JP2002515419A - 生分解性徐放性アルギン酸塩ゲル - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、生分解性アルギン酸塩遅延性ゲルまたは粒子を用いた徐放性処方物およびその方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、生分解性アルギン酸塩ゲルビーズおよび／または遅延性ゲルを使用
した徐放性処方物およびその使用法に関する。

【０００２】 （発明の背景） 遺伝子操作技術および細胞操作技術が進歩するにつれて、組換えタンパク質が
利用可能になり、治療に適用するための薬物としてのタンパク質の使用が進歩し
てきている。薬学的タンパク質で治療される多くの疾患または病状には、最も有
効な治療結果を達成するために、タンパク質レベルを持続させる必要がある。し
かし、ほとんどのタンパク質の医薬品がそうであるように、一般に、短期の生物
学的半減期のために頻繁な投与が必要とされる。これらの反復注射を種々の間隔
で投与することによって、薬剤レベルが変動し、患者に顕著な身体的および金銭
的負担になる。多くの病状は医薬品のレベルを調節することによってより良好に
応答するので、一定のより長い放出を得るためには、薬物の放出の調節が必要で
ある。このような徐放性薬物は、患者に、より向上した予防効果、治療効果、ま
たは診断効果をもたらすだけでなく、注射頻度ならびに全体的なコストも低減さ
せる。

【０００３】 用量間のヒトまたは動物における薬物レベルを持続させる最近の試みには、薬
物放出を調節するための基質としての生分解性ポリマーの使用が含まれている。
例えば、英国特許第１，３８８，５８０号では、インスリンの徐放性用のヒドロ
ゲルの使用が開示されている。米国特許第４，７８９，５５０号では、生きた細
胞のカプセル化によるタンパク質送達用のポリリシン被覆アルギン酸塩マイクロ
カプセルの使用が開示されている。徐放性の試みとして、生物活性組成物を産生
することができる細胞のカプセル化用の反対の電荷のイオン性ポリマーで取り囲
まれた陰イオン性または陽イオン性ポリマー（米国特許第４，７４４，９３３号
）も利用されている。同様に、陰イオン性または陽イオン性架橋ポリマーの多重
被覆もまた、放出を調節する手段として開示されている（米国特許第４，６９０
，６８２号および同第４，７８９，５１６号）。さらに、更なる試みとして、ポ
リペプチド組成物またはその陽イオン性沈殿物の放出調節のためにアルギン酸塩
のみまたは他の生分解性ポリマーで被覆したアルギン酸塩の使用が開示されてい
る（ＰＣＴ ＷＯ９６／０００８１、ＰＣＴ ＷＯ９５／２９６６４、およびＰ
ＣＴ ＷＯ９６／０３１１６）。

【０００４】 しかし、これらの試みは、所望のタンパク質医薬品の徐放性送達を得るために
は不十分な手段であった。ｉｎ ｖｉｖｏ条件下での特定の生分解性ポリマー（
例えば、ポリ乳酸コグリコリド）の使用は、薬物放出の高いイニシャル・バース
トを起こすことが一般に知られている（Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｏ．ｅｔ ａｌ、Ｎａ
ｔｕｒｅ Ｍｅｄ．、２（７）、７９５、１９９６）。さらに、徐放性調製物の
現在の形態で使用したタンパク質は、変性し、薬剤のカプセル化の際その生物活
性を損失し得ることが一般に知られている。このような調製物は、タンパク質の
選択において悪影響を及ぼし得る有機溶媒を使用する。最後に、以下に記載のよ
うに、アルギン酸塩のみの使用は、有効な治療結果に必要な所望のタンパク質放
出が調節されなかった。

【０００５】 一般に、アルギン酸塩が周知であり、これは、自然界に存在する陰イオン性の
多糖で、１，４−架橋β−Ｄ−マンヌロン酸およびα−グルロン酸からなる（Ｓ
ｍｉｄｓｒｏｄ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏ
ｌ．、８、７１〜７８、１９９０、Ａｓｌａｎｉ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｍｉ
ｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ、１３（５）、６０１〜６１４、１９９６）
。典型的には、アルギン酸塩は、７０％マンヌロン酸および３０％グルロン酸か
ら３０％マンヌロン酸および７０％グルロン酸まで変化する（Ｓｍｉｄｓｒｏｄ
、前出）。アルギン酸は水に不溶であるが、一価の塩（ナトリウム、カリウム、
およびアンモニウム）を形成すると水溶性になる（ＭｃＤｏｗｅｌｌ，Ｒ．Ｈ．
、「アルギン酸塩の性質」、Ｌｏｎｄｏｎ、Ａｌｇｉｎａｔｅ Ｉｎｄｕｓｔｒ
ｉｅｓ Ｌｔｄ、４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９７）。多価陽イオンは、アル
ギン酸と反応し、同時にゲルを形成することが知られている。

【０００６】 アルギン酸塩は、食品添加物、接着剤、薬学的錠剤、および創傷被覆剤など様
々に適用されている。アルギン酸塩はまた、タンパク質分離技術に推奨されてい
る。例えば、Ｇｒａｙ，Ｃ．Ｊ．ｅｔ ａｌ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａ
ｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、３１、６０７〜６１２、１９８８では、
他の血清タンパク質からインスリンを分離するためのアルギン酸の亜鉛／カルシ
ウム塩ゲル中のインスリンの包括について記載されている。

【０００７】 アルギン酸塩の基質は、薬物送達系についても十分に文献に記載されている（
例えば、アルギン酸塩ベースのチューインガム送達系および薬学的調製物を開示
している、米国特許第４，６９５，４６３号を参照のこと）。アルギン酸塩ビー
ズは、種々のタンパク質の放出調節に使用されている（ポリカチオンで被覆した
陽イオン−アルギン酸塩ビーズ中の腫瘍壊死因子レセプター（Ｗｅｅ，Ｓ．Ｆ．
、Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏ
ａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．、２１、７３０〜３１、１９９４）、アルギン酸塩ビーズ
中にカプセル化された形質転換成長因子（Ｐｕｏｌａｋｋａｉｎｅｎ，Ｐ．Ａ．
ｅｔ ａｌ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１０７、１３１９〜１３２６
、１９９４）、カルシウム−アルギン酸塩ビーズ中に包括した血管形成因子（Ｄ
ｏｗｎｓ，Ｅ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．、Ｊ． ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓｉ
ｏｌｏｇｙ、１５２、４２２〜４２９、１９９２）、キトサン−アルギン酸塩マ
イクロカプセル中に包括したアルブミン（Ｐｏｌｋ，Ａ．ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、８３（２）、１７８〜１８５
、１９９４）、ポリマーで被覆したキトサン−アルギン酸カルシウムビーズ（Ｏ
ｋｈａｍａｆｅ，Ａ．Ｏ．ｅｔ ａｌ、Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ．、１
３（５）、４９７〜５０８、１９９６）、キトサン−アルギン酸カルシウムビー
ズでカプセル化したヘモグロビン（Ｈｕｇｕｅｔ，Ｍ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．、Ｊ．
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ、５１、１４２７〜１４３２
、１９９４、Ｈｕｇｕｅｔ，Ｍ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ、３１、７４５〜７５１、１９９６）、およびアルギン酸塩−
キトサンミクロスフェア中にカプセル化したインターロイキン−２（Ｌｉｕ、Ｌ
．Ｓ．ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏ
ｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ、２２、５４２〜５４３、１９９５）な
ど）。

【０００８】 タンパク質を包括するためのアルギン酸塩ゲルビーズ、またはアルギン酸塩／
カルシウムゲルビーズを用いた系は、アルギン酸塩ビーズからのタンパク質の急
速な放出によって任意の徐放効果が欠如する（Ｌｉｕ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．、Ｊ．
Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．、４３、６５〜７４、１９９７）。このような急速な
放出を回避するために、タンパク質アルギン酸塩ビーズの放出を遅らせるための
ポリカチオンポリマー被覆（例えば、ポリリシン、キトサン）を用いた多数の上
記の系が試みられている（例えば、Ｗｈｅａｔｌｅｙ．Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．、
Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ、４３、２１２３〜２１
３５、１９９１、Ｗｅｅ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（前出）、Ｌｉｕ，Ｌ．Ｓ．ｅ
ｔ ａｌ．（前出）、Ｗｅｅ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ
Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ、２２、５６６〜５６７、１９９５、およびＬ
ｉｍ ｅｔ ａｌ．（前出）、を参照のこと）。

【０００９】 ポリリシンなどのポリカチオンは、負電荷のアルギン酸塩分子と相互作用して
ビーズ表面に拡散隔膜として作用する高分子電解質複合体を形成する正電荷の高
分子電解質である。ポリカチオンの使用において以下の問題が生じ得る：（１）
このような処方物は、ポリカチオンが原因で毒性を有する可能性があること（Ｈ
ｕｇｕｅｔ，Ｍ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（前出）、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ、Ｕｌｒｉ
ｃｈ、Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ、１３、２６９、１９９２）、Ｂｅｒｇ
ｍａｎｎ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．、Ｃｌｉｎｉｃｉａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、６７、３
５、１９８４）、（２）ポリカチオンは酸化する傾向があること、（３）ポリカ
チオンで被覆したビーズは徐々に分解せず、体内に蓄積する傾向があること、（
４）このような処方物は、ポリカチオンであるポリリシンの複数の被覆工程を含
む骨の折れる被覆手順を経て作製されること（Ｐａｄｏｌ，ｅｔ ａｌ．、Ｐｒ
ｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ
．Ｍａｔｅｒ、２、２１６、１９８６）、および（５）タンパク質とポリカチオ
ンとの間のイオン性相互作用によりタンパク質活性を損失したり、タンパク質が
不安定になること。

【００１０】 Ｆｒａｎｃｅｓｃｏ ｅｔ ａｌ．に付与された米国特許第５，３３６，６６
８号（および本明細書中で引用された文献）には、アルギン酸の全エステルおよ
び部分エステルが異なる処理によって作製され、それが興味深い薬学特性を有す
ることが記載されている。それには、医学−手術に使用するための生分解性プラ
スチック物質としてどのようにしてアルギン酸エステルを使用することができる
か（広範な種々の高分子材料への添加物として、または種々の薬物の調製の際に
使用する）ということがが記載されている。徐放性処方物中のエステル化アルギ
ン酸塩の潜在的な使用法も考察されておらず、エステル化アルギン酸塩ヒドロゲ
ルも記載されていない。

【００１１】 Ｎｉｇｈｔｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｓ
ｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．、２２、７３８
〜７３９、１９９５では、放出調節能を有するエステル化ヒアルロン酸（ＨＡ）
ミクロスフェアが記載されている。この文献では、一般に、それらのＨＡ誘導体
についての異なる分解速度を検討し、どのようにしてエステルが「破壊」されて
アルコールおよびＨＡ部分を遊離するのかが記載されている。ＨＡのバックボー
ン自体が破壊してより低分子量のポリマー単位にどのようにしてなるのかまたは
そうなるかどうかについては考察されていない。

【００１２】 多糖ベースの徐放送達系が有用であるために、多糖は無毒の産物に生分解され
なければならない。特定のアルギン酸塩ゲル系では、薬物の徐放には有効である
が、ゲルの非常に遅い散逸のために注射部位で「隆起」（つまり瘤）が形成され
ることが見出された。低用量の薬物およびまれな注射を含む治療設定では、これ
は、主要な問題にはならないであろう。しかし、高用量の薬物および頻繁な注射
を含む治療設定では、この効果は不必要であろう。注射部位からのアルギン酸塩
ゲルの散逸速度を増加させる手段が開発されなければならない。

【００１３】 従って、臨床に適用するためのより多用途で有効な手段を達成する薬学的処方
物の開発が、依然として必要とされている。多数の組換えまたは天然のタンパク
質が長期にわたる一定量の放出から利益を得ることができ、それにより、より有
効な治療結果を得ることができるであろう。

【００１４】 本発明は、このような利点を提供する。本発明の生分解性アルギン酸塩ゲル粒
子またはゲルを使用した薬学的組成物は、高い生分解性、タンパク質保護、分解
の減少ならびにタンパク質の安定性および強度を増加させた遅延放出を提供する
ことができる。また、本発明の薬学的組成物は、有効な予防、治療、または診断
結果のための、組換えタンパク質の放出が調節された簡単で、迅速で安価な手段
を提供する。

【００１５】 （発明の要旨） 本発明は、タンパク質の徐放用の非修飾アルギン酸塩（陰イオン性多糖の部類
）ヒドロゲルを用いた研究を発展させた。これらのタンパク質含有非修飾アルギ
ン酸塩ヒドロゲル（同時継続中の米国出願番号第０８／８５７，９１３号および
同第０８／９１２，９０２号を参照のこと）は、時間遅延様式で形成されている
ので、この物質をシリンジに満たし、その後ゲルをそのシリンジ中に放置するこ
とができる。これらのゲルは注射可能であることが見出された。げっ歯類モデル
における単回皮下注射後、長期にわたってタンパク質が持続していることが認め
られたが、注射部位でかなりの大きさの隆起または瘤のサイズが残存し、長期間
変化がなかった。この隆起は、水分を含んだアルギン酸塩ヒドロゲルからなり、
隆起のサイズは、注射されたゲルの体積と相関関係がある。ゲルビーズも、注射
部位に残存する。

【００１６】 従って、本発明は、治療タンパク質の徐放用の、新規の部類の生分解性生体適
合性多糖ヒドロゲル（例えば、アルギン酸エステルヒドロゲル）に関する。思い
がけず、アルギン酸エステルヒドロゲルは、ゲル化に加えて、非修飾アルギン酸
塩の注射が可能で徐放特性を有し、注射部位に隆起を残さない。すなわち、アル
ギン酸エステルヒドロゲルは、注射部位でほとんど反応せずに生分解または徐々
に分解し、周囲の組織に徐々に吸収される。

【００１７】 本発明の組成物には、タンパク質などの治療剤を含むヒドロゲル（水分含有）
基質にイオン架橋したアルギン酸エステルまたはその誘導体が含まれる。

【００１８】 さらに、本発明は、生分解性徐放性組成物の製造法に関する。

【００１９】 さらに、本発明は、体内での時間遅延型ゲル化用の液体混合物におけるアルギ
ン酸エステル物質の使用に関する。

【００２０】 さらに、本発明は、アルギン酸エステルヒドロゲルが活性剤（好ましくは治療
タンパク質）の徐放用のビーズまたはミクロスフェアの形態である組成物に関す
る。

【００２１】 本発明の１つの実施形態では、アルギン酸エステルヒドロゲルは、患者の体内
の標的部位に適用するための組成物を提供する。これらの組成物は、手術および
外傷後の組織接着の形成の予防または阻害、特に柔組織および硬組織を満たすた
めの組織の補充、吸収物資を有する閉鎖空間を満たすため、組織成長の土台とし
て、および創傷被覆剤として有用である。

【００２２】 別の実施形態では、アルギン酸エステルヒドロゲルは、身体の移植用のデバイ
スを含む活性剤（この活性剤はアルギン酸塩ポリマーに結合することができるか
結合することができない）を提供する。

【００２３】 別の実施形態では、本発明のアルギン酸塩エステルヒドロゲル組成物は、組成
物中の活性剤の生物学的利用能の改良法を提供する。

【００２４】 最後に、本発明のアルギン酸塩ヒドロゲル組成物は、さらに、患者において長
期間実質的に一定の血液レベルとする方法を提供する。

【００２５】 （発明の詳細な説明） 組成物 アルギン酸塩およびその誘導体を含む親水性ポリマーは、当該分野で周知の種
々の市販、天然、または合成供給源から得ることができる。本明細書中で使用さ
れる、用語「親水性ポリマー」は、水溶性ポリマーまたは水分吸収に親和性を有
するポリマーをいう。親水性ポリマーは、当業者に周知である。これらには、以
下に示す陰イオン性多糖を含むポリアニオンが含まれるが、これらに限定されな
い：アルギン酸塩、カルボキシメチルアミロース、ポリアクリル酸塩、ポリメタ
クリル酸塩、エチレンマレイン酸無水物コポリマー（半エステル）、カルボキシ
メチルセルロース、硫酸デキストラン、ヘパリン、カルボキシメチルデキストラ
ン、カルボキシセルロース、２，３−ジカルボキシセルロース、トリカルボキシ
セルロース、カルボキシアラビアゴム、カルボキシカラゲナン、ペクチン、カル
ボキシペクチン、カルボキシトラガカントガム、カルボキシキサンタンガム、ペ
ントサンポリ硫酸塩、カルボキシデンプン、カルボキシメチルキチン／キトサン
、カードラン、イノシトール六硫酸塩、ｂ−硫酸シクロデキストリン、ヒアルロ
ン酸、コンドロイチン−６−硫酸塩、デルマタン硫酸、硫酸へパリン、カルボキ
シメチルデンプン、カラゲナン、ポリガラクツロン酸塩、カルボキシグアールガ
ム、ポリリン酸塩、ポリアルデヒド−カルボン酸、ポリ−１−ヒドロキシ−１−
スルホネート−プロペン−２、コポリスチレンマレイン酸、アガロース、メソグ
リカン、スルホプロピル化ポリビニルアルコール、硫酸セルロース、硫酸プロタ
ミン、ホスホグアールガム、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリアミ
ノ酸、その誘導体または組み合わせ。本発明の範囲内である他の種々の親水性ポ
リマーが当業者に認識される。

【００２６】 同様に、当該分野で周知である種々の市販、天然、または合成供給源から結合
多価金属イオンを得ることができる。特に、金属イオンには、アルミニウム、バ
リウム、カルシウム、鉄、マンガン、マグネシウム、ストロンチウム、および亜
鉛が含まれ得るが、これらに限定されない。好ましくは、金属イオンは、カルシ
ウムおよび亜鉛またはその塩（酢酸亜鉛、酢酸カルシウムもしくは塩化物塩など
）である。また、硫酸アンモニウム、アセトン、エタノール、およびグリセロー
ルなどの水溶性小分子および塩を使用することができる。

【００２７】 本発明のアルギン酸のカルボキシル基のエステル化成分として使用するための
脂肪族アルコールは、例えば、最大３４個の炭素原子を有し、飽和であっても不
飽和であっても良く、他の遊離または官能基（アミノ基、水酸基、アルデヒド基
、ケト基、メルカプト基、カルボキシル基）または前記の基に由来する基（ヒド
ロカルビルまたはジヒドロカルビルアミノ（以後用語「ヒドロカルビル」は、Ｃ _ｎ Ｈ_２ｎ＋１型などの炭化水素の一価の基だけでなく、「アルキレン」−Ｃ_ｎＨ _２ または「アルキリデン」−Ｃ_ｎＨ_２ｎなどの二価または三価の基の意味を取る
べきである））、エーテル基またはエステル基、アセタール基またはケタール基
、チオエーテル基またはチオエステル基、およびエステル化カルボキシル基また
はカルバミド基または１つまたは２つの水酸基で置換されたカルバミド基によっ
て、ニトリル基によって、またはハロゲンによって置換されても良い。

【００２８】 ヒドロカルビル基を含む上記の基では、これらは、ヘテロ原子（酸素、窒素、
および硫黄）などの低級脂肪族基であることが好ましい。１つまたは２つの上記
の官能基で置換されたアルコールであることが好ましい。

