JP2002537271A - 免疫原複合体およびそれに関する方法 - Google Patents

免疫原複合体およびそれに関する方法

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Abstract

(57)【要約】 本発明は概して荷電有機担体および荷電抗原、より詳しくは、負電荷を有する有機担体および正電荷を有する抗原を含んでなる免疫原複合体に関する。本発明の複合体は、特に、抗原に対する細胞傷害性Ｔリンパ球応答の誘導を促進するための治療薬および／または予防薬として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は概して荷電有機担体および荷電抗原、より詳しくは、負電荷を有する
有機担体および正電荷を有する抗原を含んでなる免疫原複合体に関する。本発明
の複合体は、特に、抗原に対する細胞傷害性Ｔリンパ球応答の誘導を促進するた
めの治療薬および／または予防薬として有用である。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】発明の背景 本明細書において著者によって引用される刊行物の文献詳細は記載の最後に収
録されている。
【０００３】 同一の抗原提示細胞（ＡＰＣ）への抗原およびアジュバントの同時送達は適当
な免疫応答の誘導に好ましく、必須である場合もあるという考えが広がりつつあ
る。例えば、サポニンをベースとしたアジュバントのＣＤ３ ＋ＣＴＬ応答を誘導
する能力は、それらの同時送達を必要とする機構である、抗原のエンドソーム逃
避を引き起こす能力に起因する。アジュバントと抗原の安定な複合体を含んでな
る粒子形成は同時送達を達成するための最も単純な方法である。ＩＳＣＯＭ（商
標）技術の有用性はいく分かはサポニンの免疫調節性活性に由来し、いく分かは
それらの疎水性または両親媒性免疫原と複合体を形成する能力に由来する。しか
しながら、多数の分子は疎水性領域を欠いており、実際は、かかる分子はそれら
のより容易な発現および精製のために組換えタンパク質が好ましい。
【０００４】 従って、抗原と担体の同時送達を促進するが、通常は十分に安定な複合体を形
成しない免疫原複合体を開発する必要がある。例えば、疎水性領域を欠く抗原と
アジュバントを含んでなる複合体。
【０００５】 本発明の糸口となる研究では、本発明者らは抗原とアジュバントなどの有機担
体の静電気的結合に基づく免疫原複合体を開発した。静電気的結合は抗原と有機
担体の免疫系への同時送達を可能にする。従って、静電気的結合を確立すること
によって、例えば抗原に対する細胞傷害性Ｔリンパ球応答を誘導するという目的
ために、注目される抗原（それらの疎水性に関わらず）を有機担体と同時送達で
きる。
【０００６】
【課題を解決するための手段】発明の概要 本明細書およびその後に続く請求の範囲を通じて、文脈上他の意味に解す必要
がない限り、「含む」および「含んでなる」などの語尾変化は示された整数もし
くは工程または一連の整数もしくは工程を包含するが、いずれかのその他の整数
もしくは工程または一連の整数もしくは工程を除外するものではないことを意味
すると理解される。
【０００７】 本明細書はプログラムＰａｔｅｎｔＩｎバージョン２．０を用いて作製され、
本明細書において文献の後に示されるアミノ酸配列情報を含む。各アミノ酸配列
は数値的指標によって＜２１０＞、続いて、配列識別子によって（例えば、＜２
１０＞１、＜２１０＞２など）配列を列挙することによって同定される。各アミ
ノ酸配列についての配列の長さ、種類（タンパク質（ＰＲＴ）など）および供給
生物はそれぞれ数値的指標フィールド＜２１１＞、＜２１２＞および＜２１３＞
で提供される情報によって示されている。本明細書において参照されるアミノ酸
配列は数値的指標フィールド＜４００＞で提供される情報によって、さらに配列
識別子（例えば、＜４００＞１、＜４００＞２など）によって規定される。
【０００８】 本発明の１つの態様は荷電有機担体および荷電抗原を含んでなり、有機担体と
抗原が静電気的に結合している免疫原複合体に関する。
【０００９】 より詳しくは、本発明のもう１つの態様は負電荷を有する有機担体および正電
荷を有する抗原を含んでなり、有機担体と抗原が静電気的に結合している免疫原
複合体を提供する。
【００１０】 本発明のさらにもう１つの態様は負電荷を有する有機担体および正電荷を有す
るタンパク質を含んでなり、有機担体とタンパク質が静電気的に結合している免
疫原複合体を提供する。
【００１１】 本発明のさらにもう１つの態様は負電荷を有するアジュバントおよび正電荷を
有するタンパク質を含んでなり、アジュバントとタンパク質が静電気的に結合し
ている免疫原複合体を提供する。
【００１２】 本発明のなおさらなるもう１つの態様は負電荷を有するアジュバントおよび正
電荷を有するタンパク質を含んでなり、負電荷を有するアジュバントが自然状態
で負電荷を有するアジュバントであり、その負電荷度を増加させるよう改変され
ており、そのアジュバントとタンパク質が静電気的に結合している免疫原複合体
を提供する。
【００１３】 本発明のさらにもう１つの態様は負電荷を有するアジュバントおよび正電荷を
有するタンパク質を含んでなり、正電荷を有するタンパク質が自然状態で正電荷
を有するタンパク質であり、その正電荷度を増加させるよう改変されており、ア
ジュバントとタンパク質が静電気的に結合している免疫原複合体を提供する。
【００１４】 本発明のなおさらなるもう１つの態様は負電荷を有するアジュバントおよび正
電荷を有するタンパク質を含んでなり、負電荷を有するアジュバントが自然状態
で負電荷を有するアジュバントであり、その負電荷度を増加させるよう改変され
ており、かつ、正電荷を有するタンパク質が自然状態で正電荷を有するタンパク
質であり、その正電荷度を増加させるよう改変されており、アジュバントとタン
パク質が静電気的に結合している免疫原複合体を提供する
【００１５】 本発明のさらなる態様は１種以上の医薬上許容される担体および／または希釈
剤とともに、有効成分として荷電有機担体および荷電抗原を含んでなり、有機担
体と抗原が静電気的に結合している免疫原複合体を含んでなるワクチン組成物に
関する。
【００１６】 本発明のもう１つのさらなる態様は哺乳類において抗原に対する免疫応答を誘
発、誘導または促進する方法であって、哺乳類に有効量の前記の免疫原複合体ま
たはワクチン組成物を投与することを含む方法に関する。
【００１７】 本発明のさらにもう１つのさらなる態様は哺乳類において病状を治療する方法
であって、哺乳類に有効量の前記の免疫原複合体またはワクチン組成物を投与す
ることを含み、組成物の投与が、病状の発症または進行を阻害、停止、遅延、ま
たは防止する免疫応答を誘発、誘導または促進する方法に関する。
【００１８】 本発明のさらにもう１つのさらなる態様は前記で定義される免疫原複合体また
はワクチン組成物の病状の発症または進行を阻害、停止、遅延または防止するた
めの医薬の製造における使用に関する。
【００１９】 本発明のなおさらにもう１つのさらなる態様は病状の発症または進行の阻害、
停止、遅延または防止に用いる薬剤に関し、薬剤は前記で定義される免疫原複合
体またはワクチン組成物を含んでなる。
【００２０】 本明細書を通して用いられる一文字および三文字略語が表１に定義されている
。
【００２１】表１ 一文字および三文字アミノ酸略語
アミノ酸 三文字略語 一文字記号
アラニン Ａｌａ Ａ アルギニン Ａｒｇ Ｒ アスパラギン Ａｓｎ Ｎ アスパラギン酸 Ａｓｐ Ｄ システイン Ｃｙｓ Ｃ グルタミン Ｇｌｎ Ｑ グルタミン酸 Ｇｌｕ Ｅ グリシン Ｇｌｙ Ｇ ヒスチジン Ｈｉｓ Ｈ イソロイシン Ｉｌｅ Ｉ ロイシン Ｌｅｕ Ｌ リジン Ｌｙｓ Ｋ メチオニン Ｍｅｔ Ｍ フェニルアラニン Ｐｈｅ Ｆ プロリン Ｐｒｏ Ｐ セリン Ｓｅｒ Ｓ トレオニン Ｔｈｒ Ｔ トリプトファン Ｔｒｐ Ｗ チロシン Ｔｙｒ Ｙ バリン Ｖａｌ Ｖ他の残基 Ｘａａ Ｘ
【００２２】好ましい具体例の詳細な説明 本発明は一部分は静電気的相互作用を利用して抗原と担体を結合させ、それに
よって、特に、これらの分子の免疫系への同時送達を促進する免疫原複合体製剤
の開発に基づいている。本発明の免疫原複合体は特に、疎水性領域を含まない免
疫原に対する細胞傷害性Ｔリンパ球応答の刺激の促進に用いるのに好適である。
【００２３】 従って、本発明の１つの態様は荷電有機担体および荷電抗原を含んでなり、有
機担体と抗原が静電気的に結合している免疫原複合体に関する。
【００２４】 「複合体」とは２種以上の異なる相互作用性化学成分の実体を表すと理解され
るべきである。
【００２５】 「荷電」有機担体または抗原とは全体的に正の電気的電荷または全体的に負の
電気的電荷を示す有機担体または抗原として理解されるべきである。「全体的に
」とは所与の分子が含んでなる個々の正および負電荷の総計を意味する。個々の
正および負電荷の総計が全体的に電気的中性をもたらす場合には、本発明の範囲
内では分子は「荷電」とは考えられない。好ましくは、抗原は全体的に正電荷を
含んでなり、かつ、有機担体は全体的に負電荷を含んでなる。
【００２６】 従って、より詳しくは、本発明は負電荷を有する有機担体および正電荷を有す
る抗原を含んでなり、有機担体と抗原が静電気的に結合している免疫原複合体を
提供する。
【００２７】 「静電気的に結合した」とは有機担体および抗原が静電気的相互作用を含む手
段によって連結、結合または会合していることを指す。従って、静電気的相互作
用が抗原および有機担体の複合をもたらす唯一の引力である場合もあると理解さ
れるべきである。しかしながら、その他の例では、静電気的相互作用の形成がま
た、その他の相互作用力の形成をもたらすか、またはそれと関連し得る。
【００２８】 「抗原」とはそれに対して免疫応答、特に、細胞傷害性Ｔリンパ球応答を誘導
すると考えられるいずれかの分子を指すと理解されるべきである。抗原はタンパ
ク質性または非タンパク質性分子のいずれであってもよく、この分子は単独で投
与される場合には免疫原性であってもそうでなくともよい。本発明の抗原は天然
に得ることもできるし、または組換えによってもしくは合成によっても製造でき
る。抗原はその単離または合成に続いて本発明における使用に先立ってさらなる
改変（例えば、その抗原性を向上させるための構造または配列改変）を必要とす
る場合もある。本発明に用いるのに好適な抗原としては、限定されるものではな
いが、ウイルスから単離したコアタンパク質または核タンパク質、ウイルス様粒
子（ＶＬＰ）などの非コアウイルスタンパク質、悪性および非悪性細胞の抗原、
細菌性抗原、寄生虫抗原ならびに合成および組換えポリトープが挙げられる。
【００２９】 好ましくは、抗原はタンパク質である。「タンパク質」とはタンパク質、ポリ
ペプチドおよびペプチドならびにそれらの誘導体および同等物を包含すると理解
されるべきである。タンパク質は種々の程度にグリコシル化もしくは非グリコシ
ル化、リン酸化もしくは脱リン酸化されていてもよく、かつ／または、タンパク
質に融合、連結、結合または会合した、アミノ酸、脂質、炭水化物またはその他
のペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質などのある程度のその他の分子含
んでいてもよい。前記の「タンパク質」としてはアミノ酸の配列を含んでなるタ
ンパク質ならびにアミノ酸、脂質、炭水化物またはその他のペプチド、ポリペプ
チドもしくはタンパク質などのその他の分子と結合したタンパク質を含む。
【００３０】 前記に定義されるように、本発明の抗原はまたポリトープであり得る。本ポリ
トープは合成または組換え法（例えば、国際特許公開ＷＯ９６／０３１４４を参
照）によって製造すればよい。
【００３１】 好ましい具体例によれば、負電荷を有する有機担体および正電荷を有するタン
パク質を含んでなり、有機担体とタンパク質が静電気的に結合している免疫原複
合体が提供される。
【００３２】 これに関しては、本発明の免疫原複合体に含まれる抗原は、その最初の、すな
わち天然の形態では正電荷を有しても、負電荷を有してもまたは中性電荷を有し
てもよい。抗原が正電荷を有する場合であっても、弱く正電荷を有し、従って、
その正電荷度を増加させ、その結果、負電荷を有する有機担体との複合体形成が
より促進されるための改変を必要とする場合もある。例えば、抗原が弱く正電荷
を有する場合には、その正電荷度を増加させることは、限定されるものではない
が、抗原へのさらなる正電荷の化学的付加または抗原へのポリリジンの付加など
による正電荷の組換えによる付加をはじめとする当業者に公知のいくつかの方法
のいずれか１つによって達成できる。これは特に抗原がタンパク質である場合に
用いられる。抗原の正電荷度を増加させるために用いられ得るその他の方法とし
ては、限定されるものではないが、ｐＨ改変、化学修飾または抗原の負電荷のア
ルギニンなどの正電荷を有する分子での中和が挙げられる。同様に、抗原が中性
または負電荷を有する場合には、かかる方法論を用いることによってその全体的
な電荷を全体的に正電荷に変換することができる。負電荷を有する抗原の全体的
に正電荷を表すための変換は、ほとんどのタンパク質は自然状態では負電荷を有
するので抗原がタンパク質である場合には特に重要であり得る。
【００３３】 注目される抗原の電荷が十分に正であれば、正電荷を有する抗原の沈殿が有機
担体との複合体形成に先立って起こらないことを確実にすることが必要となる。
これに関しては、抗原沈殿を防ぐためのいずれかの好適な方法を用いればよい。
例えば、抗原可溶性は抗原凝集を引き起こす力を破壊することによって維持でき
る。これらの力の破壊は、例えば抗原に尿素およびグアニジンなどの溶液カオト
ロピック剤、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）およびアセトニトリルなどの溶
媒、双性イオンなどの中間体、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００およびＣＨＡＰＳ（３−
［（３−コルアミドプロピル）−ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−
プロパンスルホネート）などの界面活性剤、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）およ
びシステインなどの還元剤およびＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）などのキ
レート剤を組み込むことによって達成することができる。可溶性はまた、抗原溶
液のｐＨを変更することによって、またはアルキル化またはアセチル化などによ
る極性もしくはイオン性分子を導入するための抗原の化学修飾によって維持する
ことができる。抗原が「有機担体」と接触している時にこれらの沈殿防止剤を漸
進的または段階的に除去するか、または抗原を軽く変性させることにより、抗原
の制御された沈殿がをもたらされ、同時に有機担体との結合の増加が生じ得る。
【００３４】 「有機担体」とは抗原がそれと結合する場合に抗原に対する免疫応答、特に、
細胞傷害性Ｔリンパ球応答の誘導を促進する、いずれかの分子、分子の凝集塊ま
たは複合体、化合物またはその他の実体と理解されるべきである。本担体は「有
機的」であり、これに関しては、「有機的」とは天然に、組換えによってまたは
合成によって得たかまたは誘導したかの、炭素の化合物と理解されるべきである
。特に好ましい具体例では、有機担体はアジュバントである。「アジュバント」
とは免疫応答のいずれか１種以上の態様を刺激、増強またはアップレギュレート
するよう機能する、いずれかの有機分子、有機分子の凝集塊または複合体、化合
物またはその他の実体を意味する。例えば、アジュバントは炎症を誘導し、それ
により免疫応答細胞を抗原局在化部位に引きつけ得る。あるいは、アジュバント
は抗原をゆっくりと放出し、それによって免疫系の進行中の刺激を提供し得る。
本発明に用いるのに好適なアジュバントの例としては、限定されるものではない
が、サポニン、サポニン複合体、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸＴＭ（商標）として知ら
れるサポニン、コレステロールおよび脂質からなる免疫刺激性複合体のいずれか
１種以上の成分（例えば、サポニン成分、および／またはリン脂質成分）、リポ
ソームまたは水中油エマルションが挙げられる。［ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標
）の組成および製造は国際特許出願ＰＣＴ／ＳＥ８６／００４８０、オーストラ
リア特許第５５８２５８号および同第６３２０６７号および欧州特許公開第０１
８０５６４号に詳細に記載されており、それらの開示内容は引用することにより
本明細書の一部とされる］。アジュバントのさらなる例としては、限定されるも
のではないが、Cox and Coulter, 1992, 1997 and 1999という刊行物に列挙され
るものが挙げられる。本有機担体は天然に生じ得るかまたは合成によってもしく
は組換えによって誘導できると理解されるべきである。
【００３５】 従って、本発明はいっそうより好ましくは負電荷を有するアジュバントおよび
正電荷を有するタンパク質を含んでなり、アジュバントとタンパク質が静電気的
に結合している免疫原複合体を提供する。
【００３６】 好ましくは、アジュバントはサポニンまたはサポニン複合体を含んでなる。よ
り好ましくは、サポニン複合体はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）である。
【００３７】 本発明の有機担体はまた、その最初のまたは天然の形態では負電荷を有しても
、正電荷を有してもまたは中性であってもよい。負電荷度を増加させること（例
えば、有機担体が弱くしか負電荷を有さない場合には）または中性のまたは正電
荷を有する有機担体を負電荷を有する有機担体に変換することもまた、当業者に
公知の好適な方法のいずれかによって達成できる。例えば、有機担体が水中油エ
マルションである場合には、非極性尾部を有するいずれかの陰イオン界面活性剤
の組み込みが、界面活性剤の尾部を油的へ挿入し、それにより負電荷を有する頭
部を露出させることによりエマルションに全体的な負電荷を付与するであろう。
サポニン複合体アジュバントの負電荷は、例えば、複合体形成の際に負電荷を有
する脂質を加えることによって増加させることができる。
【００３８】 担体の負電荷を増加させ得る界面活性剤の例としては、限定されるものではな
いが、コール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸およびタウロデオキシコー
ル酸が挙げられる。担体の負電荷を増加させ得る脂質の例としては、限定される
ものではないが、リン脂質（好ましくはホスファチジルイノシトール、ホスファ
チジルセリン、ホスファチジルグリセロールおよびホスファチジン酸、最も好ま
しくはカルジオリピン）および細菌脂質（好ましくはモノホスホリル脂質Ａ（Ｍ
ＰＬ）、最も好ましくは国際特許公開ＷＯ９５／１４０２６に記載されるＯＭ１
７４などのジホスホリル脂質Ａ）が挙げられる。
【００３９】 本発明を何ら限定するものではないが、本発明者らは本荷電有機担体および荷
電抗原がそれぞれ自然状態で負および正電荷を有する場合には本発明の目的が達
成され得るということを確定した。しかしながら、いっそうより有効な免疫原複
合体は自然状態で負電荷を有する本有機担体がより多くの負電荷を付与され（好
ましくはカルジオリピンまたはジホスホリル脂質Ａの添加によって）、かつ／ま
たは、自然状態で正電荷を有する本抗原がより多くの正電荷を付与される（好ま
しくはポリリジン尾部の付加によって）場合に達成される。自然状態で負電荷を
有する有機担体がより多くの負電荷を付与され、かつ、自然状態で正電荷を有す
る抗原がより多くの正電荷を付与されることが好ましい。
【００４０】 従って、１つの好ましい具体例では、負電荷を有するアジュバントおよび正電
荷を有するタンパク質を含んでなり、負電荷を有するアジュバントが自然状態で
負電荷を有するアジュバントであり、その負電荷度を増加させるよう改変されて
おり、アジュバントとタンパク質が静電気的に結合している免疫原複合体が 提供される。
【００４１】 もう１つの好ましい具体例では、負電荷を有するアジュバントおよび正電荷を
有するタンパク質を含んでなり、正電荷を有するタンパク質が自然状態で正電荷
を有するタンパク質であり、その正電荷度を増加させるよう改変されており、ア
ジュバントとタンパク質が静電気的に結合している免疫原複合体が提供される。
【００４２】 最も好ましい具体例では、負電荷を有するアジュバントおよび正電荷を有する
タンパク質を含んでなり、負電荷を有するアジュバントが自然状態で負電荷を有
するアジュバントであり、その負電荷度を増加させるよう改変されており、かつ
、正電荷を有するタンパク質が自然状態で正電荷を有するタンパク質であり、そ
の正電荷度を増加させるよう改変されており、アジュバントとタンパク質が静電
気的に結合している免疫原複合体が提供される。
【００４３】 アジュバントまたはタンパク質がそれぞれ「自然状態で」負または正電荷を有
するとは、分子がその生成時に（自然状態で、組換えによってまたは合成によっ
てに関わらず）保持する電荷と理解されるべきである。
【００４４】 電荷度を増加させるための改変は前記で論じられた好適な技術のいずれかによ
って達成できる。好ましくは、本タンパク質はポリリジン尾部の付加によってよ
り多くの正電荷を付与され、かつ、本アジュバントはカルジオリピンまたはジホ
スホリル脂質Ａの添加によってより多くの負電荷を付与される。
【００４５】 「誘導体および同等物」とは天然の、合成または組換え供給源に由来する断片
、一部、部分、化学的同等物、変異体、相同体および類似体と理解されるべきで
ある。本抗原または担体がタンパク質である場合には、誘導体はアミノ酸の挿入
、欠失または置換に由来し得る。アミノ酸挿入誘導体は１個または複数のアミノ
酸のアミノおよび／またはカルボキシ末端融合、ならびに配列内挿入を含む。挿
入アミノ酸配列変種は１個以上のアミノ酸残基がタンパク質の所定の部位に導入
されているものであるが、得られた産物の好適なスクリーニングをともなうラン
ダム挿入も可能である。欠失変種は配列からの１個以上のアミノ酸の除去を特徴
とする。置換アミノ酸変種は配列中のある残基が除去され、異なる残基がその場
所に挿入されているものである。アミノ酸配列への付加はその他のペプチド、ポ
リペプチドまたはタンパク質との融合を含む。「同等物」は本担体または抗原の
機能的類似体として作用し得る。化学的同等物は必ずしも本担体または抗原に由
来しなくてもよいが、一定のコンフォメーションの類似性を共有し得る。あるい
は、化学的同等物は本担体または抗原の一定の生理化学的特性を模倣するよう設
