JP2024012440A - 蝸牛および前庭細胞に核酸を送達するための組成物および方法 - Google Patents

Abstract

【課題】核酸を蝸牛及び前庭細胞に効率的に送達するための物質および方法、ならびに遺伝子異常と関連する感覚トランスダクション障害を治療する方法を提供する。【解決手段】アミノ酸配列：ＴＬＡＶＰＦＫを含むカプシドと、ＴＭＣ１、ＴＭＣ２、ＭＹＯ７Ａ、ＵＳＣＨ１Ｃ、ＣＤＨ２３、ＰＣＤＨ１５、ＳＡＮＳ、ＣＩＢ２、ＵＳＨ２Ａ、ＶＬＧＲ１、ＷＨＲＮ、ＣＬＲＮ１、ＰＤＺＤ７、ＫＣＮＱ４、ＴＭＰＲＳＳ３、ＳＴＲＣ、ＥＹＡ４、ハーモニンａ、ｂ及びｃ、ＯＴＯＦ、ＧＰＲ９８、ＭＹＯ６、ＭＹＯ１５ａ、ＬＯＸＨＤ１、ＰＯＵ３Ｆ４、ＥＹＡ１、ＷＦＳ１、ＡＣＴＧ１、ＴＭＩＥ等からなる群より選択されるポリペプチドとをコードする、ＡＡＶベクター、特にＡＡＶ９－ｐｈｐ．Ｂベクターならびにそのベクターを、聴覚および／または前庭メカノセンセーションに遺伝子異常を有する対象の内耳に投与し、それによって対象を治療する方法を提供する。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本特許出願は、その全内容が参照により本明細書に組み入れられる、以下2018年3月5日に出願された米国特許仮出願第62/638,697号の恩典を主張する。

背景
遺伝性難聴は、人工内耳以外に治療選択肢が少ない深刻な障害である。遺伝性聴力障害は、多くの場合、単一遺伝子異常によるものである。言語習得前難聴は乳児の1/500において診断され、そのうち約50％が遺伝的病因を有する。それぞれが多数の異なる遺伝子のいずれかの変異によって生じ得る多数の異なる臨床サブタイプと関連するアッシャー症候群が、幼児期難聴の3～6％の原因とされている。すべての遺伝性難聴の1～2％であると推定される、より一般的な遺伝子異常の1つがTMC1遺伝子において発生する。アッシャー症候群のもっとも重篤な形態であるUSH1は、6つの遺伝子：USH1、MYO7A（ミオシン7a）、USH1C（harmonin「ハーモニン」）、CDH23（カドヘリン23）、PCDH15（プロトカドヘリン15）、SANS（sans；USH1Gとも知られる）、およびCIB2（カルシウムおよびインテグリン結合タンパク質2）の異常と関連する。

内耳、たとえば蝸牛、特に蝸牛中の内有毛細胞および外有毛細胞（IHCおよびOHC）は、様々な病因の聴力喪失および難聴、とりわけ、一遺伝子形態の遺伝性難聴に介入するためのポリヌクレオチド治療法にとって魅力的な標的である。しかし、IHCおよびOHCならびに遺伝子治療法に関連し得る他の内耳細胞を効率的に標的とし、形質導入することは難題であった。

概要
本発明は、関心対象のポリペプチド（たとえばTMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C（たとえばハーモニンa、bまたはc）、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4およびFAM65B）をコードする導入遺伝子を含むAAV9-php.bベクターならびにそのベクターを、聴覚および／または前庭メカノセンセーションに遺伝子異常を有する対象の内耳に投与し、それによって対象を治療する方法を提供する。

本発明は、少なくとも部分的に、AAV9-php.b-CMV-GFP（AAV-php.b-CMV-GFPとも呼ばれる）が、インビボで、内および外有毛細胞を含む内耳の感覚細胞を効率的かつ特異的に標的とするという発見に基づく。

1つの局面において、本発明は、ミオシン7a、ハーモニン（たとえばハーモニンa、ハーモニンbまたはハーモニンc）、カドヘリン23、プロトカドヘリン15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANSおよびカルシウムおよびインテグリン結合タンパク質2または本明細書に記載される任意の他のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するAAV9-php.bベクターを提供する。

別の局面において、本発明は、AAV9-php.bとで少なくとも約85％の配列同一性を有するカプシドをコードし、ヒトTMC1ポリヌクレオチドの発現を指示するプロモーターを含有するAAV9-php.bベクターを提供する。

別の局面において、本発明は、下流ポリヌクレオチドの発現を指示するEspinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターまたはTMHS（LHFPL5）プロモーターであるプロモーターを含有するAAV9-php.bベクターを提供する。

別の局面において、本発明は、前記局面のAAV9-php.bベクターを含有する細胞を提供する。

別の局面において、本発明は、対象の内耳中でポリペプチドを発現させる方法を提供し、本方法は、内耳の細胞を、関心対象のポリペプチドをコードするAAV9-php.bベクターと接触させる工程を含み、AAV9-php.bベクターは、内および外有毛細胞の少なくとも約85、90、95％またはより多くをトランスフェクトする。

別の局面において、本発明は、対象の内耳中でポリペプチドを発現させる方法を提供し、本方法は、内耳の細胞を、関心対象のヒトポリペプチドをコードするAAV9-php.bベクターと接触させる工程を含む。

別の局面において、本発明は、対象における遺伝子異常と関連する内耳障害を治療する方法を提供し、本方法は、対象の細胞をAAV9-php.bベクターと接触させる工程を含み、ベクターは、ミオシン7a、ハーモニン、カドヘリン23、プロトカドヘリン15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANSおよびカルシウムおよびインテグリン結合タンパク質2のいずれか1つまたは複数をコードするポリヌクレオチドを含有する。

別の局面において、本発明は、対象における遺伝子異常と関連する内耳障害を治療する方法を提供し、本方法は、対象の細胞をAAV9-php.bベクターと接触させる工程を含み、ベクターは、Espinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターおよびTMHS（LHFPL5）プロモーターのいずれかであるプロモーターを含有する。

別の局面において、本発明は、対象における遺伝子異常と関連する内耳障害を治療する方法を提供し、本方法は、対象の細胞をAAV9-php.bベクターと接触させる工程を含み、ベクターは、AAV9-php.bとで少なくとも約85％の配列同一性を有するカプシドをコードし、ミオシン7a、ハーモニン、カドヘリン23、プロトカドヘリン15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANSおよびカルシウムまたはインテグリン結合タンパク質2であるUSH1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに機能的に連結したプロモーターを含有する。

本明細書に記載される発明の上記局面または任意の他の局面の様々な態様において、内耳障害とは、内耳中に発現するポリペプチドの遺伝子変異と関連する遺伝性疾患である。他の態様において、遺伝子異常は、部分的聴力損失、完全聴覚消失または部分的もしくは完全な前庭機能不全と関連する。上記局面の他の態様において、プロモーターは、Espinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターおよびTMHS（LHFPL5）プロモーターのいずれか1つまたは複数である。上記局面の他の態様において、ベクターは、内および外有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節を少なくとも約70％またはより高い効率で形質導入する。上記局面の他の態様において、ハーモニンポリペプチドは、ハーモニンa、ハーモニンbまたはハーモニンcである。上記局面の他の態様において、細胞は外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節である。上記局面の他の態様において、ベクターは、下流ポリヌクレオチドの発現を指示するプロモーターを含有し、プロモーターは、Espinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターまたはTMHS（LHFPL5）プロモーターである。上記局面の他の態様において、下流ポリヌクレオチドは、TMC1、TMC2または、ミオシン7a、ハーモニン、カドヘリン23、プロトカドヘリン15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANSおよびカルシウムまたはインテグリン結合タンパク質2あるUSH1ポリペプチドである。上記局面の特定の態様において、ハーモニンポリペプチドはハーモニンa、ハーモニンbまたはハーモニンcである。上記局面の他の態様において、AAV9-php.bベクターは、少なくとも約70％、80％、90％、95％またはより高い効率、さらには100％の効率で、内および外有毛細胞を標的とする。上記局面の他の態様において、ヒトポリペプチドはTMC1、TMC2、ハーモニンa、ハーモニンbまたはハーモニンcである。上記局面の他の態様において、内耳障害は聴覚障害または前庭障害である。他の態様において、ベクターの投与は、対象における聴覚および／または前庭機能を改善または維持する。いくつかの態様において、改善または維持される聴覚および／または前庭機能は、毛束形態の保存および／またはメカノトランスダクションの回復と関連する。上記局面の他の態様において、内耳障害はアッシャー症候群である。

定義
別段の定めがない限り、本明細書において使用されるすべての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味を有する。以下の参考文献が、本発明において使用される用語の多くの一般的定義を当業者に提供する：Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994)；The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988)；The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al. (eds.), Springer Vcrlag (1991)およびHale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991)。本明細書において使用される以下の用語は、別段の指定がない限り、以下それらに与えられる意味を有する。

「AAV9-php.bベクター」とは、内耳の細胞をトランスフェクトするAAV9-php.bポリヌクレオチドまたはその断片を含むウイルスベクターをいう。1つの態様において、AAV9-php.bベクターは、対象の内耳への投与または内耳由来の細胞とのインビトロでの接触ののち、内有毛細胞の少なくとも70％および外有毛細胞の少なくとも70％をトランスフェクトする。他の態様においては、内有毛細胞の少なくとも85％、90％、95％または事実上100％および／または外有毛細胞の少なくとも85％、90％、95％または事実上100％がトランスフェクトされる。トランスフェクション効率は、マウスモデルにおいてGFPをコードする遺伝子を使用して評価され得る。例示的なAAV9-php.bベクターの配列を以下に提供する。

「メカノセンセーション」とは、機械的刺激に対する反応をいう。触覚、聴覚および平衡が、機械的刺激から神経シグナルへの変換の例である。メカノセンセーション入力は、「メカノトランスダクション」と呼ばれるプロセスを通して、機械的刺激に対する反応へと変換される。

「ミオシン6（Myo6）プロモーター」とは、外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節中で下流ポリヌクレオチドの発現を指示するのに十分な核酸配列を含み、またはそれからなり、以下のヌクレオチド配列とで少なくとも約85％の配列同一性を有する調節ポリヌクレオチド配列をいう。

「ミオシン7A（Myo7A）プロモーター」とは、外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節中で下流ポリヌクレオチドの発現を指示するのに十分な核酸配列を含み、またはそれからなり、以下のヌクレオチド配列とで少なくとも約85％の配列同一性を有する調節ポリヌクレオチド配列をいう。

「TMC1ポリペプチド」とは、メカノトランスダクションチャネル活性を有する、NCBI Reference Sequence: NP_619636.2に対して少なくとも約85％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片をいう。TMC1の例示的アミノ酸配列を以下に提供する。

「TMC1ポリヌクレオチド」とは、TMC1ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをいう。例示的なTMC1ポリヌクレオチドの配列が、以下に再現されるNCBI Reference Sequence: NM_138691.2に提供されている。

「TMC2ポリペプチド」とは、メカノセンセーションにおいて機能する、NCBI Reference Sequence: NP_542789に対して少なくとも約85％以上のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片をいう。TMC2の例示的アミノ酸配列を以下に提供する。

「TMC2ポリヌクレオチド」とは、、TMC2ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをいう。例示的なポリヌクレオチド配列を以下に提供する。

「ハーモニン」ポリペプチドとは、メカノセンセーションにおいて機能するまたはUSH1C、USH1G、CDH23、およびMYO7Aのいずれか1つもしくは複数と相互作用する、Q9Y6N9-1（アイソフォーム1）、Q9Y6N9-2、Q9Y6N9-3、Q9Y6N9-4、Q9Y6N9-5に対して少なくとも約85％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片をいう。例示的なハーモニンaポリペプチド（アイソフォーム1）の配列を以下に提供する。
＞sp|Q9Y6N9|USH1C_ヒトハーモニン OS=ホモサピエンス GN=USH1C PE=1 SV=3

「Ush1Cポリヌクレオチド」とは、ハーモニンポリペプチドをコードする核酸分子をいう。例示的なUsh1CポリヌクレオチドNM_005709の配列を以下に提供する。

他の例示的なハーモニン配列を以下に提供する。
ハーモニンB
＞XM 011519832.2 予測：ホモサピエンスUSH1タンパク質ネットワーク成分ハーモニン（USH1C）、転写産物変異体X3、mRNA

ハーモニンBポリペプチド

ハーモニンC
＞NM 001297764.1 ホモサピエンスUSH1タンパク質ネットワーク成分ハーモニン（USH1C）、転写産物変異体3、mRNA

ハーモニンCポリペプチド

「KCNQ4ポリペプチド」とは、カリウム電圧ゲートチャネル活性を有する、NP_004691.2とで少なくとも約85％の同一性を有するポリペプチドまたはその断片をいう。例示的なアミノ酸配列がNP_004691.2に提供され、その配列を以下に記す。

KCNQ4ポリヌクレオチドとは、KCNQ4ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをいう。例示的なKCNQ4ポリヌクレオチド配列がNM_004700に提供され、以下のように再現される。

「KCNQ4プロモーター」とは、外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節中で下流ポリヌクレオチドの発現を指示するのに十分な核酸配列を含み、またはそれからなり、以下のヌクレオチド配列とで少なくとも約85％のヌクレオチド配列同一性を有する調節ポリヌクレオチド配列をいう。

「TMPRSS3ポリペプチド」とは、プロテアーゼ活性を有する、NP_001243246とで少なくとも約85％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質またはその断片をいう。例示的なTMPRSS3配列を以下に記す。
膜貫通型プロテアーゼセリン3アイソフォーム4［ホモサピエンス］
NCBI Reference Sequence: NP_001243246.1
＞NP_001243246.1 膜貫通型プロテアーゼセリン3アイソフォーム4［ホモサピエンス］

「TMPRSS3ポリヌクレオチド」とは、TMPRSS3ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをいう。例示的なTMPRSS3配列がNCBI NM_001256317に提供され、以下のように再現される。
＞NM_001256317.1 ホモサピエンス膜貫通型セリンプロテアーゼセリン3（TMPRSS3）、トランスクリプトバリアントF、mRNA

「STRCポリペプチド」とは、内耳中の毛束と会合する、NP_714544とで少なくとも約85％のアミノ酸配列同一性を有するタンパク質またはその断片をいう。例示的なSTRCアミノ酸配列を以下に記す。

「STRCポリヌクレオチド」とは、STRCポリペプチドをコードする核酸分子をいう。例示的なSTRCポリヌクレオチド配列を以下に記す。
＞NM_153700.2 ホモサピエンスステレオシリン（STRC）、mRNA

「EYA4ポリペプチド」とは、転写調節活性を有する、NP_001287941.1とで少なくとも約85％の同一性を有するタンパク質またはその断片をいう。
＞NP_001287941.1 eyes absent homolog 4アイソフォームe［ホモサピエンス］

「EYA4ポリヌクレオチド」とは、EYA4ポリペプチドをコードする核酸分子をいう。例示的なEYA4ポリヌクレオチド配列がNCBI Ref: NM_001301012.1に提供され、以下のように再現される。
＞NM_001301012.1 ホモサピエンスEYA転写コアクチベータおよびホスファターゼ4（EYA4）、トランスクリプトバリアント5、mRNA

「Espinプロモーター」とは、外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節中で下流ポリヌクレオチドの発現を指示するのに十分である、NCBI Reference Sequence: NG_015866.1に由来する調節ポリヌクレオチド配列をいう。1つの態様において、Espinプロモーターは、Espinコード配列の上流の少なくとも約350、500、1000、2000、3000、4000、5000またはより多くの塩基対を含む、またはそれらからなる。

「プロトカドヘリン関連15（PCDH15）プロモーター」とは、外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節中で下流ポリヌクレオチドの発現を指示するのに十分である、NCBI Reference Sequence: NG_009191に由来する調節ポリヌクレオチド配列をいう。1つの態様において、PCDH15プロモーターは、PCDH15コード配列の上流の少なくとも約350、500、1000、2000、3000、4000、5000またはより多くの塩基対を含む。いくつかの態様において、PCDH15プロモーターは、以下のヌクレオチド配列とで少なくとも約85％の配列同一性を有する核酸配列を含む、またはそれからなる。

「タンパク質チロシンホスファターゼ受容体タイプQ（PTPRQ）プロモーター」とは、外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節中で下流ポリヌクレオチドの発現を指示するのに十分である、GeneID: 374462に由来する調節ポリヌクレオチド配列をいう。1つの態様において、PTPRQプロモーターは、PTPRQコード配列の上流の少なくとも約350、500、1000、2000、3000、4000、5000またはより多くの塩基対を含む。いくつかの態様において、PTPRQプロモーターは、以下のヌクレオチド配列とで少なくとも約85％の配列同一性を有する核酸配列を含む、またはそれからなる。

「脂肪腫HMGIC融合パートナ様5（LHFPL5）プロモーター」（「TMHSプロモーター」とも呼ばれる）とは、外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節中で下流ポリヌクレオチドの発現を指示するのに十分である、NCBI Reference Sequence: GeneID: 222662に由来する調節ポリヌクレオチド配列をいう。1つの態様において、TMHSプロモーターは、PCDH15コード配列の上流の少なくとも約350、500、1000、2000、3000、4000、5000またはより多くの塩基対を含む。いくつかの態様において、TMHSプロモーターは、以下のヌクレオチド配列とで少なくとも約85％の配列同一性を有する核酸配列を含む、またはそれからなる。

「シナプシンプロモーター」（「Synプロモーター」とも呼ばれる）とは、外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節または前庭神経節中で下流ポリヌクレオチドの発現を指示するのに十分な核酸配列を含み、またはそれらからなり、以下のヌクレオチド配列とで少なくとも約85％の配列同一性を有する調節ポリヌクレオチド配列をいう。

「作用物質」とは、ポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは小さな化合物をいう。

「改善する」とは、疾患または障害の発症または進行を低下させる、抑制する、弱める、減らす、阻止する、または安定化することをいう。

「変性」とは、本明細書に記載されるものなどの標準的な既知の方法によって検出される、遺伝子またはポリペプチドの発現レベルまたは活性の変化（増減）をいう。本明細書において使用される変性は、発現レベルの10％の変化、好ましくは発現レベルの25％の変化、より好ましくは40％の変化、もっとも好ましくは50％以上の変化を含む。

本開示において、「含む」、「含み」、「含有し」、および「有し」などは、米国特許法においてそれらに与えられる意味を有することができ、「含む」、「含み」などを意味することができ；「から本質的になり」または「から本質的になる」などは、米国特許法において与えられる意味を有し、この用語は開放型であり、記載されるもの以外の存在によって記載されるものの基本的または新規な特徴が変わることがない限り、記載されるもの以外の存在をも許すが、従来技術態様を除外する。

「検出する」とは、検出されるべき分析対象物の存在、非存在または量を識別することをいう。

「疾患」とは、細胞、組織、または器官の正常な機能を損傷または妨害する任意の状態または障害をいう。疾患の例は、たとえば対象の内耳中に発現する、メカノセンセーショントランスダクションにおいて機能するタンパク質中の機能の損失を特徴とする遺伝子疾患を含む。別の態様において、疾患はアッシャー症候群（たとえばUSH1）または加齢性聴力喪失である。1つの態様において、疾患は、遺伝子異常、たとえばTMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C（たとえばハーモニンa、b、またはc）、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4、およびFAM65Bの異常と関連する聴覚障害である。

「有効量」とは、未処置の患者に対して疾患の症状を改善するために必要な作用物質の量をいう。疾患の治療処置のために本発明を実施するために使用される活性物質の有効量は、投与方法、対象の年齢、体重および健康状態に依存して異なる。最終的には、主治医または獣医が適切な量および用法・用量を決定する。そのような量が「有効量」と呼ばれる。

「断片」とは、ポリペプチドまたは核酸分子の一部分をいう。この部分は、好ましくは、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、または90％を含む。断片は、10、20、30、40、50、60、70、80、90または100、200、300、400、500、600、700、800、900、または1000のヌクレオチドまたはアミノ酸を含有し得る。

「ハイブリダイゼーション」とは、相補的核酸塩基間の、ワトソン・クリック型、フーグスティーン型または逆フーグスティーン型水素結合であり得る水素結合をいう。たとえば、アデニンとチミンが、水素結合の形成を通して対を成す相補的核酸塩基である。

用語「単離された」、「精製された」、または「生物学的に高純度の」とは、自然な状態で見いだされたとき通常それに付随する成分を様々な程度に含まない物質をいう。「単離」とは、供給源または周囲からのある程度の分離を指す。

「精製」とは、単離よりも高い程度の分離を指す。「精製された」または「生物学的に高純度の」タンパク質は、任意の不純物がタンパク質の生物学的性質に実質的に影響しない、または他の有害な結果を生じさせない程度に十分に、他の物質を含まない。すなわち、本発明の核酸またはペプチドは、組換えDNA技術によって産生される場合、細胞物質、ウイルス物質、または培地を実質的に含まないならば、または化学合成される場合、化学的前駆体または他の薬品を含まないならば、精製されている。純度および均一性は通常は、分析化学技術、たとえばポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液クロマトグラフィーを使用して測定される。用語「精製された」は、電気泳動ゲル中で核酸またはタンパク質が本質的に1つのバンドしか生じさせないことを指すことができる。修飾、たとえばリン酸化またはグリコシル化に付されることができるタンパク質の場合、様々な修飾によって、別々に精製され得る様々な単離されたタンパク質が生じ得る。

「単離されたポリヌクレオチド」とは、本発明の核酸分子が由来する生物の天然ゲノム中で当該遺伝子に隣接する遺伝子を含まない核酸（たとえばDNA）をいう。したがって、この語は、たとえば、ベクターに組み込まれている組換えDNA；自律複製性プラスミドもしくはウイルスに組み込まれている組換えDNA；原核生物もしくは真核生物のゲノムDNAに組み込まれている組換えDNA；または他の配列から独立した別個の分子（たとえば、PCRまたは制限エンドヌクレアーゼ消化によって産生されたcDNAまたはゲノムもしくcDNA断片）として存在する組換えDNAを含む。加えて、この用語は、DNA分子から転写されるRNA分子およびさらなるポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えDNAを含む。

「単離されたポリペプチド」とは、自然にはそれに付随する成分から分離されている本発明のポリペプチドをいう。概して、ポリペプチドは、少なくとも60重量％が、天然においてそれが会合しているタンパク質および天然の有機分子を含まないとき、単離されている。好ましくは、調製物は、少なくとも75％、より好ましくは少なくとも90％、もっとも好ましくは少なくとも99％が本発明のポリペプチドである。本発明の単離されたポリペプチドは、たとえば、天然の供給源からの抽出によって、そのようなポリペプチドをコードする組換え核酸の発現によって；または、タンパク質の化学合成によって、得られ得る。純度は、任意の適切な方法、たとえばカラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはHPLC分析によって計測することができる。

「マーカー」とは、疾患または障害と関連して発現レベルまたは活性の変化を示す任意のタンパク質またはポリヌクレオチドをいう。

本明細書において使用される「作用物質を得る」におけるような「得る」は、作用物質を合成する、購入する、または他のやり方で取得することを含む。

「プロモーター」とは、下流ポリヌクレオチドの転写を誘導するのに十分なポリヌクレオチドをいう。

「減少する」または「増加する」とは、少なくとも10％、25％、50％、75％、または100％の負または正の変化をいう。

「参照」とは、標準または対照条件をいう。

「参照配列」とは、配列比較のベースとして使用される規定の配列である。参照配列は、指定された配列のサブセットまたは全体；たとえば完全長cDNAもしくは遺伝子配列のセグメントまたは完全なcDNAもしく遺伝子配列であり得る。ポリペプチドの場合、参照ポリペプチド配列の長さは概して、少なくとも約16アミノ酸、好ましくは少なくとも約20アミノ酸、より好ましくは少なくとも約25アミノ酸、さらに好ましくは約35アミノ酸、約50アミノ酸、または約100アミノ酸である。核酸の場合、参照核酸配列の長さは概して、少なくとも約50ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約60ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約75ヌクレオチド、さらに好ましくは約100ヌクレオチドまたは約300ヌクレオチドまたはそれらの周辺もしくは間の任意の整数である。

本発明の方法に有用な核酸分子は、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子を含む。そのような核酸分子は、内在性核酸配列に対して100％同一である必要はないが、概して実質的な同一性を示す。内在性配列に対して「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは概して、二本鎖核酸分子の少なくとも1つの鎖とハイブリダイズすることができる。本発明の方法に有用な核酸分子は、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子を含む。そのような核酸分子は、内在性核酸配列に対して100％同一である必要はないが、概して実質的な同一性を示す。内在性配列に対して「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは概して、二本鎖核酸分子の少なくとも1つの鎖とハイブリダイズすることができる。

「ハイブリダイズする」とは、様々なストリンジェンシーの条件下、相補的ポリヌクレオチド配列（たとえば、本明細書に記載される遺伝子）間でまたはその部分の間で二本鎖分子を形成するために対を成すことをいう（たとえば、Wahl, G. M. and S. L. Berger (1987) Methods Enzymol. 152:399；Kimmel, A. R. (1987) Methods Enzymol. 152:507を参照）。

