JP4511027B2 - 新規な細胞毒性トリス（オキサゾール）含有マクロライド - Google Patents

Description

【０００１】
本発明は、天然海産物の化学的修飾によって得られる新規な細胞毒性トリス（オキサゾール）含有マクロライドに関する。
【０００２】
（発明の背景）
海洋生物、特に軟珊瑚（soft corals）、スポンジおよび尾索類動物は、多くの二次代謝産物をもたらし、そして色々な程度の生物活性を示す（文献１）。これらの代謝産物の重要な一群は、細胞毒性のあるトリス（オキサゾール）含有マクロライド族である；それについて、１９８６年に、３種の第一トリス（オキサゾール）含有マクロライド、即ちウラプアライド（Ulapualide）ＡおよびＢ（文献２）並びにカビラミド（Kabiramide）Ｃ（文献３）の構造が報告された：
【化５】

【０００３】
そのとき以来、３０種を越える追加のトリス（オキサゾール）含有マクロライドが公にされている（文献４）。
【０００４】
（発明の概要）
本発明は、式（Ｉ）：
【化６】

（Ｉ）
【０００５】
を有する、新規な、細胞毒性のあるトリス（オキサゾール）含有マクロライドに関する。但し、上記の式において、Ｘは低級アルキル基を表し；Ｒ¹およびＲ²は水素または低級アルキル基を表し；Ｒ^3aは水素を表し、そしてＲ^3bは
【化７】

【０００６】
を表すか、またはＲ^3aとＲ^3bとが一緒になって酸素を表し；Ｒ⁴は水素、低級アルコキシ基または低級アルキル基を表し；Ｒ⁵は水素、カルバモイル基または低級アルカノイル基を表し；Ｒ^6aは水素を表し、そしてＲ^6bはヒドロキシ基を表すか、またはＲ^6aとＲ^6bとが一緒になって酸素を表し；Ｒ⁷は水素、低級アルキル基またはヒドロキシメチル基を表し；Ｒ⁸は低級アルコキシ基または低級アルキル基を表し；ｙ¹は水素またはメチル基を表し、そしてｙ²は水素を表すか、またはｙ¹とｙ²とが一緒になって二重結合を表す。
【０００７】
式（Ｉ）中の基の定義において、低級アルカノイル基または低級アルコキシ基の低級アルキル基および低級アルキル部分は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチルおよびヘキシルのような、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝アルキル基を意味する。
【０００８】
さらに詳しくは、本発明は構造式：
【化８】

