MXPA00007381A - Nuevos macrolidos conteniendo tris(oxazol) citotoxicos. - Google Patents

Abstract

Se han mostrado HA-1, y TH-2, dos nuevos macrolidos conteniendo tris(oxazol) citotoxicos. Estos compuestos han sido obtenidos mediante modificacion quimica de productos marinos naturales. La estructura de estos compuestos ha sido establecida con base en datos de NIVIR.

Description

NUEVOS MACRÓLIDOS CONTENIENDO TRIS(OXAZOL C1TOTÓX1COS La presente invención se refiere a nuevos macrólidos que contiene tris(oxazol) citotóxicos obtenidos a través de modificación química de productos marinos naturales.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los organismos marinos, especialmente corales blandos, esponjas y tunicados, proporcionan muchos metabolitos secundarios y exhiben un grado variable de actividad biológica (Referencia 1). Una familia importante de estos metabolitos es la familia de macrólidos conteniendo tris(oxazol) citotóxicos; en 1986 se reportó la estructura de los tres primeros macrólidos que contienen tris(oxazol): Ulapualida A y B (Referencia 2) y Kabiramida C (Referencia 3).

Desde entonces, más de 30 macrólidos conteniendo tris(oxazol) adicionales han sido publicados (Referencia 4).

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a nuevos macrólidos conteniendo tris(oxazol) citotóxicos, que tiene la fórmula (I): (D en donde X representa un alquilo inferior; R1 y R2 representan hidrógeno o alquilo inferior; R3a representa hidrógeno y R3b representa o R3a y R3 juntos representan oxígeno; R4 representa hidrógeno, alcoxi inferior o alquilo inferior; R5 representa hidrógeno, carbamoilo o alcanoilo inferior; Rßa representa hidrógeno y R6 representa hidroxi; o R6a y R6 juntos representan oxígeno; R7 representa hidrógeno; alquilo inferior, o hidroximetilo; R8 representa alcoxi inferior o alquilo inferior; Y1 representa hidrógeno o metilo, e y2 representa hidrógeno, o Y1 e Y2 juntos representan un doble enlace.

En las definiciones de los grupos de la fórmula I, el alquilo inferior y la porción de alquilo inferior del alcanoilo inferior o del alcoxi inferior representa un grupo alquilo de cadena recta o ramificada teniendo de 1 a 6 átomos de carbono tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, neopentilo y hexilo. Más particularmente, la presente invención se refiere a HA-1 y TH-2, con las fórmulas estructurales: HA-1 TH-2 Se obtuvieron HA-1 y TH-2 a través de modificación química de la Kabiramida B y C conocidas, respectivamente. HA-1 y TH-2 exhiben actividad antitumoral. En particular, HA-1 y TH-2 exhiben actividad antitumoral contra líneas de célula derivadas de tumores sólidos humanos, tales como carcinoma d pulmón humano, carcinoma de colon humano y melanoma humano, similares, son activos contra otras líneas de célula tumorales, com leucemia y linfoma. Estos compuestos, HA-1 y TH-2 tiene selectividad antitumoral in vitro para tumores sólidos. La presente invención también se refiere a un método par tratar un mamífero afectado por un tumor maligno, sensible a u compuesto de la fórmula I, que comprende administrar al individu afectado una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de l fórmula I o una composición farmacéutica del mismo. La presente invención además proporciona composicione farmacéuticas que contienen, como ingrediente activo, un compuest de la fórmula I, así como un proceso para su preparación. Un aspecto de la invención es un método para preparar l compuestos HA-1 y TH-2, que comprende la modificación química d Kabiramida B y C, respectivamente. Ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen cualqui sólido (tabletas, pildoras, cápsulas, granulos, etc.) o líqui (soluciones, suspenciones o emulsiones) con la formulaci adecuada de administración oral, tópica o parenteral, y pued contener el compuesto puro o en combinación con cualquier vehícu u otros compuestos farmacológicamente activos. Est composiciones necesitan ser estériles cuando se administr parenteralmente. La dosis correcta de una composición farmacéutica q comprende los compuestos de la fórmula I, variará de acuerdo con la formulación farmacéutica, el modo de aplicación y el sitio particular, huésped y tumor que se está tratando. Otros factores como la edad, peso del cuerpo, sexo, dieta, tiempo de administración, velocidad de excreción, condición del huésped, combinaciones de fármaco, sensibilidades a la reacción y severidad de la enfermedad deben ser tomadas en cuenta. La administración puede realizarse continua o periódicamente dentro de la dosis tolerada máxima.

