JP2002520327A

JP2002520327A - ヘテロトリマーｇタンパク質の形成から生じる病変を処置するのに意図した医薬を製造するためのシステイン誘導体の使用

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Publication number: JP2002520327A
Application number: JP2000559111A
Authority: JP
Inventors: プレヴオスト，グレゴワール; ロンシヤンプ，マリー−オデイル; ゴードン，トーマス
Original assignee: Societe de Conseils de Recherches et dApplications Scientifiques SCRAS SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 1998-07-08
Filing date: 1999-07-05
Publication date: 2002-07-09
Also published as: US6544995B1; ATE459625T1; ES2341404T3; US20030162786A1; EP1100801A2; US7034025B2; AR019908A1; FR2780974A1; CA2336846C; CA2336846A1; WO2000002881A3; AU4622299A; NZ509789A; NO319633B1; RU2268889C2; DE69942095D1; NO20010029L; US20060035899A1; TW561156B; AU756268B2

Abstract

(57)【要約】【課題】本発明はヘテロトリマーＧタンパク質の形成から生ずる疾病を処置するのに意図した医薬を製造するためにシステイン誘導体の使用に関する。これらの疾病には特に次の生体機能又は障害に関連する疾病があり；嗅覚、味覚、光の知覚、神経伝達、神経変性、内分泌腺及び外分泌腺機能、オートクリン及びパラクリン調節、動脈圧、胚形成、良性の細胞増殖、腫瘍形成、ウイルス感染、免疫機能、糖尿病、肥満病及び良性及び悪性の増殖疾病に関連する疾病がある。前記のシステイン誘導体には特に次の化合物がある；（ｉ）ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジンジスルフィド（Ｉ）及び（ii）ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−（２−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル）ジスルフィド（II）。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明はヘテロトリマーＧタンパク質の形成から生じる病変を処置するのに意
図した医薬を製造するためにシステイン誘導体の使用に特に関する。これらの疾
病には特に生体機能または障害に関連する疾病があり；嗅覚、味覚、光の知覚、
神経伝達、神経変性、内分泌腺および外分泌腺機能、オートクリン（自己分泌）
およびパラクリン（傍分泌）調節、動脈圧、胚形成、良性の細胞増殖、腫瘍形成
、ウイルス感染、免疫機能、糖尿病、肥満病および良性および悪性の増殖疾病に
関連する疾病がある。

【０００２】Ｇタンパク質は実際上α，βおよびγと呼ばれる３個の相異なるサブユニット
の構造上の組合せ体であるが、一方ではαサブユニットで且つ他方ではβ／γ二
量体で構成される解離し得る本体として作用する。

【０００３】Ｇタンパク質は、アデニル酸シクラーゼ、ホスホリパーゼＣあるいはまたイオ
ン性チャンネルを含めて種々のエフェクターを用いて、内部に７つの貫膜領域を
有する受容体との相互作用により、細胞の外部に信号の伝達に関与する。アデニ
ル酸シクラーゼ酵素は環状のＡＭＰ（ｃＡＭＰ）を生成する（ギルマンのA.G Bi
osci. Rep. 15, 65〜97(1995)参照）。即ちアデニル酸シクラーゼを賦活化する
ためには、Ｇタンパク質がヘテロトリマー形に変遷していることが必要であると
知られており、この形ではαサブユニットで構成されるモノマー（単量体）はβ
およびγサブユニットで構成される二量体と係合している。細胞外の信号がＧタ
ンパク質のサブユニットを賦活化し得るのはこの状況でのみであり、解離後には
αサブユニットはアデニル酸シクラーゼを調節（モジュレート）でき且つｃＡＭ
Ｐの製造を調節できる。

【０００４】 β／γ二量体は、細胞外信号（ＥＲＫｓ）またはＭＡＰキナーゼによって制御
されるキナーゼの賦活化を生起するエフェクターを直接賦活化し得ることもまた
知られている。β／γサブユニットとサーク（ｓｒｃ）またはｓｒｃ様キナーゼ
との間の直接結合が証明されている（ガットキンドのJ.S.J. Biol. Chem. 273,
1839〜1842(1998)参照）。

【０００５】更には、コレラ菌(Vibrio cholera)およびボルテラペルツシス(Bortella pe
rtussis)の如き細菌毒素、マストパランおよびスラミンの如きペプチドはＧタン
パク質の活性を直接調節するとして提示された〔Freissmuth,M., Boehm,S., Bei
ndl,W.らのMol. Pharmacol. 49, 602〜611(1996); Boehm,S., Huck,S., Motejle
k,A.,らのJournal of Neurochemistry 66, 1019〜1026(1996); Cachero,T.G., R
igual,R., Rocher,A. & Gonzalez, C.のEur. J. Neurosci. 8, 2320〜2327(1996
); Danilenko,M., Worland,P., Carlson,B., Sausville, E.A. & Sharoni,Y.のB
iochem. Biophys. Res. Commun. 196, 1296〜1302(1993); Beindl,W., Mitterau
er,T., Hohenegger,M., Ijzerman,A.P., Nanoff,C., & Freissmuth,M.のMol. Ph
armacol, 50, 415〜423(1996)参照〕。

【０００６】例えば、コレラの毒素は、ＮＡＤから生ずるＡＤＰ−リボースをアルギニン特
異性受容部位に添加することによりＧタンパク質のαサブユニットを変性する。
これはＧＴＰアーゼの活性を完全に阻止し、その次のエフェクター、アデニル酸
シクラーゼの持続した刺激を生起し且つｃＡＭＰの過剰生産を生ずる。

【０００７】異常なｃＡＭＰレベルの有害な作用も知られておりしかも特に次の生物機能ま
たは障害のレベルで生起する；嗅覚、味覚、光の知覚、神経伝達、神経変性、内
分泌腺および外分泌腺機能、オートクリンおよびパラクリン調節、動脈圧、胚形
成、良性の細胞増殖、腫瘍形成、ウイルス感染および免疫機能、糖尿病および肥
満病。

【０００８】本発明者が今般見出した所によれば、システインの或る誘導体即ち亜式（A1）
または（A2）；に対応する式(A)；〔式中ＸはＲ₁₂を表わし、ＹはＲ₈を表わし、あるいはＸおよびＹは６員環を構
成し、Ｘ−Ｙのセットは−ＣＨ（Ｒ₈）−ＣＨ（Ｒ₉）−基を表わし；Ｒ₁はＨ、低級アルキルまたはアルキルチオ基を表わし；Ｒ₂およびＲ₃は個々にＨまたは低級アルキル基を表わし；Ｒ₄はＨ₂またはＯを表わし；Ｒ₅はＨを表わしあるいは低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、
アリール、アリール低級アルキル、複素環式基または低級アルキル複素環式基の
１つを表わし、これらの基は場合によっては次の置換基；低級アルキル基、−Ｏ
−Ｒ₁₀、−Ｓ（Ｏ）_mＲ₁₀（ｍは０，１または２を表わす）、−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁ ₁ ）、−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ₁₀、−ＮＨ−（ＳＯ₂）−Ｒ₁₀、−ＣＯ₂−Ｒ₁₀、−Ｃ
（Ｏ）−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）および−（ＳＯ₂）−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）よりなる
群から選んだ基によって置換されており；Ｒ₆およびＲ₇は個々にＨ、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＲ₁₃−ＣＯ₂Ｒ₁₄基、ある
いは低級アルキル、アリール、アリール低級アルキル、複素環式基または低級ア
ルキル複素環式基の１つを表わし、これらの基は場合によっては次の置換基；Ｏ
Ｈ、アルキルまたは低級アルコキシ、Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）、ＣＯＯＨ、ＣＯＮ（
Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）およびハロ基よりなる群から選んだ基によって置換されており、
あるいはＲ₆およびＲ₇は一緒になってアリール基または複素環式基を形成し；Ｒ₈およびＲ₉は個々にＨあるいは低級アルキル、アリール、アリール低級アル
キル、複素環式基または低級アルキル複素環式基の１つを表わし、これらの基は
場合によっては次の置換基；ＯＨ、アルキルまたは低級アルコキシ、Ｎ（Ｒ₁₀）
（Ｒ₁₁）、ＣＯＯＨ、ＣＯＮ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）およびハロ基よりなる群から選ん
だ基によって置換されており、あるいはＲ₈およびＲ₉は一緒になってアリール基
または複素環式基を形成し；Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個々にＨ、アリール基または複素環式基、あるいはアルキル
、アリールアルキルまたは低級アルキル複素環式基を表わし；Ｒ₁₂はＮＲ₉、ＳまたはＯを表わし；Ｒ₁₃は場合によっては次の置換基；低級アルキル、−ＯＲ₁₀、−Ｓ（Ｏ）_mＲ₁ ₀ （ｍは０，１または２を表わす）および−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）基から選んだ基
によって置換された低級アルキル基を表わし；Ｒ₁₄はＨまたは低級アルキル基を表わす〕の化合物；あるいは式(B) Ｗ₁−Ａｒ−Ｗ₂ (B) （式中Ｗ₁は還元形または非還元形のシステインから生じる残基を表わし；Ａｒはアミノ安息香酸から誘導される基を表わし、その芳香族環は場合によっ
ては置換されており；Ｗ₂はアミノ酸好ましくは脂肪族アミノ酸を表わす）の化合物；あるいは次式(C)；（式中Ｚ₁は低級アルキル基を表わし；Ｚ₂およびＺ₃は両方共Ｈを表わすかあるいはＺ₂およびＺ₃は一緒になって−Ｃ
（Ｏ）−、−ＣＨ₂−、−ＣＨ（ＮＨ₂）−および−Ｓ−基から選ばれ２〜４個の
元素を有する連鎖を形成し、２個の連続的な元素は両方共−Ｃ（Ｏ）−ではない
）の化合物（但し基Ｚ₂が酸化により除去し得る水素原子を表わす時式(C)の化合
物は二量体の形で提供し得ると理解される）；あるいは式(A), (B)または(C)の化合物の製薬上許容し得る塩を用いて、ヘテロトリマ
ーＧタンパク質の形成から生じる病変を処置するのに意図した医薬を製造できる
。