【０００９】
を有するＨＡ−１およびＴＨ−２に関する。
【００１０】
ＨＡ−１およびＴＨ−２は、公知のカビラミドＢおよびＣそれぞれの化学的修飾（chemical modification）によって得られた。
【００１１】
ＨＡ−１およびＴＨ−２は抗腫瘍活性を示す。特に、ＨＡ−１およびＴＨ−２は、ヒト肺癌、ヒト結腸癌およびヒト黒色腫等のようなヒトの充実性腫瘍に由来する細胞系統に対して抗腫瘍活性を示し、またそれらは白血病やリンパ腫のような他の腫瘍細胞系統に対しても活性である。これらの化合物、ＨＡ−１およびＴＨ−２は充実性腫瘍に対して試験管内抗腫瘍選択性を有する。
【００１２】
本発明は、また、式（Ｉ）を有する化合物に対して感受性のある悪性腫瘍に罹患している哺乳動物の治療法であって、罹患している個体に、治療上有効な量の式（Ｉ）を有する化合物またはその製剤組成物を投与することから成る、上記の治療法に関する。
【００１３】
本発明は、さらに、式（Ｉ）を有する化合物を活性成分として含有している製剤組成物、およびその調製法を提供する。
【００１４】
本発明の更なる面は、カビラミドＢおよびＣをそれぞれ化学的に修飾することから成る化合物ＨＡ−１およびＴＨ−２の製造法である。
【００１５】
製剤組成物の例に、経口、局所また非経口投与に適した処方を持つ任意の個体（錠剤、ピル、カプセル、顆粒等々）または液体（溶液、懸濁液またはエマルジョン）があり、そしてそれらは純粋な化合物を含有していてもよいし、或いはその純粋な化合物を任意のキャリアーまたは他の薬理学的に活性な化合物との組み合わせで含有していてもよい。これらの組成物は非経口投与するときは無菌であることが必要であることもある。
【００１６】
式（Ｉ）を有する化合物を含んで成る製剤組成物の正しい用量は、製剤処方、適用様式、並びに治療される特定の位置、宿主および腫瘍に従って変わる。年齢、体重、性別、食事、投与時間、排泄速度、宿主の状態、薬剤の組み合わせ、反応感受性およびその病気の深刻さのような他の因子も考慮されることになろう。投与は最大耐量以内で連続的にまたは周期的に行うことができる。
【００１７】
抗腫瘍活性
細胞を、アールの平衡塩類、２．０ｍＬのＬ−グルタミン、非必須アミノ酸を含み、重炭酸ナトリウムを含まないイーグルの最少必須培養液（EMEM/neaa）にして；１０％のウシ胎児血清（FCS）、１０^-2Ｍの重炭酸ナトリウムおよび０．１ｇ／Ｌのペニシリン−Ｇ＋硫酸ストレプトマイシンが追加された同培養液中における成長の対数的相（logarithmic phase of growth）中に保持した。
【００１８】
バージェロン（Bergeron）等が述べる方法（文献５）の修正法を用いてスクリーニング法を実施し、これら化合物の抗腫瘍活性を測定および比較した。使用した抗腫瘍細胞は、Ｐ−３８８（DBA/2マウスからのリンパ球系新生物の懸濁培養）、Ａ−５４９（ヒト肺癌の単層培養）、ＨＴ−２９（ヒト結腸癌の単層培養）およびMEL−２８（ヒト黒色腫の単層培養）であった。
【００１９】
Ｐ−３８８細胞を、１６ｍｍの複数のウエルに、薬剤を指定濃度で含むMEM 5FCSの１ｍＬアリコートそれぞれにおいて細胞１×１０⁴個／ウエルで播腫した。薬剤を含まない培養物の別の組を、対照成長として、細胞が成長の指数的相（exponential phase of growth）中に残るのを保証するように播腫した。測定は全て２回ずつ行われた。９８％湿度の雰囲気中で３７℃、１０％ＣＯ₂でインキュベーションして３日後に、薬剤を含むウエル中での成長を対照ウエル中での成長と比較することによって、おおよそのＩＣ₅₀を求めた。
【００２０】
Ａ−５４９、ＨＴ−２９およびMEL−２８細胞を、１６ｍｍの複数のウエルに、薬剤を指定濃度で含むMEM 10FCSの１ｍＬアリコートそれぞれにおいて細胞２×１０⁴個／ウエルで播腫した。薬剤を含まない培養物の別の組を、対照成長として、細胞が成長の指数的相中に残るのを保証するように播腫した。測定は全て２回ずつ行われた。９８％湿度の雰囲気中で３７℃、１０％ＣＯ₂でインキュベーションして３日後に、それらウエルを０．１％のクリスタル・バイオレットで染色した。薬剤を含むウエル中での成長を対照ウエル中での成長と比較することによって、おおよそのＩＣ₅₀を求めた。
【００２１】
ＨＡ−１およびＴＨ−２の、細胞系統Ｐ−３８８、Ａ−５４９、ＨＴ−２９およびMEL−２８による試験管内細胞毒性検定の結果を、次の表に与える：
【００２２】
【表１】

【００２３】
アルデヒドメチル末端基を有するこれらの化合物ＨＡ−１およびＴＨ−２は、Ａ−５４９、ＨＴ−２９およびMEL−２８のような充実性腫瘍について試験管内抗腫瘍選択性を有することが示さる。
【００２４】
公知のカビラミドＢおよびＣの単離
シーチアン島（Sichang Island）で１９９７年５月に未同定のブラック・スポンジ（black sponge）の試料（湿潤、１３．２ｋｇ）を採集した。そのCH₂Cl₂部分（６７ｇ）を、まずシリカ真空フラッシュクロマトグラフィー（VFC、段階的溶離）で、次いでセファデックス（Sephadex）（CH₂Cl₂-MeOH、１−１）で、最後に逆相HPLC（MeOH-H₂O-EtOAc、３−２−１）で分離してカビラミドＢ（文献６）（２４．０ｍｇ）とカビラミドＣ（文献３）（３５．０ｍｇ）の両者を得た。
【００２５】
ＨＡ−１の合成
化合物ＨＡ−１を、カビラミドＢ（２４．０ｍｇ）を１０ｍＬの酸性ジオキサン水溶性（０．５Ｎ HCl−ジオキサン、２−３）中で５０℃において２時間処理することによって製造した。その粗生成物を逆相HPLCで分離してガラスとしての化合物ＨＡ−１：６．４ｍｇ（２８％）と、回収カビラミドＢ：７．１ｍｇ（３０％）を得た。
【００２６】
ＨＡ−１のNMRデーター：
化学シフトは全てTMS（δ＝０ｐｐｍ）に対して報告される。
【００２７】

