JP2002532099A - ３，５−ジオキソカルボン酸、その塩およびそのエステルのｒ−選択還元法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 本発明は３，５−ジオキソカルボン酸誘導体のエナンチオ選択還元法およびそれの合成に関する。本発明によれば式（４）の化合物が特にラクトバシラス・ブレビス(Lactobacillus brevis)から由来しているアルコール脱水素酵素およびエシェリキア・コリ(Eschericjia coil)中で組替え体過剰発現しているアルコール脱水素酵素を用いてＮＡＤＰＨの存在下で反応させる。５位のケト基がこの反応の間にエナンチオ選択的に還元される。３位のケト基は化学または酵素による反応によって別の段階で特にｓｙｎ−またはａｎｔｉ−還元することができる。 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】

本発明は、３，５−ジオキソカルボン酸、その塩およびそのエステルをエナン
チオ選択還元する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】

式１

【０００３】

【化４】

【０００４】 ［式中、Ｘは水素原子、ハロゲン原子、アルキル、アリール、ＣＨ＝ＣＨＲ² 、 Ｃ≡ＣＲ³ よりなる群から選択される基であり、ただしＲ² は金属カチオン以 外のＲでありそしてＲ³ はＲであり； Σは水素、またはヒドロキシル基のための保護基であり； ＲはＨ、金属カチオン、アルキル、アリール、アルアルキルまたはシクロアル キル基である。］ で表されるホモキラルな３，５−ジヒドロキシカルボン酸誘導体は多くの天然物
質および有効物質を合成する際の中間体である。

【０００５】 立体中心のＣ−３およびＣ−５の絶対配置次第で、これらはキラルな天然物質
、例えばメビック酸（mevic acids)またはシンテニックＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵
素抑制剤の合成の際に組織的に使用することができる。

【０００６】 他の天然物質および有効物質はＣ−３およびＣ−５の位置に別の立体中心配置
を必要とする。それ故に式１に従う３，５−ジヒドロキシカルボン酸誘導体のあ
らゆる可能な立体異性体を光学的に純粋な状態で製造できることに大きな興味が
もたれる。これらの化合物を製造する有利な方法は式２

【０００７】

【化５】

【０００８】 に従うプロキラルな３，５−ジオキソカルボン酸誘導体を接触的にエナンチオ選
択的に還元するものである。

【０００９】 この方法を使用する場合、ラセミ体、スカレマート（scalemate)またはジアス
テレオマーのための、多大な費用が掛かりかつ衛生上厄介な分離操作が必要ない
。このことでジアステレオ選択合成に必要な化学量論量のホモキラルな補助基の
結合および開裂が避けられる。更に式１に従う３，５−ジヒドロキシカルボン酸
エステルの炭素骨格が式２に従う出発化合物において既に完成している。即ち、
立体中心が遅れた時点でだけ全体の合成順序中に導入され、その結果としてホモ
キラルな物質の損失が少なく維持される。

【００１０】 ヨーロッパ特許出願公開（Ａ２）第５６９，９９８号明細書には、６位でオキ
シアルキル置換されおよびオキシアルアルキル置換されジケトエステルを還元す
るエナンチオ選択的な微生物的方法が開示されている。

【００１１】 国際特許出願公開（ＷＯ）９７／００９６８号明細書には、ボーベリア(Beauv
eria) 、カンジダ(Candida) 、クルイベロマイシス(Kluyveromycis) 、トルラス
ポラ(Torulaspora) またはピヒア(Pichia)の還元酵素によって３−オキソ−５−
ヒドロキシカルボン酸エステルを還元する方法が開示されている。

【００１２】 ドイツ特許出願公開（Ａ1 ）第１９，６１０，９８４号明細書にはアルコール
−デヒドロゲナーゼ( 脱水素酵素) 活性を持つ安定な微生物酵素、それを得る方
法並びにそれを有機性ケト化合物／ヒドロキシ化合物のエナンチオ選択還元／酸
化に使用すること、その還元／酸化の際に出発化合物次第でＲ−またはＳ−ヒド
ロキシ化合物が得られることが開示されている。

【００１３】 Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９３）、１５（１２）
、１０１４−２１以降の“３，５−ジオキソ−６−（ベンジルオキシル）ヘキサ
ン酸エチルエステルのエナンチオ選択的な微生物的還元反応（Enantioselective
microbial reduction of 3,5-dioxo-6-(benzyloxyl)hexanoic acid ethyl este
r)" なる名称の刊行物には、還元酵素によって３，５−ジオキソ−６−（ベンジ
ルオキシ）ヘキサン酸エチルエステルの還元反応を示している。

【００１４】 専門用語であるという理由から、ここでは、開示される範囲内で有効であると
認められる作業概念としてとして導入する：

【００１５】

【化６】

【００１６】 式３中、ＯＨ基は５位で紙平面から突き出ており、一方カルボン酸基あるいは
エステル基並びに残基Ｘを有する鎖は紙平面内にある。Ｃ−５の水素原子は紙平
面の後方にある。ＣＩＰ（ＲＳ）命名法によれば，Ｘで置換されている鎖の優位
さ次第で紙平面から前方に突き出すＯＨ基の同じ空間的配置についてＲ−または
Ｓ−表示法が使用される。本発明で規定される通り、ｒ−配置表示をＯＨ基が５
位で紙平面から前方に突き出ており、水素原子が５位で紙平面の後ろに伸びてお
りそしてカルボン酸基またはエステル基を有する側鎖が５番目の炭素原子の右手
側にありそして置換基Ｘを有する側鎖が５番目の炭素原子の左手側にある置換基
配置について使用する。カルボン酸基またはエステル基を有する右手側鎖が置換
基Ｘのある左手側鎖よりも高い優位さを有する場合には、これはＲ配置分類に相
当する。上記の鎖の優位さが（例えばＸ＝ハロゲンを選択することによって）逆
転される場合には、ターゲット化合物はＳ配置分類とされる。しかしながら両方
ともｒ−配置の規定に包含されるべきである。

