JP2001517699A - セリン／トレオニンプロテインキナーゼ作用の変性のためのアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、一部は、アザベンズイミダゾールを基礎とする化合物を用いてセリン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を変性する方法に向けられている。この方法は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼを発現する細胞、例えばＲＡＦを組み入れるものである。更に、本発明は、本発明により同定された化合物を用いて、生物におけるセリン／トレオニンプロテインキナーゼに関連する異常状態を予防及び治療する方法を記載するものである。その上更に、本発明は、アザベンズイミダゾール化合物及び該化合物を含む医薬組成物に関するものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明の背景の以下の説明は、本発明の理解を助けるものであるが、本発明に
対する先行技術であると認めるものではない。

【０００２】 細胞のシグナル伝達は、基本的メカニズムであるが、この場合、種々の細胞の
処理を変性する外的刺激が、細胞の細胞の内側に中継される。シグナル伝達の重
要な生化学的メカニズムの１つには、成熟タンパク質の活性を、その構造および
機能を変化させることによって変性できるようにするタンパク質の可逆的リン酸
化が含まれる。

【０００３】 最もよく特性決定されたプロテインキナーゼは、セリン、トレオニンおよびチ
ロシン残基のアルコール成分上のタンパク質をリン酸化する。前記のキナーゼは
、セリンおよびトレオニンをリン酸化に特異性のものとチロシンをリン酸化に特
異性のものとの２つのグループに大別される。いくつかのキナーゼは、「二重特
異性」キナーゼとも呼ばれ、チロシンと同様にセリン／トレオニン残基をリン酸
化することができる。

【０００４】 プロテインキナーゼは、細胞中の位置によって特性決定することもできる。い
くつかのキナーゼは、細胞膜の外部に配位子を結合することができる膜内外受容
体型タンパク質である。配位子を結合すると、受容体型プロテインキナーゼの触
媒活性が変化する。他のものは、膜内外ドメインが欠落した非受容体型タンパク
質である。非受容体型プロテインキナーゼは、細胞膜の内側表面から核への種々
の細胞区画に見出すことができる。

【０００５】 多くのキナーゼには、調節カスケードに含まれているが、ここでは、その基質
が、リン酸化状態によって活性が調節される他のキナーゼを含んでいてもよい。
最終的に、下流の作動体の活性は、かかる経路の活性化によるリン酸化によって
変性される。

【０００６】 セリン／トレオニンキナーゼファミリーには、細胞成長、移動、分化、遺伝子
発現、筋肉収縮、グルコース代謝、細胞のタンパク質合成および細胞周期の調節
を制御するカスケードを含む発信カスケードの多くの段階を調節する成員が含ま
れる。

【０００７】 リン酸化タンパク質がセリンおよびトレオニン残基を標的とする非受容体型体
プロテインキナーゼの１つの例は、ＲＡＦである。ＲＡＦは、他のプロテインキ
ナーゼ、例えばリン酸化させ、それによってマイトジェン活性されたプロテイン
キナーゼ（ＭＡＰＫ）を活性化させるプロテインキナーゼの触媒活性を変性する
。ＲＡＦ自体は、タンパク質ＲＡＳを固着した膜によって活性化されるが、これ
は更に、表皮細胞成長因子受容体（ＥＧＦＲ）および血小板由来成長因子受容体
（ＰＤＧＦＲ）のような配位子活性化されたチロシン受容体型プロテインキナー
ゼに応答して活性化される。対照細胞の発生におけるＲＡＦの生物学的重要性は
、ＲＡＦの変質形が、生物において癌を引き起こすことがあることの発見によっ
て強調される。悪性腫瘍におけるＲＡＦの重要性の証拠は、Monia他、１９９６ 、Nature Medicine ２：６６８中に得られるが、ここでは、図面および表の全て
を含めた全体を参考までに記載した。

【０００８】 癌および他の疾患のための新規の治療法を見出すべく、生物医学的研究者およ
び化学者は、プロテインキナーゼの作用を抑制する分子を設計、合成および試験
した。いくつかの小さな有機分子は、プロテインキナーゼの作用を変性する化合
物の一種を形成する。プロテインキナーゼの作用を抑制することが報告されてい
る分子の例は、ビス−単環、二環または複素環のアリール化合物（ＰＣＴ国際公
開番号ＷＯ９２／２０６４２号）、ビニレン−アザインドール誘導体（ＰＣＴ国
際公開番号ＷＯ９４／１４８０８号）、１−シクロプロイル−４−ピリジル−キ
ノロン（米国特許第５３３０９９２号）、スチリル化合物（米国特許第５２１７
９９９号）、スチリル置換したピリジル化合物（米国特許第５３０２６０６号）
、一定のキナゾリン誘導体（欧州特許出願公開第０５６６２６６Ａ１号）、セレ
オインドールおよびセレニド（ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９４／０３４２７号）、
三環式ポリヒドロキシル化合物（ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９２／２１６６０号）
およびベンジルホスホン酸化合物（ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９１／１５４９５号
）である。

【０００９】 細胞膜を横切ることができ、酸水解に対して耐性である化合物は、患者に対し
て経口投与した後に高度に生体内利用できるようになることがあるので、潜在的
に有利な治療薬である。しかしながら、前記のプロテインキナーゼ抑制因子の多
くは、プロテインキナーゼの作用を僅かに抑制するにすぎない。更に、多くのも
のは、種々のプロテインキナーゼを抑制するので、従って、疾患のための治療薬
として多種多様な副作用を引き起こすことにもなる。

【００１０】 本発明の概要 本発明は、一部は、アザベンズイミダゾールを基礎とする化合物を用いてセリ
ン／トレオニンプロテインキナーゼの作用を変性する方法に向けられている。こ
の方法は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼを発現する細胞、例えばＲＡ
Ｆを組み込むものである。更に、本発明は、本発明によって同定された化合物を
用いて、生物におけるセリン／トレオニンプロテインキナーゼに関連する異常状
態を予防および治療する方法を記載するものである。その上更に、本発明は、本
発明の方法によって同定された化合物を含有する製薬学的組成物に関するもので
ある。

【００１１】 Ｉ．セリン／トレオニンプロテインキナーゼ作用を変性する化合物の選別 本発明の方法により、受容体および細胞質セリン／トレオニンプロテインキナ
ーゼの両方の作用を変性するための手段が得られる。これらの方法により、試験
管内および生体内の両方で酵素を変性する手段が得られる。試験管内適用につい
ては、本発明よる方法は、一部は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの作
用を変性する化合物を同定する方法に関するものである。

【００１２】 従って、第一の態様では、本発明は、アザベンズイミダゾールを基礎とする化
合物を用いてセリン／トレオニンプロテインキナーゼの作用を変性する方法を特
徴とするものである。このアザベンズイミダゾール化合物は、有機基で置換され
ていてもよい。この方法は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼを発現する
細胞と該化合物との接触を含むものである。

【００１３】 「作用」という語は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの細胞の役割に
関するものである。セリン／トレオニンプロテインキナーゼファミリーには、細
胞成長、移動、分化、遺伝子発現、筋肉収縮、グルコース代謝、細胞のタンパク
質合成および細胞周期の調節を制御するカスケードを含む発信カスケードの多く
の段階を調節する成員が含まれる。

【００１４】 「変性する」という語は、プロテインキナーゼの作用を変化させる化合物の能
力に関するものである。モジュレーターは、有利に、プロテインキナーゼの触媒
活性を活性化し、更に有利には、プロテインキナーゼにさらされた化合物の濃度
に応じてプロテインキナーゼの触媒活性を活性化または抑制するかまたは最も有
利には、プロテインキナーゼの触媒活性を抑制する。

【００１５】 「触媒活性」という語は、本発明においては、プロテインキナーゼが基質をリ
ン酸化する割合を定義するものである。触媒活性は、例えば、時間の関数として
、生成物に変換された基質の量を測定することによって定められる。基質のリン
酸化は、プロテインキナーゼの活性部位で行われる。活性部位とは、通常、基質
がプロテインキナーゼに結合し、リン酸化する空隙のことである。

【００１６】 本発明において使用されている「基質」という語は、セリン／トレオニンプロ
テインキナーゼによってリン酸化される分子に関するものである。この基質は、
有利にペプチド、更に有利にタンパク質である。プロテインキナーゼに関しては
、ＲＡＦ、有利な基質は、ＭＥＫおよびＭＥＫ基質ＭＡＰＫである。

【００１７】 「活性化する」という語は、プロテインキナーゼの細胞機能を増大させること
に関するものである。プロテインキナーゼ機能とは、有利に、天然結合成分との
相互作用、極めて有利に触媒活性である。

【００１８】 「抑制する」という語は、プロテインキナーゼの細胞機能を低下させることに
関するものである。プロテインキナーゼ機能は、有利に天然結合成分との相互作
用、極めて有利に触媒活性である。

【００１９】 また、「変性する」という語は、複合体がプロテインキナーゼと天然結合成分
との間に形成する蓋然性を増大または減少することによってプロテインキナーゼ
の機能を変化させることに関するものでもある。モジュレーターは、複合体がプ
ロテインキナーゼと天然結合成分との間に形成する蓋然性を増大させ、更に有利
には、プロテインキナーゼにさらされた化合物の濃度に応じて複合体がプロテイ
ンキナーゼと天然結合成分との間に形成する蓋然性を増大または減少させ、極め
て有利には、複合体がプロテインキナーゼと天然結合成分との間に形成する蓋然
性を増大させる。

【００２０】 「複合体」という語は、互いに結合した少なくとも２個の分子の集合体に関す
るものである。シグナル伝達複合体は、互いに結合した少なくとも２個の分子を
有していることが多い。例えば、プロテインチロシン受容体型プロテインキナー
ゼ、ＧＲＢ２、ＳＯＳ、ＲＡＦおよびマイトジェン配位子に応答してシグナル伝
達複合体を形成するＲＡＳ集合体である。

【００２１】 「天然結合成分」という語は、細胞中のプロテインキナーゼと結合するポリペ
プチドに関するものである。天然結合成分は、プロテインキナーゼシグナル伝達
プロセスにおいてシグナルを増幅する役割を果たすことができる。プロテインキ
ナーゼと天然結合成分との相互作用における変化は、相互作用が形成する増大ま
たは減少した蓋然性またはプロテインキナーゼ／天然結合成分複合体の増大また
は減少した濃度として現れることがある。

【００２２】 プロテインキナーゼ天然結合成分は、高い親和性をもって、プロテインキナー
ゼの細胞内領域に結合することができる。高い親和性は、約１０^-6Ｍまたはそれ
以下の平衡結合定数に相当する。更にまた、天然結合成分は、プロテインキナー
ゼ細胞内領域と一過性の相互作用をし、それを化学的に変性することもある。プ
ロテインキナーゼ天然結合成分は、これによって制限されるものではないが、Ｓ
ＲＣ相同性２（ＳＨ２）または３（ＳＨ３）ドメイン、他のホスホリルチロシン
結合（ＰＴＢ）ドメイン、グアニンヌクレオチド交換因子、タンパク質ホスファ
ターゼおよび他のプロテインキナーゼを含むグループから選択されている。プロ
テインキナーゼとその天然結合成分との間の相互作用における変化の測定法は、
従来技術により容易に入手可能である。

【００２３】 「セリン／トレオニンプロテインキナーゼ」という語は、セリンおよびトレオ
ニン残基のタンパク質をリン酸化する別の酵素に対して少なくとも１０％のアミ
ノ酸同一性を有するアミノ酸配列を有する酵素に関するものである。セリン／ト
レオニンプロテインキナーゼは、セリンおよびトレオニン残基上のタンパク質へ
のリン酸塩の付加反応に触媒作用する。セリン／トレオニンプロテインキナーゼ
は、タンパク質または細胞質タンパク質を結合した膜として存在していることが
ある。

【００２４】 本発明において使用されている「接触」という語は、本発明のアザベンズイミ
ダゾール化合物を含む溶液と、この方法の細胞の液体培地浴とを混合することに
関するものである。また、前記化合物を含む溶液は、この方法の細胞の中への１
種またはそれ以上のアザベンズイミダゾール化合物の取り込みを促進する別の成
分、例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含んでいてもよい。アザベンズ
イミダゾール化合物を含む溶液は、送出装置、例えばピペットをベースとする装
置またはシリンジをベースとする装置を利用することによって、細胞の培地浴に
添加してもよい。

【００２５】 「アザベンズイミダゾールを基礎とする化合物」という語は、化学的置換基で
置換されたアザベンズイミダゾール有機化合物に関するものである。アザベンズ
イミダゾール化合物は、一般構造式：

【００２６】

【化４】

【００２７】 で示されるものである。

【００２８】 本発明における「置換された」という語は、任意の多数の化学的置換基を用い
て誘導されるアザベンズイミダゾール化合物に関するものである。

【００２９】 １つの有利な実施態様の場合、本発明は、プロテインキナーゼがＲＡＦである
場合のセリン／トレオニンプロテインキナーゼの機能の変性法に関するものであ
る。

【００３０】 ＲＡＦプロテインキナーゼは、セリンまたはトレオニン残基上のタンパク質標
的をリン酸化する。かかるタンパク質標的の１つは、リン酸化し、その結果、マ
イトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を活性化するプロテインキナ
ーゼ（ＭＥＫ）である。ＲＡＦ自体は、マイトジェン刺激された受容体型プロテ
インチロシンキナーゼ、例えば表皮細胞成長因子受容体（ＥＧＦＲ）および血小
板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）に応答して、膜結合した三リン酸グアニン
加水分解酵素ＲＡＳによって活性化される。

【００３１】 本発明の方法は、細胞中のＲＡＦプロテインキナーゼの機能を変性する化合物
を検出することができる。ＲＡＦは、プロテインキナーゼ（ＭＥＫ）をリン酸化
するが、これは更に、マイトジェン活性化したプロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）
をリン酸化する。ＲＡＦによるＭＥＫのリン酸化のみを監視する検定は、ＭＥＫ
のリン酸化レベルが重要というのではないので、感度が高いということはない。
前記の感度のジレンマを克服するために、ＭＥＫおよびＭＡＰＫの両方のリン酸
化が、本発明の検定の後に続けて行われる。ＭＡＰＫリン酸化シグナルは、ＭＥ
Ｋリン酸化シグナルを増幅し、検定、例えば酵素結合イミノソルベント検定の後
に続けて行うべきＲＡＦ依存リン酸化を可能にする。更に、本発明の検定は、多
くの化合物を短期間に迅速に監視することができる高処理量形式（high through
put format）で実施される。

【００３２】 別の態様では、本発明は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を変
性する化合物の同定法を記載するものであるが、これには、セリン／トレオニン
プロテインキナーゼを発現する細胞と化合物とを接触させ、細胞に対する作用を
監視する工程が含まれる。

【００３３】 「監視する」という語は、この方法の細胞に対する化合物の付加の作用を観察
することに関するものである。この作用は、細胞表現型、細胞増殖、プロテイン
キナーゼ触媒活性における変化またはプロテインキナーゼと天然結合成分との間
の相互作用において明らかになることがある。

【００３４】 「作用」という語は、細胞表現型または細胞増殖における変化または変化がな
いことを説明するものである。また、「作用」は、プロテインキナーゼの触媒活
性における変化または変化がないことを説明することもできる。また、「作用」
は、プロテインキナーゼと天然結合成分との間の相互作用における変化または変
化がないことを説明することもできる。

【００３５】 本発明の１つの有利な実施態様は、作用が、細胞表現型における変化または変
化がないことである、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を変性する
化合物を同定する方法に関するものである。