Actividad Antit?morai. Se mantuvieron células en una fase logarítmica de crecimiento en un medio esencial mínimo de Eagle, con sales equilibradas de Earle, con 2.0 mM de L-glutamina, con aminoácidos no esenciales, sin bicarbonato de sodio (EMEM/neaa); suplementado con suero de bovino fetal al 10% (FCS), 10"2 M de bicarbonato de sodio y 0.1 g/l de penicilina-G más sulfato de estreptomicina. Se realizó un procedimiento de clasificación o tamización para determinar y comparar la actividad antitumoral de estos compuestos, utilizando una forma adaptada del método descrito por Bergeron y otros, (Referencia 5). Las células antitumorales empleadas fueron P-388 (cultivo de suspensión de un neoplasma linfoide de ratón DBA/2), A-549 (cultivo de monocapa de un carcinoma de pulmón humano), AT-29 (cultivo de monocapa de un carcinoma de colon humano) y MEL-28 (cultivo de monocapa de un melanoma humano). Las células P-388 fueron sembradas en cavidades de 16 mm a 1 x 104 cél ulas por cavidad en al ícuotas de 1 ml de MEM 5FCS conteniendo la concentración indicada del fármaco. Un grupo separado de cultivo sin fármaco se sembró como un crecimiento de control para asegurar q ue las células permanecieron en fase exponencial de crecimiento. Todas las determinaciones se realizaron por duplicado. Después de 3 d ías de incubación a 37°C, 10% de CO2 en una atmósfera húmeda a 98% , se determinó una IC5o aproximada comparando el crecimiento en las cavidades con el fármaco y el crecimiento en control de cavidades. Las células A-549, HT-29 y MEL-28 fueron sembradas en cavidades de 16 mm a 2 x 1 04 células por cavidad en alícuotas de 1 ml de MEM 10FCS conteniendo la concentración indicada de fármaco. Un grupo separado de cultivo sin fármaco se sem bró como un crecimiento de control para aseg urar que las células permanecieron en una fase exponencial de crecimiento. Todas las determinaciones se realizaron por duplicado. Después de 3 días de incubación a 37°C, 10% de CO2 en una atmósfera húmeda a 98% , las cavidades fueron teñidas con 0.1 % de violeta cristal . Se determinó una IC50 aproximada comparando el crecimiento en las cavidades con fármaco con el crecimiento en el control de cavidades . Los resultados de los ensayos citotóxicos in vitro para HA-1 y TH-2 con las líneas celulares P-388, A-549 , HT-29 y M EL-28 se presentan en el siguiente cuadro. le*,, (µM) Compuesto P-388 A-549 HT-29 MEL-28 HA-1 0.010 0.001 0.001 0.001 TH-2 0.011 0.002 0.002 0.002 Se muestra que estos compuestos, HA-1 y TH-2, con un grupo metil aldehido terminal tienen una selectividad antitumoral in vitro para tumores sólidos como A-549, HT-29 y MEL-28.

Aislamiento de la Kabiramida B y C conocida. Una muestra de una esponja negra no identificada (peso 13.2 kg) se recogió en la Isla de Sichang, en mayo de 1997. Se separó su porción de CH2CI2 (67 g) primero a través de cromatografía de vaporización instantánea de sílice (VFC, elusión escalonada), después a través de Sephadex (CH2-CI2-MeOH, 1-1), y finalmente a través de HPLC de fase inversa (MeOH-H2O-EtOAc, 3-2-1) para dar tanto Kabiramida B (Referencia 6) (24.0 mg) y Kabiramida B (Referencia 3) (35.0 mg).

Síntesis de HA-1. Se preparó el compuesto HA-1 probando Kabiramida B (24.0 mg) en 10 ml de dioxano ácido acuoso (0.5 N HCI-dioxano, 2-3) durante 2 horas a 50°C. El producto crudo se separó en HPLC de fase inversa para dar 6.4 mg (28%) del compuesto HA-1 como un vidrio, y 7.1 mg (30%) de Kabiramida B recuperada.

