JP2023528590A - 中枢神経系障害に対する線維芽細胞増殖因子２１（ｆｇｆ２１）遺伝子治療 - Google Patents

Abstract

中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態の治療および／または予防に使用するための、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が本明細書に記載される。

Description

本明細書に記載される態様および実施形態は、医学の分野、特に中枢神経系障害のための遺伝子治療に関する。

加齢は認知機能の低下に関連し、神経変性および認知症の主要な危険因子である（Ｗｙｓｓ－Ｃｏｒａｙ，Ｔ．Ａｇｅｉｎｇ，ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｒａｉｎ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ５３９，１８０－１８６（２０１６））。神経筋骨格機能、筋力および歩行活動もまた、年齢と共に低下することが報告されている（Ｌｙｎｃｈ，Ｍ．Ａ．（２００４）．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．８４，８７－１３６．；Ｗｅｎｚ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．２００９．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０６（４８），２０４０５－１０；Ｌｈｏｔｅｌｌｉｅｒ Ｌ，Ｃｏｈｅｎ－Ｓａｌｍｏｎ Ｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｅｈａｖ １９８９；４５：４９１－４９３）。最も一般的な神経変性疾患であるアルツハイマー病（ＡＤ）およびパーキンソン病（ＰＤ）は、主に高齢者に観察され、これらの疾患のリスクは加齢と共に増加する。６５歳以上の１０人に１人がＡＤを有し、その有病率は年齢と共に増加し続ける。ＡＤの有病率は、今後２０年以内に倍増すると予想されている（Ｐｒｉｎｃｅ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．ｇｌｏｂａｌ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｄｅｍｅｎｔｉａ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｅｍｅｎｔ ９，ｅ ６２（２０１３））。ＡＤの主な臨床的特徴は、晩年の記憶および学習障害、見当識障害、気分変動および行動の問題である（Ｈｏｕ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ａｇｅｉｎｇ ａｓ ａ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ｖｏｌｕｍｅ １５，ｐａｇｅｓ５６５－５８１（２０１９））。ＰＤの診断的特徴には、移動の幅および速度、硬直および／または安静時振戦に影響を及ぼす神経筋機能不全が含まれる（Ｈｏｕ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ｖｏｌｕｍｅ １５，ｐａｇｅｓ ５６５－５８１（２０１９））。

不安および抑うつ障害もまた、公衆衛生上の大きな懸念である。具体的には、不安障害は、ヒトに影響を及ぼすすべての精神衛生上の問題のうちで最も一般的である（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９６，２０３－１４（２０１１））。

代謝障害（糖尿病および肥満症など）は、認知症、抑うつ、不安、脳卒中およびアルツハイマー病（ＡＤ）をも引き起こす進行性疾患である（Ｒ．Ｍａｙｅｕｘ，Ｙ．Ｓｔｅｒｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｍｅｄ．２，ａ００６２３９（２０１２）；Ａｓａｔｏ ｅｔ ａｌ，Ｎｉｈｏｎ Ｓｈｉｎｋｅｉ Ｓｅｉｓｈｉｎ Ｙａｋｕｒｉｇａｋｕ Ｚａｓｓｈｉ，３２（５－６），２５１－５（２０１２）；Ｏ．Ｇｕｉｌｌｅｍｏｔ－Ｌｅｇｒｉｓ，Ｇ．Ｇ．Ｍｕｃｃｉｏｌｉ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．４０，２３７－２５３（２０１７））（９）。実際、肥満症患者は、非肥満対象よりもこのような中枢性障害を発症する傾向がある（Ａ．Ｊ．Ｂｒｕｃｅ－Ｋｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｎ．Ｋｅｌｌｅｒ，Ｃ．Ｄ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１７９２，３９５－４００（２００９）。Ｔ２ＤＭは、アルツハイマー病（ＡＤ）のリスクをほぼ２倍にする（Ｏｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。同様に、不安および抑うつの有病率は、一般集団よりも糖尿病患者および肥満症患者において高いことが十分に認識されている（Ａｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｉｈｏｎ Ｓｈｉｎｋｅｉ Ｓｅｉｓｈｉｎ Ｙａｋｕｒｉｇａｋｕ Ｚａｓｓｈｉ，３２（５－６）、２５１－５（２０１２））。Ｔ２ＤＭを有する人では、ＡＤおよび血管性認知症の両方の臨床診断を含む認知症の全体的な相対リスクは、有さない人よりも７３％高い（Ｇｕｄａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．２０１３，２７；４（６）：６４０－５０）。同様に、ＡＤ患者は、脳のインスリン抵抗性および高インスリン血症を経験する（Ｂｉｅｓｓｅｌｓ ａｎｄ Ｒｅａｇａｎ，２０１５，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１５ １６（１１）：６６０－７１；Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ，２０１６、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２５；２１３（８）：１３７５－８５）。これは、インスリン抵抗性がＡＤに至る認知障害を促進すること、およびインスリン欠乏脳がＡＤを発症しやすいことを示唆している。

マウスにおけるいくつかの研究では、食餌誘発性肥満症およびインスリン抵抗性と認知障害との関連について言及され、高脂肪食（ＨＦＤ）への十分な曝露を与えられると、インスリン抵抗性肥満のげっ歯類は、空間学習能力、空間記憶および認識記憶の障害、ならびに不安、快感消失症および抑うつ様症状の増加を伴う、行動の劇的な変化を示すことが示されている（Ｇｕｉｌｌｅｍｏｔ－Ｌｅｇｒｉｓ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．４０，２３７－２５３）。

肥満症はまた、マウスおよびヒトの両方において神経筋機能、歩行能力および協調を害する（Ｇａｒｌａｎｄ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ ２０１１；２１４：２０６－２２９；Ｓｅｅｂａｃｈｅｒ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｂｅｓｉｔｙ ｖｏｌｕｍｅ ４１，ｐａｇｅｓ１２７１－１２７８（２０１７）；Ｐｅｒｅｚ ＬＭ，ｅｔ ａｌ．．Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ（Ｌｏｎｄ）２０１６；５９４：３１８７－３２０７；Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ，５７６，３９－４８（２０１５））。

加齢に関連する認知および神経筋の低下、ならびに神経変性疾患は、不可逆的に進行する傾向があり、大きな社会経済的および個人的費用に関連し、これらに有効な治療法は、ほとんどまたは全く利用できない。同様に、不安および抑うつ障害は、多くの場合、抗不安薬または抗うつ薬治療および認知行動療法などの現在の治療アプローチに耐性がある。したがって、新規な治療戦略が必要とされている。

線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）は、主に肝臓によって分泌されるが、脂肪組織および膵臓によっても分泌される増殖因子であり（Ｍｕｉｓｅ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，２００８．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７４：４０３－４１２）、グルコースおよび脂質代謝調節因子である。さらに、最近の報告では、ＦＧＦ２１が神経変性、再ミエリン化、認知低下、アルツハイマー病、気分安定剤および抑うつに治療的利益を及ぼすことも記載されている（Ｋｕｒｏｄａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１７．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１２７（９）：３４９６－３５０９；Ｓｈａｒｏｒ，Ｒ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｊ Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ．３７（１）：１４－２６；Ｙｕ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，２０１５．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｅｈａｖ．１３３：１２２－３１；Ｗａｎｇ，Ｘ－Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１６．Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．３４６（２）：１４７－５６；Ｗａｎｇ，Ｑ．ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．５５：４７０２－４７１７；Ｓａ－ｎｇｕａｎｍｏｏ Ｐ．ｅｔ ａｌ ２０１６．Ｈｏｒｍｏｎｅｓ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒ．８５：８６－９５；Ｓａ－ｎｇｕａｎｍｏｏ Ｐ．ｅｔ ａｌ ２０１８．Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ＆Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ．９７：１６６３－１６７２；Ｒｕｈｌｍａｎｎ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，２０１６．Ａｇｉｎｇ．８（１１）：２７７７－２７８９；Ｃｈｅｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｒｅｄｏｘ Ｂｉｏｌ．２２：１０１１３３；Ａｍｉｒｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．３４：５７４－５８３；Ｌｅｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，２０１５．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０，２１５－２２３；Ｗａｎｇ，Ｘ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２８ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０２０）。しかしながら、天然のＦＧＦ２１タンパク質は、不十分な薬物動態学的特徴を示す。それは短い半減期を有し、インビボタンパク質分解性劣化およびインビトロ凝集を受けやすい（Ｈｕａｎｇ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，２０１３．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．３４６（２）：２７０－８０；Ｓｏ，Ｗ．Ｙ．ａｎｄ Ｌｅｕｎｇ，Ｐ．Ｓ．２０１６．Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｒｅｖ．３６（４）：６７２－７０４；Ｚｈａｎｇ，Ｊ．ａｎｄ Ｌｉ，Ｙ．２０１５．Ｆｒｏｎｔ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ（Ｌａｕｓａｎｎｅ）．６：１６８）。様々な分子工学的アプローチが開発されて、半減期が延長され、ＦＧＦ２１の安定性および溶解性が改善した。現在、３つの操作されたＦＧＦ２１模倣物（ＬＹ２４０５３１９、ＰＦ－０５２３１０２３およびＢＭＳ－９８６０３６）がヒトにおいて試験されている。それにもかかわらず、それらのＦＧＦ２１模倣物は複数回の投与を必要とし、これは患者に大きな負担を課す。さらに、操作されたＦＧＦ２１模倣物／類似体は、天然のＦＧＦ２１よりも高い免疫原性のリスクを示し得、例えば、ＬＹ２４０５３１９で治療された患者は、注射部位反応、抗薬物抗体および重篤な過敏反応を発症した（Ｇａｉｃｈ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，２０１３．Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ．１８（３）：３３３－４０）。注射部位反応および抗薬物抗体は、ＰＦ－０５２３１０２３またはＢＭＳ－９８６０３６で治療された患者においても報告された（Ｋｉｍ，Ａ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１７．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｏｂｅｓ Ｍｅｔａｂ．１９（１２）：１７６２－１７７２；Ｃｈａｒｌｅｓ，Ｅ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｏｂｅｓｉｔｙ．２７（１）：４１－４９；Ｓａｎｙａｌ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｌａｎｃｅｔ．３９２（１０１６５）：２７０５－２７１７）。

Ｗｙｓｓ－Ｃｏｒａｙ，Ｔ．Ａｇｅｉｎｇ，ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｒａｉｎ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ ５３９，１８０－１８６（２０１６） Ｌｙｎｃｈ，Ｍ．Ａ．（２００４）．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．８４，８７－１３６． Ｗｅｎｚ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．２００９．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０６（４８），２０４０５－１０ Ｌｈｏｔｅｌｌｉｅｒ Ｌ，Ｃｏｈｅｎ－Ｓａｌｍｏｎ Ｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｅｈａｖ １９８９；４５：４９１－４９３ Ｐｒｉｎｃｅ Ｍ．，ｅｔ ａｌ．ｇｌｏｂａｌ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｄｅｍｅｎｔｉａ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｅｍｅｎｔ ９，ｅ ６２（２０１３） Ｈｏｕ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ａｇｅｉｎｇ ａｓ ａ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ｖｏｌｕｍｅ １５，ｐａｇｅｓ５６５－５８１（２０１９） Ｈｏｕ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ｖｏｌｕｍｅ １５，ｐａｇｅｓ ５６５－５８１（２０１９） Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９６，２０３－１４（２０１１） Ｒ．Ｍａｙｅｕｘ，Ｙ．Ｓｔｅｒｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｍｅｄ．２，ａ００６２３９（２０１２） Ａｓａｔｏ ｅｔ ａｌ，Ｎｉｈｏｎ Ｓｈｉｎｋｅｉ Ｓｅｉｓｈｉｎ Ｙａｋｕｒｉｇａｋｕ Ｚａｓｓｈｉ，３２（５－６），２５１－５（２０１２） Ｏ．Ｇｕｉｌｌｅｍｏｔ－Ｌｅｇｒｉｓ，Ｇ．Ｇ．Ｍｕｃｃｉｏｌｉ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．４０，２３７－２５３（２０１７）（９） Ａ．Ｊ．Ｂｒｕｃｅ－Ｋｅｌｌｅｒ，Ｊ．Ｎ．Ｋｅｌｌｅｒ，Ｃ．Ｄ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１７９２，３９５－４００（２００９） Ｏｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｇｕｄａｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．２０１３，２７；４（６）：６４０－５０ Ｂｉｅｓｓｅｌｓ ａｎｄ Ｒｅａｇａｎ，２０１５，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１５ １６（１１）：６６０－７１ Ｓｔａｎｌｅｙ ｅｔ ａｌ，２０１６、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２５；２１３（８）：１３７５－８５ Ｇｕｉｌｌｅｍｏｔ－Ｌｅｇｒｉｓ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．４０，２３７－２５３ Ｇａｒｌａｎｄ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ ２０１１；２１４：２０６－２２９ Ｓｅｅｂａｃｈｅｒ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｂｅｓｉｔｙ ｖｏｌｕｍｅ ４１，ｐａｇｅｓ１２７１－１２７８（２０１７） Ｐｅｒｅｚ ＬＭ，ｅｔ ａｌ．．Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ（Ｌｏｎｄ）２０１６；５９４：３１８７－３２０７ Ｚｈａｎｇ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ，５７６，３９－４８（２０１５） Ｍｕｉｓｅ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，２００８．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７４：４０３－４１２ Ｋｕｒｏｄａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１７．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１２７（９）：３４９６－３５０９ Ｓｈａｒｏｒ，Ｒ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｊ Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ．３７（１）：１４－２６ Ｙｕ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，２０１５．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｅｈａｖ．１３３：１２２－３１ Ｗａｎｇ，Ｘ－Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１６．Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．３４６（２）：１４７－５６ Ｗａｎｇ，Ｑ．ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．５５：４７０２－４７１７ Ｓａ－ｎｇｕａｎｍｏｏ Ｐ．ｅｔ ａｌ ２０１６．Ｈｏｒｍｏｎｅｓ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒ．８５：８６－９５ Ｓａ－ｎｇｕａｎｍｏｏ Ｐ．ｅｔ ａｌ ２０１８．Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ．９７：１６６３－１６７２ Ｒｕ ｈｌｍａｎｎ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，２０１６．Ａｇｉｎｇ．８（１１）：２７７７－２７８９ Ｃｈｅｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｒｅｄｏｘ Ｂｉｏｌ．２２：１０１１３３ Ａｍｉｒｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１８．Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．３４：５７４－５８３ Ｌｅｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，２０１５．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０，２１５－２２３ Ｗａｎｇ，Ｘ．ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２８ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０２０ Ｈｕａｎｇ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，２０１３．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．３４６（２）：２７０－８０ Ｓｏ，Ｗ．Ｙ．ａｎｄ Ｌｅｕｎｇ，Ｐ．Ｓ．２０１６．Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｒｅｖ．３６（４）：６７２－７０４ Ｚｈａｎｇ，Ｊ．ａｎｄ Ｌｉ，Ｙ．２０１５．Ｆｒｏｎｔ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ（Ｌａｕｓａｎｎｅ）．６：１６８ Ｇａｉｃｈ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，２０１３．Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ．１８（３）：３３３－４０ Ｋｉｍ，Ａ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１７．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｏｂｅｓ Ｍｅｔａｂ．１９（１２）：１７６２－１７７２ Ｃｈａｒｌｅｓ，Ｅ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｏｂｅｓｉｔｙ．２７（１）：４１－４９ Ｓａｎｙａｌ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，２０１９．Ｌａｎｃｅｔ．３９２（１０１６５）：２７０５－２７１７

したがって、既存の治療の欠点いずれも有さない、神経筋および認知低下に対する新しい治療が依然として必要とされている。

本発明の態様は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態の治療および／または予防に使用するための、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物に関する。いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子構築物は、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列が遍在性プロモーターに作動可能に連結されているようなものであり、好ましくは遍在性プロモーターは、ＣＡＧプロモーターおよびＣＭＶプロモーターからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子構築物は、ＦＧＦ２１の発現を防止したい組織で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列を含むようなものであり、好ましくは、マイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列は、哺乳動物の心臓および／または肝臓で発現されるマイクロＲＮＡに結合する標的配列から選択される。いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子構築物は、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列、および心臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列を含むようなものであり、好ましくは、心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、配列番号１３および２１～２５から選択され、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、配列番号１２および１４～２０から選択され、より好ましくは、遺伝子構築物はマイクロＲＮＡ－１２２ａ（配列番号１２）の標的配列およびマイクロＲＮＡ－１（配列番号１３）の標的配列を含む。いくつかの実施形態では、本発明の遺伝子構築物は、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列が、
（ａ）配列番号１、２または３のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性または類似性を有する配列を含むアミノ酸配列によって表されるポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号４、５、６、７、８、９、１０または１１のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列；および
（ｃ）遺伝暗号の縮重により、配列が（ｂ）のヌクレオチド配列の配列と異なっているヌクレオチド配列、からなる群から選択されるようなものである。

本発明の別の態様は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態の治療および／または予防に使用するための、本発明の遺伝子構築物を含む発現ベクターに関する。いくつかの実施形態では、本発明の発現ベクターは、好ましくはアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、およびレンチウイルスベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、本発明の発現ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクター、好ましくは血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、ｒｈ１０、ｒｈ８、Ｃｂ４、ｒｈ７４、ＤＪ、２／５、２／１、１／２またはＡｎｃ８０のアデノ随伴ウイルスベクター、より好ましくは血清型１、８または９のアデノ随伴ウイルスベクターである。

本発明の別の態様は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態の治療および／または予防に使用するための、本発明の遺伝子構築物および／または本発明の発現ベクターを含み、１つ以上の薬学的に許容される成分をさらに含んでもよい医薬組成物に関する。

本発明に従って使用するための遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または医薬組成物のいくつかの実施形態では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、加齢および／または代謝障害もしくは疾患、好ましくは肥満症および／または糖尿病に関連し、かつ／またはそれらによって引き起こされる。本発明に従って使用するための遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または医薬組成物のいくつかの実施形態では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、神経炎症、神経変性、認知低下および／またはそれらに関連する疾患もしくは状態である。いくつかの実施形態では、神経炎症、神経変性および／または認知低下に関連する疾患または状態は、認知障害、認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、パーキンソン病、パーキンソン様疾患、パーキンソニズム、ハンチントン病、外傷性脳損傷、プリオン病、ＨＩＶ感染症による認知症／神経認知問題、加齢による認知症／神経認知問題、タウオパチー、多発性硬化症、および他の神経炎症性／神経変性疾患からなる群から選択され、好ましくはアルツハイマー病、パーキンソン病、パーキンソン様疾患およびハンチントン病からなる群から選択され、より好ましくはアルツハイマー病およびパーキンソン病からなる群から選択され、最も好ましくはアルツハイマー病から選択される。

本発明に従って使用するための遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または医薬組成物のいくつかの実施形態では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、行動障害、好ましくは不安障害または抑うつ障害である。

本発明に従って使用するための遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または医薬組成物のいくつかの実施形態では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、神経筋障害であり、好ましくは、神経筋障害は、筋機能の低下、筋力の低下、協調の低下、バランスの低下および／または機能低下であるか、またはそれに関連する。

本発明の別の態様は、対象における記憶および／または学習を改善するための方法に関し、方法は、本発明の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または医薬組成物を対象に投与することを含み、好ましくは対象は、高齢の対象および／または代謝障害もしくは疾患、好ましくは糖尿病および／または肥満症と診断された対象である。

本発明の別の態様は、対象における筋機能、筋力、協調、バランスおよび／または機能低下を改善するための方法に関し、方法は、本発明の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または医薬組成物を対象に投与することを含み、好ましくは対象は、高齢の対象および／または代謝障害もしくは疾患、好ましくは糖尿病および／または肥満症と診断された対象である。

さらなる態様では、本発明は、本発明の遺伝子構築物、発現ベクターおよび／または組成物を投与することを含む、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態を治療および／または予防する方法に関する。

本発明のさらなる態様では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態を治療および／または予防するための医薬品の製造のための、本発明の遺伝子構築物、発現ベクターまたは組成物の使用に関する。

本発明のさらなる態様では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態を治療および／または予防するための、本発明の遺伝子構築物、発現ベクターまたは組成物の使用に関する。

説明
本発明者らは、中枢神経系（ＣＮＳ）障害に対抗するための、ＦＧＦ２１に基づく改善された遺伝子治療戦略を開発した。特に、実験の部で詳述されるように、以下の予想外の利点が見出された。ＡＡＶ媒介ＦＧＦ２１遺伝子治療は、いくつかの異なるマウスモデルにおいて、種々の投与様式および種々のタイプのベクターを使用して強力な過剰発現を媒介する。強力な過剰発現は、ＦＧＦ２１の循環レベルを増加させ、少なくとも以下の利点を発揮することが示された。

・協調、バランス、神経筋機能、強度および歩行活動の改善（実施例１～４、８、１０、１２および１３）
・記憶および学習の増強（実施例１、３、４、８、９、１０、１２および１３）
・ミトコンドリア機能の改善および酸化ストレスの軽減による神経変性の減少（実施例１および１１）
・不安様および抑うつ様行動の減少（実施例２～４および１２）
・認知能力、記憶、学習および探索能力の改善（実施例１、３、４、８、９、１０、１２および１３）
・神経炎症の減少（実施例５および８）
したがって、本明細書に記載される本発明の態様および実施形態は、本明細書で論じる問題および必要性の少なくともいくつかを解決する。

遺伝子構築物
第１の態様では、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子構築物は、治療に使用するためのものである。好ましい実施形態では、本明細書に記載される遺伝子構築物は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態の治療および／または予防に使用するためのものである。好ましい実施形態では、本明細書に記載される遺伝子構築物は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害または疾患の治療および／または予防に使用するためのものである。

本明細書に記載の「遺伝子構築物」は、本開示に鑑みて当業者によって理解されるその慣習的かつ通常の意味を有する。「遺伝子構築物」は、「発現カセット」または「発現構築物」とも呼ばれ、遺伝子または遺伝子群を指し、その発現を制御するプロモーターに作動可能に連結される目的のタンパク質をエンコードする遺伝子を含む。「一般情報」と題された本出願の部分は、「遺伝子構築物」に関するさらなる詳述を含む。本明細書で使用される「作動可能に連結される」は、「一般情報」と題する本出願の部分でさらに説明される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子構築物は、哺乳動物における発現に適している。本明細書で使用される場合、「哺乳動物における発現に適した」とは、遺伝子構築物が、発現に使用される哺乳動物宿主細胞に基づいて選択され、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された１つ以上の調節配列を含むことを意味し得る。好ましくは、発現に使用される前記哺乳動物宿主細胞は、ヒト、マウスまたはイヌ細胞である。

本発明による遺伝子構築物中に存在するＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、任意のＦＧＦ２１遺伝子またはＦＧＦ２１コーディング配列、好ましくはヒト、マウスまたはイヌ由来のＦＧＦ２１遺伝子またはＦＧＦ２１コーディング配列；または、好ましくはヒト、マウスもしくはイヌ由来の変異ＦＧＦ２１遺伝子またはＦＧＦ２１コーディング配列；または、好ましくはヒト、マウスまたはイヌ由来のコドン最適化ＦＧＦ２１遺伝子またはＦＧＦ２１コーディング配列に由来し得る。

したがって、いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードする好ましいヌクレオチド配列は、配列番号１、２または３と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性または類似性を有する配列を含むアミノ酸配列によって表されるポリペプチドをエンコードする。配列番号１は、ヒトＦＧＦ２１のアミノ酸配列である。配列番号２は、マウスＦＧＦ２１のアミノ酸配列である。配列番号３は、イヌＦＧＦ２１のアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、本発明による遺伝子構築物に存在するＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、配列番号４、５、６、７、８、９、１０または１１からなる群から選択されるいずれかの配列と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有する。

「同一性」または「配列同一性」および「類似性」または「配列類似性」の説明は、以下の「一般情報」と題するセクションで提供されている。

いくつかの実施形態では、本発明による遺伝子構築物に存在するヒトＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、配列番号４、５、６または７と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有する。配列番号４は、ヒトＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列である。配列番号５は、ヒトＦＧＦ２１をエンコードするコドン最適化ヌクレオチド配列、変異体１である。配列番号６は、ヒトＦＧＦ２１をエンコードするコドン最適化ヌクレオチド配列、変異体２である。配列番号７は、ヒトＦＧＦ２１をエンコードするコドン最適化ヌクレオチド配列、変異体３である。変異体１、変異体２および変異体３は、同じヒトＦＧＦ２１タンパク質をエンコードし、コドン最適化の異なるアルゴリズムによって得られた。「コドン最適化」の説明は、「一般情報」という題名のセクションで提供されている。

いくつかの実施形態では、本発明による遺伝子構築物に存在するマウスＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、配列番号８または９と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有する。配列番号８は、マウスＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列である。配列番号９は、マウスＦＧＦ２１をエンコードするコドン最適化ヌクレオチド配列である。

いくつかの実施形態では、本発明による遺伝子構築物に存在するイヌＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、配列番号１０または１１と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性を有する。配列番号１０は、イヌＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列である。配列番号１１は、イヌＦＧＦ２１をエンコードするコドン最適化ヌクレオチド配列である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子構築物が提供され、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、以下からなる群から選択される：
（ａ）配列番号１、２または３のアミノ酸配列と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性または類似性を有する配列を含むアミノ酸配列によって表されるポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列
（ｂ）配列番号４、５、６、７、８、９、１０または１１のヌクレオチド配列と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列
（ｃ）配列が遺伝暗号の縮重により（ｂ）のヌクレオチド配列の配列とは異なっているヌクレオチド配列。

好ましい実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、好ましくは配列番号５、６および７の配列から選択される、コドン最適化ヌクレオチド配列、好ましくはコドン最適化ヒト配列である。

本明細書中に記載されるヌクレオチド配列によってエンコードされるＦＧＦ２１は、当業者に知られているようなＦＧＦ２１の活性を少なくとも検出可能なレベルで発揮する。ＦＧＦ２１の活性は、抗肥満症および／または抗糖尿病効果を示すことであり得る。ＦＧＦ２１の活性はまた、インスリン感受性を増加させることであり得る。この活性は、当業者に公知の方法によって、例えば、インスリン負荷試験またはブドウ糖負荷試験を使用することによって評価することができる。ＦＧＦ２１の活性はまた、神経炎症を軽減し、神経変性を軽減し、認知低下を軽減し、神経筋機能を改善し、行動障害、例えば抑うつおよび抑うつ様行動ならびに不安および不安様行動を改善することであり得る。ＦＧＦ２１のこれらの活性は、当業者に公知の方法によって、例えば、実験セクションに記載された方法のいずれかを使用することによって評価することができる。

いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、遍在性プロモーターに作動可能に連結されている。好ましい遍在性プロモーターは、ＣＭＶプロモーターおよびＣＡＧプロモーターから選択される。好ましい実施形態では、遍在性プロモーターはＣＡＧプロモーターである。

いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、ＦＧＦ２１の発現を防止したい組織で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列に作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、遍在性プロモーター、およびＦＧＦ２１の発現を防止したい組織で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列に作動可能に連結される。

「遍在性プロモーター」、「作動可能に連結された」および「マイクロＲＮＡ」の説明は、以下の「一般情報」と題したセクションに提供されている。本明細書で使用される「組織で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列」または「組織で発現されるマイクロＲＮＡに結合する標的配列」または「組織で発現されるマイクロＲＮＡの結合部位」は、本明細書の他の箇所に記載されるように、前記組織で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも一部に相補的または部分的に相補的なヌクレオチド配列を指す。

いくつかの実施形態では、マイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列は、哺乳動物の心臓および／または肝臓で発現されるマイクロＲＮＡに結合する標的配列から選択される。

いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列、および心臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列に作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、遍在性プロモーター、および肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列、および心臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列に作動可能に連結される。心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、好ましくは配列番号１３および２１～２５、より好ましくは配列番号１２（マイクロＲＮＡ－１２２ａ）から選択され、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、好ましくは配列番号１２および１４～２０、より好ましくは配列番号１３（マイクロＲＮＡ－１）から選択される。

本明細書で使用される「肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列」または「肝臓で発現されるマイクロＲＮＡに結合する標的配列」または「肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの結合部位」は、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも一部に相補的または部分的に相補的なヌクレオチド配列を指す。同様に、本明細書で使用される「心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列」または「心臓で発現されるマイクロＲＮＡに結合する標的配列」または「心臓で発現されるマイクロＲＮＡの結合部位」は、心臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも一部に相補的または部分的に相補的なヌクレオチド配列を指す。

本明細書に記載されるように、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの一部または心臓で発現されるマイクロＲＮＡの一部は、前記マイクロＲＮＡの少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６または少なくとも７個の連続するヌクレオチドのヌクレオチド配列を意味する。結合部位配列は、発現されたマイクロＲＮＡの少なくとも一部に対して完全な相補性を有することができ、配列がミスマッチを生じることなく完全に一致していることを意味する。あるいは、結合部位配列は、発現されたマイクロＲＮＡの少なくとも一部と部分的に相補的であり得、これは、４、５、６または７個の連続するヌクレオチド中に１つのミスマッチが生じ得ることを意味する。部分的に相補的な結合部位は、好ましくは、マイクロＲＮＡのシード領域に対する完全、またはほぼ完全な相補性を含み、これは、マイクロＲＮＡのシード領域とその結合部位との間にミスマッチがない（完全な相補性）か、または４、５、６または７個の連続するヌクレオチドあたり１つのミスマッチが生じ得る（ほぼ完全な相補性）ことを意味する。マイクロＲＮＡのシード領域は、マイクロＲＮＡの約ヌクレオチド２～約ヌクレオチド８からのマイクロＲＮＡの５’領域からなる。本明細書に記載の部分は、好ましくは前記マイクロＲＮＡのシード領域である。肝臓で発現されるマイクロＲＮＡまたは心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列を含むメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の分解は、ＲＮＡ干渉経路を介しても、ｍＲＮＡの直接的な翻訳制御（阻害）を介してもよい。本発明は、導入遺伝子またはエンコードされるタンパク質の発現の阻害において、ｍｉＲＮＡによって最終的に利用される経路に決して限定されない。

本発明の文脈では、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡに結合する標的配列は、配列番号１２もしくは１４～２０から選択され得るか、または配列番号１２もしくは１４～２０と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列であり得る。

好ましい実施形態では、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、配列番号１２、または配列番号１２と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列である。さらなる実施形態では、配列番号１２または１４～２０に記載されているような、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の少なくとも１つのコピーが本発明の遺伝子構築物中に存在する。さらなる実施形態では、配列番号１２または１４～２０に記載されているような、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の２、３、４、５、６、７または８個のコピーが本発明の遺伝子構築物中に存在する。好ましい実施形態では、配列ｍｉＲＴ－１２２ａ（配列番号１２）の１、２、３、４、５、６、７または８個のコピーが本発明の遺伝子構築物中に存在する。肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の好ましいコピー数は４である。

本明細書で使用される肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、当業者に知られているような肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の活性を少なくとも検出可能なレベルで発揮する。肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の活性は、肝臓で発現されるその同族マイクロＲＮＡに結合すること、および、導入遺伝子に作動可能に連結された場合に、肝臓における導入遺伝子発現の脱標的化（ｄｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）を媒介することである。この活性は、ｑＰＣＲ、ウエスタンブロット分析またはＥＬＩＳＡなどの当業者に公知の標準的なアッセイによって、ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルでの肝臓における導入遺伝子発現のレベルを測定することによって評価され得る。

本発明の文脈では、心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、配列番号１３もしくは２１～２５から選択され得るか、または配列番号１３もしくは２１～２５と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列であり得る。

好ましい実施形態では、心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、配列番号１３から選択され得るか、または配列番号１３と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列であり得る。さらなる実施形態では、配列番号１３または２１～２５に記載されているような、心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の少なくとも１つのコピーが本発明の遺伝子構築物中に存在する。さらなる実施形態では、配列番号１３または２１～２５に記載されているような、心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の２、３、４、５、６、７または８個のコピーが本発明の遺伝子構築物中に存在する。好ましい実施形態では、ｍｉＲＴ－１（配列番号１３）をエンコードするヌクレオチド配列の１、２、３、４、５、６、７または８個のコピーが本発明の遺伝子構築物中に存在する。心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の好ましいコピー数は４である。

本明細書で使用される心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、当業者に知られているような心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の活性を、少なくとも検出可能なレベルで発揮する。心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の活性は、心臓で発現されるその同族マイクロＲＮＡに結合すること、および、導入遺伝子に作動可能に連結された場合に、心臓における導入遺伝子発現の脱標的化（ｄｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）を媒介することである。この活性は、ｑＰＣＲ、ウエスタンブロット分析またはＥＬＩＳＡなどの当業者に公知の標準的なアッセイによって、ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルでの心臓における導入遺伝子発現のレベルを測定することによって評価され得る。

いくつかの実施形態では、配列番号１２または１４～２０に記載されているような、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の少なくとも１つのコピー、および配列番号１３または２１～２５に記載されているような、心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の少なくとも１つのコピーが、本発明の遺伝子構築物中に存在する。さらなる実施形態では、配列番号１２または１４～２０に記載されているような、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の２、３、４、５、６、７または８個のコピー、および配列番号１３または２１～２５に記載されているような、心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列の２、３、４、５、６、７または８個のコピーが、本発明の遺伝子構築物中に存在する。さらなる実施形態において、ｍｉＲＴ－１２２ａ（配列番号１２）をエンコードするヌクレオチド配列の１、２、３、４、５、６、７または８個のコピーと、ｍｉＲＴ－１（配列番号１３）をエンコードするヌクレオチド配列の１、２、３、４、５、６、７または８個のコピーとが、本発明の遺伝子構築物において組み合わされる。さらなる実施形態において、ｍｉＲＴ－１２２ａ（配列番号１２）をエンコードするヌクレオチド配列の４個のコピーと、ｍｉＲＴ－１（配列番号１３）をエンコードするヌクレオチド配列の４個のコピーとが、本発明の遺伝子構築物において組み合わされる。

いくつかの実施形態において上記の遺伝子構築物が提供され、ここで、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列および心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、配列番号１２～２５の配列および／またはそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において上記の遺伝子構築物が提供され、ここで、心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、配列番号１３および２１～２５から選択され、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列は、配列番号１２および１４～２０から選択される。いくつかの実施形態では、マイクロＲＮＡ－１２２ａの標的配列およびマイクロＲＮＡ－１の標的配列を含む上記の遺伝子構築物が提供される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遍在性プロモーターは、ＣＡＧプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ｍｉｎｉ－ＣＭＶプロモーター、β－アクチンプロモーター、ロ肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、伸長因子１アルファ（ＥＦ１α）プロモーター、初期増殖応答因子－１（Ｅｇｒ－１）プロモーター、真核生物翻訳開始因子４Ａ（ｅｌＦ４Ａ）プロモーター、フェリチン重鎖エンコード遺伝子（ＦｅｒＨ）プロモーター、フェリチン重鎖エンコード遺伝子（ＦｅｒＬ）プロモーター、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）プロモーター、ＧＲＰ７８プロモーター、ＧＲＰ９４プロモーター、熱ショックタンパク質７０（ｈｓｐ７０）プロモーター、ユビキチンＢプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ベータ－キネシンプロモーター、ＲＯＳＡ２６およびＰＧＫ－１プロモーターからなる群から選択される。

好ましい実施形態では、遍在性プロモーターはＣＡＧプロモーターである。ＣＡＧプロモーターは、実施例において、本発明による遺伝子構築物における使用に適していることが実証されている。いくつかの実施形態では、ＣＡＧプロモーターは、配列番号２７と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましい遍在性プロモーターは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。ＣＭＶプロモーターは、実施例において、本発明による遺伝子構築物における使用に適していることが実証されている。いくつかの実施形態では、ＣＭＶプロモーターは、配列番号２８と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。好ましくは、前記ＣＭＶプロモーターは、イントロン配列と共に使用される。いくつかの実施形態では、イントロン配列は、配列番号２６と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましい遍在性プロモーターは、ｍｉｎｉ－ＣＭＶプロモーターである。いくつかの実施形態では、ｍｉｎｉ－ＣＭＶプロモーターは、配列番号３６と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましい遍在性プロモーターは、ＥＦ１αプロモーターである。いくつかの実施形態では、ＥＦ１αプロモーターは、配列番号３７と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましい遍在性プロモーターは、ＲＳＶプロモーターである。いくつかの実施形態では、ＲＳＶプロモーターは、配列番号３８と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、組織特異的プロモーターに作動可能に連結されている。

「組織特異的プロモーター」の説明は、以下の「一般情報」と題したセクションで提供されている。

好ましい実施形態では、組織特異的プロモーターはＣＮＳ特異的プロモーター、より好ましくは脳特異的プロモーターである。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＮＳ特異的プロモーターは、シナプシン１プロモーター、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）プロモーター、チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）プロモーター、フォークヘッドボックスＡ２（ＦＯＸＡ２）プロモーター、アルファ－インターネキシン（ＩＮＡ）プロモーター、ネスチン（ＮＥＳ）プロモーター、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、アルデヒドデヒドロゲナーゼ１ファミリーメンバーＬ１（ＡＬＤＨ１Ｌ１）プロモーター、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）プロモーター、ホメオボックスタンパク質９（ＨＢ９）プロモーター、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）プロモーターおよびゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）プロモーターからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される脳特異的プロモーターは、シナプシン１プロモーター、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーター、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）プロモーター、チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）プロモーター、フォークヘッドボックスＡ２（ＦＯＸＡ２）プロモーター、アルファ－インターネキシン（ＩＮＡ）プロモーター、ネスチン（ＮＥＳ）プロモーター、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター、アルデヒドデヒドロゲナーゼ１ファミリーメンバーＬ１（ＡＬＤＨ１Ｌ１）プロモーター、ミエリン関連オリゴデンドロサイト塩基性タンパク質（ＭＯＢＰ）プロモーター、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）プロモーターおよびゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）プロモーターからなる群から選択される。

好ましい実施形態では、ＣＮＳおよび／または脳特異的プロモーターは、シナプシン１プロモーターである。いくつかの実施形態では、シナプシン１プロモーターは、配列番号３９と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましいＣＮＳおよび／または脳特異的プロモーターは、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）プロモーターである。いくつかの実施形態では、カルシウム／カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ（ＣａＭＫＩＩ）プロモーターは、配列番号４０と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましいＣＮＳおよび／または脳特異的プロモーターは、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターである。いくつかの実施形態では、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターは、配列番号４１と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましいＣＮＳおよび／または脳特異的プロモーターは、ネスチンプロモーターである。いくつかの実施形態では、ネスチンプロモーターは、配列番号４２と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましいＣＮＳ特異的プロモーターは、ホメオボックスタンパク質９（ＨＢ９）プロモーターである。いくつかの実施形態では、ホメオボックスタンパク質９（ＨＢ９）プロモーターは、配列番号４３と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましいＣＮＳおよび／または脳特異的プロモーターは、チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）プロモーターである。いくつかの実施形態では、チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）プロモーターは、配列番号４４と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の好ましいＣＮＳおよび／または脳特異的プロモーターは、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）プロモーターである。いくつかの実施形態では、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）プロモーターは、配列番号４５と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＮＳおよび／または脳特異的プロモーターは、ＣＮＳおよび／または脳の少なくとも１つの細胞における前記ヌクレオチド配列の発現を指示する。好ましくは、前記プロモーターは、ＣＮＳおよび／または脳の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％において発現を指示する。ＣＮＳおよび／または脳特異的プロモーターは、本明細書で使用される場合、ＣＮＳおよび／または脳の特定の領域または細胞サブセットにおける発現を指示するプロモーターも包含する。したがって、本明細書中に記載されるＣＮＳおよび／または脳特異的プロモーターはまた、海馬、小脳、皮質、視床下部および／または嗅球の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％において発現を指令し得る。発現は、「一般情報」と題する以下のセクションに記載されているように評価することができる。

別の実施形態では、組織特異的プロモーターは肝臓特異的プロモーターである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される肝臓特異的プロモーターは、アルブミンプロモーター、主要尿タンパク質プロモーター、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）プロモーター、肝臓エンリッチ化タンパク質アクチベータープロモーター、トランスサイレチンプロモーター、チロキシン結合グロブリンプロモーター、アポリポタンパク質Ａ１プロモーター、肝臓脂肪酸結合タンパク質プロモーター、フェニルアラニンヒドロキシラーゼプロモーターおよびヒトα１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーターからなる群から選択される。

好ましい実施形態では、肝臓特異的プロモーターは、ヒトα１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーターである。いくつかの実施形態では、ヒトα１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモーターは、配列番号６４と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

好ましくは、前記ｈＡＡＴプロモーターは、イントロン配列と共に使用される。好ましいイントロン配列は、アポリポタンパク質Ｅ由来の肝細胞制御領域（ＨＣＲ）エンハンサーである。最も好ましいイントロン配列は、配列番号６５で定義されるアポリポタンパク質Ｅ由来のＨＣＲエンハンサーである。この文脈では、イントロン配列は、配列番号５３と少なくとも６０％の配列同一性または類似性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によって置き換えられ得る。好ましいヌクレオチド配列は、配列番号６５と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、１００％の同一性を有する。一実施形態において、前記ｈＡＡＴプロモーターは、イントロン配列の１、２、３、４または５個のコピーと共に使用される。好ましい実施形態では、前記ｈＡＡＴプロモーターは、配列番号６５で定義されるアポリポタンパク質Ｅ由来のＨＣＲエンハンサーの１、２、３、４または５個のコピーと共に使用される。

いくつかの態様では、本明細書に記載の肝臓特異的プロモーターは、肝臓の少なくとも１つの細胞における前記ヌクレオチド配列の発現を指示する。好ましくは、前記プロモーターは、肝臓の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％において発現を指示する。肝臓特異的プロモーターは、本明細書で使用される場合、肝臓の特定の領域または細胞サブセットにおける発現を指示するプロモーターも包含する。したがって、本明細書中に記載される肝臓特異的プロモーターはまた、海馬、小脳、皮質、視床下部および／または嗅球の細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、４０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％において発現を指示し得る。発現は、「一般情報」と題する以下のセクションに記載されているように評価することができる。

別の実施形態では、組織特異的プロモーターは脂肪組織特異的プロモーターである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂肪組織特異的プロモーターは、脂肪細胞タンパク質２（ａＰ２、脂肪酸結合タンパク質４（ＦＡＢＰ４）としても知られる）プロモーター、ＰＰＡＲｙプロモーター、アディポネクチンプロモーター、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）プロモーター、ヒトアロマターゼチトクロムｐ４５０（ｐ４５０ａｒｏｍ）に由来するプロモーター、ｍｉｎｉ／ａＰ２プロモーター（脂肪特異的ａＰ２エンハンサーおよび基礎ａＰ２プロモーターから構成される）、脱共役タンパク質１（ＵＣＰ１）プロモーター、ｍｉｎｉ／ＵＣＰ１プロモーター（脂肪特異的ＵＣＰ１エンハンサーおよび基礎ＵＣＰ１プロモーターから構成される）、アジプシンプロモーター、レプチンプロモーター、およびＦｏｘａ－２プロモーターからなる群から選択される。