【００３６】 「細胞表現型」という語は、細胞または組織の外観あるいは細胞または組織の
機能に関するものである。細胞表現型の例は、細胞の大きさ（萎縮または膨張）
、細胞増殖（細胞の個数の増加または減少）、細胞分化（細胞の形状における変
化または変化がないこと）、細胞生存、アポプトシス（細胞死）または代謝栄養
の利用（例えば、グルコース摂取）である。細胞表現型における変化または変化
がないことは、従来技術で公知の技術によって容易に評価される。

【００３７】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、作用が、細胞増殖における変化または
変化がないことである、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を変性す
る化合物を同定する方法に関するものである。

【００３８】 「細胞増殖」という語は、細胞群が分割する割合に関するものである。容器中
で増加する細胞の個数は、当業者が通常の光学顕微鏡を用いて定義された体積中
の細胞の個数を目視計数することによって定量化することができる。また、細胞
増殖率は、適当な媒体中で細胞の密度を光学的または導電的に測定する実験室用
装置によって定量化することができる。

【００３９】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、作用が、セリン／トレオニンプロテイ
ンキナーゼと天然結合成分との間の相互作用における変化または変化がないこと
である、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を変性する化合物を同定
する方法に関するものである。

【００４０】 「相互作用」という語は、本発明においては、プロテインキナーゼの細胞内領
域と天然結合成分または化合物との間に形成される複合体を説明するものである
。「相互作用」という語は、検討中の本発明の化合物と、プロテインキナーゼの
細胞内領域および細胞外領域との間に形成される複合体に拡大することもできる
。細胞質プロテインキナーゼが、細胞外領域を有していなくなるとしても、受容
体型プロテインキナーゼは、細胞外領域と細胞内領域の両方を内在させることに
なる。

【００４１】 本発明において使用されている「細胞内領域」という語は、細胞の内側に存在
するプロテインキナーゼ分に関するものである。本発明において使用されている
「細胞外領域」という語は、細胞の外側に存在するプロテインキナーゼ分に関す
るものである。

【００４２】 １つの有利な実施態様の場合、本発明は、更に以下の工程：（ａ）セリン／ト
レオニンプロテインキナーゼを含む溶解液を得るための細胞の溶解；（ｂ）抗体
への前記セリン／トレオニンプロテインキナーゼの吸着；（ｃ）１種またはそれ
以上の培地を用いる吸着されたセリン／トレオニンプロテインキナーゼの培養；
および（ｄ）固体支持体または抗体への前記の１種またはそれ以上の培地の吸着
を含む、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を変性する化合物を同定
する方法に関するものである。細胞に対する作用を監視する工程には、前記の１
種またはそれ以上の培地のリン酸塩濃度の測定が含まれる。

【００４３】 本発明において使用されている「溶解」という語は、細胞の内容物を遊離する
ような細胞の完全性を分断する方法に関するものである。細胞溶解は、当業者に
公知の多くの技術によって行われている。

【００４４】 本発明において使用されている「抗体」という語は、プロテインキナーゼを特
異的に結合するタンパク質分子に関するものである。抗体は、有利に、プロテイ
ンキナーゼの１種に結合し、更に有利にＲＡＦプロテインキナーゼに結合する。

【００４５】 本発明において使用されている「特異的に結合する」という語は、他のプロテ
インキナーゼまたは細胞タンパク質よりも高い親和性でプロテインキナーゼを結
合する抗体に関するものである。プロテインキナーゼに特異的に結合する抗体は
、他のプロテインキナーゼまたは細胞タンパク質よりも高い濃度の特殊なプロテ
インキナーゼを結合することになる。

【００４６】 本発明において使用されている「吸着」という語は、抗体または固体支持体の
表面への分子の結合に関するものである。

【００４７】 固体支持体の例は、化学的に変性されたセルロース、例えばホスホセルロースお
よびナイロンである。抗体は、当業者によく知られた技術を用いて固体支持体に
結合していてもよい。例えば、Harlo & Lane、Antibodies、Laboratory Manual 、１９８９、Cold Spring Harbor Laboratories参照。

【００４８】 本発明において使用されている「リン酸塩濃度の測定」という語は、当業者に
通常知られている技術に関するものである。前記の技術には、培地中のリン酸塩
濃度の定量化または培地中のリン酸塩の相対量の測定を含めることができる。前
記の技術には、膜への培地の吸着および培地中のリン酸塩の量の検出を含めるこ
とができる。

【００４９】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、更に以下の工程：（ａ）ＲＡＦを含む
溶解液を得るための細胞の溶解；（ｂ）抗体への該ＲＡＦの吸着；（ｃ）ＭＥＫ
およびＭＡＰＫを用いる吸着されたＲＡＦの培養；および（ｄ）固体支持体また
は１種またはそれ以上の抗体への前記のＭＥＫおよびＭＡＰＫの吸着を含む、セ
リン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を変性する化合物を同定する方法に
関するものである。細胞に対する作用を測定する工程には、前記のＭＥＫおよび
ＭＡＰＫのリン酸塩濃度の監視が含まれる。

【００５０】 １つの有利な実施態様の場合、アザベンズイミダゾールを基礎とする化合物が
、本発明において定義された式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される構造または本発
明において示されたこれらの任意の亜型を有する、セリン／トレオニンプロテイ
ンキナーゼの機能を変性する化合物を同定する方法に関するものである。

【００５１】 「化合物」という語は、前記化合物またはその製薬学的に認容性の塩、エステ
ル、アミド、プロドラッグ、異性体または代謝物質に関するものである。

【００５２】 「製薬学的に認容性の塩」という語は、化合物の生物的活性および性質を排除
することのない化合物の処方物に関するものである。製薬学的塩は、本発明の化
合物と、無機酸または有機酸、例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リ
ン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチ
ル酸等との反応によって得ることができる。

【００５３】 「プロドラッグ」という語は、生体内で親ドラッグ（the parent drug）に変 換される薬剤に関するものである。プロドラッグは、いくつかの状況では親ドラ
ッグよりも容易に投与できる。例えば、プロドラッグは、経口投与によって生物
学的に利用可能であることがあるが、しかし、親の方はそうはいかないとかまた
はプロドラッグは、静脈内投与を考慮して溶解度を改善することができる。

【００５４】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、アザベンズイミダゾールを基礎とする
化合物が、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示された構造を有しており、アザベンズイ
ミダゾール化合物が、ＳＡＢＩ化合物からなるグループから選択されている、セ
リン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を変性する化合物を同定する方法に
関するものである。

【００５５】 「ＳＡＢＩ化合物」という語は、式ＡまたはＢ：

【００５６】

【化５】

【００５７】 で示され、以下の表中のＡ−１〜Ａ−１９８の番号を付与された構造を有するア
ザベンズイミダゾールを基礎とする化合物のグループに関するものである：

【００５８】

【表１】

【００５９】

【表２】

【００６０】

【表３】

【００６１】

【表４】

【００６２】

【表５】

【００６３】

【表６】

【００６４】

【表７】

【００６５】

【表８】

【００６６】 ＩＩ．異常な状態を予防または治療する方法 別の態様の場合、本発明は、生物への、本発明により規定された全ての制約を
ともなう式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩによって本発明において定義されている本発明
の化合物の投与によって、生物中の異常状態を予防または治療する方法を特徴と
する。

【００６７】 「生物」という語は、少なくとも１個の細胞からなる任意の生命体の関するも
のである。生物とは、１個の真核細胞のような単純なものかまたは哺乳動物のよ
うな複雑なものであってもよい。有利な実施態様の場合、生物とは、ヒトまたは
哺乳動物に関するものである。

【００６８】 「予防」という語は、生物が異常な状態になるかまたは発現する蓋然性を低下
または可能性を排除する本発明の方法に関するものである。

【００６９】 「治療」という語は、治療効果を有し、異常な状態を少なくとも部分的に緩和
または排除する本発明の方法に関するものである。

【００７０】 「治療効果」という語は、異常な状態の原因となるかまたは一助となる細胞成
長の抑制に関するものである。また、「治療効果」という語は、異常な状態（例
えば癌）の原因となるかまたは一助となる成長因子の抑制に関するものでもある
。治療効果は、異常な状態の徴候の１種またはそれ以上をある程度まで軽減する
。癌の治療に関しては、治療効果は、以下の１つまたはそれ以上に関するもので
ある：（ａ）腫瘍サイズの萎縮；（ｂ）腫瘍転移の抑制（即ち、減速または停止
）；（ｃ）腫瘍成長の抑制；および（ｄ）異常な状態に関連する徴候の１種また
はそれ以上のある程度までの軽減。白血病に対して効果を示す化合物は、本発明
において記載されているように同定することができるが、該化合物は、転移を抑
制するというよりは、むしろ、その代わりに、細胞増殖または細胞成長を減速ま
たは減少させることがある。

【００７１】 「異常な状態」という語は、生物の細胞または組織中の機能に関するものであ
る。異常な状態は、細胞増殖、細胞分化または細胞生存に関連することもある。

【００７２】 異常な細胞増殖状態には、繊維症疾患およびメサンギウム疾患、異常な血管形
成および脈管形成、創傷治癒、乾癬、糖尿病および炎症が含まれる。

【００７３】 異常な分化状態には、神経変性障害、緩慢な創傷治癒速度および組織移植技術
が含まれるが、これらに限定されるものではない。

【００７４】 異常な細胞生存状態は、予め定められた細胞死（アポプトシス）経路が活性化
または排除されている状態に関するものである。多くのプロテインキナーゼは、
アポプトシス経路に関与している。プロテインキナーゼの任意の１つの機能にお
ける異常は、細胞不死性または早発性細胞死につながることもあった。

【００７５】 細胞の増殖、分化および生存は、従来技術の方法によって簡単に計測される現
象である。これらの方法には、時間（例えば日数）に関して、多数の細胞または
細胞の外観を、顕微鏡で観察することも含まれることもある。

【００７６】 「投与する」という語は、広義には生物への供給、更に詳細には、生物の細胞
または組織の中に化合物を取り込ませる方法に関するものである。異常な状態は
、生物の細胞または組織が、生物の中または生物の外に存在している場合に、予
防または治療することができる。生物の外側に存在する細胞は、細胞培養皿中で
保持または成長させることができる。生物中に内在された細胞については、従来
技術において化合物を投与するための、経口投与、腸管外投与、経皮投与、注射
投与および噴霧投与を含む（しかし、これらに限定されるものではない）多くの
技術が存在している。生物の細胞外については、従来技術において化合物を投与
するための、細胞ミクロ注入技術、変換技術およびキャリア技術を含む（しかし
、これらに限定されるものではない）多くの技術が存在している。

【００７７】 １つの有利な実施態様の場合、本発明は、アザベンズイミダゾールを基礎とす
る化合物が、本発明において定義された式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される構造
または本発明において示されるこれらの任意の亜型を有する、生物における異常
状態を予防または治療する方法に関するものである。

【００７８】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、アザベンズイミダゾール化合物が、Ｓ
ＡＢＩ化合物からなるグループから選択されている、生物における異常状態を予
防または治療する方法に関するものである。

【００７９】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、生物が哺乳動物である、生物における
異常状態を予防または治療する方法に関するものである。

【００８０】 「哺乳動物」という語は、有利にマウス、ラット、ウサギ、モルモット、山羊
、更に有利に、サルおよび類人猿、最も有利にヒトのような生物に関するもので
ある。

【００８１】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、異常な状態が癌または繊維症疾患であ
る、生物における異常状態を予防または治療する方法に関するものである。

【００８２】 更に別の有利な実施態様の場合、本発明は、癌が、肺癌、卵巣癌、悪性脳腫瘍
、内軸性悪性脳腫瘍、大腸癌、前立腺癌、肉腫、カポジ肉腫、黒色腫および神経
膠腫からなるグループから選択されている、生物における異常状態を予防または
治療する方法に関するものである。

【００８３】 更に別の有利な実施態様の場合、本発明は、セリン／トレオニンプロテインキ
ナーゼと天然結合成分との間の相互作用によって特徴付けられるシグナル伝達経
路の異常と関連する異常状態にこの方法を適用する、生物における異常状態を予
防または治療する方法に関するものである。

【００８４】 「シグナル伝達経路」という語は、シグナルの伝搬に関するものである。通常
、細胞外シグナルは、細胞膜を透過して細胞内シグナルになる。この後、このシ
グナルは、細胞の応答を刺激することができる。この語には、細胞内に完全に伝
搬される信号も含まれる。シグナル伝達プロセスに含まれるポリペプチド分子は
、代表的な受容体および非受容体型プロテインキナーゼ、受容体および非受容体
型プロテインホスファターゼ、ヌクレオチド交換因子および転写因子である。

【００８５】 シグナル伝達プロセスに関して、「異常」という語は、生物において過剰発現
または過少発現し、触媒活性が、野生型のプロテインキナーゼ活性よりも低いか
または高くなるよう突然変異させられ、天然結合成分と相互作用することがない
よう突然変異させられ、別のプロテインキナーゼまたはプロテインホスファター
ゼによって変性されないかまたは天然結合成分と相互作用しないプロテインキナ
ーゼに関するものである。

【００８６】 「異常な相互作用の促進または分断」という語は、生物の細胞または組織への
本発明の化合物の投与によって達成できる方法に関するものである。化合物は、
複合体境界面での多数の原子との適当な相互作用の形成によって、プロテインキ
ナーゼと天然結合成分との間の相互作用を促進することができる。また、化合物
は、複合体境界面での原子間に形成される適当な相互作用を歩み寄らせることに
よって、プロテインキナーゼと天然結合成分との間の相互作用を抑制することが
できる。別の有利な実施態様の場合、本発明は、セリン／トレオニンプロテイン
キナーゼがＲＡＦである、生物における異常状態を予防または治療する方法に関
するものである。

【００８７】 ＩＩＩ．本発明の化合物および医薬組成物 別の態様の場合、本発明は、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩ：

【００８８】

【化６】

【００８９】 〔式中、 （ａ）Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、独立に （ｉ）水素原子； （ｉｉ）飽和または不飽和アルキル； （ｉｉｉ）ＮＸ₂Ｘ₃（式中、Ｘ₂およびＸ₃は、独立に水素原子、飽和または 不飽和アルキルおよび単環または複素環成分からなるグループから 選択されている）； （ｉＶ）ハロゲン原子またはトリハロメチル； （ｖ）式：−ＣＯ−Ｘ₄（式中、Ｘ₄は、水素原子、アルキルおよび単環 または複素環成分からなるグループから選択されている）で示され るケトン； （ｖｉ）式：−（Ｘ₅）_n−ＣＯＯＨで示されるカルボン酸または式：−（ Ｘ₆）_n−ＣＯＯ−Ｘ₇で示されるエステル（前記式中、Ｘ₅、Ｘ₆ およびＸ₇は、独立にアルキルおよび単環または複素環成分からな るグループから選択されており、ｎは、０または１である）； （ｖｉｉ）式：（Ｘ₈）_n−ＯＨで示されるアルコールまたは式−（Ｘ₈）_n− Ｏ−Ｘ₉で示されるアルコキシ成分（前記式中、Ｘ₈およびＸ₉は 、独立に、水素原子、飽和または不飽和アルキルおよび単環または 複素環成分からなるグループから選択されており、この場合、前記 の環は、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリハロメ チル、カルボキシレート、ニトロおよびエステルからなるグループ から選択された１個またはそれ以上の置換基で置換されていてもよ く、ｎは、０または１である）； （ｖｉｉｉ）式：−ＮＨＣＯＸ₁₀（式中、Ｘ₁₀は、アルキル、ヒドロキシル および単環または複素環成分からなるグループから選択されており 、この場合、この環は、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原 子、トリハロメチル、カルボキシレート、ニトロおよびエステルか らなるグループから選択された１個またはそれ以上の置換基で置換 されていてもよい）で示されるアミド； （ｉｘ）−ＳＯ₂ＮＸ₁₁Ｘ₁₂（式中、Ｘ₁₁およびＸ₁₂は、水素原子、アル キルおよび単環または複素環成分からなるグループから選択されて いる）； （ｘ）独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリハロメチル、カ ルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からなるグループから 選択された１個、２個または３個の置換基で置換されていてもよい 単環または複素環成分； （ｘｉ）式：−ＣＯ−Ｈで示されるアルデヒド；および （ｘｉｉ）式：−ＳＯ₂−Ｘ₁₃（式中、Ｘ₁₃は、飽和または不飽和アルキル および単環または複素環成分からなるグループから選択されている ）で示されるスルホン からなるグループから選択されており、 （ｂ）Ｚ₁およびＺ₂は、独立に窒素原子、硫黄原子、酸素原子、ＮＨおよび ＮＲ₄からなるグループから選択されているが、但し、Ｚ₁およびＺ₂の 一方が、窒素原子、ＮＨまたはＮＲ₄である場合には、Ｚ₁およびＺ₂の他 方は、窒素原子、硫黄原子、酸素原子、ＮＨまたはＮＲ₄であり、 （ｃ）Ｚ₃およびＸ₁は、独立に窒素原子、硫黄原子および酸素原子からなるグ ループから選択されている〕 で示される構造を有するアザベンズイミダゾール化合物を特徴とする。

