JPS6256493A - カビラマイド類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は抗カビ作用および抗腫瘍作用を有するマクロラ
イド化合物であるカビシマイド類に関する。

（従来の技術） 海洋生物およびその代謝物からは、これまでに数多、く
の生理活性物質が単離されている。しかし、マクロライ
ド系化合物の報告はほとんどなされて（・ない。本発明
者等は、軟体動物であるラミウシ類（Ｎｕｄｉｂｒａｎ
ｃｈｉａ　）の海洋生物圧着目し、ラミウシ殊にその卵
の抽出成分の中から顕著な抗カビ作用および抗腫瘍作用
を示す物質を単離し、その化学溝造を解明し本発明を完
成した。

（発明が解決しようとする問題点および解決手段）本発
明は１次の一般式で示される新規マクロライド系化合物
である。

（式中　Ｒ１は水素原子またはメチル基を。

Ｒ２は水素原子、アセチル基またはカ ルバモイル基を。

Ｒ３はメチル基またはヒドロキシメチ ル基を。

Ｒ４は水素原子または低級アシル基を それぞれ意味する。） 本発明の化合物の代表的なものを挙げると次の通りであ
る。

ＱカビラマイドＡ ＯカビラマイドＤ （製造法） 本発明の化合物は、ラミウシの放出卵をメタノールで抽
出し、抽出物のクロロホルム可溶性成分の中から分離す
ることができる。

本つミウシは１石垣島用平湾付近に分布しており、これ
らの放出卵を採取して本発明の化合物の製造原料とする
ことができる。放出卵：二均−に磨砕したのち、抽出す
る。抽出は１通常市販のメタノールを用（・て常温で行
う。抽出液を減圧濃縮し、濃縮成分の中からクロロホル
ム可溶成分を抽出する。これをシリカゲルを充填したカ
ラム（富士デピソン社製、２Ｘ３０ｃｍ）クロロホルム
−メタノール混液を用いて展開し、　　１００〜４００
　ｍｌに溶出した両分から組成のカビシマイド類を得る
。

こうして得られた組成カビシマイド類は、必要によりさ
らＫＯＤＳカラム（富士デビソン社製）など処理したの
ち、逆相液体クロマトグラフィー（たとえば、山村化学
社製ＯＤｓカラム、５μｍ。

２Ｘ３０ｃｍ）を用いて分離精製し、純粋なカビラマイ
トＡ、　Ｂ、　Ｃ，ＤおよびＥを得る。

こうして単離されたカビシマイド類に塩基性条件で酢酸
、プロピオ／酸等の低級カルボン酸またはその反応性誘
導体（酸無水物、酸）・ライド等）を作用させることに
より、２５位の水酸基がアシル化された２５−０−アシ
ルカビシマイド類を得ることができる。

