２６】 改変された治療用ペプチド： 改変された治療用ペプチドとは、反応性基の付
着により改変された治療用ペプチドであり、そして血液成分との結合体化により
、ペプチダーゼに対して安定化されたペプチドを形成し得る。反応性基は、連結
基を介してか、または必要に応じて連結基を使用せずにかのいずれかで、治療用
ペプチドに付着され得る。１つ以上のさらなるアミノ酸が治療用ペプチドに付加
されて、反応性基の付着を容易にし得ることもまた、考慮される。改変されたペ
プチドは、血液成分との結合体化がインビボで起こるように、インビボで投与さ
れ得るか、またはこれらは、最初に血液成分とインビトロで結合体化され、そし
て得られるペプチダーゼに対して安定化されたペプチド（以下に定義されるよう
な）が、インビボで投与され得る。用語「改変された治療用ペプチド」および「
改変されたペプチド」は、本願において交換可能に使用され得る。

【００２７】 ペプチダーゼに対して安定化された治療用ペプチド： ペプチダーゼに対して
安定化された治療用ペプチドとは、連結基のありまたはなしで、改変されたペプ
チドの反応性基と血液成分の官能基との間に形成される共有結合を介して、血液
成分に結合体化された、改変されたペプチドである。ペプチダーゼに対して安定
化されたペプチドは、インビボでペプチダーゼの存在下で、安定化されていない
ペプチドより安定である。ペプチダーゼに対して安定化された治療用ペプチドは
、一般に、同じ配列の安定化されていないペプチドと比較して、少なくとも１０
〜５０％増加した半減期を有する。ペプチダーゼ安定性は、血清または血液中の
改変されていない治療用ペプチドの半減期と、血清または血液中の改変された対
応する治療用ペプチドの半減期とを比較することにより、決定される。半減期は
、改変されたペプチドおよび改変されていないペプチドの投与後の血清または血
液をサンプリングし、そしてそのペプチドの活性を決定することにより、決定さ
れる。活性を決定することに加えて、治療用ペプチドの長さもまた、測定され得
る。

【００２８】 （治療用ペプチド）−本発明にて使用される場合、治療用ペプチドとは、以下
に規定されるような治療的活性を有する、２アミノ酸と５０アミノ酸との間のア
ミノ酸鎖である。各治療用ペプチドは、アミノ末端（Ｎ末端またはアミノ末端ア
ミノ酸とも呼ばれる）、カルボキシル末端（Ｃ末端またはカルボキシル末端アミ
ノ酸とも呼ばれる）、そしてこのアミノ末端とカルボキシル末端との間に位置す
る内部アミノ酸を有する。このアミノ末端は、遊離α−アミノ基を有するその治
療用ペプチド中で唯一のアミノ酸により規定される。このカルボキシル末端は、
遊離α−カルボキシル基を有するその治療用ペプチド中で唯一のアミノ酸により
規定される。

【００２９】 本発明にて使用される治療用ペプチドは、一般にそのアミノ末端か、カルボキ
シル末端か、または内部アミノ酸に位置する、治療的に活性な領域を含む。この
治療的に活性な領域は、本願にてより詳細に規定されるような、盲目的（ｂｌｉ
ｎｄ）置換または構造活性相関（ＳＡＲ）駆動置換を使用して同定され得る。Ｓ
ＡＲは、一連の化合物について、分子の構造とその薬理学的活性との間の関係を
規定する分析である。あるいは、その治療的に活性な領域が以前に規定されてお
りそしてその文献にて利用可能である場合、科学雑誌のような参考文献を参照す
ることにより、その治療的に活性な領域が入手され得る。そのペプチドの治療的
に活性な領域の位置の知識は、下記により詳細に規定されるように、その治療用
ペプチドを改変するために重要である。

【００３０】 本発明にて使用される治療用ペプチドは、そのアミノ末端か、カルボキシル末
端もしくはカルボキシル末端付近か、または内部アミノ酸もしくは内部アミノ酸
付近に一般的に位置する、治療的により低い活性の領域も含む。この治療的によ
り低い活性な領域は、その治療用ペプチドの治療的に活性な領域と一致しないア
ミノ酸の領域である。この治療的により低い活性な領域は、一般的には治療的に
活性な領域から離れて位置し、その結果、その治療的により低い活性な領域での
改変は、その治療用ペプチドの治療的活性に実質的には影響しない。例えば、そ
の治療的に活性な領域がアミノ末端に位置する場合、その治療用ペプチドは、カ
ルボキシル末端または内部アミノ酸のいずれかにて改変される。あるいは、その
治療的に活性な領域がカルボキシル末端に位置する場合、その治療用ペプチドは
、アミノ末端または内部アミノ酸のいずれかにて改変される。最後に、その治療
的に活性な領域が内部領域に位置する場合、その治療用ペプチドは、アミノ末端
またはカルボキシル末端のいずれかにて改変される。

【００３１】 「治療的活性」は、患者における生物学的障害を治癒することまたは治療する
ことに関する、任意の活性である。上記治療用ペプチドの例としては、以下が挙
げられる：下垂体ホルモン（例えば、バソプレシン、オキシトシン、メラニン細
胞刺激ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン、成長ホルモン）；視床下部ホルモン（
例えば、成長ホルモン放出因子、副腎皮質刺激ホルモン放出因子、プロラクチン
放出ペプチド、性腺刺激ホルモン放出ホルモンおよびその関連ペプチド、黄体化
ホルモン放出ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、オレキシン、および
ソマトスタチン）；甲状腺ホルモン（例えば、カルシトニン、カルシトニン前駆
体、およびカルシトニン遺伝子関連ペプチド）；副甲状腺ホルモンおよびその関
連タンパク質；膵ホルモン（例えば、インスリンおよびインスリン様ペプチド、
グルカゴン、ソマトスタチン、膵ポリペプチド、アミリン、ペプチドＹＹ、およ
び神経ペプチドＹ）；消化ホルモン（例えば、ガストリン、ガストリン放出ペプ
チド、ガストリン阻害ペプチド、コレシストキニン、セクレチン、モチリン、お
よび血管作用性腸ペプチド）；ナトリウム排泄増加性ペプチド（例えば、心房性
ナトリウム利尿ペプチド、脳ナトリウム利尿ペプチド、およびＣ型ナトリウム利
尿ペプチド）；ニューロキニン（ニューロキニンＡ、ニューロキニンＢおよびＰ
物質）；レニン関連ペプチド（例えば、レニン物質およびインヒビターおよびア
ンギオテンシン）；エンドセリン（ビッグエンドセリン、エンドセリンＡレセプ
ターアンタゴニスト、およびサラフォトキシン（ｓａｒａｆｏｔｏｘｉｎ）ペプ
チドを含む）；ならびに他のペプチド（例えば、アドレノメデュリンペプチド、
アラトスタチン（ａｌｌａｔｏｓｔａｔｉｎ）ペプチド、アミロイドβタンパク
質フラグメント、抗生物質ペプチドおよび抗真菌ペプチド、アポトーシス関連ペ
プチド、ｂａｇ細胞ペプチド、ボンベシン、骨Ｇｌａタンパク質ペプチド、ＣＡ
ＲＴペプチド、走化性ペプチド、コルチコスタチン（ｃｏｒｔｉｓｔａｔｉｎ）
ペプチド、フィブロネクチンフラグメントおよびフィブリン関連ペプチド、ＦＭ
ＲＦおよびアナログペプチド、ガラニンおよび関連ペプチド、成長因子および関
連ペプチド、Ｇ治療用ペプチド結合タンパク質フラグメント、グアニリンおよび
ウログアニリン、インヒビンペプチド、インターロイキンおよびインターロイキ
ンレセプタータンパク質、ラミニンフラグメント、レプチンフラグメントペプチ
ド、ロイコキニン（ｌｅｕｃｏｋｉｎｉｎ）、マスト細胞脱顆粒ペプチド、下垂
体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド、パンクレアスタチン、ペプチドT
、ポリペプチド、ウイルス関連ペプチド、シグナル伝達試薬、毒素、および以下
のような種々のペプチド：アジュバントペプチドアナログ、α接合因子、抗不整
脈ペプチド、凍結防止ポリペプチド、食欲不振誘発性ペプチド、ウシ松果体抗生
殖ペプチド、ブルシン、Ｃ３ペプチドＰ１６、腫瘍壊死因子、カドヘリンペプチ
ド、クロモグラニンＡフラグメント、避妊テトラペプチド、コナントキン（ｃｏ
ｎａｎｔｏｋｉｎ）Ｇ、コナントキン（ｃｏｎａｎｔｏｋｉｎ）Ｔ、甲殻類心臓
作用性ペプチド、Ｃ−テロペプチド、シトクロムｂ５８８ペプチド、デコルシン
、デリシャス（ｄｅｌｉｃｉｏｕｓ）ペプチド、Δ−睡眠誘導ペプチド、ジアゼ
ムパム（ｄｉａｚｅｍｐａｍ）結合インヒビターフラグメント、一酸化窒素シン
ターゼブロッキングペプチド、ＯＶＡペプチド、血小板カルパインインヒビター
（Ｐ１）、プラスミノゲンアクチベーターインヒビター１、リジン（ｒｉｇｉｎ
）、精神分裂病関連ペプチド、血清胸腺因子、ナトリウムカリウムＡ治療ペプチ
ダーゼインヒビター１、スペラクト（ｓｐｅｒａｃｔ）、精子活性化ペプチド、
システミン、トロンビンレセプターアゴニスト、胸腺液性γ２因子、チモペンチ
ン、サイモシンα１、胸腺因子、ツフシン、アジポキニンホルモン、尿毒症性ペ
ンタペプチド、および他の治療用ペプチド）。

【００３２】 これらの定義を考慮すると、本発明の焦点は、治療用ペプチドをインビボにて
ペプチダーゼ活性から保護するように改変し、それによって患者にこのペプチド
自体を投与することと比較して、当該治療用ペプチドの有効治療寿命を伸長する
ことである。

【００３３】 （１．本発明において用いられる治療用ペプチド） 添付の配列表（ＳＥＱＵＥＮＣＥ ＬＩＳＴＩＮＧ）に提供されるような治療
用ペプチドの決定されたアミノ酸配列から選択したペプチドフラグメントは、本
発明を含む開発における開始点を構成する。このペプチドは、２〜５０アミノ酸
長の範囲にわたる。互換可能な用語である「ペプチドフラグメント」および「ペ
プチド部分」は、天然に存在するアミノ酸配列から誘導可能な合成のアミノ酸配
列および天然に存在するアミノ酸配列の両方を含むことが意図される。

【００３４】 １つの実施形態において、ペプチドおよびペプチドフラグメントは、以下にお
いて詳細に考察されるような、ベンチトップ（ｂｅｎｃｈ−ｔｏｐ）法、または
自動ペプチド合成機のいずれかによって、従来の手段により合成される。しかし
、例えば、タンパク質分解酵素を用いて、天然に存在するアミノ酸配列を断片化
することにより、ペプチドのフラグメントを獲得することもまた可能である。さ
らに、Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｔ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８２）（本明細書中にて参考として援用される）によ
り開示されるように、組換えＤＮＡ技術の使用により、治療用ペプチドの所望の
フラグメントを得ることが可能である。既存の方法論に対して他の新しい改変の
使用もまた意図される。

【００３５】 本発明は、治療用ペプチドの天然に存在する配列から誘導可能なペプチドを包
含する。ペプチドが天然に存在する配列を断片化することにより獲得され得る場
合、またはペプチドが、天然に存在するアミノ酸配列の配列の知識もしくはこの
配列をコードする遺伝物質（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の知識に基いて合成され得る
場合、そのペプチドは「天然に存在するアミノ酸配列から誘導可能である」と言
われる。ペプチドの「誘導体」であると言われる分子は、本発明の範囲内に含ま
れる。このような「誘導体」は、以下の特徴を有する：（１）治療用ペプチドま
たはこのペプチドの同様のサイズのフラグメントと実質的な相同性を共有する、
そして（２）このペプチドと同じ治療活性を伴って機能し得る。

【００３６】 ペプチドの誘導体のアミノ酸配列が、その誘導体と同じアミノ酸残基を有する
ペプチドまたはペプチドのフラグメントのいずれかの配列と、少なくとも８０％
、そしてより好ましくは少なくとも９０％、そして最も好ましくは少なくとも９
５％同じである場合、そのペプチドの誘導体は、このペプチドと「実質的な相同
性」を共有していると言われる。

【００３７】 本発明の誘導体は、以下に詳細に考察するように、天然に存在する治療用ペプ
チドの配列に実質的に相同な配列を含むことに加えて、そのアミノ末端および／
またはカルボキシ末端で、１つ以上のさらなるアミノ酸を含み得る、フラグメン
トを包含する。従って、本発明は、天然に存在する治療用ペプチド配列に存在し
ないかもしれない１つ以上のアミノ酸を含み得る、治療用ペプチドのポリペプチ
ドフラグメントに関する（ただし、このようなフラグメントが、その治療用ペプ
チドの活性を超える治療活性を有する場合である）。

【００３８】 同様に、本発明は、天然に存在する治療用ペプチドの配列と実質的に相同であ
る配列を含むが、その治療用ペプチドに天然に見出されるアミノ末端および／ま
たはカルボキシ末端の１つ以上のさらなるアミノ酸を欠失し得る、ポリペプチド
フラグメントを包含する。従って、本発明は、その天然に存在するペプチド配列
に通常存在する１つ以上のアミノ酸を欠失し得る治療用ペプチドのポリペプチド
フラグメントに関する（ただし、このようなポリペプチドがその治療用ペプチド
の活性を超える治療活性を有する場合である）。

【００３９】 本発明はまた、重要ではないアミノ酸置換を有する（従って、その天然の配列
のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸を有する）、上記フラグメントの明白または
瑣末な改変体を包含する（ただし、このような改変体が、上記誘導体の活性と実
質的に同一である活性を有する場合である）。明白な置換または瑣末な置換の例
としては、塩基性残基同士の置換（すなわち、ＬｙｓをＡｒｇに）、疎水性残基
同士の置換（すなわち、ＩｌｅをＬｅｕに）、または芳香族残基同士の置換（す
なわち、ＴｙｒをＰｈｅに）、などが挙げられる。

【００４０】 当該分野で公知のとおり、アミノ酸残基は、以下に詳細に考察するように、適
切なアミノ保護基またはカルボキシル保護基を用いて、その保護形態または非保
護形態であり得る。可変性の長さのペプチドは、遊離アミン（Ｎ末端へ）、また
はその酸付加塩の形態であり得る。通常の酸付加塩は、ハロゲン化水素酸（ｈｙ
ｄｒｏｈａｌｉｃ ａｃｉｄ）塩（すなわち、ＨＢｒ、ＨＩまたはより好ましく
はＨＣｌ）である。有用なカチオンは、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の
カチオン（すなわち、Ｎａ、Ｋ、Ｌｉ、Ｃａ、Ｂａなど）またはアミンカチオン
（すなわち、テトラアルキルアンモニウム、トリアルキルアンモニウム（ここで
アルキルは、Ｃ₁〜Ｃ₁₂であり得る））である。

【００４１】 治療活性を有する任意のペプチドが、本発明において用いられ得る。以下のペ
プチドのリストにより、本発明において用いられ得るペプチドの例が提供される
。しかし、この例は、排他的ではなく、本発明に用いられ得るペプチドの数また
は型を決して限定しない。これらの治療用ペプチドおよびこれらのペプチドから
生成されるフラグメントは、本発明に従って改変され得、そして身体中で治療的
に用いられ得る。

【００４２】 （Ａ．下垂体ホルモン（配列番号１〜７２）） （副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ、またはコルチコトロピンともいう）（配
列番号１〜２２）−副腎皮質の内分泌機能は、下垂体前葉ホルモンＡＣＴＨによ
り調節される。ＡＣＴＨ（３９アミノ酸のペプチド）は、コルチコトロピン放出
因子の制御下で、下垂体前葉のコルチコトロフにおいて生成される。ＡＣＴＨは
、プロ−オピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）として公知の２４１アミノ酸前駆体
から翻訳後修飾により誘導される。

【００４３】 ＡＣＴＨの生物学的役割は、副腎皮質の嵩および生存度を維持すること、およ
び副腎皮質ステロイド（主に、コルチソルおよびコルチコステロン）の産生を刺
激することである。ＡＣＴＨの作用の機構は、ＡＣＴＨレセプターへの結合、そ
の後のアデニレートサイクラーゼの活性化、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の
上昇、および副腎皮質組織のプロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）活性の増大を含む
。これらの事象の主要な効果は、側鎖切断酵素（コレステロールをプレグネノロ
ンに転換する）の活性を増大することである。種々の副腎皮質の区画における酵
素の分布が原因で、ＡＣＴＨの主な生理学的効果は、グルココルチコステロイド
の産生である。

【００４４】 副腎皮質活性を制御する機能だけでなく、ＡＣＴＨは、内分泌腺および内分泌
腺の調節、温度制御、ならびに神経再生および発達への影響を含む、多様な生物
学的役割を有するようである。さらに、ＡＣＴＨおよびそのフラグメントは、意
欲、学習および行動に影響する。従って、治療用因子としてのＡＣＴＨの使用は
、これらの機能の制御を助け得る。下垂体前葉からのＡＣＴＨの放出は、コルチ
コトロピン放出因子（ＣＲＦ）により媒介される。

【００４５】 （成長ホルモンペプチド（配列番号２３〜２４、４５）−ヒト胎盤性ラクトゲ
ン（ｈＰＬ）、成長ホルモン、およびプロラクチン（ＰｒＩ）は、成長ホルモン
ファミリーを構成する。全てが約２００アミノ酸、２つのジスルフィド結合を有
し、そしてグルコシル化を有さない。それぞれがその活性に対して特定のレセプ
ターおよび特有の特徴を有するが、その全てが、成長促進活性および乳腺刺激性
活性を保有する。成熟ＧＨ（２２，０００ダルトン）は、一本のポリペプチド鎖
として好酸性下垂体ソマトトロピン産生細胞において合成される。選択的ＲＮＡ
スプライシングが原因で、少量の多少小さい分子形態もまた分泌される。

【００４６】 ＧＨに関する多数の遺伝的欠損が存在する。ＧＨ欠損性小人は、ＧＨを合成ま
たは分泌する能力を欠き、そしてこれらの低身長の個体は、ＧＨ療法によく応答
する。ピグミーは、ＧＨに対するＩＧＦ−１応答を欠くが、その代謝効果を欠く
のではない；従って、ピグミーでは、欠損は、本質的にはレセプター後（ｐｏｓ
ｔ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ））である。結局、ラロン型小人は、正常または過剰の血
漿ＧＨを有するが、肝臓ＧＨレセプターを欠き、そして循環のＩＧＦ−１のレベ
ルが低いのである。これらの個体における欠損は、ＩＧＦ−１の産生による、Ｇ
Ｈに対する応答不能に密接に関連している。長骨の骨端閉鎖前の過剰な量ＧＨの
産生は、巨人症をもたらし、そして骨端閉鎖の後にＧＨが過剰になる場合は、末
端の骨の成長が末端肥大症の特徴的特徴をもたらす。治療用因子としてＧＨを用
いれば、これらの障害の処置を助け、そしてＧＨレベルが低いかまたは正常な他
の種類の低身長において、もしかすると成長を刺激するかもしれない。

【００４７】 （メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）（配列番号２５〜３９））−メラニン
細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）は、ドーパミンの制御下で、下垂体中間部において
生成される。ＭＳＨは、脊椎動物の色素細胞メラニン産生の制御、学習および行
動に関する神経機能、ならびに胎児発達において重要な生理学的役割を有し得る
。Ｓａｗｙｅｒ、Ｔ．Ｋ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，
７９，１７５１（１９８２）を参照のこと。

【００４８】 （オキシトシン（配列番号４０〜４４））−オキシトシンは、乳汁分泌の増強
、子宮の収縮、および出産前の骨盤の弛緩に関与する。授乳中の女性におけるオ
キシトシンの分泌は、哺乳中の乳首の刺激により得られる直接の神経的フィード
バックにより刺激される。オキシトシンの生理学的効果としては、乳腺筋上皮細
胞の収縮（乳腺からの乳汁の駆出を誘導する）、および出産をうながす子宮平滑
筋収縮の刺激が挙げられる。オキシトシンは、乳腺の分泌腺房の周囲の筋上皮細
胞を収縮させ、管を通って乳汁を押し出す。さらに、オキシトシンはプロラクチ
ンの放出を刺激する。そしてプロラクチンは、乳房の栄養であり（ｔｒｏｐｈｉ
ｃ）、そして乳汁の腺房形成を刺激する。従って、結合体化されたオキシトシン
は、乳汁分泌を補助するために、そして出産前に骨盤を弛緩するのを補助するた
めに用いられ得る。このオキシトシンはまた、産後（ｐｏｓｔ ｐａｒｔｕｍ）
子宮出血を防ぐために用いられる。

【００４９】 バソプレシン（ＡＤＨ）（配列番号４６〜７２）−バソプレシンはまた、抗利
尿ホルモン（ＡＤＨ）としても公知である。なぜなら、バソプレシンは、体液浸
透圧の主要な調節因子であり、抗利尿をもたらし、そして血圧を上昇させるから
である。バソプレシンは、形質膜レセプターに結合し、そしてＧタンパク質を通
じて作用し、サイクリックＡＭＰ／プロテインキナーゼＡ（ｃＡＭＰ／ＰＫＡ）
調節系を活性化する。バソプレシンの分泌は、浸透圧受容体（ｏｓｍｏｒｅｃｅ
ｐｔｏｒ）により、視床下部において調節される。浸透圧受容体は、水濃度を検
知し、そして血漿浸透圧が上昇すれば、バソプレシン分泌の上昇を刺激する。分
泌されたバソプレシンは、尿細管細胞において水の再吸収速度を上昇させ、Ｎａ ⁺ が濃縮されている尿の排泄を引き起こし、従って、体液の浸透圧の正味の低下
を引き起こす。バソプレシンの欠損は、尿崩症として知られた状態である、水っ
ぽい尿（ｗａｔｅｒｙ ｕｒｉｎｅ）および多渇症をもたらす。従って、結合体
化したバソプレシンまたはバソプレシンフラグメントの使用は、これらの障害を
防止し、そして身体の浸透圧の規則正しい維持を可能にする。

【００５０】 （Ｂ．視床下部ホルモン（放出因子）） （コルチコトロピン放出因子（ＣＲＦ）および関連ペプチド（配列番号７３〜
１０２））−４１アミノ酸のペプチドである、コルチコトロピン放出ホルモン（
ＣＲＦ）は、脳および末梢の両方における作用を通じてストレスに対する全般的
応答を協調させるのに重要な役割を果たす。脳においては、ＣＲＦは、視床下部
室傍核の小細胞性ニューロンから主に産生されそして分泌される。そこから、Ｃ
ＲＦ含有ニューロンは、正中隆起の門脈毛細血管に投射し、そして副腎皮質刺激
ホルモン（ＡＣＴＨ）、βエンドルフィン、および下垂体由来の他のプロオピオ
メラノコルチン（ＰＯＭＣ）由来ペプチドの分泌を刺激するように働く。引き続
く、副腎糖質コルチコイドのＡＣＴＨ誘導性放出は、ストレスに対する内分泌応
答を媒介する、視床下部−下垂体−副腎系（ＨＰＡ）における最終段階を示す。
ＣＲＦの神経内分泌的な役割に加えて、ＣＲＦはまた、神経伝達物質および神経
変調物質として機能し、生理学的、薬理学的および病理学的刺激に対して、広範
なスペクトルの自律神経効果、行動効果、および免疫効果を惹起する。

【００５１】 臨床試験により、ＣＲＦ過剰分泌が種々の疾患（例えば、大うつ病、不安関連
疾患、摂食障害、および炎症性障害）に関連していることが示された。アルツハ
イマー病、痴呆、肥満および多くの内分泌疾患において、低レベルのＣＲＦが見
出されている。従って、高レベルまたは低レベルのＣＲＦに関連する効果に対抗
する治療薬としてのＣＲＦの使用は、異常なＣＲＦレベルに関連する疾患の処置
のための基礎を提供する。いくつかのペプチドアンタゴニストおよび非ペプチド
アンタゴニストが開発されており、広範に研究されている。これには、αらせん
ＣＲＦ（９〜４１），アストレシン（Ａｓｔｒｅｓｓｉｎ）、Ｄ−ＰｈｅＣＲＦ
（１２〜４１）（ペプチドアンタゴニスト）およびＣＰ−１５４５２６（非ペプ
チドアンタゴニスト）が挙げられる。これらのＣＲＦアンタゴニストは、抑うつ
、不安および他のＣＲＨ関連疾病の処置のための新規な薬剤を提供し得る。従っ
て、結合体化されたＣＲＦペプチドは、長期ステロイド使用の間の副腎の状態お
よび生存度を維持するため、または抗炎症性薬剤として用いられ得る。

【００５２】 （性腺刺激ホルモン（ゴナドトロピン）放出ホルモン関連ペプチド（ＧＡＰ）
（配列番号１０３〜１１０）−ＧＡＰは、性腺刺激ホルモン放出ホルモン（Ｇｎ
ＲＨ）への前駆体分子に含まれる。ＧＡＰは、プロラクチン阻害特性を有する。
Ｇｎ−ＲＨは、視床下部により分泌されるホルモンである。これは、性腺刺激ホ
ルモン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）の放出を
刺激する。低レベルの循環する性ホルモンは、ＧｎＲＨ合成のフィードバック阻
害を軽減し、ＦＳＨおよびＬＨのレベルの上昇を導く。後者のペプチドホルモン
は、性腺組織に結合し、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）およびプロテインキナ
ーゼＡ（ＰＫＡ）媒介径路を介した性ホルモン産生を生じる。結合体化されたＧ
ｎＲＨは、受胎能を補助するため、または雄性もしくは雌性のいずれかにおける
避妊薬として用いられ得る。この因子は、動物およびヒトにおける用途を有する
。

【００５３】 （成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）（配列番号１１１〜１３４）） ＧＲＦは
、下垂体前葉における成長ホルモンの合成および分泌を制御する際に重要な役割
を果たす視床下部ペプチドである。いくつかの構造的に関連しない短いペプチド
はまた、異なる機構により成長ホルモン分泌を誘発するすることが報告された。

【００５４】 ＧＲＦの影響下で、成長ホルモンは、全身循環に放出され、標的組織にＩＧＦ
−１を分泌させる。成長ホルモンはまた、他のより直接的な代謝効果を有する；
これは、血糖上昇効果および脂質分解効果の両方である。全身的なＩＧＦ−１の
主な供給源は肝臓であるが、大部分の他の組織も分泌し、そして全身的ＩＧＦ−
１に寄与する。肝臓ＩＧＦ−１は、組織成長の主なレギュレーターであると見な
されている。特に、肝臓により分泌されるＩＧＦ−１は、全身を通した成長を同
期化させ、組織サイズおよび質量の恒常的平衡（ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ｂａ
ｌａｎｃｅ）を生じると考えられる。周辺組織により分泌されるＩＧＦ−１は、
一般に、生物学的作用におけるオートクラインまたはパラクリンであると見なさ
れている。次いで、ＧＨ放出を増加させる治療剤として結合体化したＧＲＦを使
用することは、ＧＲＦにより調節される成長機能を含む障害の処置を補助する。

【００５５】 （黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨ−ＲＨ）（配列番号１３５−１６１）
） 黄体形成ホルモン放出ホルモンは、性腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモン（
ＬＨ）および卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の分泌の神経調節において重要なメデ
ィエーターである。ＬＨ−ＲＨは、血漿性腺刺激ホルモンおよび性ステロイドレ
ベルを調節することによって、性行動を変化させ得る。Ｖａｌｅ，Ｗ．Ｗ．ら、
Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｆｕ
ｎｃｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｉｘｔｈ Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，Ｇｒｏｓｓ，ＥおよびＭｅｉ
ｅｎｈｏｆｅｒ，Ｍ．編，７８１（１９７９）を参照のこと。結合体化したＬＨ
−ＲＨ薬剤を使用して、受精能（ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ）の補助としてヒトまたは
動物における排卵を刺激し得る。

【００５６】 （オレキシン（配列番号１６２〜１６４）） オレキシンは、最近発見され、
特徴づけられた視床下部由来の神経ペプチドのファミリーである。オレキシンは
、食欲および食物消費を刺激する。それらの遺伝子は、視床下部外側部において
両側にかつ対称に発現される。視床下部外側部は、視床下部の「摂食中枢」であ
ることが早くに決定された。対照的に、いわゆる満腹中枢は腹内側視床下部（ｖ
ｅｎｔｒｏｍｅｄｉａｌ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｕｓ）において発現され、そし
てレプチン調節性神経ペプチドネットワークにより支配される。

【００５７】 （プロラクチン放出ペプチド（配列番号６５〜１７０）） プロラクチンは、
好酸性下垂体ラクトトロープ（ｌａｃｔｏｔｒｏｐｅ）により生成される。プロ
ラクチン放出ペプチドは、ラクトトロープに対して作用して、プロラクチンを放
出させる。ＲＰＬは、哺乳動物において（しかし通常はエストロゲン様性ホルモ
ンでプライムされた乳腺組織においてのみ）乳汁分泌を開始し、そして維持する
。結合体化したＰＲＰは、ヒトまたは動物における乳汁分泌を増大させるために
使用され得る。

【００５８】 （ソマトスタチン（配列番号１７１〜２０１）） 成長ホルモン放出阻害因子
（ＧＩＦ）としても公知のソマトスタチンは、１４アミノ酸のペプチドであり、
そして視床下部および膵臓のｄ細胞の両方により分泌される（その膵臓バージョ
ンは、以下で議論される）。ソマトスタチンは、種々の部位（下垂体、膵臓、腸
および脳を含む）の生理学的機能を調節することが報告された。これは成長ホル
モン、インスリン、およびグルカゴンの放出を阻害する。これは、多くの生物学
的役割を有し、これらの役割としては、以下が挙げられる：内分泌および外分泌
細胞からの基本的および刺激されたホルモン分泌の阻害、歩行運動（ｌｏｃｏｍ
ｏｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ）および認識機能に対する効果、ならびに小細胞肺
癌におけるあり得る治療価値。Ｒｅｕｂｉ，Ｊ．Ｃ．ら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ
ｏｇｙ，１１０，１０４９（１９８２）を参照のこと。結合体化したソマトスタ
チンを使用して、小児における巨人症または成人における先端巨大症を処置し得
る。

【００５９】 （サイロトロピン放出ホルモン（ＴＨＲ）およびアナログ（配列番号２０２〜
２１４）） ＴＨＲは、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ，サイロトロピンとしても
公知）の生成およびプロラクチン分泌を刺激する。成体において、ＴＳＨは、一
般的なタンパク質合成のアップレギュレート、および正の窒素平衡の状態の誘導
を担う。胚においては、正常な発生に必要である。胚における甲状腺機能低下は
、クレチン病の原因である。クレチン病は、複数の先天的欠損（ｃｏｎｇｅｎｉ
ｔａｌ ｄｅｆｅｃｔ）および精神遅滞により特徴づけられる。次いで、結合体
化したＴＨＲは、これらの障害の処置における治療剤として使用され得る。これ
はまた、下垂体が原因の甲状腺機能不全を処置するためにまたはヒトの甲状腺腫
瘍の診断において使用され得る。

【００６０】 （Ｃ．甲状腺ホルモン） （カルシトニン（ＣＴ）およびカルチトニン前駆体ペプチド（配列番号２１５
〜２２４）） カルシトニン（ＣＴ）は、甲状腺のＣ細胞により分泌される３２
アミノ酸のペプチドである。カルシトニンは、骨粗鬆症の症状を軽減するために
治療的に用いられるが、その作用機構の詳細は不明なままである。しかし、これ
は、ＣＴが単離された細胞で上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）の合成を誘導し、この
ことは血漿ＣＡ²⁺レベルの増加をインビボで導くことが観察された。さらに、Ｃ
Ｔはオステオポリン（Ｏｐｎ）、すなわち、破骨細胞により生成されたタンパク
質の合成を減少し、そして骨に対する破骨細胞の付着の原因であることが示され
た。従って、治療用ペプチドとして結合体化したＣＴを用いることは、ＰＴＨ誘
導を介して血漿Ｃａ²⁺を上昇させ、そして骨への破骨細胞結合を減少させること
により骨の再吸収が低減される。