【００９０】 「飽和アルキル」という語は、アルケン成分またはアルキン成分を全く有して
いないアルキル成分に関するものである。このアルキル成分は、分枝鎖状または
非分枝鎖状であってもよい。

【００９１】 「不飽和アルキル」という語は、少なくとも１個のアルケン成分またはアルキ
ン成分を有するアルキル成分に関するものである。このアルキル成分は、分枝鎖
状または非分枝鎖状であってもよい。

【００９２】 「アミン」という語は、式：ＮＲ₁Ｒ₂（式中、Ｒ₁およびＲ₂は、独立に水素原
子、飽和または不飽和アルキル、単環または複素環成分からなるグループから選
択されており、この場合、前記の環は、独立にアルキル、ハロゲン原子、トリハ
ロメチル、カルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からなるグループから
選択された１個またはそれ以上の置換基で置換されていてもよい）で示される化
学成分に関するものである。

【００９３】 「アリール」という語は、共役したｐｉ電子系を有する少なくとも１個の環を
有し、単素環式アリール（例えばフェニル）および複素環式アリール（例えばピ
リジン）の両方を含む芳香族基に関するものである。「単環式」という語は、１
個またはそれ以上の共有結合した閉鎖環構造を有し、かつ環の根幹を形成する原
子が全て炭素原子である化合物に関するものである。従って、この語は、炭素環
と、環根幹が、少なくとも１個の炭素とは異なる原子を有する複素環とを区別し
ている。「ヘテロアリール」という語は、少なくとも１個の複素環を有するアリ
ール基に関するものである。

【００９４】 「ハロゲン」という語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素からなるグループ
から選択された元素に関するものである。

【００９５】 「ケトン」という語は、式：−（Ｒ）_n−ＣＯ−Ｒ′（式中、ＲおよびＲ′は 、飽和または不法さアルキルおよび単環または複素環成分からなるグループから
選択されており、ｎは、０または１である）で示される化学成分に関するもので
ある。

【００９６】 「カルボン酸」という語は、式：−（Ｒ）_n−ＣＯＯＨ（式中、Ｒは、飽和ま たは不飽和アルキルおよび単環または複素環成分からなるグループから選択され
ており、ｎは、０または１である）で示される化学成分に関するものである。

【００９７】 「エステル」という語は、式：−（Ｒ）_n−ＣＯＯＲ′（式中、ＲおよびＲ′ は、独立に飽和または不飽和アルキルおよび単環または複素環成分からなるグル
ープから選択されており、ｎは、０または１である）で示される化学成分に関す
るものである。

【００９８】 「アルコール」という語は、式：−ＲＯＨ（式中、Ｒは、水素原子、飽和また
は不飽和アルキルおよび単環または複素環成分からなるグループから選択されて
おり、この場合、該環は、独立にアルキル、ハロゲン原子、トリハロメチル、カ
ルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からなるグループから選択された１
個またはそれ以上の置換基で置換されていてもよい）で示される化学置換基に関
するものである。

【００９９】 「アミド」という語は、式：−ＮＨＣＯＲ（式中、Ｒは、ハロゲン原子、アル
キル、ヒドロキシルおよび単環または複素環成分からなるグループから選択され
ており、この場合、該環は、独立にアルキル、ハロゲン原子、トリハロメチル、
カルボキシレート、ニトロまたはエステルからなるグループから選択された１個
またはそれ以上の置換基で置換されていてもよい）で示される化学置換基に関す
るものである。

【０１００】 「アルコキシ成分」という語は、式：−ＯＲ（式中、Ｒは、水素原子または飽
和または不飽和アルキル成分である）で示される化学置換基に関するものである
。

【０１０１】 「アルデヒド」という語は、式：−（Ｒ）_n−ＣＨＯ（式中、Ｒは、飽和また は不飽和アルキルおよび単環または複素環成分からなるグループから選択されて
おり、ｎは、０または１である）で示される化学成分に関するものである。

【０１０２】 「スルホン」という語は、式：−ＳＯ₂−Ｒ（式中、Ｒは、飽和または不飽和 アルキルおよび単環または複素環成分からなるグループから選択されている）で
示される化学成分に関するものである。

【０１０３】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、Ｚ₁およびＺ₂が、独立に窒素原子およ
びＮＨからなるグループから選択されている式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される
構造を有するアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物に関するものである。

【０１０４】 更に別の有利な実施態様の場合、本発明は、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄が、独立
に水素原子、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリアハロメチル、
ヒドロキシ、アルコキシ、カルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からな
るグループから選択された１個、２個または３個の置換基で置換されていてもよ
い単環または複素環成分で置換されていてもよい飽和または不飽和アルキルおよ
び独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリハロメチル、ヒドロキシ、
アルコキシ、カルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からなるグループか
ら選択された１個、２個または３個の置換基で置換されていてもよい単環または
複素環成分からなるグループから選択されている式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示さ
れる構造を有するアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物に関するものであ
る。

【０１０５】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、Ｒ₂およびＲ₃が、水素原子である式Ｉ
、ＩＩまたはＩＩＩで示される構造を有するアザベンズイミダゾールを基礎とす
る化合物に関するものである。

【０１０６】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、Ｒ₁が、独立にアルキル、アルコキシ 、ハロゲン原子、トリハロメチル、カルボキシレート、ニトロまたはエステル成
分からなるグループから選択された１個、２個または３個の置換基で置換されて
いてもよいフェニルである式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される構造を有するアザ
ベンズイミダゾールを基礎とする化合物に関するものである。

【０１０７】 更に別の有利な実施態様の場合、本発明は、Ｒ₁が、ＳＡＢＩ置換基からなる グループから選択された式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される構造を有するアザベ
ンズイミダゾールを基礎とする化合物に関するものである。

【０１０８】 「ＳＡＢＩ置換基」という語は、フェニル、２−ニトロフェニル、３−ニトロ
フェニル、４−ニトロフェニル、２−クロロフェニル、３−クロロフェニル、４
−クロロフェニル、２−メチルフェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェ
ニル、２−フルオロフェニル、３−フルオロフェニル、４−フルオロフェニル、
２−（トリフルオロメチル）フェニル、３−（トリフルオロメチル）フェニル、
４−（トリフルオロメチル）フェニル、２−メトキシフェニル、３−メトキシフ
ェニル、４−メトキシフェニル、２−カルボキシフェニル、３−カルボキシフェ
ニルおよび４−カルボキシフェニルからなるグループに関するものである。

【０１０９】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、Ｘ₁が、硫黄原子である式Ｉ、ＩＩま たはＩＩＩで示される構造を有するアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物
に関するものである。

【０１１０】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、Ｘ₁が、酸素原子である式Ｉ、ＩＩま たはＩＩＩで示される構造を有するアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物
に関するものである。

【０１１１】 更に別の有利な実施態様の場合、本発明は、Ｚ₃が、酸素原子である式Ｉ、Ｉ ＩまたはＩＩＩで示される構造を有するアザベンズイミダゾールを基礎とする化
合物に関するものである。

【０１１２】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、Ｒ₄が、メチルおよびエチルからなる グループから選択されている式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される構造を有するア
ザベンズイミダゾールを基礎とする化合物に関するものである。

【０１１３】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、アザベンズイミダゾール化合物が、Ｓ
ＡＢＩ化合物からなるグループから選択されている式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示
される構造を有するアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物に関するもので
ある。

【０１１４】 別の態様の場合、本発明は、明細書中に記載されている本発明の化合物または
疎の塩および生理学的に認容性の担持剤または希釈剤を含む医薬組成物を特徴と
する。

【０１１５】 別の態様の場合、本発明は、明細書中に定義された式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで
示される構造または明細書中に示されたこれらの任意の亜型を有する化合物を含
む医薬組成物に関するものである。

【０１１６】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、アザベンズイミダゾール化合物が、Ｓ
ＡＢＩ化合物からなるグループから選択されている医薬組成物に関するものであ
る。

【０１１７】 「医薬組成物」という語は、本発明のアザベンズイミダゾール化合物と他の化
学成分、例えば希釈剤または担持剤との混合物に関するものである。医薬組成物
は、生物への該化合物の投与を容易にするものである。化合物を投与する多くの
技術が、経口投与、注射投与、噴霧投与、腸管外投与および局所投与を含む従来
技術には存在しているが、これらに制限されるものではない。また、医薬組成物
は、化合物と無機酸、例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メ
タンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸等と
の反応によって取得することができる。

【０１１８】 「生理学的に認容性」という語は、化合物の生物的活性および特性を排除する
ことのない担持剤または希釈剤を定義するものである。

【０１１９】 「担持剤」という語は、細胞または組織の中への化合物の取り込みを容易にす
る化合物を定義するものである。例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は
、生物の細胞または組織の中への多くの有機化合物の摂取を容易にするので、通
常利用される担持剤である。

【０１２０】 「希釈剤」という語は、重要な化合物を溶解させ並びに該化合物の生物的活性
形を安定化することになる水中で希釈された化合物を定義するものである。緩衝
液中に溶解させられた塩は、従来技術で希釈剤として利用されている。通常使用
される１種の緩衝液は、ヒトの血液の塩の状態に似た働きをするので、リン酸塩
緩衝された食塩水である。緩衝塩は、低濃度で溶液のｐＨを制御することができ
、緩衝希釈剤は、化合物の生物的活性を滅多に変性することはない。

【０１２１】 ＩＶ．本発明の合成法 別の態様の場合、本発明は、（ａ）第一中間生成物を生じさせるための、溶剤
中での２−アミノ−６−クロロ−３−ニトロピリジンと第二反応成分との反応、
この場合、第二反応成分は、置換されたアリール環である；（ｂ）第二中間生成
物を生じさせるための、触媒および還元剤の存在下での第一中間生成物の還元；
（ｃ）第二中間生成物と第三反応成分との反応；および（ｄ）本発明の化合物の
精製の工程を含む、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩで示される構造を有するアザベンズ
イミダゾール化合物の合成法に関するものである。

【０１２２】 １つの有利な実施態様の場合、本発明は、置換されたアリール環が、置換され
たフェノール、置換されたチオフェノールおよび置換されたアニリンである、本
発明の化合物の合成法に関するものである。

【０１２３】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、置換されたフェノール、置換されたチ
オフェノールおよび置換されたアニリンが、ＳＡＢＩ反応成分からなるグループ
から選択されている、本発明の化合物の合成法に関するものである。

【０１２４】 「ＳＡＢＩ反応成分」という語は、フェノール、２−ニトロフェノール、３−
ニトロフェノール、４−ニトロフェノール、２−クロロフェノール、３−クロロ
フェノール、４−クロロフェノール、２−クレゾール、３−クレゾール、４−ク
レゾール、２−フルオロフェノール、３−フルオロフェノール、４−フルオロフ
ェノール、２−（トリフルオロメチル）フェノール、３−（トリフルオロメチル
）フェノール、４−（トリフルオロメチル）フェノール、２−メトキシフェノー
ル、３−メトキシフェノール、４−メトキシフェノール、２−ヒドロキシ安息香
酸、３−ヒドロキシ安息香酸、４−ヒドロキシ安息香酸、チオフェノール、２−
ニトロチオフェノール、３−ニトロチオフェノール、４−ニトロチオフェノール
、２−クロロチオフェノール、３−クロロチオフェノール、４−クロロチオフェ
ノール、２−チオクレゾール、３−チオクレゾール、４−チオクレゾール、２−
フルオロチオフェノール、３−フルオロチオフェノール、４−フルオロチオフェ
ノール、２−（トリフルオロメチル）チオフェノール、３−（トリフルオロメチ
ル）チオフェノール、４−（トリフルオロメチル）チオフェノール、２−メトキ
シベンゼンチオール、３−メトキシベンゼンチオール、４−メトキシベンゼンチ
オール、２−メルカプト安息香酸、３−メルカプト安息香酸、４−メルカプト安
息香酸、アニリン、２−ニトロアニリン、３−ニトロアニリン、４−ニトロアニ
リン、２−クロロアニリン、３−クロロアニリン、４−クロロアニリン、２−ト
ルイジン、３−トルイジン、４−トルイジン、２−フルオロアニリン、３−フル
オロアニリン、４−フルオロアニリン、２−（トリフルオロメチル）アニリン、
３−（トリフルオロメチル）アニリン、４−（トリフルオロメチル）アニリン、
２−アニシジン、３−アニシジン、４−アニシジン、２−アミノ安息香酸、３−
アミノ安息香酸および４−アミノ安息香酸のナトリウム塩からなる反応成分のグ
ループに関するものである。

【０１２５】 １つの有利な実施態様の場合、本発明は、溶剤がｎ−プロパノールである、本
発明の化合物の合成法に関するものである。

【０１２６】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、還元剤が水素である、本発明の化合物
の合成法に関するものである。

【０１２７】 更に別の有利な実施態様の場合、本発明は、触媒がラネーニッケルである、本
発明の化合物の合成法に関するものである。

【０１２８】 更に別の有利な実施態様の場合、本発明は、第三反応成分がＯ−メチルイソウ
レアである、本発明の化合物の合成法に関するものである。

【０１２９】 別の有利な実施態様の場合、本発明は、第三反応成分が、Ｓ−メチルイソチオ
ウロニウムスルフェートとアルキルクロロホルメートとの反応生成物である、本
発明の化合物の合成法に関するものである。

【０１３０】 更に別の有利な実施態様の場合、本発明は、アルキルクロロホルメートがメチ
ルクロロホルメートである、本発明の化合物の合成法に関するものである。

【０１３１】 更に別の有利な実施態様の場合、本発明は、アルキルクロロホルメートがエチ
ルクロロホルメートである、本発明の化合物の合成法に関するものである。

【０１３２】 上記の本発明の概要は、本発明を制限するものではなく、本発明の他の特徴お
よび利点を、有利な実施態様の以下の説明および請求項から明らかになる。

【０１３３】 有利な実施態様の説明 本発明は、一部は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を、アザベ
ンズイミダゾールを基礎とする化合物で変性する方法に関するものである。更に
本発明は、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの機能を変性する化合物を同
定する方法に関するものである。この方法にはセリン／トレオニンプロテインキ
ナーゼ、例えばＲＡＦを発現する細胞が含まれる。