【００２９】 好ましくは、本発明の用語内で使用される上記群のアルコールは、最大１２個
、特に最大６個の炭素原子を有するアルコールであり、上記アミノ基、エーテル
基、エステル基、チオエーテル基、チオエステル基、アセタール基、ケタール基
中のヒドロカルビル基は最大４個の炭素原子を有するアルキル基を示し、ヒドロ
カルビル基はまた、エステル化カルボキシル基または置換カルバミド基において
同数の炭素原子を有するアルキルであり、アミノ基またはカルバミド基は、最大
８炭素原子のアルキレンアミノ基またはアルキレンカルバミド基であってもよい
。これらのアルコールのうち、最初に記載し、かつ最も重要なアルコールは、メ
チル、エチル、プロピル、イソプロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコール、イ
ソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、アミル、ペンチル、ヘキシル、オクチ
ル、ノニル、およびドデシルアルコールならびにｎ−オクチルまたはｎ−ドデシ
ルアルコールなどの直鎖を有する全てのアルコールなどの飽和および不飽和アル
コールである。この群の置換アルコールのうち、以下を列挙すべきである：二価
のアルコール（エチレングリコール、プロピレングリコール、またはブチレング
リコールなど）、三価のアルコール（グリセリンなど）、アルデヒドアルコール
（タルトロンアルコールなど）、カルボキシアルコール（乳酸など、例えば、α
−オキシプロピオン酸、グリコール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸）、アミノ
アルコール（アミノエタノール、アミノプロパノール、ｎ−アミノブタノールな
らびにアミン基におけるそれらのジメチルおよびジエチル誘導体）、コリン、ピ
ロリジニルエタノール、ピペリジニルエタノール、ピペラジニルエタノールおよ
びｎ−プロピルアルコールまたはｎ−ブチルアルコールの誘導体、モノチオエチ
レングリコールまたはそのアルキル誘導体（例えば、メルカプト基におけるエチ
ル誘導体）。

【００３０】 飽和度の高い脂肪族アルコールのうち、特記する価値のあるアルコールは、例
えば、セチルアルコールおよびミリスチルアルコールであるが、本発明の目的に
おいて特に重要なアルコールは、１つまたは２つの二重結合を有するより不飽和
度の高いアルコールであり、特に、テルペン（シトロネロール、ゲラニオール、
ネロール、ネロリドール、リナロール、ファルネソール、フィトール等）と親和
性を有する多くの精油に含まれるアルコールなどである より不飽和度の低いアルコールのうち、プロパルギルアルコールが考慮される
べきである。

【００３１】 脂肪族アルコールのうち、上記に記載の全てのアルコールは、たった１つのベ
ンゼン残基を有するアルコールであり、その脂肪族の鎖は最大４個の炭素原子を
有し、ベンゼン残基はまた１〜３個のメチルもしくは水酸基またはハロゲン原子
（特に、塩素、臭素、またはヨウ素）で置換されても良く、その脂肪族の鎖は、
遊離アミノ基もしくはモノもしくはジメチル基からなる群から選択される１つま
たは複数の官能基またはピロリジン基もしくはピペリジン基で置換されても良い
。これらのアルコールのうち、ベンジルアルコールおよびフェネチルアルコール
が特に好ましい。環式脂肪族または脂肪族環式脂肪族アルコールは、単環式また
は多環式炭化水素から誘導され、最大３４個の炭素原子を有し得る。環式単環式
炭化水素から誘導されるアルコールのうち、特に、最大１２個の炭素原子を有す
るアルコール、好ましくは５〜７個の炭素原子を含む環を有するアルコールを記
載すべきであり、例えば、１〜３個の低級アルキル基（メチル基、エチル基、プ
ロピル基、またはイソプロピル基など）で置換しても良い。この群の特定のアル
コールは、シクロヘキサノール、シクロヘキサンジオール、１，２，３−シクロ
ヘキサントリオールおよび１，３，５−シクロヘキサントリオール（フロログル
シトール）、イノシトール、ｐ−メンタンから誘導されるアルコール（カルボメ
ントールなど）、「テルピネオール」として知られているα−およびγ−テルピ
ネオール１−テルピネオールアルコール、１，４−および１，８−テルピンであ
る。縮合環を有する炭化水素から誘導されるアルコールは、例えばツジャン、ピ
ナン、カンフェン基を有するアルコール、特にツジャノール、サビノールピノー
ル水和物、ＤおよびＬ−ボルネオールならびにＤおよびＬ−イソボルネオールで
ある。

【００３２】 エポキシ含有化合物のアルギン酸塩とのエステル化反応から誘導されるアルコ
ールもまた含まれる（例えば、米国特許第２，４６３，８２４号および同第２，
４２６，１２５号を参照のこと）。

【００３３】 本発明のポリアニオンを含む全および部分エステル基は、一般に、グリコシド
酸素がエステルのカルボニルの炭素にβ位で結合した酸性多糖である。いかなる
特異的な機構にも結合していないにもかかわらず、この部分の配置は、生理学的
条件下で起こり得るβ脱離機構によってポリマーの鎖が破壊される。

【００３４】 本発明のアルギン酸エステルは、以下の一般式Ｉ −（Ｍ）ｎ１−（Ｍ’）ｎ２−（Ｇ）ｎ３−（Ｇ’）ｎ４−（Ａ）ｎ５−
Ｉ （式中、 Ｍは、マンヌロン酸残基、ｍ−ＣＯＯＨまたはＭ−ＣＯＯ陰イオンであり、 Ｍ’は、マンヌロン酸エステル残基、ｍ−ＣＯＯＲ１であり、 Ｇは、グルロン酸残基、ｇ−ＣＯＯＨまたはｇ−ＣＯＯ陰イオンであり、 Ｇ’は、グルロン酸エステル残基、ｇ−ＣＯＯＲ２であり、 Ａは、鎖の末端内または末端で結合したヘテロ原子によって置換および干渉さ
れ得るｎｏｎ−ｇまたはｎｏｎ−ｍ鎖単位（糖、糖酸化産物、脂肪族基、芳香族
基、アリール脂肪族基、アルキル芳香族基、環式脂肪族基など）であり、ｎ１、
ｎ２、ｎ３、ｎ４、およびｎ５は、組込まれた単位の平均相対数を示す整数であ
り、Ｒ１およびＲ２は、独立して、ヘテロ原子によって置換および干渉され得る
脂肪族基、芳香族基、アリール脂肪族基、アルキル芳香族基、環式脂肪族基であ
る） のグリコシドエーテルの酸素によって互いに結合したマンヌロン酸残基（ｍ−Ｃ
ＯＯＨまたはｍ−ＣＯＯ陰イオン）およびグルロン酸残基（ｇ−ＣＯＯＨまたは
ｇ−ＣＯＯ陰イオン）、およびその誘導体（例えば、水酸基がアセチル化されて
、イソシアネートと反応した）ならびに薬学的に許容可能なその塩を含む。

【００３５】 本発明のエステルでは、Ｒ１＝Ｒ２＝脂肪族またはアルキル芳香族であり、さ
らに、１００（ｎ２＋ｎ４）／（ｎ１＋ｎ２＋ｎ３＋ｎ４）が１〜９９ｍｏｌ％
、好ましくは５〜５０ｍｏｌ％、より好ましくは６〜３０ｍｏｌ％、さらにより
好ましくは６〜１５ｍｏｌ％、最も好ましくは７〜１２ｍｏｌ％であり、１００
ｎ５／（ｎ１＋ｎ２＋ｎ３＋ｎ４＋ｎ５）が好ましくは１０ｍｏｌ％未満である
ことが好ましい。

【００３６】 本発明の部分エステルでは、非エステル化カルボキシル基は、遊離したままで
あるか、塩化され得る。これらの塩形成の塩基は、生成物の最終的な使用目的に
従って選択される。無機塩は、アルカリ金属（カリウム、特に、ナトリウムおよ
びアンモニウム）から形成され得るか、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネ
シウム、またはアルミニウム塩）から誘導されて形成されるであろう。

【００３７】 特に興味深い塩は、有機塩基、特にアゾ化塩基を有する塩（従って、脂肪族、
アリール脂肪族、環式脂肪族、または複素環式アミン）である。これらのアンモ
ニウム塩は、薬学的に許容可能なアミンもしくは無毒性であるが治療的に不活性
なアミン、または治療活性を有するアミンから誘導することができる。第１の型
のうちで、脂肪族アミン（例えば、最大８個の炭素原子を有するアルキル基を有
するモノ、ジ、およびトリアルキルアミン）または脂肪族部分に同数の炭素原子
を有するアリールアルキルアミンが好ましい。ここで、アリールとは、１〜３個
のメチル基またはハロゲン原子または水酸基によって置換することができるベン
ゼン基を意味する。塩の形成のための生物学的に不活性な塩基はまた、環式（４
〜６個の炭素原子の環を有する単環式アルキレンアミン）であり得るか、窒素、
酸素、および硫黄によって形成される基から選択されるヘテロ原子によってそれ
らの環をさえぎる可能性があるか（ピペラジンまたはモルフォリンなど）、また
は、例えば、アミノ基または水酸基によって置換され得る（アミノエタノール、
エチレンジアモール、エチレンジアミン、エフェドリン、またはコリンなど）。

【００３８】 エステル化度およびそのタイプは、当該分野で既知の合成法によって調節する
ことができる。好ましくは、アルギン酸エステルは、ジメチルスルホキシドなど
の非プロトン性有機溶媒中で、従来のアルキル化剤を用いたアルギン酸の第四級
アンモニウム塩の処理によって調製される。得られたエステルは、一価アルコー
ル（エチルなどの低級アルキルなど）またはアラルキル（ベンジルなど）のエス
テルまたはそれらの混合物であることが好ましい。エチレンオキシドまたはプロ
ピレンオキシドなどの化合物を含むオキシランまたはエポキシとアルギン酸との
反応によってエステルを形成させることもできる。

【００３９】 部分エステルの第四級アンモニウム塩（例えば、上記の炭素数を有するテトラ
アルキルアンモニウムの塩および好ましくはこのタイプの塩（ここで、第４のア
ルキル基は１〜４個の炭素原子を有する（例えば、メチル基））を形成すること
も可能である。

【００４０】 アルギン酸塩のエステル化度（ｍｏｌ％で示す）は、患者の組織におけるゲル
の所望の消失速度に関連する。ゲルのこの消失速度は、一般に、ゲルからの活性
剤の所望の放出速度に関連し、それは５年未満、通常２日〜２７０日、より通常
には２日〜１８０日、より通常には２日〜９０日にわたる。エステル化度（ＤＥ
）は、１ｍｏｌ％〜９９ｍｏｌ％、好ましくは５ｍｏｌ％〜５０ｍｏｌ％、より
好ましくは６ｍｏｌ％〜３０ｍｏｌ％、より好ましくは６ｍｏｌ％〜１５ｍｏｌ
％、より好ましくは７ｍｏｌ％から１２ｍｏｌ％である。

