JP2003505072A - 制御されたエレクトロポレーションによる細胞/組織の分析 - Google Patents
制御されたエレクトロポレーションによる細胞/組織の分析Info
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Abstract
Description
関し、特に細胞膜を介したイオンの輸送に関する。
、細胞膜を横断する電位に細胞を曝露することによって実施される。エレクトロ
ポレーションはその機序が完全に理解されているわけではないが、細胞膜の脂質
二重層が破壊されて一過的または永久的な孔が形成され、この孔を通じて化学種
が拡散によって細胞内に入るようになると考えられている。電位は典型的にはパ
ルスで加えられ、孔形成が可逆的なものか不可逆的なものかは、パルスの振幅、
長さ、形状、繰返し数などのパラメータ、ならびに細胞の種類と発育段階によっ
て決定される。細胞に化学種を導入する方法として、エレクトロポレーションは
数多くの利点を有している。使用が簡便であること;細胞集団をすべて同時に処
理できること;本質的にいかなる高分子でも細胞に導入できること;初代培養細
胞および樹立細胞株に幅広く用いることができ、且つ特定の細胞株で特に有効で
あること;細胞の種類および由来による大きな修正や適合の必要なしに原核細胞
にも真核細胞にも使用できることなどである。現在、エレクトロポレーションは
懸濁中または培養中の細胞、ならびに組織および器官中の細胞にも用いられてい
る。
るジェネレータに接続した2つの電極の間に、懸濁中または組織中の1つまたは複
数の細胞が置かれる。膜の孔形成または透過化は、細胞膜上の電極と直接接する
部位、すなわち膜内外電位差が最も高くなる部位である、細胞の極で起こる。残
念ながら、エレクトロポレーションで生じる透過化の程度は細胞の種類によって
異なり、所定の母集団の細胞でも細胞ごとに異なる。さらに、エレクトロポレー
ションはそれぞれ異なる特性をもつ個々の細胞の大きな母集団に対して行われる
ため、エレクトロポレーションの条件はその細胞母集団の平均的な質に合わせて
決定するしかなく、すなわち現在用いられている方法では、個々の細胞の特定の
特性に適合させることができない。特に問題となるのは、特定の条件下では電位
が低すぎて細胞膜を透過化できず、別の条件下ではエレクトロポレーションによ
り孔が不可逆的に形成され細胞が死に至るということである。例えば高い電場で
は、細胞母集団中の一部の細胞でトランスフェクション効率が高くなる一方、死
ぬ細胞も多くなる。既知の各種エレクトロポレーション法のさらなる問題点とし
て、エレクトロポレーションによるトランスフェクション効率が時として低くな
るということがある。例えばDNAの場合、細胞の形質転換を効果的に行うには、
周囲の媒質にDNAが大量に含まれている必要がある。
工程をリアルタイムで制御できないことに起因している。現在のところ、細胞が
いつエレクトロポレーション状態に入るのかをリアルタイムで確認する手段はな
い。したがって、エレクトロポレーションプロトコルの成果は、物質輸送工程と
それが細胞に及ぼす影響の最終的な結果から判断するよりほかない。これらは、
エレクトロポレーション時の物質輸送が起こってから長時間を経た後に生ずる。
本発明では、既存のエレクトロポレーション法におけるこれらの欠点およびその
他の欠点を解決する。
存の手法がある。正常に機能している細胞についても異常な細胞についても、自
然状態での細胞膜を介した物質輸送に関する知識は、特定の疾患の研究に貴重で
ある。さらに、細胞膜を介した物質輸送を修正および制御することができれば、
現代のバイオテクノロジーおよび医学における研究と治療を行う上で有用なツー
ルとなる。DNAや蛋白質などの化学種を細胞に導入して、または細胞から除去し
て、細胞の機能、生理、または挙動を制御することにより、正常および異常な細
胞の生理学的工程に関する情報が得られる。
の実施と研究に最も広く用いられている方法は、細胞膜を介して輸送したい化合
物を含む溶液に細胞を接触させることである。バルク輸送法では、細胞膜を介し
た物質輸送を正確に制御または測定することができない。特定の位置における溶
液の成分構成は未知であり、且つ一定でない。加えて、電場が存在する場合は、
局所的な電界強度が場所によって異なる。さらに、溶液に曝される細胞表面が正
確に定義されていない。所定の集団内の細胞の表面積はそれぞれ異なり、このた
め物質輸送の量は細胞ごとに大きく異なる。この理由から、バルク輸送工程によ
る物質輸送の量は細胞間で均一でなく、特定の細胞に実際に輸送された量を決定
することもできない。
処理する技術があり、これには、細胞膜を通じた化合物の機械的注入(マイクロ
インジェクション)または微小電極を用いたエレクトロポレーションが含まれる
。注入技術では、細胞膜に針を刺して化学物質を送達させ、化学物質を注入部位
近傍の小領域に局在させる。これには人の手による細胞の操作が必要であるが、
操作が困難な技術であり、労働力集約的で、且つ再現性の確保も容易ではない。
微小電極を用いたエレクトロポレーションにもこれらの問題があり、また、個々
の細胞におけるエレクトロポレーション開始を検出する手段がない。本発明では
これらの問題点も同様に解決する。
テム、および特定の方法を開示する。細胞膜を介した物質移動のモニタリングか
ら得られた情報を直接利用して、細胞および/または細胞膜に関する情報を推論
することができる。あるいは、モニタリングから得られた情報を利用して、電流
の印加を制御するなどにより細胞膜を介した物質移動を制御することができる。
本発明の装置およびシステムにより、荷電分子、特にイオン種を、細胞膜を介し
て移動させることが可能になり、またこの移動の発生を正確にモニタリングする
ことも可能になる。本発明の装置、システム、および方法を用いてエレクトロポ
レーションを実施する際、細胞膜を介した荷電粒子の移動をモニターして得られ
た情報は、細胞膜を介した物質輸送工程を制御するために用いられる。具体的に
は、本発明のシステムは、電流印加により細胞の物質輸送特性が変化する際の、
細胞膜内外間の電気インピーダンスの値と変化を測定するために使用される。こ
うして、電流印加により生じた電気インピーダンスの変化に関する情報をリアル
タイムで利用して、細胞膜を介した荷電分子の移動を制御する。
点と隔離されている第二の点との間に電荷の差を生じさせることを含む方法であ
る。次に、第一の点と第二の点との間で第一の電気的パラメータを測定する。次
に、第一の電気的パラメータの測定に基づいて第二の電気的パラメータが調整さ
れる。第一の電気的パラメータは、電流、電圧、および電気インピーダンスから
なる群より選択されるものなど、いかなるパラメータであってもよい。第二の電
気的パラメータは、電流、電圧、または電流と電圧の組合せからなる群より選択
されるものなどの、いかなるパラメータであってもよい(第一の電気的パラメー
タと同じものであっても、または違うものであってもよい)。
物質を生物細胞中に移動させる目的で第二の電気パラメータを調整する。導電性
媒質中に入れる物質は、薬学的活性を持つ化合物もしくは薬剤、ヌクレオチド配
列、蛍光色素、または望ましい方法で細胞に影響するように特別に設計された結
晶などの、いかなる物質であってもよい。本方法に従って、2点間の電位が細胞
を穿孔するのに十分なだけ高くなるように、種々の条件を調整する。しかし、特
に要求のある場合以外は、2点間の条件をさらに調整して、細胞死が起こらない
ように可逆的なエレクトロポレーションを行う。
は細胞群を分析してその組織またはその組織をもつ個体の情報または診断を得る
ことを目的としてエレクトロポレーションを実施することである。本方法に従っ
て、第一の点と、生物細胞を含む導電性媒質により第一の点と隔離されている第
二の点との間に電荷の差を生じさせる。次に、第一の点と第二の点との間で第一
の電気的パラメータを測定する。次に、第一の電気的パラメータの測定値を分析
して、細胞の性質、特に細胞膜の性質を決定する。第一の電気的パラメータはい
かなるパラメータであってもよく、好ましくは電流、電圧、および電気インピー
ダンスからなる群より選択される。第二の電気的パラメータは、好ましくは溶媒
中に存在する1つまたは複数の細胞の細胞膜に影響するような様式で調整される
。第二の電気的パラメータはいかなるパラメータであってもよく、好ましくは電
流、電圧、または電流と電圧の組合せからなる群より選択される。
装置である。電源は、後にこれら電極に接続することができるものであるが、装
置販売時にはついていてもいなくてもよい。この装置はさらに、定められた経路
の電流以外の、第一の電極と第二の電極との間の電流を妨げる手段を含む。さら
にこの装置は、定められた経路における電流、電圧、電気インピーダンスなどの
電気的パラメータを測定する手段を含み、且つ測定した電気的パラメータに基づ
いて電源を調整する手段を含む。電流を妨げる手段は、好ましくは非導電性物質
を含み、定められた経路はそれぞれ直径が生物細胞の直径より小さい1つまたは
複数の開口部を含み、これにより細胞は定められた経路の中に捉えられ、電流は
細胞中を通るが、好ましくは細胞周囲を通らない。
物細胞外へ広範な物質を移動させることを目的として、本方法で用いることがで
きる。その方法は、個々の細胞、細胞群、培養細胞、または、例えば無脊椎動物
、哺乳類を含む脊椎動物、植物などの生きている生物の細胞に対して行うことが
できる。複数の細胞(例えば組織)に対してこの方法を行う場合は、組織の画像
取得と画像に基づくリアルタイムの電流調整との工程を用いることができる。適
用できる画像取得技術の1つは、電気インピーダンストモグラフィ(EIT)である
。この技術は、体内または生物(例えばヒト)の生体電気的特性の差に基づいて
画像を生成する。本発明の方法において、単一の生物細胞に対して本工程を行う
ときに測定段階が用いられるのと同様の様式で、EIT画像を用いることができる
。本質的に、EIT技術により、エレクトロポレーションに起因する電流増加作用
を「見る」ことが可能となり、これから得られる情報を用いて、永久的な破壊を
生じさせることなく細胞膜を透過化できるように電流を正確に調整することがで
きる。
の点と隔離されている第二の点との間に電流を流すことを含む方法がある。組織
は、脊椎動物または無脊椎動物などの生きている生物、特に哺乳類およびヒトを
含む生きている生物に存在していてもよい。電流を流した後、組織の電気インピ
ーダンスなど電気的パラメータに基づいて組織の画像を生成する。この画像を指
針として、組織中の生物細胞に望ましい程度のエレクトロポレーションが行われ
るように電気的パラメータを調整する。エレクトロポレーションにより電気イン
ピーダンスが変化し、この変化は生成される画像上に視覚化することができる。
調整される電気パラメータは、電流、電圧、または電流と電圧の組合せなど、い
かなるパラメータであってもよい。好ましい態様では、組織中に注入するなどし
て物質を導電性媒質中に入れ、物質を組織の生物細胞中に移動させるように画像
に基づいて電流の調整を行う。生成される画像は、好ましくは、既知の入力電流
および測定した入力電圧を元に、再構成アルゴリズムを用いて生成されるインピ
ーダンス画像である。インピーダンス画像は、既知の入力電圧、測定した入力電
流、または既知の入力電圧と測定した入力電流の組合せを元に生成することもで
きる。
導電性媒質に電流を流す手段を含む。この装置はさらに、画像を生成するために
導電性媒質の第一の電気的パラメータを分析する手段と、導電性媒質中の生物細
胞に望ましい程度のエレクトロポレーションを行うために生成した画像に基づい
て第二の電気的パラメータを調整する手段とを含む。第一の電気的パラメータは
好ましくは電気インピーダンスであり、第二の電気的パラメータは好ましくは電
流、電圧、または両者の組合せからなる群より選択される。電流は、好ましくは
、組織上のエレクトロポレーションを行おうとする位置の近傍に置かれた複数の
電極により生成される。
び範囲が、生物細胞または生物細胞を含む導電性媒質の電位インピーダンス(本
明細書においてこの用語は電圧に対する電流の比を意味する)の変化に相関しう
るという発見である。生物細胞における電圧対電流比の増大は、孔形成もしくは
細胞の損傷、またはその他の様式の細胞膜穿孔によって細胞膜が透過化されたと
きに生じる。同様に、流れている導電性の液体における電圧対電流比の低下は、
液体がフロースルー電気セル中の電極間の領域に生物細胞を引き込んだときに生
じる。したがって、生物細胞のまたは細胞を懸濁した電解液のインピーダンスを
モニターすることによって、細胞膜に孔形成が起こった時点、および孔形成によ
る細胞膜における透過性の相対的程度を検出することができる。この情報を用い
て、所定の細胞に実際にエレクトロポレーションが生じたことを確認することが
でき、または、例えば電圧の強さなどの選択された電気パラメータを制御するこ
とによってエレクトロポレーション工程を制御することができる。またこの発見
は、細胞培養、または脊椎動物、無脊椎動物、もしくは植物中に含まれる多数の
細胞を同時にエレクトロポレーションする上でも有用である。特定の態様ではヒ
トを含む哺乳類に本発明を適用する。この方法により、エレクトロポレーション
が実際に発生したことを示す直接的な指標、および、処理対象の全細胞を平均し
たエレクトロポレーションの程度の指標が得られる。またこの発見は、同じ理由
から、生物組織(連続する膜を持つ生物細胞の塊)のエレクトロポレーションに
も同様に有用である。
きること、ならびに、特定の個々の細胞または細胞塊における透過化の発生と程
度がより詳細にわかることがある。個々の細胞または一連の個々の細胞に対して
この方法を適用すれば、個々の細胞が確実に透過化され、化学種の導入によって
形質転換される。また、電気的環境のばらつきがあると一部の細胞が破壊されて
、一部の細胞で十分な結果が得られないことがあるが、この方法では、ばらつき
がなくなるためエレクトロポレーションの有効性を増加させることができる。
細胞を迂回する電流が実質的に全く存在しないようにしながら生物細胞を通過す
る電流路に電流を導き、それによってイオンの流れを導くための仕切りを有する
電気装置またはシステムを使用する、単純な態様を説明することによって理解さ
れると思われる。本発明では、これら態様のいくつかにおいて、実質的に電流を
通さない仕切りによって隔離された2つの貯液槽を有する器具が使用される。仕
切りには、生物細胞より小さい開口部があり、生物細胞が開口部に引っかかると
その生物細胞によって開口部が塞がれるか、または閉じられるようになっている
。エレクトロポレーションを実施するため、生物細胞は機械的、化学的、および
/または生化学的な方法で、好ましくは後に生物細胞を損傷のない様式で取り除
くことができるように可逆的な状態で、開口部に固定される。生物細胞が開口部
に固定されると、開口部に固定された生物細胞をはさんで2槽の間に電圧が印加
される。2槽間を流れる電流は開口部通る経路、したがって生物細胞を通る経路
に限定される。電気セル内の電流と電圧の関係をモニターすることによりエレク
トロポレーション開始の検出と孔形成の程度の制御が行われ、これによりエレク
トロポレーションが確実に行われかつ過剰な孔形成と細胞死が回避される。した
がって使用者は、生物細胞膜の状態と変化に関して非常に正確な情報と制御を得
ることができる。
拡散輸送に有用である。これらの態様でも電気セルは仕切りによって2つの槽に
分けられ、一方の槽から他方の槽への細胞周囲の液体の移動が実質的に妨げられ
るような様式で、生物細胞が仕切りに設けられた開口部に引っかかる。生物細胞
に導入しようとする化学種の溶液を2槽のうちの一方または両方に入れる。溶液
中の化学種の濃度が細胞中の濃度と異なるようにする(化学種を細胞に導入しよ
うとするか、または細胞から除去しようとするかによって、高くするか低くする
かが決定される)。あるいは、溶液中の化学種の濃度が2つの槽で濃度が異なる
ようにする。
にかかるのではなく、むしろ2つの槽の間にかかるように、それぞれの槽に濃度
の異なる溶液を入れる。拡散の進行に伴って経時的または連続的に二槽の各濃度
の把握と制御されたモニタリングを行い、また、開口部の寸法を正確に把握する
ことによって、使用者は化学種が細胞に入っていく速度と量を正確に観察および
制御することができる。拡散時間は、一方の槽または両方の槽の濃度を段階的に
変化させることによって濃度差を生じさせるか、またはなくすことで制御するこ
とができる。特に興味深い応用は、以下の段落に記載するように、この種の化学
種拡散輸送を制御されたエレクトロポレーションと組合せることである。
電気インピーダンスをモニターすることによって細胞膜の完全性に関する情報を
提供することで、細胞、細胞群、または細胞群を含む組織に関する有益な情報を
提供することができる。具体的には、細胞膜を介した荷電粒子の動きに関する測
定が行われる。これらの測定値は、細胞膜を介した拡散を生じさせるのに必要な
電流の量に関連する。得られた情報は、直接分析するか、同一組織の以前の測定
値と比較するか、または異常組織もしくは正常組織の測定値と比較することがで
き、これにより、測定対象の組織に生じた変化の量(同一組織の以前の測定値に
基づいて)、または測定対象の組織と細胞膜が損傷された組織(例えば異常細胞
)もしくは正常な細胞や組織との差の量の指標が得られる。この方法は、エレク
トロポレーションで用いられるのと同様の方法で行われる。ただし、細胞周囲の
媒質に物質を添加する必要がない。装置は、仕切りで2つの部分に区切られ、一
方に陽電極、他方に陰電極があること、仕切りには開口部があり、開口部と細胞
を通って一方の電極から他方の電極へ荷電粒子が流れるような様式で開口部上に
細胞が位置することにおいて前述の装置と同様である。仕切りによって、開口部
を通る以外の荷電粒子の流れは妨げられるかまたは完全に失われる。電極間の電
気インピーダンスを測定することにより、無傷の膜をもつ細胞と膜が損傷された
細胞とを区別することができる。測定をより正確に行うことにより、損傷された
(例えば異常な)細胞膜と比較した正常な細胞膜の完全性について判断すること
ができる。
わち複数の)生物細胞に同時に、または動物または植物のものでありうる組織な
どの細胞の塊に用いることができる。前述の器具は、電流または拡散輸送が細胞
を迂回しないようにしながら電流または拡散輸送がすべての細胞を通る経路に限
定されるように仕切りを配置することによって、2つまたはそれ以上の生物細胞
への用途に適合させることができる。本発明の概念のさらなる用途として、流れ
ている液体中に懸濁された生物細胞のエレクトロポレーションがある。電極をフ
ローチャネル中に固定し、電極間の電流をモニターしながら電極間に電圧を印加
する。電極間の領域に入った生物細胞は電流値を低下させて、すなわち、インピ
ーダンスは、この領域に細胞が1つまたは複数存在することの指標となり、さら
には、エレクトロポレーションを実施するのに十分なより高い電圧の印加を開始
するためのシグナルとしても利用することができると考えられる。
きている生物に存在しうる組織中に存在する生物細胞のエレクトロポレーション
がある。組織中に電極を固定して配置し、電極間の電流をモニターしながら電極
間に電圧を印加する。電極間の領域内に無傷の膜をもつ生物細胞がある場合は電
気インピーダンスが増加する。したがって、電気インピーダンスを測定すること
によって、その領域内に1つまたは複数の細胞が存在するかどうかの指標が得ら
れる。エレクトロポレーションによりインピーダンスの測定値が低下すると考え
られる。この方法を組織に対して実施する場合、電気インピーダンスの測定値は
電極間に存在する細胞の統計的平均値となる。
、好ましくはある程度は程度)を決定可能な画像技術を用いて、本発明のエレク
トロポレーション法を生きている生物の組織に実施することができる。好ましい
画像技術は、画像化の対象とする組織の生体電気的特性の差に関する情報を元に
、変化する画像を生成する電気インピーダンストモグラフィ(EIT)である。典
型的なEIT画像は、体内に電流を流し、その結果生じる電圧を電極アレイで測定
することによって取得される。次に、再構成アルゴリズムを用いて、既知の入力
電流および測定した電圧のデータからインピーダンス画像が生成される。EITで
は電気インピーダンスが実際にマッピングされるため、本発明を組織に適用する
のに特に適している。エレクトロポレーションを行おうとする部位はすなわち細
胞の電気インピーダンスがその分変化する部位であり、したがって、EITにより
画像化される。この画像を用いて、細胞膜を損傷することなくエレクトロポレー
ションが生じるような様式で電気パラメータ(例えば電流値)を調整する。
、および個々の細胞の必要に合わせて処理条件を適合できることがある。電圧が
印加される態様において、使用者はインピーダンスをモニターすることにより、
孔の有無、孔形成の進行度、および、細胞死につながる可能性のある不可逆的な
孔形成が生じたかどうかを知ることができる。
することによるシグナル対雑音(S/N)比の高さである。
によってモニターし、モニターした状態に応じたタイミングで個々の細胞を開口
部に捉え、その後取り除くような自動装置を構成できることである。
これに基づいてシステムに与える電気的パラメータ(例えば電圧および/または
電流)を調整することによって、生物細胞のエレクトロポレーションを制御する
方法がある。
の細胞、組織、または生きている動物中の組織の一部にエレクトロポレーション
を行えることである。
の変化をリアルタイムに測定し、これに基づいて任意の電気的パラメータ(例え
ば電圧および/または電流)を調整することによって、正確な量のエレクトロポ
レーションが実施され、かつ細胞の損傷が回避できることである。
れる必要がなく、したがってベクターの細胞特異性が必要とされないヌクレオチ
ド配列による細胞のトランスフェクションに本発明を利用できることである。
ことがある。
く細胞のトランスフェクションが行えることがある。
れないこと、および細胞中に運び込まれるDNA量が制御できることである。
変化を検出できることである。
ッピングできることであり、これにより、細胞塊の細胞インピーダンスの変化を
検出して所定の電気的パラメータ(例えば電流および/または電圧)を調整し所
望のエレクトロポレーションを得ることができる。
よりさらによく理解されると思われる。
に、方法および装置は無論さまざまに異なりうるものであるから、本発明は特定
の方法および装置に限定されるものではないことが理解されなければならない。
また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲でのみ限定されるものであり、した
がって、本明細書中の用語は具体的な態様を説明する目的でのみ使用され、本発
明を限定するものではないことも理解されなければならない。
に断りがない限り下限の単位の10分の1まで具体的に開示されるものと理解され
る。定められた値または定められた範囲中の値と、別の定められた値またはその
定められた範囲中の別の値との間の小範囲は、すべて本発明に含まれる。これら
小範囲の上限および下限はその範囲に入っていても入っていなくてもよく、小範
囲に上限および下限のいずれかまたは両方が含まれるか、またはいずれも含まれ
ない場合の範囲もすべて本発明に含まれ、定められた範囲に特定の除外される限
界がある場合はその対象となる。定められた範囲が一方または両方の限界を含む
場合、これら含まれる限界のいずれか一方または両方を除外した範囲も本発明に
含まれる。
が属する分野の当業者に一般的に理解されているのと同じ意味を持つ。本発明の
実施または検証においては本明細書に記載のものと類似または同等のあらゆる方
法および物質が使用可能であるが、以下に好ましい方法および物質を説明する。
本明細書中に挙げる刊行物は、その刊行物と共に引用される方法およびまたは物
質を開示および説明するために参照として本明細書に組み入れられる。
)」、「1つの(an)」および「その(the)」は、特に断りがない限り複数形も
含む。したがって、例えば、「1つの生物細胞(a biological cell)」という表
現には複数の生物細胞が含まれ、「電極(an electrocode)」という表現には1
つまたは複数の電極および当業者に既知の同等物が含まれる。他の表現も同様で
ある。
提供される。本明細書に記載事項のいずれも、本発明が先行発明によりこれら刊
行物の日付を実際より早める権利を有しないことの承認として解釈されるもので
はない。さらに、提供される発表日は実際の発表日と異なる可能性があり、独立
した確認を要する場合がある。
られる、あらゆる導電性物質を意味し、好ましくは金属、最も好ましくは非腐蝕
性の金属を意味する。「導電性」とは、例えば電流または電圧などあらゆる形で
参照されうる電気的な流れを伝えることを意味する。電極は種々の異なる導電性
物質で製造され、合金でも純粋な金属であってもよく、銅、金、プラチナ、鉄、
銀、塩化銀などであってもそれらの合金であってもよい。さらに電極は、超小型
回路で使用されるシリコンを基礎とした物質など、導電性の非金属を含んでいて
もよい。組織のエレクトロポレーションに用いられる典型的な電極は、好ましく
は、ロッド形、平板形、または中空針形の構造体である。電極は電流を連続的に
伝えてもよく、またはパルスで伝えてもよい。電極はその用途に非常に特異的で
あってもよく、ステンレス鋼の平行プレート、埋め込みワイヤ、ペアになった針
、および針のアレイからなっていてもよい。当業者は、本発明に従って望ましい
エレクトロポレーションを行うのに特に有用な専用の電極を設計することができ
ると考えられる。
数の異なる種類のものでもよい。これらの細胞は好ましくは特定の機能を果たす
ように組織化されたものである。組織には、生きている生物中の組織も生きてい
る生物から取られた組織も含まれ、また、インビボのものを指すこともインビト
ロのものを指すこともある。さらに組織は、植物および動物を含むいかなる生物
に由来するものでも、または、遺伝子工学を用いてつくられたものでもよく、し
たがって人工的な起源のものでもよい。1つの態様では、ヒトのある明確な領域
に存在する複数の細胞が組織である。
互いに置き換え可能でであり、本明細書を通して開示および記載されるあらゆる
装置を指す。装置は、好ましくは第一の電極および第二の電極を含み、第一およ
び第二の電極がそれぞれ正および負の電荷をもつ様式で電源に接続される装置で
ある。また装置は、好ましくは、1つまたは複数の特定の開口部を通る電気の流