次に精製された目的化合物の理化学的性状を示す。

ｉｌｌ　　カビラマイドＡ （１）分子量　９５７ （１１）　　比旋光度［α］　％３　＋　６°（ｃ＝０
．１．クロロホルム）（１１１）紫外線吸収スペクトル ＵＶλＭ″′。Ｈ２４５ｎｍ　（ｉ　＝　２５，０００
　）（ＩＶ）’ＨＮＭＲスペクトル　第１表および第１
図（ｖ）Ｉ３ＣＮＭＲスペクトル　　第２表（Ｖｉ）　
　（’Ｈ，ＩＨ）　Ｃ０８Ｙスペクトル　第２図（２）
　　カビラマイドＢ （１）分子量　９２７ （１１）　　比旋光度［α］甘せ８°（ｃ＝ｏ、ｌ、ク
ロロホルム）ｃ＋ｉ１）紫外線吸収スペクトル ＵＶλ””　　２４５　ｎｍ　（ｔ２４，０００　）（
ＩＶ）　　’ＨＮＭＲスペクトル　第１表および第３図
（Ｖ）　１３ＣＮＭＲスペクトル　第２表（Ｖｌ）　　
（’Ｈ，ＩＨ）　ｃｏｓｙスペクトル　第４図（３）　
　カビラマイドＣ （１）分子量　９４１ ＜ｒｒ＞　　比旋光度［α］甘せ２０°（ｃ＝０．１．
クロロホルム）（ｊｉｉ）　　紫外線吸収スペクトル ＵＶλ”０１４２４５　ｎｍ　（ｔ　２６，０００　）
（ＩＶ）　’ＨＮＭＲスペクトル　第１表および第５図
くい１３ｃ　ＮＭＲスペクトル　第２表および第６図（
Ｖｉ）（’Ｈ，’Ｈ）ｃｏｓｙスペクトル第７図（ｖｉ
Ｄ　　（Ｊ＋、ｔ３ｅ）　　ｃｏｓｙスペクトル第８図
（ａｌおよび（ｂｌ（ＶｉｉＤ　　赤外線吸収スペクト
ル（Ｃｍ　−＋　）３４５０、３３５０．３１５０　（
以上水酸基およびＮＨ基）１７２０、１６５０　（以上
エステルおよびアミド）（ＩＸ）分子式　ｃ４ａ　Ｈ？
Ｉ　Ｎ５９１４（ＦＡＢマススペクトルより） （４）　　カビラマイドＤ （１）分子量　８９８ （１ｊ）　　比旋光度［α］甘　−５°（ｃ　＝０．１
　、クロロホルム）（ｌｉｉ）　　紫外線吸収スペクト
ル ＵＶλＭ″′。Ｈ２４５ｎｍ　（ｅ　＝２３，０００　
）（＋ｖ）　　ＩＨＮＭＲスペクトル　第１表および第
９図（Ｖ）　１３ＣＮＭＲスペクトル　第２２表（Ｖり
　　（’Ｈ，’Ｈ）　Ｃ０８Ｙ　スペクトル　第１Ｏ図
（５）　　カビラマイドＥ （＋）　　分子量　９４０ （１１）　　比旋光度［α］′Ｄ′−２０°（ｃ＝０．
１．クロロホルム）（Ｉｉｉ）　　紫外線吸収スペクト
ル ＵＶλ”０Ｈ２４５ｎｍ　（ｇ　＝２５，０００　）（
ＩＶ）　ＩＨＮＭＲスペクトル　第１表および第１１図
（Ｖ）　　（’Ｈ，’Ｈ）　　Ｃ０８Ｙスペクトル　第
１２図（有用性） 本発明の化合物は、顕著な抗カビ活性および抗腫瘍活性
を示すので、抗カビ剤、抗腫瘍剤トして有用である。た
とえばカビラマイドＣのマウス白血病細胞（Ｌ　−１２
１０およびＰ　３８８　）を用（・た細胞増殖抑制活性
を示すと以下の通りである。

０測定方法 Ｐ３８８細胞を１０％牛脂仔血渭を含むＲＰＭ１１６４
０培養液に加えた溶液、又はＬ　−１２１０細胞を１０
％牛新生仔血清を含むＲＰＭＩ　１６４０培養液に加え
た溶液を用℃・た。夫々の培養液中の細胞数を両細胞共
１×１０５個／ｍｌに調整し、そのｌ　ｒｎｌをプラス
ティック　ウェルに分注した。カビラマイドＣはジメチ
ルスルホキシド（ＪＥ下ＤＭＳＯと略する）に溶解し、
ＤＭＳＯの最終濃度が０．４容量％でカビラマイドＣが
所定濃度になるよう；て、各細胞浮遊培養液て添加した
後、５％炭酸ガスな含む空気中で３日間培養した。対照
として、ＤＭＳＯｏ、４容量％を加えた細胞浮遊培養液
も同様に培養した。培養後、トリバンプルー染色法で染
色し、生細胞数を計測して対照に対する抑制率からＩ　
Ｃ，ｏ値（５０％細胞増殖抑制濃度）−を求めた。対照
薬としてマイトマイシ／Ｃを用〜・な。結果を第３表に
示す。