【００６１】 （カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）（配列番号２２５〜２５３）
） ＣＧＲＰは、３７アミノ酸のペプチドであり。このペプチドは、カルシトニ
ン遺伝子転写物の選択的スプライシングから生じる。これは、少なくとも２つの
形態で存在する：α−ＣＧＲＰ（またはＣＧＲＰ−Ｉ）およびβ−ＣＧＲＰ（ま
たはＣＧＲＰ−ＩＩ）。ＣＧＲＰは、アミリンおよびアドレノメデュリンとかな
りの相同性を有し、そして中枢または末梢の両方で器官に広範に分布する。これ
らの器官としては、以下が挙げられる：皮膚、心臓、膵臓、肺および腎臓。ＣＧ
ＲＰは、神経系および心臓血管系、炎症および代謝に影響を及ぼす、多くの生物
学的役割を有する。

【００６２】 （Ｄ．上皮小体ホルモンおよび関連ペプチド） （上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）（配列番号２５４〜２９３）） 上皮小体ホル
モン（ＰＴＨ）は、全身のＣａ²⁺レベルに応答して上皮小体主細胞により合成さ
れ、そして分泌される。これは、血清カルシウム濃度の調節に主な役割を果たし
、それによって鉱質および骨代謝の生理に影響を及ぼす。上皮小体のＣａ²⁺レセ
プターは、ＰＫＣ、Ｃａ²⁺およびＩＰ₃の細胞内レベルを増加させることにより
Ｃａ²⁺に応答する；この段階の後、ＰＴＨ分泌がタンパク質合成期間の後に続く
。主細胞におけるＰＴＨの合成および分泌は構成的であるが、Ｃａ²⁺は、血漿Ｃ
ａ²⁺レベルが上昇した場合にＰＴＨのタンパク質分解の速度を増大させ、そして
Ｃａ²⁺レベルが低下した場合にＰＴＨのタンパク質分解を減少させることにより
、主細胞におけるＰＴＨのレベル（従って、その分泌）を調節する。ＰＴＨの役
割は、細胞外液体におけるＣａ²⁺濃度を調節することである。従って、ＰＴＨ分
泌を調節するフィードバックループは、上皮小体、Ｃａ²⁺、および以下に記載の
標的組織に関与する。

【００６３】 ＰＴＨは、ｃＡＭＰ共役型原形質膜レセプターに結合することにより作用し、
生物学的応答において最高点に達する反応のカスケードを開始する。身体のＰＴ
Ｈに対する応答は複雑であるが、全ての組織において細胞外液体におけるＣａ²⁺ レベルを増大させることに向けられる。ＰＴＨは、破骨細胞活性を刺激すること
により骨の溶解を誘導し、このことは、血漿Ｃａ²⁺およびホスフェートの上昇を
導く。腎臓において、ＰＴＨは、その再吸収を刺激することにより腎臓Ｃａ²⁺ク
リアランスを減少させ；同時に、ＰＴＨは、ホスフェートの再吸収を減少させ、
そしてそれによってそのクリアランスを増大させる。最後に、ＰＴＨは、肝臓、
腎臓および腸に対して作用して、ステロイドホルモン１，２５−ジヒドロキシコ
レカルシフェロール（カルシトリオール）の生成を刺激する。このステロイドホ
ルモンは、腸におけるＣａ²⁺吸収を担う。結合体化したＰＴＨを使用して、上皮
小体ホルモン欠損状態を有する患者におけるカルシウムホメオスタシスを調節し
得る。インヒビターアナログを使用して、過剰なＰＴＨレベルを有する腎不全患
者または他の患者におけるＰＴＨ作用をブロックし得る。

【００６４】 （上皮小体ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）（配列番号２９４〜３０９
）） 上皮小体ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）は、軟骨細胞分化を低減
させ、そしてアポトーシス性細胞死を妨げる生理学的レギュレーターとして注意
が向けられた。ＰＴＨｒＰは、上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）（カルシウムホメオ
スタシスの主要レギュレーター）に対する構造的類似性を有する腫瘍由来の分泌
タンパク質として最初に同定された。ＰＴＨおよびＰＴＨｒＰは、共通のＧタン
パク質共役細胞表面レセプター（ＰＴＨ／ＰＴＨｒＰまたはＰＴＨ−１レセプタ
ー）に結合する。このレセプターは、これらのペプチドのＮ末端領域（１〜３４
）を認識する。従って、腫瘍由来のＰＴＨｒＰが循環中に入る場合、これは、古
典的なＰＴＨ標的器官（例えば、骨および腎臓）におけるレセプターを活性化し
、そしてＰＴＨ様生物活性を誘発する。骨の再吸収を促進し、そしてカルシウム
排出を阻害することにより、循環ＰＴＨｒＰは、悪性に関連する体液性高カルシ
ウム血症の通常の新生物随伴症候群を生じる。

【００６５】 腫瘍において最初に発見されたが、ＰＴＨｒＰは、その後、胎児および成体骨
格を含む著しい種々の正常組織において発現されることが示された。そのアミノ
末端ＰＴＨ−１レセプターと協同して作用する場合、ＰＴＨｒＰは、細胞増殖お
よび分化を調節するように作用する。骨に対する断続的ＰＴＨ投与の同化効果お
よび骨粗鬆症におけるその治療的潜在性は、広範に調査された。ＰＴＨｒＰが、
破骨細胞におけるＰＴＨ／ＰＴＨｒＰレセプターについての内因性リガンドであ
るという認識に対して、同化薬剤としてのその使用もまた調査された。改変ＰＴ
ＨｒＰペプチドは、ＰＴＨと同様な指示のために使用され得る。

【００６６】 （Ｅ．膵臓ホルモン） 膵臓ホルモンの主要な役割は、主に、主細胞エネルギ
ー供給の異化および同化に関与する多くの酵素の濃度および活性を調節すること
による、体全体のエネルギー代謝の調節である。

【００６７】 （アミリン（配列番号３１０〜３３５）） 膵臓β細胞ホルモンであるアミリ
ンは、ＣＧＲＰおよびカルシトニンに関連する３７アミノ酸のペプチドである。
これは、膵臓β細胞からインスリンと共に同時分泌される。アミリンは、１型糖
尿病で欠損している。アミリンは、インスリンと共に働いて、血流における血漿
グルコース濃度を調節するようである。このことは、グルカゴンの治療後ペプチ
ドランジアル（ｐｅｐｔｉｄｅｒａｎｄｉａｌ）分泌を停止させ、そして胃が空
になる速度を抑制する。糖尿病を有する人々は、インスリン分泌における欠損と
並行してアミリンの分泌の欠損を有し、このことにより、治療後ペプチドランジ
アル期間の間に血流へのグルカゴンの過剰な流入が生じている。

【００６８】 インスリン置換治療は糖尿病処置の基礎であるが、アミリンおよびインスリン
両方の機能の置換により、グルコース制御の正常の生理をより完全に回復させる
ことが可能になり得る。２型糖尿病は、島アミロイド沈着により特徴づけられる
。この島アミロイド沈着は、島アミロイドポリペプチドのアミロイド生成ヒト形
態からおもに構成される。結合体化したアミリンを糖尿病の管理において用いて
、食事後の高血糖症を制限し得る。

【００６９】 （グルカゴン（配列番号３３６〜３７６）） グルカゴンは、非常に大きなプ
ログルカゴン分子として、ランゲルハンス島のα細胞により合成される２９アミ
ノ酸のホルモンである。インスリンのように、グルカゴンは血漿キャリアタンパ
ク質を欠き、そしてインスリンのように、その循環半減期はまた、約５分である
。後者の形質の結果として、グルカゴンの主要な効果は、膵臓分泌物を含む血液
がそそぎ込まれる最初の組織である肝臓に対してである。グルカゴンは、原形質
膜レセプターに結合し、そしてＧタンパク質を介してアデニレートシクラーゼに
共役される。ｃＡＭＰおよびＰＫＡの、結果として生じた増加は、インスリンが
肝臓に対して有する上記の効果の全てを逆転させる。この増加はまた、循環グル
コースの顕著な上昇を導き、グルコースは、肝臓糖新生および肝臓グリコーゲン
分解から誘導される。結合体化したグルカゴン構築物は、再発した高血糖症を有
する不安定型糖尿病を管理するか、医原性高血糖症を予防もしくは処置するため
に使用され得る。

【００７０】 （インスリンおよびインスリン様ペプチド（配列番号３７７〜３８２）） こ
れらの認識されたホルモンの最初は、膵臓により生成される２１アミノ酸および
３０アミノ酸のジスルフィド結合ジペプチドであるインスリンであった。インス
リンの主要な機能は、多くの高血糖症生成ホルモンの協調した作用を阻止するこ
とであり、そして低い血糖レベルを維持することである。インスリンは、ＩＧＦ
−１、ＩＧＦ−２およびリラキシンを含む、構造的かつ機能的に類似した分子の
ファミリーのメンバーである。４分子全ての三次元構造が類似しており、そして
増殖促進活性を全てが有するが、インスリンの優勢な役割は代謝であり、その一
方、ＩＧＦおよびリラキシンの優勢な役割は、細胞増殖および分化の調節にある
。

【００７１】 インスリンは、ランゲルハンス島ｂ細胞におけるプレプロホルモンとして合成
される。そのシグナルペプチドは、小胞体の槽において除去され、そしてこれは
ゴルジにおける分泌小胞にパッケージされ、そのネイティブな構造に折り畳みさ
れ、そして２つのジスルフィド結合の形成によりそのコンホメーションをロック
する。特異的プロテアーゼ活性はその分子の中心三分の一を切断し、Ｃペプチド
として解離させ、カルボキシ末端Ａペプチドに結合したアミノ末端Ｂペプチドジ
スルフィドを残す。

【００７２】 インスリンは、全ての細胞で同じである原形質膜レセプターに結合することに
より、その細胞内効果を生じる。このレセプターは、ジスルフィド結合した糖タ
ンパク質である。インスリンの１つの機能（シグナル伝達におけるその役割は別
として）は、肝外組織におけるグルコース輸送を増加することであり、原形質膜
におけるグルコース輸送体分子の数を増加させることによる。グルコース輸送体
は、ターンオーバーの連続した状態にある。輸送体の原形質膜含有量における増
加は、原形質膜への新たな輸送体の漸増速度の増加に由来する。これは、細胞質
に局在した予備形成した輸送体の特別なプールから誘導される。

【００７３】 グルコース代謝を調節することにおけるその役割（および糖尿病を処置するこ
とにおけるその治療的用途）に加えて、インスリンは、脂質生合成を刺激し、脂
質分解を減少させ、そして細胞へのアミノ酸輸送を増大させる。インスリンはま
た、転写を調節し、多くのｍＲＮＡの細胞含有量を改変する。このことは、増殖
、ＤＮＡ合成および細胞複製を刺激し、インスリンがＩＧＦおよびリラキシンと
共通して保持している効果である。従って、結合体化したインスリンを使用して
、糖尿病を管理し得る。

【００７４】 （神経ペプチドＹ（配列番号３８３〜３８９）） ３６アミノ酸残基を有する
ペプチドである神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）は、末梢神経系および中枢神経系の両
方において最も豊富な神経ペプチドの１つである。神経ペプチドは、膵臓ポリペ
プチドファミリーのペプチドに属する。その関連分子であるペプチドＹＹ（ＰＹ
Ｙ）および膵臓ポリペプチド（ＰＰ）と同様に、ＮＰＹは、レセプターに結合す
るために、分子のフリーな末端を合わせる際に重要なヘアピン構成に曲げられる
。

【００７５】 ＮＰＹは、中枢神経系（ＣＮＳ）および末梢において広範な役割を発揮する。
そのＣＮＳ作用は、摂食およびエネルギー支出、ならびに心拍数、血圧、覚醒お
よび気分における変化に対する主要な効果を含む。末梢において、ＮＰＹは、血
管収縮および高血圧を引き起こし；これはまた、胃腸経路および尿生殖路におい
て見いだされ、胃腸および腎臓標的に対する作用によりその機能に影響を与える
。最近の研究において、視床下部ＮＰＹは、肥満の特徴を発生させることにおい
て基本的役割を果たすことが見出され、視床下部へ体脂肪をシグナル伝達する経
路および体脂肪含有量を調節することにおける主要なトランスデューサーである
。肥満遺伝子産物であるレプチンは、肥満（ｏｂ／ｏｂ）マウスにおいてＮＰＹ
遺伝子発現を減少させることが見いだされた。インスリンおよびコルチコステロ
イドはまた、インスリンがＮＰＹ発現を減少し、そしてコルチコステロイドがＮ
ＰＹ発現を増加して、視床下部ＮＰＹ合成の調節に関与する。結合体化したＮＰ
Ｙを使用して、肥満および肥満患者におけるＭＯＤＭ（ＩＩ型糖尿病）を処置し
得る。

【００７６】 （膵臓ポリペプチド（ＰＰ）（配列３９０〜３９６）） 膵臓ポリペプチド（
ＰＰ）は、膵臓島および外分泌膵臓内のＦ細胞により生成された３６アミノ酸の
ホルモンである。これは、調節ペプチドのＰＰ折り畳み（ＰＰ ｆｏｌｄ）ファ
ミリーのメンバーであり、糖原分解を増加させ、そして胃腸活動を調節する。従
って、結合体化した膵臓ポリペプチドを用いて、食物の吸収および代謝を改変し
得る。

【００７７】 （ペプチドＹＹ（配列番号３９７〜４００）） ＰＹＹは、３６アミノ酸長の
ペプチドであり、ブタ腸組織から最初に単離され、そして主に腸内分泌細胞に局
在する。これは、多くの生物学的活性を有し、これらの活性としては、以下が挙
げられる：消化系内の広範な活性ならびに腸電解質および液体分泌の強力な阻害
。

【００７８】 （ソマトスタチン（配列番号１７１〜２０１）） 膵臓のｄ細胞により分泌さ
れるソマトスタチンは、視床下部により分泌されるソマトスタチンと同一の１４
アミノ酸のペプチドである。神経組織においては、ソマトスタチンは、ＧＨ分泌
を阻害し、従って、全身的な効果を有する。膵臓においては、ソマトスタチンは
、他の膵臓ホルモンのパラクリンインヒビターとして作用し、従って、全身的な
効果もまた有する。ソマトスタチン分泌は、血糖レベルに主に応答し、血糖レベ
ルが上昇するにつれて増加し、従って、グルカゴン分泌のダウンレギュレートを
導くと推測される。次いで、結合体化したソマトスタチンを使用して、糖尿病の
管理を補助し得る。

【００７９】 （Ｆ．消化ホルモン） （コレシストキニン（ＣＣＫ）および関連ペプチド（配列番号４０１〜４１６
）） ＣＣＫは、もともとはブタ小腸から単離された３３アミノ酸のポリペプチ
ドである。これは、胆嚢収縮および胆汁流を刺激し、そして膵臓からの消化酵素
の分泌を増加させる。これは複数の形態で存在し、この形態としては、ＣＣＫ−
４およびＣＣＫ−８が挙げられ、オクタペプチドが、最も大きな活性を示す優勢
な分子種を示す。これは、ＣＣＫ／ガストリンペプチドファミリーに属し、そし
て中枢的には神経系、および末梢的には胃腸系に分布する。これは多くの生物学
的役割を有し、この役割としては、以下が挙げられる：膵臓分泌の刺激、胆嚢収
縮、およびＧＩ経路の腸流動性（ｍｏｂｉｌｉｔｙ）、ならびに満腹および疼痛
刺激のあり得る媒介。結合体化したＣＣＫは、胆嚢の診断的研究または慢性胆嚢
炎において使用され得る。

【００８０】 （ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）（配列番号４１７〜４２９）） ＧＲＰ
は、もともとはブタ非洞胃組織から単離された２７アミノ酸のペプチドであり、
そしてボンベシン増殖と名付けられたカエル皮膚ペプチドのホモログである。こ
れは、脳、肺および胃腸管を含む組織において、中枢または末梢の両方に広範囲
分布している。これは、種々の細胞の生理学的プロセスを調節する。これらのプ
ロセスとしては、分泌、平滑筋収縮、神経伝達および細胞増殖が挙げられる。結
合体化したＧＲＰは、麻痺性イレウスまたは年配の者における便秘の処置におい
て使用され得る。

【００８１】 ガストリンおよび関連するペプチド（配列番号４１７〜４２９）−ガストリン
は、胃の幽門洞によって産生される、酸およびペプシンの分泌を刺激する、１７
アミノ酸のポリペプチドである。ガストリンはまた、膵臓分泌を刺激する。複数
の活性な産物はガストリン前駆体から生成され、そしてガストリン生合成には複
数の制御点が存在する。生合成前駆体および中間体（プロガストリンおよびＧｌ
ｙ−ガストリン）は、推定の増殖因子である；それらの産物であるアミド化ガス
トリンは、上皮細胞増殖、酸産生性壁細胞およびヒスタミン分泌腸クロム親和様
（ＥＣＬ）細胞の分化、ならびにＥＣＬ細胞におけるヒスタミンの合成および貯
蔵に関連する遺伝子の発現、ならびに急性刺激酸分泌を調節する。ガストリンは
また、上皮増殖因子（ＥＧＦ）ファミリーのメンバーの産生を刺激し、このこと
は次いで、壁細胞機能を阻害するが表面上皮細胞の増殖を刺激する。血漿ガスト
リン濃度は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉを有する被験体において
上昇し、この被験体は、十二指腸潰瘍疾患および胃癌の上昇した危険性を有する
ことが公知である。それゆえ、治療薬剤としてのガストリンまたはガストリンア
ンタゴニストの使用は、主な上部胃腸管疾患を処置するために寄与し得る。

【００８２】 ガストリン阻害ペプチド（配列番号４１７〜４２９）−ガストリン阻害ペプチ
ドは、ガストリンの分泌を阻害する４３アミノ酸のポリペプチドである。結合体
化されたＧＩＰを用いて、重篤な消化性潰瘍疾患を処置し得る。

【００８３】 モチリン（配列番号４３０〜４３３）−モチリンは、胃腸の筋肉を制御する、
２２アミノ酸のポリペプチドである。モチリン産生細胞は、十二指腸、上部空腸
および結腸直腸腺癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｉｎｏｍａ）な
らびに中腸類癌腫に分布する。モチリンは、腸の運動性を刺激する。

【００８４】 セクレチン（配列番号４３４〜４４１）−セクレチンは、４．５未満のｐＨ値
で十二指腸から分泌され、膵臓腺房細胞を刺激してバイカーボネートおよびＨ₂
Ｏを放出させる、２７アミノ酸のポリペプチドである。セクレチンは、神経ペプ
チド群における神経伝達物質（化学メッセンジャー）である。セレクチンは、消
化を制御するホルモンのうちの１つである（ガストリンおよびコレシストキニン
は他方のホルモンである）。セレクチンは、２７アミノ酸から構成されるポリペ
プチドであり、そして胃が空な場合に消化器系における細胞によって分泌される
。セクレチンは、腸の酸性度を中和するバイカーボネートが豊富である消化液を
膵臓が出すこと、ペプシン（タンパク質の消化を助ける酵素）を胃が産生するこ
と、および胆汁を肝臓が産生することを刺激する。

【００８５】 セクレチンは、自閉を処置する際に有用であり得る。１つの研究では、自閉の
範囲の障害を有する小児は、上部胃腸の内視鏡検査およびセクレチンの静脈内投
与を受けて、膵臓胆汁分泌が刺激された。３人全員が、非自閉患者と比較した場
合、膵臓胆汁分泌応答の増加を有した（１〜２ｍＬ／分に対して７．５〜１０ｍ
Ｌ／分）。セクレチン注入の５週間以内に、改善されたアイコンタクト、警戒お
よび表現的言語の拡大によって現れるその挙動における劇的な改善が観察された
ように、小児の胃腸の症状の有意な改善が観察された。これらの臨床的観察は、
自閉挙動を有する患者における胃腸機能と脳機能との間の関連を示唆する。

【００８６】 血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）および関連するペプチド（配列番号４４
２〜４６４）−ＶＩＰは、視床下部およびＧＩ管によって産生される、２８残基
のポリペプチドである。ＶＩＰは、ＧＩを弛緩させ、酸およびペプシンの分泌を
阻害し、末梢自律神経系において神経伝達物質として作用し、そして膵臓および
腸からのＨ₂Ｏおよび電解質の分泌を増加させる。ＶＩＰは、肺および腸におい
て元々発見された。そしてＶＩＰはまた、脳、肝臓、膵臓、平滑筋およびリンパ
球を含む組織において見出されている。ＶＩＰは、ＰＡＣＡＰ、ＰＨＩ、セクレ
チンおよびグルカゴンを含む、ペプチドのファミリーに構造的に関連している。
ＶＩＰは、血管拡張、電解質分泌、免疫機能の調節および神経伝達を含む、多岐
にわたる範囲の生物学的作用を有する。結合体化されたＶＩＰは、塩酸欠乏、虚
血性大腸炎および過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の処置において有用であり得る。

【００８７】 Ｇ．ナトリウム利尿ペプチド−ナトリウム利尿ペプチドホルモンファミリーに
は、血圧および流体のホメオスタシスの調節に関与する、３つのメンバー（心房
性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ、
脳ナトリウム利尿ペプチド）およびＣ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ））が
存在する。

【００８８】 心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）（配列番号４６５〜５０７）−ＡＮ
Ｐは、ジスルフィド結合を含む、２８アミノ酸ペプチドのホルモンである。ＡＮ
Ｐは、ナトリウム利尿効果、利尿効果および血管緊張低下効果を発揮し、そして
身体の血液容量および血圧のホメオスタシスにおいて重要な役割を果たす。Ｓｍ
ｉｔｈ，Ｆ．Ｇ．ら、Ｊ．Ｄｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２，５５（１９８９）を
参照のこと。ＡＮＰ放出を制御する機構は、猛烈な調査の対象であり、そして現
在かなり良く理解されている。ＡＮＰ分泌の主な決定要因は、筋細胞の伸長であ
る。心臓からのＢＮＰ放出を調節する因子についてはずっとわずかにしか公知で
ないが、筋細胞伸長もまた、心房および心室の両方からのＢＮＰ放出を刺激する
ことが報告されている。しかし、壁の伸長が直接作用するのか、またはエンドセ
リン−１、一酸化窒素もしくはアンギオテンシンＩＩのような、拡張に応じて遊
離された因子を介して作用するかは、証明されていない。近年の研究は、エンド
セリンのＡ型レセプターを刺激することによって、エンドセリンが、理性ある動
物における心房性筋細胞からの急性容量負荷誘導性ＡＮＰ分泌のメディエーター
として重要な生理学的役割を果たすことを示す。実際、直接伸長ではなく、心房
性壁の伸長に応じて遊離された内因性パラ分泌因子／自己分泌因子は、エンドセ
リンＡ／Ｂ型およびアンギオテンシンＩＩレセプターの組み合わされた阻害の間
のＡＮＰ分泌のほぼ完全な遮断によって証明されるように、容量負荷に応じたＡ
ＮＰ分泌の活性化を担うようである。さらに、特定の実験条件下では、アンギオ
テンシンＩＩおよび一酸化窒素はまた、伸長活性化ＡＮＰ分泌に対して有意な調
節効果を発揮し得る。エンドセリン−１、アンギオテンシンＩＩおよび一酸化窒
素が伸長活性化ＡＮＰ放出を相乗的に調節する分子機構は、未だに不明である。
１９９７年１１月１２日に発行された要約第７５巻８７６−８８５頁、Ｊｏｕｒ
ｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。結合体化ＡＮＰは、悪
性高血圧または重篤な高血圧および腎不全の管理において有用である。

【００８９】 脳ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）（配列番号５０７〜５１６）−脳ナトリ
ウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）は、ナトリウム利尿ペプチドファミリーの１メンバ
ーであり、心室から産生および放出される。ＢＮＰは、Ａ型グアニル酸シクラー
ゼ共役レセプターを通して、体液容量、血圧および血管の緊張を調節する。心房
性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）のようなＢＮＰは、電解質−流体ホメオス
タシスにおいて役割を果たす。結合体化されたＢＮＰは、心不全の管理において
有用であり得る。

【００９０】 Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）（配列番号５１７〜５２４）−Ｃ型ナ
トリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）は、ナトリウム利尿ペプチドファミリーの第３
のメンバーであり、血管内皮細胞（ＥＣ）において産生され、そして内皮由来弛
緩ペプチドとして作用する。心房性ナトリウム利尿ペプチドおよび脳ナトリウム
利尿ペプチドは、循環性ホルモンとして心血管機能および内分泌機能の調節に関
与することが周知であるが、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）の役割は未
知のままである。

【００９１】 ＣＮＰは、中枢神経系および血管内皮細胞に主に見出され、一方、ＡＮＰおよ
びＢＮＰは心臓ホルモンである。ＡＮＰは正常な成体心臓の心房において主に合
成され、一方、ＢＮＰは心房および心室の両方によって産生される。

【００９２】 Ｈ．タキキニン（配列番号５２５〜６２７）−ニューロキニンＡ、Ｂおよびサ
ブスタンスＰを含む、完全な生物学的活性に必要とされる共通のＣ末端配列（Ｆ
−Ｘ−ＧＬＭ−ＮＨ₂）を共有する、ニューロキニンＡおよびサブスタンスＰを
含むファミリーのペプチド。

【００９３】 ニューロキニンＡ−ニューロキニンＡは、サブスタンスＫとして以前に公知の
デカペプチドである。ニューロキニンＡは、サブスタンスＰおよびニューロキニ
ンＢを含む、タキキニンファミリーの神経ペプチドのメンバーである。ニューロ
キニンＡは、平滑筋の収縮、痛みの伝達、気管支収縮、血管拡張および免疫系の
調節に関連する種々の活性を示す。

【００９４】 ニューロメジン−ニューロメジンは、平滑筋刺激ペプチドであり、通常４つの
群に分けられる：ボンベシン様、カシニン様、ニューロテンシン様およびニュー
ロメジンＵ。これらの神経ペプチドおよびそれらのレセプターは、ＨＰＡ下垂体
軸（ｈｙｐｏｐｈｙｓｅａｌ ｐｉｔｕｉｔａｒｙ ａｘｉｓ）の全構成要素に
局在し、唯一の例外はニューロキニンＢであるようであり、ニューロキニンＢは
、腺下垂体に検出されない。ニューロメジンは、多種多様の効果をＨＰＡ軸に対
して発揮し、そして副腎に対するそれらの作用は、副腎皮質の増殖、構造および
機能の調節におけるそれらの関与を示唆する。ニューロメジンは、直接的効果お
よび間接的効果の両方を副腎皮質に対して発揮し得る。直接的効果は、単離また
は培養された副腎皮質細胞によるミネラルコルチコイド治療用ペプチドおよびグ
ルココルチコイド治療用ペプチドの刺激、ならびに細胞内［Ｃａ２＋］の動員に
よって証明される。一方、間接的効果は、ＡＣＴＨ、アルギニン−バソプレッシ
ン、アンギオテンシンＩＩ、カテコールアミンによって、または髄質起源の他の
調節物質によって媒介され得る。

【００９５】 サブスタンスＰおよび関連するペプチド−サブスタンスＰは、脳および腸から
最初に単離された１１アミノ酸ペプチドである。サブスタンスＰは、脊髄におけ
る痛みの伝達に関与する神経調節物質として提唱されている。サブスタンスＰは
また、平滑筋の収縮、血圧の低下、分泌組織の刺激および肥満細胞からのヒスタ
ミンの放出に影響を与える。

【００９６】 （Ｉ．レニン関連ペプチド） アンギオテンシン（配列番号６２８〜６７７）−アンギオテンシンは、腎臓酵
素レニンによるａ２−グロビンの酵素的切断に由来する１０アミノ酸ペプチドで
ある。次いで、Ｃ末端の２アミノ酸は遊離されて、アンギオテンシンＩを生じ、
これは、副腎細胞からのアルドステロンの刺激された合成および放出を通して本
態性高血圧を担う。これは、血圧、血漿容量、ニューロンの機能的口渇、および
水取り込みを調節する、多機能性ホルモンである。

【００９７】 アンギオテンシンＩＩは、アンギオテンシン変換酵素によるアンギオテンシン
Ｉに由来するオクタペプチドであり、そして心臓、腎臓および肝臓のような器官
において中心および周縁部の両方に広範囲に分布する。アンギオテンシンＩＶは
、アンギオテンシンＩまたはアンギオテンシンＩＩのいずれかからタンパク質分
解性切断によって代謝的に形成される、アンギオテンシンＩＩの末端のヘキサペ
プチドフラグメントである。アンギオテンシンＩＶは、血管の制御、心臓生長、
腎臓血流および記憶機能において役割を果たす。

【００９８】 アンギオテンシンＩＩは、血管平滑筋緊張、血圧、自由水取り込みおよびナト
リウム貯留を調節する重要なペプチドホルモンである。アンギオテンシンＩＩは
、血管痙攣性緊張の増加、ナトリウム貯留の増加および自由水取り込みの増加を
刺激することによって、血管内容量の損失を保証する血管ホメオスタシスを制御
する。

【００９９】 レニンの基質およびインヒビター（配列番号６７８〜６８４）−レニンは、非
常に特異的なアスパラギン酸プロテアーゼであり、これは、顆粒状上皮細胞と呼
ばれる、腎臓の脈管構造における分化した平滑筋細胞によって合成および放出さ
れる。レニンは、その基質であるアンギオテンシノーゲンに特異的であり、レニ
ンは、アンギオテンシノーゲンをＬｅｕ¹⁰−Ｖａｌ¹¹結合で特異的に切断して、
デカペプチドであるアンギオテンシンＩ（ＡＩ）を形成する。レニン−アンギオ
テンシン系は、脊椎動物全体の流体および無機質のバランスの制御に関与する。
レニンは、哺乳動物、トリ、爬虫類、両生類、硬骨魚、軟骨魚および無顎類（ａ
ｇｎａｔｈａｎ）に見出され得る。特異的レニンインヒビターはまた、例えば、
高血圧および鬱血性心不全の処置のための治療適用について設計され得る（Ｂｌ
ｕｎｄｅｌｌら、１９８７）。

【０１００】 Ｊ．エンドセリンおよび関連するペプチド（配列番号６８５〜７４４）−エン
ドセリンペプチドファミリーは、２１アミノ酸のアイソフォームであるエンドセ
リン−１、エンドセリン−２、エンドセリン−３、サラホトキシン（蛇毒）およ
びサソリ毒素からなる。

【０１０１】 エンドセリン（ＥＴ）および大きなエンドセリン−エンドセリンは、広範な種
々の器官系における内皮細胞に見出される。エンドセリンのレベルおよび合成の
変化に関連した病理および生理学的プロセスの例としては、以下が挙げられる：
アテローム性動脈硬化症および高血圧、冠状動脈血管痙攣、急性腎不全、細胞内
Ｃａ２⁺レベルの変化、ならびにレニン−アンギオテンシン系に対する効果。エ
ンドセリンは、アンギオテンシンＩＩ、バソプレッシンおよびサイトカイン（例
えば、ＴＧＦ−βｍ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−β−）レベルのバリエーション、なら
びに血流の増加を含む他の生理学的事象に応じて放出される。

【０１０２】 エンドセリンファミリーのペプチドは、内皮細胞上清から最初に単離された非
常に強力な内因性血管収縮剤からなる。これらは、血管収縮効果を動脈に対して
運ぶことによって器官に対する血流を調節する。エンドセリンは、大きなエンド
セリンに由来し、大きなエンドセリンは、独特の膜結合型メタロプロテアーゼで
あるエンドセリン変換酵素によって、２１アミノ酸の生物活性形態（ＥＴ−１、
ＥＴ−２およびＥＴ−３）へと切断される。