【０１３４】 ＲＡＦは非受容体型プロテインキナーゼであり、グアニントリホスフェート加
水分解酵素である活性化されたＲＡＳに結合する際に細胞膜へ補充される。ＲＡ
Ｓは、活性化された受容体型プロテインチロシンキナーゼ、例えばＥＧＦＲまた
はＰＤＧＦＲが、アダプタータンパクであるＧＲＢ２およびグアニンヌクレオチ
ド交換因子であるＳＯＳと結合する際に活性化される。ＳＯＳはＲＡＳからグア
ニンジホスフェートを取り除き、代わりにグアニントリホスフェートと置き換え
、それによってＲＡＳを活性化する。この後ＲＡＳはＲＡＦに結合するので、そ
の結果ＲＡＦが活性化される。次にＲＡＦは、キナーゼ（ＭＥＫ）のようなセリ
ンおよびトレオニン残基を標的とする他のタンパクをリン酸化し、これがマイト
ジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）をリン酸化するので、その結果活
性化される。従って、ＲＡＦはマイトジェン活性化シグナル伝達の中間制御因子
となっている。

【０１３５】 細胞中でＲＡＦが重要な制御的役割を果たすので、ＲＡＦのアミノ酸配列の修
飾は、その機能を変化させ、その結果、細胞の挙動を変性させることができる。
ＲＡＦのアミノ酸配列の変異が腫瘍および癌に関連するという観察結果から、細
胞増殖におけるＲＡＦの役割が注目される。細胞に癌を起こさせるＲＡＦの変異
が未調整の触媒活性を示すＲＡＦ分子を誘導するので、ＲＡＦの阻害剤により、
このような細胞を癌に導く細胞増殖を減少または停止させることすらできる。

【０１３６】 本発明の方法では、細胞内でプロテインキナーゼＲＡＦの機能を変性する化合
物を検出できる。ＲＡＦはプロテインキナーゼ（ＭＥＫ）をリン酸化し、更にこ
れがマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）をリン酸化する。ＲＡ
ＦによるＭＥＫのリン酸化のみを監視するアッセイは、ＭＥＫのリン酸化レベル
が有意でないため、感度が低い。この感度に関するジレンマを克服するために、
本発明のアッセイにおいて、ＭＥＫおよびＭＡＰＫの両方をリン酸化する。ＭＡ
ＰＫリン酸化シグナルはＭＥＫリン酸化シグナルを増幅し、酵素結合イムノソル
ベントアッセイにおいて、ＲＡＦ依存性のリン酸化が可能になる。更に本発明の
アッセイは有利に高処理フォーマットで実施され、多くの化合物を短時間で迅速
に監視できる。

【０１３７】 本発明の方法により、ＲＡＦプロテインキナーゼの機能を阻害する化合物が同
定される。これらの化合物は、アザベンズイミダゾールを基礎とする誘導体であ
る。アザベンズイミダゾールを基礎とする誘導体は、バクテリアにおけるヌクレ
オチド合成に関連する酵素に対する阻害能力を試験されてきたにもかかわらず、
プロテインキナーゼ阻害に関しては、前記化合物の多くがいまだにほとんど検討
されていなかった。

【０１３８】 ＲＡＦが、その他のセリン／トレオニンプロテインキナーゼと有意なアミノ酸
相同性を示すので、本発明のアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物は、Ｒ
ＡＦ以外のセリン／トレオニンプロテインキナーゼを同様に阻害する。従って、
本発明の方法はまた、受容体型および非受容体型セリン／トレオニンプロテイン
キナーゼを含む、ＲＡＦ以外のセリン／トレオニンプロテインキナーゼに関する
ものでもある。

【０１３９】 本発明の方法が有する高処理の態様により、様々な分子を短期間に試験するこ
とができるので、本発明の方法は、細胞中でＲＡＦ機能を変性するその他の化合
物にも関連するものでもある。従って、本発明の方法は、本発明の明細書に記載
されていない、ＳＴＫ機能を変性する実存分子も同定できる。

【０１４０】 Ｉ．アザベンズイミダゾールを基礎とする化合物の生物的活性 本発明のアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物を、ＲＡＦプロテインキ
ナーゼ機能を阻害する該化合物の能力を試験した。生物学的アッセイおよびそれ
らの阻害研究の結果は、本明細書中で報告されている。プロテインキナーゼ機能
のアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物の変性を測定するのに使用される
方法は、該方法の高い処理量の態様に関して、１９９６年８月２３日に提出され
た、Tang他による、“Indolinone Combinatorial Libraries and Related Produ
cts and Methods for the Treatment of Disease”(Lyon & Lyon Docket No. 22
1/187)という名称の米国特許出願第０８／７０２２３２号に記載されているもの
に類似している。該特許出願第０８／７０２２３２号は、いずれの図面を含めて
、全体として参照により本明細書中に組み込まれている。

【０１４１】 ＩＩ． アザベンズイミダゾールを基礎とする化合物により治療すべき標的の 疾患 本明細書中に記載されている方法、化合物および製薬学的組成物は、ＲＡＦプ
ロテインキナーゼの機能を変性させることによる細胞増殖性疾患を阻害するよう
に設計されている。増殖性疾患は、結果として生物にとって有害となる多細胞生
物中の細胞の１つまたはそれ以上のサブセットの望ましくない細胞増殖という結
果になる。また、本明細書中に記載されている方法、化合物および製薬学的組成
物は、生物における他の疾患、例えば早発性細胞死（即ち、神経疾患）または炎
症に関連する疾患の治療および予防に有用であることもある。これらの疾患は、
不適切に機能するＲＡＦ分子の結果または不適切に機能するＲＡＦに関連するプ
ロテインキナーゼ分子の結果であることもある。

【０１４２】 ＲＡＦプロテインキナーゼまたはＲＡＦに関連するプロテインキナーゼの機能
の変性は、特定の疾患において明らかに増大されるかまたは減少される細胞増殖
状態をくこともある。異常型の細胞増殖状態には、癌、線維症、メサンギウムの
疾患、異常な血管形成および脈管形成、創傷治癒、乾癬、再狭窄および炎症が含
まれる。

【０１４３】 線維症は、細胞−細胞外マトリクスの異常形成に関連している。線維症の一例
は、肝硬変である。肝硬変は、肝臓瘢痕の形成によりもたらされる細胞外マトリ
クス構成成分の増大した濃度により特徴付けられる。肝硬変は、肝臓の硬変症の
ような疾患を引き起こすことがある。

【０１４４】 メサンギウム細胞増殖性疾患は、メサンギウム細胞の異常増殖のために起こる
。メサンギウム増殖性疾患には、様々なヒトの腎臓病、例えば糸球体腎炎、糖尿
病性ネフロパシー、悪性腎硬化症、血栓性細小血管障害症候群、移植の拒絶反応
および糸球体症が含まれる。

【０１４５】 本発明による方法および化合物により処理されることのできる好ましい種類の
癌は、肺癌、卵巣癌、乳癌、脳癌、悪性内軸性脳腫瘍、大腸癌、前立腺癌、カポ
ジ肉腫、黒色腫および神経膠腫である。本発明による方法および化合物が、効果
的に、癌細胞の増殖を止め、かつ逆転させるのに利用できるという証拠は、参照
により本発明の明細書中で提供される。

【０１４６】 血管形成および脈管形成の疾患は、血管の過剰増殖から生じる。血管増殖は、
多様な通常の生理学的過程、例えば胚発生、黄体形成、創傷治癒および器官再生
において必要である。しかしながら、血管増殖は、また悪性腫瘍の発育にも重要
である。血管増殖性疾患の他の例には、新しい毛細血管が関節に侵入し、かつ軟
骨を破壊する場合の関節炎が含まれる。その上、血管増殖性疾患は、眼病、例え
ば、網膜中の新しい毛細血管が硝子体、鼻に侵入し、失明をもたらす場合の糖尿
病性網膜症を含む。逆に、血管の収縮、萎縮または閉鎖、例えば再狭窄に関連す
る疾患は、また、プロテインキナーゼの反対の作用の調節にも関与している。

【０１４７】 更に、脈管形成および血管形成は、悪性充実性腫瘍の成長および転移に付随す
る。活発に成長する悪性腫瘍は、成長を続けるために補給される栄養および酸素
に富んだ血液を必要とする。結果として、異常に多数の毛細血管がしばしば腫瘍
とともに成長し、かつ腫瘍への補給線として作用する。腫瘍に栄養を補給するこ
とに加えて、腫瘍中に包埋された新しい血管は、腫瘍細胞の血液循環に入り、か
つ生物中の遠隔部位に転移するための出入口を提供する。Folkman,1990, J. Nat
l. Cancer Inst. 82: 4〜6。

【０１４８】 不適切なＲＡＦ活性は、細胞増殖性疾患を刺激することがある。ＲＡＦプロテ
インキナーゼの機能を変性するように特異的に設計された分子は、細胞増殖を阻
害することが示されている。殊に、伝令ＲＮＡをエンコードするＲＡＦプロテイ
ンキナーゼおよびこの伝令からのブロック翻訳の双方に結合するように設計され
たアンチセンス核酸分子が、有効的に、試験管内でＡ５４９細胞の形質転換を逆
転させた。Monia他, 1996, Nature Medicine 2: 688は、全ての図および表を含 めて、全体において参照により本明細書中に組み込まれている。Ａ５４９細胞は
、ヒトの悪性細胞である。

【０１４９】 これらのＲＡＦの標的とするアンチセンス研究により、ＲＡＦプロテインキナ
ーゼの機能を変性すさせる本発明のアザベンズイミダゾール分子が、生物中の悪
性細胞の増殖を止めることができ、かつ同様に逆転させることができる証拠が提
供される。これらのアザベンズイミダゾール化合物は、例により本明細書中で提
供される試験管内の方法において試験できる。更に、アザベンズイミダゾール化
合物は、例により本明細書中で提供される異種移植法により生体内で腫瘍細胞へ
のこれらの効果について試験できる。

【０１５０】 不適切なＲＡＦ活性が、特別な種類の細胞の望ましくない細胞増殖を刺激する
ことのできる少なくとも２つの方法が存在する：（１）特別な細胞の成長を直接
的に刺激するか、または（２）特別な領域、例えば腫瘍組織の血管新生を増大さ
せ、それにより組織の増殖を簡単にする。

【０１５１】 本発明の使用は、細胞増殖性疾患がＲＡＦにより推進されるかどうかを最初に
確認することにより簡単にされる。１度そのような異常が確認されると、そのよ
うな異常に苦しむ患者は、従来技術に精通した医師または獣医師に十分公知であ
る方法を用いてそれらの症状の分析により確認されることができる。ついで、そ
のような患者は、本明細書中に記載されているようにして処置されることができ
る。

【０１５２】 細胞増殖性疾患がＲＡＦにより推進されるかどうかの決定は、細胞中または患
者の体内の特定部位中に生じるＲＡＦ活性の水準を最初に測定することにより達
成できる。例えば、癌細胞の場合には、１つまたはそれ以上のＲＡＦ活性の水準
は、非ＲＡＦ推進癌とＲＡＦ推進癌とについて比較できる。癌細胞が、ＲＡＦ推
進癌よりも高い水準のＲＡＦ活性、有利にＲＡＦ推進癌と等しいかまたはそれよ
り高い水準のＲＡＦ活性を有する場合には、この癌細胞は、本発明の前記のＲＡ
Ｆを変性させる方法および化合物を用いた処置のための候補である。

【０１５３】 非癌細胞の望ましくない増殖のために生じる細胞増殖性疾患の場合には、ＲＡ
Ｆ活性の水準は、一般的な個体数中で生じるその水準と比較される（例えば、ヒ
トまたは動物の一般的な個体数中に生じる平均水準、ただし、細胞増殖性疾患に
苦しむヒトまたは動物のものは除く）。望ましくない細胞増殖性疾患が、一般的
な個体数中に生じるよりも高いＲＡＦ水準により特徴付けられる場合には、つい
で、疾患は、本発明の前記のＲＡＦを変性させる方法および化合物を用いた処置
の候補である。

【０１５４】 ＩＩＩ．アザベンズイミダゾールを基礎とする化合物の製薬学的組成物および 投与 化合物の医薬品を製造する方法、患者に投与すべき化合物の量を決定する方法
および生物に化合物を投与する方式は、１９９６年８月２３日に提出された、Ta
ng他による、“Indolinone Combinatorial Libraries and Related Products an
d Methods for the Treatment of Disease”(Lyon & Lyon Docket No. 221/187)
という名称がつけられている米国特許出願第０８／７０２２３２号および１９９
６年８月１日に公表された、Buzzetti他による、“Hydrosoluble 3-Arylidene-2
-Oxindole Derivatives as Tyrosine Kinase Inhibitors”という名称がつけら れている国際特許出願公表番号ＷＯ９６／２２９７６に開示されており、これら
双方とも、それぞれの図面を含めて、全体として参照により本明細書中に組み込
まれている。当業者には、そのような記載が本発明に適用可能であり、本発明に
簡単に適応させることができることが明かである。

【０１５５】 実施例 以下の実施例は、制限するものではなく、かつ単に、本発明の多様な態様およ
び特徴の典型例であるに過ぎない。これらの例には、本発明の化合物を合成する
ための方法およびＲＡＦプロテインキナーゼの機能に関連して化合物への作用を
測定する方法が記載されている。

【０１５６】 本方法において使用される細胞は、商業的に入手可能である。また、細胞によ
り収容される核酸ベクターは、商業的に入手可能であり、多様なプロテインキナ
ーゼの遺伝子配列は、配列データバンクにおいて簡単に入手可能である。従って
、当業者には、商業的に入手可能な細胞、商業的に入手可能な核酸ベクターおよ
び当業者には簡単に入手可能な技術を用いたプロテインキナーゼ遺伝子を組み合
わせることにより、適当な方法で、細胞株を簡単に再現することができる。

【０１５７】 例１：本発明のアザベンズイミダゾール化合物の合成手順 この場合、本発明は、以下の制限されない例において説明され、その際、他に
記載されていない限り： （ｉ）蒸発を、真空下での回転蒸発により実施し； （ｉｉ）操作を、不活性ガス、例えば窒素の雰囲気下に実施し； （ｉｉｉ）高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を、E. Merck、Darms tadt、Germanyから得られるMerck LiChrosorb RP-18逆相シリ カ上で実施し； （ｉｖ）収率は、説明のためのみ記載されるのであり、到達可能な最大値である 必要はなく； （ｖ）融点は厳密なものではなく、かつHWS Mainz SG 2000デジタル融点測 定装置を用いて測定し； （ｖｉ）本発明の式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの全ての化合物の構造を、Bruker A MX500-NMR分光分析計によるプロトン核磁気共鳴分光分析、元素微量 分析、特別な場合には質量分析により同定し； （ｖｉｉ）構造の純度を、シリカゲル（Merck Silica Gel 60 F254）を用い た薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によるか、またはＨＰＬＣにより 実施し；ならびに （ｖｉｉｉ）中間体を一般に完全には特性決定せず、純度を薄層クロマトグラフ ィー（ＴＬＣ）によるか、またはＨＰＬＣにより評価した。

【０１５８】 合成手順 化合物Ａ−９０： ２−メトキシカルボニルアミノ−（６−フェニルメルカプ
ト−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン ２−アミノ−３−ニトロ−６−（フェニルメルカプト）ピリジンを、２−プロ
パノール（１５００ｍｌ）中の２−アミノ−６−クロロ−３−ニトロピリジン（
８４．０ｇ、０．４８４モル）およびナトリウムチオフェノラート(Fluka)（７ ２．０ｇ、０．５４５モル）を還流下に２時間加熱することにより製造した。室
温に冷却した後に、懸濁液を水（１００ｍｌ）で希釈し、固体を真空濾過により
捕集し、水および２−プロパノールで洗浄し、５０℃で真空下に乾燥させて２−
アミノ−３−ニトロ−６−（フェニルメルカプト）ピリジン１０９．１ｇ（９５
％収率）、融点１４８〜１５２℃を得た。

