JP2002510199A - レンチウイルスをベースにした遺伝子転移ベクター - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.(a)ウマ伝染性貧血ウイルス(EIAV)ゲノムの少なくとも一部分の核酸配 列から成る第一のベクターであって、(i)EIAV構造タンパク質をコードする少 なくとも一つの遺伝子に少なくとも一つの欠損を含み、また(ii)欠損性パッケ ージングシグナルを含む第一のベクターと、 (b)EIAVゲノムの少なくとも一部分の核酸配列から成る第二のベクターであっ て、(i)応答能のあるパッケージングシグナルを含み、また(ii)異種遺伝 子が挿入されることになるであろう複数のクローニング部位を含む第二のベク ターと、 (c)ウイルスの核酸配列から成る第三のベクターであって、 (i)ウイルスエンベロープタンパク質を発現させ、また(ii)欠損性パッケー ジングシグナルを含む第三のベクターとを含む組換えレンチウイルスベクター発 現システム。 2. 前記第二のベクターは少なくとも一つのEIAV構造タンパク質の発現に関 して欠陥がある請求項1に記載のベクターシステム。 3. 前記第一のベクター、前記第二のベクター、前記第三のベクターがEIAV ゲノムの少なくとも一部分のcDNAクローンである請求項1に記載のベクターシス テム。 4. 前記第一のベクターがgag-pol発現ベクターであり、また該ベクターがen v遺伝子に欠損を含んでいる請求項1に記載のベクター発現システム。 5. env遺伝子にある前記欠損が欠失突然変異である請求項4に記載のベクタ ー発現システム。 6. 前記第一のベクターと前記第二のベクターがそれぞれenv遺伝子に欠損を 含んでいる請求項1に記載のベクター発現システム。 7. 前記第三のベクターがEIAVエンベロープタンパク質ではないエンベロ ープタンパク質をコードする請求項1に記載のベクター発現システム。 8. 前記第三のベクターが水疱性口内炎ウイルスG糖タンパク質を発現させ る請求項1に記載のベクター発現システム。 9. 前記第二のベクターが異種遺伝子を含んでいる請求項1に記載のベクタ ー発現システム。 10. 前記異種遺伝子が抗原タンパク質あるいはペプチドをコードする請求項 9に記載のベクター発現システム。 11. 前記第一のベクターがプラスミドpEV53とプラスミドpEV53Aから成るグ ループから選択され、前記第二のベクターがpEC-lacZとpEC-puroから成るグルー プから選択され、前記第三のベクターがプラスミドpCI-VSV-Gである請求項1に 記載のベクター発現システム。 12. pEV53として図2Aに説明されているプラスミド。 13. pEV53Aとして図2Bに説明されているプラスミド。 14. pEC lacZとして図2に説明されているプラスミド。 15. pEC-puroとして図3に説明されているプラスミド。 16. pCI-VSV-Gとして図4に説明されているプラスミド。 17. ウマ伝染性貧血ウイルス(EIAV)ゲノムの少なくとも一部分の核酸配列 から成る第一のベクターであって、(i)EIAV構造タンパク質をコードする少な くとも一つの遺伝子に少なくとも一つの欠損を含んでおり、また(ii)欠損性パ ッケージングシグナルを含んでいる第一のベクターと、 (a)EIAVゲノムの少なくとも一部分の核酸配列から成る第二のベクターであっ て、(i)応答能のあるパッケージングシグナルを含んでいて、また(ii) 異種遺伝子が挿入されることになるであろう複数のクローニング部位を含ん でいる第二のベクターと、 (b)ウイルスの核酸配列から成る第三のベクターであって、(i)ウイルスエ ン ベロープタンパク質を発現させ、また(ii)欠損性パッケージングシグナル を含んでいる第三のベクターとによって細胞をトランスフェクションするこ とを含む複製-欠損性レンチウイルス粒子を産生する方法。 18. 前記細胞は非分裂細胞である請求項17に記載の方法。 19. 前記第二のベクターが異種遺伝子を含んでいる請求項17に記載の方法。 20. 請求項17の方法により産生される複製-欠損性レンチウイルス粒子。 21. プロモーターと異種遺伝子配列をコードするEIAV核酸配列を含む感染性 EIAV粒子であって、該ウイルス粒子が複製欠損性となるように、少なくとも一つ のEIAV構造タンパク質をコードする際に前記核酸配列が欠損性となる感染性EIAV 粒子。 