【００１７】

【発明が解決しようとする課題】

本発明の課題は、３，５−ジオキソカルボン酸誘導体を酵素で還元する間に５
−位に水酸基のｒ−配置をレジオ選択的に導入することである。

【００１８】 本発明の別の課題は、エナンチオマー的に純粋な３，５−ジヒドロキシカルボ
ン酸誘導体を製造する新規の方法を提供することである。即ち、ケト基のｓｙｎ
−またはａｎｔｉ−還元が５位に対して３位で組織的に生じ、その結果３，５−
ジヒドロキシカルボン酸誘導体が所望の通りに製造できるＣ−３に関して要求に
合った絶対配置を有する。

【００１９】 加えて、本発明の課題は酵素的還元のための原料として使用できる式４に従う
３，５−ジオキソカルボン酸エステルを合成する改善された方法を提供すること
である。

【００２０】

【課題を解決するための手段】 請求項１の上位概念から出発して請求項１の特徴部分に記載の要件によって本
発明に従って解決される。

【００２１】 今や、本発明の方法で、３，５−ジオキソカルボン酸並びにそれのエステルを
高いエナンチオマー選択率で還元しそしてそれと共に、３，５−ジヒドロキシカ
ルボン酸−構造要素中に規定された絶対配置を有する天然物質および有効物質の
合成で使用できる化合物を得ることでが可能である。

【００２２】 本発明の有利な実施態様は従属形式の請求項に記載してある。

【００２３】 以下に本発明を一般式で説明する。

【００２４】 本発明に従って式４

【００２５】

【化７】

【００２６】 ［式中、Ｒ¹ はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ア リール、アルアルキル、シクロアルキルアルキル、水素原子または金属カチオ ンよりなる群から選択される成分でありそして Ｘは水素原子、ハロゲン原子、アルキル、アリール、ＣＨ＝ＣＨＲ² 、Ｃ≡Ｃ Ｒ³ よりなる群から選択される成分であり、ただしＲ² は金属カチオン以外の Ｒ¹ でありそしてＲ³ はＲ¹ である。］ で表される化合物を、アルコール脱水素酵素によってＮＡＤＰＨまたは他の補助
因子の添加下に反応させる。

【００２７】 アルキルとは直鎖状並びに枝分かれした飽和炭素鎖を意味する。例えばメチル
、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｔ−ブチル、ペンチル、ｉ−ペンチル
、ｎ−ヘキシル、ｉ−ヘキシルを挙げることができる。アルケニルは直鎖状のお
よび枝分かれした不飽和炭化水素であり、例えばビニル、１−プロペニル、アリ
ル、ブテニル、ｉ−ブテニルを挙げることができる。シクロアルキルという概念
は、３、４、５、６または７つの炭素原子よりなる環状飽和炭化水素鎖を意味す
る。シクロアルケニルは５、６、７または８つの炭素原子を有する環状不飽和炭
化水素を意味する。アリールは芳香族系、ヘテロ芳香族化合物および置換された
芳香族系、例えばフェニル、ｐ−トルイル、フラニルを意味する。アルアルキル
はアルキル基を介して結合されているアリール残基、例えばベンジル残基を意味
する。シクロアルキルアルキルはアルキル基を介して結合されているシクロアル
キル残基を意味する。ハロゲンは弗素原子および塩素原子が特に有利である。

【００２８】 アルコール脱水素酵素は好ましくは組替え体であり、ラクトバシラス、特にラ
クトバシラス・ブレビス（rekLBADH) を出所としている。この酵素に関して特に
有利なのは、組替え的に過剰発現されそして大量に容易に製造できることである
。このことは工業的に大規模に使用することを可能としている。その際にこれは
水性媒体中で酵素によって並びに微生物の細胞内でも起こり得る。特に有利な実
施態様においてはラクトバシラス・ブレビスからの、エシュリキア・コリ(Eschr
ichia coil) で組替え的に過剰発現されたrekLBADHを使用する。

【００２９】 rekLBADHの別の有利な点は、必要とされる補助因子NADPH を基質連結した方法
で再生することができる性質である。即ち、NADPH を化学量論的な量で使用する
必要がないことである。更に、それ故にNADPH を再生する目的で第二の酵素を添
加する必要性が回避される。これによって最終的には価格も下げられる。この転
移水素化の際に水素供与体としてアルコール、特にイソプロパノールを使用する
ことができる。rekLBADHの活性はＭｇ²⁺の添加によって高めることができる。

【００３０】 本発明の方法は、酵素のrekLBADHが好ましくも高い熱安定性を有しているので
室温で実施することができる。このことは、所望の反応のために僅かの酵素しか
必要とされず、それによって費用を節約できるという結果ももたらす。多大な費
用の掛かる複雑な冷却手段を省くことができる。しかしながら本発明の方法は酵
素による反応にとって通例である０℃〜７０℃の温度でも実施することができる
。２０℃〜５０℃の範囲が特に有利である。

【００３１】 本発明の方法は、特に有利な酵素がｐＨ５．５で最も安定であるので、５．５
のｐＨ値で実施することができる。これは、式４に従う多くのエステル基質がこ
のｐＨ値で、酵素による反応において常態的に維持されなければならない更に高
いｐＨ値の場合よりも高い安定性を示すので有利である。しかしながらこの反応
は５．５〜９のｐＨ値域、特に好ましくは５．５〜６．５のｐＨ域でも実施する
ことができる。

【００３２】 適するｐＨ値を保証するために、酵素による反応に適するあらゆる緩衝剤を使
用することができる。これには例えばトリエタノールアミン（ＴＥＡ）、燐酸塩
緩衝剤またはＴＲＩＳ緩衝剤がある。緩衝剤の濃度範囲は５０〜５００ｍｍｏｌ
／Ｌであるのが有利である。

【００３３】 ｒ−配置を有する反応生成物は置換基Ｒ¹ およびＸが式４におけるのと同じ意
味を有する式５で示される。

【００３４】

【化８】

【００３５】 この反応のためのエナンチオマー過剰量は９８％以上乃至１００％である。

【００３６】 本発明の一つの改善法では、式５の化合物の３位にあるケト基がジアステレオ
選択的にＯＨ−基に還元される。その時にこのＯＨ−基は５−位のＯＨ−基に対
してｓｙｎ−またはａｎｔｉ−位にある。