【０１５９】 ２，３−ジアミノ−６−（フェニルメルカプト）ピリジンを、２−アミノ−３
−ニトロ−６−（フェニルメルカプト）ピリジン（１０７．１ｇ、０．４３３モ
ル）を５気圧（５．０６５×１０⁵Ｐａ）のＨ₂下で２−プロパノール１２００ｍ
ｌ中でラネー−Ｎｉ ３０ｇの存在下に７０℃で水素添加することにより製造し
た。４時間後（水素２９．１ ｌ）、反応混合物を、連続的に撹拌しながら４℃
に冷却した。沈澱物を真空濾過により捕集し、２−プロパノールで洗浄し、５０
℃で真空下に乾燥させた。組み合わせた濾液を、減圧下に濃縮し、２−プロパノ
ールから再結晶させた。ＴＨＦ １０００ｍｌで２回、水素添加装置を洗浄し、
減圧下に蒸発させ、２−プロパノールから再結晶させ、沈澱物を捕集し、真空下
に乾燥させて２，３−ジアミノ−６−（フェニルメルカプト）ピリジン８０．４
ｇ（収率８７．１％）、融点１１９〜１２２℃を得た。

【０１６０】 ２−メトキシカルボニルアミノ−６−フェニルメルカプト−３Ｈ−イミダゾ［
４，５−ｂ］ピリジンを、温度を２０℃未満に保ちながら、クロロギ酸メチル（
３４ｍｌ、０．４４モル）を水６８ｍｌ中の硫酸Ｓ−メチルイソチオウロニウム
（５３ｇ、０．１９モル）(Aldrich)の冷たい（５〜１５℃）溶液に滴加するこ とにより製造した。その後、水酸化ナトリウム水溶液（１１６ｇ、２５％ＮａＯ
Ｈ）を、注意深く添加すると、白色沈澱が生じた。２０分後、水（２１０ｍｌ）
を添加し、ｐＨを酢酸（氷酢酸、３４ｍｌ）で４．０に調節した。この混合物に
、エタノール２１０ｍｌ中の２，３−ジアミノ−６−（フェニルメルカプト）ピ
リジン（３７．８ｇ、０．１７４モル）の溶液を滴加し、８５〜９０℃で２時間
加熱した。反応混合物を一晩に亘り冷却した後に、沈澱物を濾過により単離し、
温水（１０００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ、酢酸およびエタノールから４℃で再
結晶させた。沈澱物を濾過により捕集し、メタノールで洗浄し、真空下に５０℃
で乾燥させて２−メトキシカルボニルアミノ−６−フェニルメルカプト−３Ｈ−
イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン３０ｇ（収率５７．４％）、融点２６９〜２７
４℃（分解）を得た。

【０１６１】 化合物Ａ−３： ２−メトキシカルボニルアミノ−（６−フェノキシ−３Ｈ−
イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 例Ａ−９０において、ナトリウムチオフェノラートの代わりにナトリウムフェ
ノラートに置き換えることにより、同一の方法で、２−メトキシカルボニルアミ
ノ−（６−フェノキシ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン、融点＞２８０
℃（分解）が得られた。

【０１６２】 化合物Ａ−４： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−フェノキシ−３Ｈ−イ
ミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 例Ａ−３において、クロロギ酸メチルの代わりにクロロギ酸エチルに置き換え
ることにより、同一の方法で、２−エトキシカルボニルアミノ−（６−フェノキ
シ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン、融点＞２８０℃（分解）が得られ
た。

【０１６３】 化合物Ａ−１： ２−オキソ−６−フェノキシ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ
］ピリジン Ｏ−メチルイソ尿素を、例Ａ−３における硫酸Ｓ−メチルイソチオウロニウム
とクロロギ酸メチルの反応生成物の代わりに、２，３−ジアミノ−６−（フェニ
ルメルカプト）ピリジンと直接反応させることにより、同一の方法で、２−オキ
ソ−（６−フェノキシ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン、融点２７７〜
２７８℃が得られた。

【０１６４】 化合物Ａ−２： ２−オキソ−６−フェニルメルカプト−３Ｈ−イミダゾ［４
，５−ｂ］ピリジン 例Ａ−１におけるナトリウムフェノラートの代わりに、ナトリウムチオフェノ
ラートに置き換えることにより、同一の方法で、２−オキソ−（６−フェニルメ
ルカプト−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン、融点２５３〜２５４℃が得
られた。

【０１６５】 化合物Ａ−５〜Ａ−２５： 例Ａ−１におけるナトリウムフェノラートの代わりに適当なフェノラートを用
いることにより、同一の方法で次の例が得られる。例Ａ−２３、Ａ−２４および
Ａ−２５については、カルボキシ基をメチル、エチル、ベンジル、ｔ−ブチルま
たは他の適したエステルにより保護させ、ついで最後の段階で脱保護して化合物
を得た。

【０１６６】 Ａ−５： ２−オキソ−６−（２−ニトロフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［４，
５−ｂ］ピリジン Ａ−６： ２−オキソ−６−（３−ニトロフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［４，
５−ｂ］ピリジン Ａ−７： ２−オキソ−６−（４−ニトロフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［４，
５−ｂ］ピリジン Ａ−８： ２−オキソ−６−（２−クロロフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［４，
５−ｂ］ピリジン Ａ−９： ２−オキソ−６−（３−クロロフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［４，
５−ｂ］ピリジン Ａ−１０： ２−オキソ−６−（４−クロロフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［４
，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１： ２−オキソ−６−（２−メチルフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［４
，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２： ２−オキソ−６−（３−メチルフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［４
，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３： ２−オキソ−６−（４−メチルフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［４
，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４： ２−オキソ−６−（２−フルオロフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［
４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５： ２−オキソ−６−（３−フルオロフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［
４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６： ２−オキソ−６−（４−フルオロフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［
４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７： ２−オキソ−６−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−３
Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８： ２−オキソ−６−［３−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−３
Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９： ２−オキソ−６−［４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−３
Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−２０： ２−オキソ−６−（２−メトキシフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［
４，５−ｂ］ピリジン Ａ−２１： ２−オキソ−６−（３−メトキシフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［
４，５−ｂ］ピリジン Ａ−２２： ２−オキソ−６−（４−メトキシフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ［
４，５−ｂ］ピリジン Ａ−２３： ２−オキソ−６−（２−カルボキシフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−２４： ２−オキソ−６−（３−カルボキシフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−２５： ２−オキソ−６−（４−カルボキシフェノキシ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン 化合物Ａ−２６〜Ａ−４６ 例Ａ−２におけるナトリウムチオフェノラートの代わりに適当なチオフェノラ
ートを用いることにより、同一の方法で次の例が得られる。例Ａ−４４、Ａ−４
５およびＡ−４６については、カルボキシ基をメチル、エチル、ベンジル、ｔ−
ブチルまたは他の適したエステルにより保護させ、ついで最後の段階で脱保護し
て化合物を得た。

【０１６７】 Ａ−２６： ２−オキソ−６−（２−ニトロフェニルメルカプト）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−２７： ２−オキソ−６−（３−ニトロフェニルメルカプト）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−２８： ２−オキソ−６−（４−ニトロフェニルメルカプト）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−２９： ２−オキソ−６−（２−クロロフェニルメルカプト）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３０： ２−オキソ−６−（３−クロロフェニルメルカプト）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３１： ２−オキソ−６−（４−クロロフェニルメルカプト）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３２： ２−オキソ−６−（２−メチルフェニルメルカプト）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３３： ２−オキソ−６−（３−メチルフェニルメルカプト）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３４： ２−オキソ−６−（４−メチルフェニルメルカプト）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３５： ２−オキソ−６−（２−フルオロフェニルメルカプト）−３Ｈ−イ
ミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３６： ２−オキソ−６−（３−フルオロフェニルメルカプト）−３Ｈ−イ
ミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３７： ２−オキソ−６−（４−フルオロフェニルメルカプト）−３Ｈ−イ
ミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３８： ２−オキソ−６−［２−（トリフルオロメチル）フェニルメルカプ
ト］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−３９： ２−オキソ−６−［３−（トリフルオロメチル）フェニルメルカプ
ト］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−４０： ２−オキソ−６−［４−（トリフルオロメチル）フェニルメルカプ
ト］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−４１： ２−オキソ−６−（２−メトキシフェニルメルカプト）−３Ｈ−イ
ミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−４２： ２−オキソ−６−（３−メトキシフェニルメルカプト）−３Ｈ−イ
ミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−４３： ２−オキソ−６−（４−メトキシフェニルメルカプト）−３Ｈ−イ
ミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−４４： ２−オキソ−６−（２−カルボキシフェニルメルカプト）−３Ｈ−
イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−４５： ２−オキソ−６−（３−カルボキシフェニルメルカプト）−３Ｈ−
イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−４６： ２−オキソ−６−（４−カルボキシフェニルメルカプト）−３Ｈ−
イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 化合物Ａ−４７〜Ａ−６８ 例Ａ−１におけるナトリウムフェノラートの代わりに適当なアニリン塩を用い
ることにより、同一の方法で次の例が得られる。例Ａ−６６、Ａ−６７およびＡ
−６８については、カルボキシ基をメチル、エチル、ベンジル、ｔ−ブチルまた
は他の適したエステルにより保護させ、ついで最後の段階で脱保護して化合物を
得た。

【０１６８】 Ａ−４７： ２−オキソ−６−フェニルアミノ−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ
］ピリジン Ａ−４８： ２−オキソ−６−（２−ニトロフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−４９： ２−オキソ−６−（３−ニトロフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５０： ２−オキソ−６−（４−ニトロフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５１： ２−オキソ−６−（２−クロロフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５２： ２−オキソ−６−（３−クロロフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５３： ２−オキソ−６−（４−クロロフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５４： ２−オキソ−６−（２−メチルフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５５： ２−オキソ−６−（３−メチルフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５６： ２−オキソ−６−（４−メチルフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダゾ
［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５７： ２−オキソ−６−（２−フルオロフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダ
ゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５８： ２−オキソ−６−（３−フルオロフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダ
ゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−５９： ２−オキソ−６−（４−フルオロフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダ
ゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−６０： ２−オキソ−６−［２−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ］
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−６１： ２−オキソ−６−［３−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ］
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−６２： ２−オキソ−６−［４−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ］
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−６３： ２−オキソ−６−（２−メトキシフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダ
ゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−６４： ２−オキソ−６−（３−メトキシフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダ
ゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−６５： ２−オキソ−６−（４−メトキシフェニルアミノ）−３Ｈ−イミダ
ゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−６６： ２−オキソ−６−（２−カルボキシフェニルアミノ）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−６７： ２−オキソ−６−（３−カルボキシフェニルアミノ）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−６８： ２−オキソ−６−（４−カルボキシフェニルアミノ）−３Ｈ−イミ
ダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 化合物Ａ−６９〜Ａ−８９ 例Ａ−３におけるナトリウムフェノラートの代わりに適当なフェノラートを用
いることにより、同一の方法で次の例が得られる。例Ａ−８７、Ａ−８８および
Ａ−８９については、カルボキシ基をメチル、エチル、ベンジル、ｔ−ブチルま
たは他の適したエステルにより保護させ、ついで最後の段階で脱保護して化合物
を得た。

【０１６９】 Ａ−６９： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−ニトロフェノキシ）−
３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７０： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−ニトロフェノキシ）−
３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７１： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−ニトロフェノキシ）−
３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７２： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−クロロフェノキシ）−
３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７３： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−クロロフェノキシ）−
３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７４： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−クロロフェノキシ）−
３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７５： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−メチルフェノキシ）−
３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７６： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−メチルフェノキシ）−
３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７７： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−メチルフェノキシ）−
３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７８： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−フルオロフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−７９： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−フルオロフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８０： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−フルオロフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８１： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−［２−（トリフルオロメチル
）フェノキシ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８２： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−［３−（トリフルオロメチル
）フェノキシ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８３： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−［４−（トリフルオロメチル
）フェノキシ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８４： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−メトキシフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８５： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−メトキシフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８６： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−メトキシフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８７： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−カルボキシフェノキシ
）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８８： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−カルボキシフェノキシ
）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−８９： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−カルボキシフェノキシ
）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 化合物Ａ−９１〜Ａ−１１１ 例Ａ−９０におけるナトリウムチオフェノラートの代わりに適当なチオフェノ
ラートを用いることにより、同一の方法で次の例が得られる。例Ａ−１０９、Ａ
−１１０およびＡ−１１１については、カルボキシ基をメチル、エチル、ベンジ
ル、ｔ−ブチルまたは他の適したエステルにより保護させ、ついで最後の段階で
脱保護して化合物を得た。

【０１７０】 Ａ−９１： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−ニトロフェニルメルカ
プト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−９２： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−ニトロフェニルメルカ
プト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−９３： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−ニトロフェニルメルカ
プト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−９４： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−クロロフェニルメルカ
プト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−９５： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−クロロフェニルメルカ
プト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−９６： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−クロロフェニルメルカ
プト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−９７： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−メチルフェニルメルカ
プト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−９８： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−メチルフェニルメルカ
プト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−９９： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−メチルフェニルメルカ
プト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１００： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−フルオロフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１０１： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−フルオロフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１０２： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−フルオロフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１０３： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−［２−（トリフルオロメチ
ル）フェニルメルカプト］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１０４： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−［３−（トリフルオロメチ
ル）フェニルメルカプト］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１０５： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−［４−（トリフルオロメチ
ル）フェニルメルカプト］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１０６： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−メトキシフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１０７： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−メトキシフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１０８： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−メトキシフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１０９： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−カルボキシフェニル
メルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１０： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−カルボキシフェニル
メルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１１： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−カルボキシフェニル
メルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 化合物Ａ−１１２〜Ａ−１３３ 例Ａ−３におけるナトリウムフェノラートの代わりに適当なアニリン塩を用い
ることにより、同一の方法で次の例が得られる。例Ａ−１３１、Ａ−１３２およ
びＡ−１３３については、カルボキシ基をメチル、エチル、ベンジル、ｔ−ブチ
ルまたは他の適したエステルにより保護させ、ついで最後の段階で脱保護して化
合物を得た。

【０１７１】 Ａ−１１２： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−フェニルアミノ−３Ｈ−イ
ミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１３： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−ニトロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１４： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−ニトロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１５： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−ニトロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１６： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−クロロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１７： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−クロロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１８： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−クロロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１１９： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−メチルフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２０： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−メチルフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２１： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−メチルフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２２： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−フルオロフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２３： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−フルオロフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２４： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−フルオロフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２５： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−［２−（トリフルオロメチ
ル）フェニルアミノ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２６： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−［３−（トリフルオロメチ
ル）フェニルアミノ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２７： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−［４−（トリフルオロメチ
ル）フェニルアミノ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２８： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−メトキシフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１２９： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−メトキシフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３０： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−メトキシフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３１： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（２−カルボキシフェニル
アミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３２： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（３−カルボキシフェニル
アミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３３： ２−メトキシカルボニルアミノ−６−（４−カルボキシフェニル
アミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 化合物Ａ−１３４〜Ａ−１５４ 例Ａ−４におけるナトリウムフェノラートの代わりに適当なフェノラートを用
いることにより、同一の方法で次の例が得られる。例Ａ−１５２、Ａ−１５３お
よびＡ−１５４については、カルボキシ基をメチル、エチル、ベンジル、ｔ−ブ
チルエステルまたは他の適したエステルにより保護させ、ついで最後の段階で脱
保護して化合物を得た。