好ましい実施形態では、脂肪組織特異的プロモーターは、ｍｉｎｉ／ａＰ２プロモーターまたはｍｉｎｉ／ＵＣＰ１プロモーターである。いくつかの実施形態では、ｍｉｎｉ／ａＰ２プロモーターは、配列番号６６と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ｍｉｎｉ／ＵＣＰ１プロモーターは、配列番号６７と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

別の実施形態では、組織特異的プロモーターは骨格筋プロモーターである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の骨格筋プロモーターは、ミオシン軽鎖プロモーター、ミオシン重鎖プロモーター、デスミンプロモーター、筋クレアチンキナーゼ（ＭＣＫ）プロモーター、平滑筋アルファ－アクチンプロモーター、ＣＫ６プロモーター、Ｕｎｃ－４５ミオシンシャペロンＢプロモーター、ＭＣＫエンハンサーのコピーと組み合わせた基礎ＭＣＫプロモーター、およびＥｎｈ３５８ＭＣＫプロモーター（ＭＣＫエンハンサーとＭＣＫ遺伝子の３５８ ｂｐ近位プロモーターとの組み合わせ）からなる群から選択される。

好ましい実施形態では、骨格筋プロモーターはＣ５－１２プロモーターである。いくつかの実施形態では、Ｃ５－１２プロモーターは、配列番号６８と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる。

本明細書で使用されるプロモーター（特に、プロモーター配列が所与の配列番号と最小限の同一性パーセンテージを有すると記載される場合）は、少なくとも当業者に公知のプロモーターの活性を発揮するものとする。好ましくは、所与の配列番号と最小限の同一性パーセンテージを有すると記載されるプロモーターは、当業者に公知のアッセイで評価されるように、それが作動可能に連結されているヌクレオチド配列（すなわち、少なくともＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列）の転写を制御すべきである。例えば、そのようなアッセイは、導入遺伝子の発現を測定することを含み得る。発現は、「一般情報」と題する以下のセクションに記載されているように評価することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子構築物は、要素ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）およびｅ）の少なくとも１つを有する：
（ａ）肝臓特異的プロモーター；
（ｂ）脂肪組織特異的プロモーター；
（ｃ）遍在性プロモーターと、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列をエンコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列および心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列をエンコードする少なくとも１つのヌクレオチド配列との組み合わせであって、脂肪組織での特異的発現を可能にしてもよい組み合わせ；
（ｄ）骨格筋プロモーター；および
（ｅ）遍在性プロモーターとアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター配列との組み合わせであって、骨格筋における特異的発現を可能にしてもよい組み合わせ。

さらなる配列が本発明の遺伝子構築物中に存在し得る。本明細書において好適なさらなる例示的配列としては、逆方向末端反復（ＩＴＲ）、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル（配列番号３２）、ウサギβ－グロビンポリアデニル化シグナル（配列番号３３）、ＣＭＶエンハンサー配列（配列番号２９）、ならびにヒトβ－グロビンおよび免疫グロブリン重鎖遺伝子由来のイントロンから構成されるキメライントロン（配列番号２６）が挙げられる。本発明の文脈内で、「ＩＴＲ」は、それぞれＡＡＶのゲノムに由来する１つの５’ＩＴＲおよび１つの３’ＩＴＲを包含することが意図される。好ましいＩＴＲはＡＡＶ２由来であり、配列番号３０（５’ＩＴＲ）および配列番号３１（３’ＩＴＲ）によって表される。本発明の文脈内では、ＣＭＶエンハンサー配列（配列番号２９）およびＣＭＶプロモーター配列（配列番号２８）を２つの別個の配列として、または単一の配列（配列番号３４）として使用することが包含される。これらのさらなる配列の各々は、本発明による遺伝子構築物中に存在し得る。いくつかの実施形態では、１つの５’ＩＴＲおよび１つの３’ＩＴＲ、好ましくはＡＡＶ２ ＩＴＲ、より好ましくは配列番号３０（５’ＩＴＲ）および配列番号３１（３’ＩＴＲ）によって表されるＡＡＶ２ ＩＴＲをさらに含む、本明細書に記載のＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が提供される。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化シグナル、好ましくはＳＶ４０ポリアデニル化シグナル（好ましくは配列番号３２で表される）および／またはウサギβ－グロビンポリアデニル化シグナル（好ましくは配列番号３３で表される）をさらに含む、本明細書に記載のＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が提供される。

追加のヌクレオチド配列、例えばシグナル配列、核局在化シグナル、発現エンハンサーなどをエンコードするヌクレオチド配列が、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されてもよい。

いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が提供され、遺伝子構築物は、マイクロＲＮＡの標的配列を含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物が提供され、遺伝子構築物は、ＦＧＦ２１の発現の防止が望まれる組織で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列を含まなくてもよい。

いくつかの実施形態では、本明細書で使用される配列同一性または類似性のレベルは、好ましくは７０％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは８０％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは９０％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは９５％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは９９％である。

発現ベクター
本明細書に記載の遺伝子構築物は、発現ベクターに配置することができる。したがって、別の態様では、先行する実施形態のいずれかに記載の遺伝子構築物を含む発現ベクターが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の発現ベクターは、治療に使用するためのものである。好ましい実施形態では、本明細書に記載される発現ベクターは、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態の治療および／または予防に使用するためのものである。

「発現ベクター」の説明は、「一般情報」という題名のセクションで提供されている。

いくつかの実施形態では、発現ベクターはウイルス発現ベクターである。「ウイルス発現ベクター」の説明は、「一般情報」という題名のセクションで提供されている。

ウイルスベクターは、好ましくはアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、およびレンチウイルスベクターからなる群から選択されるウイルスベクターであり得る。アデノウイルスベクターはアデノウイルス由来ベクターとしても知られており、アデノ随伴ウイルスベクターはアデノ随伴ウイルス由来ベクターとしても知られており、レトロウイルスベクターはレトロウイルス由来ベクターとしても知られており、レンチウイルスベクターはレンチウイルス由来ベクターとしても知られている。好ましいウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターである。「アデノ随伴ウイルスベクター」の説明は、「一般情報」という題名のセクションで提供されている。

いくつか実施形態では、ベクターは、血清型１のＡＡＶ（ＡＡＶ１）、血清型２のＡＡＶ（ＡＡＶ２）、血清型３のＡＡＶ（ＡＡＶ３）、血清型４のＡＡＶ（ＡＡＶ４）、血清型５のＡＡＶ（ＡＡＶ５）、血清型６のＡＡＶ（ＡＡＶ６）、血清型７のＡＡＶ（ＡＡＶ７）、血清型８のＡＡＶ（ＡＡＶ８）、血清型９のＡＡＶ（ＡＡＶ９）、血清型ｒｈ１０のＡＡＶ（ＡＡＶｒｈ１０）、血清型ｒｈ８のＡＡＶ（ＡＡＶｒｈ８）、血清型Ｃｂ４のＡＡＶ（ＡＡＶＣｂ４）、血清型ｒｈ７４のＡＡＶ（ＡＡＶｒｈ７４）、血清型ＤＪのＡＡＶ（ＡＡＶＤＪ）、血清型２／５のＡＡＶ（ＡＡＶ２／５）、血清型２／１のＡＡＶ（ＡＡＶ２／１）、血清型１／２のＡＡＶ（ＡＡＶ１／２）および血清型Ａｎｃ８０のＡＡＶ（ＡＡＶＡｎｃ８０）からなる群から選択されるアデノ随伴ベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルス由来ベクター（ＡＡＶ）である。

好ましい実施形態では、ベクターは血清型１、８または９のＡＡＶ（ＡＡＶ１、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９）である。好ましい実施形態では、ベクターは血清型１または８のＡＡＶ（ＡＡＶ１またはＡＡＶ８）である。これらのＡＡＶ血清型１、８および９は、本発明による発現ベクターとしての使用に適していることが実施例において実証されている。

好ましい実施形態では、発現ベクターはＡＡＶ１であり、ＣＭＶプロモーターに作動可能に連結されたＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物を含む。遺伝子構築物は、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル（配列番号３２）をさらに含んでもよい。このベクターは、特に筋肉内投与によって、本発明による発現ベクターとしての使用に適していることが実施例において実証されている。

別の好ましい実施形態では、発現ベクターはＡＡＶ１であり、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結されたＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物を含む。遺伝子構築物は、ウサギβ－グロビンポリアデニル化シグナル（配列番号３３）をさらに含んでもよい。このベクターは、特にＣＳＦ（脳脊髄液）内投与によって、本発明による発現ベクターとしての使用に適していることが実施例において実証されている。

別の好ましい実施形態では、発現ベクターはＡＡＶ８であり、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結されたＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列と、マイクロＲＮＡ－１２２ａ（配列番号１２）の少なくとも１つの標的配列と、マイクロＲＮＡ－１（配列番号１３）の少なくとも１つの標的配列とを含む遺伝子構築物を含む。遺伝子構築物は、ウサギβ－グロビンポリアデニル化シグナル（配列番号３３）をさらに含んでもよい。このベクターは、本発明による発現ベクターとしての使用、特に脂肪組織内、例えば、ｅＷＡＴ（精巣上体白色脂肪組織）内投与による使用に適していることが実施例で実証される。

別の好ましい実施形態では、発現ベクターはＡＡＶ９であり、ＣＡＧプロモーターに作動可能に連結されたＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列と、マイクロＲＮＡ－１２２ａ（配列番号１２）の少なくとも１つの標的配列と、マイクロＲＮＡ－１（配列番号１３）の少なくとも１つの標的配列とを含む遺伝子構築物を含む。このベクターは、特にＣＳＦ（脳脊髄液）内投与によって、本発明による発現ベクターとしての使用に適していることが実施例において実証されている。

組成物
さらなる態様では、上記の遺伝子構築物および／または上記の発現ベクターを含み、さらに１つ以上の薬学的に許容される成分を含んでいてもよい組成物が提供される。

そのような組成物は、遺伝子治療組成物と呼ばれ得る。好ましくは、組成物は医薬組成物である。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される成分」には、薬学的に許容される担体、充填剤、保存剤、可溶化剤、ビヒクル、希釈剤および／または賦形剤が含まれる。したがって、１つ以上の薬学的に許容される成分は、薬学的に許容される担体、充填剤、保存剤、可溶化剤、ビヒクル、希釈剤および／または賦形剤からなる群から選択され得る。そのような薬学的に許容される担体、充填剤、保存剤、可溶化剤、ビヒクル、希釈剤および／または賦形剤は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０１３）に見出すことができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、治療に使用するためのものである。好ましい実施形態では、本明細書に記載される組成物は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態の治療および／または予防に使用するためのものである。

さらなる化合物が本発明の組成物中に存在してもよい。前記化合物は、組成物の送達に役立ち得る。この文脈での適切な化合物は、細胞膜を通して小胞またはリポソームに複合体化または捕捉される、本明細書に記載の各成分を送達する複合体、ナノ粒子、ミセルおよび／またはリポソームを形成することができる化合物である。これらの化合物の多くは、当技術分野で公知である。適切な化合物は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、またはポリプロピレンイミンもしくはポリエチレンイミンコポリマー（ＰＥＣ）および誘導体を含む類似のカチオン性ポリマー；合成両親媒性物質（ＳＡＩＮＴ－１８）；ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標）、ＤＯＴＡＰを含む。当業者は、どのタイプの製剤が本明細書に記載の組成物に最も適しているかを知っているであろう。

方法および使用
本明細書の他の箇所に記載されているように、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態の治療および／または予防に使用するための遺伝子構築物、発現ベクターおよび組成物が本明細書で提供される。

さらなる態様では、本明細書に記載される遺伝子構築物、発現ベクターおよび／または組成物を投与することを含む、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態を治療および／または予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、遺伝子構築物、発現ベクターまたは組成物を投与することは、それを必要とする対象などの対象に投与することを意味する。好ましい実施形態では、治療有効量の遺伝子構築物、発現ベクターまたは組成物が投与される。

本明細書で使用される場合、「有効量」は、有益なまたは所望の結果を発揮するのに十分な量である。

さらなる態様では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態を治療および／または予防するための医薬品の製造のための、本明細書に記載される遺伝子構築物、発現ベクターまたは組成物の使用が提供される。

さらなる態様では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれらに関連する状態を治療および／または予防するための、本明細書に記載される遺伝子構築物、発現ベクターまたは組成物の使用が提供される。

好ましい実施形態では、中枢神経系障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、加齢および／または代謝障害もしくは疾患、好ましくは肥満症および／または糖尿病に関連し、かつ／またはそれによって引き起こされる。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用によるいくつかの実施形態では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、神経炎症、神経変性、認知低下および／またはそれらに関連する疾患もしくは状態であり得る。

いくつかの実施形態では、神経炎症、神経変性および／または認知低下に関連する疾患または状態は、認知障害、認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、パーキンソン病、パーキンソン様疾患、パーキンソニズム、ハンチントン病、外傷性脳損傷、プリオン病、ＨＩＶ感染症による認知症／神経認知問題、加齢による認知症／神経認知問題、タウオパチー、多発性硬化症、および他の神経炎症性／神経変性疾患からなる群から選択され、好ましくはアルツハイマー病、パーキンソン病、パーキンソン様疾患およびハンチントン病からなる群から選択され、より好ましくはアルツハイマー病およびパーキンソン病からなる群から選択され、最も好ましくはアルツハイマー病から選択される。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用によるいくつかの実施形態では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、行動障害であり得る。好ましい実施形態では、行動障害は、不安障害および／または抑うつ性障害である。本発明に包含される不安障害の非限定的な例は、全般性不安障害、特定恐怖症、社会不安障害、分離不安障害、広場恐怖症、パニック障害、および選択性緘黙である。本発明によって包含される抑うつ性障害の非限定的な例は、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、快感消失症、非定型うつ病、メランコリックうつ病、精神病性大うつ病、緊張病性うつ病、産後うつ病、月経前不快気分障害、季節性情動障害、気分不調症、二重うつ病、別段特定されない抑うつ性障害、抑うつ性パーソナリティ障害、反復性短期型うつ病および軽度うつ病性障害である。いくつかの実施形態では、不安障害は不安様行動にも関連し得、抑うつ性障害は抑うつ様行動にも関連し得る。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用によるいくつかの実施形態では、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、神経筋障害であり得、好ましくは、神経筋障害は、筋機能の低下、筋力の低下、協調の低下、バランスの低下および／または機能低下であるか、またはそれに関連する。

別の態様では、対象の記憶および／または学習を改善する方法が提供され、方法は、本明細書に記載の遺伝子構築物および／または本明細書に記載の発現ベクターおよび／または本明細書に記載の組成物を対象に投与することを含む。好ましい実施形態では、有効量の遺伝子構築物、発現ベクターまたは組成物が投与される。好ましい実施形態では、治療される対象は、高齢対象および／または代謝障害もしくは疾患、好ましくは肥満症および／もしくは糖尿病と診断された対象である。いくつかの実施形態では、記憶は、認識および／または想起記憶、好ましくは認識記憶であり得る。いくつかの実施形態では、記憶は、感覚記憶、短期記憶および／または長期記憶、好ましくは短期記憶および／または長期記憶であり得る。いくつかの実施形態では、記憶は、黙示的（または手続き型）および／または明示的（または宣言型）記憶であり得る。好ましい実施形態では、記憶は空間記憶によるものであり得る。いくつかの実施形態では、学習は空間学習であり得る。記憶の様々なタイプのさらなる説明は、「一般情報」という題名のセクションに含まれている。

別の態様では、筋機能、筋力、協調、バランスおよび／または機能低下を改善する方法が提供され、方法は、本明細書に記載の遺伝子構築物および／または本明細書に記載の発現ベクターおよび／または本明細書に記載の組成物を対象に投与することを含む。好ましい実施形態では、有効量の遺伝子構築物、発現ベクターまたは組成物が投与される。好ましい実施形態では、治療される対象は、高齢対象および／または代謝障害もしくは疾患、好ましくは肥満症および／もしくは糖尿病と診断された対象である。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用による好ましい実施形態では、治療される対象は、高齢対象および／または代謝障害もしくは疾患と診断された対象である。換言すれば、本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用によるいくつかの実施形態では、中枢神経系障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、加齢および／または代謝障害もしくは疾患に関連し、かつ／またはそれらによって引き起こされる。代謝障害または疾患の合併症も包含され得る。

本明細書で使用される場合、高齢対象は、好ましくは５０歳以上、好ましくは５５歳以上、より好ましくは６０歳以上、最も好ましくは６５歳以上の対象を意味し得る。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用による他の実施形態では、治療される対象は、高齢対象ではなく、かつ／または５０歳以下、４５歳以下、４０歳以下、３５歳以下、３０歳以下、２５歳以下の対象である。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用による他の実施形態では、治療される対象は、代謝障害または疾患と診断されていない対象である。換言すれば、本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用によるいくつかの実施形態では、中枢神経系障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態は、加齢および／または代謝障害もしくは疾患に関連せず、かつ／またはそれらによって引き起こされていない。

代謝障害および疾患には、メタボリック症候群、糖尿病、肥満症、肥満関連併存症、糖尿病関連併存症、高血糖症、インスリン抵抗性、耐糖能異常、肝脂肪症、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、内分泌障害、オステオサルコペニア肥満症候群（ＯＳＯ）、糖尿病性腎症、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、心肥大、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性ニューロパチー、関節炎、敗血症、眼血管新生、神経変性、認知症が含まれ得、抑うつ、腺腫、癌腫も含まれ得る。糖尿病には、糖尿病前症、高血糖症、１型糖尿病、２型糖尿病、若年発症成人型糖尿病（ＭＯＤＹ）、単一遺伝子性糖尿病、新生児糖尿病、妊娠糖尿病、ブリットル糖尿病、特発性糖尿病、薬物または化学誘導性糖尿病、スティッフパーソン症候群、脂肪萎縮性糖尿病、成人潜在性自己免疫性糖尿病（ＬＡＤＡ）が含まれ得る。肥満症には、過体重、中心／上半身肥満、末梢／下半身肥満、病的肥満、オステオサルコペニア肥満症候群（ＯＳＯ）、小児肥満、メンデル遺伝型（単一遺伝子型）症候性肥満、メンデル遺伝型非症候性肥満、多遺伝子性肥満が含まれ得る。好ましい代謝障害または疾患は、肥満症および／または糖尿病である。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用によるいくつかの実施形態では、治療される対象は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態を発症するリスクのある対象である。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中の、療法および／または治療および／または医薬品は、ＣＮＳにおけるＦＧＦ２１の発現および／またはＣＮＳ、好ましくは脳の形質導入を含み得る。いくつかの実施形態では、脳におけるＦＧＦ２１の発現は、視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球におけるＦＧＦ２１の発現を意味し得る。したがって、脳におけるＦＧＦ２１の発現は、視床下部、皮質、海馬、小脳および嗅球からなる群から選択される少なくとも１つ、または少なくとも２つ、または少なくとも３つ、またはすべての脳領域におけるＦＧＦ２１の発現を意味し得る。いくつかの実施形態では、ＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球における発現および／またはそれらの形質導入は、ＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球における特異的発現および／またはそれらの特異的形質導入を意味し得る。一実施形態では、発現は、肝臓、膵臓、脂肪組織、骨格筋および／または心臓における発現を含まない。いくつかの実施形態では、発現は、肝臓、膵臓、脂肪組織、骨格筋および心臓からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはすべての器官における発現を含まない。ＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球に特異的な発現の説明は、以下の「一般情報」と題するセクションで提供されている。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中の、療法および／または治療および／または医薬品は、肝臓におけるＦＧＦ２１の発現および／または肝臓の形質導入を含み得る。いくつかの実施形態では、肝臓における発現および／または肝臓の形質導入は、肝臓における特異的発現および／または肝臓の特異的形質導入を意味し得る。一実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、膵臓、脂肪組織、骨格筋および／または心臓における発現を含まない。いくつかの実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、膵臓、脂肪組織、骨格筋および心臓からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはすべての器官における発現を含まない。肝臓特異的発現の説明は、以下の「一般情報」と題したセクションに提供されている。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中の、療法および／または治療および／または医薬品は、筋におけるＦＧＦ２１の発現および／または筋の形質導入を含み得る。いくつかの実施形態では、筋における発現および／または筋の形質導入は、筋における特異的発現および／または筋の特異的形質導入を意味し得る。一実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、脂肪組織および／または心臓における発現を含まない。いくつかの実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、脂肪組織および心臓からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはすべての器官における発現を含まない。筋特異的発現の説明は、以下の「一般情報」と題したセクションに提供されている。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中の、療法および／または治療および／または医薬品は、脂肪組織におけるＦＧＦ２１の発現および／または脂肪組織の形質導入を含み得る。いくつかの実施形態では、脂肪組織における発現および／または脂肪組織の形質導入は、脂肪組織における特異的発現および／または脂肪組織の特異的形質導入を意味し得る。一実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、骨格筋および／または心臓における発現を含まない。いくつかの実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、骨格筋および心臓からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはすべての器官における発現を含まない。脂肪組織特異的発現の説明は、以下の「一般情報」と題したセクションに提供されている。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の好ましい実施形態では、療法および／または治療および／または医薬品は、以下のうちの少なくとも１つを含み得る：
－ＣＮＳ、好ましくは脳におけるＦＧＦ２１の発現；
－末梢身体器官、好ましくは筋、脂肪組織および／または肝臓、より好ましくは筋および／または脂肪組織におけるＦＧＦ２１の発現；および
－ＦＧＦ２１の循環レベルの上昇。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中、「遺伝子構築物の発現を伴う」は、「遺伝子構築物の発現を引き起こす」または「遺伝子構築物の発現を誘導する」または「形質導入を伴う」に置き換えられ得る。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中の、療法および／または治療および／または医薬品は、筋におけるＦＧＦ２１の発現および／または筋、好ましくは、四頭筋、腓腹筋および／または脛骨筋などの骨格筋の形質導入を含み得る。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中の、療法および／または治療および／または医薬品は、脂肪組織におけるＦＧＦ２１の発現および／または脂肪組織、好ましくは白色脂肪組織（ＷＡＴ）の形質導入を含み得る。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中の、療法および／または治療および／または医薬品は、ＦＧＦ２１の循環レベルの増加を含み得る。ＦＧＦ２１の循環レベルは、例えば実験の部に記載されているように、ＥＬＩＳＡなどの当技術分野で公知の方法に従って血清中で測定することができる。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用のいくつかの実施形態では、方法または使用は、ＣＮＳにおけるＦＧＦ２１の発現を含まず、かつ／またはＣＮＳの形質導入を含まない。

好ましい実施形態では、本明細書に記載の治療または療法または医薬品の使用または投与を繰り返す必要はない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療または療法または医薬品の使用または投与は、毎年または２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０（列挙された値のうちの任意の２つの間の区間を含む）年毎に繰り返すことができる。

治療される対象は、高等哺乳動物、例えば、ネコ、げっ歯類（好ましくはマウス、ラット、スナネズミおよびモルモット、より好ましくはマウスおよびラット）、イヌまたはヒトであり得る。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中、本明細書に記載の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物および／または医薬品は、以下の効果の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、またはすべてを示すことが好ましい：
－神経炎症の減少；
－神経形成の増加；
－神経変性の減少；
－症状（本明細書で後述）の緩和；および
－パラメータ（本明細書で後述）の改善。

神経炎症の減少は、神経組織の炎症が減少することを意味し得る。これは、例えば実験の部で行われるような（神経）炎症マーカーの測定など、当業者に公知の技術を使用して評価することができる。これに関して使用され得る例示的なマーカーは、Ｉｌ－１ｂ、Ｉｌ－６およびＮｆｋＢである。この文脈において、「減少」（それぞれ「改善」）は、実験の部で行われるアッセイなどの当業者に公知のアッセイを使用して、少なくとも検出可能な減少（それぞれ検出可能な改善）を意味する。減少は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％の減少であり得る。この減少は、本発明の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物を用いた治療の少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年またはそれ以上後に見られ得る。好ましくは、単回投与後に減少が観察される。いくつかの実施形態では、減少は、好ましくは単回投与後に少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１２年、１５年、２０年またはそれ以上の期間観察される。

神経形成の増加は、神経幹細胞によってニューロンが産生されることを意味し得る。これは、神経形成マーカーの測定など、当業者に公知の技術を使用して評価することができる。これに関して使用され得る例示的なマーカーは、Ｄｃｘ、ＮｃａｍおよびＳｏｘ２である。この文脈において、「増加」（それぞれ「改善」）は、実験の部で行われるアッセイなどの当業者に公知のアッセイを使用して、少なくとも検出可能な増加（それぞれ検出可能な改善）を意味する。増加は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％の増加であり得る。この増加は、本発明の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物を用いた治療の少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年またはそれ以上後に見られ得る。好ましくは、単回投与後に増加が観察される。いくつかの実施形態では、増加は、好ましくは単回投与後に少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１２年、１５年、２０年またはそれ以上の期間観察される。

神経変性の減少は、ニューロンの死を含むニューロンの構造または機能の損失が減少することを意味し得る。これは、免疫細胞化学、免疫組織化学などの当業者に公知の技術を使用して、ＭＲＩなどの医療用画像化技術によって、ニューロン形態およびシナプス変性を研究することによって（シナプスにあるタンパク質の密度を測定することによって）、またはいくつかの老化マーカーおよび神経変性マーカーの発現レベルを分析することによって評価することができる。関連マーカーの非限定的な例は、ミトコンドリアの機能不全および／または酸化ストレスのマーカー、例えば表１のプロセスおよび経路のいずれかに関連するマーカーである。この文脈において、「減少」（それぞれ「改善」）は、実験の部で行われるアッセイなどの当業者に公知のアッセイを使用して、少なくとも検出可能な減少（それぞれ検出可能な改善）を意味する。減少は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％の減少であり得る。この増加は、本発明の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物を用いた治療の少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年またはそれ以上後に見られ得る。好ましくは、単回投与後に増加が観察される。いくつかの実施形態では、増加は、好ましくは単回投与後に少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１２年、１５年、２０年またはそれ以上の期間観察される。

症状を緩和するとは、典型的な症状（例えば、神経炎症、神経変性、認知低下、シナプス喪失、タウリン酸化、協調の喪失、バランスの喪失、筋力の喪失、筋機能の喪失、機能低下、抑うつ、不安、快感消失症、．．．）の進行が、医師によって評価された場合に、個体、前記個体の細胞、組織または器官において減速したことを意味し得る。典型的な症状の減少は、症状発展の進行の遅延または症状の完全な消失を意味し得る。症状、したがって症状の減少もまた、臨床検査および慣例的な実験室試験を含む様々な方法、大部分は中枢神経系の障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態の診断に使用されるのと同じ方法を使用して評価することができる。臨床検査は、行動試験および認知試験を含み得る。実験室試験には、巨視的方法と顕微鏡的方法の両方、分子的方法、Ｘ線などの放射線学的方法、生化学的方法、免疫組織化学的方法などが含まれ得る。症状の緩和は、本発明の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物を用いた治療の少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年またはそれ以上後に見られ得る。好ましくは、単回投与後に緩和が観察される。いくつかの実施形態では、緩和は、好ましくは単回投与後に少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１２年、１５年、２０年またはそれ以上の期間観察される。

パラメータの改善は、行動試験後の結果の改善、血清およびＣＳＦマーカーの発現の改善、アポトーシス／神経形成細胞マーカーの発現の改善などを意味し得る。パラメータの改善は、本発明の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物を使用した治療の少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年またはそれ以上後に見られ得る。好ましくは、単回投与後に改善が観察される。いくつかの実施形態では、改善は、好ましくは単回投与後に少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１２年、１５年、２０年またはそれ以上の期間観察される。

本明細書に記載の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物は、本発明の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物を用いた治療の少なくとも１週間、１ヶ月、６ヶ月、１年またはそれ以上後に、症状または特徴が本明細書に記載のように減少した（例えば、もはや検出できないか、または減速している）場合、患者または前記患者の細胞、組織もしくは器官の前記症状または特徴を好ましく緩和することができる。

本明細書に記載の遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態に罹患しているかまたはその発症リスクがある個体の細胞、組織および／または器官へのインビボでの投与に適し得、インビボ、エクスビボまたはインビトロで投与することができる。前記遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物は、中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患、またはそれに関連する状態に罹患しているかまたはその発症リスクがある個体の細胞、組織および／または器官へ直接的に、または関節的にインビボで投与することができ、直接的または関節的にインビボ、エクスビボまたはインビトロで投与することができる。

本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈内で、遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物は、異なる投与様式によって投与され得る。投与様式は、静脈内、筋肉内、腹腔内、吸入経由、鼻腔内、実質内、ＣＳＦ（脳脊髄液）内、眼内、皮下、関節内、脂肪組織内、経口、肝臓内、内臓内、耳内、局所投与および／または逆行性膵管内を介した投与であり得る。ＣＳＦ内投与は、大槽、髄腔内または脳室内送達を介して行われ得る。本明細書で使用される「ＣＳＦ内投与」、「鼻腔内投与」、「実質内投与」、「大槽内投与」、「髄腔内投与」および「脳室内投与」は、「一般情報」と題する本出願の部分に記載されている。

好ましい投与様式は、筋肉内、脂肪組織内、例えばｅＷＡＴ（精巣上体白色脂肪組織）内、および（大槽、髄腔内または脳室内送達を介した）ＣＳＦ（脳脊髄液）内投与である。ＣＳＦ内投与の場合、大槽を経由する注射が最も好ましい。

いくつかの実施形態では、本発明による使用のための遺伝子構築物、使用のための発現ベクター、使用のための組成物、方法および使用の文脈中、遺伝子構築物および／または発現ベクターおよび／または組成物は、ＣＳＦ内投与によって投与されない。

本発明のウイルス発現構築物および／またはウイルスベクターおよび／または核酸分子および／または組成物は、当技術分野で公知の適切な手段を使用して直接的または間接的に投与され得る。これまでに達成された進歩を考慮して、本発明のウイルス発現構築物および／またはウイルスベクターおよび／または核酸分子および／または組成物を個体または前記個体の細胞、組織、器官に提供するための手段の改善が予想される。当然ながら、このような将来の改善は、本発明の言及された効果を達成するために組み込まれてもよい。ウイルス発現構築物および／またはウイルスベクターおよび／または核酸分子および／または組成物は、個体、前記個体の細胞、組織または器官にそのまま送達することができる。疾患または状態に応じて、前記個体の細胞、組織または器官は、本明細書で前述した通りであり得る。本発明のウイルス発現構築物および／またはウイルスベクターおよび／または核酸分子および／または組成物を投与する場合、そのようなウイルス発現構築物および／またはベクターおよび／または核酸および／または組成物は、送達方法に適合する溶液に溶解されることが好ましい。

本明細書に包含されるように、上記のウイルス発現構築物、ベクター、核酸分子および／または組成物の治療有効用量は、好ましくは単回の独自の用量で投与され、したがって反復周期的投与を回避する。

一般情報
特に明記しない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって慣習的かつ普通に理解され、本開示を考慮して解釈されるのと同じ意味を有する。

本明細書で使用される場合、「プロモーター」または「調節配列」という用語は、１つまたは複数のコーディング配列の転写を制御するように機能し、コーディング配列の転写開始部位の転写の方向に関して上流に位置し、ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、転写開始部位、および任意の他のＤＮＡ配列のための結合部位、例えば、これらに限定されないが、転写因子結合部位、リプレッサーおよびアクチベータータンパク質結合部位などの存在によって構造的に同定される核酸断片、ならびにプロモーターからの転写量を直接または間接的に調節するように作用する、当業者に公知の任意の他のヌクレオチドの配列を指す。「構成要素」プロモーターは、ほとんどの生理学的および発生的条件下でほとんどの組織において活性であるプロモーターである。「誘導性」および／または「抑制性」プロモーターは、例えば化学的誘導物質または抑制シグナルの適用によって、誘導および／または抑制されるように生理学的または発生的に調節されるプロモーターである。

本明細書で使用される場合、「作動可能に連結される」という用語は、機能的関係にあるポリヌクレオチド要素の連結を指す。核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれた場合、「作動可能に連結される」。例えば、プロモーターなどの転写調節配列は、コーディング配列の転写に影響を及ぼす場合、コーディング配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されているとは、連結されているＤＮＡ配列が典型的には連続しており、２つのタンパク質エンコード領域を連結する必要がある場合は、連続し、かつリーディングフレーム内にあることを意味する。

本明細書で使用される場合、「調節因子」または「転写調節因子」は、特定のＤＮＡ配列に結合することによって、ＤＮＡからメッセンジャーＲＮＡへの遺伝情報の転写速度を制御するタンパク質である。

「タンパク質」または「ポリペプチド」という用語は互換的に使用され、アミノ酸の鎖からなる分子を指し、特定の作用様式、サイズ、三次元構造または起源に言及しない。

「遺伝子」という用語は、適切な調節領域（例えばプロモーター）に作動可能に連結された、細胞のＲＮＡ分子（例えばｍＲＮＡ）に転写される領域（転写領域）を含むＤＮＡ断片を意味する。遺伝子は、通常、作動可能に連結されたいくつかの断片、例えば、プロモーター、５’リーダー配列、コーディング領域および３’非翻訳配列（３’末端）を含み、例えば、ポリアデニル化部位および／または転写終結部位を含む。

「遺伝子の発現」は、適切な調節領域、特にプロモーターに作動可能に連結されたＤＮＡ領域が、生物学的に活性な、すなわち生物学的に活性なタンパク質またはペプチドに翻訳され得るＲＮＡに転写されるプロセスを指す。

本明細書に記載のアミノ酸配列では、アミノ酸または「残基」は３文字記号で示される。これらの３文字記号および対応する１文字記号は当業者に周知であり、以下の意味を有する：Ａ（Ａｌａ）はアラニン、Ｃ（Ｃｙｓ）はシステイン、Ｄ（Ａｓｐ）はアスパラギン酸、Ｅ（Ｇｌｕ）はグルタミン酸、Ｆ（Ｐｈｅ）はフェニルアラニン、Ｇ（Ｇｌｙ）はグリシン、Ｈ（Ｈｉｓ）はヒスチジン、Ｉ（Ｉｌｅ）はイソロイシン、Ｋ（Ｌｙｓ）はリジン、Ｌ（Ｌｅｕ）はロイシン、Ｍ（Ｍｅｔ）はメチオニン、Ｎ（Ａｓｎ）はアスパラギン、Ｐ（Ｐｒｏ）はプロリン、Ｑ（Ｇｌｎ）はグルタミン、Ｒ（Ａｒｇ）はアルギニン、Ｓ（Ｓｅｒ）はセリン、Ｔ（Ｔｈｒ）はトレオニン、Ｖ（Ｖａｌ）はバリン、Ｗ（Ｔｒｐ）はトリプトファン、Ｙ（Ｔｙｒ）はチロシンである。残基は、タンパク質を構成する任意のアミノ酸であり得るが、タンパク質を構成しない任意のアミノ酸、例えばＤ－アミノ酸、および翻訳後修飾によって形成された修飾アミノ酸でもあり得、本明細書に記載されるような、任意の非天然アミノ酸でもあり得る。

配列同一性
本発明の文脈において、ＦＧＦ２１をエンコードする核酸分子などの核酸分子は、タンパク質断片またはポリペプチドまたはペプチドまたは誘導ペプチドをエンコードする核酸またはヌクレオチド配列によって表される。本発明の文脈において、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）としてのＦＧＦ２１タンパク質断片またはポリペプチドまたはペプチドまたは誘導ペプチドは、アミノ酸配列によって表される。

所与の配列同一性番号（配列番号）によって本明細書で同定される各核酸分子またはタンパク質断片またはポリペプチドまたはペプチドまたは誘導ペプチドまたは構築物は、開示されるこの特定の配列に限定されないことが理解されるべきである。本明細書で同定される各コーディング配列は、所与のタンパク質断片もしくはポリペプチドもしくはペプチドもしくは誘導ペプチドもしくは構築物をエンコードするか、またはそれ自体がタンパク質断片もしくはポリペプチドもしくは構築物もしくはペプチドもしくは誘導ペプチドである。

本出願を通して、所与のタンパク質断片またはポリペプチドまたはペプチドまたは誘導ペプチドをエンコードする特定のヌクレオチド配列の配列番号（例として配列番号Ｘとする）に言及する場合はいつでも、それを、
ｉ．配列番号Ｘと少なくとも６０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列；
ｉｉ．配列が、遺伝子暗号の縮重により（ｉ）の核酸分子の配列と異なっているヌクレオチド配列；または
ｉｉｉ．ヌクレオチド配列の配列番号Ｘによってエンコードされるアミノ酸配列と少なくとも６０％のアミノ酸同一性または類似性を有するアミノ酸配列をエンコードするヌクレオチド配列、に置き換えることができる。

配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは７０％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは８０％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは９０％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは９５％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは９９％である。

本出願を通して、特定のアミノ酸配列の配列番号（例として配列番号Ｙとする）に言及する場合はいつでも、それを、アミノ酸配列の配列番号Ｙと少なくとも６０％の配列同一性または類似性を有する配列を含むアミノ酸配列によって表されるポリペプチドに置き換えることができる。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは７０％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは８０％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは９０％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは９５％である。配列同一性または類似性の別の好ましいレベルは９９％である。

所与のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列との同一性または類似性パーセンテージによって本明細書に記載される各ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、さらに好ましい実施形態において、所与のヌクレオチド配列またはアミノ酸配列それぞれと少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の同一性または類似性を有する。

非コーディングヌクレオチド配列（すなわち、プロモーターのもの、または別の調節因子領域のもの）の各々は、特定のヌクレオチド配列の配列番号（例として配列番号Ａとする）と少なくとも６０％の配列同一性または類似性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によって置き換えることができる。好ましいヌクレオチド配列は、配列番号Ａと少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有する。好ましい実施形態では、プロモーターなどの、このような非コーディングヌクレオチド配列は、少なくともこのような非コーディングヌクレオチド配列の活性、例えば当業者に公知のプロモーターの活性を示すか、または発揮する。

「相同性」、「配列同一性」などの用語は、本明細書では互換的に使用される。配列同一性は、本明細書では、配列を比較することによって決定される、２つ以上のアミノ酸（ポリペプチドまたはタンパク質）配列または２つ以上の核酸（ポリヌクレオチド）配列の間の関連性として説明される。好ましい実施形態では、配列同一性は、２つの所与の配列番号の全長またはその一部に基づいて計算される。その一部とは、好ましくは両方の配列番号の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％を意味する。当技術分野では、「同一性」はまた、アミノ酸または核酸配列間の、場合によってはそのような配列のストリング間の一致によって決定された配列関連性の程度を指す。２つのアミノ酸配列間の「類似性」は、１つのポリペプチドのアミノ酸配列およびその保存されたアミノ酸置換を第２のポリペプチドの配列と比較することによって決定される。「同一性」および「類似性」は、限定されないが、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ：Ｍｏｄｅｒｎ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ａｎｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｉｃｓ，Ｘｉａ Ｘ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２０１８；およびＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｍｏｕｎｔ Ｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００４に記載されるものを含む、公知の方法によって容易に計算され得る。

「配列同一性」および「配列類似性」は、２つの配列の長さに応じて、グローバルまたはローカルアライメントアルゴリズムを使用して、２つのペプチドまたは２つのヌクレオチド配列のアライメントによって決定することができる。同程度の長さの配列を、好ましくは、配列を全長にわたって最適にアライメントするグローバルアライメントアルゴリズム（例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈ）を使用してアライメントし、一方、実質的に異なる長さの配列を、好ましくは、ローカルアライメントアルゴリズム（例えば、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ）を使用してアライメントする。配列は、それらが（例えばデフォルトパラメータを使用して、プログラムＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｌｅまたはＥＭＢＯＳＳ ｗａｔｅｒによって最適にアライメントされた場合に）少なくとも一定の最小パーセンテージの配列同一性を共有する場合（後述するように）、「実質的に同一」または「本質的に類似」と称され得る。

２つの配列が同程度の長さを有する場合、グローバルアライメントを適切に使用して配列同一性を決定する。配列が実質的に異なる全長を有する場合、ローカルアライメント、例えばＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用するものが好ましい。ＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｌｅは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈグローバルアライメントアルゴリズムを使用して、２つの配列をそれらの全長（完全長）にわたってアライメントし、一致の数を最大化し、ギャップの数を最小化する。ＥＭＢＯＳＳ ｗａｔｅｒは、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎローカルアライメントアルゴリズムを使用する。一般に、ＥＭＢＯＳＳ ｎｅｅｄｌｅニードルおよびＥＭＢＯＳＳ ｗａｔｅｒのデフォルトパラメータが、ギャップオープンペナルティ＝１０（ヌクレオチド配列）／１０（タンパク質）、およびギャップエクステンションペナルティ＝０．５（ヌクレオチド配列）／０．５（タンパク質）で使用される。ヌクレオチド配列の場合、使用されるデフォルトスコアリングマトリックスはＤＮＡｆｕｌｌであり、タンパク質の場合、デフォルトスコアリングマトリックスはＢｌｏｓｕｍ６２である（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ＆Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９２，ＰＮＡＳ ８９，９１５－９１９、参照により本明細書に組み込まれる）。

あるいは、類似性または同一性のパーセンテージは、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴなどのアルゴリズムを使用して、公開データベースに対して検索することによって決定され得る。したがって、本発明のいくつかの実施形態の核酸およびタンパク質配列を「クエリ配列」としてさらに使用して、公開データベースに対して検索を実行して、例えば、他のファミリーメンバーまたは関連配列を同定することができる。そのような検索は、参照により本明細書に組み込まれる、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のＢＬＡＳＴｎおよびＢＬＡＳＴｘプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２で実行して、本発明の酸化還元酵素核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＢＬＡＳＴｘプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で実行して、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためにギャップのあるアライメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、参照により本明細書に組み込まれるＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２に記載されているように利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴｘおよびＢＬＡＳＴｎ）のデフォルトパラメータを使用することができる。ワールドワイドウェブ、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／でアクセス可能な国立生物工学情報センターのホームページを参照されたい。

場合により、アミノ酸類似性の程度を決定する際に、当業者は、いわゆる保存的アミノ酸置換も考慮に入れることができる。本明細書で使用される場合、「保存的」アミノ酸置換は、類似の側鎖を有する残基の互換性を指す。保存的置換のためのアミノ酸残基のクラスの例を以下の表に示す。

代替的な保存的アミノ酸残基置換のクラス：

アミノ酸残基の代替的な物理的および機能的分類：

例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンであり、脂肪族－ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリンおよびトレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群はアスパラギンおよびグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、およびヒスチジンであり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群はシステインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換群は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、およびアスパラギン－グルタミンである。本明細書に開示されるアミノ酸配列の置換変異体は、開示される配列中の少なくとも１つの残基が除去され、その場所に異なる残基が挿入されたものである。好ましくは、アミノ酸変化は保存的である。天然に存在するアミノ酸のそれぞれに対する好ましい保存的置換は以下の通りである：ＡｌａからＳｅｒ；ＡｒｇからＬｙｓ；ＡｓｎからＧｌｎまたはＨｉｓ；ＡｓｐからＧｌｕ；ＣｙｓからＳｅｒまたはＡｌａ；ＧｌｎからＡｓｎ；ＧｌｕからＡｓｐ；ＧｌｙからＰｒｏ；ＨｉｓからＡｓｎまたはＧｌｎ；ＩｌｅからＬｅｕまたはＶａｌ；ＬｅｕからＩｌｅまたはＶａｌ；ＬｙｓからＡｒｇ；ＧｌｎまたはＧｌｕ；ＭｅｔからＬｅｕまたはＩｌｅ；ＰｈｅからＭｅｔ、ＬｅｕまたはＴｙｒ；ＳｅｒからＴｈｒ；ＴｈｒからＳｅｒ；ＴｒｐからＴｙｒ；ＴｙｒからＴｒｐまたはＰｈｅ；および、ＶａｌからＩｌｅまたはＬｅｕ。

