RU2268889C2 - Применение производных цистеина для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина g - Google Patents

Применение производных цистеина для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина g Download PDF

Info

Publication number
RU2268889C2
RU2268889C2 RU2001103647/15A RU2001103647A RU2268889C2 RU 2268889 C2 RU2268889 C2 RU 2268889C2 RU 2001103647/15 A RU2001103647/15 A RU 2001103647/15A RU 2001103647 A RU2001103647 A RU 2001103647A RU 2268889 C2 RU2268889 C2 RU 2268889C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
amino
tetrahydroimidazo
oxo
thiopropyl
pyrazine
Prior art date
Application number
RU2001103647/15A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2001103647A (ru
Inventor
Грегуар ПРЕВО (FR)
Грегуар ПРЕВО
Мари-Одиль ЛОНШАМ (FR)
Мари-Одиль ЛОНШАМ
Томас ГОРДОН (US)
Томас ГОРДОН
Original Assignee
Сосьете Де Консей Де Решерш Э Д`Аппликасьон Сьентифик (Скрас)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Сосьете Де Консей Де Решерш Э Д`Аппликасьон Сьентифик (Скрас) filed Critical Сосьете Де Консей Де Решерш Э Д`Аппликасьон Сьентифик (Скрас)
Publication of RU2001103647A publication Critical patent/RU2001103647A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2268889C2 publication Critical patent/RU2268889C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/223—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of alpha-aminoacids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины и касается применения производных цистеина для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения заболеваний, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина G, к новым производным цистеина и фармкомпозиции на их основе. Производные цистеина, в частности, включают: бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин]-дисульфид, бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(1-нафтил)-8-(2-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин-7-ил]дисульфид. Изобретение обеспечивает высокую эффективность лечения. 3 н. и 3 з.п. ф-лы, 7 ил., 2 табл.