れ以外は2つの電極間の電気の流れを妨げる手段を含む。例えば流れを妨げる手
段は、1つまたは複数の開口部を有する非導電性物質で開口部が1つまたは1群の
生物細胞を捉えるように特別に設計されたものでもよい。これにより、電流は必
ず開口部と細胞を通って他方の電極に届く。また装置は、好ましくは電極間の電
流の流れ方を測定する手段を含む。測定の手段には、電圧計、電流計、または任
意の様式で電気の流れを測定することができる当業者に公知のあらゆる装置が含
まれる。さらに、装置は好ましくは電極間の電気の流れの量を調整する手段を含
む。これにより、最適のエレクトロポレーションが得られるように、測定した電
気の流れに基づいて、電圧、電流、またはその他電気の流れに関する所望のパラ
メータを具体的に調整することができる。「エレクトロポレーション」という用
語が用いられる場合は、薬剤またはDNA配列などの化合物を細胞内へ移動させる
ために装置が用いられることを必ずしも意味してはいない。
能であり、電力、電流、または電圧を供給しそれにより電極間に電気の流れを生
じさせるあらゆる手段を指す。装置は好ましくは制御されたモードと振幅を供給
できる能力を有し、一定のDC電流またはAC電流を供給し、またパルス電圧または
連続電圧を供給することができる。装置は、好ましくは電圧、ランプ電圧、ラン
プ電流、またはその他の組合せを指数関数的に減衰できる能力を有する。電源は
例えば、マイクロプロセッサで使用されるタイプのチップと組合せて使用するこ
とも、110Vの交流電流を供給する通常の一般用電源で高速増幅を実現することも
できる。パルス形状は、LabViewプログラム上で動作しその出力をパワー増幅器
に入力することができるToshibaラップトップなどのマイクロプロセッサで生成
することができる。幅広いさまざまな市販の電源で所望の機能を得ることができ
る。通常、エレクトロポレーションのために供給される電位は、組織中の対象領
域に生じ単位V/cmで定義される電圧勾配として表される。その範囲は10 V/cm〜1
00,000 V/cmの範囲を含み、好ましくは100 V/cm〜10,000 V/cmである。しかし、
この範囲は増幅のしかたによるものであり、所望の用途に応じてこれに外れても
よい。電気パルスの範囲は一般にマイクロ秒〜ミリ秒である。しかし、所望の結
果に応じて他の範囲のパルスを使用してもよい。
発明に固有の構造および方法を詳しく説明する。この説明により本発明の全体的
な概念が明らかになると思われる。
ができる。装置は、第一の電圧を有する第一の電極および第二の電圧を有する第
二の電極を含んでいなければならない。さらに装置は、電極間の荷電粒子の流れ
を検出する手段、および、電極間の荷電粒子の流れの変化を検出して得られたデ
ータに基づいて電極間の電流を変化させる手段を含む。好ましくは、装置はさら
に、第一および第二の電極間に置かれた1つまたは複数の生物細胞を通る以外の
電極間の荷電粒子の流れを妨げるか、または大幅に減少させる部品を含む。
することができる。また本発明は、細胞中に移動させる物質を媒質に加える段階
を必ずしも含まない。本発明の方法は、印加した電流に基づいて細胞膜に生じた
変化を測定するためだけに実施することも可能である。この情報は媒質中に存在
する細胞または細胞群の特性を決定するのに有用となりうるし、特に、正常細胞
および異常細胞の情報との比較に、または以前に検査後の細胞と現在検査中の細
胞との違いの決定に、使用することができる。
の電気の流れをその生物細胞を通る経路に限定する仕切りとを内部に持つ、エレ
クトロポレーションセルである。電圧が印加されていないときは、電圧による孔
形成を行わない単なる拡散輸送にこの構造を用いることができる。
おいて不可欠なものではなく、様々に異なっていても本発明の目的および利点を
達成しうる。ただし、生物細胞は大きさが顕微鏡レベルであるため、様々な各形
態で本発明を実施するための器具として好ましいのは、構造全体および/または
槽の大きさがマイクロファブリケーション技術でつくられる電子チップのサイズ
であるものである。マイクロファブリケーション技術としては例えば電子チップ
製造で用いられている技術がある。さらに、槽がフロースルー槽になっていて、
連続流、間欠流、または使用者の指示による流入で液体を通過させることができ
、且つ生物細胞の細胞膜を通過する化学種を精密に制御するため必要に応じて濃
度、圧、およびその他の条件を変えることができることがより好ましい。したが
って、この器具の好ましい構造および製造方法の1つは、接合されたときに流路
を形成する適切な開口部を持った層または小板で器具を構築するものである。
したがって大量の細胞を連続処理できるという利点がある。またフロースルー槽
では溶液の溶質が減少した場合に補充が可能であり、したがって必要に応じて濃
度勾配を連続的に維持することができる。フロースルー槽がもつさらなる機能の
1つは圧の増加と減少である。この機能は以下に説明するように様々な目的にお
いて有益となる。
通過を可能にするような任意の構造であり得る。最も便利な支持体は、仕切りに
設けられた開口部である。開口部に生物細胞を固定することにより、開口部が閉
鎖、密閉、または塞栓され、これにより電流、拡散輸送、またはその両方の経路
が細胞を通ることになり、細胞周囲の漏れはなくなるかまたは最小限に抑えられ
る。これを達成するのに便利な機械的手段の1つは、開口部を挟んで、開口部に
細胞を押し付ける方向に圧差をかけることである。開口部の直径は細胞の直径よ
り小さくする。器具に入った細胞は2つの槽のどちらかに入る。細胞の入った槽
の圧を高くするか、あるいは他方の槽の圧を下げることにより、細胞が開口部に
押し付けられ開口部をふさぐ。処理が完了したら、2槽の圧を等しくするか、ま
たは圧差を逆にして細胞の入った槽より他方の槽の圧を高くすることにより、細
胞は容易に開口部から離れる。細胞の入った槽の液体の流れにより細胞が開口部
から除去され、開口部には別の細胞が固定できるようになる。
たは開口部の縁に被覆を施すことである。生物細胞の細胞膜は負に帯電している
ため、被覆にはポリリジン、ポリアルギニン、またはポリヒスチジンなどの正に
帯電する物質を用いることができる。生物細胞は開口部を挟んだ圧差によって開
口部に導かれ、そこで被覆によって保持される。処理が完了したら、開口部の細
胞側の槽の液体の流速を瞬間的に増加させることによって、または開口部を挟ん
だ圧差を逆転させて開口部から細胞を動かすことによって、細胞を被覆から離す
ことができる。
制御可能かつ経済的に妥当な時間内に達成するのに十分な表面積を細胞膜上に確
保できるかぎり、本発明において特に重要ではない。したがって、最適な大きさ
は処理あるいは研究しようとする特定の細胞ごとに異なるであろう。一般的に、
開口部は好ましくは円形またはほぼ円形であり、直径は細胞の大きさによって異
なり、好ましくは約1ミクロン〜約100ミクロン、より好ましくは約1ミクロン〜
約50ミクロン、最も好ましくは約2ミクロン〜約20ミクロンである。2つの槽を隔
てる孔のあいた仕切りは、好ましくは、水にも溶質にも不浸透性で、細胞を開口
部に固定するのに十分な圧差を保持できる硬質の誘導体物質である。マイクロフ
ァブリケーション技術で製造される装置では、仕切りの材料として便利なのは窒
化ケイ素である。同様に機能する他の材料は当業者に容易に明らかになるであろ
う。
使用である。これにより使用者は、細胞内部および微量拡散とマイクロエレクト
ロポレーションが起こる工程を顕微鏡で観察できる。
要としている生物の治療、分析、または診断において有用である。治療は一般的
に、治療しようとする組織の領域に物質を連続注入あるいは急速大量投与して行
われる。その組織の近傍に電極を設置し、電流または電圧を連続的に印加および
測定して、望ましいレベルのエレクトロポレーションが実施され注入された物質
が治療しようとする組織の細胞中へと移動できるようになったかを調べる。
または蛋白質をコードするヌクレオチド配列であってもよい。さらに、組織に注
入する構成物の投与は、エレクトロポレーション装置から電気パルスを印加する
前でも、印加中でも、さらには印加後でもよい。本方法の全体的な目標はエレク
トロポレーションによって孔をあけ、通常は細胞膜を通過しない化合物を細胞内
に導入することである。例えば、ブレオマイシンまたは種々の遺伝子構造体およ
び/もしくはプラスミドを、治療しようとする組織の細胞に導入することができ
る。これは、治療しようとする組織中の細胞に電位と電流を生じさせることによ
って実施され、このとき電位は電気パルスとして生成される。パルスを生成する
には1つの電極より複数の電極を使用するほうが好ましい。
プを含むものである。2つの電極は約6〜7 mm離れており、この距離は固定されて
いる。第二の電極デザインは、2つ〜最大8つの20 mmの正方形平鋼を含むもので
ある。電極はPS15電気パルセータに接続される。パルスは、平面側を皮膚に当て
ることによって、あるいは電極を皮膚腫瘍の周囲に置くことによって伝えられる
。皮膚との接触には、導電性ゲルまたは食塩水など、心電図計測に従来から用い
られている物質を使用することができる。本発明の方法を実施するには患者に1
つまたは複数のパルスを与えることができ、好ましくは複数のパルスを与える。
人体の内部など生物内部の組織にエレクトロポレーションを行うには、すなわち
皮膚の外に電極を置かずに実施するには、様々な構成が可能である。このような
構成は複数の針電極を含む針アレイで構成することもできる。1例として、陽電
極および負電極はそれぞれ、直径0.5 mmでステンレス鋼からなり、長さ1 cmの6
本あるいはそれ以上の針で構成され、BTX 820パルスジェネレータに接続されう
る。この電極を平行に組織に挿入し、エレクトロポレーションを行おうとする細
胞の周囲に設置することができる。電極は範囲5 mm〜1 cmの任意の直径で円形に
配置することもできる。レンジ約1300 V/cmの電圧電極比を使用することができ
る。与えるパルスの数はいくつでもよいが、インターバル1秒間、パルス幅100マ
イクロ秒の約6パルスで始めるのが好ましい。本発明は、細胞内に導入された物
質を追跡するための色素および標識を使用することなくエレクトロポレーション
が生じたかどうかを決定できることができる点で、組織のエレクトロポレーショ
ンに特に適している。
レーションが生じた後は細胞の中を通る(図6b)。本発明の方法により、図6aの
状態と図6bの状態の中間の移行期がいつ起こっているかを決定することが可能と
なり、またさらに、細胞膜に不可逆的な影響が生じるのを避けることが可能とな
る。図8aに示すように、エレクトロポレーションを強く行うと、細胞膜が損傷さ
れその結果、不可逆的な影響が生じることがある。一般的にこれは好ましくない
。しかし、電流の量を調整することにより、細胞膜に有意な損傷を与えることな
くエレクトロポレーションを行うことができ、従って図8bに示すような可逆的な
状態を得ることができる。
の電気インピーダンスの程度を正確に測定すること、および、エレクトロポレー
ションで所望の結果が得られるように電流を調整することに関する。しかし、組
織中のように多数の細胞が関与する場合は、組織中の複数のセルにエレクトロポ
レーションを行う上で電流のその他の影響を測定する別の機構を用いるのが好ま
しいことがある。電気インピーダンスは電気がある物質をどのように通過するか
の尺度である。電気インピーダンスは物質ごとに異なり、物質の電気的組成で決
定される。電気インピーダンスの高い物質もあれば低い物質もある。悪性疾患の
ある(癌性の)乳房組織は、正常組織または良性(癌性でない)腫瘍より電気イ
ンピーダンスが大幅に低い(電気をよく通す)。
の程度抵抗するかという尺度である。インピーダンスは、1組の端子間を流れる
電流に対する、端子間にかけられた電圧の比であり、オームで表される。直流(
DC)回路ではインピーダンスは抵抗に相当する。交流(AC)回路では、インピー
ダンスは抵抗、インダクタンス、およびキャパシタンスの関数である。インダク
タおよびキャパシタは電流の流れと逆向きの電圧を蓄積する。この対抗性はリア
クタンスと呼ばれ、これと抵抗との組合せでインピーダンスが定義される。イン
ダクタンスにより生じる抵抗はAC電流の周波数に正比例し、キャパシタンスによ
り生じるリアクタンスは周波数に反比例する。
グラフィ(EIT)とも呼ばれる電気インピーダンス画像法を説明するのにも適し
ている。同じ技術を説明するのに多数の異なる用語が使用されうることは注意を
要する。電位印加トモグラフィ(Applied potential tomography:APT)もその1
つである。これらの画像技術により、生物組織の電気的特性の空間的変動に基づ
く画像を得ることが可能である。APTおよびEITなどの技術を利用して、組織にお
いて本発明を実施することができる。電位印加トモグラフィ(APT)の物理的基
礎は、生物物質表面の2点間に電流を印加したときの表面の電位分布の測定であ
る。他の研究者らもこの技術を利用しており、電気インピーダンス画像法、導電
性画像法、電気インピーダンストモグラフィなどの名称で呼んでいる。本明細書
においてはこの技術を主にEITまたは電気インピーダンストモグラフィと呼んで
いる。したがって、以後の開示ではこの技術をEITとのみ称し、実施例3にその1
例を示す。
あろう。組織に対して本発明を実施する際にこれらを測定するための好ましい方
法の1つは画像技術を用いることであり、具体的には試料の生体電気的特性の差
異をモニターし、分析して、画像を生成する電気インピーダンストモグラフィ(
EIT)を用いることである。本発明においては、EIT画像を生成し、所望の結果を
得るためにこの画像を用いて電流を調整することにより、EIT技術を利用するこ
とができる。具体的には、組織中に電流を流し、その結果生じる電圧を電極アレ
イで測定することによってEIT画像が生成される。これにより、再構成アルゴリ
ズムを用いて、既知の入力電流と測定された入力電圧データからインピーダンス
画像を生成することが可能になる。EIT画像では電気インピーダンスのマップが
得られるため、この点において、本発明を組織に適用するうえでEIT技術は特に
好適である。電気インピーダンスのマップにより、本質的に、使用者はエレクト
ロポレーションがいつ開始されたかを視覚化することができる。エレクトロポレ
ーションが開始されたら、使用者は印加する電流の量を安定化させることができ
、これによって、図8aに示すような不可逆的な損傷を細胞に生じさせるような多
量の電流の印加を回避することができる。EIT技術により、モニターしている組
織中の細胞の電気インピーダンスの変化に基づいて、組織中のエレクトロポレー
ションを行う領域を視覚化することが可能になる。
の概念図である。電流源72はシグナル発生器73によって制御され、コンピュータ
制御された1組のマルチプレクサ74、75を介して組織試料71に電流を流すために
使用される。マルチプレクサ74、75は、差動増幅器76と復調器77に接続される。
測定されたシグナルは元のシグナルと比較され、後の画像構成のために振幅と位
相のデータが記録される。制御用コンピュータ78は、典型的には、どの電極ペア
から電流を流すかを選択しながら他の電極の電圧を読み取る。本発明で利用でき
るハードウェア構成はこの他にも多数存在する。
般的にシリアルシステムと呼ばれる。他のシステムでは、様々な程度の並列化(
複数の電流源および電圧測定用増幅器)を用いることにより電流注入システムの
柔軟性およびスピードの向上が図られている。
した電流のデータ)と電極形状に関する情報から、組織71の領域内の組織インピ
ーダンスの空間分布を表す画像を生成するのに用いられる。インピーダンス画像
の生成に使用できる方法は多数ある。静的画像法は絶対インピーダンスの分布を
描出するものである(Cook, R. D.ら、「ACT3: 高速高精度電気インピーダンス
トモグラフィ(ACT3: a high speed, high precision electrical impedance to
mography)」IEEE, Trans. Biomed. Eng. 41, 713-22 (1994))。差分画像法
は2つのデータセットの差に基づいて分布を描出する(Barber, D. C.、「バイオ
メディカルエンジニアリングの進歩(Advances in Biomed Eng.)」(Benek in,
W., Thevenin, V.編) 165-173 (IOS Press, Amsterdam, 1995))。この種の
技術では、インピーダンス分布があるベースライン測定からどのように変化した
かを表す画像が得られる。多周波インピーダンス画像法は、組織インピーダンス
の周波数依存性を利用するものである(Groffiths, H.、「電気インピーダンス
トモグラフィにおける位相測定の重要性(The importance of phase measuremen
t in electrical impedance tomography)」Physics in Medicine and Biology
32,1435-44 (1987))。準静的画像は、低周波数画像をベースラインとしてこ
れらの差分技術を用いて生成することができる。したがって、このシステムによ
り、真の静的画像における困難を伴うことなくある種の静的画像を得ることが可
能になる。
う数学的モデルが使用される。一般的に、EITにおける電流の流れに適用される
モデルは、よく知られているポワソンの方程式で得られる。EIT画像再構成およ
び他の多くの医用画像技術で必要とされる数学的分析法は、大きくは境界値問題
として知られる種類に属する。境界値問題を解く方法は多数あるが、これらはす
べて分析法または数値反復法のいずれかに分類することができ、当業者は本発明
の実施に当ってこれらを適用することができる。
て反復解法を用いたものである。反復アプローチの多くは、組織中のインピーダ
ンス分布を推定して順問題を繰り返し解き(あるインピーダンス分布における電
圧密度および電流密度を算出)、それに応じてインピーダンスの推定値を調整し
、電圧および電流の測定値が計算値と一致するまでこれを行うことによって境界
値問題を解こうとするものである。順問題は数値的に解く必要があり、有限要素
法または差分法が用いられるのが普通である。FEM(有限要素法)は順問題を解
く上で非常に強力でよく用いられる方法であり、このため、多くの学際的分野で
技術的解法として最も広く使われる傾向にある。
行う場合に適した微量拡散器具の一例を図1に示す。この器具の部品は、下から
順に、アクリル製ベース11、2つの液体槽のうち下の槽の側面となる彫り込み部
位13をもつシリコン製中間層12(厚さ1ミクロン)、2つの槽の仕切りとして機能
する窒化ケイ素層14、上部液体槽16の側面となるシリコンワッシャ15、および、
ガラス製カバープレート17である。窒化ケイ素の仕切りにあけられた穴18は開口
部として機能し、図中には1つの細胞あるいは組織のように連続した細胞塊19が
この穴をふさいでいる様子を示している。アクリル製ベースを通るチャネルは、
図中に矢印で示すように、上槽および下槽を通る液体の流入路および流出路とし
て機能する。
槽の液体を隔てる栓として機能する。2槽の溶液の組成が細胞内のそれと異なる
場合は、細胞膜を介して槽と細胞との間で物質輸送が生じる。一方の槽の溶液の
組成が他方の槽のそれと異なる場合は、細胞を介して槽と槽との間で物質輸送が
起こる。2つの槽の溶液の組成を正確に制御することにより、セル内の物質輸送
の速度と方向を正確に制御することができる。穴18の直径は既知であることから
、この穴を通る物質輸送を正確に決定することができる。
この装置を用いてグリセロールなどの凍結保存剤を細胞内に注入することが可能
であり、それには上槽16を生理食塩水で、下槽13をグリセロールでそれぞれ満た
す。細胞膜を介したグリセロールの物質輸送係数がわかっている細胞19を用いる
場合は、セルに浸透するグリセロールの量を計算して、凍結保存に必要な量を細
胞に注入するための濃度および曝露時間を容易に調整できる。
具の1例を図2に示す。この器具の構造は図1の微量拡散器具と似たものである。
その部品構成は、下から順に、アクリル製ベース21、下部液体槽23の側面となる
彫り込み部位をもつ下部シリコン層22、2つの槽の仕切りとして機能する窒化ケ
イ素層24(厚さ1ミクロン)、上部液体槽26の側面となる上部シリコン層25、お
よび、n+ポリシリコン層(厚さ5,000 Å)27、および窒化ケイ素層(厚さ1ミク
ロン)28を含むガラス製カバーである。窒化ケイ素の仕切り24にあけられた穴29
は開口部として機能し、1つの細胞30(または細胞塊)がこの穴をふさぐ。アク
リル製ベースを通るチャネルは、図中に矢印で示すように、上槽および下槽を通
る液体の流入路および流出路として機能する。さらに、アクリル製ベース21の上
にn+ポリシリコンの層(5,000 Å)31があり、この層は、上槽26の上にあるn+ポ
リシリコン層27とともに2つの電極として機能する。各電極は、電極間に印加す
る電圧の制御と電極間を通る電流の測定とを行うプリント回路基板32に導線で接
続される。
スキング、エッチング、およびスパッタリングで用いられている従来のマイクロ
ファブリケーション技術で作製することができる。この器具の動作は図1の微量
拡散器具の動作と類似している。器具内の生物細胞の移動は上槽用の液体に細胞
を懸濁することにより実施され、細胞は2つの槽に圧差をかけることによって1度
に1つずつ開口部に導かれ、開口部に導かれた細胞はこの開口部に保持される。
このような圧差をかけるのに便利な方法の1つは、下槽に注射器を取り付け、上
槽を大気圧に維持したまま注射器のピストンを引くことによって下槽の圧を大気
圧未満に下げることである。細胞を損傷しないところまでに圧差をとどめるよう
に注意が必要である。
。この器具と方法では、コンジットまたはフローチャネルを流れる生物細胞の懸
濁液が使用され、細胞はコンジットまたはフローチャネルを通る際に1組の電極
に挟まれた領域を通る。縦断面図である図3aは、チャネルの壁41およびチャネル
の内腔を下方に向かって(矢印の方向に)通過する生物細胞42を示している。横
断面図である図3bはチャネルの断面が長方形であることを示しているが、他の断
面形状であってもよい。電極43、44はチャネル内で対面する2つの壁に被覆とし
て形成される。電極は、インピーダンスの測定と電極に印加する電圧の制御とを
行うプリント回路基板45に導線で接続される。生物細胞42は、2つの電極に挟ま
れた領域を通過しているものとして示されている。
るように十分に大きく、かつ、電極間の領域を1度に通過する細胞が1つのみとな
るように十分に小さい。さらに、電極間の領域に細胞が入ると、電極間に印加さ
れた電圧によってこの領域を通っている電流が有意にすなわち測定可能なだけ減
少するように、電極43、44の長さは生物細胞の直径とほぼ等しいかそれよりわず
かに大きくする。同様に、電極のスペーシングすなわち電極間の距離にも同じ考
慮が必要である。生物細胞は、細胞内に導入しようとする化学種の溶液に懸濁し
、この懸濁液をチャネルに通す。懸濁液がチャネルを通るときにある電圧を電極
に印加し、電極間の電流(あるいはインピーダンス)をモニターする。電流の有
意な低下は、電極間の領域に生物細胞が存在することを示す。このように細胞が
検出されたら、電極間の領域に細胞がある間にエレクトロポレーションパルスを
電極に印加し、引き続きインピーダンスをモニターすればエレクトロポレーショ
ンの開始を検出することができる。エレクトロポレーションの結果、溶液に溶解
されている化学種が細胞内に入る。
う。例えば、前述の仕切りは、生物細胞と同じ大きさまたはそれより小さい微小
電極を用いることによって最小化あるいは排除することが可能である。このよう
な微小電極の例として、高精度マイクロマニピュレータ(例えば東京、ナリシゲ
から入手可能なMWH-3)で用いられるカーボンファイバー微小電極(例えばProCF
E、米国カリフォルニア州フォスターシティ、Axon Instruments)がある。微小
電極は、図2あるいは図3aおよび図3bに示す電極の代わりに使用することができ
る。
を当業者に提供するためのものであり、本発明者らが発明であると考える範囲を
限定するものではなく、また以下の実験が実施された全ての実験または実施され
た実験のみであることを示すものでもない。示した数字(例えば量、温度など)
は正確であるように注意を払っているが、いくつかの実験上の誤差および逸脱は
考慮に入れられるべきである。特に断りがない限り、部分は重さによる部分であ
り、分子量は平均分子量であり、温度の単位は摂氏であり、圧力は大気圧または
大気圧付近である。
よび下槽に循環させる液体用の流速圧力制御ユニット、および圧力計、可変DC電
源、装置に電圧パルスをかけるためのパルスジェネレータおよびパワー増幅器、
パルスをモニターするためのデジタルオシロスコープ、蛍光顕微鏡、CCD(電荷
結合素子)カメラ、ならびに画像処理ソフトウェアおよび波形処理ソフトウェア
を備えたコンピュータと組合せたマイクロエレクトロポレーションシステムを用
いて、一連の実験を行った。装置の2つの槽を生理食塩水で満たし、上槽に細胞
を入れた。上槽および下槽の液体の移動は注射器で行った。上槽内の圧力は大気
圧とし、下槽内の圧力は下槽に接続した注射器の筒を引くことによって大気圧よ
り低くした。電圧は強さ0〜120 V、持続時間2マイクロ秒〜100ミリ秒の範囲の単
一矩形波で印加した。上槽および下槽の電極間の距離は900ミクロンとした。
用いて行った。マイクロエレクトロポレーション装置の開口部は直径5ミクロン
とした。持続時間60ミリ秒の矩形電圧パルスを印加し、パルスは10 Vから60 Vま
で5 Vずつ振幅を上げて変化させた。各パルスについて開口部を通過する電流を
測定した。実験は細胞について行い、ガラスビーズで開口部をふさいだ場合およ
び開口部に障害物を置かない場合の両方について行った。それぞれの場合の結果
をパルス振幅のボルトに対する電流のマイクロアンペアで表した。これをプロッ
トしたものが図4であり、一番上の曲線(xで示したデータポイント)は開口部を
閉鎖しなかった場合、一番下の曲線(アスタリスクで示したデータポイント)は
開口部にガラスビーズを置いた場合、中間の3本の曲線(中抜き四角、中抜き正
位の三角、および中抜き逆位の三角)はそれぞれ異なるND-1細胞を開口部に置い
た場合のデータを示す。
伴って実質的に安定して電流が増加することを示す。一番下の曲線も、程度はは