【０００９】低級アルキル基とは１〜６個の炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖アルキル
基であると理解され、特にメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、
イソブチル、sec−ブチルおよびtert−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、イソ
ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル基である。複素環式基とは少なくとも１個の
異種原子を含有し且つ１つ又はそれ以上の環によって構成される基と理解される
。アリールアルキル、アルキル複素環式、アルキルチオまたは低級アルコキシ基
とは、その中のアルキル基が前述した意味を有する基と理解される。

【００１０】好ましくは、式(B)に包含されるＡｒ基は場合によっては、１〜６個の炭素原
子を有するアルキル基またはアリール基によって置換されており、これらのアル
キル基またはアリール基それら自体は場合によっては１〜４個の炭素原子のアル
コキシ基、フルオロ、クロロ、ブロモによって選択的に置換されている。アリー
ル基好ましくはフェニル基はそれ自体アルキル基によって置換し得る。

【００１１】好ましくはまた式(B)の化合物は、Ａｒがアミノ安息香酸から誘導される基を
表わし、その芳香族環はフェニル基によって置換されておりしかもＷ₂が脂肪族
アミノ酸を表わすようなものである。

【００１２】特に、次の化合物を用いてヘテロトリマーＧタンパク質の形成から生ずる病変
を処置するのに意図した医薬を製造できる； (1) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (2) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−ブチル−２−
（２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔
１，２ａ〕ピラジン； (3) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（１−メチル
プロピル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (4) １−〔２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル〕−２（Ｓ）−ｎ−ブ
チル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； (5) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−２−（メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−
テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド； (6) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７
，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド； (7) ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−
〔２−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル〕ジスルフィド； (8) 次式；の化合物； (9) 次式；の化合物； (10) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，
２ａ〕ピラジン； (11) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルメトキシ）メチル−５，６，７，８−テトラハイ
ドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (12) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（１−フェニルメトキシ）エチル−５，６，７，８−テトラ
ハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (13) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (14) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジンまたはその二量体形；および (15) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルスルホニルエチル）−５，６，７，８−テトラハ
イドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン；あるいはこれらの１つの製薬上許容し得る塩。

【００１３】次の化合物の１つを本発明に用いるのが好ましい； (1) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７
，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド（Ｉ）； (2) ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−
〔２−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル〕ジスルフィド（II）； (3) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン(III)； (4) 次式；の化合物； (5) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−ブチル−２−
（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２
ａ〕ピラジン（Ｖ）； (6) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−２−（メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−
テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド（VI）； (7) 次式；の化合物； (8) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，
２ａ〕ピラジン； (9) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（１−メチル
プロピル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (10) １−〔２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル〕−２（Ｓ）−ｎ−ブ
チル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン；またはこれらの１つの製薬上許容し得る塩。

【００１４】更に選択的には、次の化合物の１種を本発明に用いる； (1) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７
，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド（Ｉ）； (2) ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−
〔２−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル〕ジスルフィド（II）； (3) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダ
ゾ〔１，２ａ〕ピラジン(III)； (4) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−ブチル−２−
（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２
ａ〕ピラジン〕ピラジン（Ｖ）； (5) 式の化合物；あるいはこれらの１つの製薬上許容し得る塩。

【００１５】最後に、次の化合物が更に特に好ましい； (1) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７
，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド（Ｉ）； (2) ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−
〔２−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル〕ジスルフィド（II）；あるいはこれらの１つの製薬上許容し得る塩。

【００１６】それ故、本発明は先ず、ヘテロトリマーＧタンパク質の形成から生じる病変を
処置するのに意図した医薬を製造するために前記の如き式(A), (B)または(C)の
化合物の使用に関する。特に本発明は、次の生体機能または障害；嗅覚、味覚、
光の知覚、神経伝達、神経変性、内分泌腺および外分泌腺機能、オートクリンお
よびパラクリン調節、動脈圧、胚形成、ウイルス感染、免疫機能、糖尿病および
肥満病に関連する疾病を処置するのに意図した医薬を製造するために前記阻害剤
の使用に関する。

【００１７】更に特に、本発明は、コレラ、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、旅行性下
痢および家族性男性早発青春期を処置するのに意図した医薬を製造するために式
(A), (B)または(C)の化合物の使用に関する。

【００１８】本発明の要旨はまた一般式(A)の新規生成物(1)〜(7)で以下に実施例で記載さ
れる生成物である、即ち； (1) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (2) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，
２ａ〕ピラジン； (3) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルメトキシ）メチル−５，６，７，８−テトラハイ
ドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (4) ７−〔２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル〕−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（１−フェニルメトキシ）エチル−５，６，７，８−テトラ
ハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (5) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (6) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジンまたはその二量体形；および (7) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルスルホニルエチル）−５，６，７，８−テトラハ
イドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン。

【００１９】本発明の要旨はまた医薬として前記の新規な生成物またはそれらの製薬上許容
し得る塩並びにヘテロトリマーＧタンパク質の形成から生じる病変を処置するの
に意図した医薬を製造するためにそれらの使用である。特に本発明は、次の生体
機能または障害；嗅覚、味覚、光の知覚、神経伝達、神経変性、内分泌腺および
外分泌腺機能、オートクリンおよびパラクリン調節、動脈圧、胚形成、良性の細
胞増殖、腫瘍形成、ウイルス感染、免疫機能、糖尿病、肥満病および良性および
悪性の増殖疾病に関連している疾病を処置するのに意図した医薬を製造するため
に前記生成物の使用に関する。

【００２０】本発明により用いるのに特に好ましい生成物はそれ故次の化合物である； (1) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７
，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド； (2) ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−
〔２−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル〕ジスルフィド； (3) 次式；の化合物； (4) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (5) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，
２ａ〕ピラジン； (6) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルメトキシ）メチル−５，６，７，８−テトラハイ
ドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (7) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（１−フェニルメトキシ）エチル−５，６，７，８−テトラ
ハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (8) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (9) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジンまたはその二量体形；および (10) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルスルホニルエチル）−５，６，７，８−テトラハ
イドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン；またはこれらの１つの製薬上許容し得る塩。

【００２１】同様に、本発明は更に特に、コレラ、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、旅
行性下痢および家族性男性早発青春期を処置するのに意図した医薬を製造するた
めに前記した化合物の使用に関する。

【００２２】式(A)の化合物およびそれらの製造は国際特許出願WO97／30053号または以下の
実施例に記載されている。式(B) の化合物およびそれらの製造は国際特許出願WO
96／21456号に記載されている。最後に、式(C)の化合物の製造は、式(VII)の化
合物を除いてＰＣＴ特許出願ＰＣＴ WO95／00497号に記載されおり、式(VII)の
化合物の合成は本発明の実験部分に記載されている。

【００２３】本発明の化合物を含有してなる製薬組成物は固形分の形であることができ、例
えば粉末、顆粒、錠剤、ゼラチンカプセル、リポソームまたは座薬の形であり得
る。適当な固体担体は例えばリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タ
ルク、糖類、ラクトース、デキストリン、澱粉、ゼラチン、セルロース、メチル
セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンお
よびワックスであり得る。

【００２４】本発明の化合物を含有してなる製薬組成物はまた液体形で提供することもでき
、例えば溶液、乳液、懸濁液またはシロップ液であり得る。適当な液体担体は例
えば水、グリセロールまたはグリコールの如き有機溶剤並びに水中に種々の割合
でのこれらの混合物であり得る。

【００２５】本発明の医薬の投与は局所、経口、非経口方式により、注射（筋肉内、皮下、
静脈内等）等により実施できる。投与方式は勿論処置すべき疾病の種類に応じて
決まるものである。

【００２６】本発明の医薬に想定される投与量は、処置すべき病変の型式に応じて0.1mg〜1
0ｇよりなる。

【００２７】別の要領で定義されていなければ、こゝで用いた全ての技術用語および科学用
語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有す
る。同様に、こゝに記載した全ての刊行物、特許出願、全ての特許および全ての
他の参考文献は参考のため組入れてある。

【００２８】実施例実施例１；７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シク
ロヘキシルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハ
イドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン；１化合物１は以下の合成図式により製造した； 1.a）カルボベンジルオキシ−Ｌ−シクロヘキシルアラニンＬ−フェニルアラニン（10.0ｇ；60.6ミリモル）を酢酸（60ml）中でPtO₂(430
mg)と合し、該混合物を20〜50psiのＨ₂下で一夜水添した。ＨＣｌの５％水溶液
を該混合物に添加して透明な溶液を得、しかも水素の消費が終了するまで水添を
続行した。触媒は濾過により除去し、濾液を減圧下に濃縮した。残渣をメタノー
ルおよび水に溶解させ、NaOHの10％溶液の添加によりｐＨを4.4に調節した。得
られた生成物を濾過により回収し、更なる精製なしに用いた。