Description

Настоящее изобретение относится, в частности, к применению производных цистеина для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина G. Такими заболеваниями являются, в частности, заболевания, связанные со следующими биологическими функциями или нарушениями: обоняние, вкусовые ощущения, световое восприятие, нейротрансмиссия, нейродегенерация, функционирование эндокринных и экзокринных желез, аутокринная и паракринная регуляция, артериальное кровяное давление, эмбриогенез, доброкачественная клеточная пролиферация, онкогенез, вирусная инфекция, иммунологические функции, диабет, ожирение, и доброкачественные и злокачественные пролиферативные заболевания.
Протеины G фактически представляют собой структурную ассоциацию трех различных субъединиц, называемых α, β и γ, однако функционируют как диссоциирующие частицы, образованные, с одной стороны, субъединицами α и, с другой стороны, димерами β/γ.
Протеины G участвуют в передаче сигналов с поверхности клетки за счет своего взаимодействия с рецепторами семи трансмембранных доменов к внутренней части через посредство различных эффекторов, включающих аденилатциклазу, фосфолипазу С или ионные каналы. Фермент аденилатциклаза генерирует циклический аденозинмонофосфат (цАМФ) (см. Gilman A.G., Biosci. Rep., 15, 65-97 (1995)). Также известно, что для активации аденилатциклазы необходимо, чтобы протеины G временно находились в гетеротримерной форме, т.е. форме, в которой мономер, образованный субъединицей α, ассоциирован с димером, образованным субъединицами β и γ. Только в этом состоянии сигнал с поверхности клетки может активировать субъединицу а протеина G, которая после диссоциации может модулировать аденилатциклазу и модулировать продукцию цАТФ.
Также известно, что димеры β/γ могут активировать непосредственно эффекторы, приводящие к активации киназ, регулируемых внеклеточными сигналами (ERKs), или МАР-киназ. Было показано наличие прямой связи между субъединицами β/γ и киназами src или src like (см. Gut kind J.S., J.Biol. Chem., 273, 1839-1842 (1998)).
Кроме того, показано, что бактериальные токсины, такие как Vibrio cholera и Bortella pertussis, пептиды, такие как мастопаран и сурамин, непосредственно модулируют активность протеинов G (см., Freissmuth M., Boehm S., Beindl W. и др., Mol. Pharmacol., 49, 602-611 (1996); Boehm S., Huck S., Motejlek А., и др., Journal of Neurochemistry, 66, 1019-1026 (1966); Cachero T.G., Rigual R., Rocher А. и Gonzaiez С., Eur. J. Neurosci., 8, 2320-2327 (1996); Danilenko M., Worland P., Carlson В., Sausviile E.A. и Sharoni Y., Biochem. Biophys. Res. Commun., 196, 1296-1302 (1993); Beindl W., Mitterauer Т., Hohenegger M., Ijzerman A. P., Nanoff С. и Freissmuth M., Mol. Pharmacol., 50, 415-423 (1996)).
Холерный токсин, например, модифицирует субъединицу αs протеина G за счет присоединения аденозиндифосфатрибозы (АДФ-рибозы), происходящей от никотинамид-аденин-динуклеотида (НАД), к специфичному аргининовому акцепторному сайту. Это полностью блокирует активность гуанозинтрифосфатазы (GTPase), что провоцирует продолжительную стимуляцию ее следующего эффектора, аденилатциклазы, и приводит к сверхпродукции цАМФ.
Негативный эффект повышенного количества цАМФ также известен и, в частности, он проявляется на уровне следующих биологический функций и нарушений: обоняние, вкусовые ощущения, световое восприятие, нейротрансмиссия, нейродегенерация, функционирование эндокринных и экзокринных желез, аутокринная и паракринная регуляция, артериальное кровяное давление, эмбриогенез, доброкачественная клеточная пролиферация, онкогенез, вирусная инфекция и иммунологические функции, диабет и ожирение.
Заявитель в настоящее время нашел, что некоторые производные цистеина, а именно соединения общей формулы (А):
Figure 00000002
соответствующей частичным формулам (А1) и (А2)
Figure 00000003
Figure 00000004
в которых:
Х означает R12 и Y означает R8, или Х и Y входят в состав шестичленного цикла, причем совокупность X-Y означает радикал -СН(R8)-CH(R9)-;
R1 означает Н, низший алкил или низшую алкилтиогруппу;
R2 и R3 независимо означают Н или низший алкил;
R4 означает Н2 или О;
R5 означает Н или один из следующих радикалов: низший алкил, низший алкенил, низший алкинил, арил, низший арилалкил, гетероциклический или низший алкилгетероциклический радикал, причем эти радикалы в случае необходимости могут быть замещены радикалами, выбираемыми из группы, состоящей из низшего алкила, -О-R10, -S(O)mR10 (где m означает 0, 1 или 2), -N(R10)(R11), -N-C(O)-R10, -NH-(SO2)-R10, -CO2-R10, C(O)-N(R10)(R11) и -(SO2)-N(R10)(R11);
R6 и R7 независимо означают Н, радикал -С(О)-NH-CHR13-CO2R14 или один из следующих радикалов: низший алкил, арил, низший арилалкил, гетероциклический или низший алкилгетероциклический радикал, причем эти радикалы в случае необходимости могут быть замещены радикалами, выбираемыми из группы, состоящей из ОН, низшего алкила или алкоксила, N(R10)(R11), COOH, CON (R10)(R11) и галогена;
или R6 и R7 вместе образуют арил или гетероциклический радикал;
R8 и R9 независимо означают Н или один из следующих радикалов: низший алкил, арил, низший арилалкил, гетероциклический или низший алкилгетероциклический радикал, причем эти радикалы в случае необходимости могут быть замещены радикалами, выбираемыми из группы, состоящей из ОН, низшего алкила или алкоксила, N(R10) (R11), COOH, CON(R10)(R11) и галогена;
или R8 и R9 вместе образуют арил или гетероциклический радикал;
R10 и R11 независимо означают Н, арил или гетероциклический радикал, или низший алкил, низший арилалкил или низший алкилгетероциклический радикал;
R12 означает NR9, S или О;
R13 означает низший алкил, возможно замещенный радикалом, выбираемым среди следующих радикалов: низший алкил, -OR10, -S(O)mR10 (где m означает 0, 1 или 2) и -N(R10)(R11);
R14 означает Н или низший алкил;
или соединения общей формулы (В):
Figure 00000005
в которой:
W1 означает остаток, происходящий от цистеина в восстановленной или невосстановленной форме;
Ar означает радикал, происходящий от аминобензойной кислоты, ароматическое ядро которой может быть замещено;
W2 означает остаток аминокислоты, предпочтительно алифатической аминокислоты;
или соединения общей формулы (С):
Figure 00000006
в которой:
Z1 означает низший алкил;
Z2 и Z3 оба означают Н или же Z2 и Z3 вместе образуют цепь из 2-4 звеньев, выбираемых среди радикалов -С(О)-, -CH2-, -CH(NH2)-и -S-, при условии, что два последовательных звена не могут одновременно являться -С(O)-;
при условии, что соединения общей формулы (С) также могут находиться в форме димеров, когда радикал Z2 означает атом водорода, который может быть удален путем окисления;
или фармацевтически приемлемая соль соединения общей формулы (А), (В) или (С);
могут быть использованы для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина G.
Под низшим алкилом понимают линейный или разветвленный алкильный радикал с 1-6 атомами углерода и, в частности, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил, пентил, неопентил, изопентил, гексил, изогексил. Под гетероциклическим радикалом понимают радикал, образованный одним или несколькими циклами и включающий по крайней мере один гетероатом. Под низшим арилалкилом, алкилгетероциклическим радикалом, алкилтиогруппой или алкоксилом понимают радикалы, алкильная часть которых имеет вышеуказанное значение.
Радикал Ar, входящий в формулу (В), предпочтительно может быть замещен алкилом с 1-6 атомами углерода или арилом, причем эти алкильный и арильный радикалы сами по себе также могут быть предпочтительно замещены алкоксилом с 1-4 атомами углерода, фтором, хлором, бромом. Арил, предпочтительно фенил, сам также может быть замещен алкилом.
Соединения общей формулы (В) предпочтительно еще являются такими, в которых Ar означает радикал, происходящий от аминобензойной кислоты, ароматическое ядро которой замещено фенилом, и W2 означает остаток алифатической аминокислоты.
Для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина G, в особенности могут быть использованы следующие соединения:
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-бутил-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(1-метилпропил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 1-[2(R)-амино-3-меркаптопропил]-2(S)-н-бутил-4-(1-нафтоил)пиперазин;
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин]дисульфид;
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин]дисульфид;
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(1-нафтил)-8-(2-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин-7-ил]дисульфид;
- соединение формулы (VII):
Figure 00000007
- соединение формулы:
Figure 00000008
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилметокси)метил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(1-фенилметокси)этил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин в димерной форме;
- и 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилсульфонилэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин;
или фармацевтически приемлемая соль одного из этих соединений.
Предпочтительно используют одно из следующих соединений согласно изобретению:
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин]дисульфид (I);
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(1-нафтил)-8-(2-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин-7-ил]дисульфид (II);
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин (III);
- соединение формулы (IV):
Figure 00000009
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-бутил-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин (V);
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо-[1,2а]пиразин]дисульфид (VI);
- соединение формулы (VII):
Figure 00000010
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(1-метилпропил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 1-[2(R)-амино-3-меркаптопропил]-2(S)-н-бутил-4-(1-нафтоил)пиперазин;
- или фармацевтически приемлемую соль одного из этих соединений.
Более предпочтительно используют одно из следующих соединений согласно изобретению:
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимида-зо[1,2а]пиразин]дисульфид (I);
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(1-нафтил)-8-(2-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин-7-ил]дисульфид (II);
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин (III);
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-бутил-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин (V);
- соединение формулы (VII):
Figure 00000010
- или фармацевтически приемлемую соль одного из этих соединений.
Наконец, в высшей степени предпочтительными являются следующие соединения:
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин]дисульфид (I);
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(1-нафтил)-8-(2-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин-7-ил]дисульфид (II);
- или фармацевтически приемлемая соль одного из этих соединений.
Изобретение, следовательно, относится прежде всего к применению соединений общей формулы (А), (В) или (С), таких, как указанные выше, для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина G. В частности, изобретение относится к применению вышеуказанных ингибиторов для получения лекарственных средств в целях лечения заболеваний, связанных со следующими биологическими функциями или нарушениями: обоняние, вкусовые ощущения, световое восприятие, нейротрансмиссия, нейродегенерация, функционирование эндокринных и экзокринных желез, аутокринная и паракринная регуляция, артериальное кровяное давление, эмбриогенез, вирусная инфекция, иммунологические функции, диабет и ожирение.
Более предпочтительно, изобретение относится к применению соединений общей формулы (А), (В) или (С) для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения холеры, синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД), диареи путешественника и наследственного мужского преждевременного полового созревания.
Предметом изобретения также являются новые продукты общей формулы (А) под номерами 1-7 и описанные ниже в примерах, а именно:
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилметокси)метил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(1-фенилметокси)этил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин в димерной форме;
- и 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилсульфонилэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо [1,2а]пиразин.