第３表二カビラマイドＣのマウス白血病細胞Ｐ３８８又
はＬ−１２１０に対する細胞増殖抑制作用本発明によっ
て得られたカビシマイド類を医薬として使用するには、
抗カビ作用又は抗腫瘍効果を発現するのに都合のよい形
で投与する。

カビシマイド類はそのままの状態で医薬となり得るが、
製薬上の慣習に従って製薬的に許容し得る希釈剤及び／
又は他の薬理作用物質との混合物として組成された状態
でも提供され得る。

従って本発明のカビシマイド類は、経口的又は非経口的
に投与するための形態を適宜に採り得る。例えば散剤、
顆粒２錠剤、糖衣錠、カプセル、ピル、坐剤、懸濁剤、
液剤、乳剤、注射剤。

エアゾール剤である。

本発明のカビシマイド類の投薬量は、感受性差２年令、
性別１体重、投与方法、投与の時期。

間隔、病状１体調、医薬製剤の性質、調整の種類等積々
の原因によって変動する。

（実施例） つぎに実施例を挙げて本発明の化合物およびその製造法
をさらに具体的に説明する。

実施例　１、 用平湾（沖縄系１石垣市）で採集したラミウシ放出部（
ピンク色乃至赤紫色のバラの花形様の直径約５　ａｍの
卵）　１９１ｒＭ＋　２２０ｇを磨砕後５００　ｔｎｌ
のメタノールで３回攪拌抽出、抽出物を濃縮後りｏ。

ホルムに溶かし、シリカゲルカラム（富士デビソン社製
２　Ｘ　３０　ａｍ　）　Ｔｌｃ添加、クロロホルム−
メタノール（９８：　２　）で展開した。１３５〜３７
５　ｒｎｔに溶出した画分を濃縮後９０％メタノールに
溶かし、　ＯＤＳカラム（富士デビソン社製２Ｘ５ｃｍ
）に添加、同溶媒で展開し溶出物を集めた。最後に、こ
の溶出物を逆相高速液体クロマトグラフィー（山村化学
社製、ＯＤＳカラム、　　５μｍ、　　２Ｘ３０ｃｍ、
溶媒７８％メタノール）を用いて精製し第１３図に示す
溶出画分からカビラマイドＡ、　Ｂ、　Ｃ，Ｄ、および
Ｅを得た。

いずれも無色、非結晶性の固体でありそれらの埋化学的
性状の詳細は前記の通りである。

本発明の化合物の化学構造は次の様にして決定された。

これをカビラマイドＣについて説明する。

なお、カビラマイドＡ、　Ｂ、　ＤおよびＥの化学構造
は、Ｃに準じて決定した。

ＱカビラマイドＣの構造決定 カビラマイドＣは非結晶性の無色固体 （［α］＾＋２０ζ　ｃ　＝　０．１．クロロホルム）
で２２０から２８０ｎｍにかけてブロードな紫外部吸収
（２ｍ１ｘ２４５　ａｍ、　１ｇ＝２６，０００　）を
示した。ＩＲスペクトルでは、　３４５０．３３５０お
よび３１５０　ａｍ−＋　Ｋ　ＯｆｔとＮｕ基。

１７２０　ト１６５０　Ｃｍ−ｒにエステルおよびアミ
ドの吸収が認められた。カビラマイドＣ３の分子式は＋
３ｃ　ＮＭＲと高分解能ＦＡＢマススペクトル（ＭＷ”
　ｍ／ｚ　９４２．５０１６゜Ｃ４８Ｈ？２ＮＩＯ１４
＋Δ−０，５ｍｍｕ　）からＣ４１１Ｈ？ｌＮ５Ｏ１４
と決定した。