【０１７２】 Ａ−１３４： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−ニトロフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３５： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−ニトロフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３６： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−ニトロフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３７： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−クロロフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３８： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−クロロフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１３９： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−クロロフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４０： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−メチルフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４１： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−メチルフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４２： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−メチルフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４３： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−フルオロフェノキシ
）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４４： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−フルオロフェノキシ
）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４５： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−フルオロフェノキシ
）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４６： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−［２−（トリフルオロメチ
ル）フェノキシ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４７： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−［３−（トリフルオロメチ
ル）フェノキシ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４８： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−［４−（トリフルオロメチ
ル）フェノキシ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１４９： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−メトキシフェノキシ
）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５０： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−メトキシフェノキシ
）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５１： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−メトキシフェノキシ
）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５２： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−カルボキシフェノキ
シ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５３： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−カルボキシフェノキ
シ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５４： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−カルボキシフェノキ
シ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 化合物Ａ−１５５〜Ａ−１７６ 例Ａ−４におけるナトリウムフェノラートの代わりに適当なチオフェノラート
を用いることにより、同一の方法で次の例が得られる。例Ａ−１７４、Ａ−１７
５およびＡ−１７６については、カルボキシ基をメチル、エチル、ベンジル、ｔ
−ブチルまたは他の適したエステルにより保護させ、ついで最後の段階で脱保護
して化合物を得た。

【０１７３】 Ａ−１５５： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−フェニルメルカプト−３Ｈ
−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５６： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−ニトロフェニルメル
カプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５７： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−ニトロフェニルメル
カプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５８： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−ニトロフェニルメル
カプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１５９： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−クロロフェニルメル
カプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６０： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−クロロフェニルメル
カプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６１： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−クロロフェニルメル
カプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６２： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−メチルフェニルメル
カプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６３： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−メチルフェニルメル
カプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６４： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−メチルフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６５： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−フルオロフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６６： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−フルオロフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６７： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−フルオロフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６８： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−［２−（トリフルオロメチ
ル）フェニルメルカプト］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１６９： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−［３−（トリフルオロメチ
ル）フェニルメルカプト］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７０： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−［４−（トリフルオロメチ
ル）フェニルメルカプト］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７１： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−メトキシフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７２： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−メトキシフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７３： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−メトキシフェニルメ
ルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７４： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−カルボキシフェニル
メルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７５： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−カルボキシフェニル
メルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７６： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−カルボキシフェニル
メルカプト）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 化合物Ａ−１７７〜Ａ−１９８ 例Ａ−４におけるナトリウムフェノラートの代わりに適当なアニリン塩を用い
ることにより、同一の方法で次の例が得られる。例Ａ−１９６、Ａ−１９７およ
びＡ−１９８については、カルボキシ基をメチル、エチル、ベンジル、ｔ−ブチ
ルまたは他の適したエステルにより保護させ、ついで最後の段階で脱保護して化
合物を得た。

【０１７４】 Ａ−１７７： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−フェニルアミノ−３Ｈ−イ
ミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７８： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−ニトロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１７９： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−ニトロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８０： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−ニトロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８１： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−クロロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８２： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−クロロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８３： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−クロロフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８４： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−メチルフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８５： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−メチルフェニルアミ
ノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８６： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−メチルフェノキシ）
−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８７： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−フルオロフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８８： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−フルオロフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１８９： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−フルオロフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９０： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−［２−（トリフルオロメチ
ル）フェニルアミノ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９１： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−［３−（トリフルオロメチ
ル）フェニルアミノ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９２： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−［４−（トリフルオロメチ
ル）フェニルアミノ］−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９３： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−メトキシフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９４： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−メトキシフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９５： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−メトキシフェニルア
ミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９６： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（２−カルボキシフェニル
アミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９７： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（３−カルボキシフェニル
アミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン Ａ−１９８： ２−エトキシカルボニルアミノ−６−（４−カルボキシフェニル
アミノ）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン 例２：ＲＡＦのリン酸化機能の測定に関するアッセイ 以下のアッセイは、ＲＡＦの標的タンパク質であるＭＥＫ並びにＭＥＫの標的
であるＭＡＰＫの、ＲＡＦ−触媒作用されたリン酸化量を調べるものである。Ｒ
ＡＦ遺伝子配列は、Bonner他、1985、Molec. Cell. Biol. 5：1400〜1407中に記
載されており、同義遺伝子配列データバンクから容易に入手できる。本発明のこ
の部分で使用する核酸ベクターの構成および細胞株は全て、Morrison等の文献（
1988、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85：8855〜8859）に記載されている。

【０１７５】 材料および試薬 １． ｓｆ９（spodoptera frugiperda）細胞：GIBCO-BRL、Gaithersburg、Ｍ
Ｄ ２． ＲＩＰＡバッファー： Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ２０ｍＭ ｐＨ７．４、Ｎ ａＣｌ １３７ｍＭ、１０％グリセロール、ＰＭＳＦ １ｍＭ、アプロテニン
５ｍｇ／Ｌ、０．５％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００； ３． チオレドキシン−ＭＥＫ融合タンパク質（Ｔ−ＭＥＫ）：Ｔ−ＭＥＫの
発現およびアフィニティークロマトグラフィーによる精製は、製造者の方法に従
って実施した。カタログ番号Ｋ３５０−０１およびＲ３５０−４０、Invitrogen
Crop.、San Diego、CA ４． Ｈｉｓ−ＭＡＰＫ（ＥＲＫ２）；Ｈｉｓ−標識ＭＡＰＫを、Ｈｉｓ−Ｍ
ＡＰＫをコードするｐＵＣ１８ベクターで形質転換したＸＬ１Ｂｌｕｅ細胞中で
、発現させた。Ｈｉｓ−ＭＡＰＫをＮｉ−アフィニティークロマトグラフィーに
より精製した。明細書に記載するように、カタログ番号は２７−４９４９−０１
（Pharmacia、Almeda、CA）である。

【０１７６】 ５． ヒツジ抗マウスＩｇＧ：Jackson laboratories、West Grove、PA。カタ
ログ番号５１５−００６−００８、ロット番号２８５６３。

【０１７７】 ６． ＲＡＦ−１プロテインキナーゼ特異的抗体：ＵＢＩからのＵＲＰ２６５
３。

【０１７８】 ７． コーティングバッファー：ＰＢＳ；リン酸塩緩衝生理食塩水、GIBCO-BR
L、Gaithersburg、MD。

【０１７９】 ８． 洗浄バッファー：ＴＢＳＴ−５０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ７．２
、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００。

【０１８０】 ９． ブロックバッファー：ＴＢＳＴ、０．１％ エタノールアミン ｐＨ７
．４。

【０１８１】 １０． ＤＭＳＯ、Sigma、St. Louis、MO。

【０１８２】 １１． キナーゼバッファー（ＫＢ）：Ｈｅｐｅｓ／ＨＣｌ ２０ｍＭ ｐＨ
７．２、ＮａＣｌ １５０ｍＭ、０．１％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ＰＭＳＦ
１ｍＭ、アプロテニン ５ｍｇ／Ｌ、オルトバナジン酸ナトリウム ７５ｍ Ｍ、ＤＴＴ ０．５ｍＭおよびＭｇＣｌ₂ １０ｍＭ。

【０１８３】 １２． ＡＴＰミックス： ＭｇＣｌ₂ １００ｍＭ、ＡＴＰ ３００ｍＭ、１
０ｍＣｉ ｇ−³³ＰＡＴＰ（Dupont-NEN）／ｍＬ。

【０１８４】 １３． 停止液：１％ リン酸；Fisher、Pittsburgh、PA。

【０１８５】 １４． ウォレスリン酸セルロースフィルターマット；Wallac、Turku、Finnl
and。

【０１８６】 １５． フィルター洗浄液：１％ リン酸、Fisher、Pittsburgh、PA。

【０１８７】 １６． トムテックプレートハーベスター、Wallac、Turku、Finnland。

【０１８８】 １７． ウォレスベータプレートリーダー＃１２０５、Wallac、Truku、Finnl
and。

【０１８９】 １８． 配布の科学カタログ番号AS-７２０９２の化合物用ＮＵＮＣ９６穴Ｖ
底ポリプロピレンプレート。

【０１９０】 方法 特記しない限り、以下の工程を全て室温で実施した。

【０１９１】 １． ＥＬＩＺＡプレートのコーティング：ＥＬＩＺＡのウェルを、ヒツジ抗
マウス親和性精製抗血清（コーティングバッファー１００ｍＬ中に１ｍｇを含有
）１００ｍＬにより、４℃で一晩かけて被覆する。ＥＬＩＺＡプレートは、４℃
で保存すれば２週間使用できる。

【０１９２】 ２． プレートを逆さまにして液体を除去する。ブロック溶液１００ｍＬを添
加し、３０分間恒温保持する。

【０１９３】 ３． ブロック溶液を除去し、洗浄バッファーで４回洗浄する。ペーパータオ
ルでプレートから余分な液体を拭き取る。

【０１９４】 ４． ＲＡＦ−１に特異性抗体１ｍｇを各ウェルに入れ、１時間恒温保持する
。工程３の記載のようにして洗浄する。

【０１９５】 ５． ＲＡＳ／ＲＡＦ感染ｓｆ９細胞由来の細胞溶解液を解凍し、ＴＢＳＴで
希釈して１０ｍｇ／１００ｍＬとする。希釈した細胞溶解液１０ｍｇをウェルに
入れ、１時間恒温保持する。恒温保持の間、プレートを振盪させる。ネガティブ
コントロールには細胞溶解液を与えない。ＲＡＳ／ＲＡＦ感染ｓｆ９細胞由来の
細胞溶解液を、組換えバキュロウイルスにより各ウイルス当たり感染多重度５で
細胞を感染させ、次いで４８時間培養した後に製造する。この細胞をＰＢＳで１
回洗浄し、ＲＩＰＡバッファー中で溶解させる。不溶性材料を遠心分離（１００
００×ｇで５分間）により除去する。細胞溶解液のアリコートをドライアイス／
エタノール中で凍結させ、使用するまで−８０℃で保存する。

【０１９６】 ６． 非結合材料を除去し、前記の要領で洗浄する（工程３）。

【０１９７】 ７． 各ウェルにＴ−ＭＥＫ２ｍｇおよびＨｉｓ−ＭＡＥＰＫ２ｍｇを入れ、
キナーゼバッファーを用いて容量を４０ｍＬに調整する。細胞抽出物からＴ−Ｍ
ＥＫおよびＭＡＰＫを精製する方法を実施例より明細書中に示す。

【０１９８】 ８． 化合物（保存溶液１０ｍｇ／ｍＬ ＤＭＳＯ）または抽出物を１％ＤＭ
ＳＯを加えたＴＢＳＴ中で２０倍に予め希釈する。予め希釈した化合物／抽出物
５ｍＬを工程６の記載と同様にしてウェルに入れる。２０分間恒温保持する。コ
ントロールには薬剤を与えない。

【０１９９】 ９． ＡＴＰ混合物５ｍＬを添加してキナーゼ反応を開始する；恒温保持の間
ＥＬＩＺＡプレートシェーカー上でＥＬＩＺＡプレートを振盪させる。

【０２００】 １０． ６０分後に、各ウェルに停止液３０ｍＬを添加してキナーゼ反応を停
止させる。

【０２０１】 １１． リン酸セルロースマットおよびＥＬＩＺＡプレートをトムテックプレ
ートハーベスターの中に入れる。製造者の方法に従ってフィルターを採取し、フ
ィルター洗浄液で洗浄する。フィルターマットを乾燥させる。フィルターマット
を密封し、ホルダーの中に入れる。ホルダーを放射性検出装置内に装入し、フィ
ルターマット上の放射性リンを定量化する。

【０２０２】 あるいは、アッセイプレートの各ウェルからのアリコート４０ｍＬを、リン酸
セルロースフィルターマット上の対応する位置に移動させてもよい。フィルター
を気乾させた後に、フィルターをトレーの中に入れる。１５分ごとに洗浄液を交
換しながら、１時間トレーを緩徐に振盪させる。フィルターマットを密封し、サ
ンプル中に含まれる放射性リンの測定に合わせてホルダーの中に入れる。ホルダ
ーを検出装置内に装入し、フィルターマット上の放射性リンを定量化する。

【０２０３】 ＲＡＦ−１ＥＬＩＺＡアッセイにおいて、以下のアザベンズイミダゾールを基
礎とする化合物用のプロトコールに従って、ＩＣ₅₀値を測定した。

【０２０４】

【化７】

【０２０５】 ＩＣ₅₀は、リン酸化した標的タンパク質の量の最大値あるいは細胞増殖を５０
％まで低下させるのに必要な、アザベンズイミダゾールを基礎とする阻害剤の濃
度である。ＲＡＦ−１リン酸化アッセイで測定したＩＣ₅₀値を、表１に示す：

【０２０６】

【表９】

【０２０７】 例３：ＭＡＰＫおよびＭＥＫの精製 ＭＡＰＫおよびＭＥＫタンパク質は、これらのタンパク質をコードする遺伝子
をポリ−ヒスチジン標識を伴うタンパク質を発現する市販により入手可能なベク
ター中へサブクローニングすることにより、細胞で容易に発現する。これらのタ
ンパク質をコードする遺伝子は、これらのタンパク質を日常的に扱っている研究
施設から容易に入手できるし、また、ｃＤＮＡライブラリーを含む細胞からこれ
らの遺伝子をクローニングすることによっても容易に入手できる。ライブラリー
は容易に購入でき、当業者は、ジェンバンク（Genbank）のような同義遺伝子デ ータベースから獲得できるＭＥＫおよびＭＡＰＫの核酸配列から、ＭＥＫおよび
ＭＡＰＫをコードするｃＤＮＡ分子に相同な核酸プローブを容易に設計できる。
遺伝子のクローニングは、当業者が現在容易に実施できる技術により、短期間で
達成される。

【０２０８】 細胞抽出物からのＭＥＫおよびＭＡＰＫタンパク質の精製を、Robbins等の文 献（1993、 J. Biol. Chem. 268：5097〜5106）を翻案した以下のプロトコール を使用して実施する。

【０２０９】 １． 当業者が容易に実施できる超音波処理、浸透圧、またはフレンチプレス
技術により細胞を溶解する。適切な超音波処理用バッファーを下に記す。

【０２１０】 ２． ニッケルまたはコバルトと共役した固体支持体を、下に記載する平衡化
バッファーで平衡化する。ポリ−ヒスチジンタグは、固体支持体上のニッケルお
よびコバルト原子と特異的に結合する。平衡化は、固体支持体容積の１０倍に等
しい容積の平衡化バッファーを使用して、レジンを３回洗浄することにより達成
できる。固体支持体は、一般的な当業者により容易に入手できる。

【０２１１】 ３． 細胞溶解液を固体支持体に加え、一定期間、容器中で平衡化する。ある
いは、固体支持体をタンパク質クロマトグラフィーカラム内へ詰め込み、細胞溶
解液を固体支持体に貫流させてもよい。

【０２１２】 ４． 固体支持体を下に記載した洗浄バッファーで洗浄する。

【０２１３】 ５． 固体支持体からタンパク質の特定部分を除去する溶出バッファー量（下
に記載）を使用して、固体支持体からＭＥＫまたはＭＡＰＫタンパク質を溶出さ
せる。