Предметом настоящего изобретения являются также вышеуказанные новые продукты или их фармацевтически приемлемые соли в качестве лекарственных средств, а также их применение для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина G. В особенности, изобретение относится к применению вышеуказанных продуктов для получения лекарственных средств, предназначенных для лечения заболеваний, связанных со следующими биологическими функциями или нарушениями: обоняние, вкусовые ощущения, световое восприятие, нейротрансмиссия, нейродегенерация, функционирование эндокринных и экзокринных желез, аутокринная и паракринная регуляция, артериальное кровяное давление, эмбриогенез, доброкачественная клеточная пролиферация, онкогенез, вирусная инфекция, иммунологические функции, диабет, ожирение и доброкачественные и злокачественные пролиферативные заболевания.
Для применения согласно изобретению особенно предпочтительными продуктами являются, таким образом, следующие:
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин]дисульфид;
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(1-нафтил)-8-(2-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин-7-ил]дисульфид;
- соединение формулы:
Figure 00000011
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-5,6,1,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилметокси)метил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(1-фенилметокси)этил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин в димерной форме;
- и 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил) -8-(фенилсульфонилэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин;
- или фармацевтически приемлемая соль одного из этих соединений.
Точно также изобретение относится в особенности к применению вышеуказанных соединений для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения холеры, синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД), диареи путешественника и наследственного мужского преждевременного полового созревания.
Соединения общей формулы (А) и их получение описываются в Международной заявке на патент 97/30053 или в нижеприводимых примерах. Соединения общей формулы (В) и их получение описываются в Международной заявке на патент 96/21456. Наконец, получение соединений общей формулы (С) описывается в Международной заявке на патент РСТ 95/00497 за исключением соединения формулы (VII), синтез которого описывается в экспериментальной части настоящей заявки.
Фармацевтические композиции, включающие соединение согласно изобретению, могут быть в форме твердых веществ, например, порошков, гранул, таблеток, желатиновых капсул, липосом или суппозиториев. Соответствующими твердыми носителями могут быть, например, фосфат кальция, стеарат магния, тальк, сахара, лактоза, декстрин, крахмал, желатин, целлюлоза, метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, поливинилпирролидин и воск.
Фармацевтические композиции, включающие соединение согласно изобретению, также могут находиться в жидкой форме, например, в виде растворов, эмульсий, суспензий или сиропов. Соответствующими жидкими носителями могут быть, например, вода, органические растворители, такие как глицерин или гликоли, а также их смеси, в различных соотношениях, в воде.
Лекарственное средство согласно изобретению можно вводить топическим путем, перорально, парентерально, путем инъекции (внутримышечной, подкожной, внутривенной и т.д.), и т.д. Путь введения зависит, разумеется, от типа заболевания.
Предусматриваемая для лекарственного средства согласно изобретению вводимая доза составляет от 0,1 мг до 10 г в зависимости от типа патологии.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют значения, обычно понимаемые специалистом в области, к которой относится настоящее изобретение. Точно также все публикации, заявки на патенты, все патенты и все другие указанные здесь ссылки включены в настоящее описание в виде ссылки.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
7-(2-Амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин: 1
Соединение 1 получают согласно нижеприводимой схеме синтеза:
Схема 1
Figure 00000012
1.а) Карбобензилокси-L-циклогексилаланин
10,0 г (60,6 ммоль) L-Фенилаланина смешивают с 430 мг PtO2 в 60 мл уксусной кислоты и смесь гидрируют при давлении водорода 1,38-3,45 бар в течение ночи. К смеси добавляют водный 5%-ный раствор HCl для получения прозрачного раствора и гидрирование продолжают вплоть до прекращения потребления водорода. Катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток обрабатывают метанолом и водой и значение рН устанавливают равным 4,4 путем добавления 10%-ного раствора NaOH. Полученный продукт извлекают путем отфильтровывания и используют без дополнительной очистки.
60,6 ммоль L-Циклогексилаланина суспендируют в 100 мл воды, добавляют 8,36 г (60,6 ммоль) К2СО3, затем раствор 15,1 г (60,6 ммоль) N-(бензилоксикарбонилокси)сукцинимида в 150 мл CH3CN и полученную смесь интенсивно перемешивают в течение 45 минут. Смесь концентрируют до получения объема около 100 мл и промывают с помощью 100 мл диэтилового эфира, затем подкисляют с помощью концентрированной соляной кислоты и экстрагируют 2 раза по 50 мл этилацетатом. Объединенные этилацетатные фазы сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают и концентрируют, получая 17,27 г (93%) прозрачного масла.
1H-ЯМР (ДМСО-d6 [гексадейтеродиметилсульфоксид]), δ (м.д.): 7,5-7,6 (д, 1Н); 7,2-7,5 (м, 5Н); 5,0-5,1 (с, 2Н); 3,9-4,1 (м, 1Н); 0,7-1,8 (м, 13Н).
1.b) 2-(1-(S)-((Фенилметокси)карбонил)амино-2-(циклогексил)метил)-4-(2-метилфенил)имидазол
4,58 г (15,0 ммоль) Cbz-(L)-Циклогексилаланина и 2,44 г (7,50 ммоль) Cs2СО3 вносят в 75 мл смеси диметилформамида с водой в соотношении 2:1. Полученную смесь перемешивают до тех пор, пока она не станет гомогенной. Растворители удаляют при пониженном давлении, остаток растворяют в 60 мл диметилформамида и добавляют 3,20 г (15,0 ммоль) 2-бром-2'-метилацетофенона в 30 мл диметилформамида. Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, затем отфильтровывают и концентрируют при пониженном давлении. Полученный сложный кетоэфир растворяют в 100 мл смеси ксилолов и добавляют 19,5 г (0,25 моль) ацетата аммония.
Смесь кипятят с обратным холодильником в течение примерно трех часов при удалении избыточного ацетата аммония и высвободившейся воды при использовании ловушки Дина-Старка. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, обрабатывают этилацетатом, полученный раствор промывают с помощью 100 мл насыщенного раствора NaHCO3 и 100 мл насыщенного раствора NaCl. Этилацетатную фазу сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают и концентрируют в вакууме. Полученный сырой продукт очищают путем флэш-хроматографии на силикагеле при использовании смеси хлороформа с метанолом в соотношении 98:2 в качестве элюента. Содержащие чистый продукт фракции объединяют и концентрируют, получая 2,52 г (40%) продукта в виде слегка коричневого цвета пены, который используют без дополнительной очистки в следующей стадии.
1.с) 2-(1-(S)-((Фенилметокси)карбонил)амино-2-(циклогексил)метил)-1-((2-этокси-2-оксо)этил)-4-(2-метилфенил)имидазол
2,52 г (6,0 ммоль) Промежуточного соединения 1.b) растворяют в 20 мл диметилформамида, обрабатывают с помощью 1,67 г (12,1 ммоль) К2СО3 и добавляют 1,34 мл (12,5 ммоль) этилбромацетата. Полученную смесь нагревают при температуре 45°С в течение полутора часов. Смесь разбавляют с помощью 50 мл диэтилового эфира и раствор промывают с помощью 50 мл насыщенного раствора NaHCO3, затем с помощью 50 мл насыщенного раствора NaCl. Эфирный слой сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают и концентрируют, получая масло, которое используют без дополнительной очистки в следующей стадии.
Масс-спектрометрия: 504,3 МН+.
1.d) 8-(Циклогексилметил)-6-оксо-2-(2-метилфенил)имидазо[1,2а]пиразин
Сырое промежуточное соединение, полученное в стадии 1.с, растворяют в 50 мл уксусной кислоты, содержащих 152 мг 10%-ного палладия-на-угле в качестве катализатора, затем гидрируют при давлении водорода 3,45 бар в течение 18 часов при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывают и фильтрат нагревают при температуре 70°С в течение двух часов. Полученную смесь концентрируют при пониженном давлении, растворяют в 100 мл дихлорметана и промывают с помощью 100 мл насыщенного раствора NaHCO3. Дихлорметановый слой сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают и концентрируют, получая вязкое масло, которое используют без дополнительной очистки в следующей стадии.
Масс-спектрометрия: 324,3 МН+.
1.е) 8-(Циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-4,5,6,7-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
Сырое промежуточное соединение, полученное в стадии 1.d, растворяют в 25 мл тетрагидрофурана и при комнатной температуре, обрабатывают с помощью 25 мл 1М раствора ВН3 в тетрагидрофуране в течение получаса, затем кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа. Смесь охлаждают на бане со льдом и при температуре 0°С прикапывают 40 мл 4 н. соляной кислоты. Смесь доводят до комнатной температуры, затем кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа. После этого реакционную смесь охлаждают и концентрируют при пониженном давлении. Остаток обрабатывают 50 мл насыщенного раствора NaHCO3 и экстрагируют три раза по 50 мл дихлорметаном. Дихлорметановые фазы сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают и концентрируют, получая 1,63 г (выход составляет 87% по отношению к стадиям 1.c, 1.d и 1.e) масла слегка коричневого цвета.
Масс-спектрометрия: 310,3 МН+.
1.f) 8-(Циклогексилметил)-7-[2-(((1,1-диметилэтокси)карбонил)амино)-1-оксо-3-((трифенилметил)тио)пропил]-2-(2-метилфенил)-4,5,6,7-тетрагидроимидазо[1,2-а]-пиперазин
908 мкл (5,80 ммоль) Диизопропилкарбодиимида и 5,37 г (11,6 ммоль) BocCys(trt)-ОН растворяют в 25 мл дихлорметана, полученную смесь перемешивают в течение 45 минут. Затем добавляют 1,63 г (5,27 ммоль) 8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-4,5,6,7-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразина. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляют при пониженном давлении и полученный продукт очищают путем флэш-хроматографии на силикагеле при использовании смеси дихлорметана с метанолом в соотношении 98:2 в качестве элюента. Чистые фракции концентрируют, получая вязкое масло, которое используют без дополнительной очистки в следующей стадии.
Масс-спектрометрия: 755,6 МН+.
1.g) 7-(2-Амино-1-оксо-3-(меркаптопропил))-8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-4,5,6,7-тетрагидроимидазо[1,2а]пиперазиы: 1:
3,54 г (4,69 ммоль) Полученного в стадии 1.f промежуточного соединения растворяют в 80 мл трифторуксусной кислоты (ТФУК), содержащих 1,92 мл (9,38 ммоль) триизопропил-силана, и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота в течение часа. Реакционную смесь отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток экстрагируют путем порошкования с водным 0,1%-ным раствором трифторуксусной кислоты (6 раз по 65 мл) и отфильтровывают. Сырой продукт очищают путем препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на колонке с C18, используя градиент 0-20% СН3CN в 0,1%-ном водном растворе трифторуксусной кислоты, в течение 30 минут. Чистые фракции продукта объединяют и лиофилизируют. Первоначальный продукт лиофилизируют два раза из разбавленного раствора HCl, получая продукт в виде его гидрохлорида (740 мг; 32%).
Масс-спектрометрия: 413,2 МН+.
1Н-ЯМР (ДМСО-d6), δ (м.д.): 8,5-9,0 (д уш., 3Н); 7,8-8,0 (с, 1Н); 7,5-7,7 (д, 1Н); 7,2-7,5 (м, 3Н); 5,8-6,1 (м, 1Н); 4,65-4,8 (с, 1Н); 4,5-4,7 (д, 1Н); 4,1-4,4 (м, 2Н); 3,8-4,0 (м, 1H); 3,2-3,7 (Н2O); 2,8-3,1 (м, 2Н); 2,35-2,5 (с, 3Н); 2,0-2,2 (м, 1H); 1,8-2,05 (м, 2Н); 1,25-1,4 (с уш., 4Н); 1,3-0,9 (м, 6Н).
Пример 2
7-(2-Амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-фенил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин: 2:
Соединение 2 получают согласно схеме 1, стадии b-g, по методике, аналогичной таковой примера 1, заменяя в стадии b) 2-бром-2'-метилацетофенон на 2-бромацетофенон.
Масс-спектрометрия: 399,2 МН+.
1H-ЯМР (ДМСО-d6), δ (м.д.): 8,5-8,9 (д уш., 3Н); 8,0-8,2 (с, 1H); 7,8-8,0 (д, 2Н); 7,45-7,56 (т, 2Н); 7,35-7,5 (т, 1H); 5,9-6,05 (с уш., 1H); 4,65-4,8 (с, 1H); 4,5-4,65 (д, 1H); 4,1-4,35 (м, 2Н); 3,8-4,0 (м, 1H); 3,2-3,8 (H2O); 3,25-3,4 (т, 1H); 2,8-3,05 (м, 2Н); 2,05-2,2 (д, 1H); 1,85-2,05 (т, 2Н); 1,55-1,75 (с уш., 4Н); 1,15-1,3 (с уш., 1H); 1,2-0,9 (м, 5Н).
Пример 3
7-(2-Амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилметокси)метил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин: 3:
Соединение 3 получают согласно схеме 1, стадии b-g, по методике, аналогичной таковой примера 1, заменяя в стадии b) Cbz-(L)-циклогексилаланин на Boc-(L)-Ser(Bzl)-ОН и заменяя стадию d) стадией удаления защитной группы при использовании трифторуксусной кислоты и триизопропилсилана, согласно методике, аналогичной таковой стадии 1.g. Продукт получают в виде пары диастерероизомеров в соотношении 2:3.