たとえば、ストリンジェントな塩濃度は通常、約750mM NaClおよび75mMクエン酸三ナトリウム未満、好ましくは約500mM NaClおよび50mMクエン酸三ナトリウム未満、より好ましくは約250mM NaClおよび25mMクエン酸三ナトリウム未満である。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、有機溶媒、たとえばホルムアミドの非存在において得ることができ、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約35％ホルムアミド、より好ましくは少なくとも約50％ホルムアミドの存在において得ることができる。ストリンジェントな温度条件は通常、少なくとも約30℃、より好ましくは少なくとも約37℃、もっとも好ましくは少なくとも約42℃の温度を含む。様々なさらなるパラメータ、たとえばハイブリダイゼーション時間、洗浄剤、たとえばドデシル硫酸ナトリウム（SDS）の濃度およびキャリヤDNAの包含または非包含が当業者に周知である。これら様々な条件を必要に応じて組み合わせることにより、様々なレベルのストリンジェンシーが達成される。好ましい態様において、ハイブリダイゼーションは、750mM NaCl、75mMクエン酸三ナトリウムおよび1％SDS中、30℃で実施される。より好ましい態様において、ハイブリダイゼーションは、500mM NaCl、50mMクエン酸三ナトリウム、1％SDS、35％ホルムアミドおよび100μg/ml変性サケ精子DNA（ssDNA）中、37℃で実施される。もっとも好ましい態様において、ハイブリダイゼーションは、250mM NaCl、25mMクエン酸三ナトリウム、1％SDS、50％ホルムアミドおよび200μg/ml ssDNA中、42℃で実施される。これらの条件に対する有用な変更が当業者には容易に理解されよう。

大部分の応用の場合、ハイブリダイゼーションに続く洗浄工程もまた、ストリンジェンシーにおいて異なる。洗浄ストリンジェンシー条件は、塩濃度および温度によって決めることができる。上記のように、洗浄ストリンジェンシーは、塩濃度を下げることによって、または温度を上げることによって、高めることができる。たとえば、洗浄工程のためのストリンジェントな塩濃度は、好ましくは、約30mM NaClおよび3mMクエン酸三ナトリウム未満であり、もっとも好ましくは、約15mM NaClおよび1.5mMクエン酸三ナトリウム未満であろう。洗浄工程のためのストリンジェントな温度条件は通常、少なくとも約25℃、より好ましくは少なくとも約42℃、さらに好ましくは少なくとも約68℃を含む。好ましい態様において、洗浄工程は、30mM NaCl、3mMクエン酸三ナトリウムおよび0.1％SDS中、25℃で実施される。より好ましい態様において、洗浄工程は、15mM NaCl、1.5mMクエン酸三ナトリウムおよび0.1％SDS中、42℃で実施される。より好ましい態様において、洗浄工程は、15mM NaCl、1.5mMクエン酸三ナトリウムおよび0.1％SDS中、68℃で実施される。これらの条件に対するさらなる変更が当業者には容易に理解されよう。ハイブリダイゼーション技術は当業者に周知であり、たとえば、Benton and Davis（Science 196:180, 1977）；Grunstein and Hogness（Proc. Natl. Acad. Sci., USA 72:3961, 1975)；Ausubel et al.（Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, 2001）；Berger and Kimmel（Guide to Molecular Cloning Techniques, 1987, Academic Press, New York）およびSambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New Yorkに記載されている。

「実質的に同一」とは、ポリペプチドまたは核酸分子が参照アミノ酸配列（たとえば、本明細書に記載されるアミノ酸配列のいずれか1つ）または核酸配列（たとえば、本明細書に記載される核酸配列のいずれか1つ）に対して少なくとも50％の同一性を示すことをいう。好ましくは、そのような配列は、比較に使用される配列に対してアミノ酸レベルまたは核酸において少なくとも60％、より好ましくは80％または85％、より好ましくは90％、95％、または99％同一である。

配列同一性は一般的に、配列分析ソフトウェア（たとえば、Sequence Analysis Software Package of the Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705、BLAST、BESTFIT、GAPまたはPILEUP/PRETTYBOXプログラム）を使用して計測される。そのようなソフトウェアは、様々な置換、欠失および／または他の修飾にホモロジー度を割り当てることにより、同一または類似の配列をマッチさせる。保存的置換は一般的に以下のグループ内の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リシン、アルギニンおよびフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を測定するための例示的手法においてはBLASTプログラムが使用され得、e^-3～e^-100の間の確率スコアが、密接に関連する配列を示す。

「対象」とは、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、たとえばウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、またはネコをはじめとする哺乳動物をいう。

「導入遺伝子」とは、作為的に細胞に挿入され、その細胞から発生する生物のゲノムの一部となるDNAの任意のピースをいう。そのような導入遺伝子は、トランスジェニック生物にとって部分的または完全に異種（すなわち外因性）である遺伝子を含み得る、または生物の内在性遺伝子に相同な遺伝子を表し得る。

本明細書に提供される範囲は、範囲内の値のすべてのための省略表現であると理解されよう。たとえば、1～50の範囲は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、または50からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分範囲を含むことが理解されよう。

本明細書において使用される用語「治療する」、「治療」などは、障害および／またはそれに伴う症状を軽減または改善することをいう。障害または状態の治療は、障害、状態またはそれに伴う症状が完全に解消されることを要求しない（除外はされないが）ということが理解されよう。

具体的に述べられない、または文脈から明白でない限り、本明細書において使用される用語「または」は包括的であると理解されよう。具体的に述べられない、または文脈から明白でない限り、「1つの」、「ある」、および「その」は単数でも複数でもあるということが理解されよう。

具体的に述べられない、または文脈から明白でない限り、本明細書において使用される用語「約」は、当技術分野における通常の許容範囲内、たとえば平均値の2標準偏差内と理解されよう。「約」は、述べられた値の10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、または0.01％以内と理解することができる。そうでないことが文脈から明白でない限り、本明細書に提供されるすべての数値は用語「約」によって修飾される。

本明細書における変数の任意の定義における化学的グループのリストの記載は、任意の1つのグループまたはリストされたグループの組み合わせとしての当該変数の定義を含む。本明細書における変数または局面に関する態様の記載は、任意の1つの態様としての当該態様または任意の他の態様もしくはその部分との組み合わせとしての当該態様を含む。

本明細書に提供される任意の組成物または方法は、本明細書に提供される他の組成物および方法のいずれの1つまたは複数と組み合わされることができる。

別段の定めがない限り、本明細書において使用されるすべての科学技術用語は、方法および物質組成が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等である方法および材料を方法および物質組成の実施または試験に使用することもできるが、適当な方法および材料が本明細書に記載される。加えて、材料、方法および例は例示でしかなく、限定的であることを意図したものではない。本明細書において挙げられるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は全体として参照により本明細書に組み入れられる。
[本発明1001]
アミノ酸配列：TLAVPFKを含むカプシドと、TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、ハーモニンa、bおよびc、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4、ならびにFAM65Bからなる群より選択されるポリペプチドとをコードする、AAVベクター。
[本発明1002]
TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、ハーモニンa、bおよびc、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4、ならびにFAM65Bからなる群より選択されるポリペプチドをコードする、AAV9-php.bベクター。
[本発明1003]
Espinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーター、およびTMHS（LHFPL5）プロモーターからなる群より選択されるプロモーターをさらに含む、本発明1001または1002のベクター。
[本発明1004]
内および外有毛細胞を少なくとも約70％またはより高い効率で形質導入する、本発明1001のAAV9-php.bベクター。
[本発明1005]
本発明1001のAAV9-php.bベクターを含む細胞。
[本発明1006]
外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節、または前庭神経節である、本発明1005の細胞。
[本発明1007]
対象における遺伝子異常と関連する内耳障害を治療する方法であって、該対象の細胞を本発明1001または1002のAAVベクターと接触させる工程を含む、方法。
[本発明1008]
内耳障害がアッシャー症候群である、本発明1007の方法。
[本発明1009]
対象における聴覚および／または前庭機能を増強、改善、または維持する、本発明1007の方法。
[本発明1010]
欠陥を有する対象に欠陥遺伝子の野生型形態を導入するための方法であって、該対象の細胞を本発明1001または1002のAAVベクターと接触させる工程を含む、方法。
[本発明1011]
対象におけるアッシャー症候群を治療する方法であって、該対象の細胞をAAV9-php.bベクターと接触させる工程を含み、該ベクターが、Espinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーター、およびTMHS（LHFPL5）プロモーターからなる群より選択されるプロモーターを含み、該プロモーターが、ミオシン7a、ハーモニン、カドヘリン23、プロトカドヘリン15、USH2A、ADGRV1/VLGR1/GPR98、WHRN、CLRN1、HARS、SANS、およびカルシウムおよびインテグリン結合タンパク質2からなる群より選択されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現を指示する、方法。
[本発明1012]
対象における遺伝子異常を治療する方法であって、該対象の細胞をAAV9-php.bベクターと接触させる工程を含み、該ベクターが、Espinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーター、およびTMHS（LHFPL5）プロモーターからなる群より選択されるプロモーターを含み、該プロモーターが、TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、ハーモニンa、bおよびc、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4、ならびにFAM65Bをコードするポリヌクレオチドの発現を指示する、方法。
[本発明1013]
細胞が内耳の細胞である、本発明1011または1012の方法。
[本発明1014]
投与が対象における聴覚および／または前庭機能を改善または維持する、本発明1011または1012の方法。
[本発明1015]
遺伝子異常が、部分的聴力損失、完全聴覚消失、または部分的もしくは完全な前庭機能不全と関連する、本発明1011または1012の方法。
[本発明1016]
聴覚機能の増強が、毛束形態の保存および／またはメカノトランスダクションの回復と関連する、本発明1014の方法。
[本発明1017]
対象における外もしくは内有毛細胞、前庭有毛細胞、らせん神経節、または前庭神経節を形質導入する方法であって、ベクターを該対象の卵形嚢に注入する工程を含む、方法。
[本発明1018]
ベクターが本発明1001～1004のいずれかのベクターである、本発明1017の方法。

AAV9-PHP.B CMV-GFPを形質導入された感覚有毛細胞を示す。左パネルは、AAV9-PHP.B CMV-GFPを形質導入され、ファロイジン赤で染色された感覚有毛細胞の画像である。右パネルは、内有毛細胞の100％がベクターを吸収し、緑色蛍光タンパク質（GFP）に関して陽性であったことを示す、AAV9-PHP.B CMV-GFPを形質導入された感覚有毛細胞の画像である。 異なるマウスおよび注入からAAV9-PHP.B CMV-GFPを形質導入された有毛細胞の画像である。内有毛細胞の100％および外有毛細胞の100％が形質導入され、GFP陽性である。GFPを発現する他の細胞は非常に少ない。4匹のマウスの内耳に注入を実施した。4匹のマウスのうち3匹は、以下、本明細書に記載される発現に類似する発現を示し、感覚有毛細胞の100％が形質導入された。4匹目が図1に示されている。 異なるマウスからの高倍率画像を示す。この場合、組織を、Myo7aで染色して有毛細胞細胞体を強調し（青）、ファロイジンで染色して毛束を染色した（赤）。上パネルは、3つすべてのカラーチャネルの組み合わせを示す。中間パネルは、内有毛細胞の100％が形質導入され、外有毛細胞の100％が形質導入されたGFP（緑）発現を示す。下パネルはMyo7aおよびファロイジンを示す。 マウスを形質導入するために使用された注入部位を示す内耳のイラストである。「P0-P4」および「>P5」は、それぞれ、ポストヒアリングステージP0～P4での注入およびP5よりも後のポストヒアリングステージでの注入を指す。 図5A～5Dは、Anc80-Cmv-eGFPの卵形嚢および正円窓膜（RWM）注入を比較する。図5Aは、P1で卵形嚢注入によってAAV2/Anc80L65-GFPを形質導入された蝸牛頂の共焦点画像である。 図5A～5Dは、Anc80-Cmv-eGFPの卵形嚢および正円窓膜（RWM）注入を比較する。図5Bは、P1でRWM注入によってAAV2/Anc80L65-GFPを形質導入された蝸牛頂の共焦点画像である。図5Aのスケールバーは図5Bにも適用され、0.2mmを表す。 図5A～5Dは、Anc80-Cmv-eGFPの卵形嚢および正円窓膜（RWM）注入を比較する。図5Cは、P1で卵形嚢およびRWM注入によってAnc80-GFPを形質導入された蝸牛の頂端（上行）、中間（中間行）および基底（下行）領域からの一連の高倍率（630×）共焦点画像である。上行に示すスケールバーは20μmを表す。 図5A～5Dは、Anc80-Cmv-eGFPの卵形嚢および正円窓膜（RWM）注入を比較する。図5Dは、卵形嚢（左）およびRWM（右）注入後の画像断面からのeGFP陽性内有毛細胞（IHC）および外有毛細胞（OHC）の割合のグラフ比較である。 図6A～6Dは、PHP.B-Cmv-eGFPの卵形嚢およびRWM注入を比較する。図6Aは、Ecole Polytechnique Federale de Lausanne（EPFL）で作製されたAAV.9PHP.B-Cmv-eGFPをP1で卵形嚢注入された後の蝸牛頂の共焦点画像である。図6Aのスケールバーは図6A～6Cにも適用され、0.2mmを表す。 図6A～6Dは、PHP.B-Cmv-eGFPの卵形嚢およびRWM注入を比較する。図6Aは、ボストン小児病院（BCH）で調製されたAAV.9PHP.B-Cmv-eGFPをP1で卵形嚢注入された後の蝸牛頂の共焦点画像である。 図6A～6Dは、PHP.B-Cmv-eGFPの卵形嚢およびRWM注入を比較する。図6Cは、P1でAAV.9PHP.B-Cmv-eGFPをRWM注入された後の蝸牛頂の共焦点画像である。 図6A～6Dは、PHP.B-Cmv-eGFPの卵形嚢およびRWM注入を比較する。図6Dは、EPFLで調製されたPHP.B-Cmv-eGFPをP1でRWMまたは卵形嚢注入された後の蝸牛の頂端、中間および基底領域の一連の100μm共焦点画像（63×）である。 図6A～6Dは、PHP.B-Cmv-eGFPの卵形嚢およびRWM注入を比較する。図6Eは、AAV9.PHP.B-CMV-eGFPの卵形嚢およびRWM注入後のeGFP陽性内有毛細胞（IHC）および外有毛細胞（OHC）の割合のグラフ比較である。 図7A～7Cは、PHP.BおよびAnc80の有毛細胞の形質導入効率を同じ力価（3.5 E+12ウイルスゲノム/mL）で比較する。図7Aは、PHP.Bアデノ随伴ベクター（AAV）の卵形嚢注入後の蝸牛頂の共焦点画像である。スケールバーは図7Aおよび7Bにも適用され、0.2mmを表す。 図7A～7Cは、PHP.BおよびAnc80の有毛細胞の形質導入効率を同じ力価（3.5 E+12ウイルスゲノム/mL）で比較する。図7Bは、Anc80 AAVの卵形嚢注入後の蝸牛頂の共焦点画像である。 図7A～7Cは、PHP.BおよびAnc80の有毛細胞の形質導入効率を同じ力価（3.5 E+12ウイルスゲノム/mL）で比較する。図7Cは、PHP.B AAV（左）およびAnc80 AAV（右）の卵形嚢注入後のeGFP陽性内有毛細胞（IHC）および外有毛細胞（OHC）の割合のグラフ比較である。 図8Aおよび8Bは、AAV9.PHP.BがAnc80よりも高い特異性を有することを示す。図8Aは、P1で卵形嚢を介してAnc80-Cmv-eGFP-WPREを注入され、P15で採取されたマウス蝸牛の一連の共焦点画像である。図8Aのスケールバーは図8Bにも適用され、100μmを表す。図8Bは、P1で卵形嚢を介してPHP.B-Cmv-eGFPを注入され、P15で採取されたマウス蝸牛の一連の共焦点画像である。 図9Aおよび9Bは、PHP.B-Cmv-eGFPが出生後期および成熟期で内耳有毛細胞を標的とすることを示す。図9Aは、P7およびP16でPHP.B-GFPを卵形嚢注入された後の蝸牛の頂端、中間および基底領域の一連の100μm共焦点画像（63×）である。図9Aの上行中の画像中に存在するスケールバーが図9A中の全画像に適用され、20μmを表す。 図9Aおよび9Bは、PHP.B-Cmv-eGFPが出生後期および成熟期で内耳有毛細胞を標的とすることを示す。図9Bは、図9Aの画像から計数されたeGFP陽性内および外有毛細胞の割合のグラフ比較である。 図10A～10Cは、野生型マウスにおける有毛細胞トランスダクションがP1におけるAAV9-Php.b-CMV-GFPの注入によって影響されなかったことを示す。図10Aは、P7におけるGFP陽性外有毛細胞（右パネル）、P7におけるGFP陽性内有毛細胞およびP29におけるGFP陽性内有毛細胞から毛束の機械的変位によって誘発される感覚トランスダクション電流の代表的な電流ファミリーを示す一連のグラフである。 図10A～10Cは、野生型マウスにおける有毛細胞トランスダクションがP1におけるAAV9-Php.b-CMV-GFPの注入によって影響されなかったことを示す。図10Bは、GFP陰性およびGFP陽性細胞の場合のP7外有毛細胞（OHC）からのトランスダクション電流の電流変位プロットである。 図10A～10Cは、野生型マウスにおける有毛細胞トランスダクションがP1におけるAAV9-Php.b-CMV-GFPの注入によって影響されなかったことを示す。図10Cは、振幅においてWT細胞と類似するGFP陽性細胞からのピークトランスダクション電流を示すチャートである（Landegger et al., Nat. Biotech, 2017）。 図11A～11Cは、聴性脳幹反応（ABR）および歪成分耳音響放射（DPOAE）閾値がP1、P7およびP16におけるPHP.B-Cmv-eGFPの注入によって影響されなかったことを示す。図11は、非注入WTマウス（黒い点線）およびP1（図11A）、P7（図11B）またはP16（図11C）でAnc80-Cmv-eGFP（淡いグレー）またはAAV9-Php.b-Cmv-eGFP（濃いグレー）を注入された後のWTマウスの場合に約P30で計測されたABRおよびDPOAE閾値を示すグラフのパネルを示す。 図11Aの説明を参照のこと。 図11Aの説明を参照のこと。 図12Aおよび12Bは、P1、P7およびP16で注入されたPHP.B-Cmv-eGFPが、前庭有毛細胞中、Anc80-Cmv-eGFPよりも高い形質導入率を有することを示す。図8Aは、P1、P7およびP16でPHP.B-Cmv-eGFP（上行）およびAnc80-Cmv-eGFP（下行）を卵形嚢注入された後の卵形嚢ならびに水平稜および前稜の一連の共焦点画像である。図8Bは、P1、P7およびP16でPHP.B-Cmv-eGFP（上行）およびAnc80-Cmv-eGFP（下行）を卵形嚢注入された後の球形嚢の一連の共焦点画像である。図8Aのスケールバーがすべての画像に適用され、100μmを表す。 P1、P7およびP16でPHP.B-Cmv-eGFP（上行）およびAnc80-Cmv-eGFP（下行）を卵形嚢注入された後の前庭形質導入を比較する一連の画像である。第一のパネルのスケールバーがすべてのパネルに適用され、100μmを表す。 eGFP発現を駆動するベクターを卵形嚢を介して注入されたマウスの前庭凍結切片を示す一連の共焦点画像である。第一のパネルのスケールバーがすべてのパネルに適用され、200μmを表す。 P1でPHP.B-Syn-eGFPを卵形嚢を介して注入されたC57マウスの蝸牛凍結切片（上行、スケールバーは100μmを表す）、前庭凍結切片（中間行、スケールバーは200μmを表す）およびホールマウント切片（下行、スケールバーは100μmを表す）の一連の共焦点画像である。 図16Aおよび16Bは、AAV9-PHP.B-Cmv-TMC1がTMC1変異体マウスにおいて聴覚機能を回復させることを示す。図16Aは、聴性脳幹反応（ABR）閾値がAAV1-CMV-TMC1またはAnc80-CMV-TMC1のそれよりも優れていたことを示すグラフである。1つのトレース（エラーバーなし）は、PHP.B-CMV-TMC1を形質導入され、野生型（WT）に類似する閾値を示した。 図16Aおよび16Bは、AAV9-PHP.B-Cmv-TMC1がTMC1変異体マウスにおいて聴覚機能を回復させることを示す。図16Bは、AAV9-PHP.B-Cmv-Tmc1を注入された5匹のマウスの場合の歪成分耳音響放射（DPOAE）閾値を示すグラフである。 図17A～17Dは、内耳中で導入遺伝子の発現を駆動する様々なプロモーターの能力を示す。図17Aは、内および外有毛細胞中で導入遺伝子発現を駆動するPcdh15プロモーターの能力を示す一連の共焦点画像である。図17Bは、内および外有毛細胞中で導入遺伝子発現を駆動するMyo6プロモーターの能力を示す共焦点画像である。図17Cは、内および外有毛細胞中で発現を駆動するMyo7aプロモーターの能力を示す画像である。図17Dは、特に外有毛細胞中で導入遺伝子発現を駆動するKCNQ4プロモーターの能力を示す一連の画像である。

詳細な説明
本発明は、聴覚および／または前庭機能を含むメカノセンセーションに必要なタンパク質（たとえばTMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C（たとえばハーモニンa、bまたはc）、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4およびFAM65B）を、当該タンパク質のレベルまたは活性の損失または低下を有する対象の内耳の細胞、たとえば蝸牛細胞（たとえば内または外有毛細胞）中に送達し、発現させるための組成物および方法を提供する。

本発明は、少なくとも部分的に、7量体配列TLAVPFKを含むカプシドをコードするアデノ随伴ウイルスベクターAAV-PHP.Bが、内耳の内および外有毛細胞中で関心対象のタンパク質を発現させるのにきわめて効率的かつ特異的であるという発見に基づく。

AAV-PHP.B
AAV-PHP.Bベクターは、既定のCre発現性標的細胞集団（CREATEとも呼ばれる）を形質導入するカプシドを選択的に回収するためのCre組換え依存手法を使用して作製したものである。本発明の方法において有用なこの手法およびベクターは、Deverman et al., "Cre-dependent selection yields AAV variants for widespread gene transfer to the adult brain,” Nat Biotechnol. 2016 February; 34(2): 204-209および米国特許出願公開第20170166926号に記載されている。いずれも全体として参照により本明細書に組み入れられる。ランダム化配列（7量体）の7つのアミノ酸（AA）をAAV9カプシドのAA588とAA589との間（VP1位置）に挿入することにより、AAVバリアントのライブラリーを作製した。AAV-PHP.Bは7量体配列TLAVPFKをコードし、これを、蝸牛への効率的な導入遺伝子送達に関して試験すると、内および外有毛細胞中で著しく特異的かつロバストな発現が示された。

アッシャー症候群
ヒトアッシャー症候群（USH）は、盲聾の原因である希な遺伝子疾患である。常染色体劣性形質として遺伝し、米国において16,000～20,000人を冒し、幼児期難聴の3～6％の原因である。アッシャー症候群は、症状の重度にしたがって3つの臨床亜型（USH-1、2、および3）に分類される。USH1が最重症型である。USH1に冒された患者は、先天性の両側性重度感音性聴力喪失、前庭反射消失、および思春期前の網膜色素変性症（網膜の桿体および錐体機能の進行性両側性対称性縮退）を病む。人工内耳を装着しない限り、個体は一般的に発声能力を発達させない。現在、アッシャー患者のための生物学的治療は存在しないが、欠陥遺伝子の野生型形態の早期再導入が疾患の好転を許し得る。

6つのアッシャー遺伝子：MYO7A（ミオシン7a）、USH1C（ハーモニン）、CDH23（カドヘリン23）、PCDH15（プロトカドヘリン15）、SANS（sans）、およびCIB2（カルシウムおよびインテグリン結合タンパク質2）がUSH1と関連している。これらの遺伝子は、内耳中の毛束形態形成に関与し、インタラクトームの一部であるタンパク質をコードする（たとえば、Mathur & Yang, 2015, Biochim. Biophys. Acta, 1852:406-20を参照）。ハーモニンはUSH1インタラクトームの中心に存在し、そこで他のUsher1タンパク質に結合する。そのPDZ（PSD-59 95/Dlg/ZO-1）相互作用ドメインのために、ハーモニンは、足場タンパク質として機能することが提唱されてきた。インビトロの結合研究により、すべての他の既知のUSH1タンパク質が、USH2タンパク質の2つであるUsherinおよびVLGR1と同様、ハーモニンのPDZドメインに結合することを示した。USH1C遺伝子は28のエクソンからなり、これらのエクソンは、タンパク質のドメイン組成に依存して3つの異なるサブクラス（a、b、およびc）に分類される、ハーモニンの10種のオルタナティブスプライス形態をコードする。3つのアイソフォームは、PDZタンパク質－タンパク質相互作用ドメイン、コイルドコイル（CC）ドメイン、およびプロリン－セリン－トレオニン（PST）リッチドメインの数において異なる。