【００４１】 本明細書中で使用される、用語「緩衝液」は、当該分野で既知の緩衝液を調製
するための無機酸もしくは有機酸またはその組み合わせの使用をいう。本発明の
範囲内の無機酸には、ハロゲン化水素（例えば、塩酸）、リン酸、硝酸、または
硫酸が含まれる。他の無機酸も当業者に周知であり、本明細書において意図され
る。本発明の範囲内の有機酸には、脂肪族カルボン酸および有機酸（蟻酸、炭酸
、酢酸、プロピオン酸、酪酸、バレリアン酸、カプロン酸、アクリル酸、マロン
酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、マレイン酸、フマル酸、グリシン、ま
たはフェノールスルホン酸など）が含まれる。他の有機酸も当業者に周知であろ
う。

【００４２】 本明細書中で使用される、用語「生物活性剤」は、ヒトまたは動物において、
予防、治療、または診断への適用に有用な、組換えまたは天然のタンパク質なら
びに小分子のような非タンパク質ベースの薬剤をいう。生物活性剤は、天然、合
成、半合成、またはその誘導体であり得る。本発明の生物活性剤は、沈殿しなけ
ればならない。広範な種々の生物活性剤が意図される。これらには、ホルモン、
サイトカイン、造血因子、成長因子、肥満抑制因子、栄養因子、抗炎症因子、お
よび酵素（有用な生物活性剤の更なる例として、米国特許第４，６９５，４６３
号も参照のこと）が含まれるが、これらに限定されない。当業者は、本発明の組
成物に望ましい生物活性剤を容易に適用することができる。

【００４３】 このようなタンパク質には、以下が含まれるが、これらに限定されない：イン
ターフェロン（米国特許第５，３７２，８０８号、同第５，５４１，２９３号、
同第４，８９７，４７１号、および同第４，６９５，６２３号（図面を含めて本
明細書中で参考として援用される）を参照のこと）、インターロイキン（米国特
許第５，０７５，２２２号（図面を含めて本明細書中で参考として援用される）
を参照のこと）、エリスロポイエチン（米国特許第４，７０３，００８号、同第
５，４４１，８６８号、同第５，６１８，６９８号、同第５，５４７，９３３号
、および同第，６２１，０８０号（図面を含めて本明細書中で参考として援用さ
れる）を参照のこと）、顆粒球コロニー刺激因子（米国特許第４，８１０，６４
３号、同第４，９９９，２９１号、同第５，５８１，４７６号、同第５，５８２
，８２３号、およびＰＣＴ公開第９４／１７１８５号（図面を含めて本明細書中
で参考として援用される）を参照のこと）、幹細胞因子（ＰＣＴ公開第９１／０
５７９５号、同第９２／１７５０５号、および同第９５／１７２０６号（図面を
含めて本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）、およびＯＢタンパ
ク質（ＰＣＴ公開第９６／４０９１２号、同第９６／０５３０９号、同第９７／
００１２８号、同第９７／０１０１０号、および９７／０６８１６（図面を含め
て本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）。さらに、生物活性剤に
は、以下を含むことができるが、これらに限定されない：肥満抑制関連産物、イ
ンスリン、ガストリン、プロラクチン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、甲
状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（
ＦＳＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）、モチリン、インターフェロン
（α、β、γ）、インターロイキン（ＩＬ−１〜ＩＬ−１２）、腫瘍壊死因子（
ＴＮＦ）、腫瘍壊死因子結合タンパク質（ＴＮＦ−ｂｐ）、脳由来神経栄養因子
（ＢＤＮＦ）、神経膠細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、神経栄養因子３（Ｎ
Ｔ３）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、神経栄養成長因子（ＮＧＦ）、骨成長
因子（オステオプロテゲリン（ＯＰＧ）など）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ
）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコ
ロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、巨核球由来成長因子（ＭＧＤＦ）、トロンボ
ポイエチン、血小板由来成長因子（ＰＧＤＦ）、コロニー刺激成長因子（ＣＳＦ
）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、
組織プラスミノゲン活性化因子（ＴＰＡ）、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ
、およびカリクレイン。本明細書中で使用される、用語「タンパク質は」には、
ペプチド、ポリペプチド、コンセンサス分子、アナログ、誘導体、またはその組
み合わせが含まれる。

【００４４】 生物活性剤の誘導体には、タンパク質部分に対する１つまたは複数の化学的部
分の結合が含まれ得る。生物活性剤の化学修飾は、治療タンパク質の安定性およ
び循環時間の増加ならびに免疫原性の減少などの特定の条件下での更なる利点を
提供することが見出されている。当業者は、所望の投薬量、循環時間、タンパク
質分解に対する耐性、治療用途、および他の検討材料に基づいた所望の化学修飾
を選択することができる。

【００４５】 本明細書中で使用される、「生分解性」は、特定の分子量のポリマーをより小
さい数の鎖の単位に破壊すること、すなわち、より低分子量の単位への破壊のこ
とをいう。「生分解性ゲル」は、使用環境におけるゲルの散逸をいい、散逸はポ
リマー成分の分子量の偶発的な破壊であり、それによりポリマーの鎖がより少な
い単位になる。

【００４６】 複合体 タンパク質、アナログ、または誘導体は、結合成分と複合体化して投与するこ
とができる。このような結合組成物は、タンパク質、アナログ、または誘導体の
循環時間を延長するか、生物活性剤の活性を増大させる効果を有し得る。このよ
うな組成物は、タンパク質（ペプチドと同義）、その誘導体、アナログ、または
組み合わせであり得る。例えば、ＯＢタンパク質の結合タンパク質は、ＯＢタン
パク質レセプターまたはその一部（その溶解性部分など）である。他の結合タン
パク質は、血清におけるＯＢタンパク質の試験もしくはタンパク質の選択によっ
て確認するか、結合の存在を経験的にスクリーニングすることができる。典型的
には、このような結合は、ＯＢタンパク質、アナログ、または誘導体が内在性Ｏ
Ｂタンパク質レセプターおよび／または有効なシグナル伝達への結合能力を阻害
しない。ＯＢタンパク質に加えて、結合複合体もまた、同様に本発明の他の治療
タンパク質に適用できる。当業者は、本発明に使用するための適切な結合タンパ
ク質を確認することができる。

【００４７】 同様に、生物活性剤を沈殿させるために使用される沈殿剤は、当該分野で周知
の種々の市販、天然、合成供給源から得ることができる。沈殿剤には、多価金属
イオンまたはそれらの塩（酢酸塩、クエン酸塩、塩化物、炭酸塩、水酸化物、シ
ュウ酸塩、酒石酸塩もしくはその水酸化物、酸もしくは水溶性ポリマー）が含ま
れるが、これらに限定されない。特に、金属イオンにはアルミニウム、バリウム
、カルシウム、鉄、マンガン、マグネシウム、ストロンチウム、および亜鉛が含
まれるが、これらに限定されない。好ましくは、金属イオンは、亜鉛または酢酸
クロリドのような塩である。硫酸アンモニウム、アセトン、エタノール、および
グリセロールなどの水溶性小分子およびその塩もまた、使用することができる。

【００４８】 水溶性ポリマーとして、以下が示されるが、これらに限定されない：ポリエチ
レングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カル
ボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピ
ロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エ
チレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸、デキストラン、ポリ（ｎ
−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリ
マー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチ
ル化ポリオール、ポリビニルアルコールスクシネート、グリセリン、エチレンオ
キシド、プロピレンオキシド、ポロキサマー、アルコキシ化コポリマー、水溶性
ポリアニオン、その誘導体または組み合わせ。水溶性ポリマーは、いかなる分子
量でも良く、分枝でも分枝でなくてもでも良い。例えば、取扱いやすく、有効に
沈殿するポリエチレングリコールの好ましい分子量は、約７００Ｄａと約１００
ｋＤａとの間である。

【００４９】 他のサイズおよびタイプの沈殿剤を使用することができ、これは、所望の治療
プロフィール（例えば、所望の徐放持続時間、有効性（生物活性について何かあ
れば）、扱いやすさ、抗原性の程度又は欠如、および治療タンパク質またはアナ
ログに対する所望の沈殿剤の他の効果）に依存する。本発明の範囲内の他の適切
な単沈殿剤が当業者に理解される。

【００５０】 さらに、本発明の組成物はまた、生物活性剤および／または親水性ポリマーを
安定化させるのに必要なさらなる賦形剤が含まれ得る。これらは、緩衝液中に含
むことができ、防腐剤が含まれ得るがこれらに限定されない。

【００５１】 薬学的組成物 本発明の徐放性薬学的組成物は、経口（例えば、ハードカプセルおよびソフト
カプセルなどのカプセル、顆粒、錠剤、丸剤、トローチ、またはドロップ、カシ
ェ剤、ペレット、粉末、および凍結乾燥形態などの固体調製物、懸濁液などの液
体調製物）および非経口（例えば、筋肉内、皮下、経皮、内臓、ＩＶ（静脈内）
、ＩＰ（腹腔内）、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、注射、肺、鼻、直
腸、および子宮経粘液調製物）で投与することができる。

【００５２】 一般に、本発明の徐放性組成物を含み、投与に必要ならば薬学的に許容可能な
希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／またはキャリアを含
む、有効量のタンパク質または誘導体産物を含む徐放性薬学的組成物が本発明に
含まれる。ＰＣＴ９７／０１３３１（本明細書中で参考として援用される）を参
照のこと。投与経路および所望の投薬量に依存して、所望の生物活性剤のための
至適な薬学的処方物が、当業者によって同定される。例として、薬学的組成物は
、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’Ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１８ｔｈ Ｅｄ．、Ｅａｓｔｏｎ
、ＰＡ、１４３５〜１７１２、１９９０）に開示されている。