Масс-спектрометрия: 453,2 МН+.
Времена удерживания для диастереоизомеров составляют соответственно 6,58 и 7,07 минут в следующей системе ВЭЖХ:
элюент: 30-50% СН3CN/0,1%-ная ТФУК
продолжительность элюирования: 24 минуты
детекция: 254 нм
колонка: протеин Vydac и пептид C18
Пример 4
7-(2-Амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(1-фенилметокси)этил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин: 4:
Соединение 4 получают согласно схеме 1, стадии b-g, по методике, аналогичной таковой примера 3, заменяя в стадии b) Boc-(L)-Ser(Bzl)-OH на Boc-(L)-Thr(Bzl)-ОН. Масс-спектрометрия: 467,3 МН+.
1H-ЯМР (ДМСО-d6), δ (м.д.): 8,5-8,9 (д уш., 3Н); 8,0-8,1 (с, 1Н); 7,95-8,1 (д, 2Н); 7,4-7,5 (т, 1Н); 7,15-7,3 (д, 1Н); 7,0-7,2 (м, 3Н); 6,9-7,05 (м, 2Н); 5,85-5,95 (д, 1Н); 4,75-4,85 (с уш., 1Н); 4,65-4,8 (с уш., 1Н); 4,35-4,65 (м, 3Н); 4,1-4,25 (к, 2Н); 3,9-4,0 (с, 3Н); 2,8-3,1 (м, 2Н); 1,2-1,4 (д, 3Н).
Пример 5
7-(2-Амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин: 5:
Соединение 5 получают согласно нижеприводимой схеме синтеза:
Схема 2
Figure 00000013
5.h) 2-(1-(S)-((Фенилметокси)карбонил)амино-2-(2-оксо-2-(фенилметокси)этил)-4-(2-метоксифенил)имидазол
5,00 г (14,0 ммоль) Cbz-(L)-Asp(Obzl)-ОН и 2,28 г (7,00 ммоль) Cs2СО3 смешивают с 75 мл смеси диметилформамида с водой в соотношении 1:1. Полученную смесь перемешивают до тех пор, пока она не станет гомогенной. Растворители удаляют при пониженном давлении, остаток растворяют в 60 мл диметилформамида и добавляют 3,21 г (14,0 ммоль) 2-бром-2'-метоксиацетофенона в 30 мл диметилформамида. Полученную смесь перемешивают в течение получаса при комнатной температуре, затем отфильтровывают и концентрируют при пониженном давлении. Полученный сложный кетоэфир порошкуют со смесью диэтилового эфира с гексаном (2 раза по 40 мл), затем суспендируют в 100 мл смеси ксилолов. Добавляют 17,5 г (0,23 моль) ацетата аммония и смесь кипятят с обратным холодильником в течение примерно полутора часов при удалении избыточного количества ацетата аммония и высвободившейся воды, используя ловушку Дина-Старка. Реакционную смесь промывают с помощью 50 мл насыщенного раствора NaHCO3, сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают и концентрируют в вакууме, получая 6,66 г (98%) целевого продукта.
Масс-спектрометрия: 486,3 МН+.
5.i) 2-(1-(S)-((Фенилметокси)карбонил)амино-2-((2-фенилметокси-2-оксо)этил)-1-((2-этокси-2-оксо)этил)-4-(2-метоксифенил)имидазол
Промежуточное соединение 5.i получают согласно методике, аналогичной таковой стадии 1.c.
Масс-спектрометрия: 572,3 МН+.
5.j) (6-Оксо-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин-8-ил)-уксусная кислота
Промежуточное соединение 5.j получают согласно методике, аналогичной таковой стадии 1.d.
Масс-спектрометрия: 302,2 МН+.
1H-ЯМР (ДМСО-d6), δ (м.д.): 8,35-8,5 (д уш., 1Н); 8,0-8,1 (дд, 1Н); 7,45-7,55 (с, 1Н); 7,15-7,25 (м, 1Н); 7,0-7,1 (м, 1Н); 6,9-7,0 (м, 1Н); 4,85-5,0 (с уш., 1Н); 4,55-4,75 (к, 2Н); 3,85-3,95 (с, ЗН); 2,8-2,95 (д, 2Н).
5.k) 8-Гидроксиэтил-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразин
Промежуточное соединение 5.k получают согласно методике, аналогичной таковой стадии 1.е за исключением того, что используют молярное соотношение ВН3 по отношению к субстрату, составляющее 6:9.
Масс-спектрометрия: 274,3 МН+.
5.1) 7-((1,1-Диметилэтокси)карбонил)-8-гидроксиэтил-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
1,36 г (5,0 ммоль) Промежуточного соединения 5.k суспендируют в 5 мл воды и добавляют смесь 1,20 г (5,5 ммоль) ди-трет-бутилдикарбоната в 10 мл п-диоксана. Реакционную смесь интенсивно перемешивают и поддерживают при значении рН, составляющем 8,0-8,4, путем добавления по каплям 2,5 н. раствора NaOH вплоть до окончания реакции (за протеканием реакции следят с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью этилацетата с гексанами в соотношении 3:2). Сырой продукт очищают путем флэш-хроматографии на силикагеле с помощью смеси этилацетата с гексанами в соотношении 3:2 в качестве элюента (система Biotage, предварительно заполненные колонки размером 4×15 см). Содержащие продукт фракции объединяют и концентрируют в вакууме, получая 1,60 г (86%) белой пены.
Масс-спектрометрия: 374,3 МН+.
1H-ЯМР (ДМСО-d6), δ (м.д.): 7,95-8,05 (дд, 1Н); 7,45-7,55 (с, 1Н); 7,10-7,25 (м, 1Н); 7,0-7,1 (м, 1Н); 6,9-7,05 (м, 1Н); 5,05-5,15 (т, 1Н); 4,25-4,35 (т, 1Н); 4,05-4,2 (с уш., 1Н); 4,0-4,1 (м, 1Н); 3,9-4,0 (с, 3Н); 3,9-4,0 (м, 1Н); 3,25-3,35 (м, 2Н); 1,9-2,1 (м, 2Н); 1,15-1,25 (с, 9Н).
5.m) 7-((1,1-Диметилэтокси)карбонил)-8-феноксиэтил-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
746 мг (2,00 ммоль) Промежуточного соединения 5.1 растворяют в 10 мл тетрагидрофурана, содержащих 550 мг (2,1 ммоль) трифенилфосфина и 198 мг (2,1 ммоль) фенола. Смесь охлаждают до температуры 0°С в атмосфере азота и добавляют по каплям в течение 10 минут 330 мкл (2,1 ммоль) диэтилазодикарбоксилата. Реакционную смесь затем перемешивают в течение двух часов при комнатной температуре. После этого реакционную смесь снова охлаждают до температуры 0°С и добавляют 275 мг (1,05 ммоль) трифенилфосфина и 99 мг (1,05 ммоль) фенола. Затем в течение 10 минут добавляют по каплям 166 мкл (1,05 ммоль) диэтилазодикарбоксилата, после чего смесь перемешивают еще в течение 1 часа при комнатной температуре. Растворители удаляют при пониженном давлении и сырой продукт очищают путем флэш-хроматографии на силикагеле при использовании смеси этилацетата с гексанами в соотношении 3:2 в качестве элюента. Содержащие продукт фракции объединяют и концентрируют в вакууме. После перекристаллизации из этилацетата и гексанов получают 863 г (96%) целевого продукта в виде твердого вещества белого цвета.
Масс-спектрометрия: 450,4 МН+.
5.n) 7-(2-(((1,1-Диметилэтокси)карбонил)амино)-1-оксо-3-((трифенилметил)тио)-пропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-4,5,6,7-тетрагидроимидазо[1,2а]пиперазин
850 мг (1,89 ммоль) Промежуточного соединения 5.т обрабатывают с помощью смеси 10 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 387 мкл (1,89 ммоль) триизопропилсилана, при комнатной температуре в течение 20 минут. Растворители удаляют при пониженном давлении и сырой продукт распределяют между 15 мл этилацетата и 15 мл насыщенного раствора NaHCO3. Этилацетатную фазу сушат над сульфатом натрия, отфильтровывают и концентрируют при пониженном давлении. Продукт, из которого удалена защитная группа, связывают с Boc-(L)-Cys(Trt)-ОН согласно методике, аналогичной таковой стадии 1.f (1,26 г; 84%).
5.о) 7-(2-Амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-4,5,6,7-тетрагидроимидазо[1,2-а]-пиперазин
Продукт 5 получают из промежуточного соединения 5.n согласно методике, аналогичной таковой стадии 1.g.
Масс-спектрометрия: 274/3 МН+.
1H-ЯМР (ДМСО-d6 при температуре 90°С), δ (м.д.): 8,5-9,2 (с уш., 3Н); 7,95-8,1 (д, 1Н); 7,85-8,0 (с, 1Н); 7,35-7,5 (м, 1Н); 7,15-7,35 (м, 3Н); 7,0-7,15 (т, 1Н); 6,85-7,0 (м, 3Н); 5,9-6,1 (с уш., 1Н); 4,5-4,8 (м уш., 2Н); 4,15-4,45 (м уш., 3Н); 3,9-4,0 (с, 3Н); 3,75-4,0 (муш., 1Н); 2,8-3,05 (м уш., 2Н); 2,55-2,75 (муш., 2Н).
Пример 6
7-(2-Амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(феноксиэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин в виде димера: 6:
467 мг (0,687 ммоль) Соединения 5.0 растворяют в 25 мл воды и значение рН раствора устанавливают равным 7,2 путем добавления водного разбавленного раствора NH4OH. Добавляют ацетонитрил, получая прозрачный раствор, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Сырой продукт очищают путем препаративной ВЭЖХ на колонке с C18, используя градиент 15-40% ацетонитрила в 0,1%-ной трифторук-сусной кислоте, в течение 50 минут. Чистые фракции продукта объединяют и лиофилизируют. Первоначальный продукт лиофилизируют два раза из разбавленного раствора HCl, получая продукт в виде гидрохлорида (161 мг; 45%).
Масс-спектрометрия: 903,5 МН+.
1H-ЯМР (ДМСО-d6 при температуре 90°С), δ (м.д.): 8,7-9,3 (с уш., 3Н); 7,95-8,1 (д, 1Н); 7,85-8,0 (с, 1Н); 7,35-7,5 (т, 1Н); 7,1-7,3 (м, 3Н); 7,0-7,15 (т, 1Н); 6,8-7,0 (м, 3Н); 5,85-6,1 (с уш., 1Н); 4,7-4,9 (с уш., 1Н); 4,45-4,7 (м уш., 1Н); 4,1-4,5 (м уш., 4Н); 3,85-4,0 (с, 4Н); 3,3-3,5 (м уш., 2Н); 2,5-2,8 (м уш., 2Н).
Пример 7
7-(2-Амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилсульфонилэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин: 7:
Соединение 7 получают согласно нижеприводимой схеме синтеза:
Схема 3
Figure 00000014
7.p) 7-((1,1-Диметилэтокси)карбонил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилтиоэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]-пиразин
1,23 г (3,30 ммоль) Промежуточного соединения 5.1, 1,64 мл (6,60 ммоль) три-н-бутилфосфина и 1,44 г (6,60 ммоль) фенилдисульфида смешивают в 10 мл тетрагидро-фурана. Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 4-х часов. Растворители удаляют при пониженном давлении и сырой продукт очищают путем флэш-хроматографии на силикагеле при использовании смеси этилацетата с гексанами в соотношении 1:1 в качестве элюента, Содержащие продукт фракции объединяют и концентрируют в вакууме, получая 1,43 г (93%) продукта в виде белой пены.
Масс-спектрометрия: 466/3 МН+.
7.q) 7-((1,1-Диметилэтокси)карбонил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилсульфонилэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин
650 мг (1,40 ммоль) Промежуточного продукта 7.р растворяют в 10 мл дихлорметана и в виде нескольких порций в течение периода 10 минут добавляют 483 мг (2,80 ммоль) 3-хлорпероксибензойной кислоты. Смесь вносят в колонку с диоксидом кремния и элюируют смесью гексанов с этилацетатом в соотношении 7:3, затем смесью гексанов с этилацетатом в соотношении 1:1, получая 220 мг (32%) чистого продукта.
Масс-спектрометрия: 498,3 МН+.
1H-ЯМР (ДМСО-d6 при температуре 30°С), δ (м.д.): 7,9-8,0 (м, 3Н); 7,7-7,85 (м, 1Н); 7,6-7,75 (м, 2Н); 7,45-7,55 (с, 1Н); 7,15-7,25 (м, 1Н); 6,9-7,1 (м, 2Н); 5,1-5,25 (т, 1H); 4,1-4,3 (д уш., 1Н); 4,0-4,15 (м, 1Н); 3,8-4,0 (м, 1H); 3,85-3,95 (с, 3Н); 3,6-3,8 (м, 1H); 3,4-3,6 (м, 1H); 3,2-3,4 (H2O плюс размытый сигнал); 1,9-2,3 (м, 2Н); 1,3-1,5 (с, 9Н).
Стадия 7.n)
Стадию 7.n осуществляют согласно методике, аналогичной стадии 5.n. Сырой продукт без дополнительной очистки используют в следующей стадии.
Стадия 7.о)
Стадию 7.о осуществляют согласно методике, аналогичной стадии 5.o.
Масс-спектрометрия: 501,3 МН+.
Получение соединения формулы (VII):
Это соединение, близкое к описанным в Международной заявке на патент РСТ 97/30053 соединениям, может быть получено согласно нижеприводимой схеме синтеза:
Figure 00000015
где
R'=H или СН3;
Cys=цистеин; Cys-al=цистеиналь;
Pen=пеницилламин; Pen-al=пеницилламинилаль;
Boc=трет-бутоксикарбонил;
EDC=N-(3-диметиламинопропил)-N-этилкарбодиимид;
HOBT=гидроксибензотриазол;
Trt=трифенилметил.
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ
С целью пояснения полезности изобретения изучают эффект обработки линии человеческих клеток MCF-7 с помощью следующих соединений:
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразин]дисульфид, обозначаемый в этой части как соединение (I);
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(3-нафтил)-8-(2-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин-7-ил]дисульфид, обозначаемый в этой части как соединение (II);
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин, обозначаемый в этой части как соединение (III);
- соединение формулы:
Figure 00000016
обозначаемое в этой части как соединение (IV);
- 7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-бутил-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидро-имидазо[1,2а]пиразин, обозначаемый в этой части как соединение (V);
- бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиразин]дисульфид, обозначаемый в этой части как соединение (VI);
- соединение формулы:
Figure 00000017
обозначаемое в этой части как соединение (VII).
Методики
Клеточная линия
Клеточные линии MCF-7 (плевральные человеческие клетки; рак молочной железы) были приобретены из Американской коллекции тканевых культур (Роквилл, Мериленд, США).
Определение внутриклеточного количества цАМФ в случае клеток MCF-7