USH1タンパク質は、多数の細胞外リンクによって相互接続された何百もの不動毛で構成されているメカノセンセーション毛束中の有毛細胞の頂端に局在化している。カドヘリン23およびプロトカドヘリン15は、Usher遺伝子（それぞれUSH1DおよびUSH1E）の産物であり、不動毛の遠位端に位置する感覚糸を形成する。ハーモニンbは、CDH23、PCDH15、Fアクチンおよびそれ自体に結合する。これは、有毛細胞の感覚糸挿入点の近くの不動毛の先端に見られ、そこで、有毛細胞中のトランスダクションおよび順応において機能的役割を演じると考えられている。ハーモニンbは出生後早期に発現するが、その発現は、蝸牛および前庭の両方において出生後30日（P30）ごろに減少する。ハーモニンaもまた、カドヘリン23に結合し、不動毛中に見られる。最近の報告がシナプスにおけるハーモニンaのさらなる役割（Cav1.3 Ca2＋チャネルと会合して、ユビキチン依存性経路を介するチャネル利用可能性を制限する）を明らかにした。

アッシャー症候群のいくつかのマウスモデルが過去10年にわたり同定または操作され、そのうちの7つはハーモニンに影響を及ぼす。これらのうち、1つのモデル、Ush1c c.216G＞Aモデルだけが、ヒトアッシャー症候群を特徴づける聴覚および網膜両方の異常を再現する。Ush1c c.216G＞Aは、フランス系アカディア人USH1C患者のコホートにおいて見られるものに類似する点変異のせいで、すべての従来のハーモニンアイソフォームの発現に影響するノックインマウスモデルである。変異は、Ush1c遺伝子のエクソン3の端部に隠れたスプライス部位を導入する。この隠れたスプライス部位の使用が、35bp欠失を有するフレームシフト転写産物を生成し、PDZ、PST、およびCCドメインを欠く重度に切断されたタンパク質の翻訳を生じさせる。ホモ接合型c.216AAノックインマウスは1月齢で重度の聴力喪失をこうむるが、ヘテロ接合型c.216GAマウスは任意の異常な表現型を呈しない。c.216AAマウスにおける蝸牛組織診は、P30で、中および基底回転中、崩壊した毛束、異常な細胞列ならびに内および外両方の有毛細胞の損失を示す。

AAV9-PHP.Bベクターは、有毛細胞に成功裏に形質導入し、有毛細胞内で関心対象のタンパク質（すなわちGFP）を発現させたことが、本明細書において実証される。従って、このベクターを用いて、アッシャー症候群および他の聴覚障害の治療のために、関心対象の他のタンパク質を有毛細胞に送達することができる。

TMC1/TMC2
難聴を生じさせる40を超える異なる変異がTMC1において同定されている。これらは、35の劣性変異および5つの優性変異へと細分される。劣性変異の大多数は重度の先天性聴力喪失を生じさせるが（たとえばDFNB7/11）、少数は晩期発症型の中～重度の聴力喪失を生じさせる。優性変異のすべてが、十代半ばに発症する、進行性の聴力喪失を生じさせる（たとえばDFNA36）。特に、本明細書に記載されるAAV9-PHP.Bベクターは、非変異体（たとえば野生型）TMC1配列またはTMC2配列を送達し、それによって、聴力喪失（たとえば、さらなる聴力喪失）を予防する、および／または聴覚機能を回復させるために使用することができる。

聴力喪失の治療のための治療戦略
成体哺乳動物蝸牛の感覚細胞は自己修復能力を欠くため、現在の治療戦略（障害のレベルおよび正確な位置に依存する）は、増幅（補聴器）、より良い音声伝達（中耳プロテーゼ／アクティブインプラント）または直接神経刺激（人工内耳）に依存して、聴覚神経を形成し、音響情報を脳へと中継する一次感覚有毛細胞またはらせん神経節ニューロンへの永久的損傷を補償する。これらの手法は変革的であったが、現代生活にとって重要な複雑なヒト聴覚機能の回復においては依然、最適からはほど遠い。特に、主な問題はさらに、限られた周波数感度、不自然な音声知覚および騒がしい環境における限られた語音弁別を含む。

蝸牛への治療的遺伝子導入が、加齢性および環境誘発性の聴力喪失から遺伝的な難聴形態に及ぶ現在の標準的治療をさらに改善すると考えられてきた。300を超える遺伝子座が、記載された70を超える原因遺伝子による遺伝性聴力喪失と関連付けられている（Parker & Bitner-Glindzicz, 2015, Arch. Dis. Childhood, 100:271-8）。これらの手法における治療の成功は、蝸牛中のコルチ器中の関連する治療標的細胞への外因性遺伝子構築物の安全かつ効率的な送達に有意に依存する。

コルチ器は、2つのクラスの感覚有毛細胞：音によって運ばれた機械的情報を、ニューロン構造に伝達される電気シグナルへと変換する内有毛細胞；および蝸牛反応を増幅し、調整する（複雑な聴覚機能に必要なプロセス）ように働く外有毛細胞を含む。内耳中の他の潜在的標的は、らせん神経節ニューロン、らせん板縁の円柱細胞を含み、これらは、隣接する蓋膜または支持細胞（保護機能を有し、早期新生児期までに有毛細胞へと分化転換するように誘発されることができる）の維持に重要である。

高カリウム内リンパ液で満たされている蝸牛管への注入が有毛細胞への直接アクセスを提供することができる。しかし、この精巧な流体環境への変更は、蝸牛内電位を乱して、注入関連毒性のリスクを高めるおそれがある。蝸牛管、鼓室階、および前庭階を包囲する外リンパで満たされた空間は、中耳から、前庭窓膜または正円窓膜のいずれかを通してアクセスすることができる。内耳に通じる唯一の非骨質開口部である正円窓膜は、多くの動物モデルにおいて比較的容易にアクセス可能であり、この経路を使用するウイルスベクターの投与は良好に忍容される。ヒトにおいて、人工内耳の配置は慣例的に、RWMに通す外科的電極挿入に依存する。

器官型蝸牛外植片およびインビボ内耳注入においてAAV血清型を評価した以前の研究は、遺伝性難聴のマウスモデルにおいて部分的にのみ聴力のレスキューを生じさせている。予想外に、AAV9-PHP.Bベクターが高い効率で有毛細胞を形質導入した。この知見は、従来のAAV血清型を使用する蝸牛遺伝子療法の開発の成功を制限してきた低い形質導入効率を克服する。本明細書に記載されるAAV9-PHP.Bベクターは、内および外有毛細胞ならびに遺伝的な聴覚および平衡障害によって損なわれる他の様々な内耳細胞型への内耳遺伝子送達のための貴重なプラットフォームを提供する。

AAV9-PHP.Bベクターは、関心対象のタンパク質をコードする核酸の高効率送達を提供する。特に、本発明は、以下のプロモーターの1つを含むAAV9-PHP.Bベクターを提供する：Espinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターまたはTMHS（LHFPL5）プロモーター。特定の態様において、プロモーターは、細胞、特に内耳内、たとえば蝸牛中の細胞（または蝸牛中の細胞もしく蝸牛細胞）への、TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C（たとえばハーモニンa、bまたはc）OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4およびFAM65Bの1つまたは複数をコードするポリヌクレオチドの発現を指示する。本明細書において使用される内耳細胞とは、非限定的に、内有毛細胞（IHC）、外有毛細胞（OHC）、らせん神経節ニューロン、血管条、前庭有毛細胞、前庭神経節ニューロンおよび支持細胞をいう。支持細胞とは、興奮性ではない耳の中の細胞、たとえば、有毛細胞またはニューロンではない細胞をいう。支持細胞の一例がシュワン細胞である。

本明細書に記載される核酸の1つまたは複数の、内耳細胞への送達は、通常は部分的聴力損失または完全聴覚消失によって定義される、任意の数の遺伝性または後天性聴覚障害を治療するために使用することができる。本明細書に記載される方法は、聴覚障害、たとえば非限定的に、劣性難聴、優性難聴、アッシャー症候群および他の症候群性難聴ならびに外傷または加齢による聴力損失を治療するために使用することができる。

特定の導入遺伝子を保有するウイルスを作製する方法
本明細書に記載されるように、AAV-PHP.Bベクターは、核酸（たとえば、TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C（たとえばハーモニンa、bまたはc）の1つまたは複数をコードするポリヌクレオチドをはじめとする導入遺伝子）を内耳細胞に送達する場合に特に効率的である。AAV-PHP.Bベクターは、好都合にも、内または外有毛細胞の約60％、70％、80％、90％、95％超または100％を形質導入した。

特定の態様において、AAV-PHP.Bベクターは、有毛細胞のための天然の、または操作された向性を有する。いくつかの態様において、AAV9-php.bは、導入遺伝子（たとえば、TMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C（たとえばハーモニンa、bまたはc）、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4およびFAM65Bの1つまたは複数をコードするポリヌクレオチド）を対象の内耳に送達する。

1つの態様においては、TMC1、TMC2、MYO7A、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、USH1C（たとえばハーモニンa、bまたはc）、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4およびFAM65Bの1つまたは複数をコードするポリヌクレオチドの発現を指示するプロモーター（たとえばEspinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターおよびTMHS（LHFPL5）プロモーター）を含むAAV-PHP.Bベクターが、聴覚障害を治療するために使用される。発現のために細胞に送達される核酸配列はしばしば導入遺伝子と呼ばれる。内耳細胞に送達され、その中で発現することができる代表的な導入遺伝子は、非限定的に、聴覚および／または前庭メカノセンセーションにおいて機能するポリペプチド（たとえばTMC1、TMC2、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7（たとえばハーモニンa、bまたはc）、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4およびFAM65B）、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4をコードする導入遺伝子、神経栄養因子（たとえばGDNV、BDNFまたはHSP70）をコードする導入遺伝子を含む。

導入遺伝子の発現は、その導入遺伝子の天然のプロモーター（すなわち、トランスジェニックコード配列とともに天然に見られるプロモーター）によって、または異種プロモーター（たとえばEspinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターおよびTMHS（LHFPL5）プロモーター）によって指示され得る。たとえば、本明細書に記載される導入遺伝子はいずれも、その天然のプロモーターとともに使用されることができる。または、本明細書に記載される導入遺伝子はいずれも異種プロモーターとともに使用されることもできる。本明細書において使用される異種プロモーターとは、その配列の発現を自然には指示しない（すなわち、自然界においてその配列とともに見られない）プロモーターをいう。本明細書に示される導入遺伝子のいずれかの発現を指示するために使用することができる代表的な異種プロモーターは、たとえば、CMVプロモーター、CBAプロモーター、CASIプロモーター、PプロモーターおよびEF-1プロモーター、アルファ9ニコチン受容体プロモーター、プレスチンプロモーター、Gfi1プロモーターおよびVglut3プロモーターを含む。加えて、上記導入遺伝子の1つの発現を自然に指示するプロモーター（たとえばKCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、Myo6プロモーターまたはAtoh1プロモーター）を、導入遺伝子の発現を指示するための異種プロモーターとして使用することもできる。他の態様において、プロモーターは、Espinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターまたはTMHS（LHFPL5）プロモーターである。

AAV-PHP.Bベクター中にパッケージングするための導入遺伝子（たとえばTMC1、TMC2、USH1C（たとえばハーモニンa、bまたはc）、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4）を作製する方法は当技術分野において公知であり、従来の分子生物学および組換え核酸技術を利用する。

導入遺伝子は、たとえば、パッケージング宿主細胞を使用して、AAV-PHP.Bベクター中にパッケージングすることができる。本明細書に記載される1つまたは複数の構築物を使用して、ウイルス粒子の構成要素（たとえばrep配列、cap配列、逆位末端反復（ITR）配列）を一時的または安定的にパッケージング宿主細胞に導入することができる。

概して、本明細書において使用される「核酸」は、DNAおよびRNAを含むことができ、1つまたは複数のヌクレオチド類似体または骨格修飾を含む核酸をも含むことができる。核酸は、通常はその所期の用途に依存して、一本鎖または二本鎖であることができる。本明細書に記載される方法に使用することができる核酸は、既知の核酸配列と同一であることもできるし、そのような既知の配列とは配列において異なることもできる。単に実例として、核酸（またはコードされるポリペプチド）は、既知の配列に対して少なくとも75％の配列同一性（たとえば、少なくとも80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、または99％の配列同一性）を有することができる。

配列同一性％値を計算する際、2つの配列をアラインメントし、2つの配列の間でのヌクレオチドまたはアミノ酸残基の完全な一致の数を決定する。完全な一致の数をアラインメントされた領域の長さ（すなわち、アラインメントされたヌクレオチドまたはアミノ酸残基の数）で割り、100を掛けて、配列同一性％値を求める。アラインメントされた領域の長さが、最短の配列の完全長サイズまでの、一方または両方の配列の部分であることができることが理解されよう。また、1つの配列を、複数の他の配列に対してアラインメントすることができ、したがって、アラインメントされた各領域の間で異なる配列同一性％値を有することができることが理解されよう。

配列同一性％値を決定するための2つ以上の配列のアラインメントは、コンピュータプログラムClustalWおよびデフォルトパラメータを使用して実施され、これは、核酸またはポリペプチド配列のアラインメントをその長さ全体で実施することを可能にする（グローバルアラインメント）。Chenna et al., 2003, Nucleic Acids Res., 31(13):3497-500。ClustalWは、クエリーと1つまたは複数の対象配列との間のベストマッチを計算し、それらをアラインメントして、同一性、類似性、および差が決定されるようにする。配列アラインメントを最大化するために、1つまたは複数の残基のギャップをクエリー配列、対象配列または両方に挿入することができる。核酸配列のペアワイズアラインメントの場合には、デフォルトパラメータを使用し（すなわち、ワードサイズ：2；ウィンドウサイズ：4；スコアリング法：％値；トップダイアゴナルの数：4；およびギャップペナルティ：5）；多重核酸配列のアラインメントの場合には、以下のパラメータ：ギャップ開始ペナルティ：10.0；ギャップ伸長ペナルティ：5.0；およびウエイトトランジション：あり、を使用する。ポリペプチド配列のペアワイズアラインメントの場合には、以下のパラメータ：ワードサイズ：1；ウィンドウサイズ：5；スコアリング法：％値；トップダイアゴナルの数：5およびギャップペナルティ：3、を使用する。ポリペプチド配列の多重アラインメントの場合には、以下のパラメータ：ウエイトマトリックス：BLOSUM（blocks substitution matrix）；ギャップ開始ペナルティ：10.0；ギャップ伸長ペナルティ：0.05；親水性ギャップ：オン；疎水性残基：Gly、Pro、Ser、Asn、Asp、Gln、Glu、ArgおよびLys；ならびに残基特異的ギャップペナルティ：オン、を使用する。ClustalWは、たとえば、World Wide Web上、Baylor College of Medicine Search LauncherウエブサイトまたはEuropean Bioinformatics Instituteウエブサイトで実行することができる。

核酸配列に変更を導入することができ、それが、その核酸配列がコード配列である場合には、コードされるポリペプチドのアミノ酸配列の変更をもたらすことができる。たとえば、変更は、変異誘発（たとえば部位特異的変異誘発、PCR媒介変異誘発）を使用することによって、またはそのような変更を有する核酸分子を化学合成することによって、核酸コード配列に導入することができる。そのような核酸変更は、1つまたは複数のアミノ酸残基における保存的および／または非保存的アミノ酸置換を招くことができる。「保存的アミノ酸置換」とは、1つのアミノ酸残基が、類似する側鎖を有する異なるアミノ酸残基で置換されることであり（たとえば、アミノ酸置換の頻度表を提供する、Dayhoffら（1978, Atlas of Protein Sequence and Structure, 5(Suppl. 3):345-352）を参照）、非保存的置換とは、アミノ酸残基が、類似する側鎖を有しないアミノ酸残基で置換されることである。

核酸は、ベクターまたはプラスミドとも呼ばれ得る構築物内に含めることができる。構築物は、市販されてもいるし、当技術分野において慣例的な組換え技術によって作製することもできる。核酸を含有する構築物は、そのような核酸の発現を誘導および／または調節する発現エレメントを有することができ、また、構築物を維持するための配列（たとえば複製起点、選択マーカー）などの配列を含むこともできる。発現エレメントは、当技術分野において公知であり、たとえば、プロモーター、イントロン、エンハンサー配列、応答エレメントまたは誘導エレメントを含む。

薬学的組成物
通常は生理学的に適合性の賦形剤中に懸濁した、プロモーター（たとえばEspinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターおよびTMHS（LHFPL5）プロモーター）と、USH1、MYO7A、USH1C（ハーモニンa、b、c）、CDH23、PCDH15、SANSおよびCIB2の1つまたは複数であるポリヌクレオチドとを含むAAV-PHP.Bベクターは、正円窓または卵形嚢を通して対象の内耳に注入することにより、対象（たとえばヒトまたは非ヒト哺乳動物）に投与することができる。適当な担体は、多様な緩衝溶液（たとえばリン酸緩衝生理食塩水）、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストラン、寒天、ペクチンおよび水とで調合され得る生理食塩水を含む。AAV-PHP.Bベクターは、細胞を形質導入し、または感染させ、過度な有害作用なしで治療的利益を提供するのに十分なレベルの遺伝子導入および発現を提供するのに十分な量で投与される。

対象に投与されるAAV-PHP.Bベクターの用量は、主に、治療される病気ならびに対象の年齢、体重および健康状態などの要因に依存する。たとえば、ヒト対象に投与されるAAV-PHP.Bベクターの治療有効用量は一般に、AAVのゲノムコピー（GC）約1×10¹～1×10¹²個（たとえばGC約1×10³～1×10⁹個）の濃度を含む溶液約0.1ml～約10mlの範囲である。

核酸を内耳細胞に送達する方法
核酸を細胞に送達する方法は一般に当技術分野において公知であり、導入遺伝子を含有するウイルス（ウイルス粒子と呼ぶこともできる）をインビボで内耳細胞に送達する方法が本明細書に記載されている。本明細書に記載されるように、約10⁸～約10¹²個のウイルス粒子を対象に投与することができ、ウイルスは、適当な量（たとえば10μL、50μL、100μL、500μLまたは1000μL）の、たとえば人工外リンパ液内に懸濁させることができる。

本明細書に記載される、プロモーター（たとえばEspinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターおよびTMHS（LHFPL5）プロモーター）と、導入遺伝子（たとえばTMC1、TMC2、USH1C（たとえばハーモニンa、bまたはc）、MYO7A、USCH1C、CDH23、PCDH15、SANS、CIB2、USH2A、VLGR1、WHRN、CLRN1、PDZD7、KCNQ4、TMPRSS3、STRC、EYA4、OTOF、GPR98、MYO6、MYO15A、LOXHD1、POU3F4、EYA1、WFS1、ACTG1、TMIE、PJVK、SYNE4およびFAM65B）とを含有するウイルスは、任意の数の手段を使用して内耳細胞（たとえば蝸牛中の細胞）に送達することができる。たとえば、本明細書に記載される1つまたは複数の異なるタイプの導入遺伝子を含有するウイルス粒子を含む治療有効量の組成物を、一般的には比較的簡単な（たとえば外来）処置で、正円窓もしくは卵円窓または卵形嚢に通して注入することができる。いくつかの態様においては、本明細書に記載される、導入遺伝子を含有する治療有効数のウイルス粒子を含む、または異なるウイルス粒子の1つまたは複数のセットを含有する（セット中の各粒子は同じタイプの導入遺伝子を含有することができるが、粒子の各セットは他のセットとは異なるタイプの導入遺伝子を含有する）組成物を、外科手術（たとえばコクレオストミーまたはカナロストミー）中に耳内の適切な位置に送達することができる。

1つの態様においては、プロモーター（たとえばEspinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターまたはTMHS（LHFPL5）プロモーター）と、USH1、MYO7A、USH1C（ハーモニンa、b、c）、CDH23、PCDH15、SANSおよびCIB2の1つまたは複数であるポリヌクレオチドとを含むAAV-PHP.Bベクターを、それを必要とする対象の正円窓または卵形嚢に通して注入する。

加えて、鼓膜を通過する、および／または正円窓もしくは卵形嚢を通る作用物質の移入を容易にする送達ビヒクル（たとえばポリマー）が利用可能であり、任意のそのような送達ビヒクルを、本明細書に記載されるウイルスを送達するために使用することができる。たとえば、Arnold et al., 2005, Audiol. Neurootol., 10:53-63を参照すること。

本明細書に記載される組成物および方法は、内耳細胞、たとえば蝸牛細胞への核酸の高効率送達を可能にする。たとえば、本明細書に記載される組成物および方法は、内有毛細胞の少なくとも80％（たとえば少なくとも85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99％）への導入遺伝子の送達およびその中での発現または外有毛細胞の少なくとも80％（たとえば少なくとも85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、または99％）への導入遺伝子の送達およびその中での発現を可能にする。

本明細書において実証されるように、AAV-PHP.Bベクターを使用して送達された導入遺伝子の発現は、内有毛細胞（IHC）、外有毛細胞（OHC）、らせん神経節ニューロン、血管条、前庭有毛細胞、および／または前庭神経節ニューロン（たとえばAtoh1、NF2）の再生を生じさせて、聴覚または前庭機能が長期間（たとえば数ヶ月、数年、数十年間、一生涯）回復されるようにすることができる。

キット
本発明はまた、プロモーター（たとえばEspinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターおよびTMHS（LHFPL5）プロモーター）と、USH1、MYO7A、USH1C（ハーモニンa、b、c）、CDH23、PCDH15、SANSおよびCIB2の1つまたは複数であるポリヌクレオチドとを含むAAV-PHP.Bベクターを含む、本発明の薬学的組成物の成分の1つまたは複数で満たされた1つまたは複数の容器を含む薬学的パックまたはキットを提供する。このような容器には、医薬品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府機関によって規定された形式の通知が添付されることができ、この通知は、ヒトへの投与に関する製造、使用または販売の、当該機関による承認を反映する。

本発明はまた、聴覚および／または前庭メカノセンセーションの異常と関連する疾患または障害（またはそれらの症状）の治療または予防のためのキットを提供する。1つの態様において、キットは、プロモーター（たとえばEspinプロモーター、PCDH15プロモーター、PTPRQプロモーター、Myo6プロモーター、KCNQ4プロモーター、Myo7aプロモーター、シナプシンプロモーター、GFAPプロモーター、CMVプロモーター、CAGプロモーター、CBHプロモーター、CBAプロモーター、U6プロモーターおよびTMHS（LHFPL5）プロモーター）と、USH1、MYO7A、USH1C（ハーモニンa、b、c）、CDH23、PCDH15、SANSおよびCIB2の1つまたは複数であるポリヌクレオチドとを含む、単位剤形にある有効量のAAV-PHP.Bベクターを、聴覚障害を伴う疾患もしくは障害またはその症状を病む、またはそれを罹患しやすい対象にAAV-PHP.Bベクターを投与するための指示書とともに含む。好ましい態様において、キットは、AAV-PHP.Bベクターを収容する無菌容器を含み；そのような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスタパックまたは当技術分野において公知の他の適当な容器であることができる。そのような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔または薬剤を保持するのに適した他の材料でできていることができる。指示書は一般に、聴覚障害を伴う疾患もしくは障害またはその症状の治療のためのAAV-PHP.Bベクターの使用に関する情報を含む。指示書は、容器（存在する場合）に直接印刷されてもよいし、容器に貼り付けられるラベルとして提供されてもよいし、容器中に提供される、または容器とともに提供される別個のシート、パンフレット、カードまたはフォルダとして提供されてもよい。

当業者の技能の範囲内の従来の分子生物学、微生物学、生化学および組換えDNA技術を本開示にしたがって使用することができる。そのような技術は文献において十分に説明されている。本発明は、請求の範囲に記載される方法および物質組成の範囲を限定しない以下の実施例においてさらに説明される。

実施例1―AAV-PHP.Bベクターは外有毛細胞および内有毛細胞における導入遺伝子の発現を導く
インビボ注入
仔マウス（P0～P2）に対し、斜角研磨したガラスマイクロインジェクションピペットを使用して、正円窓膜（RWM）を介して、AAV-PHP.BベクターCMV GFP注入を実施した。P-2000ピペットプラー（Sutter Instrument, Novato, CA）上、ガラス毛管（WPI）からピペットを引き、マイクロピペットベベラ（Sutter Instrument, Novato, CA）を使用して斜角研磨した（先端径約20μm、角度28°）。手術部位（左乳様突起）を覆うために無菌スワブを使用して、鎮痛のためにEMLAクリーム（リドカイン2.5％およびプリロカイン2.5％）を外部から塗布した。術前、加温パッド上で体温を38℃に維持した。仔マウスを、氷／水中で2～3分間、急速な低体温誘導によって麻酔して意識消失させ、手術中、この状態を冷却プラットフォーム上で5～10分間維持した。べタジンでスクラブし、70％エタノールで拭くことを3回繰り返すことにより、手術部位を消毒した。耳後部の切開を実施して透明な耳胞を露出させ、マイクロピペットを手で耳胞およびその上の筋膜に通し、マイクロピペットの先端をRWMに通した。ウイルス約1μLを、1分以内に、C57BL/6動物の左耳だけに手で注入した。注入後、6-0黒色モノフィラメント縫合糸（Surgical Specialties, Wyomissing, PA）を使用して皮膚切開創を閉じた。その後、仔マウスを38℃の加温パッドに戻して5～10分おき、次いで、飼育のために母マウスに戻した。