【００３７】 式５に従う化合物から反応生成物６ａ、６ｂへの転化は、ｓｙｎ−（６ａ）お
よびａｎｔｉ−ジオール（６ｂ）の合成について知られている方法で行なうこと
ができる。

【００３８】

【化９】

【００３９】 これらは、β−ヒドロキシカルボニル化合物からｓｙｎ−ジオール（６ａ）を
製造するためには、トリアルキル−またはアルコキシジアルキルボロン類の存在
下での例えば水素化硼素ナトリウム−還元反応（１：Narasaka, F.C.Pai, Tetra
hedron 1984, 40, 2233-2238、２: K.M.Chen, G.E.Hardtmann, K.Prasad, O.Rep
ic, M.J.Shapiro, Tetrahedron Lett. 1987, 28, 155-158) およびβ−ヒドロキ
シカルボニル化合物からａｎｔｉ−ジオール（６ｂ）を製造するためには、例え
ばテトラメチルアンモニウム−トリアセトキシ水素化硼素を用いる還元反応（D.
A.Evans, K.T.Chapman, E.M.Carreira, J. Am. Chem. Soc. 1988, 110, 3560-35
78) がある。

【００４０】 一般に第二段階のためには化学的還元反応並びに酵素による還元反応が可能で
ある。酵素による３−位の還元反応は例えば次の微生物またはそれの分離された
還元酵素を用いて実施することができる； ボーベリア・バシアナ(Beauveria bassiana)ＡＴＣＣ７１５９、カンジダ・フミ
コラ（Candida humicola）ＣＢＳ１８９７、カンジダ・ジデンシエ（Candida di
ddensiae) ＡＴＣＣ２０２１３、カンジダ・フリードリヒ(Candida frieddrichi
i)ＡＴＣＣ２２９７０、カンジダ・ソラニ（Candida solani) ＣＢＳ１９０８、
ハンセヌラ・ノンフェメンタンス（Hansenula nonfementans) ＣＢＳ５７６４、
クルイベロマイセス・ドロソフィラルム(Kluyveromyces・drosophilarum)ＣＢＳ
２１０５、ピヒア・アウグスタ（Pichia angusta) ＮＣＹＣ４９５、ピヒア・ア
ウグスタ（Pichia angusta) ＮＣＹＣ Ｒ３２０、ピヒア・アウグスタ（Pichia
angusta) ＮＣＹＣ Ｒ３２２、ピヒア・ハプロフィラ（Pichia haplophila)Ｃ
ＢＳ２０２８、ピヒア・メンブランファシエンス（Pichia membranefaciens) Ｄ
ＳＭ７０３６６、ピヒア・パストリス（Picha pastoris）ＢＰＣＣ２６０、ピヒ
ア・パストリス（Picha pastoris）ＢＰＣＣ４４３、ピヒア・パストリス（Pich
a pastoris）ＮＣＹＣ Ｒ３２１、トルラスポラ・ハンセニ(Torulaspora hanse
nii)ＡＴＣＣ２０２２０、カンジダ・ペリクロサ(Candida pelliculosa) ＡＴＣ
Ｃ２１４９、ハンセヌラ・アノモラ（Hansenula anomola)ＣＢＳ２２３０、ニュ
ーロスポラ・クラッサ(Neurospora crassa) ＡＴＣＣ９２７７、ピヒア・トレハ
ロヒラ（Pichia trehalophila)ＣＢＳ５３６１，モルティレラ・アルピナ(Morti
erella alpina)ＭＦ５５３４（ＡＴＣＣ８９７９）。

【００４１】 サッカロマイス類(Saccharomyces) 、特にサッカロマイセス・セレビシアエ(S
accharomyces cerevisiae)の還元酵素も細胞中でまたは分離された状態で使用す
ることもできる。

【００４２】 本発明の製造方法は有利には連続的方法で酵素−膜反応器、例えばドイツ特許
第３９３７８９２号明細書に記載されている様なもの中で実施することができる
。３，５−ジオキソカルボン酸エステルのＣ−５位でのエナンチオ選択還元反応
は野生タイプ酵素および／または組替え体過剰発現酵素でおよび細胞全体で行な
うことができる。しかしながら、より多いエナンチオマー過剰が達成されるので
、細胞生抽出物を用いる細胞外反応が特に有利である。

【００４３】 本発明の有利な別の実施態様では、式４に従う３，５−ジオキソカルボン酸誘
導体の良く立証されている他の合成法と反対に特に経済的に且つ合理的な原料を
用いて成功する方法によって、合成に必要とされる基質を製造する。この方法の
別の長所は複雑でない反応技術にある。

【００４４】 以下に本発明の方法を式２に従う３，５−ジオキソカルボン酸エステルを用い
て下記式Ａ

【００４５】

【化１０】

【００４６】 ［式中、Ｒ⁴ はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ア リール、アルアルキル、シクロアルキルアルキルまたは金属カチオンである］
で表されるビスエノラートを式Ｂ

【００４７】

【化１１】

【００４８】 ［式中、Ｘは式２の場合と同じ意味を有しそしてＲ⁵ はアルキル基である］ で表される容易に製造できる安価なカルボン酸エステルでアシル化することによ
って高収率で製造できる本発明の方法を説明する。

【００４９】 公知の作業方法に従ってβ−ケトエステルからリチウム化合物によって有機溶
剤中でその場で式Ａのビスエノレートが得られる。この式Ａのビスエノレートは
次いで反応容器の内部温度を制御しながら式Ｂのカルボン酸エステルを添加する
ことによってアシル化する。その際にα−ハロゲン化カルボン酸エステルを使用
するのが好ましい。特にクロロ醋酸およびフロロ醋酸のメチルエステルが有利で
ある。次いでこの混合物を、水と混和しない有機溶剤、例えば醋酸エチルエステ
ルまたはジエチルエーテルの存在下に酸性水性処理する。

【００５０】 本発明の反応は不活性ガス雰囲気および水不含条件のもとで実施するのが特に
有利である。不活性ガスとしては例えば窒素またはアルゴンが適する。溶剤とし
ては不活性有機溶剤、例えばエーテル、アルカンまたはシクロアルカン（Ｃ₅ 〜
Ｃ₇ ）、トルエンまたはベンゼンが適する。特にエーテルの化合物群の内の非プ
ロトン性コーディネーテング溶剤、例えばジエチルエーテル、ジメトキシエタン
またはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）が有利である。ＴＨＦが特に有利である。