計してもよい。同等物は化学合成してもよいし、または例えば、天然産物スクリ
ーニング後に検出してもよい。本明細書において考慮される相同体としては、限
定されるものではないが、異なる種に由来する分子が挙げられる。
【００４６】 本発明は一部は、好ましくは負電荷を有する有機担体と正電荷を有する抗原の
、静電気的結合による免疫原複合体の形成に基づいている。かかる複合体の被験
体への投与はアジュバントと抗原が同時にではあるが結合していない形態で投与
されて達成されるものよりも有意によりよい免疫応答の誘導を促進する。特に、
本発明のアジュバントと結合した抗原の投与は抗原に対する細胞傷害性Ｔリンパ
球応答の誘導を促進する。しかしながら、体液性およびその他の細胞性応答も増
強され得る。
【００４７】 本発明をいずれか１種の理論または作用様式に限定するものではないが、アジ
ュバントと抗原の複合は同一抗原提示細胞へのアジュバントと抗原の同時送達を
促進し、それによりこれらの分子が同時送達されないと生じないかまたは効果的
には生じないのいずれかである免疫応答の誘導を促進するということが考えられ
る。例えば、いくらかのＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球応答の誘導はアジュバン
トが抗原提示細胞における抗原のエンドソーム逃避を誘導する場合に生じると考
えられる。これは抗原提示細胞への抗原とアジュバントの同時送達を必ず必要と
する。
【００４８】 従って、本発明のさらなる態様は哺乳類において、限定するものではないが、
体液性および／または細胞媒介性免疫応答をはじめとする免疫応答を誘導するた
めの本発明の使用に関する。
【００４９】 従って、本発明のもう１つの態様は１種以上の医薬上許容される担体および／
または賦形剤とともに、有効成分として荷電有機担体および荷電抗原を含んでな
り、有機担体と抗原が静電気的に結合している免疫原複合体を含んでなるワクチ
ン組成物に関する。
【００５０】 好ましくは、有機担体はアジュバントであり、いっそうより好ましくは、サポ
ニンまたはサポニン複合体である。好ましくはサポニン複合体はＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）である。
【００５１】 いっそうより好ましくは、抗原はタンパク質である。
【００５２】 好ましくは、有機担体は負電荷を有し、かつ、抗原は正電荷を有する。
【００５３】 注入可能な使用に好適な医薬形態としては滅菌水溶液（水に可溶性である場合
には）または分散物および滅菌注射溶液または分散物のの即時調製用滅菌散剤が
挙げられ、あるいはクリームの形態または局所塗布に好適なその他の形態であっ
てもよい。製造および保存の条件下で安定でなくてはならず、かつ、細菌および
菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。有機担体は例えば、
水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールお
よび液体ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物および植物油を
含む溶媒または分散媒体であり得る。適当な流動性は例えば、レシチンなどの被
膜の使用によって、分散物の場合には所望の粒径の維持によって、および界面活
性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用からの保護は種々の抗
菌および抗真菌薬、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビ
ン酸、チメロサールなどによって達成することができる。多くの場合には、等張
剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射組成
物の持続性吸収は組成物への吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸
アルミニウムおよびゼラチンの使用によって達成することができる。
【００５４】 滅菌注射溶液は前記に列挙される種々のその他の成分とともに適当な溶媒中の
所望の量の有効成分を組み入れ、必要であれば、それに次いで濾過除菌すること
によって製造する。一般に、分散物は種々の滅菌有効成分を基剤となる分散媒質
および前記に列挙されるものから所望のその他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み
入れることによって製造する。滅菌注射溶液の調製用滅菌散剤の場合には、好ま
しい製造方法には有効成分およびその予め滅菌濾過した溶液からのいずれかのさ
らなる所望の成分の散剤を生じる真空乾燥および凍結乾燥技術がある。
【００５５】 有効成分が好適に保護される場合には、例えば、不活性賦形剤とともにかまた
は同化性可食担体とともに経口投与してもよく、あるいはハードまたはソフトシ
ェルゼラチンカプセルに封入してもよいし、あるいは錠剤に打錠してもよいし、
あるいは治療食の食物とともに直接取り込んでもよい。経口治療的投与用には、
有効成分は賦形剤と混合し、経口摂取可能錠剤、舌下錠、トローチ剤、カプセル
剤、エリキシル、懸濁液、シロップ、カシェ剤などの形態で用いてよい。かかる
組成物および製剤は少なくとも１重量％の有効成分を含むべきである。組成物お
よび製剤のパーセンテージは当然異なり得、便宜には単位重量の約５〜約８０％
の間であり得る。かかる治療上有用な組成物中の有効成分の量は好適な用量にで
きるようなものである。本発明の好ましい組成物または製剤は経口用量単位形が
約０．１μｇと２０００ｍｇの間の有効成分を含むよう製造される。
【００５６】 錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などはまた前記に列挙された成分：アラ
ビアゴム、コーンスターチまたはゼラチンなどの結合剤；リン酸ニカルシウムな
どの賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；
ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；およびスクロース、ラクトースまたは
サッカリンなどの甘味剤を含んでもよく、またはペパーミント、冬緑油、もしく
はチェリー香添加剤などの香料添加剤を加えてもよい。用量単位形がカプセル剤
である場合には、上記の種類の物質に加え、液体担体を含んでもよい。種々のそ
の他の物質が用量単位の物理的形態を別途改変するための被膜として存在し得る
。例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤はシェラック、糖もしくはその双方で被
覆してもよい。シロップまたはエリキシルは有効成分、甘味剤としてスクロース
、防腐剤としてメチルおよびプロピルパラベン、着色料およびチェリーまたはオ
レンジ香などの香料添加剤を含んでもよい。当然、いずれかの用量単位形の製造
に用いる物質のいずれも医薬上純粋であり、かつ、用いられる量では実質的に非
毒性であるべきである。さらに、有効成分は徐胞性製剤および製剤形態に組み込
んでもよい。
【００５７】 本発明の実施を何ら限定するものではないが、本発明の免疫原複合体の同時送
達は抗原に対する免疫応答、特に、細胞傷害性Ｔリンパ球応答の誘導に特に有用
であり、免疫応答は特異的（Ｔ細胞および／もしくはＢ細胞）および／または非
特異的免疫応答であり得る。
【００５８】 従って、本発明のさらにもう１つの態様は哺乳類において抗原に対する免疫応
答を誘発、誘導または促進する方法であって、哺乳類に有効量の前記の免疫原複
合体またはワクチン組成物を投与することを含んでなる方法に関する。
【００５９】 好ましくは、免疫応答は細胞傷害性Ｔリンパ球応答である。
【００６０】 本細胞傷害性リンパ球応答は単独でまたはヘルパーＴ細胞応答、体液性応答も
しくはその他の特異的もしくは非特異的免疫応答とともにのいずれかで生じ得る
と理解されるべきである。
【００６１】 本発明のさらなる態様は病状の治療的および／または予防的治療に関する本発
明の免疫原複合体の使用に関する。本発明の方法に従って治療され得る病状の例
としては、限定されるものではないが、微生物感染または癌に起因するいずれか
の病状が挙げられる。例としてはＨＩＶ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、黒色腫、前立腺
癌、乳癌、結核および寄生虫による症状が挙げられる。
【００６２】 従って、本発明のさらにもう１つの態様は哺乳類において病状を処置する方法
であって、哺乳類に有効量の前記の免疫原複合体またはワクチン組成物を投与す
ることを含み、組成物の投与が、病状の発症または進行を阻害、停止、遅延また
は防止する免疫応答を誘発、誘導または促進する方法に関する。
【００６３】 「有効量」とは所望の免疫応答を得るため、すなわち治療される特定の症状の
発症を遅延させるか、または進行を阻害するか、または発症もしくは進行を全く
停止させるために少なくともいく分かは必要な量を意味する。この量は治療され
る個体の健康および身体状態、治療される個体の分類学的群、個体の免疫系の抗
体合成能、所望の保護度、ワクチンの処方、医学上の状況の評価およびその他の
関連する因子によって異なる。量は慣例の試験をとおして決定され得る比較的広
範囲になると予測される。
【００６４】 「哺乳類」としてはヒト、霊長類、家畜動物（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、
ブタ、ロバ）、実験室試験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット
）、コンパニオン・アニマル（例えば、イヌ、ネコ）および捕らえられた野生動
物（例えば、カンガルー、シカ、キツネ）が挙げられる。好ましくは、哺乳類は
ヒトまたは実験室試験動物である。いっそうより好ましくは、哺乳類はヒトであ
る。
【００６５】 処置を受ける哺乳類は病状または潜在的病状の治療的または予防的治療を必要
とするヒトまたは動物であってよい。
【００６６】 さらにもう１つの態様では本発明は前記で定義される免疫原複合体またはワク
チン組成物の病状の発症または進行を阻害、停止、遅延または防止する医薬の製
造における使用に関する。
【００６７】 本発明のさらにもう１つの態様は病状の発症または進行の阻害、停止、遅延ま
たは防止に用いる薬剤に関する。この薬剤は前記で定義される免疫原複合体また
はワクチン組成物を含んでなる。
【００６８】 本発明のさらなる特徴は、限定されるものではないが以下の実施例でより十分
に説明載される。
【００６９】 「ＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）７０３」は５０〜９０重量％のＱｕｉｌＡの画分
Ａおよび５０重量％〜１０重量％のＱｕｉｌＡの画分Ｃを含んでなるサポニン製
剤を指すと理解されるべきである。画分ＡおよびＣはＱｕｉｌＡの親油性画分か
ら製造される。画分「Ａ」および「Ｃ」、それらの製造方法および７０３の製造
方法は国際特許公開ＷＯ９６／１１７１１に記載されており、これは引用するこ
とにより本明細書の一部とされる。
【００７０】実施例１ 標準および改変ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸＴＭ（商標）の調製 ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（抗原を含まない免疫刺激性複合体）は本質的
にはMorein et al. (1989)の方法によって製造した。便宜には、１．７６ｍｌの
ＰＢＳｐＨ７．２に０．１６ｍｌの１０ｍｇ／ｍｌのトリチウム化（３Ｈ）コレ
ステロールおよび２０％のＭＥＧＡ−１０界面活性剤（ｗ／ｖ）中の１０ｍｇ／
ｍｌの脂質を含有する溶液、次いで、０．０８ｍｌのＰＢＳ中の１００ｍｇ／ｍ
ｌのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）７０３を含有する溶液を加えた。溶液を穏やかに
混合しながら２５℃で１時間保持した。その後のＰＢＳ／アジ化物に対する透析
の際に、コレステロール、ＤＰＰＣおよびＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）を含有する
ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）が形成された。総てのＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商
標）製剤は電子顕微鏡によれば典型的な外観のものであった。
【００７１】 脂質： 標準ＤＰＰＣ ジパルミトイルホスファチジルコリン 改変ＣＤＬ カルジオリピン 改変ＤＰＬ ジホスホリル脂質Ａ 改変ＭＰＬ モノホスホリル脂質Ａ 改変ＤＰＡ ホスファチジン酸 改変ＤＰＰＧ ジパルミトイルホスファチジルグリセロール
【００７２】 処方後、調製物をスクロース勾配（１０〜５０％ｗ／ｖ）で精製し、画分を脂
質およびコレステロールについて分析した。コレステロールは１ｍｌシンチラン
ト中の１００μｌのサンプルの３Ｈｃｐｍによって検出し、脂質は脂質と結合し
た場合に蛍光を発するジフェニルヘキサトリエン（ＤＰＨ）を用いて検出した。
便宜には、ＤＰＨを１ｍｇ／ｍｌでアセトンに溶解し、次いで、ＰＢＳｐＨ７．
２で５０分の１に希釈し、次いで、マイクロタイタープレートにおいて５０μｌ
を５０μｌの各画分と混合した。２０〜２５℃で１５０分間インキュベートした
後、プレートを励起３５５ｎｍおよび発光４６０ｎｍを用いて蛍光計で読み取っ
た。ＤＰＨおよび３Ｈピークは総ての製剤について一致し、改変製剤の勾配プロ
フィールは標準製剤と同様であり、これは脂質のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）
への組み込みを示した（図１）。
【００７３】実施例２ 自然状態で正電荷を有するタンパク質：Ｈ．ピロリ(H. pylori)ファミリーＥタ
ンパク質（ＨｐＥ）を用いる、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合した抗原の 調製 ＨｐＥタンパク質のｐＩは９．２４であり、ｐＨ８で正電荷を有するタンパク
質にさせる。ＨｐＥの可溶性は０．５ＭのＴｒｉｓ、０．５ＭのＮａＣｌ、０．
１％の１，２−ジヘプタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＰＣ
）ｐＨ８を用いて維持した。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＨｐＥ製
剤はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）としてのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に対して
１：５の割合のタンパク質を２０〜２５℃で６０分間混合することによって調製
した。用いたＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤はＤＰＰＣ、ＣＤＬ、ＤＰＬお
よびＤＰＰＧであった。
【００７４】 処方後、調製物をスクロース勾配（１０〜５０％スクロースｗ／ｖ）で精製し
、ＨｐＥ、ＨｐＥとＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合およびＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸ（商標）について画分を分析した（図２）。ＨｐＥはＰＢＳで１０分の
１に希釈した画分をＥＩＡプレートのウェルに吸着させ、次いで、セイヨウワサ
ビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）が結合したＨｐＥに対するモノクローナル抗体で
検出することによって検出した。結合は捕捉するためのＨｐＥに対するモノクロ
ーナル抗体および検出するためのＨＲＰが結合したＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に
対するモノクローナル抗体を用いてＥＩＡによって測定した。ＩＳＣＯＭＡＴＲ
ＩＸ（商標）は３Ｈコレステロールを検出することによって測定した。
【００７５】 ＨｐＥタンパク質はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合されない場合にはＥ
ＩＡによって画分３〜１０に認められた（図２Ｅ）。ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）と混合した場合には、ＨｐＥは大部分は画分２〜８に認められた
が、いくらかはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）および結合ピークと一致する画分
１２〜２０に認められ、このことは結合が生じたことを示す（図２Ａ）。ＣＤＬ
またはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には、ＨｐＥは大
部分がＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）および結合ピークと一致する画分７〜１６
に認められ、このことはほとんど完全な結合が生じたということを示す（図２Ｂ
＆Ｃ）。画分２〜８に認められた遊離ＨｐＥはあったとしても極めて少量であっ
た。ＤＰＰＧ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には、結果はＤＰ
ＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と同様であった（図２Ｄ）。
【００７６】 これらの結果はＤＰＰＧおよび標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）
は弱いながらも正電荷を有する抗原と結合し得、ＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）を用いることによって結合能を実質的に高めることができ
るということを示す。
【００７７】実施例３ 自然状態で正電荷を有するタンパク質：ＮＹ−ＥＳＯ−１（ＥＳＯ）を用いる、 ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合した抗原の調製 ＥＳＯタンパク質のｐＩは９．１であり、ｐＨ７で正電荷を有するタンパク質
にさせる。ＥＳＯの可溶性は８Ｍの尿素、５０ｍＭのＴｒｉｓ、５０ｍＭのＮａ
Ｈ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、０．１５ＭのＮａＣｌｐＨ７を用いて維持した。ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤と結合したＥＳＯはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）
としてのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に対して１：５の割合のタンパク質を２０〜
２５℃で６０分間混合することによって調製した。用いたＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ
（商標）製剤はＤＰＰＣおよびＤＰＬであった。
【００７８】 処方後、調製物をスクロース勾配（１０〜５０％スクロースｗ／ｖ）で精製し
、ＥＳＯ、ＥＳＯとＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合およびＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸ（商標）について画分を分析した（図３）。ＥＳＯはＰＢＳで１０分の
１に希釈した画分をＥＩＡプレートのウェルに吸着させ、次いで、ＨＲＰが結合
したＥＳＯに対するモノクローナル抗体で検出することによって検出した。結合
は捕捉するためのＥＳＯに対するモノクローナル抗体および検出するためのＨＲ
Ｐが結合したＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に対するモノクローナル抗体を用いてＥ
ＩＡによって測定した。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）は３Ｈコレステロールを
検出することによって測定した。
【００７９】 ＥＳＯタンパク質はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合されない場合にはＥ
ＩＡによって画分１〜６に認められた（図３Ｃ）。標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には、ＥＳＯは画分１〜６および１２〜１６に
認められた（図３Ａ）。画分１２〜１６中の存在はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標
）および結合ピークと一致し、このことは結合があることを示すものであったが
、画分１〜６中の存在によって示されるように大部分のＥＳＯは結合していなか
った。ＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には、ＥＳＯは大
部分がＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）および結合ピークと一致する画分１２〜１
６に認められ、このことは結合が生じたということを示す（図３Ｂ）。
【００８０】 これらの結果は標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との正電荷を有
するタンパク質の結合がいくらかあったが、ＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商
標）の使用により結合能が実質的に高まったということを示す。
【００８１】実施例４ 標準ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥＳＯでのマウスの免疫化 抗体応答： １０個体のＢＡＬＢ／ｃマウスを０日および２８日に０．１ｍｌの５μｇのタ
ンパク質を含有するＥＳＯまたは５μｇのタンパク質および５μｇのＩＳＣＯＰ
ＲＥＰ（商標）を含有するＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）が結合したＥＳＯで首