【０１０３】 ３つのアイソフォーム（ＥＴ−１、ＥＴ−２、ＥＴ−３）のうち、エンドセリ
ン−１は、主なアイソフォームであり、そして血管機能の調節に重要な役割を果
たす。内因性エンドセリンペプチドおよびそれらのレセプターは、血管、子宮、
膀胱および腸を含む、多くの平滑筋組織全体に異なって分布する。この広範な分
布および局在を通して、これらは、血管緊張を調節する際および有糸分裂誘発を
引き起こす際に生物学的機能を発揮する。ＥＴおよびそれらのレセプターサブタ
イプはまた、種々の内分泌器官に存在する。これは、プロラクチン、ゴナドトロ
ピンＧＨおよびＴＳＨの分泌のモジュレーターとして作用するようである。エン
ドセリンはまた、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化症、鬱血性心不全、腎不
全、全身性高血圧、肺性高血圧、大脳の血管痙攣における疾患マーカーまたは病
因因子であり得る。

【０１０４】 外から投与されたエンドセリン−１は、末梢抵抗および血圧を用量依存性様式
で上昇させることが実証されている。しかし、静脈内投与の最初の数分間の間に
、エンドセリンはまた、血管拡張化合物（例えば、一酸化窒素、プロスタサイク
リンおよび心房性ナトリウム利尿ペプチド）の放出におそらく起因して、末梢抵
抗および血圧を低下させる。

【０１０５】 ＥＴ（Ａ）レセプターアンタゴニスト−エンドセリンレセプターは、２つの型
として存在する：Ａ（ＥＴ−Ａ）およびＢ（ＥＴ−Ｂ１およびＥＴ−Ｂ２）。Ｅ
Ｔ−Ａレセプターは担い、一方、ＥＴ−Ｂ１およびＥＴ−Ｂ２はそれぞれ血管緊
張低下および血管収縮を媒介する。

【０１０６】 サラホトキシンペプチド−既に記載したように、エンドセリン（ＥＴ）ペプチ
ドは、Ｇタンパク質共役レセプターに結合する強力な増殖因子である。Ａｔｒａ
ｃｔａｓｐｉｓ ｅｎｇａｄｄｅｎｓｉｓから単離されたサラホトキシン（Ｓ６
）は、エンドセリンに対して非常に相同である。サラホトキシンペプチドは、顕
著な血管収縮活性を有し、そして蛇またはサソリに咬まれた後の虚血性四肢の損
失を担う。これらは、ショックおよび敗血症における血管収縮（ｖａｓｏｐｒｅ
ｓｓｉｖｅ）剤としてのペプチダーゼ安定化ペプチドとして治療的に用いられ得
る。

【０１０７】 Ｋ．オピオイドペプチド（配列番号７４５−９２７）−オピオイドは、鎮痛剤
として臨床的に用いられる大きなクラスの薬物であり、これは、植物由来および
合成のアルカロイドならびに哺乳動物の脳において内因的に見出されるペプチド
の両方を含む。植物由来アルカロイドは数千年にわたって公知であり、そして用
いられているが、内因性オピオイドペプチドは、１９７０年代半ばにようやく発
見された。

【０１０８】 オピオイドとしては、カソモルフィン（ｃａｓｏｍｏｒｐｈｉｎ）ペプチド、
デモルフィン（ｄｅｍｏｒｐｈｉｎ）、エンドルフィン、エンケファリン、デル
トロフィン、ジノルフィン、ならびにこれらのアナログおよび誘導体が挙げられ
る。

【０１０９】 カソモルフィンペプチド−カソモルフィンペプチドは、カゼイン（β−カソモ
ルフィン）に由来する新規なオピオイドペプチドである。βカソモルフィンは、
食物タンパク質（β−カゼイン）から生じた、さらに詳細にわたって研究された
オピオイドペプチドである。これらは、ウシβ−カゼインから元々単離された。
この同じ配列は、ヒツジおよびバッファローのβ−カゼインにおいて生じる。

【０１１０】 デモルフィン（ｄｅｒｍｏｒｐｈｉｎ）−デモルフィンは、Ｐｈｙｌｏｍｅｄ
ｕｓａ ｓａｕｖａｇｅｉのカエル皮膚から元々単離された、７アミノ酸ペプチ
ドである。デモルフィンは、μオピオイドレセプターに対して高親和性で結合す
るリガンドであり、そして痛覚脱失、内分泌調節、免疫調節、Ｋ⁺コンダクタン
スの増加および活動電位の阻害を含む、多くの生物学的役割を有する。

【０１１１】 ジノルフィン／新たなエンドルフィン前駆体関連ペプチド−ジノルフィンは、
中枢神経系において複数の形態で存在する内因性オピオイドのクラスである。ジ
ノルフィンは、前駆体プロジノルフィン（プロエンケファリンＢ）に由来する。
ジノルフィンＡ１−１７としても公知のジノルフィンは、配列Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−
Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ⁵−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ¹⁰−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ¹⁵−Ａｓｎ−Ｇｌｎ（配列番号１）を有す
る周知のオピオイドである。Ｄｙｎ Ａ１−１３（配列番号２）、Ｄｙｎ Ａ２
−１３（配列番号３）、Ｄｙｎ Ａ１−１２、Ｄｙｎ Ａ２−１２およびＤｙｎ
Ａ２−１７、ならびにアミドアナログ（例えば、Ｌｅｅらの米国特許第４，４
６２，９４１号に言及されるアミドアナログ）、Ｎ末端短縮化ジノルフィンアナ
ログ（例えば、Ｌｅｅらの国際特許出願ＷＯ ９６／０６６２６に記載されるＮ
末端短縮化ジノルフィンアナログ）ならびにｄｅｓ−Ｔｙｒまたはｄｅｓ−Ｔｙ
ｒ−Ｇｌｙのアナログ（例えば、またＬｅｅらの国際特許出願ＷＯ ９３／２５
２１７に開示されるアナログ）を含めて、ジノルフィンの多数の誘導体およびア
ナログが公知である。ジノルフィン（ｄｙｎｏｒｐｈｉ）は、非常に強力なオピ
オイドであり、そしてκレセプターに対する選択的親和性を示す。Ｇｏｌｄｓｔ
ｅｉｎ，Ａ．、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉ
ｏｎ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ８ｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ、Ｈｒｕｂｙ、Ｖ．Ｊ．およびＲｉｃｈ、
Ｄ．Ｈ．編、４０９（１９８３）を参照のこと。

【０１１２】 エンドルフィン−エンドルフィン（ｅｎｄｏｒｐｈｉ）は、前駆体タンパク質
リポトロピンに由来する。エンドルフィンは、いくつかの生物学的反応（例えば
、痛覚脱失、行動変化および成長ホルモン放出）を惹起することが見出されてい
る。Ａｋｉｌ，Ｈ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、７，２２３（１
９８４）を参照のこと。

【０１１３】 エンケファリン（ｅｎｋｅｐａｌｉｎ）および関連ペプチド−エンケファリン
およびエンドルフィンは、痛みのインパルスの伝達を阻害する神経ホルモンであ
る。中枢神経系および末梢神経系の両方におけるニューロンの活性は、それらの
放出部位から極めて離れた細胞に作用する多数の神経ホルモンによって影響を受
ける。神経ホルモンは、神経細胞がシナプスの神経伝達物質に応答する能力を改
変し得る。神経系に対して絶大な効果を有するいくつかの低分子ペプチド（例え
ば、エンケファリン（例えば、Ｍｅｔ−エンケファリンおよびＬｅｕ−エンケフ
ァリン）ならびにエンドルフィン（例えば、βエンドルフィン））が近年発見さ
れている。これらの３つのものは、それらの機能に必須である共通のテトラペプ
チド配列（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ）を含む。エンケファリンおよびエ
ンドルフィンは、天然の鎮痛剤またはアヘン剤として機能し、そして中枢神経系
における疼痛応答を減少させる。Ａｋｉｌ，Ｈ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒ
ｏｓｃｉ．、７、２２３（１９８４）もまた参照のこと。

【０１１４】 Ｌ．胸腺ペプチド（配列番号９２８〜９３４）−胸腺は、乳児および成体の両
方においてＴ細胞免疫の発達および調節を担うと考えられている。胸腺は、その
上皮細胞を通した、胸腺ペプチドと呼ばれる種々の非細胞性ホルモン様産物の分
泌を介してその調節機能を発揮するようである。

【０１１５】 胸腺ペプチドは、Ｔ細胞に対して多くの効果を有することが報告されている。
いくつかの研究は、胸腺ペプチドが未成熟な前駆体細胞の、その充分に能力のあ
るＴ細胞への発達を補助し得ることを報告した。胸腺ペプチドは、Ｔ細胞上での
種々のサイトカインおよびモノカインレセプターの発現を調節するようであり、
そして免疫系が抗原投与された場合にＩＬ−２、インターフェロンαおよびイン
ターフェロンγ（疾患と闘う物質）の分泌を誘導する。化学療法によって引き起
こされた免疫不全を有する小児における胸腺ホルモンの使用が、循環するＴ細胞
の増加、Ｔ細胞サブセットの正常化、および遅延型過敏反応の修復をもたらした
ことについての報告が存在する。

【０１１６】 チモポエチン−チモポエチンは、公知の胸腺ホルモンのうちで最大であり、そ
して４９アミノ酸からなる。

【０１１７】 サイミュリン−胸腺血清因子として以前に公知のサイミュリンは、化学的に特
徴付けられた胸腺ホルモンのうちの最小のものであり、そして９アミノ酸からな
る。サイミュリンは、免疫系Ｔ細胞の産生の刺激を担うホルモンである。

【０１１８】 サイモペンティン−サイモペンティンは、治療用ペプチド５またはＴｉｍｕｎ
ｏｘとしても公知の、小さな、合成された胸腺ペプチド薬物である。米国では、
サイモペンティンは、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓ
ｔｉｔｕｔｅによってＡＩＤＳ治療として開発されている。サイモペンティンは
、大部分の他の胸腺ペプチド薬物よりも詳細にわたって研究されている。少なく
とも１つの研究は、未処置のコントロール関係者と比較して、サイモペンティン
を１週間に３回受けた患者における、Ｔ細胞の有意な上昇およびわずかな臨床的
改善を主張した。１４の未処置のコントロール関係者と比較して、薬物を摂った
患者は、より大きな「免疫学的安定性」およびいくらかの臨床的改善を示した。

【０１１９】 チモシン−チモシンは、１５以上のタンパク質の混合物である。これらのタン
パク質のうちの１つは、２８アミノ酸からなるチモシンα−１である。チモシン
は、一次免疫欠損の処置のために、そしてインフルエンザワクチンについてのブ
ースターとして腎臓透析患者において治療用途を有する。チモシンはまた、進行
中の臨床試験において慢性Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎、ＨＩＶ感染ならびに特定の
形態の癌に対する活性について試験されている。

【０１２０】 胸腺体液因子（ＴＨＦ）−ＴＨＦは、抗ＨＩＶ処置として現在試験されている
胸腺ペプチドである。ＣＭＶ関連免疫抑制を有するラットにおける前臨床研究で
は、ＴＨＦは、Ｔ細胞の調節を通して免疫能力を回復した。さらに、ＴＨＦは、
ヘルペスの処置において治療用途を有し得、（少なくとも１つの研究において）
ウイルス感染の迅速な後退およびＴ細胞集団の増加を引き起こす。

【０１２１】 （Ｌ．他のペプチド） （アドレノメデュリンペプチド（ＡＭ）（配列番号９３５〜９４５）） アドレノメデュリンは、心臓血管機能に対して主要な効果を発揮する強力な血
管拡張ペプチドである。その全身投与は、迅速かつ深刻な血圧の低下および肺の
血流の増加を引き起こす。他のその作用は気管支拡張であり、飲酒行動（ｄｒｉ
ｎｋｉｎｇ ｂｅｈａｖｉｏｒ）のインヒビター、およびアンギオテンシン誘導
アルドステロン分泌のインヒビターである。Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂ
ｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２７０巻、４３号、２５３４４−
２５３４７頁、１９９５およびそこに引用されている参考文献を参照のこと。

【０１２２】 （アラトスタチンペプチド（配列番号９４６〜９４９）） アラトスタチンは、幼若ホルモンの産生を制御するために昆虫によって合成さ
れる６〜１８アミノ酸のペプチドである。幼若ホルモンは、次には、変態および
卵生成を含む機能を調節する。アラトスタチンファミリーの神経ペプチドは、幼
若ホルモン（これは、ゴキブリＤｉｐｌｏｐｔｅｒａ ｐｕｎｃｔａｔａにおい
て発生および生殖の局面を調節する）のインビトロ産生を阻害するが、これらは
、血液リンパ、腸におけるペプチダーゼによる不活化に感受性であり、そして内
部組織に結合する。

【０１２３】 （アミロイドβタンパク質フラグメント（Ａβフラグメント）（配列番号９５
０〜１０１０）） これらは、アルツハイマー病の脳における神経炎性斑中に細胞内的および細胞
外的に蓄積するアミロイド斑の主要な成分である。Ａβは、４．５ｋＤのタンパ
ク質であり、約４０〜４２アミノ酸長であり、これは、アミロイド前駆体タンパ
ク質（ＡＰＰ）のＣ末端に由来する。ＡＰＰは、膜貫通糖タンパク質であり、こ
れは、正常なプロセシング経路において、Ａβタンパク質内部で切断されて、Ａ
ＰＰの分泌型であるα−ｓＡＰＰを産生する。α−ａＡＰＰの形成は、Ａβの形
成を妨げる。Ａβは、ＡＰＰの異常なプロセシングによって蓄積し、その結果、
Ａβ産生の原因である酵素の活性を阻害する化合物が探索されることが提案され
てきた。例えば、Ｗａｇｎｅｒら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｒｅｐｏｒｔ（１９９４／
１９９５）、１０６−１０７頁；およびＳｅｌｋｏｅ（１９９３）ＴＩＮＳ １
６：４０３−４０９を参照のこと。特定の条件下で、Ａβペプチドは最初に凝集
し、次いで、アミロイド原線維に特徴的な折り畳まれたβシート構造として沈着
する。β−アミロイド（１−４２）型は、β−アミロイド（１−４０）よりも有
意に早い速度でかつ大きな程度で凝集する。

【０１２４】 （抗菌ペプチド（配列番号１０１１〜１０４７）） 抗菌ペプチドは、大部分の多細胞生物の先天性免疫系の鍵となる成分であり、
これは、１以上の微生物（例えば、細菌、真菌、原生動物、酵母、およびマイコ
バクテリア）に対して活性である。このようなペプチドの例としては、ディフェ
ンシン、セクロピン（ｃｅｃｒｏｐｉｎ）、ブフォリン（ｂｕｆｏｒｉｎ）、お
よびマガイニン（ｍａｇａｉｎｉｎ）が挙げられる。配列および分類の広い分岐
にも関わらず、大部分の抗菌ペプチドは、共通の作用メカニズム（すなわち、病
原体の膜透過化）を共有する。抗菌ペプチドは、２つの広いグループ：直鎖状お
よび環状に分類される。直鎖状抗菌ペプチドにおいて、２つのサブグループが存
在する：αヘリックス両親媒性コンホメーションを取る傾向のある直鎖状ペプチ
ド、および、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、またはＴｒｐのようなアミノ酸に富む異常な組成
の直鎖状ペプチド。環状グループは、すべてのシステイン含有ペプチドを含み、
そしてさらに、単一または複数のジスルフィド構造に対応する２つのサブグルー
プに分割され得る。

【０１２５】 大部分の抗菌ペプチドは、原形質膜の透過の増加を引き起こす。特定の膜タン
パク質の阻害、ストレスタンパク質の合成、ＤＮＡ合成の停止、ディフェンシン
による一本鎖ＤＮＡの切断、ブフォリンによるＤＮＡとの相互作用（合成の停止
を伴わない）、または過酸化水素の産生のような、他の機構の証拠もまた存在す
る。抗菌ペプチドはまた、真核生物細胞におけるアポトーシスまたは細菌標的に
おける自己分解のような、自己破壊的な機構を誘発することによって作用し得る
。抗菌ペプチドはまた、偽基質として働くことによってか、または基質の接近を
妨害する活性部位に強固に結合することによってのいずれかで、病原性生物によ
って産生される酵素のインヒビターとして作用することが知られている。

【０１２６】 抗菌ペプチドのレベルの増加は、いくつかの動物およびヒトの感染について（
例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ、またはＣｒｙ
ｐｔｏｐｏｒｉｄｉｕｍ感染におけるα−ディフェンシン）、そして水疱および
創傷液中において種々のペプチドが報告されている。炎症性状況または刺激はま
た、抗生物質ペプチドの誘導と関連する。

【０１２７】 枯渇したレベルの抗菌ペプチドは、いくつかの病理と関連する。従って、特異
的顆粒欠損症候群の患者は、α−ディフェンシンを完全に欠き、頻繁かつ重篤な
細菌感染に苦しむ。ＨＩＶ患者の唾液からの低レベルのヒスタチン（ｈｉｓｔａ
ｔｉｎ）は、口のカンジダ症および真菌感染の高い発生率と相関していた。おそ
らく、ヒトの病理における抗菌ペプチドの関連性の最も説得力のある例証は、気
道の再発性の細菌感染と関連する遺伝病である、嚢胞性線維症に由来する。この
疾患を引き起こす欠損した塩素チャネルは、肺胞液の塩分を増大させ、従って、
塩分に感受性であるβ−ディフェンシンの抗菌活性を損なう。Ａｎｄｒｅｕ Ｄ
．（編）（１９９８）「Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｐｔｉｄｅｓ」Ｂｉ
ｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）第４７巻、第６号、４
１３−４９１頁。Ａ．Ａｎｄｒｅｕ、Ｌ．Ｒｉｖａｓ（１９９８）Ａｎｉｍａｌ
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ，
Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｐｅｐ．Ｓｃｉ．）４７：４１５−４３３。

【０１２８】 （抗酸化ペプチド（配列番号１０４８〜１０５０）） 抗酸化剤は、組織に対する酸化的損傷を防ぐ薬剤である。哺乳動物細胞は、連
続して活性酸素種（例えば、スーパーオキシド、過酸化水素、ヒドロキシルラジ
カル、および一重項酸素）に曝される。これらの反応性酸素中間体は、好気性代
謝、薬物および他の生体異物の異化、紫外線およびＸ線照射、ならびに食細胞（
例えば、白血球）の呼吸性バーストに応答して、インビボで細胞によって生成さ
れて、侵入する細菌（例えば、創傷を通じて導入されたもの）を殺傷する。例え
ば、過酸化水素は、特に、ストレスを受けた細胞および損傷した細胞によって、
大部分の生きている生物の呼吸の間に産生される。

【０１２９】 抗酸化ペプチドの１つの例は、ナチュラルキラー増強因子Ｂ（ＮＫＥＦ−Ｂ）
であり、これは、最近発見された抗酸化剤の高度に保存されたファミリーに属す
る。ナチュラルキラー増強因子（ＮＫＥＦ）は、ＮＫ細胞傷害性を増加させるそ
の能力に基づいて、同定およびクローニングされた。２つの遺伝子（ＮＫＥＦ−
ＡおよびＮＫＥＦ−Ｂ）は、ＮＫＥＦタンパク質をコードし、そして示された配
列分析は、各々が高度に保存された抗酸化剤のファミリーに属することを示唆す
る。ＮＫＥＦ−Ｂの抗酸化剤としての役割は、過酸化水素による酸化的損傷に対
する、トランスフェクトされた細胞のその防御によって実証された。ＮＫＥＦ−
Ｂは、酸化促進剤（例えば、アルキルヒドロペルオキシドおよびＭｅＨｇ）に対
する抗酸化活性を有する。その抗酸化活性とともに、ＨＰによるＮＫＥＦ−Ｂの
誘導は、ＮＫＥＦ−Ｂが、種々の生体異物毒性薬剤に対する防御を提供する、重
要な酸化的ストレスタンパク質であることを示す。

【０１３０】 （アポトーシス関連ペプチド（配列番号１０５１〜１０７５） 動物細胞は、固有の細胞死のプログラムを介して自己破壊し得る（Ｓｔｅｌｌ
ｅｒ、１９９５）。アポトーシスは、特定の形態学的および生化学的特性によっ
て特徴付けられる、プログラムされた細胞死の一形態である（Ｗｙｌｌｉｅら、
１９８０）。形態学的に、アポトーシスは、死滅しつつある細胞の一連の構造変
化（原形質膜の小疱形成（すなわち、水膨れ）、細胞質および核の凝縮、ならび
に膜アポトーシス小体への細胞の断片化）によって特徴付けられる（Ｓｔｅｌｌ
ｅｒ、１９９５；Ｗｙｌｌｉｅら、１９８０）。

【０１３１】 生化学的には、アポトーシスは、クロマチンの分解によって特徴付けられ、こ
れは、最初には５０〜３００キロ塩基の大きなフラグメント、引き続いて２００
塩基のモノマーおよびマルチマーである、より小さなフラグメントになる（Ｏｂ
ｅｒｈａｍｍｅｒら、１９９３；Ｗｙｌｌｉｅ、１９８０）。アポトーシスの他
の生化学的な指標は、タンパク質クラステリン（ＴＲＰＭ−２またはＳＧＰ−２
としてもまた公知）（Ｐｅａｒｓｅら、１９９２）の誘導レベルまたは増加レベ
ル、および酵素ＩＩ型トランスグルタミナーゼ（この酵素は、アポトーシス小体
の外被にタンパク質を架橋させる）の活性化である（Ｆｅｓｕｓら、１９９１）
。アポトーシスは、組織および細胞型によって変化し得る、関連する形態学的プ
ロセスおよび生化学的プロセスの複雑な現象である（Ｚａｋｅｒｉら、１９９５
）。

【０１３２】 アポトーシスの遂行は、死滅しつつある細胞からの細胞成分の漏出を最小化す
る（アポトーシスは、細胞を退縮させる）。例えば、プロテアーゼは、隣接する
細胞を損傷させ得るか、または炎症性応答を刺激し得る。アポトーシスのこの基
本的な特徴は、アポトーシスをネクローシスから区別する。ネクローシスは、通
常、外傷から生じ、損傷した細胞を膨張および溶解させ、炎症性応答を刺激する
細胞質性の物質を放出する（Ｓｔｅｌｌｅｒ、１９９５；Ｗｙｌｌｉｅら、１９
８０）。

【０１３３】 （嚢細胞ペプチド（ＢＣＰ）（配列番号１０７６〜１０８０）） 海洋軟体動物Ａｐｌｙｓｉａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａの神経ペプチド作動性
嚢細胞は、動物の産卵行動に関与する。これらの神経分泌性細胞は、産卵ホルモ
ン（ＥＬＨ）前駆体タンパク質を合成し、複数の生物活性ペプチド（ＥＬＨを含
む）、いくつかの嚢細胞ペプチド（ＢＣＰ）、および酸性ペプチド（ＡＰ）を産
生する。海洋軟体動物Ａｐｌｙｓｉａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａの嚢細胞は、産
卵を開始する、十分に特徴付けられた神経内分泌細胞である。性的成熟の間、こ
れらの細胞（嚢細胞ニューロン）は、神経系刺激の期間の間に放出されるホルモ
ンを貯蔵する能力を発達させる。このホルモンは、産卵のプロセスに重要であり
、それゆえその動物が性的に成熟する前に放出されてはならない。α−嚢細胞ペ
プチドは、インビトロで嚢細胞活性を誘発し得る、構造的に関連するペプチドの
小さなファミリーに属する。

【０１３４】 （ボンベシン（配列番号１０８１〜１０９０）） ボンベシンは、共通のＣ末端配列Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｘ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｍｅ
ｔ−ＮＨ２およびＮ末端領域を共有するペプチドのファミリーに属する、生物活
性テトラデカペプチド神経ペプチドである。これは、内因性のガストリンの放出
による胃の傷害を予防する、脳の神経および腸において見出される調節的な役割
を有する。ボンベシンの哺乳動物ホモログは、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ
）である。

【０１３５】 （骨Ｇｌａタンパク質ペプチド（配列番号１０９１〜１０９７）） オステオカルシン（骨Ｇｌａタンパク質またはＢＧＰ）は、骨形成のプロセス
において、骨芽細胞によって産生および分泌される。コラーゲンと同様に、この
タンパク質は、骨マトリックスの成分である。血清オステオカルシンは、骨形成
速度が上昇した場合に上昇する。レベルは、骨成長が最も速い思春期の間におい
て高い。レベルは、しばしば、高い骨の代謝回転を有する疾患（例えば、上皮小
体機能亢進症および甲状腺機能亢進症）においてもまた高い。閉経後の骨粗しょ
う症において、オステオカルシンレベルは、ときおり増加し、このことは、二次
的な骨の迅速な骨吸収への代謝回転の増加を反映する。より高齢の被験体におい
て発症する、老人性の骨粗しょう症においては、オステオカルシンレベルが低い
ようであり、このことは、骨の代謝回転および骨形成の両方の速度が減少してい
ることを反映する。骨形成を増加させる処置レジメンはまた、血清オステオカル
シンレベルを上昇させる。

【０１３６】 （ＣＡＲＴペプチド（配列番号１０９８〜１１００）） コカインおよびアンフェタミン調節転写物ペプチド（ＣＡＲＴ）は、強力な食
欲抑制活性を有する、最近発見された視床下部性ペプチドである。ラットにおい
て、ＣＡＲＴ遺伝子は、１２９アミノ酸残基または１１６アミノ酸残基のいずれ
かのペプチドをコードするのに対して、ヒトにおいては短い型のみが存在する。
推定シグナル配列は、１０２残基または８９残基のプロホルモン中に生じる２７
アミノ酸残基である。ＣＡＲＴのＣ末端は、４８アミノ酸残基および３つのジス
ルフィド結合からなり、この分子の生物学的に活性な部分を構成すると考えられ
ている。

【０１３７】 中枢神経系において、ＣＡＲＴは、多くの視床下部の核において高度に発現さ
れ、それらのいくつかは、摂食行動の調節に関与する。ＣＡＲＴ ｍＲＮＡは、
レプチンによって調節されており、そして発現されたＣＡＲＴは、神経ペプチド
Ｙによって誘導される摂食応答を無効にさえする、摂食の強力なインヒビターで
ある。従って、推定ＣＡＲＴレセプターは、抗肥満薬物についての強力な治療標
的である。ＣＡＲＴ，ａ ｎｅｗ ａｎｏｒｅｃｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈ
ｉｍ Ｌ；Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｐ；Ｌａｒｓｅｎ ＰＪ；Ｗｕｌｆｆ ＢＳ
，Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、３０（１２）：１２８１
−４ １９９８ Ｄｅｃを参照のこと。

【０１３８】 （細胞接着ペプチド（配列番号１１０１）） 細胞接着ペプチドは、外部刺激に対する細胞応答に直接的に関与する。例えば
、炎症性応答の間に、白血球は、原形質区画から離れて、抗原性の傷害の点に移
動しなくてはならない。この移動事象の機構は、可溶性メディエーターと膜結合
細胞接着分子との間の複雑な相互作用である。可溶性細胞走化因子は、種々の常
在性の細胞によって損傷された組織中で産生され、原形質区画の外に化学的濃度
勾配を生じさせる。これらの因子の、白血球上のそれらのレセプターとの相互作
用は、走化因子の増加する濃度に向かっての白血球の方向付けられた移動をもた
らす。同時に、種々の接着ペプチドは、内皮組織上で最初の転がり（ｒｏｌｌｉ
ｎｇ）を媒介する白血球上でアップレギュレートされ、活性化された内皮組織上
の特定のリガンドに結合し、そして最終的に、内皮細胞間でのその組織への移動
をもたらす。事象のカスケードにおけるこの段階は、「細胞接着分子」と名付け
られた特定の細胞表面タンパク質の相互作用によって媒介される。この分子は、
例えば、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１、内皮白血球接着分子−１）、ＩＣＡＭ
−１（細胞間接着分子−１）、およびＶＣＡＭ−１（血管細胞接着分子−１）で
ある。

【０１３９】 （走化性ペプチド（配列番号１１０２〜１１１３）） 走化性ペプチドは、白血球（ｗｈｉｔｅ ｃｅｌｌ）、白血球（ｌｅｕｋｏｃ
ｙｔｅ）、およびマクロファージの、感染もしくは傷害の部位の組織への移動を
刺激するか、または代替的に、これらの同じ細胞の、これらの部位から離れる移
動を妨害するペプチドである。

【０１４０】 （補体インヒビター（配列番号１１１４〜１１２０）） 異種移植片（ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）に対する補体攻撃の阻害は、補
体インヒビターの使用によって達成され得る。移植された器官の拒絶は、極度に
迅速な超急性拒絶（ＨＡＲ）期およびより遅い細胞拒絶期の両方を含み得る。異
種移植片のＨＡＲは、あらかじめ形成された、ドナーの器官の内皮に結合する「
天然の」抗体により開始され、そして、この抗体は、ドナーの組織内皮に結合し
て、レシピエントの免疫系による補体攻撃を活性化する。補体の活性化は、走化
性、凝血促進性、炎症誘発性、接着性、および細胞溶解性の特性を有する、液相
タンパク質（Ｃ３ａ、Ｃ５ａ）および膜結合タンパク質（Ｃ３ｂおよびＣ５ｂ−
９、すなわち、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９）の生成をもたらす。補
体インヒビターは、このプロセスを阻害する。

【０１４１】 （コルチスタチンペプチド（配列番号１１２１〜１１２４）） コルチスタチン（ｃｏｒｔｉｓｔａｔｉｎ）は、そのｍＲＮＡが睡眠遮断の間
に蓄積し、明らかに、皮質興奮性に対するアセチルコリンの効果に拮抗すること
によって作用し、それによって、脳の徐波の同期化をもたらす。コルチスタチン
−１４（ＣＳＴ−１４）は、ソマトスタチン−１４（ＳＲＩＦ−１４）とその１
４残基のうちの１１を共有し、なおその睡眠の生理、歩行運動の行動、および海
馬の機能に対する効果は、ソマトスタチンの効果とは全く異なっている。

【０１４２】 （フィブロネクチンフラグメントおよびフィブリン関連ペプチド（配列番号１
１２５〜１１７４）） フィブロネクチンは、反復する相同なペプチド配列の３つの型のブロックから
構成される、大きな糖タンパク質である。相同なブロックのうちのいくつかは、
２つのほぼ同一のサブユニットアーム上に直鎖状のアレイに組織化される機能的
ドメインを形成する。各アームは、機能的ドメインに分けられ得、これらは、し
ばしば、その領域に結合する物質の１つによって呼ばれる（例えば、ヘパリン結
合フラグメント、フィブリン結合フラグメント、および細胞結合フラグメント）
。いくつかの細胞型において、フィブロネクチンの細胞結合ドメインのＡｒｇ−
Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）配列は、ｌｉｂ／ＩＩＩａと呼ばれる細胞表面糖タン
パク質と相互作用する。フィブロネクチンはまた、細胞外および基底膜の成分、
ウイルスのエンベロープ糖タンパク質、種々の細菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｉおよびｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉを含む）、ならびに寄生生物（例えば、Ｔｒ
ｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉおよびＬｅｉｓｈｍａｎｉａ種）に結合する。

【０１４３】 フィブロネクチンは、いくつかの接着機能（例えば、細胞−細胞接着、細胞−
基底膜接着、および凝塊安定化）を有する。さらに、フィブロネクチンは、胚形
成、神経再生、線維芽細胞移動、マクロファージ機能、ならびに、哺乳動物細胞
および細胞外マトリックスへの病原体（ウイルス、真菌、細菌、および原生動物
）の結合を促進する。従って、フィブロネクチンは、創傷治癒の最終段階を通し
ての感染の開始からの感染の病因に関与する。Ｐｒｏｃｔｏｒ，Ｒ．Ａ．、Ｒｅ
ｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．、９、３１７（１９８７）を参照のこと。

【０１４４】 （ＦＭＲＦおよび類似のペプチド（配列番号１１７５〜１１８７）） ＦＭＲＦは、ＦＭＲＦアミド遺伝子にコードされた神経ペプチドであり、共通
のＣ末端ＦＭＲＦアミドを有するが、異なるＮ末端伸長を有する。ＦＭＲＦアミ
ド関連ペプチド（ＦａＲＰ）は、動物界の至るところに存在し、そして神経機能
および胃腸機能の両方に影響を与える。生物は、共通のＣ末端構造を有するが異
なるＮ末端アミノ酸伸長を有する、多数のＦａＲＰをコードするいくつかの遺伝
子を有する。