例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンであり、脂肪族－ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリンおよびトレオニンであり、アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群はアスパラギンおよびグルタミンであり、芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンであり、塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニン、およびヒスチジンであり、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群はシステインおよびメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換群は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、およびアスパラギン－グルタミンである。本明細書に開示されるアミノ酸配列の置換変異体は、開示される配列中の少なくとも１つの残基が除去され、その場所に異なる残基が挿入されたものである。好ましくは、アミノ酸変化は保存的である。天然に存在するアミノ酸のそれぞれに対する好ましい保存的置換は以下の通りである：ＡｌａからＳｅｒ；ＡｒｇからＬｙｓ；ＡｓｎからＧｌｎまたはＨｉｓ；ＡｓｐからＧｌｕ；ＣｙｓからＳｅｒまたはＡｌａ；ＧｌｎからＡｓｎ；ＧｌｕからＡｓｐ；ＧｌｙからＰｒｏ；ＨｉｓからＡｓｎまたはＧｌｎ；ＩｌｅからＬｅｕまたはＶａｌ；ＬｅｕからＩｌｅまたはＶａｌ；ＬｙｓからＡｒｇ；ＧｌｎまたはＧｌｕ；ＭｅｔからＬｅｕまたはＩｌｅ；ＰｈｅからＭｅｔ、ＬｅｕまたはＴｙｒ；ＳｅｒからＴｈｒ；ＴｈｒからＳｅｒ；ＴｒｐからＴｙｒ；ＴｙｒからＴｒｐまたはＰｈｅ；および、ＶａｌからＩｌｅまたはＬｅｕ。

遺伝子またはコーディング配列
「遺伝子」という用語は、適切な調節領域（例えばプロモーター）に作動可能に連結された、細胞のＲＮＡ分子（例えばｍＲＮＡ）に転写される領域（転写領域）を含むＤＮＡ断片を意味する。遺伝子は、通常、作動可能に連結されたいくつかの断片、例えば、プロモーター、５’リーダー配列、コーディング領域および３’非翻訳配列（３’末端）を含み、例えば、ポリアデニル化部位および／または転写終結部位を含む。キメラ遺伝子または組換え遺伝子（ＦＧＦ２１遺伝子など）は、本来は通常見られない遺伝子、例えばプロモーターが転写されたＤＮＡ領域の一部または全部と事実上関連していない遺伝子などである。「遺伝子の発現」は、適切な調節領域、特にプロモーターに作動可能に連結されたＤＮＡ領域が、生物学的に活性な、すなわち生物学的に活性なタンパク質またはペプチドに翻訳され得るＲＮＡに転写されるプロセスを指す。

「導入遺伝子」は、本明細書では、細胞に新たに導入された遺伝子またはコーディング配列または核酸分子（すなわち、ＦＧＦ２１をエンコードする分子）、すなわち存在することはできるが、通常は細胞内で発現され得ないかまたは不十分なレベルで発現され得る遺伝子として記載される。この文脈において、「不十分」とは、前記ＦＧＦ２１が細胞内で発現されるが、本明細書に記載の状態および／または疾患が依然として発症し得ることを意味する。この場合、本発明は、ＦＧＦ２１の過剰発現を可能にする。導入遺伝子は、細胞本来の配列、細胞内に本来存在しない配列を含み得、両方の組み合わせを含み得る。導入遺伝子は、ＦＧＦ２１をコーディングする配列、および／または細胞においてＦＧＦ２１をコーディングする配列の発現のために適切な調節配列に作動可能に連結され得る、本明細書において先に同定されたようなさらなるタンパク質を含み得る。好ましくは、導入遺伝子は宿主細胞のゲノムに組み込まれない。

プロモーター
本明細書で使用される場合、「プロモーター」または「転写調節配列」という用語は、１つまたは複数のコーディング配列の転写を制御するように機能し、コーディング配列の転写開始部位の転写の方向に関して上流に位置し、ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ、転写開始部位、および任意の他のＤＮＡ配列のための結合部位、例えば、これらに限定されないが、転写因子結合部位、リプレッサーおよびアクチベータータンパク質結合部位などの存在によって構造的に同定される核酸断片、ならびにプロモーターからの転写量を直接または間接的に調節するように作用する、当業者に公知の任意の他のヌクレオチドの配列を指す。「構成要素」プロモーターは、ほとんどの生理学的および発生的条件下でほとんどの組織において活性であるプロモーターである。「誘導性」プロモーターは、例えば化学的誘導物質の適用によって生理学的または発生的に調節されるプロモーターである。

「遍在性プロモーター」は、生物の実質的にすべての組織、器官および細胞において活性である。

「器官特異的」または「組織特異的」プロモーターは、それぞれ特定の種類の器官または組織で活性なプロモーターである。器官特異的プロモーターおよび組織特異的プロモーターは、主に１つの器官または組織における１つ以上の遺伝子（またはコーディング配列）の発現を調節するが、他の器官または組織においても検出可能なレベルの（「漏出性」）発現を可能にすることができる。他の器官または組織における漏出性発現は、当業者に公知の標準的なアッセイ（例えば、ｑＰＣＲ、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡ）によってｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルで評価した場合に、器官特異的発現または組織特異的発現と比較して、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍または少なくとも５倍低いがそれでも検出可能な発現を意味する。漏出性発現が検出され得る器官または組織の最大数は、５、６、７または８である。

「ＣＮＳまたは脳特異的プロモーター」は、ＣＮＳおよび／または脳において転写を開始することができるプロモーターであるが、それでも他の（最大５、６、７または８）器官および身体の部分におけるいくらかの漏出性発現を可能にする。ＣＮＳおよび／または脳における転写は、視床下部、皮質、海馬、小脳および嗅球などの関連領域、ならびにニューロンおよび／またはグリア細胞などの細胞において検出することができる。

本発明の文脈において、ＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球の特異的プロモーターとは、他の器官または組織と比較して、ＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球におけるＦＧＦ２１の優先的または優勢な（少なくとも１０％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、少なくとも２００％高い、またはそれ以上）発現を駆動することができるプロモーターであり得る。他の器官または組織は、肝臓、膵臓、脂肪組織、骨格筋、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃、精巣などであり得る。好ましくは、他の器官は、肝臓および心臓である。発現は、他に「一般情報」と題する以下のセクションで記載されているように評価することができる。

本出願を通して、発現の文脈でＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球特異的が言及される場合、ＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球を構成する細胞型の細胞型特異的発現もそれぞれ想定される。

「肝臓特異的プロモーター」は、肝臓において転写を開始することができるプロモーターであるが、それでも他の（最大５、６、７または８）器官および身体の部分におけるいくらかの漏出性発現を可能にする。肝臓における転写は、肝組織および肝細胞、例えば肝実質細胞、クッパー細胞および／またはオーバル細胞において検出することができる。

本発明の文脈において、肝臓特異的プロモーターは、他の器官または組織と比較して、肝臓におけるＦＧＦ２１の優先的または優勢な（少なくとも１０％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、少なくとも２００％高い、またはそれ以上）発現を駆動することができるプロモーターであり得る。他の器官または組織は、ＣＮＳ、脳、膵臓、脂肪組織、骨格筋、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃、精巣などであり得る。好ましくは、他の器官は心臓である。発現は、他に「一般情報」と題する以下のセクションで記載されているように評価することができる。

本出願を通して、発現の文脈で肝臓特異的が言及される場合、肝臓を構成する細胞型（肝実質細胞、クッパー細胞および／またはオーバル細胞を含む）の細胞型特異的発現もそれぞれ想定される。

「脂肪組織特異的プロモーター」は、脂肪組織において転写を開始することができるプロモーターであるが、それでも他の（最大５、６、７または８）器官および身体の部分におけるいくらかの漏出性発現を可能にする。脂肪組織における転写は、脂肪組織の脂肪組織細胞、例えば白色脂肪細胞、褐色脂肪細胞、ベージュ脂肪細胞、前脂肪細胞、間質血管細胞において検出することができる。

本発明の文脈において、脂肪組織特異的プロモーターは、他の器官または組織と比較して、脂肪組織におけるＦＧＦ２１の優先的または優勢な（少なくとも１０％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、少なくとも２００％高い、またはそれ以上）発現を駆動することができるプロモーターであり得る。他の器官または組織は、ＣＮＳ、脳、膵臓、肝臓、筋骨格、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃、精巣などであり得る。好ましくは、他の器官は心臓である。発現は、他に「一般情報」と題する以下のセクションで記載されているように評価することができる。

本出願を通して、発現の文脈で脂肪組織特異的が言及される場合、脂肪組織を構成する細胞型（白色脂肪細胞、褐色脂肪細胞、ベージュ脂肪細胞、前脂肪細胞、間質血管細胞を含む）の細胞型特異的発現もそれぞれ想定される。

「骨格筋プロモーター」は、骨格筋において転写を開始することができるプロモーターであるが、それでも他の（最大５、６、７または８）器官および身体の部分におけるいくらかの漏出性発現を可能にする。骨格筋における転写は、骨格筋組織および骨格筋細胞、例えば筋細胞、筋芽細胞、衛星細胞において検出することができる。

本発明の文脈において、骨格筋プロモーターは、他の器官または組織と比較して、骨格筋におけるＦＧＦ２１の優先的または優勢な（少なくとも１０％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、少なくとも２００％高い、またはそれ以上）発現を駆動することができるプロモーターであり得る。他の器官または組織は、ＣＮＳ、脳、膵臓、脂肪組織、肝臓、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃、精巣などであり得る。好ましくは、他の器官は心臓である。発現は、他に「一般情報」と題する以下のセクションで記載されているように評価することができる。

本出願を通して、発現の文脈で骨格筋が言及される場合、骨格筋を構成する細胞型（筋細胞、筋芽細胞、衛星細胞）の細胞型特異的発現もそれぞれ想定される。

作動可能に連結される
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結される」という用語は、機能的関係にあるポリヌクレオチド要素の連結を指す。核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれた場合、「作動可能に連結される」。例えば、転写調節配列は、コーディング配列の転写に影響を及ぼす場合、コーディング配列に作動可能に連結される。作動可能に連結されているとは、連結されているＤＮＡ配列が典型的には連続しており、２つのタンパク質エンコード領域を連結する必要がある場合は、連続し、かつリーディングフレーム内にあることを意味する。連結は、好都合な制限部位での、またはアダプターもしくはその代わりに挿入されたリンカーでのライゲーションによって、または遺伝子合成によって達成することができる。

マイクロＲＮＡ
本明細書で使用される場合、「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲＮＡ」または「ｍｉＲ」は、本開示に鑑みて当業者によって理解されるその慣習的かつ通常の意味を有する。マイクロＲＮＡは、植物、動物およびいくつかのウイルスに見られる小さな非コーディングＲＮＡ分子であり、ＲＮＡサイレンシングおよび遺伝子発現の転写後調節において機能し得る。マイクロＲＮＡの標的配列は、「ｍｉＲＴ」と表記され得る。例えば、マイクロＲＮＡ－１またはｍｉＲＮＡ－１またはｍｉＲ－１の標的配列は、ｍｉＲＴ－１と表記され得る。

タンパク質およびアミノ酸
「タンパク質」または「ポリペプチド」または「アミノ酸配列」という用語は互換的に使用され、アミノ酸の鎖からなる分子を指し、特定の作用様式、サイズ、三次元構造または起源に言及しない。本明細書に記載のアミノ酸配列では、アミノ酸または「残基」は３文字記号で示される。これらの３文字記号および対応する１文字記号は当業者に周知であり、以下の意味を有する：Ａ（Ａｌａ）はアラニン、Ｃ（Ｃｙｓ）はシステイン、Ｄ（Ａｓｐ）はアスパラギン酸、Ｅ（Ｇｌｕ）はグルタミン酸、Ｆ（Ｐｈｅ）はフェニルアラニン、Ｇ（Ｇｌｙ）はグリシン、Ｈ（Ｈｉｓ）はヒスチジン、Ｉ（Ｉｌｅ）はイソロイシン、Ｋ（Ｌｙｓ）はリジン、Ｌ（Ｌｅｕ）はロイシン、Ｍ（Ｍｅｔ）はメチオニン、Ｎ（Ａｓｎ）はアスパラギン、Ｐ（Ｐｒｏ）はプロリン、Ｑ（Ｇｌｎ）はグルタミン、Ｒ（Ａｒｇ）はアルギニン、Ｓ（Ｓｅｒ）はセリン、Ｔ（Ｔｈｒ）はトレオニン、Ｖ（Ｖａｌ）はバリン、Ｗ（Ｔｒｐ）はトリプトファン、Ｙ（Ｔｙｒ）はチロシンである。残基は、タンパク質を構成する任意のアミノ酸であり得るが、タンパク質を構成しない任意のアミノ酸、例えばＤ－アミノ酸、および翻訳後修飾によって形成された修飾アミノ酸でもあり得、任意の非天然アミノ酸でもあり得る。

ＣＮＳおよび脳
本明細書で使用される場合、「中枢神経系」または「ＣＮＳ」は、感覚インパルスが伝達され、運動インパルスを出し、神経系全体の活動を調整する、脳および脊髄を含む神経系の部分を指す。

本明細書で使用される場合、「脳」は、神経系の中枢器官を指し、大脳、脳幹および小脳からなる。それは、身体の活動の大部分を制御し、感覚器官から受信した情報を処理、統合、および調整し、身体の残りの部分に送信される命令に関する決定を行う。

特に、本明細書で使用される場合、「視床下部」は、視床の下の前脳の領域を指し、それは自律神経系と下垂体の活動の両方を調整し、体温、口渇、空腹、および他の恒常性系を制御し、睡眠および情動活動に関与する。本明細書で使用される「海馬」は、辺縁系に属し、短期記憶から長期記憶への情報の固定において、およびナビゲーションを可能にする空間記憶において重要な役割を果たす。海馬は、大脳皮質の下（ａｌｌｏｃｏｒｔｉｃａｌ）および内側側頭葉の霊長類に位置する。本明細書で使用される「皮質」または「大脳皮質」は、ヒトおよび他の哺乳動物における脳の大脳の神経組織の外層である。それは、記憶、注意、知覚、認識、思考、言語、および意識において重要な役割を果たす。本明細書で使用される「小脳」は、すべての脊椎動物の後脳における主要な形質を指す。ヒトでは、それは運動制御において重要な役割を果たす。それはまた、注意および言語などのいくつかの認知機能、ならびに恐怖および快楽の反応の調節に関与し得る。本明細書で使用される「嗅球」は、嗅覚系（嗅覚に特化した系）の本質的な構造を指す。嗅球は、扁桃体、眼窩前頭皮質（ＯＦＣ）、および海馬においてさらに処理されるべき情報を送り、そこで感情、記憶、および学習における役割を果たす。

遺伝子構築物
本明細書に記載の遺伝子構築物は、当業者に公知の任意のクローニングおよび／または組換えＤＮＡ技術を使用して調製することができ、前記ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列は、適切な細胞、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）およびＳａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１、上記）に記載されているような（これらの両方は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、培養細胞または多細胞生物の細胞で発現される。Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８２：４８８（部位誘導突然変異誘発を記載）、およびＲｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２８：７３１－７３４またはＷｅｌｌｓ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｇｅｎｅ ３４：３１５（カセット突然変異誘発を記載）も参照されたい。

発現ベクター
「発現ベクター」または「ベクター」という句は、例えば、遺伝子またはコーディング配列の発現をもたらすことができるヌクレオチド配列を、そのような配列と適合性のある宿主において導入することによって、細胞における遺伝子発現を得るために使用される分子生物学におけるツールを一般に指す。発現ベクターは、細胞内で安定化し、エピソームのまま存続することができるゲノムを保有する。本発明の文脈内で、細胞は、構築物を作製するために使用される細胞、または構築物が投与される細胞を包含することを意味し得る。あるいは、ベクターは、例えば相同組換えまたは他の方法によって細胞のゲノムに組み込むことができる。

これらの発現ベクターは、典型的には、少なくとも適切なプロモーター配列を含み、転写終結シグナルを含んでもよい。発現をもたらすのに必要または有用な追加の因子も、本明細書に記載のように使用することができる。ＦＧＦ２１をエンコードする核酸またはＤＮＡまたはヌクレオチド配列は、インビトロ細胞培養物への導入、およびそこでの発現が可能なＤＮＡ構築物に組み込まれる。具体的には、ＤＮＡ構築物は、原核生物宿主、例えば細菌、例えば大腸菌における複製に適しているか、または培養された哺乳動物、植物、昆虫、（例えば、Ｓｆ９）、酵母、真菌もしくは他の真核細胞株に導入することができる。

特定の宿主への導入のために調製されたＤＮＡ構築物は、宿主によって認識される複製系、所望のポリペプチドをエンコードすることを意図するＤＮＡセグメント、ならびにポリペプチドをエンコードするセグメントに作動可能に連結された転写および翻訳開始および終結調節配列を含み得る。「作動可能に連結された」という用語は、本明細書で既に説明されている。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写を刺激する場合、コーディング配列に作動可能に連結されている。シグナル配列のためのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドをエンコードするＤＮＡに作動可能に連結されている。一般に、作動可能に連結されるＤＮＡ配列は隣接しており、シグナル配列の場合、隣接し、かつリーディングフレーム内にある。しかしながら、エンハンサーは、それらが転写を制御するコーディング配列と隣接している必要はない。連結は、好都合な制限部位での、またはアダプターもしくはその代わりに挿入されたリンカーでのライゲーションによって、または遺伝子合成によって達成される。

適切なプロモーター配列の選択は、一般に、ＤＮＡセグメントの発現のために選択される宿主細胞に依存する。適切なプロモーター配列の例としては、当技術分野で周知の原核生物プロモーターおよび真核生物プロモーターが挙げられる（例えば、前出のＳａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，２００１を参照されたい）。転写調節配列は、典型的には、宿主によって認識される異種エンハンサーまたはプロモーターを含む。適切なプロモーターの選択は宿主に依存するが、ｔｒｐ、ｌａｃおよびファージプロモーター、ｔＲＮＡプロモーターならびに解糖酵素プロモーターなどのプロモーターが公知であり、入手可能である（例えば、前出のＳａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，２００１を参照されたい）。発現ベクターは、ポリペプチドをエンコードするセグメントの挿入部位と共に、複製系ならびに転写および翻訳調節配列を含む。ほとんどの場合、複製系は、ベクターを作製するために使用される細胞においてのみ機能する（大腸菌としての細菌細胞）。ほとんどのプラスミドおよびベクターは、ベクターに感染した細胞では複製しない。細胞株と発現ベクターとの実行可能な組み合わせの例は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１、前出）およびＭｅｔｚｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：３１－３６に記載されている。例えば、適切な発現ベクターは、酵母、例えば出芽酵母、例えば昆虫細胞、例えばＳｆ９細胞、哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ細胞、および細菌細胞、例えば大腸菌で発現させることができる。したがって、細胞は、原核生物または真核生物の宿主細胞であり得る。細胞は、液体または固体培地での培養に適した細胞であり得る。

あるいは、宿主細胞は、トランスジェニック植物またはトランスジェニック動物などの多細胞生物の一部である細胞である。

適切なプロモーター配列の選択は、一般に、ＤＮＡセグメントの発現のために選択される宿主細胞に依存する。適切なプロモーター配列の例としては、当技術分野で周知の原核生物プロモーターおよび真核生物プロモーターが挙げられる（例えば、前出のＳａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，２００１を参照されたい）。転写調節配列は、典型的には、宿主によって認識される異種エンハンサーまたはプロモーターを含む。適切なプロモーターの選択は宿主に依存するが、ｔｒｐ、ｌａｃおよびファージプロモーター、ｔＲＮＡプロモーターならびに解糖酵素プロモーターなどのプロモーターが公知であり、入手可能である（例えば、前出のＳａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，２００１を参照されたい）。発現ベクターは、ポリペプチドをエンコードするセグメントの挿入部位と共に、複製系ならびに転写および翻訳調節配列を含む。ほとんどの場合、複製系は、ベクターを作製するために使用される細胞においてのみ機能する（大腸菌としての細菌細胞）。ほとんどのプラスミドおよびベクターは、ベクターに感染した細胞では複製しない。細胞株と発現ベクターとの実行可能な組み合わせの例は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１、前出）およびＭｅｔｚｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：３１－３６に記載されている。例えば、適切な発現ベクターは、酵母、例えば出芽酵母、例えば昆虫細胞、例えばＳｆ９細胞、哺乳動物細胞、例えばＣＨＯ細胞、および細菌細胞、例えば大腸菌で発現させることができる。したがって、細胞は、原核生物または真核生物の宿主細胞であり得る。細胞は、液体または固体培地での培養に適した細胞であり得る。

あるいは、宿主細胞は、トランスジェニック植物またはトランスジェニック動物などの多細胞生物の一部である細胞である。

ウイルスベクター
ウイルスベクターまたはウイルス発現ベクター、ウイルス遺伝子治療ベクターは、本明細書に記載の遺伝子構築物を含むベクターである。

ウイルスベクターまたはウイルス遺伝子治療ベクターは、遺伝子治療に適したベクターである。遺伝子治療に適したベクターは、Ａｎｄｅｒｓｏｎ １９９８，Ｎａｔｕｒｅ ３９２：２５－３０；Ｗａｌｔｈｅｒ ａｎｄ Ｓｔｅｉｎ，２０００，Ｄｒｕｇｓ ６０：２４９－７１；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．７：３３－４０；Ｒｕｓｓｅｌｌ，２０００，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８１：２５７３－６０４；Ａｍａｄｏ ａｎｄ Ｃｈｅｎ，１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８５：６７４－６；Ｆｅｄｅｒｉｃｏ，１９９９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：４４８－５３；Ｖｉｇｎａ ａｎｄ Ｎａｌｄｉｎｉ，２０００，Ｊ．Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ．２：３０８－１６；Ｍａｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ ３：３９６－４０３；Ｐｅｎｇ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，１９９９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：４５４－７；Ｓｏｍｍｅｒｆｅｌｔ，１９９９，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８０：３０４９－６４；Ｒｅｉｓｅｒ，２０００，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：９１０－３；およびその中で引用されている参考文献に記載されている。

特に適切な遺伝子治療ベクターには、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターが含まれる。これらのベクターは、滑膜細胞および肝細胞を含む多数の分裂細胞型および非分裂細胞型に感染する。細胞侵入後のアデノウイルスベクターおよびＡＡＶベクターのエピソーム性により、これらのベクターは上記のように治療用途に適したものになる（Ｒｕｓｓｅｌｌ，２０００，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ。８１：２５７３－２６０４；Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ，２００５，Ｖｉｒｏｌ Ｊ．２（１）：４３）。ＡＡＶベクターは、導入遺伝子発現の非常に安定した長期発現をもたらすことが知られているので、さらにより好ましい（イヌでは最大９年間（Ｎｉｅｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｂｌｏｏｄ．２００９ Ｊａｎ ２２；１１３（４）：７９７－８０６）、ヒトでは約１０年間（Ｂｕｃｈｌｉｓ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２０１２ Ｍａｒ ２９；１１９（１３）：３０３８－４１）。好ましいアデノウイルスベクターは、Ｒｕｓｓｅｌｌ（２０００、前出）によって概説されるように、宿主応答を減らすように修飾される。ＡＡＶベクターを使用する遺伝子治療のための方法は、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ．Ｍａｒｃｈ ９（印刷に先行するＥｐｕｂ）、Ｍａｎｄｅｌ ｅｔ ａｌ．、２００４、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．６（５）：４８２－９０、およびＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．、２００４、Ｅｙｅ １８（１１）：１０４９－５５、Ｎａｔｈｗａｎｉ ｅｔ ａｌ、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０１１ Ｄｅｃ ２２；３６５（２５）：２３５７－６５、Ａｐｐａｒａｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ、Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００５ Ａｐｒ；１６（４）：４２６－３４に記載されている。

別の適切な遺伝子治療ベクターには、レトロウイルスベクターが含まれる。本発明における適用のための好ましいレトロウイルスベクターは、レンチウイルスベースの発現構築物である。レンチウイルスベクターは、分裂細胞および非分裂細胞のゲノムに感染し、安定に組み込まれる能力を有する（Ａｍａｄｏ ａｎｄ Ｃｈｅｎ，１９９９ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８５：６７４－６）。レンチウイルスベースの発現構築物の構築および使用方法は、米国特許第６，１６５，７８２号、第６，２０７，４５５号、第６，２１８，１８１号、第６，２７７，６３３号および第６，３２３，０３１号、ならびにＦｅｄｅｒｉｃｏ（１９９９，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １０：４４８－５３）およびＶｉｇｎａ ｅｔ ａｌ．（２０００，Ｊ Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ ２０００；２：３０８－１６）に記載されている。

他の適切な遺伝子治療ベクターには、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、ポリオーマウイルスベクターまたはワクシニアウイルスベクターが含まれる。

アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶベクター）
本明細書で同義語として使用される用語「アデノ随伴ウイルス」、「ＡＡＶウイルス」、「ＡＡＶビリオン」、「ＡＡＶウイルス粒子」および「ＡＡＶ粒子」は、ＡＡＶの少なくとも１つのキャプシドタンパク質（好ましくは特定のＡＡＶ血清型のすべてのキャプシドタンパク質で構成される）およびＡＡＶゲノムのカプセル化ポリヌクレオチドで構成されるウイルス粒子を指す。粒子がＡＡＶ逆方向末端反復に隣接する異種ポリヌクレオチド（すなわち、野生型ＡＡＶゲノムとは異なるポリヌクレオチド、例えば哺乳動物細胞に送達される導入遺伝子）を含む場合、それらは、典型的には「ＡＡＶベクター粒子」または「ＡＡＶウイルスベクター」または「ＡＡＶベクター」として知られている。ＡＡＶは、ディペンドウイルス属パルボウイルス科に属するウイルスを指す。ＡＡＶゲノムは、長さが約４．７Ｋｂであり、陽性または陰性で検出され得る一本鎖デオキシリボ核酸（ｓｓＤＮＡ）からなる。本発明はまた、ｄｓＡＡＶまたはｓｃＡＡＶとも呼ばれる二本鎖ＡＡＶの使用も包含する。ゲノムは、ＤＮＡ鎖の両端に逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）と、２つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）：ｒｅｐおよびｃａｐとを含む。フレームｒｅｐは、ＡＡＶライフサイクルに必要なタンパク質Ｒｅｐをエンコードする４つの重複遺伝子で構成されている。フレームｃａｐは、相互作用して正二十面体対称性のキャプシドを形成するキャプシドタンパク質：ＶＰ１、ＶＰ２およびＶＰ３と重複するヌクレオチド配列を含有する（Ｃａｒｔｅｒ ａｎｄ Ｓａｍｕｌｓｋｉ．、２０００、およびＧａｏ ｅｔ ａｌ、２００４を参照されたい）。

好ましいウイルスベクターまたは好ましい遺伝子治療ベクターはＡＡＶベクターである。本明細書で使用されるＡＡＶベクターは、好ましくは組換えＡＡＶベクター（ｒＡＡＶベクター）を含む。本明細書で使用される「ｒＡＡＶベクター」は、本明細書で説明されるＡＡＶ血清型に由来するキャプシドタンパク質のタンパク質シェルにキャプシド化されたＡＡＶゲノムの一部を含む組換えベクターを指す。ＡＡＶゲノムの一部は、アデノ随伴ウイルス血清型、例えばＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５などに由来する逆方向末端反復配列（ＩＴＲ）を含み得る。好ましいＩＴＲは、配列番号３０（５’ＩＴＲ）および配列番号３１（３’ＩＴＲ）を含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなる配列によって表されるＡＡＶ２のＩＴＲである。本発明はまた、好ましくは、５’ＩＴＲとして配列番号３０と少なくとも８０％（または少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）の同一性を有する配列、および３’ＩＴＲとして配列番号３１と少なくとも８０％（または少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％）の同一性を有する配列の使用を包含する。

キャプシドタンパク質で構成されるタンパク質シェルは、任意のＡＡＶ血清型に由来し得る。タンパク質シェルは、キャプシドタンパク質シェルとも呼ばれ得る。ｒＡＡＶベクターは、１つまたは好ましくはすべての野生型ＡＡＶ遺伝子が欠失していてもよいが、依然として機能的ＩＴＲ核酸配列を含み得る。機能的ＩＴＲ配列は、ＡＡＶビリオンの複製、レスキューおよびパッケージングに必要である。ＩＴＲ配列は、野生型配列であり得るか、または野生型配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有し得るか、または機能的なままである限り、例えばヌクレオチドの挿入、変異、欠失または置換によって変化し得る。この文脈において、機能性とは、ゲノムをキャプシドシェルに直接パッケージングし、次いで感染される宿主細胞または標的細胞における発現を可能にする能力を指す。本発明の文脈において、キャプシドタンパク質シェルは、ｒＡＡＶベクターゲノムＩＴＲとは異なる血清型のものであり得る。

選択の核酸配列によって表される核酸分子は、好ましくは、上記で同定されたｒＡＡＶゲノムまたはＩＴＲ配列、例えばコーディング配列に作動可能に連結された発現調節要素を含む発現構築物と、３’末端配列との間に挿入される。前記核酸分子は、導入遺伝子とも呼ばれ得る。

「ＡＡＶヘルパー機能」は、一般に、トランスでｒＡＡＶベクターに供給されるｒＡＡＶの複製およびパッケージングに必要な対応するＡＡＶ機能を指す。ＡＡＶヘルパー機能は、ｒＡＡＶベクターに欠けているＡＡＶ機能を補完するが、ＡＡＶ ＩＴＲ（ｒＡＡＶベクターゲノムによって提供される）を欠く。ＡＡＶヘルパー機能は、ＡＡＶの２つの主要なＯＲＦ、すなわちｒｅｐコーディング領域およびｃａｐコーディング領域、またはそれらの機能的に実質的に同一の配列を含む。ＲｅｐおよびＣａｐ領域は当技術分野で周知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９９，Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ ７３（２）：１３０９－１３１９）または米国特許第５，１３９，９４１号明細書を参照されたい。ＡＡＶヘルパー機能は、ＡＡＶヘルパー構築物に供給することができる。ヘルパー構築物の宿主細胞への導入は、例えば、本明細書で同定されるｒＡＡＶベクター中に存在するｒＡＡＶゲノムの導入前または導入と同時に、形質転換、形質移入または形質導入によって起こり得る。したがって、本発明のＡＡＶヘルパー構築物は、一方ではｒＡＡＶベクターのキャプシドタンパク質シェルについて、他方では前記ｒＡＡＶベクター複製およびパッケージングに存在するｒＡＡＶゲノムについて、血清型の所望の組み合わせをもたらすように選択され得る。

「ＡＡＶヘルパーウイルス」は、ＡＡＶの複製およびパッケージングに必要なさらなる機能を提供する。適切なＡＡＶヘルパーウイルスには、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ１型および２型など）およびワクシニアウイルスが含まれる。参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，５３１，４５６号に記載されているように、ヘルパーウイルスによって提供されるさらなる機能を、プラスミドを介して宿主細胞に導入することもできる。

「形質導入」は、ウイルスベクターによるレシピエント宿主細胞へのＦＧＦ２１の送達を指す。例えば、本発明のｒＡＡＶベクターによる標的細胞の形質導入は、そのベクターに含まれるｒＡＡＶゲノムの形質導入細胞への移入をもたらす。「宿主細胞」または「標的細胞」は、ＤＮＡ送達が行われる細胞、例えば対象の筋細胞を指す。ＡＡＶベクターは、分裂細胞と非分裂細胞の両方に形質導入することができる。

ＡＡＶベクターの作製
導入遺伝子をベクター化するための組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）の作製は、以前に説明されている。Ａｙｕｓｏ Ｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１０；１０：４２３－４３６，Ｏｋａｄａ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００９；２０：１０１３－１０２１，Ｚｈａｎｇ Ｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００９；２０：９２２－９２９、およびＶｉｒａｇ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００９；２０：８０７－８１７を参照されたい。これらのプロトコルは、本発明のＡＡＶを作製するために使用または適合させることができる。一実施形態では、産生細胞株に、本発明のポリヌクレオチド（ＩＴＲに隣接する発現カセットを含む）、ならびにｒｅｐおよびｃａｐタンパク質をエンコードし、ヘルパー機能を提供する構築物を一過性に形質移入する。別の実施形態では、細胞株はヘルパー機能を安定に供給し、本発明のポリヌクレオチド（ＩＴＲに隣接する発現カセットを含む）、ならびにｒｅｐおよびｃａｐタンパク質をエンコードする構築物を一過性に形質移入される。別の実施形態では、細胞株は、ｒｅｐおよびｃａｐタンパク質ならびにヘルパー機能を安定に供給し、本発明のポリヌクレオチドを一過性に形質移入される別の実施形態では、細胞株はｒｅｐおよびｃａｐタンパク質を安定に供給し、本発明のポリヌクレオチド、およびヘルパー機能をエンコードするヌクレオチドを一過性に形質移入される。さらに別の実施形態では、細胞株は、本発明のポリヌクレオチド、ｒｅｐおよびｃａｐタンパク質ならびにヘルパー機能を安定に供給する。これらおよび他のＡＡＶ製造システムを作製および使用する方法は、当技術分野で説明されている。Ｍｕｚｙｃｚｋａ Ｎ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，１３９，９４１号、Ｚｈｏｕ Ｘ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，７４１，６８３号、Ｓａｍｕｌｓｋｉ Ｒ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第６，０５７，１５２号、Ｓａｍｕｌｓｋｉ Ｒ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第６，２０４，０５９号、Ｓａｍｕｌｓｋｉ Ｒ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第６，２６８，２１３号、Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ Ｊ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第６，４９１，９０７号、Ｚｏｌｏｔｕｋｈｉｎ Ｓ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第６，６６０，５１４号、Ｓｈｅｎｋ Ｔ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第６，９５１，７５３号、Ｓｎｙｄｅｒ Ｒ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第７，０９４，６０４、Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ Ｊ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第７，１７２，８９３、Ｍｏｎａｈａｎ Ｐ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第７，２０１，８９８号、Ｓａｍｕｌｓｋｉ Ｒ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第７，２２９，８２３号、およびＦｅｒｒａｒｉ Ｆ，ｅｔ ａｌ．、米国特許第７，４３９，０６５号を参照されたい。

ｒＡＡＶベクター中に存在するｒＡＡＶゲノムは、少なくとも、ＡＡＶ血清型の１つ（好ましくは本明細書で前に開示された血清型ＡＡＶ２のもの）の逆方向末端反復領域（ＩＴＲ）のヌクレオチド配列、またはそれと実質的に同一のヌクレオチド配列もしくはそれと少なくとも６０％の同一性を有するヌクレオチド配列、および２つのＩＴＲの間に挿入された（適切な調節要素の制御下の）ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列を含む。ベクターゲノムは、ｒＡＡＶキャプシドへのベクターゲノムの効率的なパッケージングを可能にするために、隣接する５’および３’ＩＴＲ配列の使用を必要とする。

いくつかのＡＡＶ血清型および対応するＩＴＲの完全なゲノムが配列決定されている（Ｃｈｉｏｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．１９９９、Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．７３，Ｎｏ．２，ｐ１３０９－１３１９）。それらは、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．（Ｆｏｓｔｅｒｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）によって供給されるオリゴヌクレオチド合成機を使用して、または標準的な分子生物学技術によって、当技術分野で公知の化学合成によってクローニングまたは作製することができる。ＩＴＲは、ＡＡＶウイルスゲノムからクローニングするか、またはＡＡＶ ＩＴＲを含むベクターから摘出することができる。ＩＴＲヌクレオチド配列を、標準的な分子生物学技術を使用して、１つ以上の治療用タンパク質をエンコードするヌクレオチド配列にいずれかの末端でライゲーションしても、またはＩＴＲ間のＡＡＶ配列を所望のヌクレオチド配列で置き換えてもよい。

好ましくは、ｒＡＡＶベクターに存在するｒＡＡＶゲノムは、ＡＡＶのｒｅｐ（複製）遺伝子またはｃａｐ（キャプシド）遺伝子などのウイルスタンパク質をエンコードするヌクレオチド配列を含まない。このｒＡＡＶゲノムは、マーカーまたはレポーター遺伝子、例えば抗生物質耐性遺伝子エンコードする遺伝子、蛍光タンパク質（例えば、ｇｆｐ）または当技術分野で公知の化学的、酵素的もしくは他の方法で検出可能、かつ／もしくは選択可能な産物（例えば、ｌａｃＺ、ａｐｈなど）をエンコードする遺伝子をさらに含み得る。

前記ｒＡＡＶベクターに存在するｒＡＡＶゲノムは、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されるプロモーター配列をさらに含む。

適切な３’非翻訳配列はまた、ＦＧＦ２１をエンコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結され得る。適切な３’非翻訳領域は、ヌクレオチド配列に自然に会合しているものであり得るか、または異なる遺伝子、例えばＳＶ４０ポリアデニル化シグナル（配列番号３２）およびウサギβ－グロビンポリアデニル化シグナル（配列番号３３）などに由来し得る。

発現
発現は、当業者に公知の任意の方法によって評価され得る。例えば、発現は、当業者に公知の標準的なアッセイ、例えばｑＰＣＲ、ＲＮＡ配列決定、ノーザンブロット分析、ウエスタンブロット分析、タンパク質由来ペプチドの質量分析またはＥＬＩＳＡによって、形質導入組織における導入遺伝子発現のレベルをｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルで測定することによって評価され得る。

発現は、本明細書に記載の遺伝子構築物、発現ベクターまたは組成物の投与後の任意の時点で評価することができる。いくつかの実施形態では、発現は、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、５週間後、６週間後、７週間後、８週間後、９週間後、１０週間後、１１週間後、１２週間後、１４週間後、１６週間後、１８週間後、２０週間後、２２週間後、２４週間後、２８週間後、３２週間後、３６週間後、４０週間後、またはそれ以上後に評価され得る。

本発明の文脈において、ＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球の特異的発現とは、他の器官または組織と比較して、ＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球におけるＦＧＦ２１の優先的または優勢な（少なくとも１０％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、少なくとも２００％高い、またはそれ以上）発現を指す。他の器官または組織は、肝臓、膵臓、脂肪組織、骨格筋、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃、精巣などであり得る。好ましくは、他の器官は、肝臓および／または心臓である。一実施形態では、発現は、肝臓、膵臓、脂肪組織、骨格筋および／または心臓では検出不可能である。いくつかの実施形態では、発現は、肝臓、膵臓、脂肪組織、骨格筋、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃および精巣からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはすべての器官において検出不可能である。発現は、上記のように評価され得る。

本出願を通して、発現の文脈でＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球特異的が言及される場合、ＣＮＳおよび／または脳および／または視床下部および／または皮質および／または海馬および／または小脳および／または嗅球を構成する細胞型の細胞型特異的発現もそれぞれ想定される。

本発明の文脈において、肝臓特異的発現は、他の器官または組織と比較して、肝臓におけるＦＧＦ２１の優先的または優勢な（少なくとも１０％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、少なくとも２００％高い、またはそれ以上）発現を指す。他の器官または組織は、ＣＮＳ、脳、膵臓、脂肪組織、骨格筋、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃、精巣などであり得る。好ましくは、他の器官は心臓である。一実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、膵臓、脂肪組織、骨格筋および／または心臓では検出不可能である。いくつかの実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、膵臓、脂肪組織、骨格筋、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃および精巣からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはすべての器官において検出不可能である。

本出願を通して、発現の文脈で肝臓特異的が言及される場合、肝臓を構成する細胞型の細胞型特異的発現もそれぞれ想定される。

本発明の文脈において、筋特異的発現は、他の器官または組織と比較して、筋におけるＦＧＦ２１の優先的または優勢な（少なくとも１０％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、少なくとも２００％高い、またはそれ以上）発現を指す。他の器官または組織は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、脂肪組織、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃、精巣などであり得る。好ましくは、他の器官は、肝臓および／または心臓である。一実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、脂肪組織、および／または心臓では検出不可能である。いくつかの実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、脂肪組織、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃および精巣からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはすべての器官において検出不可能である。

本出願を通して、発現の文脈で筋特異的が言及される場合、筋を構成する細胞型の細胞型特異的発現もそれぞれ想定される。

本発明の文脈において、脂肪組織特異的発現は、他の器官または組織と比較して、脂肪組織におけるＦＧＦ２１の優先的または優勢な（少なくとも１０％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、少なくとも２００％高い、またはそれ以上）発現を指す。他の器官または組織は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、筋骨格、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃、精巣などであり得る。好ましくは、他の器官は、肝臓および／または心臓である。一実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、筋骨格、および／または心臓では検出不可能である。いくつかの実施形態では、発現は、ＣＮＳ、脳、肝臓、膵臓、筋骨格、心臓、腎臓、結腸、造血組織、肺、卵巣、脾臓、胃および精巣からなる群から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つまたはすべての器官において検出不可能である。発現は、上記のように評価され得る。

本出願を通して、発現の文脈で脂肪組織特異的が言及される場合、脂肪組織を構成する細胞型の細胞型特異的発現もそれぞれ想定される。

投与
本明細書で使用される場合、「ＣＳＦ内投与」は、脳を取り囲む髄膜のくも膜層と軟膜層との間のくも膜下腔内に位置するＣＳＦへの直接投与を意味する。ＣＳＦ内投与は、大槽内、脳室内または髄腔内投与を介して行うことができる。本明細書で使用される場合、「大槽内投与」は、小脳と延髄の背面との間に位置するくも膜下腔の開口部である大槽内への投与を意味する。本明細書で使用される場合、「脳室内投与」は、脳の両側脳室のいずれかへの投与を意味する。本明細書で使用される場合、「髄腔内投与」は、脊柱の髄腔内のＣＳＦ内への直接投与を含む。本明細書で使用される場合、「実質内投与」は、脳実質の任意の領域への直接局所投与を意味する。本明細書で使用される場合、「鼻腔内投与」は、鼻構造による投与を意味する。

筋肉内投与は、筋肉、好ましくは骨格筋への直接投与を意味する。脂肪組織内投与とは、脂肪組織内に直接投与することを意味する。

コドン最適化
本明細書で使用される「コドン最適化」は、既存のコーディング配列を修飾するため、またはコーディング配列を設計するため、例えば、コーディング配列から転写された転写ＲＮＡ分子の発現宿主細胞もしくは生物における翻訳を改善するため、またはコーディング配列の転写を改善するために用いられるプロセスを指す。コドン最適化には、限定されないが、発現宿主生物のコドン優先度に適合するようにコーディング配列のコドンを選択することを含むプロセスが含まれる。例えば、哺乳動物、好ましくはマウス、イヌまたはヒト発現宿主のコドン優先性に適合させる。コドン最適化はまた、ＲＮＡの安定性および／または翻訳に悪影響を及ぼす可能性がある要素を排除する（例えば終結配列、ＴＡＴＡボックス、スプライス部位、リボソーム進入部位、反復および／もしくはＧＣリッチ配列ならびにＲＮＡ二次構造または不安定性モチーフ）。いくつかの実施形態では、コドン最適化された配列は、コドン最適化されていない元の配列と比較して、遺伝子発現、転写、ＲＮＡ安定性および／または翻訳の少なくとも３％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれ以上の増加を示す。