の首筋で皮下に免疫化した。３５日にマウスから採血し、血清を間接ＥＩＡによ
ってＥＳＯに対する抗体について分析した。便宜には、ＥＳＯをＰＢＳｐＨ７．
２中でマイクロタイタープレートに吸着させ、次いで、プレートを０．１％のカ
ゼイン溶液でブロッキングし、乾燥させた。血清の希釈液を２０〜２５℃で１時
間インキュベートし、次いで、プレートを洗浄した。ＨＲＰが結合したヤギ抗マ
ウスＩｇＧ、ＩｇＧ１またはＩｇＧ２ａを加え、プレートを２０〜２５℃で１時
間インキュベートし、次いで、洗浄した。ＴＭＢ基質を加え、２０〜２５℃で１
０分間インキュベートし、次いで、０．５ＭのＨ２ＳＯ４を加えて反応を停止さ
せた。プレートをＯＤ４５０ｎｍで読み取り、終点力価を算出した。
【００８２】 ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合した場合にはＥＳＯに対するＩｇＧおよ
びＩｇＧ１応答は２０倍より多く増加し、ＩｇＧ２ａ力価は千倍増加した（図４
）。
【００８３】細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答： ５個体のＨＬＡ Ａ２トランスジェニックＨＨＤマウスを０．１ｍｌの５μｇ
のタンパク質を含有するＥＳＯまたは５μｇのタンパク質および５μｇのＩＳＣ
ＯＰＲＥＰ（商標）を含有するＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥＳＯ
で尾の付け根で皮下に免疫化した。１４日後、脾細胞を回収し、２４ウェルプレ
ートにおいてＥＳＯペプチド（１０μｇ／ｍｌ、３７℃で１時間）で感作された
ＥＬ４ＨＨＤ細胞で５×１０６個の細胞を再刺激し、照射し、２回洗浄した。細
胞を１０％ウシ胎児血清、２ｍＭのグルタミン、５×１０−５Ｍのβ−メルカプ
トエタノール、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンおよび１００ＩＵ／ｍｌ
のペニシリンを添加したＲＰＭＩ培地で培養し、３７℃で６日間５％ＣＯ２中で
インキュベートした。４日目に１ｍｌの５Ｕ／ｍｌの組換えヒトＩＬ−２を含有
する培地を加えた。６日目に標準的な６時間５１Ｃｒ放出アッセイにおいて培養
物を再刺激のために感作されたＥＬ４ＨＨＤ細胞に対するエフェクターとして用
いた。
【００８４】 ＥＳＯ単独で免疫化したマウスではＣＴＬは検出されなかったが、ＩＳＣＯＭ
ＡＴＲＩＸ（商標）と結合した場合には、総てのマウスでＣＴＬが検出された（
図５）。
【００８５】 これらの結果は細胞性免疫応答の最適な誘導には結合が必要であるということ
を示す。
【００８６】実施例５ 自然状態で負電荷を有するタンパク質：ＨＰＶ Ｅ６Ｅ７（Ｅ６Ｅ７）を用いる 、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合した抗原の調製 Ｅ６Ｅ７タンパク質のｐＩは５．９であり、ｐＨ６．９で負電荷を有するタン
パク質にさせる。Ｅ６Ｅ７の可溶性は８Ｍの尿素、５０ｍＭのＴｒｉｓ、５０ｍ
ＭのＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、１５０ｍＭのＮａＣｌｐＨ６．９を用いて維持
した。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤と結合したＥ６Ｅ７はＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）としてのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に対して１：５の割合のタン
パク質を２０〜２５℃で６０分間混合することによって調製した。用いたＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤はＤＰＰＣ、ＣＤＬ、ＤＰＬ、ＭＰＬ、ＤＰＡおよ
びＤＰＰＧであった。
【００８７】 処方後、調製物をスクロース勾配（１０〜５０％スクロースｗ／ｖ）で精製し
、Ｅ６Ｅ７、Ｅ６Ｅ７とＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合およびＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）について画分を分析した（図８）。Ｅ６Ｅ７は２種のＥ７
に対する非競合モノクローナル抗体を用いるＥＩＡによって検出した。結合は捕
捉するためのＥ７に対するモノクローナル抗体および検出するためのＨＲＰが結
合したＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）７０３に対するモノクローナル抗体を用いてＥ
ＩＡによって測定した。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）は３Ｈコレステロールを
検出することによって測定した。
【００８８】 Ｅ６Ｅ７タンパク質単独はＥＩＡによって画分１０〜２２に認められた（図６
Ｇ）。標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には、ほと
んどのＥ６Ｅ７は画分１４〜２０に認められたが、結合はほとんど検出されなか
った（図６Ａ）。ＣＤＬ、ＤＰＬおよびＤＰＡ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）
と混合した場合には、Ｅ６Ｅ７は大部分は結合およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商
標）ピークと一致する画分に認められ、このことはほとんど完全な結合が生じた
ことを示した（図６Ｂ、Ｃ、Ｅ）。ＭＰＬおよびＤＰＰＧ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）と混合した場合には、タンパク質は結合およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ
（商標）ピークと一致する画分９〜１４に認められ、このことは結合を示すが、
画分１７〜２２では相当な量が結合していないとわかった（図６Ｄ、Ｆ）。
【００８９】 これらの結果は負電荷を有するタンパク質は不十分にしか標準ＤＰＰＣ ＩＳ
ＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しないが、ＣＤＬ、ＤＰＬ、ＭＰＬ、ＤＰＡま
たはＤＰＰＧを用いることによって結合能が種々の程度に高まるということを示
す。
【００９０】実施例６ 標準および改変ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥ６Ｅ７でのマウスの 免疫化 ３個体のＣ５７ＢＬ／６マウスを０日および２１日に０．１ｍｌの１０μｇの
タンパク質および６μｇのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）を含むＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）と結合したＥ６Ｅ７で皮下に免疫化した。７日後、脾細胞を回収し、
Ｔ２５組織培養フラスコ中で８ｍＬの２０×１０６個の細胞をＥ７をトランスフ
ェクトしたマイトマイシン−Ｃ処理したＥＬ４細胞（Ｃ２）で再刺激し、３回洗
浄した。細胞を１０％のウシ胎児血清、２ｍＭのグルタミン、５．５×１０−５ Ｍのβ−メルカプトエタノール、５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを添加したＲ
ＰＭＩ培地で培養し、３７℃で５日間５％ＣＯ２中でインキュベートした。６日
目にＣ２細胞に対する標準的な４時間の５１Ｃｒ放出アッセイにおいて培養物を
エフェクターとして用いた。
【００９１】 ＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥ６Ｅ７は３個体のうち２
個体のマウスでＣＴＬ応答を誘導した（図７Ａ）。標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸ（商標）と結合したＥ６Ｅ７はいずれのマウスでもＣＴＬ応答を誘導で
きなかった（図７Ｂ）。ＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で陰性のマウス
群は最適な読み出しに不十分な細胞を有しており、妥当な応答の基準に応じるも
のではなかった。他の総てのマウスは妥当な応答の基準を満たしていた。
【００９２】 これらの結果は結合が多いほどＣＴＬ応答がよりよいものとなるということを
示す。
【００９３】実施例７ 自然状態で負電荷を有するタンパク質：Ｈ．ピロリファミリーＣタンパク質（Ｈ ｐＣ）を用いる、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合した抗原の製造 ＨｐＣタンパク質は５．０５のｐＩを有し、ｐＨ７．２で負電荷を有させる。
このタンパク質はＰＢＳｐＨ７．２において可溶性であった。ＩＳＣＯＭＡＴＲ
ＩＸ（商標）製剤と結合したＨｐＣはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）としてのＩ
ＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に対して１：５の割合のタンパク質を２０〜２５℃で６
０分間混合することによって調製した。用いたＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製
剤はＤＰＰＣおよびＤＰＬであった。
【００９４】 処方後、調製物をスクロース勾配（１０〜５０％スクロースｗ／ｖ）で精製し
、ＨｐＣ、ＨｐＣとＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合およびＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸ（商標）について画分を分析した（図８）。ＨｐＣはＰＢＳで１０分の
１に希釈した画分をＥＩＡプレートのウェルに吸着させ、次いで、ＨＲＰが結合
したＨｐＣに対するモノクローナル抗体で検出することによって検出した。結合
は捕捉するためのＨｐＣに対するモノクローナル抗体および検出するためのＨＲ
Ｐが結合したＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に対するモノクローナル抗体を用いてＥ
ＩＡによって測定した。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）は実施例１に記載のよう
に３ＨコレステロールまたはＤＰＨの検出のいずれかによって測定した。
【００９５】 ＨｐＣ単独は画分１〜５に認められ、標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（
商標）と混合した場合には、ＨｐＣは大部分は画分１〜５に認められ、結合して
いなかった。ＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には、相当
な割合のＨｐＣがＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）および結合ピークと一致する画
分１１〜１７に認められ、このことは結合を示す。
【００９６】 これらの結果は負電荷を有するタンパク質は不十分にしか標準ＤＰＰＣ ＩＳ
ＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しないが、ＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商
標）を用いることによって結合能が高まるということを示す。
【００９７】実施例８ ｐＨを利用して正電荷を与える自然状態で正電荷を有するタンパク質：Ｅ６Ｅ７ を用いる、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合した抗原の調製 Ｅ６Ｅ７タンパク質のｐＩは５．９５であり、ｐＨ７．２で負電荷を有するタ
ンパク質にさせる。それはＮ末端にヘキサヒスチジン配列を含みｐＨ６で正電荷
を有する。Ｅ６Ｅ７の可溶性は８Ｍの尿素、５０ｍＭのＢｉｓ Ｔｒｉｓ、０．
１５ＭのＮａＣｌｐＨ６を用いて維持した。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤
と結合したＥ６Ｅ７は等量のＥ６Ｅ７をＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）としての
ＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）と２０〜２５℃で６０分間混合し、５０ｍＭのＢｉｓ
Ｔｒｉｓ、０．１５ＭのＮａＣｌｐＨ６に対して透析して尿素を除去し、次いで
、１０，０００ｇで５分間遠心分離して沈殿物のいずれをも除去することによっ
て調製した。
【００９８】 処方後、調製物をスクロース勾配（５０〜１０％スクロースｗ／ｖ）で精製し
、タンパク質、Ｅ６Ｅ７とＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合およびＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）について画分を分析した（図９）。タンパク質はＥ７に
ついてのサンドウィッチＥＩＡを用いて検出した。結合は捕捉するためのＥ７に
対するモノクローナル抗体および検出するためのＨＲＰが結合したＩＳＣＯＰＲ
ＥＰ（商標）に対するモノクローナル抗体を用いてＥＩＡによって測定した。Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）は実施例１に記載のように３Ｈコレステロールまた
はＤＰＨを検出することによって測定した。
【００９９】 Ｅ６Ｅ７は単独で実施した場合には画分１０〜２２に認められた（図９Ｃ）。
ｐＨ７．２でＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には、Ｅ
６Ｅ７は大部分は画分１６〜２２に認められ、結合の証拠がほとんどなかった（
図９Ｂ）。ｐＨ６で標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場
合には、Ｅ６Ｅ７は大部分はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）および結合ピークと
一致する画分１２〜１６に認められ、このことは結合を示す（図９Ａ）。
【０１００】 これらの結果はｐＨを用いて標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）の
、自然状態で負電荷を有するタンパク質と結合する能力を高めることができると
いうことを示す。
【０１０１】実施例９ ｐＨ改変したＤＰＰＣと結合したＥ６Ｅ７でのマウスの免疫化 ６個体のＣ５７ＢＬ／６マウスを０日および２１日に０．１ｍｌの６μｇのＩ
ＳＣＯＰＲＥＰ（商標）および６μｇのＥ６Ｅ７を含むＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（
商標）と結合したＥ６Ｅ７で首の首筋で皮下に免疫化した。
【０１０２】抗体応答： ２６日にマウスから採血し、血清を間接ＥＩＡによってＥ７に対する抗体につ
いて分析した。便宜には、ＧＳＴＥ７を０．１Ｍの炭酸塩ｐＨ９．６中でマイク
ロタイタープレートに吸着させ、次いで、プレートを０．１％のカゼイン溶液で
ブロッキングし、乾燥させた。血清の希釈液を２０〜２５℃で１時間インキュベ
ートし、次いで、プレートを洗浄した。ＨＲＰが結合したヤギ抗マウスＩｇＧ、
を加え、プレートを２０〜２５℃で１時間インキュベートし、次いで、洗浄した
。ＴＭＢ基質を加え、２０〜２５℃で１０分間インキュベートし、次いで、０．
５ＭのＨ２ＳＯ４を加えて反応を停止させた。プレートをＯＤ４５０ｎｍで読み
取り、終点力価を算出した。
【０１０３】 ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥ６Ｅ７群のＧＭＴは９４９であっ
た。典型的にはＡｌ（ＯＨ）３を含むＥ６Ｅ７は約１００のＧＭＴを示す。
【０１０４】サイトカイン応答： ２７日に３個体のマウス各々から脾細胞を回収し、プールし、４８ウェルプレ
ートにおいて１および５μｇのＧＳＴＥ７で、対照としてＣｏｎＡおよびＲＰＭ
１で２．５×１０６個の細胞を再刺激した。細胞を１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ
のグルタミン、５×１０−５Ｍのβ−メルカプトエタノール、１００μｇ／ｍｌ
のストレプトマイシンおよび１００ＩＵ／ｍｌのペニシリンを添加したＲＰＭＩ
培地で培養し、３７℃で２日間５％ＣＯ２中でインキュベートした。上清を回収
し、Endogenの試薬を用いてＥＩＡによってγＩＦＮおよびＩＬ５を検出した。 ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥ６Ｅ７は７．４ｎｇ／ｍｌまでγ
ＩＦＮを、および１４０ｐｇ／ｍｌまでＩＬ５を誘導した（表２）。典型的には
Ａｌ（ＯＨ）３を含むＥ６Ｅ７は検出可能でないγＩＦＮ（＜３０ｐｇ／ｍｌ）
またはＩＬ５（＜４ｐｇ／ｍｌ）を誘導する。
【０１０５】 これらの結果はｐＨ改変したＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥ６Ｅ
７はマウスにおいて免疫原性であり、Ｔｈ１型応答を誘導したということを示す
。
【０１０６】実施例１０ キレート性（ＣＨＬ）ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）の製造 ＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はMacfarlan and Malliaros, (1998)
国際特許公開ＷＯ／９８／３６７７２の方法によって製造した。便宜には、１．
６ｍｌの５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．６ｍＭのＣｕＣｌ２ ｐＨ７．２（バッファーＡ）に０．２ｍｌの２０％のＭＥＧＡ−１０界面活性剤
（ｗ／ｖ）中に１０ｍｇ／ｍｌのコレステロール、９ｍｇ／ｍｌのＤＰＰＣ、１
．０７４ｍｇ／ｍｌのジパルミトイル−ｒａｃ−グリセロール−３（８−（３，
６−ジオキシ）オクチル−１−アミノ−Ｎ，Ｎ−ニ酢酸）（ＤＰＩＤＡ）を含有
する溶液、次いで、０．２ｍｌのバッファーＡ中に５０ｍｇ／ｍｌのＩＳＣＯＰ
ＲＥＰ（商標）７０３を含有する溶液を加えた。溶液を穏やかに混合しながら２
５℃で９０分間保持した。次いで、透析をまずバッファーＡに対してバッファー
を２回交換して一晩、次いで５０ｍＭのＴｒｉｓ、５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４・
２Ｈ２Ｏ、１５０ｍＭのＮａＣｌｐＨ６．９に対してバッファーを２回交換して
２日間実施した。透析の際に、コレステロール、ＤＰＰＣ、ＤＰＩＤＡおよびＩ
ＳＣＯＰＲＥＰ（商標）を含むＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）が形成さ
れた。ＣＨＬ
【０１０７】 ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤は電子顕微鏡によれば典型的な外観のもの
であった。
【０１０８】実施例１１ ヘキサヒスチジン（６Ｈ）±ヘキサリジン（６Ｋ）ＨｐＣの作製、発現および精 製 ＨｐＣタンパク質のｐＩは５．０５であり、ｐＨ７．２で負電荷を有させる。
６Ｋの付加はｐＩを７．６８に変更し、正電荷を有する尾部を付与するであろう
。精製用に、６Ｋを含むか含まない、ＨｐＣおよび６Ｈを与える２種のクローン
を構築した。ＣＳＬ６９４ＤＮＡ（Edwards et al. 1998に記載のベクターｐＧ
ｅｘＳｔｏｐ中のＣ末端６Ｈを含むＨｐＣ１３）をＰＣＲ増幅の鋳型として用い
、Ｃ末端６Ｋを作製した。ＰＣＲ産物を発現ベクターｐＧｅｘＳｔｏｐＩＶのＥ
ｃｏＲＩ−ＢｇｌＩＩ部位にクローニングし、直列型Ｃ末端６Ｋとそれに続く６
Ｈタグを作製した。これは大腸菌(E.coli)系統ＥＲ１７９３で作製し、ＣＳＬ１
４２４と呼んだ。
【０１０９】 １リットルの培養物をＡ６００＝２において０．５ｍＭのＩＰＴＧで誘導し、
誘導の５時間後に回収した。可溶性組換えタンパク質を金属（ニッケル）アフィ
ニティークロマトグラフィーのためにＣ末端６Ｈタグを利用して精製した。溶出
したタンパク質をＰＢＳに対して透析した。
【０１１０】実施例１２ ６Ｈおよび６Ｋタグ：ＨｐＣを用いる、ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合し た抗原の調製 ６Ｈを含むＨｐＣタンパク質のｐＩは５．８５であり、ｐＨ７．２で負電荷を
有させる。このタンパク質への６Ｋの付加は７．６８のｐＩを与え、ｐＨ７．２
で正電荷を有させる。両形態のタンパク質ともＰＢＳｐＨ７．２に可溶性である
。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤と結合したＨｐＣはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ
（商標）としてのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に対して１：５の割合のタンパク質
を２０〜２５℃で６０分間混合することによって調製した。用いたＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸ（商標）製剤はＤＰＰＣおよびＣＨＬであった。６Ｈタンパク質とＩＳ
ＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）を結合させるための標準法としてＣＨＬ ＩＳＣＯＭ
ＡＴＲＩＸ（商標）技術を用いた。
【０１１１】 処方後、調製物をスクロース勾配（１０〜５０％スクロースｗ／ｖ）で精製し
、ＨｐＣ、ＨｐＣとＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合およびＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸ（商標）について画分を分析した（図１０）。ＨｐＣはＰＢＳで１０分
の１に希釈した画分をＥＩＡプレートのウェルに吸着させ、次いで、ＨＲＰが結
合したＨｐＣに対するモノクローナル抗体で検出することによって検出した。結
合は捕捉するためのＨｐＣに対するモノクローナル抗体および検出するためのＨ