【００２９】Ｌ−シクロヘキシルアミン（60.6ミリモル）を水(100ml)に懸濁させ、K₂CO₃（
8.36ｇ；60.6ミリモル）を添加し、次いでCH₃CN(150ml)中のＮ−（ベンジルオキ
シカルボニルオキシ）サクシンイミド（15.1ｇ；60.6ミリモル）の溶液を添加し
、得られた混合物を45分間激しく攪拌した。該混合物を大体100mlの容量となる
ように濃縮し、EtO₂(100ml)で洗滌し、次いで濃ＨＣｌで酸性化し、AcOEt（２×
50ml）で抽出した。合したAcOEt相をNa₂SO₄上で乾燥させ、濾過し、濃縮して澄
明な油(17.27ｇ；93％）を得た。

【００３０】 NMR ¹H(DMSO-d6):7.5-7.6(1H,d); 7.2-7.5(5H,m); 5.0-5.1(2H,s); 3.9-4.1(1
H,m); 0.7-1.8(13H,m). 1.b）２−〔１−（Ｓ）−（（フェニルメトキシ）カルボニル）−アミノ−２−
（シクロヘキシル）メチル〕−４−（２−メチルフェニル）−イミダゾール Cbz−（Ｌ）−シクロヘキシルアラニン（4.58ｇ；15.0ミリモル）およびCs₂CO ₃ （2.44ｇ；7.50ミリモル）を、ＤＭＦ：Ｈ₂Ｏの２：１混合物（75ml）中に入れ
た。得られた混合物をそれが均質となるまで攪拌した。溶剤を減圧下に除去し、
残渣をＤＭＦ（60ml）に溶解し、ＤＭＦ（30ml）中の２−ブロモ−２′−メチル
アセトフェノン（3.20ｇ；15.0ミリモル）を添加した。該混合物を室温で一夜攪
拌し、次いで濾過し、減圧下に濃縮した。得られたケトエステルをキシレン(100
ml)に溶解させ、酢酸アンモニウム（19.5ｇ；0.25モル）を添加した。該混合物
を大体３時間加熱還流させ、その際ディーン−スタークトラップにより過剰のAc
ONH₄上澄み液および遊離した水を除去しながら行なう。反応混合物を減圧下に濃
縮し、AcOEtに溶解させ、NaHCO₃の飽和溶液(100ml)で洗浄し且つNaClの飽和溶液
で洗浄した。AcOEt相をNa₂SO₄上で乾燥させ、濾過し、真空下に濃縮した。得ら
れた粗製物は溶離液としてCHCl₃／MeOH（98／３）混合物を用いてシリカゲル上
のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。純粋な精製物を含有するフラ
クションを合し、濃縮してわずかに褐色のフォームの形で生成物（2.52ｇ；40％
）を生成し、これを追加の精製なしに次の段階に用いた。

【００３１】 1.c）２−〔１−（Ｓ）−（（フェニルメトキシ）カルボニル）−アミノ−２−
（シクロヘキシル）メチル〕−１−（（２−エトキシ−２−オキソ）エチル）−
４−（２−メチルフェニル）−イミダゾール中間体1.b（2.52ｇ；6.0ミリモル）をＤＭＦ（20ml）に溶解させ、K₂CO₃（1.6
7ｇ；12.1ミリモル）で処理し、ブロモ酢酸エチル（1.34ml；12.5ミリモル）を
添加した。得られた混合物を１時間半45℃に加熱した。該混合物をエーテル（50
ml）で希釈し、NaHCO₃の飽和溶液（50ml）で洗浄し、次いでNaClの飽和溶液（50
ml）で洗浄した。エーテル相をNa₂SO₄上で乾燥させ、濾過し、濃縮して油状物を
生成し、これを更なる精製なしに次の段階に用いた。

【００３２】質量スペクトル：504.3 MH+. 1.d）８−（シクロヘキシルメチル）−６−オキソ−２−（２−メチルフェニル
）−イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン段階1.cの粗製中間体を、炭素上の10％Ｐｄ触媒(152mg)含有酢酸（50ml）中に
溶解し、次いで室温で18時間Ｈ₂の50psiの圧力下に水添した。触媒を濾過により
除去し、濾液を70℃で２時間加熱した。得られた混合物を減圧下に濃縮し、CH₂C
l₂(100ml)に溶解させ、NaHCO₃の飽和溶液で洗浄した。CH₂Cl₂相をNa₂CO₃上で乾
燥させ、濾過し、濃縮して粘稠な油を生成し、これを追加の精製なしに次の段階
に用いた。

【００３３】質量スペクトル：324.3 MH+. 1.e）８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−４，５，
６，７−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン段階1.cの粗製中間体をＴＨＦ（25ml）に溶解させ、30分間ＴＨＦ中のBH₃の１
Ｍ溶液（25ml）で室温で処理し、次いで１時間還流させた。該混合物を氷浴を用
いて冷却し、４ＮＨＣｌ（40ml）を０℃で滴加した。該混合物を室温に戻し、
次いで１時間還流させた。反応媒質を次いで冷却し、濾過し、減圧下に濃縮した
。残渣をNaHCO₃の飽和溶液（50ml）で処理し、CH₂Cl₂（３×50ml）で抽出した。
CH₂Cl₂相をNa₂CO₃上で乾燥させ、濾過し、濃縮してわずかに褐色の油（1.63ｇ；
段階1.c，1.dおよび1.eについて87％の収率）を生成した。

【００３４】質量スペクトル：310.3 MH+. 1.f）８−（シクロヘキシルメチル）−７−〔２−（（（１，１−ジメチルエト
キシ）カルボニル）アミノ）−１−オキソ−３−（（トリフェニルメチル）チオ
）プロピル〕−２−（２−メチルフェニル）−４，５，６，７−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピペラジンジイソプロピルカルボジアミド（908μl；5.80ミリモル）およびBocCys(trt)
−ＯＨ（5.37ｇ；11.6ミリモル）をCH₂Cl₂（25ml）に溶解させ、得られた混合物
を45分間攪拌した。次いで８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メチルフ
ェニル）−４，５，６，７−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン（1.
63ｇ；5.27ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で一夜攪拌した。溶剤を減
圧下に除去し、得られた生成物は溶離液としてCH₂Cl₂／MeOH（98／２）混合物を
用いてシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。純粋なフ
ラクションを濃縮して粘稠な油を生成し、これを追加の精製なしに次の段階に用
いた。

【００３５】質量スペクトル：755.6 MH+. 1.g）７−〔２−アミノ−１−オキソ−３−（メルカプトプロピル）〕−８−（
シクロヘキシルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−４，５，６，７−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピペリジン；１；段階1.fの中間体（3.54ｇ；4.69ミリモル）をトリイソプロピルシラン（1.92m
l；9.38ミリモル）含有トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ，80ml）に溶解させ、反応混
合物を１時間窒素下に室温で攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下に濃
縮した。残渣を0.1％のＴＦＡの水溶液（６×65ml）と研和することにより抽出
し、濾過した。粗製物は0.1％のＴＦＡの水溶液中でCH₃CNの０％〜20％の勾配を
用いて30分間Ｃ18カラム上の分取HPLCにより精製した。生成物の純粋なフラクシ
ョンを収集し、凍結乾燥した。最初の生成物をＨＣｌの希釈溶液から２回凍結乾
燥させてその塩酸塩の形で生成物を生成した(740mg；32％)。

【００３６】質量スペクトル：413.2 MH+. NMR ¹H(DMSO-d6): 8.5-9.0(3H,d,ブロード); 7
.8-8.0(1H,s); 7.5-7.7(1H,d); 7.2-7.5(3H,m); 5.8-6.1(1H,m); 4.65-4.8(1H,s
); 4.5-4.7(1H,d); 4.1-4.4(2H,m); 3.8-4.0(1H,m); 3.2-3.7(H₂O); 2.8-3.1(2H
,m); 2.35-2.5(3H,s); 2.0-2.2(1H,m); 1.8-2.05(2H,m); 1.25-1.4(4H,ブロード
s); 1.3-0.9(6H,m). 実施例２：７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロ
ヘキシルメチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔
１，２ａ〕ピラジン；２；化合物２は、段階ｂにおける２−ブロモ−２′−メチルアセトフェノンの代り
に２−ブロモアセトフェノンを用いて、実施例１の方法と同様な方法により反応
図式１、段階ｂ〜ｇに応じて製造した。

【００３７】質量スペクトル：399.2 MH+. NMR ¹H(DMSO-d6): 8.5-8.9(3H,ブロード d); 8
.0-8.2(1H,s); 7.8-8.0(2H,d); 7.45-7.56(2H,t); 7.35-7.5(1H,t); 5.9-6.05(1
H,ブロード s); 4.65-4.8(1H,s); 4.5-4.65(1H,d); 4.1-4.35(2H,m); 3.8-4.0(1
H,m); 3.2-3.8(H₂O); 3.25-3.4(1H,t); 2.8-3.05(2H,m); 2.05-2.2(1H,d); 1.85
-2.05(2H,t); 1.55-1.75(4H,ブロード s); 1.15-1.3(1H,ブロード s); 1.2-0.9(
5H,m). 実施例３：７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メ
トキシフェニル）−８−（フェニルメトキシ）メチル−５，６，７，８−テトラ
ハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン；３；化合物３は、段階ｂのCbz−（Ｌ）−シクロヘキシルアラニンの代りにBoc−（
Ｌ）−Ser(Bzl)−ＯＨを用い、段階ｄは反応1.gと同様な方法によりＴＦＡとiPr ₃ SiHとを用いて脱保護で置換えて、実施例１と同様な方法により、反応図式１、
段階ｂ〜ｇに応じて製造した。生成物は２：３の割合で１対のジアステレオイソ
マーの形で得られた。