Los datos para NMR para HA-1 son: Todos los desplazamientos químicos se reportan con respecto a TMS (d = 0 ppm). 1H NMR (CDCI3): d 9.75 (1H, t, J = 2.5 Hz), 8.10 (1H, s), 8.04 (1H, s), 7.59 (1H, s), 7.29 (1H, m), 6.33 (1H, d, J = 16.0 Hz), 5.18 (1H, dt, J = 2.0, 10.0 Hz), 5.02 (1H, dd, J = 8.0, 12.0 Hz), 4.85 (1H, s), 4.15 (1H, m), 3.84 (1H, m), 3.45 (3H, s), 3.37 (3H, s), 3.27 (1H, dd, J=4.0, 7.5 Hz), 3.07 (1H, m), 2.73 (1H, m), 2.62 (1H, m), 2.57 (1H, m), 2.53 (2H, m), 2.45 (1H, m), 2.43 (2H, m), 2.36 (1H, dd, J = 2.0, 8.0 Hz), 2.25 (1H, m), 2.09 (1H, m), 1.85 (3H, m), 1.75 (1H, m), 1.72 (3H, m), 1.46 (2H, m), 1.35 (1H, m), 1.05 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.02 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.01 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.97 (3H, d, J= 7.0 Hz), 0.93 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.83 (3H, d, J = 7.0 Hz). 13C NMR (CDCI3): d 213.3 s, 201.8 d, 172.0 s, 163.9 s, 157.7 s, 156.5 s, 155,4 s, 145.5 d, 141.7 s, 137.2 d, 136.9 d, 135.7 d, 131.1 s, 129.8 s, 115.1 d, 87.5 d, 82.2 d, 78.2 d, 74.4 d, 73.5 d, 70.4 d, 68.2 d, 60.6 g, 57.9 q. 57.6 q, 48.7 t, 46.1 t, 45.3 t, 43.4 t, 42.8 t, 42.7 d, 41-7 t, 37.8 t, 37.3 d, 34.7 d, 34.6 t, 31..0 d, 25.3 t, 25.1 d, 18.3 q (2C), 15.6 q, 13.4 q, 10.6 q, 9.2 q. IR (CHCb) 3470, 3015, 1720, 1650, 1460, 1315, 1215, 915, 665 cnrrX Síntesis de TH-2. Se agitó una mezcla de Kabiramida C (35.0 mg) en 10 mi de 0.5 N HCI-dioxano (2-3) a 50°C durante 2 horas. La mezcla se dividió entre EtOAc y agua, y la capa orgánica se concentró. El producto crudo se separó en HPLC de fase inversa (MeCN-H2O-EtOAc, 6-4-1) para dar 11.0 mg (33%) del compuesto TH-2 como un vidrio, y 18.3 mg (52%) de Kabiramida C recuperada.

Los datos NMR para TH-2 son: Todos los desplazamientos químicos son reportados con TMS (d = 0 ppm). 1H NMR (CDCI3): d 9.75 (1H, t, J = 2.3 Hz), 8.09 (1H, s), 8.03 (1H, s), 7.58 (1H, d, J = 1.0 Hz), 7.46 (1H, ddd, J = 16.0, 9.5, 5.0 Hz), 6.29 (1H, d, J = 16.0 Hz), 5.32 (1H, m), 5.17 (1H, t, J = 10.5 Hz), 4.80 (1H, s), 3.84 (1H, m), 3.67 (1H, m), 3.45 (3H, s), 3.43 (3H, s), 3.33 (3H, s), 3.27 (1H, m), 3.01 (1H, m), 2.81 (1H, m), 2.72 (1H, t, J = 8.0 Hz), 2.59 (1H, dd, J = 14.3, 9.7 Hz), 2.52 (1H, m), 2.44 (1H, m), 2.41 (1H, m), 2.36 (1H, m), 2.32 (1H, m), 2.15 (1H, m), 1.85 (1H, m), 1.46 (1H, m), 1.34 (1H, m), 1.04 (3H, d, J = 6.7 Hz), 1.01 (3H, d, J = 7.0 Hz), 0.99 (3H, d, J= Hz), 0.94 (3H, d, J= 7.0 Hz), 0.87 (3H, d, J=6.4 Hz), 0.83 (3H, d, J = 7.0 Hz). 13C NMR (CDCI3): d 213.4 s, 201.8 d, 171.6 s, 163.2 s, 157.3 s, 156.4 s, 155.4 s, 142.0 d, 141.4 s, 137.1 d, 136.8 d, 135.6 d, 131.1 s, 129.9 s, 115.5 d, 87.4 d, 82.0 d, 79.2 d, 78.3 d, 74.0 d, 73.3 d, 69.3 d, 60.6 q, 57.9 q, 57.6 q, 57.5 q, 48.6 t, 46.0 t, 45.0 t, 43.6 t, 42.9 t, 41.7 t, 40.4 d, 37.3 d, 34.5 d, 33.9 t, 32.9 t, 30.9 d, 25.0 d (2C), 18.2 q (2C), 15.5 q, 13.3 q, 10.7 q, 8.4 q.