【０２１４】 超音波処理用バッファー リン酸ナトリウム ｐＨ８．０ ５０ｍＭ 塩化ナトリウム ０．３Ｍ β−メルカプトエタノール １０ｍＭ ＮＰ４０ １％ ＮａＦ １０ｍＭ ペファブロック（Ｐｅｆａｂｌｏｃｋ） ０．５ｍＭ 平衡化バッファー リン酸ナトリウム ｐＨ８．０ ５０ｍＭ 塩化ナトリウム ０．３Ｍ β−メルカプトエタノール １０ｍＭ ＮＰ４０ １％ ＮａＦ １０ｍＭ イミダゾール １ｍＭ 洗浄バッファー リン酸ナトリウム ｐＨ８．０ ５０ｍＭ 塩化ナトリウム ０．３Ｍ β−メルカプトエタノール １０ｍＭ ＮＰ４０ １％ ＮａＦ １０ｍＭ イミダゾール １０ｍＭ 溶出バッファー リン酸ナトリウム ｐＨ８．０ ５０ｍＭ 塩化ナトリウム ０．３Ｍ β−メルカプトエタノール １０ｍＭ ＮＰ４０ １％ ＮａＦ １０ｍＭ イミダゾール １０〜５００ｍＭ 例４：ＥＧＦ受容体のリン酸化機能を測定するアッセイ 全ての細胞におけるＥＧＦ受容体キナーゼ活性（EGFR-NIH3T3 アッセイ）を 、ＰＣＴ特許明細書ＷＯ９６４０１１６（Tang等、1996年6月5日出願、発明の名
称“疾患治療用インドリノン化合物（Indolinone Compounds for the Treatment
of Disease)”）の詳細な記載に従って測定する。この特許明細書の図面を含む
全体を引用することにより、本明細書中に記載したものとする。

【０２１５】 ＥＧＦ受容体リン酸化アッセイで測定したＩＣ₅₀値を、表２に示す。

【０２１６】

【表１０】

【０２１７】 例５：Ｒａｓ発現細胞の増殖に対する、アザベンズイミダゾール−基礎化合物
の効果の測定に関するアッセイ 以下のアッセイは、Ｒａｓを発現しているＮＩＨ−３Ｔ３細胞の増殖速度を測
定するものである。アッセイの目的は、Ｈ−Ｒａｓを過剰発現したＮＩＨ−３Ｔ
３細胞の増殖に対する化合物の効果を測定することである。

【０２１８】 器具 ９６穴平底滅菌プレート ９６穴丸底滅菌プレート ２５ｍＬおよび１００ｍＬの滅菌貯蔵器 ピペット、マルチ−チャンネルピペットマン 滅菌ピペットチップ １５ｍＬおよび５０ｍＬの滅菌チューブ 試薬 １％の酢酸中の０．４％ＳＲＢ トリスベース １０ｍＭ １０％ ＴＣＡ １％の酢酸 滅菌ＤＭＳＯ（Sigma） ＤＭＳＯ中の化合物（１００ｍＭまたはそれより低濃度の保存溶液） トリプシン−ＥＤＴＡ（GIBCO BRL） 細胞系： ３Ｔ３／Ｈ−Ｒａｓ（癌遺伝子Ｈ−Ｒａｓの遺伝子フラグメントを発現している
ＮＩＨ３Ｔ３のクローン７細胞）。

【０２１９】 この細胞は、以下のプロトコールを用いて構築することができる： １．Ｒａｓをコードしている遺伝子フラグメントを、ＮＴＨ３Ｔ３細胞に安定し
て形質導入される商業的に入手可能なベクターにサブクローニングした。フラグ
メントはｃＨａ−ｒａｓのゲノム形質転換した対立遺伝子からのものである。

【０２２０】 ２．リン酸カルシウム法によってＮＩＨ３Ｔ３細胞を、サブクローニングされた
ベクターで感染させた。２％の血清のＤＭＥＭ中で、Ｒａｓ構造が発現している
細胞を選択した。２週間後に可視の病巣が観察された。安定して形質転換された
細胞系を形成するために、形質転換された細胞を保存した。

【０２２１】 増殖培地： ２％の仔牛血清／ＤＭＥＭ＋２ｍＭグルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシ
ン プロトコール： 第０日目：細胞培養： この一連のアッセイは、層フローフード中で実施した。

【０２２２】 １．細胞をトリプシン処理した。細胞懸濁液２００ｍｌを同中性子体１０ｍｌに
移し入れた。細胞をコールターカウンターで数えた。

【０２２３】 ２．細胞を増殖培地中で、６００００細胞／ｍｌに希釈した。細胞１００ｍｌを
、９６穴平底プレートのそれぞれのウェルに６０００細胞／ウェルになるように
移し入れた。

【０２２４】 ３．それぞれの化合物に対してプレートの半分（４列）およびそれぞれの化合物
の濃度に対して４層のウェルを使用し、かつ培地対照のために４つのウェルを設
けた。

【０２２５】 ４．細胞を均一に付着させるためにプレートを穏やかに振盪させた。

【０２２６】 ５．プレートを３７℃で、１０％ＣＯ₂インキュベーター中で培養した。

【０２２７】 第１日目：化合物の添加： この部分のアッセイを、層フローフード中で実施した。

【０２２８】 １．９６穴丸底プレート中で、最も高い化合物のスクリーニング濃度が見出され
た２ＸＤＭＳＯの最終％を含有する増殖培地１２０ｍｌを、縦列１〜１１に加え
た。例えば、最も高い濃度が１００ｍｌであり、かつこれが１００ｍＭストック
溶液からなる場合には、１ＸＤＭＳＯが０．１％、２ＸＤＭＳＯが０．２％であ
る。このプレートを、化合物、４列／化合物の滴定に使用した。

【０２２９】 ２．１５ｍｌの滅菌チューブ中、増殖培地および２ＸＤＭＳＯ中で、最も高いス
クリーニング濃度の化合物の２Ｘ溶液を作成した。一つの細胞系に対して１ｍｌ
が必要であった。化合物の出発濃度は通常１００ｍＭであるが、しかし、この濃
度は、化合物の安定性に応じて変動させてもよい。

【０２３０】 ３．２Ｘ出発化合物溶液２４０ｍｌを、９６穴丸底プレートの第１２カラム中の
４層のウェルに移し入れた。１：２の連続希釈を、第１２カラムから第１１カラ
ムへ、第１１カラムから第１０カラムへ、かつ同様に第２カラムまで１２ｍｌを
移し入れることによって、プレート上で右から左へ亘っておこなった。化合物の
希釈液１００ｍｌおよび第１カラム中の培地１００ｍｌを、９６穴平底プレート
のそれぞれ対応するウェル中の細胞上の培地１００ｍｌに移し入れた。一つのウ
ェル当たりの総量は２００ｍｌにすべきである。

【０２３１】 ４．プレートをインキュベーターに戻し、かつ３日間に亘って培養した。

【０２３２】 第４日目：アッセイの実施： この一連のアッセイは、ベンチで実施した。

【０２３３】 １．培地を吸引または注ぎあけた。細胞を固定するために、１０％の冷たいＴＣ
Ａ ２００ｍｌをぞれぞれのウェルに加えた。このプレートを少なくとも６０分
間、４℃で培養した。

【０２３４】 ２．ＴＣＡを捨て、ウェルを水道水で５回、すすぎ洗いした。このプレートを上
面を下にしてペーパータオル上で乾燥させた。

【０２３５】 ３．細胞を、０．４％のＳＲＢ １００ｍｌ／ウェルで１０分間染色した。

【０２３６】 ４．ＳＲＢを注ぎ入れ、かつウェルを１％の酢酸で５回、すすぎ洗いした。この
プレートを上面を下にしてペーパータオル上で乾燥させた。

【０２３７】 ５．染色液を１０ｍＭトリスベース １００ｍｌ／ウェルで、５〜１０分間に亘
って振盪器上で可溶化させた。

【０２３８】 ６．プレートをダイナテックＥＬＩＳＡプレートリーダー（Dynatech ELISA Pl
ate REader）上で、６３０ｎｍを参考に５７０ｎｍで読みとった。表３に示した
ように、ＲＡＳが過剰発現ぢた細胞の増殖速度を抑制する化合物を選択した。

【０２３９】

【表１１】

【０２４０】 例６：Ａ５４９細胞の増殖上でのアザベンジミナゾールを基礎とした化合物の
測定効果のアッセイ 続くアッセイは、Ａ５４９細胞の増殖速度を測定する。アッセイの目的は、Ａ
５４９ヒト肺癌腫細胞の成長における化合物の効果を測定することである。Ａ５
４９細胞は寄託機関、例えばＡＴＣＣ（ＣＣＬ１８５）から簡単に入手可能であ
る。

【０２４１】 材料： ９６穴平底滅菌プレート ９６穴丸底滅菌プレート 滅菌２５ｍｌまたは１００ｍｌ容器 ピペット、マルチチャンネルピペットマン 滅菌ピペットチップ 滅菌１５ｍｌチューブおよび５０ｍｌチューブ 試薬： １％の酢酸中の０．４％ＳＲＢ トリスベース１０ｍＭ １０％のＴＣＡ １％の酢酸 滅菌ＤＭＳＯ（Sigma） ＤＭＳＯ中の化合物（１００ｍＭまたはそれより少ないストック溶液） トリプシン−ＥＤＴＡ（GIBCO BRL） 細胞系および増殖培地： Ａ５４９ヒト肺癌腫細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ１８５） Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２−Ｋ中の１０％仔牛血清 プロトコール： 第０日目：細胞プレーティング： この一連の分析を層フローフード中で実施した。

【０２４２】 １．細胞をトリプシン処理した。細胞懸濁液２００μｌを同中性子体１０ｍｌに
移し入れた。コールターカウンターで細胞を数えた。

【０２４３】 ２．細胞を増殖培地中で２００００細胞／ｍｌに希釈した。細胞１００μｌを９
６穴平底プレート中のそれぞれのウェルに２０００細胞／ウェルになるように移
し入れた。

【０２４４】 ３．それぞれの化合物に対してプレートの半分（４列）およびそれぞれの化合物
の濃度に対して４層のウェルを使用し、かつ培地対照のために４つのウェルを設
けた。

【０２４５】 ４．細胞を均一に付着させるために、プレートを穏やかに振盪させた。

【０２４６】 ５．プレートを１０％ＣＯ２インキュベーター中で３７℃で培養した。

【０２４７】 第１日目：化合物の添加： この一連のアッセイを、層フローフード中で実施した。

【０２４８】 １．９６穴丸底プレート中で、化合物の最も高いスクリーニング濃度が見出され
た２ＸＤＭＳＯの最終％を含有する増殖培地１２０μｌをカラム１〜１１に加え
た。例えば、最も高いスクリーニング濃度が１００μＭであり、これが１００ｍ
Ｍストックから作成される場合には、１ＸＤＭＳＯは、０．１％、２ＸＤＭＳＯ
は、０．２％である。このプレートを化合物、４列／化合物の滴定に使用した。

【０２４９】 ２．１５ｍｌの滅菌チューブ中で、化合物の最も高いスクリーニング濃度の２Ｘ
溶液を増殖培地および２ＸＤＭＳＯ中で作成した。一つの細胞系に対して１ｍｌ
が必要である。化合物の出発濃度は通常１００μＭであるが、しかしながら、こ
の濃度は化合物の安定性に依存して変えることができる。

【０２５０】 ３．２Ｘ出発化合物溶液２４０μｌを、９６穴丸底プレートの第１２カラム中の
４層のウェルに移し入れた。１：２の連続希釈を第１２カラムから第１１カラム
へ、第１１カラムから第１０カラムへ、かつ同様に第２カラムまで１２０μｌを
移すことによって、プレート上で右から左へ行った。化合物希釈液１００μｌお
よびカラム１中の培養液１００μｌを、９６穴平底プレートの対応するウェル中
の細胞上の培養液１００μｌに移し入れた。一つのウェルに対する総量は２００
μｌにすべきである。

【０２５１】 ４．プレートをインキュベーターに戻し、かつ３日間に亘って培養した。

【０２５２】 第５日目：アッセイの実施 この一連のアッセイを、ベンチで実施した。

【０２５３】 １．培地を吸引または注ぎあけた。細胞を固定するために、１０％の冷たいＴＣ
Ａ ２００μｌをそれぞれのウェルに加えた。プレートを４℃で少なくとも６０
分間に亘って培養した。

【０２５４】 ２．ＴＣＡを取り除き、かつウェルを水道水で５回、すすぎ洗いした。プレート
を上面を下に向けてペーパータオル上で乾燥させた。

【０２５５】 ３．細胞を０．４％のＳＲＢ １００μｌ／ウェルで、１０分間に亘って染色し
た。

【０２５６】 ４．ＳＲＢを注ぎあけ、かつウェルを１％酢酸で５回、すすぎ洗いした。プレー
トを上面を下に向けてペーパータオル上で完全に乾燥させた。

【０２５７】 ５．染色液を１０ｍＭトリスベース １００μｌ／ウェルで、振盪器上で５〜１
０分間に亘って可溶化した。

【０２５８】 ６．プレートをダイナテックＥＬＩＳＡプレートリーダー上で、６３０ｎｍを参
考に５７０ｎｍで読みとった。

【０２５９】 表４で示したように、Ａ５４９細胞の増殖速度が抑制された化合物を選択した
。

【０２６０】

【表１２】

【０２６１】 実施例７：生体内でのＲａｆ変性剤の生体学的活性の測定方法 異種移植片の研究を、卵巣、メラノーマ、前立腺、肺および乳腺の腫瘍細胞の
抑制上で本発明の化合物の効果を観察するために利用することができる。このア
ッセイのためのプロトコールは、Tang他による「疾病の治療のためのインドリノ
ン化合物」の名称がつけられたＰＣＴ出願明細書ＷＯ９６４０１１６、６月５日
、１９９６年で詳細に記載されているが、ここでは、図面および表の全てを含め
た全体を参考までに記載した。

【０２６２】 本明細書中で説明的に記載された本発明は、本明細書中で特に開示されていな
い１種またはそれ以上の任意の要素や制限が存在しない中でおこなわれてもよい
。使用した用語および表現は、説明のためであって制限するための用語として用
いられるものであり、これらの用語および表現の使用の際には、これらが示し、
説明する特徴の全てまたはその一部を除外することを意図するものはないが、し
かし、特許の保護を求めた本発明の範囲内には、種々の変法が可能であることが
認められる。従って、本発明は、好ましい実施態様および任意の特徴によって詳
細に開示されているが、本明細書中で開示された概念の修正および変更はこれら
当業者に負うものであってもよく、このような修正および変法は、添付の請求項
によって明らかなように本発明の範囲内にあるとみなされると解すべきものであ
る。

【０２６３】 当業者であれば、本発明が課題を達成し、目的、前記の利点ならびに本発明に
固有のものを得るために十分に適合されることは簡単に評価することになろう。
本明細書中に記載された分子鎖体、方法、手順、処理、分子および特定の化合物
は、直ちに好ましい実施態様の代表であり、具体例であり、かつ本発明の範囲を
制限することを意図するものではない。ここでの変更および別の用途は、当業者
に想到されることになるが、これらは、本発明の精神に含まれるものであり、特
許請求の範囲によって定義されている。

【０２６４】 代用および修正の変化により、本発明の範囲および精神から逸脱することなく
、本明細書中で開示された本発明を成し得ることは、当業者には容易に明らかに
なる。

【０２６５】 本明細書中で挙げられた特許および刊行物の全ては、本発明に属するこれら従
来技術の当業者の水準を表すものである。これらの特許及び刊行物の全ては、そ
れぞれ別個の刊行物が、参照により詳細かつ別個に挿入されていたことを詳細か
つ個別に示されていた場合には、それと同じ範囲につき参照により本明細書中に
挿入してある。