AAV-PHP.Bベクターは、高い特異性でほぼ100％のIHCおよび100％のOHCに形質導入した（図1～3）、すなわち非有毛細胞はほどんど形質導入されなかった。

AAV-PHP.B CMV GFPベクターで形質導入した試料を、その後固定し、ファロイジンまたはMyo7で染色して、共焦点顕微鏡で画像化した。外有毛細胞および内有毛細胞のターゲッティングは、効率的な形質導入を説明するものである。

実施例2―有毛細胞電気生理学
関心対象の遺伝子をコードする導入遺伝子を含むAAV-PHP.Bベクターの形質導入に続き、有毛細胞の電気生理を分析した。蝸牛を切除し、カバーガラスに載せ、63×水浸対物レンズおよび微分干渉コントラストオプティクスを備えたAxio Examiner.A1正立顕微鏡（Carl Zeiss, Oberkochen, Germany）で観察する。MEM（Life Technologies, Carlsbad, CA）のように、137 NaCl、5.8 KCl、10 HEPES、0.7 NaH₂PO₄、1.3 CaCl₂、0.9 MgCl₂および5.6 D-グルコース（mM単位）、ビタミン（1：100）およびアミノ酸（1：50）を含有する標準液（pH7.4；約310mOsm/kg）中、室温（22℃～24℃）で電気生理学的記録を実施する。記録電極（3～4MΩ）をR-6ガラス（King Precision Glass, Claremont, CA）から引き、140CsCl、5EGTA-KOH、5HEPES、2.5Na₂ATP、3.5MgCl₂および0.1CaCl₂（mM単位）を含有する細胞内液（pH7.4；約280mOsm/kg）で満たす。ホールセルタイトシール技術を使用して、Axopatch 200B（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）を使用してメカノトランスダクション電流を記録する。有毛細胞を－84mVに維持した。ローパスBesselフィルタによって電流を5kHzでフィルタリングし、12ビット収集ボード（Digidata 1440A、Molecular Devices, Sunnyvale, CA）によって≧20kHzでデジタル化し、pCLAMP10ソフトウェア（Molecular Devices, Sunnyvale, CA）を使用して記録した。LVPZT増幅器（E-500.00、Physik Instrumente, Karlsruhe, Germany）によって駆動されるPICMAチップピエゾアクチュエータ（Physik Instrumente, Karlsruhe, Germany）に取り付けた堅いガラスプローブを使用して、IHCおよびOHCからの毛束を偏向させ、8ポールBesselフィルタ（Model 3384フィルタ、Krohn-Hite Corporation, Brokton, MA）によって40kHzでフィルタリングして、残留ピペット共振を除去した。堅いガラスプローブは、全束記録のために有毛細胞不動毛の列の凹側面に嵌まるように設計されたものである（OHCの場合には直径3～4μm、IHCの場合には直径4～5μm）。＞P10での全細胞電気生理学記録のために、P5～7で蝸牛組織を解体し、MEM（1×）＋1％FBSを含むGlutaMAXTM-I培地中、37℃、5％CO2で30日間までインキュベートする。

実施例3―聴力検査
聴力は、遺伝的に聴覚障害を有するマウスに形質導入したのちにアッセイする。聴性脳幹反応（ABR）および歪成分耳音響放射（DPOAE）データを収集する。DPOAEは、正しい蝸牛増幅および同調のためのアッセイであり、外有毛細胞の生存可能性の高感度な尺度である。麻酔したマウスにおいて試験した刺激は、5.6、8、11.3、16、22.6および32kHzの周波数で音圧レベル10から90dBまで変化させた。ABRを誘発するために必要な最小限の音閾値をプロットする。

実施例4―ロータロッド試験
ロータロッド装置上での平衡行動に関してマウスを試験する。前庭機能が損傷したマウスは、ロータロッド装置上でのパフォーマンスが良くないことが知られている。以前の研究が、一方の耳のみが障害を有する場合に平衡機能不全を検出する、このロータロッド試験の能力を強調している。マウスに対し、P1で注入を実施し、P36で試験し、非注入対照マウスをP79で試験する。以下のロータロッドプロトコルを使用してすべてのマウスを試験する。1日目、マウスを、4RPMで回転するロッド上で5分間の平衡を保つよう、訓練する。2日目、マウスを5回の試行（5分間隔）で試験する。試行ごとに、ロッドを2RPMの開始速度から1RPMずつ加速する。マウスが装置から落ちるまでの時間（秒単位）を記録する。

蝸牛の外リンパ液は前庭迷路の外リンパ液と連続しているため、蝸牛RWMを介して注入された関心対象のタンパク質を発現するAAV-PHP.Bベクターが前庭感覚器官に形質導入するかどうかを評価する。したがって、AAV-PHP.Bベクターの形質導入が平衡に影響し得るという安全性の懸念に対処するために、前庭発現を確認された注入マウスは、前庭機能に関するロータロッド試験に関し、非注入対照に相当するパフォーマンスを見せる。

実施例5－アッシャー症候群のマウスモデル
組織標本
電気生理学的研究のために、Ush1c c.216G＞Aヘテロ接合型またはホモ接合型変異体マウスからの卵形嚢およびコルチ器を出生後0～8日（P0～P8）で採取する。出生後の仔マウスを迅速な断頭によって屠殺する。側頭骨を切除し、10mM HEPES（pH7.4）を添加したMEM（Invitrogen, Carlsbad, CA）に浸漬する。前記（53）のように、酵素を使用せずにコルチ器を切り出す。0.1mg/mlのプロテアーゼ（Protease XXIV, Sigma）による10分間の処理ののち、卵形嚢を取り出す。切除した器官を丸いカバーガラスに載せる。事前にカバーガラスに接着しておいた一対の細いガラス繊維を組織の縁に配置して、組織をフラットな位置で安定させる。組織は、すぐに使用するか、1％ウシ胎仔血清の存在下で培養するかのいずれかである。インビトロでのウイルスベクター感染を伴う実験のために、培養を7～8日間維持し、培地を2～3日ごとに交換する。

動物
Ush1c c.216G＞Aノックインマウスをルイジアナ州立大学Health Science Centerから入手した。C57BL6バックグラウンド上のインポートされた株を事前にCdh23（Ahl）変異から育種して、加齢性聴力喪失を生じさせた（48、49）。トウクリップ（P8の前）またはイヤーパンチ（P8の後）を使用してマウスの遺伝子型を決定し、前記（32）のようにPCRを実施する。すべての試験に関し、雄雌マウスをほぼ等しい割合で使用した。他の点では無作為化パラダイムは適用しない。

正円窓膜（RWM）注入
選択したプロモーター下で関心対象の遺伝子を発現するAAV-PHP.Bベクターを作製する。ベクター0.8μl～1ulをP0～P1およびP10～P12の新生仔マウスに注入する。最初に、P0～P1マウスを低体温曝露によって麻酔し、P10～P12マウスをイソフルランによって麻酔する。麻酔中、耳後部切開を実施して耳胞を露出させ、蝸牛を可視化する。マイクロマニピュレータ（Askew et al., 2015）によって制御されるガラスマイクロピペットを用いて、RWMを通して注入を実施する。10分間、注入物質の量をおよそ0.02μl／分に制御する。標準的な術後ケアを適用する。試料サイズを最適化し、分散を減らすために、インビボ実験のための試料サイズを連続的に測定した。

電気生理学的記録
144 NaCl、0.7 NaH2PO4、5.8 KCl、1.3 CaCl2、0.9 MgCl2、5.6 D-グルコースおよび10 HEPES-NaOH（mM単位）を含有する、pH7.4および320mOsmol/kgに調節された標準人工外リンパ液中で記録を実施する。濃縮物（Invitrogen, Carlsbad, CA）からビタミン（1：50）およびアミノ酸（1：100）を添加した。63×水浸対物レンズおよび微分干渉コントラストオプティクスを備えたAxioskop FS正立顕微鏡（Zeiss, Oberkochen, Germany）を使用して、頂端面から有毛細胞を観察した。記録ピペット（3～5MΩ）をホウケイ酸ガラス毛管（Garner Glass, Claremont, CA）から引き、135 KCl、5 EGTA-KOH、10 HEPES、2.5 K₂ATP、3.5 MgCl₂、0.1 CaCl₂（mM単位）を含有するpH7.4の細胞内液で満たした。全細胞電圧固定下、室温で－64mVの保持電位で電流を記録した。Axopatch Multiclamp 700AまたはAxopatch 200A（Molecular Devices, Palo Alto, CA）を使用してデータを取得し、ローパスBesselフィルタによって10kHzでフィルタリングし、12ビット収集ボード（Digidata 1322）ならびにpClamp8.2および10.5（Molecular Devices, Palo Alto, CA）を用いて≧20kHzでデジタル化した。OriginLabソフトウエアによってデータをオフラインで分析した。別段の記載がない限り、平均値±標準偏差として表す。

実施例6―聴覚性驚愕反応
Startle Monitor（Kinder Scientific）を使用して聴覚性驚愕反応（ASR）を計測する。マウスを、圧電／プレキシガラス感知アセンブリに固定された小型の非制限的な立方体プレキシガラス記録チャンバ（27cm×10cm×652 12.5cm）に入れ、60dB SPLバックグラウンドホワイトノイズで5分間順化させる。各セッションは35回の試行からなり、その間、10dB SPL強度が60～120db SPLの範囲である1つのノイズパルスを平均30秒（25～35秒範囲）の試行間隔で印加する。外部ノイズ干渉を制限するために、パルスは、一定の60dB SPLバックグラウンドノイズ上、擬似ランダムな順序で並べる。Startle Monitorシステムが、ピーク驚愕反応（ASR振幅）および刺激からピーク驚愕反応までの時間（ASR潜時）の計算のために、各パルスへの反応を第一N、最大Nおよび反応の最大時間（ms）の計測値へと換算した。ASRはすべて盲検的に実施した。

ABR/DPOAE回復が聴覚機能の行動的に関連する回復を生じさせるかどうかを評価するために、AAV-PHP.Bベクターのみを注入されて関心対象のタンパク質を発現するマウス、および両ベクターを注入されたマウスにおいて聴覚性驚愕反応を計測する。ホワイトノイズに対する驚愕反応の分析は6週齢マウスにおける反応レスキューについて評価する。

実施例7―免疫蛍光検査
AAV-PHP.Bベクターによって送達された導入遺伝子の発現の分布を決定するために免疫染色を実施する。そうするために、解体したばかりのコルチ器を、PBS中に希釈した4％パラホルムアルデヒドによって室温で1時間浸漬固定して、免疫染色を実施する。次いで、組織をPBS中で洗浄し、0.01～0.1％Triton X-100で30分間透過処理し、AlexaFluor546ファロイジン（Molecular Probes、1：200希釈）で1時間対比染色して、フィラメント状アクチンを標識する。

外因的に発現したTMC::FLAG融合タンパク質の局在化のために、2％BSAおよび5％ヤギ正常血清を使用して組織を1時間ブロックし、FLAGモチーフに対する抗体（BD Biosciences、1：200希釈）とともに4℃で一晩インキュベートする。有毛細胞計数のために、組織をヤギ正常血清中で1時間ブロックし、ウサギ抗ミオシンVIIa一次抗体（Proteus Biosciences、1：1000希釈）で4℃で一晩染色し、AlexaFluor488（Life Technologies、1：200希釈）にコンジュゲートしたヤギ抗ウサギ抗体で1時間標識する。試料をVectashield封入剤（Vector Laboratories）によってカバーガラスに封入し、Zeiss LSM700共焦点顕微鏡を使用して10×～63×の倍率で画像化する。

実施例8－卵形嚢注入
治療ベクターを内耳に送達するための新規な注入法を開発した。以前の注入法は、正円窓膜、卵円窓または後半規管を通してベクターを送達するものであった。いくらかは効果的であるが、これらの方法はすべて、外科的にアクセスし難い標的、不均一なウイルス分散および外リンパまたは内リンパ空間を標的とするときの有意な可変性を含む有意な欠点を抱えている。これらの制限を回避するために、聴覚または前庭機能不全を生じさせることなく内耳空間への効率的な送達を可能にする新規な方法を設計した。

この方法は、注入のために卵形嚢（前庭器官の1つ）を標的とすることを含む。注入は内リンパ腔への注入である。マウスの年齢に応じて2つの異なる経路を送達に使用した。以下に示すように、P0とP5との間で、外側半規管と後半規管との間で卵形嚢に接近した。P5よりも後の段階で、正円窓と卵円窓との間で卵形嚢に注入を実施した（図4）。卵形嚢の流体で満たされた空間は他の前庭器官および蝸牛と連続しているため、内耳全体を通して有意に改善されたウイルス分散が認められた。

この新たな方法を、正円窓膜（RWM）へ注入する既存の方法と比較するために、P1マウスに対し、AAV2-Anc80L65-GFPを卵形嚢またはRWMに注入した。イメージングのために4週齢で側頭骨を採取した。有毛細胞を抗ミオシンVIIa抗体で染色した。図5Aおよび5Bを参照すると、卵形嚢およびRWM注入をそれぞれ受けたマウスの蝸牛頂で発現が検出されている。蝸牛の頂端、中間および基底領域の高解像度画像は、卵形嚢注入を実施されたマウスにおいて、RWM注入を受けたマウスと比べて高められたGFP発現を示した（図5Cおよび5D）。

PHB.B-Cmv-eGFPが卵形嚢またはRWM注入によって効率的かつ特異的にマウスを形質導入したかどうかを決定するために、P1で、マウスに対し、AAV9.PHP.B-Cmv-eGFPを卵形嚢またはRWMのいずれかに注入した。図6Aおよび6Bを参照すると、それぞれEcole Polytechnique Federale de Lausanne（EPFL）で調製されたウイルスおよびボストン小児病院（BCH）で調製されたウイルスをP1で卵形嚢注入されたP14マウスから採取された側頭骨において効率的かつ特異的な形質導入が認められた。EPFLウイルスのRWM形質導入もまた効率的かつ特異的であった（図6C）。卵形嚢注入とRWM注入の両方で、蝸牛の頂端、中間および基部領域において類似の割合の形質導入された細胞が認められた（図6DおよびE）。

AAV9-PHP.BベクターはAnc80ベクターよりも高い率でマウスを形質導入する。P1で、マウスに対し、AAV9.PHP.B-Cmv-eGFPまたはAAV-Anc80-Cmv-eGFPの卵形嚢注入を実施した。P14で側頭骨を採取し、蝸牛中（図7Aおよび7B）ならびに蝸牛の頂端、中間および基底領域の内および外有毛細胞中（図7C）で検出された蛍光によって測定すると、Anc80と比べ、PHP.Bの場合に増大した形質導入率が認められた。

PHP.BがAnc80よりも高い特異性を有するかどうかを決定するために、P1マウスに対し、Anc80-Cmv-eGFP-EPREまたはPHP.B-Cmv-eGFPの卵形嚢注入を実施した。P15マウスで蝸牛を採取し、横断切片を調製した。図8Aおよび8Bを参照すると、下中央パネルに認められる緑色の蛍光によって示されるように、PHP.Bの場合に増大した特異性が認められた。

PHP.B-Cmv-eGFPが内および外有毛細胞を標的とする発達段階を決定するために、P7およびP16で、マウスに対し、PHP.Bベクターの卵形嚢注入を実施した。図9Aを参照すると、P16と比べ、P7で注入を受けたマウスにおいて増加したeGFP陽性細胞が認められた。しかし、PHP.B-Cmv-eGFPは出生後期と成熟期の両方で内耳有毛細胞を標的とした（図9B）。

野生型マウスにおける有毛細胞トランスダクションに対するAAV9-PHP.B-Cmv-GFP注入の効果を評価した。P1で、マウスに対し、ベクターの卵形嚢注入を実施した。図10Aは、GFP陽性細胞からの毛束の機械的変位によって誘発される感覚トランスダクション電流の代表的な電流ファミリーを表す。図10Bは、P7でGFP陽性外有毛細胞とGFP陰性外有毛細胞との間で感度の差がなかったことを示す。加えて、GFP陽性内および外有毛細胞とGFP陰性内および外有毛細胞とで電流振幅の差は認められなかった（図10C）。

聴性脳幹反応（ABR）および歪成分耳音響放射（DPOAE）閾値を評価した。図11Aは、P28～P31で試験された4匹のC57非注入マウス（黒い点線）、P1でAnc80-eGFPの卵形嚢注入を実施され、P30で試験された4匹のC57マウス（淡いグレー）およびP1でAAV9.PHP.B-Cmv-eGFP（BCHによって調製）の卵形嚢注入を実施され、P29で試験された4匹のC57マウス（濃いグレー）の場合に観察されたABRおよびDPOAE閾値を示す。図11Bを参照すると、P28～P31で試験された4匹のC57非注入マウス（黒い点線）、P7でAnc80-eGFPの卵形嚢注入を実施され、P30で試験された4匹のC57マウス（淡いグレー）およびP7でPHP.B-eGFP（EPFL）の卵形嚢注入を実施され、P27～P28で試験された9匹のC57マウス（濃いグレー）の場合にABR（左）およびDPOAE（右）の閾値が観察されている。図11Cを参照すると、P28～P31で試験された4匹のC57非注入マウス（黒い点線）、P16でAnc80-eGFPの卵形嚢注入を実施され、P31で試験された4匹のC57マウス（淡いグレー）およびP16でPHP.B-eGFP（EPFL）の卵形嚢注入を実施され、P28で試験された4匹のC57マウス（濃いグレー）の場合にABR（左）およびDPOAE（右）の閾値が観察されている。合わせると、これらのデータは、ABRおよびDPOAE閾値がP1、P7またはP16でのAAV9.PHP.B-Cmv-eGFPの注入によって影響を受けなかったことを示す。

PHP.BおよびAnc80形質導入に対する注入タイミングの影響を比較した。P1、P7およびP16で、マウスに対し、AAV9.PHP.B-Cmv-eGFPまたはAnc80-Cmv-eGFPを卵形嚢に注入した。図12Aおよび12Bを参照すると、PHP.B-Cmv-eGFPは、それぞれ卵形嚢および球形嚢において、Anc80構築物よりも高い形質導入率を示した。また、eGFP発現は、定性的に、Anc80-Cmv-eGFPを投与されたマウスと比べ、PHP.B-Cmv-eGFPを投与されたマウスにおいて、よりロバストかつ後半規管の有毛細胞に特異的であった（図13）。

様々な事業主体によって調製されたウイルスのベクターを評価した。P1で、C57マウスに対し、Anc80-Cmv-eGFP、BCHで調製されたPHP.B-Cmv-eGFPまたはEPFLで調製されたPHP.B-Cmv-eGFPの卵形嚢注入を実施した。P15で組織を採取した。図14を参照すると、PHP.B-Cmv-eGFP（特に、BCHで調製されたベクター）は、前庭有毛細胞中、Anc80ベクターよりも高い形質導入率を示した。

実施例9：ニューロン形質導入
蝸牛および前庭ニューロンを効果的に形質導入することができるかどうかを決定するために、AAV9-PHP.Bベクターを、シナプシンプロモーターを含むように改変した。P1で、C57マウスに対し、PHP.B-Syn-eGFPの卵形嚢注入を実施した。P15で組織を採取し、横断切片およびホールマウント切片を調製した。図15を参照すると、蝸牛および前庭横断切片ならびにホールマウント切片は、AAV-PHP.B-Syn-eGFPが、らせん神経節および前庭ニューロンを形質導入する場合に高い特異性および効率を有することを示す。

実施例10：聴覚機能の回復
治療ポリペプチドの発現を駆動するPHP.Bベクターの能力をホモ接合型Tmc1変異体マウスにおいて評価した。P1でマウスに注入を実施し、P30で聴覚機能を計測した。ABRおよびDPOAE閾値によって計測されたように、AAV9-PHP.B-Cmv-Tmc1ベクターは、変異体マウスにおいて聴覚機能を回復させた（図16Aおよび16B）。このベクターはAAV1-Cmv-Tmc1およびAnc80-Cmv-Tmc1の性能を上回り、AAV9-PHP.B-Cmv-Tmc1ベクターを投与された1匹のマウスは野生型と同様の性能を示した（図16A）。

実施例11：内および外有毛細胞において導入遺伝子を発現させるためのプロモーター
特定の細胞または組織中で発現を駆動するプロモーターは、治療導入遺伝子の標的化送達およびオフターゲット発現の最小化にとって特に貴重である。特に前庭細胞中で発現を駆動するいくつかのプロモーターの能力を調べた。図17A～17Cを参照すると、Pcdh15、ミオシン6およびミオシン7aプロモーターが内および外有毛細胞中で発現を駆動している。KCNQ4プロモーターは外有毛細胞中で特異的に発現を駆動する（図17D）。

他の態様
本明細書において、方法および物質組成はいくつかの異なる局面に関連して説明されたが、様々な局面の前記説明は、方法および物質組成を例示することを意図したものであり、方法および物質組成の範囲を限定することを意図したものではないことが理解されよう。他の局面、利点および変形が以下の請求項の範囲内である。

本明細書における変数の任意の定義における要素のリストの記載は、任意の1つの要素またはリストされた要素の組み合わせ（またはサブコンビネーション）としての当該変数の定義を含む。本明細書における態様の記載は、任意の1つの態様としての当該態様または任意の他の態様もしくはその部分との組み合わせとしての当該態様を含む。

本明細書において挙げられるすべての特許および刊行物は、各個の特許および刊行物が参照により組み入れられることが明確かつ個別に示される場合と同じ程度に、参照により本明細書に組み入れられる。

開示されるものは、開示される方法および組成物のために使用することができる、開示される方法および組成物とともに使用することができる、開示される方法および組成物の調製において使用することができる、または開示される方法および組成物の産物である、方法および組成物である。これらおよび他の物質が本明細書に開示され、これらの方法および組成物の組み合わせ、サブセット、相互作用、群などが開示されるということが理解されよう。すなわち、これらの組成物および方法の各様々な個々のおよび集合的な組み合わせおよび置換への具体的言及が明示的に開示されていないとしても、それぞれは本明細書において具体的に考慮され、記載されている。たとえば、特定の物質組成または特定の方法が開示され、記載され、多数の組成物または方法が述べられているならば、別段の指示がない限り、それらの組成物および方法の各組み合わせおよび置換が具体的に考慮されている。同様に、これらの任意のサブセットまたは組み合わせが同じく具体的に考慮され、開示されている。

配列情報
SEQUENCE LISTING
<110> THE CHILDREN'S MEDICAL CENTER CORPORATION
ECOLE POLYTECHNIQUE FEDERALE DE LAUSANNE
<120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR DELIVERING NUCLEIC ACIDS TO COCHLEAR
AND VESTIBULAR CELLS
<150> US 62/638,697
<151> 2018-03-05
<160> 27
<170> PatentIn version 3.5