Referencias 1. Faulkner, D. Nat. Prod. Rep. 1997, 14, 259-302 y referencias que ahí se encuentran. 2. Scheuer, PJ. y otros, J. Am. Chem. Soc. 1986, 108, 846-847. 3. Fusetani, N. y otros, J. Am. Chem. Soc. 1986, 108, 847-849. 4. Marine Biotechnology, Vol. 1, Ed. By David H. Attaway y Oskar R. Zaborsky, Plenum Press, New York 1993, pp. 211-213, y referencias que ahí se presentan. 5. Raymond J. Bergeron, Paul F. Cavanaugh, Jr., Steven J. Kline, Robert G. Hughes, Jr., Gray T. Eliot and Cari W. Porter, Antineoplastic and antiherpetic activity of spermidine catecholamide iron chelators. Biochem. Bioph. Res. Comm. 1984, 121, 848-854. 6. Fusetani, N. y otros, J. Org. Chem. 1989, 54, 1360-1363.

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES Un compuesto que tiene la fórmula (I): (D en donde X representa un alquilo inferior; R1 y R2 representan hidrógeno o alquilo inferior; R3a representa hidrógeno y R3b representa o R3a y R3b juntos representan oxígeno; R4 representa hidrógeno, alcoxi inferior o alquilo inferior; R5 representa hidrógeno, carbamoilo o alcanoilo inferior; Rßa representa hidrógeno y R6b representa hidroxi; o R6a y Rßb juntos representan oxígeno; R7 representa hidrógeno, alquilo inferior, o hidroximetilo; R8 representa alcoxi inferior o alquilo inferior; Y1 representa hidrógeno o metilo, e y2 representa hidrógeno, o Y1 e Y2 juntos representan un doble enlace; en las definiciones de los grupos de la fórmula I, el alquilo inferior y la porción de alquilo inferior del alcanoilo inferior o del alcoxi inferior representa un grupo alquilo de cadena recta o ramificada teniendo de 1 a 6 átomos de carbono tales como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, neopentilo y hexilo.
2. 2.- Un compuesto HA-1, de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene la siguiente fórmula: HA-1
3. 3.- Un compuesto TH-2, de acuerdo con la reivindicación 1, que tiene la siguiente fórmula: TH-2
4. 4.- Un método para tratar un mamífero que padece de un tumor maligno sensible a un compuesto de la fórmula (I), como se definió en la reivindicación 1, el cual comprende administrar al individuo afectado una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto o una composición farmacéutica del mismo.
5. 5.- Un método para tratar un mamífero afectado por un tumor maligno sensible a HA-1, como se define en la reivindicación 2, que comprende administrar al individuo afectado una cantidad terapéuticamente efectiva de HA-1 o una composición farmacéutica del mismo.
6. 6.- Un método para tratar un mamífero afectado por un tumor maligno sensible a TH-2, como se define en la reivindicación 3, que comprende administrar al individuo afectado una cantidad terapéuticamente efectiva de TH-2 o una composición farmacéutica del mismo.
7. 7.- Una preparación farmacéutica que contiene como ingrediente activo un compuesto de la fórmula (I), como se definió en la reivindicación 1.
8. 8.- Una preparación farmacéutica que contiene como ingrediente activo HA-1 (como se define en la reivindicación 2), o TH-2 (como se define en la reivindicación 3).
9. 9.- Un método para tratar un mamífero que padece de un tumor maligno, el cual comprende administrar al individuo afectado una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula (I), como se definió en la reivindicación 1, junto con otro u otros compuestos antitumorales.
10. 10.- Un método para preparar HA-1 (como se definió en la reivindicación 2) o TH-2 (como se definió en la reivindicación 3), que consiste de una modificación química de la Kabiramida B y C conocidas, respectivamente. R ES U ME N Se han mostrado HA-1 y TH-2, dos nuevos macrólidos conteniendo tris(oxazol) citotóxicos. Estos compuestos han sido obtenidos mediante modificación química de productos marinos naturales. La estructura de estos compuestos ha sido establecida con base en datos de NMR .