記憶
記憶は、一般に、データまたは情報がエンコードされ、保存され、必要に応じて検索される脳の機能であると理解される。異なるタイプまたは記憶が説明されている。１つの可能な区別は、感覚記憶、短期記憶および長期記憶を含む。感覚記憶は、事柄が知覚された後１秒未満で感覚情報を保持する。短期（作業記憶としても知られている）記憶は、典型的にはリハーサルなしで、数秒から１分の期間にわたる想起を可能にする。反対に、長期記憶は、潜在的に無制限の期間（生涯全体まで）、はるかに大量の情報を保存することができる。

別の区別は、手続き型記憶（または黙示的記憶）および明示的記憶（または宣言型記憶）を含む。黙示的記憶は、情報の意識的な想起に基づくのではなく、黙示的学習、すなわち何かをどのようにするかを覚えておくことに基づく。明示的（または宣言型）記憶は、事実情報、過去の経験、および概念の意識的で意図的な想起である。

想起記憶と認識記憶とで区別することもできる。認識とは、よく知られているものとして事象または情報を「認識」する能力を指し、一方想起とは、記憶からの関連する詳細の検索を指す。

空間記憶は、自分の環境および空間的方向に関する情報の記録を担当する記憶の一形態である。

本文書およびその特許請求の範囲において、「含む」という動詞およびその活用形は、非限定的な意味で使用され、その語に続く項目が含まれるが、具体的に言及されていない項目を除外しないことを意味する。加えて、「～からなる」という動詞は、本明細書に記載の組成物が具体的に特定されたもの以外の追加の成分を含んでもよく、前記追加の成分が本発明の固有の特性を変化させないことを意味する「～から本質的になる」に置き換えられてもよい。加えて、「～からなる」という動詞は、本明細書に記載の方法が具体的に特定されたもの以外の追加の工程を含んでもよく、前記追加の工程が本発明の固有の特性を変化させないことを意味する「～から本質的になる」に置き換えられてもよい。

不定冠詞「ａ」または「ａｎ」による要素への言及は、文脈が１つかつ唯一の要素であることを明確に要求しない限り、要素の複数が存在する可能性を排除しない。したがって、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」は、通常、「少なくとも１つ」を意味する。

本明細書で使用される場合、「少なくとも」特定の値は、その特定の値以上を意味する。例えば、「少なくとも２」は、「２以上」、すなわち、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、．．．などと同じであると理解される。

さらに、明細書および特許請求の範囲における第１、第２、第３などの用語は、同様の要素を区別するために使用され、必ずしも連続的または時系列的な順序を説明するためのものではない。そのように使用される用語は、適切な状況下で交換可能であり、本明細書に記載される本発明の実施形態は、本明細書に記載または図示されている以外の順序で動作することができることを理解されたい。

「約」または「およそ」という用語は、数値に関連して使用される場合（例えば約１０）、好ましくは、その値が、その値を０．１％超えるかまたは下回る（１０の）所与の値であり得ることを意味する。

本明細書で使用される場合、「および／または」という用語は、記載された事例の１つまたは複数が、単独で、または記載された事例の少なくとも１つと、最大で記載された事例のすべてと組み合わせて生じ得ることを示す。

様々な実施形態が本明細書に記載される。本明細書で特定される各実施形態は、特に明記しない限り、一緒に組み合わせることができる。

本明細書で引用されるすべての特許出願、特許、および印刷された刊行物は、任意の定義、主題の放棄または否定を除いて、組み込まれた資料が本明細書の明示的な開示と矛盾する程度まで除いて、全体が参照により本明細書に組み込まれ、その場合、本開示の文言が支配する。

当業者は、本発明の実施に使用することができる、本明細書に記載されたものと類似または同等の多くの方法および材料を認識するであろう。実際、本発明は、記載された方法および材料に決して限定されない。

本発明は、以下の実施例によってさらに説明され、それらは本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

高齢マウスにおけるＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターのｉｍ投与後のＦＧＦ２１循環レベルの増加。（Ａ）ＦＧＦ２１の発現レベル。マウスコドン最適化ＦＧＦ２１コーディング配列（ｍｏＦＧＦ２１）の発現レベルを、屠殺時の脛骨筋、腓腹筋および四頭筋および肝臓におけるＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。（Ｂ）ＡＡＶ投与の６ヶ月後のＦＧＦ２１の循環レベル。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物５匹／群ＮＤ、検出されず。ＡＵ、任意単位。対照（２１月齢）のＡＡＶ１無効治療マウスに対して＊＊＊ｐ＜０．００１。 高齢マウスにおけるＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターのｉｍ投与後の神経筋機能の改善。（Ａ）ロータロッド試験。ヒストグラムは、マウスが加速ロータロッド上に留まった時間を示す。ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで治療した高齢マウスは、協調およびバランスの改善を示した。（Ｂ）ハングワイヤ試験ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで治療した高齢マウスは、協調および筋機能の改善を示した。（Ｃ）オープンフィールド試験で最高速度を測定した。（Ｄ）握力。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物１２～１５匹／群Ｎ、ニュートン。ｇ、体重グラム。対照（３～５月齢）未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５および＊＊＊ｐ＜０．００１；対照（８～１０月齢）未治療マウスに対して＃＃ｐ＜０．０１および＃＃＃ｐ＜０．００１；対照（２２～２４月齢）ＡＡＶ１無効治療マウスに対して＄ｐ＜０．０５および＄＄＄ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した高齢マウスにおける認知機能の改善。新規物体認識試験を行って記憶を評価した。ヒストグラムは、識別指数を示す。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物１１～１３匹／群。対照（２月齢）未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５；対照（２７月齢）ＡＡＶ１無効治療マウスに対して＄ｐ＜０．０５。 ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターによる治療後の肥満症の長期反転。（Ａ～Ｂ）ＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターでｅＷＡＴ内治療した（Ａ）、またはＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した（Ｂ）動物における体重の展開。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６～１０匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。 ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターによる治療後のＦＧＦ２１循環レベルの増加。（Ａ～Ｂ）ＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターでｅＷＡＴ内治療した（Ａ）、またはＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した（Ｂ）動物における、ＡＡＶ投与の６ヶ月後のＦＧＦ２１の循環レベル。（Ｃ～Ｄ）（Ａ～Ｂ）と同じコホートでの脂肪組織、骨格筋および肝臓におけるＦＧＦ２１の発現レベル。マウスコドン最適化ＦＧＦ２１コーディング配列（ｍｏＦＧＦ２１）の発現レベルを、屠殺時にＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６～１０匹／群ＮＤ、検出されず。ＨＦＤ、高脂肪食。ＡＵ、任意単位。ｅＷＡＴ、精巣上体白色脂肪組織。ｉＷＡＴ、鼠径部白色脂肪組織。ｉＢＡＴ肩甲骨間褐色脂肪組織。対照固形飼料給餌マウスに対して＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１；対照ＨＦＤ給餌マウスに対して＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１および＃＃＃ｐ＜０．００１；５×１０^１０ｖｇのＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴでｅＷＡＴ内治療した、または７×１０^１０ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療したＨＦＤ給餌マウスに対して＄＄ｐ＜０．０１および＄＄＄ｐ＜０．００１；１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療したＨＦＤ給餌マウスに対して＆＆＆ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターでｅＷＡＴ内治療したＨＦＤ給餌雄マウスにおける歩行活動の増加。歩行活動をオープンフィールド試験によって評価した。（Ａ）移動した距離。（Ｂ）最高速度。（Ｃ）移動時間。（Ｄ）休止時間。（Ｅ）交差した線。（Ｆ）敏速な時間。（Ｇ）ゆっくりした時間。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物５～１５匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。対照（２月齢）固形飼料給餌マウスに対して＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１；対照（１１月齢）固形飼料給餌マウスに対して＃ｐ＜０．０５；対照（１１月齢）ＨＦＤ給餌マウスに対して＄ｐ＜０．０５、＄＄ｐ＜０．０１および＄＄＄ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ内治療したＨＦＤ給餌雄マウスにおける歩行活動の増加。歩行活動をオープンフィールド試験によって評価した。（Ａ）移動した距離。（Ｂ）最高速度。（Ｃ）移動時間。（Ｄ）休止時間。（Ｅ）交差した線。（Ｆ）敏速な時間。（Ｇ）ゆっくりした時間。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物５～１５匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。対照（２月齢）固形飼料給餌マウスに対して＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１；対照（１１月齢）固形飼料給餌マウスに対して＃ｐ＜０．０５および＃＃＃＃ｐ＜０．００１；対照（１１月齢）ＨＦＤ給餌マウスに対して＄ｐ＜０．０５、＄＄ｐ＜０．０１および＄＄＄ｐ＜０．００１。７ｘ１０^１０ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療したＨＦＤ給餌マウスに対して＆ｐ＜０．０５および＆＆ｐ＜０．０１。 ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターで治療したＨＦＤ給餌雄マウスにおける不安の減少。不安をオープンフィールド試験によって評価した。（Ａ～Ｂ）ヒストグラムは、ＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターでｅＷＡＴ内治療した（Ａ）、またはＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した（Ｂ）動物が中心で過ごした時間を示す。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物５～１５匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。対照（２月齢）固形飼料給餌マウスに対して＊ｐ＜０．０５。 ＨＦＤ給餌雌マウスにおけるＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターのｉｍ投与による肥満症の長期逆転。（Ａ）体重の展開。（Ｂ）ＡＡＶ投与の３ヶ月後のＦＧＦ２１の循環レベル。（Ｃ）ＦＧＦ２１の発現レベル。マウスコドン最適化ＦＧＦ２１コーディング配列（ｍｏＦＧＦ２１）の発現レベルを、屠殺時の脛骨筋および肝臓におけるＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物９～１０匹／群ＮＤ、検出されず。ＨＦＤ、高脂肪食。ＡＵ、任意単位。対照固形飼料給餌マウスに対して＊＊＊ｐ＜０．００１；対照ＨＦＤ給餌マウスに対して＃＃＃ｐ＜０．００１；１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療したＨＦＤ給餌マウスに対して＄＄＄ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療したＨＦＤ給餌雌マウスにおける歩行活動の増加。歩行活動をオープンフィールド試験によって評価した。（Ａ）移動した距離。（Ｂ）最高速度。（Ｃ）移動時間。（Ｄ）休止時間。（Ｅ）交差した線。（Ｆ）敏速な時間。（Ｇ）ゆっくりした時間。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６～９匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。対照固形飼料給餌マウスに対して＊ｐ＜０．０５および＊＊ｐ＜０．０１。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療したＨＦＤ給餌雌マウスにおける不安の減少。不安をオープンフィールド試験によって評価した。ヒストグラムは、動物が中心で過ごした時間を示す。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６～９匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療したＨＦＤ給餌雌マウスにおける神経筋機能の改善。（Ａ）ロータロッド試験。ヒストグラムは、マウスが加速ロータロッド上に留まった時間を示す。ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで治療したマウスは、協調およびバランスの改善を示した。（Ｂ）握力。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６～９匹／群Ｎ、ニュートン。ｇ、体重のグラム。ＨＦＤ、高脂肪食。対照固形飼料給餌マウスに対して＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１；対照ＨＦＤ給餌マウスに対して＃＃ｐ＜０．０１；１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療したＨＦＤ給餌マウスに対して＄ｐ＜０．０５。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療したＨＦＤ給餌雌マウスにおける認知機能の改善。新規物体認識試験（Ａ）、およびＹ字迷路試験（Ｂ）によって記憶を評価した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６～９匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。対照ＨＦＤ給餌マウスに対して＃＃ｐ＜０．０１。 ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１のＣＳＦ内投与後のｄｂ／ｄｂマウスにおける歩行活動の増加。９週齢の未治療ｄｂ／＋（痩せ型）、未治療ｄｂ／ｄｂおよびＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１治療ｄｂ／ｄｂマウスの（Ａ）移動距離、（Ｂ）最高速度および（Ｃ）敏速な時間をオープンフィールド試験において測定した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６匹／群。ｄｂ／＋マウスに対して＊ｐ＜０．０５＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、およびｄｂ／ｄｂ未治療マウスに対して^＃＃ｐ＜０．０１ ^＃＃＃ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１でＣＳＦ内治療したｄｂ／ｄｂマウスにおける不安様行動の改善。オープンフィールド試験において、９週齢の未治療ｄｂ／＋（痩せ型）、未治療ｄｂ／ｄｂおよびＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１治療ｄｂ／ｄｂマウスの（Ａ）辺縁での距離および（Ｂ）中心での距離を測定した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６匹／群。ｄｂ／＋マウスに対して＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１でＣＳＦ内治療したｄｂ／ｄｂマウスの探索能力の増加。Ｙ字迷路試験において、１０週齢の未治療ｄｂ／＋（痩せ型）、未治療ｄｂ／ｄｂおよびＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１治療ｄｂ／ｄｂマウスの（Ａ）進入の数、および（Ｂ）１回目の潜伏時間を測定した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６匹／群。ｄｂ／＋マウスに対して＊ｐ＜０．０５。 ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターによるＣＳＦ内遺伝子治療後のｄｂ／ｄｂマウスにおける短期記憶の改善。１１週齢の未治療ｄｂ／＋（痩せ型）、未治療ｄｂ／ｄｂおよびＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１治療ｄｂ／ｄｂマウスにおける新規物体認識試験中に識別指数を測定し、実施例の一般手順で説明されているように計算した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６匹／群。ｄｂ／＋マウスに対して＊ｐ＜０．０５。 ＡＡＶ１－ＦＧＦ２１治療ｄｂ／ｄｂマウスの脳におけるＦＧＦ２１の発現。マウスコドン最適化ＦＧＦ２１（ｍｏＦｇｆ２１）コーディング配列の発現レベルを、ｄｂ／ｄｂマウスの視床下部、皮質、海馬、小脳および嗅球においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターの５×１０^１０ｖｇ／マウスのＣＳＦ内投与の１６週間後に分析を行った。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物７匹／群ＮＤ、検出されず。 ＡＡＶ９－ＦＧＦ２１ベクターで治療したｄｂ／ｄｂマウスにおける脳炎症の減少。アストロサイトマーカー（ＧｆａｐおよびＳ１００ｂ）、ミクログリアマーカー（Ａｉｆ１）および炎症性分子（Ｎｆｋｂ、Ｉｌ１ｂおよびＩｌ６）の発現レベルを、ｄｂ／ｄｂマウスの視床下部においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。ＡＡＶ９－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターの５×１０^１０ｖｇ／マウスのＣＳＦ内投与の１２週間後に分析を行った。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物９匹／群。未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５。Ｇｆａｐ、グリア原線維酸性タンパク質；Ｓ１００ｂ、カルシウム結合タンパク質Ｂ；Ａｉｆ１、同種移植炎症因子１；Ｎｆｋｂ、核因子カッパＢ；Ｉｌ１ｂ、インターロイキン１ベータ；Ｉｌ６、インターロイキン６。 ＡＡＶ９－ＦＧＦ２１で治療したＳＡＭＰ８マウスにおける脳炎症の減少。アストロサイトマーカー（ＧｆａｐおよびＳ１００ｂ）、ミクログリアマーカー（Ａｉｆ１）および炎症性分子（Ｎｆｋｂ、Ｉｌ１ｂおよびＩｌ６）の発現レベルを、ＳＡＭＰ８マウスの視床下部においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。ＡＡＶ９－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターの５×１０^１０ｖｇ／マウスのＣＳＦ内投与の１４週間後に分析を行った。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物９匹／群。未治療マウスに対して＊＊ｐ＜０．０１。Ｇｆａｐ、グリア原線維酸性タンパク質；Ｓ１００ｂ、カルシウム結合タンパク質Ｂ；Ａｉｆ１、同種移植炎症因子１；Ｎｆｋｂ、核因子カッパＢ；Ｉｌ１ｂ、インターロイキン１ベータ；Ｉｌ６、インターロイキン６。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療したＳＡＭＰ８マウスにおける神経筋機能および認知の改善（Ａ）ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療したＳＡＭＰ８マウスならびに未治療ＳＡＭＰ８マウスおよびＳＡＭＲ１マウスにおける脛骨筋、腓腹筋および四頭筋および肝臓におけるｍｏＦＧＦ２１の発現レベル。ｍｏＦＧＦ２１の発現レベルを、屠殺時にＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。（Ｂ）（Ａ）と同じコホートにおけるＦＧＦ２１の循環レベル。（Ｃ～Ｄ）ＡＡＶ投与の２４週間後にロータロッド試験を実施した。（Ｃ）のヒストグラムは、マウスが加速ロータロッド上に留まった時間を示す。（Ｄ）運動学習能力。（Ｅ～Ｆ）新規物体認識試験を実施して、７月齢マウスの短期記憶（Ｅ）および長期記憶（Ｆ）を評価した。ヒストグラムは、識別指数を示す。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物７～１２匹／群ＮＤ、検出されず。ＡＵ、任意単位。ＳＡＭＲ１に対して＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１；未治療ＳＡＭＰ８に対して＃＃＃ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療したＳＡＭＰ８マウスにおける脳炎症の減少。炎症性分子Ｃｃｌ１９（Ａ）およびＩｌ６ａ（Ｂ）の発現レベルを、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療したＳＡＭＰ８マウスならびに未治療のＳＡＭＰ８マウスおよびＳＡＭＲ１マウスの皮質および海馬においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。４２週齢までの屠殺時に分析を行った。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物４～５匹／群Ｃｃｌ１９、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９；Ｉｌ６、インターロイキン６。未治療ＳＡＭＰ８マウスに対して＊ｐ＜０．０５。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した３ｘＴｇ－ＡＤマウスにおける記憶の改善。（Ａ）ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した３ｘＴｇ－ＡＤマウスならびに未治療３ｘＴｇ－ＡＤマウスおよびＢ６１２９ＳＦ２／ＪマウスにおけるＦＧＦ２１の循環レベル。（Ｂ）（Ａ）と同じコホートの脛骨筋、腓腹筋および四頭筋および肝臓におけるｍｏＦＧＦ２１の発現レベル。ｍｏＦＧＦ２１の発現レベルを、屠殺時にＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。（Ｃ～Ｄ）新規物体認識試験を実施して、８月齢マウスの短期記憶（Ｃ）および長期記憶（Ｄ）を評価した。ヒストグラムは、識別指数を示す。（Ｅ）皮質における不溶性アミロイドβ_４０（Ａβ_４０）レベル。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物３～１１匹／群ＮＤ、検出されず。ＡＵ、任意単位。Ｂ６１２９ＳＦ２／Ｊに対して＊＊＊ｐ＜０．００１；未治療３ｘＴｇ－ＡＤに対して＃＃＃ｐ＜０．００１。 異なる用量のＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した高齢マウスにおける神経筋機能および認知の改善（Ａ）１×１０^１１または３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した高齢マウスにおけるＦＧＦ２１の循環レベル。分析をＡＡＶの２ヶ月後に行った。（Ｂ～Ｃ）ＡＡＶ投与の２ヶ月後にロータロッド試験を実施した。（Ｂ）のヒストグラムは、マウスが加速ロータロッド上に留まった平均時間を示す。（Ｃ）運動学習能力。（Ｄ～Ｅ）新規物体認識試験を実施して、２６月齢マウスの短期記憶（Ｄ）および長期記憶（Ｅ）を評価した。ヒストグラムは、識別指数を示す。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６～１２匹／群ＮＤ、検出されず。ＡＵ、任意単位。対照に対して＊ｐ＜０．０５および＊＊＊ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療した高齢動物の脳におけるＯＸＰＨＯＳマーカーの発現。いくつかのＯＸＰＨＯＳマーカーの発現レベルを、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した２５月齢マウスの皮質および海馬においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物４～６匹／群ＡＵ、任意単位；Ｐｐａｒｇｃ１ａ、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーター１アルファ；Ｐｐａｒｇｃ１ｂ、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーター１ベータ；Ａｔｐ５ｆ１ａ、ＡＴＰシンターゼＦ１サブユニットアルファ；ｍｔ－ｃｏ１、シトクロムｃオキシダーゼ１；Ｃｏｘ６、シトクロムｃオキシダーゼサブユニット６；Ｃｏｘ５ａ、シトクロムｃオキシダーゼサブユニット５ａ。対照（２５月齢）未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療した高齢動物の脳における抗酸化マーカーの発現。種々の抗酸化マーカーの発現レベルを、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した２５月齢マウスの皮質および海馬においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物４～６匹／群ＡＵ、任意単位；Ｎｒｆ２、ＮＦ－Ｅ２関連因子２；Ｓｏｄ１、スーパーオキシドジスムターゼ１；Ｃａｔ、カタラーゼ。対照（２５月齢）未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１による治療は、脳における解糖の加齢性障害を打ち消した。いくつかの解糖関連遺伝子の発現レベルを、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した２５月齢マウスの皮質および海馬においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物４～６匹／群ＡＵ、任意単位；ＧＡＰＤＨ、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ；Ｈｋ１、ヘキソキナーゼ１；Ｐｆｋｐ、ホスホフルクトキナーゼの血小板アイソフォーム；Ｇｐｄ１、グリセロール－３－リン酸デヒドロゲナーゼ１；Ｇｐｄ２、グリセロール－３－リン酸デヒドロゲナーゼ２；Ｐｋｍ、ピルビン酸キナーゼＭ。対照（２５月齢）未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１および＊＊＊ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１による治療は、重要なシナプスタンパク質の発現を増加させた。重要なシナプスタンパク質の発現レベルを、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した２５月齢マウスの皮質および海馬においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物４～６匹／群ＡＵ、任意単位；Ｓｙｐ、シナプトフィジン；Ｇｒｉａ１およびＧｒｉａ２、α－アミノ－３－ヒドロキシ－５－メチル－４－イソオキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）型イオンチャネル型グルタミン酸受容体のＧｌｕＲ１およびＧｌｕＲ２サブユニット；Ｇｒｉｎ１、Ｇｒｉｎ２ａおよびＧｒｉｎ２ｂ、Ｎ－メチル－ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）型イオンチャネル型グルタミン酸受容体のＮＲ１、Ｎ２ＡおよびＮ２Ｂサブユニット；Ａｔｆ４、活性化転写因子４。対照（２５月齢）未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５および＊＊＊ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１による治療は、自己貪食マーカーおよび抗ＥＲストレスマーカーの発現を増加させる。自己貪食マーカーｐ６２（Ｓｑｓｔｍ１によってエンコードされる）およびＡｔｇ５、ならびにシャペロンＢｉＰの発現レベルを、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した２５月齢マウスの皮質においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物４～６匹／群ＡＵ、任意単位；Ａｔｇ５、自己貪食関連５。対照（２５月齢）未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５。 ＡＡＶ１－ＦＧＦ２１による治療は、脳におけるコレステロール恒常性を改善する。

コレステロール２４ヒドロキシラーゼ（Ｃｙｐ４６ａ１によってエンコードされる）の発現レベルを、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した２５月齢マウスの皮質においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物４～６匹／群ＡＵ、任意単位。対照（２５月齢）未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５。
ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターによるＣＳＦ内治療後の肥満症の長期反転。（Ａ）異なる用量のＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターでＣＳＦ内治療した動物における体重の展開。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物１０匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。（Ｂ）マウスコドン最適化ＦＧＦ２１（ｍｏＦｇｆ２１）コーディング配列の発現レベルを、固形飼料給餌およびＨＦＤ給餌マウスの視床下部、皮質、海馬においてＲＴｑＰＣＲによって測定し、Ｒｐｌｐ０値で正規化した。ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターの５×１０^９および１ｘ１０^１０ｖｇ／マウスのＣＳＦ内投与の１１週間後に分析を行った。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物８匹／群ＮＤ、検出されず。 ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでＣＳＦ内治療したＨＦＤ給餌雄マウスにおける歩行活動の増加。歩行活動をオープンフィールド試験によって評価した。（Ａ）移動した距離。（Ｂ）最高速度。（Ｃ）移動時間。（Ｄ）休止時間。（Ｅ）敏速な時間。（Ｆ）ゆっくりした時間。（Ｇ）交差した線。（Ｈ）中心への進入。（Ｉ）辺縁への進入。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝少なくとも動物１０匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。対照固形飼料給餌マウスに対して＊ｐ＜０．０５および＊＊ｐ＜０．０１；対照ＨＦＤ給餌マウスに対して＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１および＃＃＃ｐ＜０．００１。 ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターで治療したＨＦＤ給餌マウスにおける不安の減少。不安は、オープンフィールド試験および高架式十字迷路試験によって評価した。（Ａ）中心での時間、（Ｂ）辺縁での時間、（Ｃ）中心までの潜伏時間、（Ｄ）中心での距離および（Ｅ）辺縁での距離を、すべてのマウス群においてオープンフィールド試験で測定した。（Ｆ）ヒストグラムは、動物が高架式十字迷路の開放アームまたは閉鎖アームで過ごした時間の割合を示す。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝少なくとも動物１０匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。対照固形飼料給餌マウスに対して＊ｐ＜０．０５および＊＊ｐ＜０．０１；対照ＨＦＤ給餌マウスに対して＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１および＃＃＃ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでＣＳＦ内治療したＨＦＤ給餌マウスにおける認知機能の改善。新規物体認識試験を行って、短期記憶および長期記憶の両方を評価した。ヒストグラムは、（Ａ）短期試験および（Ｂ）長期試験における識別指数を示す。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝少なくとも動物１０匹／群ＨＦＤ、高脂肪食。対照固形飼料給餌マウスに対して＊ｐ＜０．０５。 ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ ＨＦＤ給餌マウスにおける学習の改善。バーンズ迷路試験を行って、マウスの学習能力および記憶を研究した。（Ａ）グラフは、種々の試験中にバーンズ迷路の穴に入る時間を示す。（Ｂ）穴に入るための試験依存的改善から学習勾配を計算した。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝少なくとも動物１０匹／群 ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでＣＳＦ内治療した高齢マウスにおける神経筋機能および認知の改善（Ａ）のヒストグラムは、マウスが加速ロータロッド上に留まった平均時間を示す。（Ｂ）グラフは、ロータロッド脱落までの時間の試験依存的な増強を示し、（Ｃ）ヒストグラムは、この試験依存的な改善の勾配を示す。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝少なくとも動物７匹／群。対照未治療マウスに対して＊ｐ＜０．０５＊＊ｐ＜０．０１、および＊＊＊ｐ＜０．００１。 ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでＣＳＦ内治療した高齢マウスにおける認知機能の改善。新規物体認識試験を行って、短期記憶および長期記憶の両方を評価した。ヒストグラムは、（Ａ）短期試験および（Ｂ）長期試験における識別指数を示す。結果を平均±ＳＥＭとして表す。ｎ＝動物６匹／群。対照未治療マウスに対して＊＊＊ｐ＜０．００１。

［実施例］
実施例１では、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１の筋肉内投与は、強力な過剰発現をもたらし、ＦＧＦ２１の循環レベルを増加させ、以下の利点を有する。

・協調、バランス、神経筋機能、筋力および歩行活動の改善
・記憶および学習の増強
・ミトコンドリア機能の改善および酸化ストレスの削減による神経変性の減少
実施例２では、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１の筋肉内投与およびＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴのｅＷＡＴ内投与は、強力な過剰発現をもたらし、ＦＧＦ２１の循環レベルを増加させ、以下の利点を有する。

・歩行活動および神経筋機能の改善
・不安様行動の減少
実施例３では、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１の筋肉内投与は、強力な過剰発現をもたらし、ＦＧＦ２１の循環レベルを増加させ、以下の利点を有する。

・協調、バランス、神経筋機能、筋力および歩行活動の改善
・不安様行動の減少
・認知機能、記憶、学習および探索能力の改善
実施例４では、ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１のＣＳＦ内投与は、強力な過剰発現をもたらし、以下の利点を有する。

・歩行活動の改善
・不安様行動の減少
・認知機能、記憶および探索能力の改善
実施例５では、ＡＡＶ９－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴのＣＳＦ内投与は、強力な過剰発現をもたらし、以下の利点を有する。

・抑うつの改善を示す神経炎症の減少
実施例８および９では、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１の筋肉内投与は、ＳＡＭＰ８マウス（神経炎症などの加齢性脳病変を伴う、広く使用されている老化マウスモデル）および３ｘＴｇ－ＡＤマウス（アルツハイマー病モデル）において肯定的な治療効果をもたらすことが示されている。

実施例１０では、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１の筋肉内投与は、協調、バランスおよび運動学習、ならびに短期記憶および長期記憶の改善をもたらすことが示されている。

実施例１１では、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１の筋肉内投与が、高齢マウスの皮質および海馬におけるミトコンドリア機能の改善、グルコース代謝および自己消耗の増加、酸化およびＥＲストレスの削減、ならびにコレステロール恒常性およびシナプス機能の改善によって、神経変性および認知低下を予防することが示された。

実施例１２および１３では、ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１のＣＳＦ内投与は、高齢マウスにおいて、糖尿病および肥満症に関連する神経筋および認知の低下を改善し、神経筋の機能を改善し、学習および短期記憶および長期記憶を強化した。

実施例への一般的な手順
対象特徴
雄ＳＡＭＰ８／ＴａＨｓｄ（ＳＡＭＰ８）、雄および雌Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウス、雄ＢＫＳ．Ｃｇ－＋Ｌｅｐｒ^ｄｂ／＋Ｌｅｐｒ^ｄｂ／ＯｌａＨｓｄ（ｄｂ／ｄｂ）ａｎｄ ｍａｌｅ ＢＫＳ．Ｃｇ－ｍ＋／＋Ｌｅｐｒ^ｄｂ／ＯｌａＨｓｄ（ｄｂ／＋、痩せ型）マウス、雄ＳＡＭＲ１／ＴａＨｓｄ（ＳＡＭＲ１）マウス、雄３ｘＴｇ－ＡＤ（Ｂ６；１２９Ｔｇ（ＡＰＰＳｗｅ，ｔａｕＰ３０１Ｌ）１Ｌｆａ Ｐｓｅｎ１^{ｔｍ１Ｍｐｍ}）および雄Ｂ６１２９ＳＦ２／Ｊを使用した。マウスに標準食（２０１８Ｓ Ｔｅｋｌａｄ Ｇｌｏｂａｌ Ｄｉｅｔｓ（登録商標）、Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｓ．，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳ）または高脂肪飼食（ＴＤ．８８１３７ Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳ）を自由に与え、１２時間の明暗サイクル（８：００ ａ．ｍ．点灯）および安定温度（２２℃±２）下に保った。記述時、マウスは１６時間絶食された。組織試料採取のために、マウスを吸入麻酔イソフルラン（ＩｓｏＦｌｏ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ、ＵＳ）によって麻酔し、断頭した。目的の組織を摘出し、分析まで－８０℃またはホルマリンで維持した。すべての実験手順は、バルセロナ自治大学のＥｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎによって承認された。

組換えＡＡＶベクター
血清型１または８または９の一本鎖ＡＡＶベクターを、標準的な方法（Ａｙｕｓｏ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．，２０１０．Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１０（６）：４２３－３６）に従ってＨＥＫ２９３細胞の３回の形質移入によって作製した。１０本のローラーボトル（８５０ｃｍ^２、フラット；Ｃｏｒｎｉｎｇ（商標）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．、Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳ）において、１０％ＦＢＳのＤＭＥＭ中で８０％コンフルエンスまで細胞を培養し、ＡＡＶ２ ＩＴＲに隣接する発現カセットを有するプラスミド、ＡＡＶ２ ｒｅｐ遺伝子および血清型１または８のｃａｐ遺伝子のＡＡＶを有するヘルパープラスミド、ならびにアデノウイルスヘルパー機能を有するプラスミドをリン酸カルシウム法によって同時形質移入した。使用した導入遺伝子は、マウスコドン最適化ＦＧＦ２１コーディング配列であり、それは、１）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサー／ニワトリベータアクチン（ＣＡＧ）プロモーター；２）発現カセットの３’非翻訳領域にクローニングされた、ｍｉＲＴ１２２ａ配列（５’ＣＡＡＡＣＡＣＣＡＴＴＧＴＣＡＣＡＣＡＣＴＣＣＡ３’）（配列番号１２）の４つのタンデム反復配列およびｍｉＲＴ１配列（５’ＴＴＡＣＡＴＡＣＴＴＣＴＴＴＡＣＡＡＴＴＣＣＡ３’）（配列番号１３）の４つのタンデム反復配列が付加されたサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサー／ニワトリベータアクチン（ＣＡＧ）プロモーター；または３）ＣＭＶプロモーターによって駆動される。ＣＭＶプロモーターを有する非コーディングプラスミドを使用して、無効ベクターを作製した。ＡＡＶを、ポリエチレングリコール沈殿工程および２つの連続する塩化セシウム（ＣｓＣｌ）勾配に基づく最適化された方法で精製した。この第二世代のＣｓＣｌベースのプロトコルは、空のＡＡＶキャプシドおよびＤＮＡおよびタンパク質不純物を劇的に減少させた（Ａｙｕｓｏ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．，２０１０．Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１０（６）：４２３－３６）。精製したＡＡＶベクターをＰＢＳに対して透析し、濾過し、－８０℃で保存した。ウイルスゲノムの力価は、標準曲線として線形化プラスミドＤＮＡを使用して、ＡＡＶ２参照標準物質について記載されたプロトコルに従って定量ＰＣＲによって決定した（Ｌｏｃｋ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１０；２１：１２７３－１２８５）。ベクターは、当技術分野で周知の分子生物学技術に従って構築した。

ＡＡＶベクターのインビボｅＷＡＴ内投与
ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射でマウスを麻酔した。精巣上体白色脂肪組織を露出させるために開腹切開した。ＡＡＶベクターを０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８（Ｇｉｂｃｏ）を含むＰＢＳに再懸濁し、精巣上体脂肪パッドに直接注射した。各精巣上体脂肪パッドに５０μＬのＡＡＶ溶液を２回注射した（一方は精巣に近く、他方は脂肪パッドの中央において）。腹部を滅菌生理食塩水ですすぎ、２層アプローチで閉じた。

ＡＡＶベクターの筋肉内投与
ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射でマウスを麻酔した。後肢を剃毛し、総体積１８０μｌのベクターを、各後肢の四頭筋、腓腹筋、および前脛骨筋（ｔｉｂｉａｌｉｓ ｃｒａｎｅａｌｉｓ）に分布する６つの注射部位に分けて筋肉内注射によって投与した。

ＡＡＶベクターのインビボＣＳＦ内投与
ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射でマウスを麻酔し、耳の後ろからおおよそ肩甲骨の間までの後頭部の皮膚を剃毛し、エタノールですすいだ。マウスを腹臥位で保持し、頭部をわずかに下方に傾けた。２ｍｍの吻側尾側切開を行い、ハミルトンシリンジを４５°～５５°の角度で大槽内に、後頭部とＣ１椎骨との間に導入し、５μｌのベクター希釈物を投与した。ＣＮＳがベクター送達のための主な標的コンパートメントであることを考慮して、マウスに体重に関係なく同じ数のベクターゲノムをマウス毎に投与した（５×１０^９、１×１０^１０および５×１０^１０ｖｇ／マウス）。

ＲＮＡ分析
全ＲＮＡを脂肪デポまたは骨格筋から、それぞれＱＩＡｚｏｌ Ｌｙｓｉｓ 試薬（Ｑｉａｇｅｎ ＮＶ，Ｖｅｎｌｏ，ＮＬ）またはＴｒｉｐｕｒｅ単離試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、ＵＳ）およびＲＮｅａｓｙ Ｌｉｐｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｍｉｎｉｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ ＮＶ，Ｖｅｎｌｏ，ＮＬ）を使用することによって得た。残留ウイルスゲノムを除去するために、全ＲＮＡをＤＮＡｓｅＩ（Ｑｉａｇｅｎ ＮＶ，Ｖｅｎｌｏ，ＮＬ）で処理した。ＲＴ－ＰＣＲのために、１μｇのＲＮＡ試料を、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｒ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（０４３７９０１２００１，Ｒｏｃｈｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を使用して逆転写した。リアルタイム定量ＰＣＲを、ＥＸＰＲＥＳＳ ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ ｑＰＣＲ ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標）、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｓｌｂａｄ，ＣＡ，ＵＳ）を使用してＳｍａｒｔＣｙｃｌｅｒＩＩ（商標）（Ｃｅｐｈｅｉｄ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＵＳＡ）で行った。データをＲｐｌｐ０値で正規化し、前述のように分析した（Ｐｆａｆｆｌ，Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００１；２９（９）：ｅ４５）。

全ＲＮＡを、視床下部、皮質、海馬、小脳および嗅球から、Ｔｒｉｐｕｒｅ単離試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ，ＵＳ）、および海馬試料用のＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ ＫｉｔまたはＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ ＮＶ，Ｖｅｎｌｏ，ＮＬ）を使用して得た。残留ウイルスゲノムを除去するために、全ＲＮＡをＤＮＡｓｅＩ（Ｑｉａｇｅｎ ＮＶ，Ｖｅｎｌｏ，ＮＬ）で処理した。ＲＴ－ＰＣＲ分析のために、１μｇのＲＮＡ試料を、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｒ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（０４３７９０１２００１，Ｒｏｃｈｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を使用して逆転写した。リアルタイム定量ＰＣＲを、ＴＢ Ｇｒｅｅｎ Ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ ＴａｑＩＩ（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ Ｅｕｒｏｐｅ、Ｆｒａｎｃｅ）を使用して、ＳｍａｒｔＣｙｃｌｅｒＩＩ（商標）（Ｃｅｐｈｅｉｄ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＵＳＡ）で行った。データをＲｐｌｐ０値で正規化し、前述のように分析した（Ｐｆａｆｆｌ，Ｍ．、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００１；２９（９）：ｅ４５）。