【００５１】 上記リチウム化合物は好ましくは強塩基性であるが求核性が小さい。特にリチ
ウムアミド、例えばリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）、リチウムジシク
ロヘキシルアミド、リチウムシクロヘキシルイソプロピルアミド、リチウム−２
，２，６，６−テトラメチルピペリジン（ＬｉＴＭＰ）またはリチウム−ビス−
（トリメチルシリル）−アミド（ＬｉＨＭＤＳ）が有利である。ＬＤＡはなかで
も特に有利である。有機リチウム化合物、例えばメシチルリチウムまたはｔ−ブ
チルリチウムも使用できる。ビスエノレートを製造するためのリチウム塩基とβ
−ケトエステルとの特に有利なモル比は２：１〜４：１であり、２．１：１のモ
ル比が特に有利である。

【００５２】 式Ｂのカルボン酸エステルを添加することによって式Ａのビスエノレートをそ
の場で製造するアシル化反応は、好ましくは−１００℃〜＋２５℃の反応器内温
度、特に好ましくは−８０℃〜−４０℃の温度で行なう。−７２℃〜−６５℃の
範囲が中でも特に有利である。カルボン酸エステルとビスエノレートとのモル比
は０．５：１〜２：１であるのが特に有利である。１：１の比が中でも特に有利
である。

【００５３】 強塩基性反応混合物の後処理は式Ｂのカルボン酸エステルの残りの部分の添加
２〜１２０分後に、特に好ましくは１５〜３０分後に行なう。この目的のために
反応容器内容物を、水と混和しない有機溶剤、例えば醋酸エチルまたはジエチル
エーテルと酸水溶液、例えば希塩酸、醋酸または塩化アンモニウム溶液との、冷
却され強力攪拌された混合物に注ぎ込む。この目的のために２モルの塩化水素酸
および醋酸エチルエステルを使用するのが有利である。

【００５４】 この方法は、式Ｂのカルボン酸エステルでの式Ａのビスエノレートのアシル化
の関係で、過剰の塩基あるいはビスエノレートを使用することが避けられそして
特別な高価なアシル化剤、触媒または補助溶剤を使用することも避けられるので
既存の方法を改善している[ a):M.Yamaguchi、K.Shibato 、H.Nakashima 、T.Mi
nami、Tetrahedron 1988、44、4767-4775; b) N.S.Narasimhan、R.K.Ammanamanc
hi、J.Org.Chem. 1983、48、3945-3947; c)S.N.Huckin 、L.Weiler、Can.J.Chem
. 1974、52、1343-1351 ] 。別の長所は、Huckin等の場合と異なり各成分を間隔
を置いて添加する必要がなく、必要量を一度に添加することができるので反応操
作をが簡単である点である。本発明の方法では式２の種々の３，5-ジオキソカル
ボン酸エステル製造することができ、それらの内の例には６−クロロ−３，5-ジ
オキソヘキサン酸−１，１−ジメチルエチルエステルおよび６−フルオロ−３，
5-ジオキソヘキサン酸−１，１−ジメチルエチルエステルがある。これらの両方
の化合物は新規である。

【００５５】

【実施例】

以下に本発明の方法を特に有利な実施例で例示的に説明する。しかしながら本
発明の方法はこれらの例に限定されない。

【００５６】 実施例１： （３Ｒ，５Ｓ）−６−クロロ−３，５−ジヒドロキシヘキサン酸−１，１−ジ
メチルエチルエステル ａ）６−クロロ−３，５−ジオキソヘキサン酸−１，１−ジメチルエチルエス
テル

【００５７】

【化１２】

【００５８】 以下の反応を加熱された標準的なガラス製装置（三角フラスコ、滴下ロート）
中で湿分および空気の排除下に（Ｎ₂ −保護ガス雰囲気で）実施する。この装置
は、全て市販されている反応試薬を空気の排除下に中空針によって添加すること
ができる隔膜を備えている。この明細書で使用される温度表示は反応容器の内部
温度を示している。従って反応容器は内部温度計を備えている。反応混合物は反
応を実施するいずれの時点でも（マグネットスタラーで）良く攪拌されている。

【００５９】 上記の反応容器中に２５０ｍＬ〜３００ｍＬの完全無水状態のＴＨＦおよび１
０．６３ｇ（１０５ｍｍｏｌ）のジイソプロピルアミンが添加されている。フラ
スコ内容物を氷−食塩冷却浴で−１５℃の温度に冷却した後に、ｎ−ヘキサン（
約１．６ｍｏｌ）に溶解した６４ｍＬ（約１０５ｍｍｏｌ）のｎ−ブチルリチウ
ム溶液を攪拌下に滴下ロートからゆっくり滴加する。その際に温度が０℃を超え
ないようにするべきである。滴加終了後にフラスコを冷却浴中に残し、更に１０
分攪拌する。次いで７．９１ｇ（５０ｍｍｏｌ）の３−オキソブタン酸−１，１
−ジメチルエチルエステルを滴加する。その際に−５℃の温度を超えないように
するべきである。この滴加の終了後にフラスコを冷却浴から僅かに引き上げ、反
応混合物を−１０℃〜最高−５℃で更に１０分間攪拌する。この後で氷−食塩冷
却浴を、アセトン、ドライアイスおよび僅かの液体窒素よりなる冷却浴に交換す
る。反応溶液を−７２℃に冷却した後に５．４３ｇ（５０ｍｍｏｌ）のクロロ醋
酸メチルエステルを、−６５℃の温度を超えないようにゆっくり滴加する。滴加
終了後に−７０℃〜最高−６５℃の温度で更に２５分攪拌し、次いでこの反応溶
液を、１５０ｍＬの醋酸エチルおよび１５０ｍＬの２モル濃度塩化水素酸より成
る、氷冷却浴で４℃に冷却され激しく攪拌される混合物に注ぎ込む。この混合物
をその直後に別のロートに移しそして良く震盪する。相を分離し、水性相を各１
５０ｍＬの醋酸エチルで更に二度抽出処理する。一緒にした有機相を１５０ｍＬ
のＮａＨＣＯ₃ −溶液（５％濃度）で洗浄する。この段階で相分離と一緒に問題
が生じた場合には、４０ｇの食塩を添加溶解する。次いで有機相を１５０ｍＬの
飽和食塩溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過しそして回転式蒸発器中
で膜ポンプ減圧（membrane pump vacuum) 下に最高４０℃でできる限り濃縮する
。¹ Ｈ−ＮＭＲ分析によると約９５％が所望の生成物よりなる１１ｇの油状粗生
成物（９４％）が残る。薄層クロマトグラム（シリカーゲル、醋酸エチル：ｉ−
ヘキサン＝３：７、蛍光消失または沃素と一緒の蒸発による展開）は極性不純物
および非極性不純物の割合が少ないことを示している。