るかに低いものの、電圧の増加に伴って実質的に安定して増加することを示す。
一番下の曲線の電流値は装置を流れる迷走電流を示す。開口部にND-1細胞を置い
た場合の曲線から、低電圧では電流値が開口部をガラスビーズでふさいだ場合の
値に近いが、高電圧で場合は電流値が開口部をふさがない場合のレベルまで上昇
することが示される。その変化は急激な上昇となっており、このことは細胞膜に
電流が通過できる孔が形成されたこと、すなわちエレクトロポレーションの開始
を示唆している。3つの細胞すべてにおいて、この変化は電圧30 V〜40 Vの電圧
で起こった。3つの細胞のうち2つ(中抜き四角および中抜き正位の三角)では、
本質的に同じ電圧でエレクトロポレーションが開始されたが、3つ目の細胞(逆
位の三角)では、他の2つより約5 V低い電圧でエレクトロポレーションが開始さ
れた。このことは、最適の結果を得るためには個々の細胞ごとに工程を調整する
ことの重要であることを示している。
曲線はヒステリシスを示した。すなわち、振幅を漸減した場合に得られる曲線で
は、漸増した場合に得られる曲線より電圧が高くなった。このことはこれらの実
験におけるエレクトロポレーションは不可逆的に起きたことを示している。
いて、細胞の典型的な直径は20ミクロンであるラット肝細胞(ATCC #CRL-1439)
に対して一連の実験を行った。マイクロエレクトロポレーション器具の開口部は
直径4ミクロンとした。実施例1と同様に持続時間60ミリ秒の矩形電圧パルスを使
用した。振幅は10 V〜37.5 Vとし、10 V〜30 Vでは5 Vずつ、30 V〜37.5 Vでは2
.5 Vずつ増加させた。実験の一部は振幅の漸増のみで行い、一部は振幅を最初に
漸増し次に漸減して可逆性を評価した。結果は図5a、図5b、図5c、および図5dに
示したグラフに表示する。各グラフにおいて、一番上の曲線(円で示したデータ
ポイント)は開口部に細胞もガラスビーズも置かなかった場合、一番下の曲線(
四角で示したデータポイント)は開口部にガラスビープを置いた場合、中間の曲
線(三角で示したデータポイント)は開口部に肝細胞を置いた場合のデータであ
り、4枚の図はそれぞれ別の肝細胞を用いたデータである。
圧は25 Vと30 Vの間を示した。図5bおよび図5cでは、振幅をまず漸増させ次に漸
減して、中間の2本の曲線を得た。漸増時の曲線と漸減時の曲線を区別していな
いが、各図において両者は実質的に同一であり、このことは各々の場合において
各電圧パルスの後に細胞膜が再度塞がれたこと、したがってこの場合の孔形成が
可逆的であったことを示している。図5dに示した試験では、図には示していない
が、印加電圧が37.5 Vを超えると細胞が崩壊した。図5a、図5b、図5c、および図
5dのそれぞれで同じ種類の細胞を使用したにも関わらず、エレクトロポレーショ
ンの閾値電圧が、すべて20 V〜35 Vの範囲に入っていたとはいえ個々の細胞ごと
に異なっていたことは注目に値する。このように電流をモニターして、どの時点
でエレクトロポレーションの閾値が生じるかに注目することによって、個々の細
胞にあわせた処置を容易に実施することができる。このシステムにおける最適な
曝露時間、電圧、周囲の液体中の組成の変化、および他のパラメータを選択する
ことにより、細胞を破壊することなく所望の処理を行うことができる。
性の基礎研究を行う上で有用なツールであり、産業においても大量の細胞をフロ
ースルー方式で処理する上で有用なツールである。個々の細胞を流れる電流の観
察と記録を可能にすることによって、電圧パルスの振幅と持続時間を制御して最
適の結果を得ることが可能となる。さらに本明細書に示した本発明の実施に用い
る装置は、透明な部品を用いて、顕微鏡のステージに固定するのに適したサイズ
で構成することができる。これにより、電流の測定値を細胞内部の視覚的観察結
果および蛍光の測定値と相関させることが可能となる。本装置を用いて、細胞膜
の孔形成が起きた時点および細胞が開口部に引っかかった時点を、電流の測定に
より電気的に検出することができる。より大規模で産業的な用途には、本明細書
で記載した種類のマイクロエレクトロポレーション装置を多数並列に配置するこ
とができる。各細胞について、開口部に細胞が捕捉されたことを示す電気的情報
(電流の急激な低下など)を利用してエレクトロポレーションを連続的に開始す
るシグナルを生成することができ、さらにエレクトロポレーションの完了を示す
電気的情報(電流の急激な上昇など)を利用して、その細胞を(例えば圧差を消
失または逆転させるなどして)解放し次の細胞を開口部に導くシグナルを生成す
ることができる。
に加え、診断または分析の様式でも使用することができる。これは媒質中に入れ
た1つまたは複数の細胞の電気インピーダンスを測定し、この測定した電気イン
ピーダンス情報を利用することによって行われる。細胞膜の完全性に関する情報
を導き出すことが可能であり、したがって分析に用いることができる。また、そ
の情報を同じ種類の正常細胞または異常細胞で以前に取得した情報と比較するこ
とが可能であり、したがって診断情報を得ることができる。例えば、無傷の細胞
膜を持つ細胞の電気インピーダンスは細胞膜が損なわれた同じ細胞のインピーダ
ンスよりはるかに高い。このように、本工程から分析的に細胞膜の構造上の完全
性に関する情報が得られる。診断的には、細胞膜の構造上の相対的な完全性に関
する情報が得られる。
能性を示すため、本発明者らはこの問題の数学的シミュレーションを解決した。
、まず二次元の微細格子FEMモデル(格子点 約1600、要素 約3100)を用いて模
擬組織像を作成した。図9に示すこの像は、収量を変更できる点状の電極を円周
に沿って等間隔に配置した、筋肉様の円形画像領域(半径20 mm、抵抗率500 Ω
・cm)を含んだ。この画像領域内では、任意の形状の1つのエレクトロポレーシ
ョン領域を異なる抵抗率で定義した。対向する電極電流注入パターンを用いて、
N(N-1)/2(式中、Nは電極の数である)の独立した電圧を測定した。MATLAB's Pa
rtial Differential Equation Toolbox (The Mathworks Inc.)の適合格子生成法
およびFEM解法アルゴリズムを用いてこのモデルを解釈した。与えられた幾何学
的構造に対する格子の1例を図9に示す。像のモジュールにより再構成アルゴリズ
ムへの利用が可能になる情報は、実験の中のエレクトロポレーション中に得られ
たと考えられるデータ、すなわち組織周囲に配置した各電極の電流および電圧を
示すものである。このデータから、本発明者らはこのモデルに入力した組織の原
画像の再構成を試みた。(EITでは通常AC電流が使われるがこの実験では問題を
単純化するためDC注入電流を用いたことは注意を要する。ACの導出および実施は
ここに示す結果をそのまま拡張したものである。)8電極EITシステムのシミュレ
ーションデータ取得段階の、この像内の電圧および電流の典型的な例を図10に示
す。
限要素法、もう1つは境界要素法を用いてインピーダンス画像を生成した。いず
れのアルゴリズムも画像の生成には標準的なニュートン・ラフソン(Newton Raph
son)法を用いている。図11では、2つの異なる電気インピーダンスを有する円形
の画像領域を、有限要素法および境界要素法で再生成した原画像と比較している
。
り、エレクトロポレーションはインピーダンスの変化を生じさせるものであるこ
とから、電気インピーダンスによる断層撮影法を用いて組織中のエレクトロポレ
ーションが起きた領域を画像化することができる。組織のエレクトロポレーショ
ンの画像化に用いる電極はエレクトロポレーション工程自体に用いる電極と異な
ることもあれば同一であることもある。
的および不可逆的なエレクトロポレーション中の細胞の電気的特性を調べた。可
逆的なエレクトロポレーションでは、細胞はエレクトロポレーション工程によっ
て損傷されず、細胞膜は再び塞がれる。不可逆的なエレクトロポレーションでは
、細胞膜が損傷され再度塞がれることはない。ND-1細胞を用いて、マイクロエレ
クトロポレーション中に細胞を通過する電流を測定した一連の実験では、図8aお
よび図8bに示す結果を得た。この結果は、図8aおよび図8bに示した三角形の電気
パルス(一番上の曲線)に細胞を曝露することによって得られたものである。細
胞を流れる電流は図8aおよび図8bの一番下の曲線に示す。図8aは不可逆的にエレ
クトロポレーションされた細胞、図8bは可逆的にエレクトロポレーションされた
細胞に関する。可逆的にエレクトロポレーションされた細胞では、電圧を減少さ
せたときに電圧を上昇させたときと同じ値が保たれていることが容易にわかる。
しかし、不可逆的なエレクトロポレーションが起きた場合、膜が損傷された細胞
を通る電流は無傷の細胞よりも大きくなった。したがって、特にエレクトロポレ
ーションの際だけでなく、細胞を流れる電流によって、一般的には膜の透過性に
おける変化の指標を得ることができ、細胞膜の完全性を測定することができる。
例えば、細胞の生存度は、損傷された膜を通過するトリパンブルーまたは蛍光色
素を用いて測定されることが多い。これらの結果から、膜が損傷された細胞を検
出する別の方法として、細胞における電流と電圧の関係を測定することもありえ
る。同様に、細胞膜の穿孔を誘発する、イオノフォアなど化合物が存在する。細
胞膜における電流と電圧の関係(インピーダンス)を測定することにより、これ
らの化合物によって細胞膜が損傷されたかどうかを検出することも可能である。
電気的測定ではただちに情報が得られることから、電気的測定は細胞膜の損傷を
検出する上で化学的な方法よりも有利である。細胞膜の透過性における変化、特
に損傷された細胞膜における変化を検出する方法として考えられるのが、エレク
トロポレーション工程で記載したエレクトロポレーションチップの利用である。
図8aおよび図8bに示したように、損傷の尺度は、無傷の細胞のインピーダンスと
損傷された細胞のインピーダンスにおける差異であるといえる。組織中において
も、本明細書に記載したエレクトロポレーションの検出法と同様の方法で膜が損
傷された細胞を検出することができると考えられる。
の精神と範囲から逸脱することなく、様々な変更や同等物による置換を行いうる
ことは、当業者に理解されるべきである。さらに、特定の状況、物質、物質の組
成、工程、または工程段階を本発明の目的、趣旨、および範囲に適合させるため
に数多くの修正を行うことが可能である。こうした修正はすべて添付の特許請求
の範囲内に入るものと解釈される。
細胞に化学種を注入するための、本発明の実施に有用な微小拡散装置の断面図で
ある。
補助を用いて細胞に化学種を注入するための、本発明の実施に有用なマイクロエ
レクトロポレーション装置の断面図である。
くエレクトロポレーション装置の縦断面図である。図3bは図3aに示す装置の
横断面図である。
装置を用いて行った一連のエレクトロポレーション実験の電圧電流プロット図で
ある。
レクトロポレーション装置を用いてさらに行った一連のエレクトロポレーション
実験の電圧電流プロット図である。
6bはエレクトロポレーション後(穿孔中)の細胞を通って流れる電流を示す。
EIT)システムを示す。
電流の流れ方の像、図8bは可逆的なエレクトロポレーションを生じた細胞を通
る電流の流れ方の像である。
フ略図である。この領域は2つの異なるインピーダンスをもつ。
スの異なる含有物を有する円形領域内の等ポテンシャル曲線を示す略図である。
インピーダンスマッピングである。
Claims (21)
- 【請求項1】 以下の段階を含む方法: 第一の点と、生物細胞を含む導電性媒質によって該第一の点から隔離される第
二の点との間に電荷の差を生じさせる段階; 該第一の点と該第二の点との間で第一の電気的パラメータを測定する段階;お
よび 該第一の電気的パラメータの測定結果を分析することによって、該生物細胞の
性質を決定する段階。 - 【請求項2】 第一の電気的パラメータが、電流、電圧、および電気インピ
ーダンスからなる群より選択される、請求項1に記載の方法。 - 【請求項3】 以下の段階をさらに含む、請求項1に記載の方法: 生物細胞膜に影響を与える様式で第二の電気的パラメータを調整する段階。
- 【請求項4】 第二の電気的パラメータが、電流、電圧、および電流と電圧
の組合せからなる群より選択される、請求項3に記載の方法。 - 【請求項5】 性質が、生物細胞膜の完全性である、請求項1に記載の方法
。 - 【請求項6】 分析が、測定結果を以前の測定結果と比較する段階を含む、
請求項1に記載の方法。 - 【請求項7】 以前の測定結果が、媒質中の生物細胞と実質的に同一である
正常な生物細胞で得られたものである、請求項6に記載の方法。 - 【請求項8】 以前の測定結果が、媒質中の生物細胞と同じ種類の異常な生
物細胞で得られたものである、請求項6に記載の方法。 - 【請求項9】 第一の電極と、 第二の電極と、 該第一の電極および該第二の電極と電気的に接続された電源と、 定められた経路を通る電流以外の該第一の電極と該第二の電極との間の電流を
妨げる手段と、 該定められた経路を通る電流を測定する手段と、 該定められた経路を通る測定された電流に基づいて該電源を調整する手段と を含む装置。 - 【請求項10】 電流を妨げる手段が非導電性物質を含み、定められた経路
がそれぞれ生物細胞の直径より小さい直径を有する1つまたは複数の開口部を含
む、請求項9に記載の装置。 - 【請求項11】 以下の段階を含む、制御された様式で生物細胞にエレクト
ロポレーションを行う方法: (a)生物細胞を導電性媒質中に入れ、該媒質に電圧を印加する段階; (b)該媒質にかかる電圧に対する該媒質を通る電流の比を連続的に検出する
段階;および (c)該生物細胞に対して制御された程度のエレクトロポレーションを行うた
め、検出された電圧対電流比の変化に応じて該印加電圧の強さを調整する段階。 - 【請求項12】 段階(b)が生物細胞のエレクトロポレーションの指標と
して電圧対電流比を連続的に検出する段階を含み、且つ段階(c)が特定の望ま
しい程度のエレクトロポレーションを実施するために電圧対電流比に応じて印加
電圧の持続時間を調整する段階を含む、請求項11に記載の方法。 - 【請求項13】 複数の生物細胞を導電性媒質中に入れ、電圧対電流比を該
複数の生物細胞について平均化し、それによって該複数の生物細胞に対して制御
された平均的程度のエレクトロポレーションが実施される、請求項11に記載の
方法。 - 【請求項14】 電圧が2つの微小電極間に印加され、生物細胞が該微小電
極間に置かれる、請求項11に記載の方法。 - 【請求項15】 電圧がフロースルーチャネル中の2つの電極間に印加され
、該電極が該チャネルを通る流れを横切る方向に該電圧を印加するように配置さ
れ; 段階(a)が、該媒質中に該生物細胞を懸濁する段階と、該媒質を該チャネル
に連続的に通過させる段階とを含み; 段階(b)が、該電圧対電流比と該電極間の該生物細胞の存在とを相関させる
段階をさらに含み;および 段階(c)が、該電極間に該生物細胞が存在する際に該電圧の強さを調整する
段階を含む、 請求項11に記載の方法。 - 【請求項16】 導電性媒質中に複数の生物細胞を懸濁する段階、および一
度に約1つの細胞が電極を通過するように媒質をチャネルに連続的に通過させる
段階を含む、請求項15に記載の方法。 - 【請求項17】 以下の段階を含む、制御された様式で生物組織にエレクト
ロポレーションを行う方法: (a)該生物組織を導電性媒質中に入れる段階、および該媒質に電圧を印加す
る段階; (b)該生物組織における該エレクトロポレーションの程度の指標として該媒
質にかかる電圧に対する該媒質を通る電流の比を連続的に検出する段階;および (c)該生物組織に対して制御された程度のエレクトロポレーションを行うた
め、該電圧対電流比の変化に応じて該印加電圧の強さを調整する段階。 - 【請求項18】 以下の段階を含む、エレクトロポレーションの開始および
制御の検出が可能な様式でエレクトロポレーションにより化学物質を生物細胞に
注入する方法: (a)該化学物質を溶解した液体を含む電気セルであって、電圧が該電気セル
に印加された場合に、実質的に全電流を迂回させずに該生物細胞に該生物細胞を
通る流路に電流を限定するように配置された電流仕切りを含む電気セルの中に、
該生物細胞を固定する段階; (b)該電気セルに電圧を印加する段階、ならびに該細胞にエレクトロポレー
ションが起きたことの指標として該細胞を通る電流および該印加電圧の相対的な
値をモニターする段階。 - 【請求項19】 仕切りが電気セル中の第一および第二の電極槽を分け、生
物細胞より幅の小さな開口部を含み、かつ(a)が、生物細胞によって開口部を
閉じるように該生物細胞を該開口部上に固定する段階を含む、請求項18に記載
の方法。 - 【請求項20】 第一の電極槽が第一の導電性の液体を含み、第二の電極槽
が第二の導電性の液体を含み、且つ化学物質が該第一および該第二の導電性の液
体のうちの一方にのみ溶解される、請求項19に記載の方法。 - 【請求項21】 第一の電極槽が第一の導電性の液体を含み、第二の電極槽
が第二の導電性の液体を含み、化学物質が該第一および該第二の導電性の液体の
両方に溶解される、請求項19に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
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---|---|---|---|
US09/358,510 US6300108B1 (en) | 1999-07-21 | 1999-07-21 | Controlled electroporation and mass transfer across cell membranes |
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Family Applications (1)
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---|---|---|---|
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CA (1) | CA2378110A1 (ja) |
WO (1) | WO2001007583A1 (ja) |
Cited By (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001252065A (ja) * | 2000-03-15 | 2001-09-18 | Tokai Rika Co Ltd | 粒子移動/固定装置 |
JP2005337734A (ja) * | 2004-05-24 | 2005-12-08 | Shigetoshi Oiki | シス−トランス液流方式によるイオンチャネル解析方法と、その方法に使用するイオンチャネル解析装置 |
JP2006129798A (ja) * | 2004-11-08 | 2006-05-25 | Onchip Cellomics Consortium | 細胞チップおよび細胞改変方法および細胞制御方法 |
JP2006191893A (ja) * | 2005-01-17 | 2006-07-27 | Seiko Instruments Inc | 侵襲確認装置 |
JP2008545415A (ja) * | 2005-05-26 | 2008-12-18 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 組織中の細胞膜を横切る制御されたエレクトロポレーションおよび物質移動 |
JP2009515168A (ja) * | 2005-11-02 | 2009-04-09 | メイ−ルーベン テクノロジーズ,インク. | 電場を発生させる高インピーダンスシステムおよび使用方法 |
JP2010506660A (ja) * | 2006-10-17 | 2010-03-04 | ヴィージーエックス ファーマシューティカルズ,インコーポレイテッド | 哺乳動物の細胞の電気穿孔のための電気穿孔装置および該電気穿孔装置を使用する方法 |
US9598691B2 (en) | 2008-04-29 | 2017-03-21 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Irreversible electroporation to create tissue scaffolds |
US9764145B2 (en) | 2009-05-28 | 2017-09-19 | Angiodynamics, Inc. | System and method for synchronizing energy delivery to the cardiac rhythm |
US9867652B2 (en) | 2008-04-29 | 2018-01-16 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Irreversible electroporation using tissue vasculature to treat aberrant cell masses or create tissue scaffolds |
US9895189B2 (en) | 2009-06-19 | 2018-02-20 | Angiodynamics, Inc. | Methods of sterilization and treating infection using irreversible electroporation |
US10117707B2 (en) | 2008-04-29 | 2018-11-06 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for estimating tissue heating of a target ablation zone for electrical-energy based therapies |
US10154874B2 (en) | 2008-04-29 | 2018-12-18 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Immunotherapeutic methods using irreversible electroporation |
US10238447B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-03-26 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for ablating a tissue site by electroporation with real-time monitoring of treatment progress |
US10245105B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-04-02 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Electroporation with cooling to treat tissue |
US10272178B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-04-30 | Virginia Tech Intellectual Properties Inc. | Methods for blood-brain barrier disruption using electrical energy |
US10292755B2 (en) | 2009-04-09 | 2019-05-21 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | High frequency electroporation for cancer therapy |
US10463426B2 (en) | 2001-08-13 | 2019-11-05 | Angiodynamics, Inc. | Method for treating a tubular anatomical structure |
US10470822B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-11-12 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for estimating a treatment volume for administering electrical-energy based therapies |
US10471254B2 (en) | 2014-05-12 | 2019-11-12 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Selective modulation of intracellular effects of cells using pulsed electric fields |
US10694972B2 (en) | 2014-12-15 | 2020-06-30 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Devices, systems, and methods for real-time monitoring of electrophysical effects during tissue treatment |
US10702326B2 (en) | 2011-07-15 | 2020-07-07 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Device and method for electroporation based treatment of stenosis of a tubular body part |
US11254926B2 (en) | 2008-04-29 | 2022-02-22 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Devices and methods for high frequency electroporation |