使用したプライマーの概要を以下に示す：
ｍｏＦｇｆ２１－Ｆｗ：５’－ＣＣＴＡＡＣＣＡＧＧＡＣＧＣＣＡＣＡＡＧ－３’（配列番号４７）
ｍｏＦｇｆ２１－Ｒｖ：５’－ＧＴＴＣＣＡＣＣＡＴＧＣＴＣＡＧＡＧＧＧ－３’（配列番号４８）
Ｇｆａｐ－Ｆｗ：５’－ＡＣＡＧＡＣＴＴＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＣＣＡＧ－３’（配列番号４９）
Ｇｆａｐ－Ｒｖ：５’－ＣＣＴＴＣＴＧＡＣＡＣＧＧＡＴＴＴＧＧＴ－３’（配列番号５０）
Ｓ１００ｂ－Ｆｗ：５’－ＡＡＣＡＡＣＧＡＧＣＴＣＴＣＴＣＡＣＴＴＣＣ－３’（配列番号５１）
Ｓ１００ｂ－Ｒｖ：５’－ＣＧＴＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＴＴＧＴＣＣＡ－３’（配列番号５２）
Ａｉｆ１－Ｆｗ：５’－ＴＧＡＧＣＣＡＡＡＧＣＡＧＧＧＡＴＴＴＧ－３’（配列番号５３）
Ａｉｆ１－Ｒｖ：５’－ＴＣＡＡＧＴＴＴＧＧＡＣＧＧＣＡＧＡＴＣ－３’（配列番号５４）
Ｎｆｋｂ－Ｆｗ：５’－ＧＡＣＣＡＣＴＧＣＴＣＡＧＧＴＣＣＡＣＴ－３’（配列番号５５）
Ｎｆｋｂ－Ｒｖ：５’－ＴＧＴＣＡＣＴＡＴＣＣＣＧＧＡＧＴＴＣＡ－３’（配列番号５６）
Ｉｌ１ｂ－Ｆｗ：５’－ＡＴＧＡＡＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＣＡＡＡＣ－３’（配列番号５７）
Ｉｌ１ｂ－Ｒｖ：５’－ＡＴＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＧＡＧＡＴＴＴＧ－３’（配列番号５８）
Ｉｌ６－Ｆｗ：５’－ＴＣＧＣＴＣＡＧＧＧＴＣＡＣＡＡＧＡＡＡ－３’（配列番号５９）
Ｉｌ６－Ｒｖ：５’－ＣＡＴＣＡＧＡＧＧＣＡＡＧＧＡＧＧＡＡＡＡＣ－３’（配列番号６０）
Ｒｐｌｐ０－Ｆｗ：５’－ＡＣＴＧＧＴＣＴＡＧＧＡＣＣＣＧＡＧＡＡ－３’（配列番号６１）
Ｒｐｌｐ０－Ｆｗ：５’－ＴＣＣＣＡＣＣＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＴＣＴ－３’（配列番号６２）
Ｃｃｌ１９－Ｆｗ：５’－ＧＣＧＧＧＣＴＣＡＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＣ－３’（配列番号６９）
Ｃｃｌ１９－Ｒｖ：５’－ＴＧＧＧＡＡＧＧＴＣＣＡＧＡＧＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号７０）
Ｐｐａｒｇｃ１ａ－Ｆｗ：５’－ＴＴＴＧＧＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＡＣＴＴＴＴＣ－３’（配列番号７１）
Ｐｐａｒｇｃ１ａ－Ｒｖ：５’－ＴＴＧＴＧＴＴＧＧＧＣＧＡＧＡＧＡＡＡＧ－３’（配列番号７２）
Ｐｐａｒｇｃ１ｂ－Ｆｗ：５’－ＡＧＡＡＧＣＧＣＴＴＴＧＡＧＧＴＧＴＴＣ－３’（配列番号７３）
Ｐｐａｒｇｃ１ｂ－Ｒｖ：５’－ＧＧＴＧＡＴＡＡＡＡＣＣＧＴＧＣＴＴＣＴＧＧ－３’（配列番号７４）
Ａｔｐ５ｆ１ａ－Ｆｗ：５’－ＴＣＴＣＧＧＣＣＡＧＡＧＡＣＴＡＧＧＡＣ－３’（配列番号７５）
Ａｔｐ５ｆ１ａ－Ｒｖ：５’－ＧＣＡＣＴＴＧＣＡＣＣＡＡＴＧＡＡＴＴＴ－３’（配列番号７６）
Ｍｔ－ｃｏ１－Ｆｗ：５’－ＡＴＧＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＡＣＴＴＣＧ－３’（配列番号７７）
Ｍｔ－ｃｏ１－Ｒｖ：５’－ＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＴＴＴＧＧＴＣＣＡＧ－３’（配列番号７８）
Ｃｏｘ６－Ｆｗ：５’－ＡＧＴＣＣＣＴＣＴＧＴＣＣＣＧＴＧＴＣ－３’（配列番号７９）
Ｃｏｘ６－Ｒｖ：５’－ＡＴＡＴＧＣＴＧＡＧＧＴＣＣＣＣＣＴＴＴ－３’（配列番号８０）
Ｃｏｘ５ａ－Ｆｗ：５’－ＣＴＣＧＴＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＣＡＧＴ－３’（配列番号８１）
Ｃｏｘ５ａ－Ｒｖ：５’－ＴＡＧＣＡＧＣＧＡＡＴＧＧＡＡＣＡＧＡＣ－３’（配列番号８２）
Ｓｏｄ１－Ｆｗ：５’－ＴＡＣＡＣＡＡＧＧＣＴＧＴＡＣＣＡＧＴＧＣ－３’（配列番号８３）
Ｓｏｄ１－Ｒｖ：５’－ＴＴＴＣＣＡＧＣＡＧＴＣＡＣＡＴＴＧＣＣ－３’（配列番号８４）
Ｎｒｆ２－Ｆｗ：５’－ＡＧＴＣＧＣＴＴＧＣＣＣＴＧＧＡＴＡＴＣ－３’（配列番号８５）
Ｎｒｆ２－Ｒｖ：５’－ＴＧＣＣＡＡＡＣＴＴＧＣＴＣＣＡＴＧＴＣ－３’（配列番号８６）
Ｃａｔ－Ｆｗ：５’－ＴＧＴＧＣＡＴＧＣＡＴＧＡＣＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号８７）
Ｃａｔ－Ｒｖ：５’－ＧＣＡＣＴＧＴＴＧＡＡＧＣＧＴＴＴＣＡＣ－３’（配列番号８８）
Ｇａｐｄｈ－Ｆｗ：５’－ＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＡＣＣＣ－３’（配列番号８９）
Ｇａｐｄｈ－Ｒｖ：５’－ＣＡＡＣＣＴＧＧＴＣＣＴＣＡＣＴＧＴＡＧ－３’（配列番号９０）
ＨｋＩ－Ｆｗ：５’－ＡＣＧＧＴＣＡＡＡＡＴＧＣＴＧＣＣＴＴＣ－３’（配列番号９１）
ＨｋＩ－Ｒｖ：５’－ＡＡＴＣＧＴＴＣＣＴＣＣＧＡＧＡＴＣＣＡ－３’（配列番号９２）
Ｐｆｋｐ－Ｆｗ：５’－ＴＧＴＧＴＣＴＧＡＡＧＧＡＧＣＡＡＴＣＧ－３’（配列番号９３）
Ｐｆｋｐ－Ｒｖ：５’－ＧＧＣＣＡＡＡＡＴＣＣＴＧＴＣＡＡＡＴＧ－３’（配列番号９４）
Ｇｐｄ１－Ｆｗ：５’－ＡＧＡＣＡＣＣＣＡＡＣＴＴＴＣＧＣＡＴＣ－３’（配列番号９５）
Ｇｐｄ１－Ｒｖ：５’－ＴＡＴＴＣＴＴＣＡＡＧＧＣＣＣＣＡＣＡＧ－３’（配列番号９６）
Ｇｐｄ２－Ｆｗ：５’－ＴＴＧＣＣＴＴＧＧＧＡＧＡＡＧＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９７）
Ｇｐｄ２－Ｒｖ：５’－ＡＧＴＴＣＣＧＣＡＣＴＴＣＡＴＴＣＡＧＧ－３’（配列番号９８）
Ｐｋｍ－Ｆｗ：５’－ＧＣＴＴＴＧＣＡＴＣＴＧＡＴＣＣＣＡＴＴ－３’（配列番号９９）
Ｐｋｍ－Ｒｖ：５’－ＡＧＴＣＣＡＧＣＣＡＣＡＧＧＡＴＧＴＴＣ－３’（配列番号１００）
Ｓｙｐ－Ｆｗ：５’－ＡＣＡＴＧＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＧ－３’（配列番号１０１）
Ｓｙｐ－Ｒｖ：５’－ＡＡＧＡＴＧＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＡＣＴＧ－３’（配列番号１０２）
Ｇｒｉａ１－Ｆｗ：５’－ＣＣＡＴＧＣＴＧＧＴＴＧＣＣＴＴＡＡＴＣ－３’（配列番号１０３）
Ｇｒｉａ１－Ｒｖ：５’－ＣＣＧＴＡＴＧＧＣＴＴＣＡＴＴＧＡＴＧＧ－３’（配列番号１０４）
Ｇｒｉａ２－Ｆｗ：５’－ＡＡＧＧＧＣＧＴＧＴＡＡＴＣＣＴＴＧＡＣ－３’（配列番号１０５）
Ｇｒｉａ２－Ｒｖ：５’－ＴＴＴＣＡＧＣＡＧＧＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧ－３’（配列番号１０６）
Ｇｒｉｎ１－Ｆｗ：５’－ＴＧＡＣＴＡＣＣＣＧＡＡＴＧＴＣＣＡＴＣ－３’（配列番号１０７）
Ｇｒｉｎ１－Ｒｖ：５’－ＴＴＧＴＡＧＡＣＧＣＧＣＡＴＣＡＴＣＴＣ－３’（配列番号１０８）
Ｇｒｉｎ２ａ－Ｆｗ：５’－ＴＧＴＧＡＡＧＡＡＧＴＧＣＴＧＣＡＡＧＧ－３’（配列番号１０９）
Ｇｒｉｎ２ａ－Ｒｖ：５’－ＣＧＣＣＴＡＴＣＡＴＴＣＣＡＴＴＣＣＡＣ－３’（配列番号１１０）
Ｇｒｉｎ２ｂ－Ｆｗ：５’－ＴＴＧＧＴＧＡＧＧＴＧＧＴＣＡＴＧＡＡＧ－３’（配列番号１１１）
Ｇｒｉｎ２ｂ－Ｒｖ：５’－ＴＧＣＧＴＧＡＴＡＣＣＡＴＧＡＣＡＣＴＧ－３’（配列番号１１２）
Ｓｑｓｔｍ１－Ｆｗ：５’－ＴＧＣＴＧＧＣＧＧＣＴＴＴＡＣＡＴＴＴＧ－３’（配列番号１１３）
Ｓｑｓｔｍ１－Ｒｖ：５’－ＣＡＧＡＡＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＡＡＧＣＣ－３’（配列番号１１４）
Ａｔｇ５－Ｆｗ：５’－ＡＧＡＴＧＧＡＣＡＧＣＴＧＣＡＣＡＣＡＣ－３’（配列番号１１５）
Ａｔｇ５－Ｒｖ：５’－ＴＴＧＧＣＴＣＴＡＴＣＣＣＧＴＧＡＡＴＣ－３’（配列番号１１６）
Ａｔｆ４－Ｆｗ：５’－ＡＴＧＡＴＧＧＣＴＴＧＧＣＣＡＧＴＧ－３’（配列番号１１７）
Ａｔｆ４－Ｒｖ：５’－ＣＣＡＴＴＴＴＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＣＡＡＴＣ－３’（配列番号１１８）
Ｂｉｐ－Ｆｗ：５’－ＣＴＧＡＧＧＣＧＴＡＴＴＧＧＧＡＡＧ－３’（配列番号１１９）
Ｂｉｐ－Ｒｖ：５’－ＴＣＡＴＧＡＣＡＴＴＣＡＧＴＣＣＡＧＣＡＡ－３’（配列番号１２０）
Ｃｙｐ４６ａ１－Ｆｗ：５’－ＴＣＧＴＴＧＡＡＣＧＴＣＴＣＣＡＴＣＡＧ－３’（配列番号１２１）
Ｃｙｐ４６ａ１－Ｒｖ：５’－ＴＴＴＧＧＧＧＡＧＡＧＡＣＴＧＴＴＴＧＧ－３’（配列番号１２２）
マイクロアレイによるｍＲＮＡ発現の分析
ｃＤＮＡ合成およびアレイハイブリダイゼーション。ｍＲＮＡ発現の分析のために、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｃｌａｒｉｏｍ Ｓマウスマイクロアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用した。約３００ ｎｇの全ＲＮＡを、ＧｅｎｅＣｈｉｐ ＷＴ Ｐｌｕｓ Ｒｅａｇｅｎｔキット（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を製造者の説明書に従って使用して処理し、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｃｌａｒｉｏｍ Ｓマウスマイクロアレイプレートにハイブリダイズさせた。アレイ処理のために、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈ，ａｎｄ Ｓｔａｉｎキットを使用した。その後、チップをＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｓｃａｎｎｅｒ ３０００でスキャンした。

アレイ品質管理および正規化。Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＣｏｎｓｏｌｅＴＭソフトウェア（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）も使用して、マイクロアレイの品質管理を行い、すべてのマイクロアレイのデータを正規化した。ＲＭＡアルゴリズムを使用して、マイクロアレイにわたる値の比較を可能にするためのバックグラウンド補正、ｌｏｇ２変換、および分位数正規化を行った。その後、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｃｏｎｓｏｌｅソフトウェア（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して、ＦＧＦ２１治療脳試料を無効治療脳試料に対して注釈付けおよび比較し、計算された倍数変化およびｐ値を含む遺伝子のリストを生成した。

ＦＧＦ２１循環レベルの測定
ＦＧＦ２１の循環レベルを、定量的サンドイッチ酵素イムノアッセイマウス／ラットＦＧＦ－２１ ＥＬＩＳＡキット（ＭＦ２１００，Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｂｉｎｇｄｏｎ，ＵＫ）によって決定した。

アミロイドベータ抽出および定量化
切開した皮質を、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ＥＤＴＡ－ｆｒｅｅ，Ｒｏｃｈｅ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を補充した冷Ｔ－ＰＥＲ緩衝液（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）中で、超音波処理器（Ｓｏｎｉｃｓ，Ｖｉｂｒａ－Ｃｅｌｌ，Ｎｅｗｔｏｗｎ，ＵＳＡ）を使用して均質化した。短時間の超音波処理後、試料を、ＳＷ－５５Ｔｉローターを使用するＵｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｕｅ（Ｏｐｔｉｍａ ＸＰＮ－１００、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｂｒｅａ、ＣＡ、ＵＳＡ）中、４℃で１時間、１００，０００×ｇで遠心分離した。上清を可溶性画分として標識した。ペレットを７０％ギ酸溶液に再懸濁した。超音波処理および遠心分離工程を繰り返し、上清を回収し、真空濃縮器（Ｓａｖａｎｔ ＳｐｅｅｄＶａｃ ＤＮＡ１３０濃縮器、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で４時間乾燥させた。乾燥したギ酸抽出物をＤＭＳＯに再懸濁し、不溶性画分として標識した。すべての画分をさらなる使用まで直ちに－８０℃で保存した。

Ａβ４０レベルを、製造業者によって推奨されるプロトコルに従ってＥＬＩＳＡによって不溶性画分中で定量した（ヒトＡβ４０ ＥＬＩＳＡ ｋｉｔ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ｒｅｆ．ＫＨＢ３４８１）。データを各試料中のタンパク質の総量に対して正規化した（Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ｒｅｆ．２３２２５）。

オープンフィールド試験
オープンフィールド試験は、過去に報告されたように、９：００ＡＭ～１：００ＰＭに実施した（Ｈａｕｒｉｇｏｔ ｅｔ ａｌ，２０１３）。手短に言えば、動物を白色プラスチックの壁および床の箱（４５×４５×４０ｃｍ）の隅に置いた。Ｃ５７Ｂｌ／６Ｊマウスについて、運動および探索活動を、ビデオ追跡システム（ＳＭＡＲＴ Ｊｕｎｉｏｒ；Ｐａｎｌａｂ）を使用して最初の６分間評価した。ｄｂ／ｄｂマウスおよびそれらの対照群について、マウスを最初にオープンフィールドアリーナに５分間慣らした。次いで、それらをホームケージに５分間入れ、その後、再びオープンフィールドアリーナに置き、最初の１２分間の間に運動および探索活動を評価した。

新規物体認識試験
新規物体認識試験は、オープンフィールド箱で行った。オープンフィールド試験を使用して、マウスを箱に順応させた。翌日、最初の試験を行うために、２つの同一の物体（ＡおよびＢ）を箱の右上および左上の四半部に配置し、次いでマウスを両方の物体の後方に置いた。１０分間の探索の後、マウスを箱から取り出し、１０分間休憩させた。第２の試験では、同一の物体（ＡおよびＢ）の１つを物体Ｃ（新たな物体）に置き換えた。次いで、マウスを、短期記憶試験のためのさらなる１０分間の探索のために箱の中に戻した。長期記憶試験のために、翌日、物体Ｃを新しい物体（Ｄ）と交換し、マウスに物体ＡおよびＤをさらに１０分間探索させた。動物が新規物体を探索するのに費やした時間量を、ビデオ追跡システム（ＳＭＡＲＴ Ｊｕｎｉｏｒ；Ｐａｎｌａｂ）を使用して記録し、評価した。新規物体認識試験の記憶の評価は、以下の式、識別率（％）＝（Ｎ－Ｆ）／（Ｎ＋Ｆ）×１００％に従って計算された識別率のパーセンテージとして表され、式中、Ｎは新しい物体の探索に費やされた時間を表し、Ｆは同じ物体の探索に費やされた時間を表す。

ロータロッド試験
マウスを、４ＲＰＭで回転する回転棒（Ｐａｎｌａｂ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）上に置いた。レーン幅、５０ｍｍ；棒直径、３０ｍｍ。安定化されたら、マウスをｘ ＲＰＭ／ｘ秒の漸増速度に供した。実験の初日は、装置の使用において動物を訓練するために使用した。動物は、それぞれ３回の試験を受けた。マウスが棒の上に留まることができた時間の長さを記録した。次いで、動物を１日休ませ、３日目にマウスを棒上でさらに３回試験した。３回の試験の平均を分析した。運動学習の評価のために、個々の試験のそれぞれにおける成績を分析した。

握力試験
握力検査計（Ｐａｎｌａｂ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）を使用して前肢握力を評価した。握力計を水平に配置し、マウスを尾で持ち、装置に向かって降ろした。動物に前足で金属棒を掴ませ、次いで水平面において後方に引っ張った。把持を失う直前に棒に加えられた力をピーク張力として記録した。３回の試験の平均を分析した。

ハングワイヤ試験
ワイヤハング試験は、２つの垂直スタンドに固定された幅５５ｃｍ、厚さ２ｍｍの金属ワイヤを使用して行った。ワイヤを床敷材料の層の３５ｃｍ上方に維持して、落下時の動物の傷害を防止した。マウスを、尾で扱って、ワイヤの中央を前肢で掴ませた。マウスが落下するまでの時間を測定した。１８０秒の限界懸垂時間に達したマウスは、試験数とは無関係に実験を停止させたが、他のマウスは最大３回の試験のために直ちに再試験した（試験間に３０秒の回復期間を使用した）。

バーンズ迷路試験
バーンズ迷路試験は、周囲の周りに２０個の均一に離間した穴を有する、高さのある円形プラットフォームからなった。１つの穴の下に逃避箱が取り付けられ、残りの１９個の穴を覆われた状態で残した。訓練および試験の間、明るい光（１０００ルーメン超）、オープンスペース、および雑音（９０ｄｂ超）などの嫌悪刺激が、逃避行動を誘発する動機づけ因子として役立った。バーンズ迷路を何も無い部屋で行い、壁の視覚的合図を参照として使用した。初日の間、動物を逃避箱で１分間、続いて開放プラットフォームで１４０秒間順応させた。すべての動物が順応すると、逃避箱をバーンズ迷路の別の穴に移動させ、そこで訓練の期間中維持した。最初の訓練では、ＰＶＣチューブ内のマウスをバーンズ迷路の中央に１５秒間置いた後、ＰＶＣを解放し、動物はプラットフォームを自由に探索し、１４０秒間逃避箱を探した。動物は、正しい穴を見つけて逃避箱に入れば、３０秒間内部に留まったが、そうでなければ動物は逃避箱に誘導された。その後（２，３および４日目）の、１日２回の訓練を最初の訓練として評価した。最終日（５日目）、逃避箱を取り外し、１８０秒間の記憶を評価するためにプローブ試験を行った。動物がバーンズ迷路を探索するのに費やした時間量を、ビデオ追跡システム（ＳＭＡＲＴ Ｊｕｎｉｏｒ；Ｐａｎｌａｂ）を使用して記録し、評価した。動物が逃避箱を見つけるまでに費やした時間を記憶の尺度として計算した。

高架式十字迷路
高架式十字迷路試験は、中央で交差する開放アームおよび閉鎖アームと、中心領域とからなる装置において行われた。構造物を床から９０～１００ｃｍ高くした。試験中、マウスを中心領域に置き、アーム間を５分間自由に移動させた。動物が開放アームおよび閉鎖アームを探索するのに費やした時間量を、ビデオ追跡システム（ＳＭＡＲＴ Ｊｕｎｉｏｒ；Ｐａｎｌａｂ）を使用して記録し、評価した。開放アームへの進入回数および開放アームで過ごした時間は、マウスにおけるオープンスペース誘発不安の指標として使用される。

統計学的分析
すべての値を平均±ＳＥＭとして表す。データはテューキーの事後補正を用いた一元配置ＡＮＯＶＡによって分析されたが、但し２つの実験群のみの比較に関わるパラメータは除き、このケースでは対応のないスチューデントのｔ検定を使用した。Ｐ＜０．０５の場合、差異を有意とみなした。

［実施例１］
ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターで治療した高齢マウスにおける神経筋機能および認知の改善ならびに神経変性の減少
ＦＧＦ２１による骨格筋の遺伝子操作が高齢動物において治療上の利益を発揮し得るかどうかを評価するために、１３．５月齢の雄Ｃ５７Ｂｌ６マウスに、ＣＭＶプロモーターの制御下でマウスコドン最適化ＦＧＦ２１コーディング配列（ｍｏＦＧＦ２１）をエンコードする血清型１のＡＡＶベクター（ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１）を、３×１０^１１ウイルスゲノム（ｖｇ）で筋肉内投与した。同齢の対照動物を同じ用量のＡＡＶ１－ＣＭＶ無効ベクターで治療した。若齢マウスの未治療コホートが、さらなる対照群として役立った。すべての実験群に固形飼料食を与えた。

ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１治療マウスは、注射した３つの筋においてコドン最適化ＦＧＦ２１の過剰発現を示したが、肝臓および心臓などのオフターゲット組織では示さなかった（図１Ａ）。ＦＧＦ２１の骨格筋過剰発現は、血流中へのＦＧＦ２１の分泌増加をもたらした（図１Ｂ）。

ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで高齢マウスを治療すると、協調およびバランスが改善した。注目すべきことに、２２月齢のＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１治療マウスと３月齢の未治療マウスとの間に差は観察されなかった（図２Ａ）。骨格筋機能および協調をさらに研究するために、ハングワイヤ試験を実施した。ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１で治療した高齢マウスは、無効ベクターを投与したマウスと比較して神経筋機能の改善を示した（図２Ｂ）。オープンフィールド試験は、身体活動レベルが加齢と共に低下することを明らかにした（図２Ｃ）。ＡＡＶ－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１治療マウスは活動レベルの有意な増加を示し、２３月齢のＡＡＶ－ＦＧＦ２１治療マウスの活動レベルは、４月齢の未治療マウスの活性レベルと同程度になった（図１Ｃ）。以前の報告（Ｗｅｎｚ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．２００９．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０６（４８）、２０４０５－１０）と一致して、握力試験は、加齢に関連する筋力の喪失を証明した（図２Ｄ）。ＡＡＶ－ＣＶＭ－ｍｏＦＧＦ２１治療マウスは、ＡＡＶ１－ＣＭＶ無効同齢対照物と比較してこのパラメータの有意な改善を示し、前者のマウスの握力は、４月齢マウスの握力と比較してわずかに低下した（図２Ｄ）。さらに、２７月齢まで、ＦＧＦ２１をエンコードするベクターで治療したマウスは、ＡＡＶ１－ＣＭＶ無効ベクターで治療した同齢コホートよりも新規物体認識試験において著しく良好に機能し、２月齢動物の認識指数と同等の認識指数を有した（図３）。これらの結果はすべて、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターによる治療が、高齢マウスにおいて神経筋機能を改善し、学習を強化し、記憶を正常化したことを示唆している。

ＡＡＶ－ＦＧＦ２１がもたらす認知の改善の根底にある分子機構についての洞察を得るために、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１またはＡＡＶ１－ＣＭＶ無効ベクターで治療した高齢マウスの脳からのＲＮＡを得て、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｃｌａｒｉｏｍ Ｓマウスマイクロアレイ技術を用いてトランスクリプトーム解析を行った。データの前処理は、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｃｏｎｓｏｌｅを使用して行った。その後、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｃｏｎｓｏｌｅを使用して、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１またはＡＡＶ１－ＣＭＶ無効ベクターで治療した高齢マウスの脳試料を比較して、計算された倍数変化およびｐ値を含む遺伝子のリストを生成した。マイクロアレイ分析から得られたトランスクリプトームデータを解釈するために、遺伝子セットエンリッチメント解析（ＧＳＥＡ）を行った。この方法は、遺伝子セット、すなわち、先行の生物学的知識、例えば、生物学的機能、生物学的経路または細胞コンパートメントに基づく共通の特徴を共有する遺伝子群に依存する（Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，２００５）。これらのセットは、可変数の遺伝子（遺伝子セットのサイズ）を含み、Ｈａｌｌｍａｒｋ、ＫＥＧＧ、Ｒｅａｃｔｏｍｅ、またはＧｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ（ＧＯ）などのいくつかのデータベースから検索され、次いで、過剰表現分析（ｏｖｅｒｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ）が計算された。ＧＳＥＡの目的は、遺伝子セットのメンバーが、治療された試料対未治療の試料に相関する傾向があるかどうかを決定することである。セットが過剰に表される程度を計算し、セットのサイズを説明するために正規化し、正規化されたエンリッチメントスコア（ＮＥＳ）、および統計学的有意性を説明するための関連するｐ値を得た。

組換えＦＧＦ２１タンパク質で治療された動物における、主にミトコンドリア機能の増強および酸化ストレスの減少に起因する神経変性および認知低下の改善を説明する以前の報告と一致して（Ｙｕ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｗａｎｇ，Ｘ－Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｓａ－ｎｇｕａｎｍｏｏ Ｐ．ｅｔ ａｌ ２０１６；Ｓａ－ｎｇｕａｎｍｏｏ Ｐ．ｅｔ ａｌ ２０１８；Ｃｈｅｎ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，２０１９；Ａｍｉｒｉ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１８）、ＧＳＥＡは、酸化的リン酸化、呼吸電子輸送、脱共役タンパク質媒介熱発生、活性酸素種、ミトコンドリア複合体および成分、クリステ形成およびミトコンドリア膜貫通輸送に関連する経路が、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで治療された高齢動物において、ＡＡＶ１－ＣＭＶ無効ベクターを受けたマウスと比較して強化されていることを明らかにした（表１）。したがって、データは、ＦＧＦ２１遺伝子治療がミトコンドリア機能の改善および酸化ストレスの削減によって神経変性を防止することを示している。

［実施例２］
ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターで治療したＨＦＤ給餌雄マウスにおける機能低下ならびに不安様および抑うつ様症状の逆転
本発明者らは、ＦＧＦ２１を用いた脂肪組織または骨格筋のＡＡＶ媒介遺伝子操作の、肥満症および糖尿病に関連する不安、ならびに神経筋機能の低下を回復させる治療的可能性を評価した。この目的のために、１０週齢の雄Ｃ５７Ｂｌ６マウスにＨＦＤを１８週間与えた。これらの最初の４ヶ月の追跡中、固形飼料給餌動物の体重は２５％増加したが、ＨＦＤを与えられた動物は肥満になった（体重増加９１％）（図４Ａ～図４Ｂ）。次いで、肥満動物に、ｍｉＲ１２２ａおよびｍｉＲ１の標的部位を含むＣＡＧ遍在性プロモーターの制御下でマウスコドン最適化ＦＧＦ２１コーディング配列をエンコードするＡＡＶ８ベクター（ＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴ）５×１０^１０ｖｇまたは１×１０^１１ｖｇをｅＷＡＴ（ｅＷＡＴ：精巣上体白色脂肪組織）内投与した。肥満マウスの別のコホートに、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターを７×１０^１０、１×１０^１１、および３×１０^１１ｖｇ／マウスの３つの異なる用量で筋肉内（ｉｍ）投与した。ＡＡＶ投与後、ＡＡＶ治療マウスを約１年間、すなわち１６．５月齢までＨＦＤを維持した。対照として、未治療の固形飼料給餌およびＨＦＤ給餌Ｃ５７Ｂｌ６マウスを使用した。

５×１０^１０ｖｇまたは１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターで治療した動物は、最初にそれぞれ体重の１４％および２５％を減少させ、徐々に体重を減少させ続けた（図４Ａ）。実際、１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴで治療したＨＦＤ給餌マウスの体重は、研究が終了する頃（約１４．５ヶ月）には固形飼料給餌動物の体重と同程度であった（図４Ａ）。

ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１で治療した群では、明確な用量依存的体重減少が観察された。ベクターの最低用量はＨＦＤ摂取に関連する体重増加を打ち消さなかったが、これらの動物の平均体重は、常に対照ＨＦＤ給餌マウスの平均体重より低かった（図４Ｂ）。１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１で治療した動物は、最初に体重の１８％を減少させ、徐々に体重を減少させ続けた（図４Ｂ）。これらのマウスの体重は、試験の終了頃（約１４．５ヶ月）には固形飼料給餌動物の体重と同程度であった（図４Ｂ）。３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＦＧＦ２１を投与すると、ＨＦＤ給餌マウスは、最初に体重の３４％を減少させ、進行性の体重減少も経験し、これは、研究の終わり（１６．５月齢）までに、固形飼料給餌動物の体重よりも低く、ＨＦＤ給餌の開始前に記録された体重と比較してわずかに増加した（図４Ｂ）。

５×１０^１０または１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターでｅＷＡＴ内治療した動物は、ＦＧＦ２１の脂肪特異的過剰発現（図５Ｂ）を介する血流中の高レベルのＦＧＦ２１（図５Ａ）を示した。同様に、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＦＧＦ２１ベクターで治療したＨＦＤ給餌マウスは、循環ＦＧＦ２１の顕著な増加を示し（図５Ｃ）、これは３つの注射筋肉におけるベクター由来ＦＧＦ２１の高レベルの発現と並行していた（図５Ｄ）。ベクター血清型、プロモーターおよび投与経路のこの組み合わせは、肝臓などのオフターゲット組織での導入遺伝子の発現をもたらさなかった（図５Ｄ）。

ＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴまたはＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターによる治療は、歩行活動に対する影響をもたらした。ＨＦＤを与えた未治療動物におけるオープンフィールド試験で観察された機能低下とは対照的に、５×１０^１０ｖｇまたは１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴで治療したマウスは、固形飼料給餌動物と同程度の自発的歩行活動を示した（図６）。１１月齢のＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴ治療動物は、未治療ＨＦＤ給餌対照よりも長い距離を移動し、多くの時間かつ速い速度で移動し、休止時間が短く、ゆっくりとした動作および速い動きに多くの時間を費やした（図６Ａ～図６Ｇ）。同様の観察を、１×１０^１１および３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療したマウスにおいて行った（図７）。これらの結果は、ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターで治療したＨＦＤ給餌マウスにおける神経筋機能の改善を示唆する。これらの結果はまた、移動した総距離など、オープンフィールド試験において典型的には抑うつ様行動として特徴付けられる行動の減少を示している（例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０２０ Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２８ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０２０を参照されたい）。

食餌誘導性肥満症を示すマウスは、肥満症および糖尿病患者で観察される不安様行動に似ることが報告されている（Ａｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｉｈｏｎ Ｓｈｉｎｋｅｉ Ｓｅｉｓｈｉｎ Ｙａｋｕｒｉｇａｋｕ Ｚａｓｓｈｉ，３２（５－６）、２５１－５（２０１２））。本発明者らは、マウスにおいてこのパラメータを評価するために広く使用されているオープンフィールド試験によって不安様行動を調べた（Ｚｈａｎｇ，Ｌ－Ｌ．ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９６，２０３－１４）。マウスは、新規な環境のオープンフィールドに置かれると、装置の周囲を動き回ることを好む。したがって、オープンフィールドの中心領域で過ごした時間は、不安に関連する傾向のレベルと逆相関すると考えられる。１６．５月齢の未治療ＨＦＤ給餌マウスは、同齢の固形飼料給餌対照と比較して、中心ゾーンで過ごした時間が短く、不安のレベルが高まっていることが示唆された（図８Ａ）。対照的に、ＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターによる治療は不安を完全に打ち消した。特に、１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ８－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴで治療したＨＦＤ給餌マウスが中心ゾーンで過ごした時間は、２月齢の固形飼料給餌対照マウスの時間と同程度であった（図８Ａ）。１×１０^１１および３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターの筋肉内投与もまた、ＨＦＤ関連不安の反作用をもたらした（図８Ｂ）。

これらの結果はすべて、ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターによる治療が糖尿病および肥満症に関連する行動障害を改善したことを示唆している。

［実施例３］
ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターで治療したＨＦＤ給餌雌マウスにおける不安の反作用ならびに神経筋機能および認知の改善
次に、本発明者らは、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターのｉｍ投与が肥満およびインスリン抵抗性雌マウスにおいて治療上の利益をもたらし得るかどうかを評価した。この目的のために、１１週齢の雌Ｃ５７Ｂｌ６マウスにＨＦＤを８週間与え、その後、１×１０^１１または３×１０^１１ｖｇ／マウスの用量のＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで四頭筋、腓腹筋および頭側脛骨筋を治療した。未治療の固形飼料給餌およびＨＦＤ給餌コホートを対照とした。

１×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで治療した雌マウスは、最初に体重を５％減らし、対照ＨＦＤ給餌マウスよりも低い平均体重を常に示した（図９Ａ）。注目すべきことに、３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで治療したマウスのコホートは、ＡＡＶ送達の数週間以内に体重を正常化した（図９Ａ）。実際、この動物群の平均体重は、追跡期間（約８ヶ月）の間、固形飼料給餌未治療コホートの平均体重と区別がつかなくなった（図９Ａ）。

ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療したＨＦＤ給餌雄マウスで行われた観察と同様に、同じベクターを用いた雌マウスの骨格筋の遺伝子操作も、循環ＦＧＦ２１レベルの顕著な増加（図９Ｂ）および注射した筋肉における因子の特異的過剰発現（図９Ｃ）をもたらした。

神経筋機能を評価するために、オープンフィールド、ロータロッド、および握力試験を行った。オープンフィールド試験中、ＨＦＤを与えられ、骨格筋においてＦＧＦ２１を過剰発現している雌マウスは、歩行活動の増加を示した（図１０）。移動した総距離の減少など、オープンフィールド試験において典型的には抑うつ様行動として特徴付けられる行動（例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０２０ Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２８ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０２０を参照されたい）も改善された。注目すべきことに、オープンフィールド試験はまた、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで治療したマウスにおいて不安の減少を明らかにした（図１１）。さらに、３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＦＧＦ２１ベクターをｉｍ投与された雌マウスは、未治療のＨＦＤ給餌対応物よりも加速ロータロッド上に長く留まることができ、協調およびバランスの改善を実証している（図１２Ａ）。さらに、前者マウスはまた、未治療肥満マウスよりも高い筋力を示し、前者マウスの握力は、固形飼料給餌マウスの握力と比較してわずかに低かった（図１２Ｂ）。

認知機能に対するＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＦＧＦ２１ベクターによる治療の効果を試験するために、新規物体認識試験およびＹ字迷路試験を行った。ＦＧＦ２１をエンコードするベクターで治療したＨＦＤ給餌雌マウスは、両方の試験において、未治療ＨＦＤ給餌コホートよりも著しく良好に実行した。新規物体認識試験では、３×１０^１１ｖｇ／マウスのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＦＧＦ２１ベクターを投与されたマウスは、固形飼料給餌対照コホートの認識指数と同等の認識指数を有し、一方、１×１０^１１ｖｇの用量で治療されたマウスは、対照の痩せた動物よりも良好な学習および記憶を示した（図１３Ａ）。さらに、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＦＧＦ２１ベクターで治療したマウスは、用量に関係なく、Ｙ字迷路において空間記憶の改善を示した（図１３Ｂ）。１×１０^１１または３×１０^１１ｖｇ／マウスのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ＦＧＦ２１ベクターで治療した対照固形飼料給餌マウスおよびＨＦＤ給餌マウスは、新しいアームを同様に、かつ他のアームよりも頻繁に探索した（図１３Ｂ）。

これらの結果はすべて、ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターによる治療が、糖尿病および肥満症に関連する神経筋および認知の低下を改善したことを示唆している。

［実施例４］
ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターで治療したｄｂ／ｄｂマウスにおける歩行活動の増加ならびに不安様行動、探索能力および認知の改善。

ＦＧＦ２１遺伝子治療による脳のＡＡＶ媒介遺伝子操作の認知低下に対する治療的可能性をｄｂ／ｄｂマウスで評価した。ｄｂ／ｄｂマウスは、レプチンシグナル伝達の欠損を特徴とする、広く使用されている肥満症および糖尿病の遺伝的マウスモデルである。さらに、ｄｂ／ｄｂマウスは、神経炎症および認知低下のマウスモデルとしても使用されている（Ｄｅｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｍｕｎｏｌ．２０１４；Ｄｉｎｅｌ ｅｔ ａｌ Ｐｌｏｓ ｏｎｅ ２０１１；Ｓｔｒａｎａｈａｎ ｅｔ ａｌ Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２００８；Ｚｈｅｎｇ，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ ２０１７）。

２月齢のｄｂ／ｄｂ雄マウスに、ＣＡＧ遍在性プロモーターの制御下でマウスコドン最適化ＦＧＦ２１コーディングする配列をエンコードするＡＡＶ１ベクター（ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１）を５×１０^１０ｖｇ／マウス、大槽を介して脳脊髄液（ＣＳＦ）内に局所投与した。対照として、未治療ｄｂ／ｄｂおよび未治療ｄｂ／＋（痩せ型）マウスを使用した。

ＡＡＶ投与の１６週間後の視床下部、皮質、海馬、小脳および嗅球などの脳の種々の領域における因子の発現レベルの増加によって証明されるように、ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターのＣＳＦ内投与は、脳におけるＦＧＦ２１の広範な過剰発現をもたらした（図１８）。

オープンフィールド試験を、すべてのマウス群に対して９週齢で行った。未治療ｄｂ／ｄｂマウスは、移動距離、最高速度および敏速な時間の減少を示した（図１４Ａ～図１４Ｃ）。これらのパラメータはすべて、ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１投与後のｄｂ／ｄｂマウスにおいて改善され（図１４Ａ～図１４Ｃ）、ＦＧＦ２１遺伝子療法治療後の歩行活動の増加を示している。移動した総距離の減少など、オープンフィールド試験において典型的には抑うつ様行動として特徴付けられる行動（例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０２０ Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２８ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０２０を参照されたい）も改善された。

不安様行動もオープンフィールドで研究し、ｄｂ／ｄｂ未治療マウスで観察された障害（辺縁での距離の増加および中心での距離の減少）（図１５Ａ～図１５Ｂ）は、ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１のＣＳＦ内投与後のｄｂ／ｄｂマウスでは改善され（図１５Ａ～図１５Ｂ）、不安様行動の減少を示している。

Ｙ字迷路試験をすべてのマウスに群に１０週齢で実施したところ、未治療ｄｂ／ｄｂマウスはｄｂ／＋痩せ型マウスより探索能力が低いこと（図１６Ａ～図１６Ｂ）、およびｄｂ／ｄｂマウスの探索能力がＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１遺伝子治療によるＣＳＦ内治療後に改善されたこと（進入数の増加および最初の選択の潜伏時間の減少）が示された（図１６Ａ～図１６Ｂ）。

記憶に対するＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターによるＣＳＦ内治療の効果を試験するために、新規物体認識試験を１１週齢で行った。ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１をエンコードするベクターで治療したｄｂ／ｄｂマウスは、未治療ｄｂ／ｄｂコホートよりも著しく良好に実行した（図１７）。さらに、未治療ｄｂ／ｄｂマウスで観察された識別指数の著しい低下は、ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１投与後に高度に改善され（図１７）、遺伝子治療後の記憶の増加を示した。

［実施例５］
ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターで治療したｄｂ／ｄｂマウスおよびＳＡＭＰ８マウスにおける、抑うつの減少を示す神経炎症の減少
本発明者らはまた、神経炎症を減少させるためのＡＡＶ媒介ＦＧＦ２１遺伝子治療の可能性を評価した。

最初に、本発明者らは、神経炎症などの加齢性脳病変を伴う、広く使用されている老化マウスモデルである老化促進マウス－ｐｒｏｎｅ ８（ＳＡＭＰ８）マウス（Ｔａｋｅｄａ Ｔ．，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２００９，３４（４）：６３９－６５９；Ｇｒｉｎａｎ－Ｆｅｒｒｅ Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２０１６，５３（４）：２４３５－２４５０）を使用した。脳における炎症を、アストロサイトマーカーＧｆａｐおよびＳ１００ｂ、ミクログリアマーカーＡｉｆ１ならびに炎症促進性分子、例えばＮｆｋｂ、Ｉｌ１ｂおよびＩｌ６の発現によって分析した。炎症促進性サイトカインＩｌ１ｂおよびＩｌ６の発現は、脳においてＦＧＦ２１を過剰発現しているＳＡＭＰ８マウスの視床下部において減少した（図２０）。

次に、本発明者らは、レプチンシグナル伝達の欠損を特徴とする、広く使用されている肥満症および糖尿病の遺伝的マウスモデルであるｄｂ／ｄｂマウスを使用した。さらに、これらのマウスは、脂肪組織および肝臓などの末梢組織だけでなく、脳においても炎症を呈する（Ｄｅｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｍｕｎｏｌ．２０１４）。ＡＡＶ９－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴベクターでＣＳＦ内治療したｄｂ／ｄｂマウスは、視床下部におけるＧｆａｐ、Ｓ１００ｂ、Ａｉｆ１、Ｎｆｋｂ、Ｉｌ１ｂおよびＩｌ６の発現低下を示した（図１９）。

炎症性サイトカインの発現レベルの減少に伴うアストロサイトマーカーの減少は、ＦＧＦ２１遺伝子療法治療後に有害性アストロサイト（Ａ１アストロサイト）の集団の減少およびミクログリアの減少があることを示す。

多くの研究は、炎症プロセスが抑うつの病因において中心的な役割を果たすことを裏付けている（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０２０ Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２８ Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２０２０）。実施例２、３および４で観察された抑うつ様行動の減少と共に、これは、ＦＧＦ２１遺伝子治療が抗うつ効果を有することを示している。

［実施例６］
ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターのＳＡＭＰ８マウスへの筋肉内投与。

認知低下に対するＦＧＦ２１による骨格筋のＡＡＶ媒介遺伝子操作の治療可能性をさらに評価するために、ＳＡＭＰ８マウスを使用する。ＳＡＭＰ８マウスモデルは、８～１２月齢までに認知低下を示す（Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｍ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｅｈａｖ．１９８６；３８（３）：３９９－４０６；Ｍａｒｋｏｗｓｋａ，ＡＬ．，Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｅｈａｖ．１９９８；６４（１）：１５－２６）。

ＳＡＭＰ８マウスに３×１０^１１ｖｇ／マウスのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターをｉｍ投与する。対照として、未治療のＳＡＭＰ８およびＳＡＭＲ１動物を使用する。これらのマウスにおいて、いくつかの行動試験および神経筋試験、例えば、Ｙ字迷路、オープンフィールド、新規物体認識試験、ロータロッド、ハングワイヤ試験、握力試験およびモリス水迷路を行う。屠殺時に、血清および組織試料を分析のために採取する。これらの試料の分析には、神経形成（Ｓｏｘ２、ＮｅｕＮおよびＤｃｘなどのニューロンマーカーの発現）、神経炎症（ＧＦＡＰ、Ｉｂａ１およびいくつかのサイトカインの発現レベル）、シナプス変性（シナプトフィジンのタンパク質レベルおよび脊椎密度）に関する研究が含まれる。

［実施例７］
ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターのアルツハイマー病マウスモデルへの筋肉内投与。

ＦＧＦ２１による骨格筋のＡＡＶ媒介遺伝子操作のアルツハイマー病に対する治療可能性を評価するために、３ｘＴｇ－ＡＤ（Ｂ６；１２９Ｔｇ（ＡＰＰＳｗｅ，ｔａｕＰ３０１Ｌ）１Ｌｆａ Ｐｓｅｎ１^{ｔｍ１Ｍｐｍ}）マウスモデルを使用する。３ｘＴｇ－ＡＤは、広く使用されているアルツハイマー病のマウスモデルであり、３つすべての変異対立遺伝子についてホモ接合性であり、Ｐｓｅｎ１変異についてホモ接合性であり、同時注射されるＡＰＰＳｗｅおよびｔａｕＰ３０１Ｌ導入遺伝子についてホモ接合性である（Ｂｅｌｆｉｏｒｅ，Ｒ．，Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ。２０１９，１８（１）：ｅ１２８７３）。

３ｘＴｇ－ＡＤマウスに３×１０^１１ｖｇ／マウスのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターをｉｍ投与する。対照として、未治療の３ｘＴｇ－ＡＤ動物を使用する。これらのマウスにおいて、いくつかの行動試験および神経筋試験、例えば、Ｙ字迷路、オープンフィールド、新規物体認識試験、ロータロッド、ハングワイヤ試験、握力試験およびモリス水迷路を行う。屠殺時に、血清および組織試料を分析のために採取する。これらの試料の分析には、神経形成（Ｓｏｘ２、ＮｅｕＮおよびＤｃｘなどのニューロンマーカーの発現）、神経炎症（ＧＦＡＰ、Ｉｂａ１およびいくつかのサイトカインの発現レベル）、アミロイド－ベータ（可溶性アミロイドおよびプラーク）のレベル、シナプス変性（シナプトフィジンのタンパク質レベルおよび脊椎密度）、タウリン酸化のレベルに関する研究が含まれる。

［実施例８］
ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで筋肉内治療したＳＡＭＰ８マウスにおける神経筋機能および認知の改善
８週齢の雄ＳＡＭＰ８マウスに３×１０^１１ｖｇ／マウスのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターをｉｍ投与した。対照として、未治療のＳＡＭＰ８およびＳＡＭＲ１動物を使用した。

ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１治療ＳＡＭＰ８マウスは、注射した３つの筋肉におけるコドン最適化ＦＧＦ２１の特異的過剰発現およびＦＧＦ２１循環レベルの増加を示した（図２１Ａ～図２１Ｂ）。

神経筋機能に対するＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターによる治療の効果を試験するために、ロータロッド試験を行った。３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターをｉｍ投与されたＳＡＭＰ８マウスは、未治療のＳＡＭＰ８およびＳＡＭＲ１よりも加速ロータロッド上に長く留まることができ、協調およびバランスの改善を実証している（図２１Ｃ）。運動学習能力もまた、その後の試験中の成績の改善を調べることによって評価した。注目すべきことに、ＡＡＶ１－ＦＧＦ２１治療されたＳＡＭＰ８マウスは、未治療のＳＡＭＰ８およびＳＡＭＲ１対応物よりも優れていた（図２１Ｄ）。さらに、新規物体認識試験により、ＦＧＦ２１をエンコードするベクターで治療したＳＡＭＰ８マウスにおける認知低下の防止がさらに確認された。３２週齢までに、治療ＳＡＭＰ８マウスは、未治療ＳＡＭＰ８マウスおよび対照ＳＡＭＲ１マウスの両方と比較して、短期記憶および長期記憶の顕著な改善を示した（図２１Ｅ～図２１Ｆ）。