カビラマイドＣは高速液体クロマトグラフィーにおいて
、シャープで対称なピークとして得られるにもかかわら
ず、ｌＨおよび”ＣＮＭＲにおいて数本のピークは１：
２のダブレットとして現われた。

このことから、カビラマイドＣは２つの゛ゆっくり相互
変換する立体配座を取ることが推察された。

ＮＭＲから、４つのＯ−メチル、１つのＮ−メチルおよ
び６つの２級メチル基；７つのメチレ／基；７つのＯ−
メチンと６つのＣ−メチン基；２つの２置換オレフイン
、３つの複素芳香環プロトン。

１つのギ酸アミド、１つのケトン、１つの水酸基および
１つのアミノ基が認められた。

ＩＩ　ＮＭＲにお（・て、δ１．６５　（２Ｈ）　、　
１．８３　（２Ｈ）　。

２．４０（３Ｈ）および２．４９（２）Ｉ）のシグナル
が複雑に重なっていたため、スピン系の解読に困難が予
想されたが、２次元（’Ｈ＋　”Ｃ）　Ｃ０８Ｙスペク
トルによりてメチン基とメチレン基を区別することがで
き。

さらπ（’Ｈ，’Ｈ）　Ｃ０８Ｙスペクトルを用いてす
べてのプロトンのつながりを明らかにすることができた
。

部分構造五 部分構造五はファニング島（Ｆａｎｎｉｎｇ島）の藍藻
トリボスリックス　コンクルテイナタ　コロラタ（Ｔｏ
ｌｙｐｏｔｈｒｔｘ　ｃｏｎｇｌｕｔｉｎａｔａ　ｖａ
ｒ、ｃｌｏｒａｔａ　）から単離されたトリトシン（ｔ
ｏｌｙｔｏｘｉｎ　）の末端部分と同一でありた。既に
述べたように０−メチル基以外のすべての炭素シグナル
と１．２．５位およびＮ−メチルギ酸アミドのＩＨシグ
ナルが強度比１：２のダブレットとして現われ、さらに
ダブレット間のケミカルシフト差がＮ−メチルギ酸アミ
ド基に近いほど大きかったので、この分裂はアミノ基の
Ｃ−Ｎ結合の配座に由来するものと結論できた。

Δ１・２二重結合がＥ型であることは１位と２位のプロ
トンが１４．０　Ｈｚで互（・にカップリングしている
ことから推定した。さらに、６３．３１のＯ−メチルプ
ロトンを照射するとＣ−３メチル基にｎｏｅが認められ
ることから、４位にＯ−メチル基が存在することが示さ
れた。

、部分構造上 ン 上 δ６，２６に認められる１７位のオルフィンプロトンか
ら始めて（’Ｈ，’ｆ（）　Ｃ０８Ｙスペクトルをつな
げていくと部分構造上が得られた。Δ１６．１７二重結
合がＥ型であることは、１６位と１７位のプロト７間の
結合定数が１４．５　Ｈｚであることから推定した。

また、２つのＯ−メチル基の位置はｎＯｅ実験から決定
した。すなわち、δ３．４０および３．３０の０−メチ
ルプロトンを照射すると、１４位および１０位のメチン
プロトンの強度がそれぞれ増大した。１２位のプロトン
が５．２９　ｐｐｍと低磁場に現われるため。