US11272979B2 (en) | 2008-04-29 | 2022-03-15 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for estimating tissue heating of a target ablation zone for electrical-energy based therapies |
US11311329B2 (en) | 2018-03-13 | 2022-04-26 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Treatment planning for immunotherapy based treatments using non-thermal ablation techniques |
US11382681B2 (en) | 2009-04-09 | 2022-07-12 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Device and methods for delivery of high frequency electrical pulses for non-thermal ablation |
US11453873B2 (en) | 2008-04-29 | 2022-09-27 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Methods for delivery of biphasic electrical pulses for non-thermal ablation |
US11607537B2 (en) | 2017-12-05 | 2023-03-21 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Method for treating neurological disorders, including tumors, with electroporation |
US11638603B2 (en) | 2009-04-09 | 2023-05-02 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Selective modulation of intracellular effects of cells using pulsed electric fields |
US11723710B2 (en) | 2016-11-17 | 2023-08-15 | Angiodynamics, Inc. | Techniques for irreversible electroporation using a single-pole tine-style internal device communicating with an external surface electrode |
US11779395B2 (en) | 2011-09-28 | 2023-10-10 | Angiodynamics, Inc. | Multiple treatment zone ablation probe |
US11925405B2 (en) | 2018-03-13 | 2024-03-12 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Treatment planning system for immunotherapy enhancement via non-thermal ablation |
US11931096B2 (en) | 2010-10-13 | 2024-03-19 | Angiodynamics, Inc. | System and method for electrically ablating tissue of a patient |
US11950835B2 (en) | 2019-06-28 | 2024-04-09 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Cycled pulsing to mitigate thermal damage for multi-electrode irreversible electroporation therapy |
Families Citing this family (188)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003046171A1 (en) | 2001-11-27 | 2003-06-05 | Cellectricon Ab | A method for combined sequential agent delivery and electroporation for cell structures and use thereof |
SE9704076D0 (sv) | 1997-11-06 | 1997-11-06 | Holdingbolaget Vid Goeteborgs | Method for permeabilisation of cell structures and use thereof |
US6355425B1 (en) * | 1999-03-26 | 2002-03-12 | Billups-Rothenberg, Inc. | Mutations associated with iron disorders |
US6927049B2 (en) * | 1999-07-21 | 2005-08-09 | The Regents Of The University Of California | Cell viability detection using electrical measurements |
US6300108B1 (en) | 1999-07-21 | 2001-10-09 | The Regents Of The University Of California | Controlled electroporation and mass transfer across cell membranes |
US6682649B1 (en) * | 1999-10-01 | 2004-01-27 | Sophion Bioscience A/S | Substrate and a method for determining and/or monitoring electrophysiological properties of ion channels |
IT1320186B1 (it) * | 2000-04-21 | 2003-11-26 | Igea Srl | Dispositivo e metodo di elettro-porazione in cui l'ampiezzadell'impulso o degli impulsi viene stabilita in modo automatico in |
IT1320187B1 (it) * | 2000-04-21 | 2003-11-26 | Igea Srl | Dispositivo e metodo di elettro-porazione che fornisce un segnalemodulato sotto il controllo continuo della elettro-permeabilizzazione |
US6795728B2 (en) | 2001-08-17 | 2004-09-21 | Minnesota Medical Physics, Llc | Apparatus and method for reducing subcutaneous fat deposits by electroporation |
US6697670B2 (en) | 2001-08-17 | 2004-02-24 | Minnesota Medical Physics, Llc | Apparatus and method for reducing subcutaneous fat deposits by electroporation with improved comfort of patients |
US8251986B2 (en) | 2000-08-17 | 2012-08-28 | Angiodynamics, Inc. | Method of destroying tissue cells by eletroporation |
US6892099B2 (en) | 2001-02-08 | 2005-05-10 | Minnesota Medical Physics, Llc | Apparatus and method for reducing subcutaneous fat deposits, virtual face lift and body sculpturing by electroporation |
US6776896B1 (en) * | 2000-10-11 | 2004-08-17 | Axon Instruments, Inc. | Method of positioning cells for electrophysiological testing |
SE0003841D0 (sv) | 2000-10-20 | 2000-10-20 | Daniel Chiu | A method and apparatus for penetration of lipid bilayer membranes |
AU2002365071A1 (en) * | 2001-08-06 | 2003-06-30 | Vanderbilt University | Device and methods for monitoring the status of at least one cell |
USRE42016E1 (en) | 2001-08-13 | 2010-12-28 | Angiodynamics, Inc. | Apparatus and method for the treatment of benign prostatic hyperplasia |
US7130697B2 (en) * | 2002-08-13 | 2006-10-31 | Minnesota Medical Physics Llc | Apparatus and method for the treatment of benign prostatic hyperplasia |
US7056430B1 (en) * | 2002-01-09 | 2006-06-06 | Axon Instruments, Inc. | Detachable cell-delivery system for patch-clamp unit |
DE10202094B4 (de) * | 2002-01-21 | 2006-09-28 | Eppendorf Ag | Verfahren und Vorrichtung zur Elektroporation biologischer Zellen |
US8209006B2 (en) * | 2002-03-07 | 2012-06-26 | Vgx Pharmaceuticals, Inc. | Constant current electroporation device and methods of use |
US7245963B2 (en) * | 2002-03-07 | 2007-07-17 | Advisys, Inc. | Electrode assembly for constant-current electroporation and use |
US7653438B2 (en) | 2002-04-08 | 2010-01-26 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for renal neuromodulation |
US7162303B2 (en) | 2002-04-08 | 2007-01-09 | Ardian, Inc. | Renal nerve stimulation method and apparatus for treatment of patients |
US8145317B2 (en) | 2002-04-08 | 2012-03-27 | Ardian, Inc. | Methods for renal neuromodulation |
US7853333B2 (en) | 2002-04-08 | 2010-12-14 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for multi-vessel renal neuromodulation |
US7617005B2 (en) | 2002-04-08 | 2009-11-10 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for thermally-induced renal neuromodulation |
US8145316B2 (en) | 2002-04-08 | 2012-03-27 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for renal neuromodulation |
US20070129761A1 (en) | 2002-04-08 | 2007-06-07 | Ardian, Inc. | Methods for treating heart arrhythmia |
US7756583B2 (en) | 2002-04-08 | 2010-07-13 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for intravascularly-induced neuromodulation |
US8150519B2 (en) | 2002-04-08 | 2012-04-03 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for bilateral renal neuromodulation |
US20070135875A1 (en) | 2002-04-08 | 2007-06-14 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for thermally-induced renal neuromodulation |
US20080213331A1 (en) | 2002-04-08 | 2008-09-04 | Ardian, Inc. | Methods and devices for renal nerve blocking |
US20140018880A1 (en) | 2002-04-08 | 2014-01-16 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Methods for monopolar renal neuromodulation |
US8774913B2 (en) | 2002-04-08 | 2014-07-08 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Methods and apparatus for intravasculary-induced neuromodulation |
US8347891B2 (en) | 2002-04-08 | 2013-01-08 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Methods and apparatus for performing a non-continuous circumferential treatment of a body lumen |
US20060206150A1 (en) | 2002-04-08 | 2006-09-14 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for treating acute myocardial infarction |
US6978174B2 (en) | 2002-04-08 | 2005-12-20 | Ardian, Inc. | Methods and devices for renal nerve blocking |
US9308043B2 (en) | 2002-04-08 | 2016-04-12 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Methods for monopolar renal neuromodulation |
US8131371B2 (en) | 2002-04-08 | 2012-03-06 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for monopolar renal neuromodulation |
US9308044B2 (en) | 2002-04-08 | 2016-04-12 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Methods for therapeutic renal neuromodulation |
US8774922B2 (en) | 2002-04-08 | 2014-07-08 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Catheter apparatuses having expandable balloons for renal neuromodulation and associated systems and methods |
US7620451B2 (en) | 2005-12-29 | 2009-11-17 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for pulsed electric field neuromodulation via an intra-to-extravascular approach |
US9636174B2 (en) | 2002-04-08 | 2017-05-02 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Methods for therapeutic renal neuromodulation |
JP4552423B2 (ja) * | 2003-11-21 | 2010-09-29 | パナソニック株式会社 | 細胞外電位測定デバイスおよびこれを用いた細胞外電位の測定方法 |
WO2006132116A1 (ja) * | 2005-06-07 | 2006-12-14 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | 細胞電気生理測定デバイスおよびその製造方法 |
WO2006022092A1 (ja) * | 2004-08-25 | 2006-03-02 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | 細胞電位測定プローブ |
US8202439B2 (en) * | 2002-06-05 | 2012-06-19 | Panasonic Corporation | Diaphragm and device for measuring cellular potential using the same, manufacturing method of the diaphragm |
ITTO20020477A1 (it) | 2002-06-07 | 2003-12-09 | Igea Srl | Dispositivo per elettroporazione. |
US20040082859A1 (en) | 2002-07-01 | 2004-04-29 | Alan Schaer | Method and apparatus employing ultrasound energy to treat body sphincters |
GB0217564D0 (en) * | 2002-07-30 | 2002-09-11 | Amersham Biosciences Uk Ltd | Cell recording device |
US8323955B1 (en) * | 2003-03-05 | 2012-12-04 | Sandia Corporation | Micromachined patch-clamp apparatus |
JP2004344003A (ja) * | 2003-04-22 | 2004-12-09 | Institute Of Physical & Chemical Research | 細胞刺激装置及び細胞刺激方法 |
US6969604B1 (en) | 2003-06-20 | 2005-11-29 | Yakovenko Sergey A | Electroporation chamber |
JP4394917B2 (ja) * | 2003-09-19 | 2010-01-06 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 人工脂質二重膜を有する電流測定装置 |
US20050170510A1 (en) * | 2003-12-08 | 2005-08-04 | Yong Huang | Device and method for controlled electroporation and molecular delivery into cells and tissue |
ES2729378T3 (es) | 2003-12-24 | 2019-11-04 | Univ California | Ablación de tejido con electroporación irreversible |
US8298222B2 (en) * | 2003-12-24 | 2012-10-30 | The Regents Of The University Of California | Electroporation to deliver chemotherapeutics and enhance tumor regression |
US8017367B2 (en) * | 2004-01-29 | 2011-09-13 | Narvalus S.R.L. | Biochip electroporator and its use in multi-site, single-cell electroporation |
US8058056B2 (en) * | 2004-03-12 | 2011-11-15 | The Regents Of The University Of California | Method and apparatus for integrated cell handling and measurements |
JP4443278B2 (ja) * | 2004-03-26 | 2010-03-31 | テルモ株式会社 | 拡張体付カテーテル |
FR2873385B1 (fr) * | 2004-07-23 | 2006-10-27 | Centre Nat Rech Scient Cnrse | Surveillance et controle d'une electroporation |
US7937143B2 (en) | 2004-11-02 | 2011-05-03 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for inducing controlled renal neuromodulation |
US7776373B2 (en) * | 2004-11-19 | 2010-08-17 | Eteka Llc | Apparatus and method for the enhancement of food properties and food prepared therefrom |
US7850645B2 (en) * | 2005-02-11 | 2010-12-14 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Internal medical devices for delivery of therapeutic agent in conjunction with a source of electrical power |
WO2006112870A1 (en) | 2005-04-19 | 2006-10-26 | Excellin Life Sciences, Inc. | Device and method for controlled electroporation and molecular delivery in cells and tissue |
US20060264752A1 (en) * | 2005-04-27 | 2006-11-23 | The Regents Of The University Of California | Electroporation controlled with real time imaging |
US20060286623A1 (en) * | 2005-06-16 | 2006-12-21 | Hiroyuki Yonekawa | Three dimensional object manipulating method and device |
US8114070B2 (en) * | 2005-06-24 | 2012-02-14 | Angiodynamics, Inc. | Methods and systems for treating BPH using electroporation |
US20060293731A1 (en) * | 2005-06-24 | 2006-12-28 | Boris Rubinsky | Methods and systems for treating tumors using electroporation |