<210> 1
<211> 8543
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 1
ccaatgatac gcgtcggtgc gggcctcttc gctattacgc cagctggcga aagggggatg 60
tgctgcaagg cgattaagtt gggtaacgcc agggttttcc cagtcacgac gttgtaaaac 120
gacggccagt gagcgcgcgt aatacgactc actatagggc gaattgggta catcgacggt 180
atcgggggag ctcgcagggt ctccattttg aagcgggagg tttgaacgcg cagccgccat 240
gccggggttt tacgagattg tgattaaggt ccccagcgac cttgacgagc atctgcccgg 300
catttctgac agctttgtga actgggtggc cgagaaggaa tgggagttgc cgccagattc 360
tgacatggat ctgaatctga ttgagcaggc acccctgacc gtggccgaga agctgcagcg 420
cgactttctg acggaatggc gccgtgtgag taaggccccg gaggctcttt tctttgtgca 480
atttgagaag ggagagagct acttccacat gcacgtgctc gtggaaacca ccggggtgaa 540
atccatggtt ttgggacgtt tcctgagtca gattcgcgaa aaactgattc agagaattta 600
ccgcgggatc gagccgactt tgccaaactg gttcgcggtc acaaagacca gaaatggcgc 660
cggaggcggg aacaaggtgg tggatgagtg ctacatcccc aattacttgc tccccaaaac 720
ccagcctgag ctccagtggg cgtggactaa tatggaacag tatttaagcg cctgtttgaa 780
tctcacggag cgtaaacggt tggtggcgca gcatctgacg cacgtgtcgc agacgcagga 840
gcagaacaaa gagaatcaga atcccaattc tgatgcgccg gtgatcagat caaaaacttc 900
agccaggtac atggagctgg tcgggtggct cgtggacaag gggattacct cggagaagca 960
gtggatccag gaggaccagg cctcatacat ctccttcaat gcggcctcca actcgcggtc 1020
ccaaatcaag gctgccttgg acaatgcggg aaagattatg agcctgacta aaaccgcccc 1080
cgactacctg gtgggccagc agcccgtgga ggacatttcc agcaatcgga tttataaaat 1140
tttggaacta aacgggtacg atccccaata tgcggcttcc gtctttctgg gatgggccac 1200
gaaaaagttc ggcaagagga acaccatctg gctgtttggg cctgcaacta ccgggaagac 1260
caacatcgcg gaggccatag cccacactgt gcccttctac gggtgcgtaa actggaccaa 1320
tgagaacttt cccttcaacg actgtgtgga caagatggtg atctggtggg aggaggggaa 1380
gatgaccgcc aaggtcgtgg agtcggccaa agccattctc ggaggaagca aggtgcgcgt 1440
ggaccagaaa tgcaagtcct cggcccagat agacccgact cccgtgatcg tcacctccaa 1500
caccaatatg tgcgccgtga ttgacgggaa ctcaacgacc ttcgaacacc agcagccgtt 1560
gcaagaccgg atgttcaaat ttgaactcac ccgccgtctg gatcatgact ttgggaaggt 1620
caccaagcag gaagtcaaag actttttccg gtgggcaaag gatcacgtgg ttgaggtgga 1680
gcatgaattc tacgtcaaaa agggtggagc caagaaaaga cccgccccca gtgacgcaga 1740
tataagtgag cccaaacggg tgcgcgagtc agttgcgcag ccatcgacgt cagacgcgga 1800
agcttcgatc aactacgcgg acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg tgggcatgaa 1860
tctgatgctg tttccctgca gacaatgcga gagactgaat cagaattcaa atatctgctt 1920
cactcacggt gtcaaagact gtttagagtg ctttcccgtg tcagaatctc aacccgtttc 1980
tgtcgtcaaa aaggcgtatc agaaactgtg ctacattcat cacatcatgg gaaaggtgcc 2040
agacgcttgc actgcttgcg acctggtcaa tgtggacttg gatgactgtg tttctgaaca 2100
ataaatgact taaaccaggt atgagtcggc tggataaatc taaagtcata aacggcgctc 2160
tggaattact caatgaagtc ggtatcgaag gcctgacgac aaggaaactc gctcaaaagc 2220
tgggagttga gcagcctacc ctgtactggc acgtgaagaa caagcgggcc ctgctcgatg 2280
ccctggccat cgagatgctg gacaggcatc atacccactt ctgccccctg gaaggcgagt 2340
catggcaaga ctttctgcgg aacaacgcca agtcattccg ctgtgctctc ctctcacatc 2400
gcgacggggc taaagtgcat ctcggcaccc gcccaacaga gaaacagtac gaaaccctgg 2460
aaaatcagct cgcgttcctg tgtcagcaag gcttctccct ggagaacgca ctgtacgctc 2520
tgtccgccgt gggccacttt acactgggct gcgtattgga ggaacaggag catcaagtag 2580
caaaagagga aagagagaca cctaccaccg attctatgcc cccacttctg agacaagcaa 2640
ttgagctgtt cgaccggcag ggagccgaac ctgccttcct tttcggcctg gaactaatca 2700
tatgtggcct ggagaaacag ctaaagtgcg aaagcggcgg gccggccgac gcccttgacg 2760
attttgactt agacatgctc ccagccgatg cccttgacga ctttgacctt gatatgctgc 2820
ctgctgacgc tcttgacgat tttgaccttg acatgctccc cgggtaaatg catgaattcg 2880
atctagaggg ccctattcta tagtgtcacc taaatgctag agctcgctga tcagcctcga 2940
ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc 3000
tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc 3060
tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt 3120
gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatggcttct gaggcggaaa 3180
gaaccagctg gggctcgaat caagctatca agtgccacct gacgtctccc tatcagtgat 3240
agagaagtcg acacgtctcg agctccctat cagtgataga gaaggtacgt ctagaacgtc 3300
tccctatcag tgatagagaa gtcgacacgt ctcgagctcc ctatcagtga tagagaaggt 3360
acgtctagaa cgtctcccta tcagtgatag agaagtcgac acgtctcgag ctccctatca 3420
gtgatagaga aggtacgtct agaacgtctc cctatcagtg atagagaagt cgacacgtct 3480
cgagctccct atcagtgata gagaaggtac cccctatata agcagagaga tctgttcaaa 3540
tttgaactga ctaagcggct cccgccagat tttggcaaga ttactaagca ggaagtcaag 3600
gacttttttg cttgggcaaa ggtcaatcag gtgccggtga ctcacgagtt taaagttccc 3660
agggaattgg cgggaactaa aggggcggag aaatctctaa aacgcccact gggtgacgtc 3720
accaatacta gctataaaag tctggagaag cgggccaggc tctcatttgt tcccgagacg 3780
cctcgcagtt cagacgtgac tgttgatccc gctcctctgc gaccgctagc ttcgatcaac 3840
tacgcagaca ggtaccaaaa caagtgttct cgtcacgtgg gcattaatct gattctgttt 3900
ccctgcagac aatgcgagag aatgaatcag aactcaaata tctgcttcac tcacggacag 3960
aaagactgtt tagagtgctt tcccgtgtca gaatctcaac ccgtttctgt cgtcaaaaag 4020
gcgtatcaga aactgtgcta cattcatcat atcatgggaa aggtgccaga cgcttgcact 4080
gcctgcgatc tggtcaatgt ggatttggat gactgcatct ttgaacaata aatgacttaa 4140
gccaggtatg gctgccgatg gttatcttcc agattggctc gaggacaacc ttagtgaagg 4200
aattcgcgag tggtgggctt tgaaacctgg agcccctcaa cccaaggcaa atcaacaaca 4260
tcaagacaac gctagaggtc ttgtgcttcc gggttacaaa taccttggac ccggcaacgg 4320
actcgacaag ggggagccgg tcaacgcagc agacgcggcg gccctcgagc acgacaaagc 4380
ctacgaccag cagctcaagg ccggagacaa cccgtacctc aagtacaacc acgccgacgc 4440
cgagttccag gagcggctca aagaagatac gtcttttggg ggcaacctcg ggcgagcagt 4500
cttccaggcc aaaaagaggc ttcttgaacc tcttggtctg gttgaggaag cggctaagac 4560
ggctcctgga aagaagaggc ctgtagagca gtctcctcag gaaccggact cctccgcggg 4620
tattggcaaa tcgggtgcac agcccgctaa aaagagactc aatttcggtc agactggcga 4680
cacagagtca gtcccagacc ctcaaccaat cggagaacct cccgcagccc cctcaggtgt 4740
gggatctctt acaatggctt caggtggtgg cgcaccagtg gcagacaata acgaaggtgc 4800
cgatggagtg ggtagttcct cgggaaattg gcattgcgat tcccaatggc tgggggacag 4860
agtcatcacc accagcaccc gaacctgggc cctgcccacc tacaacaatc acctctacaa 4920
gcaaatctcc aacagcacat ctggaggatc ttcaaatgac aacgcctact tcggctacag 4980
caccccctgg gggtattttg acttcaacag attccactgc cacttctcac cacgtgactg 5040
gcagcgactc atcaacaaca actggggatt ccggcctaag cgactcaact tcaagctctt 5100
taacattcag gtcaaagagg ttacggacaa caatggagtc aagaccatcg ccaataacct 5160
taccagcacg gtccaggtct tcacggactc agactatcag ctcccgtacg tgctcgggtc 5220
ggctcacgag ggctgcctcc cgccgttccc agcggacgtt ttcatgattc ctcagtacgg 5280
gtatctgacg cttaatgatg gaagccaggc cgtgggtcgt tcgtcctttt actgcctgga 5340
atatttcccg tcgcaaatgc taagaacggg taacaacttc cagttcagct acgagtttga 5400
gaacgtacct ttccatagca gctacgctca cagccaaagc ctggaccgac taatgaatcc 5460
actcatcgac caatacttgt actatctctc tagaactatt aacggttctg gacagaatca 5520
acaaacgcta aaattcagtg tggccggacc cagcaacatg gctgtccagg gaagaaacta 5580
catacctgga cccagctacc gacaacaacg tgtctcaacc actgtgactc aaaacaacaa 5640
cagcgaattt gcttggcctg gagcttcttc ttgggctctc aatggacgta atagcttgat 5700
gaatcctgga cctgctatgg cctctcacaa agaaggagag gaccgtttct ttcctttgtc 5760
tggatcttta atttttggca aacaaggtac tggcagagac aacgtggatg cggacaaagt 5820
catgataacc aacgaagaag aaattaaaac tactaacccg gtagcaacgg agtcctatgg 5880
acaagtggcc acaaaccacc agagtgccca aactttggcg gtgcctttta aggcacaggc 5940
gcagaccggt tgggttcaaa accaaggaat acttccgggt atggtttggc aggacagaga 6000
tgtgtacctg caaggaccca tttgggccaa aattcctcac acggacggca actttcaccc 6060
ttctccgctg atgggagggt ttggaatgaa gcacccgcct cctcagatcc tcatcaaaaa 6120
cacacctgta cctgcggatc ctccaacggc cttcaacaag gacaagctga actctttcat 6180
cacccagtat tctactggtc aagtcagcgt ggagatcgag tgggagctgc agaaggaaaa 6240
cagcaagcgc tggaacccgg agatccagta cacttccaac tattacaagt ctaataatgt 6300
tgaatttgct gttaatactg aaggtgtata tagtgaaccc cgccccattg gcaccagata 6360
cctgactcgt aatctgtaag tcgacttgct tgttaatcaa taaaccgttt aattcgtttc 6420
agttgaactt tggtctctgc gaagggcaat tcgtttaaac ctgcaggact agaggtcctg 6480
tattagaggt cacgtgagtg ttttgcgaca ttttgcgaca ccatgtggtc acgctgggta 6540
tttaagcccg agtgagcacg cagggtctcc attttgaagc gggaggtttg aacgcgcagc 6600
cgccaagccg aattctgcag atatcacatg tcctaggaac tatcgatcca tcacactggc 6660
ggccgctcga ctagagcggc cgccaccgcg gtggagctcc agcttttgcg gaccgaatcg 6720
gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc 6780
tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc 6840
agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc 6900
tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt 6960
cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg 7020
ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat 7080
ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag 7140
ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt 7200
ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc 7260
cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta 7320
gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag 7380
atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga 7440
ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa 7500
gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa 7560
tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc 7620
ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga 7680
taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa 7740
gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt 7800
gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg 7860
ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc 7920
aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg 7980
gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag 8040
cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt 8100
actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt 8160
caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac 8220
gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac 8280
ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag 8340
caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa 8400
tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga 8460
gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc 8520
cccgaaaagt gccacctgac gtc 8543

<210> 2
<211> 1242
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 2
tgcaagaacc ctcactggct gaactatctt gccagcccct tattttgttt tcatattaac 60
ctcttttttc tagtaaagga gatgtttgct ctcaaatttg cataggaatg taatatttaa 120
tttaaaaaga tgacccacat atgaccttat aaggacagta aaattaaaca accggaaaga 180
taaagcgggc cagttggctc agttctataa aaccagccca caaggattgt cactattctt 240
aggcttgcgc gggctacatg atgagttcca ggactgcctg gttacagacc gagactctct 300
caagagtcca gataaacaac aacaaagggg gcgaggtgga aatacagggg ctgtaagaag 360
taaatatgat atctgcatgg gaggctagcc agagaagaaa aaattttctt ccgtggttca 420
atcctccaag ggctgaacag gaagttgacg caggcaggtg aggagcacga gcctagatgg 480
gctgcggtgc cacccttaat ccccacaagc gagttcctcc gcaattcgcc tgtcccactc 540
tcaacttttc ttcaactgac tctttgctgt ggtccctcgc tgtggcagtg gaaacaacta 600
ccactgcgag gtagggaatg tcatgagggg ctacctgcag cccttggctt gcagggatgc 660
agggatgcgg tcggaacctg aggccccgcc cttctcttgc cccacgccat taggccacgc 720
ccctacccag cactccttca accaccccct tccccggcgc ctcatgaggt cccgcccctc 780
tcaaccctag ctcttgaggc ctccccttca cagccgcccc ggcgttcctt gacttgaggc 840
cacgtccctc tgctccttca ttcccaagac cctacgcttt gcgagtcctc cctgtcctgc 900
tgcctaggac cccgcccctc tcagcccttc tgccccaaga ccccgcccct taggctgttc 960
ccgcccactg gccaatgaag acccgccctt tctttagccg ccccgccccg gtcccacaaa 1020
atcccgcctc cggccccgcc tcccgccccc ttgggcgctc cgtagcagtg acgtgcgcag 1080
gctgggcact ctgcagggct ctctggccgg cgggtggaga ccgatccggg atctgtccca 1140
gcaggaagcg tatcccggcc gccgtcgtgc tgtcgtctcc ggtgctcgct ctcggccgcg 1200
gtgtcgcgct tgcccttcgc gcccgcagcc cggcagcctc tc 1242

<210> 3
<211> 3221
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 3
agacacccca gttatggggg ctagggaccc aaaagagaca tccttctgcc acccagagct 60
gccctggcga ggtgcactat ggggccgccg acagctgcgt ggctgccgag ggcggaaagg 120
agaaactgtc atgtcccgat agggccgcgc gaggtctcca tcctcgacaa cgctaataac 180
aaagacgtgt gctcctcttt gcttggttcc ccccactcct ttaaatcaca gatttcactt 240
cagtttatct gtgtcgctgt cacacgtggg gtggctccca gtcagctggt ttggcaaagt 300
ttctggatga ttacggaata acatgtgtcc ccaacccgca gagcaggttg tgggggcaat 360
gttgcattga ccagcgtcag agaacacaca tcagaggcaa gggtgggtgt gcaggaggga 420
gaaggcgcag aaggcagggc tttagctcag cactctccct cctgccatgc tctgcctgac 480
cgttccctct ctgagtccca aacagccagg tagaggagga agaaatgggg ctgagacccc 540
agcacatcag tgattaagtc aggatcaggt gcggtttcct gctcaggtgc tgagacagca 600
ggcggtgtcc tgcaaacaac aggaggcacc tgaagctagc ctggggggcc cacgcccagg 660
tgcggtgcat tcagcagcac agccagagac agaccccaat gaccccgcct ccctgtcggc 720
agccagtgct ctgcacagag ccctgagcag cctctggaca ttagtcccag ccccagcacg 780
gcccgtcccc cacgctgatg tcaccgcacc cagaccttgg aggccccctc cggctccgcc 840
tcctgggaga aggctctgga gtgaggaggg gagggcagca gtgctggctg gacagctgct 900
ctgggcagga gagagaggga gagacaagag acacacacag agagacggcg aggaagggaa 960
agacccagag ggacgcctag aacgagactt ggagccagac agaggaagag gggacgtgtg 1020
tttgcagact ggctgggccc gtgacccagc ttcctgagtc ctccgtgcag gtggcagctg 1080
taccaggctg gcaggtcact gagagtgggc agctgggccc caggtaagga tgggctgccc 1140
actgtcctgg gcattgggag gggtttggat gtggaggagt catggacttg agctacctct 1200
agagcctctg ccccacagcc acttgctcct gggactgggc ttcctgccac ccttgagggc 1260
tcagccacca cagccactga atgaaactgt cccgagcctg ggaagatgga tgtgtgtccc 1320
ctggaggagg gaagagccaa ggagcatgtt gtccatcgaa tcttctctga gctggggctg 1380
gggttagtgg catcctgggg ccaggggaat agacatgctg tggtggcaga gagaagagtc 1440
cgttctctct gtctcctttg ctttctctct gacactcttt atctccgttt ttggataagt 1500
cacttccttc ctctatgccc caaatatccc atctgtgaaa tgggagtatg aagccccaac 1560
agccagggtt gtagtgggga agaggtaaaa tcaggtatag acatagaaat acaaatacag 1620
tctatgcccc ctgttgtcag ttggaaaaga aattaacttg aaggtggtct agttctcatt 1680
tttagaaatg aaatgtctgt ctggtcattt taaaatgtgg cccttaaatt tcacgccctc 1740
accgctctcc cccatccctt ggagccccat gtctctagtg aaagcactgg ctctgccccc 1800
agccctcatg gctcatgctg gcatagggcg cctgctccac agcctgggca ccatcttcag 1860
acaagtgccc ggtggcaact gcctgctggc cctgttgaat ccacatctcc accaggcatc 1920
cagactagtt caggtctctg gaaggaccgt gggtttgctg tgtcccagag ctccagggca 1980
ggggtcaggg ctcggatgtc gggcagtgtc atgggcagag gatcgaatgc cccggcggct 2040
ctgaatgggc ccttgtgaaa aattgatgcg cattctagga gacaggttgg gagccagagg 2100
ggcctcatac cagggtctgt aggctggggc tgccttttaa gctccttcct gaggccgtct 2160
ctgggtctgg ccctgtgctg gacaaggctg gagacaaggc aatgtctcag accctctccc 2220
attggccaca tcctgccctg gatcaactcg ccaactttgg gggcagaggt gggactgacc 2280
cttaccctga caacataatg catatagtca aaatgggata aaggggaata tagaggctct 2340
tggcagcttg ggagtggtca gggaaggctt cctggaggag gtatcatctg aactgagcca 2400
tgaaccataa gtggaaattc actagtcaaa atttcaggta gaagggccag tgtgtgaagg 2460
ccaggagatg gcaagagctg gcgtatttca ggaacagtga gtcactgagg atgtccaagt 2520
ataagggtag gaaagggagt gagcagtgag agaaaagacc gaggcatcag caggggccag 2580
attgtgctgg gcctagcggg gcgggcccgg gcccgggccc aggcccaggt gcggtgcatt 2640
cagcagcaca gccagagaca gaccccaatg accctgcctc cccgtcagca gccagtgctc 2700
tgcacagagc catcctgagg gcagtgggtg ctcttgagag gtttcaggca gggtgtgctg 2760
tgagcaggtc atgcccagcc cttgaccttc tgctcagtca ggcttgtcct tgtcacccac 2820
attcctgggg cagtccctaa gctgagtgcc ggagattaag tcctagtcct aaatttgctc 2880
tggctagctg tgtgaccctg ggcaagtctt ggtccctctc tgggcccctt tgccgtaggt 2940
ccctggtggg gccagacttg ctactttcta ggagcccttt gggaatctct gaatgacagt 3000
ggctgagaga agaattcagc tgctctgggc agtggtgctg gtgacagtgg ctgaggctca 3060
ggtcacacag gctgggcagt ggtcagaggg agagaagcca aggagggttc ccttgaggga 3120
ggaggagctg gggctttggg aggagcccag gtgaccccag ccaggctcaa ggcttccagg 3180
gctggcctgc ccagaagcat gacatggtct ctctccctgc a 3221

<210> 4
<211> 760
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Met Ser Pro Lys Lys Val Gln Ile Lys Val Glu Glu Lys Glu Asp Glu
1 5 10 15
Thr Glu Glu Ser Ser Ser Glu Glu Glu Glu Glu Val Glu Asp Lys Leu
20 25 30
Pro Arg Arg Glu Ser Leu Arg Pro Lys Arg Lys Arg Thr Arg Asp Val
35 40 45
Ile Asn Glu Asp Asp Pro Glu Pro Glu Pro Glu Asp Glu Glu Thr Arg
50 55 60
Lys Ala Arg Glu Lys Glu Arg Arg Arg Arg Leu Lys Arg Gly Ala Glu
65 70 75 80
Glu Glu Glu Ile Asp Glu Glu Glu Leu Glu Arg Leu Lys Ala Glu Leu
85 90 95
Asp Glu Lys Arg Gln Ile Ile Ala Thr Val Lys Cys Lys Pro Trp Lys
100 105 110
Met Glu Lys Lys Ile Glu Val Leu Lys Glu Ala Lys Lys Phe Val Ser
115 120 125
Glu Asn Glu Gly Ala Leu Gly Lys Gly Lys Gly Lys Arg Trp Phe Ala
130 135 140
Phe Lys Met Met Met Ala Lys Lys Trp Ala Lys Phe Leu Arg Asp Phe
145 150 155 160
Glu Asn Phe Lys Ala Ala Cys Val Pro Trp Glu Asn Lys Ile Lys Ala
165 170 175
Ile Glu Ser Gln Phe Gly Ser Ser Val Ala Ser Tyr Phe Leu Phe Leu
180 185 190
Arg Trp Met Tyr Gly Val Asn Met Val Leu Phe Ile Leu Thr Phe Ser
195 200 205
Leu Ile Met Leu Pro Glu Tyr Leu Trp Gly Leu Pro Tyr Gly Ser Leu
210 215 220
Pro Arg Lys Thr Val Pro Arg Ala Glu Glu Ala Ser Ala Ala Asn Phe
225 230 235 240
Gly Val Leu Tyr Asp Phe Asn Gly Leu Ala Gln Tyr Ser Val Leu Phe
245 250 255
Tyr Gly Tyr Tyr Asp Asn Lys Arg Thr Ile Gly Trp Met Asn Phe Arg
260 265 270
Leu Pro Leu Ser Tyr Phe Leu Val Gly Ile Met Cys Ile Gly Tyr Ser
275 280 285
Phe Leu Val Val Leu Lys Ala Met Thr Lys Asn Ile Gly Asp Asp Gly
290 295 300
Gly Gly Asp Asp Asn Thr Phe Asn Phe Ser Trp Lys Val Phe Thr Ser
305 310 315 320
Trp Asp Tyr Leu Ile Gly Asn Pro Glu Thr Ala Asp Asn Lys Phe Asn
325 330 335
Ser Ile Thr Met Asn Phe Lys Glu Ala Ile Thr Glu Glu Lys Ala Ala
340 345 350
Gln Val Glu Glu Asn Val His Leu Ile Arg Phe Leu Arg Phe Leu Ala
355 360 365
Asn Phe Phe Val Phe Leu Thr Leu Gly Gly Ser Gly Tyr Leu Ile Phe
370 375 380
Trp Ala Val Lys Arg Ser Gln Glu Phe Ala Gln Gln Asp Pro Asp Thr
385 390 395 400
Leu Gly Trp Trp Glu Lys Asn Glu Met Asn Met Val Met Ser Leu Leu
405 410 415
Gly Met Phe Cys Pro Thr Leu Phe Asp Leu Phe Ala Glu Leu Glu Asp
420 425 430
Tyr His Pro Leu Ile Ala Leu Lys Trp Leu Leu Gly Arg Ile Phe Ala
435 440 445
Leu Leu Leu Gly Asn Leu Tyr Val Phe Ile Leu Ala Leu Met Asp Glu
450 455 460
Ile Asn Asn Lys Ile Glu Glu Glu Lys Leu Val Lys Ala Asn Ile Thr
465 470 475 480
Leu Trp Glu Ala Asn Met Ile Lys Ala Tyr Asn Ala Ser Phe Ser Glu
485 490 495
Asn Ser Thr Gly Pro Pro Phe Phe Val His Pro Ala Asp Val Pro Arg
500 505 510
Gly Pro Cys Trp Glu Thr Met Val Gly Gln Glu Phe Val Arg Leu Thr
515 520 525
Val Ser Asp Val Leu Thr Thr Tyr Val Thr Ile Leu Ile Gly Asp Phe
530 535 540
Leu Arg Ala Cys Phe Val Arg Phe Cys Asn Tyr Cys Trp Cys Trp Asp
545 550 555 560
Leu Glu Tyr Gly Tyr Pro Ser Tyr Thr Glu Phe Asp Ile Ser Gly Asn
565 570 575
Val Leu Ala Leu Ile Phe Asn Gln Gly Met Ile Trp Met Gly Ser Phe
580 585 590
Phe Ala Pro Ser Leu Pro Gly Ile Asn Ile Leu Arg Leu His Thr Ser
595 600 605
Met Tyr Phe Gln Cys Trp Ala Val Met Cys Cys Asn Val Pro Glu Ala
610 615 620
Arg Val Phe Lys Ala Ser Arg Ser Asn Asn Phe Tyr Leu Gly Met Leu
625 630 635 640
Leu Leu Ile Leu Phe Leu Ser Thr Met Pro Val Leu Tyr Met Ile Val
645 650 655
Ser Leu Pro Pro Ser Phe Asp Cys Gly Pro Phe Ser Gly Lys Asn Arg
660 665 670
Met Phe Glu Val Ile Gly Glu Thr Leu Glu His Asp Phe Pro Ser Trp
675 680 685
Met Ala Lys Ile Leu Arg Gln Leu Ser Asn Pro Gly Leu Val Ile Ala
690 695 700
Val Ile Leu Val Met Val Leu Ala Ile Tyr Tyr Leu Asn Ala Thr Ala
705 710 715 720
Lys Gly Gln Lys Ala Ala Asn Leu Asp Leu Lys Lys Lys Met Lys Met
725 730 735
Gln Ala Leu Glu Asn Lys Met Arg Asn Lys Lys Met Ala Ala Ala Arg
740 745 750
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Arg Gln
755 760