ＲＰが結合したＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に対するモノクローナル抗体を用いて
ＥＩＡによって測定した。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）は実施例１に記載のよ
うにＤＰＨを検出することによって測定した。
【０１１２】 標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には、６Ｈ−Ｈ
ｐＣは画分１〜６に認められ、結合の証拠はほとんどなかった（図１０Ｃ）。６
Ｋ６Ｈ−ＨｐＣをＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には
、相当な量のＨｐＣが結合およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）ピークと一致す
る画分７〜１１にあり、このことは結合を示す(図１０Ａ）６Ｈ−ＨｐＣをＣＨ
Ｌ
【０１１３】 ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した場合には、ほとんどのＨｐＣはＩＳ
ＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）および結合ピークと一致する画分７〜１４にあり、こ
のことは結合を示す（図１０Ｂ）。
【０１１４】 これらの結果は６Ｋの負電荷を有するタンパク質への付加はその標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との結合能を高め、達成された結合はＣＨＬ
ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とともに６Ｈを用いるものに匹敵したということ
を示す。
【０１１５】実施例１３ パルミチン酸（ＰＡＬ）、６Ｈ、６Ｋを用いる、および製剤タグを用いない、合 成ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合し たものの調製 ポリトープはValerio et al.によって記載されたマルチピン（商標）クラウン
に対するカイロン技術によりアミノ酸のためのＦｍｏｃαアミノ保護スキームを
用いて合成し、精製した。側鎖を脱保護し、トリフルオロ酢酸／スカベンジャー
溶液中で切断した後、ペプチドをエーテルで沈殿させ、乾燥させた。再溶解した
ペプチドをアセトニトリルの勾配での溶出を用いて分取逆相ＨＰＬＣにより精製
した。イオンスプレー質量分析により求められる、妥当な分子量を有する物質を
含有する画分をプールし乾燥させた。
【０１１６】 ポリトープは以下のとおりであった： 公知のＢＡＬＢ／ｃ制限エピト−プを含むタグ−ＹＰＨＦＭＰＴＮＬＲＰＱＡ
ＳＧＶＹＭＴＹＱＲＴＲＡＬＶＳＹＩＰＳＡＥＫＩ−ＯＨ（＜４００＞３）、Ｙ
ＰＨＦＭＰＴＮＬ（＜４００＞４）、ＲＰＱＡＳＧＶＹＭ（＜４００＞５）、Ｔ
ＹＱＲＴＲＡＬＶ（＜４００＞６）およびＳＹＩＰＳＡＥＫＩ（＜４００＞７）
。用いたタグはＰＡＬ、６Ｈ、６ＫまたはＨ（タグはない）であった。
【０１１７】 ＰＡＬポリトープについてはMorein et al. (1989)の方法に従って、ＩＳＣＯ
Ｍ（商標）（免疫刺激性複合体）への組み込みにより結合を達成した。便宜には
、１．７６ｍｌのＰＢＳ中の１０％のＭＥＧＡ−１０界面活性剤（ｗ／ｖ）、５
０％のアセトニトリルに可溶化した４ｍｇのポリトープに０．１６ｍｌの２０％
のＭＥＧＡ−１０界面活性剤（ｗ／ｖ）中に１０ｍｇ／ｍｌのコレステロールお
よび１０ｍｇ／ｍｌのＤＰＰＣを含有する溶液、次いで、０．０８ｍｌのＰＢＳ
中に１００ｍｇ／ｍｌのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）７０３を含有する溶液を加え
た。溶液を穏やかに混合しながら２５℃にて１時間保持した。続くＰＢＳ／アジ
化物に対する透析の際に、パルミチル化ポリトープ、コレステロール、ＤＰＰＣ
およびＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）を含有するＩＳＣＯＭ（商標）が形成された。
これらのＩＳＣＯＭ（商標）は電子顕微鏡によれば典型的な外観のものであった
。
【０１１８】 ６Ｈポリトープを８Ｍの尿素に可溶化し、次いで、ＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲ
ＩＸ（商標）と混合し、また６Ｋおよびタグを含まないポリトープをＰＢＳに可
溶化し、次いで、標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した。総
ての製剤はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）としてのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に
対して１：８の割合のタンパク質で調製し、２０〜２５℃で６０分間インキュベ
ートした。
【０１１９】 調製物をスクロース勾配（１０〜５０％スクロースｗ／ｖ）で精製し、タンパ
ク質およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）について画分を分析した。タンパク質
はMolecular ProvesのＣＢＱＣＡ（＜４００＞８）を用い、製造業者の使用説明
書に従って、またはBradford (1976)の方法に従ってクマシーによって検出した
。便宜には、１００μｌの各画分をマイクロプレートに加え、次いで１００μｌ
のクマシー試薬を加え、次いで、プレートを５９５ｎｍで読み取った。ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）は実施例１に記載のようにＤＰＨによって検出した。
【０１２０】 ポリトープ単独は画分１〜５に認められた（図１１Ｅ）。ＰＡＬポリトープＩ
ＳＣＯＭ（商標）では、ＣＢＱＣＡ（＜４００＞８）によって検出されたタンパ
ク質は大部分はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）ピークと一致する画分１１〜１３
に認められ、このことは組み込みを示す（図１１Ａ）。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（
商標）と結合した６Ｋポリトープでは、クマシーによって検出されたタンパク質
は大部分は画分１〜５に認められ、これはおそらくはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商
標）と結合していなかった（図１１Ｃ）。相当な割合のポリトープがＩＳＣＯＭ
ＡＴＲＩＸ（商標）ピークと一致する画分１２〜１４に認められ、このことは結
合を示す。ＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合した６Ｈポリトープで
は、クマシーによって検出されたタンパク質は大部分はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（
商標）ピークと一致する画分４〜１０に認められ、このことは結合を示す（図１
１Ｂ）。相当な割合の６Ｈポリトープが画分１〜３に認められたが、これはおそ
らく結合していなかった。タグを含まないＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合
したものでは、クマシーによって検出されたタンパク質はほとんど総てが画分１
〜５に認められたが、これはおそらくはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合し
ていなかった。
【０１２１】 これらの結果はタグは調べたポリトープのＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との
結合に必要であり、また標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との６Ｋ
ポリトープ結合はＩＳＣＯＭ（商標）への疎水性ＰＡＬポリトープの組み込みに
匹敵するが、ＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との６Ｈポリトープ結合ほ
どは十分でなかったということを示す。
【０１２２】実施例１４ 合成ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤と 結合したものでのマウスの免疫化 ３個体のＢＡＬＢ／ｃマウスをで０．１ｍｌの６μｇのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商
標）および３．５μｇ〜５μｇの間のタンパク質を含むポリトープＩＳＣＯＭ（
商標）またはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したもので尾の付け根で皮下
に免疫化した。
【０１２３】 ＣＴＬアッセイはElliottet al. (1999)の方法に従って実施した。便宜には、
各脾臓から脾細胞を１４日めに採取し、加湿インキュベーター中で３７℃にて２
４ウェルプレートで１μｇ／ｍｌの個々のペプチド（４種のペプチド／脾臓）と
ともに１ｍｌの培地で５×１０６細胞／ｍｌで培養した。３日目に、１ｍｌの新
鮮培地を加え、次いで、さらに７日目に照射（８００ｒａｄ）ペプチドに感作さ
れた（１０μｇ／ｍｌ、１時間３７℃、２回洗浄）Ｐ８１５細胞を刺激物に対す
る応答物の割合を２０：１で加えてin vitro再刺激を実施し、２×１０６エフェ
クター／ウェルとした。７日の間隔でこの処置をさらに２回反復し、バルク培養
物を６日後に標準の６時間クロム放出アッセイにおいてエフェクターとして用い
た。培地は１０％のＦＣＳ(QIMR)、５×１０−５Ｍの２−メルカプトエタノール
、２ｍＭのグルタミンおよびアオカビ属／ストレプトマイセス属抗生物質を添加
したＲＰＭＩ１６４０を含んでいた。標的細胞は５１Ｃｒ標識ペプチドに感作さ
れたおよび感作されていない（対照）Ｐ８１５細胞とした。エフェクター：標的
の割合は５０、１０および２対１とした。アッセイは９６ウェル丸底プレートで
二組で実施した。
【０１２４】 ＰＡＬポリトープＩＳＣＯＭ（商標）は４種のエピト−プ総てに対して、ＴＹ
Ｑについては３／３のマウスで、ＳＹＩについては１／３で、ＹＰＨについでは
２／３でおよびＲＰＱについては２／３でＣＴＬ応答を誘導した（図１２Ａ）。
ＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合した６Ｈポリトープは４種エピト
−プ総てについて３／３のマウスに対してＣＴＬ応答を誘導した（図１２Ｂ）。
ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合した６Ｋポリトープは４種のエ
ピトープ総てに対して、ＴＹＱ、ＹＰＨおよびＲＰＱについては３／３で、ＳＹ
Ｉについては２／３で、ＣＴＬ応答を誘導した（図１２Ｃ）。ＤＰＰＣ ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したタグを含まないポリトープはＲＰＱについて
２／３のマウスで弱いＣＴＬ応答を誘導したが、その他のエピトープのいずれか
に対してはＣＴＬ応答は検出されなかった（図１２Ｄ）。ＳＹＩ配列は弱いエピ
トープであると知られており、これは総ての製剤について事実であった。
【０１２５】 これらの結果はポリトープのＩＳＣＯＭ（商標）またはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ
（商標）との結合は最適なＣＴＬ誘導に必要であり、６Ｋを用いる結合はＣＨＬ
ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）をともなう６Ｈまたは従来の疎水性タンパク質
の組み込み（ＰＡＬポリトープＩＳＣＯＭ（商標））と同程度に有効であったと
いうことを示す。
【０１２６】実施例１５ 組換え（ｒ）６Ｈ±ポリトープの作製、発現および精製 ｐｓｔｍｐｄｖ ＤＮＡ（QIMRにより供給された）をマウスポリトープ、ＹＰ
ＨＦＭＰＴＮＬＴＳＳＧＰＳＮＴＰＰＥＩＦＡＰＧＮＹＰＡＬＳＹＩＰＳＡＥＫ
ＩＥＥＧＡＩＶＧＥＩＲＰＱＡＳＧＶＹＭ（＜４００＞９）のＰＣＲ増幅の鋳型
として用い、Ｃ末端６Ｋを含むか含まないで（それぞれ、ＣＳＬ１４３０および
１４２６）作製することが可能となった。ＰＣＲ産物を発現ベクターｐＥＴ２４
ｂ(Novagen)のＢａｍＨＩ−ＸｈｏＩ部位にクローニングし、Ｎ末端Ｔ７タグ（
同定用）および直列型Ｃ末端６Ｋとそれに続く６Ｈ（精製用）を作製した。 クローンは大腸菌系統ＥＲ１７９３で作製し、次いで発現系統ＢＬ２１（ＤＥ
３）に形質転換した。１リットルの培養物をＡ６００＝２にて０．５ｍＭのＩＰ
ＴＧで誘導し、誘導後４時間で回収した。可溶性組換えタンパク質を金属（ニッ
ケル）アフィニティークロマトグラフィーのためのＣ末端６Ｈタグを利用して精
製した。溶出したタンパク質をＰＢＳに対して透析した。
【０１２７】実施例１６ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したｒポリトープ６Ｈおよび６Ｋの調製 ６Ｈを含むマウスポリトープのｐＩは５．８５であり、ｐＨ７．２で負電荷を
有させる。これへの６Ｋの付加は７．６８のｐＩを与え、ｐＨ７．２で正電荷を
有させる。タンパク質の両形態ともＰＢＳｐＨ７．２で可溶性であった。ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤と結合したポリトープはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商
標）としてのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標）に対して１：５の割合のタンパク質を２
０〜２５℃にて６０分間混合することによって調製した。用いたＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）製剤はＤＰＰＣ、ＣＤＬ、ＤＰＬおよびＣＨＬであった。配列中
に結合を強力に干渉し得るいくつかのＥがあるので、ｐＨ４．３でグルタミン酸
（Ｅ）のｐＩ以下である製剤を調べた。
【０１２８】 処方後、調製物をスクロース勾配（１０〜５０％スクロースｗ／ｖ）で精製し
、タンパク質およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）について画分を分析した（図
１３）。タンパク質はＰＢＳで１０分の１に希釈した画分をＥＩＡプレートのウ
ェルに吸着させ、次いで、ＨＲＰが結合した６Ｈに対するモノクローナル抗体で
検出することによって検出した。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）は実施例１に記
載のように３ＨコレステロールまたはＤＰＨを検出することによって測定した。
【０１２９】 ｒ６Ｈ６Ｋポリトープ単独ではタンパク質は画分１〜６に認められた（図１３
Ｋ）。ｐＨ７で標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合したｒ６Ｋ
６Ｈポリトープでは、タンパク質は大部分は画分１〜９に認められたが、結合の
証拠はほとんどなかった（図１３Ａ）。ｐＨ７でＣＤＬおよびＤＰＬ ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合したｒ６Ｋ６Ｈポリトープでは、タンパク質は大部
分はＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と一致する画分に認められ、このことは結合
を示す（図１３Ｃ、Ｅ）。ＣＤＬおよびＤＰＬそれぞれについては相当な割合の
タンパク質が画分１〜３および１〜６に認められ、これらはおそらくは結合して
いない。ｐＨ４．３で標準ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した
ｒ６Ｋ６Ｈポリトープでは、タンパク質は大部分は画分１〜９に認められたが、
画分１０〜１２におけるＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）ピークと一致する結合の
証拠がいくらかあった（図１３Ｂ）。ｐＨ４．３でＣＤＬおよびＤＰＬ ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合したｒ６Ｋ６Ｈポリトープではタンパク質はＩＳ
ＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と一致する画分にほとんど総て認められ、このことは
ほとんど完全な結合を示した（図１３Ｄ、Ｆ）。ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）と混合したｒ６Ｈポリトープは大部分が画分１〜７に認められ、結合
の証拠はほとんどなかった。ＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と混合した
ｒ６ＨポリトープはｐＨ７およびｐＨ４．３の双方での標準ＤＰＰＣおよびＣＤ
Ｌ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と同様のパターンの結合を示した。タンパク
質は結合していない画分１〜４およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）ピークと一
致する５〜１０にほとんど等量で認められ、結合を示した（図１３Ｈ、Ｉ、Ｊ）
。
【０１３０】 これらの結果は本明細書で用いたｒポリトープは６Ｋを付加してでさえ標準Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しないであろうということを示す。結合は改
変ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）を用いて達成でき、これらの製剤の結合能は低
ｐＨを利用することによって高まる。改変ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と低ｐ
Ｈの組合せは改変ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）または低ｐＨの使用によって高
められていない６Ｈ ＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と同程度によいか
、またはよりよい結合をもたらした。
【０１３１】実施例１７ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤と結合したｒポリトープでのマウスの免疫化 ３個体のＢＡＬＢ／ｃマウスを０．１ｍｌの６μｇのＩＳＣＯＰＲＥＰ（商標
）７０３および３．５μｇ〜５μｇの間のタンパク質を含むＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）と結合したもので尾の付け根で皮下に免疫化した。 ＣＴＬアッセイはElliottet al. (1999)の方法に従って実施した。便宜には、
各脾臓から脾細胞を１４日めに採取し、加湿インキュベーター中で３７℃にて２
４ウェルプレートで１μｇ／ｍｌの個々のペプチド（４種のペプチド／脾臓）と
ともに１ｍｌの培地で５×１０６細胞／ｍｌで培養した。３日目に、１ｍｌの新
鮮培地を加え、次いで、さらに７日目に照射（８００ｒａｄ）ペプチドに感作さ
れた（１０μｇ／ｍｌ、１時間３７℃、２回洗浄）Ｐ８１５細胞を刺激物に対す
る応答物の割合を２０：１で加えてin vitro再刺激を実施し、２×１０６エフェ
クター／ウェルとした。７日の間隔でこの処置をさらに２回反復し、バルク培養
物を６日後に標準の６時間クロム放出アッセイにおいてエフェクターとして用い
た。培地は１０％のＦＣＳ(QIMR)、５×１０−５Ｍの２−メルカプトエタノール
、２ｍＭのグルタミンおよびアオカビ属／ストレプトマイセス属抗生物質を添加
したＲＰＭＩ１６４０を含んでいた。標的細胞は５１Ｃｒ標識ペプチドに感作さ
れたおよび感作されていない（対照）Ｐ８１５細胞とした。エフェクター：標的
の割合は５０、１０および２対１とした。アッセイは９６ウェル丸底プレートで
二組で実施した。
【０１３２】 ＣＤＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したｒ６Ｋ６ＨポリトープｐＨ
４．３はＳＹＩ、ＹＰＨおよびＲＰＱエピトープについては３／３のマウスで、
およびＴＹＱエピトープについでは１／３でＣＴＬ応答を誘導した（図１４Ａ）
。ＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したｒ６Ｈ ｐＨ７はＳＹＩ、
ＹＰＨおよびＲＰＱエピトープについては３／３のマウスで、およびＴＹＱエピ
トープについては２／３でＣＴＬ応答を誘導した（図１４Ｂ）。両製剤ともＴＹ
Ｑエピトープに対しては極めて低い応答を誘導した。
【０１３３】 これらの結果はＣＤＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したｒ６Ｋ６Ｈ
ポリトープｐＨ４．３を用いてＣＴＬ応答を誘導でき、これはＣＨＬ ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したｒ６Ｈ ｐＨ７を用いた応答に匹敵するるとい
うことを示す。
【０１３４】実施例１８ 自然状態で負電荷を有するタンパク質：Ｅ６Ｅ７を用いる、ＤＰＰＣおよびＤＰ Ｌリポソームの製造 リポソームはTalsma and Crommelin (1992)の方法に従って製造した。便宜に
は、３Ｈコレステロールをメタノール、クロロホルムに溶解し、次いで、脂質を
加え、穏やかに回転させながら回転フラスコ中で溶媒を蒸発させることによって
リポソームを形成させた。用いた脂質は標準ＤＰＰＣおよび負電荷を有するＤＰ
Ｌであった。次いで、Ｅ６Ｅ７をリポソームに加え、混合物を超音波処理し、次
いで２６Ｇ針を通して押し出した。リポソームは電子顕微鏡によれば典型的な外
観のものであった。
【０１３５】 処方後、調製物をスクロース勾配（１０〜５０％スクロースｗ／ｖ）で精製し
、タンパク質およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）について画分を分析した（図
１５）。タンパク質はモノクローナル抗体を用いるＥ７についてのサンドウィッ
チＥＩＡによって検出した。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）は３Ｈコレステロー