【００６０】 生成物の精製は最高７５℃でおよび少なくとも０．０１ｍｂａｒの減圧下球管
蒸留(bulb tube distillation)によって行なうことができる。この様にして１．
１２ｇの粗生成物から０．８３ｇの分析レベルの純度の生成物が単離される。酸
洗浄した金属不含のシリカーゲルを用いてフラッシュ−クロマトグラフィー(fla
sh chromatography)を実施する[ このクロマトグラフィーの前に市販のシリカー
ゲル（標準的品質）を２モルの塩化水素酸中に２４時間懸濁させ、濾過し、脱イ
オン水で、洗浄液が５．５のｐＨ値を示すまで洗浄し、次いで少なくとも２４時
間１０５℃、標準圧で乾燥する。J.S.Hubbard, T.M.Harris, J.Org.Chem. 1981,
46, 2566-2570参照) ] 。この方法で３．８１ｇの粗生成物から２．７２ｇの分
析レベルの純度の生成物および０．２４ｇの混合フラクションが得られる（６ｃ
ｍの直径を有するカラム、２２０ｇのシリカゲル、醋酸エチル：ｉ−ヘキサン＝
２：８、６０ｍＬのフラクション）。この化合物は−２０℃で数ケ月保存できる
。¹ Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃ 、２２℃） １．）エノール型δ：
１４．７６（ｓ，１Ｈ，ＯＨ，ｂｒ）、５．９７（ｓ，１Ｈ，Ｈ４）、４．０６
（ｓ，２Ｈ，Ｈ６）、３．３１（ｓ，２Ｈ，Ｈ２）、１．４８（ｓ，９Ｈ，３×
ＣＨ ₃ ）；２．）ケト型δ：４．２１（ｓ，２Ｈ，Ｈ６）、３．９２（ｓ，２Ｈ
，Ｈ４）、３．４９（ｓ，２Ｈ，Ｈ２）、１．４７（ｓ，９Ｈ，３×ＣＨ ₃ ）；
ケト：エノール＝１２：８８。¹³ Ｃ−ＮＭＲ（７５．５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃ 、エノール型のシグナルだけが得ら
れた）δ：２８．１４（Ｃ（ＣＨ₃ ）₃ ）、４４．３５（Ｃ６）、４６．０３（
Ｃ２）、８２．５６（ＯＣ（ＣＨ₃ ）₃ ）、９８．８９（Ｃ４）、１６６．４８
（ＣＯＯｔＢｕ）、１８７．０５、１８７．３４（Ｃ３，Ｃ５）。

【００６１】 ｂ）（Ｓ）−６−クロロ−５−ヒドロキシ−３−オキソヘキサン酸−１，１−
ジメチルエチルエステル

【００６２】

【化１３】

【００６３】 酵素による以下の反応をオキシド−還元酵素のｒｅｋＬＢＡＤＨを用いて実施
する。組替え体 E.coil 菌株(recADHHB101+)の湿分−細胞集団を湿式細粉するこ
とによって製造される細胞生抽出物を使用する。培養条件および細胞分解(diges
tion) 消化の詳細は文献に記載されている（B.Riebel, Dissertation, Heinrich
-Heine-University,デュセルドルフ、ドイツ国、1996; また、ドイツ特許出願第
１９６１０９８４．１明細書、１９９６参照）。１ｇの湿分−細胞集団からこの
方法によって約３ｍＬの細胞生抽出物を得る。この酵素調製物の活性は以下の条
件のもとで約１１００Ｕ／ｍＬである：３４０ｎｍでの光度測定（ε_NADPH ＝６
．２２ｃｍ² ／μｍｏｌ）；基質：アセトフェノン（１０ｍＭ）、ＮＡＤＰＨ（
０．２５ｍＭ）、ＭｇＣｌ₂ （１ｍＭ）、燐酸塩緩衝剤（１００ｍＭ、ｐＨ６．
５）、制限酵素量（limiting enzyme quantity);１ｍＬの全容量；温度＝２５℃
；１分間測定。酵素単位（Ｕ）は１分当り１μｍｏｌのＮＡＤＰＨを上記の条件
のもとで酸化する酵素量として規定する。

【００６４】 以下に反応操作を簡単に説明する（バッチ式反応器、単一相）。反応容器とし
て適当な大きさの丸型フラスコを使用する。酵素による還元反応の間にフラスコ
内容物をマグネットスタラーでゆっくり（約６０回転／分）攪拌する。