US20060293725A1 (en) * | 2005-06-24 | 2006-12-28 | Boris Rubinsky | Methods and systems for treating fatty tissue sites using electroporation |
US20060293730A1 (en) * | 2005-06-24 | 2006-12-28 | Boris Rubinsky | Methods and systems for treating restenosis sites using electroporation |
US20100019782A1 (en) * | 2005-06-29 | 2010-01-28 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Cellular potential measurement container |
AU2006266579B2 (en) * | 2005-06-30 | 2009-10-22 | Lg Electronics Inc. | Method and apparatus for encoding and decoding an audio signal |
US20070105206A1 (en) * | 2005-10-19 | 2007-05-10 | Chang Lu | Fluidic device |
US20070156135A1 (en) * | 2006-01-03 | 2007-07-05 | Boris Rubinsky | System and methods for treating atrial fibrillation using electroporation |
GB2436145A (en) * | 2006-03-16 | 2007-09-19 | Sophion Bioscience As | A system for monitoring properties of a single cell |
US8293524B2 (en) * | 2006-03-31 | 2012-10-23 | Fluxion Biosciences Inc. | Methods and apparatus for the manipulation of particle suspensions and testing thereof |
WO2008004476A1 (fr) * | 2006-07-06 | 2008-01-10 | Panasonic Corporation | Dispositif pour capteur cellulaire électrophysiologique, capteur cellulaire électrophysiologique utilisant le dispositif, et procédé de fabrication du dispositif pour capteur cellulaire électrophysiologique |
US7943367B2 (en) * | 2006-09-20 | 2011-05-17 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | High-throughput electroporation chamber with functional lid for risk reduction |
US7687267B2 (en) * | 2006-09-30 | 2010-03-30 | Rational Biotechnology Inc. | High-throughput cell transfection device and methods of using thereof |
EP2076313A4 (en) | 2006-10-16 | 2012-07-25 | Univ California | PREDETERMINED CONDUCTIVITY GELS FOR IRREVERSIBLE ELECTROPORATION OF FABRICS |
US20080132884A1 (en) * | 2006-12-01 | 2008-06-05 | Boris Rubinsky | Systems for treating tissue sites using electroporation |
CN101627123A (zh) * | 2007-01-08 | 2010-01-13 | 米利波尔公司 | 消除基因扩增的高表达细胞系 |
WO2008104086A1 (en) * | 2007-03-01 | 2008-09-04 | Queen's University At Kingston | Planar electroporation apparatus and method |
US9121806B1 (en) | 2007-07-26 | 2015-09-01 | University Of South Florida | Impedance spectroscopy-based cellular analysis device |
US8314466B2 (en) | 2007-09-11 | 2012-11-20 | Panasonic Corporation | Silicon structure, method for manufacturing the same, and sensor chip |
WO2009067142A1 (en) * | 2007-11-21 | 2009-05-28 | The Regents Of The University Of California | Controlled multi-holes electroporation |
US20090137925A1 (en) * | 2007-11-23 | 2009-05-28 | Divya Cantor | Impedance Spectroscopy Cervix Scanning Apparatus and Method |
US20100004623A1 (en) * | 2008-03-27 | 2010-01-07 | Angiodynamics, Inc. | Method for Treatment of Complications Associated with Arteriovenous Grafts and Fistulas Using Electroporation |
US20090247933A1 (en) * | 2008-03-27 | 2009-10-01 | The Regents Of The University Of California; Angiodynamics, Inc. | Balloon catheter method for reducing restenosis via irreversible electroporation |
DE102008018170B4 (de) * | 2008-04-03 | 2010-05-12 | NMI Naturwissenschaftliches und Medizinisches Institut an der Universität Tübingen | Mikrofluidisches System und Verfahren zum Aufbau und zur anschließenden Kultivierung sowie nachfolgender Untersuchung von komplexen Zellanordnungen |
WO2009137800A2 (en) * | 2008-05-09 | 2009-11-12 | Angiodynamics, Inc. | Electroporation device and method |
US9173704B2 (en) | 2008-06-20 | 2015-11-03 | Angiodynamics, Inc. | Device and method for the ablation of fibrin sheath formation on a venous catheter |
US9681909B2 (en) | 2008-06-23 | 2017-06-20 | Angiodynamics, Inc. | Treatment devices and methods |
US20100152725A1 (en) * | 2008-12-12 | 2010-06-17 | Angiodynamics, Inc. | Method and system for tissue treatment utilizing irreversible electroporation and thermal track coagulation |
US8652129B2 (en) | 2008-12-31 | 2014-02-18 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Apparatus, systems, and methods for achieving intravascular, thermally-induced renal neuromodulation |
WO2010080886A1 (en) | 2009-01-09 | 2010-07-15 | Recor Medical, Inc. | Methods and apparatus for treatment of mitral valve in insufficiency |
WO2010085765A2 (en) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Moshe Meir H | Therapeutic energy delivery device with rotational mechanism |
US8231603B2 (en) | 2009-02-10 | 2012-07-31 | Angiodynamics, Inc. | Irreversible electroporation and tissue regeneration |
US9599591B2 (en) | 2009-03-06 | 2017-03-21 | California Institute Of Technology | Low cost, portable sensor for molecular assays |
US20110004096A1 (en) * | 2009-07-06 | 2011-01-06 | California Institute Of Technology | Electromagnetic cellular tomography |
WO2010118387A1 (en) | 2009-04-09 | 2010-10-14 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Integration of very short electric pulses for minimally to noninvasive electroporation |
USD630321S1 (en) | 2009-05-08 | 2011-01-04 | Angio Dynamics, Inc. | Probe handle |
HUP0900431A2 (en) * | 2009-07-10 | 2011-01-28 | Cryo Innovation Kft | Sample imaging system and pocedure for transmitting imager of cells or tissues located in breeder space towards a data processing device |
WO2011047387A2 (en) * | 2009-10-16 | 2011-04-21 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Treatment planning for electroporation-based therapies |
WO2011050009A1 (en) * | 2009-10-19 | 2011-04-28 | Rational Biotechnology Inc. | Method, device and apparatus for inducing self-adjusting cell electroporation |
US20110118732A1 (en) | 2009-11-19 | 2011-05-19 | The Regents Of The University Of California | Controlled irreversible electroporation |
US8728784B2 (en) * | 2010-05-05 | 2014-05-20 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method for fluid flow containment in an open liquid environment |
JP6046041B2 (ja) | 2010-10-25 | 2016-12-14 | メドトロニック アーディアン ルクセンブルク ソシエテ ア レスポンサビリテ リミテ | 神経変調療法の評価及びフィードバックのためのデバイス、システム、及び方法 |
JP6144255B2 (ja) | 2011-05-13 | 2017-06-07 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 細胞の選択的トランスフェクション用の光熱基板 |
WO2012158132A1 (en) | 2011-05-18 | 2012-11-22 | Eteka Llc | Apparatus for the enhancement of food properties by electroporation or pulsed electric fields |
US9072518B2 (en) * | 2011-05-31 | 2015-07-07 | Atricure, Inc. | High-voltage pulse ablation systems and methods |
US9382510B2 (en) | 2011-08-25 | 2016-07-05 | Jian Chen | Methods and devices for electroporation |
WO2013103901A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | Bend Research, Inc. | Dielectric spectroscopy methods and apparatus |
US20130189771A1 (en) * | 2012-01-25 | 2013-07-25 | Hans Strandberg | Cell culture device |
US9414881B2 (en) | 2012-02-08 | 2016-08-16 | Angiodynamics, Inc. | System and method for increasing a target zone for electrical ablation |
US9597018B2 (en) | 2012-03-08 | 2017-03-21 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Biomarker sampling in the context of neuromodulation devices, systems, and methods |
US9750568B2 (en) | 2012-03-08 | 2017-09-05 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Ovarian neuromodulation and associated systems and methods |
EP2882336B1 (en) | 2012-08-09 | 2019-06-26 | University of Iowa Research Foundation | Catheter systems for puncturing through a tissue structure |
US20140110296A1 (en) | 2012-10-19 | 2014-04-24 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Packaging for Catheter Treatment Devices and Associated Devices, Systems, and Methods |
JP6606058B2 (ja) | 2013-03-15 | 2019-11-13 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 光熱プラットフォームを使用する生細胞への高スループットカーゴ送達 |
CN103275874B (zh) * | 2013-06-08 | 2014-09-10 | 苏州文曲生物微系统有限公司 | 一种高密度分布式立体电极装置 |
WO2015085162A1 (en) | 2013-12-05 | 2015-06-11 | Rfemb Holdings, Llc | Cancer immunotherapy by radiofrequency electrical membrane breakdown (rf-emb) |
EP3068925B1 (en) | 2013-11-14 | 2022-01-05 | RM2 Technology LLC | Systems, and apparatuses for delivery of electrolysis products |
EP3091921B1 (en) | 2014-01-06 | 2019-06-19 | Farapulse, Inc. | Apparatus for renal denervation ablation |
US10166321B2 (en) | 2014-01-09 | 2019-01-01 | Angiodynamics, Inc. | High-flow port and infusion needle systems |
US9980766B1 (en) | 2014-03-28 | 2018-05-29 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Methods and systems for renal neuromodulation |
US10194979B1 (en) | 2014-03-28 | 2019-02-05 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Methods for catheter-based renal neuromodulation |
US10194980B1 (en) | 2014-03-28 | 2019-02-05 | Medtronic Ardian Luxembourg S.A.R.L. | Methods for catheter-based renal neuromodulation |
WO2015148842A1 (en) * | 2014-03-28 | 2015-10-01 | The Regents Of The University Of California | Efficient delivery of large cargos into cells on a porous substrate |
EP3139997B1 (en) | 2014-05-07 | 2018-09-19 | Farapulse, Inc. | Apparatus for selective tissue ablation |
WO2015192027A1 (en) | 2014-06-12 | 2015-12-17 | Iowa Approach Inc. | Method and apparatus for rapid and selective transurethral tissue ablation |
WO2015192018A1 (en) | 2014-06-12 | 2015-12-17 | Iowa Approach Inc. | Method and apparatus for rapid and selective tissue ablation with cooling |
WO2016060983A1 (en) | 2014-10-14 | 2016-04-21 | Iowa Approach Inc. | Method and apparatus for rapid and safe pulmonary vein cardiac ablation |
US20160131637A1 (en) * | 2014-11-10 | 2016-05-12 | William Marsh Rice University | Suspended nano-electrodes for on-chip electrophysiology |
WO2016123608A2 (en) | 2015-01-30 | 2016-08-04 | Rfemb Holdings, Llc | Radio-frequency electrical membrane breakdown for the treatment of high risk and recurrent prostate cancer, unresectable pancreatic cancer, tumors of the breast, melanoma or other skin malignancies, sarcoma, soft tissue tumors, ductal carcinoma, neoplasia, and intra and extra luminal abnormal tissue |
WO2016161081A1 (en) | 2015-04-03 | 2016-10-06 | Fluxion Biosciences, Inc. | Molecular characterization of single cells and cell populations for non-invasive diagnostics |
US10939949B2 (en) | 2015-05-01 | 2021-03-09 | Inter Science Gmbh | Methods, systems, and apparatuses for tissue ablation using pulse shape designs |
CN108351723B (zh) * | 2015-11-11 | 2020-12-22 | 阿尔卑斯阿尔派株式会社 | 输入装置及输入装置的驱动方法 |
US10660702B2 (en) | 2016-01-05 | 2020-05-26 | Farapulse, Inc. | Systems, devices, and methods for focal ablation |
US20170189097A1 (en) | 2016-01-05 | 2017-07-06 | Iowa Approach Inc. | Systems, apparatuses and methods for delivery of ablative energy to tissue |
US10130423B1 (en) | 2017-07-06 | 2018-11-20 | Farapulse, Inc. | Systems, devices, and methods for focal ablation |
US10172673B2 (en) | 2016-01-05 | 2019-01-08 | Farapulse, Inc. | Systems devices, and methods for delivery of pulsed electric field ablative energy to endocardial tissue |
US11612426B2 (en) | 2016-01-15 | 2023-03-28 | Immunsys, Inc. | Immunologic treatment of cancer |
EP3471631A4 (en) | 2016-06-16 | 2020-03-04 | Farapulse, Inc. | GUIDE WIRE DISTRIBUTION SYSTEMS, APPARATUSES AND METHODS |
JP6793918B2 (ja) * | 2016-09-02 | 2020-12-02 | 日本光電工業株式会社 | 測定装置 |
US10702690B2 (en) | 2017-02-03 | 2020-07-07 | Infinitesimal Llc | Electroporation system with micromanipulator and probe |
CN110741076A (zh) * | 2017-04-26 | 2020-01-31 | 拉瓦塔解决方案股份有限公司 | 用于电穿孔的微电极技术 |
US9987081B1 (en) | 2017-04-27 | 2018-06-05 | Iowa Approach, Inc. | Systems, devices, and methods for signal generation |
US10617867B2 (en) | 2017-04-28 | 2020-04-14 | Farapulse, Inc. | Systems, devices, and methods for delivery of pulsed electric field ablative energy to esophageal tissue |