Клетки MCF-7 (2·104 клеток на лунку), посев которых производили в 24-луночные планшеты, культивировали в течение 5 дней в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), дополненной с помощью 10% инактивированной путем нагревания фетальной телячьей сыворотки (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), 50000 единиц/л пенициллина и 50 мг/л стрептомицина (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), и 2 ммоль глутамина (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция). Культуральную среду заменяли после двух промывок средой без сыворотки, дополненной или нет определенными агентами во время, указанное на различных фигурах. Затем при температуре 37°С добавляли агенты, активирующие продуцирование цАМФ. Реакцию прекращали по истечении 30 минут путем удаления среды и быстрого добавления 100 мкл 0,1н. раствора HCl. Эти экстракты замораживали при температуре -80°С до их использования. Концентрацию цДМФ определяли при использовании продажного набора для измерения (номер NEK033 NEN, Les Ulis, Франция), следуя инструкции изготовителя. Радиоактивность определяли с помощью гамма-счетчика (Gamma Master-1277, LKB, Turku, Финляндия).
Определение клеточной пролиферации in vitro
Клетки MCF-7 (3000 клеток на лунку) культивировали в 96-луночных планшетах в 80 мкл модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), дополненной с помощью 10% инактивированной путем нагревания фетальной телячьей сыворотки (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), 50000 единиц/л пенициллина и 50 мг/л стрептомицина (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), и 2 ммоль глутамина (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), производили посев в 96-луночный планшет в день 0. Клетки обрабатывали в день 1 в течение 96 часов возрастающими концентрациями вплоть до 50 мкмоль каждого из тестируемых соединений. По окончании этого периода количественную оценку клеточной пролиферации осуществляли путем колориметрического теста, базируясь на расщеплении соли тетразолия WST1 митохондриальными дегидрогеназами в жизнеспособных клетках, приводящем к образованию формазана (Boehringer Mannheim, Милан, Франция). Эти тесты осуществляли при двукратном повторении с 8 определениями на тестируемую концентрацию. Для каждого тестируемого соединения учитывали включенные в линейную часть сигмоида значения для анализа путем линейной регрессии и использовали для определения ингибирующей концентрации (ИК50).
Определение активности МАР-киназы
Клетки MCF-7 (5105 клеток на лунку) культивировали в шестилуночных планшетах в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), дополненной с помощью 10% инактивированной путем нагревания фетальной телячьей сыворотки (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), смесью антибиотиков из 50000 единиц/л пенициллина и 50 мг/л стрептомицина (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция) и 2 ммоль глутамина (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция). После культивирования в течение 24 часов клетки инкубировали в течение 48 часов в среде, не содержащей сыворотки, для приведения клеток в состояние покоя. Клетки тогда обрабатывали в течение 1 часа либо соединением (I), либо PD98059 (Calbiochem, France Biochem, Meudon, Франция), специфическим ингибитором активации МАР-киназы. Клетки затем стимулировали (или нет) в течение 5 минут с помощью 12,5 нг/мл эпидермального фактора роста (EGF). Реакцию прекращали путем двух промывок с помощью забуференного фосфатом физиологического раствора (Gibco-Brl, Cergy-Pontoise, Франция), не содержащим ни кальция, ни магния, при температуре 4°С и путем добавления 150 мкл буфера для лизиса при температуре 4°С, состав которого следующий: 10 ммоль Трис, 150 ммоль NaCl, 2 ммоль этиленбис(оксиэтиленнитрило)тетрауксусной кислоты, 2 ммоль дитиотреитола, 1 ммоль фенил-метилсульфонилфторида, 2 ммоль ортованадата, 10 мкг/мл лейпептина и 10 мкг/мл апротинина. Количество протеинов, содержащихся в экстрактах, определяли методом Бредфорда (реактивы Biorad, Ivry-Sur-Seine, Франция). Эти экстракты замораживали при температуре -80°С до их использования. Активность МАР-киназы определяли с помощью продажного набора для измерения (номер RPN 84, Amersham, Life Science, Les Ulis, Франция), следуя инструкциям изготовителя. Радиоактивность определяли с помощью сцинтилляционного счетчика фирмы Паккард (Tricarb 5000 СА).
Материал
Вазоинтестинальный пептид (VIP) был приобретен у фирмы Bachem (Voisins le Bretonneux, Франция). Холерный токсин, форсколин, изопротеренол, простагландин E2 и PD 98059 были приобретены у фирмы Calbiochem (France Biochem, Meodon, Франция). Соединения формул (I), (II), (III), (IV), (V), (VI) и (VII) были предоставлены фирмой Biomeasure Inc. (Milford, МА, США). Все эти соединения были использованы в соответствии с рекомендациями их изготовителей.
Результаты
На фигуре 1 показано, что активация аденилатциклазы холерным токсином (200 нг/мл) или форсколином (10 мкмоль) приводит к очень значительному повышению количества цАМФ. Предварительная обработка клеток в течение 30 минут с помощью 30 мкмоль соединения (I) не изменяет продукцию цАМФ, индуцированную прямым активатором аденилатциклазы, форсколином. В то же время продукция цДМФ, стимулированная прямым активатором субъединицы, холерным токсином, сильно ингибируется соединением (I). Это показывает, что аденилатциклаза сама по себе не модифицирована соединением (I) и что оно препятствует образованию гетеротримерного комплекса.
VIP представлен как внеклеточный лиганд рецептора, связанного с протеином G, который стимулирует синтез цАМФ в человеческих клетках рака молочной железы. На фигуре 2 показано, что обработка с помощью VIP человеческих клеток рака молочной железы MCF-7 повышает внутриклеточное количество цАМФ зависящим от концентрации образом. Концентрацию VIP, составляющую 10 нмоль, которая вызывает почти оптимальную продукцию цДМФ, используют для следующих тестов. Эта концентрация согласуется с уже опубликованными данными, касающимися линии человеческих клеток рака молочной железы T47D.
На фигуре 3 показано, что предварительная обработка в течение 30 минут клеток MCF-7, происходящих от культур in vitro, соединением формулы (I) является достаточной для ингибирования зависящим от концентрации образом аккумуляции цАМФ, стимулированной с помощью VIP. Почти полное ингибирование было достигнуто при концентрции 100 мкмоль соединения формулы (I). Эти результаты показывают, что обработка соединением (I) является достаточной для блокирования трансдукции сигнала, на пути прохождения которого используются гетеротримерные протеины G в качестве медиаторов.
На фигуре 4 показано, что обработка в течение часа соединением формулы (I) является достаточной для модификации ответа на VIP. Обработки в течение более длительного времени (8 часов и 24 часа) продолжают ингибировать цАМФ, но основной эффект достигается очень быстро.
Соединение (I) также способно ингибировать образование цАМФ, индуцированное другими агентами, которые стимулируют рецепторы семи трансмембранных доменов. В клетках MCF-7, например, активность аденилатциклазы, очень сильно повышаемая простагландином Е2, ингибируется путем обработки в течение 30 минут соединением (I). Это позволяет предположить, что обработка клеток соединением (I) модифицирует гетеротримерную форму протеинов G за счет диссоциации субъединицы димера β/γ.
Ингибирование стимуляции с помощью VIP не было уменьшено соединениями структуры, аналогичной таковой соединения формулы (I). Как это показано в таблице I, соединения (II), (III), (IV), (V), (VI) и (VII), тестируемые при использовании одной и той же модели, также способны снижать индуцированное с помощью VIP количество цАМФ.
Совокупность этих результатов позволяет предположить, что тестируемые соединения модулируют активность аденилатциклазы за счет модификации гетеротримерной формы протеинов G. Однако известно, что димеры β/γ могут непосредственно активировать эффекторы, приводящие к активации киназ, регулируемых внеклеточными сигналами (ERKs), или МАР-киназ.
На фигуре 6 показано, что обработка клеток в течение 1 часа соединением (I) повышает вдвое базальную активность МАР-киназы. Это позволяет предположить, что путем препятствования образованию гетеротримерного комплекса соединение (I) высвобождает гетеродимер, который сам остается связанным с мембраной и активирует путь ras. Однако на фигуре 7 показано, что после стимуляции в течение 5 минут МАР-киназы эпителиальным фактором роста (EGF) активность фермента увеличивается примерно в 7 раз. Предварительная обработка в течение 1 часа клеток либо соединением (I), либо с помощью PD98059, специфического ингибитора активации МАР-киназы, уменьшает в 2 раза активность МАР-киназы. Эти результаты позволяют предположить, что соединение (I) стимулирует в базальном состоянии путь ras и ингибирует этот же самый путь, если он стимулирован, проявляя таким образом свое антипролиферативное действие.
Действительно, в таблице II показано, что соединения (I), (II), (III) и (IV) способны ингибировать пролиферацию in vitro человеческих опухолевых клеток MCF-7.
Таблица I
Воздействия соединений (I), (II), (III) и (IV), инкубируемых в течение 30 минут, на стимулированную с помощью VIP продукцию цДМФ в клетках MCF-7
Соединение Ингибирование при концентрации 30 мкмоль
(I) 86%
(II) 71%
(III) 59%
(IV) 52%
(V) 68%
(VI) 52%
(VII) 65%
Клетки инкубировали в течение 30 минут в присутствии или нет соединений (I), (II), (III) и (IV) в концентрации 30 мкмоль, которые затем стимулировали с помощью 10-8 моль VIP. Количество цАМФ определяли путем радиоиммунологического анализа. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (n=5 для контроля и n=1 для различных соединений).
Таблица II
Ингибирование роста in vitro клеток MCF-7 соединениями (I), (II), (III) и (IV)
Тестируемое соединение ИК50 (мкмоль)
соединение (I) 9,4
соединение (II) 15,0
соединение (III) 16,1
соединение (IV) 34,6
Результаты ИК50 выражены в мкмоль и представляют собой среднее значение из двух экспериментов.
ФИГУРЫ
Фигура 1: Действие соединения (I) на стимулированную холерным токсином или форсколином продукцию цАМФ в клетках MCF-7.
Клетки инкубировали в течение 30 минут в присутствии или нет соединения (I) в концентрации 30 мкмоль и затем стимулировали либо холерным токсином (200 нг/мл) в течение 90 минут, либо форсколином (10-5 моль) в течение 30 минут. Количество цАМФ определяли путем радиоиммунологического анализа. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (n=3).
Фигура 2: Действие возрастающих концентраций VIP на продукцию цДМФ в клетках MCF-7.
Клетки стимулировали в течение 30 минут с помощью VIP в указанных концентрациях. Количество цАМФ определяли путем радиоиммунологического анализа.
Фигура 3: Действие различных концентраций соединения (I) на стимулированную с помощью VIP продукцию цАМФ в клетках MCF-7.
Клетки инкубировали в течение 24 часов в присутствии возрастающих концентраций соединения (I) и стимулировали затем в течение 30 минут с помощью 10-8 моль VIP. Количество цАМФ определяли путем радиоиммунологического анализа. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (n=3).
Фигура 4: Влияние времени инкубации клеток MCF-7 в присутствии соединения (I) на стимулированную с помощью VIP продукцию цАМФ.
Клетки инкубировали в течение 1, 8 или 24 часов в присутствии или нет соединения (I) в концентрации 30 мкмоль и стимулировали затем с помощью 10-8 моль VIP. Количество цАМФ определяли путем радиоиммунологического анализа. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (n=1).
Фигура 5: Действие соединения (I) на стимулированную с помощью VIP, изопротеренола или простагландина E2 продукцию цАМФ в клетках MCF-7.
Клетки инкубировали в течение 30 минут в присутствии или нет соединения (I) в концентрации 30 мкмоль и стимулировали затем в течение 30 минут либо с помощью 10-8 моль VIP, либо с помощью 10-6 моль изопротеренола, либо с помощью 10-6 моль простагландина Е2. Количество цАМФ определяли путем радиоиммунологического анализа. Данные представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение (n=3).
Фигура 6: Действие соединения (I) на базальную активность МАР-киназы в клетках MCF-7.
Клетки, лишенные сыворотки в течение 48 часов, обрабатывали в течение 1 часа соединением (I) (10 и 50 мкмоль). Активность МАР-киназы определяли в клеточных лизатах и выражали в пмоль включенного Pi в минуту и на 4 мкг протеина (n=3 для контрольных образцов и n=2 для обработанных соединением (I) клеток).
Фигура 7: Действие соединения (I), сравниваемого с PD98059, на активность МАР-киназы в клетках MCF-7.
Клетки, лишенные сыворотки в течение 48 часов, обрабатывали в течение 1 часа либо соединением (I) (10 и 50 мкмоль), либо с помощью PD98059 (10 и 50 мкмоль). Клетки затем стимулировали путем добавления 12,5 нг/мл эпидермального фактора роста в течение 5 минут. Активность МАР-киназы определяли в клеточных лизатах и выражали в пмоль включенного Pi в минуту и на 4 мкг протеина (n=4).