【００３８】質量スペクトル：453.2 MH+. ジアステレオイソマーの滞留時間は次のHPLC系でそれぞれ6.58分および7.07分
である；溶離液：30〜50％CH₃CN／0.1％ＴＦＡ溶離時間：24分検出：254nm カラム：Vydacタンパク質およびＣ18ペプチド。

【００３９】実施例４：７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メ
トキシフェニル）−８−（１−フェニルメトキシ）エチル−５，６，７，８−テ
トラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン；４；化合物４は、段階ｂのBoc−（Ｌ）−Ser(Bzl)−ＯＨの代りにBoc−（Ｌ）−Th
r(Bzl)−ＯＨを用いて実施例３の方法と同様な方法により反応図式１、段階ｂ〜
ｇに応じて製造した。

【００４０】質量スペクトル：467.3 MH+. NMR ¹H(DMSO-d6): 8.5-8.9(3H,d,ブロード); 8
.0-8.1(1H,s); 7.95-8.1(2H,d); 7.4-7.5(1H,t); 7.15-7.3(1H,d); 7.0-7.2(3H,
m); 6.9-7.05(2H,m); 5.85-5.95(1H,d); 4.75-4.85(1H,ブロード s); 4.65-4.8(
1H,ブロード s); 4.35-4.65(3H,m); 4.1-4.25(2H,q); 3.9-4.0(3H,s); 2.8-3.1(
2H,m); 1.2-1.4(3H,d). 実施例５：７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メ
トキシフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイド
ロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン；５；化合物５は次の合成図式により製造した：

【００４１】 5.h）２−（１−（Ｓ）−（（フェニルメトキシ）カルボニル）−アミノ−２−
（２−オキソ−２−（フェニルメトキシ）エチル）−４−（２−メトキシフェニ
ル）−イミダゾール Cbz−（Ｌ）−Asp(Obzl)−ＯＨ（5.00ｇ；14ミリモル）およびCs₂CO₃（2.28ｇ
；7.00ミリモル）をＤＭＦ：Ｈ₂Ｏの１：１混合物（75ml）中で混合した。得ら
れた混合物を均質となるまで攪拌した。溶剤を減圧下に除去し、残渣をＤＭＦ（
60ml）に溶解し、ＤＭＦ（30ml）中の２−ブロモ−２′−メトキシアセトフェノ
ン（3.21ｇ；14.0ミリモル）を添加した。得られた混合物を室温で30分間攪拌し
、次いで濾過し、減圧下に濃縮した。得られたケトエステルはEt₂O：ヘキサンの
１：１混合物（２×40ml）と研和し、次いでキシレン(100ml)に懸濁させた。酢
酸アンモニウム（17.5ｇ；0.23モル）を添加し、該混合物を大体１時間30分加熱
還流させ、その際ディーン−スタークトラップにより過剰のAcONH₄および遊離し
た水を除去しながら行なう。反応媒質をNaHCO₃の飽和溶液（50ml）で洗浄し、Na ₂ SO₄で乾燥させ、真空下に濃縮して6.66ｇ（98％）の所望生成物を生成した。

【００４２】質量スペクトル：486.3 MH+. 5.i）２−（１−（Ｓ）−（（フェニルメトキシ）カルボニル）−アミノ−２−
（（２−フェニルメトキシ−２−オキソ）エチル）−１−（（２−エトキシ−２
−オキソ）エチル）−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾール中間体5.iは段階1.cの方法と同様な方法により製造した。

【００４３】質量スペクトル：572.3 MH+. 5.j）（６−オキソ−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラ
ハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−８−イル）−酢酸中間体5.jは段階1.dの方法と同様な方法により製造した。

【００４４】質量スペクトル：302.2 MH+. NMR ¹H(DMSO-d6): 8.35-8.5(1H,d,ブロード);
8.0-8.1(1H,dd); 7.45-7.55(1H,s); 7.15-7.25(1H,m); 7.0-7.1(1H,m); 6.9-7.0
(1H,m); 4.85-5.0(1H,ブロード s); 4.55-4.75(2H,q); 3.85-3.95(3H,s); 2.8-2
.95(2H,d). 5.k）８−ヒドロキシエチル−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８
−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン基質に対してＢＨ₃の６／９のモル割合を用いるという事実を除いては、中間
体5.kは段階1.eの方法と同様な方法により製造した。

【００４５】質量スペクトル：274.3 MH+. 5.l）７−（（１，１−ジメチルメトキシ）カルボニル）−８−ヒドロキシエチ
ル−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ
〔１，２ａ〕ピラジン中間体5.k（1.36ｇ；5.0ミリモル）をＨ₂Ｏ（５ml）に懸濁させ、ｐ−ジオキ
サン（10ml）中のジ−ｔ−ブチルジカーボネート（1.20ｇ；5.5ミリモル）の混
合物を添加した。反応媒質を激しく攪拌し、反応が終了するまでNaOHの2.5Ｎ溶
液の滴加によりpH8.0〜8.4に維持した（反応の監視は、溶離液のAcOEt：ヘキサ
ン（３：２）を用いてシリカゲル上のＴＬＣにより行なう）。粗製物は溶離液と
してAcOEt：ヘキサン（３：２）混合物を用いてシリカゲル上のフラッシュクロ
マトグラフィーにより精製した（バイオタージ系、予備充填したカラム４×15cm
）。生成物を含有するフラクションを合し、真空下に濃縮して白色フォーム（1.
60ｇ；86％）を生成した。

【００４６】質量スペクトル：374.3 MH+. NMR ¹H(DMSO-d6): 7.95-8.05(1H,dd); 7.45-7.
55(1H,s); 7.10-7.25(1H,m); 7.0-7.1(1H,m); 6.9-7.05(1H,m); 5.05-5.15(1H,t
); 4.25-4.35(1H,t); 4.05-4.2(1H,ブロード s); 4.0-4.1(1H,m); 3.9-4.0(3H,s
); 3.9-4.0(1H,m); 3.25-3.35(2H,m); 1.9-2.1(2H,m); 1.15-1.25(9H,s). 5.m）７−（（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル）−８−フェノキシエチ
ル−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ
〔１，２ａ〕ピラジン中間体5.l（746mg；2.00ミリモル）を、トリフェニルホスフィン（550mg；2.1
ミリモル）およびフェノール（198mg；2.1ミリモル）含有ＴＨＦ（10ml）に溶解
させた。該混合物を窒素下に０℃に冷却し、ジエチルアゾジカルボキシレート（
330μl：2.1ミリモル）を10分に亘って滴加した。次いで反応混合物を室温で２
時間攪拌した。次いで反応媒質を再び０℃に冷却し、トリフェニルホスフィン（
275mg；1.05ミリモル）およびフェノール（99mg；1.05ミリモル）を添加した。
次いでジエチルアゾジカルボキシレート（166μl；1.05ミリモル）を10分に亘っ
て滴加し、次いで該混合物を室温で１時間再び攪拌した。溶剤を減圧下に除去し
、粗製物は溶離液としてAcOEt：ヘキサン（３：２）混合物を用いてシリカゲル
上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含有するフラクシ
ョンを合し、真空下に濃縮した。AcOEtおよびヘキサンから再結晶させた後に、
所望の生成物は白色固体（863mg：96％）の形で得た。

【００４７】質量スペクトル：450.4 MH+. 5.n）７−（２−（（（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル）アミノ）−１
−オキソ−３−（（トリフェニルメチル）チオ）プロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−４，５，６，７−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕−ピペラジン中間体5.m（850mg；1.89ミリモル）を室温で20分間iPr₃SiH（387μl；1.89ミ
リモル）含有ＴＦＡ（10ml）の混合物で処理した。溶剤を減圧下に除去し、粗製
物をAcOEt（15ml）とNaHCO₃の飽和溶液（15ml）との間で分割した。AcOEt相をNa ₂ SO₄上で乾燥させ、濾過し、減圧下に濃縮した。脱保護した生成物を段落1.fの
方法と同様な方法によりBoc−（Ｌ）−Cys(Trt)−ＯＨに結合させた（1.26ｇ；8
4％）。

【００４８】 5.o）７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−４，５，６，７−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕−ピペラジン生成物５は段階1.gの方法と同様な方法により中間体5.mから製造した。

【００４９】質量スペクトル：274.3 MH+. NMR ¹H(DMSO-d6,90℃): 8.5-9.2(3H,s,ブロー
ド); 7.95-8.1(1H,d); 7.85-8.0(1H,s); 7.35-7.5(1H,m); 7.15-7.35(3H,m); 7.
0-7.15(1H,t); 6.85-7.0(3H,m); 5.9-6.1(1H,s,ブロード); 4.5-4.8(2H,m,ブロ
ード); 4.15-4.45(3H,m,ブロード); 3.9-4.0(3H,s); 3.75-4.0(1H,m,ブロード);
2.8-3.05(2H,m,ブロード); 2.55-2.75(2H,m,ブロード). 実施例６：７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メ
トキシフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイド
ロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン、二量体；６；化合物5.o（467mg；0.687ミリモル）をＨ₂Ｏ（25ml）に溶解させ、溶液のｐＨ
はNH₄OHの希釈水溶液を添加することにより7.2に調節した。アセトニトリルを添
加して透明な溶液を生成し、該混合物を室温で一夜攪拌した。粗製物は50分の期
間に亘って0.1％のＴＦＡ中で15％〜40％のCH₃CNの勾配を用いてＣ18カラム上の
分取HPLCにより精製した。生成物の純粋なフラクションを収集し、凍結乾燥させ
た。最初の生成物をＨＣｌの希釈溶液から２回凍結乾燥させてその塩酸塩の形で
生成物を生成した（161mg；45％）。