ルを検出することによって測定した。
【０１３６】 ＤＰＰＣリポソームではＥ６Ｅ７は大部分は画分１〜３に認められたが、ほと
んど勾配に存在せず、このことはタンパク質は沈殿していたということを示した
。（図１５Ａ）。存在したタンパク質は画分２〜４に認められたリポソームとお
そらくは結合していなかった。ＤＰＬリポソームではＥ６Ｅ７は勾配全体に認め
られ、これは同様に勾配全体に認められたリポソームと一致した（図１５Ｂ）。
勾配全体への製剤の広がりはおそらくはリポソームの大きさの範囲を示すもので
あったが、ほとんど総てのタンパク質はリポソームと結合していると考えられる
。
【０１３７】 これらの結果は負電荷を有する脂質をリポソームに用いて標準リポソームとは
結合しない負電荷を有するタンパク質と結合させることができるということを示
す。
【０１３８】 当業者ならば本明細書に記載される本発明は具体的に記載されるもの以外の変
法および改変の影響を受けやすいということを理解するであろう。本発明は総て
のかかる変法および改変を含むと理解されるべきである。本発明はまた、本明細
書において、個々にまたは集団的に記載されるか、または示される、総ての工程
、特徴、組成物および化合物、ならびにいずれか２種以上の工程または特徴の組
合せのいずれかおよび総てを含む。
【０１３９】
【表１】 文献
【表２】
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１ａ】 ＤＰＰＣ（図１ａ）、ＣＤＬ（図１ｂ）、ＤＰＬ（図１ｃ）、ＭＰＬ（図１ｄ
）ＤＰＡ（図１ｅ）およびＤＰＰＧ（図１ｆ）を用いて処方されたＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸＴＭ（商標）のスクロース勾配分析のグラフである。各場合において、
脂質および３Ｈは各脂質のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）構造への組み込みを重
複して示しているということがわかる。
【図１ｂ】 ＤＰＰＣ（図１ａ）、ＣＤＬ（図１ｂ）、ＤＰＬ（図１ｃ）、ＭＰＬ（図１ｄ
）ＤＰＡ（図１ｅ）およびＤＰＰＧ（図１ｆ）を用いて処方されたＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸＴＭ（商標）のスクロース勾配分析のグラフである。各場合において、
脂質および３Ｈは各脂質のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）構造への組み込みを重
複して示しているということがわかる。
【図１ｃ】 ＤＰＰＣ（図１ａ）、ＣＤＬ（図１ｂ）、ＤＰＬ（図１ｃ）、ＭＰＬ（図１ｄ
）ＤＰＡ（図１ｅ）およびＤＰＰＧ（図１ｆ）を用いて処方されたＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸＴＭ（商標）のスクロース勾配分析のグラフである。各場合において、
脂質および３Ｈは各脂質のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）構造への組み込みを重
複して示しているということがわかる。
【図１ｄ】 ＤＰＰＣ（図１ａ）、ＣＤＬ（図１ｂ）、ＤＰＬ（図１ｃ）、ＭＰＬ（図１ｄ
）ＤＰＡ（図１ｅ）およびＤＰＰＧ（図１ｆ）を用いて処方されたＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸＴＭ（商標）のスクロース勾配分析のグラフである。各場合において、
脂質および３Ｈは各脂質のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）構造への組み込みを重
複して示しているということがわかる。
【図１ｅ】 ＤＰＰＣ（図１ａ）、ＣＤＬ（図１ｂ）、ＤＰＬ（図１ｃ）、ＭＰＬ（図１ｄ
）ＤＰＡ（図１ｅ）およびＤＰＰＧ（図１ｆ）を用いて処方されたＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸＴＭ（商標）のスクロース勾配分析のグラフである。各場合において、
脂質および３Ｈは各脂質のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）構造への組み込みを重
複して示しているということがわかる。
【図１ｆ】 ＤＰＰＣ（図１ａ）、ＣＤＬ（図１ｂ）、ＤＰＬ（図１ｃ）、ＭＰＬ（図１ｄ
）ＤＰＡ（図１ｅ）およびＤＰＰＧ（図１ｆ）を用いて処方されたＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸＴＭ（商標）のスクロース勾配分析のグラフである。各場合において、
脂質および３Ｈは各脂質のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）構造への組み込みを重
複して示しているということがわかる。
【図２ａ】 ＨｐＥと混合した後の実施例１の４種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＨｐＥはＣＤＬおよびＤＰＬ
ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しているが、ＤＰＰＣおよびＤＰＰＧ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とは一部のみしか結合していないということがわか
る。
【図２ｂ】 ＨｐＥと混合した後の実施例１の４種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＨｐＥはＣＤＬおよびＤＰＬ
ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しているが、ＤＰＰＣおよびＤＰＰＧ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とは一部のみしか結合していないということがわか
る。
【図２ｃ】 ＨｐＥと混合した後の実施例１の４種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＨｐＥはＣＤＬおよびＤＰＬ
ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しているが、ＤＰＰＣおよびＤＰＰＧ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とは一部のみしか結合していないということがわか
る。
【図２ｄ】 ＨｐＥと混合した後の実施例１の４種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＨｐＥはＣＤＬおよびＤＰＬ
ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しているが、ＤＰＰＣおよびＤＰＰＧ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とは一部のみしか結合していないということがわか
る。
【図２ｅ】 ＨｐＥと混合した後の実施例１の４種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＨｐＥはＣＤＬおよびＤＰＬ
ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しているが、ＤＰＰＣおよびＤＰＰＧ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とは一部のみしか結合していないということがわか
る。
【図３ａ】 ＥＳＯと混合した後の実施例１の２種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥＳＯはＤＰＬ ＩＳＣＯＭ
ＡＴＲＩＸ（商標）と結合しているが、ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標
）とは一部のみしか結合していないということがわかる。
【図３ｂ】 ＥＳＯと混合した後の実施例１の２種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥＳＯはＤＰＬ ＩＳＣＯＭ
ＡＴＲＩＸ（商標）と結合しているが、ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標
）とは一部のみしか結合していないということがわかる。
【図３ｃ】 ＥＳＯと混合した後の実施例１の２種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥＳＯはＤＰＬ ＩＳＣＯＭ
ＡＴＲＩＸ（商標）と結合しているが、ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標
）とは一部のみしか結合していないということがわかる。
【図４】 ＥＳＯ製剤に対する抗体応答のグラフである。ＥＳＯが結合したＩＳＣＯＭＡ
ＴＲＩＸ（商標）は特にＴｈ１サブタイプＩｇＧ２ａにおいてＥＳＯ単独よりも
高い抗体応答を含有するということがわかる。
【図５ａ】 刺激および標的のために、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬ（＜４００＞１）（図５ａ
、５ｂ）およびＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（＜４００＞２）（図５ｃ、５ｄ）ペプチド
を用いるＥＳＯ（図５ａ、５ｃ）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合し
たＥＳＯ（図５ｂ、５ｄ）で免疫化したマウスのＣＴＬ分析のグラフである。Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥＳＯはＣＴＬ応答を誘導するが、ＥＳ
Ｏ単独は誘導しないということがわかる。
【図５ｂ】 刺激および標的のために、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬ（＜４００＞１）（図５ａ
、５ｂ）およびＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（＜４００＞２）（図５ｃ、５ｄ）ペプチド
を用いるＥＳＯ（図５ａ、５ｃ）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合し
たＥＳＯ（図５ｂ、５ｄ）で免疫化したマウスのＣＴＬ分析のグラフである。Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥＳＯはＣＴＬ応答を誘導するが、ＥＳ
Ｏ単独は誘導しないということがわかる。
【図５ｃ】 刺激および標的のために、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬ（＜４００＞１）（図５ａ
、５ｂ）およびＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（＜４００＞２）（図５ｃ、５ｄ）ペプチド
を用いるＥＳＯ（図５ａ、５ｃ）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合し
たＥＳＯ（図５ｂ、５ｄ）で免疫化したマウスのＣＴＬ分析のグラフである。Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥＳＯはＣＴＬ応答を誘導するが、ＥＳ
Ｏ単独は誘導しないということがわかる。
【図５ｄ】 刺激および標的のために、ＳＬＬＭＷＩＴＱＣＦＬ（＜４００＞１）（図５ａ
、５ｂ）およびＳＬＬＭＷＩＴＱＣ（＜４００＞２）（図５ｃ、５ｄ）ペプチド
を用いるＥＳＯ（図５ａ、５ｃ）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合し
たＥＳＯ（図５ｂ、５ｄ）で免疫化したマウスのＣＴＬ分析のグラフである。Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合したＥＳＯはＣＴＬ応答を誘導するが、ＥＳ
Ｏ単独は誘導しないということがわかる。
【図６ａ】 Ｅ６Ｅ７と混合した後の実施例１の６種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥ６Ｅ７はＣＤＬ、ＤＰＬお
よびＤＰＡ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しており、ＭＰＬおよびＤＰ
ＰＧ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはあまり結合しておらず、ＤＰＰＣ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはやはりさらに結合していないということがわか
る。
【図６ｂ】 Ｅ６Ｅ７と混合した後の実施例１の６種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥ６Ｅ７はＣＤＬ、ＤＰＬお
よびＤＰＡ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しており、ＭＰＬおよびＤＰ
ＰＧ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはあまり結合しておらず、ＤＰＰＣ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはやはりさらに結合していないということがわか
る。
【図６ｃ】 Ｅ６Ｅ７と混合した後の実施例１の６種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥ６Ｅ７はＣＤＬ、ＤＰＬお
よびＤＰＡ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しており、ＭＰＬおよびＤＰ
ＰＧ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはあまり結合しておらず、ＤＰＰＣ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはやはりさらに結合していないということがわか
る。
【図６ｄ】 Ｅ６Ｅ７と混合した後の実施例１の６種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥ６Ｅ７はＣＤＬ、ＤＰＬお
よびＤＰＡ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しており、ＭＰＬおよびＤＰ
ＰＧ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはあまり結合しておらず、ＤＰＰＣ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはやはりさらに結合していないということがわか
る。
【図６ｅ】 Ｅ６Ｅ７と混合した後の実施例１の６種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥ６Ｅ７はＣＤＬ、ＤＰＬお
よびＤＰＡ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しており、ＭＰＬおよびＤＰ
ＰＧ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはあまり結合しておらず、ＤＰＰＣ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはやはりさらに結合していないということがわか
る。
【図６ｆ】 Ｅ６Ｅ７と混合した後の実施例１の６種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥ６Ｅ７はＣＤＬ、ＤＰＬお
よびＤＰＡ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しており、ＭＰＬおよびＤＰ
ＰＧ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはあまり結合しておらず、ＤＰＰＣ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはやはりさらに結合していないということがわか
る。
【図６ｇ】 Ｅ６Ｅ７と混合した後の実施例１の６種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤
のスクロース勾配分析のグラフである。ほとんどのＥ６Ｅ７はＣＤＬ、ＤＰＬお
よびＤＰＡ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）と結合しており、ＭＰＬおよびＤＰ
ＰＧ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはあまり結合しておらず、ＤＰＰＣ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とはやはりさらに結合していないということがわか
る。
【図７】 Ｅ６Ｅ７ ＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（Ａ）およびＥ６Ｅ７ Ｄ
ＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（Ｂ）で免疫化したマウスにおけるＣＴ
Ｌ分析のグラフである。Ｅ６Ｅ７ ＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はＣ
ＴＬ応答を誘導するがＥ６Ｅ７ ＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）は誘
導しないということがわかる。
【図８ａ】 ＨｐＣと混合した後の実施例１の２種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ほとんど結合していないＤＰＰＣ ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とよりもより多くのＨｐＣがＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲ
ＩＸ（商標）と結合しているということがわかる。
【図８ｂ】 ＨｐＣと混合した後の実施例１の２種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ほとんど結合していないＤＰＰＣ ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とよりもより多くのＨｐＣがＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲ
ＩＸ（商標）と結合しているということがわかる。
【図８ｃ】 ＨｐＣと混合した後の実施例１の２種のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ほとんど結合していないＤＰＰＣ ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とよりもより多くのＨｐＣがＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲ
ＩＸ（商標）と結合しているということがわかる。
【図９ａ】 ｐＨ６（図６ａ）およびｐＨ７．２（図６ｂ）でＥ６Ｅ７と混合した後の２種
のＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース勾配分析のグラフ
である。ｐＨ６でｐＨ７．２よりもより多くのＥ６Ｅ７がＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭ
ＡＴＲＩＸ（商標）と結合するということがわかる。
【図９ｂ】 ｐＨ６（図６ａ）およびｐＨ７．２（図６ｂ）でＥ６Ｅ７と混合した後の２種
のＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース勾配分析のグラフ
である。ｐＨ６でｐＨ７．２よりもより多くのＥ６Ｅ７がＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭ
ＡＴＲＩＸ（商標）と結合するということがわかる。
【図９ｃ】 ｐＨ６（図６ａ）およびｐＨ７．２（図６ｂ）でＥ６Ｅ７と混合した後の２種
のＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース勾配分析のグラフ
である。ｐＨ６でｐＨ７．２よりもより多くのＥ６Ｅ７がＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭ
ＡＴＲＩＸ（商標）と結合するということがわかる。
【図１０ａ】 実施例１１の改変ＨｐＣと混合した後のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ＨｐＣへの６Ｋの付加はＤＰＰＣ ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との結合を６ＨとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標
）製剤とのものに匹敵するレベルにまで増加させるということがわかる。
【図１０ｂ】 実施例１１の改変ＨｐＣと混合した後のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ＨｐＣへの６Ｋの付加はＤＰＰＣ ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との結合を６ＨとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標
）製剤とのものに匹敵するレベルにまで増加させるということがわかる。
【図１０ｃ】 実施例１１の改変ＨｐＣと混合した後のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤の
スクロース勾配分析のグラフである。ＨｐＣへの６Ｋの付加はＤＰＰＣ ＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との結合を６ＨとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標
）製剤とのものに匹敵するレベルにまで増加させるということがわかる。