【００５３】 遅延型ゲル処方物の揺変性のために、シリンジを使用して皮下投与することが
できる。組成物を、その後の注射のために、シリンジ中にゲル化することができ
る。このゲル化は、時間遅延様式で行うことができる。必要ならば、タイミング
は、混合物中のゲル化剤およびプロトン供与体の量の賢明な調整によって調節さ
れる。このような調製物は、注射後の体内でのその後の再ゲル化に使用されるで
あろう。本明細書中で使用される、用語「揺変性」は、圧力下（例えば、シリン
ジプランジャー由来）で減少する（その時点で、混合物は、例えばシリンジの針
を通って流動し、その後、注射部位でゲルを再形成する）ゲル混合物の粘度をい
う。

【００５４】 遅延型ゲル化の概念はまた、シリンジへの充填（ここで、徐放性ゲル組成物は
、シリンジ中に充填され、シリンジ中で予め決められた時間でゲル化する（例え
ば、充填後２、３分から数時間））に適用することができる。これは、既にゲル
化された物質をシリンジに充填する問題を回避する。これらの予め充填したシリ
ンジを、患者へのその後の注射用に保存することができる。

【００５５】 投与に必要であり得る成分は、以下が含まれ得る：種々の緩衝成分（例えば、
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩）、ｐＨ、およびイオン強度の希釈剤、以下の添加物
（界面活性剤および可溶化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ ８０、ＨＣＯ−６０、Ｐｏ
ｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、グルタチオ
ン、メタ重亜硫酸ナトリウム）、更なる多糖（例えば、カルボキシメチルセルロ
ース、アルギン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、硫酸プロタミン、ポリ
エチレングリコール）、防腐剤（例えば、チメルソール、ベンジルアルコール、
メチルパラベン、プロピルパラベン）、および構成単位（ｂｕｉｌｄｉｎｇ）物
質（例えば、乳糖、マンニトール））、ポリ乳酸／ポリグリコール酸ポリマーも
しくはコポリマーなどまたはリポソームとの組み合わせなどの高分子化合物の特
定の調製物への物質の組み込み。ヒアルロン酸はまた、投与成分として使用する
ことができ、これは、循環におけるなおさらなる徐放持続時間を促進する効果を
有し得る。さらに、本発明の徐放性組成物はまた、オイル（例えば、ゴマ油、ト
ウモロコシ油（植物性））もしくはリン脂質（例えば、レシチン）との混合物、
または中鎖脂肪酸トリグリセリド（例えば、Ｍｉｇｌｙｏｌ ８１２）で分散さ
せて油性懸濁物を得ることができる。本発明の組成物はまた、分散剤（水溶性多
糖（例えば、マンニトール、乳糖、グルコース、デンプン）、ヒアルロン酸、グ
リシン、フィブリン、コラーゲン、および無機塩（例えば、塩化ナトリウム）な
ど）で分散させることができる。

【００５６】 さらに、治療産物の肺への送達用に設計された機械的デバイスもまた本発明の
徐放性組成物の投与に使用されることが意図される。それには、噴霧器、定量吸
入器、および粉末吸入器（当業者は、これらの全てに精通している）が含まれる
がこれらに限定されない。

【００５７】 投与成分は、本発明のタンパク質および誘導体の物理的状態、安定性、ｉｎ
ｖｉｖｏでの放出速度、およびｉｎ ｖｉｖｏでのクリアランス速度に影響され
得る。成分の適切な投与および／または使用するための適切な機械的デバイスが
治療上の用途、投与経路、所望の投薬量、循環時間、タンパク質分解への耐性、
タンパク質の安定性および他の検討材料に依存することが当業者に認識される。

【００５８】 使用法 治療。治療用途は、使用される生物活性剤に依存する。当業者は、その意図す
る治療用途のために本発明の所望の生物活性剤を容易に適用することができる。
このような薬剤の治療用途は、図面を含めて本明細書中で参考として援用される
、以下の出版物により詳細に記載されている。治療用途は、以下に示すようなタ
ンパク質の使用が含まれるが、これらに限定されない：インターフェロン（米国
特許第５，３７２，８０８号、同第５，５４１，２９３号、同第４，８９７，４
７１号、および同第４，６９５，６２３号（図面を含めて本明細書中で参考とし
て援用される）を参照のこと）、インターロイキン（米国特許第５，０７５，２
２２号（図面を含めて本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）、エ
リスロポイエチン（米国特許第４，７０３，００８号、同第５，４４１，８６８
号、同第５，６１８，６９８号、同第５，５４７，９３３号、および同第５，６
２１，０８０号（図面を含めて本明細書中で参考として援用される）を参照のこ
と）、顆粒球コロニー刺激因子（米国特許第４，９９９，２９１号、同第５，５
８１，４７６号、同第５，５８２，８２３号、同第４，８１０，６４３号、およ
びＰＣＴ公開第９４／１７１８５号（図面を含めて本明細書中で参考として援用
される）を参照のこと）、幹細胞因子（ＰＣＴ公開第９１／０５７９５号、同第
９２／１７５０５号、および同第９５／１７２０６号（図面を含めて本明細書中
で参考として援用される）を参照のこと）、およびＯＢタンパク質（ＰＣＴ公開
第９６／４０９１２号、同第９６／０５３０９号、同第９７／００１２８号、同
第９７／０１０１０号、および９７／０６８１６（図面を含めて本明細書中で参
考として援用される）を参照のこと）。

【００５９】 さらに、本発明の治療用途には、以下に示す生物活性剤の使用が含まれるがこ
れらに限定されない：肥満抑制関連産物、インスリン、ガストリン、プロラクチ
ン、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体
形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピ
ン（ＨＣＧ）、モチリン、インターフェロン（α、β、γ）、インターロイキン
（ＩＬ−１〜ＩＬ−１２）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、腫瘍壊死因子結合タンパ
ク質（ＴＮＦ−ｂｐ）、能由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、神経膠細胞由来神経
栄養因子（ＧＤＮＦ）、神経栄養因子３（ＮＴ３）、線維芽細胞成長因子（ＦＧ
Ｆ）、神経栄養成長因子（ＮＧＦ）、骨成長因子（オステオプロテゲリン（ＯＰ
Ｇ）など）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、マクロファージコロニー刺激因
子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、
巨核球由来成長因子（ＭＧＤＦ）、トロンボポイエチン、血小板由来成長因子（
ＰＧＤＦ）、コロニー刺激成長因子（ＣＳＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、
スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、組織プラスミノゲン活性化因子（Ｔ
ＰＡ）、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、およびカリクレイン。本明細書中
で使用される、用語「タンパク質」には、ペプチド、ポリペプチド、コンセンサ
ス分子、アナログ、誘導体、またはその組み合わせが含まれる。さらに、本発明
の組成物はまた、生物活性剤での治療が意図される病状の治療または回復のため
の１つまたは複数の薬物の製造に使用することができる。

【００６０】 例として、治療用途（血液中での酸化）および骨吸収または骨粗鬆症の減少も
また、体重を減少させることなく達成することができる。

【００６１】 併用療法 本発明の組成物および方法は、他の治療（食事および運動の変更など）と組み
合わせて使用することができる。他の薬物（糖尿病の治療に有用な薬物（例えば
、インスリンおよびおそらくアミリン）、コレステロールおよび血圧を減少させ
る薬物（例えば、血中脂質レベルを減少させる薬物または他の心血管薬物）、活
性増加薬剤（例えば、アンフェタミン）、利尿剤（液体排泄用）、および食欲抑
制剤）。このような投与は、同時または逐次であり得る。さらに、本方法は、身
体の全体的な外見を変化させるために設計された美容整形外科などの手術（例え
ば、体格を減少させるために設計された脂肪吸引およびレーザー手術または外見
の体格を増加させるために設計された移植）と組み合わせて使用することができ
る。心臓手術（脂肪蓄積物による血管の遮断（動脈の斑など）による有害な条件
を軽減するように設計されたバイパス手術または他の手術など）の健康上の利点
は、本発明の組成物および方法の併用によって増加する。胆石排出法（超音波法
またはレーザー法など）はまた、本発明の治療法の前、最中、または後のいずれ
かで使用することができる。さらに、本方法は、骨折、筋肉の損傷のための手術
もしくは治療または他の治療への添加物として使用することができ、これにより
、不足した組織の質量を増加させることによって改良されるであろう。

【００６２】 投薬量 当業者は、投与および所望の治療効果の観察によって有効な投薬量を確認する
ことができる。徐放性調製物の投薬量は、所定の期間、ｉｎ ｖｉｖｏで生物活
性剤の有効濃度を達成するために必要な量である。徐放性調製物の投薬量および
好ましい投与頻度は、生物活性剤の型、所望の放出持続時間、標的疾患、所望の
投薬頻度、目的の動物の種、および他の因子によって変化する。約０．１０μｇ
／ｋｇ／日と１００ｍｇ／ｋｇ／日との間で所望の治療効果が得られるように分
子を処方するのが好ましい。

【００６３】 有効量は、診断ツールを使用して同定することができる。一例として、本発明
は、ＯＢタンパク質の投薬量を提供する。例えば、第１に、血液（または血漿ま
たは血清）中のＯＢタンパク質量測定の診断法を使用して内因性のＯＢタンパク
質レベルを測定することができる。このような診断ツールは、抗体サンドイッチ
アッセイなどの抗体アッセイの形態であり得る。最初に、内因性ＯＢタンパク質
の量を定量し、ベースラインを決定する。治療投薬量を、内因性ＯＢタンパク質
の数量として同定し、外因性ＯＢタンパク質（すなわち、自己産生または投与さ
れ、体内に見出されたタンパク質、アナログ、または誘導体）を、治療クールに
わたり継続する。例えば、治療の利点が認められるまで、最初は、比較的高い投
薬量が必要であり、その後、より低い投薬量を用いて治療の利点を維持する。

【００６４】 材料と方法 材料。アルギン酸ナトリウムの形態のアルギン酸塩は、当該分野で周知の供給
源から見出すことができる。ＯＢタンパク質およびＧＣＳＦは、Ａｍｅｇｅｎ
Ｉｎｃから得る。他の化学薬品は、当該分野で周知の供給源から得る。

【００６５】 アルギン酸塩ヒドロゲル粒子／ビーズの調製。

【００６６】 アルギン酸塩ヒドロゲル粒子およびビーズ（タンパク質含有および含有してい
ない）の調製は、同時継続中である、米国特許出願番号第０８／８４２，７５６
号（本明細書中で参考として援用される）に詳細に記載されている。