１２位の水酸基はエステル化されているものと推定され
た。なお、　　７．８．９および１１位の１３ｃ　Ｇメ
チルは強度比１：２のダブレットとなって℃・た。

部分構造旦 γ −９〜 δ４，７８の２７位プロトンから出発してｃｏｓｙスペ
クトルをつなげていくと部分構造旦が導かれた。

２７位にＯ−メチル基があることはｎｏｅ実験によって
決定した。すなわち、δ３．４２を照射すると２７位の
プロトンにｎｏｅが認められた。また、２５位の水酸基
が遊離なことは、２５位のプロトンがδ３．１３の交換
可能なプロトンとカップリングして（・ることがら導か
れた。これはカビラマイドＣをアセチル化（無水酢酸、
ピリジン中室温で１６時間反応）して得られた２５−０
−アセチルカビラマイドＣ［ＦＡＢＭＳ、　ｍ／ｚ　９
８５　（ＭＨ＋）　］において２２５位プロトがδ５．
１０に低磁場シフトしていることから支持された。２０
位のメチレンプロト／の化学シフト（δ２．３９．２．
５６　’）から、この炭素はカルボニル基に隣接するも
のと考えられた。一方、２１位のプロトンがδ５．工３
に認められることから、２１位の水酸基は置換されて（
・ることか予想された。

〜Ｐ− ＩＨおよび＋３ＣＮＭＲにお（・て、低磁場領域にシグ
ナルがあるため複素芳香環の存在が推定された。

２９　、３２および３５位のプロトンの化学シフト（δ
７．５５．８．０７および８．０１）、大きな’ＪＣ−
Ｈ値（（・ずれも２１１　Ｈｚ　）、　”Ｊ　Ｃ−Ｈ値
および残りの炭素シグナルの化学シフト値からオキサゾ
ール環が３つあるものと考えた。これら３つのオキサゾ
ール環の配列は、　ＬＳＰＤ実験（テトラヘドロン　レ
ター（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ、）、　９２
３．１９７８　）から推定した。

すなわち、δ７．５５を照射すると２８位および３０位
の炭素シグナルが単純化した。：Ｃ−２８，δ１４１．
６゜ｄｄ、　Ｊ　＝１４．５Ｈｚ　→ｄ、　Ｊ＝５Ｈｚ
　；　Ｃ−３０，δ１５５．４゜ｄ、　Ｊ　＝　８　ｆ
（ｚ　→Ｓ０一方、δ８．０７を照射すると３１位と３
３位の炭素シグナル（δ１３１．１．　ｄ、　　Ｊ＝１
３Ｈｚ。

Ｃ−３１；δ１５６．４．　ｄ、　　Ｊ＝８Ｈｚ、　Ｃ
−３３）がともにシングレアトチ変わったほか、３０位
の炭素シグナルがシャープになった：Ｗ１２．６　Ｈｚ
　−＋　２．０　Ｈｚ　０また。

δ８，０１を照射すると３４位と１８位の炭素シグナル
が単純化（Ｃ−３４，δ１２９．９　、　ｄ、　Ｊ　＝
　１４　Ｈｚ−４Ｓ　；Ｃ−１８，δ１６３．２．　ｄ
ｄ、　Ｊ　＝　６．８Ｈｚ　−＋　ｄ、　Ｊ　＝　６Ｈ
ｚ　）するとともに、３３位の炭素シグナルがシャープ
になった。以上の結果、オキサゾール環が３つ連なった
部分構造りが得られた。

カビラマイドＣの構造　。

部分構造ＡとＢは、ダブレットのケトン（δ２１４．０
．２１４．１　）を介して、Ｃ−５とＣ−７を結合する
ことができた。これはｎｏｅ実験（δ２．６６を照射す
るとδ２．４９の７位のメチレンプロトンの強度が増大
）によって支持された。一方、　ＬＳＰＤ実験において
δ７．４４を照射すると１８位の炭素シグナルがＪ　＝
　８　Ｈｚのダブレットに変化したため部分構造↓とＤ
がＣ−１７とＣ−１８でつながる。さらに、２７位と２
９位のプロトンが１ｆ（ｚの力、プリングを示し。

ＬＳ　ＰＤ実験でδ４．７８を照射すると２８位および
２９位の炭素シグナルがし・ずれもダブルダブレットか
らダブレットになったため９部分構造ＣとＤがＣ−２７
とＣ−２８で結合される。また、　ＬＳＰＤ実験てお（
・てδ５．２９を照射すると１９位のカルボニル炭素が
変化したので、１２位の酸素が１９位の炭素と結合して
いることが確証された。残るはＣＨ，Ｎ。