【０１４５】 （ガラニンおよび関連するペプチド（配列番号１１８８〜１２０８）） ガラニンは、もともとブタの小腸から単離された２９〜３０アミノ酸のペプチ
ドである。これは、２つの生物学的に活性な形態で見出されている：ＧＡＬ（１
〜１９）および非アミド化形態のＧＡＬ（１〜３０）である。ガラニンは、多く
の生物学的役割を有し、それらとしては以下が挙げられる：視床下部における生
体アミンの放出の阻害、コリン作用性機能のシナプス前部およびシナプス後部の
阻害、胃腸のホメオスタシスの維持、ならびにインスリンおよびグルカゴンの分
泌の調節。

【０１４６】 （増殖因子および関連するペプチド（配列番号１２０９〜１２４０）） 増殖因子は、細胞分裂を調節するタンパク質のファミリーである。いくつかの
増殖因子は細胞型特異的であり、適切なレセプターを有する細胞のみの分裂を刺
激する。他の増殖因子は、その効果においてより一般的である。増殖因子の効果
と拮抗して、分裂を遅延または妨害する細胞外因子もまた、存在する（例えば、
トランスフォーミング増殖因子βおよび腫瘍壊死因子）。これらの細胞外シグナ
ルは、ホルモンのレセプターと非常に類似している細胞表面レセプターを通して
、そして類似の機構（細胞内第２メッセンジャーの産生、タンパク質リン酸化、
および究極的には、遺伝子発現の変更）によって作用する。

【０１４７】 （Ｇ治療用ペプチド結合タンパク質フラグメント（配列番号１２４１〜１２４
６）） Ｇ治療用ペプチド（Ｇｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ）結合調節タ
ンパク質（Ｇタンパク質）のファミリーのメンバーは、膜結合レセプターから細
胞内エフェクターにシグナルを伝達する。このファミリーには、Ｇ_sおよびＧ_iが
含まれ、これらは、それぞれ、アデニル酸シクラーゼの刺激および阻害の原因で
ある。トランスデューシン（Ｔ）は、網膜杆状体外部セグメントの円板膜に局在
し、光によるロドプシンの活性化を、サイクリックＧＭＰホスホジエステラーゼ
活性の増加に連関させる。もともとウシ脳において見出されたＧ_oは、このファ
ミリーの第４のメンバーである。

【０１４８】 精製されたＧタンパク質は、類似の物理学的特性を有する。これらは、αサブ
ユニット、βサブユニット、およびγサブユニットから構成されるヘテロダイマ
ーである。αサブユニットはＧ治療用ペプチドに結合し、そしてこれを加水分解
する。Ｓ．Ｍ．Ｍｕｍｂｙら、ＰＮＡＳ ８３，２６５（１９８６）およびＬｅ
ｈｎｉｎｇｅｒ ７６４頁を参照のこと。

【０１４９】 （グアニリンおよびウログアニリン（配列番号１２４７〜１２４９）） グアニリンおよびウログアニリンは、腸粘膜および尿から単離されたペプチド
であり、これらは、腸細胞中のサイクリックＧＭＰ産生を調節し、グアニル酸シ
クラーゼＣに結合してそれを活性化し、そして脊椎動物の多くの上皮中での塩お
よび水の輸送を制御し、いくつかの熱安定性細菌のエンテロトキシンの作用を模
倣する。腎臓においては、これらの両方が、十分に実証されているナトリウム排
泄増加性効果およびカリウム排泄増加性効果を有する。

【０１５０】 腸における塩素分泌は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣ−Ｃ）の活性化を介し
て、これらのホルモンによって調節される。両方のペプチドは、種々の組織およ
び器官（腎臓を含む）において発現される。単離された、灌流した腎臓およびイ
ンビボのこれらのホルモンは、ナトリウム排泄増加および利尿を誘導するが、し
かし、腎臓中のそれらの作用の局在および細胞機構は、なお未知である。

【０１５１】 （インヒビンペプチド（配列番号１２５０〜１２５５） インヒビンは、２つのサブユニット（αは１３４アミノ酸；βは、１１５〜１
１６アミノ酸）から構成される。その役割は、ＦＳＨ分泌の阻害である。２つの
インヒビンアイソフォーム（インヒビンＡおよびインヒビンＢ）は、配偶子成熟
の過程で性腺によって産生され、そして月経周期の間、異なる分泌パターンを有
する。インヒビンはまた、胎盤および胚膜によって産生され、そして妊娠の生理
学的適応に関与し得る。臨床的には、インヒビンは、閉経後の女性における感度
の高い腫瘍マーカーとして、または不妊の女性における卵巣の抑制（ｏｖａｒｉ
ａｎ ｒｅｓｅｒｖｅ）を評価するための有用なツールとして働き得；これらは
また、母性（ｍａｔｅｒｎｏ）胎児障害の診断において使用され、そして卵の成
熟を妨害し得るか、または排卵を阻害し得る。

【０１５２】 （インターロイキン（ＩＬ）およびインターロイキンレセプタータンパク質（
配列番号１２５６〜１２６３）） インターロイキンは、造血起源の細胞を標的とする増殖因子である。免疫応答
および炎症応答と関連する種々の生物学的活性は、インターロイキンに起因して
いる。これらの応答には、発熱、軟骨破壊、骨吸収、胸腺細胞増殖、Ｔリンパ球
およびＢリンパ球の活性化、肝実細胞からの急性期タンパク質合成の誘導、線維
芽細胞増殖、ならびに骨髄細胞の分化および増殖が挙げられる。

【０１５３】 （ラミニンフラグメント（配列番号１２６４〜１２８４）） ラミニン（基底膜の主要非コラーゲン糖タンパク質）は、インビトロで種々の
腫瘍細胞型の接着、拡散、および移動を促進することが示された。特に、実験室
において現在主要な研究は、インタクトなラミニン、ラミニンの精製されたタン
パク質分解フラグメント、およびラミニンの合成ペプチドを、この大きなタンパ
ク質における機能的に活性な部位を同定するために利用する。このような基底膜
の成分は、種々の細胞型についての増殖、発生および分化の重要なモジュレータ
ーである。結合体化ラミニンは、組織の炎症または線維症を予防するのに使用さ
れ得る。

【０１５４】 このカテゴリーはまた、ペプチドクリングル−５（すなわちＫ−５）を含む。
本明細書中で使用されるように、用語「クリングル５」とは、哺乳動物プラスミ
ノーゲン分子の５番目のクリングル領域によって規定される特定の三次元コンフ
ォメーションに寄与する３つのジスルフィド結合を有する哺乳動物のプラスミノ
ーゲンの領域をいう。１つのこのようなジスルフィド結合は、アミノ酸４６２位
および５４１位に位置するシステイン残基と連結し、第２の結合は、アミノ酸４
８３位および５２４位に位置するシステイン残基に連結し、そして第３の結合は
、アミノ酸５１２位および５３６位に位置するシステイン残基に連結する。用語
「クリングル５ペプチドペプチド」とは、哺乳動物プラスミノーゲンの対応する
ペプチドフラグメントに相同な実質的配列を有する、４アミノ酸と１０４アミノ
酸の間（両端を含む）の抗脈管形成活性を有するペプチドをいう。

【０１５５】 （レプチン（ｌｅｐｔｉｎ）フラグメントペプチド（配列番号１２８５〜１２
８８）） レプチン（肥満遺伝子のタンパク質産物）は、脂肪細胞によって分泌される。
レプチンは、ヒトにおける体重および代謝の調節に関与し、また、インシュリン
耐性症候群の病態生理学に関与し得、このインシュリン耐性症候群は、心臓血管
疾患の発生と関連する。

【０１５６】 （ロイコキニン（ｌｅｕｃｏｋｉｎｉｎ）（配列番号１２８９〜９８）） ロイコキニンは、腸運動性および細管流体分泌速度を刺激する、広範な昆虫ホ
ルモンのグループである。細管において、それらの主要な作用は、基底外側の膜
上のレセプターに結合することによって塩化物透過性を上昇させることである。

【０１５７】 （下垂体アデニレートシクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）（配列番
号１２９９〜１３１１） これは、３８アミノ酸ペプチドであり、これは最初にヒツジ視床下部から単離
され、これはまた、ＰＡＣＡＰ−２７と呼ばれる２７アミノ酸形態において生じ
る。ＰＡＣＡＰは、視床下部に局在化しており、他には、脳、気道および胃腸系
において局在化している。これは、神経伝達およびホルモン機能、エネルギー代
謝の調節の関与、およびニューロン保護作用活性を含む多くの生物学的作用を有
する。

【０１５８】 （パンクレアスタチン（配列番号１３１２〜１３２４）） パンクレアスタチンは、４９アミノ酸ペプチドであり、最初にブタ膵臓から単
離、精製および特徴付けされた。異なる組織におけるその生物学的活性は、分子
のＣ末端部分に割り当てられ得る。パンクレアスタチンは、プロホルモン前駆体
、クロモグラニンＡを有し、このクロモグラニンＡは、内分泌膵臓を含む神経内
分泌に存在する糖タンパク質である。

【０１５９】 （ポリペプチド（配列番号１３２５〜１３２６）） これらは、反復性の鎖である。２つの例を提供する：（ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌ
ｙ）１０^*２０Ｈ２０およびポリＬ−リジン塩酸塩。

【０１６０】 （シグナル伝達試薬（配列番号１３２７〜１３６７）） シグナル伝達は、細胞外シグナル（例えば、化学的、力学的、または電気的）
が増幅され、細胞性応答に変換されるプロセスである。多くの試薬が、このプロ
セスに含まれ、例えば、アチャチン−１（ａｃｈａｔｉｎ−１）、グリコーゲン
シンターゼ、オートカムチド２（ａｕｔｏｃａｍｔｉｄｅ２）、カルシニューリ
ン自己阻害ペプチド、カルモジュリン依存性プロテインキナーゼＩＩ、カルモジ
ュリン依存性プロテインキナーゼ基質、カルモジュリン依存性プロテインキナー
ゼ基質アナログ。ＣＳＫ−１７、Ｃｙｓ−Ｋｅｍｐｔｉｄｅ、オートカムチド２
、マランチド（ｍａｌａｎｔｉｄｅ）、メリチン、リン酸アクセプターペプチド
、プロテインキナーゼＣフラグメント、Ｐ３４ｃｄ２キナーゼフラグメント、Ｐ
６０ｃ−ｓｒｃ基質ＩＩ、プロテインキナーゼＡフラグメント、チロシンプロテ
インキナーゼ基質、シンチド２（ｓｙｎｔｉｄｅ２）、Ｓ６キナーゼ基質ペプチ
ド３２、チロシン特異性プロテインキナーゼインヒビター、およびそれらの誘導
体およびフラグメントが挙げられる。

【０１６１】 （トロンビンインヒビター（配列番号１３６８〜１３７７）） トロンビンは、凝固カスケードにおいて重要な調節酵素である；トロンビンは
、正のフィードバック調節因子と負のフィードバック調節因子との両方として多
元的な役割に役立つ。止血に対するその直接的な効果に加えて、トロンビンは、
動脈血栓症の病原を支持および増幅する様々な細胞型に対する直接的な効果を及
ぼす。この酵素は、血小板の強力な活性化因子であり、血小板を凝集させ、物質
（例えば、ＡＤＰ ＴＸＡ．ｓｕｂ．２ＮＥ）を放出し、これは、さらに、血栓
サイクルを増加させる。フィブリンメッシュ内の血小板は、白色血栓の主要なフ
レームワークを含む。トロンビンはまた、内皮細胞に直接的な効果を及ぼし、こ
れは、血管収縮物質の放出および接着分子のトランスロケーションを引き起こし
、これは、免疫細胞の接着の部位となる。さらに、この酵素は、平滑筋細胞の有
糸分裂誘発および線維芽細胞の増殖を引き起こす。この分析から、トロンビンイ
ンヒビターによるトロンビン活性の阻害が、血栓症と関連する増殖事象の減少に
向かった実行可能な治療アプローチを構成することが明らかである。

【０１６２】 （毒素（配列番号１３８７〜１４１５）） 毒素は、本発明を用いて、標的癌細胞、レセプター、ウイルス、または血液細
胞に結合体化され得る。一旦毒素が標的細胞に結合すると、その毒素は内部移行
し、細胞毒性を引き起こし、そして結果的に細胞死を引き起こす。毒素は、癌治
療剤として広く使用されている。

【０１６３】 毒素の分類の一つの例は、肥満細胞脱顆粒ペプチド、ハチ毒から単離された２
つのジスルフィド架橋を有するカチオン性２２−アミノ酸残基ペプチドであり、
これは、肥満細胞脱顆粒を引き起こし、低濃度でヒスタミン放出を引き起こし、
高濃度で抗炎症活性を有する。この肥満細胞脱顆粒ペプチドは、強力な抗炎症性
があり、炎症を減少する際、ヒドロコルチゾンより１００倍より高く効果的であ
る。これらの独特の免疫学的性質のため、ＭＣＤペプチドは、肥満細胞、好塩基
性細胞、および白血球のような炎症性細胞の分泌メカニズムを研究する際有用な
ツールとして役立ち得、治療的可能性を有する化合物の設計に導く。肥満細胞顆
粒化ペプチドの例は、マストパランであり、これはスズメバチの毒液から生じる
。マストパランは、肥満細胞を０．５μｇ／ｍｌの濃度で脱顆粒し、同じ濃度で
細胞からヒスタミンを放出させる。ＩＹ．Ｈｉｒａｉら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ
．Ｂｕｌｌ．２７，１９４２（１９７９）を参照のこと。

【０１６４】 このような毒素の他の例は、オメガ−アガトキシンＴＫ、アゲレニン（ａｇｅ
ｌｅｎｉｎ）、アパミン、カルシクジン（ｃａｌｃｉｃｕｄｉｎｅ）、カルシセ
プチン（ｃａｌｃｉｓｅｐｔｉｎｅ）、チャーブドトキシン（ｃｈａｒｂｄｏｔ
ｏｘｉｎｅ）、クロロトキシン（ｃｈｏｒｏｔｏｘｉｎｅ）、コノトキシン、内
毒素インヒビター、ゲグラフィートキシン（ｇｅｇｒａｐｈｕｔｏｘｉｎｅ）、
イベリオトキシン（ｉｂｅｒｉｏｔｏｘｉｎ）、カリオトキシン（ｋａｌｉｏｔ
ｏｘｉｎ）、肥満細胞顆粒化ペプチド、マーガトキシン（ｍａｒｇａｔｏｘｉｎ
）、神経毒ＮＳＴＸ−３、ＰＬＴＸ−ＩＩ、サイラトキシン（ｓｃｙｌｌａｔｏ
ｘｉｎｅ）、スチコダクチラトキシン（ｓｔｉｃｈｏｄａｃｔｙｌａ ｔｏｘｉ
ｎ）、ならびにこれらの誘導体およびフラグメントが挙げられる。

【０１６５】 （トリプシンインヒビター（配列番号１４１６〜１４１８）） トリプシンインヒビターは、トリプシン、ならびに他のセリンプロテアーゼの
インヒビターとして機能する。肺炎症、膵炎、心筋梗塞、脳血管虚血の処置に有
用である。

【０１６６】 （ウイルス関連ペプチド（配列番号１４１９〜１５２９）） ウイルス関連ペプチドは、ウイルス関連タンパク質、例えば、ウイルスレセプ
イター、ウイルスインヒビター、およびエンベロープタンパク質である。例とし
ては、以下が挙げられるが、これらには限定されない：ヒト免疫不全ウイルス（
ＨＩＶ）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ヒトパラインフルエンザウイルス（ＨＰＶ
）、麻疹ウイルス（ＭｅＶ）、およびシミアン免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）のペ
プチドインヒビター、蛍光発生的ヒトＣＭＶプロテアーゼ基質、ＨＣＶコアタン
パク質、ＨＣＶ ＮＳ４Ａタンパク質、Ｂ型肝炎ウイルスレセプター結合フラグ
メント、Ｂ型肝炎ウイルスＰｒｅ−Ｓ領域、ヘルペスウイルスインヒビター２、
ＨＩＶエンベロープタンパク質フラグメント、ＨＩＶｇａｇフラグメント、ＨＩ
Ｖ基質、ＨＩＶ−１阻害ペプチド、ペプチドＴ、Ｔ２１、Ｖ３デカペプチド、ウ
イルス複製インヒビターペプチド、ならびにそれらのフラグメントおよび誘導体
。

【０１６７】 これらのペプチドは、治療的に投与され得る。例えば、ペプチドＴは、ＨＩＶ
−１ｇｐ１２０のＶ２領域からの８アミノ酸の鎖である。これらのアミノ酸は、
ＨＩＶの外側エンベロープの部分と類似している。これらのアミノ酸は、ＨＩＶ
関連の神経学的症状および全身症状の治療法として研究されており、ペプチドＴ
は、発熱、寝汗、体重減少、および疲労のような症状を軽減し得る。これはまた
、乾癬損傷を散らすことが示されている。

【０１６８】 （種々雑多なペプチド（配列番号１５２９〜１６１７）） アジュバントペプチドアナログ、α接合因子、抗不整脈ペプチド、食欲不振誘
発性ペプチド、α−１抗トリプシン、ウシ松果体抗生殖ペプチド、バルシン（ｂ
ｕｒｓｉｎ）、Ｃ３ペプチドＰ１６、カドヘリンペプチド、クロモグラニンＡフ
ラグメント、避妊テトラペプチド、コナントキンＧ（ｃｏｎａｎｔｏｋｉｎ Ｇ
）、コナントキンＴ、甲殻類心臓作用ペプチド、Ｃ−テロペプチド、チトクロム
ｂ５８８ペプチド、デコルシン（ｄｅｃｏｒｃｉｎ）、デリシャスペプチド、δ
睡眠誘導ペプチド、ジアゼパム結合インヒビターフラグメント、一酸化窒素シン
ターゼ遮断ペプチド、ＯＶＡペプチド、血小板カルパインインヒビター（Ｐ１）
、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター１、リギン（ｒｉｇｉｎ）、精神分
裂病関連ペプチド、ナトリウムカリウムＡ治療ペプチダーゼインヒビター−１（
ｓｏｄｉｕｍ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄ
ｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１）、スペラクト、精子活性化ペプチド、シス
テミン（ｓｙｓｔｅｍｉｎ）、トロンビンレセプターアゴニスト（３つのペプチ
ド）、ツフシン、アジポキニンホルモン、尿毒症ペンタペプチド、凍結防止ペプ
チド、腫瘍壊死因子、ヒル［Ｄｅｓ Ａｓｐ１０］Ｄｅｃｏｒｓｉｎ、Ｌ−オル
ニチルタウリン（Ｏｒｎｉｔｈｙｌｔａｕｒｉｎｅ）塩酸塩、ｐ−アミノフェニ
ルアセチルツフシン、

【０１６９】

【化１】 ウニ精子活性化ペプチド、ＳＨＵ−９１１９ ＭＣ３−ＲおよびＭＣ４Ｒアンタ
ゴニスト、グラスピモド（ｇｌａｓｐｉｍｏｄ）（免疫刺激剤、細菌感染、真菌
感染、免疫不全、免疫障害、白血球減少症に対して有用）、ＨＰ−２２８（メラ
ノコルチン、化学療法誘導嘔吐、毒性、疼痛、真性糖尿病、炎症、慢性関節リウ
マチ、肥満に対して有用）、α−２−プラスミンインヒビター（プラスミンイン
ヒビター）、ＡＰＣ腫瘍抑制因子（腫瘍抑制因子、新生物に対して有用）、初期
妊娠因子（免疫抑制因子）、エンドゼピン（ｅｎｄｏｚｅｐｉｎｅ）ジアゼパム
結合インヒビター（レセプターペプチド）、γインターフェロン(白血病に対し
て有用）、腺カリクレインｎ−１（免疫刺激剤）、胎盤リボヌクレアーゼインヒ
ビター、サルコレシン（ｓａｒｃｏｌｅｃｉｎ）結合タンパク質、界面活性タン
パク質Ｄ、ウィルムス腫瘍抑制因子、ウィルムス腫瘍抑制因子、ＧＡＢＡＢ １
ｂレセプターペプチド、プリオン関連ペプチド（ｉＰｒＰ１３）、コリン結合タ
ンパク質フラグメント（細菌関連ペプチド）、テロメラーゼインヒビター、カル
ジオスタチン（ｃａｒｄｉｏｓｔａｔｉｎ）ペプチド、エンドスタチン（ｅｎｄ
ｏｓｔａｔｉｎ）誘導ペプチド（新脈管形成インヒビター）、プリオン阻害ペプ
チド、Ｎ−メチルＤ−アスパラギン酸レセプターアンタゴニスト、Ｃ−ペプチド
アナログ（糖尿病合併症に対して有用）が挙げられる。

【０１７０】 （２．修飾治療用ペプチド） 本発明は、修飾治療用ペプチドおよびそれらの誘導体に関する。本発明の修飾
治療用ペプチドは、共有結合を形成するために、血液成分の利用可能な反応性官
能基と反応し得る反応性基を含む。本発明はまた、このような修飾物、血液成分
とのこのような組み合わせおよびそれらの使用方法に関する。これらの方法は、
修飾治療用ペプチドの効果的な治療インビボ半減期を延ばす工程を含む。

【０１７１】 タンパク質上の官能性と共有結合を形成するために、反応性基として広範な種
々の活性なカルボキシル基、特にエステルを使用し得、ここで、ヒドロキシル部
分は、治療用ペプチドを修飾するために必要とされるレベルで生理学的に受容可
能である。多くの異なるヒドロキシル基がこれらの連結剤において使用され得る
が、最も通常のものは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、およびＮ−
ヒドロキシ−スルホスクシンイミド（ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ）である。

【０１７２】 第一級アミンは、以下のスキーム１Ａに図示されるようにＮＨＳエステルに対
する重要な標的である。タンパク質のＮ末端に存在するアクセス可能なα−アミ
ンが、ＮＨＳエステルと反応する。しかし、タンパク質のα−アミノ基は、ＮＨ
Ｓカップリングについて望ましくないかまたは利用可能でないかもしれない。５
個のアミノ酸がその側鎖に窒素を有するが、リジンのε−アミンのみが、有意に
ＮＨＳエステルと反応する。アミド結合は、ＮＨＳエステルが、結合反応におい
て、以下のスキーム１Ａに示されるように、第一級アミンと反応し、Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミドを放出する場合に形成される。

【０１７３】

【化２】 本発明の好ましい実施形態において、タンパク質の官能基はチオール基であり
、反応性基は、γ−マレイミド−ブチルアミド（ＧＭＢＡ）またはＭＰＡのよう
なマレイミド含有基である。マレイミド基は、反応混合物のｐＨが以下のスキー
ム１Ｂに示されるように６．５と７．４の間で維持される場合、ペプチドのスル
フヒドリル基について最も選択的である。ｐＨ７．０において、マレイミド基と
スルフヒドリルとの反応速度は、アミンとの反応より１０００倍速い。マレイミ
ド基とスルフヒドリルとの間の安定なチオエーテル結合が形成され、これは、生
理学的な条件下では切断され得ない。

【０１７４】

【化３】 本発明の治療用ペプチドおよびペプチド誘導体は、血液成分の特異的標識化お
よび非特異的標識化のために修飾され得る。

【０１７５】 （Ａ．特異的標識化） 好ましくは、本発明の治療用ペプチドは、移動性血液タンパク質のチオール基
と特異的に反応するように設計される。このような反応は、好ましくは、血清ア
ルブミンまたはＩｇＧのような移動性血液タンパク質のチオール基へのマレイミ
ド連結（例えば、ＧＭＢＳ、ＭＰＡまたは他のマレイミドから調製される）を用
いて修飾される治療用ペプチドの共有結合によって確立される。

【０１７６】 特定の条件下において、マレイミドとの特異的な標識化は、ＮＨＳおよびｓｕ
ｌｆｏ−ＮＨＳのような基を用いる移動性タンパク質の非特異的な標識化に比べ
ていくつかの利点を提供する。チオール基は、インビボにおいてアミノ基よりも
あまり豊富ではない。従って、本発明のマレイミド誘導体は、より少ないタンパ
ク質に共有結合する。例えば、アルブミン（最も豊富な血液タンパク質）におい
て、一つのチオール基のみが存在する。従って、治療用ペプチドマレイミド−ア
ルブミン結合体は、治療用ペプチド対アルブミンを約１：１のモル比で含む傾向
がある。アルブミンに加えて、ＩｇＧ分子（クラスＩＩ）もまた、遊離チオール
を有する。ＩｇＧ分子および血清アルブミンが血液において可溶なタンパク質の
大部分を構成するので、これらはまた、マレイミド修飾治療用ペプチドに共有結
合するのに利用可能な血液中の遊離チオール基の大部分を構成する。

【０１７７】 さらに、遊離チオール含有血液タンパク質の間でさえ、マレイミドを用いた特
異的標識化は、アルブミン自体の独特の特徴付けに起因して、治療用ペプチドマ
レイミド−アルブミン結合体の優先的な形成に導く。アルブミンの単一の遊離チ
オール基は、種間において高度に保存され、アミノ酸残基３４（Ｃｙｓ³⁴）に位
置する。最近、アルブミンのＣｙｓ³⁴が他の遊離チオール含有タンパク質の遊離
チオールと比べて高い反応性を有することが示されている。これは、アルブミン
のＣｙｓ³⁴に対する非常に低いｐＫ値（５．５）に一部起因する。これは、一般
的にシステイン残基の典型的なｐＫ値（典型的には約８）よりもずっと低い。こ
の低いｐＫに起因して、正常な生理学的条件下でアルブミンのＣｙｓ³⁴は、主に
イオン化された形態であり、これは、その反応性を劇的に増加させる。Ｃｙｓ³⁴ の低いｐＫ値に加えて、Ｃｙｓ³⁴の反応性を高める別の因子はその位置であり、
その位置は、アルブミンのＶ領域の一つのループの表面に近接した間隙である。
この位置は、Ｃｙｓ³⁴を全ての種類のリガンドに対してまさしく利用可能にし、
遊離ラジカルトラップおよび遊離チオール捕捉剤としてＣｙｓ³⁴の生物学的役割
において重要な因子である。これらの性質は、Ｃｙｓ³⁴を治療用ペプチドマレイ
ミドに非常に反応性にし、反応速度の加速は、他の遊離チオール含有タンパク質
と治療用ペプチドマレイミドの反応の反応速度に比べて、１０００倍であり得る
。

【０１７８】 治療用ペプチドマレイミド−アルブミン結合体の別の利点は、Ｃｙｓ³⁴に特異
的にペプチド対アルブミンを１：１で含むことに関連する再現性である。グルタ
ルアルデヒド、ＤＣＣ、ＥＤＣおよび例えば、遊離アミンについての他の化学活
性化のような他の技術は、この選択性を欠いている。例えば、アルブミンは、５
２個のリジン残基を含み、このうちの２５〜３０個は、アルブミンの表面に位置
し、そして結合のためにアクセス可能である。これらのリジン残基の活性化、あ
るいはこれらのリジン残基を通して結合するペプチドの修飾は、結合体の不均一
な集団を生じる。ペプチド対アルブミンの１：１のモル比が使用される場合でさ
え、生成物は、複数の結合体酸物からなり、そのいくつかは、アルブミン当たり
０、１、２以上のペプチドを含み、それぞれは、２５〜３０個の利用可能なリジ
ン部位のいずれか１つにランダムに結合されるペプチドを有する。多くの組み合
わせが可能である場合、抽出成分およびそれぞれのバッチの性質の特徴付けは困
難になり、バッチ間の再現性はほとんど不可能であり、このような結合体を治療
剤としてあまり望ましくなくする。さらに、アルブミンのリジン残基を介する結
合体化が、アルブミン分子当たりの治療剤のより多くを送達する利点を少なくと
も有するようであるが、研究によって、治療剤対アルブミンの１：１の比が好ま
しいことが示された。Ｓｔｅｈｌｅら、「Ｔｈｅ Ｌｏａｄｉｎｇ Ｒａｔｅ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ Ｔｕｍｏｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅ
ｓ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ−Ａｌｂｕｍｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ
ｉｎ Ｒａｔｓ」、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ，第８巻，６７７−
６８５頁（１９９７）による論文（その全体において本明細書中で援用される）
において、著者らは、抗癌剤メトトレキサート対グルタルアルデヒドを介して結
合されるアルブミンの１：１の比が最も有望な結果を与えたことを報告した。こ
れらの結合体は腫瘍細胞によって取り込まれたが、５：１〜２０：１のメトトレ
キサート分子を有する結合体は、変化したＨＰＬＣプロフィールを有し、そして
インビボで肝臓に迅速に取り込まれた。これらの高い比において、アルブミンに
対するコンフォメーションの変化は、治療キャリアとしてのその有効性を減少す
ることが推論された。

【０１７９】 マレイミド−治療用ペプチドのインビボでの制御された投与を通して、アルブ
ミンおよびＩｇＧのインビボでの特異的な標識化を制御し得る。典型的な投与に
おいて、８０〜９０％の投与されたマレイミド−治療用ペプチドが、アルブミン
を標識し、５％未満がＩｇＧを標識する。グルタチオンのような遊離チオールの
微量標識がまた、生じる。このような特異的な標識化は、インビボ用途に好まし
い。なぜなら、これは、投与された薬剤の見積もられた半減期の正確な計算を可
能にするからである。

【０１８０】 制御された特異的なインビボ標識化を提供することに加えて、マレイミド−治
療用ペプチドは、血清アルブミンおよびＩｇＧのエキソビボでの特異的標識化を
提供し得る。このようなエキソビボの標識化は、血清アルブミンおよび／または
ＩｇＧを含む血液、血清または生理食塩水へのマレイミド−治療用ペプチドの添
加を包含する。一旦、マレイミド−治療用ペプチドを用いてエキソビボで修飾す
ると、血液、血清または生理食塩溶液は、インビボ処置のために血液に再投与さ
れ得る。

【０１８１】 ＮＨＳ−ペプチドと対照的に、マレイミド−治療用ペプチドは、一般的に、水
性溶液の存在下および遊離アミンの存在下において、非常に安定である。マレイ
ミド−治療用ペプチドが遊離チオールとのみ反応するので、マレイミド−治療用
ペプチドがそれ自体と反応することを防ぐために、保護基は、一般的に必要では
ない。さらにペプチドの増加した安定性によって、インビボ用途に適切な非常に
精製された産物を調製するためのＨＰＬＣのようなさらなる精製工程の使用を可
能になる。最後に、増加した化学的安定性は、より長い有効期限を有する製品を
提供する。 （Ｂ．非特異的標識） 本発明の治療用ペプチドはまた、血液成分の非特異的標識のために改変され得
る。アミノ基との結合が一般的に使用され得、特に非特異的標識のためのアミド
結合の形成を伴う。そのような結合を形成するために、治療用ペプチドと結合し
た化学反応性基として、広範に種々の活性カルボキシル基、特にエステルを使用
し得、ここでそのヒドロキシル部分は、必要とされるレベルにおいて生理学的に
受容可能である。多数の異なるヒドロキシル基がこれらの結合剤において使用さ
れ得るが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）およびＮ−ヒドロキシ−ス
ルホスクシンイミド（スルホ−ＮＨＳ）が最も都合が良い。

【０１８２】 利用され得る他の結合剤は、米国特許第５，６１２，０３４号（これは、本明
細書中に参考として援用される）において記載される。

【０１８３】 非特異的治療用ペプチドの化学反応性基がインビボで反応し得る種々の部位と
しては、細胞、特に赤血球（成熟赤血球）および血小板、ならびにタンパク質（
例えば、免疫グロブリン（ＩｇＧおよびＩｇＭを含む）、血清アルブミン、フェ
リチン、ステロイド結合タンパク質、トランスフェリン、サイロキシン結合蛋白
、α−２−マクログロブリンなど）が挙げられる。誘導体化された治療用ペプチ
ドが反応するそれらのレセプター（これは、長命ではない）は、一般的に、およ
そ３日以内にヒト宿主から除去される。上記に示されるタンパク質（細胞のタン
パク質を含む）は、血中濃度に基づいて、特に半減期に関しては、少なくとも３
日間血流中に残存し、そして５日間以上残存し得る（一般的に、６０日間を超え
ず、より一般的には３０日間を超えない）。