<210> 5
<211> 3201
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 5
cagaaactat gagggcagaa cccagcaatc tgtgctttct ttcacaagcc ctccaggagt 60
tgctgaaatt taggaatcat tgccccaaaa agtggccctc ataatgatgc cagatgggat 120
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ctcccaggtt caagtgattc tcctgcctcg gcctcctgag tagctgggat ttcaggccat 240
gaaagatcac tgttttagtc tgcgtggtgc agtggaacag atagacctcg gtttgaatct 300
cagctctact gtttactaga catgaaatgg ggaaatctaa aatgagatgc cagaagcctc 360
aaaaatggaa aaccccctgt gcttcacatc tgaaaatctc tgctgggggc agcaactttg 420
agcctgtggg gaaggaactg tccacgtgga gtggtctggt gaatgcttaa ggagctgcag 480
aagggaagtc cctctccaaa ctagccagcc actgagacct tctgacagga cacccccagg 540
atgtcaccca aaaaagtaca aatcaaagtg gaggaaaaag aagacgagac tgaggaaagc 600
tcaagtgaag aggaagagga ggtggaagat aagctacctc gaagagagag cttgagacca 660
aagaggaaac ggaccagaga tgttatcaat gaggatgacc cagaacctga accagaggat 720
gaagaaacaa ggaaggcaag agaaaaagag aggaggagga ggctaaagag aggagcagaa 780
gaagaagaaa ttgatgaaga ggaattggaa agattgaagg cagagttaga tgagaaaaga 840
caaataattg ctactgtcaa atgcaaacca tggaagatgg agaagaaaat tgaagttctc 900
aaggaggcaa aaaaatttgt gagtgaaaat gaaggggctc ttgggaaagg aaaaggaaaa 960
cggtggtttg catttaagat gatgatggcc aagaaatggg caaaattcct ccgtgatttt 1020
gagaacttca aagctgcgtg tgtcccatgg gaaaataaaa tcaaggctat tgaaagtcag 1080
tttggctcct cagtggcctc atacttcctc ttcttgagat ggatgtatgg agtcaatatg 1140
gttctcttta tcctgacatt tagcctcatc atgttgccag agtacctctg gggtttgcca 1200
tatggcagtt tacctaggaa aaccgttccc agagccgaag aggcatcggc agcaaacttt 1260
ggtgtgttgt acgacttcaa tggtttggca caatattccg ttctctttta tggctattat 1320
gacaataaac gaacaattgg atggatgaat ttcaggttgc cgctctccta ttttctagtg 1380
gggattatgt gcattggata cagctttctg gttgtcctca aagcaatgac caaaaacatt 1440
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tgggactacc tgatcggcaa tcctgaaaca gcagacaaca aatttaattc tatcacaatg 1560
aactttaagg aagctatcac agaagaaaaa gcagcccaag tagaagaaaa cgtccacttg 1620
atcagattcc tgaggtttct ggctaacttc ttcgtgtttc taacacttgg agggagtgga 1680
tacctcatct tttgggctgt gaagcgatcc caggaatttg cacagcaaga tcctgacacc 1740
cttgggtggt gggaaaaaaa tgaaatgaac atggttatgt ccctcctagg gatgttctgt 1800
ccaacattgt ttgacttatt tgctgaatta gaagactacc atcctctcat cgctttgaaa 1860
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ctttgggaag ccaatatgat caaggcctac aatgcatcat tctctgaaaa tagcactgga 2040
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ggacaggagt ttgtgaggct gacagtctct gatgttctga ccacctacgt cacaatcctc 2160
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ttggagtatg gatatccttc atacaccgaa ttcgacatca gtggcaacgt cctcgctctg 2280
atcttcaacc aaggcatgat ctggatgggc tccttctttg ctcccagcct cccaggcatc 2340
aatatccttc gactccatac atccatgtac ttccagtgct gggccgttat gtgctgcaat 2400
gttcctgagg ccagggtctt caaagcttcc agatcaaata acttctacct gggcatgcta 2460
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ctggagcacg atttcccaag ctggatggcg aagatcttga gacagctttc aaaccctggg 2640
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attttatatg tttcttttgc c 3201

<210> 6
<211> 906
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
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1 5 10 15
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20 25 30
Arg Arg Ser Ser Ser Lys Arg Ala Leu Lys Ala Glu Gly Thr Pro Gly
35 40 45
Arg Arg Gly Ala Gln Arg Ser Gln Lys Glu Arg Ala Gly Gly Ser Pro
50 55 60
Ser Pro Gly Ser Pro Arg Arg Lys Gln Thr Gly Arg Arg Arg His Arg
65 70 75 80
Glu Glu Leu Gly Glu Gln Glu Arg Gly Glu Ala Glu Arg Thr Cys Glu
85 90 95
Gly Arg Arg Lys Arg Asp Glu Arg Ala Ser Phe Gln Glu Arg Thr Ala
100 105 110
Ala Pro Lys Arg Glu Lys Glu Ile Pro Arg Arg Glu Glu Lys Ser Lys
115 120 125
Arg Gln Lys Lys Pro Arg Ser Ser Ser Leu Ala Ser Ser Ala Ser Gly
130 135 140
Gly Glu Ser Leu Ser Glu Glu Glu Leu Ala Gln Ile Leu Glu Gln Val
145 150 155 160
Glu Glu Lys Lys Lys Leu Ile Ala Thr Met Arg Ser Lys Pro Trp Pro
165 170 175
Met Ala Lys Lys Leu Thr Glu Leu Arg Glu Ala Gln Glu Phe Val Glu
180 185 190
Lys Tyr Glu Gly Ala Leu Gly Lys Gly Lys Gly Lys Gln Leu Tyr Ala
195 200 205
Tyr Lys Met Leu Met Ala Lys Lys Trp Val Lys Phe Lys Arg Asp Phe
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Asp Asn Phe Lys Thr Gln Cys Ile Pro Trp Glu Met Lys Ile Lys Asp
225 230 235 240
Ile Glu Ser His Phe Gly Ser Ser Val Ala Ser Tyr Phe Ile Phe Leu
245 250 255
Arg Trp Met Tyr Gly Val Asn Leu Val Leu Phe Gly Leu Ile Phe Gly
260 265 270
Leu Val Ile Ile Pro Glu Val Leu Met Gly Met Pro Tyr Gly Ser Ile
275 280 285
Pro Arg Lys Thr Val Pro Arg Ala Glu Glu Glu Lys Ala Met Asp Phe
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Ser Val Leu Trp Asp Phe Glu Gly Tyr Ile Lys Tyr Ser Ala Leu Phe
305 310 315 320
Tyr Gly Tyr Tyr Asn Asn Gln Arg Thr Ile Gly Trp Leu Arg Tyr Arg
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Leu Pro Met Ala Tyr Phe Met Val Gly Val Ser Val Phe Gly Tyr Ser
340 345 350
Leu Ile Ile Val Ile Arg Ser Met Ala Ser Asn Thr Gln Gly Ser Thr
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Tyr Phe Val Val Lys Arg Ser Gln Gln Phe Ser Lys Met Gln Asn Val
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500 505 510
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515 520 525
His Leu Lys Leu Ala Asn Glu Glu Thr Ile Lys Asn Ile Thr His Trp
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Thr Leu Phe Asn Tyr Tyr Asn Ser Ser Gly Trp Asn Glu Ser Val Pro
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565 570 575
Thr Ala Val Gly Ile Glu Phe Met Arg Leu Thr Val Ser Asp Met Leu
580 585 590
Val Thr Tyr Ile Thr Ile Leu Leu Gly Asp Phe Leu Arg Ala Cys Phe
595 600 605
Val Arg Phe Met Asn Tyr Cys Trp Cys Trp Asp Leu Glu Ala Gly Phe
610 615 620
Pro Ser Tyr Ala Glu Phe Asp Ile Ser Gly Asn Val Leu Gly Leu Ile
625 630 635 640
Phe Asn Gln Gly Met Ile Trp Met Gly Ser Phe Tyr Ala Pro Gly Leu
645 650 655
Val Gly Ile Asn Val Leu Arg Leu Leu Thr Ser Met Tyr Phe Gln Cys
660 665 670
Trp Ala Val Met Ser Ser Asn Val Pro His Glu Arg Val Phe Lys Ala
675 680 685
Ser Arg Ser Asn Asn Phe Tyr Met Gly Leu Leu Leu Leu Val Leu Phe
690 695 700
Leu Ser Leu Leu Pro Val Ala Tyr Thr Ile Met Ser Leu Pro Pro Ser
705 710 715 720
Phe Asp Cys Gly Pro Phe Ser Gly Lys Asn Arg Met Tyr Asp Val Leu
725 730 735
Gln Glu Thr Ile Glu Asn Asp Phe Pro Thr Phe Leu Gly Lys Ile Phe
740 745 750
Ala Phe Leu Ala Asn Pro Gly Leu Ile Ile Pro Ala Ile Leu Leu Met
755 760 765
Phe Leu Ala Ile Tyr Tyr Leu Asn Ser Val Ser Lys Ser Leu Ser Arg
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Ala Asn Ala Gln Leu Arg Lys Lys Ile Gln Val Leu Arg Glu Val Glu
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Lys Ser His Lys Ser Val Lys Gly Lys Ala Thr Ala Arg Asp Ser Glu
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Asp Thr Pro Lys Ser Ser Ser Lys Asn Ala Thr Gln Leu Gln Leu Thr
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Lys Glu Glu Thr Thr Pro Pro Ser Ala Ser Gln Ser Gln Ala Met Asp
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Ser Gly Lys Ser Ala Gln Arg Pro Pro His
900 905

<210> 7
<211> 3169
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 7
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atcccagagg tactgatggg catgccctat gggagtattc ccagaaagac agtgcctcgg 900
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gctgataaca aatatgcatc catcaccacc agcttcaagg aatcaatagt ggatgaacaa 1260
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gagacaataa agaacatcac tcactggact ctgtttaact attacaactc ttctggttgg 1680
aacgagagtg tcccccgacc acccctgcac cctgcagatg tgccccgggg ttcttgctgg 1740
gagacagctg tgggcattga attcatgagg ctgacggtgt ctgacatgct ggtaacgtac 1800
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gaggacacac ctaaaagcag ctccaaaaat gccacccagc tccaactcac caaggaagag 2520
accactcctc cctctgccag ccaaagccag gccatggaca agaaggcgca gggccctggg 2580
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<211> 552
<212> PRT
<213> Homo sapiens
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Ile Glu Asn Asp Ala Glu Lys Asp Tyr Leu Tyr Asp Val Leu Arg Met
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Tyr His Gln Thr Met Asp Val Ala Val Leu Val Gly Asp Leu Lys Leu
35 40 45
Val Ile Asn Glu Pro Ser Arg Leu Pro Leu Phe Asp Ala Ile Arg Pro
50 55 60
Leu Ile Pro Leu Lys His Gln Val Glu Tyr Asp Gln Leu Thr Pro Arg
65 70 75 80
Arg Ser Arg Lys Leu Lys Glu Val Arg Leu Asp Arg Leu His Pro Glu
85 90 95
Gly Leu Gly Leu Ser Val Arg Gly Gly Leu Glu Phe Gly Cys Gly Leu
100 105 110
Phe Ile Ser His Leu Ile Lys Gly Gly Gln Ala Asp Ser Val Gly Leu
115 120 125
Gln Val Gly Asp Glu Ile Val Arg Ile Asn Gly Tyr Ser Ile Ser Ser
130 135 140
Cys Thr His Glu Glu Val Ile Asn Leu Ile Arg Thr Lys Lys Thr Val
145 150 155 160
Ser Ile Lys Val Arg His Ile Gly Leu Ile Pro Val Lys Ser Ser Pro
165 170 175
Asp Glu Pro Leu Thr Trp Gln Tyr Val Asp Gln Phe Val Ser Glu Ser
180 185 190
Gly Gly Val Arg Gly Ser Leu Gly Ser Pro Gly Asn Arg Glu Asn Lys
195 200 205
Glu Lys Lys Val Phe Ile Ser Leu Val Gly Ser Arg Gly Leu Gly Cys
210 215 220
Ser Ile Ser Ser Gly Pro Ile Gln Lys Pro Gly Ile Phe Ile Ser His
225 230 235 240
Val Lys Pro Gly Ser Leu Ser Ala Glu Val Gly Leu Glu Ile Gly Asp
245 250 255
Gln Ile Val Glu Val Asn Gly Val Asp Phe Ser Asn Leu Asp His Lys
260 265 270
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Ala Glu Ala Arg Gln Arg Glu Leu Gln Arg Gln Glu Leu Leu Met Gln
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545 550

<210> 9
<211> 2237
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 9
agctccgagg gcggctggcc cggtcgcggt cgcggctctt tccagctcct ggcagccggg 60
cacccgaagg aacgggtcgt gcaacgacgc agctggacct ggcccagcca tggaccgaaa 120
agtggcccga gaattccggc ataaggtgga ttttctgatt gaaaatgatg cagagaagga 180
ctatctctat gatgtgctgc gaatgtacca ccagaccatg gacgtggccg tgctcgtggg 240
agacctgaag ctggtcatca atgaacccag ccgtctgcct ctgtttgatg ccattcggcc 300
gctgatccca ctgaagcacc aggtggaata tgatcagctg accccccggc gctccaggaa 360
gctgaaggag gtgcgtctgg accgtctgca ccccgaaggc ctcggcctga gtgtgcgtgg 420
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ggcagaggcg cggcagcgtg agctgcagcg gcaggagctt ctcatgcaga agcggctggc 1080
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aatcaacggc aagattgtga cagactacac cctggctgag gctgaggctg ccctgcagaa 1680
ggcctggaat cagggcgggg actggatcga ccttgtggtt gccgtctgcc ccccaaagga 1740
gtatgacgat gagctgacct tcttctgaag tccaaaaggg gaaaccaaat tcaccgttag 1800
gaaacagtga gctccggccc cacctcgtga acacaaagcc tcggatcagc cttgagagag 1860
gccacactac acacaccaga tggcatcctt gggacctgaa tctatcaccc aggaatctca 1920
aactcccttt ggccctgaac cagggccaga taaggaacag ctcgggccac tcttctgaag 1980
gccaacgtgg aggaaaggga gcagccagcc atttgggaga agatctcaag gatccagact 2040
ctcattcctt tcctctggcc cagtgaattt ggtctctccc agctctgggg gactccttcc 2100
ttgaacccta ataagacccc actggagtct ctctctctcc atccctctcc tctgccctct 2160
gctctaattg ctgccaggat tgtcactcca aaccttactc tgagctcatt aataaaatag 2220
atttattttc cagctta 2237

<210> 10
<211> 2385
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 10
agctccgagg gcggctggcc cggtcgcggt cgcggctctt tccagctcct ggcagccggg 60
cacccgaagg aacgggtcgt gcaacgacgc agctggacct ggcccagcca tggaccgaaa 120
agtggcccga gaattccggc ataaggtgga ttttctgatt gaaaatgatg cagagaagga 180
ctatctctat gatgtgctgc gaatgtacca ccagaccatg gacgtggccg tgctcgtggg 240
agacctgaag ctggtcatca atgaacccag ccgtctgcct ctgtttgatg ccattcggcc 300
gctgatccca ctgaagcacc aggtggaata tgatcagctg accccccggc gctccaggaa 360
gctgaaggag gtgcgtctgg accgtctgca ccccgaaggc ctcggcctga gtgtgcgtgg 420
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ctgtacccat gaggaggtca tcaacctcat tcgaaccaag aaaactgtgt ccatcaaagt 600
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ccaaacctta ctctgagctc attaataaaa tagatttatt ttcca 2385

<210> 11
<211> 899
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Met Asp Arg Lys Val Ala Arg Glu Phe Arg His Lys Val Asp Phe Leu
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Ile Glu Asn Asp Ala Glu Lys Asp Tyr Leu Tyr Asp Val Leu Arg Met
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Tyr His Gln Thr Met Asp Val Ala Val Leu Val Gly Asp Leu Lys Leu
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Val Ile Asn Glu Pro Ser Arg Leu Pro Leu Phe Asp Ala Ile Arg Pro
50 55 60
Leu Ile Pro Leu Lys His Gln Val Glu Tyr Asp Gln Leu Thr Pro Arg
65 70 75 80
Arg Ser Arg Lys Leu Lys Glu Val Arg Leu Asp Arg Leu His Pro Glu
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Gly Leu Gly Leu Ser Val Arg Gly Gly Leu Glu Phe Gly Cys Gly Leu
100 105 110
Phe Ile Ser His Leu Ile Lys Gly Gly Gln Ala Asp Ser Val Gly Leu
115 120 125
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130 135 140
Cys Thr His Glu Glu Val Ile Asn Leu Ile Arg Thr Lys Lys Thr Val
145 150 155 160
Ser Ile Lys Val Arg His Ile Gly Leu Ile Pro Val Lys Ser Ser Pro
165 170 175
Asp Glu Pro Leu Thr Trp Gln Tyr Val Asp Gln Phe Val Ser Glu Ser
180 185 190
Gly Gly Val Arg Gly Ser Leu Gly Ser Pro Gly Asn Arg Glu Asn Lys
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210 215 220
Ser Ile Ser Ser Gly Pro Ile Gln Lys Pro Gly Ile Phe Ile Ser His
225 230 235 240
Val Lys Pro Gly Ser Leu Ser Ala Glu Val Gly Leu Glu Ile Gly Asp
245 250 255
Gln Ile Val Glu Val Asn Gly Val Asp Phe Ser Asn Leu Asp His Lys
260 265 270
Glu Ala Val Asn Val Leu Lys Ser Ser Arg Ser Leu Thr Ile Ser Ile
275 280 285
Val Ala Ala Ala Gly Arg Glu Leu Phe Met Thr Asp Arg Glu Arg Leu
290 295 300
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305 310 315 320
Lys Arg Leu Ala Met Glu Ser Asn Lys Ile Leu Gln Glu Gln Gln Glu
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Met Glu Arg Gln Arg Arg Lys Glu Ile Ala Gln Lys Ala Ala Glu Glu
340 345 350
Asn Glu Arg Tyr Arg Lys Glu Met Glu Gln Ile Val Glu Glu Glu Glu
355 360 365
Lys Phe Lys Lys Gln Trp Glu Glu Asp Trp Gly Ser Lys Glu Gln Leu
370 375 380
Leu Leu Pro Lys Thr Ile Thr Ala Glu Val His Pro Val Pro Leu Arg
385 390 395 400
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Leu Tyr Lys Glu Lys Glu Glu Met Leu Glu Lys Glu Lys Gln Leu Lys
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Leu Pro Val Met Pro His Pro Pro Pro Ser Asn Pro Pro His Lys Val
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Val Arg Leu Leu Arg Ile Lys Lys Glu Gly Ser Leu Asp Leu Ala Leu
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Ile Asp Leu Val Val Ala Val Cys Pro Pro Lys Glu Tyr Asp Asp Glu
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Leu Ala Ser Leu Pro Ser Ser Val Ala Glu Ser Pro Gln Pro Val Arg
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Ile His Arg

<210> 12
<211> 2180
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
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tagatttatt ttccagctta 2180

<210> 13
<211> 533
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 13
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Ile Glu Asn Asp Ala Glu Lys Asp Tyr Leu Tyr Asp Val Leu Arg Met
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Tyr His Gln Thr Met Asp Val Ala Val Leu Val Gly Asp Leu Lys Leu
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Val Ile Asn Glu Pro Ser Arg Leu Pro Leu Phe Asp Ala Ile Arg Pro
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Arg Ser Arg Lys Leu Lys Glu Val Arg Leu Asp Arg Leu His Pro Glu
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Phe Ile Ser His Leu Ile Lys Gly Gly Gln Ala Asp Ser Val Gly Leu
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Cys Thr His Glu Glu Val Ile Asn Leu Ile Arg Thr Lys Lys Thr Val
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Ser Ile Lys Val Arg His Ile Gly Leu Ile Pro Val Lys Ser Ser Pro
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Val Lys Pro Gly Ser Leu Ser Ala Glu Val Gly Leu Glu Ile Gly Asp
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Leu Val Leu Ser Val Leu Ser Thr Ile Gln Glu His Gln Glu Leu Ala
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130 135 140
Leu Glu Tyr Ile Val Arg Val Trp Ser Ala Gly Cys Cys Cys Arg Tyr
145 150 155 160
Arg Gly Trp Gln Gly Arg Phe Arg Phe Ala Arg Lys Pro Phe Cys Val
165 170 175
Ile Asp Phe Ile Val Phe Val Ala Ser Val Ala Val Ile Ala Ala Gly
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275 280 285
Lys Thr Pro His Thr Trp Leu Gly Arg Val Leu Ala Ala Gly Phe Ala
290 295 300
Leu Leu Gly Ile Ser Phe Phe Ala Leu Pro Ala Gly Ile Leu Gly Ser
305 310 315 320
Gly Phe Ala Leu Lys Val Gln Glu Gln His Arg Gln Lys His Phe Glu
325 330 335
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340 345 350
Tyr Ser Thr Asp Met Ser Arg Ala Tyr Leu Thr Ala Thr Trp Tyr Tyr
355 360 365
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370 375 380
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385 390 395 400
Arg Ala Pro Val Pro Asp Gly Ala Pro Ser Arg Tyr Pro Pro Val Ala
405 410 415
Thr Cys His Arg Pro Gly Ser Thr Ser Phe Cys Pro Gly Glu Ser Ser
420 425 430
Arg Met Gly Ile Lys Asp Arg Ile Arg Met Gly Ser Ser Gln Arg Arg
435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
Lys Ser Trp Ser Phe Asn Asp Arg Thr Arg Phe Arg Ala Ser Leu Arg
485 490 495
Leu Lys Pro Arg Thr Ser Ala Glu Asp Ala Pro Ser Glu Glu Val Ala
500 505 510
Glu Glu Lys Ser Tyr Gln Cys Glu Leu Thr Val Asp Asp Ile Met Pro
515 520 525
Ala Val Lys Thr Val Ile Arg Ser Ile Arg Ile Leu Lys Phe Leu Val
530 535 540
Ala Lys Arg Lys Phe Lys Glu Thr Leu Arg Pro Tyr Asp Val Lys Asp
545 550 555 560
Val Ile Glu Gln Tyr Ser Ala Gly His Leu Asp Met Leu Gly Arg Ile
565 570 575
Lys Ser Leu Gln Thr Arg Val Asp Gln Ile Val Gly Arg Gly Pro Gly
580 585 590
Asp Arg Lys Ala Arg Glu Lys Gly Asp Lys Gly Pro Ser Asp Ala Glu
595 600 605
Val Val Asp Glu Ile Ser Met Met Gly Arg Val Val Lys Val Glu Lys
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<210> 15
<211> 4116
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 15
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gctctggtgg gggacgatta cattgacaac catcggctat ggtgacaaga caccgcacac 960
atggctgggc agggtcctgg ctgctggctt cgccttactg ggcatctctt tctttgccct 1020
gcctgccggc atcctaggct ccggctttgc cctgaaggtc caggagcagc accggcagaa 1080
gcacttcgag aagcggagga tgccggcagc caacctcatc caggctgcct ggcgcctgta 1140
ctccaccgat atgagccggg cctacctgac agccacctgg tactactatg acagtatcct 1200
cccatccttc agagagctgg ccctcttgtt tgagcacgtg caacgggccc gcaatggggg 1260
cctacggccc ctggaggtgc ggcgggcgcc ggtacccgac ggagcaccct cccgttaccc 1320
gcccgttgcc acctgccacc ggccgggcag cacctccttc tgccctgggg aaagcagccg 1380
gatgggcatc aaagaccgca tccgcatggg cagctcccag cggcggacgg gtccttccaa 1440
gcagcatctg gcacctccaa caatgcccac ctccccaagc agcgagcagg tgggtgaggc 1500
caccagcccc accaaggtgc aaaagagctg gagcttcaat gaccgcaccc gcttccgggc 1560
atctctgaga ctcaaacccc gcacctctgc tgaggatgcc ccctcagagg aagtagcaga 1620
ggagaagagc taccagtgtg agctcacggt ggacgacatc atgcctgctg tgaagacagt 1680
catccgctcc atcaggattc tcaagttcct ggtggccaaa aggaaattca aggagacact 1740
gcgaccgtac gacgtgaagg acgtcattga gcagtactca gcaggccacc tggacatgct 1800
gggccggatc aagagcctgc aaactcgggt ggaccaaatt gtgggtcggg ggcccgggga 1860
caggaaggcc cgggagaagg gcgacaaggg gccctccgac gcggaggtgg tggatgaaat 1920
cagcatgatg ggacgcgtgg tcaaggtgga gaagcaggtg cagtccatcg agcacaagct 1980
ggacctgctg ttgggcttct attcgcgctg cctgcgctct ggcacctcgg ccagcctggg 2040
cgccgtgcaa gtgccgctgt tcgaccccga catcacctcc gactaccaca gccctgtgga 2100
ccacgaggac atctccgtct ccgcacagac gctcagcatc tcccgctcgg tcagcaccaa 2160
catggactga gggacttctc agaggcaggg cagcacacgg ccagccccgc ggcctggcgc 2220
tccgactgcc ctctgaggcc tccggactcc tctcgtactt gaactcactc cctcacgggg 2280
agagagacca cacgcagtat tgagctgcct gagtgggcgt ggtacctgct gtgggtgcca 2340
gcgccccttc cccacctcag gagcgtgaga tgccaggtcg cacagagggc agcagcagcg 2400
gccgtcccgc ggcctctggg ccccccagtg ccctgcccac tccatcaagg ccctatgtgg 2460
cccacctggc aggggcacag ccccgggagt gggagcgggc gctggggccc tgggccctga 2520
cccagcttcc agctatgcaa ggtgaggtct ctggcccacc cttcggacac agcagggaag 2580
ccctcccgcc aagtccccgc cccacttggg ggtgggccaa ggtgccccca caggtaccca 2640
caaagcacag gaccctgcca caaggcaggt ggacaccata tatgcaaacc atgttaaata 2700
tgcaactttg gggaccccca tggggtctct ctgtccctcc cccattggga gctgggcccc 2760
cagcagtagc tggtctcagg ctgcttggcc accaccctgt ccctattctt tggcttatca 2820
ctccttcccc tcccagcatg gggcctgttt ctcccctgcc ctctcctaag ggcaatgcct 2880
gggcctttct tcccatttgc aagtgtcagc tcccaggggc tccctcctcc tgctgggtgg 2940
ccactcccct ccttggccct ccagacacca ctcatagtca gcacaggttt ctgtatcctc 3000
cccaaaactc ccagacagtg cttcgtggac gatcgcacaa acatagcctt ttagtttctc 3060
cagacaggaa gaaagcctct cacacttaaa catgcaatga cgtgacacac ttggagacat 3120
gagtgcagag ccactcagcc gctcctgggc ctctgcagca gatgccagtg gactggcctt 3180
gcagggtgac gaccactaag aggaagaccc ccaactccat ctgagcagga gaaggagctt 3240
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gaagatctcc tcctctctgg tccaggagcc ctaacccact gcctctgcct gtccccaagg 3360
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ccaggcccac ttctagccag gcctgtgcct tcctagtcac tctaactccc agagagaata 3480
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ccctccacac cccacttctt cacttcaatt ggcagcgcca catccaggcg tcagccccca 3600
ttcactccag gaacactttc ttatccccac ccctttgctc ctcttctgca aagccaatgc 3660
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ctggatctta ctcagtccat ggtgcccagc ctctgcccca acatgccctc tgcatgtgac 3840
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ctatgaccaa ggagacatgg gaagaagccc tccttccttc cacgatcgag gttccgccat 4020
caactcggtt ctcggatatg caagtacctc actttgttaa cttattaact tattggtttc 4080
attaaagttt tcaagaggaa aaaaaaaaaa aaaaaa 4116