【図１１ａ】 実施例１３の４種のポリトープＩＳＣＯＭ（商標）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）製剤のスクロース勾配分析のグラフである。６ＫポリトープはＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）といくらか結合しているが、６Ｋが存在しない場合には
結合はないということがわかる。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との６Ｋポリト
ープ結合はＰＡＬポリトープのＩＳＣＯＭ（商標）への疎水性組み込みに匹敵す
るが、６ＨポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合よりは
少ない。
【図１１ｂ】 実施例１３の４種のポリトープＩＳＣＯＭ（商標）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）製剤のスクロース勾配分析のグラフである。６ＫポリトープはＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）といくらか結合しているが、６Ｋが存在しない場合には
結合はないということがわかる。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との６Ｋポリト
ープ結合はＰＡＬポリトープのＩＳＣＯＭ（商標）への疎水性組み込みに匹敵す
るが、６ＨポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合よりは
少ない。
【図１１ｃ】 実施例１３の４種のポリトープＩＳＣＯＭ（商標）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）製剤のスクロース勾配分析のグラフである。６ＫポリトープはＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）といくらか結合しているが、６Ｋが存在しない場合には
結合はないということがわかる。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との６Ｋポリト
ープ結合はＰＡＬポリトープのＩＳＣＯＭ（商標）への疎水性組み込みに匹敵す
るが、６ＨポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合よりは
少ない。
【図１１ｄ】 実施例１３の４種のポリトープＩＳＣＯＭ（商標）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）製剤のスクロース勾配分析のグラフである。６ＫポリトープはＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）といくらか結合しているが、６Ｋが存在しない場合には
結合はないということがわかる。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との６Ｋポリト
ープ結合はＰＡＬポリトープのＩＳＣＯＭ（商標）への疎水性組み込みに匹敵す
るが、６ＨポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合よりは
少ない。
【図１１ｅ】 実施例１３の４種のポリトープＩＳＣＯＭ（商標）およびＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）製剤のスクロース勾配分析のグラフである。６ＫポリトープはＩＳＣ
ＯＭＡＴＲＩＸ（商標）といくらか結合しているが、６Ｋが存在しない場合には
結合はないということがわかる。ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）との６Ｋポリト
ープ結合はＰＡＬポリトープのＩＳＣＯＭ（商標）への疎水性組み込みに匹敵す
るが、６ＨポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）間の結合よりは
少ない。
【図１２ａ（ｉ）】 実施例１３の４種の合成ポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のＣＴ
Ｌ分析のグラフである。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はポリト
ープ中の４種のエピト−プ総てに対してＣＴＬ応答を誘導したが（図１２ｃ）、
タグを含まないポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤は１種のエピト−
プに対する低いＣＴＬ応答しか誘導しなかった（図１２ｄ）ということがわかる
。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）についてのＣＴＬ応答はＰＡＬ
、ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）（図１２ａ）および６ＨポリトープＣＨＬ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１２ｂ）で誘導されたものに匹敵した。
【図１２ａ（ii）】 実施例１３の４種の合成ポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のＣＴ
Ｌ分析のグラフである。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はポリト
ープ中の４種のエピト−プ総てに対してＣＴＬ応答を誘導したが（図１２ｃ）、
タグを含まないポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤は１種のエピト−
プに対する低いＣＴＬ応答しか誘導しなかった（図１２ｄ）ということがわかる
。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）についてのＣＴＬ応答はＰＡＬ
、ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）（図１２ａ）および６ＨポリトープＣＨＬ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１２ｂ）で誘導されたものに匹敵した。
【図１２ｂ（ｉ）】 実施例１３の４種の合成ポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のＣＴ
Ｌ分析のグラフである。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はポリト
ープ中の４種のエピト−プ総てに対してＣＴＬ応答を誘導したが（図１２ｃ）、
タグを含まないポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤は１種のエピト−
プに対する低いＣＴＬ応答しか誘導しなかった（図１２ｄ）ということがわかる
。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）についてのＣＴＬ応答はＰＡＬ
、ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）（図１２ａ）および６ＨポリトープＣＨＬ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１２ｂ）で誘導されたものに匹敵した。
【図１２ｂ（ii）】 実施例１３の４種の合成ポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のＣＴ
Ｌ分析のグラフである。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はポリト
ープ中の４種のエピト−プ総てに対してＣＴＬ応答を誘導したが（図１２ｃ）、
タグを含まないポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤は１種のエピト−
プに対する低いＣＴＬ応答しか誘導しなかった（図１２ｄ）ということがわかる
。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）についてのＣＴＬ応答はＰＡＬ
、ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）（図１２ａ）および６ＨポリトープＣＨＬ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１２ｂ）で誘導されたものに匹敵した。
【図１２ｃ（ｉ）】 実施例１３の４種の合成ポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のＣＴ
Ｌ分析のグラフである。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はポリト
ープ中の４種のエピト−プ総てに対してＣＴＬ応答を誘導したが（図１２ｃ）、
タグを含まないポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤は１種のエピト−
プに対する低いＣＴＬ応答しか誘導しなかった（図１２ｄ）ということがわかる
。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）についてのＣＴＬ応答はＰＡＬ
、ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）（図１２ａ）および６ＨポリトープＣＨＬ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１２ｂ）で誘導されたものに匹敵した。
【図１２ｃ（ii）】 実施例１３の４種の合成ポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のＣＴ
Ｌ分析のグラフである。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はポリト
ープ中の４種のエピト−プ総てに対してＣＴＬ応答を誘導したが（図１２ｃ）、
タグを含まないポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤は１種のエピト−
プに対する低いＣＴＬ応答しか誘導しなかった（図１２ｄ）ということがわかる
。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）についてのＣＴＬ応答はＰＡＬ
、ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）（図１２ａ）および６ＨポリトープＣＨＬ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１２ｂ）で誘導されたものに匹敵した。
【図１２ｄ（ｉ）】 実施例１３の４種の合成ポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のＣＴ
Ｌ分析のグラフである。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はポリト
ープ中の４種のエピト−プ総てに対してＣＴＬ応答を誘導したが（図１２ｃ）、
タグを含まないポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤は１種のエピト−
プに対する低いＣＴＬ応答しか誘導しなかった（図１２ｄ）ということがわかる
。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）についてのＣＴＬ応答はＰＡＬ
、ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）（図１２ａ）および６ＨポリトープＣＨＬ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１２ｂ）で誘導されたものに匹敵した。
【図１２ｄ（ii）】 実施例１３の４種の合成ポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のＣＴ
Ｌ分析のグラフである。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）はポリト
ープ中の４種のエピト−プ総てに対してＣＴＬ応答を誘導したが（図１２ｃ）、
タグを含まないポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤は１種のエピト−
プに対する低いＣＴＬ応答しか誘導しなかった（図１２ｄ）ということがわかる
。６ＫポリトープＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）についてのＣＴＬ応答はＰＡＬ
、ポリトープＩＳＣＯＭ（商標）（図１２ａ）および６ＨポリトープＣＨＬ Ｉ
ＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１２ｂ）で誘導されたものに匹敵した。
【図１３ａ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｂ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｃ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｄ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｅ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｆ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｇ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｈ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｉ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｊ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１３ｋ】 実施例１６の１０種の組換えＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）製剤のスクロース
勾配分析のグラフである。付加６ＫタグとＣＤＬまたはＤＰＬ ＩＳＣＯＭＡＴ
ＲＩＸ（商標）とを組合せることによって６ＫとＤＰＰＣ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩ
Ｘ（商標）に優って結合を増加させ、次いで、これらを低ｐＨと組み合わせると
結合能がいっそうさらに増加するということがわかる。６Ｋ、ＣＤＬ、ＩＳＣＯ
ＭＡＴＲＩＸ（商標）および低ｐＨを組合せることで達成される結合はポリトー
プをＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）とほとんど完全に結合させ、この結合は６Ｈ
ポリトープとＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）で達成され得るものよりも
よりも多かった。
【図１４ａ（ｉ）】 ６ＫポリトープＣＤＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）ｐＨ４．３（図１４ａ
）および６ＨポリトープＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１４ｂ）製
剤のＣＴＬ分析のグラフである。ＣＴＬ応答は両製剤についてポリトープ中の４
種のエピト−プの総てに対して誘導されたが、この応答はＴＹＱエピト−プに対
しては極めて低かったということがわかる。
【図１４ａ（ii）】 ６ＫポリトープＣＤＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）ｐＨ４．３（図１４ａ
）および６ＨポリトープＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１４ｂ）製
剤のＣＴＬ分析のグラフである。ＣＴＬ応答は両製剤についてポリトープ中の４
種のエピト−プの総てに対して誘導されたが、この応答はＴＹＱエピト−プに対
しては極めて低かったということがわかる。
【図１４ｂ（ｉ）】 ６ＫポリトープＣＤＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）ｐＨ４．３（図１４ａ
）および６ＨポリトープＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１４ｂ）製
剤のＣＴＬ分析のグラフである。ＣＴＬ応答は両製剤についてポリトープ中の４
種のエピト−プの総てに対して誘導されたが、この応答はＴＹＱエピト−プに対
しては極めて低かったということがわかる。
【図１４ｂ（ii）】 ６ＫポリトープＣＤＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）ｐＨ４．３（図１４ａ
）および６ＨポリトープＣＨＬ ＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）（図１４ｂ）製
剤のＣＴＬ分析のグラフである。ＣＴＬ応答は両製剤についてポリトープ中の４
種のエピト−プの総てに対して誘導されたが、この応答はＴＹＱエピト−プに対
しては極めて低かったということがわかる。
【図１５ａ】 実施例１８のＥ６Ｅ７と混合したリポソームのグラフである。ほとんどのＥ６
Ｅ７はＤＰＬリポソームと結合していたが、Ｅ６Ｅ７はＤＰＰＣリポソームとは
ほとんど結合していなかったということがわかる。
【図１５ｂ】 実施例１８のＥ６Ｅ７と混合したリポソームのグラフである。ほとんどのＥ６
Ｅ７はＤＰＬリポソームと結合していたが、Ｅ６Ｅ７はＤＰＰＣリポソームとは
ほとんど結合していなかったということがわかる。
【手続補正書】
【提出日】平成１３年１０月１０日（２００１．１０．１０）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/06 Ａ６１Ｐ 31/06 31/18 31/18 31/20 31/20 33/00 33/00 35/00 35/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 アンドレアス、スールビアー オーストラリア連邦クイーンズランド州、 バンヤ、4055、メイルマンズ、トラック、 185 Ｆターム(参考） 4C085 AA02 AA03 AA38 BA20 BA76 BB07 EE01 EE06 FF12 FF18 GG01 GG08

Claims (51)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 荷電有機担体および荷電抗原を含んでなり、その有機担体および抗原が静電気
    的に結合している、免疫原複合体。
  2. 【請求項２】 担体が負電荷を有し、かつ、抗原が正電荷を有する、請求項１に記載の免疫原
    複合体。
  3. 【請求項３】 抗原がタンパク質またはその誘導体もしくは同等物である、請求項２に記載の
    免疫原複合体。
  4. 【請求項４】 担体がアジュバントまたはその誘導体もしくは同等物である、請求項２に記載
    の免疫原複合体。
  5. 【請求項５】 抗原がタンパク質またはその誘導体もしくは同等物であり、かつ、担体がアジ
    ュバントまたはその誘導体もしくは同等物である、請求項２に記載の免疫原複合
    体。
  6. 【請求項６】 負電荷を有するアジュバントが自然状態で負電荷を有するアジュバントであり
    、その負電荷度を増加させるよう改変されている、請求項５に記載の免疫原複合
    体。
  7. 【請求項７】 正電荷を有するタンパク質が自然状態で正電荷を有するタンパク質であり、そ
    の正電荷度を増加させるよう改変されている、請求項５に記載の免疫原複合体。
  8. 【請求項８】 負電荷を有するアジュバントが自然状態で負電荷を有するアジュバントであり
    、その負電荷度を増加させるよう改変されており、かつ、正電荷を有するタンパ
    ク質が自然状態で正電荷を有するタンパク質であり、その正電荷度を増加させる
    よう改変されている、請求項５に記載の免疫原複合体。
  9. 【請求項９】 アジュバントがサポニンを含んでなる、請求項５〜８のいずれか一項に記載の
    免疫原複合体。
  10. 【請求項１０】 アジュバントがサポニン複合体である、請求項５〜８のいずれか一項に記載の
    免疫原複合体。
  11. 【請求項１１】 サポニン複合体がＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）である、請求項１０に記載の
    免疫原複合体。
  12. 【請求項１２】 アジュバントがリン脂質を含んでなる、請求項５〜８のいずれか一項に記載の
    免疫原複合体。
  13. 【請求項１３】 リン脂質がホスホグリセリドである、請求項１２に記載の免疫原複合体。
  14. 【請求項１４】 ホスホグリセリドがホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロー
    ル、ホスファチジン酸およびカルジオリピンからなる群から選択される、請求項
    １３に記載の免疫原複合体。
  15. 【請求項１５】 リン脂質が脂質Ａである、請求項１２に記載の免疫原複合体。
  16. 【請求項１６】 脂質ＡがＯＭ１７４などのジホスホリル脂質Ａおよびモノホスホリル脂質Ａか
    らなる群から選択される、請求項１５に記載の免疫原複合体。
  17. 【請求項１７】 複合体が細胞傷害性Ｔリンパ球応答を誘導する請求項１〜１６のいずれか一項
    に記載の免疫原複合体。
  18. 【請求項１８】 １種以上の医薬上許容される担体および／または希釈剤とともに、有効成分と
    して荷電有機担体および荷電抗原を含んでなり、担体および抗原が静電気的に結
    合している、ワクチン組成物。
  19. 【請求項１９】 担体が負電荷を有し、かつ、抗原が正電荷を有する、請求項１８に記載のワク
    チン組成物。
  20. 【請求項２０】 抗原がタンパク質またはその誘導体もしくは同等物である、請求項１９に記載
    のワクチン組成物。
  21. 【請求項２１】 担体がアジュバントまたはその誘導体もしくは同等物である、請求項１９に記
    載のワクチン組成物。
  22. 【請求項２２】 抗原がタンパク質またはその誘導体もしくは同等物であり、かつ、担体がアジ