脳における炎症を、ケモカイン（Ｃ－Ｃモチーフ）リガンド１９（Ｃｃｌ１９）およびＩｌ６の発現によって分析した。Ｃｃｃｌ１９は、ＳＡＭＰ８の神経病理学的表現型に対して主要な役割を果たすと仮定されている（Ｃａｒｔｅｒ ＴＡ．Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．２００５；６（６）：Ｒ４８）。ＳＡＭＰ８は、ＳＡＭＲ１マウスと比較して、皮質および海馬において顕著に増加したＣｃｌ１９発現レベルを示した（図２２Ａ）。ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターによるＳＡＭＰ８マウスの治療は、そのような脳領域におけるＣｃｌ１９発現レベルを正常化した（図２２Ａ）。さらに、ＡＡＶ１－ＦＧＦ２１治療ＳＡＭＰ８は、海馬におけるＩｌ６発現の減少を示した（図２２Ｂ）。

これらの結果はすべて、ＡＡＶ１－ＦＧＦ２１による治療が、ＳＡＭＰ８マウスにおける神経筋機能、運動学習および記憶を増強し、脳炎症を減少させたことを示唆している。

［実施例９］
ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで筋肉内治療したアルツハイマー病マウスモデルにおける記憶の改善
８週齢の雄３ｘＴｇ－ＡＤマウスに３×１０^１１ｖｇ／マウスのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターをｉｍ投与した。対照として、未治療の３ｘＴＧ－ＡＤおよびＢ６１２９ＳＦ２／Ｊ動物を使用した。

ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療したＳＡＭＰ８マウスで行われた観察と同様に、同じベクターを用いた３ｘＴｇ－ＡＤマウスの骨格筋の遺伝子操作も、循環ＦＧＦ２１レベルの顕著な増加（図２３Ａ）および注射した筋肉における因子の特異的過剰発現（図２３Ｂ）をもたらした。

脳内のアミロイドプラーク（主にアミロイド－β（Ａβ）で作られる）の蓄積および記憶喪失は、アルツハイマー病の重要な特徴である（Ｂｅｌｆｉｏｒｅ Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ．２０１９；１８（１）：ｅ１２８７３）。ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターによる３ｘＴｇ－ＡＤマウスの治療は、未治療３ｘＴｇ－ＡＤマウスと比較して顕著に改善された短期記憶および長期記憶によって実証されるように、治療３ｘＴｇ－ＡＤマウスの認知低下を防止した（図２３Ｃ～図２３Ｄ）。注目すべきことに、ＡＡＶ１－ＦＧＦ２１治療３ｘＴｇ－ＡＤマウスの識別指数は、対照Ｂ６１２９ＳＦ２／Ｊ動物のものと同程度であった（図２３Ｃ～図２３Ｄ）。さらに、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した３ｘＴｇ－ＡＤマウスは、未治療の３ｘＴｇ－ＡＤマウスと比較して、皮質における不溶性Ａβ_４０レベルの顕著な低下を示した（図２３Ｅ）。

［実施例１０］
異なる用量のＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した高齢マウスにおける神経筋機能および認知の改善
１３月齢の雄Ｃ５７Ｂｌ６マウスに、１×１０^１１または３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターを筋肉内投与した。未治療の同齢対照動物を対照とした。

ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１治療マウスは、用量依存的にＦＧＦ２１の血流中への分泌を示した（図２４Ａ）。ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで治療した高齢マウスは、用量に関係なく、協調、バランスおよび運動学習の改善を示した（図２４Ｂ～図２４Ｃ）。さらに、１×１０^１１または３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターによる高齢マウスの治療は、短期記憶および長期記憶を著しく改善した（図２４Ｄ～Ｅ）。

［実施例１１］
ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１で治療した高齢マウスにおいて神経変性および認知低下の防止に関与する分子機構および脳領域
前述のように、全脳トランスクリプトーム分析は、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療された高齢マウスにおけるミトコンドリア機能の改善および酸化ストレスの削減が、神経変性および認知低下の抑制をもたらすことを示唆した（表１）。次に、本発明者らは、ＡＡＶ１－ＦＧＦ２１治療マウスにおける認知機能の改善に関与するさらなる分子機構を解読するとともに、特異的に影響を受けた脳領域を特徴付けた。

ｑＰＣＲによるいくつかの酸化的リン酸化（ＯＸＰＨＯＳ）および抗酸化マーカーの測定は、ＧＳＥＡの知見をさらに裏付けた（図２５および図２６）。さらに、ｑＰＣＲ分析により、ＯＸＰＨＯＳの増強が主に皮質において行われ、海馬では程度が低いことが明らかにされた（図２５）。両方とも認知機能に関与する重要な脳領域である。詳細には、３×１０^１１ｖｇのＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した高齢動物は、同齢の対応物と比較して、皮質におけるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーター１アルファおよびベータ（それぞれＰｐａｒｇｃ１ａおよびＰｐａｒｇｃ１ｂ）、ならびに皮質におけるそれらの転写標的ＡＴＰシンターゼＦ１サブユニットアルファ（Ａｔｐ５ｆ１ａ）、シトクロムｃオキシダーゼ１（ｍｔ－ｃｏ１）およびシトクロムｃオキシダーゼサブユニット６（Ｃｏｘ６）、ならびに海馬におけるＡｔｐ５ｆ１ａおよびシトクロムｃオキシダーゼサブユニット５ａ（Ｃｏｘ５ａ）の発現増加を示した（図２５）（Ｓａｈｉｎ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１１；４７０（７３３４）：３５９－６５）。同様に、抗酸化遺伝子発現の活性化を調整する転写因子ＮＦ－Ｅ２関連因子２（Ｎｒｆ２）（Ｊａｉｓｗａｌ ＡＫ，２００４．Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ ３６：１１９９－１２０７；Ｌｅｅ ＪＭ，２００４．Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３７：１３９－１４３）、ならびに活性酸素種解毒酵素、例えば、Ｐｐａｒｇｃ１ａ標的でもあるスーパーオキシドジスムターゼ１（Ｓｏｄ１）およびカタラーゼ（Ｃａｔ）をエンコードする重要な遺伝子（Ｓａｈｉｎ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１１；４７０（７３３４）：３５９－６５）の発現の増加が、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１治療高齢マウスの皮質および海馬において記録された（図２６）。

脳はエネルギーを要求する器官であり、解糖、ＴＣＡサイクルおよび酸化的リン酸化による効率的なＡＴＰ産生に大きく依存している（Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ ＤＡ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２０１９ Ｍａｒ；２０（３）：１４８－１６０）。解糖がＯＸＰＨＯＳのためのグルコースの代謝を担うと仮定して、重要な解糖関連遺伝子の発現レベルを決定した。ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターで治療した高齢マウスは、皮質におけるグリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、ヘキソキナーゼ１（Ｈｋ１）、ホスホフルクトキナーゼの血小板アイソフォーム（Ｐｆｋｐ）およびグリセロール－３－リン酸デヒドロゲナーゼ１および２（それぞれＧｐｄ１およびＧｐｄ２）、ならびに海馬におけるピルビン酸キナーゼＭ（Ｐｋｍ）およびＧｐｄ２の発現増加を示し、これらの脳領域における解糖の増強を示唆した（図２７）。

これらの結果はすべて、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１による高齢マウスの治療が、加齢に伴うグルコース代謝の低下およびミトコンドリア機能不全を予防し、これがニューロン機能のための効率的なＡＴＰ産生を確保することを示唆している。

ミトコンドリアの摂動およびＡＴＰ産生の減少が、認知欠損および記憶喪失と強く相関するシナプス機能不全およびシナプス変性に寄与すると報告されていることは、言及する価値がある（Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ ＤＡ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２０１９ Ｍａｒ；２０（３）：１４８－１６０；Ｃａｉ Ｑ．Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ．２０１７；５７（４）：１０８７－１１０３）。注目すべきことに、２５月齢までに、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１で治療した高齢動物は、重要なシナプスタンパク質の発現の堅固な増加を示した。（図２８）具体的には、アルファ－アミノ－３－ヒドロキシ－５－メチル－４－イソオキサゾールプロピオン酸（ＡＭＰＡ）型のシナプトフィジン（Ｓｙｐ）、ＧｌｕＲ１およびＧｌｕＲ２サブユニット（それぞれＧｒｉａ１およびＧｒｉａ２）、ならびにＮ－メチル－ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）型のＮＲ１、Ｎ２ＡおよびＮ２Ｂサブユニット（Ｇｒｉｎ１、Ｇｒｉｎ２ａ、Ｇｒｉｎ２ｂ）イオンチャネル型グルタミン酸受容体の発現レベルが皮質で増加した（図２８）。Ｇｒｉａ２も、海馬において増加した（図２８）。さらに、シナプス可塑性および記憶の調節を含む、広範囲の活性に関与する重要な転写因子である活性化転写因子４（Ａｔｆ４）（Ｉｌｌ－Ｒａｇａ ｇ．Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ２０１３；２３：４３１－４３６；Ｌｉｕ Ｊ．Ｆｒｏｎｔ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１４；８：１７７）の発現レベルの増加が、皮質において検出された（図２８）。重要なシナプスタンパク質の発現増強は、シナプス可塑性を改善し、その結果、皮質および海馬の機能を改善する可能性が高い。

脳の自己貪食能力は、年齢とともに低下し、神経変性を引き起こすことが報告されている（Ｌｉｐｉｎｓｋｉ ＭＭ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２０１０；１０７：１４１６４－９；Ｈａｒａ Ｔ．Ｎａｔｕｒｅ ２００６；４４１：８８５－９；Ｋｏｍａｔｓｕ Ｍ．Ｎａｔｕｒｅ ２００６；４４１：８８０－４）。ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでｉｍ治療した高齢マウスは、皮質において自己貪食マーカーｐ６２（Ｓｑｓｔｍ１遺伝子によってエンコードされる）および自己貪食関連５（Ａｔｇ５）の発現増加を示した（図２９）。同様に、小胞体（ＥＲ）も細胞の恒常性において不可欠な役割を果たす。抗アポトーシスシャペロンＢｉＰ（ＧＲＰ７８としても知られる）の誘導は、細胞がＥＲストレスに耐えるための主要な細胞保護機構を代表し得る（Ａ．Ｓ．Ｌｅｅ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６（２００１）５０４－５１０）。これに関して、ＢｉＰの発現増加がＡＡＶ１－ＦＧＦ２１治療高齢マウスの皮質で観察された（図２９）。Ａｔｆ４は、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１でｉｍ治療した高齢マウスの皮質においてもその発現が誘導され（図２８）、ＢｉＰ発現を上方制御することが報告されている（Ｌｕｏ Ｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ。２００３；２７８（３９）：３７３７５－８５）。

最後に、脳コレステロール恒常性の異常（特にニューロン中の高濃度）と、アルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病を含むいくつかの神経変性障害との間の強い関連が観察されている（Ｖａｎｃｅ ＪＥ．Ｄｉｓ Ｍｏｄｅｌ Ｍｅｃｈ ２０１２；５：７４６－５５）。Ｃｙｐ４６ａ１によってエンコードされるコレステロール２４ヒドロキシラーゼは、脳からのコレステロール排出を制御し、それによって脳コレステロール恒常性の調節において主要な役割を果たす。さらに、増加する証拠は、Ｃｙｐ４６ａ１が神経変性障害の病理発生および進行において役割を有し、脳におけるそのレベルの増加が神経保護的であることを示唆している（Ｋａｃｈｅｒ Ｒ．Ｂｒａｉｎ。２０１９；１４２（８）：２４３２－２４５０；Ｄｊｅｌｔｉ Ｆ．Ｂｒａｉｎ ２０１５；１３８（Ｐｔ ８）：２３８３－９８）。これと一致して、ＡＡＶ１－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターによる治療は、高齢マウスの皮質におけるＣｙｐ４６ａ１の発現を増加させた（図３０）。

まとめると、これらの結果は、ＦＧＦ２１遺伝子治療が、高齢マウスの皮質および海馬におけるミトコンドリア機能の改善、グルコース代謝および自己消耗の増加、酸化およびＥＲストレスの削減、ならびにコレステロール恒常性およびシナプス機能の改善によって、神経変性および認知低下を抑制することが示された。

［実施例１２］
ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターでＣＳＦ内治療したＨＦＤ給餌雄マウスにおける不安の反作用ならびに神経筋機能および認知の改善
本発明者らは次に、ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターのＣＳＦ内投与が肥満およびインスリン抵抗性雄マウスにおいて治療上の利益をもたらし得るかどうかを評価した。この目的のために、８週齢の雄Ｃ５７Ｂｌ６マウスにＨＦＤを３ヶ月間与えた。これらの最初の３ヶ月の追跡中、固形飼料給餌動物の体重は３２％増加したが、ＨＦＤを与えられた動物は肥満になった（体重増加８４％）。次いで、肥満動物に５×１０^９または１×１０^１０ｖｇ／マウスのＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターをＣＳＦ内投与した。未治療の固形飼料給餌およびＨＦＤ給餌コホートを対照とした。最初に、ＡＡＶ１ベクターで治療したＨＦＤ給餌マウスは体重が減少し、同齢の固形飼料給餌マウスと同様のレベルに達した（図３１Ａ）。ＡＡＶ１治療の２ヶ月後、ＨＦＤ給餌マウスの体重は安定化し、実験の追跡調査中（約１１ヶ月）も同様のレベルのままであった（図３１Ａ）。

ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでＣＳＦ内治療したｄｂ／ｄｂ雄マウスで行われた観察と同様に、同じベクターを用いたＨＦＤ給餌マウスの脳の遺伝子操作もまた、種々の脳領域における因子の特異的過剰発現をもたらした（図３１Ｂ）。

神経筋機能を評価するために、追跡期間の終わりに、オープンフィールド試験を実施した。オープンフィールド試験中、２つの用量のＡＡＶ１ベクターをＣＳＦ内に投与したＨＦＤ給餌マウスは、歩行活動の増加を示した（図３２）。総移動距離に観察された増加は、ＡＡＶ治療マウスにおける抑うつ様行動の改善も示した。不安の尺度として、オープンフィールドの中心および辺縁で過ごした距離および時間を測定し、データは、ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１治療マウスが、ＨＦＤを与えられた対照マウスよりも中心で過ごした時間が長く、辺縁で過ごした時間が短いことを示し（図３３Ａ～図３３Ｅ）、ＨＦＤ対照マウスよりも不安様行動が少ないことを示している。これらの結果は高架式十字迷路試験で補強され、そこでＦＧＦ２１治療マウスは、ＨＦＤ給餌対照マウスよりも開放アームで過ごした時間が長く、閉鎖アームで過ごした時間が短かった（図３３Ｆ）。

認知機能に対するＡＡＶ１－ＣＡＧ－ＦＧＦ２１ベクターによるＣＳＦ内治療の効果を試験するために、新規物体認識試験およびバーンズ迷路試験を行った。新規物体認識試験では、両用量のＡＡＶ１－ＣＡＧ－ＦＧＦ２１ベクターを投与されたマウスは、短期記憶試験および長期記憶試験の両方で、固形飼料給餌対照コホートと同等の認識指数を有したが（図３４）、ＨＦＤ給餌対照マウスは認識指数の悪化を示し、記憶障害を示している（図３４）。ＡＡＶ１ ＣＳＦ内治療マウスの学習能力をバーンズ迷路で測定した。２つの用量のＡＡＶ１ベクターで治療したＨＦＤ給餌マウスの穴に進入するための時間（図３５Ａ）および学習勾配（図３５Ｂ）で観察された減少は、ＡＡＶ－１治療マウスにおける学習能力が対照ＨＦＤ給餌マウスよりも増加し、固形飼料食を与えた対照マウスと同等のレベルに達したことを示した。

これらの結果はすべて、ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターによるＣＳＦ内治療が、糖尿病および肥満症に関連する神経筋および認知の低下を改善したことを示唆している。

［実施例１３］
ＦＧＦ２１をエンコードするＡＡＶベクターで治療した高齢マウスにおける神経筋機能および認知の改善
ＦＧＦ２１を用いたＣＳＦ内遺伝子治療が高齢動物において治療上の利益を発揮し得るかどうかを評価するために、１３月齢の雄Ｃ５７Ｂｌ６マウスに５×１０^９および１×１０^１０ｖｇ／マウスのＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターをＣＳＦ内投与した。未治療のコホートを対照とした。すべての実験群には、すべての実験中、固形飼料を与えた。

神経筋機能を評価するために、ロータロッド試験をすべての群に２３月齢で実施した。すべての用量のＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１でＣＳＦ内治療した高齢マウスは、未治療の高齢対応物よりも加速ロータロッド上に長く留まることができ（図３６Ａ）、協調およびバランスの改善を実証した。さらに、異なる試験中に、ＡＡＶ１治療マウスにおいてロータロッド脱落までの時間の試験依存的改善があり（図３６Ｂ～図３６Ｃ）、高齢治療マウスにおける学習の増強を示している。

さらに、２４～２５月齢までに、ＦＧＦ２１をエンコードするベクター５×１０^９ｖｇ／マウスで治療したマウスは、新規物体認識試験において、短期試験および長期試験の両方で、同齢コホート未治療マウスよりも著しく良好に実行し（図３７Ａ～図３７Ｂ）、ＡＡＶ１－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１ベクターでの治療が高齢マウスの神経筋機能を改善し、学習および短期記憶および長期記憶を増強したことを示唆している。

ホモサピエンスＦＧＦ２１のアミノ酸配列（配列番号１）
ＭＤＳＤＥＴＧＦＥＨＳＧＬＷＶＳＶＬＡＧＬＬＬＧＡＣＱＡＨＰＩＰＤＳＳＰＬＬＱＦＧＧＱＶＲＱＲＹＬＹＴＤＤＡＱＱＴＥＡＨＬＥＩＲＥＤＧＴＶＧＧＡＡＤＱＳＰＥＳＬＬＱＬＫＡＬＫＰＧＶＩＱＩＬＧＶＫＴＳＲＦＬＣＱＲＰＤＧＡＬＹＧＳＬＨＦＤＰＥＡＣＳＦＲＥＬＬＬＥＤＧＹＮＶＹＱＳＥＡＨＧＬＰＬＨＬＰＧＮＫＳＰＨＲＤＰＡＰＲＧＰＡＲＦＬＰＬＰＧＬＰＰＡＬＰＥＰＰＧＩＬＡＰＱＰＰＤＶＧＳＳＤＰＬＳＭＶＧＰＳＱＧＲＳＰＳＹＡＳ
ホモサピエンスＦＧＦ２１のヌクレオチド配列（配列番号４）
ＡＴＧＧＡＣＴＣＧＧＡＣＧＡＧＡＣＣＧＧＧＴＴＣＧＡＧＣＡＣＴＣＡＧＧＡＣＴＧＴＧＧＧＴＴＴＣＴＧＴＧＣＴＧＧＣＴＧＧＴＣＴＴＣＴＧＣＴＧＧＧＡＧＣＣＴＧＣＣＡＧＧＣＡＣＡＣＣＣＣＡＴＣＣＣＴＧＡＣＴＣＣＡＧＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＡＴＴＣＧＧＧＧＧＣＣＡＡＧＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＴＡＣＣＴＣＴＡＣＡＣＡＧＡＴＧＡＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＡＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＧＧＧＡＧＧＡＴＧＧＧＡＣＧＧＴＧＧＧＧＧＧＣＧＣＴＧＣＴＧＡＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＧＡＡＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＧＡＡＧＣＣＧＧＧＡＧＴＴＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＴＧＧＧＡＧＴＣＡＡＧＡＣＡＴＣＣＡＧＧＴＴＣＣＴＧＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＡＴＧＧＧＧＣＣＣＴＧＴＡＴＧＧＡＴＣＧＣＴＣＣＡＣＴＴＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＣＣＴＧＣＡＧＣＴＴＣＣＧＧＧＡＧＣＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＧＧＡＣＧＧＡＴＡＣＡＡＴＧＴＴＴＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＡＧＣＣＣＡＣＧＧＣＣＴＣＣＣＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＧＴＣＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＣＡＧＣＴＣＧＣＴＴＣＣＴＧＣＣＡＣＴＡＣＣＡＧＧＣＣＴＧＣＣＣＣＣＣＧＣＡＣＴＣＣＣＧＧＡＧＣＣＡＣＣＣＧＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＣＧＡＴＧＴＧＧＧＣＴＣＣＴＣＧＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＡＴＧＧＴＧＧＧＡＣＣＴＴＣＣＣＡＧＧＧＣＣＧＡＡＧＣＣＣＣＡＧＣＴＡＣＧＣＴＴＣＣＴＧＡ
ホモサピエンスＦＧＦ２１のコドン最適化ヌクレオチド配列－変異体１（配列番号５）
ＡＴＧＧＡＴＴＣＴＧＡＴＧＡＧＡＣＡＧＧＣＴＴＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＧＧＧＴＴＴＣＡＧＴＴＣＴＧＧＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＡＧＣＣＴＧＴＣＡＧＧＣＡＣＡＣＣＣＴＡＴＴＣＣＡＧＡＴＡＧＣＡＧＣＣＣＴＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＴＣＧＧＣＧＧＡＣＡＡＧＴＧＣＧＧＣＡＧＡＧＡＴＡＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＣＧＡＣＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＡＣＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＧＡＧＡＧＧＡＴＧＧＣＡＣＡＧＴＴＧＧＣＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＡＴＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＡＡＴＣＴＣＴＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＴＧＡＴＣＣＡＧＡＴＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＡＡＡＣＣＡＧＣＣＧＧＴＴＣＣＴＧＴＧＣＣＡＡＡＧＡＣＣＴＧＡＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＴＡＴＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＣＣＴＧＣＡＧＣＴＴＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＴＴＧＡＧＧＡＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣＧＴＧＴＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＧＧＣＣＣＡＴＧＧＣＣＴＧＣＣＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＣＣＴＧＧＡＡＡＣＡＡＧＡＧＣＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＡＴＣＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＡＧＡＴＴＴＣＴＧＣＣＴＣＴＴＣＣＴＧＧＡＴＴＧＣＣＴＣＣＴＧＣＴＣＴＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＴＧＡＴＧＴＧＧＧＣＡＧＣＴＣＴＧＡＴＣＣＴＣＴＧＡＧＣＡＴＧＧＴＣＧＧＡＣＣＴＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＡＴＣＴＣＣＴＡＧＣＴＡＣＧＣＣＴＣＴＴＧＡ
ホモサピエンスＦＧＦ２１のコドン最適化ヌクレオチド配列－変異体２（配列番号６）
ＡＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＡＡＡＣＣＧＧＧＴＴＣＧＡＧＣＡＣＡＧＣＧＧＴＣＴＧＴＧＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＴＣＣＴＧＧＧＡＧＣＣＴＧＴＣＡＧＧＣＧＣＡＣＣＣＣＡＴＣＣＣＴＧＡＣＴＣＣＴＣＧＣＣＧＣＴＧＣＴＧＣＡＡＴＴＣＧＧＣＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＡＧＡＧＡＴＡＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＣＧＡＣＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＣＣＧＡＡＧＣＣＣＡＣＣＴＧＧＡＡＡＴＴＣＧＧＧＡＧＧＡＣＧＧＧＡＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＴＧＣＡＧＡＴＣＡＧＴＣＡＣＣＣＧＡＧＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＣＴＧＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＧＴＧＡＴＴＣＡＧＡＴＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＡＡＡＣＴＴＣＣＣＧＣＴＴＣＣＴＴＴＧＣＣＡＡＣＧＧＣＣＧＧＡＴＧＧＡＧＣＴＣＴＧＴＡＣＧＧＡＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＴＣＧＡＣＣＣＣＧＡＡＧＣＣＴＧＣＴＣＡＴＴＣＣＧＣＧＡＧＣＴＧＣＴＣＣＴＴＧＡＧＧＡＣＧＧＣＴＡＴＡＡＣＧＴＧＴＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＧＧＣＣＣＡＴＧＧＡＣＴＣＣＣＣＣＴＧＣＡＴＣＴＧＣＣＣＧＧＣＡＡＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＣＡＣＣＧＧＧＡＴＣＣＴＧＣＣＣＣＡＡＧＡＧＧＣＣＣＡＧＣＴＣＧＧＴＴＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＣＣＧＧＧＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＧＣＧＴＴＧＣＣＣＧＡＡＣＣＣＣＣＴＧＧＴＡＴＣＣＴＧＧＣＣＣＣＧＣＡＡＣＣＡＣＣＴＧＡＣＧＴＣＧＧＴＴＣＧＴＣＧＧＡＣＣＣＧＣＴＧＡＧＣＡＴＧＧＴＣＧＧＴＣＣＧＡＧＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＴＣＣＣＣＧＴＣＣＴＡＣＧＣＡＴＣＣＴＧＡ
ホモサピエンスＦＧＦ２１のコドン最適化ヌクレオチド配列－変異体３（配列番号７）
ＡＴＧＧＡＴＴＣＣＧＡＣＧＡＡＡＣＴＧＧＡＴＴＴＧＡＡＣＡＴＴＣＡＧＧＧＣＴＧＴＧＧＧＴＣＴＣＴＧＴＧＣＴＧＧＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＧＧＧＣＴＴＧＴＣＡＧＧＣＴＣＡＣＣＣＣＡＴＣＣＣＴＧＡＣＡＧＣＴＣＣＣＣＴＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＴＣＧＧＡＧＧＡＣＡＧＧＴＧＣＧＧＣＡＧＡＧＡＴＡＣＣＴＧＴＡＴＡＣＣＧＡＣＧＡＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＣＡＧＡＧＧＣＡＣＡＣＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＧＧＧＡＧＧＡＣＧＧＡＡＣＣＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＣＣＧＡＴＣＡＧＴＣＴＣＣＣＧＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＣＣＴＧＧＣＧＴＧＡＴＣＣＡＧＡＴＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＧＧＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＣＣＧＡＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＴＡＣＧＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＴＣＧＡＴＣＣＣＧＡＧＧＣＣＴＧＴＴＣＴＴＴＴＡＧＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣＧＴＧＴＡＴＣＡＧＡＧＣＧＡＧＧＣＡＣＡＣＧＧＣＣＴＧＣＣＡＣＴＧＣＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＣＡＡＴＡＡＧＴＣＣＣＣＴＣＡＣＣＧＣＧＡＴＣＣＡＧＣＡＣＣＣＡＧＧＧＧＣＣＣＡＧＣＡＣＧＣＴＴＣＣＴＧＣＣＴＣＴＧＣＣＡＧＧＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＧＣＣＣＴＧＣＣＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＧＧＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＣＣＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＴＧＧＧＣＴＣＣＡＧＣＧＡＴＣＣＴＣＴＧＴＣＡＡＴＧＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＴＣＡＧＧＧＧＣＧＧＡＧＴＣＣＴＴＣＡＴＡＣＧＣＡＴＣＡＴＡＡ
マウスコドン最適化ＦＧＦ２１のヌクレオチド配列（配列番号９）
ＡＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＧＣＣＴＧＴＧＧＧＴＧＣＧＡＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＴＧＴＧＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＧＣＧＴＧＴＡＣＣＡＧＧＣＣＴＡＣＣＣＣＡＴＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴＡＧＣＣＣＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＴＴＧＧＣＧＧＡＣＡＡＧＴＧＣＧＧＣＡＧＡＧＡＴＡＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＣＧＡＣＧＡＣＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧＡＧＧＣＣＣＡＣＣＴＧＧＡＡＡＴＣＣＧＣＧＡＧＧＡＴＧＧＣＡＣＡＧＴＣＧＴＧＧＧＣＧＣＴＧＣＴＣＡＣＡＧＡＡＧＣＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧＧＣＣＣＴＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＧＴＧＡＴＣＣＡＧＡＴＣＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＣＣＴＧＴＧＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＣＧＧＣＧＣＣＣＴＧＴＡＣＧＧＣＴＣＴＣＣＴＣＡＣＴＴＣＧＡＴＣＣＴＧＡＧＧＣＣＴＧＣＡＧＣＴＴＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣＧＴＧＴＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＧＧＣＣＣＡＣＧＧＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＧＣＣＴＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＴＡＡＣＣＡＧＧＡＣＧＣＣＡＣＡＡＧＣＴＧＧＧＧＡＣＣＴＧＴＧＣＧＧＴＴＣＣＴＧＣＣＴＡＴＧＣＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＧＣＣＣＣＡＧＧＡＴＣＡＧＧＣＴＧＧＣＴＴＴＣＴＧＣＣＴＣＣＴＧＡＧＣＣＴＣＣＡＧＡＣＧＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧＡＧＣＡＴＧＧＴＧＧＡＡＣＣＴＣＴＧＣＡＧＧＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＣＡＧＣＴＡＣＧＣＣＴＣＴＴＧＡ
ＣＡＧプロモーターのヌクレオチド配列（配列番号２７）
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＴＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＧＡＧＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＴＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＡＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＴＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＣＡＡＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＡＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧ
ＣＭＶプロモーターのヌクレオチド配列（配列番号２８）
ＧＴＧＡＴＧＣＧＧＴＴＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＣＣＡＡＴＧＧＧＣＧＴＧＧＡＴＡＧＣＧＧＴＴＴＧＡＣＴＣＡＣＧＧＧＧＡＴＴＴＣＣＡＡＧＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＡＧＴＴＴＧＴＴＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＡＡＴＣＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＡＡＡＴＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＣＴＧＣＧＡＴＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＣＧＣＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＧＧＣＧＴＧＴＡＣＧＧＴＧＧＧＡＧＧＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴ
ＣＭＶエンハンサーのヌクレオチド配列（配列番号２９）
ＧＧＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧ
ＣＭＶプロモーターおよびＣＭＶエンハンサー配列（配列番号３４）
ＧＧＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＴＧＡＴＧＣＧＧＴＴＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＣＣＡＡＴＧＧＧＣＧＴＧＧＡＴＡＧＣＧＧＴＴＴＧＡＣＴＣＡＣＧＧＧＧＡＴＴＴＣＣＡＡＧＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＡＧＴＴＴＧＴＴＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＡＡＴＣＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＡＡＡＴＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＣＴＧＣＧＡＴＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＴＴＧＡＣＧＣＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＧＧＣＧＴＧＴＡＣＧＧＴＧＧＧＡＧＧＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴ
ＡＡＶ２ ５’ＩＴＲ（配列番号３０）
ＧＣＧＣＧＣＴＣ ＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣ ＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣ ＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣ
ＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧ ＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴ ＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧ ＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧ ＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧ
ＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧ ＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ ＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴ ＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴ
ＡＡＶ２ ３’ＩＴＲ（配列番号３１）
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴ ＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧ ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣ ＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧ
ＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧ ＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧ ＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣ ＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣ ＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧ ＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧ ＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡ ＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣ ＧＡＧＣＧＣＧＣ
ウサギβ－グロビンポリアデニル化シグナル（３’ＵＴＲおよびポリＡシグナルを含むウサギベータ－グロビンの隣接領域）（配列番号３３）
ＧＡＴＣＴＴＴＴＴＣＣＣＴＣＴＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＡＴＧＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＣＣＣＣＴＴＧＡＧＣＡＴＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＡＴＡＡＡＧＧＡＡＡＴＴＴＡＴＴＴＴＣＡＴＴＧＣＡＡＴＡＧＴＧＴＧＴＴＧＧＡＡＴＴＴＴＴＴＧＴＧＴＣＴＣＴＣＡＣＴＣＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣＡＡＡＴＣＡＴＴＴＡＡＡＡＣＡＴＣＡＧＡＡＴＧＡＧＴＡＴＴＴＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴＴＴＧＧＣＡＡＣＡＴＡＴＧＣＣＣＡＴＡＴＧＣＴＧＧＣＴＧＣＣＡＴＧＡＡＣＡＡＡＧＧＴＴＧＧＣＴＡＴＡＡＡＧＡＧＧＴＣＡＴＣＡＧＴＡＴＡＴＧＡＡＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴＴＣＣＴＴＡＴＴＣＣＡＴＡＧＡＡＡＡＧＣＣＴＴＧＡＣＴＴＧＡＧＧＴＴＡＧＡＴＴＴＴＴＴＴＴＡＴＡＴＴＴＴＧＴＴＴＴＧＴＧＴＴＡＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣＣＴＡＡＡＡＴＴＴＴＣＣＴＴＡＣＡＴＧＴＴＴＴＡＣＴＡＧＣＣＡＧＡＴＴＴＴＴＣＣＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＡＧＴＣＡＴＡＧＣＴＧＴＣＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＴＡＴＧＧＡＧＡＴＣ
ｍｉＲＴ配列
ｍｉＲＴ－１２２ａ（配列番号１２）：５’ＣＡＡＡＣＡＣＣＡＴＴＧＴＣＡＣＡＣＴＣＣＡ ３’、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡ－１２２ａ（ｍｉＲＢａｓｅデータベースへのアクセッション番号ＭＩ００００４４２）の標的。

ｍｉＲＴ－１５２（配列番号１４）：５’ＣＣＡＡＧＴＴＣＴＧＴＣＡＴＧＣＡＣＴＧＡ ３’、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡ－１５２（ＭＩ００００４６２）の標的。

ｍｉＲＴ－１９９ａ－５ｐ（配列番号１５）：５’ＧＡＡＣＡＧＧＴＡＧＴＣＴＧＡＡＣＡＣＴＧＧＧ ３’、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡ １９９ａ（ＭＩ００００２４２）の標的。

ｍｉＲＴ－１９９ａ－３ｐ（配列番号１６）：５’ＴＡＡＣＣＡＡＴＧＴＧＣＡＧＡＣＴＡＣＴＧＴ ３’、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡ－１９９ａ（ＭＩ００００２４２）の標的。

ｍｉＲＴ－２１５（配列番号１７）：５’ＧＴＣＴＧＴＣＡＡＴＴＣＡＴＡＧＧＴＣＡＴ ３’、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡ－２１５（ＭＩ００００２９１）の標的。

ｍｉＲＴ－１９２（配列番号１８）：５’ＧＧＣＴＧＴＣＡＡＴＴＣＡＴＡＧＧＴＣＡＧ ３’、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡ－１９２（ＭＩ００００２３４）の標的。

ｍｉＲＴ－１４８ａ（配列番号１９）：５’ＡＣＡＡＡＧＴＴＣＴＧＴＡＧＴＧＣＡＣＴＧＡ ３’、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡ－１４８ａ（ＭＩ００００２５３）の標的。

ｍｉＲＴ－１９４（配列番号２０）：５’ＴＣＣＡＣＡＴＧＧＡＧＴＴＧＣＴＧＴＴＡＣＡ ３’、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡ－１９４（ＭＩ００００４８８）の標的。

ｍｉＲＴ－１３３ａ（配列番号２１）：５’ＣＡＧＣＴＧＧＴＴＧＡＡＧＧＧＧＡＣＣＡＡＡ ３’、心臓で発現されるマイクロＲＮＡ－１３３ａ（ＭＩ００００４５０）の標的。

ｍｉＲＴ－２０６（配列番号２２）：５’ＣＣＡＣＡＣＡＣＴＴＣＣＴＴＡＣＡＴＴＣＣＡ ３’、心臓で発現されるマイクロＲＮＡ－２０６（ＭＩ００００４９０）の標的。

ｍｉＲＴ－１（配列番号１３）：５’ＴＴＡＣＡＴＡＣＴＴＣＴＴＴＡＣＡＴＴＣＣＡ ３’、心臓で発現されるマイクロＲＮＡ－１（ＭＩ００００６５１）の標的。

ｍｉＲＴ－２０８ａ－５ｐ（配列番号２３）：５’ＧＴＡＴＡＡＣＣＣＧＧＧＣＣＡＡＡＡＧＣＴＣ ３’、心臓で発現されるマイクロＲＮＡ－２０８ａ（ＭＩ００００２５１）の標的。

ｍｉＲＴ－２０８ａ－３ｐ（配列番号２４）：５’ＡＣＡＡＧＣＴＴＴＴＴＧＣＴＣＧＴＣＴＴＡＴ ３’、心臓で発現されるマイクロＲＮＡ－２０８ａ（ＭＩ００００２５１）の標的。

ｍｉＲＴ－４９９－５ｐ（配列番号２５）：５’ＡＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＣＡＡＧＴＣＴＴＡＡ ３’、心臓で発現されるマイクロＲＮＡ－４９９（ＭＩ０００３１８３）の標的。