【００５０】質量スペクトル：903.5 MH+. NMR ¹H(DMSO-d6,90℃): 8.7-9.3(3H,ブロード
s); 7.95-8.1(1H,d); 7.85-8.0(1H,s); 7.3-7.5(1H,t); 7.1-7.3(3H,m); 7.0-7.
15(1H,t); 6.8-7.0(3H,m); 5.85-6.1(1H,ブロード s); 4.7-4.9(1H,ブロード s)
; 4.45-4.7(1H,ブロード m); 4.1-4.5(4H,ブロード m); 3.85-4.0(4H,s); 3.3-3
.5(2H,ブロード m); 2.5-2.8(2H,ブロード m). 実施例７：７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メ
トキシフェニル）−８−（フェニルスルホニルエチル）−５，６，７，８−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン；７；化合物７は以下の合成図式により製造した；

【００５１】 7.p）７−（（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル）−２−（２−メトキシ
フェニル）−８−（フェニルチオエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕−ピラジン中間体5.l（1.23ｇ；3.30ミリモル）、トリ−ｎ−ブチルホスフィン（1.64ml
；6.60ミリモル）およびフェニルジスルフィド（1.44ｇ；6.60ミリモル）をＴＨ
Ｆ（10ml）中に混合させた。該混合物をアルゴン下に４時間室温で攪拌した。溶
剤を減圧下に除去し、粗製物は溶離液としてAcOEt：ヘキサン（１：１）混合物
を用いてシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物
を含有するフラクションを合し、真空下に濃縮して白色フォームの形で生成物を
生成した（1.43ｇ；93％）。

【００５２】質量スペクトル：466.3 MH+. 7.q）７−（（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル）−２−（２−メトキシ
フェニル）−８−（フェニルスルホニルエチル）−５，６，７，８−テトラハイ
ドロイミダゾ〔１，２ａ〕−ピラジン中間体7.p（650mg；1.40ミリモル）をCH₂Cl₂（10ml）に溶解させ、３−クロロ
パーオキシ安息香酸（483ml；2.80ミリモル）を数回に分けて10分の期間に亘っ
て添加した。該混合物をシリカカラムにそゝぎ、ヘキサン：AcOEt（７：３）混
合物で溶離し、次いでヘキサン：AcOEt（１：１）混合物で溶離して純粋な生成
物（220mg；32％）を生成した。

【００５３】質量スペクトル：498.3 MH+. NMR ¹H(DMSO-d6,30℃): 7.9-8.0(3H,m); 7.7-7
.85(1H,m); 7.6-7.75(2H,m); 7.45-7.55(1H,s); 7.15-7.25(1H,m); 6.9-7.1(2H,
m); 5.1-5.25(1H,t); 4.1-4.3(1H,ブロード d); 4.0-4.15(1H,m); 3.8-4.0(1H,m
); 3.85-3.95(3H,s); 3.6-3.8(1H,m); 3.4-3.6(1H,m); 3.2-3.4(H₂O＋ぼやけた
シグナル）;1.9-2.3(2H,m); 1.3-1.5(9H,s). 段階 7.n）段階7.nは段階5.nと同様な方法により実施した。粗製物は更なる精製なしに次
の段階に用いた。

【００５４】段階 7.o）段階7.oは段階5.oと同様な方法により実施した。

【００５５】質量スペクトル：501.3 MH+. 式(VII)の化合物の製造；ＰＣＴ特許出願PCT WO97／30053号に記載される化合物と類縁のこの化合物は
次の合成図式により製造できる；

【００５６】薬理部分本発明の有用性を証明するために、次の化合物を用いてヒトのＭＣＦ−７細胞
系列(cell line)の処置の作用についての研究を続いて行なう； (1) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７
，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド、この部分
では化合物（Ｉ）と命名した； (2) ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル−２
−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラハ
イドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル〕、この部分では化合物（II）
と命名した； (3) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン、この部分では化合物(III)と命名した； (4) 次式；の化合物、この部分では化合物（IV）と命名した； (5) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−ブチル−２−
（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２
ａ〕ピラジン、この部分では化合物（Ｖ）と命名した； (6) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−２−（メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−
テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕、この部分では化合物（VI）と
命名した； (7) 次式；の化合物、この部分では化合物(VII)と命名した。

【００５７】試験方法細胞系列ＭＣＦ−７細胞系統（ヒトの助膜細胞、乳ガン）は米国組織培養コレクション
(the American Tissue Culture Collection)(Rockville, Meryland，米国）から
取得した。

【００５８】ＭＣＦ−７細胞用の環式ＡＭＰの細胞内量の測定 24個の凹みの板に播種したＭＣＦ−７細胞（2.10⁴細胞／凹み）は、加熱によ
り不活性化した子牛胎児の血清10％（Gibco-Brl, Cergy-Pontoise,フランス）、
50000単位／ｌのペニシリンおよび50mg／ｌのストレプトマイシン（Gibco-Brl,
Cergy-Pontoise,フランス）および２mMのグルタミン（Gibco-Brl, Cergy-Pontoi
se,フランス）を補充したダルベッコの改質イーグル培地（Gibco-Brl, Cergy-Po
ntoise,フランス）中で５日間培養した。培地は種々の図面に示した時間特定の
試薬を補充したまたは補充していない媒質と血清なしに２回の洗浄後に代替した
。次いで環状ＡＭＰの生産を賦活化する試薬を37℃で添加した。反応は、100μl
の0.1ＮＨＣｌ溶液を迅速に添加して培地を抑制することにより30分後に停止
させた。これらの抽出物はそれを用いるまで−80℃で凍結した。ｃＡＭＰの濃度
は生産者の指図に従って、市販の測定キット（ＮＥＮ，Les UlisからのNEK033参
照，フランス）を用いて測定した。放射能はガンマーカウンターにより測定した
（ガンマーマスター1277，ＬＫＢ，Turku，フィンランド）。

【００５９】試験管内の細胞増殖の測定ＭＣＦ−７細胞（3000個の細胞／凹み）は、加熱により不活性化した子牛胎児
血清の10％（Gibco-Brl, Cergy-Pontoise,フランス）、50000単位／ｌのペニシ
リンおよび50mg／ｌのストレプトマイシン（Gibco-Brl, Cergy-Pontoise,フラン
ス）および２mMのグルタミン（Gibco-Brl, Cergy-Pontoise,フランス）を補充し
た80μｌのダルベッコの改質イーグル培地（Gibco-Brl, Cergy-Pontoise,フラン
ス）中で96個の凹みの板中で培養し、これを０日として96個の凹みの板上に播種
した。細胞は１日として96時間50μMまでの増大する濃度の各々の供試化合物で
処置した。この期間後に、細胞増殖の定量は、生存している細胞中のミトコンド
リアデヒドロゲナーゼによってＷＳＴ１テトラゾラム塩の開裂に基づいてホルマ
ザンの形成を生ずる、比色試験により測定した(Boehringer Mannheim, Meylan，
フランス）。

【００６０】これらの試験は供試濃度当り８回の測定で重複して行なった。

【００６１】試験すべき各々の化合物について、Ｓ字型の直線部分に含有される数値は直線
退縮分析について保留されしかもこれを用いて阻止濃度（IC₅₀）を評価する。

【００６２】ＭＡＰキナーゼ活性の測定ＭＣＦ−７細胞（5.105細胞／凹み）は、加熱により不活性化した10％の子牛
胎児血清（Gibco-Brl, Cergy-Pontoise,フランス）、抗生物質の混合物；50000
単位／ｌのペニシリンおよび50mg／ｌのストレプトマイシン（Gibco-Brl, Cergy
-Pontoise,フランス）および２mMのグルタミン（Gibco-Brl, Cergy-Pontoise,フ
ランス）を補充したダルベッコの改質イーグル培地中で６個の凹みで培養した。
24時間の培養後に、細胞は血清無含有培地中で48時間温置して細胞を休止の状態
に戻した。次いで細胞を１時間化合物ＩであるいはＭＡＰキナーゼ賦活化の特異
的な阻害剤であるPD 98059（Calbiochem France Biochem, Meudon，フランス）
で処理した。次いで細胞は12.5mg／mlの表皮成長因子（ＥＧＦ）で５分間刺激し
た（または刺激しなかった）。反応は、カルシウムもマグネシウムも含有しない
４℃のＰＢＳ（Gibco-Brl, Cergy-Pontoise,フランス）で２回の洗浄によりしか
も４℃で150μlの溶菌緩衝剤を添加することにより停止し、該溶菌緩衝剤の組成
は次の通りである；10mMのトリス、150mMのNaCl、２mMのEGTA、２mMのジチオト
レイトール、１mMのPMSF、２mMのオルトバナデート、10μg／mlのロイペプチン
および10μg／mlのアプロチニン。抽出物に含有されるタンパク質の測定はブラ
ッドフォード法(Biorad reagents, Ivry-Sur-Seine，フランス）により行なった
。これらの抽出物はそれを用いるまで−80℃で凍結した。ＭＡＰキナーゼの活性
は生産者の指図に従って市販の測定キット（参照RPN84, Amersham Life Science
, Les Ulis，フランス）を用いて測定した。放射能はパッカード(Packard)のシ
ンチレーション計数計(Tricarb 5000CA)を用いて測定した。