【００６７】 遅延型ゲル調製 遅延型アルギン酸塩ヒドロゲル（タンパク質含有および含有していない）の調
製は、同時継続中である、米国特許出願番号第０８／８５７，９１３号および同
第０８／９１２，９０２号（本明細書中で参考として援用される）に詳細に記載
されている。

【００６８】 以下の実施例は、本発明をより完全に例示するために付与されるが、本発明の
範囲を限定すると解釈すべきではない。さらに、上記の開示または以下の実施例
に関して、当業者は、大量生産の開示のために必要に応じて変更することができ
る。

【００６９】 実施例１ 以下の実施例は、本発明で使用されるアルギン酸エステルの調製を記載する。

【００７０】 調製Ａ：テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）アルギン酸塩。スルホン酸樹脂
（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＡＧ ＭＰ−５０）を、室温でのバッチ法を用いてテトラブ
チルアンモニウムヒドロキシド（Ａｌｄｒｉｃｈ）との処理によりテトラブチル
アンモニウム（ＴＢＡ）形態に変換する。８００ｍｌの蒸留水に溶解した１０ｇ
のアルギン酸のナトリウム塩に、テトラブチルアンモニウム塩形態の、６０ｍｌ
のスルホン酸樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，ＡＧ ＭＰ−５０）を添加する。混合物を
、室温で０．５時間撹拌する。樹脂をろ過して取り除き、蒸留水で洗浄する。ろ
過物中のＴＢＡアルギン酸塩を、凍結乾燥によって単離し（収量１６．８ｇ）、 ^１ ＨＮＭＲによって確認した。

【００７１】 調製Ｂ：アルギン酸の部分的エチルエステル、エステル化度（ＤＥ）＝３０ｍ
ｏｌ％。

【００７２】 ＴＢＡアルギン酸塩（６ｇ、１４．４ｍｍｏｌ ＴＢＡ単位）を、５００ｍｌ
のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に室温で溶解する。次いで、ヨードエタ
ン（Ａｌｄｒｉｃｈ、６７３ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を、３
０℃で１５時間撹拌し、その後、室温に冷却する。この溶液に、２０ｍＬの水に
溶解した２ｇのＮａＣｌ溶液をゆっくり添加し、ＴＢＡをナトリウム塩に完全に
変換させる。１５〜３０分の撹拌後、溶液を１５００ｍＬの酢酸エチルにゆっく
りと注ぐ。沈殿物をろ過によって回収し、アセトン／水（８：１ｖ／ｖ）で３回
およびアセトンで３回洗浄し、その後、真空乾燥する。化合物を、蒸留水（約１
００ｍＬ）中に再溶解し、０℃で、ｐＨを０．２％ＮａＨＣＯ_３で約６．５に調
整する。次いで、溶液を、４℃の蒸留水に対して一晩透析し（ＭＷカットオフ８
０００）、その後、凍結乾燥する。部分的エステルの収量は２．８ｇであり、エ
ステル化度は３０＋／−１％（^１Ｈ ＮＭＲ、内部標準としてマレイミド）であ
る。

【００７３】 調製Ｃ：アルギン酸の全および部分的エチルエステル、ＤＥ＝１００％、５０
％、２０％、１０％、および５％。

【００７４】 これらの化合物の調製は、ヨードエタンの添加量を所望のエステル化度に到達
するように調整する以外は、調製Ｂに記載の調製法と同様である。

【００７５】 調製Ｄ：アルギン酸の部分的プロピルエステル、ヘキシルエステル、オクチル
エステル、およびドデシルエステル。

【００７６】 調製は、ヨードエタンを１−ヨードプロパン、１−ヨードヘキサン、１−ヨー
ドオクタン、または１−ヨードドデカンにそれぞれ置き換えるのを除いて上記の
調製ＢおよびＣに記載の調製法と同様である。

【００７７】 調製Ｅ：アルギニン酸の部分的ベンジルエステル、ＤＥ＝３０％。

【００７８】 ＴＢＡアルギン酸塩（２．５ｇ、５．９９ｍｍｏｌ ＴＢＡ単位）を室温で約
２００ｍＬのＤＭＳＯに溶解する。臭化ベンジル（Ａｌｄｒｉｃｈ、３０７ｍｇ
、１．８ｍｍｏｌ）およびＴＢＡヨウ化物（Ａｌｄｒｉｃｈ、３０ｍｇ）を添加
する。混合物を、３０℃で１５時間撹拌し、その後、室温に冷却する。この溶液
に１０ｍＬ水に溶解させた０．６ｇＮａＣｌ溶液をゆっくり添加し、ＴＢＡをナ
トリウム塩に完全に変換する。１５〜３０分間撹拌した後、溶液を、５００ｍＬ
の酢酸エチル中にゆっくりと注いだ。沈殿物をろ過によって回収し、アセトン／
水（８：１ｖ／ｖ）で３回およびアセトンで３回洗浄し、その後、真空乾燥する
。化合物を、蒸留水（約６０ｍＬ）中に再溶解し、０℃で、ｐＨを０．２％Ｎａ
ＨＣＯ_３で約６．５に調整する。次いで、溶液を、４℃の蒸留水に対して一晩透
析する（ＭＷカットオフ８０００）。部分的エステルの収量は１．３ｇであり、
エステル化度は３０＋／−１％（^１Ｈ ＮＭＲ、内部標準としてマレイミド）で
ある。

【００７９】 調製Ｆ：異なるＤＥのアルギン酸の全および部分的ベンジルエステル。

【００８０】 これらの化合物の調製は、臭化ベンジルおよびＴＢＡヨウ化物の添加量を所望
のエステル化度に到達するように調整する以外は、調製物Ｅに記載の調製法に同
様である。

【００８１】 実施例２ 以下の実施例は、アルギン酸エチルエステル（ＤＥ＝１５ｍｏｌ％および１０
ｍｏｌ％）ゲルを含むタンパク質薬物（レプチン）の調製およびこのゲルからの
ｉｎ ｖｉｔｒｏでの徐放を示す。

【００８２】 レプチン（１００ｍｇ／ｍＬ、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ８．８（ｐ
Ｈを、１Ｍ ＮａＯＨで８．０から８．８に調整する））および６％アルギン酸
のエチルエステル（１５ｍｏｌ％、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ８．６）
を、氷浴で冷却する。６％アルギン酸のエチルエステル（０．１８ｍＬ）にレプ
チン（０．５ｍＬ）を添加し、混合物を氷浴中で１０〜１５分間撹拌する。最終
ｐＨは、８．６〜８．８である。この混合物に、１Ｍ ＣａＣＯ_３（１６μＬ）
を添加し、得られた懸濁液を、十分に混合する。この懸濁液を撹拌しながら０．
１Ｍ ＺｎＣｌ_２（１００μＬ）溶液を滴加し、その後、水を添加して体積を１
ｍＬにする。混合物を完全に混合して、氷浴に１０〜２０分間維持する。次いで
、１．６８Ｍ δ−グルコノラクトン（Ａｌｄｒｉｃｈ、５６μＬ）溶液を、こ
の混合物に添加して完全に撹拌する。最終混合物（５０ｍｇ／ｍＬレプチン、１
％アルギン酸エチルエステル、０．１ｍＬ）を、エッペンドルフチューブ中に入
れ、４℃で一晩放置し、ゲル化させる。一晩の保存後、ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出を
１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ７．４）中で誘導する。１５ｍｏｌ％のエステ
ル化度を有するキャストゲルは、最小のバーストおよび６日間で６０％が放出す
るレプチンのかなり一定の放出を示す。１０ｍｏｌ％のエステル化度を有するキ
ャストゲルは、最小のバーストおよび６日間で５５％が放出するレプチンのかな
り一定の放出を示す。

【００８３】 実施例３ 以下の実施例は、アルギン酸のヘキシルエステル（ＤＥ＝１５ｍｏｌ％および
１０ｍｏｌ％）ゲルを含むタンパク質薬物（レプチン）の調製およびこのゲルか
らのｉｎ ｖｉｔｒｏでの徐放を示す。

【００８４】 本実施例を、アルギン酸のエチルエステル以外は、実施例２に記載の様式と同
様の様式で行う。

【００８５】 １５ｍｏｌ％および１０ｍｏｌ％のエステル化度を有するアルギン酸のヘキシ
ルエステルのゲルは、最小のバーストを示し、６日間で５０％が放出する徐放を
示す。

【００８６】 実施例４ 以下の実施例は、アルギン酸エチルエステル（ＤＥ＝１５ｍｏｌ％）ゲルを含
むタンパク質薬物（Ｚｎ−レプチン）の調製およびこのゲルからのｉｎ ｖｉｔ
ｒｏでの徐放を示す。

【００８７】 ４％（ｗ／ｖ）のアルギン酸のエチルエステル溶液（１５ｍｏｌ％、０．７５
ｍＬ）に１Ｍ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ８．０、７．５μＬ）、０．５Ｍ ＰＩ
ＰＥＳ（ｐＨ６．８、３３μＬ）、および０．１Ｍ ＺｎＣｌ_２（８．５μＬ）
を添加する。混合物を十分に攪拌する。この溶液に、Ｚｎ−レプチン懸濁液（１
００ｍｇ／ｍＬ、６７５μＬ）を添加し、混合物を完全に撹拌する。１Ｍ Ｃａ
ＣＯ_３懸濁液（２４μＬ）と１．６８Ｍ ｄ−グルコノラクトン（７０μＬ）溶
液とをこの混合物に添加し、完全に撹拌する。最終混合物（０．１ｍＬ）をエッ
ペンドルフチューブの内側に入れ、４℃で一晩静置し、ゲル化する。一晩の保存
後、ｉｎ ｖｉｔｒｏ放出を、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ７．４）中で誘
導する。この１５ｍｏｌ％のエステル化度を有するキャストアルギン酸のエチル
エステルゲルは、ほとんどバーストをせず、４日間で６５％が放出されたレプチ
ンの徐放を示す。