ｐＡＡＶ－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１－ｄｍｉＲＴ（配列番号３５）
１ ＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧ ＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡ ＧＣＴＧＣＡＴＴＡＡ ＴＧＡＡＴＣＧＧＣＣ ＡＡＣＧＣＧＣＧＧＧ
５１ ＧＡＧＡＧＧＣＧＧＴ ＴＴＧＣＧＴＡＴＴＧ ＧＧＣＧＣＴＣＴＴＣ ＣＧＣＴＴＣＣＴＣＧ ＣＴＣＡＣＴＧＡＣＴ
１０１ ＣＧＣＴＧＣＧＣＴＣ ＧＧＴＣＧＴＴＣＧＧ ＣＴＧＣＧＧＣＧＡＧ ＣＧＧＴＡＴＣＡＧＣ ＴＣＡＣＴＣＡＡＡＧ
１５１ ＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣ ＧＧＴＴＡＴＣＣＡＣ ＡＧＡＡＴＣＡＧＧＧ ＧＡＴＡＡＣＧＣＡＧ ＧＡＡＡＧＡＡＣＡＴ
２０１ ＧＴＧＡＧＣＡＡＡＡ ＧＧＣＣＡＧＣＡＡＡ ＡＧＧＣＣＡＧＧＡＡ ＣＣＧＴＡＡＡＡＡＧ ＧＣＣＧＣＧＴＴＧＣ
２５１ ＴＧＧＣＧＴＴＴＴＴ ＣＣＡＴＡＧＧＣＴＣ ＣＧＣＣＣＣＣＣＴＧ ＡＣＧＡＧＣＡＴＣＡ ＣＡＡＡＡＡＴＣＧＡ
３０１ ＣＧＣＴＣＡＡＧＴＣ ＡＧＡＧＧＴＧＧＣＧ ＡＡＡＣＣＣＧＡＣＡ ＧＧＡＣＴＡＴＡＡＡ ＧＡＴＡＣＣＡＧＧＣ
３５１ ＧＴＴＴＣＣＣＣＣＴ ＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣ ＴＣＧＴＧＣＧＣＴＣ ＴＣＣＴＧＴＴＣＣＧ ＡＣＣＣＴＧＣＣＧＣ
４０１ ＴＴＡＣＣＧＧＡＴＡ ＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣ ＴＴＴＣＴＣＣＣＴＴ ＣＧＧＧＡＡＧＣＧＴ ＧＧＣＧＣＴＴＴＣＴ
４５１ ＣＡＴＡＧＣＴＣＡＣ ＧＣＴＧＴＡＧＧＴＡ ＴＣＴＣＡＧＴＴＣＧ ＧＴＧＴＡＧＧＴＣＧ ＴＴＣＧＣＴＣＣＡＡ
５０１ ＧＣＴＧＧＧＣＴＧＴ ＧＴＧＣＡＣＧＡＡＣ ＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡ ＧＣＣＣＧＡＣＣＧＣ ＴＧＣＧＣＣＴＴＡＴ
５５１ ＣＣＧＧＴＡＡＣＴＡ ＴＣＧＴＣＴＴＧＡＧ ＴＣＣＡＡＣＣＣＧＧ ＴＡＡＧＡＣＡＣＧＡ ＣＴＴＡＴＣＧＣＣＡ
６０１ ＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧ ＣＣＡＣＴＧＧＴＡＡ ＣＡＧＧＡＴＴＡＧＣ ＡＧＡＧＣＧＡＧＧＴ ＡＴＧＴＡＧＧＣＧＧ
６５１ ＴＧＣＴＡＣＡＧＡＧ ＴＴＣＴＴＧＡＡＧＴ ＧＧＴＧＧＣＣＴＡＡ ＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣ ＡＣＴＡＧＡＡＧＡＡ
７０１ ＣＡＧＴＡＴＴＴＧＧ ＴＡＴＣＴＧＣＧＣＴ ＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣ ＣＡＧＴＴＡＣＣＴＴ ＣＧＧＡＡＡＡＡＧＡ
７５１ ＧＴＴＧＧＴＡＧＣＴ ＣＴＴＧＡＴＣＣＧＧ ＣＡＡＡＣＡＡＡＣＣ ＡＣＣＧＣＴＧＧＴＡ ＧＣＧＧＴＧＧＴＴＴ
８０１ ＴＴＴＴＧＴＴＴＧＣ ＡＡＧＣＡＧＣＡＧＡ ＴＴＡＣＧＣＧＣＡＧ ＡＡＡＡＡＡＡＧＧＡ ＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧ
８５１ ＡＴＣＣＴＴＴＧＡＴ ＣＴＴＴＴＣＴＡＣＧ ＧＧＧＴＣＴＧＡＣＧ ＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡ ＣＧＡＡＡＡＣＴＣＡ
９０１ ＣＧＴＴＡＡＧＧＧＡ ＴＴＴＴＧＧＴＣＡＴ ＧＡＧＡＴＴＡＴＣＡ ＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴ ＴＣＡＣＣＴＡＧＡＴ
９５１ ＣＣＴＴＴＴＡＡＡＴ ＴＡＡＡＡＡＴＧＡＡ ＧＴＴＴＴＡＡＡＴＣ ＡＡＴＣＴＡＡＡＧＴ ＡＴＡＴＡＴＧＡＧＴ
１００１ ＡＡＡＣＴＴＧＧＴＣ ＴＧＡＣＡＧＴＴＡＣ ＣＡＡＴＧＣＴＴＡＡ ＴＣＡＧＴＧＡＧＧＣ ＡＣＣＴＡＴＣＴＣＡ
１０５１ ＧＣＧＡＴＣＴＧＴＣ ＴＡＴＴＴＣＧＴＴＣ ＡＴＣＣＡＴＡＧＴＴ ＧＣＣＴＧＡＣＴＣＣ ＣＣＧＴＣＧＴＧＴＡ
１１０１ ＧＡＴＡＡＣＴＡＣＧ ＡＴＡＣＧＧＧＡＧＧ ＧＣＴＴＡＣＣＡＴＣ ＴＧＧＣＣＣＣＡＧＴ ＧＣＴＧＣＡＡＴＧＡ
１１５１ ＴＡＣＣＧＣＧＡＧＡ ＣＣＣＡＣＧＣＴＣＡ ＣＣＧＧＣＴＣＣＡＧ ＡＴＴＴＡＴＣＡＧＣ ＡＡＴＡＡＡＣＣＡＧ
１２０１ ＣＣＡＧＣＣＧＧＡＡ ＧＧＧＣＣＧＡＧＣＧ ＣＡＧＡＡＧＴＧＧＴ ＣＣＴＧＣＡＡＣＴＴ ＴＡＴＣＣＧＣＣＴＣ
１２５１ ＣＡＴＣＣＡＧＴＣＴ ＡＴＴＡＡＴＴＧＴＴ ＧＣＣＧＧＧＡＡＧＣ ＴＡＧＡＧＴＡＡＧＴ ＡＧＴＴＣＧＣＣＡＧ
１３０１ ＴＴＡＡＴＡＧＴＴＴ ＧＣＧＣＡＡＣＧＴＴ ＧＴＴＧＣＣＡＴＴＧ ＣＴＡＣＡＧＧＣＡＴ ＣＧＴＧＧＴＧＴＣＡ
１３５１ ＣＧＣＴＣＧＴＣＧＴ ＴＴＧＧＴＡＴＧＧＣ ＴＴＣＡＴＴＣＡＧＣ ＴＣＣＧＧＴＴＣＣＣ ＡＡＣＧＡＴＣＡＡＧ
１４０１ ＧＣＧＡＧＴＴＡＣＡ ＴＧＡＴＣＣＣＣＣＡ ＴＧＴＴＧＴＧＣＡＡ ＡＡＡＡＧＣＧＧＴＴ ＡＧＣＴＣＣＴＴＣＧ
１４５１ ＧＴＣＣＴＣＣＧＡＴ ＣＧＴＴＧＴＣＡＧＡ ＡＧＴＡＡＧＴＴＧＧ ＣＣＧＣＡＧＴＧＴＴ ＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧ
１５０１ ＧＴＴＡＴＧＧＣＡＧ ＣＡＣＴＧＣＡＴＡＡ ＴＴＣＴＣＴＴＡＣＴ ＧＴＣＡＴＧＣＣＡＴ ＣＣＧＴＡＡＧＡＴＧ
１５５１ ＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧ ＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴ ＡＣＴＣＡＡＣＣＡＡ ＧＴＣＡＴＴＣＴＧＡ ＧＡＡＴＡＧＴＧＴＡ
１６０１ ＴＧＣＧＧＣＧＡＣＣ ＧＡＧＴＴＧＣＴＣＴ ＴＧＣＣＣＧＧＣＧＴ ＣＡＡＴＡＣＧＧＧＡ ＴＡＡＴＡＣＣＧＣＧ
１６５１ ＣＣＡＣＡＴＡＧＣＡ ＧＡＡＣＴＴＴＡＡＡ ＡＧＴＧＣＴＣＡＴＣ ＡＴＴＧＧＡＡＡＡＣ ＧＴＴＣＴＴＣＧＧＧ
１７０１ ＧＣＧＡＡＡＡＣＴＣ ＴＣＡＡＧＧＡＴＣＴ ＴＡＣＣＧＣＴＧＴＴ ＧＡＧＡＴＣＣＡＧＴ ＴＣＧＡＴＧＴＡＡＣ
１７５１ ＣＣＡＣＴＣＧＴＧＣ ＡＣＣＣＡＡＣＴＧＡ ＴＣＴＴＣＡＧＣＡＴ ＣＴＴＴＴＡＣＴＴＴ ＣＡＣＣＡＧＣＧＴＴ
１８０１ ＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧ ＣＡＡＡＡＡＣＡＧＧ ＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴ ＧＣＣＧＣＡＡＡＡＡ ＡＧＧＧＡＡＴＡＡＧ
１８５１ ＧＧＣＧＡＣＡＣＧＧ ＡＡＡＴＧＴＴＧＡＡ ＴＡＣＴＣＡＴＡＣＴ ＣＴＴＣＣＴＴＴＴＴ ＣＡＡＴＡＴＴＡＴＴ
１９０１ ＧＡＡＧＣＡＴＴＴＡ ＴＣＡＧＧＧＴＴＡＴ ＴＧＴＣＴＣＡＴＧＡ ＧＣＧＧＡＴＡＣＡＴ ＡＴＴＴＧＡＡＴＧＴ
１９５１ ＡＴＴＴＡＧＡＡＡＡ ＡＴＡＡＡＣＡＡＡＴ ＡＧＧＧＧＴＴＣＣＧ ＣＧＣＡＣＡＴＴＴＣ ＣＣＣＧＡＡＡＡＧＴ
２００１ ＧＣＣＡＣＣＴＧＡＣ ＧＴＣＴＡＡＧＡＡＡ ＣＣＡＴＴＡＴＴＡＴ ＣＡＴＧＡＣＡＴＴＡ ＡＣＣＴＡＴＡＡＡＡ
２０５１ ＡＴＡＧＧＣＧＴＡＴ ＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣ ＴＴＴＣＧＴＣＴＣＧ ＣＧＣＧＴＴＴＣＧＧ ＴＧＡＴＧＡＣＧＧＴ
２１０１ ＧＡＡＡＡＣＣＴＣＴ ＧＡＣＡＣＡＴＧＣＡ ＧＣＴＣＣＣＧＧＡＧ ＡＣＧＧＴＣＡＣＡＧ ＣＴＴＧＴＣＴＧＴＡ
２１５１ ＡＧＣＧＧＡＴＧＣＣ ＧＧＧＡＧＣＡＧＡＣ ＡＡＧＣＣＣＧＴＣＡ ＧＧＧＣＧＣＧＴＣＡ ＧＣＧＧＧＴＧＴＴＧ
２２０１ ＧＣＧＧＧＴＧＴＣＧ ＧＧＧＣＴＧＧＣＴＴ ＡＡＣＴＡＴＧＣＧＧ ＣＡＴＣＡＧＡＧＣＡ ＧＡＴＴＧＴＡＣＴＧ
２２５１ ＡＧＡＧＴＧＣＡＣＣ ＡＴＡＴＧＣＧＧＴＧ ＴＧＡＡＡＴＡＣＣＧ ＣＡＣＡＧＡＴＧＣＧ ＴＡＡＧＧＡＧＡＡＡ
２３０１ ＡＴＡＣＣＧＣＡＴＣ ＡＧＧＣＧＡＴＴＣＣ ＡＡＣＡＴＣＣＡＡＴ ＡＡＡＴＣＡＴＡＣＡ ＧＧＣＡＡＧＧＣＡＡ
２３５１ ＡＧＡＡＴＴＡＧＣＡ ＡＡＡＴＴＡＡＧＣＡ ＡＴＡＡＡＧＣＣＴＣ ＡＧＡＧＣＡＴＡＡＡ ＧＣＴＡＡＡＴＣＧＧ
２４０１ ＴＴＧＴＡＣＣＡＡＡ ＡＡＣＡＴＴＡＴＧＡ ＣＣＣＴＧＴＡＡＴＡ ＣＴＴＴＴＧＣＧＧＧ ＡＧＡＡＧＣＣＴＴＴ
２４５１ ＡＴＴＴＣＡＡＣＧＣ ＡＡＧＧＡＴＡＡＡＡ ＡＴＴＴＴＴＡＧＡＡ ＣＣＣＴＣＡＴＡＴＡ ＴＴＴＴＡＡＡＴＧＣ
２５０１ ＡＡＴＧＣＣＴＧＡＧ ＴＡＡＴＧＴＧＴＡＧ ＧＴＡＡＡＧＡＴＴＣ ＡＡＡＣＧＧＧＴＧＡ ＧＡＡＡＧＧＣＣＧＧ
２５５１ ＡＧＡＣＡＧＴＣＡＡ ＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡ ＡＴＡＴＧＡＴＡＴＴ ＣＡＡＣＣＧＴＴＣＴ ＡＧＣＴＧＡＴＡＡＡ
２６０１ ＴＴＣＡＴＧＣＣＧＧ ＡＧＡＧＧＧＴＡＧＣ ＴＡＴＴＴＴＴＧＡＧ ＡＧＧＴＣＴＣＴＡＣ ＡＡＡＧＧＣＴＡＴＣ
２６５１ ＡＧＧＴＣＡＴＴＧＣ ＣＴＧＡＧＡＧＴＣＴ ＧＧＡＧＣＡＡＡＣＡ ＡＧＡＧＡＡＴＣＧＡ ＴＧＡＡＣＧＧＴＡＡ
２７０１ ＴＣＧＴＡＡＡＡＣＴ ＡＧＣＡＴＧＴＣＡＡ ＴＣＡＴＡＴＧＴＡＣ ＣＣＣＧＧＴＴＧＡＴ ＡＡＴＣＡＧＡＡＡＡ
２７５１ ＧＣＣＣＣＡＡＡＡＡ ＣＡＧＧＡＡＧＡＴＴ ＧＴＡＴＡＡＧＣＡＡ ＡＴＡＴＴＴＡＡＡＴ ＴＧＴＡＡＧＣＧＴＴ
２８０１ ＡＡＴＡＴＴＴＴＧＴ ＴＡＡＡＡＴＴＣＧＣ ＧＴＴＡＡＡＴＴＴＴ ＴＧＴＴＡＡＡＴＣＡ ＧＣＴＣＡＴＴＴＴＴ
２８５１ ＴＡＡＣＣＡＡＴＡＧ ＧＣＣＧＡＡＡＴＣＧ ＧＣＡＡＡＡＴＣＣＣ ＴＴＡＴＡＡＡＴＣＡ ＡＡＡＧＡＡＴＡＧＡ
２９０１ ＣＣＧＡＧＡＴＡＧＧ ＧＴＴＧＡＧＴＧＴＴ ＧＴＴＣＣＡＧＴＴＴ ＧＧＡＡＣＡＡＧＡＧ ＴＣＣＡＣＴＡＴＴＡ
２９５１ ＡＡＧＡＡＣＧＴＧＧ ＡＣＴＣＣＡＡＣＧＴ ＣＡＡＡＧＧＧＣＧＡ ＡＡＡＡＣＣＧＴＣＴ ＡＴＣＡＧＧＧＣＧＡ
３００１ ＴＧＧＣＣＣＡＣＴＡ ＣＧＴＧＡＡＣＣＡＴ ＣＡＣＣＣＴＡＡＴＣ ＡＡＧＴＴＴＴＴＴＧ ＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴ
３０５１ ＧＣＣＧＴＡＡＡＧＣ ＡＣＴＡＡＡＴＣＧＧ ＡＡＣＣＣＴＡＡＡＧ ＧＧＡＧＣＣＣＣＣＧ ＡＴＴＴＡＧＡＧＣＴ
３１０１ ＴＧＡＣＧＧＧＧＡＡ ＡＧＣＣＧＧＣＧＡＡ ＣＧＴＧＧＣＧＡＧＡ ＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡ ＡＧＡＡＡＧＣＧＡＡ
３１５１ ＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣ ＧＣＴＡＧＧＧＣＧＣ ＴＧＧＣＡＡＧＴＧＴ ＡＧＣＧＧＴＣＡＣＧ ＣＴＧＣＧＣＧＴＡＡ
３２０１ ＣＣＡＣＣＡＣＡＣＣ ＣＧＣＣＧＣＧＣＴＴ ＡＡＴＧＣＧＣＣＧＣ ＴＡＣＡＧＧＧＣＧＣ ＧＴＡＣＴＡＴＧＧＴ
３２５１ ＴＧＣＴＴＴＧＡＣＧ ＡＧＣＡＣＧＴＡＴＡ ＡＣＧＴＧＣＴＴＴＣ ＣＴＣＧＴＴＡＧＡＡ ＴＣＡＧＡＧＣＧＧＧ
３３０１ ＡＧＣＴＡＡＡＣＡＧ ＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴ ＡＡＡＧＧＧＡＴＴＴ ＴＡＧＡＣＡＧＧＡＡ ＣＧＧＴＡＣＧＣＣＡ
３３５１ ＧＡＡＴＣＣＴＧＡＧ ＡＡＧＴＧＴＴＴＴＴ ＡＴＡＡＴＣＡＧＴＧ ＡＧＧＣＣＡＣＣＧＡ ＧＴＡＡＡＡＧＡＧＴ
３４０１ ＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡ ＣＧＣＡＡＡＴＴＡＡ ＣＣＧＴＴＧＴＣＧＣ ＡＡＴＡＣＴＴＣＴＴ ＴＧＡＴＴＡＧＴＡＡ
３４５１ ＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴ ＴＧＣＣＴＧＡＧＴＡ ＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡ ＡＡＣＴＡＴＣＧＧＣ ＣＴＴＧＣＴＧＧＴＡ
３５０１ ＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡ ＣＡＡＴＡＴＴＡＣＣ ＧＣＣＡＧＣＣＡＴＴ ＧＣＡＡＣＧＧＡＡＴ ＣＧＣＣＡＴＴＣＧＣ
３５５１ ＣＡＴＴＣＡＧＧＣＴ ＧＣＧＣＡＡＣＴＧＴ ＴＧＧＧＡＡＧＧＧＣ ＧＡＴＣＧＧＴＧＣＧ ＧＧＣＣＴＣＴＴＣＣ
３６０１ ＡＣＴＧＡＧＧＣＣＣ ＡＧＣＴＧＣＧＣＧＣ ＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣ ＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧ ＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
３６５１ ＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴ ＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴ ＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣ ＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧ ＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧ
３７０１ ＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡ ＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣ ＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡ ＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣ ＣＴＴＧＴＡＧＴＴＡ
３７５１ ＡＴＧＡＴＴＡＡＣＣ ＣＧＣＣＡＴＧＣＴＡ ＣＴＴＡＴＣＴＡＣＴ ＣＧＡＣＡＴＴＧＡＴ ＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧ
３８０１ ＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧ ＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡ ＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴ ＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣ ＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧ
３８５１ ＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴ ＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴ ＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧ ＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧ ＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣ
３９０１ ＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣ ＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣ ＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧ ＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣ ＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣ
３９５１ ＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧ ＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴ ＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧ ＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴ ＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡ
４００１ ＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴ ＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴ ＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣ ＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧ ＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴ
４０５１ ＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡ ＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡ ＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣ ＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧ ＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴ
４１０１ ＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧ ＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡ ＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡ ＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡ ＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧ
４１５１ ＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴ ＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧ ＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴ ＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣ ＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣ
４２０１ ＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴ ＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣ ＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴ ＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴ ＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴ
４２５１ ＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧ ＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧ ＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧ ＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧ ＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧ
４３０１ ＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧ ＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧ ＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡ ＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧ ＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡ
４３５１ ＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡ ＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴ ＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴ ＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧ ＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧ
４４０１ ＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧ ＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡ ＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣ ＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧ ＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧ
４４５１ ＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣ ＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣ ＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧ ＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧ ＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣ
４５０１ ＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣ ＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴ ＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧ ＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣ ＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣ
４５５１ ＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧ ＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴ ＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴ ＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧ ＣＴＴＧＴＴＴＣＴＴ
４６０１ ＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴ ＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣ ＣＴＴＧＡＧＧＧＧＣ ＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧ ＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣ
４６５１ ＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧ ＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧ ＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧ ＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧ ＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣ
４７０１ ＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣ ＴＣＣＧＣＧＣＴＧＣ ＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧ ＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣ ＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧ
４７５１ ＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧ ＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣ ＡＧＴＧＴＧＣＧＣＧ ＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣ ＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣ
４８０１ ＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣ ＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧ ＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧ ＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣ ＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧ
４８５１ ＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴ ＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡ ＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧ ＴＧＧＧＣＧＣＧＴＣ ＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧ
４９０１ ＣＡＡＣＣＣＣＣＣＣ ＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣ ＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴ ＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧ ＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣ
４９５１ ＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧ ＣＴＣＣＧＴＡＣＧＧ ＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣ ＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣ ＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧ
５００１ ＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧ ＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧ ＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧ ＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣ ＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣ
５０５１ ＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴ ＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧ ＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣ ＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧ ＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧ
５１０１ ＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧ ＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡ ＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴ ＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡ ＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡ
５１５１ ＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧ ＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧ ＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴ ＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣ ＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧ
５２０１ ＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣ ＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣ ＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣ ＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣ ＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣ
５２５１ ＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧ ＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧ ＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴ ＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧ ＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣ
５３０１ ＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴ ＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧ ＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴ ＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧ ＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣ
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５４０１ ＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡ ＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡ ＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡ ＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣ ＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣ
５４５１ ＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧ ＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧ ＧＴＴＡＴＴＧＴＧＣ ＴＧＴＣＴＣＡＴＣＡ ＴＴＴＴＧＧＣＡＡＡ
５５０１ ＧＡＡＴＴＧＡＴＴＡ ＡＴＴＣＧＡＧＣＧＡ ＡＣＧＣＧＴＣＧＡＧ ＴＣＧＣＴＣＧＧＴＡ ＣＧＡＴＴＴＡＡＡＴ
５５５１ ＴＧＡＡＴＴＧＧＣＣ ＴＣＧＡＧＣＧＣＡＡ ＧＣＴＴＧＡＧＣＴＡ ＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴ ＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧ
５６０１ ＡＧＡＡＧＣＡＧＡＧ ＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴ ＧＧＧＣＣＴＧＴＧＧ ＧＴＧＣＧＡＣＴＧＣ ＴＧＣＴＧＧＣＴＧＴ
５６５１ ＧＴＴＴＣＴＧＣＴＧ ＧＧＣＧＴＧＴＡＣＣ ＡＧＧＣＣＴＡＣＣＣ ＣＡＴＣＣＣＴＧＡＣ ＴＣＴＡＧＣＣＣＣＣ
５７０１ ＴＧＣＴＧＣＡＧＴＴ ＴＧＧＣＧＧＡＣＡＡ ＧＴＧＣＧＧＣＡＧＡ ＧＡＴＡＣＣＴＧＴＡ ＣＡＣＣＧＡＣＧＡＣ
５７５１ ＧＡＣＣＡＧＧＡＣＡ ＣＣＧＡＧＧＣＣＣＡ ＣＣＴＧＧＡＡＡＴＣ ＣＧＣＧＡＧＧＡＴＧ ＧＣＡＣＡＧＴＣＧＴ
５８０１ ＧＧＧＣＧＣＴＧＣＴ ＣＡＣＡＧＡＡＧＣＣ ＣＴＧＡＧＡＧＣＣＴ ＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧ ＡＡＧＧＣＣＣＴＧＡ
５８５１ ＡＧＣＣＣＧＧＣＧＴ ＧＡＴＣＣＡＧＡＴＣ ＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡ ＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧ ＡＴＴＣＣＴＧＴＧＣ
５９０１ ＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧ ＡＣＧＧＣＧＣＣＣＴ ＧＴＡＣＧＧＣＴＣＴ ＣＣＴＣＡＣＴＴＣＧ ＡＴＣＣＴＧＡＧＧＣ
５９５１ ＣＴＧＣＡＧＣＴＴＣ ＡＧＡＧＡＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡ ＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣ ＧＴＧＴＡＣＣＡＧＴ
６００１ ＣＴＧＡＧＧＣＣＣＡ ＣＧＧＣＣＴＧＣＣＣ ＣＴＧＡＧＡＣＴＧＣ ＣＴＣＡＧＡＡＧＧＡ ＣＡＧＣＣＣＴＡＡＣ
６０５１ ＣＡＧＧＡＣＧＣＣＡ ＣＡＡＧＣＴＧＧＧＧ ＡＣＣＴＧＴＧＣＧＧ ＴＴＣＣＴＧＣＣＴＡ ＴＧＣＣＴＧＧＡＣＴ
６１０１ ＧＣＴＧＣＡＣＧＡＧ ＣＣＣＣＡＧＧＡＴＣ ＡＧＧＣＴＧＧＣＴＴ ＴＣＴＧＣＣＴＣＣＴ ＧＡＧＣＣＴＣＣＡＧ
６１５１ ＡＣＧＴＧＧＧＣＡＧ ＣＡＧＣＧＡＣＣＣＴ ＣＴＧＡＧＣＡＴＧＧ ＴＧＧＡＡＣＣＴＣＴ ＧＣＡＧＧＧＣＡＧＡ
６２０１ ＡＧＣＣＣＣＡＧＣＴ ＡＣＧＣＣＴＣＴＴＧ ＡＧＡＡＴＧＣＧＧＧ ＣＣＣＧＧＴＡＣＣＣ ＣＣＧＡＣＧＣＧＧＣ
６２５１ ＣＧＣＴＡＡＴＴＣＴ ＡＧＡＴＣＧＣＧＡＡ ＣＡＡＡＣＡＣＣＡＴ ＴＧＴＣＡＣＡＣＴＣ ＣＡＧＴＡＴＡＣＡＣ
６３０１ ＡＡＡＣＡＣＣＡＴＴ ＧＴＣＡＣＡＣＴＣＣ ＡＧＡＴＡＴＣＡＣＡ ＡＡＣＡＣＣＡＴＴＧ ＴＣＡＣＡＣＴＣＣＡ
６３５１ ＡＧＧＣＧＡＡＣＡＡ ＡＣＡＣＣＡＴＴＧＴ ＣＡＣＡＣＴＣＣＡＡ ＧＧＣＴＡＴＴＣＴＡ ＧＡＴＣＧＣＧＡＡＴ
６４０１ ＴＡＣＡＴＡＣＴＴＣ ＴＴＴＡＣＡＴＴＣＣ ＡＧＴＡＴＡＣＡＴＴ ＡＣＡＴＡＣＴＴＣＴ ＴＴＡＣＡＴＴＣＣＡ
６４５１ ＧＡＴＡＴＣＡＴＴＡ ＣＡＴＡＣＴＴＣＴＴ ＴＡＣＡＴＴＣＣＡＡ ＧＧＣＧＡＡＴＴＡＣ ＡＴＡＣＴＴＣＴＴＴ
６５０１ ＡＣＡＴＴＣＣＡＡＧ ＧＣＴＡＣＣＴＧＡＧ ＧＣＣＣＧＧＧＧＧＴ ＡＣＣＴＣＴＴＡＡＴ ＴＡＡＣＴＧＧＣＣＴ
６５５１ ＣＡＴＧＧＧＣＣＴＴ ＣＣＧＣＴＣＡＣＴＧ ＣＣＣＧＣＴＴＴＣＣ ＡＧＴＣＧＧＧＡＡＡ ＣＣＴＧＴＣＧＴＧＣ
６６０１ ＣＡＧＴＣＡＧＧＴＧ ＣＡＧＧＣＴＧＣＣＴ ＡＴＣＡＧＡＡＧＧＴ ＧＧＴＧＧＣＴＧＧＴ ＧＴＧＧＣＣＡＡＴＧ
６６５１ ＣＣＣＴＧＧＣＴＣＡ ＣＡＡＡＴＡＣＣＡＣ ＴＧＡＧＡＴＣＴＴＴ ＴＴＣＣＣＴＣＴＧＣ ＣＡＡＡＡＡＴＴＡＴ
６７０１ ＧＧＧＧＡＣＡＴＣＡ ＴＧＡＡＧＣＣＣＣＴ ＴＧＡＧＣＡＴＣＴＧ ＡＣＴＴＣＴＧＧＣＴ ＡＡＴＡＡＡＧＧＡＡ
６７５１ ＡＴＴＴＡＴＴＴＴＣ ＡＴＴＧＣＡＡＴＡＧ ＴＧＴＧＴＴＧＧＡＡ ＴＴＴＴＴＴＧＴＧＴ ＣＴＣＴＣＡＣＴＣＧ
６８０１ ＧＡＡＧＧＡＣＡＴＡ ＴＧＧＧＡＧＧＧＣＡ ＡＡＴＣＡＴＴＴＡＡ ＡＡＣＡＴＣＡＧＡＡ ＴＧＡＧＴＡＴＴＴＧ
６８５１ ＧＴＴＴＡＧＡＧＴＴ ＴＧＧＣＡＡＣＡＴＡ ＴＧＣＣＣＡＴＡＴＧ ＣＴＧＧＣＴＧＣＣＡ ＴＧＡＡＣＡＡＡＧＧ
６９０１ ＴＴＧＧＣＴＡＴＡＡ ＡＧＡＧＧＴＣＡＴＣ ＡＧＴＡＴＡＴＧＡＡ ＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴ ＧＣＴＧＴＣＣＡＴＴ
６９５１ ＣＣＴＴＡＴＴＣＣＡ ＴＡＧＡＡＡＡＧＣＣ ＴＴＧＡＣＴＴＧＡＧ ＧＴＴＡＧＡＴＴＴＴ ＴＴＴＴＡＴＡＴＴＴ
７００１ ＴＧＴＴＴＴＧＴＧＴ ＴＡＴＴＴＴＴＴＴＣ ＴＴＴＡＡＣＡＴＣＣ ＣＴＡＡＡＡＴＴＴＴ ＣＣＴＴＡＣＡＴＧＴ
７０５１ ＴＴＴＡＣＴＡＧＣＣ ＡＧＡＴＴＴＴＴＣＣ ＴＣＣＴＣＴＣＣＴＧ ＡＣＴＡＣＴＣＣＣＡ ＧＴＣＡＴＡＧＣＴＧ
７１０１ ＴＣＣＣＴＣＴＴＣＴ ＣＴＴＡＴＧＧＡＧＡ ＴＣＣＣＴＣＧＡＣＣ ＴＧＣＡＧＣＣＣＡＡ ＧＣＴＧＴＡＧＡＴＡ
７１５１ ＡＧＴＡＧＣＡＴＧＧ ＣＧＧＧＴＴＡＡＴＣ ＡＴＴＡＡＣＴＡＣＡ ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴ ＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧ
７２０１ ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣ ＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧ ＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧ ＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧ ＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣ
７２５１ ＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣ ＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧ ＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧ ＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡ ＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣ
７３０１ ＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ ＣＴＧＧＣＧＴＡＡ
ＡＡＶ２ ５’ＩＴＲ：３６１５－３７４２ ｂｐ
ＣＡＧプロモーター：３７８２－５４５２ ｂｐ
ハツカネズミコドン最適化ＦＧＦ２１（ｍｏＦＧＦ２１）：５５８９－６２２１ ｂｐ
ｄｍｉＲＴ（ｍｉＲＴ－１２２ａの４つのコピーおよびｍｉＲＴ－１の４つのコピー）：６２５４～６５１４ ｂｐ
ウサギβグロビンポリＡシグナル（ポリＡシグナルを含むウサギベータ－グロビンの３’ＵＴＲおよび３’隣接領域）：６６７４－６７６４ ｂｐ
ＡＡＶ２ ３’ＩＴＲ：７１８１－７３０８ ｂｐ
ｐＡＡＶ－ＣＡＧ－ｍｏＦＧＦ２１（配列番号４６）
１ ＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧ ＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡ ＧＣＴＧＣＡＴＴＡＡ ＴＧＡＡＴＣＧＧＣＣ ＡＡＣＧＣＧＣＧＧＧ ＧＡＧＡＧＧＣＧＧＴ
６１ ＴＴＧＣＧＴＡＴＴＧ ＧＧＣＧＣＴＣＴＴＣ ＣＧＣＴＴＣＣＴＣＧ ＣＴＣＡＣＴＧＡＣＴ ＣＧＣＴＧＣＧＣＴＣ ＧＧＴＣＧＴＴＣＧＧ
１２１ ＣＴＧＣＧＧＣＧＡＧ ＣＧＧＴＡＴＣＡＧＣ ＴＣＡＣＴＣＡＡＡＧ ＧＣＧＧＴＡＡＴＡＣ ＧＧＴＴＡＴＣＣＡＣ ＡＧＡＡＴＣＡＧＧＧ
１８１ ＧＡＴＡＡＣＧＣＡＧ ＧＡＡＡＧＡＡＣＡＴ ＧＴＧＡＧＣＡＡＡＡ ＧＧＣＣＡＧＣＡＡＡ ＡＧＧＣＣＡＧＧＡＡ ＣＣＧＴＡＡＡＡＡＧ
２４１ ＧＣＣＧＣＧＴＴＧＣ ＴＧＧＣＧＴＴＴＴＴ ＣＣＡＴＡＧＧＣＴＣ ＣＧＣＣＣＣＣＣＴＧ ＡＣＧＡＧＣＡＴＣＡ ＣＡＡＡＡＡＴＣＧＡ
３０１ ＣＧＣＴＣＡＡＧＴＣ ＡＧＡＧＧＴＧＧＣＧ ＡＡＡＣＣＣＧＡＣＡ ＧＧＡＣＴＡＴＡＡＡ ＧＡＴＡＣＣＡＧＧＣ ＧＴＴＴＣＣＣＣＣＴ
３６１ ＧＧＡＡＧＣＴＣＣＣ ＴＣＧＴＧＣＧＣＴＣ ＴＣＣＴＧＴＴＣＣＧ ＡＣＣＣＴＧＣＣＧＣ ＴＴＡＣＣＧＧＡＴＡ ＣＣＴＧＴＣＣＧＣＣ
４２１ ＴＴＴＣＴＣＣＣＴＴ ＣＧＧＧＡＡＧＣＧＴ ＧＧＣＧＣＴＴＴＣＴ ＣＡＴＡＧＣＴＣＡＣ ＧＣＴＧＴＡＧＧＴＡ ＴＣＴＣＡＧＴＴＣＧ
４８１ ＧＴＧＴＡＧＧＴＣＧ ＴＴＣＧＣＴＣＣＡＡ ＧＣＴＧＧＧＣＴＧＴ ＧＴＧＣＡＣＧＡＡＣ ＣＣＣＣＣＧＴＴＣＡ ＧＣＣＣＧＡＣＣＧＣ
５４１ ＴＧＣＧＣＣＴＴＡＴ ＣＣＧＧＴＡＡＣＴＡ ＴＣＧＴＣＴＴＧＡＧ ＴＣＣＡＡＣＣＣＧＧ ＴＡＡＧＡＣＡＣＧＡ ＣＴＴＡＴＣＧＣＣＡ
６０１ ＣＴＧＧＣＡＧＣＡＧ ＣＣＡＣＴＧＧＴＡＡ ＣＡＧＧＡＴＴＡＧＣ ＡＧＡＧＣＧＡＧＧＴ ＡＴＧＴＡＧＧＣＧＧ ＴＧＣＴＡＣＡＧＡＧ
６６１ ＴＴＣＴＴＧＡＡＧＴ ＧＧＴＧＧＣＣＴＡＡ ＣＴＡＣＧＧＣＴＡＣ ＡＣＴＡＧＡＡＧＡＡ ＣＡＧＴＡＴＴＴＧＧ ＴＡＴＣＴＧＣＧＣＴ
７２１ ＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣ ＣＡＧＴＴＡＣＣＴＴ ＣＧＧＡＡＡＡＡＧＡ ＧＴＴＧＧＴＡＧＣＴ ＣＴＴＧＡＴＣＣＧＧ ＣＡＡＡＣＡＡＡＣＣ
７８１ ＡＣＣＧＣＴＧＧＴＡ ＧＣＧＧＴＧＧＴＴＴ ＴＴＴＴＧＴＴＴＧＣ ＡＡＧＣＡＧＣＡＧＡ ＴＴＡＣＧＣＧＣＡＧ ＡＡＡＡＡＡＡＧＧＡ
８４１ ＴＣＴＣＡＡＧＡＡＧ ＡＴＣＣＴＴＴＧＡＴ ＣＴＴＴＴＣＴＡＣＧ ＧＧＧＴＣＴＧＡＣＧ ＣＴＣＡＧＴＧＧＡＡ ＣＧＡＡＡＡＣＴＣＡ
９０１ ＣＧＴＴＡＡＧＧＧＡ ＴＴＴＴＧＧＴＣＡＴ ＧＡＧＡＴＴＡＴＣＡ ＡＡＡＡＧＧＡＴＣＴ ＴＣＡＣＣＴＡＧＡＴ ＣＣＴＴＴＴＡＡＡＴ
９６１ ＴＡＡＡＡＡＴＧＡＡ ＧＴＴＴＴＡＡＡＴＣ ＡＡＴＣＴＡＡＡＧＴ ＡＴＡＴＡＴＧＡＧＴ ＡＡＡＣＴＴＧＧＴＣ ＴＧＡＣＡＧＴＴＡＣ
１０２１ ＣＡＡＴＧＣＴＴＡＡ ＴＣＡＧＴＧＡＧＧＣ ＡＣＣＴＡＴＣＴＣＡ ＧＣＧＡＴＣＴＧＴＣ ＴＡＴＴＴＣＧＴＴＣ ＡＴＣＣＡＴＡＧＴＴ
１０８１ ＧＣＣＴＧＡＣＴＣＣ ＣＣＧＴＣＧＴＧＴＡ ＧＡＴＡＡＣＴＡＣＧ ＡＴＡＣＧＧＧＡＧＧ ＧＣＴＴＡＣＣＡＴＣ ＴＧＧＣＣＣＣＡＧＴ
１１４１ ＧＣＴＧＣＡＡＴＧＡ ＴＡＣＣＧＣＧＡＧＡ ＣＣＣＡＣＧＣＴＣＡ ＣＣＧＧＣＴＣＣＡＧ ＡＴＴＴＡＴＣＡＧＣ ＡＡＴＡＡＡＣＣＡＧ
１２０１ ＣＣＡＧＣＣＧＧＡＡ ＧＧＧＣＣＧＡＧＣＧ ＣＡＧＡＡＧＴＧＧＴ ＣＣＴＧＣＡＡＣＴＴ ＴＡＴＣＣＧＣＣＴＣ ＣＡＴＣＣＡＧＴＣＴ
１２６１ ＡＴＴＡＡＴＴＧＴＴ ＧＣＣＧＧＧＡＡＧＣ ＴＡＧＡＧＴＡＡＧＴ ＡＧＴＴＣＧＣＣＡＧ ＴＴＡＡＴＡＧＴＴＴ ＧＣＧＣＡＡＣＧＴＴ
１３２１ ＧＴＴＧＣＣＡＴＴＧ ＣＴＡＣＡＧＧＣＡＴ ＣＧＴＧＧＴＧＴＣＡ ＣＧＣＴＣＧＴＣＧＴ ＴＴＧＧＴＡＴＧＧＣ ＴＴＣＡＴＴＣＡＧＣ
１３８１ ＴＣＣＧＧＴＴＣＣＣ ＡＡＣＧＡＴＣＡＡＧ ＧＣＧＡＧＴＴＡＣＡ ＴＧＡＴＣＣＣＣＣＡ ＴＧＴＴＧＴＧＣＡＡ ＡＡＡＡＧＣＧＧＴＴ
１４４１ ＡＧＣＴＣＣＴＴＣＧ ＧＴＣＣＴＣＣＧＡＴ ＣＧＴＴＧＴＣＡＧＡ ＡＧＴＡＡＧＴＴＧＧ ＣＣＧＣＡＧＴＧＴＴ ＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧ
１５０１ ＧＴＴＡＴＧＧＣＡＧ ＣＡＣＴＧＣＡＴＡＡ ＴＴＣＴＣＴＴＡＣＴ ＧＴＣＡＴＧＣＣＡＴ ＣＣＧＴＡＡＧＡＴＧ ＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧ
１５６１ ＡＣＴＧＧＴＧＡＧＴ ＡＣＴＣＡＡＣＣＡＡ ＧＴＣＡＴＴＣＴＧＡ ＧＡＡＴＡＧＴＧＴＡ ＴＧＣＧＧＣＧＡＣＣ ＧＡＧＴＴＧＣＴＣＴ
１６２１ ＴＧＣＣＣＧＧＣＧＴ ＣＡＡＴＡＣＧＧＧＡ ＴＡＡＴＡＣＣＧＣＧ ＣＣＡＣＡＴＡＧＣＡ ＧＡＡＣＴＴＴＡＡＡ ＡＧＴＧＣＴＣＡＴＣ
１６８１ ＡＴＴＧＧＡＡＡＡＣ ＧＴＴＣＴＴＣＧＧＧ ＧＣＧＡＡＡＡＣＴＣ ＴＣＡＡＧＧＡＴＣＴ ＴＡＣＣＧＣＴＧＴＴ ＧＡＧＡＴＣＣＡＧＴ
１７４１ ＴＣＧＡＴＧＴＡＡＣ ＣＣＡＣＴＣＧＴＧＣ ＡＣＣＣＡＡＣＴＧＡ ＴＣＴＴＣＡＧＣＡＴ ＣＴＴＴＴＡＣＴＴＴ ＣＡＣＣＡＧＣＧＴＴ
１８０１ ＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧ ＣＡＡＡＡＡＣＡＧＧ ＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴ ＧＣＣＧＣＡＡＡＡＡ ＡＧＧＧＡＡＴＡＡＧ ＧＧＣＧＡＣＡＣＧＧ
１８６１ ＡＡＡＴＧＴＴＧＡＡ ＴＡＣＴＣＡＴＡＣＴ ＣＴＴＣＣＴＴＴＴＴ ＣＡＡＴＡＴＴＡＴＴ ＧＡＡＧＣＡＴＴＴＡ ＴＣＡＧＧＧＴＴＡＴ
１９２１ ＴＧＴＣＴＣＡＴＧＡ ＧＣＧＧＡＴＡＣＡＴ ＡＴＴＴＧＡＡＴＧＴ ＡＴＴＴＡＧＡＡＡＡ ＡＴＡＡＡＣＡＡＡＴ ＡＧＧＧＧＴＴＣＣＧ
１９８１ ＣＧＣＡＣＡＴＴＴＣ ＣＣＣＧＡＡＡＡＧＴ ＧＣＣＡＣＣＴＧＡＣ ＧＴＣＴＡＡＧＡＡＡ ＣＣＡＴＴＡＴＴＡＴ ＣＡＴＧＡＣＡＴＴＡ
２０４１ ＡＣＣＴＡＴＡＡＡＡ ＡＴＡＧＧＣＧＴＡＴ ＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣ ＴＴＴＣＧＴＣＴＣＧ ＣＧＣＧＴＴＴＣＧＧ ＴＧＡＴＧＡＣＧＧＴ
２１０１ ＧＡＡＡＡＣＣＴＣＴ ＧＡＣＡＣＡＴＧＣＡ ＧＣＴＣＣＣＧＧＡＧ ＡＣＧＧＴＣＡＣＡＧ ＣＴＴＧＴＣＴＧＴＡ ＡＧＣＧＧＡＴＧＣＣ
２１６１ ＧＧＧＡＧＣＡＧＡＣ ＡＡＧＣＣＣＧＴＣＡ ＧＧＧＣＧＣＧＴＣＡ ＧＣＧＧＧＴＧＴＴＧ ＧＣＧＧＧＴＧＴＣＧ ＧＧＧＣＴＧＧＣＴＴ
２２２１ ＡＡＣＴＡＴＧＣＧＧ ＣＡＴＣＡＧＡＧＣＡ ＧＡＴＴＧＴＡＣＴＧ ＡＧＡＧＴＧＣＡＣＣ ＡＴＡＴＧＣＧＧＴＧ ＴＧＡＡＡＴＡＣＣＧ
２２８１ ＣＡＣＡＧＡＴＧＣＧ ＴＡＡＧＧＡＧＡＡＡ ＡＴＡＣＣＧＣＡＴＣ ＡＧＧＣＧＡＴＴＣＣ ＡＡＣＡＴＣＣＡＡＴ ＡＡＡＴＣＡＴＡＣＡ
２３４１ ＧＧＣＡＡＧＧＣＡＡ ＡＧＡＡＴＴＡＧＣＡ ＡＡＡＴＴＡＡＧＣＡ ＡＴＡＡＡＧＣＣＴＣ ＡＧＡＧＣＡＴＡＡＡ ＧＣＴＡＡＡＴＣＧＧ
２４０１ ＴＴＧＴＡＣＣＡＡＡ ＡＡＣＡＴＴＡＴＧＡ ＣＣＣＴＧＴＡＡＴＡ ＣＴＴＴＴＧＣＧＧＧ ＡＧＡＡＧＣＣＴＴＴ ＡＴＴＴＣＡＡＣＧＣ
２４６１ ＡＡＧＧＡＴＡＡＡＡ ＡＴＴＴＴＴＡＧＡＡ ＣＣＣＴＣＡＴＡＴＡ ＴＴＴＴＡＡＡＴＧＣ ＡＡＴＧＣＣＴＧＡＧ ＴＡＡＴＧＴＧＴＡＧ
２５２１ ＧＴＡＡＡＧＡＴＴＣ ＡＡＡＣＧＧＧＴＧＡ ＧＡＡＡＧＧＣＣＧＧ ＡＧＡＣＡＧＴＣＡＡ ＡＴＣＡＣＣＡＴＣＡ ＡＴＡＴＧＡＴＡＴＴ
２５８１ ＣＡＡＣＣＧＴＴＣＴ ＡＧＣＴＧＡＴＡＡＡ ＴＴＣＡＴＧＣＣＧＧ ＡＧＡＧＧＧＴＡＧＣ ＴＡＴＴＴＴＴＧＡＧ ＡＧＧＴＣＴＣＴＡＣ
２６４１ ＡＡＡＧＧＣＴＡＴＣ ＡＧＧＴＣＡＴＴＧＣ ＣＴＧＡＧＡＧＴＣＴ ＧＧＡＧＣＡＡＡＣＡ ＡＧＡＧＡＡＴＣＧＡ ＴＧＡＡＣＧＧＴＡＡ
２７０１ ＴＣＧＴＡＡＡＡＣＴ ＡＧＣＡＴＧＴＣＡＡ ＴＣＡＴＡＴＧＴＡＣ ＣＣＣＧＧＴＴＧＡＴ ＡＡＴＣＡＧＡＡＡＡ ＧＣＣＣＣＡＡＡＡＡ
２７６１ ＣＡＧＧＡＡＧＡＴＴ ＧＴＡＴＡＡＧＣＡＡ ＡＴＡＴＴＴＡＡＡＴ ＴＧＴＡＡＧＣＧＴＴ ＡＡＴＡＴＴＴＴＧＴ ＴＡＡＡＡＴＴＣＧＣ
２８２１ ＧＴＴＡＡＡＴＴＴＴ ＴＧＴＴＡＡＡＴＣＡ ＧＣＴＣＡＴＴＴＴＴ ＴＡＡＣＣＡＡＴＡＧ ＧＣＣＧＡＡＡＴＣＧ ＧＣＡＡＡＡＴＣＣＣ
２８８１ ＴＴＡＴＡＡＡＴＣＡ ＡＡＡＧＡＡＴＡＧＡ ＣＣＧＡＧＡＴＡＧＧ ＧＴＴＧＡＧＴＧＴＴ ＧＴＴＣＣＡＧＴＴＴ ＧＧＡＡＣＡＡＧＡＧ
２９４１ ＴＣＣＡＣＴＡＴＴＡ ＡＡＧＡＡＣＧＴＧＧ ＡＣＴＣＣＡＡＣＧＴ ＣＡＡＡＧＧＧＣＧＡ ＡＡＡＡＣＣＧＴＣＴ ＡＴＣＡＧＧＧＣＧＡ
３００１ ＴＧＧＣＣＣＡＣＴＡ ＣＧＴＧＡＡＣＣＡＴ ＣＡＣＣＣＴＡＡＴＣ ＡＡＧＴＴＴＴＴＴＧ ＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴ ＧＣＣＧＴＡＡＡＧＣ
３０６１ ＡＣＴＡＡＡＴＣＧＧ ＡＡＣＣＣＴＡＡＡＧ ＧＧＡＧＣＣＣＣＣＧ ＡＴＴＴＡＧＡＧＣＴ ＴＧＡＣＧＧＧＧＡＡ ＡＧＣＣＧＧＣＧＡＡ
３１２１ ＣＧＴＧＧＣＧＡＧＡ ＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡ ＡＧＡＡＡＧＣＧＡＡ ＡＧＧＡＧＣＧＧＧＣ ＧＣＴＡＧＧＧＣＧＣ ＴＧＧＣＡＡＧＴＧＴ
３１８１ ＡＧＣＧＧＴＣＡＣＧ ＣＴＧＣＧＣＧＴＡＡ ＣＣＡＣＣＡＣＡＣＣ ＣＧＣＣＧＣＧＣＴＴ ＡＡＴＧＣＧＣＣＧＣ ＴＡＣＡＧＧＧＣＧＣ
３２４１ ＧＴＡＣＴＡＴＧＧＴ ＴＧＣＴＴＴＧＡＣＧ ＡＧＣＡＣＧＴＡＴＡ ＡＣＧＴＧＣＴＴＴＣ ＣＴＣＧＴＴＡＧＡＡ ＴＣＡＧＡＧＣＧＧＧ
３３０１ ＡＧＣＴＡＡＡＣＡＧ ＧＡＧＧＣＣＧＡＴＴ ＡＡＡＧＧＧＡＴＴＴ ＴＡＧＡＣＡＧＧＡＡ ＣＧＧＴＡＣＧＣＣＡ ＧＡＡＴＣＣＴＧＡＧ
３３６１ ＡＡＧＴＧＴＴＴＴＴ ＡＴＡＡＴＣＡＧＴＧ ＡＧＧＣＣＡＣＣＧＡ ＧＴＡＡＡＡＧＡＧＴ ＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡ ＣＧＣＡＡＡＴＴＡＡ
３４２１ ＣＣＧＴＴＧＴＣＧＣ ＡＡＴＡＣＴＴＣＴＴ ＴＧＡＴＴＡＧＴＡＡ ＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴ ＴＧＣＣＴＧＡＧＴＡ ＧＡＡＧＡＡＣＴＣＡ
３４８１ ＡＡＣＴＡＴＣＧＧＣ ＣＴＴＧＣＴＧＧＴＡ ＡＴＡＴＣＣＡＧＡＡ ＣＡＡＴＡＴＴＡＣＣ ＧＣＣＡＧＣＣＡＴＴ ＧＣＡＡＣＧＧＡＡＴ
３５４１ ＣＧＣＣＡＴＴＣＧＣ ＣＡＴＴＣＡＧＧＣＴ ＧＣＧＣＡＡＣＴＧＴ ＴＧＧＧＡＡＧＧＧＣ ＧＡＴＣＧＧＴＧＣＧ ＧＧＣＣＴＣＴＴＣＣ
３６０１ ＡＣＴＧＡＧＧＣＣＣ ＡＧＣＴＧＣＧＣＧＣ ＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣ ＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧ ＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡ ＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴ
３６６１ ＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴ ＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣ ＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧ ＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧ ＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡ ＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣ
３７２１ ＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡ ＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣ ＣＴＴＧＴＡＧＴＴＡ ＡＴＧＡＴＴＡＡＣＣ ＣＧＣＣＡＴＧＣＴＡ ＣＴＴＡＴＣＴＡＣＴ
３７８１ ＣＧＡＣＡＴＴＧＡＴ ＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧ ＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧ ＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡ ＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴ ＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣ
３８４１ ＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧ ＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴ ＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴ ＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧ ＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧ ＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣ
３９０１ ＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣ ＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣ ＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧ ＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣ ＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣ ＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧ
３９６１ ＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴ ＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧ ＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴ ＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡ ＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴ ＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴ
４０２１ ＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣ ＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧ ＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴ ＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡ ＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡ ＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣ
４０８１ ＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧ ＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴ ＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧ ＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡ ＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡ ＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡ
４１４１ ＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧ ＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴ ＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧ ＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴ ＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣ ＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣ
４２０１ ＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴ ＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣ ＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴ ＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴ ＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴ ＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧ
４２６１ ＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧ ＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧ ＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧ ＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧ ＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧ ＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧ
４３２１ ＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡ ＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧ ＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡ ＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡ ＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴ ＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴ
４３８１ ＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧ ＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧ ＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧ ＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡ ＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣ ＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧ
４４４１ ＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧ ＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣ ＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣ ＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧ ＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧ ＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣ
４５０１ ＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣ ＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴ ＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧ ＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣ ＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣ ＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧ
４５６１ ＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴ ＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴ ＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧ ＣＴＴＧＴＴＴＣＴＴ ＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴ ＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣ
４６２１ ＣＴＴＧＡＧＧＧＧＣ ＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧ ＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣ ＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧ ＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧ ＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧ
４６８１ ＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧ ＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣ ＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣ ＴＣＣＧＣＧＣＴＧＣ ＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧ ＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣ
４７４１ ＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧ ＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧ ＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣ ＡＧＴＧＴＧＣＧＣＧ ＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣ ＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣ
４８０１ ＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣ ＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧ ＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧ ＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣ ＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧ ＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴ
４８６１ ＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡ ＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧ ＴＧＧＧＣＧＣＧＴＣ ＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧ ＣＡＡＣＣＣＣＣＣＣ ＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣ
４９２１ ＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴ ＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧ ＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣ ＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧ ＣＴＣＣＧＴＡＣＧＧ ＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣ
４９８１ ＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣ ＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧ ＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧ ＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧ ＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧ ＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣ
５０４１ ＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣ ＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴ ＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧ ＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣ ＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧ ＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧ
５１０１ ＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧ ＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡ ＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴ ＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡ ＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡ ＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧ
５１６１ ＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧ ＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴ ＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣ ＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧ ＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣ ＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣ
５２２１ ＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣ ＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣ ＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣ ＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧ ＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧ ＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴ
５２８１ ＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧ ＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣ ＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴ ＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧ ＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴ ＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧ
５３４１ ＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣ ＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧ ＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧ ＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣ ＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣ ＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧ
５４０１ ＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡ ＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡ ＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡ ＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣ ＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣ ＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧ
５４６１ ＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧ ＧＴＴＡＴＴＧＴＧＣ ＴＧＴＣＴＣＡＴＣＡ ＴＴＴＴＧＧＣＡＡＡ ＧＡＡＴＴＧＡＴＴＡ ＡＴＴＣＧＡＧＣＧＡ
５５２１ ＡＣＧＣＧＴＣＧＡＧ ＴＣＧＣＴＣＧＧＴＡ ＣＧＡＴＴＴＡＡＡＴ ＴＧＡＡＴＴＧＧＣＣ ＴＣＧＡＧＣＧＣＡＡ ＧＣＴＴＧＡＧＣＴＡ
５５８１ ＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴ ＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧ ＡＧＡＡＧＣＡＧＡＧ ＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴ ＧＧＧＣＣＴＧＴＧＧ ＧＴＧＣＧＡＣＴＧＣ
５６４１ ＴＧＣＴＧＧＣＴＧＴ ＧＴＴＴＣＴＧＣＴＧ ＧＧＣＧＴＧＴＡＣＣ ＡＧＧＣＣＴＡＣＣＣ ＣＡＴＣＣＣＴＧＡＣ ＴＣＴＡＧＣＣＣＣＣ
５７０１ ＴＧＣＴＧＣＡＧＴＴ ＴＧＧＣＧＧＡＣＡＡ ＧＴＧＣＧＧＣＡＧＡ ＧＡＴＡＣＣＴＧＴＡ ＣＡＣＣＧＡＣＧＡＣ ＧＡＣＣＡＧＧＡＣＡ
５７６１ ＣＣＧＡＧＧＣＣＣＡ ＣＣＴＧＧＡＡＡＴＣ ＣＧＣＧＡＧＧＡＴＧ ＧＣＡＣＡＧＴＣＧＴ ＧＧＧＣＧＣＴＧＣＴ ＣＡＣＡＧＡＡＧＣＣ
５８２１ ＣＴＧＡＧＡＧＣＣＴ ＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧ ＡＡＧＧＣＣＣＴＧＡ ＡＧＣＣＣＧＧＣＧＴ ＧＡＴＣＣＡＧＡＴＣ ＣＴＧＧＧＣＧＴＧＡ
５８８１ ＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧ ＡＴＴＣＣＴＧＴＧＣ ＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧ ＡＣＧＧＣＧＣＣＣＴ ＧＴＡＣＧＧＣＴＣＴ ＣＣＴＣＡＣＴＴＣＧ
５９４１ ＡＴＣＣＴＧＡＧＧＣ ＣＴＧＣＡＧＣＴＴＣ ＡＧＡＧＡＧＣＴＧＣ ＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡ ＣＧＧＣＴＡＣＡＡＣ ＧＴＧＴＡＣＣＡＧＴ
６００１ ＣＴＧＡＧＧＣＣＣＡ ＣＧＧＣＣＴＧＣＣＣ ＣＴＧＡＧＡＣＴＧＣ ＣＴＣＡＧＡＡＧＧＡ ＣＡＧＣＣＣＴＡＡＣ ＣＡＧＧＡＣＧＣＣＡ
６０６１ ＣＡＡＧＣＴＧＧＧＧ ＡＣＣＴＧＴＧＣＧＧ ＴＴＣＣＴＧＣＣＴＡ ＴＧＣＣＴＧＧＡＣＴ ＧＣＴＧＣＡＣＧＡＧ ＣＣＣＣＡＧＧＡＴＣ
６１２１ ＡＧＧＣＴＧＧＣＴＴ ＴＣＴＧＣＣＴＣＣＴ ＧＡＧＣＣＴＣＣＡＧ ＡＣＧＴＧＧＧＣＡＧ ＣＡＧＣＧＡＣＣＣＴ ＣＴＧＡＧＣＡＴＧＧ
６１８１ ＴＧＧＡＡＣＣＴＣＴ ＧＣＡＧＧＧＣＡＧＡ ＡＧＣＣＣＣＡＧＣＴ ＡＣＧＣＣＴＣＴＴＧ ＡＧＡＡＴＧＣＧＧＧ ＣＣＣＧＧＴＡＣＣＣ
６２４１ ＣＣＧＡＣＧＣＧＧＣ ＣＴＡＡＣＴＧＧＣＣ ＴＣＡＴＧＧＧＣＣＴ ＴＣＣＧＣＴＣＡＣＴ ＧＣＣＣＧＣＴＴＴＣ ＣＡＧＴＣＧＧＧＡＡ
６３０１ ＡＣＣＴＧＴＣＧＴＧ ＣＣＡＧＴＣＡＧＧＴ ＧＣＡＧＧＣＴＧＣＣ ＴＡＴＣＡＧＡＡＧＧ ＴＧＧＴＧＧＣＴＧＧ ＴＧＴＧＧＣＣＡＡＴ
６３６１ ＧＣＣＣＴＧＧＣＴＣ ＡＣＡＡＡＴＡＣＣＡ ＣＴＧＡＧＡＴＣＴＴ ＴＴＴＣＣＣＴＣＴＧ ＣＣＡＡＡＡＡＴＴＡ ＴＧＧＧＧＡＣＡＴＣ
６４２１ ＡＴＧＡＡＧＣＣＣＣ ＴＴＧＡＧＣＡＴＣＴ ＧＡＣＴＴＣＴＧＧＣ ＴＡＡＴＡＡＡＧＧＡ ＡＡＴＴＴＡＴＴＴＴ ＣＡＴＴＧＣＡＡＴＡ
６４８１ ＧＴＧＴＧＴＴＧＧＡ ＡＴＴＴＴＴＴＧＴＧ ＴＣＴＣＴＣＡＣＴＣ ＧＧＡＡＧＧＡＣＡＴ ＡＴＧＧＧＡＧＧＧＣ ＡＡＡＴＣＡＴＴＴＡ
６５４１ ＡＡＡＣＡＴＣＡＧＡ ＡＴＧＡＧＴＡＴＴＴ ＧＧＴＴＴＡＧＡＧＴ ＴＴＧＧＣＡＡＣＡＴ ＡＴＧＣＣＣＡＴＡＴ ＧＣＴＧＧＣＴＧＣＣ
６６０１ ＡＴＧＡＡＣＡＡＡＧ ＧＴＴＧＧＣＴＡＴＡ ＡＡＧＡＧＧＴＣＡＴ ＣＡＧＴＡＴＡＴＧＡ ＡＡＣＡＧＣＣＣＣＣ ＴＧＣＴＧＴＣＣＡＴ
６６６１ ＴＣＣＴＴＡＴＴＣＣ ＡＴＡＧＡＡＡＡＧＣ ＣＴＴＧＡＣＴＴＧＡ ＧＧＴＴＡＧＡＴＴＴ ＴＴＴＴＴＡＴＡＴＴ ＴＴＧＴＴＴＴＧＴＧ
６７２１ ＴＴＡＴＴＴＴＴＴＴ ＣＴＴＴＡＡＣＡＴＣ ＣＣＴＡＡＡＡＴＴＴ ＴＣＣＴＴＡＣＡＴＧ ＴＴＴＴＡＣＴＡＧＣ ＣＡＧＡＴＴＴＴＴＣ
６７８１ ＣＴＣＣＴＣＴＣＣＴ ＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣ ＡＧＴＣＡＴＡＧＣＴ ＧＴＣＣＣＴＣＴＴＣ ＴＣＴＴＡＴＧＧＡＧ ＡＴＣＣＣＴＣＧＡＣ
６８４１ ＣＴＧＣＡＧＣＣＣＡ ＡＧＣＴＧＴＡＧＡＴ ＡＡＧＴＡＧＣＡＴＧ ＧＣＧＧＧＴＴＡＡＴ ＣＡＴＴＡＡＣＴＡＣ ＡＡＧＧＡＡＣＣＣＣ
６９０１ ＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡ ＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴ ＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣ ＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣ ＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧ ＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣ
６９６１ ＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣ ＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧ ＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣ ＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣ ＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧ ＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡ
７０２１ ＧＣＴＧＧＣＧＴＡＡ
ＡＡＶ２ ５’ＩＴＲ：３６０１－３７４２ ｂｐ
ＣＡＧプロモーター：３７７９－５４２３ ｂｐ
ハツカネズミコドン最適化ＦＧＦ２１（ｍｏＦＧＦ２１）：５５８８－６２２１ ｂｐ
ウサギβグロビンポリＡシグナル（ポリＡシグナルを含むウサギベータ－グロビンの３’ＵＴＲおよび３’隣接領域）：６３１５－６８３３ ｂｐ
ＡＡＶ２ ３’ＩＴＲ：６８９２－７０２４ ｂｐ
ｐＡＡＶ－ＣＭＶ－ｍｏＦＧＦ２１（配列番号６３）
１ ＧＧＧＧＣＴＡＧＣＧ ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡ ＡＴＧＧＡＴＧＡＧＡ ＡＧＣＡＧＡＧＴＧＧ ＧＣＡＣＣＣＴＧＧＧ
５１ ＣＣＴＧＴＧＧＧＴＧ ＣＧＡＣＴＧＣＴＧＣ ＴＧＧＣＴＧＴＧＴＴ ＴＣＴＧＣＴＧＧＧＣ ＧＴＧＴＡＣＣＡＧＧ
１０１ ＣＣＴＡＣＣＣＣＡＴ ＣＣＣＴＧＡＣＴＣＴ ＡＧＣＣＣＣＣＴＧＣ ＴＧＣＡＧＴＴＴＧＧ ＣＧＧＡＣＡＡＧＴＧ
１５１ ＣＧＧＣＡＧＡＧＡＴ ＡＣＣＴＧＴＡＣＡＣ ＣＧＡＣＧＡＣＧＡＣ ＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧ ＡＧＧＣＣＣＡＣＣＴ
２０１ ＧＧＡＡＡＴＣＣＧＣ ＧＡＧＧＡＴＧＧＣＡ ＣＡＧＴＣＧＴＧＧＧ ＣＧＣＴＧＣＴＣＡＣ ＡＧＡＡＧＣＣＣＴＧ
２５１ ＡＧＡＧＣＣＴＧＣＴ ＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧ ＧＣＣＣＴＧＡＡＧＣ ＣＣＧＧＣＧＴＧＡＴ ＣＣＡＧＡＴＣＣＴＧ
３０１ ＧＧＣＧＴＧＡＡＧＧ ＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴ ＣＣＴＧＴＧＣＣＡＧ ＣＡＧＣＣＴＧＡＣＧ ＧＣＧＣＣＣＴＧＴＡ
３５１ ＣＧＧＣＴＣＴＣＣＴ ＣＡＣＴＴＣＧＡＴＣ ＣＴＧＡＧＧＣＣＴＧ ＣＡＧＣＴＴＣＡＧＡ ＧＡＧＣＴＧＣＴＧＣ
４０１ ＴＧＧＡＧＧＡＣＧＧ ＣＴＡＣＡＡＣＧＴＧ ＴＡＣＣＡＧＴＣＴＧ ＡＧＧＣＣＣＡＣＧＧ ＣＣＴＧＣＣＣＣＴＧ
４５１ ＡＧＡＣＴＧＣＣＴＣ ＡＧＡＡＧＧＡＣＡＧ ＣＣＣＴＡＡＣＣＡＧ ＧＡＣＧＣＣＡＣＡＡ ＧＣＴＧＧＧＧＡＣＣ
５０１ ＴＧＴＧＣＧＧＴＴＣ ＣＴＧＣＣＴＡＴＧＣ ＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴ ＧＣＡＣＧＡＧＣＣＣ ＣＡＧＧＡＴＣＡＧＧ
５５１ ＣＴＧＧＣＴＴＴＣＴ ＧＣＣＴＣＣＴＧＡＧ ＣＣＴＣＣＡＧＡＣＧ ＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧ ＣＧＡＣＣＣＴＣＴＧ
６０１ ＡＧＣＡＴＧＧＴＧＧ ＡＡＣＣＴＣＴＧＣＡ ＧＧＧＣＡＧＡＡＧＣ ＣＣＣＡＧＣＴＡＣＧ ＣＣＴＣＴＴＧＡＧＡ
６５１ ＡＴＧＣＧＧＧＣＣＣ ＧＧＴＡＣＣＣＣＣＴ ＣＧＡＣＧＧＴＡＣＣ ＡＧＣＧＣＴＧＴＣＧ ＡＧＧＣＣＧＣＴＴＣ
７０１ ＧＡＧＣＡＧＡＣＡＴ ＧＡＴＡＡＧＡＴＡＣ ＡＴＴＧＡＴＧＡＧＴ ＴＴＧＧＡＣＡＡＡＣ ＣＡＣＡＡＣＴＡＧＡ
７５１ ＡＴＧＣＡＧＴＧＡＡ ＡＡＡＡＡＴＧＣＴＴ ＴＡＴＴＴＧＴＧＡＡ ＡＴＴＴＧＴＧＡＴＧ ＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴ
８０１ ＡＴＴＴＧＴＡＡＣＣ ＡＴＴＡＴＡＡＧＣＴ ＧＣＡＡＴＡＡＡＣＡ ＡＧＴＴＡＡＣＡＡＣ ＡＡＣＡＡＴＴＧＣＡ
８５１ ＴＴＣＡＴＴＴＴＡＴ ＧＴＴＴＣＡＧＧＴＴ ＣＡＧＧＧＧＧＡＧＡ ＴＧＴＧＧＧＡＧＧＴ ＴＴＴＴＴＡＡＡＧＣ
９０１ ＡＡＧＴＡＡＡＡＣＣ ＴＣＴＡＣＡＡＡＴＧ ＴＧＧＴＡＡＡＡＴＣ ＧＡＴＴＡＧＧＡＴＣ ＴＴＣＣＴＡＧＡＧＣ
９５１ ＡＴＧＧＣＴＡＣＣＴ ＡＧＡＣＡＴＧＧＣＴ ＣＧＡＣＡＧＡＴＣＡ ＧＣＧＣＴＣＡＴＧＣ ＴＣＴＧＧＡＡＧＡＴ
１００１ ＣＴＣＧＡＴＴＴＡＡ ＡＴＧＣＧＧＣＣＧＣ ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴ ＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧ ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣ
１０５１ ＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧ ＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧ ＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧ ＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣ ＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣ
１１０１ ＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧ ＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧ ＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡ ＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣ ＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ
１１５１ ＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧ ＧＧＧＣＧＣＣＴＧＡ ＴＧＣＧＧＴＡＴＴＴ ＴＣＴＣＣＴＴＡＣＧ ＣＡＴＣＴＧＴＧＣＧ
１２０１ ＧＴＡＴＴＴＣＡＣＡ ＣＣＧＣＡＴＡＣＧＴ ＣＡＡＡＧＣＡＡＣＣ ＡＴＡＧＴＡＣＧＣＧ ＣＣＣＴＧＴＡＧＣＧ
１２５１ ＧＣＧＣＡＴＴＡＡＧ ＣＧＣＧＧＣＧＧＧＴ ＧＴＧＧＴＧＧＴＴＡ ＣＧＣＧＣＡＧＣＧＴ ＧＡＣＣＧＣＴＡＣＡ
１３０１ ＣＴＴＧＣＣＡＧＣＧ ＣＣＣＴＡＧＣＧＣＣ ＣＧＣＴＣＣＴＴＴＣ ＧＣＴＴＴＣＴＴＣＣ ＣＴＴＣＣＴＴＴＣＴ
１３５１ ＣＧＣＣＡＣＧＴＴＣ ＧＣＣＧＧＣＴＴＴＣ ＣＣＣＧＴＣＡＡＧＣ ＴＣＴＡＡＡＴＣＧＧ ＧＧＧＣＴＣＣＣＴＴ
１４０１ ＴＡＧＧＧＴＴＣＣＧ ＡＴＴＴＡＧＴＧＣＴ ＴＴＡＣＧＧＣＡＣＣ ＴＣＧＡＣＣＣＣＡＡ ＡＡＡＡＣＴＴＧＡＴ
１４５１ ＴＴＧＧＧＴＧＡＴＧ ＧＴＴＣＡＣＧＴＡＧ ＴＧＧＧＣＣＡＴＣＧ ＣＣＣＴＧＡＴＡＧＡ ＣＧＧＴＴＴＴＴＣＧ
１５０１ ＣＣＣＴＴＴＧＡＣＧ ＴＴＧＧＡＧＴＣＣＡ ＣＧＴＴＣＴＴＴＡＡ ＴＡＧＴＧＧＡＣＴＣ ＴＴＧＴＴＣＣＡＡＡ
１５５１ ＣＴＧＧＡＡＣＡＡＣ ＡＣＴＣＡＡＣＣＣＴ ＡＴＣＴＣＧＧＧＣＴ ＡＴＴＣＴＴＴＴＧＡ ＴＴＴＡＴＡＡＧＧＧ
１６０１ ＡＴＴＴＴＧＣＣＧＡ ＴＴＴＣＧＧＣＣＴＡ ＴＴＧＧＴＴＡＡＡＡ ＡＡＴＧＡＧＣＴＧＡ ＴＴＴＡＡＣＡＡＡＡ
１６５１ ＡＴＴＴＡＡＣＧＣＧ ＡＡＴＴＴＴＡＡＣＡ ＡＡＡＴＡＴＴＡＡＣ ＧＴＴＴＡＣＡＡＴＴ ＴＴＡＴＧＧＴＧＣＡ
１７０１ ＣＴＣＴＣＡＧＴＡＣ ＡＡＴＣＴＧＣＴＣＴ ＧＡＴＧＣＣＧＣＡＴ ＡＧＴＴＡＡＧＣＣＡ ＧＣＣＣＣＧＡＣＡＣ
１７５１ ＣＣＧＣＣＡＡＣＡＣ ＣＣＧＣＴＧＡＣＧＣ ＧＣＣＣＴＧＡＣＧＧ ＧＣＴＴＧＴＣＴＧＣ ＴＣＣＣＧＧＣＡＴＣ
１８０１ ＣＧＣＴＴＡＣＡＧＡ ＣＡＡＧＣＴＧＴＧＡ ＣＣＧＴＣＴＣＣＧＧ ＧＡＧＣＴＧＣＡＴＧ ＴＧＴＣＡＧＡＧＧＴ
１８５１ ＴＴＴＣＡＣＣＧＴＣ ＡＴＣＡＣＣＧＡＡＡ ＣＧＣＧＣＧＡＧＡＣ ＧＡＡＡＧＧＧＣＣＴ ＣＧＴＧＡＴＡＣＧＣ
１９０１ ＣＴＡＴＴＴＴＴＡＴ ＡＧＧＴＴＡＡＴＧＴ ＣＡＴＧＡＴＡＡＴＡ ＡＴＧＧＴＴＴＣＴＴ ＡＧＡＣＧＴＣＡＧＧ
１９５１ ＴＧＧＣＡＣＴＴＴＴ ＣＧＧＧＧＡＡＡＴＧ ＴＧＣＧＣＧＧＡＡＣ ＣＣＣＴＡＴＴＴＧＴ ＴＴＡＴＴＴＴＴＣＴ
２００１ ＡＡＡＴＡＣＡＴＴＣ ＡＡＡＴＡＴＧＴＡＴ ＣＣＧＣＴＣＡＴＧＡ ＧＡＣＡＡＴＡＡＣＣ ＣＴＧＡＴＡＡＡＴＧ
２０５１ ＣＴＴＣＡＡＴＡＡＴ ＡＴＴＧＡＡＡＡＡＧ ＧＡＡＧＡＧＴＡＴＧ ＡＧＴＡＴＴＣＡＡＣ ＡＴＴＴＣＣＧＴＧＴ
２１０１ ＣＧＣＣＣＴＴＡＴＴ ＣＣＣＴＴＴＴＴＴＧ ＣＧＧＣＡＴＴＴＴＧ ＣＣＴＴＣＣＴＧＴＴ ＴＴＴＧＣＴＣＡＣＣ
２１５１ ＣＡＧＡＡＡＣＧＣＴ ＧＧＴＧＡＡＡＧＴＡ ＡＡＡＧＡＴＧＣＴＧ ＡＡＧＡＴＣＡＧＴＴ ＧＧＧＴＧＣＡＣＧＡ
２２０１ ＧＴＧＧＧＴＴＡＣＡ ＴＣＧＡＡＣＴＧＧＡ ＴＣＴＣＡＡＣＡＧＣ ＧＧＴＡＡＧＡＴＣＣ ＴＴＧＡＧＡＧＴＴＴ
２２５１ ＴＣＧＣＣＣＣＧＡＡ ＧＡＡＣＧＴＴＴＴＣ ＣＡＡＴＧＡＴＧＡＧ ＣＡＣＴＴＴＴＡＡＡ ＧＴＴＣＴＧＣＴＡＴ
２３０１ ＧＴＧＧＣＧＣＧＧＴ ＡＴＴＡＴＣＣＣＧＴ ＡＴＴＧＡＣＧＣＣＧ ＧＧＣＡＡＧＡＧＣＡ ＡＣＴＣＧＧＴＣＧＣ
２３５１ ＣＧＣＡＴＡＣＡＣＴ ＡＴＴＣＴＣＡＧＡＡ ＴＧＡＣＴＴＧＧＴＴ ＧＡＧＴＡＣＴＣＡＣ ＣＡＧＴＣＡＣＡＧＡ
２４０１ ＡＡＡＧＣＡＴＣＴＴ ＡＣＧＧＡＴＧＧＣＡ ＴＧＡＣＡＧＴＡＡＧ ＡＧＡＡＴＴＡＴＧＣ ＡＧＴＧＣＴＧＣＣＡ
２４５１ ＴＡＡＣＣＡＴＧＡＧ ＴＧＡＴＡＡＣＡＣＴ ＧＣＧＧＣＣＡＡＣＴ ＴＡＣＴＴＣＴＧＡＣ ＡＡＣＧＡＴＣＧＧＡ
２５０１ ＧＧＡＣＣＧＡＡＧＧ ＡＧＣＴＡＡＣＣＧＣ ＴＴＴＴＴＴＧＣＡＣ ＡＡＣＡＴＧＧＧＧＧ ＡＴＣＡＴＧＴＡＡＣ
２５５１ ＴＣＧＣＣＴＴＧＡＴ ＣＧＴＴＧＧＧＡＡＣ ＣＧＧＡＧＣＴＧＡＡ ＴＧＡＡＧＣＣＡＴＡ ＣＣＡＡＡＣＧＡＣＧ
２６０１ ＡＧＣＧＴＧＡＣＡＣ ＣＡＣＧＡＴＧＣＣＴ ＧＴＡＧＣＡＡＴＧＧ ＣＡＡＣＡＡＣＧＴＴ ＧＣＧＣＡＡＡＣＴＡ
２６５１ ＴＴＡＡＣＴＧＧＣＧ ＡＡＣＴＡＣＴＴＡＣ ＴＣＴＡＧＣＴＴＣＣ ＣＧＧＣＡＡＣＡＡＴ ＴＡＡＴＡＧＡＣＴＧ
２７０１ ＧＡＴＧＧＡＧＧＣＧ ＧＡＴＡＡＡＧＴＴＧ ＣＡＧＧＡＣＣＡＣＴ ＴＣＴＧＣＧＣＴＣＧ ＧＣＣＣＴＴＣＣＧＧ
２７５１ ＣＴＧＧＣＴＧＧＴＴ ＴＡＴＴＧＣＴＧＡＴ ＡＡＡＴＣＴＧＧＡＧ ＣＣＧＧＴＧＡＧＣＧ ＴＧＧＧＴＣＴＣＧＣ
２８０１ ＧＧＴＡＴＣＡＴＴＧ ＣＡＧＣＡＣＴＧＧＧ ＧＣＣＡＧＡＴＧＧＴ ＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣ ＧＴＡＴＣＧＴＡＧＴ
２８５１ ＴＡＴＣＴＡＣＡＣＧ ＡＣＧＧＧＧＡＧＴＣ ＡＧＧＣＡＡＣＴＡＴ ＧＧＡＴＧＡＡＣＧＡ ＡＡＴＡＧＡＣＡＧＡ
２９０１ ＴＣＧＣＴＧＡＧＡＴ ＡＧＧＴＧＣＣＴＣＡ ＣＴＧＡＴＴＡＡＧＣ ＡＴＴＧＧＴＡＡＣＴ ＧＴＣＡＧＡＣＣＡＡ
２９５１ ＧＴＴＴＡＣＴＣＡＴ ＡＴＡＴＡＣＴＴＴＡ ＧＡＴＴＧＡＴＴＴＡ ＡＡＡＣＴＴＣＡＴＴ ＴＴＴＡＡＴＴＴＡＡ
３００１ ＡＡＧＧＡＴＣＴＡＧ ＧＴＧＡＡＧＡＴＣＣ ＴＴＴＴＴＧＡＴＡＡ ＴＣＴＣＡＴＧＡＣＣ ＡＡＡＡＴＣＣＣＴＴ
３０５１ ＡＡＣＧＴＧＡＧＴＴ ＴＴＣＧＴＴＣＣＡＣ ＴＧＡＧＣＧＴＣＡＧ ＡＣＣＣＣＧＴＡＧＡ ＡＡＡＧＡＴＣＡＡＡ
３１０１ ＧＧＡＴＣＴＴＣＴＴ ＧＡＧＡＴＣＣＴＴＴ ＴＴＴＴＣＴＧＣＧＣ ＧＴＡＡＴＣＴＧＣＴ ＧＣＴＴＧＣＡＡＡＣ
３１５１ ＡＡＡＡＡＡＡＣＣＡ ＣＣＧＣＴＡＣＣＡＧ ＣＧＧＴＧＧＴＴＴＧ ＴＴＴＧＣＣＧＧＡＴ ＣＡＡＧＡＧＣＴＡＣ
３２０１ ＣＡＡＣＴＣＴＴＴＴ ＴＣＣＧＡＡＧＧＴＡ ＡＣＴＧＧＣＴＴＣＡ ＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡ ＧＡＴＡＣＣＡＡＡＴ
３２５１ ＡＣＴＧＴＣＣＴＴＣ ＴＡＧＴＧＴＡＧＣＣ ＧＴＡＧＴＴＡＧＧＣ ＣＡＣＣＡＣＴＴＣＡ ＡＧＡＡＣＴＣＴＧＴ
３３０１ ＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴ ＡＣＡＴＡＣＣＴＣＧ ＣＴＣＴＧＣＴＡＡＴ ＣＣＴＧＴＴＡＣＣＡ ＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧ
３３５１ ＣＣＡＧＴＧＧＣＧＡ ＴＡＡＧＴＣＧＴＧＴ ＣＴＴＡＣＣＧＧＧＴ ＴＧＧＡＣＴＣＡＡＧ ＡＣＧＡＴＡＧＴＴＡ
３４０１ ＣＣＧＧＡＴＡＡＧＧ ＣＧＣＡＧＣＧＧＴＣ ＧＧＧＣＴＧＡＡＣＧ ＧＧＧＧＧＴＴＣＧＴ ＧＣＡＣＡＣＡＧＣＣ
３４５１ ＣＡＧＣＴＴＧＧＡＧ ＣＧＡＡＣＧＡＣＣＴ ＡＣＡＣＣＧＡＡＣＴ ＧＡＧＡＴＡＣＣＴＡ ＣＡＧＣＧＴＧＡＧＣ
３５０１ ＴＡＴＧＡＧＡＡＡＧ ＣＧＣＣＡＣＧＣＴＴ ＣＣＣＧＡＡＧＧＧＡ ＧＡＡＡＧＧＣＧＧＡ ＣＡＧＧＴＡＴＣＣＧ
３５５１ ＧＴＡＡＧＣＧＧＣＡ ＧＧＧＴＣＧＧＡＡＣ ＡＧＧＡＧＡＧＣＧＣ ＡＣＧＡＧＧＧＡＧＣ ＴＴＣＣＡＧＧＧＧＧ
３６０１ ＡＡＡＣＧＣＣＴＧＧ ＴＡＴＣＴＴＴＡＴＡ ＧＴＣＣＴＧＴＣＧＧ ＧＴＴＴＣＧＣＣＡＣ ＣＴＣＴＧＡＣＴＴＧ
３６５１ ＡＧＣＧＴＣＧＡＴＴ ＴＴＴＧＴＧＡＴＧＣ ＴＣＧＴＣＡＧＧＧＧ ＧＧＣＧＧＡＧＣＣＴ ＡＴＧＧＡＡＡＡＡＣ
３７０１ ＧＣＣＡＧＣＡＡＣＧ ＣＧＧＣＣＴＴＴＴＴ ＡＣＧＧＴＴＣＣＴＧ ＧＣＣＴＴＴＴＧＣＴ ＧＧＣＣＴＴＴＴＧＣ
３７５１ ＴＣＡＣＡＴＧＴＣＣ ＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣ ＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧ ＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴ ＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣ
３８０１ ＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣ ＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧ ＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧ ＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣ ＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣ
３８５１ ＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣ ＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧ ＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣ ＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡ ＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧ
３９０１ ＣＧＧＣＣＧＣＧＡＴ ＡＴＣＴＧＴＡＧＴＴ ＡＡＴＧＡＴＴＡＡＣ ＣＣＧＣＣＡＴＧＣＴ ＡＣＴＴＡＴＣＴＡＣ
３９５１ ＡＧＡＴＣＴＣＡＡＴ ＡＴＴＧＧＣＣＡＴＴ ＡＧＣＣＡＴＡＴＴＡ ＴＴＣＡＴＴＧＧＴＴ ＡＴＡＴＡＧＣＡＴＡ
４００１ ＡＡＴＣＡＡＴＡＴＴ ＧＧＣＴＡＴＴＧＧＣ ＣＡＴＴＧＣＡＴＡＣ ＧＴＴＧＴＡＴＣＴＡ ＴＡＴＣＡＴＡＡＴＡ
４０５１ ＴＧＴＡＣＡＴＴＴＡ ＴＡＴＴＧＧＣＴＣＡ ＴＧＴＣＣＡＡＴＡＴ ＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧ ＴＴＧＧＣＡＴＴＧＡ
４１０１ ＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡ ＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡ ＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴ ＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴ ＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧ
４１５１ ＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧ ＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧ ＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴ ＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴ ＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧ
４２０１ ＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣ ＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣ ＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡ ＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴ ＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴ
４２５１ ＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡ ＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧ ＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴ ＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴ ＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡ
４３０１ ＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡ ＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴ ＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡ ＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴ ＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡ
４３５１ ＧＴＣＣＧＣＣＣＣＣ ＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣ ＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡ ＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣ ＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴ
４４０１ ＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡ ＴＧＡＣＣＴＴＡＣＧ ＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴ ＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴ ＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴ
４４５１ ＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣ ＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡ ＴＧＧＴＧＡＴＧＣＧ ＧＴＴＴＴＧＧＣＡＧ ＴＡＣＡＣＣＡＡＴＧ
４５０１ ＧＧＣＧＴＧＧＡＴＡ ＧＣＧＧＴＴＴＧＡＣ ＴＣＡＣＧＧＧＧＡＴ ＴＴＣＣＡＡＧＴＣＴ ＣＣＡＣＣＣＣＡＴＴ
４５５１ ＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧ ＧＧＡＧＴＴＴＧＴＴ ＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡ ＡＡＴＣＡＡＣＧＧＧ ＡＣＴＴＴＣＣＡＡＡ
４６０１ ＡＴＧＴＣＧＴＡＡＣ ＡＡＣＴＧＣＧＡＴＣ ＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧ ＴＴＧＡＣＧＣＡＡＡ ＴＧＧＧＣＧＧＴＡＧ
４６５１ ＧＣＧＴＧＴＡＣＧＧ ＴＧＧＧＡＧＧＴＣＴ ＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧ ＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡ ＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣ
４７０１ ＡＧＡＴＣＡＣＴＡＧ ＧＣＴＡＧＣＴＡＴＴ ＧＣＧＧＴＡＧＴＴＴ ＡＴＣＡＣＡＧＴＴＡ ＡＡＴＴＧＣＴＡＡＣ
４７５１ ＧＣＡＧＴＣＡＧＴＧ ＣＴＴＣＴＧＡＣＡＣ ＡＡＣＡＧＴＣＴＣＧ ＡＡＣＴＴＡＡＧＣＴ ＧＣＡＧＴＧＡＣＴＣ
４８０１ ＴＣＴＴＡＡＧＧＴＡ ＧＣＣＴＴＧＣＡＧＡ ＡＧＴＴＧＧＴＣＧＴ ＧＡＧＧＣＡＣＴＧＧ ＧＣＡＧＧＴＡＡＧＴ
４８５１ ＡＴＣＡＡＧＧＴＴＡ ＣＡＡＧＡＣＡＧＧＴ ＴＴＡＡＧＧＡＧＡＣ ＣＡＡＴＡＧＡＡＡＣ ＴＧＧＧＣＴＴＧＴＣ
４９０１ ＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡ ＡＧＡＣＴＣＴＴＧＣ ＧＴＴＴＣＴＧＡＴＡ ＧＧＣＡＣＣＴＡＴＴ ＧＧＴＣＴＴＡＣＴＧ
４９５１ ＡＣＡＴＣＣＡＣＴＴ ＴＧＣＣＴＴＴＣＴＣ ＴＣＣＡＣＡＧＧＴＧ ＴＣＣＡＣＴＣＣＣＡ ＧＴＴＣＡＡＴＴＡＣ
５００１ ＡＧＣＴＣＴＴＡＡＧ ＧＣＴＡＧＡＧＴＡＣ ＴＴＡＡＴＡＣＧＡＣ ＴＣＡＣＴＡＴＡＧＡ ＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡ
５０５１ ＣＴＡＴＡＧＧＧＡＧ ＡＣＧＣＴＡＧＣＧＴ ＣＧＡ
ＡＡＶ２ ５’ＩＴＲ：３７７２－３８９９ ｂｐ
ＣＭＶエンハンサー：４０９３－４４７２ ｂｐ
ＣＭＶプロモーター：４４７３－４６８４ ｂｐ
β－グロビンイントロン（ヒトβ－グロビンおよび免疫グロブリン重鎖遺伝子由来のイントロンから構成されるキメライントロン）：４８４５－４９７７ ｂｐ
ハツカネズミコドン最適化ＦＧＦ２１（ｍｏＦＧＦ２１）：１６－６４８ ｂｐ
ＳＶ４０ ｐｏｌｙＡ ｓｉｇｎａｌ：７１３－８３４ ｂｐ
ＡＡＶ２ ３’ＩＴＲ：１０２１－１１４８ ｂｐ