Claims (6)

1. Применение соединений общей формулы
Figure 00000018
Figure 00000019
или
Figure 00000020
в которых R1 означает циклогексилметил, 2-метилпропил, бутил, 1-метилпропил;
R2 означает 2-метоксифенил, 1-нафтил, 2-метилфенил;
R3 означает атом водорода или группу
Figure 00000021
или их фармацевтически приемлемых солей для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина, выбранных среди патологий, связанных со следующими биологическими функциями или нарушениями: обоняние, вкусовые ощущения, световое восприятие, нейротрансмиссия, нейродегенерация, функционирование эндокринных и экзокринных желез, аутокринная и паракринная регуляция, артериальное кровяное давление, эмбриогенез, вирусная инфекция, иммунологические функции, диабет и ожирение.
2. Применение по п.1, отличающееся тем, что используемое соединение выбирают из одного из следующих соединений:
7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-бутил-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1, 2а]пиразин;
бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(метоксифенил)-8-(1-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1, 2а]пиразин]дисульфид;
бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метоксифенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1, 2а]пиразин]дисульфид;
бис-1,1'-[7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(1-нафтил)-8-(2-метилпропил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1, 2а]пиразин-7-ил]дисульфид.
3. Продукт, представляющий собой одно из следующих соединений:
7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-8-(циклогексилметил)-2-(2-метилфенил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1, 2а]пиразин;
7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилметокси)метил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1, 2а]пиразин;
7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(1-фенилметокси)этил-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1, 2а]-пиразин;
7-(2-амино-1-оксо-3-тиопропил)-2-(2-метоксифенил)-8-(фенилсульфонилэтил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1, 2а]пиразин,
или фармацевтически приемлемую соль одного из этих соединений.
4. Продукт по п.3 или фармацевтически приемлемая соль этого продукта в качестве лекарственного средства для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина G.
5. Продукт по п.4, отличающийся тем, что патология связана с одной из следующих биологических функций или нарушений: обоняние, вкусовые ощущения, световое восприятие, нейтротрансмиссия, нейродегенерация, функционирование эндокринных и экзокринных желез, аутокринная и паракринная регуляция, артериальное кровяное давление, эмбриогенез, доброкачественная клеточная пролиферация, онкогенез, вирусная инфекция, иммунологические функции, диабет, ожирение, и доброкачественные и злокачественные пролиферативные заболевания.
6. Фармацевтическая композиция для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина G, включающая в качестве действующего начала соединение по пп.1-4 или фармацевтически приемлемую соль этого соединения.
RU2001103647/15A 1998-07-08 1999-07-05 Применение производных цистеина для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина g RU2268889C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9808731 1998-07-08
FR9808731A FR2780974B1 (fr) 1998-07-08 1998-07-08 Utilisation de derives d'imidazopyrazines pour preparer un medicament destine a traiter les pathologies qui resultent de la formation de la proteine g heterotrimetrique