HRP20220615T1 (hr) | 2017-06-30 | 2022-06-24 | Inscripta, Inc. | Postupci, moduli, instrumenti i sustavi za automatiziranu obradu stanica |
SE542514C2 (en) | 2017-07-28 | 2020-05-26 | Scandinavian Chemotech Ab | A pulse generating device for delivery of electrical pulses to a desired tissue of a mammal |
US10738327B2 (en) | 2017-08-28 | 2020-08-11 | Inscripta, Inc. | Electroporation cuvettes for automation |
CN115844523A (zh) | 2017-09-12 | 2023-03-28 | 波士顿科学医学有限公司 | 用于心室局灶性消融的系统、设备和方法 |
CA3074927A1 (en) | 2017-09-30 | 2019-04-04 | Inscripta, Inc. | Flow through electroporation instrumentation |
CN112204131A (zh) | 2018-03-29 | 2021-01-08 | 因思科瑞普特公司 | 用于诱导和转化的细胞生长速率的自动化控制 |
US10376889B1 (en) | 2018-04-13 | 2019-08-13 | Inscripta, Inc. | Automated cell processing instruments comprising reagent cartridges |
US10557216B2 (en) | 2018-04-24 | 2020-02-11 | Inscripta, Inc. | Automated instrumentation for production of T-cell receptor peptide libraries |
US10858761B2 (en) | 2018-04-24 | 2020-12-08 | Inscripta, Inc. | Nucleic acid-guided editing of exogenous polynucleotides in heterologous cells |
WO2019209926A1 (en) | 2018-04-24 | 2019-10-31 | Inscripta, Inc. | Automated instrumentation for production of peptide libraries |
JP7399881B2 (ja) | 2018-05-07 | 2023-12-18 | ファラパルス,インコーポレイテッド | 心外膜アブレーションカテーテル |
JP7379377B2 (ja) | 2018-05-07 | 2023-11-14 | ファラパルス,インコーポレイテッド | パルス電界アブレーションによって誘導される高電圧ノイズをフィルタリングするためのシステム、装置、および方法 |
JP2021522903A (ja) | 2018-05-07 | 2021-09-02 | ファラパルス,インコーポレイテッド | 組織へアブレーションエネルギーを送達するためのシステム、装置、および方法 |
CN108802388A (zh) * | 2018-05-15 | 2018-11-13 | 华中科技大学鄂州工业技术研究院 | 一种用于结肠癌高通量标记检测的探针试剂盒及其使用方法 |
US11300558B2 (en) * | 2018-06-14 | 2022-04-12 | Nokomis, Inc. | Apparatus and system for spectroscopy and tomography of fragile biologic materials |
NL2021435B1 (en) * | 2018-08-07 | 2020-02-17 | Ixl Netherlands B V | Method for preparing a food product and pulsed electric field cooking device |
US10532324B1 (en) | 2018-08-14 | 2020-01-14 | Inscripta, Inc. | Instruments, modules, and methods for improved detection of edited sequences in live cells |
IL292273B2 (en) | 2018-08-14 | 2023-10-01 | Inscripta Inc | Devices, modules and methods for improved detection of edited sequences in living cells |
US11142740B2 (en) | 2018-08-14 | 2021-10-12 | Inscripta, Inc. | Detection of nuclease edited sequences in automated modules and instruments |
US10752874B2 (en) | 2018-08-14 | 2020-08-25 | Inscripta, Inc. | Instruments, modules, and methods for improved detection of edited sequences in live cells |
EP3844263A4 (en) | 2018-08-30 | 2022-05-25 | Inscripta, Inc. | ENHANCED DETECTION OF NUCLEASE-EDITED SEQUENCES IN AUTOMATED MODULES AND INSTRUMENTS |
US10687892B2 (en) | 2018-09-20 | 2020-06-23 | Farapulse, Inc. | Systems, apparatuses, and methods for delivery of pulsed electric field ablative energy to endocardial tissue |
US10907125B2 (en) | 2019-06-20 | 2021-02-02 | Inscripta, Inc. | Flow through electroporation modules and instrumentation |
CN114008070A (zh) | 2019-06-21 | 2022-02-01 | 因思科瑞普特公司 | 导致大肠杆菌赖氨酸产量增加的全基因组合理设计的突变 |
US10927385B2 (en) | 2019-06-25 | 2021-02-23 | Inscripta, Inc. | Increased nucleic-acid guided cell editing in yeast |
US10625080B1 (en) | 2019-09-17 | 2020-04-21 | Farapulse, Inc. | Systems, apparatuses, and methods for detecting ectopic electrocardiogram signals during pulsed electric field ablation |
US11065047B2 (en) | 2019-11-20 | 2021-07-20 | Farapulse, Inc. | Systems, apparatuses, and methods for protecting electronic components from high power noise induced by high voltage pulses |
US11497541B2 (en) | 2019-11-20 | 2022-11-15 | Boston Scientific Scimed, Inc. | Systems, apparatuses, and methods for protecting electronic components from high power noise induced by high voltage pulses |
US10842572B1 (en) | 2019-11-25 | 2020-11-24 | Farapulse, Inc. | Methods, systems, and apparatuses for tracking ablation devices and generating lesion lines |
US10689669B1 (en) | 2020-01-11 | 2020-06-23 | Inscripta, Inc. | Automated multi-module cell processing methods, instruments, and systems |
AU2021213705A1 (en) | 2020-01-27 | 2022-06-16 | Inscripta, Inc. | Electroporation modules and instrumentation |
US20210332388A1 (en) | 2020-04-24 | 2021-10-28 | Inscripta, Inc. | Compositions, methods, modules and instruments for automated nucleic acid-guided nuclease editing in mammalian cells |
US11787841B2 (en) | 2020-05-19 | 2023-10-17 | Inscripta, Inc. | Rationally-designed mutations to the thrA gene for enhanced lysine production in E. coli |
US12006507B2 (en) | 2020-07-22 | 2024-06-11 | Nantcell, Inc. | Electroporation with active compensation |
WO2022214870A1 (en) | 2021-04-07 | 2022-10-13 | Btl Medical Technologies S.R.O. | Pulsed field ablation device and method |
CN113220925B (zh) * | 2021-04-26 | 2022-04-12 | 华南师范大学 | 一种细胞图像查重方法和系统 |
IL309432A (en) | 2021-07-06 | 2024-02-01 | Btl Medical Dev A S | Apparatus and method for ablation (burning) by electric pulse field |
US20230109873A1 (en) * | 2021-10-13 | 2023-04-13 | CyteQuest, Inc. | Devices, methods, and systems for electroporation using controlled parameters |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5173158A (en) * | 1991-07-22 | 1992-12-22 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
WO1998056893A1 (en) * | 1997-06-10 | 1998-12-17 | Walters Richard E | Method and apparatus for treating materials with electrical fields having varying orientations |
Family Cites Families (137)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US599847A (en) * | 1898-03-01 | Railway-switch and means for operating same | ||
US1653819A (en) | 1926-08-07 | 1927-12-27 | Northcott Ephraim | Electrotherapeutical apparatus |
DE863111C (de) | 1951-07-03 | 1953-01-15 | Walter Hallegger | Instrument zur transkutanen und subkutanen Erwaermung und Iontophorese und Verfahrenzu seiner Anwendung |
US4016886A (en) | 1974-11-26 | 1977-04-12 | The United States Of America As Represented By The United States Energy Research And Development Administration | Method for localizing heating in tumor tissue |
US4407943A (en) * | 1976-12-16 | 1983-10-04 | Millipore Corporation | Immobilized antibody or antigen for immunoassay |
CH617590A5 (ja) | 1977-05-27 | 1980-06-13 | Carba Ag | |
DE2800039C2 (de) | 1978-01-02 | 1984-06-20 | Horst Dr.Med. 6700 Ludwigshafen Kief | Akupunkturgerät |
US5385544A (en) | 1992-08-12 | 1995-01-31 | Vidamed, Inc. | BPH ablation method and apparatus |
US5370675A (en) | 1992-08-12 | 1994-12-06 | Vidamed, Inc. | Medical probe device and method |
GB8408529D0 (en) * | 1984-04-03 | 1984-05-16 | Health Lab Service Board | Concentration of biological particles |
US4946793A (en) * | 1986-05-09 | 1990-08-07 | Electropore, Inc. | Impedance matching for instrumentation which electrically alters vesicle membranes |
US5098843A (en) | 1987-06-04 | 1992-03-24 | Calvin Noel M | Apparatus for the high efficiency transformation of living cells |
ATE131081T1 (de) | 1988-01-21 | 1995-12-15 | Massachusetts Inst Technology | Molekültransport durch gewebe mit der verwendung von elektroporation. |
US5389069A (en) | 1988-01-21 | 1995-02-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Method and apparatus for in vivo electroporation of remote cells and tissue |
US5186800A (en) * | 1988-04-18 | 1993-02-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Electroporation of prokaryotic cells |
EP0346513A1 (de) | 1988-06-15 | 1989-12-20 | Etama Ag | Anordnung zur Elektrotherapie |
ES2012944A6 (es) | 1989-01-09 | 1990-04-16 | Tomas Justribo Jose Ramon | Procedimiento y su dispositivo para la admionistracion de farmacos mediante ionoforesis, para tratamiento loco-regionales. |
CS275292B2 (en) | 1989-02-22 | 1992-02-19 | Cvut Fakulta Elektrotechnick | Private rehabilitation apparatus with ion transcutaneous acceleration |
DE4000893A1 (de) | 1990-01-15 | 1991-07-18 | Bosch Gmbh Robert | Mehrkanaliges geraet zur elektrostimulation |
US5134070A (en) | 1990-06-04 | 1992-07-28 | Casnig Dael R | Method and device for cell cultivation on electrodes |
US5193537A (en) | 1990-06-12 | 1993-03-16 | Zmd Corporation | Method and apparatus for transcutaneous electrical cardiac pacing |
US5052391A (en) | 1990-10-22 | 1991-10-01 | R.F.P., Inc. | High frequency high intensity transcutaneous electrical nerve stimulator and method of treatment |
US5328451A (en) | 1991-08-15 | 1994-07-12 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Iontophoretic device and method for killing bacteria and other microbes |
US5425752A (en) | 1991-11-25 | 1995-06-20 | Vu'nguyen; Dung D. | Method of direct electrical myostimulation using acupuncture needles |
US6500173B2 (en) | 1992-01-07 | 2002-12-31 | Ronald A. Underwood | Methods for electrosurgical spine surgery |
US6210402B1 (en) | 1995-11-22 | 2001-04-03 | Arthrocare Corporation | Methods for electrosurgical dermatological treatment |
US6132419A (en) | 1992-05-22 | 2000-10-17 | Genetronics, Inc. | Electroporetic gene and drug therapy |
US5318563A (en) | 1992-06-04 | 1994-06-07 | Valley Forge Scientific Corporation | Bipolar RF generator |
US5549644A (en) | 1992-08-12 | 1996-08-27 | Vidamed, Inc. | Transurethral needle ablation device with cystoscope and method for treatment of the prostate |
US5273525A (en) | 1992-08-13 | 1993-12-28 | Btx Inc. | Injection and electroporation apparatus for drug and gene delivery |
US5634899A (en) | 1993-08-20 | 1997-06-03 | Cortrak Medical, Inc. | Simultaneous cardiac pacing and local drug delivery method |
GB9226376D0 (en) * | 1992-12-18 | 1993-02-10 | British Tech Group | Tomography |
US5792187A (en) | 1993-02-22 | 1998-08-11 | Angeion Corporation | Neuro-stimulation to control pain during cardioversion defibrillation |
DE4310141A1 (de) * | 1993-03-29 | 1994-10-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Homobidentale trifunktionelle Linker |
US5403311A (en) | 1993-03-29 | 1995-04-04 | Boston Scientific Corporation | Electro-coagulation and ablation and other electrotherapeutic treatments of body tissue |
FR2703253B1 (fr) | 1993-03-30 | 1995-06-23 | Centre Nat Rech Scient | Applicateur d'impulsions electriques pour traitement de tissus biologiques. |
US5439440A (en) | 1993-04-01 | 1995-08-08 | Genetronics, Inc. | Electroporation system with voltage control feedback for clinical applications |
US5702359A (en) | 1995-06-06 | 1997-12-30 | Genetronics, Inc. | Needle electrodes for mediated delivery of drugs and genes |
US6832996B2 (en) | 1995-06-07 | 2004-12-21 | Arthrocare Corporation | Electrosurgical systems and methods for treating tissue |
US5464437A (en) | 1993-07-08 | 1995-11-07 | Urologix, Inc. | Benign prostatic hyperplasia treatment catheter with urethral cooling |
US5533999A (en) | 1993-08-23 | 1996-07-09 | Refractec, Inc. | Method and apparatus for modifications of visual acuity by thermal means |
US5458625A (en) | 1994-05-04 | 1995-10-17 | Kendall; Donald E. | Transcutaneous nerve stimulation device and method for using same |
US5836905A (en) | 1994-06-20 | 1998-11-17 | Lemelson; Jerome H. | Apparatus and methods for gene therapy |
DE59602545D1 (de) | 1995-01-17 | 1999-09-02 | Hehrlein | Ballon-katheter zur verhinderung der re-stenose nach angioplastie, und verfahren zum herstellen eines ballon-katheters |
US5720921A (en) * | 1995-03-10 | 1998-02-24 | Entremed, Inc. | Flow electroporation chamber and method |
US5810762A (en) | 1995-04-10 | 1998-09-22 | Genetronics, Inc. | Electroporation system with voltage control feedback for clinical applications |
US6041252A (en) | 1995-06-07 | 2000-03-21 | Ichor Medical Systems Inc. | Drug delivery system and method |
US6607529B1 (en) | 1995-06-19 | 2003-08-19 | Medtronic Vidamed, Inc. | Electrosurgical device |
US5919142A (en) * | 1995-06-22 | 1999-07-06 | Btg International Limited | Electrical impedance tomography method and apparatus |