【００８８】 実施例５ 以下の実施例は、アルギン酸エチルエステル（ＤＥ＝３０ｍｏｌ％）ゲルを含
むタンパク質薬物（ＧＣＳＦ）の調製およびこのゲルからのｉｎ ｖｉｔｒｏで
の徐放を示す。

【００８９】 ２．３９％のアルギン酸のエチルエステル（３０ｍｏｌ％、０．５．ｍＬ）溶
液に、０．１Ｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ４．５、１００μＬ）、ＧＣＳＦ（１０４μ
Ｌ、４８．２ｍｇ／ｍＬ、ＨＣｌ、ｐＨ３）および蒸留水（２４６ｍＬ）を添加
する。混合物を、十分に撹拌する。１Ｍ ＣａＨＰＯ_４懸濁液（１０μＬ）と１
．６８Ｍ δ−グルコノラクトン（４０μＬ）溶液を、この混合物に添加して、
完全に撹拌する。最終混合物（０．２ｍＬ）をエッペンドルフチューブの内側に
入れ、４℃で一晩静置し、ゲル化する。ゲルの一晩の保存後、ｉｎ ｖｉｔｒｏ
放出を、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．５）中で誘導する。この３０ｍｏ
ｌ％のエステル化度を有するキャストアルギン酸のエチルエステルゲルは、５％
未満のバーストを示し、１日間で２０％および２日間で４０％が放出された徐放
を示す。

【００９０】 実施例６ 以下の実施例は、アルギン酸ベンジルエステル（ＤＥ＝３０ｍｏｌ％）ゲルを
含むタンパク質薬物（ＧＣＳＦ）の調製およびこのゲルからのｉｎ ｖｉｔｒｏ
での徐放を示す。

【００９１】 本実施例を、アルギン酸のエチルエステルの代わりにアルギン酸のベンジルエ
ステルを使用する以外は、実施例５に記載の様式と同様の様式で行う。アルギン
酸エステルゲルの保存期間は一晩以内である。この３０ｍｏｌ％のエステル化度
を有するアルギン酸のベンジルエステルゲルは、５％未満のバーストを示し、１
日間で４０％および２日間で８０％が放出された徐放を示す。

【００９２】 実施例７ 本実施例は、アルギン酸エチルエステルビーズの調整を示す。

【００９３】 ゲルビーズを、２％アルギン酸エステル溶液の１００ｍＭ塩化カルシウム溶液
（蒸留水または１Ｍ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ７．０）緩衝液）への滴下によっ
て調製する。形成されたビーズを、蒸留水または緩衝液で洗浄する。ビーズを、
３０％または５０％のエステル化度を使用して調製する。

【００９４】 実施例８ 本実施例は、レプチン含有アルギン酸エステルビーズの調製を示す。

【００９５】 ビーズを、２５ｍｇ／ｍＬレプチンの２％アルギン酸エチルエステル溶液（Ｔ
ｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ８．７）の、１００ｍＭ塩化カルシウムおよび２５ｍＭ塩
化亜鉛の溶液への滴下によって調製する。ビーズを、３０％のエステル化度を用
いて調製する。ビーズは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでレプチンの徐放を示す。

【００９６】 実施例９ 本実施例は、中性の生理学的ｐＨの緩衝液中でのアルギン酸エステルの分子量
の破壊（つまり、分解）を示す。

【００９７】 アルギン酸エステル（１％溶液）をリン酸緩衝液（０．１Ｍリン酸ナトリウム
、ｐＨ６．８）または０．１Ｍ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．０）のいずれかに溶
解し、３７℃でインキュベートする。分子量の破壊を、選択された時間間隔での
溶液粘度（Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ、２５℃）の減少を測定することにより決定す
る。非修飾アルギン酸ナトリウムは、その粘度が８日間で５％しか減少しない（
リン酸緩衝液）という点で比較的安定であることが見出されるが、同一の緩衝液
中でのアルギン酸のエチルエステルおよびベンジルエステル（ＤＥ＝３０％）は
、８日間で粘度が３５％低下する。アルギン酸エステルの分解量はまた、エステ
ル化度に依存し、例えば、エステル化度の低い（ＤＥ＝１５％）エチルエステル
では、８日間で粘度が２５％減少する。従って、分子量の破壊は、エステル化度
に直接関係している。

【００９８】 実施例１０ 本実施例は、タンパク質を含まないアルギン酸エステルヒドロゲルおよびタン
パク質を含むヒドロゲルのｉｎ ｖｉｖｏ分解（または段階的消失）を示す。

【００９９】 アルギン酸エステルゲルを、最終混合物をシリンジに取り出し、４℃のシリン
ジ中でゲルを静置する以外は、実施例３に記載の様式と同様の様式で調製する。
次いで、１００μＬのゲルを、マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、１２週齢
雌、ＢＤＦ１、２０ｇ、５マウス／群）の頸部の後ろ側に皮下注射し、群の異な
るメンバーの部位を手術して定期的に試験する。

【０１００】 ＤＥ＝３０％のアルギン酸のエチルエステルおよびベンジルエステル物質を用
いた単回注射部位研究の結果は、アルギン酸エステルゲルは２週間以内に消滅す
ることを示す。ＤＥ＝１５％のアルギン酸のエチルエステルゲルを用いると、ゲ
ルは３０日および６１日間でも存在したが、サイズは減少する。ＤＥ＝５％のア
ルギン酸のエチルエステル物質を用いると、ゲルは３０日および６１日間でも存
在し、サイズはほとんど減少しない。非置換アルギン酸ナトリウム物質を用いる
と、ゲルは、６１日目で相対的に変化がない。

【０１０１】 アルギン酸エステルゲルの消失速度は、タンパク質の有無にかかわらず類似し
ている。

【０１０２】 実施例１１ 本実施例は、ラットにおけるレプチン含有アルギン酸エステルヒドロゲルにつ
いての体重減少および薬物動態学的データを提供する。

【０１０３】 アルギン酸エチルエステルゲルを、最終混合物をシリンジに取り出し、４℃の
シリンジ中でゲルを静置する以外は、実施例３に記載の様式と同様の様式で調製
する。ラットに、大量瞬時投与量の０ｍｇ／ｋｇ（コントロール）および１００
ｍｇ／ｋｇを投与し、血液レベルおよび体重減少を７日間監視する。

【０１０４】 結果を以下に示す。ＤＥ＝５ｍｏｌ％を有するアルギン酸のエチルエステルは
、３日間安定な血液レベル（約２０００ｎｇ／ｍＬ）を示し、その後次の３〜４
日間で２〜３ｎｇ／ｍＬに減少する。ＤＥ＝１５ｍｏｌ％を有するアルギン酸の
エチルエステルは、２日間安定な血液レベル（約２０００ｎｇ／ｍＬ）を示し、
その後次の５日間で２〜３ｎｇ／ｍＬに減少する。ＤＥ＝３０ｍｏｌ％を有する
アルギン酸のエチルエステルは、１日間安定な血液レベル（約２０００ｎｇ／ｍ
Ｌ）を示し、その後次の４日間で２〜３ｎｇ／ｍＬに減少する。Ｚｎ−レプチン
懸濁液の血液レベルは、１２時間でピークに達し、その後６日目で１〜２ｎｇ／
ｍＬに減少する。全ての動物は体重減少を示し、これは、Ｚｎ−レプチンが活性
であることを示す。この結果はまた、アルギン酸のエチルエステルゲル（ＤＥ＝
５ｍｏｌ％および１５ｍｏｌ％）中へのＺｎ−レプチンの組み込みは、Ｚｎ−レ
プチンの曲線下面積（ＡＵＣ）の倍近く（１．８〜１．９）であることを示し、
これは、生物学的利用能が倍であることを示唆する。アルギン酸のエチルエステ
ルゲル（ＤＥ＝３０ｍｏｌ％）の使用は、ＡＵＣに基づいて、Ｚｎ−レプチンの
生物学的利用能と類似していることを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/02 Ａ６１Ｋ 47/36 47/12 Ａ６１Ｐ 1/16 １０５ 47/22 3/04 47/36 3/06 Ａ６１Ｐ 1/16 １０５ 3/10 3/04 9/08 3/06 9/10 3/10 １０１ 9/08 Ａ６１Ｋ 37/02 9/10 37/24 １０１ 37/66 Ｈ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，Ｚ Ｗ (72)発明者 クー，チエン・ホア アメリカ合衆国、カリフオルニア・91360、 サウザンド・オークス、ホドウンキヤン プ・ロード・ナンバー・76・319 Ｆターム(参考） 4C076 AA09 AA94 CC29 CC30 DD22 DD23 DD26 DD30 DD43 DD59 EE30 EE36 GG08 4C084 AA03 AA17 BA03 DA12 DA14 DA19 DA21 DA25 DB18 DB52 DB54 DB56 DB58 DB59 MA05 MA23 MA66 NA03 NA12 NA20