【００６３】準備バソアクチブ・インテスチナル・ペプチド（ＶＩＰ）はBachem(Voisins le Br
etonneux，フランス）から取得した。コレラ毒素、ホルスコリン、イソプロテレ
ノール、プロスタグランジンＥ２およびPD 98059はCalbiochem(France Biochem,
Meudon，フランス）から取得した。式（Ｉ），（II），(III)，（IV），（Ｖ）
，（VI）および(VII)の化合物はBiomeasure社(Milford, MA，米国）によって供
給された。全てのこれらの化合物は生産者の勧告に従って用いた。

【００６４】結果第１図が示す処によれば、コレラの毒素（200ng／ml）によりまたはホルスコ
リン（10μM)によりアデニル酸シクラーゼの賦活化は環式ＡＭＰレベルできわめ
て有意な程の増大を生じる。30μMの化合物（Ｉ）で30分間細胞を前処理すると
、アデニル酸シクラーゼの直接的な賦活剤であるホルスコリンによって誘発され
る環式ＡＭＰの生産を改変しない。他方、サブユニットの直接的な賦活剤である
コレラの毒素によって促進される環式ＡＭＰの生産は化合物（Ｉ）によって大幅
に阻害された。これはアデニル酸シクラーゼそれ自体は化合物（Ｉ）によって改
変されず、化合物（Ｉ）はヘテロトリマー複合体の形成を防止することを示して
いる。

【００６５】ＶＩＰは、ヒトの乳ガン細胞において環式ＡＭＰの合成を促進するＧタンパク
質と結合した受容体の細胞外配位子として提示された。第２図が示す処によれば
、ＭＣＦ−７ヒトの乳ガン細胞をＶＩＰで処置すると、濃度依存性の要領で環式
ＡＭＰの細胞内量を増大させる。環式ＡＭＰの準最適生産を提供する10mMのＶＩ
Ｐ濃度は次の試験に用いる。この濃度Ｔ47Ｄヒトの乳ガン細胞系統に関して既に
発表されたデータと合致する。

【００６６】第３図が示す処によれば、試験管培養から生ずるＭＣＦ−７細胞を式（Ｉ）の
化合物で30分間前処理すると、濃度依存性の要領でＶＩＰによって促進された環
式ＡＭＰの集積を阻止するのに十分である。式（Ｉ）の化合物の100μMの濃度で
殆んど完全な阻止が得られた。これらの結果は、化合物（Ｉ）での処理はシグナ
ルのルートがヘテロトリマーＧタンパク質を媒介物質として用いるシグナルの形
質導入を阻止するのに十分である。

【００６７】第４図が示す処によれば、式（Ｉ）の化合物で１時間処理するとＶＩＰに対す
る応答を改変するのに十分である。より長い期間（８時間および24時間）の処理
は環式ＡＭＰの生産を阻止し続けるが、主要な作用はきわめて迅速に得られる。

【００６８】化合物（Ｉ）はまた、７つの貫膜領域をもつ受容体を刺激する別の試薬によっ
て誘発される環式ＡＭＰの形成を阻害する能力がある。例えば、ＭＣＦ−７細胞
において、プロスタグランジンＥ₂によって大幅に増大したアデニル酸シクラー
ゼの活性は化合物（Ｉ）で30分間処理することにより阻害される。これは、化合
物（Ｉ）で細胞を処理するとβ／γ二量体のサブユニットを解離することにより
Ｇタンパク質のヘテロトリマー（三量体）形(heterotrimeric form)を改変する
ことを示唆している。

【００６９】ＶＩＰによる刺激の阻止は式（Ｉ）の化合物の構造と類似した構造の化合物に
限定されない。表１に示す通り、同じ型式で試験した化合物（II），(III)，（I
V），（Ｖ），（VI）および(VII)はＶＩＰで誘発される環式ＡＭＰの量を減少さ
せる能力がある。

【００７０】全てのこれらの結果が示唆する処によれば、供試化合物はＧタンパク質のヘテ
ロトリマー形を変更することによりアデニル酸シクラーゼの活性を調節する。今
般、β／γ二量体は細胞外シグナルによって制御されるキナーゼ(ERK's)または
ＭＡＰキナーゼの賦活化を生ずるエフェクターを直接賦活化できることは知られ
ている。

【００７１】第６図が示す処によれば、化合物（Ｉ）で１時間細胞を処理するとＭＡＰキナ
ーゼの基礎活性を二倍にする。これはヘテロトリマー複合体の形成を防止するこ
とにより、化合物（Ｉ）はヘテロ二量体を放出し、これ自体は細胞膜に結合した
まゝでありしかもｒａｓルートを賦活化することを示唆している。他方、第７図
が示す処によれば、成長因子ＥＧＦにより５分間ＭＡＰキナーゼを刺激した後に
は、酵素の活性は大体７倍だけ増大する。化合物（Ｉ）でまたはＭＡＰキナーゼ
賦活化の特異的な阻害剤であるPD 98059で１時間細胞を前処理するとＭＡＰキナ
ーゼの活性を半減する。これらの結果は、化合物（Ｉ）がｒａｓルートの基底状
態を刺激し且つｒａｓルートが刺激されるならばこの同じルートを阻害しかくし
てその抗増殖作用を説明していると示唆する。

【００７２】表IIは化合物（Ｉ），（II），(III)及び（IV）がＭＣＦ−７ヒトの腫瘍細胞
の試験管内増殖を阻害する能力があることを実際上示している。

【００７３】

【００７４】ＭＣＦ−７細胞中でＶＩＰにより刺激された環式ＡＭＰの生産における30分間
温置した化合物Ｉ，II，IIIおよびIVの作用化合物Ｉ，II，IIIおよびIV（30μM)の存在下にまたは不在下に細胞を30分間
培養し、次いで10^-8ＭのＶＩＰによって刺激した。環式ＡＭＰの定量は放射線免
疫検定法によって測定した。データは平均±ＭＳＤ（ｎ＝５対照についておよ
びｎ＝１種々の化合物について）を表わす。

【００７５】

【００７６】化合物Ｉ，II，IIIおよびIVによるＭＣＦ−７細胞の試験管内成長の阻止 IC₅₀の結果はμMで表わし、２回の実験の平均を表わす。

【図面の簡単な説明】

第１図〜第７図は本発明化合物がｃＡＭＰの生産を阻害することを表わす図表
である。

【手続補正書】

【提出日】平成１３年１月１７日（２００１．１．１７）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】図面の簡単な説明

【補正方法】変更

【補正内容】

【図面の簡単な説明】第１図はＭＣＦ−７細胞においてコレラの毒素またはホルスコリンにより刺激
された環式ＡＭＰの生産に対する化合物Ｉの作用を示す図表である。ＭＣＦ−７細胞は化合物Ｉ（30μＭ）の存在下にまたは不在下に30分間温知（
インキュベート）し、次いでコレラの毒素（200mg／ml）により90分間あるいは
ホルスコリン（10^-5Ｍ）により30分間刺激した。環式ＡＭＰの定量は投薬放射線
免疫検定法によって測定した。データは平均値±ＥＳＭ（ｎ＝３）を表わす。第２図はＭＣＦ−７細胞において環式ＡＭＰの生産に対する増大濃度のＶＩＰ
の作用を示す図表である。ＭＣＦ−７細胞は、指示した濃度のＶＩＰにより30分間刺激された。環式ＡＭ
Ｐの定量は投薬放射線免疫検定法により測定した。第３図はＭＣＦ−７細胞においてＶＩＰによって刺激された環式ＡＭＰの生産
に対する種々濃度の化合物Ｉの作用を示す図表である。ＭＣＦ−７細胞は、増大する濃度の化合物Ｉの存在下に24時間温置し、次いで
10^-8ＭＶＩＰにより30分間刺激した。環式ＡＭＰの定量は投薬放射線免疫検定
法により測定した。データは平均値±ＥＳＭ（ｎ＝３）を表わす。第４図はＶＩＰにより刺激された環式ＡＭＰの生産に対する化合物Ｉの存在下
でＭＣＦ−７細胞の温置期間の作用を示す図表である。ＭＣＦ−７細胞は、化合物Ｉ（30μＭ）の存在下にまたは不在下に１時間、８
時間または24時間温置し次いで10^-8ＭＶＩＰにより刺激した。環式ＡＭＰの定
量は投薬放射線免疫検定法により測定した。データは平均値±ＥＳＭ（ｎ＝１）
を表わす。第５図はＭＣＦ−７細胞においてＶＩＰ、イソプロテレノールまたはプロスタ
グランジンＥ₂によって促進された環式ＡＭＰの生産に対する化合物Ｉの作用を
示す図表である。ＭＣＦ−７細胞は、化合物Ｉ（30μＭ）の存在下にまたは不在下に30分間温置
し、次いでＶＩＰ（10^-8Ｍ）、イソプロテレノール（10^-6Ｍ）またはＰＧＥ₂（1
0^-6Ｍ）により30分間刺激した。環式ＡＭＰの定量は投薬放射線免疫検定法によ
り測定した。データは平均値±ＥＳＭ（ｎ＝３）を表わす。第６図はＭＣＦ−７細胞においてＭＡＰキナーゼの基礎活性に対する化合物Ｉ
の作用を示す図表である。 48時間血清なしのＭＣＦ−７細胞は化合物Ｉ（10および50μＭ）により１時間
処理した。ＭＡＰキナーゼの活性は細胞溶菌液中で測定されしかも取込んだＰｉ
のｐモル数／分／４μｇのタンパク質で表わされる（比較対照例についてはｎ＝
３及び化合物Ｉで処理した細胞についてはｎ＝２）。第７図は、ＭＣＦ−７細胞においてＭＡＰキナーゼの活性に対してPD 98059と
比較した化合物Ｉの作用を示す図表である。 48時間血清なしのＭＣＦ−７細胞は、化合物Ｉ（10および50μＭ）によりまた
はPD 98059（10および50μＭ）により１時間処理した。ＭＣＦ−７細胞は成長因
子ＥＧＦ（12.5ng／ml）の添加により５分間刺激した。ＭＡＰキナーゼの活性は
細胞溶菌液中で測定されしかも取込んだＰｉのｐモル数／分／４μｇのタンパク
質で表わされる（ｎ＝４）。