US5983131A (en) | 1995-08-11 | 1999-11-09 | Massachusetts Institute Of Technology | Apparatus and method for electroporation of tissue |
EP0776678A1 (en) | 1995-11-30 | 1997-06-04 | Hewlett-Packard Company | System for administering transcutaneous cardiac pacing with transcutaneous electrical nerve stimuli |
US6010613A (en) | 1995-12-08 | 2000-01-04 | Cyto Pulse Sciences, Inc. | Method of treating materials with pulsed electrical fields |
US5718246A (en) * | 1996-01-03 | 1998-02-17 | Preferential, Inc. | Preferential induction of electrically mediated cell death from applied pulses |
US6090106A (en) | 1996-01-09 | 2000-07-18 | Gyrus Medical Limited | Electrosurgical instrument |
US6016452A (en) | 1996-03-19 | 2000-01-18 | Kasevich; Raymond S. | Dynamic heating method and radio frequency thermal treatment |
US5778894A (en) | 1996-04-18 | 1998-07-14 | Elizabeth Arden Co. | Method for reducing human body cellulite by treatment with pulsed electromagnetic energy |
SE509241C2 (sv) | 1996-07-18 | 1998-12-21 | Radinvent Ab | Anordningar för elektrodynamisk strålterapi av tumörsjukdomar |
US6102885A (en) | 1996-08-08 | 2000-08-15 | Bass; Lawrence S. | Device for suction-assisted lipectomy and method of using same |
US6106521A (en) | 1996-08-16 | 2000-08-22 | United States Surgical Corporation | Apparatus for thermal treatment of tissue |
US5991697A (en) * | 1996-12-31 | 1999-11-23 | The Regents Of The University Of California | Method and apparatus for optical Doppler tomographic imaging of fluid flow velocity in highly scattering media |
AU6262698A (en) | 1997-02-04 | 1998-08-25 | National Aeronautics And Space Administration - Nasa | Multimodality instrument for tissue characterization |
US5873849A (en) | 1997-04-24 | 1999-02-23 | Ichor Medical Systems, Inc. | Electrodes and electrode arrays for generating electroporation inducing electrical fields |
US6085115A (en) | 1997-05-22 | 2000-07-04 | Massachusetts Institite Of Technology | Biopotential measurement including electroporation of tissue surface |
US5978704A (en) * | 1997-06-03 | 1999-11-02 | Uab Research Foundation | Method and apparatus for treating cardiac arrhythmia |
US6216034B1 (en) | 1997-08-01 | 2001-04-10 | Genetronics, Inc. | Method of programming an array of needle electrodes for electroporation therapy of tissue |
US6055453A (en) | 1997-08-01 | 2000-04-25 | Genetronics, Inc. | Apparatus for addressing needle array electrodes for electroporation therapy |
EP1003847A4 (en) | 1997-09-04 | 2005-04-06 | Science Res Lab Inc | SEPARATION OF CELLS BY USE OF ELECTRIC FIELDS |
US5999847A (en) | 1997-10-21 | 1999-12-07 | Elstrom; John A. | Apparatus and method for delivery of surgical and therapeutic agents |
AU1114699A (en) | 1997-10-24 | 1999-05-17 | Children's Medical Center Corporation | Methods for promoting cell transfection (in vivo) |
US6009347A (en) | 1998-01-27 | 1999-12-28 | Genetronics, Inc. | Electroporation apparatus with connective electrode template |
US6208893B1 (en) | 1998-01-27 | 2001-03-27 | Genetronics, Inc. | Electroporation apparatus with connective electrode template |
US6440127B2 (en) | 1998-02-11 | 2002-08-27 | Cosman Company, Inc. | Method for performing intraurethral radio-frequency urethral enlargement |
US6122599A (en) * | 1998-02-13 | 2000-09-19 | Mehta; Shailesh | Apparatus and method for analyzing particles |
JP4467793B2 (ja) * | 1998-03-12 | 2010-05-26 | 株式会社東京大学Tlo | 細胞の特定部位穿孔技術 |
SE513814C2 (sv) | 1998-03-31 | 2000-11-06 | Aditus Medical Ab | Anordning för behandling av sjukdomar med elektriska fält |
US6219577B1 (en) | 1998-04-14 | 2001-04-17 | Global Vascular Concepts, Inc. | Iontophoresis, electroporation and combination catheters for local drug delivery to arteries and other body tissues |
US6159163A (en) | 1998-05-07 | 2000-12-12 | Cedars-Sinai Medical Center | System for attenuating pain during bone marrow aspiration and method |
EP1079890A4 (en) | 1998-05-08 | 2008-12-03 | Genetronics Inc | VASODILATION OF AN ELECTRICALLY INDUCED VESSEL |
US6101613A (en) * | 1998-07-06 | 2000-08-08 | Intel Corporation | Architecture providing isochronous access to memory in a system |
EP1100579B1 (en) | 1998-07-13 | 2015-09-02 | Inovio Pharmaceuticals, Inc. | Skin and muscle-targeted gene therapy by pulsed electrical field |
US6212433B1 (en) | 1998-07-28 | 2001-04-03 | Radiotherapeutics Corporation | Method for treating tumors near the surface of an organ |
WO2000018289A1 (en) | 1998-09-30 | 2000-04-06 | Cygnus, Inc. | Method and device for predicting physiological values |
US6611706B2 (en) | 1998-11-09 | 2003-08-26 | Transpharma Ltd. | Monopolar and bipolar current application for transdermal drug delivery and analyte extraction |
AU1727400A (en) | 1998-11-16 | 2000-06-05 | United States Surgical Corporation | Apparatus for thermal treatment of tissue |
US6090016A (en) * | 1998-11-18 | 2000-07-18 | Kuo; Hai Pin | Collapsible treader with enhanced stability |
US6351674B2 (en) | 1998-11-23 | 2002-02-26 | Synaptic Corporation | Method for inducing electroanesthesia using high frequency, high intensity transcutaneous electrical nerve stimulation |
US6261831B1 (en) | 1999-03-26 | 2001-07-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force | Ultra-wide band RF-enhanced chemotherapy for cancer treatmeat |
US6738663B2 (en) | 1999-04-09 | 2004-05-18 | Oncostim, A Minnesota Corporation | Implantable device and method for the electrical treatment of cancer |
US6627421B1 (en) | 1999-04-13 | 2003-09-30 | Imarx Therapeutics, Inc. | Methods and systems for applying multi-mode energy to biological samples |
US6403348B1 (en) * | 1999-07-21 | 2002-06-11 | The Regents Of The University Of California | Controlled electroporation and mass transfer across cell membranes |
US6300108B1 (en) | 1999-07-21 | 2001-10-09 | The Regents Of The University Of California | Controlled electroporation and mass transfer across cell membranes |
US6927049B2 (en) | 1999-07-21 | 2005-08-09 | The Regents Of The University Of California | Cell viability detection using electrical measurements |
US6387671B1 (en) | 1999-07-21 | 2002-05-14 | The Regents Of The University Of California | Electrical impedance tomography to control electroporation |
US7053063B2 (en) | 1999-07-21 | 2006-05-30 | The Regents Of The University Of California | Controlled electroporation and mass transfer across cell membranes in tissue |
DE60026313D1 (de) * | 1999-07-23 | 2006-04-27 | Uutech Ltd | Sensibilisierung von roten blutkörperchen gegenüber ultraschall durch einwirkung eines elektrischen feldes |
US20020010491A1 (en) | 1999-08-04 | 2002-01-24 | Schoenbach Karl H. | Method and apparatus for intracellular electro-manipulation |
US6326177B1 (en) | 1999-08-04 | 2001-12-04 | Eastern Virginia Medical School Of The Medical College Of Hampton Roads | Method and apparatus for intracellular electro-manipulation |
US20030078499A1 (en) | 1999-08-12 | 2003-04-24 | Eppstein Jonathan A. | Microporation of tissue for delivery of bioactive agents |
US6613211B1 (en) * | 1999-08-27 | 2003-09-02 | Aclara Biosciences, Inc. | Capillary electrokinesis based cellular assays |
JP4676042B2 (ja) * | 1999-10-01 | 2011-04-27 | 帝國製薬株式会社 | フェルビナク含有鎮痛・消炎外用貼付剤 |
US6493592B1 (en) | 1999-12-01 | 2002-12-10 | Vertis Neuroscience, Inc. | Percutaneous electrical therapy system with electrode position maintenance |
US20010044596A1 (en) | 2000-05-10 | 2001-11-22 | Ali Jaafar | Apparatus and method for treatment of vascular restenosis by electroporation |
KR100375657B1 (ko) | 2000-06-21 | 2003-03-15 | 주식회사 몸앤맘 | 체지방 제거장치 및 방법 |
US6669691B1 (en) | 2000-07-18 | 2003-12-30 | Scimed Life Systems, Inc. | Epicardial myocardial revascularization and denervation methods and apparatus |
US7419487B2 (en) | 2000-07-25 | 2008-09-02 | Angiodynamics, Inc. | Apparatus for detecting and treating tumors using localized impedance measurement |
US6697670B2 (en) | 2001-08-17 | 2004-02-24 | Minnesota Medical Physics, Llc | Apparatus and method for reducing subcutaneous fat deposits by electroporation with improved comfort of patients |
US6795728B2 (en) | 2001-08-17 | 2004-09-21 | Minnesota Medical Physics, Llc | Apparatus and method for reducing subcutaneous fat deposits by electroporation |
US6892099B2 (en) | 2001-02-08 | 2005-05-10 | Minnesota Medical Physics, Llc | Apparatus and method for reducing subcutaneous fat deposits, virtual face lift and body sculpturing by electroporation |
US6702808B1 (en) | 2000-09-28 | 2004-03-09 | Syneron Medical Ltd. | Device and method for treating skin |
US20050043726A1 (en) | 2001-03-07 | 2005-02-24 | Mchale Anthony Patrick | Device II |
US7393657B2 (en) | 2001-04-12 | 2008-07-01 | Imperial College Innovations Limited | Diagnosis and treatment of cancer: I |
WO2002087692A1 (en) | 2001-04-26 | 2002-11-07 | The Procter & Gamble Company | A method and apparatus for the treatment of cosmetic skin conditioins |
US6832111B2 (en) | 2001-07-06 | 2004-12-14 | Hosheng Tu | Device for tumor diagnosis and methods thereof |
US6994706B2 (en) | 2001-08-13 | 2006-02-07 | Minnesota Medical Physics, Llc | Apparatus and method for treatment of benign prostatic hyperplasia |
US7130697B2 (en) | 2002-08-13 | 2006-10-31 | Minnesota Medical Physics Llc | Apparatus and method for the treatment of benign prostatic hyperplasia |
AU2002327779B2 (en) | 2001-09-28 | 2008-06-26 | Angiodynamics, Inc. | Impedance controlled tissue ablation apparatus and method |
AU2002362441A1 (en) | 2001-10-01 | 2003-04-14 | Am Discovery, Incorporated | Devices for treating atrial fibrilation |
FR2830767B1 (fr) | 2001-10-12 | 2004-03-12 | Optis France Sa | Dispositif de delivrance de medicaments par iontophorese ou electroporation introculaire |
AU2002363106B2 (en) | 2001-10-24 | 2008-04-24 | Power Paper Ltd. | Device and method for controlled delivery of active substance into the skin |
US6807444B2 (en) | 2001-11-05 | 2004-10-19 | Hosheng Tu | Apparatus and methods for monitoring tissue impedance |
US20030170898A1 (en) | 2001-12-04 | 2003-09-11 | Gundersen Martin A. | Method for intracellular modifications within living cells using pulsed electric fields |
US7392080B2 (en) | 2002-03-11 | 2008-06-24 | Altea Therapeutics Corporation | Transdermal drug delivery patch system, method of making same and method of using same |
US6912417B1 (en) | 2002-04-05 | 2005-06-28 | Ichor Medical Systmes, Inc. | Method and apparatus for delivery of therapeutic agents |
US20060206150A1 (en) | 2002-04-08 | 2006-09-14 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for treating acute myocardial infarction |
US7653438B2 (en) | 2002-04-08 | 2010-01-26 | Ardian, Inc. | Methods and apparatus for renal neuromodulation |
US6780178B2 (en) | 2002-05-03 | 2004-08-24 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method and apparatus for plasma-mediated thermo-electrical ablation |
US6801804B2 (en) | 2002-05-03 | 2004-10-05 | Aciont, Inc. | Device and method for monitoring and controlling electrical resistance at a tissue site undergoing iontophoresis |
ES2289307T3 (es) | 2002-05-06 | 2008-02-01 | Covidien Ag | Detector de sangre para controlar una unidad electroquirurgica. |
EP1515775A4 (en) | 2002-05-07 | 2010-03-03 | Oncostim Inc | METHOD AND DEVICE FOR TREATING CANCER WITH ELECTROTHERAPY ASSOCIATED WITH CHEMOTHERAPEAN MEDICAMENTS AND RADIOTHERAPY |
US7063698B2 (en) | 2002-06-14 | 2006-06-20 | Ncontact Surgical, Inc. | Vacuum coagulation probes |
US6972014B2 (en) | 2003-01-04 | 2005-12-06 | Endocare, Inc. | Open system heat exchange catheters and methods of use |
US7211083B2 (en) | 2003-03-17 | 2007-05-01 | Minnesota Medical Physics, Llc | Apparatus and method for hair removal by electroporation |