【００６５】 ４７０ｍＬの燐酸塩−クエン酸塩−緩衝剤（２５０ｍＭのＮａ₂ ＨＰＯ₄ 、１
２５ｍＭのクエン酸、ＮａＯＨでｐＨ５．５に調整）に、ａ）段階で製造された
６−クロロ−３，５−ジオキソヘキサン酸−１，１−ジメチルエチルエステル２
．２１ｇ（９．４ｍｍｏｌ）を（補助因子を再生する目的のために）５．６６ｇ
（９４ｍｍｏｌ）のイソプロパノールに溶解した溶液を添加する。溶解過程を促
進するために短い超音波処理を使用してもよい。更にこの溶液に１．９２ｇ（９
．４ｍｍｏｌ）の塩化マグネシウム・６水和物および４０１ｍｇ（０．４７ｍｍ
ｏｌ）のトリホスホピリジンヌクレオチドのナトリウム塩（ＮＡＤＰ⁺ 、９０％
、例えばＦＬＵＫＡ Ｎｏ．９３２１０）を添加する。マグネシウムイオン濃度
をこの特別な使用例で意図的に高める。次いで反応を１０００Ｕ（上記参照）の
ｒｅｋＬＢＡＤＨの添加によって開始し、反応用フラスコを栓で封じる。反応溶
液の温度は反応の間２５℃に維持する。１６時間後にフラスコ内容物を濾過し、
分液ロートに移し、４００ｍＬの醋酸エチルで抽出処理する。相分離を容易にす
るために１３５ｇの塩化ナトリウムを添加溶解する。各相を分離し、水性相を各
４００ｍＬの醋酸エチルで更に二度抽出処理する。一緒にした有機相を硫酸ナト
リウムで乾燥し、濾過しそして回転式蒸発器中で膜ポンプ減圧下に最高４０℃で
できる限り濃縮する。¹ Ｈ−ＮＭＲ分析によると少なくとも９０％が所望の生成
物よりなる１．９７ｇの油状粗生成物（８８％）が得られる。核磁気共鳴スペク
トルによって不純物として少量の環化生成物（２−（ｔ−ブチロキシカルボニル
）−メチル−３（２Ｈ）−フラノン）が測定できる。反応を更に高いｐＨ値で実
施した場合には環化生成物の割合が増加する。所望の生成物の精製は、フラッシ
ュ−クロマトグラフィー（５ｃｍの直径を有するカラム、１４８ｇのシリカゲル
、醋酸エチル：ｉ−ヘキサン＝４：６、５０ｍＬのフラクション）によって行い
、上記の環化生成物を含む０．１６ｇの混合フラクションの他に１．６７ｇの分
析レベルの純度の生成物（７５％）が得られる。¹ Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃ 、２２℃、ケト型のシグナルだけが得
られた）δ：４．３１（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯＨ）、３．６２（ｄｄ，Ｊ＝１１．２
、５．１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６）、３．５７（ｄｄ，Ｊ＝１１．２、５．０Ｈｚ，１
Ｈ，Ｈ６）、３．４１（ｓ，２Ｈ，Ｈ２）、３．１０（ｓ，1 Ｈ，ＯＨ，ｂｒ）
、２．９０（ｄｄ，Ｊ＝１７．５、５．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４）、２．８３（ｄｄ
，Ｊ＝１７．５、７．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４）、１．４７（ｓ，９Ｈ，３×ＣＨ ₃ ）；ケト：エノール＝約９５：５。¹³ Ｃ−ＮＭＲ（７５．５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃ 、ケト型のシグナルだけが得られた
）δ：２８．１３（３×ＣＨ₃ ）、４６．５７（Ｃ６）、４８．４３（Ｃ４）、
、５１．３１（Ｃ２）、６７．５８（Ｃ５）、８２．７３（ＯＣ（ＣＨ₃ ）₃ ）
、１６６．２２（ＣＯＯｔＢｕ）、２０２．９３（Ｃ３）。 ［α］²⁵ _D ＝−２４．９（ＣＤＣｌ₃ 、ｃ＝１．３５） 光学的純度および配置は、生成物の比旋光度を最もエナンチオマー純粋な同じ
化合物の試料の比旋光度と比較することによって測定する。この目的のために公
知の方法（J.K.Thottathil, Y.Pendri, W.S.Li, D.R.Kronenthal、米国特許第5,
278,313 号明細書、1994) に従って市販のエナンチオマー純粋化合物（（Ｓ）−
４−クロロ−３−ヒドロキシ酪酸エチルエステル、９６％、ＡＬＤＲＩＣＨ Ｎ
ｏ．４６０５２４、＞９７％ｅｅ（製造元情報）から出発して測定する：［α］ ²⁵ _D ＝−２１．７（ＣＨＣｌ₃ 、ｃ＝２．３３）、文献：［α］²¹ _D ＝＋２０．
９（ＣＨＣｌ₃ 、ｃ＝７．７１）、９７％ｅｅ、（Ｒ）−エナンチオマー（M.Ki
tamura, T.Ohkuma, H.Takaya, R.Noyori, Tetrahedron Lett. 1988, 29, 1555-1
556)、生成物の純正試料（Ｓ）−６−クロロ−５−ヒドロキシ−３−オキソヘキ
サン酸−１，１−ジメチルエチルエステルが製造される。こうして得られる粗生
成物の精製は上記の方法で行なう。

【００６６】 この比較用化合物の¹ Ｈ−および¹³Ｃ−スペクトルは上記のデータと正確に一
致する。精製した純正試料の比旋光度は以下の通りである： ［α］²⁵ _D ＝−２３．０（ＣＨＣｌ₃ 、ｃ＝１．５２） 両方の比旋光度の比較で、酵素による上記の還元が非常に高い光学的純度の生
成物をもたらすことが判る。比旋光度のサインの一致は生成物が（Ｓ）配置で存
在していることを実証している。

【００６７】 ｃ）（３Ｒ，５Ｓ）−６−クロロ−３，５−ジヒドロキシヘキサン酸−１，１
−ジメチルエチルエステル

【００６８】

【化１４】

【００６９】 ｂ）段階で製造された粗生成物から出発して所望の目的化合物をジエチルメト
キシボランの存在下に水素化硼素ナトリウムで還元することによって製造する。
この方法はここ示す使用例について文献に明確に記載されている（J.K.Thottath
il, Y.Pendri, W.S.Li, D.R.Kronenthal、米国特許第5,278,313 号明細書、1994
) 。

【００７０】 実施例２： （３Ｒ，５Ｒ）−ジヒドロキシヘキサン酸−１，１−ジメチルエチルエステル ａ）３，５−ジオキソヘキサン酸−１，１−ジメチルエチルエステル

【００７１】

【化１５】

【００７２】 このプロキラルな原料は文献に記載された方法によってアルコール分解および
アセトアセチル化メルドルム酸(Meldrum's acid)の脱カルボキシル化によって製
造される(F.Yuste, F.K.Brena, H.Barrlos, R.Sanchez-Obregon, B.Ortiz, F.Wa
lls, Synth. Commun. 1988, 18, 735-739)。