Claims (63)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 徐放性遅延型ゲル組成物であって、 ａ）親水性ポリマーと、 ｂ）生物活性剤と、 ｃ）少なくとも１つの結合多価金属イオンとを含み、前記ゲルが生分解性であ
   る、徐放性組成物。
2. 【請求項２】 前記結合多価金属イオンが結合多価金属イオンと非結合多価
   金属イオンとの混合物である、請求項１に記載の徐放性組成物。
3. 【請求項３】 生物活性剤または親水性ポリマーを安定させるための賦形剤
   をさらに含む、請求項１に記載の徐放性遅延型ゲル。
4. 【請求項４】 前記結合多価金属イオンが、その酢酸塩、リン酸塩、乳酸塩
   、酒石酸塩、クエン酸塩、塩化物、炭酸塩、または水酸化物からなる群から選択
   される塩である、請求項１に記載の組成物。
5. 【請求項５】 前記金属イオンが、マンガン、ストロンチウム、鉄、マグネ
   シウム、カルシウム、バリウム、銅、アルミニウム、または亜鉛からなる群から
   選択される、請求項４に記載の組成物。
6. 【請求項６】 前記金属イオンがカルシウムである、請求項５に記載の組成
   物。
7. 【請求項７】 前記プロトン供与体が酸供給源由来である、請求項１に記載
   の組成物。
8. 【請求項８】 前記酸供給源が、緩衝液、エステル、徐々に溶解する酸、ま
   たはラクトンからなる群から選択される、請求項７に記載の組成物。
9. 【請求項９】 前記親水性ポリマーがポリアニオンである、請求項１に記載
   の組成物。
10. 【請求項１０】 前記親水性ポリマーが多糖である、請求項１に記載の組成
    物。
11. 【請求項１１】 前記多糖が酸性多糖である、請求項１０に記載の組成物。
12. 【請求項１２】 前記多糖がアルギン酸塩である、請求項１１に記載の組成
    物。
13. 【請求項１３】 前記アルギン酸塩が少なくとも３０％のグルロン酸を含む
    、請求項１２に記載の組成物。
14. 【請求項１４】 前記アルギン酸塩が少なくとも０．０５重量％からなる、
    請求項１２に記載の組成物。
15. 【請求項１５】 前記生物活性剤がタンパク質を含み、前記組成物が改良さ
    れた生物学的利用能を示す、請求項１に記載の組成物。
16. 【請求項１６】 前記タンパク質が少なくとも０．００１ｍｇ／ｍｌからな
    る、請求項１５に記載の組成物。
17. 【請求項１７】 前記タンパク質が、造血因子、コロニー刺激因子、肥満抑
    制因子、成長因子、栄養因子、および抗炎症因子からなる群から選択される、請
    求項１５に記載の組成物。
18. 【請求項１８】 前記タンパク質が、レプチン、Ｇ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＢＤ
    ＮＦ、ＧＤＮＦ、ＮＴ３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ２、ＴＮＦ−ｂｐ
    、ＭＧＤＦ、ＯＰＧ、インターフェロン、エリスロポイエチン、ＫＧＦ、インス
    リン、およびそのアナログまたは誘導体からなる群から選択される、請求項１５
    に記載の組成物。
19. 【請求項１９】 前記生物活性剤が複合生物活性剤である、請求項１に記載
    の組成物。
20. 【請求項２０】 前記複合生物活性剤が沈殿タンパク質である、請求項１９
    に記載の組成物。
21. 【請求項２１】 前記沈殿タンパク質が亜鉛レプチン沈殿である、請求項２
    ０に記載の組成物。
22. 【請求項２２】 徐放性遅延型ゲル組成物の製造方法であって、前記ゲルは
    生分解性であり、 ａ）溶媒中で生物活性剤と親水性ポリマーとを混合して第１の混合物を形成さ
    せる工程と、 ｂ）前記第１の混合物に少なくとも１つの結合多価金属イオンを混合して第２
    の混合物を形成させる工程とを包含する、方法。
23. 【請求項２３】 ｃ）前記第２の混合物に結合多価金属イオンを放出するこ
    とができる少なくとも１つのプロトン供与体を混合する工程をさらに包含する、
    請求項２２に記載の方法。
24. 【請求項２４】 前記プロトン供与体または結合多価金属イオンとの混合前
    に、前記第１の混合物を濃縮する、請求項２２に記載の方法。
25. 【請求項２５】 前記結合多価金属イオンが、その酢酸塩、リン酸塩、乳酸
    塩、クエン酸塩、酒石酸塩、塩化物、炭酸塩、または水酸化物からなる群から選
    択される塩である、請求項２２に記載の方法。
26. 【請求項２６】 前記方法により、患者の前記生物活性剤の血液レベルが長
    時間実質的に一定になる、請求項２２に記載の方法。
27. 【請求項２７】 前記金属イオンが、マンガン、ストロンチウム、鉄、マグ
    ネシウム、カルシウム、バリウム、銅、アルミニウム、または亜鉛からなる群か
    ら選択される、請求項２４に記載の組成物。
28. 【請求項２８】 前記金属イオンがカルシウムである、請求項２６記載の組
    成物。
29. 【請求項２９】 前記プロトン供与体が酸供給源由来である、請求項２３に
    記載の組成物。
30. 【請求項３０】 前記徐々に溶解する酸が、緩衝液、エステル、徐々に溶解
    する酸、またはラクトンからなる群から選択される、請求項２８に記載の組成物
    。
31. 【請求項３１】 前記酸供給源がδ−グルコノラクトンである、請求項２９
    に記載の組成物。
32. 【請求項３２】 前記親水性ポリマーがポリアニオンである、請求項２２に
    記載の組成物。
33. 【請求項３３】 前記親水性ポリマーが多糖である、請求項２２に記載の組
    成物。
34. 【請求項３４】 前記多糖が酸性多糖である、請求項３２に記載の組成物。
35. 【請求項３５】 前記多糖がアルギン酸塩である、請求項３３に記載の組成
    物。
36. 【請求項３６】 前記アルギン酸塩が少なくとも３０％のグルロン酸を含む
    、請求項３４に記載の組成物。
37. 【請求項３７】 前記アルギン酸塩が少なくとも０．０５重量％からなる、
    請求項３４に記載の組成物。
38. 【請求項３８】 前記生物活性剤がタンパク質を含む、請求項２２に記載の
    組成物。
39. 【請求項３９】 前記タンパク質が少なくとも０．００１ｍｇ／ｍｌからな
    る、請求項３７に記載の組成物。
40. 【請求項４０】 前記タンパク質が、造血因子、コロニー刺激因子、肥満抑
    制因子、成長因子、栄養因子、および抗炎症因子からなる群から選択される、請
    求項３７に記載の組成物。
41. 【請求項４１】 前記タンパク質が、レプチン、Ｇ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＢＤ
    ＮＦ、ＧＤＮＦ、ＮＴ３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ２、ＴＮＦ−ｂｐ
    、ＭＧＤＦ、ＯＰＧ、インターフェロン、エリスロポイエチン、ＫＧＦ、および
    そのアナログまたは誘導体からなる群から選択される、請求項３７に記載の組成
    物。
42. 【請求項４２】 前記生物活性剤が複合生物活性剤である、請求項２２に記
    載の組成物。
43. 【請求項４３】 前記複合生物活性剤が沈殿タンパク質である、請求項４１
    に記載の組成物。
44. 【請求項４４】 前記沈殿タンパク質が亜鉛レプチン沈殿である、請求項４
    ２に記載の組成物。
45. 【請求項４５】 前記徐放性組成物を単離する工程をさらに包含する、請求
    項２２に記載の方法。
46. 【請求項４６】 前記請求項２２または請求項４４に記載の方法によって製
    造される、徐放性生成物。
47. 【請求項４７】 薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、またはアジュバン
    ト中に、請求項１、２、３または４５に記載の前記徐放性組成物が含まれる、薬
    学的処方物。
48. 【請求項４８】 前記処方物がシリンジ中に存在する、請求項４６に記載の
    薬学的処方物。
49. 【請求項４９】 薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、またはアジュバン
    ト中の、請求項１、２、３または４５に記載の前記徐放性組成物を用いた適応症
    の治療方法。
50. 【請求項５０】 薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、またはアジュバン
    ト中の、請求項１、２、３または４５に記載の徐放性組成物であって、前記生物
    活性剤がレプチン、そのアナログまたは誘導体である組成物を用いた、肥満、糖
    尿病、高血中脂質レベル、動脈硬化、動脈プラーク、胆石形成の減少または予防
    、徐脂肪組織量の不足、インスリンに対する感受性の不足、および脳卒中からな
    る群から選択される障害の治療法。
51. 【請求項５１】 薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、またはアジュバン
    ト中の、請求項１、２、３または４５に記載の徐放性組成物であって、前記生物
    活性剤がＧ−ＣＳＦ、そのアナログまたは誘導体である組成物を用いた、造血細
    胞欠損症、感染、および好中球減少からなる群から選択される障害の治療法。
52. 【請求項５２】 薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、またはアジュバン
    ト中の、請求項１、２、３または４５に記載の徐放性組成物であって、前記生物
    活性剤がＩＬ−１ｒａ、そのアナログまたは誘導体である組成物を用いた、炎症
    の治療法。
53. 【請求項５３】 徐放性組成物であって、 ａ）親水性ポリマーと、 ｂ）生物活性剤と、 ｃ）少なくとも１つの沈殿剤とを含み、 前記生物活性剤が親水性ポリマー内で共沈し、前記組成物がゲル粒子の形態であ
    り、前記粒子が生分解性であることを特徴とする、徐放性組成物。
54. 【請求項５４】 前記沈殿剤が、多価金属イオンもしくは塩、その酢酸塩、
    クエン酸塩、塩化物、炭酸塩、または水酸化物からなる群から選択される、請求
    項５２に記載の組成物。
55. 【請求項５５】 前記金属イオンが、マンガン、ストロンチウム、鉄、マグ
    ネシウム、カルシウム、バリウム、アルミニウム、または亜鉛からなる群から選
    択される、請求項５３に記載の組成物。
56. 【請求項５６】 前記沈殿剤が、亜鉛、カルシウム、またはその組み合わせ
    からなる群から選択される多価イオンである、請求項５４に記載の組成物。
57. 【請求項５７】 前記親水性ポリマーが多糖である、請求項５２に記載の組
    成物。
58. 【請求項５８】 前記多糖がアルギン酸塩である、請求項５６に記載の組成
    物。
59. 【請求項５９】 ａ）溶媒に生物活性剤および親水性ポリマーを溶解して第
    １の混合物を形成させる工程と、 ｂ）溶媒中に少なくとも１つの沈殿剤を溶解して第２の混合物を形成させる工
    程と、 ｃ）前記第１の混合物を前記第２の混合物に添加する工程と、 ｄ）前記生物活性剤と前記親水性ポリマーとを共沈させて共沈ゲル粒子を形成
    させる工程を包含し、前記粒子は生分解性である、徐放性組成物の製造法。
60. 【請求項６０】 前記共沈粒子を単離する工程をさらに包含する、請求項５
    ８に記載の方法。
61. 【請求項６１】 前記請求項５９に記載の方法によって製造される、徐放性
    生成物。
62. 【請求項６２】 薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、またはアジュバン
    ト中の、請求項５２に記載の薬学的処方物。
63. 【請求項６３】 薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、またはアジュバン
    ト中の、請求項５２に記載の徐放性組成物を用いた、適応症の治療法。