【００２８】

【００２９】

【００３０】
ＴＨ−２の合成
カビラミドＣ（３５．０ｍｇ）の、０．５Ｎ HCl−ジオキサン（２−３）１０ｍＬ中混合物を５０℃で２時間攪拌した。この混合物をEtOAcと水との間に分配し、その有機層を濃縮した。その粗生成物を逆相HPLC（MeCN-H₂O-EtOAc、６−４−１）で分離してガラスとしての化合物ＴＨ−２：１１．０ｍｇ（３３％）と、回収カビラミドＣ：１８．３ｍｇ（５２％）を得た。
【００３１】
ＴＨ−２のNMRデーター：
化学シフトは全てTMS（δ＝０ｐｐｍ）に対して報告される。
【００３２】

【００３３】

【００３４】
（文献）
１．フォークナー，Ｄ（Foulkner, D.）のNat. Prod. Rep., 1997, 14, 259-302およびその中の文献。
２．ショイアー，Ｐ．Ｊ．（Scheuer, P. J.）等のJ. Am. Chem. Soc., 1986, 108, 846-847。
３．フセタニ，Ｎ(Fusetani, N.)等のJ. Am. Chem. Soc., 1986, 108, 847-849。
【００３５】
４．Marine Biotechnology, 第一巻, ダビッド Ｈ．（David H.）、アッタウエイ（Attaway）およびオスカー Ｒ．ザボルスキー（Oskar R. Zaborsky）編、プレナム・プレス社（Plenum Press）、ニュー・ヨーク（New York）、１９９３年、２１１−２１３頁、およびその中の文献。
【００３６】
５．レイモンド Ｊ．バージェロン（Raymond J. Bergeron）、ポール Ｆ．カバノーフ，Ｊｒ．（Paul F. Cavanaugh, Jr.）、スチーブン Ｊ．クライン（Steven J. Kline）、ロバート Ｇ．ヒューゲス，Ｊｒ．（Robert G. Hughes, Jr.）、ガリー Ｔ．エリオット（Gary T. Elliot）およびカール Ｗ．ポーター（Carl W. Porter）著・スペルミジンカテコールアミド鉄キレート化剤の抗腫瘍および抗ヘルペス活性（Antineoplastic and antiherpetic Activity of spermidine catecholamide iron chelatiors）、Biochem. Bioph, Res. Comm., 1984, 121, 848-854。
【００３７】
６．フセタニ，Ｎ（Fusetani, N.）等のJ. Org. Chem., 1989, 54, 1360-1363。

Claims (8)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   を有する化合物：但し、上記の式において、Ｘはメチレン基を表し；Ｒ¹は水素またはメチル基を表し；Ｒ^２はメチル基を表し；Ｒ^3aは水素を表し、そしてＲ^3bは
   

   

   を表すか、またはＲ^3aとＲ^3bとが一緒になって酸素を表し；Ｒ⁴はヒドロキシ基またはメトキシ基を表し；Ｒ⁵は水素、カルバモイル基またはＣ₁〜Ｃ₆アルカノイル基を表し；Ｒ^6aは水素を表し、そしてＲ^6bはヒドロキシ基を表すか、またはＲ^6aとＲ^6bとが一緒になって酸素を表し；Ｒ⁷は水素、メチル基またはヒドロキシメチル基を表し；Ｒ⁸はメチル基またはメトキシ基を表し；ｙ¹は水素またはメチル基を表し、そしてｙ²は水素を表すか、またはｙ¹とｙ²とが一緒になって二重結合を表す。式（Ｉ）中の基の定義において、Ｃ₁〜Ｃ₆アルカノイル基のＣ₁〜Ｃ₆アルキル部分は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチルおよびヘキシルのような、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝アルキル基を意味する。
2. 次式：
   

   

   を有する、請求項１に記載の化合物、ＨＡ−１。
3. 次式：
   

   

   を有する、請求項１に記載の化合物、ＴＨ−２。
4. 請求項１で定義される式（Ｉ）を有する化合物に対して感受性のある悪性腫瘍に罹患している哺乳動物を処置するための医薬組成物であって、治療上有効な量の該化合物を、活性成分として含有する、上記の医薬組成物。
5. 請求項２で定義されるＨＡ−１に対して感受性のある悪性腫瘍に罹患している哺乳動物を処置するための医薬組成物であって、治療上有効な量のＨＡ−１を活性成分として含有する、上記の医薬組成物。
6. 請求項３で定義されるＴＨ−２に対して感受性のある悪性腫瘍に罹患している哺乳動物を処置するための医薬組成物であって、治療上有効な量のＴＨ−２を活性成分として含有する、上記の医薬組成物。
7. 請求項１で定義される式（Ｉ）を有する化合物を活性成分として含有する医薬製剤。
8. ＨＡ−１（請求項２で定義）またはＴＨ−２（請求項３で定義）を活性成分として含有する医薬製剤。