【００７３】 ｂ）（Ｒ）−５−ヒドロキシ−３−オキソヘキサン酸−１，１−ジメチルエチ
ルエステル

【００７４】

【化１６】

【００７５】 酵素によるこの還元のために実施例１のｂ）段階に説明した種類の細胞生抽出
物を使用する。

【００７６】 ２６０ｍＬの燐酸塩−緩衝剤（１２５ｍＭのＮａ₂ ＨＰＯ₄ 、１２５ｍＭのＮ
ａＨ₂ ＰＯ₄ 、ＨＣｌでｐＨ６．６に調整）に、ａ）段階で製造された３，５−
ジオキソヘキサン酸−１，１−ジメチルエチルエステル１．０４ｇ（５．１７ｍ
ｍｏｌ）を（補助因子を再生する目的のために）３．１ｇ（５２ｍｍｏｌ）のイ
ソプロパノールに溶解した溶液を添加する。更にこの溶液に５３ｍｇ（０．２６
ｍｍｏｌ）の塩化マグネシウム・６水和物および２２０ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ
）のトリホスホピリジンヌクレオチドのナトリウム塩（ＮＡＤＰ⁺ 、９０％、Ｆ
ＬＵＫＡ Ｎｏ．９３２１０）を添加する。次いで反応を２１５ＵのｒｅｋＬＢ
ＡＤＨの添加によって開始し、反応用フラスコを栓で封じる。反応溶液をマグネ
ットスタラーでゆっくり（６０回転／分）攪拌する。反応溶液の温度は反応の間
２５℃に維持する。２８時間後にフラスコ内容物をガラス製ヌッチェ（孔のサイ
ズ４）で濾過する。濾液を別の分液ロートに移し、１５０ｍＬの醋酸エチルで抽
出処理する。相分離を容易にするために７５ｇの塩化ナトリウムを添加溶解する
。各相を分離し、水性相を各１５０ｍＬの醋酸エチルで更に二度抽出処理する。
一緒にした有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過しそして回転式蒸発器中で膜
ポンプ減圧下に最高４０℃でできる限り濃縮する。¹ Ｈ−ＮＭＲ分析によると少
なくとも９０％が所望の生成物よりなる０．９６ｇの油状粗生成物（９２％）が
得られる。核磁気共鳴スペクトルによって不純物として少量の原料が測定できる
。生成物の精製は、減圧−球管蒸留（５５℃、０．０２ｍｂａｒ）によって行な
うかまたはフラッシュ−クロマトグラフィーによって行う。後者の方法で、０．
８２ｇの分析レベルの純度の生成物（７５％）が得られる（３ｃｍの直径を有す
るカラム、４５ｇのシリカゲル、醋酸エチル：ｎ−ヘキサン＝４：６、２０ｍＬ
のフラクション）。ＮＭＲ−データは文献の記載と一致する(L.Shao, H.Kawano,
M.Saburi, Y.Uchida, Tehrahedron 1993, 49, 1997-2010) 。¹ Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃ 、２２℃、ケト型のシグナルだけが得
られた）δ：４．２７（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯＨ）、３．３８（ｓ，２Ｈ，Ｈ２）、
、２．９１（ｓ，１Ｈ，ＯＨ，ｂｒ）、２．７４（ｄｄ，Ｊ＝１７．７、３．２
Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４）、２．６４（ｄｄ，Ｊ＝１７．７、８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４
）、１．４８（ｓ，９Ｈ，３×ＣＨ ₃ ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ
，Ｈ６）；ケト：エノール＝約９５：５。¹³ Ｃ−ＮＭＲ（７５．５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃ 、ケト型のシグナルだけが得られた
）δ：２２．５９（Ｃ６）、２８．１３（３×ＣＨ₃ ）、５１．１９、５１．２
９（Ｃ２，Ｃ４）、６３．９３（Ｃ５）、８２．４４（ＯＣ（ＣＨ₃ ）₃ ）、１
６６．４２（ＣＯＯｔＢｕ）、２０４．３８（Ｃ３）。 ［α］²⁶ _D ＝−４０．５（ｃ＝１．３５、ＣＨＣｌ₃ ） 酵素による還元で得られる生成物の比旋光度をエナンチオマー純粋な生成物に
ついての文献値と比較することによって、本発明の反応が高い光学的純度の（Ｒ
）−配置生成物をもたらすことが判る（文献：［α］²⁶ ＝−３９．６（ｃ＝２
、ＣＨＣｌ₃ ）、９９％ｅｅ(P.F.Deschenaux, T.Kallimopoulos, H.S.Evans, A
.Jacot-Guillarmod, Helv. Chim. Acta 1989、 72 、 731-737) 。

【００７７】 ｃ）（３Ｒ，５Ｒ）−ジヒドロキシヘキサン酸−１，１−ジメチルエチルエス
テル

【００７８】

【化１７】

【００７９】 ｂ）段階で製造された（Ｒ）−５−ヒドロキシ−３−オキソヘキサン酸−１，
１−ジメチルエチルエステルから出発して所望の目的化合物をジエチルメトキシ
ボランの存在下に水素化硼素ナトリウムで還元することによって製造する。この
方法はここ示す使用例について文献に明確に記載されている（C.Masoni, P.F.De
schenaux, T.Kallimopoulos, A.Jacot-Guillarmod, Helv.Chim.Acta 1989, 72,
1284-128) 。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１２年１１月４日（２０００．１１．４）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項１

【補正方法】変更

【補正内容】

【化１】 ［式中、Ｒ¹ はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ア リール、アルアルキル、シクロアルキルアルキル、水素または金属カチオンよ りなる群から選択される基でありそして Ｘは水素原子、ハロゲン原子、アルキル、アリール、ＣＨ＝ＣＨＲ² 、Ｃ≡Ｃ Ｒ³ よりなる群から選択される基であり、ただしＲ² は金属カチオン以外のＲ ¹ でありそしてＲ³ はＲ¹ である。］ で表される３，５−ジオキソカルボン酸、その塩およびエステルをｒ−選択的に
還元する方法において、還元をアルコール脱水素酵素によって補助因子の存在下
に接触的に行なうことを特徴とする、上記方法。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】発明の名称