［δｃ　１５７．３．　Ｓ　；δＨ６，４８（２Ｈ，Ｓ
、交換可能）］のみである。炭素の化学シフトを考慮す
るとカルバメート基が存在するものと考えられ、さらに
。

ＬＳＰＤ実験から、この炭素が２１位のプロトンと３Ｈ
ｚの力、プリングを示して℃・ることが判明したので、
　２１位の酸素がカルバモイル化されて（・ることがわ
かった。

以上の結果から、カビラマイドＣの構造を前記の如く決
定した。

【図面の簡単な説明】

ｉｌｌ　　第１図はカビラマイドＡのＩＨＮＭＲスペク
トルを示す。 （２）　　第２図はカビラマイドＡの（’Ｈ，’Ｈ）　
Ｃ０５Ｙスペクトルを示す。 （３）　　第３図はカビラマイドＢの’ｆ（ＮＭＲスペ
クトルを示す。 （４）　　第４図はカビラマイドＢの（’Ｈ，用）ＣＯ
３Ｙスペクトルを示す。 ＋５１ｍ５図はカビラマイドＣの’ＨＮＭＲスペクトル
を示す。 （６）　　第６図はカビラマイドＣの１３ＣＮＭＲスペ
クトルを示す。 （７）　　第７図はカビラマイドＣの（ＩＨ，ＩＨ）Ｃ
Ｏ８Ｙスペクトルを示す。 （８）　　第８図（ａｌはカビラマイドＣの（ＬＨ，１
３ｃ　）ｃｏｓｙスペクトルを、（ｂ）はその一部を拡
大したものを示す。 （９）　　第９図はカビラマイドＤの’ＨＮＭＲＣ０３
Ｙスペクトルを示す。 叫　第１０図はカビラマイドＤの（ＩＨ，ＩＨ）ｃｏｓ
ｙスペクトルを示す。 αυ　第１１図はカビラマイドＤの（用、’Ｈ）ｃｏｓ
ｙスペクトルを示す。 ０２１　　第１２図はカビラマイドＥの（’Ｈ，’Ｈ）
ｃｏｓｙスペクトルを示す。 Ｑ３１　　第１３図はカビラマイドＡ、　Ｂ、　Ｃ，Ｄ
およびＥの混合物の高速液体クロマトグラムを示す１、
手続補正書（自発） １　事件の表示 昭和６０年特許願第１９８３２２号 ２、発明の名称 カビシマイド類 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住所　　東京都中央区日本橋本町２丁目５番地１名称　
　（６６７）山之内製薬株式会社代表者　　森　岡　茂
　夫 ４代理人 住所　　東京都板橋区小豆沢１丁目１番８号７シゴ１、
− 手続補正古（方式） ％式％ ２発明の名称 カビシマイド類 よ　補正をする者 事件との関係　　　　　　特許出願人 化　所　　〒１０３　東京都中央区日本橋本町２丁口５
番地１名　称　　（６６７）山之内製薬体式会社住　庚
　　〒１７４　　東京都板橋区小豆沢１丁目１番８号α
　補正の対象 ７　補正の内容 Ｍ＋ｉノ）に添付した図面の浄−！Ｙ（内容に変更なし
）８、　１公付１！′ｉ類の目録 図面　　　　　　　　　　　　　　　　１４様手続補正
書（自発） 昭和６１年を月１０日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１は水素原子またはメチル基を、Ｒ＾２は
   水素原子、アセチル基またはカルバモイル基を、 Ｒ＾３はメチル基またはヒドロキシメチル基を、 Ｒ＾４は水素原子または低級アシル基をそれぞれ意味す
   る。） で示されるカピラマイド類