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2001103647A RU2001103647A (ru) 2002-12-20
RU2268889C2 true RU2268889C2 (ru) 2006-01-27

Family

ID=9528405

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2001103647/15A RU2268889C2 (ru) 1998-07-08 1999-07-05 Применение производных цистеина для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения патологий, возникающих вследствие образования гетеротримерного протеина g

Country Status (17)

Country Link
US (3) US6544995B1 (ru)
EP (1) EP1100801B1 (ru)
JP (1) JP2002520327A (ru)
AR (1) AR019908A1 (ru)
AT (1) ATE459625T1 (ru)
AU (1) AU756268B2 (ru)
CA (1) CA2336846C (ru)
DE (1) DE69942095D1 (ru)
ES (1) ES2341404T3 (ru)
FR (1) FR2780974B1 (ru)
MY (1) MY122419A (ru)
NO (1) NO319633B1 (ru)
NZ (1) NZ509789A (ru)
RU (1) RU2268889C2 (ru)
TW (1) TW561156B (ru)
WO (1) WO2000002881A2 (ru)
ZA (1) ZA200101061B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2523543C2 (ru) * 2009-03-05 2014-07-20 Цзянсу Хэнжуй Медицин Ко., Лтд. Соли производных тетерагидро-имидазо[1,5-a]пиразина, способы их получения и их медицинское применение