【０１８４】 ほとんどの部分について、反応は、血液中の移動性成分、詳細には血液タンパ
ク質および細胞、より詳細には血液タンパク質および成熟赤血球を伴う。「移動
性」とは、その成分が、任意の長期間（一般的には５分間を超えず、より一般的
には１分間である）一定の場所にいないことを意図するが、いくつかの血液成分
は、長期間、比較的停止し得る。最初は、標識されたタンパク質および細胞の比
較的不均一な集団が存在する。しかし、ほとんどの部分について、投与後数日以
内でその集団は、血流中の標識されたタンパク質の半減期に依存して、最初の集
団とは実質的に異なってくる。従って、通常、およそ３日以内もしくはそれ以上
の期間内に、ＩｇＧは、血流において優勢な標識タンパク質となる。

【０１８５】 通常、投与後５日までに、ＩｇＧ、血清アルブミンおよび成熟赤血球は、血液
中の結合成分の少なくとも約６０ｍｏｌ％、通常は少なくとも約７５ｍｏｌ％と
なり、ＩｇＧ、ＩｇＭ（実質的により少ない程度まで）および血清アルブミンは
、非細胞性結合成分の少なくとも約５０ｍｏｌ％、通常は少なくとも約７５ｍｏ
ｌ％、より一般には約８０ｍｏｌ％となる。

【０１８６】 血液成分に対する非特異的治療用ペプチドの所望の結合体は、患者に直接その
治療用ペプチドを投与することによって、インビボにて調製され得る。この患者
は、ヒトまたは他の哺乳動物であり得る。その投与は、ボーラス形態でなされる
か、または流れを計器で調節して注入することなどによって、ゆっくりと長期間
で導入され得る。

【０１８７】 所望される場合、対象結合体はまた、血液と本発明の改変治療用ペプチドとを
組み合わせることによって、エキソビボで調製され得、血液成分上の反応性官能
基と改変治療用ペプチドとの共有結合を可能にし、次いで、宿主にその結合体化
血液を戻すか、または投与する。さらに、上記のことは、初めに、個々の血液成
分または限られた数の成分（例えば、赤血球細胞、免疫グロブリン、血清アルブ
ミンなど）を精製し、そしてその成分または複数の成分をエキソビボにて化学的
に反応性の治療（ｌｔｈｅｒｐｅｕｔｉｃ）ペプチドと組み合わせることによっ
て達成され得る。次いで、標識された血液または血液成分は、治療的に有効な結
合体をインビボで被験体に提供するために宿主に戻され得る。その血液はまた、
エキソビボで操作する間の凝固を予防するために処理され得る。

【０１８８】 （３．本発明において使用される治療用ペプチドの合成） ペプチドフラグメントは、当業者に公知の固相ペプチド化学の標準的な方法に
よって、合成され得る。例えば、ペプチドフラグメントは、アプライドバイオシ
ステムシンセサイザー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｚｅｒ）を使用する、ＳｔｅｗａｒｄおよびＹｏｕｎｇ（Ｓｔｅｗａｒｄ，Ｊ
． Ｍ．およびＹｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版．，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍ
ｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．，（１９８４））により記載される手順
に従がう固相化学技術によって合成され得る。次いで、同様に、複数のフラグメ
ントが共に結合して合成されて、より大きなフラグメントを形成する。これらの
合成ペプチドフラグメントはまた、特定の位置におけるアミノ酸置換を伴って作
製され得る。

【０１８９】 固相ペプチド合成について、多くの技術の概要が、Ｊ．Ｍ．Ｓｔｅｗａｒｔお
よびＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔ
ｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．（Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）
，１９６３およびＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｈｏｒｍｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，第２巻 ４６頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），１９７３において見出され得る。伝統的な溶液合成
については、Ｇ．ＳｃｈｒｏｄｅｒおよびＫ．Ｌｕｐｋｅ，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉ
ｄｅｓ，第１巻、Ａｃａｃｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照の
こと。一般的にこれらの方法は、１つ以上のアミノ酸または適切に保護されたア
ミノ酸を連続的に付加してペプチド鎖に成長させることを含む。通常、第１のア
ミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基のいずれかが、適切な保護基によって保
護される。次いで、その保護されたアミノ酸または誘導体化されたアミノ酸は、
不活性固体支持体に付着されるか、あるいは、アミド結合を形成するために適切
な条件下において、適切に保護されたコンプリメンタリー（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎ
ｔａｒｙ）（アミノもしくはカルボキシル）基を有する配列中に次のアミノ酸を
付加することによって溶液中で利用される。次いで、保護基をこの新たに付加さ
れたアミノ酸残基から除去し、そして次のアミノ酸（適切に保護された）が付加
などされる。

【０１９０】 全ての所望のアミノ酸が、適切な配列内に結合された後、全ての残りの保護基
（および任意の固体支持体）が連続的にか、または同時に除去されて、最終的な
ポリヌクレオチドができる。この一般的手順の単純な改変によって、１つよりも
多くのアミノ酸を一度に付加させて、鎖を成長させることが可能となる（例えば
、保護されたトリペプチドを適切に保護されたジペプチドに（キラル中心をラセ
ミ化しない条件下で）結合させることによって脱保護の後、ペンタペプチドを形
成させることによる）。

【０１９１】 本発明の化合物を調製する特に好ましい方法は、固相ペプチド合成を含み、こ
こでアミノ酸α−Ｎ−末端は、酸感受性基または塩基感受性基によって保護され
る。そのような保護基は、ペプチド結合形成の条件に対して安定であるという特
性を有するべき一方で、成長するペプチド鎖の破壊またはその中に含まれる任意
のキラル中心のラセミ化を伴わずに容易に除去可能であるという特性も有すべき
である。適切な保護基は、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ
）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂ
ｚ）、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル
、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベン
ジルオキシカルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブ
チルオキシカルボニルなどである。９−フルオレニル−メチルオキシカルボニル
（Ｆｍｏｃ）保護基は、治療用ペプチドフラグメントの合成のために特に好まし
い。他の好ましい側鎖保護基は、リジンおよびアルギニンのような側鎖アミノ基
に関しては、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（ｐ
ｍｃ）、ニトロ基、ｐ−トルエンスルホニル基、４−メトキシベンゼン−スルホ
ニル基、Ｃｂｚ基、Ｂｏｃ基、およびアダマンチルオキシカルボニル基；チロシ
ンに関しては、ベンジル基、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、２，６−
ジクロロベンジル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）基、シクロヘキ
シル基、シクロペニル基およびアセチル（Ａｃ）基であり；セリンに関しては、
ｔ−ブチル基、ベンジル基およびテトラヒドロピラニル基であり；ヒスチジンに
関しては、トリチル基、ベンジル基、Ｃｂｚ基、ｐ−トルエンスルホニル基およ
び２，４−ジニトロフェニル基であり；トリプトファンに関しては、ホルミル基
であり；アスパラギン酸およびグルタミン酸に関しては、ベンジル基およびｔ−
ブチル基ならびにシステインに関しては、トリフェニルメチル（トリチル）基で
ある。

【０１９２】 固相ペプチド合成方法において、α−Ｃ−末端アミノ酸は、適切な固体支持体
または樹脂に付着される。上記合成のために有用な適切な固体支持体は、段階的
な縮合−脱保護反応の試薬および反応条件に対して不活性であり、ならびに使用
される媒体に不溶性である材料である。α−Ｃ−末端カルボキシペプチドの合成
のための好ましい固体支持体は、４−ヒドロキシメチルフェノキシメチル−コポ
リ（スチレン−１％ジビニルベンゼン）である。α−Ｃ−末端アミドペプチドの
ための好ましい固相支持体は、４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏ
ｃ−アミノメチル）フェノキシアセトアミドエチル樹脂である（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）から入手可
能）。このα−Ｃ−末端アミノ酸は、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）
、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、ベンゾトリアゾール−１−
イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェ
ート（ＢＯＰ）またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィンク
ロリド（ＢＯＰＣｌ）を伴うか、または伴わずに、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル
カルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ
）またはＯ−ベンゾトリアゾル−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチ
ルウロニウム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢＴＵ）によって樹脂に結合さ
れ、結合は、ジクロロメタンまたはＤＭＦのような溶媒中で１０℃と５０℃との
間の温度にて約１時間〜２４時間の間媒介される。

【０１９３】 固体支持体が、４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメ
チル）フェノキシ−アセトアミドエチル樹脂である場合、Ｆｍｏｃ基は、上記の
α−Ｃ−末端アミノ酸とのカップリングの前に、第二級アミン、好ましくはピペ
リジンで切断される。脱保護された４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆ
ｍｏｃ−アミノメチル）フェノキシ−アセトアミドエチル樹脂へのカップリング
のための好ましい方法は、ＤＭＦ中Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ
，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢ
ＴＵ、１当量）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１当量）
である。保護されたアミノ酸の連続的なカップリングは、当該分野において周知
の自動ポリペプチドシンセサイザーにおいて実行され得る。好ましい実施形態に
おいて、成長するペプチド鎖のα−Ｎ−末端アミノ酸は、Ｆｍｏｃで保護される
。成長するペプチドのα−Ｎ−末端側からのＦｍｏｃ保護基の除去は、第二級ア
ミン、好ましくはピペリジンを用いて処理することによって達成される。次いで
、各々の保護アミノ酸は、およそ３倍の過剰なモル濃度で導入され、そして好ま
しくは、カップリングはＤＭＦ中で実行される。カップリング剤は、通常、Ｏ−
ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルウロニウ
ム−ヘキサフロオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１当量）および１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ、１当量）である。

【０１９４】 固相合成の終点において、このポリペプチドは、連続的にか、または１回の操
作でのいずれかで、樹脂から取り出されて、そして脱保護される。ポリペプチド
の取り出しおよび脱保護は、チオアニソール、水、エタンジチオールおよびトリ
フルオロ酢酸を含む切断試薬（ｃｌｅａｖａｇｅ ｒｅａｇｅｎｔ）を用いて、
樹脂結合ポリペプチドを処理することにより１回の操作で達成され得る。ポリペ
プチドのα−Ｃ−末端がアルキルアミドである場合、樹脂は、アルキルアミンを
用いるアミノ分解によって切断される。あるいは、ペプチドは、例えば、メタノ
ールを用いるエステル交換反応、続いてアミノ分解または直接的アミド基交換に
よって取り出され得る。保護ペプチドは、この時点で精製され得るか、または次
の工程に直接使用され得る。側鎖保護基の除去は、上記の切断カクテル（ｃｏｃ
ｋｔａｉｌ）を使用して達成される。完全に脱保護されたペプチドは、任意また
は全ての以下の型：弱塩基樹脂上のイオン交換（アセテート形態）；非誘導体化
ポリスチレン−ジビニルベンゼン上の疎水性吸着クロマトグラフィー（例えば、
Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ）；シリカゲル吸着クロマトグラフィー；カルボキ
シメチルセルロース上のイオン交換クロマトグラフィー；分配クロマトグラフィ
ー（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５、ＬＨ−２０）または向流分配；高速
液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（特に、オクチル−もしくはオクタデシル
シリル−シリカ結合相充填剤上の逆相ＨＰＬＣ）を利用する一連のクロマトグラ
フィー工程により精製される。

【０１９５】 これらの治療用ペプチドの分子量は、Ｆａｓｔ Ａｔｏｍ Ｂｏｍｂａｒｄｍ
ｅｎｔ（ＦＡＢ）Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙを使用して決定される。

【０１９６】 本発明の治療用ペプチドは、プロドラッグとしての使用のために、Ｎ末端保護
基およびＣ末端保護基を用いて合成され得る。

【０１９７】 （（１）Ｎ−末端保護基） 上記に議論されるように、用語「Ｎ−保護基」とは、アミノ酸もしくはペプチ
ドのα−Ｎ−末端を保護すること、さもなくばアミノ酸もしくはペプチドのアミ
ノ基を、合成手順の間の望ましくない反応物に対して保護することが意図される
それらの基をいう。一般的に、使用されるＮ−保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒ
ｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ Ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
」（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８１））（これ
は、本明細書中に参考として援用される）に開示される。さらに、保護基を、例
えば、酵素的加水分解によって容易にインビボで切断されるプロドラッグとして
使用して、生物学的に活性なペアレント（ｐａｒｅｎｔ）を放出し得る。α−Ｎ
−保護基は、低級アルカノイル基（例えば、ホルミル基、アセチル基（「Ａｃ」
）、プロピオニル基、ピバロイル基、ｔ−ブチルアセチル基など；２−クロロア
セチル基、２−ブロモアセチル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチ
ル基、フタリル基、ｏ−ニトロフェノキシアセチル基、クロロブチリル基、ベン
ゾイル基、４−クロロベンゾイル基、４−ブロモベンゾイル基、４−ニトロベン
ゾイル基などを含む他のアシル基；例えば、ベンゼンスルホニル基、ｐ−トルエ
ンスルホニル基などのようなスルホニル基；例えば、ベンジルオキシカルボニル
基、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカル
ボニル基、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、２−ニトロベンジルオキシ
カルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、３，４−ジメトキシベ
ンジルオキシカルボニル基、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、
２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、４−エトキシベンジルオキシ
カルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、
３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル基、１−（ｐ−ビフェニル
イル）−１−メチルエトキシカルボニル基、α，α−ジメチル−３，５−ジメト
キシベンジルオキシカルボニル基、ベンズヒドリルオキシカルボニル基、ｔ−ブ
チルオキシカルボニル基、ジイソプロピルメトキシオキシカルボニル基、イソプ
ロピルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、メトキシカルボニル基、ア
リルオキシカルボニル基、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル基、フェ
ノキシカルボニル基、４−ニトロフェノキシカルボニル基、フルオレニル−９−
メトキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基、アダマンチルオキ
シカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基、フェニルチオカルボニル
基などのカルバメート形成基；例えば、ベンジル基、トリフェニルメチル基、ベ
ンジルオキシメチル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ
）などのようなアリールアルキル基ならびに例えば、トリメチルシリルなどのよ
うなシリル基を含む。

【０１９８】 （（２）カルボキシ保護基） 上記で議論されるように、用語「カルボキシ保護基」とは、化合物の他の官能
基部位に関与する反応が実施されながらカルボン酸官能基をブロックもしくは保
護するために使用されるカルボン酸保護エステル基またはアミド基のことをいう
が、る。カルボキシ保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏ
ｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」１５２〜１８６頁（１９
８１）（これは、本明細書中に参考として援用される）に開示される。さらに、
カルボキシ保護基は、例えば、酵素的加水分解によって容易にインビボで切断さ
れ、生物学的に活性なペアレントを放出し得る。そのようなカルボキシ保護基は
、当業者に周知であり、米国特許第３，８４０，５５６号および同第３，７１９
，６６７号にて記載されるように、ペニシリンおよびセファロスポリンの分野に
おけるカルボキシル基の保護において広範囲に使用されている。これらの開示は
、本明細書中に参考として援用される。代表的なカルボキシ保護基は、Ｃ₁−Ｃ₈ 低級アルキル基（例えば、メチル基、エチル基またはｔ−ブチル基など）；例え
ば、フェネチル基またはベンジル基のようなアリールアルキル基ならびに例えば
、アルコキシベンジル基またはニトロベンジル基などのようなそれらの置換誘導
体；例えば、フェニルエテニル基などのアリールアルケニル；アリールおよび例
えば、５−インダニル基などのようなその置換誘導体で；例えば、ジメチルアミ
ノエチル基などのようなジアルキルアミノアルキル基；例えば、アセトキシメチ
ル基、ブチリルオキシメチル基、バレリルオキシメチル基、イソブチリルオキシ
メチル基、イソバレリルオキシメチル基、１−（プロピオニルオキシ）−１−エ
チル基、１−（ピバロイルオキシ）−１−エチル基、１−メチル−１−（プロピ
オニルオキシ）−１−エチル基、ピバロイルオキシメチル基、プロピオニルオキ
シメチル基などのようなアルカノイルオキシアルキル基；例えば、シクロプロピ
ルカルボニルオキシメチル基、シクロブチルカルボニルオキシメチル基、シクロ
ペンチルカルボニルオキシメチル基、シクロヘキシルカルボニルオキシメチル基
などのようなシクロアルカノイルオキシアルキル基；例えば、ベンゾイルオキシ
メチル基、ベンゾイルオキシエチル基などのようなアロイルオキシアルキル基；
例えば、ベンジルカルボニルオキシメチル基、２−ベンジルカルボニルオキシエ
チル基などのようなアリールアルキルカルボニルオキシアルキル基；例えば、メ
トキシカルボニルメチル基、シクロヘキシルオキシカルボニルメチル基、１−メ
トキシカルボニル−１−エチル基などのようなアルコキシカルボニルアルキル基
またはシクロアルキルオキシカルボニルアルキル基；例えば、メトキシカルボニ
ルオキシメチル基、ｔ−ブチルオキシカルボニルオキシメチル基、１−エトキシ
カルボニルオキシ−１−エチル基、１−シクロへキシルオキシカルボニルオキシ
−１−エチル基などのようなアルコキシカルボニルオキシアルキル基またはシク
ロアルキルオキシカルボニルアルキル基；例えば、２−（フェノキシカルボニル
オキシ）エチル基、２−（５−インダニルオキシカルボニルオキシ）エチル基な
どのようなアリールオキシカルボニルオキシアルキル基；例えば、２−（１−メ
トキシ−２−メチルプロパン−２−オイルオキシ）エチル基などのようなアルコ
キシアルキルカルボニルオキシアルキル基；例えば、２−（ベンジルオキシカル
ボニルオキシ）エチル基などのようなアリールアルキルオキシカルボニルオキシ
アルキル基；例えば、２−（３−フェニルプロペン−２−イルオキシカルボニル
オキシ）エチル基などのようなアリールアルケニルオキシカルボニルオキシアル
キル基；例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノメチル基などのようなアル
コキシカルボニルアミノアルキル基；例えば、メチルアミノカルボニルアミノメ
チル基などのようなアルキルアミノカルボニルアミノアルキル基；例えば、アセ
チルアミノメチル基などのようなアルカノイルアミノアルキル基；例えば、４−
メチルピペラジニルカルボニルオキシメチル基などのような複素環式カルボニル
オキシアルキル基；例えば、ジメチルアミノカルボニルメチル基、ジエチルアミ
ノカルボニルメチル基などのようなジアルキルアミノカルボニルアルキル基；例
えば、（５−ｔ−ブチル−２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）メチ
ル基などのような（５−（低級アルキル）−２−オキソ−１，３−ジオキソレン
−４−イル）アルキル基；ならびに、例えば、（５−フェニル−２−オキソ−１
，３−ジオキソレン−４−イル）メチル基などのような（５−フェニル−２−オ
キソ−１，３−ジオキソレン−４−イル）アルキル基である。

【０１９９】 代表的なアミドカルボキシ保護基は、アミノカルボニル基および低級アルキル
アミノカルボニル基である。

【０２００】 本発明の好ましいカルボキシ保護化合物には複数の化合物があり、ここでその
保護カルボキシ基は、低級アルキルエステル、シクロアルキルエステルもしくは
アリールアルキルエステル（例えば、メチルエステル、エチルエステル、プロピ
ルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、ｓｅｃ−ブチルエステル
、イソブチルエステル、アミルエステル、イソアミルエステル、オクチルエステ
ル、シクロヘキシルエステル、フェニルエチルエステルなど）またはアルカノイ
ルオキシアルキルエステル、シクロアルカノイルオキシアルキルエステル、アロ
イルオキシアルキルエステルもしくはアリールアルキルカルボニルオキシアルキ
ルエステルである。好ましいアミドカルボキシ保護基は、低級アルキルアミノカ
ルボニル基である。例えば、アスパラギン酸は、酸不安定基（例えば、ｔ−ブチ
ル基）によりα−Ｃ−末端にて保護され得、そして水素化不安定基（例えば、ベ
ンジル基）によりβ−Ｃ−末端にて保護され得、次いで、合成中に選択的に脱保
護され得る。

【０２０１】 あるいは、例えば、当該分野において周知の方法に従がうタンパク質分解酵素
を使用して、天然に存在するアミノ酸配列を断片化することによりペプチドのフ
ラグメントを得ることもまた可能である。さらに、この治療用ペプチドの所望の
フラグメントを、当該分野において周知の方法を使用する組換えＤＮＡ技術の使
用を介して得ることが可能である。

【０２０２】 （治療用ペプチドの改変） 本発明の改変された治療用ペプチドを生成する様式は、その分子を含む種々の
要素の性質に依存して、広範に変動する。合成手順は、単純であるように、高収
率を提供するように、そして高度に精製された安定な生成物を可能とするように
、選択される。通常、反応性基は、最終段階として、例えば、カルボキシル基を
用いて作製され、活性エステルを形成するためのエステル化が、合成の最終工程
である。本発明の改変された治療用ペプチドの生成のための特定の方法を、以下
に記載する。

【０２０３】 一般的に、本発明の改変された治療用ペプチドは、ブラインド（ｂｌｉｎｄ）
または構造活性相関（ＳＡＲ）駆動置換を使用して、作製され得る。ＳＡＲは、
分子の構造と、一連の化合物に対するその薬理学的活性との間の関係を規定する
分析である。個々の治療用ペプチドに関連した種々の研究により、如何にしてペ
プチドの活性が、化学的構造または化学的特性のバリエーションに従って変動す
るかが示される。より詳細には、最初に遊離ペプチドの治療的活性をアッセイす
る。次いで、本発明に従い、そのペプチドのＮ末端、Ｃ末端または内部のいずれ
かで連結基のみによって、そのペプチドを改変する。連結基としては、上記で考
察したような反応性基が挙げられる。この改変されたペプチド連結基の治療的活
性を、次いでアッセイし、そして検出された活性に基づいて、改変部位に関して
決定を下す。次いで、ペプチド結合体を調製し、そしてその治療的活性を決定す
る。結合体化後のペプチドの治療的活性が実質的に低減されていない場合（すな
わち、治療的活性が、１／１０未満低減されている場合）、ペプチドの安定性を
、そのインビボ寿命によって示されるように測定する。安定性が所望されるレベ
ルまで改善されない場合、ペプチドを、代替的な部位で改変する。そして、所望
されるレベルの治療的活性および所望される安定性が達成されるまで、この手順
を繰り返す。

【０２０４】 より詳細には、リンカーおよび反応性基での誘導体化を受けさせるために選択
された各治療用ペプチドを、以下の基準に従って改変する：末端のカルボン酸基
が、治療用ペプチドにおいて利用可能であり、そしてこの末端のカルボン酸基が
薬理学的活性の保持に重要ではなく、そして他の感受性官能基が治療用ペプチド
に存在しない場合、このカルボン酸を、リンカー反応性基改変のための結合部位
として選択する。末端のカルボン酸基が薬理学的活性に関与している場合、また
はカルボン酸が利用可能ではない場合、薬理学的活性の保持に重要ではない任意
の他の感受性反応性基を、リンカー反応性基改変のための結合部位として選択す
る。いくつかの感受性官能基が治療用ペプチドにおいて利用可能である場合、リ
ンカー／反応性基の付加および保護されたすべての感受性官能基の脱保護後に、
薬理学的活性の保持がなお得られるような様式で、保護基の組み合わせが使用さ
れる。感受性官能基が治療用ペプチドにおいて利用可能ではない、またはより単
純な改変経路が所望される場合、合成的な試みが、生物学的活性の保持およびレ
セプター特異性または標的特異性の保持が得られるような様式での本来のペプチ
ドの改変を可能にする。この場合、改変は、ペプチドの反対の末端において生じ
る。

【０２０５】 ＮＨＳ誘導体は、治療用ペプチドにおいて、他の感受性官能基の不在下でカル
ボン酸から合成され得る。特に、このような治療用ペプチドは、無水ＣＨ₂Ｃｌ₂ およびＥＤＣ中でＮ−ヒドロキシスクシンイミドと反応し、そしてこの生成物は
、クロマトグラフィーによって精製されるか、またはＮＨＳ誘導体を与えるに適
切な溶媒系から再結晶化される。

【０２０６】 あるいは、ＮＨＳ誘導体は、アミノ基および／またはチオール基、ならびにカ
ルボン酸を含む治療用ペプチドから合成され得る。分子中に遊離のアミノ基また
はチオール基が存在する場合、ＮＨＳ誘導体の付加を実施する前に、これらの感
受性官能基を保護することが好ましい。例えば、分子が遊離アミノ基を含む場合
、Ｆｍｏｃまたは好ましくはｔＢｏｃ保護アミンへのアミンの転換が、上記化学
を実施する前に必要とされる。アミン官能基（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）は
、ＮＨＳ誘導体の調製後に脱保護されない。従って、この方法は、所望される薬
理学的効果を誘導するために、アミン基が遊離状態であることが必要とされない
化合物のみに対して適用される。アミノ基が、分子の本来の生物学的特性を保持
するために遊離状態であることが必要とされる場合、実施例３〜６に記載された
別の型の化学が実施されなければならない。

【０２０７】 さらに、ＮＨＳ誘導体は、アミノ基またはチオール基を含み、そしてカルボン
酸を含まない治療用ペプチドから合成され得る。選択された分子が、カルボン酸
を含まない場合、一連の二官能性リンカーを使用して、その分子を反応性ＮＨＳ
誘導体へと変換し得る。例えば、ＤＭＦ中に溶解され、そして遊離アミノ含有分
子に付加されたエチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシネート）（Ｅ
ＧＳ）およびトリエチルアミン（ＥＧＳの方が有利なように、１０：１の比率で
）は、モノＮＨＳ誘導体を生成する。チオール誘導体化分子からＮＨＳ誘導体を
生成するためには、ＤＭＦ中のＮ−［−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイ
ミドエステル（ＧＭＢＳ）およびトリエチルアミンが使用され得る。マレイミド
基は、遊離チオールと反応し、そしてＮＨＳ誘導体は、シリカでのクロマトグラ
フィーによってか、またはＨＰＬＣによって反応混合物から精製される。

【０２０８】 ＮＨＳ誘導体はまた、複数の感受性官能基を含む治療用ペプチドから合成され
得る。各々の場合に、異なる様式で分析および解明がなされなければならない。
しかし、市販されている多量の保護基および二官能性リンカーのお陰により、本
発明は、治療用ペプチドを誘導体化するために、好ましくはわずか１つの化学的
工程で（実施例１または３に記載されるように）、または２工程（実施例２に記
載され、感受性基の予めの保護を含む）もしくは３工程（保護、活性化、および
脱保護）で、任意の治療用ペプチドに適用可能である。例外的な状況下でのみ、
治療用ペプチドを活性ＮＨＳまたはマレイミド誘導体に転換するために、複数の
（３工程を超える）合成工程を使用することが必要とされる。

【０２０９】 マレイミド誘導体はまた、遊離アミノ基および遊離カルボン酸を含む治療用ペ
プチドから合成され得る。アミノ誘導体化分子からマレイミド誘導体を生成する
ためには、ＤＭＦ中のＮ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエ
ステル（ＧＭＢＳ）およびトリエチルアミンが使用され得る。スクシンイミドエ
ステル基は遊離アミノと反応し、そしてマレイミド誘導体は、結晶化によってか
、またはシリカでのクロマトグラフィーによってか、またはＨＰＬＣによって、
反応混合物から精製される。

【０２１０】 最後に、マレイミド誘導体は、複数の他の感受性官能基を含み、そして遊離カ
ルボン酸を含まない治療用ペプチドから合成され得る。選択された分子が、カル
ボン酸を含まない場合、一連の二官能性架橋試薬を使用して、分子を反応性ＮＨ
Ｓ誘導体に変換し得る。例えば、ＤＭＦ中でのＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活
性化を使用して、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）を、遊離アミンにカップリ
ングし、遊離アミンとＭＰＡのカルボン酸基との反応を通してマレイミド誘導体
を生成し得る。あるいは、リシン残基をペプチドのＣ末端に付加して、以下の実
施例に記載されるように、リシンのアミノ基での結合体化を可能にし得る。この
付加されたリシンは、樹脂の最初の選択によって設計されたように、アミド官能
基によってキャッピングされた末端を維持しつつ、ペプチドのＣ末端での単純か
つ効率的な改変を可能にする。

【０２１１】 多くの他の市販されるヘテロ二官能性架橋試薬が、必要とされる場合に代替的
に使用され得る。多数の二官能性化合物が、実体への架橋のために利用可能であ
る。例示的な試薬としては、以下が挙げられる：アジドベンゾイルヒドラジド、
Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリチルアミノ）ブチル］−３’−［２’−ピリジルジ
チオ）プロピオンアミド）、ビス−スルホスクシンイミジルスベレート（ｓｕｂ
ｅｒａｔｅ）、ジメチルアジピイミデート（ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ）、ジスク
シンイミジル酒石酸塩、Ｎ−ｙ−マレイミドブチリルオキシスクシンイミドエス
テル、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミジル−４−アジドベンゾエート、Ｎ−
スクシンイミジル［４−アジドフェニル］−１，３’−ジチオプロピオネート、
Ｎ−スクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、グルタルア
ルデヒド、およびスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサ
ン−１−カルボキシレート。

【０２１２】 さらにより詳細には、ペプチドは、好ましくは、その置換基の性質、および遊
離システインの存在または不在に従って、改変される。大半のペプチドは、３つ
の異なる分類に集められ得る：（１）システインを含まないペプチド；（２）１
つのシステインを含むペプチド、（３）ジスルフィド架橋（システイン）として
、２つのシステインを含むペプチド；および（４）複数のシステインを含むペプ
チド。

【０２１３】 （Ａ．システインを含まないペプチド） ペプチドがシステインを含まない場合、支持体樹脂から切断され、そして完全
に保護されたすべての残基で、Ｃ末端からの付加を実施する。ＥＤＣおよびＮＨ
ＳとのＣ末端の液相活性化を、ワンポット（ｏｎｅ ｐｏｔ）において、アミノ
−アルキル−マレイミドと反応させ得る。次いで、ペプチドを、完全に脱保護す
る。あるいは、リシン残基をペプチドのＣ末端に付加して、アミド基でキャッピ
ングされたカルボキシ末端を維持しつつ、リシンのεアミノ基での改変を可能に
し得る。このようなリシン残基の付加は、好ましくは、付加がペプチドの治療的
活性に実質的に影響しない場合にのみ実施される。システインを含まないペプチ
ドのＣ末端改変についての一般化反応スキームを、以下の模式図に例示する。

【０２１４】

【化４】 Ｎ末端改変が有利であり、そして再度、システインを含まないペプチドについ
ての場合は、Ｎ末端における付加が、支持体樹脂上に存在するすべての残基で実
施され、そして完全に保護される。活性化ＮＨＳ−Ｍａｌ二官能性リンカーの付
加は、樹脂上に存在するペプチドと脱保護されたＮ−末端において実施され得る
。次いで、ペプチドは完全に脱保護される。システインを含まず、そしてＣ末端
改変を受ける治療用ペプチドの例を、実施例７〜２６に記載する。システインを
含まず、そしてＮ末端改変を受ける治療用ペプチドの例を、実施例２７〜３８に
記載する。システインを含まないペプチドのＮ末端改変についての一般化反応ス
キームを、それぞれ、ヘテロＮＨＳマレイミド（ＧＭＢＳ様）および３−ＭＰＡ
を用いて、以下の模式図において例示する。

【０２１５】

【化５】

【０２１６】

【化６】 あるいは、ペプチドは、内部アミノ酸（すなわち、Ｃ末端でもＮ末端でもない
）で改変され得る。遊離システインを含まないペプチドの内部アミノ酸での改変
についての一般化反応スキームを、ホモビスＮＨＳおよびヘテロＮＨＳマレイミ
ドを用いて、以下の模式図において例示する。