<210> 16
<211> 508
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 16
acgcgtccgg cttcccggcc ccgcgcgctg cccccgccac gcggttcggc ccaggcacca 60
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<210> 17
<211> 453
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 17
Met Gly Glu Asn Asp Pro Pro Ala Val Glu Ala Pro Phe Ser Phe Arg
1 5 10 15
Ser Leu Phe Gly Leu Asp Asp Leu Lys Ile Ser Pro Val Ala Pro Asp
20 25 30
Ala Asp Ala Val Ala Ala Gln Ile Leu Ser Leu Leu Pro Leu Lys Phe
35 40 45
Phe Pro Ile Ile Val Ile Gly Ile Ile Ala Leu Ile Leu Ala Leu Ala
50 55 60
Ile Gly Leu Gly Ile His Phe Asp Cys Ser Gly Lys Tyr Arg Cys Arg
65 70 75 80
Ser Ser Phe Lys Cys Ile Glu Leu Ile Ala Arg Cys Asp Gly Val Ser
85 90 95
Asp Cys Lys Asp Gly Glu Asp Glu Tyr Arg Cys Val Arg Val Gly Gly
100 105 110
Gln Asn Ala Val Leu Gln Val Phe Thr Ala Ala Ser Trp Lys Thr Met
115 120 125
Cys Ser Asp Asp Trp Lys Gly His Tyr Ala Asn Val Ala Cys Ala Gln
130 135 140
Leu Gly Phe Pro Ser Tyr Val Ser Ser Asp Asn Leu Arg Val Ser Ser
145 150 155 160
Leu Glu Gly Gln Phe Arg Glu Glu Phe Val Ser Ile Asp His Leu Leu
165 170 175
Pro Asp Asp Lys Val Thr Ala Leu His His Ser Val Tyr Val Arg Glu
180 185 190
Gly Cys Ala Ser Gly His Val Val Thr Leu Gln Cys Thr Ala Cys Gly
195 200 205
His Arg Arg Gly Tyr Ser Ser Arg Ile Val Gly Gly Asn Met Ser Leu
210 215 220
Leu Ser Gln Trp Pro Trp Gln Ala Ser Leu Gln Phe Gln Gly Tyr His
225 230 235 240
Leu Cys Gly Gly Ser Val Ile Thr Pro Leu Trp Ile Ile Thr Ala Ala
245 250 255
His Cys Val Tyr Asp Leu Tyr Leu Pro Lys Ser Trp Thr Ile Gln Val
260 265 270
Gly Leu Val Ser Leu Leu Asp Asn Pro Ala Pro Ser His Leu Val Glu
275 280 285
Lys Ile Val Tyr His Ser Lys Tyr Lys Pro Lys Arg Leu Gly Asn Asp
290 295 300
Ile Ala Leu Met Lys Leu Ala Gly Pro Leu Thr Phe Asn Glu Met Ile
305 310 315 320
Gln Pro Val Cys Leu Pro Asn Ser Glu Glu Asn Phe Pro Asp Gly Lys
325 330 335
Val Cys Trp Thr Ser Gly Trp Gly Ala Thr Glu Asp Gly Gly Asp Ala
340 345 350
Ser Pro Val Leu Asn His Ala Ala Val Pro Leu Ile Ser Asn Lys Ile
355 360 365
Cys Asn His Arg Asp Val Tyr Gly Gly Ile Ile Ser Pro Ser Met Leu
370 375 380
Cys Ala Gly Tyr Leu Thr Gly Gly Val Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser
385 390 395 400
Gly Gly Pro Leu Val Cys Gln Glu Arg Arg Leu Trp Lys Leu Val Gly
405 410 415
Ala Thr Ser Phe Gly Ile Gly Cys Ala Glu Val Asn Lys Pro Gly Val
420 425 430
Tyr Thr Arg Val Thr Ser Phe Leu Asp Trp Ile His Glu Gln Met Glu
435 440 445
Arg Asp Leu Lys Thr
450

<210> 18
<211> 2460
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 18
accgggcacc ggacggctcg ggtactttcg ttcttaatta ggtcatgccc gtgtgagcca 60
ggaaagggct gtgtttatgg gaagccagta acactgtggc ctactatctc ttccgtggtg 120
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gtgtacggtg gcatcatctc cccctccatg ctctgcgcgg gctacctgac gggtggcgtg 1380
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cggcaccagt agcaggcccg aaagaggcac ccttccatct gattccagca caaccttcaa 1740
gctgcttttt gttttttgtt tttttgagat ggagtctcgc tctgttgccc aggctggagt 1800
gcagtggcga aatccctgct cactgcagcc tccgcttccc tggttcaagc gattctcttg 1860
cctcagcttc cccagtagct gggaccacag gtgcccgcca ccacacccaa ctaatttttg 1920
tatttttagt agagacaggg tttcaccatg ttggccaggc tgctctcaaa cccctgacct 1980
caaatgatgt gcctgcttca gcctcccaca gtgctgggat tacaggcatg ggccaccacg 2040
cctagcctca cgctcctttc tgatcttcac taagaacaaa agaagcagca acttgcaagg 2100
gcggcctttc ccactggtcc atctggtttt ctctccaggg gtcttgcaaa attcctgacg 2160
agataagcag ttatgtgacc tcacgtgcaa agccaccaac agccactcag aaaagacgca 2220
ccagcccaga agtgcagaac tgcagtcact gcacgttttc atctctaggg accagaacca 2280
aacccaccct ttctacttcc aagacttatt ttcacatgtg gggaggttaa tctaggaatg 2340
actcgtttaa ggcctatttt catgatttct ttgtagcatt tggtgcttga cgtattattg 2400
tcctttgatt ccaaataata tgtttccttc cctcattgaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2460

<210> 19
<211> 1775
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 19
Met Ala Leu Ser Leu Trp Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Ser Phe Ala Val Thr Leu Ala Pro Thr Gly Pro His Ser Leu
20 25 30
Asp Pro Gly Leu Ser Phe Leu Lys Ser Leu Leu Ser Thr Leu Asp Gln
35 40 45
Ala Pro Gln Gly Ser Leu Ser Arg Ser Arg Phe Phe Thr Phe Leu Ala
50 55 60
Asn Ile Ser Ser Ser Phe Glu Pro Gly Arg Met Gly Glu Gly Pro Val
65 70 75 80
Gly Glu Pro Pro Pro Leu Gln Pro Pro Ala Leu Arg Leu His Asp Phe
85 90 95
Leu Val Thr Leu Arg Gly Ser Pro Asp Trp Glu Pro Met Leu Gly Leu
100 105 110
Leu Gly Asp Met Leu Ala Leu Leu Gly Gln Glu Gln Thr Pro Arg Asp
115 120 125
Phe Leu Val His Gln Ala Gly Val Leu Gly Gly Leu Val Glu Val Leu
130 135 140
Leu Gly Ala Leu Val Pro Gly Gly Pro Pro Thr Pro Thr Arg Pro Pro
145 150 155 160
Cys Thr Arg Asp Gly Pro Ser Asp Cys Val Leu Ala Ala Asp Trp Leu
165 170 175
Pro Ser Leu Leu Leu Leu Leu Glu Gly Thr Arg Trp Gln Ala Leu Val
180 185 190
Gln Val Gln Pro Ser Val Asp Pro Thr Asn Ala Thr Gly Leu Asp Gly
195 200 205
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210 215 220
Pro Thr Gly Glu Leu Gly Ser Lys Glu Ala Leu Trp Gly Gly Leu Leu
225 230 235 240
Arg Thr Val Gly Ala Pro Leu Tyr Ala Ala Phe Gln Glu Gly Leu Leu
245 250 255
Arg Val Thr His Ser Leu Gln Asp Glu Val Phe Ser Ile Leu Gly Gln
260 265 270
Pro Glu Pro Asp Thr Asn Gly Gln Cys Gln Gly Gly Asn Leu Gln Gln
275 280 285
Leu Leu Leu Trp Gly Val Arg His Asn Leu Ser Trp Asp Val Gln Ala
290 295 300
Leu Gly Phe Leu Ser Gly Ser Pro Pro Pro Pro Pro Ala Leu Leu His
305 310 315 320
Cys Leu Ser Thr Gly Val Pro Leu Pro Arg Ala Ser Gln Pro Ser Ala
325 330 335
His Ile Ser Pro Arg Gln Arg Arg Ala Ile Thr Val Glu Ala Leu Cys
340 345 350
Glu Asn His Leu Gly Pro Ala Pro Pro Tyr Ser Ile Ser Asn Phe Ser
355 360 365
Ile His Leu Leu Cys Gln His Thr Lys Pro Ala Thr Pro Gln Pro His
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Pro Ser Thr Thr Ala Ile Cys Gln Thr Ala Val Trp Tyr Ala Val Ser
385 390 395 400
Trp Ala Pro Gly Ala Gln Gly Trp Leu Gln Ala Cys His Asp Gln Phe
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Leu Ser Gly Ser Asn Arg Arg Leu Val Lys Arg Leu Cys Ala Gly Leu
435 440 445
Leu Pro Pro Pro Thr Ser Cys Pro Glu Gly Leu Pro Pro Val Pro Leu
450 455 460
Thr Pro Asp Ile Phe Trp Gly Cys Phe Leu Glu Asn Glu Thr Leu Trp
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Ala Glu Arg Leu Cys Gly Glu Ala Ser Leu Gln Ala Val Pro Pro Ser
485 490 495
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Thr Ala Ser Pro Pro Cys His Ile Gly Pro Cys Gly Glu Arg Cys Pro
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530 535 540
Glu Val Leu Val Pro Phe Trp Pro Trp Leu Ala Gly Gln Cys Arg Ile
545 550 555 560
Ser Arg Gly Gly Asn Asp Thr Cys Phe Leu Glu Gly Leu Leu Gly Pro
565 570 575
Leu Leu Pro Ser Leu Pro Pro Leu Gly Pro Ser Pro Leu Cys Leu Thr
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Pro Gly Pro Phe Leu Leu Gly Met Leu Ser Gln Leu Pro Arg Cys Gln
595 600 605
Ser Ser Val Pro Ala Leu Ala His Pro Thr Arg Leu His Tyr Leu Leu
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Gln Gly Met Leu Gly Arg Ala Leu Leu Leu Ser Ser Leu Pro Asp Asn
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Cys Ser Phe Trp Asp Ala Phe Arg Pro Glu Gly Arg Arg Ser Val Leu
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Arg Thr Ile Gly Glu Tyr Leu Glu Gln Asp Glu Glu Gln Pro Thr Pro
675 680 685
Ser Gly Phe Glu Pro Thr Val Asn Pro Ser Ser Gly Ile Ser Lys Met
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Glu Leu Leu Ala Cys Phe Ser Pro Val Leu Trp Asp Leu Leu Gln Arg
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Met Pro Pro Glu Asn Leu Gln Gln Leu Val Leu Ser Ala Glu Arg Glu
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Asp Tyr Ser Pro Gly Met Arg Pro Glu Gln Lys Glu Ala Leu Ala Lys
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850 855 860
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Asn Phe Leu Gln Leu Ser Pro His Gln Ile Gln Ala Leu Glu Asp Ser
885 890 895
Trp Pro Ala Ala Gly Leu Gly Pro Gly His Ala Arg His Val Leu Arg
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Ser Leu Val Asn Gln Ser Val Gln Asp Gly Glu Glu Gln Val Arg Arg
915 920 925
Leu Gly Pro Leu Ala Cys Phe Leu Ser Pro Glu Glu Leu Gln Ser Leu
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Val Pro Leu Ser Asp Pro Thr Gly Pro Val Glu Arg Gly Leu Leu Glu
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Cys Ala Ala Asn Gly Thr Leu Ser Pro Glu Gly Arg Val Ala Tyr Glu
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Leu Leu Gly Val Leu Arg Ser Ser Gly Gly Ala Val Leu Ser Pro Arg
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Leu Gln Gly Thr Ser Val Thr Pro Ala Gln Ala Val Leu Leu Leu
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Thr Trp Pro Asp Cys Leu Leu Pro Leu Leu Pro Leu Lys Leu Leu
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Gln Leu Asp Ser Leu Ala Leu Leu Ala Asn Arg Arg Arg Tyr Trp
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Glu Leu Pro Trp Ser Glu Gln Gln Ala Gln Phe Leu Trp Lys Lys
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Met Gln Val Pro Thr Asn Leu Thr Leu Arg Asn Leu Gln Ala Leu
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Gly Thr Leu Ala Gly Gly Met Ser Cys Glu Phe Leu Gln Gln Ile
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Val Gly Pro Glu Leu Asn Gly Leu Asp Ser Lys Leu Leu Leu Asp
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Leu Thr Pro Leu His Gln Ala Ala Leu Ala Glu Arg Ala Leu Gln
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Asn Leu Ala Pro Lys Glu Thr Pro Val Ser Gly Glu Val Leu Glu
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Thr Leu Gly Pro Leu Val Gly Phe Leu Gly Thr Glu Ser Thr Arg
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Gln Ile Pro Leu Gln Ile Leu Leu Ser His Leu Ser Gln Leu Gln
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Gly Phe Cys Leu Gly Glu Thr Phe Ala Thr Glu Leu Gly Trp Leu
1355 1360 1365
Leu Leu Gln Glu Ser Val Leu Gly Lys Pro Glu Leu Trp Ser Gln
1370 1375 1380
Asp Glu Val Glu Gln Ala Gly Arg Leu Val Phe Thr Leu Ser Thr
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Glu Ala Ile Ser Leu Ile Pro Arg Glu Ala Leu Gly Pro Glu Thr
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Leu Glu Arg Leu Leu Glu Lys Gln Gln Ser Trp Glu Gln Ser Arg
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Val Gly Gln Leu Cys Arg Glu Pro Gln Leu Ala Ala Lys Lys Ala
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Ala Leu Val Ala Gly Val Val Arg Pro Ala Ala Glu Asp Leu Pro
1445 1450 1455
Glu Pro Val Pro Asn Cys Ala Asp Val Arg Gly Thr Phe Pro Ala
1460 1465 1470
Ala Trp Ser Ala Thr Gln Ile Ala Glu Met Glu Leu Ser Asp Phe
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Glu Asp Cys Leu Thr Leu Phe Ala Gly Asp Pro Gly Leu Gly Pro
1490 1495 1500
Glu Glu Leu Arg Ala Ala Met Gly Lys Ala Lys Gln Leu Trp Gly
1505 1510 1515
Pro Pro Arg Gly Phe Arg Pro Glu Gln Ile Leu Gln Leu Gly Arg
1520 1525 1530
Leu Leu Ile Gly Leu Gly Asp Arg Glu Leu Gln Glu Leu Ile Leu
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Val Asp Trp Gly Val Leu Ser Thr Leu Gly Gln Ile Asp Gly Trp
1550 1555 1560
Ser Thr Thr Gln Leu Arg Ile Val Val Ser Ser Phe Leu Arg Gln
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Ser Gly Arg His Val Ser His Leu Asp Phe Val His Leu Thr Ala
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Leu Gly Tyr Thr Leu Cys Gly Leu Arg Pro Glu Glu Leu Gln His
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Ile Ser Ser Trp Glu Phe Ser Gln Ala Ala Leu Phe Leu Gly Thr
1610 1615 1620
Leu His Leu Gln Cys Ser Glu Glu Gln Leu Glu Val Leu Ala His
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Leu Leu Val Leu Pro Gly Gly Phe Gly Pro Ile Ser Asn Trp Gly
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Pro Glu Ile Phe Thr Glu Ile Gly Thr Ile Ala Ala Gly Ile Pro
1655 1660 1665
Asp Leu Ala Leu Ser Ala Leu Leu Arg Gly Gln Ile Gln Gly Val
1670 1675 1680
Thr Pro Leu Ala Ile Ser Val Ile Pro Pro Pro Lys Phe Ala Val
1685 1690 1695
Val Phe Ser Pro Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Ala Gln Ala
1700 1705 1710
Val Ala Val Thr Pro Glu Gln Met Ala Phe Leu Ser Pro Glu Gln
1715 1720 1725
Arg Arg Ala Val Ala Trp Ala Gln His Glu Gly Lys Glu Ser Pro
1730 1735 1740
Glu Gln Gln Gly Arg Ser Thr Ala Trp Gly Leu Gln Asp Trp Ser
1745 1750 1755
Arg Pro Ser Trp Ser Leu Val Leu Thr Ile Ser Phe Leu Gly His
1760 1765 1770
Leu Leu
1775

<210> 20
<211> 5515
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 20
gccctgccct cacctggcta tcccacacag gtgagaataa ccagaactca cctccggtac 60
cagtgttcac ttggaaacat ggctctcagc ctctggcccc tgctgctgct gctgctgctg 120
ctgctgctgc tgtcctttgc agtgactctg gcccctactg ggcctcattc cctggaccct 180
ggtctctcct tcctgaagtc attgctctcc actctggacc aggctcccca gggctccctg 240
agccgctcac ggttctttac attcctggcc aacatttctt cttcctttga gcctgggaga 300
atgggggaag gaccagtagg agagccccca cctctccagc cgcctgctct gcggctccat 360
gattttctag tgacactgag aggtagcccc gactgggagc caatgctagg gctgctaggg 420
gatatgctgg cactgctggg acaggagcag actccccgag atttcctggt gcaccaggca 480
ggggtgctgg gtggacttgt ggaggtgctg ctgggagcct tagttcctgg gggcccccct 540
accccaactc ggcccccatg cacccgtgat gggccgtctg actgtgtcct ggctgctgac 600
tggttgcctt ctctgctgct gttgttagag ggcacacgct ggcaagctct ggtgcaggtg 660
cagcccagtg tggaccccac caatgccaca ggcctcgatg ggagggaggc agctcctcac 720
tttttgcagg gtctgttggg tttgcttacc ccaacagggg agctaggctc caaggaggct 780
ctttggggcg gtctgctacg cacagtgggg gcccccctct atgctgcctt tcaggagggg 840
ctgctccgtg tcactcactc cctgcaggat gaggtcttct ccattttggg gcagccagag 900
cctgatacca atgggcagtg ccagggaggt aaccttcaac agctgctctt atggggcgtc 960
cggcacaacc tttcctggga tgtccaggcg ctgggctttc tgtctggatc accaccccca 1020
ccccctgccc tccttcactg cctgagcacg ggcgtgcctc tgcccagagc ttctcagccg 1080
tcagcccaca tcagcccacg ccaacggcga gccatcactg tggaggccct ctgtgagaac 1140
cacttaggcc cagcaccacc ctacagcatt tccaacttct ccatccactt gctctgccag 1200
cacaccaagc ctgccactcc acagccccat cccagcacca ctgccatctg ccagacagct 1260
gtgtggtatg cagtgtcctg ggcaccaggt gcccaaggct ggctacaggc ctgccacgac 1320
cagtttcctg atgagttttt ggatgcgatc tgcagtaacc tctccttttc agccctgtct 1380
ggctccaacc gccgcctggt gaagcggctc tgtgctggcc tgctcccacc ccctaccagc 1440
tgccctgaag gcctgccccc tgttcccctc accccagaca tcttttgggg ctgcttcttg 1500
gagaatgaga ctctgtgggc tgagcgactg tgtggggagg caagtctaca ggctgtgccc 1560
cccagcaacc aggcttgggt ccagcatgtg tgccagggcc ccaccccaga tgtcactgcc 1620
tccccaccat gccacattgg accctgtggg gaacgctgcc cggatggggg cagcttcctg 1680
gtgatggtct gtgccaatga caccatgtat gaggtcctgg tgcccttctg gccttggcta 1740
gcaggccaat gcaggataag tcgtgggggc aatgacactt gcttcctaga agggctgctg 1800
ggcccccttc tgccctctct gccaccactg ggaccatccc cactctgtct gacccctggc 1860
cccttcctcc ttggcatgct atcccagttg ccacgctgtc agtcctctgt cccagctctt 1920
gctcacccca cacgcctaca ctatctcctc cgcctgctga ccttcctctt gggtccaggg 1980
gctgggggcg ctgaggccca ggggatgctg ggtcgggccc tactgctctc cagtctccca 2040
gacaactgct ccttctggga tgcctttcgc ccagagggcc ggcgcagtgt gctacggacg 2100
attggggaat acctggaaca agatgaggag cagccaaccc catcaggctt tgaacccact 2160
gtcaacccca gctctggtat aagcaagatg gagctgctgg cctgctttag tcctgtgctg 2220
tgggatctgc tccagaggga aaagagtgtt tgggccctgc agattctagt gcaggcgtac 2280
ctgcatatgc ccccagaaaa cctccagcag ctggtgcttt cagcagagag ggaggctgca 2340
cagggcttcc tgacactcat gctgcagggg aagctgcagg ggaagctgca ggtaccacca 2400
tccgaggagc aggccctggg tcgcctgaca gccctgctgc tccagcggta cccacgcctc 2460
acctcccagc tcttcattga cctgtcacca ctcatccctt tcttggctgt ctctgacctg 2520
atgcgcttcc caccatccct gttagccaac gacagtgtcc tggctgccat ccgggattac 2580
agcccaggaa tgaggcctga acagaaggag gctctggcaa agcgactgct ggcccctgaa 2640
ctgtttgggg aagtgcctgc ctggccccag gagctgctgt gggcagtgct gcccctgctc 2700
ccccacctcc ctctggagaa ctttttgcag ctcagccctc accagatcca ggccctggag 2760
gatagctggc cagcagcagg tctggggcca gggcatgccc gccatgtgct gcgcagcctg 2820
gtaaaccaga gtgtccagga tggtgaggag caggtacgca ggcttgggcc cctcgcctgt 2880
ttcctgagcc ctgaggagct gcagagccta gtgcccctga gtgatccaac ggggccagta 2940
gaacgggggc tgctggaatg tgcagccaat gggaccctca gcccagaagg acgggtggca 3000
tatgaacttc tgggtgtgtt gcgctcatct ggaggagcgg tgctgagccc ccgggagctg 3060
cgggtctggg cccctctctt ctctcagctg ggcctccgct tccttcagga gctgtcagag 3120
ccccagctta gagccatgct tcctgtcctg cagggaacta gtgttacacc tgctcaggct 3180
gtcctgctgc ttggacggct ccttcctagg cacgatctat ccctggagga actctgctcc 3240
ttgcaccttc tgctaccagg cctcagcccc cagacactcc aggccatccc taggcgagtc 3300
ctggtcgggg cttgttcctg cctggcccct gaactgtcac gcctctcagc ctgccagacc 3360
gcagcactgc tgcagacctt tcgggttaaa gatggtgtta aaaatatggg tacaacaggt 3420
gctggtccag ctgtgtgtat ccctggtcag cctattccca ccacctggcc agactgcctg 3480
cttcccctgc tcccattaaa gctgctacaa ctggattcct tggctcttct ggcaaatcga 3540
agacgctact gggagctgcc ctggtctgag cagcaggcac agtttctctg gaagaagatg 3600
caagtaccca ccaaccttac cctcaggaat ctgcaggctc tgggcaccct ggcaggaggc 3660
atgtcctgtg agtttctgca gcagatcaac tccatggtag acttccttga agtggtgcac 3720
atgatctatc agctgcccac tagagttcga gggagcctga gggcctgtat ctgggcagag 3780
ctacagcgga ggatggcaat gccagaacca gaatggacaa ctgtagggcc agaactgaac 3840
gggctggata gcaagctact cctggactta ccgatccagt tgatggacag actatccaat 3900
gaatccatta tgttggtggt ggagctggtg caaagagctc cagagcagct gctggcactg 3960
acccccctcc accaggcagc cctggcagag agggcactac aaaacctggc tccaaaggag 4020
actccagtct caggggaagt gctggagacc ttaggccctt tggttggatt cctggggaca 4080
gagagcacac gacagatccc cctacagatc ctgctgtccc atctcagtca gctgcaaggc 4140
ttctgcctag gagagacatt tgccacagag ctgggatggc tgctattgca ggagtctgtt 4200
cttgggaaac cagagttgtg gagccaggat gaagtagagc aagctggacg cctagtattc 4260
actctgtcta ctgaggcaat ttccttgatc cccagggagg ccttgggtcc agagaccctg 4320
gagcggcttc tagaaaagca gcagagctgg gagcagagca gagttggaca gctgtgtagg 4380
gagccacagc ttgctgccaa gaaagcagcc ctggtagcag gggtggtgcg accagctgct 4440
gaggatcttc cagaacctgt gccaaattgt gcagatgtac gagggacatt cccagcagcc 4500
tggtctgcaa cccagattgc agagatggag ctctcagact ttgaggactg cctgacatta 4560
tttgcaggag acccaggact tgggcctgag gaactgcggg cagccatggg caaagcaaaa 4620
cagttgtggg gtcccccccg gggatttcgt cctgagcaga tcctgcagct tggtaggctc 4680
ttaataggtc taggagatcg ggaactacag gagctgatcc tagtggactg gggagtgctg 4740
agcaccctgg ggcagataga tggctggagc accactcagc tccgcattgt ggtctccagt 4800
ttcctacggc agagtggtcg gcatgtgagc cacctggact tcgttcatct gacagcgctg 4860
ggttatactc tctgtggact gcggccagag gagctccagc acatcagcag ttgggagttc 4920
agccaagcag ctctcttcct cggcaccctg catctccagt gctctgagga acaactggag 4980
gttctggccc acctacttgt actgcctggt gggtttggcc caatcagtaa ctgggggcct 5040
gagatcttca ctgaaattgg caccatagca gctgggatcc cagacctggc tctttcagca 5100
ctgctgcggg gacagatcca gggcgttact cctcttgcca tttctgtcat ccctcctcct 5160
aaatttgctg tggtgtttag tcccatccaa ctatctagtc tcaccagtgc tcaggctgtg 5220
gctgtcactc ctgagcaaat ggcctttctg agtcctgagc agcgacgagc agttgcatgg 5280
gcccaacatg agggaaagga gagcccagaa cagcaaggtc gaagtacagc ctggggcctc 5340
caggactggt cacgaccttc ctggtccctg gtattgacta tcagcttcct tggccacctg 5400
ctatgagcct gtctctacag tagaaggaga ttgtggggag agaaatctta agtcataatg 5460
aataaagtgc aaacagaagt gcatcctgat tattttcaga agctgatgag gaata 5515