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2780974B1 (fr) * 1998-07-08 2001-09-28 Sod Conseils Rech Applic Utilisation de derives d'imidazopyrazines pour preparer un medicament destine a traiter les pathologies qui resultent de la formation de la proteine g heterotrimetrique
US7084135B1 (en) 1998-12-31 2006-08-01 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, Sas Prenyl transferase inhibitors
DE69915514T2 (de) 1998-12-31 2005-01-05 Société de Conseils de Recherches et d'Applications Scientifiques S.A.S. Prenyltransferase-inhibitoren
DE10164711A1 (de) * 2001-03-13 2002-10-17 Schebo Biotech Ag Verwendung von Zuckerphosphaten, Zuckerphosphatanalogen, Aminosäuren und/oder Aminosäureanalogen zur Modulation des Glycolyse-Enzym-Komplexes, des Malat Aspartat Shuttles und/oder der Transaminasen
DE10112925A1 (de) * 2001-03-13 2002-10-02 Erich Eigenbrodt Verwendung von Zuckerphosphaten, Zuckerphosphatanalogen, Aminosäuren, Aminosäureanalogen zur Modulation von Transaminasen und/oder der Assoziation p36/Malat Dehydrogenase
UA74912C2 (en) 2001-07-06 2006-02-15 Merck & Co Inc Beta-aminotetrahydroimidazo-(1,2-a)-pyrazines and tetratriazolo-(4,3-a)-pyrazines as inhibitors of dipeptylpeptidase for the treatment or prevention of diabetes
US20060052382A1 (en) * 2002-12-20 2006-03-09 Duffy Joseph L 3-Amino-4-phenylbutanoic acid derivatives as dipeptidyl peptidase inhibitors for the treatment or prevention of diabetes
FR2879460B1 (fr) * 2004-12-17 2007-02-23 Sod Conseils Rech Applic Associations anti-douleur comprenant un derive de dihydroimidazopyrazine
FR2921658A1 (fr) * 2007-09-27 2009-04-03 Sod Conseils Rech Applic Derives des pyrazolo-pyrazines comme inhibiteurs de proteines g
AR077463A1 (es) 2009-07-09 2011-08-31 Irm Llc Derivados de imidazo[1, 2 - a]pirazina y su uso en medicamentos para el tratamiento de enfermedades parasitarias
CN110691597A (zh) 2017-04-24 2020-01-14 诺华股份有限公司 2-氨基-1-(2-(4-氟苯基)-3-(4-氟苯基氨基)-8,8-二甲基-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8H)-基)乙酮及其组合的治疗方案
CN112480122B (zh) * 2020-11-24 2022-03-22 中山大学 一种四氢咪唑[1,2-a]吡嗪类化合物、组合物及其制备方法与应用

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2075630T3 (es) * 1991-10-11 1995-10-01 Squibb & Sons Inc Uso de inhibidores de la proteina-farnesil transferasa para la preparacion de un medicamento para bloquear la transformacion neoplastica de celulas inducidas por oncogenes ras.
GB9226065D0 (en) * 1992-12-14 1993-02-10 Ici Plc Peptides
US5705686A (en) * 1993-05-18 1998-01-06 University Of Pittsburgh Inhibition of farnesyl transferase
EP0703905A1 (en) * 1993-06-18 1996-04-03 Merck & Co. Inc. Inhibitors of farnesyl-protein transferase
WO1995030012A1 (en) * 1994-04-26 1995-11-09 Cadus Pharmaceutical Corporation Functional expression of mammalian adenylyl cyclase in yeast
CA2159850A1 (en) * 1994-11-03 1996-05-04 Yadagiri Pendri Phosphonosulfonate squalene synthetase inhibitor salts and method
WO1996021456A1 (en) * 1995-01-12 1996-07-18 University Of Pittsburgh Inhibitors of prenyl transferases
FR2736638B1 (fr) * 1995-07-12 1997-08-22 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux inhibiteurs de farnesyl transferase, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US6673927B2 (en) * 1996-02-16 2004-01-06 Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques, S.A.S. Farnesyl transferase inhibitors
AU714560B2 (en) * 1996-04-15 2000-01-06 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Sensitization of cells to radiation and chemotherapy
US5935812A (en) * 1996-09-18 1999-08-10 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human GTP binding protein gamma-3
RU2201931C2 (ru) * 1996-11-20 2003-04-10 Биомежер Инкорпорэйтед Ингибиторы фарнезилтрансферазы и способы ингибирования фарнезилтрансферазы
FR2780974B1 (fr) * 1998-07-08 2001-09-28 Sod Conseils Rech Applic Utilisation de derives d'imidazopyrazines pour preparer un medicament destine a traiter les pathologies qui resultent de la formation de la proteine g heterotrimetrique

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2523543C2 (ru) * 2009-03-05 2014-07-20 Цзянсу Хэнжуй Медицин Ко., Лтд. Соли производных тетерагидро-имидазо[1,5-a]пиразина, способы их получения и их медицинское применение

Also Published As

Publication number Publication date
AU4622299A (en) 2000-02-01
ES2341404T3 (es) 2010-06-18
MY122419A (en) 2006-04-29
ATE459625T1 (de) 2010-03-15
US20060035899A1 (en) 2006-02-16
WO2000002881A2 (fr) 2000-01-20
AR019908A1 (es) 2002-03-20
EP1100801B1 (fr) 2010-03-03
CA2336846A1 (en) 2000-01-20
NO20010029L (no) 2001-01-08
CA2336846C (en) 2010-03-16
US20030162786A1 (en) 2003-08-28
AU756268B2 (en) 2003-01-09
JP2002520327A (ja) 2002-07-09
FR2780974A1 (fr) 2000-01-14
WO2000002881A3 (fr) 2000-03-16
ZA200101061B (en) 2002-10-02
NO319633B1 (no) 2005-09-05
US6544995B1 (en) 2003-04-08
US7034025B2 (en) 2006-04-25
NO20010029D0 (no) 2001-01-03
NZ509789A (en) 2004-01-30
FR2780974B1 (fr) 2001-09-28
EP1100801A2 (fr) 2001-05-23
TW561156B (en) 2003-11-11
DE69942095D1 (de) 2010-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20060035899A1 (en) Use of cysteine derivatives for the preparation of a medicament intended to treat pathologies which result from the formation of the heterotrimeric G protein
RU2060996C1 (ru) Производные аденозина
US5631370A (en) Optically-active isomers of dideoxycarbocyclic nucleosides
BR112020013237A2 (pt) derivados de amino-metilpiperidina como iniciador quinase
HU201329B (en) Process for production of substituated on nitrogen atom of methil-amin group of staurosporen derivatives and medical compositions containing them
KR20010033049A (ko) 포스포디에스테라아제 ｉｖ 억제 작용을 하는 퓨린 유도체
NZ256589A (en) Condensed azepine analogues and medicaments (where a is c, o or s and b is o or s)
US5364881A (en) S-alkyl-isothioureido-amino acids and use thereof
Kisliuk et al. Diastereoisomers of 5, 10-methylene-5, 6, 7, 8-tetrahydropteroyl-D-glutamic acid
US4840948A (en) 1-(hydroxystyrl)-5H-2,3-benzodiazepine derivatives, and pharmaceutical compositions containing the same
EP0252727A1 (en) Novel amino acid derivatives
EP0670317B9 (en) Epoxycyclohexenedione derivative
WO1997043307A1 (en) Compounds inhibiting the association of the pdgf receptor and phosphatidylinositol 3-kinase and their use
AU744528B2 (en) 6,7-disubstituted-4-aminopyrido(2,3-d)pyrimidine compounds
AU2006342055B2 (en) Metabolites of wortmannin analogs and methods of using the same
US5567703A (en) Method for treating HIV infections with dideoxycarbocyclic nucleosides
JPH029819A (ja) 抗血管レン縮剤および血管弛緩剤
WO1997028183A1 (en) Peptide inhibitors of hematopoietic cell proliferation
JP2003503412A (ja) 海洋放線菌に由来する新規のインドロカルバゾールアルカロイド
US5705492A (en) 3'-O-aminoacyl ARA uridines, method of making, and antiviral activity
CN115141150B (zh) 2,4,5-三取代嘧啶羟胺酰衍生物及其制备方法与应用
MXPA00007381A (es) Nuevos macrolidos conteniendo tris(oxazol) citotoxicos.
WO2024044375A2 (en) Antiviral compounds
KR940010294B1 (ko) 신규한 피롤리딘유도체
CN115232076A (zh) 苯氨基取代的嘧啶氨基酸衍生物及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20110706