【０２１７】

【化７】

【０２１８】

【化８】 システインを含まず、そして上記のように改変され得るペプチドとしては、以
下が挙げられる：Ｋｒｉｎｇｌｅ５ペプチドのフラグメント、ＧＬＰ−１ペプチ
ドのフラグメント、ダイノルフィンＡのフラグメント、ヒト成長ホルモン放出因
子、ヒトニューロペプチドＹの１−２４フラグメント、およびヒトセクレチン。
これらの各ペプチドについての化学の完全な説明を、実施例の節において報告す
る。

【０２１９】 （Ｂ．１つのシステインを含むペプチド） １つのシステインを含むペプチドの場合、システインは、マレイミドの付加後
に、キャッピングされたままでなければならない。システインが、結合部位に含
まれる場合、システインが保護基によってキャッピングされて、どの程度の効力
が損失したかに関する評価がなされなければならない。システインが、キャッピ
ングされたままであり得る場合、合成経路は、Ｃ末端改変またはＮ末端改変のい
ずれかについて上記のＡ欄に記載された経路と類似する。

【０２２０】 あるいは、ペプチドは、内部アミノ酸（すなわち、Ｃ末端でもＮ末端でもない
）で改変され得る。システインを含まないペプチドの内部アミノ酸での改変につ
いての一般化反応スキームを、ホモビスマレイミドおよびヘテロＮＨＳマレイミ
ド（ＧＭＢＳ様）を用いて、以下の模式図において例示する。

【０２２１】

【化９】

【０２２２】

【化１０】 １つのシステインを含む治療用ペプチドの例としては、以下が挙げられる：Ｇ _α （Ｇｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃペプチド結合タンパク質のαサブユニット）、ラ
ット脳一酸化窒素シンターゼブロッキングペプチドの７２４−７３９フラグメン
ト、ヒト［Ｔｙｒ０］インヒビンのαサブユニット１−３２フラグメント、ＨＩ
Ｖエンベロープタンパク質の２５４−２７４フラグメント、およびＰ３４ｃｄｃ
２キナーゼフラグメント。

【０２２３】 （Ｃ．ジスルフィド架橋（システイン）として、２つのシステインを含むペプ
チド） ペプチドが、ジスルフィド架橋として２つのシステインを含む場合、ペプチド
を、マレイミドの付加前に支持体樹脂から切断する。Ｃ末端からのペプチドの改
変については、ペプチドが樹脂から切断される場合に脱保護されることが必要な
、カルボキシ末端（これは、支持体樹脂からの切断に起因して、保護されないま
まである）および２つのシステインを除いて、すべての保護基が存在する。温和
な空気中酸化がジスルフィド架橋を生じ、そしてペプチドは、その段階で精製さ
れ得る。次いで、ジスルフィド架橋の存在下でＣ末端を活性化するために、そし
てＣ末端にマレイミドを付加する（アミノ−アルキル−マレイミドを通して）た
めに、液相化学が必要とされる。次いで、ペプチドは完全に脱保護される。

【０２２４】 Ｎ末端でのペプチドの改変については、ペプチドは、支持体樹脂に残存し得る
。２つのシステインは、マレイミドの付加前に、選択的に脱保護される。潜在的
に触媒によって補助される（不均一な）空気中酸化は、樹脂上に存在するペプチ
ドとのジスルフィドを生じ得る。次いで、マレイミドがＮ末端に付加され、そし
てペプチドが、樹脂から切断され、そして完全に脱保護される。ジスルフィド架
橋において２つのシステインを含むペプチドの内部アミノ酸での改変についての
一般化反応スキームを、以下の模式図において例示する。

【０２２５】

【化１１】 あるいは、ペプチドは、内部アミノ酸（すなわち、Ｃ末端またはＮ末端のいず
れでもない）において修飾され得る。ジスルフィド架橋いおいて２つのシステイ
ンを含むペプチドの内部アミノ酸における修飾のための一般化された反応スキー
ムは、以下の説明図で例示される。

【０２２６】

【化１２】 ジスルフィド架橋として２つのシステインを含む治療用ペプチドの例としては
、ヒトオステオカルシン１−４９、ヒト糖尿病関連ペプチド、ヒト／イヌ心房性
ナトリウム利尿ペプチドの５−２８フラグメント、ウシバクテネシン（ｂａｃｔ
ｅｎｅｃｉｎ）、およびヒト［Ｔｙｒ０］−コルチスタチン（ｃｏｒｔｉｓｔａ
ｔｉｎ）２９が挙げられる。

【０２２７】 （Ｄ．複数のシステインを含むペプチド） ペプチドが、ジスルフィド架橋として複数のシステインを含む場合、ペプチド
は、マレイミドの付加前に支持体樹脂から切断される。Ｃ末端からのペプチドの
修飾に関して、全ての保護基が、カルボキシ末端（カルボキシ末端は、支持体樹
脂からの切断に起因して保護されないままにある）およびジスルフィド架橋を構
築するとされる２つのシステインを除いて存在する。他のジスルフィド架橋に関
与するシステインは、保護基の選択を用いて、対において順に脱保護される。次
の架橋に移動する前に１つずつ各架橋を構築し、そして精製することが推奨され
る。おだやかな空気中酸化が、ジスルフィド架橋を産生し、そしてペプチドが、
各段階で精製されるべきである。次いで、溶液相化学が、ジスルフィド架橋の存
在下でＣ末端を活性化し、そしてＣ末端に（アミノ−アルキル−マレイミドを介
して）マレイミドを付加するのに必要とされる。次いで、ペプチドは完全に脱保
護される。

【０２２８】 Ｎ末端からのペプチドの修飾に関しては、支持体樹脂上でペプチドを切断し得
、そして選択的に最初の２つのシステインを脱保護して穏やかな空気中酸化のも
と、ジスルフィドを構築し得る。引き続く脱保護は、マレイミドの付加の前に、
他のジスルフィドを提供する。触媒（不均一）により潜在的に促進される空気中
酸化は、なお樹脂上にあるペプチドとジスルフィドを産生し得る。次いで、マレ
イミドは、Ｎ末端上で付加され、そしてペプチドは、樹脂から切断され、そして
完全に脱保護される。

【０２２９】 あるいは、ペプチドは、内部アミノ酸（すなわち、Ｃ末端またはＮ末端のどち
らでもない）において修飾され得る。

【０２３０】 複数のシステインを含むペプチドとしては、ヒトエンドセリンおよび［Ｌｙｓ
４］サラホトキシンＳ６ｃが挙げられる。

【０２３１】 （５．修飾された治療用ペプチドの投与） 修飾された治療用ペプチドは、生理学的に受容可能な媒体（例えば、脱イオン
水、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水、水性エタノールまたは他
のアルコール、血漿、蛋白様溶液、マンニトール、水性グルコース、アルコール
、植物油など）中で投与される。含まれ得る他の添加物としては、緩衝液（この
媒体は、約５〜１０の範囲のｐＨで一般的に緩衝化され、緩衝液は一般に約５０
〜２５０ｍＭの濃度の範囲である）、塩（塩の濃度は、一般に約５〜５００ｍＭ
の範囲である）、生理的に受容可能な安定剤などが挙げられる。組成物は、都合
の良い保存および輸送のために凍結乾燥され得る。

【０２３２】 修飾された治療（ｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）ペプチドは、大部分について、
経口的に、非経口的に（例えば、脈管内に（ＩＶ）、動脈内に（ＩＡ）、筋肉内
に（ＩＭ）、皮下に（ＳＣ）など）投与される。投与は、適切な場合には、輸注
により得る。いくつかの場合において（ここで、官能基の反応は比較的緩慢であ
る）、投与は、経口的、経鼻的、直腸的、経皮的またはエーロゾルであり得、こ
こで結合体の性質は、脈管系への移動を可能にする。通常、一回の注入が使用さ
れるが、所望の場合、１回より多い注入が用いられ得る。修飾された治療用ペプ
チドは、任意の都合のよい手段（注射器、トロカール、カテーテルなどを含む）
により投与され得る。投与の特定の様式は、投与されるべき量、１回のボーラス
であるかまたは継続的な投与であるかなどに依存して変化する。好ましくは、投
与は、脈管内であり（この導入の部位は、本発明に対して重要なものではない）
、好ましくは急速な血流が存在する部位（例えば、静脈内、末梢静脈または中心
静脈）である。他の経路は、投与が、遅延性放出技術または保護マトリックスと
結びつけられる使用を見出し得る。この意図は、治療（ｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ
ｃ）ペプチドが血液中で効率的に分布されることであり、その結果、血液成分と
反応し得る。結合体の濃度は、一般的に約１ｐｇ／ｍｌ〜５０ｍｇ／ｍｌで、広
範に変化する。脈管内に投与される総量は、一般に約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１０
ｍｇ／ｍｌ、より通常では、約１ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌの範囲である。

【０２３３】 血液の永続成分（例えば、免疫グロブリン、血清アルブミン、赤血球および血
小板）を結合することにより、多数の利点が結果として生じる。修飾された治療
用ペプチド成分の活性は、数日〜数週間延長される。１回の投与のみ、この期間
に与えられる必要がある。活性化合物は、大きい分子に主に結合されることから
（ここでは、他の生理学的プロセスを妨げるように細胞内に取り込まれる可能性
が低い）、より優れた特異性が達成され得る。

【０２３４】 血液成分間の共有結合の形成は、インビボまたはエキソビボで生じ得る。エキ
ソビボの共有結合形成に関して、修飾された治療（ｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）
ペプチドが、血液、血清あるいはヒト血清アルブミンまたはＩｇＧを含む生理食
塩水溶液に添加され、修飾された治療用ペプチドと血液成分との間の共有結合形
成を可能にする。好ましい様式において、治療用ペプチドは、マレイミドを用い
て修飾され、そして生理食塩水溶液中でヒト血清アルブミンと反応される。一旦
、修飾された治療用ペプチドが血液成分と反応して、治療用ペプチドタンパク質
結合体を形成すると、この結合体は、患者に投与され得る。

【０２３５】 あるいは、修飾された治療用ペプチドは、直接患者に投与され得、その結果、
共有結合が、インビボにおいて、修飾された治療用ペプチドと結合成分との間で
形成する。

【０２３６】 さらに、治療用ペプチドの局在化した送達が所望される場合、いくつかの送達
方法が使用され得る。

【０２３７】 （Ａ．切開手術領域の洗浄） 切開（ｏｐｅｎ）手術への補助としての治療的化合物の投与を内含する、局所
的な治療的化合物についての多数の適用が存在する。これらの場合において、治
療的化合物は、閉合の前に手術部位（すなわち、その部位の部分）において洗浄
されるか、または治療的化合物が、限られた空間（例えば、動脈内膜切除手順後
の動脈切片の内部または切除の間のＧＩ管の一部分）において短期間インキュベ
ートされ、そして過剰の液体が引き続いて排除される。

【０２３８】 （Ｂ．組織移植片のインキュベーション） 組織移植片（例えば、自己および生体異物性の静脈／動脈移植片ならびに弁の
移植片ならびに器官移植片）が、修飾されている治療的化合物を用いて予め処理
され、治療用溶液中でその移植片をインキュベートするかおよび／またはこのよ
うな溶液を用いてその移植片を灌流するかのいずれかにより、共有結合を形成す
ることを可能にし得る。

【０２３９】 （Ｃ．カテーテル送達） カテーテルは、器官（例えば、膀胱、ＧＩ管、膣／子宮）内部への内視鏡手順
の一部としてか、または心臓血管系カテーテル手順（例えば、バルーン血管形成
術）の補助としてのいずれかで、治療的化合物を送達するために使用される。標
準的カテーテルならびにより新しい薬物送達およびイオン導入カテーテルが利用
され得る。

【０２４０】 （Ｄ．直接的注射） 特定の血管化の乏しい空間（例えば、関節内関節空間）に関して、治療的化合
物の直接注射により、表面組織に生体結合体化し（ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）
得、そして薬物効果の所望される持続期間を達成し得る。他の適用は以下が挙げ
られ得る：骨髄内注射、腫瘍内注射、腟内注射、子宮内注射、腸管内注射、エウ
スターキオ管内注射、鞘内注射、皮下注射、関節内注射、腹腔内注射または眼内
注射ならびに気管支鏡を介して、経鼻胃管を介しておよび腎造瘻術を介する。

【０２４１】 （６．修飾された治療用ペプチド誘導体の存在のモニタリング） 本発明の別の局面は、生物学的サンプル（例えば、血液）における治療用ペプ
チドおよび／またはアナログ、あるいはそれらの誘導体および結合体の濃度を決
定する方法、ならびに修飾されたペプチドのペプチダーゼ安定性を決定する方法
に関する。哺乳動物宿主の血液は、１回以上、修飾された治療用ペプチド化合物
の存在についてモニターされ得る。宿主の血液の一部分またはサンプルを採取す
ることにより、治療用ペプチドが治療的活性であるのに十分な量で永続血液成分
に結合されているか否かを決定し得、そしてその後、血液中の治療用ペプチド成
分のレベルを決定し得る。所望される場合、治療用ペプチド誘導体分子がどの血
液成分に結合されるかもまた決定され得る。これは、非特異的治療用ペプチドを
使用する場合に特に重要である。特定のマレイミド治療用ペプチドに関して、血
清アルブミンおよびＩｇＧの半減期を算出することは、はるかに簡単である。

【０２４２】 治療用ペプチド、アナログ、誘導体および結合体の濃度を決定する１つの方法
は、治療用ペプチドまたは治療用ペプチドアナログあるいはそれらの誘導体およ
び結合体に特異的な抗体を使用すること、ならびにこのような治療用ペプチド、
アナログ、および／またはそれらの誘導体または結合体と潜在的に関連する毒性
に対する処置としての抗体を使用することである。これは、患者において、イン
ビボで、治療用ペプチドの安定性および寿命の増加が、処置の間の新規の問題（
毒性に関する可能性の増加を含む）を導き得るので有利である。しかし、いくつ
かの場合、従来の抗体アッセイが、切断される治療用ペプチドと切断されない治
療用ペプチドとの間の相違を認識し得ないことが言及されるべきである。このよ
うな場合、他のアッセイ技術が使用され得る（例えば、ＬＣ／ＭＳ）（液体クロ
マトグラフィー／質量分析法）。

【０２４３】 特定の治療用ペプチド、そのアナログまたは誘導体に特異性を有する抗体（モ
ノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれか）の使用は、任意のこの
ような問題を仲裁する際に補助し得る。抗体は、特定の治療用ペプチド、そのア
ナログもしくは誘導体を用いて、またはその因子の免疫原性フラグメント、ある
いはこの因子の抗原決定基に対応する合成された免疫原を用いて免疫された宿主
から生成され得るか、またはそれらに由来し得る。好ましい抗体は、治療用ペプ
チドまたは治療用ペプチドアナログのネイティブな形態、誘導体化形態、および
結合体化形態に対して、高い特異性および親和性を有する。このような抗体はま
た、酵素、蛍光色素、または放射性標識を用いて標識され得る。

【０２４４】 誘導体化された治療用ペプチドに特異的な抗体は、誘導体化された治療用ペプ
チド特異的抗体の誘導のために精製された治療用ペプチドを使用するすることに
より、産生され得る。抗体の誘導により、動物中への注射による免疫応答の刺激
のみならず、合成抗体または他の特異的結合分子の産生における類似の工程（例
えば、組換え免疫グロブリンライブラリーのスクリーニング）も意図される。モ
ノクローナル抗体およびポリクローナル抗体の両方が、当該分野で周知の手順に
より産生され得る。いくつかの場合、モノクローナル抗体の使用は、ポリクロー
ナル抗体よりも好適であり得る（例えば、分解がエピトープ／抗体認識の及ばな
い領域にわたって起こる場合）。

【０２４５】 抗体が、治療用ペプチド、そのアナログまたは誘導体の投与により誘導された
毒性を処置するために使用され得、そしてエキソビボまたはインビボで使用され
得る。エキソビボの方法は、固体支持体に固定された抗体を使用する、毒性に対
する免疫透析処置を含む。インビボの方法は、抗体−薬剤複合体のクリアランス
を誘導するのに有効な量の抗体の投与を含む。

【０２４６】 抗体は、無菌条件下で抗体と血液を接触させることにより、エキソビボで患者
の血液から、治療用ペプチド、そのアナログまたは誘導体、およびその結合体を
除去するために使用され得る。例えば、抗体は、カラムマトリックス上に固着（
ｆｉｘ）され得るかまたはさもなくば固定化（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅ）され得、
そして患者の血液が、その患者から取り出され得、そしてそのマトリックスに通
過され得る。治療用ペプチドアナログ、誘導体または結合体が、抗体に結合しそ
して低濃度の治療用ペプチド、アナログ、誘導体または結合体を含む血液が、次
いで、患者の循環系に戻され得る。除去される治療用ペプチド化合物の量は、圧
力および流速を調整することにより、制御され得る。患者の血液の血漿成分由来
の治療用ペプチド、アナログ、誘導体および結合体の優先的な除去は、例えば、
半透膜の使用により、またはさもなくば、抗治療抗体を含むマトリックスを血漿
成分が通過する前に、当該分野で公知の方法により細胞成分から血漿成分をまず
分離することにより、もたらされ得る。あるいは、治療用ペプチド結合体化血球
（赤血球細胞を含む）の優先的な除去は、患者の血液中の血球を回収し、そして
濃縮し、ならびに患者の血液の血清成分の排除に対してそれらの細胞を、固着さ
れた抗治療抗体と接触させることによりもたらされ得る。

【０２４７】 抗体は、処置のために、治療用ペプチド、アナログ、誘導体または結合体を受
容している患者に、インビボで非経口的に投与され得る。抗体は、治療用ペプチ
ド化合物および結合体に結合する。一旦治療用ペプチドに結合されると、活性は
、完全にはブロックされないとしても、妨げられ、それにより患者の血流中の治
療用ペプチド化合物の生物学的有効濃度を低減し、そして有害な副作用を最少に
する。さらに、結合された抗体−治療用ペプチド複合体は、患者の血流からの治
療用ペプチド化合物および結合体のクリアランスを容易にする。

【０２４８】 十分に記載されている本発明を、ここで以下の限定されない実施例により例示
する。

【０２４９】 （実施例） （Ａ．改変された治療用ペプチドの合成の一般方法） １００μｍｏｌの規模での、改変されたペプチドの固相ペプチド合成を、Ｆｍ
ｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、Ｏ−ベ
ンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘ
キサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）溶液およびＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）での活性化用いてＳｙｍｐｈｏ
ｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行し、そしてＦｍｏｃ基
のピペリジン脱保護を行った（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％の
ピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−マレイミドプロピオン酸（
３−ＭＰＡ）のカップリング、酢酸のカップリングまたは１つまたは複数のＦｍ
ｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングのいずれかを行い、続いて３−ＭＰＡのカップリ
ングを行う（工程３）。樹脂の切断および生成物の単離を、８６％ ＴＦＡ／５
％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニソールおよび２％のフェノールを用
いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。
生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍ
ｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ
ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å
、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調
製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。
生成物は、ダイオードアレイ検出器を備えるＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ
ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によりそ
してエレクトロスプレーイオン化を用いて決定される場合、＞９５％の純度を有
するべきである。

【０２５０】 （Ｂ．ネイティブペプチド鎖の変更） ペプチドの改変を容易にするために、１以上のアミノ酸残基を、実施例１〜５
に記載されるようにペプチドに付加し得、そして／または１以上のアミノ酸残基
を、他のアミノ酸残基で置換し得る。この変更は、反応性基の結合を援助する。

【０２５１】 （実施例１ クリングル−５のＣ末端でのＬｙｓの付加。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａ
ｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂．３ＴＦＡの
調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ。樹脂
に結合したアミノ酸のＮ末端でのＦｍｏｃ基の逆ブロック化を、ＤＭＦ中の２０
％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、ア
ミノ酸カップリングに類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切断を、上記の
通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そして調製
用ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の際に所望の生成物を白色固体として得た。

【０２５２】 （実施例２ クリングル−５のＣ末端でのＬｙｓの付加。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ｌ
ｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂．２ＴＦＡ．３ＴＦＡ
の調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ。樹脂に結合したアミノ酸のＮ末
端でのＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１
５〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、アミノ酸カップリングと類似の
条件下で実行した。樹脂からの最終切断を、上記の通りに切断混合物を用いて実
行した。生成物を、沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製し、凍
結乾燥の際に所望の生成物を白色固体として得た。

【０２５３】 （実施例３ クリングル−５のＮ末端でのＬｙｓの付加。ＮＡｃ−Ｔｙｒ−Ｔ
ｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔ
ｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ２．３ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ。樹脂に結合した
アミノ酸のＮ末端でのＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジ
ンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、アミノ酸カップ
リングと類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切断を、上記の通りに切断混
合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣに
より精製し、凍結乾燥の際に所望の生成物を白色固体として得た。

【０２５４】 （実施例４ クリングル−５のＮ末端におけるＬｙｓの付加。Ｃｙｓの位置５
２４におけるＡｌａでの置換。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌ
ｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｌａ⁵²⁴−Ｔｙｒ−
Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−
Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂．４ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌ
ａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌ
ｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓ
ｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒ
ｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−
ＯＨ。樹脂に結合したアミノ酸のＮ末端でのＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ
中の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップリン
グを、アミノ酸カップリングと類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切断を
、上記の通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そ
して調製用ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の際に所望の生成物を白色固体とし
て得た。

【０２５５】 （実施例５ クリングル−５のＮ末端におけるＬｙｓの付加。ＮＡｃ−Ａｒ
ｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ。樹脂に結合したアミノ酸のＮ末端でのＦｍｏｃ基の逆ブロック
を、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて１５〜２０分間実行した。酢酸のカ
ップリングを、アミノ酸カップリングと類似の条件下で実行した。樹脂からの最
終切断を、上記の通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単
離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の際に所望の生成物を白色
固体として得た。

【０２５６】 （実施例６ Ｄ−Ａｌａ２ ＧＬＰ−１（７−３６）アミドの調製） １００μｍｏｌの規模での、ＧＬＰ−１アナログの固相ペプチド合成を、手動
固相合成ならびに、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂、Ｆｍｏ
ｃ保護アミノ酸、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テ
トラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）のＮ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液およびＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）での
活性化を用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを
用いて実行し、そしてＦｍｏｃ基のピペリジン脱保護を行った（工程１）。樹脂
の切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％のチオアニ
ソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ ₂ Ｏにより沈殿させる（工程２）。生成物をＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製
用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％
ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）
を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２
１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ Ｕ
ＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣによ
り９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、所望のペプチドをＲＰ−ＨＰ
ＬＣによって決定された通りに＞９５％純度で得る。これらの工程を、以下の概
略ダイヤグラム中に図示する。

【０２５７】

【化１３】 （Ｃ．システインを含まないペプチドからの改変されたペプチドの調製） 複数の保護官能基を含有しかつシステインを含有しない治療用ペプチドからの
マレイミドペプチドの調製を、以下に記載の通りのペプチドの合成により例示す
る。このペプチドを、Ｎ末端、Ｃ末端またはＮ末端とＣ末端との間に位置するア
ミノ酸にて改変し得る。この改変されたペプチドを、天然のペプチド配列のＮ末
端を切断（ｌｉｎｋｉｎｇ ｏｆｆ）するか、または天然のペプチド配列の改変
されたＣ末端を切断することにより合成する。１以上のさらなるアミノ酸を、治
療用ペプチドに付加し、反応性基の結合を容易にし得る。

【０２５８】 （１．Ｃ末端での治療用ペプチドの改変） （実施例７ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるＲＳＶペプチ
ドの改変。Ｖａｌ−ｌｌｅ−Ｔｈｒ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ
−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ
−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ
−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−（Ｎε
−ＭＰＡ）の調製。） １００μｍｏｌ規模での、ＤＡＣアナログの固相ペプチド合成を、手動の固相
合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＳｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍ
ｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護アミノ
酸を、連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（
Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖ
ａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅ
ｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−
１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホス
フェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて
活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。
Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣ
ｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰ
ｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ３（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する
（工程３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプ
チドを、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフ
ェノールを用いて樹脂から切断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏ
により沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用
バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ Ｔ
ＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を
用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１
ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶ
Ｄ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより
９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定す
るように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。

【０２５９】 （実施例８ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるＤｙｎ Ａ
１−１３の改変−Ｄｙｎ Ａ １−１３（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂ Ｔｙｒ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌ
ｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂の合成） １００μｍｏｌ規模での、Ｄｙｎ Ａ １−１３の固相ペプチド合成を、手動
の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒおよ
びＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の保護
アミノ酸を、連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒ
ｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−Ｈ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリア
ゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフル
オロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）
を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間で達成する（工
程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬ
のＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰ
ｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）
。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡ
ｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄
した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動
化する（工程３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。こ
のペプチドを、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５
％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥ
ｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）
調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５
％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶
出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ
ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣ
により９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって
決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。

【０２６０】 この生成物の構造は、以下：

【０２６１】

【化１４】 である。

【０２６２】 （実施例９ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるＤｙｎ Ａ
２−１３の改変−Ｄｙｎ Ａ ２−１３（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂ Ｇｌｙ−Ｇ
ｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂の合成） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、連続的にＲｉｎｋ Ａｍ
ｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、およびＢｏｃ−
Ｇｌｙ−ＯＨ。手動合成を、残りの工程について使用した：ＤＭＦ中のＨＢＴＵ
／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活性化を用いるＭｔｔ基の選択的除去およびＭＰＡのカッ
プリング。標的ダイノルフィンアナログを、樹脂から除去した；生成物を、沈殿
により単離し、そして調製的ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥の際に３５％収
率で白色固体として所望の生成物を得た。分析的ＨＰＬＣは、生成物がＲ_t＝３
０．４２分で＞９５％純度であると示した。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ₇₃Ｈ₁₂₃
Ｎ₂₅Ｏ₁₅（ＭＨ⁺）、計算値１５９０．０、実測値 ＭＨ³⁺ ５３１．３。

【０２６３】 （実施例１０ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＤｙｎ
Ａ １−１３の改変−Ｄｙｎ Ａ １−１３（ＡＥＡ₃−ＭＰＡ）−ＮＨ₂ Ｔｙ
ｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−（ＡＥＡ₃−ＭＰＡ）−ＮＨ₂の合成） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、連続的にＲｉｎｋ Ａｍ
ｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌ
ｙ−ＯＨおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。手動合成を、残りの工程につ
いて使用した：Ｍｔｔ基の選択的除去、各カップリング間における３つのＦｍｏ
ｃ−ＡＥＡ−ＯＨ基（ＡＥＡ＝アミノエトキシ酢酸）のＦｍｏｃ除去を用いるカ
ップリング、およびＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活性を用いるＭＰ
Ａ酸。標的ダイノルフィンアナログを、樹脂から除去した；生成物を、沈殿によ
り単離し、そして調製的ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥の際に２９％収率で
白色固体として所望の生成物を得た。分析的ＨＰＬＣは、生成物がＲ_t＝３３．
０６分で＞９５％純度であると示した。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ₉₄Ｈ₁₅₄Ｎ₂₉
Ｏ₂₃（ＭＨ⁺）、計算値２０５７．２、実測値 ＭＨ⁴⁺ ５１５．４、ＭＨ³⁺
６８６．９、ＭＨ²⁺ １０２９．７。

【０２６４】

【化１５】 （実施例１１ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＤｙｎ
Ａ ２−１３の改変−Ｄｙｎ Ａ ２−１３（ＡＥＡ₃−ＭＰＡ）−ＮＨ₂ ＧＩ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−（ＡＥＡ₃−ＭＰＡ）−ＮＨ₂の合成） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、連続的にＲｉｎｋ Ａｍ
ｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−
Ｇｌｙ−ＯＨ。手動合成を、残りの工程について使用した：Ｍｔｔ基の選択的除
去、各カップリング間における３つのＦｍｏｃ−ＡＥＡ−ＯＨ基とＦｍｏｃ除去
を用いるカップリング、およびＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活性を
用いるＭＰＡ。標的ダイノルフィンアナログを、樹脂から除去した；生成物を、
沈殿により単離し、そして調製的ＨＰＬＣにより精製して、凍結乾燥の際に２９
％収率で白色固体として所望の生成物を得た。分析的ＨＰＬＣは、生成物がＲ_t
＝３１．８８分で＞９５％純度であると示した。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ₈₅Ｈ ₁₄₅ Ｎ₂₅Ｏ₂₁（ＭＨ⁺）、計算値１８９４．３、実測値 ＭＨ⁴⁺ ４７４．６、Ｍ
Ｈ³⁺ ６３２．４、ＭＨ²⁺ ９４８．１０。

【０２６５】

【化１６】 （実施例１２ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるニューロ
ペプチド Ｙの改変−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｓ
ｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓ
ｐ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙ
ｓ−（Ｎ−εＭＰＡ）−ＮＨ₂の調製） １００μｍｏｌ規模での、改変されたニューロペプチド Ｙアナログの固相ペ
プチド合成を、手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔ
ｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実
行する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（
Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌ
ａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配
列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラ
メチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロ
ピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、
２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を
用いて２０分間活性化する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を
、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０
．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理するこ
とによって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ
）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およ
びＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリ
ピオン酸の添加のために再自動化する（工程３）。すべてのカップリングの間に
、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプ
ロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／
５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて
、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５
５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５
％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖ
ａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を
用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製
し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得
る。

【０２６６】 （実施例１３ Ｃ末端アルギニンにおけるＧＬＰ−１（７−３６）の改変−Ｇ
ＬＰ−１（７−３６）−ＥＤＡ−ＭＰＡの調製） １００μｍｏｌ規模での、改変されたＧＬＰ−１アナログの固相ペプチド合成
を、手動でかつＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ
ＳＡＳＲＩＮ（超酸感応性樹脂）上で実行する。以下の保護アミノ酸を、連続的
に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｃｏ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−
ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１
−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフ
ェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活
性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。完
全に保護されたペプチドを、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭを用いる処置によって樹脂か
ら切断する（工程２）。次いで、エチレンジアミンおよび３−マレイミドプロピ
オン酸を、遊離のＣ末端に連続的に付加する（工程３）。次いで、保護基を、切
断し、そして生成物を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％の
チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて単離し、続いて、ドライアイス
で冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ
Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよび
ＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および
２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５
ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシ
ステムを用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決
定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概
略ダイアグラム中に例示する。

【０２６７】

【化１７】 （実施例１４ Ｃ末端セリンにおけるエキセンディン−４の改変。エキセンデ
ィン−４（１−３９）−ＥＤＡ−ＭＰＡの調製） １００μｍｏｌ規模での、改変されたエキセンディン−４アナログの固相ペプ
チド合成を、手動でかつＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｚｅｒ ＳＡＳＲＩＮ（超酸感応性樹脂）上で実行する。以下の保護アミノ酸を
、連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐ
ｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂ
ｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉ
ｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に
溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ
’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）
およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ
保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。完全に保護されたペプ
チドを、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭを用いる処理によって樹脂から切断する（工程２
）。次いで、エチレンジアミンおよび３−マレイミドプロピオン酸を、遊離のＣ
末端に連続的に付加する（工程３）。次いで、保護基を、切断し、そして生成物
を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％のチオアニソールおよ
び２％のフェノールを用いて単離し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂
Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８
μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒ
ｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備え
たＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いる
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて、調
製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９
５％純度で所望のＤＡＣを得る。

【０２６８】

【化１８】 （実施例１５ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるセクレチン
ペプチドの改変。Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−
Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−
Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−
Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂の調製） １００μｍｏｌ規模での、改変されたセクレチンペプチドアナログの固相ペプ
チド合成を、手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実行
する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａ
ｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅ
ｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈ
ｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中
に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，
Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ
）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏ
ｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）
基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯ
Ａｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時
間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨ
Ｃｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（
６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、
３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程３）。すべての
カップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗
浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％ ＴＦ
Ａ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂
から切断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工
程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシ
ステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅ
ｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムお
よびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４お
よび２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８
０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度
で所望のＤＡＣを得る。

【０２６９】 （実施例１６ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるクリング
ル−５の改変。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔ
ｙｒ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） １００μｍｏｌ規模での、改変されたクリングル−５ペプチドの固相ペプチド
合成を、手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実行した
。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏ
ｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｐｒｏ−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し
、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ
’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）および
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基
の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。合成の終りに、無水酢酸を、
Ｎ末端をアセチル化するために添加した。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護
を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：
０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理する
ことによって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍ
Ｌ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、お
よびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプ
リピオン酸の添加のために再自動化する（工程３）。すべてのカップリングの間
に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソ
プロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ
／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続い
て、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を
、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜
５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４
５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（
Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）
を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精
製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを
得る。