【補正方法】変更

【補正内容】

【発明の名称】 ３，５−ジオキソカルボン酸、その塩およびそのエステルのｒ
−選択還元法

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００１

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００１】

【産業上の利用分野】 本発明は、３，５−ジオキソカルボン酸、その塩およびそのエステルをｒ−選
択的に還元する方法に関する。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１３

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１３】 Ｅｎｚｙｍｅ Ｍｉｃｒｏｂ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９３）、１５（１２）
、１０１４−２１以降の“３，５−ジオキソ−６−（ベンジルオキシル）ヘキサ
ン酸エチルエステルのエナンチオ選択的な微生物的還元反応（Enantioselective
microbial reduction of 3,5-dioxo-6-(benzyloxyl)hexanoic acid ethyl este
r)" なる名称の刊行物には、還元酵素によって３，５−ジオキソ−６−（ベンジ
ルオキシル）ヘキサン酸エチルエステルの還元反応を示している。 刊行物Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９２）
、３８、３３４〜３４０の“微生物ケトエステル還元酵素の分類および調節の研
究(Studies on the distribution and regulation of microbinal keto ester r
eductases)”にはケト酸およびエステルを、アセトバクター(Acetobcter)、アル
カリゲネス(Alcaligenes) 、グルコノバクター(Gluconobacter) 、メチロモナス
(Methylomonas)、シスードモナス(Pseudomonas) 、ロドコクス(Rodococcus)およ
び酵母より成る群から選択される還元酵素によって還元することが示されている
。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/09 (Ｃ１２Ｎ 9/04 Ｚ (Ｃ１２Ｎ 9/04 Ｃ１２Ｒ 1:24） Ｃ１２Ｒ 1:24） (Ｃ１２Ｎ 9/04 Ｚ (Ｃ１２Ｎ 9/04 Ｃ１２Ｒ 1:19） Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 7/04 (Ｃ１２Ｐ 7/04 Ｃ１２Ｒ 1:24） Ｃ１２Ｒ 1:24） (Ｃ１２Ｐ 7/04 (Ｃ１２Ｐ 7/04 Ｃ１２Ｒ 1:19） Ｃ１２Ｒ 1:19） Ｃ０７Ｍ 7:00 Ｃ０７Ｍ 7:00 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者 フムメル・ヴェルナー ドイツ連邦共和国、52445 ティッツ、ク ラウディウスストラーセ、11 Ｆターム(参考） 4B024 AA03 BA08 DA06 4B050 CC03 DD02 LL05 4B064 AD64 BH01 BH04 BH05 CA21 CB18 CC06 CC07 CC24 DA16 4H006 AA02 AB84 AC41 BE23 BM10 BM72 BN10

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式４ 【化１】 式４ ［式中、Ｒ¹ はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ア リール、アルアルキル、シクロアルキルアルキル、水素または金属カチオンよ りなる群から選択される成分でありそして Ｘは水素原子、ハロゲン原子、アルキル、アリール、ＣＨ＝ＣＨＲ² 、Ｃ≡Ｃ Ｒ³ よりなる群から選択される成分であり、ただしＲ² は金属カチオン以外の Ｒ¹ でありそしてＲ³ はＲ¹ である。］ で表される３，５−ジオキソカルボン酸、その塩およびそのエステルをエナンチ
   オ選択的に還元する方法において、還元をアルコール脱水素酵素によって補助因
   子の存在下に接触的に行なうことを特徴とする、上記方法。
2. 【請求項２】 アルコール脱水素酵素が組替え体である請求項１に記載の方
   法。
3. 【請求項３】 アルコール脱水素酵素がラクトバシラス(Lactobacillus) か
   ら由来している請求項１または２に記載の方法。
4. 【請求項４】 アルコール脱水素酵素がラクトバシラス・ブレビス(Lactoba
   cillus brevis)から由来している請求項３に記載の方法。
5. 【請求項５】 アルコール脱水素酵素がエシェリキア・コリ(Escherichia c
   oil)中で過剰発現される請求項１〜４のいずれか一つに記載の方法。
6. 【請求項６】 ハロゲン原子が弗素原子または塩素原子である請求項１〜５
   のいずれか一つに記載の方法。
7. 【請求項７】 残基Ｒ¹ がメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、
   アリル、ｔ−ブチル、ペンチル、ｉ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｉ−ヘキシル、
   ビニル、１−プロペニル、ブテニル、ｉ−ブテニル、シクロプロピル、シクロブ
   チル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、
   シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル、フェニル、ｐ−トリ
   ル、フラニルおよびベンジルよりなる群から選択される基である請求項１〜６の
   いずれか一つに記載の方法。
8. 【請求項８】 室温で実施する請求項１〜７のいずれか一つに記載の方法。
9. 【請求項９】 ５．５のｐＨ値で実施する請求項１〜７のいずれか一つに記
   載の方法。
10. 【請求項１０】 反応生成物が３−位で高ジアステレオ選択的に還元されて
    ｓｙｎ−ジオールまたはａｎｔｉ−ジオールをもたらす請求項１〜９のいずれか
    一つに記載の方法。
11. 【請求項１１】 ジアステレオ選択還元反応を酵素によって行なう請求項１
    ０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 酵素−膜反応器で実施する請求項１〜１１のいずれか一つ
    に記載の方法。
13. 【請求項１３】 式Ａ 【化２】 ［式中、Ｒ⁴ はアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ア リール、アルアルキル、シクロアルキルアルキルまたは金属カチオンである］
    で表される二リチウム−ビスエノラートから出発して、式Ｂ 【化３】 ［式中、Ｒ⁵ はアルキルである］ で表されるカルボン酸エステルでアシル化することによって式４に従うプロキラ
    ルな出発化合物を製造する、請求項１〜１２のいずれか一つに記載の方法。
14. 【請求項１４】 −７２℃〜−６５℃の温度で実施する請求項１３に記載の
    方法。
15. 【請求項１５】 非プロトン性のコーディネーチング溶剤中で実施する請求
    項１３または１４に記載の方法。