Claims (15)

1. 中枢神経系（ＣＮＳ）障害もしくは疾患の治療および／または予防に使用するための、線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）をエンコードするヌクレオチド配列を含む遺伝子構築物。
2. ＦＧＦ２１をエンコードする前記ヌクレオチド配列が遍在性プロモーターに作動可能に連結されており、好ましくは前記遍在性プロモーターが、ＣＡＧプロモーターおよびＣＭＶプロモーターからなる群から選択される、請求項１に記載の使用のための遺伝子構築物。
3. ＦＧＦ２１の発現を防止したい組織で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列を含み、好ましくは、前記マイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列が、哺乳動物の心臓および／または肝臓で発現されるマイクロＲＮＡに結合する標的配列から選択される、請求項１または２に記載の使用のための遺伝子構築物。
4. 肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列、および心臓で発現されるマイクロＲＮＡの少なくとも１つの標的配列を含み、好ましくは心臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列が、配列番号１３および２１～２５から選択され、肝臓で発現されるマイクロＲＮＡの標的配列が、配列番号１２および１４～２０から選択され、より好ましくは、マイクロＲＮＡ－１２２ａの標的配列（配列番号１２）およびマイクロＲＮＡ－１の標的配列（配列番号１３）を含む、請求項３に記載の使用のための遺伝子構築物。
5. ＦＧＦ２１をエンコードする前記ヌクレオチド配列が、
   （ａ）配列番号１、２または３のアミノ酸配列と少なくとも６０％の配列同一性または類似性を有する配列を含むアミノ酸配列によって表されるポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列；
   （ｂ）配列番号４、５、６、７、８、９、１０または１１のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列；および
   （ｃ）遺伝暗号の縮重により、配列が（ｂ）のヌクレオチド配列の配列と異なっているヌクレオチド配列、
   からなる群から選択される、請求項１～４いずれか一項に記載の使用のための遺伝子構築物。
6. 中枢神経系（ＣＮＳ）障害または疾患の治療および／または予防に使用するための、請求項１～５のいずれか一項に記載の遺伝子構築物を含む発現ベクターであって、好ましくはウイルスベクターであり、より好ましくはアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、およびレンチウイルスベクターからなる群から選択される発現ベクター。
7. 前記発現ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクター、好ましくは血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、ｒｈ１０、ｒｈ８、Ｃｂ４、ｒｈ７４、ＤＪ、２／５、２／１、１／２またはＡｎｃ８０のアデノ随伴ウイルスベクター、より好ましくは血清型１、８または９のアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項６に記載の使用のための発現ベクター。
8. 請求項１～５のいずれか一項に記載の遺伝子構築物および／または請求項６もしくは７に記載の発現ベクターを含み、１つ以上の薬学的に許容される成分をさらに含んでもよい医薬組成物であって、中枢神経系（ＣＮＳ）障害または疾患の治療および／または予防に使用するための、医薬組成物。
9. 前記中枢神経系（ＣＮＳ）障害または疾患が、加齢および／または代謝障害もしくは疾患、好ましくは肥満症および／または糖尿病に関連し、かつ／またはそれらによって引き起こされる、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための遺伝子構築物、および／または請求項６もしくは７に記載の使用のための発現ベクター、および／または請求項８に記載の使用のための医薬組成物。
10. 前記中枢神経系（ＣＮＳ）障害または疾患が、神経炎症、神経変性、認知低下および／またはそれらに関連する疾患もしくは状態である、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のための遺伝子構築物、および／または請求項６もしくは７に記載の使用のための発現ベクター、および／または請求項８に記載の使用のための医薬組成物。
11. 神経炎症、神経変性および／または認知低下に関連し、かつ／またはそれらによって引き起こされる前記疾患または状態が、認知障害、認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、パーキンソン病、パーキンソン様疾患、パーキンソニズム、ハンチントン病、外傷性脳損傷、プリオン病、ＨＩＶ感染症による認知症／神経認知問題、加齢による認知症／神経認知問題、タウオパチー、多発性硬化症、および他の神経炎症性／神経変性疾患からなる群から選択され、好ましくはアルツハイマー病、パーキンソン病、パーキンソン様疾患およびハンチントン病からなる群から選択され、より好ましくはアルツハイマー病およびパーキンソン病からなる群から選択され、最も好ましくはアルツハイマー病から選択される、請求項１０に記載の使用のための遺伝子構築物、および／または使用のための発現ベクター、および／または使用のための医薬組成物。
12. 前記中枢神経系（ＣＮＳ）障害または疾患が、行動障害、好ましくは不安障害または抑うつ性障害である、請求項１～５いずれか一項に記載の使用のための遺伝子構築物、および／または請求項６もしくは７に記載の使用のための発現ベクター、および／または請求項８に記載の使用のための医薬組成物。
13. 前記中枢神経系（ＣＮＳ）障害または疾患が、神経筋障害であり、好ましくは前記神経筋障害が、筋機能の低下、筋力の低下、協調の低下、バランスの低下および／または機能低下であるか、またはそれに関連する、請求項１～５いずれか一項に記載の使用のための遺伝子構築物、および／または請求項６もしくは７に記載の使用のための発現ベクター、および／または請求項８に記載の使用のための医薬組成物。
14. 対象における記憶および／または学習を改善するための方法であって、請求項１～５いずれか一項に記載の遺伝子構築物、および／または請求項６もしくは７に記載の発現ベクター、および／または請求項８に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含み、好ましくは前記対象が、高齢の対象および／または代謝障害もしくは疾患、好ましくは糖尿病および／または肥満症と診断された対象である、方法。
15. 対象における筋機能、筋力、協調、バランスおよび／または機能低下を改善するための方法であって、請求項１～５いずれか一項に記載の遺伝子構築物、および／または請求項６もしくは７に記載の発現ベクター、および／または請求項８に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含み、好ましくは前記対象が、高齢の対象および／または代謝障害もしくは疾患、好ましくは糖尿病および／または肥満症と診断された対象である、方法。

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