<210> 21
<211> 585
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 21
Met Glu Asp Ser Gln Asp Leu Asn Glu Gln Ser Val Lys Lys Thr Cys
1 5 10 15
Thr Glu Ser Asp Val Ser Gln Ser Gln Asn Ser Arg Ser Met Glu Met
20 25 30
Gln Asp Leu Ala Ser Pro His Thr Leu Val Gly Gly Gly Asp Thr Pro
35 40 45
Gly Ser Ser Lys Leu Glu Lys Ser Asn Leu Ser Ser Thr Ser Val Thr
50 55 60
Thr Asn Gly Thr Gly Val Ile Thr Ser Ser Gly Tyr Ser Pro Arg Ser
65 70 75 80
Ala His Gln Tyr Ser Pro Gln Leu Tyr Pro Ser Lys Pro Tyr Pro His
85 90 95
Ile Leu Ser Thr Pro Ala Ala Gln Thr Met Ser Ala Tyr Ala Gly Gln
100 105 110
Thr Gln Tyr Ser Gly Met Gln Gln Pro Ala Val Tyr Thr Ala Tyr Ser
115 120 125
Gln Thr Gly Gln Pro Tyr Ser Leu Pro Thr Tyr Asp Leu Gly Val Met
130 135 140
Leu Pro Ala Ile Lys Thr Glu Ser Gly Leu Ser Gln Thr Gln Ser Pro
145 150 155 160
Leu Gln Ser Gly Cys Leu Ser Tyr Ser Pro Gly Phe Ser Thr Pro Gln
165 170 175
Pro Gly Gln Thr Pro Tyr Ser Tyr Gln Met Pro Gly Ser Ser Phe Ala
180 185 190
Pro Ser Ser Thr Ile Tyr Ala Asn Asn Ser Val Ser Asn Ser Thr Asn
195 200 205
Phe Ser Gly Ser Gln Gln Asp Tyr Pro Ser Tyr Thr Ala Phe Gly Gln
210 215 220
Asn Gln Tyr Ala Gln Tyr Tyr Ser Ala Ser Thr Tyr Gly Ala Tyr Met
225 230 235 240
Thr Ser Asn Asn Thr Ala Asp Gly Thr Pro Ser Ser Thr Ser Thr Tyr
245 250 255
Gln Leu Gln Glu Ser Leu Pro Gly Leu Thr Asn Gln Pro Gly Glu Phe
260 265 270
Asp Thr Met Gln Ser Pro Ser Thr Pro Ile Lys Asp Leu Asp Glu Arg
275 280 285
Thr Cys Arg Ser Ser Gly Ser Lys Ser Arg Gly Arg Gly Arg Lys Asn
290 295 300
Asn Pro Ser Pro Pro Pro Asp Ser Asp Leu Glu Arg Val Phe Val Trp
305 310 315 320
Asp Leu Asp Glu Thr Ile Ile Val Phe His Ser Leu Leu Thr Gly Ser
325 330 335
Tyr Ala Gln Lys Tyr Gly Lys Asp Pro Pro Met Ala Val Thr Leu Gly
340 345 350
Leu Arg Met Glu Glu Met Ile Phe Asn Leu Ala Asp Thr His Leu Phe
355 360 365
Phe Asn Asp Leu Glu Glu Cys Asp Gln Val His Ile Asp Asp Val Ser
370 375 380
Ser Asp Asp Asn Gly Gln Asp Leu Ser Thr Tyr Ser Phe Ala Thr Asp
385 390 395 400
Gly Phe His Ala Ala Ala Ser Ser Ala Asn Leu Cys Leu Pro Thr Gly
405 410 415
Val Arg Gly Gly Val Asp Trp Met Arg Lys Leu Ala Phe Arg Tyr Arg
420 425 430
Arg Val Lys Glu Leu Tyr Asn Thr Tyr Lys Asn Asn Val Gly Gly Leu
435 440 445
Leu Gly Pro Ala Lys Arg Asp Ala Trp Leu Gln Leu Arg Ala Glu Ile
450 455 460
Glu Gly Leu Thr Asp Ser Trp Leu Thr Asn Ala Leu Lys Ser Leu Ser
465 470 475 480
Ile Ile Ser Thr Arg Ser Asn Cys Ile Asn Val Leu Val Thr Thr Thr
485 490 495
Gln Leu Ile Pro Ala Leu Ala Lys Val Leu Leu Tyr Ser Leu Gly Gly
500 505 510
Ala Phe Pro Ile Glu Asn Ile Tyr Ser Ala Thr Lys Ile Gly Lys Glu
515 520 525
Ser Cys Phe Glu Arg Ile Val Ser Arg Phe Gly Thr Asn Ile Thr Tyr
530 535 540
Val Val Ile Gly Asp Gly Arg Asp Glu Glu His Ala Ala Asn Gln His
545 550 555 560
Asn Met Pro Phe Trp Arg Ile Ser Ser His Ser Asp Leu Leu Ala Leu
565 570 575
His Gln Ala Leu Glu Leu Glu Tyr Leu
580 585

<210> 22
<211> 5393
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 22
tccggagttt tggctcctct cctttcctcc tccccctcgg agccggcttc tccctccgcc 60
ccgcttctcc cccgcttgtg tacgctattt gttgtggggt ggccgaaggg gatgtcctgt 120
tttcaccaga ggcacagcgc gaaggggaaa cttcgacact ggaaggaacg agaataaata 180
cttaattacg gacgcactga accgcggctg ggacagacac ttcgggaacc cgaggcggac 240
cgggcgacga gatagtcatt tttacttgaa ggaagctgct tctacttggg agtggcagga 300
gaagtgagaa aaccacatgg aagactccca ggatttaaat gaacaatcag taaagaaaac 360
gtgcacagaa tcagatgttt cacaatctca gaattccagg tctatggaaa tgcaggacct 420
agcaagtcct catactcttg ttggaggtgg tgatactcca ggtagctcca aactggaaaa 480
atctaatctc agcagcacat cagttactac aaatgggaca ggagtaatta caagtagtgg 540
ctacagcccc agatcagcac atcagtattc cccacagctg tatccttcca agccctatcc 600
acacattctt tctacaccag cagctcaaac aatgtctgcc tatgcaggcc agactcagta 660
ttcggggatg cagcagccag ccgtctacac agcctactca cagacaggac agccctacag 720
cttgcccact tacgatttgg gtgtgatgtt gccagccatc aagacagaga gtggactttc 780
ccaaactcag tccccattac agagtggctg cctcagttac agcccagggt tctctacccc 840
acagccaggc cagacacctt attcttacca aatgccaggt tctagttttg caccatcatc 900
tactatttat gcaaataatt cagtttccaa ttcaacgaat ttcagtggtt cacaacagga 960
ttatccatcc tatacagcct ttggccaaaa ccagtatgca cagtattatt cagcatcaac 1020
gtatggagcg tatatgacat cgaataacac agccgatggc acaccctctt caacctctac 1080
ttatcagttg caggaatctc tcccaggact gactaaccaa ccaggagagt tcgataccat 1140
gcagagtccc tccacaccca tcaaagatct tgatgagaga acctgtagga gttctgggtc 1200
aaagtccaga ggaagaggcc ggaaaaataa tccctccccg cctcctgata gtgacctgga 1260
gcgtgtgttt gtctgggatt tggatgaaac catcattgtt tttcactcac tgctcaccgg 1320
gtcttatgca cagaagtatg gcaaggatcc ccccatggct gtaacccttg gactccgcat 1380
ggaagaaatg atttttaatc ttgctgatac tcatttgttt tttaatgatt tagaggagtg 1440
tgatcaagtt catatagatg atgtttcctc tgatgataat gggcaggact taagtaccta 1500
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agaattatat aacacctaca agaacaacgt tggaggactc cttggccctg ccaagaggga 1680
tgcctggcta cagttaaggg cagagattga aggtctgaca gattcctggc taacaaatgc 1740
acttaagtct ttatcaatta ttagcactag gagtaactgc ataaatgtct tggtaacgac 1800
aactcaactg atcccagcac ttgcgaaggt tctactctat agtttaggag gtgctttccc 1860
cattgagaat atttacagtg caactaaaat aggcaaggaa agctgttttg agcgtatagt 1920
gtccagattt ggcactaaca taacttatgt tgtgattgga gatggccgag atgaggagca 1980
tgccgctaac cagcacaaca tgcccttctg gaggatatcc agtcactcag acctcctggc 2040
tctccaccaa gcactggaat tagagtattt gtaactgtgt tctttagccg gagatccatt 2100
ttttatattt caagtacact gaatttttat gtgtgattca atgcctctgg ctctacacat 2160
ataaattgtc ttaatggatg aaatcatatt tggaataaaa attccagaat gaagaattca 2220
gattgctgaa tggagttaaa ctttagtgct acagaaaaga aactctatgg tcttatattt 2280
acaacacttt aatgggtttt ttaaaaatct gtggaggttg ctggtacaca ccaaatgagt 2340
ccaaactgga atgagcagct ttagcaaaga actcttaccc tggcaaagca gcaacacaca 2400
tgctccgtct gacaaggtgg tcaacaacat tcctcaaaat gggagatctt ctcagccctg 2460
aggtttgaat ctgactttag cctacctaac ccagaaaatc tgaattggaa tgcactcaga 2520
ctgtataagg acagtcctat ttagacatgt aatttgtgta aattattgat gaaaataatt 2580
tactgtgact ttattagcag ctgactttca aagtggatgc aatttttctt tcttttgttg 2640
gggaggggaa tgggagggga aatgggaata taatattgtc tcttttttaa gtttggcaaa 2700
cagaatgttc atactgatgt gttgtgcctt aaagacaaga cagcatttgt gtgttacaat 2760
gtaactttgg ttaaaatctc tgtagataat gaaaaaaaac aaaaaaaaaa acctttgtga 2820
tgattcttaa catgaccaaa tttaaaagtc aagctctcag agcttaatta ccgcatcagc 2880
aagaaactga gtattttttg caataagaaa acaacaataa taaaggaaag cttgtgtttc 2940
atttgggttc ttaataattc caataattgt atgaggcaac tatttgcgca tccaaccatg 3000
agtggaaggt ttgggaaaga ctgtgggacc tttacttaga aagtgaaatg tatgtagaag 3060
tctcaagtac cccttctaca gttttactgg agaaaactaa gagccatatt catgacaact 3120
tgcacagttt tgaggttgag acttttgata tgtgtaagtt gcatagagga ggatattatc 3180
atgcaaatca tgagcaatta tcacataaac ttttttagaa tgtgccatga acatggcata 3240
aaattcacat tgagtgcaca gggcttaaaa taaagctaag tatgtttatt cccaatgcca 3300
tggcaaaaat gataatatca tcagaaatgg aaggcagttc tcccagatgg tgtctaatga 3360
aagcaatgag tctatgaaaa ttttacctag aatatcatca taaattaaat tagcaagtgc 3420
gctggatctt ggcagcgctg ctgaaatgac aacagtaaaa taatacctgg ttctccatct 3480
gaatacatca atgcaggttc tcctcgtaac agacttgcat atgtttgtta gtttctgcct 3540
gtattgtcac tgcgcaacgg atggcattca ttacaagaag agcccatcat cgttgtgttt 3600
gcatggtttt tttccttgtg tgtagcccat gttgggaaca cgatacaggt tctcctctta 3660
tttcctatga cacgatttcc cttgtggaaa tttaagactt taagaactag agtattttta 3720
tggtgtctgc acctgcagtt ctgtgtttaa aatgtcataa tgtggatcct ggagtcaggc 3780
tactagtcag tgcccctagc cagaggctgg ttcatgagtt catcaactga ggcctctgtg 3840
gcttcaataa agtctacatt ttgctcacag atcacaacat tcactgtgga aatatgattt 3900
catttcttta ggctacaaac ctgtatttct ttactgaatg ctaaggccat gtttatattg 3960
ggtagaaaga tattgagatc ccaattttgt acaagattgt gatttcatta tctaaacctt 4020
aaacttaatc ctttaaattt tgtagctttt ggctgcatct gccccaagta ctattccagg 4080
caaattaaag ttggaatacc tttaataata taaaaataat gatagtaaat cttatacttc 4140
tgttggccct tagcttgaaa atagcagtta aaaaaattta aatgttgcct tgattatcag 4200
tacttaatta tgttgtgcac taaaacctta aatatttatt actgtgaata aaaacaaatt 4260
atctttactg tatagctggt ttctttaaat gttgatagaa ttgtggcatt acatctaaat 4320
ttgtaagtct tttcatatca aacaagcaag gctttttatg ctgctaagtc tgtgggtgca 4380
gaaagaaaca ccccttggaa gggcaaagag aagccggctg gttgcatcac cccgtgcagt 4440
ttctcacaca catctctttt tctgattctg tgttcagaag aggctgccgg cataaaacct 4500
aaatgcaagg ttgacggaga acagcttgtc tggcacaaca atggtgcagg cccacgagcc 4560
agcatcacag cttggccatg ggacgttgag tatgcacaaa ctagaactct tcccttccca 4620
ccttaggaat agaaaatcct cttcctttct aatctgaaaa acgaaaactg aacaaacaca 4680
aaaccaaccc cttggcagtt cccacctcct attgacatat ggaatattgt gccttattgt 4740
aaaccagttt gaaaaatgtt ctgtaactaa agtgggtttt cggctattat gtatacagct 4800
tggtatatta ctacgaaaga taaccacctt gtgttgcacc ttaaaaatat caagaccatg 4860
taatttccat aacaaaatag gtggcctggc tatggtatta tagcatacaa ttaggacact 4920
atgcccctgc aaaattttgt aaatcaaatt cagaggcaaa aacatatttt agaatcatac 4980
agtttgcaca cgacaagtag gtaataactg tctctaaaaa tgttttctcc ttagtccgca 5040
atgagctaag attcagaata gtgtcaacag catgctccta tatgaagttg ttttttttaa 5100
agcacatttg tttatgacaa gcctacattc tcagtgaata tggcatttag tatttctttt 5160
gaaaacaaac ttaagcatca tgagccaaag ttgcactttg actcccaact acggtagcat 5220
tatggacatc tcacaatgtc aagggtttct gttatgtatt agtaaagtat agattattgg 5280
ggcctacata atttaaaaga aatgtaaatt aatattaaaa gcttgtaaaa atatgtatat 5340
ctttactatt tctcaataaa tacctttgca attgttttca tttccttcaa aaa 5393

<210> 23
<211> 964
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 23
tcttcacctg tcattttcaa ccagcctcag cctatctgct ctgtcacaat cactactaaa 60
atatgttcct aaattgcttg tttctagatc cttccttctc atatgctcag gtgaacacat 120
gggtgaaatt taatatggaa ttgaaatatg tactatgcaa gatagattcc ttaagaaatg 180
tttctctgat ttatatgaca taattgtatt ttactagttt acctgtccat ctgtaaaact 240
ttgttttgga gatttcatat attacaatgt ttaagaaata tgctataatg ttttgtatag 300
tatatttctt cgtgataacc ttatatacta ccagtcacac gtgtttgtaa aaatctaaag 360
agtacttttg gctcctacag aatgtgtgaa gttgtgaaat tgtttttttg ttttgttttg 420
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gagagaggga gagacagaga gaatgataaa agaagcttaa gagattattt tatcttgtca 540
acgacattgt tattgaatgt aagctgctaa acttcttaga taaagtaaaa cagtaaaaac 600
aaacacacaa aacagaacag agaatcatca gacaggctga cgaacacagt acaataaagc 660
agccagtacc gatgatcagt ggacatcaat ttgtcttttg ggctgtagca cctgctacta 720
attggtgcaa agcgctcacc agtcagtgcg tggtttagcg cactcagctg tctcctgtat 780
gtgctgcgag aagcaagata gctaattgct gttgcttcag tgccagtgaa atcaacgtgc 840
tgagctaata gcgacagata gagggcagac agattcctgc tagcagctta gtgttagttg 900
cttgtggtaa ctaaggcagg tggcatacat ctcagaacgt ggagaatgat ggtatgcttt 960
ctga 964

<210> 24
<211> 1040
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 24
tggtagcctc cctagagaca cagagctggg ccggatgagt ccaggcactg acgtgatcca 60
ttatctttca ccttaaagag taaaagggaa actaaagtta attacctcca cgaaacaaaa 120
aggtgccttc ttgtgcttca attacatgga tatattctac tagtctaaaa gtatcttctc 180
acttctttct gtcactgtga ggacttgagt cagaagaaag tttaaataca gtcattgagc 240
tggaaagagt ggaaagagaa gcaaagaggg ggaagctgta ggaaggacga agtcaccccc 300
aagatacatg gttactgctt acaccaagca agctgccttg ggaacgcttc ccccgagcag 360
ccagaatgct cagcagtgga agacacctct attcctgtag gcgagtcctg ggaagctggt 420
caatctgcaa atgccaattc ccagcagtga gctcggtcca cgtgtaaatc aagatttggg 480
gaaagagtag ggtgggtggc atggttgaca atgtcatcag ctccctcctc tgactcctgt 540
ggtcgtgccc ccatctactc tcactcagct acaccccacc ttcggatttg tgatggacgc 600
tgggtcccta gtaaccacag caagtgtctc ccccgcactt cccccttccc cacccccacc 660
cccaccccca accaccaccc cagcgatgga gcctactctg ctccaagccg ccgctaagac 720
ccggagaagc ggaatttcac tttgaaattc ccttgcctcg tgagggccgg cgctgggcat 780
gctcagtagc cgcggcgctg ctgctgggct gctgggctgg cgcggagtcc accctgccgt 840
ctccgccttg gcttctgggc gtccagaagg ccaggcattt gccgcctctg agcgcttctg 900
ttccccttac ccgcaacctc ctactgctct tcctctctcc ctctcttagg gaggttgaag 960
ctggtgctgg tttctgtcgg cgccacagac tgactgctct gcaaacccca gccgaggacc 1020
tgaatcccgg agactagaag 1040

<210> 25
<211> 964
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 25
gcccagtgga attttcctag ttctttacac tagccatgta tttacctata aaatcaggag 60
aaatatgtat atatataata tattaaaaca tatatatatt taaatgggga aatatgtaac 120
aaacaaatag aaacaagggg agaaaggcat tgtatttgac aaaacacata tgttcaggtc 180
tgagaaggct cataaagaat gttgtctgct atactttgta gttgcttctg ttatcacaca 240
atcagtctgc atatacaggc gttttatata tatatttata tagactacat atatacgtat 300
attatatatg taaatatttc actgtctttg aggacggggg ccctgtcttt tttatctgtg 360
gttttgctta gatgtcctcc aacataatct taacacatag tatgctttta gaaatcgttg 420
actgaatgct aaggacgaaa aaccggtgac cagaaggcaa ccaggaaagg ctttgctgac 480
ctccggagtg gtggagttgg aggttctggg aaggcgacta gggagccagg caggggcggg 540
gtgggatggg atgtggacag cgcttttgcg gggggaaagc gtttttgctg ctggaattga 600
gcagtaggaa tgtgtcagtc acatccccac cttcccaatt cttgtcatct cggttcagga 660
aggtgaacgg tgttccgatt ccccgcggcg ggggcctgta gtgggagctc tgccccttcc 720
ccgcctctgc tgcaggcccc gcccctcgcc cggaaccccg gggcgctggc cgcggtgctg 780
aaacggcgcc ctccgcggac ggaggagggg gcggggctct cgggagccgt gagccgggaa 840
gagggagacg ggcagggcgg cgccagcagg ccctggtggg cttgggagga ggcaggagac 900
tggagacagc ctcggctaga gcggacacag gcacctggca agctttcctt gaccaaatca 960
aggt 964

<210> 26
<211> 477
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 26
tctagactgc agagggccct gcgtatgagt gcaagtgggt tttaggacca ggatgaggcg 60
gggtgggggt gcctacctga cgaccgaccc cgacccactg gacaagcacc caacccccat 120
tccccaaatt gcgcatcccc tatcagagag ggggagggga aacaggatgc ggcgaggcgc 180
gtgcgcactg ccagcttcag caccgcggac agtgccttcg cccccgcctg gcggcgcgcg 240
ccaccgccgc ctcagcactg aaggcgcgct gacgtcactc gccggtcccc cgcaaactcc 300
ccttcccggc caccttggtc gcgtccgcgc cgccgccggc ccagccggac cgcaccacgc 360
gaggcgcgag ataggggggc acgggcgcga ccatctgcgc tgcggcgccg gcgactcagc 420
gctgcctcag tctgcggtgg gcagcggagg agtcgtgtcg tgcctgagag cgcagtc 477

<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 27
Thr Leu Ala Val Pro Phe Lys
1 5

Claims (1)

1. この出願の明細書に記載された発明。

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