22. 前記レンチウイルス粒子が請求項17の方法により産生される複製-欠損 性レンチウイルス粒子を含む細胞。 23. ウマ伝染性貧血ウイルス(EIAV)ゲノムの少なくとも一部分の核酸配列 から成る第一のベクターであって、(i)EIAV構造タンパク質をコードする少な くとも一つの遺伝子に少なくとも一つの欠損を含んでいて、また(ii)欠損性パ ッケージングシグナルを含んでいる第一のベクターと、 (a) EIAVゲノムの少なくとも一部分の核酸配列から成る第二のベクター であって、 (i)応答能のあるパッケージングシグナルを含んでいて、また(ii)異種遺伝 子が挿入されることになるであろう複数のクローニング部位を含んでいる第二の ベクターと、 (b) ウイルスの核酸配列から成る第三のベクターであって、 (i)ウイルスエンベロープタンパク質を発現させ、また(ii)欠損性パッケー ジングシグナルを含んでいる第三のベクターとによって、 前記標的細胞をトランスフェクションすることを含む標的細胞に異種遺伝子をデ リバリーする方法。 24. 前記標的細胞が非分裂細胞である請求項23に記載の方法。 25. (a)レンチウイルス-許容プロデューサー細胞をトランスフェクショ ンするステップであり、 (i)ウマ伝染性貧血ウイルス(EIAV)ゲノムの少なくとも一部分の核酸配列 から成る第一のベクターであり、(1)EIAV構造タンパク質をコードする少な くとも一つの遺伝子に少なくとも一つの欠損を含んでいて、また(2)欠損性 パッケージングシグナルを含んでいる第一のベクターと、 (ii)EIAVゲノムの少なくとも一部分の核酸配列から成る第二のベクターであ り、(1)応答能のあるパッケージングシグナルを含んでいて、(2)異種遺伝 子を含んでいる第二のベクターと、 (iii)ウイルスの核酸配列から成る第三のベクターであり、(1)ウイルスエ ンベロープタンパク質を含んでいて、また(2)欠損性パッケージングシグナ ルを含んでいる第三のベクターとによって、レンチウイルス-許容プロデュー サー細胞をトランスフェクションするステップと、 (b)該細胞において複製-欠損性レンチウイルス粒子の産生を許容するのに十 分な細胞培養条件下で前記プロデューサー細胞を成長させるステップと、 (c)該プロデューサー細胞から複製-欠損性レンチウイルス粒子を収集するス テップとを含むレンチウイルス菌株を産生する方法。 26. 前記プロデューサー細胞を細胞培地で成長させ、また前記複製-欠損性 レンチウイルス粒子が該培地から収集される請求項25に記載の方法。 27. 請求項25のステップ(c)により収集される複製-欠損性レンチウイルス 粒子によって前記標的細胞を感染させることから成る標的細胞に異種遺伝子をデ リバリーする方法。 28. 前記標的細胞が非分裂細胞である請求項27に記載の方法。 29. 前記標的細胞がヒト気道上皮細胞である請求項27に記載の方法。 30. 請求項20ないしは21のいずれかに記載の複製-欠損性レンチウイルス粒 子によって該標的細胞を感染させることを含む標的細胞に異種遺伝子をデリバリ ーする方法。 31. 医薬品として受け入れ可能なキャリヤーの中に入っている請求項20ない しは請求項21のいずれかに記載されている複製-欠損性レンチウイルス粒子から 成る医薬品製剤。 32. ウマ伝染性貧血ウイルス(EIAV)ゲノムの少なくとも一部分の核酸配列 から成るベクターによってレンチウイルス-許容細胞をトランスフェクションす ることから構成されていて、該ベクターが欠損性パッケージングシグナルを含ん でいるパッケージング細胞を作成する方法。 33. 前記ベクターがgag-pol発現ベクターである請求項32に記載の方法。 34. 前記ベクターがブラスミドpEV53とプラスミドpEV53Aから成るグループ から選択される請求項32に記載の方法。 35. 前記レンチウイルス-許容細胞がヒト293細胞である請求項32に記載の方 法。 36. 少なくとも一つのEIAV構造タンパク質をコードするEIAV核酸配列を含ん でいるレンチウイルス-許容宿主細胞から成るパッケージ細胞であって、前記核 酸配列がパッケージ-シグナル欠損性であり、そのため、細胞自体は少なくとも 一つのEIAV構造タンパク質を産生することはできるが、複製能力のある感染性ウ イルスを産生することはできないパッケージ細胞。
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