ES2729378T3 (es) | 2003-12-24 | 2019-11-04 | Univ California | Ablación de tejido con electroporación irreversible |
US20050261672A1 (en) | 2004-05-18 | 2005-11-24 | Mark Deem | Systems and methods for selective denervation of heart dysrhythmias |
US7261710B2 (en) | 2004-10-13 | 2007-08-28 | Medtronic, Inc. | Transurethral needle ablation system |
US20060264752A1 (en) | 2005-04-27 | 2006-11-23 | The Regents Of The University Of California | Electroporation controlled with real time imaging |
US20080052786A1 (en) | 2006-08-24 | 2008-02-28 | Pei-Cheng Lin | Animal Model of Prostate Cancer and Use Thereof |
-
1999
- 1999-07-21 US US09/358,510 patent/US6300108B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-07-19 US US09/618,951 patent/US6482619B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-20 WO PCT/US2000/019971 patent/WO2001007583A1/en active Application Filing
- 2000-07-20 EP EP00950548A patent/EP1196550A4/en not_active Withdrawn
- 2000-07-20 AU AU63650/00A patent/AU6365000A/en not_active Abandoned
- 2000-07-20 CA CA002378110A patent/CA2378110A1/en not_active Abandoned
- 2000-07-20 AU AU63642/00A patent/AU6364200A/en not_active Abandoned
- 2000-07-20 JP JP2001512853A patent/JP2003505072A/ja active Pending
- 2000-07-20 AU AU62314/00A patent/AU6231400A/en not_active Abandoned
-
2001
- 2001-05-22 US US09/863,117 patent/US6562604B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-22 US US09/863,197 patent/US20010046706A1/en not_active Abandoned
-
2003
- 2003-03-20 US US10/393,576 patent/US20030194808A1/en not_active Abandoned
- 2003-04-03 US US10/407,580 patent/US20030166181A1/en not_active Abandoned
-
2006
- 2006-01-25 US US11/340,176 patent/US7718409B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-04-09 US US12/757,595 patent/US7955827B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5173158A (en) * | 1991-07-22 | 1992-12-22 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
WO1998056893A1 (en) * | 1997-06-10 | 1998-12-17 | Walters Richard E | Method and apparatus for treating materials with electrical fields having varying orientations |
Cited By (54)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001252065A (ja) * | 2000-03-15 | 2001-09-18 | Tokai Rika Co Ltd | 粒子移動/固定装置 |
US10463426B2 (en) | 2001-08-13 | 2019-11-05 | Angiodynamics, Inc. | Method for treating a tubular anatomical structure |
JP2005337734A (ja) * | 2004-05-24 | 2005-12-08 | Shigetoshi Oiki | シス−トランス液流方式によるイオンチャネル解析方法と、その方法に使用するイオンチャネル解析装置 |
JP4516356B2 (ja) * | 2004-05-24 | 2010-08-04 | 成稔 老木 | シス−トランス液流方式によるイオンチャネル解析方法と、その方法に使用するイオンチャネル解析装置 |
JP2006129798A (ja) * | 2004-11-08 | 2006-05-25 | Onchip Cellomics Consortium | 細胞チップおよび細胞改変方法および細胞制御方法 |
JP4585280B2 (ja) * | 2004-11-08 | 2010-11-24 | 一般社団法人オンチップ・セロミクス・コンソーシアム | 細胞チップおよび細胞改変方法および細胞制御方法 |
JP2006191893A (ja) * | 2005-01-17 | 2006-07-27 | Seiko Instruments Inc | 侵襲確認装置 |
JP4618674B2 (ja) * | 2005-01-17 | 2011-01-26 | セイコーインスツル株式会社 | 侵襲確認装置 |
JP2008545415A (ja) * | 2005-05-26 | 2008-12-18 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 組織中の細胞膜を横切る制御されたエレクトロポレーションおよび物質移動 |
JP2009515168A (ja) * | 2005-11-02 | 2009-04-09 | メイ−ルーベン テクノロジーズ,インク. | 電場を発生させる高インピーダンスシステムおよび使用方法 |
JP2010506660A (ja) * | 2006-10-17 | 2010-03-04 | ヴィージーエックス ファーマシューティカルズ,インコーポレイテッド | 哺乳動物の細胞の電気穿孔のための電気穿孔装置および該電気穿孔装置を使用する方法 |
US10238447B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-03-26 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for ablating a tissue site by electroporation with real-time monitoring of treatment progress |
US11737810B2 (en) | 2008-04-29 | 2023-08-29 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Immunotherapeutic methods using electroporation |
US11952568B2 (en) | 2008-04-29 | 2024-04-09 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Device and methods for delivery of biphasic electrical pulses for non-thermal ablation |
US10117707B2 (en) | 2008-04-29 | 2018-11-06 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for estimating tissue heating of a target ablation zone for electrical-energy based therapies |
US10154874B2 (en) | 2008-04-29 | 2018-12-18 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Immunotherapeutic methods using irreversible electroporation |
US11453873B2 (en) | 2008-04-29 | 2022-09-27 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Methods for delivery of biphasic electrical pulses for non-thermal ablation |
US10245098B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-04-02 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Acute blood-brain barrier disruption using electrical energy based therapy |
US10245105B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-04-02 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Electroporation with cooling to treat tissue |
US10272178B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-04-30 | Virginia Tech Intellectual Properties Inc. | Methods for blood-brain barrier disruption using electrical energy |
US10286108B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-05-14 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Irreversible electroporation to create tissue scaffolds |
US11890046B2 (en) | 2008-04-29 | 2024-02-06 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for ablating a tissue site by electroporation with real-time monitoring of treatment progress |
US9867652B2 (en) | 2008-04-29 | 2018-01-16 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Irreversible electroporation using tissue vasculature to treat aberrant cell masses or create tissue scaffolds |
US11974800B2 (en) | 2008-04-29 | 2024-05-07 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Irreversible electroporation using tissue vasculature to treat aberrant cell masses or create tissue scaffolds |
US10470822B2 (en) | 2008-04-29 | 2019-11-12 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for estimating a treatment volume for administering electrical-energy based therapies |
US11655466B2 (en) | 2008-04-29 | 2023-05-23 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Methods of reducing adverse effects of non-thermal ablation |
US10537379B2 (en) | 2008-04-29 | 2020-01-21 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Irreversible electroporation using tissue vasculature to treat aberrant cell masses or create tissue scaffolds |
US9598691B2 (en) | 2008-04-29 | 2017-03-21 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Irreversible electroporation to create tissue scaffolds |
US11607271B2 (en) | 2008-04-29 | 2023-03-21 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for estimating a treatment volume for administering electrical-energy based therapies |
US10828086B2 (en) | 2008-04-29 | 2020-11-10 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Immunotherapeutic methods using irreversible electroporation |
US10828085B2 (en) | 2008-04-29 | 2020-11-10 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Immunotherapeutic methods using irreversible electroporation |
US10959772B2 (en) | 2008-04-29 | 2021-03-30 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Blood-brain barrier disruption using electrical energy |
US11254926B2 (en) | 2008-04-29 | 2022-02-22 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Devices and methods for high frequency electroporation |
US11272979B2 (en) | 2008-04-29 | 2022-03-15 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | System and method for estimating tissue heating of a target ablation zone for electrical-energy based therapies |
US11638603B2 (en) | 2009-04-09 | 2023-05-02 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Selective modulation of intracellular effects of cells using pulsed electric fields |
US11382681B2 (en) | 2009-04-09 | 2022-07-12 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Device and methods for delivery of high frequency electrical pulses for non-thermal ablation |
US10448989B2 (en) | 2009-04-09 | 2019-10-22 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | High-frequency electroporation for cancer therapy |
US10292755B2 (en) | 2009-04-09 | 2019-05-21 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | High frequency electroporation for cancer therapy |
US9764145B2 (en) | 2009-05-28 | 2017-09-19 | Angiodynamics, Inc. | System and method for synchronizing energy delivery to the cardiac rhythm |
US11707629B2 (en) | 2009-05-28 | 2023-07-25 | Angiodynamics, Inc. | System and method for synchronizing energy delivery to the cardiac rhythm |
US9895189B2 (en) | 2009-06-19 | 2018-02-20 | Angiodynamics, Inc. | Methods of sterilization and treating infection using irreversible electroporation |
US11931096B2 (en) | 2010-10-13 | 2024-03-19 | Angiodynamics, Inc. | System and method for electrically ablating tissue of a patient |
US10702326B2 (en) | 2011-07-15 | 2020-07-07 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Device and method for electroporation based treatment of stenosis of a tubular body part |
US11779395B2 (en) | 2011-09-28 | 2023-10-10 | Angiodynamics, Inc. | Multiple treatment zone ablation probe |
US11957405B2 (en) | 2013-06-13 | 2024-04-16 | Angiodynamics, Inc. | Methods of sterilization and treating infection using irreversible electroporation |
US11406820B2 (en) | 2014-05-12 | 2022-08-09 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Selective modulation of intracellular effects of cells using pulsed electric fields |
US10471254B2 (en) | 2014-05-12 | 2019-11-12 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Selective modulation of intracellular effects of cells using pulsed electric fields |
US11903690B2 (en) | 2014-12-15 | 2024-02-20 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Devices, systems, and methods for real-time monitoring of electrophysical effects during tissue treatment |
US10694972B2 (en) | 2014-12-15 | 2020-06-30 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Devices, systems, and methods for real-time monitoring of electrophysical effects during tissue treatment |
US11723710B2 (en) | 2016-11-17 | 2023-08-15 | Angiodynamics, Inc. | Techniques for irreversible electroporation using a single-pole tine-style internal device communicating with an external surface electrode |
US11607537B2 (en) | 2017-12-05 | 2023-03-21 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Method for treating neurological disorders, including tumors, with electroporation |
US11925405B2 (en) | 2018-03-13 | 2024-03-12 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Treatment planning system for immunotherapy enhancement via non-thermal ablation |
US11311329B2 (en) | 2018-03-13 | 2022-04-26 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Treatment planning for immunotherapy based treatments using non-thermal ablation techniques |
US11950835B2 (en) | 2019-06-28 | 2024-04-09 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Cycled pulsing to mitigate thermal damage for multi-electrode irreversible electroporation therapy |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU6231400A (en) | 2001-02-13 |
WO2001007583A1 (en) | 2001-02-01 |
AU6364200A (en) | 2001-02-13 |
EP1196550A4 (en) | 2006-06-07 |
US20030194808A1 (en) | 2003-10-16 |
US6562604B2 (en) | 2003-05-13 |
CA2378110A1 (en) | 2001-02-01 |
US20010051366A1 (en) | 2001-12-13 |
US6300108B1 (en) | 2001-10-09 |
US20100196984A1 (en) | 2010-08-05 |
US7718409B2 (en) | 2010-05-18 |
US20010046706A1 (en) | 2001-11-29 |
WO2001007583A8 (en) | 2001-08-16 |
US6482619B1 (en) | 2002-11-19 |
AU6365000A (en) | 2001-02-13 |
US7955827B2 (en) | 2011-06-07 |
US20030166181A1 (en) | 2003-09-04 |
US20060121610A1 (en) | 2006-06-08 |
EP1196550A2 (en) | 2002-04-17 |
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---|---|---|
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