【０２７０】 （実施例１７ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル
−５の改変。ＮＡｃ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．２
ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ（工程１）。樹
脂結合アミノ酸のＮ末端におけるＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％
のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。樹脂からの最終切断を、上記
の通りに切断混合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そしてＨ
ＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の際に白色固体として所望の生成物を得た。Ｌｙ
ｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃
：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃
）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次いで、
この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５
ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次い
で、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工
程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％
チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイ
スで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ
（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂
Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ
（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフ
ェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ
Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調
製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。

【０２７１】 （実施例１８ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル
の改変。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−
Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−（Ｎε−
ＭＰＡ）−ＮＨ₂．３ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ末端のＦｍ
ｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分
間実行した。酢酸のカップリングを、アミノ酸のカップリングと類似の条件下で
実行した。樹脂からの最終切断を、上記の通りに切断混合物を用いて実行した。
生成物を、沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精製し、凍結乾燥の
際に白色固体として所望の生成物を得た。

【０２７２】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化した
（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／
５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライ
アイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉ
ａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（
Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦ
Ａ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μの
フェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａ
ｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、
調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。

【０２７３】 （実施例１９ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル
−５の改変。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａ
ｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ− （Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．
ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ
（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で
実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中
に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによっ
て達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ
（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸
の添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５
％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用
いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工
程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシ
ステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅ
ｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムお
よびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４お
よび２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８
０分にわたって精製した。

【０２７４】 （実施例２０ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル
−５の改変。ＮＡｃ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙ
ｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。樹脂結合アミノ
酸のＮ末端におけるＦｍｏｃ基の逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジン
を用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、アミノ酸のカップ
リングと類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切断を、上記の通りに切断混
合物を用いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣに
より精製し、凍結乾燥の際に白色固体として所望の生成物を得た。Ｌｙｓ（Ａｌ
ｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ
：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液
で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を
、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、Ｄ
ＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合
成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化した（工程３）。樹
脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニ
ソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却さ
れたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎ
ｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．
０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の
勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘ
キシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａ
ｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相Ｈ
ＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。

【０２７５】 （実施例２１ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル
−５の改変。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙ
ｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ末
端のＦｍｏｃ基における逆ブロックを、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて
約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップリングを、アミノ酸のカップリングと
類似の条件下で実行した。樹脂からの最終切断を、上記の通りに切断混合物を用
いて実行した。生成物を、沈殿により単離し、そしてＨＰＬＣにより精製し、凍
結乾燥の際に白色固体として所望の生成物を得た。

【０２７６】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化した
（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／
５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライ
アイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉ
ａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（
Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦ
Ａ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μの
フェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａ
ｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、
調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。

【０２７７】 （実施例２２ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ酸基におけるクリン
グル−５の改変。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−
Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（
Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ
（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ末端におけるＦｍｏｃ基の逆ブロックを、Ｄ
ＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップ
リングを、アミノ酸のカップリングと類似の条件下で実行した。Ｌｙｓ（Ａｌｏ
ｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：
ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次いで、この樹脂を、
ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成
を、添加のために再自動化した（工程３）。次いで、この合成を、ＡＥＥＡ（ア
ミノエトキシエトキシ酢酸）基および３−マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）の
添加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％
ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用い
て実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させた（工程
４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシス
テム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃Ｃ
Ｎ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎ
ｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよ
びＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４およ
び２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０
分にわたって精製した。

【０２７８】 （実施例２３ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるクリングル
−５の改変。ＮＡｃ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙ
ｒ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＡＥＥＡ_n−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（
Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ
（工程１）。樹脂結合アミノ酸のＮ末端におけるＦｍｏｃ基の逆ブロックを、Ｄ
ＭＦ中の２０％のピペリジンを用いて約１５〜２０分間実行した。酢酸のカップ
リングを、アミノ酸のカップリングと類似の条件下で実行した。

【０２７９】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
この合成を、添加のために再自動化した。次いで、この合成を、３−マレイミド
プリピオン酸（ＭＰＡ）およびＡＥＥＡ（アミノエトキシエトキシ酢酸）基の添
加のために再自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％
ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて
実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４
）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステ
ム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ
中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅ
ｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよび
ＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および
２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分
にわたって精製した。

【０２８０】 （実施例２４ 付加されたＣ末端リジン残基のεアミノ基におけるＧＬＰ−１
の改変。ＧＬＰ−１（１−３６）−Ｌｙｓ³⁷（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．５ＴＦ
Ａ；Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．５ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｐｂｆ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ
−Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ
（工程１）。

【０２８１】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再
自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続い
て、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を
、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜
５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４
５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（
Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）
を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精
製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａ
ｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン
化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有し
た。これらの工程は、以下の概略ダイアグラムに図示される。

【０２８２】

【化１９】 （実施例２５ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＧＬＰ−
１の改変。ＧＬＰ−１（１−３６）−Ｌｙｓ³⁷（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−Ｍ
ＰＡ）−ＮＨ₂．５ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ
−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ
−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ
−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ
−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−Ｎ
Ｈ₂．５ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｐｂｆ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ
−Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ−Ｔｒｔ）−Ｏ
Ｈ（工程１）。

【０２８３】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミノエトキシエトキシ酢酸）基および
３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）
。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオ
アニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷
却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の
０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ）
）の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙ
ｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆
相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、
ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１
１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有し、ＥＳＩ−ＭＳ ｍ
／ｚ：Ｃ₁₇₄Ｈ₂₆₅Ｎ₄₄Ｏ₅₆（ＭＨ⁺）、計算値３８６８、実測値［Ｍ＋Ｈ₂］²⁺１
９３４、［Ｍ＋Ｈ₃］³⁺１２９０、［Ｍ＋Ｈ₄］⁴⁺９６７であった。これらの工程
を、以下の概略ダイアグラムに図示する。

【０２８４】

【化２０】 （実施例２６ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＧＬＰ−
１の改変。ＧＬＰ−１（７−３６）−Ｌｙｓ³⁷（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．４Ｔ
ＦＡ；Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａ
ｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａ
ｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖ
ａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．４ＴＦＡの
調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｐｂｆ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ
−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。

【０２８５】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再
自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続い
て、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させた（工程４）。生成物を
、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜
５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４
５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（
Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）
を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精
製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａ
ｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン
化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有し
た。

【０２８６】 （実施例２７ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ酸基におけるＧＬＰ
−１の改変。ＧＬＰ−１（７−３６）−Ｌｙｓ³⁷（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−
ＭＰＡ）−ＮＨ₂．４ＴＦＡ Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈ
ｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌ
ａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＡＥＥ
Ａ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ²．４ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｐｂｆ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｎ
−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。

【０２８７】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミノエトキシエトキシ酢酸）基および
３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）
。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオ
アニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷
却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の
０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ）
）の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙ
ｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆
相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、
ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１
１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。

【０２８８】 （実施例２８ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＤ−Ａｌ
ａ²ＧＬＰ−１の改変。Ｄ−Ａｌａ²ＧＬＰ−１（７−３６）−Ｌｙｓ³⁷（Ｎε−
ＭＰＡ）−ＮＨ₂．４ＴＦＡ Ｈｉｓ−ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−
Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−
Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−
Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−Ｍ
ＰＡ）−ＮＨｈ₂．４ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｐｂｆ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ
（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。

【０２８９】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再
自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続い
て、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を
、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜
５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４
５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（
Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）
を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精
製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａ
ｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン
化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有し
た。これらの工程を、以下の概略ダイアグラムに図示する。

【０２９０】

【化２１】 （実施例２９ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＤ−Ａｌ
ａ²ＧＬＰ−１の改変。Ｄ−Ａｌａ²ＧＬＰ−１（７−３６）−Ｌｙｓ³⁷（Ｎε−
ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．４ＴＦＡ Ｈｉｓ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌ
ｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅ
ｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．４ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（ｔＢｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｐｂｆ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｄ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ
（Ｎ−Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。

【０２９１】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミノエトキシエトキシ酢酸）基および
３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）
。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオ
アニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷
却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の
０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ）
）の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙ
ｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆
相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、
ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１
１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。これらの工程を
、以下の概略ダイアグラムに図示する。

【０２９２】

【化２２】 （実施例３０ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるエキセジ
ン−４（１−３９）の改変。エキセンジン−４（１−３９）−Ｌｙｓ⁴⁰（Ｎε−
ＭＰＡ）−ＮＨ₂；Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ
−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ
−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ
−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ
−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ （Ｎε−ＭＰＡ）−ＮＨ ₂ ．５ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｂｐｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇ
ｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。

【０２９３】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再
自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続い
て、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を
、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜
５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４
５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（
Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）
を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精
製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａ
ｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン
化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有し
た。これらの工程を、以下の概略ダイアグラムに図示する。

【０２９４】

【化２３】 （実施例３１ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるエキセン
ジン−４（１−３９）の改変。エキセジン４（１−３９）−Ｌｙｓ⁴⁰（Ｎε−Ａ
ＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．５ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇ
ｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇ
ｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐ
ｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐ
ｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌ
ｙｓ（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．５ＴＦＡ 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｂｐｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖ
ａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙ
ｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程
１）。

【０２９５】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミノエトキシエトキシ酢酸）基および
３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）
。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオ
アニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷
却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の
０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ）
）の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙ
ｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆
相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、
ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１
１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。これらの工程を
、以下の概略ダイアグラムに図示する。

【０２９６】

【化２４】 （実施例３２ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるエキセン
ジン−３（１−３９）の改変。エキセンジン−３（１−３９）−Ｌｙｓ⁴⁰（Ｎε
−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．５ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐ
ｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇ
ｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇ
ｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓ
ｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ（Ｎε−ＭＰ
Ａ）−ＮＨ₂．５ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｂｐｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。

【０２９７】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再
自動化した（工程３）。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続い
て、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を
、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜
５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４
５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ
１０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（
Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）
を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精
製した。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａ
ｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン
化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有し
た。これらの工程を、以下の概略ダイアグラムに図示する。

【０２９８】

【化２５】 （実施例３３ 付加されたＣ末端リジン残基のε−アミノ基におけるエキセン
ジン−３（１−３９）の改変。エキセンジン−３（１−３９）−Ｌｙｓ⁴⁰（Ｎε
−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）−ＮＨ₂．５ＴＦＡ；Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ
−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ
−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ
−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ
−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ
−Ｌｙｓ（Ｎε−ＡＥＥＡ−ＡＥＥＡ−ＭＰＡ）ＮＨ₂．５ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を使用して、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｂｐｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａ
ｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（
ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅ
ｒ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（工程１）。

【０２９９】 Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨ
Ｃｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（Ｐ
Ｐｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成した（工程２）。次い
で、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。
次いで、この合成を、２つのＡＥＥＡ（アミノエトキシエトキシ酢酸）基および
３−マレイミドプリピオン酸（ＭＰＡ）の添加のために再自動化した（工程３）
。樹脂切断および生成物の単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオ
アニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷
却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａ
ｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の
０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ）
）の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル
−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙ
ｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆
相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製した。生成物は、
ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１
１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−Ｈ
ＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。

【０３００】 （実施例３４ Ｃ末端におけるＨＩＶ−１ ＤＰ １７８の改変。改変された
ＨＩＶ−１ ＤＰ １７８抗融合誘導ペプチド Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅ
ｕ−ｌｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌ
ｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｓｅ
ｒ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−（Ｎε−ＭＰＡ）−Ｎ
Ｈ₂の調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔ
ｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒ
ｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｔｂ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌ
ｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
ＨおよびＢｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。手動合成を、残りの工程について使
用する：Ｍｔｔ基の選択的除去およびＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ
活性を用いるマレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）のカップリング。標的分子を、
樹脂から除去する；生成物を沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精
製して、所望の生成物を凍結乾燥の際に白色固体として得る。

【０３０１】 （実施例３５ Ｃ末端におけるＨＩＶ−１ ＤＰ １０７の改変。改変された
ＨＩＶ−１ ＤＰ １０７抗融合誘導ペプチド Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅ
ｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−ｌｌｅ−Ｌｙ
ｓ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａ
ｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−（Ｎ
ε−ＭＰＡ）−ＮＨ₂の調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加した：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ
（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ。手動合成を、残りの工程について使用す
る：Ｍｔｔ基の選択的除去およびＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ／ＤＩＥＡ活性
を用いるマレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）のカップリング。標的アナログを、
樹脂から除去する；生成物を沈殿により単離し、そして調製用ＨＰＬＣにより精
製して、所望の生成物を凍結乾燥の際に白色固体として得る。

【０３０２】 （２．Ｎ末端における治療用ペプチドの改変） （実施例３６ 付加されたＮ末端リジン残基のε−アミノ基におけるＲＳＶペ
プチドの改変。（Ｎε−ＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−ｌｌｅ−Ｔｈｒ−ｌｌｅ−
Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−
Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−
Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−
Ａｌａ−Ｖａｌの調製） １００μｍｏｌの規模での、改変されたＲＳＶペプチドの固相ペプチド合成を
、手動固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ
およびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実行する。以下の
保護アミノ酸を、樹脂に連続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙ
ｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（
Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解させ、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾト
リアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ
）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶液を用いて２０分間で達成す
る（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして
５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当
量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（
工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％
ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ
）で洗浄する。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のため
に再自動化する（工程３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄
する。このペプチドを、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソール
および５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて、ドライアイスで冷却
されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉ
ｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０
．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））
の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−
ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎ
ａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相
ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣ
によって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。

【０３０３】 （実施例３７ 付加されたＮ末端リジン残基のε−アミノ基におけるニューロ
ペプチド Ｙの改変。（Ｎ−εＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌ
ｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｐ
ｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｓ
ｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕの調製） １００μｍｏｌの規模での、改変されたニューロペプチド Ｙの固相ペプチド
合成を、手動固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実行した。
以下の保護アミノ酸を、樹脂に連続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌ
ａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓ
ｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それ
らを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解させ、そして配列に従
って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル
ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチ
ルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶液を用い
て２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手
動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５
）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理すること
によって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）
、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、および
ＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピ
オン酸の添加のために再自動化する（工程３）。すべてのカップリングの間に、
樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロ
パノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５
％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて、
ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖ
ａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５
％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％
ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １
０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａ
ｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用
いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し
、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る
。

【０３０４】 （実施例３８ 付加されたＮ末端リジン残基のε−アミノ基におけるニューロ
ペプチド Ｙの改変。（Ｎ−εＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌ
ｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｐ
ｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｓ
ｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕの調製） １００μｍｏｌの規模での、改変されたニューロペプチド Ｙの固相ペプチド
合成を、手動固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実行する。
以下の保護アミノ酸を、樹脂に連続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌ
ａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓ
ｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏ
ｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それ
らを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解させ、そして配列に従
って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル
ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチ
ルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶液を用い
て２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手
動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５
）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理すること
によって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）
、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、および
ＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピ
オン酸の添加のために再自動化する（工程３）。すべてのカップリングの間に、
樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロ
パノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５
％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて、
ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖ
ａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５
％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％
ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １
０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａ
ｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用
いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し
、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る
。

【０３０５】 （実施例３９ 付加されたＮ末端リジン残基のεアミノ基におけるＤｙｎ Ａ
１−１３の改変−（Ｎε−ＭＰＡ）−Ｄｙｎ Ａ １−１３−ＮＨ₂ （Ｎε−
ＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ
−ｌｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕの合成） １００μｍｏｌの規模での、改変されたＤｙｎ Ａ １−１３アナログの固相
ペプチド合成を、手動固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔ
ｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実
行する。以下の保護アミノ酸を、樹脂に連続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（
Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌ
ｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）中に溶解させ、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル
−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（
ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する
。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０
％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンの溶液を用いて２０分間で達成する。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ
）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：Ｈ
ＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で
２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、
ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣ
Ｍ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで、この合成
を、３−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程３）。すべ
てのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３
回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％
ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて
樹脂から切断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる
（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬ
Ｃシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）および
ＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎ
ｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカ
ラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２
１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分に
て１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５
％純度で所望のＤＡＣを得る。

【０３０６】 （実施例４０ Ｎ末端グリシンにおけるＤｙｎ Ａ ２−１７−ＮＨ₂の改変
−ＭＰＡ−ＡＥＡ₃−Ｄｙｎ Ａ ２−１７−ＮＨ₂ （ＭＰＡ−ＡＥＡ−ＡＥＡ
−ＡＥＡ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ｌｌｅ−Ａｒ
ｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｇｌｕの合成
） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸およびマレイミドを、Ｒｉｎ
ｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒ
ｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＡＥＡ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ＡＥＡ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−ＡＥＡ−ＯＨおよびＭＰＡ。次いで、標的ダイノルフィンアナログを、
樹脂から除去した；生成物を、沈殿によって単離し、そして調製用ＨＰＬＣによ
り精製し、所望の生成物を凍結乾燥の際に３２％の収率で淡黄色固体として得た
。分析的ＨＰＬＣは、生成物が、Ｒｔ＝３３．４４分で＞９５％純度であること
を示した。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ₁₀₉Ｈ₁₇₂Ｎ₃₅Ｏ₂₉（ＭＨ⁺）、計算値２４
３６．８、実測値ＭＨ³⁺８１３．６。

【０３０７】

【化２６】 （実施例４２ 付加されたＮ末端リジン残基のε−アミノ基におけるクリング
ル−５の改変。（Ｎε−ＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−
Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） １００μｍｏｌの規模での、改変されたクリングル−５アナログの固相ペプチ
ド合成を、手動固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓ
ｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実行する
。以下の保護アミノ酸を、樹脂に連続的に付加する：Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌ
ｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解さ
せ、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）および
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基
の除去を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％（Ｖ／Ｖ）ピペ
リジンの溶液を用いて２０分間で達成する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の
選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ３：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ
（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間
樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣ
ｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６
×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで、この合成を、３
−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程３）。すべてのカ
ップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄
し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを、８５％ ＴＦＡ
／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて樹脂か
ら切断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ２Ｏにより沈殿させる（工程
４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシス
テム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃Ｃ
Ｎ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎ
ｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよ
びＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４およ
び２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０
分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で
所望のＤＡＣを得る。

【０３０８】 （実施例４３ Ｎ末端プロリンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−Ａ
ＥＥＡ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ
−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（
工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工
程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする。生じたＦｍｏｃ−ＡＥＥＡ
−ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いる脱保護は、その後の３−Ｍ
ＰＡの付加を可能にする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％ Ｔ
ＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニソールおよび２％のフェノ
ールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工
程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ
ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈ 、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎ
ｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精
製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａ
ｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン
化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有し
た。

【０３０９】 （実施例４４ Ｎ末端プロリンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂．
２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（
工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工
程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする（工程３）。樹脂切断および
生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニ
ソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ ₂ Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、
８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａ
ｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備
えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用い
るＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調
製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨ
ｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつ
エレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定す
る場合＞９５％純度を有した。

【０３１０】 （実施例４５ Ｎ末端チロシンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−Ａ
ＥＥＡ）−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ
−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）ＯＨ（工程１）。
末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続
いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングをする。生じたＦｍｏｃ−ＡＥＥＡ−
ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いる脱保護は、その後の３−ＭＰ
Ａの付加を可能にする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％ ＴＦ
Ａ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニソールおよび２％のフェノー
ルを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程
４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、
２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ
ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、
６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉ
ｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製
する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒ
ｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化
を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した
。

【０３１１】 （実施例４６ Ｎ末端チロシンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）−
Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−
Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（工程１）
。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、
続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングをする（工程３）。樹脂切断および
生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニ
ソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ ₂ Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、
８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａ
ｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備
えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用い
るＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調
製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨ
ｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつ
エレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定す
る場合＞９５％純度を有した。

【０３１２】 （実施例４７ Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−
ＡＥＥＡ）−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｐｒ
ｏ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ₂．３ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、
２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリ
ングをする。生じたＦｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリ
ジンを用いる脱保護は、その後の３−ＭＰＡの付加を可能にする（工程３）。樹
脂切断および生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２
％ チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライア
イス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ_{1 8} 、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ
検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５
４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍ
カラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステ
ムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ検出
器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光
計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計に
よって決定する場合＞９５％純度を有した。

【０３１３】 （実施例４８ Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）
−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ
−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ₂．３ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、
２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡの
カップリングをする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％ ＴＦＡ
／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニソールおよび２％のフェノール
を用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４
）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２
１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ Ｕ
ＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６
０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ
）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製す
る。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ
ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を
用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。

【０３１４】 （実施例４９ Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−
ＡＥＥＡ）−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−ＮＨ₂．ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを
用いて達成し（工程２）、続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡのカップリングをする。
生じたＦｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ペプチドのＤＭＦ中の２０％のピペリジンを用いる
脱保護は、その後の３−ＭＰＡの付加を可能にする（工程３）。樹脂切断および
生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニ
ソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ ₂ Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、
８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａ
ｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備
えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用い
るＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調
製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨ
ｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつ
エレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定す
る場合＞９５％純度を有した。

【０３１５】 （実施例５０ Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）
−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ
−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−ＮＨ₂．ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（
Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを
用いて達成し（工程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする（工程３）
。樹脂切断および生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ
／２％ チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ
Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよび
ＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および
２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５
ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシ
ステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオードアレイ
検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ
分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光
計によって決定する場合＞９５％純度を有した。

【０３１６】 （実施例５１ Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−
ＡＥＥＡ）−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ₂．２Ｔ
ＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基
の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、Ｆｍｏｃ
−ＡＥＥＡのカップリングをする。生じたＦｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ペプチドのＤＭ
Ｆ中の２０％のピペリジンを用いる脱保護は、その後の３−ＭＰＡの付加を可能
にする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩ
Ｓ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行
し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を
、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５
ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）
（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイ
ナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は
、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−
１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−
ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。

【０３１７】 （実施例５２ Ｎ末端アルギニンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）
−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製
） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基
の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−ＭＰ
Ａのカップリングをする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％ Ｔ
ＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニソールおよび２％のフェノ
ールを用いて実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工
程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール
、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ
ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈ 、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎ
ｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精
製する。生成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａ
ｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン
化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有し
た。

【０３１８】 （実施例５３ Ｎ末端プロリンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ−Ａ
ＥＥＡ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−ＮＨ₂．２ＴＦ
Ａの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を
、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、Ｆｍｏｃ−ＡＥＥＡ
のカップリングをする。生じたＦｍｏｃ−ＡＥＥＡ−ペプチドのＤＭＦ中の２０
％のピペリジンを用いる脱保護は、その後の３−ＭＰＡの付加を可能にする（工
程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％
Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて
、ドライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａ
ｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラム
およびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４
および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ
×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰ
ＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生成物は、ジオード
アレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭＳ−１１００シ
リーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲＰ−ＨＰＬＣ質
量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。

【０３１９】 （実施例５４ Ｎ末端プロリンにおけるクリングル−５の改変。（ＭＰＡ）−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−ＮＨ₂．２ＴＦＡの調製） 自動ペプチド合成を用いて、以下の保護アミノ酸を、Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ
ＭＢＨＡ樹脂に連続的に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐ
ｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（工程１）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を
、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−ＭＰＡのカップ
リングをする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％
ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％ チオアニソールおよび２％のフェノールを用い
て実行し、続いて、ドライアイス冷却Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生
成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ
×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ
ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、
８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製
用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製する。生
成物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣ
ＭＳ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いる
ＲＰ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。

【０３２０】 （３．内部アミノ酸における改変） （実施例５５ Ｌｙｓ²⁶（ε−ＭＰＡ）ＧＬＰ−１（７−３６）−ＮＨ₂の合
成） １００μｍｏｌの規模での、改変されたＧＬＰ−１アナログの固相ペプチド合
成を、手動でかつＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂を用いるＳ
ｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行した。以下
の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加させた：Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒ
ｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅ
ｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔ
ｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ。それら
を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って
、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウ
ロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチル
アミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ
／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０
分間活性化する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実
行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に
溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって
達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ
中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（
６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプリピオン酸の
添加のために再自動化する（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％
ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％のチオアニソールおよび２％フェノ
ールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿さ
せる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモ
ジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎ
ａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａ
ｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（
Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣ
により精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望の
ＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略ダイアグラムに図示する。

【０３２１】

【化２７】 （Ｄ．１つの遊離システインを含有するペプチドからの改変されたペプチドの
調製） １つの遊離システインを含有する治療用ペプチドからのマレイミドペプチドの
調製を、以下に記載の通りのペプチドの合成によって例示する。このペプチドを
、Ｎ末端、Ｃ末端またはＮ末端とＣ末端との間に位置するアミノ酸にて改変し得
る。

【０３２２】 複数の保護官能基および１つの遊離システイン残基を有する複数のシステイン
残基すべて（すなわち、１つのシステイン残基を除くすべてのシステイン残基は
、ジスルフィドとして拘束される）を含有するペプチドからのマレイミドペプチ
ドの調製。実施例５のような天然配列における内部アミノ酸からの連結。遊離シ
ステイン残基は、キャップされるかまたは別のアミノ酸（例えば、アラニン、メ
チオニンなど）で置換されなければならない。

【０３２３】 ペプチドが、１つのシステインを含む場合、このシステインは、マレイミドの
付加の後キャップされたままでいなければならない。システインが、結合部位に
含まれる場合、潜在性が度の程度失われ、システインが、どの程度保護基にキャ
ップされているかという評価をしなければならない。システインが、キャップさ
れ得るままである場合、合成経路は、上記の実施例（ｉ）と同様である。１つの
システインを含む治療用ペプチドの例としては、Ｇ_α（Ｇ治療用ペプチド結合タ
ンパク質のαサブユニット）、ラット脳一酸化炭素シンセターゼブロックペプチ
ドの７２４−７３９フラグメント、ヒト［Ｔｙｒ０］インヒビンのαサブユニッ
ト１−３２、ＨＩＶエンベロープタンパク質の２５４−２７４フラグメントおよ
びＰ３４ｃｄｃ２キナーゼフラグメントが挙げられる。

【０３２４】 （１．Ｎ末端における改変） （実施例５６ 付加されたＮ末端リジンにおけるインヒビンペプチドの改変。
（Ｎε−ＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ
−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ
−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ
−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ
−Ａｒｇの調製） １００μｍｏｌの規模での、改変されたインヒビンペプチドアナログの固相ペ
プチド合成を、手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔ
ｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実
行する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ
（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔ
ｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌ
ａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｇｌｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂ
ｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓ
ｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙ
ｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ
−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベン
ゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘ
キサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（Ｄ
ＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペ
リジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化
する（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そし
て５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３
当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（
工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ
）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプロピオン酸の添加のため
に再自動化する（工程３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄
する。このペプチドを、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソール
および５％のフェノールを用いて樹脂から切断し、続いて、ドライアイスで冷却
されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉ
ｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０
．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））
の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−
ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎ
ａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相
ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣ
によって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。

【０３２５】 （実施例５７ Ｎ末端におけるＲＳＶ抗融合誘導ペプチドの改変。３−（ＭＰ
Ａ）−Ｖａｌ−ｌｌｅ−Ｔｈｒ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−ｌ
ｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａ
ｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌの調製） 最初に、システイン（Ｃｙｓ）を、ネイティブ配列内のメチオニン（Ｍｅｔ）
と置換した。１００μｍｏｌの規模での、改変された抗ＲＳＶアナログの固相ペ
プチド合成を、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上
で、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸
、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のＯ−ベンゾトリアゾール−１−
イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェ
ート（ＨＢＴＵ）およびＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）を用いる活性化を用い
て実行し、そしてＦｍｏｃ基のピペリジン脱保護をする（工程１）。末端Ｆｍｏ
ｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用いて達成し（工程２）、続いて、３−
ＭＰＡのカップリングをする（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８５％
ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用い
て実行し、、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工
程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシ
ステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅ
ｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムお
よびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４お
よび２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８
０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度
で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略ダイアグラムに図示する。

【０３２６】

【化２８】 （２．Ｃ末端における改変） （実施例５８ 付加されたＣ末端リジンにおけるインヒビンペプチドの改変。
（Ｎε−ＭＰＡ）−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ
−Ｇｌｙ−ｌｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ
の調製） １００μｍｏｌの規模での、改変されたインヒビンペプチドアナログの固相ペ
プチド合成を、手動の固相合成、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔ
ｈｅｓｉｚｅｒおよびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いて実
行する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ
（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌ
ｕ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−
ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１
−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフ
ェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活
性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ｌ
ｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ ₃ ：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃ ）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次いで、
この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５
ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次い
で、この合成を、３−マレイミドプロピオン酸の付加のために自動化する（工程
３）。すべてのカップリングの間に、樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）で３回洗浄し、そしてイソプロパノールで３回洗浄する。このペプチドを
、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノー
ルを用いて樹脂から切断し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより
沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナ
リーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（
Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて
、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×
２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ Ｉ
Ｉ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５
ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するよう
に、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。

【０３２７】 （実施例５９ Ｃ末端におけるＲＳＶ融合誘導ペプチドの改変。Ｖａｌ−ｌｌ
ｅ−Ｔｈｒ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−ｌｌｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｔｙ
ｒ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｖａｌ−（ＡＥＥＡ．ＭＰＡ）） 複数の保護官能基および１個のシステインを含有するペプチドからのマレイミ
ドペプチドの調製を、改変されたＲＳＶ融合誘導ペプチドの合成によって例示す
る。改変されたＲＳＶ融合誘導ペプチドを、以下の概略ダイアグラムによって例
示されるように、ナチュラルペプチド配列にリジン残基を付加させることによる
Ｃ末端の切断によって合成した。システイン残基が、ペプチド配列内に含まれ、
そしてペプチドの生物学的活性が本質的にない場合、この残基は、別のアミノ酸
（例えば、アラニン、メチオニンなど）と置換されなければならない。以下の合
成において、システイン（Ｃｙｓ）を、ネイティブＲＳＶ配列内のメチオニン（
Ｍｅｔ）と置換した。

【０３２８】 １００μｍｏｌの規模での、マレイミドＲＳＶ融合誘導ペプチドの固相ペプチ
ド合成を、手動の固相合成およびＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ
を用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ、Ｆｍｏ
ｃ保護アミノ酸、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のＯ−ベンゾトリ
アゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフ
ルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）を用いて実行し、ジイソプロピルエチルアミン
（ＤＩＥＡ）を用いて活性化し、Ｆｍｏｃ基のピペリジン脱保護をする（工程１
）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣ
ＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（
ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することによって達成する（工程２）。次
いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（
６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した
。次いで、この合成を、３−マレイミドプロピオン酸の付加のために自動化する
（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５
％ チオアニソールおよび５％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライア
イスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａ
ｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ ₂ Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣＨ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ
（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフ
ェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ
Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を用いて、調
製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて１８０分にわたって精製し、ＲＰ−
ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これら
の工程を、以下の概略ダイアグラムに図示する。

【０３２９】

【化２９】 （３．内部アミノ酸における改変） （実施例６０ Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−
ｌｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−ＶａｌにおけるＧαペプチ
ドの改変） 複数の保護官能基および１つのシステインを含有するペプチドからのマレイミ
ドペプチドの調製を、改変されたＧαペプチドの合成によって例示する。改変さ
れたＧαペプチドを、以下に記載のように内部アミノ酸における結合によって合
成する。

【０３３０】 システイン残基が、ペプチド配列内に含まれ、かつ本質的にペプチドの生物学
的活性がない場合において、この残基は、キャップされるかまたは別のアミノ酸
（例えば、アラニン、メチオニンなど）で置換される。１００μｍｏｌの規模で
の、改変されたＧαペプチドの固相ペプチド合成を、手動の固相合成およびＦｍ
ｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡを用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔ
ｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、Ｎ，Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド（ＤＭＦ）中Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ
’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）を用い
て実行し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）を用いて活性化し、Ｆｍｏｃ基のピ
ペリジン脱保護をする（工程１）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を、手
動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０．５
）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処理することに
よって達成する（工程２）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍＬ）、
ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、およびＤ
ＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプロピオ
ン酸の付加のために再自動化する（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８
５％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ チオアニソールおよび５％のフェノールを
用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（
工程４）。生成物を、Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣ
システム（：３０〜５５％Ｂ（Ｈ₂Ｏ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ａ）およびＣ
Ｈ₃ＣＮ中の０．０４５％ ＴＦＡ（Ｂ））の勾配溶出）を用いて、Ｐｈｅｎｏ
ｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μのフェニル−ヘキシル、２１ｍｍ×２５ｃｍカラ
ムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１
４および２５４ｎｍ）を用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより９．５ｍＬ／分にて
１８０分にわたって精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％
純度で所望のＤＡＣを得る。