【手続補正書】

【提出日】平成１３年５月１日（２００１．５．１）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】請求項１

【補正方法】変更

【補正内容】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００８

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００８】本発明者が今般見出した所によれば、システインの或る誘導体即ち亜式(A1)ま
たは(A2)；に対応する式(A); 〔式中ＸはＲ₁₂を表わし、ＹはＲ₈を表わし、あるいはＸおよびＹは６員環を構
成し、Ｘ−Ｙのセットは−ＣＨ（Ｒ₈）−ＣＨ（Ｒ₉）−基を表わし；Ｒ₁はＨ、低級アルキルまたはアルキルチオ基を表わし；Ｒ₂およびＲ_３は個々にＨまたは低級アルキル基を表わし；Ｒ₄はＨ₂またはＯを表わし；Ｒ₅はＨを表わしあるいは低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、
アリール、アリール低級アルキル、複素環式基または複素環式低級アルキル基の
１つを表わし、これらの基は場合によっては次の置換基；低級アルキル基、−Ｏ
−Ｒ₁₀、−Ｓ（Ｏ）_mＲ₁₀（ｍは０，１または２を表わす）、−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁ ₁ ）、−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ₁₀、−ＮＨ−（ＳＯ₂）−Ｒ₁₀、−ＣＯ₂−Ｒ₁₀、−Ｃ
（Ｏ）−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）および−（ＳＯ₂）−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）よりなる
群から選んだ基によって置換されており；Ｒ₆およびＲ₇は個々にＨ、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＲ₁₃−ＣＯ₂Ｒ₁₄基、ある
いは低級アルキル、アリール、アリール低級アルキル、複素環式基または複素環
式低級アルキル基の１つを表わし、これらの基は場合によっては次の置換基；Ｏ
Ｈ、アルキルまたは低級アルコキシ、Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）、ＣＯＯＨ、ＣＯＮ（
Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）およびハロ基よりなる群から選んだ基によって置換されており、
あるいはＲ₆およびＲ₇は一緒になってアリール基または複素環式基を形成し；Ｒ₈およびＲ₉は個々にＨあるいは低級アルキル、アリール、アリール低級アル
キル、複素環式基または複素環式低級アルキル基の１つを表わし、これらの基は
場合によっては次の置換基；ＯＨ、アルキルまたは低級アルコキシ、Ｎ（Ｒ₁₀）
（Ｒ₁₁）、ＣＯＯＨ、ＣＯＮ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）およびハロ基よりなる群から選ん
だ基によって置換されており、あるいはＲ₈およびＲ₉は一緒になってアリール基
または複素環式基を形成し；Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個々にＨ、アリール基または複素環式基、あるいはアルキル
、アリールアルキルまたは複素環式低級アルキル基を表わし；Ｒ₁₂はＮＲ₉、ＳまたはＯを表わし；Ｒ₁₃は場合によっては次の置換基；低級アルキル、−ＯＲ₁₀、−Ｓ（Ｏ）_mＲ₁ ₀ （ｍは０，１または２を表わす）および−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）基から選んだ基
によって置換された低級アルキル基を表わし；Ｒ₁₄はＨまたは低級アルキル基を表わす〕の化合物；あるいは式(B) Ｗ₁−Ａｒ−Ｗ₂ (B) （式中Ｗ₁は還元形または非還元形のシステインから生じる残基を表わし；Ａｒはアミノ安息香酸から誘導される基を表わし、その芳香族環は場合によっ
ては置換されており; Ｗ₂はアミノ酸好ましくは脂肪族アミノ酸を表わす）の化合物；あるいは次式(C)；（式中Ｚ₁は低級アルキル基を表わし；Ｚ₂およびＺ₃は両方共Ｈを表わすかあるいはＺ₂およびＺ₃は一緒になって−Ｃ
（Ｏ）−、−ＣＨ₂−、−ＣＨ（ＮＨ₂）−および−Ｓ−基から選ばれ２〜４個の
元素を有する連鎖を形成し、２個の連続的な元素は両方共−Ｃ（Ｏ）−ではない
）の化合物（但し基Ｚ₂が酸化により除去し得る水素原子を表わす時式(C)の化合
物は二量体の形で提供し得ると理解される）；あるいは式(A),(B)または(C)の化合物の製薬上許容し得る塩を用いて、ヘテロトリマー
Ｇタンパク質の形成から生じる病変を処置するのに意図した医薬を製造できる。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００９

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００９】低級アルキル基とは１〜６個の炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖アルキル
基であると理解され、特にメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、
イソブチル、sec-ブチルおよびtert-ブチル、ペンチル、ネオペンチル、イソペ
ンチル、ヘキシル、イソヘキシル基てある。複素環式基とは少なくとも１個の異
種原子を含有し且つ１つ又はそれ以上の環によって構成される基と理解される。
アリールアルキル、複素環式低級アルキル、アルキルチオまたは低級アルコキシ
基とは、その中のアルキル基が前述した意味を有する基と理解される。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３５

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３５】質量スペクトル：７５５．６ MH⁺。 1.g）７−〔２−アミノ−１−オキソ−３−（メルカプトプロピル）〕−８−（
シクロヘキシルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−４，５，６，７−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピペラジン;1; 段階1.fの中間体（3.54g；4.69ミリモル）をトリイソプロピルシラン（1.92ml
；9.38ミリモル）含有トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ，80ml）に溶解させ、反応混合
物を１時間窒素下に室温で撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下に濃縮
した。残渣を0.1％のＴＦＡの水溶液（6×65ml）と研和することにより抽出し、
濾過した。粗製物は0.1％のＴＦＡの水溶液中でＣＨ₃ＣＮの0％〜20％の勾配を
用いて30分間Ｃ18カラム上の分取HPLCにより精製した。生成物の純粋なフラクシ
ヨンを収集し、凍結乾燥した。最初の生成物をＨＣｌの希釈溶液から２回凍結乾
燥させてその塩酸塩の形で生成物を生成した（740mg；32％）。