    ュバントまたはその誘導体もしくは同等物である、請求項１９に記載のワクチン
    組成物。
  23. 【請求項２３】 負電荷を有するアジュバントが自然状態で負電荷を有するアジュバントであり
    、その負電荷度を増加させるよう改変されている、請求項２２に記載のワクチン
    組成物。
  24. 【請求項２４】 正電荷を有するタンパク質が自然状態で正電荷を有するタンパク質であり、そ
    の正電荷度を増加させるよう改変されている、請求項２２に記載のワクチン組成
    物。
  25. 【請求項２５】 負電荷を有するアジュバントが自然状態で負電荷を有するアジュバントであり
    、その負電荷度を増加させるよう改変されており、かつ、正電荷を有するタンパ
    ク質が自然状態で正電荷を有するタンパク質であり、その正電荷度を増加させる
    よう改変されている、請求項２２に記載のワクチン組成物。
  26. 【請求項２６】 アジュバントがサポニンを含んでなる、請求項２２〜２５のいずれか一項に記
    載のワクチン組成物。
  27. 【請求項２７】 アジュバントがサポニン複合体である、請求項２２〜２５のいずれか一項に記
    載の免疫原複合体。
  28. 【請求項２８】 サポニン複合体がＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（商標）である、請求項２７に記載の
    ワクチン組成物。
  29. 【請求項２９】 アジュバントがリン脂質を含んでなる、請求項２２〜２５のいずれか一項に記
    載のワクチン組成物。
  30. 【請求項３０】 リン脂質がホスホグリセリドである、請求項２９に記載のワクチン組成物。
  31. 【請求項３１】 ホスホグリセリドがホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロー
    ル、ホスファチジン酸およびカルジオリピンからなる群から選択される、請求項
    ３０に記載のワクチン組成物。
  32. 【請求項３２】 リン脂質が脂質Ａである、請求項２９に記載のワクチン組成物。
  33. 【請求項３３】 脂質ＡがＯＭ１７４などのジホスホリル脂質Ａおよびモノホスホリル脂質Ａか
    らなる群から選択される、請求項３２に記載のワクチン組成物。
  34. 【請求項３４】 組成物が細胞傷害性Ｔリンパ球応答を誘導する、請求項１８〜３３のいずれか
    一項に記載のワクチン組成物。
  35. 【請求項３５】 哺乳類において抗原に対する免疫応答を誘発、誘導、または促進する方法であ
    って、哺乳類に有効量の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の免疫原複合体を
    投与することを含む方法。
  36. 【請求項３６】 哺乳類において抗原に対する免疫応答を誘発、誘導または促進する方法であっ
    て、哺乳類に有効量の請求項１８〜３４のいずれか一項に記載のワクチン組成物
    を投与することを含む方法。
  37. 【請求項３７】 免疫応答が細胞傷害性Ｔリンパ球応答を含む、請求項１７または３６に記載の
    方法。
  38. 【請求項３８】 哺乳類において病状を処置する方法であって、哺乳類に有効量の請求項１〜１
    ７のいずれか一項に記載の免疫原複合体を投与することを含み、複合体の投与が
    、病状の発症または進行を阻害、停止、遅延または防止する免疫応答を誘発、誘
    導または促進する、方法。
  39. 【請求項３９】 哺乳類において病状を処置する方法であって、哺乳類に有効量の請求項１８〜
    ３４のいずれか一項に記載のワクチン組成物を投与することを含み、組成物の投
    与が、病状の発症または進行を阻害、停止、遅延または防止する免疫応答を誘発
    、誘導または促進する、方法。
  40. 【請求項４０】 免疫応答が細胞傷害性Ｔリンパ球応答を含む、請求項３８または３９に記載の
    方法。
  41. 【請求項４１】 処置が治療的または予防的なものである、請求項３８〜４１のいずれか一項に
    記載の方法。
  42. 【請求項４２】 病状が微生物感染または癌に起因する、請求項３８〜４１のいずれか一項に記
    載の方法。
  43. 【請求項４３】 微生物感染がＨＩＶ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、結核または寄生虫による症状であ
    り、また癌が黒色腫、前立腺癌または乳癌である、請求項４３に記載の方法。
  44. 【請求項４４】 病状の発症または進行を阻害、停止、遅延または防止するための医薬の製造に
    おける、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の免疫原複合体の使用。
  45. 【請求項４５】 病状の発症または進行を阻害、停止、遅延または防止するための医薬の製造に
    おける、請求項１８〜３４のいずれか一項に記載のワクチン組成物の使用。
  46. 【請求項４６】 病状が微生物感染または癌に起因する、請求項４４または４５に記載の使用。
  47. 【請求項４７】 微生物感染がＨＩＶ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、結核または寄生虫感染であり、ま
    た癌が黒色腫、前立腺癌または乳癌である、請求項４６に記載の使用。
  48. 【請求項４８】 病状の発症または進行の阻害、停止、遅延または防止に用いる薬剤であって、
    請求項１〜１７のいずれか一項に記載の免疫原複合体を含んでなる薬剤。
  49. 【請求項４９】 病状の発症または進行の阻害、停止、遅延または防止に用いる薬剤であって、
    請求項１８〜３４のいずれか一項に記載のワクチン組成物を含んでなる薬剤。
  50. 【請求項５０】 病状が微生物感染または癌に起因する、請求項４８または４９に記載の薬剤。
  51. 【請求項５１】 微生物感染がＨＩＶ、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、結核または寄生虫感染であり、ま
    た癌が黒色腫、前立腺癌または乳癌である、請求項５０に記載の薬剤。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014065229A1 (ja) * 2012-10-22 2014-05-01 国立大学法人大阪大学 アジュバント及びそれを含むワクチン

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7776343B1 (en) * 1999-02-17 2010-08-17 Csl Limited Immunogenic complexes and methods relating thereto
DE60039715D1 (de) * 1999-11-19 2008-09-11 Csl Ltd Hcv-impfstoff zusammensetzungen
GB0008877D0 (en) * 2000-04-12 2000-05-31 Astrazeneca Ab Polypeptide delivery system
GB0008879D0 (en) * 2000-04-12 2000-05-31 Astrazeneca Ab Polypeptide delivery system
US7713942B2 (en) 2001-04-04 2010-05-11 Nordic Vaccine Technology A/S Cage-like microparticle complexes comprising sterols and saponins for delivery of polynucleotides
AU2002357359B2 (en) * 2001-12-21 2009-01-08 Csl Limited Compositions comprising immunoreactive reagents and saponins, and methods of use thereof
JP2008506789A (ja) * 2004-07-18 2008-03-06 シーエスエル、リミテッド インターフェロン−ガンマ応答強化を誘発するための免疫刺激複合体及びオリゴヌクレオチド処方物
CN101151280A (zh) * 2005-02-08 2008-03-26 昆士兰医学研究学院委员会 免疫原性分子
NZ583377A (en) * 2007-10-12 2013-11-29 Csl Ltd Method of eliciting an immune response against pandemic influenza virus
KR101413844B1 (ko) 2008-12-09 2014-06-30 화이자 백신스 엘엘씨 ＩｇＥ ＣＨ３ 펩티드 백신
WO2010125480A1 (en) 2009-04-30 2010-11-04 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Pneumococcal vaccine and uses thereof
EP2459214A1 (en) 2009-07-30 2012-06-06 Pfizer Vaccines LLC Antigenic tau peptides and uses thereof
HUE037416T2 (hu) 2009-09-03 2018-08-28 Pfizer Vaccines Llc PCSK9 vakcina
AU2010334428B2 (en) 2009-12-22 2015-05-21 Celldex Therapeutics, Inc. Vaccine compositions
EP2576613A1 (en) 2010-06-07 2013-04-10 Pfizer Inc. Her-2 peptides and vaccines
WO2011154878A1 (en) 2010-06-07 2011-12-15 Pfizer Vaccines Llc Ige ch3 peptide vaccine
WO2012131504A1 (en) 2011-03-02 2012-10-04 Pfizer Inc. Pcsk9 vaccine
AU2012298877B2 (en) 2011-08-22 2018-01-04 Emergent Biosolutions Canada Inc. Clostridium difficile antibodies
KR101951365B1 (ko) 2012-02-08 2019-04-26 삼성디스플레이 주식회사 액정 표시 장치
EP2659906A1 (en) 2012-05-01 2013-11-06 Affiris AG Compositions
EP2659908A1 (en) 2012-05-01 2013-11-06 Affiris AG Compositions
EP2659907A1 (en) 2012-05-01 2013-11-06 Affiris AG Compositions
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
PE20161095A1 (es) 2014-01-21 2016-10-26 Pfizer Composiciones inmunogenicas que comprenden antigenos de sacaridos capsulares conjugados y uso de los mismos
WO2015123291A1 (en) 2014-02-11 2015-08-20 The Usa, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Pcsk9 vaccine and methods of using the same
US20170065702A1 (en) 2014-02-19 2017-03-09 Cangene Corporation Methods of modulating an immune response
TWI695013B (zh) 2014-04-10 2020-06-01 台灣浩鼎生技股份有限公司 抗體、產生該抗體之融合瘤、包含該抗體之藥學組成物及其用途
PL3244917T3 (pl) 2015-01-15 2023-07-17 Pfizer Inc. Kompozycje immunogenne do zastosowania w szczepionkach przeciwko pneumokokom
CA2986494A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 Affiris Ag Il-23-p19 vaccines
AU2016289497A1 (en) 2015-07-07 2017-12-07 Affiris Ag Vaccines for the treatment and prevention of IgE mediated diseases
RU2721128C2 (ru) 2015-07-21 2020-05-18 Пфайзер Инк. Иммуногенные композиции, содержащие конъюгированные антигены капсульного сахарида, наборы, содержащие эти композиции, и их применения
EP3344291A4 (en) 2015-09-03 2019-04-10 Novavax, Inc. VACCINE COMPOSITIONS WITH IMPROVED STABILITY AND IMMUNOGENICITY
EP3906943A1 (en) 2015-09-04 2021-11-10 Primatope Therapeutics Inc. Humanized anti-cd40 antibodies and uses thereof
CN108350605A (zh) 2015-09-04 2018-07-31 台湾浩鼎生技股份有限公司 聚糖阵列以及使用方法
CA3005524C (en) 2015-11-20 2023-10-10 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
US10980894B2 (en) 2016-03-29 2021-04-20 Obi Pharma, Inc. Antibodies, pharmaceutical compositions and methods
CN109311995A (zh) 2016-03-29 2019-02-05 台湾浩鼎生技股份有限公司 抗体、药物组合物和方法
AU2017252128B2 (en) 2016-04-22 2024-06-06 Obi Pharma, Inc. Cancer immunotherapy by immune activation or immune modulation via Globo series antigens
JP2019527690A (ja) 2016-07-27 2019-10-03 オービーアイ ファーマ，インコーポレイテッド 免疫原性／治療用グリカン組成物およびその使用
EP3491026A4 (en) 2016-07-29 2020-07-29 OBI Pharma, Inc. HUMAN ANTIBODIES, PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND METHODS
JP2019535731A (ja) 2016-11-21 2019-12-12 オービーアイ ファーマ，インコーポレイテッド コンジュゲートさせた生物学的分子、医薬組成物及び方法
KR102459629B1 (ko) 2017-01-20 2022-10-28 화이자 인코포레이티드 폐렴구균 백신에 사용하기 위한 면역원성 조성물
JP7317796B2 (ja) 2017-07-24 2023-07-31 ノババックス，インコーポレイテッド 呼吸器疾患を治療するための方法および組成物
US11633471B2 (en) 2018-03-06 2023-04-25 Unm Rainforest Innovations Compositions and methods for reducing serum triglycerides
WO2020006176A1 (en) 2018-06-27 2020-01-02 Obi Pharma, Inc. Glycosynthase variants for glycoprotein engineering and methods of use
US11260119B2 (en) 2018-08-24 2022-03-01 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
JP2022512345A (ja) 2018-12-12 2022-02-03 ファイザー・インク 免疫原性多重ヘテロ抗原多糖－タンパク質コンジュゲートおよびその使用
EP3952906A1 (en) 2019-04-10 2022-02-16 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof
IL292494A (en) 2019-11-01 2022-06-01 Pfizer Preparations of Escherichia coli and their methods
US10953089B1 (en) 2020-01-27 2021-03-23 Novavax, Inc. Coronavirus vaccine formulations
AU2021223184A1 (en) 2020-02-23 2022-08-18 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
PE20231934A1 (es) 2020-10-27 2023-12-01 Pfizer Composiciones de escherichia coli y metodos de las mismas
CN116744965A (zh) 2020-11-04 2023-09-12 辉瑞大药厂 用于肺炎球菌疫苗的免疫原性组合物
US20220202923A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Pfizer Inc. E. coli fimh mutants and uses thereof
WO2022147373A1 (en) 2020-12-31 2022-07-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibody-guided pcsk9-mimicking immunogens lacking 9-residue sequence overlap with human proteins
US11786592B2 (en) * 2021-05-19 2023-10-17 The University Of Hong Kong Compositions of cardiolipin adjuvants and methods of use thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990001947A1 (en) * 1988-08-25 1990-03-08 The Liposome Company, Inc. Affinity associated vaccine
WO1997028809A1 (en) * 1996-02-07 1997-08-14 Novavax, Inc. Adjuvant properties of poly(amidoamine) dendrimers
WO1997030721A1 (de) * 1996-02-24 1997-08-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmazeutische zusammensetzung für die immunmodulation beruhend auf peptiden und adjuvantien
WO1998022135A1 (en) * 1996-11-22 1998-05-28 Astra Aktiebolag Pharmaceutical lipid aggregate with helicobacter pylori antigen and negatively charged lipid

Family Cites Families (156)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
JP2547714B2 (ja) 1981-10-23 1996-10-23 モルキユラ− バイオシステムズ インコ−ポレテツド オリゴヌクレオチド治療剤及びその製法
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US5897873A (en) * 1984-04-12 1999-04-27 The Liposome Company, Inc. Affinity associated vaccine
SE8405493D0 (sv) * 1984-11-01 1984-11-01 Bror Morein Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel
DE3775783D1 (de) 1986-01-14 1992-02-20 Nederlanden Staat Verfahren zur herstellung immunologischer komplexe und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzung.
US5583112A (en) 1987-05-29 1996-12-10 Cambridge Biotech Corporation Saponin-antigen conjugates and the use thereof
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
DE68920016T2 (de) 1988-05-17 1995-04-20 Soldano Ferrone Anti-idiotyp-antikörper gegen antimenschliche hochmolekulare, an melanomen assoziierte antigene.