【０３３１】 （Ｅ．ジスルフィド架橋で２つのシステインを含有するペプチドからの改変さ
れたペプチドの調製） ペプチドが、ジスルフィド結合として２つのシステインを含有する場合、ペプ
チドを、マレイミドの付加の前に支持体樹脂から切断する。本発明者らは、他の
ｔ−Ｂｏｃ保護リジンの存在下でリジンを選択的に脱保護するために、Ｍｔｔ基
で保護されたＬｙｓを付加させることを必要とする。すべての保護基は、カルボ
キシ末端（これは、支持体樹脂からの切断に起因して保護されないままでいる）
および２つのシステインを除いて存在し、これらは、ペプチドが樹脂から切断さ
れる場合に、脱保護される必要がある。穏やかな空気酸化は、ジスルフィド架橋
を与え、そしてこのペプチドは、この段階で精製され得る。次いで、液相化学は
、ジスルフィド架橋の存在下でＣ末端を活性化する必要があり、そしてマレイミ
ド（アミノ−アルキル−マレイミドを介する）をＣ末端に付加させる必要がある
。次いで、このペプチドを、脱保護する。ジスルフィド架橋として２つのシステ
インを含有する治療用ペプチドの例としては、ヒトオステオカルシン１−４９、
ヒト糖尿病関連ペプチド、ヒト／イヌ心房性ナトリウム利尿ペプチド、ウシバク
テネシン（ｂａｃｔｅｎｅｃｉｎ）、およびヒト［Ｔｙｒ０］−コルチスタチン
２９が挙げれる。

【０３３２】 ジスルフィド架橋で２つのシステインを含有する治療用ペプチドからのマレイ
ミドペプチドの調製は、以下に記載のようなペプチドの合成によって例示される
。このペプチドを、Ｎ末端、Ｃ末端、またはＮ末端とＣ末端との間に位置するア
ミノ酸において改変し得る。

【０３３３】 （１．Ｎ末端における改変） （実施例６１ Ｎ末端におけるＴＨ−１ペプチドの改変。（Ｎε−ＭＰＡ）Ｎ
Ｈ₂−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓの調製） 複数の保護官能基を含有しかつ全く遊離システイン残基を含有しない（すなわ
ち、すべてのシステイン残基は、ジスルフィド架橋として拘束される）ペプチド
からのチオール環化マレイミドペプチドの調製を、改変されたＴＨ−１ペプチド
の合成によって例示する。

【０３３４】 １００μｍｏｌの規模での、改変されたＴＨ−１ペプチドの固相ペプチド合成
を、手動で実行し、そしてＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂を
用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ、Ｆｍｏｃ
保護アミノ酸、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中Ｏ−ベンゾトリアゾ
ール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオ
ロホスフェート（ＨＢＴＵ）を用いて実行し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）
を用いて活性化し、Ｆｍｏｃ基のピペリジン脱保護をする（工程１）。Ａｃｍ基
の除去および樹脂ＤＡＣ上で環化を形成する２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を、
ＴＩ（ＣＦ₃ＣＯ）₂を用いて達成した（工程２）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、
２０％のピペリジンを用いて達成し、続いて、３−ＭＰＡのカップリングをする
（工程３）。樹脂切断および生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５
％ Ｈ₂Ｏ／２％のチオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続
いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物
を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２
５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ
）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μ
ｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バ
イナリーＨＰＬＣシステムを用いて、調製用逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成
物は、ジオードアレイ検出器を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ＬＣＭ
Ｓ−１１００シリーズ分光計を用いかつエレクトロスプレーイオン化を用いるＲ
Ｐ−ＨＰＬＣ質量分光計によって決定する場合＞９５％純度を有した。ＥＳＩ−
ＭＳ ｍ／ｚ：Ｃ₆₆Ｈ₉₅Ｎ₂₀Ｏ₂₆Ｓ₂（ＭＨ⁺）、１６４６．８、実測値：１６４
６．７。これらの工程を、以下の概略的ダイアグラムに図示する。

【０３３５】

【化３０】 （実施例６２ Ｎ−ＭＰＡ−Ｓｅｒ¹−ソマトスタチン−２８の合成） １００μｍｏｌの規模での、ＤＡＣ：ソマトスタチン−２８アナログの固相ペ
プチド合成を、手動でかつ、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂
を用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて
実行する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｃｙ
ｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１
−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフ
ェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活
性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ａ
ｃｍ基の除去およびジスルフィド架橋を形成する２つのＣｙｓ残基の生じる酸化
を、ヨウ素を用いて達成する（工程２）。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％の
ピペリジンを用いて達成し、続いて３−ＭＰＡのカップリングをする（工程３）
。樹脂切断および生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ
／２％のチオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドラ
イアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程４）。生成物を、Ｄｙｎ
ａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラ
ムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１
４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍ
ｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨ
ＰＬＣシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによ
って決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以
下の概略的ダイアグラムに例示する。

【０３３６】

【化３１】 （２．Ｃ末端における改変） （実施例６３ ソマトスタチン−２８−ＥＤＡ−ＭＰＡの合成） １００μｍｏｌの規模での、ＤＡＣ：ソマトスタチン−２８アナログの固相ペ
プチド合成を、手動でかつ、ＳＡＳＲＩＮ（超酸感応性樹脂）を用いるＳｙｍｐ
ｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行する。以下の保護
アミノ酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（
Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解
し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，
Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およ
びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護
基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（Ｄ
ＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。完全に保護されたペプチド
を、１％ ＴＦＡ／ＤＣＭを用いて樹脂から切断する（工程２）。Ａｃｍ基の除
去およびジスルフィド架橋を形成する２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を、ヨウ素
を用いて達成する（工程３）。次いで、エチレンジアミンおよび３−マレイミド
プロピオン酸を、連続的に遊離のＣ末端に付加する（工程４）。次いで、保護基
を切断し、そして生成物を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２
％のチオアニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライア
イスで冷却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程５）。生成物を、Ｄｙｎａｍ
ａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムお
よびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４お
よび２５４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×
２５ｃｍカラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬ
Ｃシステムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって
決定するように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の
概略的ダイアグラムに例示する。

【０３３７】

【化３２】 （３．内部アミノ酸における改変） （実施例６４ Ｌｙｓ¹⁴（ε−ＭＰＡ）−ソマトスタチン−２８の合成） １００μｍｏｌの規模での、ＤＡＣ：ソマトスタチン−２８アナログの固相ペ
プチド合成を、手動でかつ、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂
を用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行
する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（
Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏ
ｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ
）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ
、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−
イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェ
ート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性
化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ａｃ
ｍ基の除去およびジスルフィド架橋を形成する２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を
、ヨウ素を用いて達成する（工程２）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的脱保護を
、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８：１：０
．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４の溶液で２時間樹脂を処理する
ことによって達成する（工程３）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６×５ｍ
Ｌ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ）、お
よびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、この合成を、３−マレイミドプ
リピオン酸の添加のために再自動化する（工程４）。樹脂切断および生成物単離
を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％のチオアニソールおよ
び２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂
Ｏにより沈殿させる（工程５）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８
μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒ
ｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備え
たＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いる
Ｖａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製
用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５
％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略的ダイアグラムに例
示する。

【０３３８】

【化３３】 （Ｆ．複数のシステインを含有するペプチドからの改変されたペプチドの調製
） （１．Ｎ末端における改変） （実施例６５ Ｎ−ＭＰＡ−Ｃｙｓ¹−エンドセリン−１（１−２１）−ＯＨ
の合成） １００μｍｏｌの規模での、改変されたエンドセリン−１アナログの固相ペプ
チド合成を、手動でかつ、Ｆｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂を
用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行す
る。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒ
ｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆ
ｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ
（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（
Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−Ｏ
Ｈ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅ
ｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾ
トリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキ
サフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩ
ＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリ
ジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液を用いて２０分間活性化す
る（工程１）。Ａｃｍ基の除去およびジスルフィド架橋を形成する２つのＣｙｓ
残基の生じる酸化を、ヨウ素を用いて達成する（工程２）。ｔＢｕ基の除去およ
び樹脂上に第２のジスルフィド架橋を形成するその他の２つのＣｙｓの生じる酸
化を、タリウム（ＩＩＩ）トリフルオロアセテートを用いて達成する（工程３）
。末端Ｆｍｏｃ基の脱保護を、２０％のピペリジンを用い、続いて、３−ＭＰＡ
のカップリングによって達成する（工程４）。樹脂切断および生成物単離を、８
６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％のチオアニソールおよび２％
のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却されたＥｔ₂Ｏによ
り沈殿させる（工程５）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍの
ガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（Ｖａｒｉａｎ
Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）を備えたＤｙ
ｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを用いるＶａｒ
ｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用いて調製用逆相
ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、＞９５％純度
で所望のＤＡＣを得る。

【０３３９】

【化３４】 これらの工程を、上記の概略的ダイアグラムに例示する。

【０３４０】 （２．Ｃ末端における改変） （実施例６６ エンドセリン−１（１−２１）Ｌｙｓ²²−（Ｎε−ＭＰＡ）−
ＯＨの合成） １００μｍｏｌの規模での、改変されたエンドセリン−１アナログの固相ペプ
チド合成を、手動でかつＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂を用
いるＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行する
。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌ
ｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌ
ｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）
−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ
ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙ
ｓ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ａ
ｃｍ）−ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し
、そして配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ
’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）および
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基
の除去を、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）溶液を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ａｃｍ基の除去および樹脂上
に第１ジスルフィド架橋を形成する第１の２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を、ヨ
ウ素を用いて達成する（工程２）。ｔＢｕ基の除去および樹脂上に第２のジスル
フィド架橋を形成するその他の２つのＣｙｓの生じる酸化を、タリウム（ＩＩＩ
）トリフルオロアセテートを用いて達成する（工程３）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基
の選択的脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡ
ｃ（１８：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間
樹脂を処理することによって達成する（工程４）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣ
ｌ₃（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６
×５ｍＬ）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで、この合成を、３
−マレイミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程５）。樹脂切断お
よび生成物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％のチオ
アニソールおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷
却されたＥｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程６）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ_{1 8} 、６０Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ
検出器（Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５
４ｎｍ）を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍ
カラムを用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステ
ムを用いて調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定する
ように、＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略的ダ
イアグラム中に図示する。

【０３４１】

【化３５】 （３．内部アミノ酸における改変） （実施例６７ Ｌｙｓ⁴（Ｎε−ＭＰＡ）サラフォトキシンＢ（１−２１）−
ＯＨの合成） １００μｍｏｌの規模での、改変されたサラフォトキシン−Ｂアナログの固相
ペプチド合成を、手動でかつＦｍｏｃ保護Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂
を用いるＳｙｍｐｈｏｎｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ上で実行
する。以下の保護アミノ酸を、連続的に樹脂に付加させる：Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ（
Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−ｌｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈ
ｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍ
ｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏ
ｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ
−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（ｔＢ
ｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−
ＯＨ。それらを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中に溶解し、そして
配列に従って、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テト
ラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）およびジイソプ
ロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を用いて活性化する。Ｆｍｏｃ保護基の除去を
、２０％（Ｖ／Ｖ）ピペリジンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液
を用いて２０分間活性化する（工程１）。Ａｃｍ基の除去および樹脂上に第１ジ
スルフィド架橋を形成する第１の２つのＣｙｓ残基の生じる酸化を、ヨウ素を用
いて達成する（工程２）。ｔＢｕ基の除去および樹脂上に第２のジスルフィド架
橋を形成するその他の２つのＣｙｓの生じる酸化を、タリウム（ＩＩＩ）トリフ
ルオロアセテートを用いて達成する（工程３）。Ｌｙｓ（Ａｌｏｃ）基の選択的
脱保護を、手動で実行し、そして５ｍＬのＣＨＣｌ₃：ＮＭＭ：ＨＯＡｃ（１８
：１：０．５）中に溶解した３当量のＰｄ（ＰＰｈ₃）₄の溶液で２時間樹脂を処
理することによって達成する（工程４）。次いで、この樹脂を、ＣＨＣｌ₃（６
×５ｍＬ）、ＤＣＭ中の２０％ ＨＯＡｃ（６×５ｍＬ）、ＤＣＭ（６×５ｍＬ
）、およびＤＭＦ（６×５ｍＬ）で洗浄する。次いで、この合成を、３−マレイ
ミドプリピオン酸の添加のために再自動化する（工程５）。樹脂切断および生成
物単離を、８６％ ＴＦＡ／５％ ＴＩＳ／５％ Ｈ₂Ｏ／２％のチオアニソー
ルおよび２％のフェノールを用いて実行し、続いて、ドライアイスで冷却された
Ｅｔ₂Ｏにより沈殿させる（工程６）。生成物を、Ｄｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０
Å、８μｍのガードモジュール、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムおよびＵＶ検出器（
Ｖａｒｉａｎ Ｄｙｎａｍａｘ ＵＶＤ ＩＩ）（λ２１４および２５４ｎｍ）
を備えたＤｙｎａｍａｘ Ｃ₁₈、６０Å、８μｍ、２１ｍｍ×２５ｃｍカラムを
用いるＶａｒｉａｎ（Ｒａｉｎｉｎ）調製用バイナリーＨＰＬＣシステムを用い
て調製用逆相ＨＰＬＣにより精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって決定するように、
＞９５％純度で所望のＤＡＣを得る。これらの工程を、以下の概略的ダイアグラ
ム中に図示する。

【０３４２】

【化３６】 （Ｆ．ペプチド安定性アッセイ） （実施例６８ Ｋ５のペプチド安定性アッセイ） ペプチド安定性アッセイを実行した。（ＭＰＡ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−
Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂。２ＴＦＡを、上記の通りに合成し、
そしてＭＰＡ−Ｋ５を同定した。非改変の対応ペプチドＰｒｏ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓもまた、３−ＭＰＡの付加なしで実施例２０
に記載の通りに合成し、そしてＫ５として同定した。

【０３４３】 Ｋ５（ＭＷ１２６０．１８、９１８．１２遊離塩基）を、水中の１００ｍＭの
貯蔵溶液として調製した。ＭＰＡ−Ｋ５（ＭＷ＝１４１１．１７、１０６９．１
１遊離塩基）を、水中の１００ｍＭの貯蔵溶液として調製した。ヒト血清アルブ
ミン（ＨＳＡ）を、Ａｌｐｈａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃから入手可能なＡｌｂ
ｕｔｅｉｎ（登録商標）として２５％溶液（計算値２５０ｍｇ／ｍｌ、３．７５
ｍＭ）として得た。ヒト血漿を、Ｇｏｌｄｅｎ Ｗｅｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌｓから得た。

【０３４４】 （１）ヒト血漿におけるＫ５の安定性 Ｋ５を１μＭの溶液として調製し、そして２５％のヒト血清アルブミン中に溶
解させた。次いで、この混合物を、ヒト血漿の存在下で最終濃度１６０ｍＭのＫ
５まで３７℃にてインキュベートした。１００μｌのアリコートを、０、４およ
び２４時間において血漿から回収した。１００μｌのアリコートをすべてのタン
パク質を沈殿させるために、１００μｌのブロッキング溶液（５容量の５％のＺ
ｎＳＯ₄／３容量のアセトニトリル／２容量のメタノール）で混合した。サンプ
ルを１０，０００ｇにて５分間遠心分離し、そしてペプチドを含有する上清を、
再転換し、そして０．２２μｍフィルターを通して濾過した。遊離インタクトな
Ｋ５ペプチドの存在を、ＨＰＬＣ／ＭＳによりアッセイした。結果を以下に示す
。血清におけるＫ５ペプチドの検出についてのＨＰＬＣパラメータは、以下の通
りであった。

【０３４５】 ＨＰＬＣ方法は、以下の通りであった：Ａ Ｖｙｄａｃ Ｃ１８ ２５０×４
．６ｍｍ、５μ粒子サイズカラムを利用した。カラム温度は、３０℃であり、流
速は、０．５ｍｌ／分であった。流動性相Ａは、０．１％のＴＦＡ／水であった
。流動性相Ｂは、０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルであった。注入容量は、１０
μｌであった。

【０３４６】 勾配は、以下の通りであった： 時間（分） ％Ａ ％Ｂ ０ ９５ ５ ２０ ７０ ３０ ２５ １０ ９０ ３０ １０ ９０ ３５ ９５ ５ ４５ ９５ ５ タンパク質を２１４、２１５および３３４ｎｍにて検出した。質量分光分析の
ために、イオン化様式は、３００〜２０００のＭ／Ｚ範囲におけるＡＰＩ−エレ
クトロスプレー（陽性様式）であった。ゲインは、３．０であり、フラグメンタ
ーは、１２０ｖであり、闘値は、２０であり、ステップサイズは、０．１であっ
た。ガス温度は、３５０℃であり、そして乾燥ガス容量は、１０．０ｌ／分であ
った。Ｎｅｂ圧力は、２４ｐｓｉであり、そしてＶｃａｐは、３５００Ｖであっ
た。ＨＰＬＣ方法は以下の通りであった：Ａ Ｖｙｄａｃ Ｃ１８ ２５０×４
．６分、５μ 粒子サイズカラムを利用した。カラム温度は、３０℃であり、流
速は、０．５ｍｌ／分であった。流動性相Ａは、０．１％のＴＦＡ／水であった
。流動性相Ｂは、０．１％のＴＦＡ／アセトニトリルであった。注入容量は、１
０μｌであった。

【０３４７】 勾配は、以下のとおりであった： 時間（分） ％Ａ ％Ｂ ０ ９５ ５ ２０ ７０ ３０ ２５ １０ ９０ ３０ １０ ９０ ３５ ９５ ５ ４５ ９５ ５ タンパク質を、２１４、２５４および３３４ｎｍにて検出した。質量分光分析
のために、イオン化様式は、３００〜２０００のＭ／Ｚ範囲におけるＡＰＩ−エ
レクトロスプレー（陽性様式）であった。ゲインは、３．０であり、フラグメン
ターは、１２０ｖであり、闘値は、２０であり、ステップサイズは、０．１であ
った。ガス温度は、３５０℃であり、そして乾燥ガス容量は、１０．０ｌ／分で
あった。Ｎｅｂ圧力は、２４ｐｓｉであり、そしてＶｃａｐは、３５００Ｖであ
った。

【０３４８】 時間 血漿中の％Ｋ５ペプチド ０時間 １００％ ４時間 ９％ ２４時間 ０％ 結果は、非改変のＫ５ペプチドが、プロテアーゼ活性の結果と同様に血漿中で
不安定であることを実証する。

【０３４９】 （２）血漿中のＭＰＡ−Ｋ５−ＨＳＡ結合体の安定性 ＭＰＡ−Ｋ５（改変Ｋ５ペプチド）を、室温にて２５％ ＨＳＡを用いて２時
間インキュベートした。次いで、ＭＰＡ−Ｋ５−結合体を、最終濃度１６０μｍ
でヒト血漿の存在下３７℃にてインキュベートした。特定のインキュベーション
期間（０、４および２４時間）の後、１００μｌのアリコートを、取り上げ、そ
して０．２２μフィルターを通して濾過した。インタクトな結合体の存在を、Ｈ
ＰＬＣ−ＭＳによりアッセイした。

【０３５０】 カラムは、Ａｑｕａｐｏｒｅ ＲＰ−３００、２５０×４．６ｍｍ、７μ粒子
サイズであった。カラム温度は、５０℃であった。流動性相Ａは、０．１％ Ｔ
ＦＡ／水であった。流動性相Ｂは、０．１％ ＴＦＡ／アセトニトリルであった
。注入容量は、１μｌであった。勾配は、以下の通りであった： 時間（分） ％Ａ ％Ｂ 流速（ｍｌ／分） ０ ６６ ３４ ０．７００ １ ６６ ３４ ０．７００ ２５ ５８．８ ４１．２ ０．７００ ３０ ５０ ５０ ０．７０ ３５ ５ ９５ １．００ ４１ ５ ９５ １．００ ４５ ６６ ３４ １．００ ４６ ６６ ３４ ０．７０。

【０３５１】 ペプチドを、定量化のために２１４ｎｍにて検出した。ペプチドの質量分光分
析のために、イオン化様式は、１２８０〜１５００ｍ／ｚの範囲のＡＰＩ−エレ
クトロスプレーであり、ゲイン１．０、フラグメンター１２５Ｖ、闘値１００、
ステップサイズ０．４０であった。ガス温度は、３５０℃であり、乾燥ガスは、
１３．０ｌ／分であった。圧力は、６０ｐｓｉであり、そしてＶｃａｐは、６０
００Ｖであった。結果を、以下に示す。

【０３５２】 血流における循環するアルブミンのおよそ３３％は、メルカプトアルブミン（
ＳＨ−アルブミン）であり、これは、内因性スルフヒドリル化合物（例えば、シ
ステインまたはグルタチオン）によってブロックされ、従って、マレイミド基と
の反応に利用可能である。循環するアルブミンの残余の６６％は、キャップされ
るかまたはスルフヒドリル化合物によってブロックされる。ＨＰＬＣ ＭＳアッ
セイは、キャップされたＨＳＡ、ＳＨ−アルブミン、およびＫ５−ＭＰＡ−アル
ブミンの同定を可能にする。ＭＰＡは、アルブミン上で遊離のチオールに共有結
合する。血漿中のアルブミンの３つの形態の安定性は、以下に示される。

【０３５３】

【表１】 Ｋ５−ＭＰＡ−ＨＳＡの百分率は、非改変のＫ５と対称的に、２４時間の血漿
アッセイを通して相対的に一定のままであり、血漿中で４時間のみでＫ５の元の
の量の９％まで減少させた。結果は、血漿中でかなり不安定なＫ５と対照的に、
Ｋ５−ＭＰＡ−ＨＳＡは、血漿中でペプチターゼ活性からかなり安定であること
を実証する。

【０３５４】 （実施例７０ ダイノルフィンのペプチド安定性アッセイ） 血清ペプチターゼの存在下でペプチド結合体の安定性を決定するために、Ｄｙ
ｎ Ａ−（１−１３）−ＯＨ、Ｄｙｎ Ａ−（１−１３）−ＮＨ₂およびＤｙｎ
Ａ １−１３（ＭＰＡ）−ＮＨ₂の血清安定性を、比較した。Ｄｙｎ Ａ−（
１−１３）−ＯＨ、Ｄｙｎ Ａ−（１−１３）−ＮＨ₂およびＤｙｎ Ａ−１−
１３（ＭＰＡ）−ＮＨ₂を上記の通りに合成した。ダイノルフィンペプチドを、
ヒトヘパリン処理化血漿を用いて最終濃度４ｍｇ／ｍＬまで混合した。３７℃で
の必要なインキュベーション時間（０，２０、２０、６０、１２０、１８０、３
６０および４８０分）の後、１００μＬのアリコートを、すべてのタンパク質を
沈殿させる１００μＬのブロック溶液（５％ＺｎＳＯ₄水溶液の５容量、アセト
ニトリルの３容量、メタノールの２容量）に添加した。遠心分離（１０，０００
ｇ、２．５分間）の後、透明な上清を回収し、０．４５μｍフィルターを通して
濾過し、そしてＬＣ／ＭＳ分析まで氷上で貯蔵した。

【０３５５】 サンプルを２１４ｎｍにおいてＬＣを用いて分析し、検出された化合物の同一
性を決定するために、異なる化合物およびＭＳの存在を検出した。次いで、ＬＣ
クロマトグラムからの各ピークについての積分面積％を、時間およびヒト血漿中
で決定された相対安定性に対してプロットした。

【０３５６】 Ｄｙｎ Ａ−（１−１３）−ＯＨおよびＤｙｎ Ａ−（１−１３）−ＮＨ₂に
ついての安定性データは、文献に報告されたデータと一致した：ダイノルフィン
ペプチドのタンパク分解性崩壊は、かなり迅速である。Ｄｙｎ Ａ−（１−１３
）−ＯＨは、約１０分の半減期を有した。Ｄｙｎ Ａ−（１−１３）−ＮＨ₂は
、約３０分の半減期を有した。対照的に、Ｄｙｎ Ａ−（１−１３）−ＮＨ₂は
、血清ペプチターゼ活性の存在下で顕著な安定性を示した。非改変ダイノルフィ
ンペプチドを、６０分以内に分解する。対照的に、改変ダイノルフィンペプチド
（Ｄｙｎ Ａ−（１−１３）−ＮＨ₂）は、４８０分まで血清ペプチターゼ活性
に安定である。

【０３５７】 ダイノルフィン結合体の安定性決定を、ＥＬＩＳＡによって決定する。観測さ
れたシグナルが、ダイノルフィン結合体に起因するか否かおよびこの結合体が、
何かを決定するために、８時間後の反応混合物のＬＣ質量分光分析を実行した。
質量分光法の使用は、結合体の分子量の決定を可能にし、そしてダイノルフィン
結合体の任意の切断された形態であるか否かの決定を可能にする。ヒト血漿の質
量分析は、アルブミンの２つの形態、６６４３６Ｄａでの遊離のチオールおよび
６６５５７Ｄａにおける酸化形態を示す。質量分光法はまた、均等な混合物での
、Ｄｙｎ ２−１３切断化結合体（６８０４６Ｄａ）とインタクトなＤｙｎ １
−１３結合体（６８２０７Ｄａ）との間で区別し得る。

【０３５８】 ４８０分の曝露の後、血清から得たダイノルフィンサンプルの血清ペプチター
ゼに対する質量分光分析は、インタクトな結合体（６８１９２Ｄａ）の存在のみ
を同定し、崩壊産物の存在を同定しなく、それによって、血清ペプチターゼ活性
からのダイノルフィン結合体の安定性を実証する。

【０３５９】

【表２】

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） // Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ６０／１５９，７８３ (32)優先日 平成11年10月15日(1999．10．15) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ミルナー， ピーター ジー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94022， ロス アルトス ヒルズ， マニュエラ ロード 14690 (72)発明者 ホルメス， ダレン エル． カナダ国 エイチ３ジー １ティー３ ケ ベック， モントリオール， ドラムモン ド ストリート 3450 (72)発明者 シボーデュー， カレン カナダ国 エイチ３ダブリュー ２エル５ ケベック， モントリオール， ナンバ ー407， ボナビスタ ストリート 4700 Ｆターム(参考） 4C076 CC30 EE41Q EE59Q 4C084 AA03 DC50 NA03 NA14 ZC031 4H045 AA20 BA12 BA13 BA14 BA15 BA16 BA17 BA18 BA19 BA41 BA50 CA42 EA20 FA33

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ３個と５０個との間のアミノ酸を含有するペプチターゼ安定
   化治療用ペプチドを合成する方法であって、該ペプチドは、カルボキシ末端アミ
   ノ酸、アミノ末端アミノ酸、治療的に活性な領域および治療的により低い活性の
   領域を有し、該方法は、以下の工程： ａ）該治療用ペプチドが、システインを含まない場合、該カルボキシ末端アミ
   ノ酸から該ペプチドを合成し、そして反応性基を該カルボキシ末端アミノ酸に付
   加するか、または末端リジンを該カルボキシ末端アミノ酸に付加しかつ該反応性
   基を該末端リジンに付加する工程であって、該反応性基は、血液成分上のアミノ
   基、ヒドロキシル基、またはチオール基と反応して安定な共有結合を形成し得る
   、工程；または ｂ）該治療用ペプチドがシステインのみを含む場合、該反応性基を該治療的に
   より低い活性の領域のアミノ酸に付加する前に、保護基と該システインを反応さ
   せる工程；または ｃ）該治療用ペプチドが、ジスルフィド架橋として２つのシステインを含む場
   合、該２つのシステインを酸化し、そして該反応性基を該アミノ末端アミノ酸、
   または該カルボキシ末端アミノ酸、または該カルボキシ末端アミノ酸と該アミノ
   末端アミノ酸との間に位置するアミノ酸に付加する工程；または ｄ）該治療用ペプチドが、ジスルフィド架橋として２より多くのシステインを
   含む場合、該ジスルフィド架橋における該システインを連続的に酸化し、そして
   該反応性基の該カルボキシ末端アミノ酸への付加の前に該ペプチドを精製する工
   程； を包含する、方法。
2. 【請求項２】 前記反応性基は、連結基を介して前記治療用ペプチドに結合
   される、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記血液成分は、アルブミンである、請求項１に記載の方法
   。
4. 【請求項４】 前記反応性基は、マレイミドを含有する、請求項３に記載の
   方法。
5. 【請求項５】 インビボでペプチターゼ活性から治療用ペプチドを保護する
   ための方法であって、該ペプチドは、３個と５０個との間のアミノ酸を含有しか
   つカルボキシ末端およびアミノ末端ならびにカルボキシ末端アミノ酸およびアミ
   ノ末端アミノ酸を有し、該方法は、以下： ａ）反応性基を該カルボキシ末端アミノ酸、該アミノ末端アミノ酸、または該
   アミノ末端アミノ酸と該カルボキシ末端アミノ酸との間に位置するアミノ酸に結
   合させることによって該ペプチドを改変する工程であって、該反応性基は、血液
   成分上の反応性官能基とインビボで共有結合を形成し得る、工程；および ｂ）該反応性基と該血液成分上の該反応性官能基との間に共有結合を形成して
   改変されたペプチド−血液成分結合体を形成し、それによってペプチターゼ活性
   から該ペプチドを保護する工程； を包含する、方法。
6. 【請求項６】 工程（ｂ）より前にインビボで前記改変されたペプチドを投
   与し、その結果、前記改変されたペプチド−血液成分結合体がインビボで形成さ
   れる工程をさらに包含する、請求項５に記載の方法。
7. 【請求項７】 工程（ｂ）は、エキソビボで起こる、請求項５に記載の方法
   。
8. 【請求項８】 前記反応性基は、マレイミド基である、請求項５に記載の方
   法。
9. 【請求項９】 前記反応性基は、連結基を介して前記ペプチドに結合される
   、請求項５に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記血液成分は、アルブミンである、請求項８に記載の方
    法。
11. 【請求項１１】 １以上の前記アミノ酸は、合成的である、請求項５に記載
    の方法。
12. 【請求項１２】 ペプチターゼ活性からインビボで治療用ペプチドを保護す
    るための方法であって、該ペプチドは、３個と５０個との間のアミノ酸を含有し
    かつアミノ酸の治療的に活性な領域およびアミノ酸の治療的により低い活性の領
    域を有し、該方法は、以下： ａ）アミノ酸の該治療的に活性な領域を決定する工程； ｂ）該治療的により低い活性の領域に含まれるアミノ酸において、反応性基を
    該アミノ酸に結合させて改変されたペプチドを形成することによって該ペプチド
    を改変し、その結果、該改変されたペプチドは、治療的活性を有する工程であっ
    て、該反応性基は、血液成分上の反応性官能基とインビボで共有結合を形成し得
    る、工程；ならびに ｃ）反応性実体と血液成分上の反応性官能基との間に共有結合を形成してペプ
    チド−血液成分結合体を形成し、それによってペプチターゼ活性から該ペプチド
    を保護する工程； を包含する、方法。
13. 【請求項１３】 工程（ｃ）の前に前記改変されたペプチドをインビボで投
    与し、その結果前記ペプチド−血液成分結合体は、インビボで形成される、工程
    をさらに包含する、請求項１２に記載の方法。
14. 【請求項１４】 工程（ｃ）は、エキソビボで起こる、請求項１２に記載の
    方法。
15. 【請求項１５】 請求項１２に記載の方法であって、ここで、前記ペプチド
    は、カルボキシ末端、アミノ末端、カルボキシ末端アミノ酸、およびアミノ末端
    アミノ酸を有し、そしてここで、工程（ｂ）は、さらに、以下： ａ）前記治療的により低い活性の領域が、該ペプチドの該カルボキシ末端に位
    置する場合、該ペプチドの該カルボキシ末端アミノ酸において該ペプチドを改変
    する工程；または ｂ）該より低い活性の領域が、該ペプチドの該アミノ末端に位置する場合、該
    ペプチドの該アミノ末端アミノ酸において該ペプチドを改変する工程；または ｃ）該より低い活性の領域部分が、該ペプチドの該アミノ末端にも該カルボキ
    シ末端にも位置しない場合、該カルボキシ末端と該アミノ末端との間に位置する
    アミノ酸において該ペプチドを改変する工程； を包含する、方法。
16. 【請求項１６】 前記反応性基は、マレイミド基である、請求項１２に記載
    の方法。
17. 【請求項１７】 前記反応性基は、連結基を介して該ペプチドに結合される
    、請求項１２に記載の方法。
18. 【請求項１８】 前記血液成分は、アルブミンである、請求項１２に記載の
    方法。
19. 【請求項１９】 １以上の前記アミノ酸は、合成的である、請求項１２に記
    載の方法。