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００５７】試験方法細胞系列ＭＣＦ−７細胞系統（ヒトの肋膜細胞、乳ガン）は米国組織培養コレクション
（the American Tissue Culture Collection)(Rockville, Meryland, 米国）か
ら取得した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 31/426 Ａ６１Ｋ 31/426 ４Ｃ２０６ 31/495 31/495 31/496 31/496 31/4985 31/4985 Ａ６１Ｐ 3/06 Ａ６１Ｐ 3/06 3/10 3/10 5/00 5/00 9/12 9/12 15/00 15/00 25/02 １０１ 25/02 １０１ 25/28 25/28 31/12 31/12 35/00 35/00 37/02 37/02 Ｃ０７Ｄ 233/64 １０５Ｃ０７Ｄ 233/64 １０５ 241/04 241/04 263/32 263/32 277/28 277/28 417/06 417/06 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者プレヴオスト，グレゴワールフランス国エフ−92160 アントニイ，アヴニュドラプロビダンス，12 (72)発明者ロンシヤンプ，マリー−オデイルフランス国エフ−94550 シエヴイリー −ラルー，リュアンリイクレト，30 (72)発明者ゴードン，トーマスアメリカ合衆国マサチューセッツ 02053，メドウエイ，レインボードライブ６Ｆターム(参考） 4C033 AD06 4C050 AA01 BB05 CC08 EE03 FF02 FF05 GG01 HH01 4C056 AA01 AB01 AC02 AD01 AE03 BA11 BB01 BC01 4C063 AA01 BB03 CC67 DD34 EE01 4C086 AA01 AA02 BC38 BC50 BC69 BC82 BC93 CB05 GA07 GA10 MA01 NA14 ZA01 ZA02 ZA36 ZA42 ZA43 ZA66 ZA70 ZB07 ZB32 ZB33 ZC02 ZC03 ZC35 4C206 AA01 AA02 DB02 DB43 FA53 JA58 MA01 MA04 NA14 ZA01 ZA02 ZA36 ZA42 ZA43 ZA66 ZA70 ZB07 ZB32 ZB33 ZC02 ZC03 ZC35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】システイン誘導体が亜式（A1）または（A2）；に対応する式(A)；〔式中ＸはＲ₁₂を表わし、ＹはＲ₈を表わし、あるいはＸおよびＹは６員環を構
成し、Ｘ−Ｙのセットは−ＣＨ（Ｒ₈）−ＣＨ（Ｒ₉）−基を表わし；Ｒ₁はＨ、低級アルキルまたはアルキルチオ基を表わし；Ｒ₂およびＲ₃は個々にＨまたは低級アルキル基を表わし；Ｒ₄はＨ₂またはＯを表わし；Ｒ₅はＨを表わしあるいは低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、
アリール、アリール低級アルキル、複素環式基または低級アルキル複素環式基の
１つを表わし、これらの基は場合によっては次の置換基；低級アルキル基、−Ｏ
−Ｒ₁₀、−Ｓ（Ｏ）_mＲ₁₀（ｍは０，１または２を表わす）、−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁ ₁ ）、−Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ₁₀、−ＮＨ−（ＳＯ₂）−Ｒ₁₀、−ＣＯ₂−Ｒ₁₀、−Ｃ
（Ｏ）−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）および−（ＳＯ₂）−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）よりなる
群から選んだ基によって置換されており；Ｒ₆およびＲ₇は個々にＨ、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨＲ₁₃−ＣＯ₂Ｒ₁₄基、ある
いは低級アルキル、アリール、アリール低級アルキル、複素環式基または低級ア
ルキル複素環式基の１つを表わし、これらの基は場合によっては次の置換基；Ｏ
Ｈ、アルキルまたは低級アルコキシ、Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）、ＣＯＯＨ、ＣＯＮ（
Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）およびハロ基よりなる群から選んだ基によって置換されており、
あるいはＲ₆およびＲ₇は一緒になってアリール基または複素環式基を形成し；Ｒ₈およびＲ₉は個々にＨあるいは低級アルキル、アリール、アリール低級アル
キル、複素環式基または低級アルキル複素環式基の１つを表わし、これらの基は
場合によっては次の置換基；ＯＨ、アルキルまたは低級アルコキシ、Ｎ（Ｒ₁₀）
（Ｒ₁₁）、ＣＯＯＨ、ＣＯＮ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）およびハロ基よりなる群から選ん
だ基によって置換されており、あるいはＲ₈およびＲ₉は一緒になってアリール基
または複素環式基を形成し；Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個々にＨ、アリール基または複素環式基、あるいはアルキル
、アリールアルキルまたは低級アルキル複素環式基を表わし；Ｒ₁₂はＮＲ₉、ＳまたはＯを表わし；Ｒ₁₃は場合によっては次の置換基；低級アルキル、−ＯＲ₁₀、−Ｓ（Ｏ）_mＲ₁ ₀ （ｍは０，１または２を表わす）および−Ｎ（Ｒ₁₀）（Ｒ₁₁）基から選んだ基
によって置換された低級アルキル基を表わし；Ｒ₁₄はＨまたは低級アルキル基を表わす〕の化合物（但し各々水素原子を表わ
す２個のＲ₁基を酸化により除去した時は式(A)の化合物は二量体の形でも提示で
きると理解される）であるか；あるいは式(B) Ｗ₁−Ａｒ−Ｗ₂ (B) （式中Ｗ₁は還元形または非還元形のシステインから生じる残基を表わし；Ａｒはアミノ安息香酸から誘導される基を表わし、その芳香族環は場合によっ
ては置換されており；Ｗ₂はアミノ酸好ましくは脂肪族アミノ酸を表わす）の化合物であるか；ある
いは次式(C)；（式中Ｚ₁は低級アルキル基を表わし；Ｚ₂およびＺ₃は両方共Ｈを表わすかあるいはＺ₂およびＺ₃は一緒になって−Ｃ
（Ｏ）−、−ＣＨ₂−、−ＣＨ（ＮＨ₂）−および−Ｓ−基から選ばれ２〜４個の
元素を有する連鎖を形成し、２個の連続的な元素は両方共−Ｃ（Ｏ）−ではない
）の化合物（但し基Ｚ₂が酸化により除去し得る水素原子を表わす時式(C)の化合
物は二量体の形で提供し得ると理解される）であるか；あるいは式(A), (B)または(C)の化合物の製薬上許容し得る塩であることを特徴とする
、ヘテロトリマーＧタンパク質の形成を防止するのに意図した医薬を製造するた
めのシステイン誘導体の使用。
【請求項２】製造した医薬は、ガンおよび増殖性の疾病を除いてヘテロト
リマーＧタンパク質の形成から生じる病変を処置するのに意図されることを特徴
とする請求の範囲第１項記載の使用。
【請求項３】用いた化合物は、請求の範囲第１項で定義した如き式(A)の化合物であるか；あるいは式(B)の化合物（但しＡｒはアミノ安息香酸から誘導される基を表わ
し、その芳香族環はフェニル基によって置換されており、Ｗ₁は脂肪族アミノ酸
を表わす）であることを特徴とする請求の範囲第１項記載の使用。
【請求項４】用いた化合物は次の化合物の１種； (1) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (2) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−ブチル−２−
（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２
ａ〕ピラジン； (3) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（１−メチル
プロピル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (4) １−〔２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル〕−２（Ｓ）−ｎ−ブ
チル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； (5) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−２−（メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−
テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド； (6) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７
，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド； (7) ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−
〔２−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル〕ジスルフィド； (8) 次式；の化合物； (9) 次式；の化合物； (10) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，
２ａ〕ピラジン； (11) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルメトキシ）メチル−５，６，７，８−テトラハイ
ドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (12) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（１−フェニルメトキシ）エチル−５，６，７，８−テトラ
ハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (13) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (14) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジンまたはその二量体形；および (15) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルスルホニルエチル）−５，６，７，８−テトラハ
イドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン；あるいはこれらの１つの製薬上許容し得る塩から選ばれることを特徴とする請
求の範囲第１項記載の使用。
【請求項５】用いた化合物は次の化合物の１種； (1) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７
，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド（Ｉ）； (2) ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−
〔２−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル〕ジスルフィド（II）； (3) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン(III)； (4) 次式；の化合物； (5) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−ブチル−２−
（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２
ａ〕ピラジン（Ｖ）； (6) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−２−（メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−
テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド（VI）； (7) 次式；の化合物； (8) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，
２ａ〕ピラジン； (9) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（１−メチル
プロピル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (10) １−〔２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル〕−２（Ｓ）−ｎ−ブ
チル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン；またはこれらの１つの製薬上許容し得る塩；から選ばれることを特徴とする請求の範囲第４項記載の使用。
【請求項６】用いた化合物は次の化合物の１種； (1) ビス−１，１′−〔７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）
−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７
，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン〕ジスルフィド（Ｉ）； (2) ビス−１，１′−７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−
〔２−（１−ナフチル）−８−（２−メチルプロピル）−５，６，７，８−テト
ラハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン−７−イル〕ジスルフィド（II）；あるいはこれらの１つの製薬上許容し得る塩；から選ばれることを特徴とする、請求の範囲第５項記載の使用。
【請求項７】処置すべき病変は、次の生体機能又は障害に関連する病変か
ら選ばれ；嗅覚、味覚、光の知覚、神経伝達、神経変性、内分泌腺および外分泌
腺機能、オートクリンおよびパラクリン調節、動脈圧、ウイルス感染、免疫機能
、糖尿病および肥満病に関連する病変から選ばれることを特徴とする、請求の範
囲第１項〜第６項の１つに記載の使用。
【請求項８】処置すべき病変は次の病変；コレラ、後天性免疫不全症候群
（ＡＩＤＳ）、旅行性下痢および家族性男性早発青春期から選ばれることを特徴
とする、請求の範囲第１項〜第６項の１つに記載の使用。
【請求項９】次の化合物の１種； (1) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−（２−メチルフェニル）−５，６，７，８−テトラハイドロ
イミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (2) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（シクロヘキ
シルメチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラハイドロイミダゾ〔１，
２ａ〕ピラジン； (3) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルメトキシ）メチル−５，６，７，８−テトラハイ
ドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (4) ７−〔２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル〕−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（１−フェニルメトキシ）エチル−５，６，７，８−テトラ
ハイドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (5) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン； (6) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェノキシエチル）−５，６，７，８−テトラハイドロイ
ミダゾ〔１，２ａ〕ピラジンまたはその二量体形；および (7) ７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−２−（２−メトキ
シフェニル）−８−（フェニルスルホニルエチル）−５，６，７，８−テトラハ
イドロイミダゾ〔１，２ａ〕ピラジン；であることを特徴とする生成物。
【請求項１０】医薬として、請求の範囲第９項記載の生成物またはこの生
成物の製薬上許容し得る塩。
【請求項１１】有効成分として請求の範囲第９項記載の生成物またはこの
生成物の製薬上許容し得る塩を含有してなる製薬組成物。
【請求項１２】ヘテロトリマーＧタンパク質の形成から生ずる病変を処置
するのに意図した医薬を製造するため請求の範囲第９項記載の生成物の使用。
【請求項１３】病変は次の生体機能または障害の１つ；嗅覚、味覚、光の
知覚、神経伝達、神経変性、内分泌腺および外分泌腺機能、オートクリンおよび
パラクリン調節、動脈圧、胚形成、良性の細胞増殖、腫瘍形成、ウイルス感染、
免疫機能、糖尿病、肥満病および良性および悪性の増殖疾病に関連していること
を特徴とする、請求の範囲第１２項記載の使用。