NZ230747A (en) 1988-09-30 1992-05-26 Bror Morein Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina
US5190870A (en) * 1989-05-16 1993-03-02 Amoco Corporation Method for oxidizing hydrocarbons with a hydroxylase from a methane monooxygenase
US5178880A (en) * 1989-07-25 1993-01-12 Norwich Eaton Pharmaceuticals, Inc. Liquid suspensions of nitrofurantoin
US4981684A (en) 1989-10-24 1991-01-01 Coopers Animal Health Limited Formation of adjuvant complexes
US5178860A (en) 1989-09-01 1993-01-12 Coopers Animal Health Limited Adjuvant complexes and vaccine made therefrom
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
EP0468520A3 (en) 1990-07-27 1992-07-01 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences
JP3507486B2 (ja) 1991-03-15 2004-03-15 アムジエン・インコーポレーテツド 顆粒球コロニー刺激因子の肺内投与
US5273965A (en) 1992-07-02 1993-12-28 Cambridge Biotech Corporation Methods for enhancing drug delivery with modified saponins
US5650398A (en) 1992-07-02 1997-07-22 Cambridge Biotech Corporation Drug delivery enhancement via modified saponins
US5443534A (en) 1992-07-21 1995-08-22 Vlt Corporation Providing electronic components for circuity assembly
JPH08502416A (ja) 1992-10-30 1996-03-19 シード・キャピタル・インベストメント・（エス・シー・アイ）・ベスローテン・フェンノートシャップ キラヤ種の培養細胞
AU695259B2 (en) 1993-05-05 1998-08-13 Common Services Agency Hepatitis-C virus type 4, 5 and 6
DE4321946A1 (de) 1993-07-01 1995-01-12 Hoechst Ag Methylphosphonsäureester, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
US5859231A (en) 1993-09-03 1999-01-12 Duke University Synthesis of oligonucleotides with boranophosphonate linkages
WO1995009179A1 (en) 1993-09-30 1995-04-06 Seed Capital Investments (Sci) B.V. Compounds with adjuvant activity
PL181241B1 (pl) 1993-11-17 2001-06-29 Deutsche Om Arzneimittel Gmbh Disacharydy beta(1 6)glukozoaminowe, sposób wytwarzania disacharydu beta(1 6) glukozoaminowego, zawierająca je kompozycja farmaceutyczna i środek immunomodulujący i/lub przeciwnowotworowy oraz szczepionka
US6727230B1 (en) 1994-03-25 2004-04-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US5451569A (en) 1994-04-19 1995-09-19 Hong Kong University Of Science And Technology R & D Corporation Limited Pulmonary drug delivery system
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US7935675B1 (en) 1994-07-15 2011-05-03 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
CA2194761C (en) 1994-07-15 2006-12-19 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
US20030050263A1 (en) 1994-07-15 2003-03-13 The University Of Iowa Research Foundation Methods and products for treating HIV infection
US6429199B1 (en) 1994-07-15 2002-08-06 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells
US20030026782A1 (en) 1995-02-07 2003-02-06 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
US5612030A (en) 1995-01-17 1997-03-18 University Of Kentucky Research Foundation Anti-idiotype monoclonal antibody 1A7 and use for the treatment of melanoma and small cell carcinoma
UA56132C2 (uk) * 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US6190870B1 (en) 1995-08-28 2001-02-20 Amcell Corporation Efficient enrichment and detection of disseminated tumor cells
US6160109A (en) 1995-10-20 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Preparation of phosphorothioate and boranophosphate oligomers
US5780448A (en) 1995-11-07 1998-07-14 Ottawa Civic Hospital Loeb Research DNA-based vaccination of fish
SE9600648D0 (sv) 1996-02-21 1996-02-21 Bror Morein Receptorbimdande enhet
US6251603B1 (en) 1996-10-03 2001-06-26 Ludwig Institute For Cancer Research Method for determining status of a cancerous condition by determining antibodies to NY-ESO-1 in a patient sample
DE69733020T2 (de) 1996-10-11 2006-02-16 The Regents Of The University Of California, Oakland Immunostimulierende oligonucleotidekonjugate
US6231859B1 (en) 1996-12-02 2001-05-15 Aquila Biopharmaceuticals, Inc. Saponin adjuvant compositions
EP0855184A1 (en) 1997-01-23 1998-07-29 Grayson B. Dr. Lipford Pharmaceutical composition comprising a polynucleotide and an antigen especially for vaccination
AUPO517897A0 (en) * 1997-02-19 1997-04-11 Csl Limited Chelating immunostimulating complexes
US6214806B1 (en) 1997-02-28 2001-04-10 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CPC dinucleotide in the treatment of LPS-associated disorders
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
US6835395B1 (en) 1997-05-14 2004-12-28 The University Of British Columbia Composition containing small multilamellar oligodeoxynucleotide-containing lipid vesicles
AU739107B2 (en) * 1997-05-16 2001-10-04 Toray Industries, Inc. An immune disease remedy, treatment method and preventive agent and method for dogs and cats
WO1998052581A1 (en) 1997-05-20 1998-11-26 Ottawa Civic Hospital Loeb Research Institute Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols
PT996451E (pt) 1997-05-20 2005-04-29 Galenica Pharmaceuticals Inc Analogos de saponina triterpenica com actividade adjuvante e imunoestimulante
US6080725A (en) 1997-05-20 2000-06-27 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof
US6221882B1 (en) 1997-07-03 2001-04-24 University Of Iowa Research Foundation Methods for inhibiting immunostimulatory DNA associated responses
US6355244B1 (en) 1997-11-17 2002-03-12 University Of Kentucky Research Foundation Methods and compositions for the treatment of psoriasis
US20050031638A1 (en) 1997-12-24 2005-02-10 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine
JP2002510644A (ja) 1998-04-03 2002-04-09 ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション 免疫治療用オリゴヌクレオチドおよびサイトカインを用いる免疫系刺激のための方法および産物
AU3884199A (en) 1998-05-06 1999-11-23 Ottawa Health Research Institute Methods for the prevention and treatment of parasitic infections and related diseases using cpg oligonucleotides
AU760795B2 (en) 1998-05-14 2003-05-22 Coley Pharmaceutical Gmbh Methods for regulating hematopoiesis using CpG-oligonucleotides
RU2244547C2 (ru) 1998-05-19 2005-01-20 Рисерч Дивелопмент Фаундейшн Тритерпеновые композиции и способы их применения
ES2628744T3 (es) 1998-05-22 2017-08-03 Ottawa Hospital Research Institute Métodos y productos para inducir inmunidad en mucosas
EP1022795B1 (en) * 1998-06-16 2015-04-22 Watanabe, Masahiro Catalyst for polymer solid electrolyte type fuel-cell and method for producing catalyst for polymer solid electrolyte type fuel-cell
US20040247662A1 (en) 1998-06-25 2004-12-09 Dow Steven W. Systemic immune activation method using nucleic acid-lipid complexes
CA2333854A1 (en) 1998-07-27 2000-02-10 University Of Iowa Research Foundation Stereoisomers of cpg oligonucleotides and related methods
ES2257068T3 (es) 1998-08-10 2006-07-16 Antigenics Inc. Mezclas de adyuvantes de cpg y saponinas y metodos de empleo de las mismas.
CA2341338A1 (en) 1998-09-03 2000-03-16 Coley Pharmaceutical Gmbh G-motif oligonucleotides and uses thereof
US20020065236A1 (en) 1998-09-09 2002-05-30 Yew Nelson S. CpG reduced plasmids and viral vectors
FR2783170B1 (fr) 1998-09-11 2004-07-16 Pasteur Merieux Serums Vacc Emulsion immunostimulante
AUPP807399A0 (en) 1999-01-08 1999-02-04 Csl Limited Improved immunogenic lhrh composition and methods relating thereto
US7776343B1 (en) * 1999-02-17 2010-08-17 Csl Limited Immunogenic complexes and methods relating thereto
WO2000054803A2 (en) 1999-03-16 2000-09-21 Panacea Pharmaceuticals, Llc Immunostimulatory nucleic acids and antigens
FR2790955B1 (fr) 1999-03-19 2003-01-17 Assist Publ Hopitaux De Paris Utilisation d'oligonucleotides stabilises comme principe actif antitumoral
DE60014076T2 (de) 1999-04-19 2005-10-13 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Adjuvans-zusammensetzung, enthaltend saponin und ein immunstimulatorisches oligonukleotid
US6558670B1 (en) 1999-04-19 2003-05-06 Smithkline Beechman Biologicals S.A. Vaccine adjuvants
EP1176978A2 (en) 1999-05-06 2002-02-06 The Immune Response Corporation Hiv immunogenic compositions and methods
UA81216C2 (en) 1999-06-01 2007-12-25 Prevention and treatment of amyloid disease
CA2376634A1 (en) 1999-06-08 2000-12-14 Aventis Pasteur Immunostimulant oligonucleotide
WO2000076982A1 (en) 1999-06-16 2000-12-21 University Of Iowa Research Foundation Antagonism of immunostimulatory cpg-oligonucleotides by 4-aminoquinolines and other weak bases
US7496632B2 (en) * 1999-06-28 2009-02-24 Lockheed Martin Corporation Method and system for distributing a public information release authorization (PIRA) form over an intranet
US6299622B1 (en) * 1999-08-19 2001-10-09 Fox Hollow Technologies, Inc. Atherectomy catheter with aligned imager
AU7085400A (en) 1999-09-02 2001-03-26 Antigenics, Inc. Compositions of immunostimulatory polymers and saponin adjuvants and uses thereof
MXPA02003108A (es) 1999-09-25 2003-10-14 Univ Iowa Res Found Acidos nucleicos inmunoestimuladores.
US6949520B1 (en) 1999-09-27 2005-09-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
ES2265980T5 (es) 1999-09-27 2010-12-28 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Metodos relacionados con interferón inducido por ácidos nucleicos inmunoestimuladores.
US7223398B1 (en) 1999-11-15 2007-05-29 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof
JP4659937B2 (ja) 1999-11-19 2011-03-30 ナノキャリア株式会社 コア−シェル構造のポリイオンコンプレックスミセル
DE60039715D1 (de) * 1999-11-19 2008-09-11 Csl Ltd Hcv-impfstoff zusammensetzungen
WO2001045750A1 (en) 1999-12-21 2001-06-28 The Regents Of The University Of California Method for preventing an anaphylactic reaction
AU781812B2 (en) 2000-01-13 2005-06-16 Antigenics, Inc. Innate immunity-stimulating compositions of CPG and saponin and methods thereof
AU3108001A (en) 2000-01-20 2001-12-24 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response
US7585847B2 (en) 2000-02-03 2009-09-08 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of asthma and allergy
FR2805265B1 (fr) 2000-02-18 2002-04-12 Aventis Pasteur Oligonucleotides immunostimulants
US20020156033A1 (en) 2000-03-03 2002-10-24 Bratzler Robert L. Immunostimulatory nucleic acids and cancer medicament combination therapy for the treatment of cancer
US20040131628A1 (en) 2000-03-08 2004-07-08 Bratzler Robert L. Nucleic acids for the treatment of disorders associated with microorganisms
US6339630B1 (en) * 2000-05-18 2002-01-15 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Sealed drive screw operator
KR101155294B1 (ko) 2000-06-16 2013-03-07 캠브리지 안티바디 테크놀로지 리미티드 면역특이적으로 ＢＬｙＳ에 결합하는 항체
CA2410371C (en) 2000-06-22 2015-11-17 University Of Iowa Research Foundation Methods for enhancing antibody-induced cell lysis and treating cancer
US20020091097A1 (en) 2000-09-07 2002-07-11 Bratzler Robert L. Nucleic acids for the prevention and treatment of sexually transmitted diseases
JP2005500806A (ja) 2000-09-15 2005-01-13 コーリー ファーマシューティカル ゲーエムベーハー ＣｐＧに基づく免疫アゴニスト／免疫アンタゴニストの高スループットスクリーニングのためのプロセス
FR2814958B1 (fr) 2000-10-06 2003-03-07 Aventis Pasteur Composition vaccinale
IL155282A0 (en) 2000-10-18 2003-11-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
GB0025577D0 (en) 2000-10-18 2000-12-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
ES2307568T3 (es) 2000-12-08 2008-12-01 Coley Pharmaceutical Gmbh Acidos nucleicos de tipo cpg y metodos de uso de los mismos.
US20030050268A1 (en) 2001-03-29 2003-03-13 Krieg Arthur M. Immunostimulatory nucleic acid for treatment of non-allergic inflammatory diseases
US7713942B2 (en) 2001-04-04 2010-05-11 Nordic Vaccine Technology A/S Cage-like microparticle complexes comprising sterols and saponins for delivery of polynucleotides
US7581103B2 (en) * 2001-06-13 2009-08-25 Intertrust Technologies Corporation Software self-checking systems and methods
AU2002318944A1 (en) 2001-08-01 2003-02-17 Coley Pharmaceutical Gmbh Methods and compositions relating to plasmacytoid dendritic cells
CA2838062C (en) 2001-08-03 2015-12-22 Roche Glycart Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
NZ552377A (en) 2001-08-17 2008-08-29 Coley Pharm Gmbh Combination motif immune stimulatory oligonucleotides with improved activity
JP2005519990A (ja) 2001-10-12 2005-07-07 ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション イミダゾキノリン化合物を用いて免疫応答を増強するための方法および産物
FR2830940B1 (fr) 2001-10-17 2007-06-15 Commissariat Energie Atomique Procede de selection de ligands d'hla-dp4 et ses applications
US6639814B2 (en) 2001-12-03 2003-10-28 Delta Electronics, Inc. Constant voltage reset circuit for forward converter
AU2002357359B2 (en) 2001-12-21 2009-01-08 Csl Limited Compositions comprising immunoreactive reagents and saponins, and methods of use thereof
ES2543710T3 (es) 2002-04-04 2015-08-21 Zoetis Belgium S.A. Oligorribonucleótidos inmunoestimulantes que contienen G y U
WO2003103586A2 (en) 2002-06-05 2003-12-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Method for treating autoimmune or inflammatory diseases with combinations of inhibitory oligonucleotides and small molecule antagonists of immunostimulatory cpg nucleic acids
US7576066B2 (en) 2002-07-03 2009-08-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7605138B2 (en) 2002-07-03 2009-10-20 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US20040053880A1 (en) 2002-07-03 2004-03-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7569553B2 (en) 2002-07-03 2009-08-04 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7807803B2 (en) 2002-07-03 2010-10-05 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
AU2003255969A1 (en) 2002-07-17 2004-02-02 Coley Pharmaceutical Gmbh Use of cpg nucleic acids in prion-disease
AR040996A1 (es) 2002-08-19 2005-04-27 Coley Pharm Group Inc Acidos nucleicos inmunoestimuladores
AU2003278845A1 (en) 2002-09-19 2004-04-08 Coley Pharmaceutical Gmbh Toll-like receptor 9 (tlr9) from various mammalian species
CA2505611A1 (en) 2002-10-25 2004-05-13 Chiron Corporation Activation of hcv-specific cells
ES2381224T3 (es) 2002-10-29 2012-05-24 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Uso de oligonucleótidos CPG en el tratamiento de infección por el virus de la hepatitis C
JP2006512927A (ja) 2002-12-11 2006-04-20 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド ５’ｃｐｇ核酸およびその使用方法
JP3931139B2 (ja) * 2002-12-27 2007-06-13 興和株式会社 眼科撮影装置
CA2521050A1 (en) 2003-04-02 2004-10-14 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations and related methods of use
EP1631687A2 (en) 2003-04-22 2006-03-08 Coley Pharmaceutical GmbH Methods and products for identification and assessment of tlr ligands
WO2004100155A1 (en) * 2003-05-09 2004-11-18 Lg Electronics Inc. Recording medium having data structure for managing at least a data area of the recording medium and recording and reproducing methods and apparatuses
WO2005002621A2 (en) 2003-06-17 2005-01-13 Mannkind Corporation Methods to elicit, enhance and sustain immune responses against mhc class i-restricted epitopes, for prophylactic or therapeutic purposes
JP2007524615A (ja) 2003-06-20 2007-08-30 コーリー ファーマシューティカル ゲーエムベーハー 低分子トール様レセプター（ｔｌｒ）アンタゴニスト
PL1648502T3 (pl) 2003-07-11 2011-05-31 Intercell Ag Szczepionki przeciwko HCV
US20050013812A1 (en) 2003-07-14 2005-01-20 Dow Steven W. Vaccines using pattern recognition receptor-ligand:lipid complexes
US20050017047A1 (en) * 2003-07-22 2005-01-27 Bentley Fastening Tools Co., Ltd. Nail-guiding grooves of the nail cartridge of a nailing gun
EP1660119A2 (en) 2003-09-05 2006-05-31 Sanofi Pasteur Limited Multi-antigen vectors for melanoma
CA2536139A1 (en) 2003-09-25 2005-04-07 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid-lipophilic conjugates
WO2005033278A2 (en) 2003-09-30 2005-04-14 Ludwig Institute For Cancer Research In vivo efficacy of ny-eso-1 plus iscom
US20050215501A1 (en) 2003-10-24 2005-09-29 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods and products for enhancing epitope spreading
UA88457C2 (ru) 2003-10-30 2009-10-26 Коли Фармасьютикал Гмбх Иммуностимулирующая нуклеиновая кислота с улучшенной иммуностимулирующей эффективностью
US20050239733A1 (en) 2003-10-31 2005-10-27 Coley Pharmaceutical Gmbh Sequence requirements for inhibitory oligonucleotides
US20050100983A1 (en) 2003-11-06 2005-05-12 Coley Pharmaceutical Gmbh Cell-free methods for identifying compounds that affect toll-like receptor 9 (TLR9) signaling
US20050181035A1 (en) 2004-02-17 2005-08-18 Dow Steven W. Systemic immune activation method using non CpG nucleic acids
WO2005097993A2 (en) 2004-02-19 2005-10-20 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory viral rna oligonucleotides
US20050222072A1 (en) 2004-02-20 2005-10-06 Hybridon, Inc. Potent mucosal immune response induced by modified immunomodulatory oligonucleotides
AU2005243250A1 (en) 2004-04-02 2005-11-24 Coley Pharmaceutical Gmbh Immunostimulatory nucleic acids for inducing IL-10 responses
JP2008506789A (ja) 2004-07-18 2008-03-06 シーエスエル、リミテッド インターフェロン−ガンマ応答強化を誘発するための免疫刺激複合体及びオリゴヌクレオチド処方物
EP1776105A2 (en) 2004-07-18 2007-04-25 Coley Pharmaceutical Group, Ltd Methods and compositions for inducing innate immune responses
US20070190072A1 (en) 2004-09-30 2007-08-16 Csl Limited Ludwig Institute For Cancer Research In vivo efficacy of ny-eso-1 plus adjuvant
MY159370A (en) 2004-10-20 2016-12-30 Coley Pharm Group Inc Semi-soft-class immunostimulatory oligonucleotides
US20080009455A9 (en) 2005-02-24 2008-01-10 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory oligonucleotides
JP2008535859A (ja) 2005-04-08 2008-09-04 コーリー ファーマシューティカル グループ，インコーポレイテッド 感染症によって悪化した喘息を治療するための方法
CA2609788A1 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Coley Pharmaceutical Gmbh Modified oligoribonucleotide analogs with enhanced immunostimulatory activity

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990001947A1 (en) * 1988-08-25 1990-03-08 The Liposome Company, Inc. Affinity associated vaccine
WO1997028809A1 (en) * 1996-02-07 1997-08-14 Novavax, Inc. Adjuvant properties of poly(amidoamine) dendrimers
WO1997030721A1 (de) * 1996-02-24 1997-08-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmazeutische zusammensetzung für die immunmodulation beruhend auf peptiden und adjuvantien
WO1998022135A1 (en) * 1996-11-22 1998-05-28 Astra Aktiebolag Pharmaceutical lipid aggregate with helicobacter pylori antigen and negatively charged lipid

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014065229A1 (ja) * 2012-10-22 2014-05-01 国立大学法人大阪大学 アジュバント及びそれを含むワクチン
JPWO2014065229A1 (ja) * 2012-10-22 2016-09-08 国立大学法人 奈良先端科学技術大学院大学 アジュバント及びそれを含むワクチン

Also Published As

Publication number Publication date
EP1150710A1 (en) 2001-11-07
HK1039895B (zh) 2010-12-03
JP5084984B2 (ja) 2012-11-28
CA2362204C (en) 2011-11-08
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