【０２６６】 本明細書中で適切に詳細に説明されている本発明は、本明細書中で特に開示さ
れていない任意の１つまたはそれ以上の要素、１つまたはそれ以上の制限の存在
しない中で行われてもよい。従って例えば、本明細書中のそれぞれの例で任意の
「....なる（comprising....）」、「本質的に....なる（consisting essential
ly of....）」および「....からなる（consisting of）」という表現は、他の二
つの表現の双方で置き換えることができる。使用した用語および表現は、説明の
ためであって制限するための用語として用いられるものであり、これらの用語お
よび表現の使用の際には、これらが示し、説明する特徴の全てまたはその一部を
除外することを意図するものはないが、しかし、特許の保護を求めた本発明の範
囲内には、種々の変法が可能であることが認められる。従って、本発明は、好ま
しい実施態様および任意の特徴によって詳細に開示されているが、本明細書中で
開示された概念の修正および変更はこれら当業者に負うものであってもよく、こ
のような修正および変法は、添付の請求項によって明らかなように本発明の範囲
内にあるとみなされると解すべきものである。

【０２６７】 更に、本発明の特徴または態様がマーカッシュ群（Markush group）の用語で 記載されている場合には、当業者はまた本発明がこれによってマーカッシュ群の
任意の個別の項目またはサブグループの項目で記載されることも認めることにな
る。例えば、Ｘが臭素、塩素およびヨウ素からなる群から選択されることが記載
されている場合には、Ｘが臭素である請求項およびＸが臭素および塩素である請
求項が完全に記載されている。

【０２６８】 先の参考文献は、本明細書中で参考のために特許文献および特許でない文献の
双方を含めて、全ての目的のための参照により本明細書中に特に挿入されたもの
である。別の実施態様は、前記の請求項中に記載されている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ， ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ハインツ ヴァインベルガー ドイツ連邦共和国 ズルツバッハ アム ホルツヴェーク ３ (72)発明者 ベルンハルト クッチャー ドイツ連邦共和国 マインタール シュト レーゼンマンシュトラーセ ９ (72)発明者 ハラルト アップ アメリカ合衆国 カリフォルニア サンフ ランシスコ トゥエンティセブンスストリ ート 630 Ｆターム(参考） 4B063 QA01 QA18 QQ02 QQ08 QQ27 QQ95 QR41 QS02 QS24 4C065 AA04 BB06 CC01 DD03 EE02 HH01 JJ03 JJ07 JJ09 KK01 LL04 LL07 PP03 4C086 AA01 AA02 CB05 MA01 ZB26 ZC20

Claims (37)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アザベンズイミダゾールを基礎とする化合物を用いてセリン
   ／トレオニンプロテインキナーゼの作用を変性する方法において、前記セリン／
   トレオニンプロテインキナーゼを表現する細胞と前記化合物との接触の工程を含
   む、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの作用の変性法。
2. 【請求項２】 セリン／トレオニンプロテインキナーゼがＲＡＦである、請
   求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 セリン／トレオニンプロテインキナーゼの作用を変性する化
   合物を同定する方法において、以下の工程： （ａ）前記のセリン／トレオニンプロテインキナーゼを表現する細胞と前記化合 物との接触；および （ｂ）前記細胞への作用の監視 を含むことを特徴とする、セリン／トレオニンプロテインキナーゼの作用を変性
   する化合物の同定法。
4. 【請求項４】 前記の作用が、細胞表現型における変化または変化の欠如で
   ある、請求項３に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記の作用が、細胞増殖における変化または変化の欠如であ
   る、請求項３に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記の作用が、前記セリン／トレオニンプロテインキナーゼ
   の触媒活性の変化または変化の欠如である、請求項３に記載の方法。
7. 【請求項７】 前記の作用が、ここに記載のように、前記のセリン／トレオ
   ニンプロテインキナーゼと、天然結合成分との相互作用の変化または変化の欠如
   である、請求項３に記載の方法。
8. 【請求項８】 以下の工程： （ａ）セリン／トレオニンプロテインキナーゼを含む溶解液を得るための前記細 胞の溶解； （ｂ）抗体への前記セリン／トレオニンプロテインキナーゼの吸着； （ｃ）１種またはそれ以上の培地を用いる吸着されたセリン／トレオニンプロテ インキナーゼの培養；および （ｄ）固体支持体または抗体への前記の１種またはそれ以上の培地の吸着； を含むが、この場合、前記細胞への前記作用の監視の前記工程には、前記の１種
   またはそれ以上の培地のリン酸塩濃度の測定が含まれる、請求項３に記載の方法
   。
9. 【請求項９】 前記のセリン／トレオニンプロテインキナーゼがＲＡＦであ
   り、かつ以下の工程： （ａ）ＲＡＦを含む溶解液を得るための前記細胞の溶解； （ｂ）抗体への前記ＲＡＦの吸着； （ｃ）ＭＥＫおよびＭＡＰＫを用いる吸着されたＲＡＦの培養；および （ｄ）固体支持体または１種またはそれ以上の抗体への前記のＭＥＫおよびＭＡ ＰＫの吸着； 工程を含むが、この場合、前記細胞への前記作用の測定の前記工程は、前記のＭ
   ＥＫおよびＭＡＰＫのリン酸塩濃度の監視を含む、請求項３に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記のアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物が、式
    Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩ： 【化１】 〔式中、 （ａ）Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、独立に （ｉ）水素原子； （ｉｉ）飽和または不飽和アルキル； （ｉｉｉ）ＮＸ₂Ｘ₃（式中、Ｘ₂およびＸ₃は、独立に水素原子、飽和または 不飽和アルキルおよび単環または複素環成分からなるグループから 選択されている）； （ｉＶ）ハロゲン原子またはトリハロメチル； （ｖ）式：−ＣＯ−Ｘ₄（式中、Ｘ₄は、水素原子、アルキルおよび単環 または複素環成分からなるグループから選択されている）で示され るケトン； （ｖｉ）式：−（Ｘ₅）_n−ＣＯＯＨで示されるカルボン酸または式：−（ Ｘ₆）_n−ＣＯＯ−Ｘ₇で示されるエステル（前記式中、Ｘ₅、Ｘ₆ およびＸ₇は、独立にアルキルおよび単環または複素環成分からな るグループから選択されており、ｎは、０または１である）； （ｖｉｉ）式：（Ｘ₈）_n−ＯＨで示されるアルコールまたは式−（Ｘ₈）_n− Ｏ−Ｘ₉で示されるアルコキシ成分（前記式中、Ｘ₈およびＸ₉は、 独立に、水素原子、飽和または不飽和アルキルおよび単環または複 素環成分からなるグループから選択されており、この場合、前記の 環は、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリハロメチ ル、カルボキシレート、ニトロおよびエステルからなるグループか ら選択された１個またはそれ以上の置換基で置換されていてもよく 、ｎは、０または１である）； （ｖｉｉｉ）式：−ＮＨＣＯＸ₁₀（式中、Ｘ₁₀は、アルキル、ヒドロキシル および単環または複素環成分からなるグループから選択されており 、この場合、前記の環は、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン 原子、トリハロメチル、カルボキシレート、ニトロおよびエステル からなるグループから選択された１個またはそれ以上の置換基で置 換されていてもよい）で示されるアミド； （ｉｘ）−ＳＯ₂ＮＸ₁₁Ｘ₁₂（式中、Ｘ₁₁およびＸ₁₂は、水素原子、アル キルおよび単環または複素環成分からなるグループから選択されて いる）； （ｘ）独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリハロメチル、カ ルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からなるグループから 選択された１個、２個または３個の置換基で置換されていてもよい 単環または複素環成分； （ｘｉ）式：−ＣＯ−Ｈで示されるアルデヒド；および （ｘｉｉ）式：−ＳＯ₂−Ｘ₁₃（式中、Ｘ₁₃は、飽和または不飽和アルキル および単環または複素環成分からなるグループから選択されている ）で示されるスルホン からなるグループから選択されており、 （ｂ）Ｚ₁およびＺ₂は、独立に窒素原子、硫黄原子、酸素原子、ＮＨおよび ＮＲ₄からなるグループから選択されているが、但し、Ｚ₁およびＺ₂の一 方が、窒素原子、ＮＨまたはＮＲ₄である場合には、Ｚ₁およびＺ₂の他方 は、窒素原子、硫黄原子、酸素原子、ＮＨまたはＮＲ₄であり、 （ｃ）Ｚ₃およびＸ₁は、独立に窒素原子、硫黄原子および酸素原子からなるグ ループから選択されている〕 で示される構造を有する、請求項１に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記のアザベンズイミダゾール化合物が、ここに記載のよ
    うに、ＳＡＢＩ化合物からなるグループから選択されている、請求項１０に記載
    の方法。
12. 【請求項１２】 生物中の異常な状態の予防または処置法において、式Ｉ、
    ＩＩまたはＩＩＩ： 【化２】 〔式中、 （ａ）Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、独立に （ｉ）水素原子； （ｉｉ）飽和または不飽和アルキル； （ｉｉｉ）ＮＸ₂Ｘ₃（式中、Ｘ₂およびＸ₃は、独立に水素原子、飽和または 不飽和アルキルおよび単環または複素環成分からなるグループから 選択されている）； （ｉＶ）ハロゲン原子またはトリハロメチル； （ｖ）式：−ＣＯ−Ｘ₄（式中、Ｘ₄は、水素原子、アルキルおよび単環 または複素環成分からなるグループから選択されている）で示され るケトン； （ｖｉ）式：−（Ｘ₅）_n−ＣＯＯＨで示されるカルボン酸または式：−（ Ｘ₆）_n−ＣＯＯ−Ｘ₇で示されるエステル（前記式中、Ｘ₅、Ｘ₆ およびＸ₇は、独立にアルキルおよび単環または複素環成分からな るグループから選択されており、ｎは、０または１である）； （ｖｉｉ）式：（Ｘ₈）_n−ＯＨで示されるアルコールまたは式−（Ｘ₈）_n− Ｏ−Ｘ₉で示されるアルコキシ成分（前記式中、Ｘ₈およびＸ₉は 、独立に、水素原子、飽和または不飽和アルキルおよび単環または 複素環成分からなるグループから選択されており、この場合、前記 の環は、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリハロメ チル、カルボキシレート、ニトロおよびエステルからなるグループ から選択された１個またはそれ以上の置換基で置換されていてもよ く、ｎは、０または１である）； （ｖｉｉｉ）式：−ＮＨＣＯＸ₁₀（式中、Ｘ₁₀は、アルキル、ヒドロキシル および単環または複素環成分からなるグループから選択されており 、この場合、前記の環は、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン 原子、トリハロメチル、カルボキシレート、ニトロおよびエステル から選択された１個またはそれ以上の置換基で置換されていてもよ い）で示されるアミド； （ｉｘ）−ＳＯ₂ＮＸ₁₁Ｘ₁₂（式中、Ｘ₁₁およびＸ₁₂は、水素原子、アル キルおよび単環または複素環成分からなるグループから選択されて いる）； （ｘ）独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリハロメチル、カ ルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からなるグループから 選択された１個、２個または３個の置換基で置換されていてもよい 単環または複素環成分； （ｘｉ）式：−ＣＯ−Ｈで示されるアルデヒド；および （ｘｉｉ）式：−ＳＯ₂−Ｘ₁₃（式中、Ｘ₁₃は、飽和または不飽和アルキル および単環または複素環成分からなるグループから選択されている ）で示されるスルホン からなるグループから選択されており、 （ｂ）Ｚ₁およびＺ₂は、独立に窒素原子、硫黄原子、酸素原子、ＮＨおよびＮ Ｒ₄からなるグループから選択されているが、但し、Ｚ₁およびＺ₂の一方 が、窒素原子、ＮＨまたはＮＲ₄である場合には、Ｚ₁およびＺ₂の他方は 、窒素原子、硫黄原子、酸素原子、ＮＨまたはＮＲ₄であり、 （ｃ）Ｚ₃およびＸ₁は、独立に窒素原子、硫黄原子および酸素原子からなるグ ループから選択されている〕 で示されるアザベンズイミダゾールを基礎とする化合物を前記生物に投与する工
    程を含むことを特徴とする、生物中の異常な状態の予防または処置法。
13. 【請求項１３】 前記の生物が、哺乳動物である、請求項１２に記載の方法
    。
14. 【請求項１４】 前記の異常な状態が、癌または繊維症疾患である、請求項
    １２に記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記の異常な状態が、肺癌、卵巣癌、悪性脳腫瘍、内軸性
    悪性脳腫瘍、大腸癌、前立腺癌、肉腫、カポジ肉腫、黒色腫および神経膠腫から
    なるグループから選択された癌である、請求項１４に記載の方法。
16. 【請求項１６】 前記の異常な状態が、セリン／トレオニンプロテインキナ
    ーゼと天然結合成分との間の相互作用によって特徴付けられるシグナル伝達経路
    における異常に関連する、請求項１２に記載の方法。
17. 【請求項１７】 前記のセリン／トレオニンプロテインキナーゼがＲＡＦで
    ある、請求項１６に記載の方法。
18. 【請求項１８】 式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩ： 【化３】 〔式中、 （ａ）Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄は、独立に （ｉ）水素原子； （ｉｉ）飽和または不飽和アルキル； （ｉｉｉ）ＮＸ₂Ｘ₃（式中、Ｘ₂およびＸ₃は、独立に水素原子、飽和または 不飽和アルキルおよび単環または複素環成分からなるグループから 選択されている）； （ｉＶ）ハロゲン原子またはトリハロメチル； （ｖ）式：−ＣＯ−Ｘ₄（式中、Ｘ₄は、水素原子、アルキルおよび単環 または複素環成分からなるグループから選択されている）で示され るケトン； （ｖｉ）式：−（Ｘ₅）_n−ＣＯＯＨで示されるカルボン酸または式：−（ Ｘ₆）_n−ＣＯＯ−Ｘ₇で示されるエステル（前記式中、Ｘ₅、Ｘ₆ およびＸ₇は、独立にアルキルおよび単環または複素環成分からな るグループから選択されており、ｎは、０または１である）； （ｖｉｉ）式：（Ｘ₈）_n−ＯＨで示されるアルコールまたは式−（Ｘ₈）_n− Ｏ−Ｘ₉で示されるアルコキシ成分（前記式中、Ｘ₈およびＸ₉は、 独立に、水素原子、飽和または不飽和アルキルおよび単環または複 素環成分からなるグループから選択されており、この場合、前記の 環は、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリハロメチ ル、カルボキシレート、ニトロおよびエステルからなるグループか ら選択された１個またはそれ以上の置換基で置換されていてもよく 、ｎは、０または１である）； （ｖｉｉｉ）式：−ＮＨＣＯＸ₁₀（式中、Ｘ₁₀は、アルキル、ヒドロキシル および単環または複素環成分からなるグループから選択されており 、この場合、前記の環は、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン 原子、トリハロメチル、カルボキシレート、ニトロおよびエステル から選択された１個またはそれ以上の置換基で置換されていてもよ い）で示されるアミド； （ｉｘ）−ＳＯ₂ＮＸ₁₁Ｘ₁₂（式中、Ｘ₁₁およびＸ₁₂は、水素原子、アル キルおよび単環または複素環成分からなるグループから選択されて いる）； （ｘ）独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原子、トリハロメチル、カ ルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からなるグループから 選択された１個、２個または３個の置換基で置換されていてもよい 単環または複素環成分； （ｘｉ）式：−ＣＯ−Ｈで示されるアルデヒド；および （ｘｉｉ）式：−ＳＯ₂−Ｘ₁₃（式中、Ｘ₁₃は、飽和または不飽和アルキル および単環または複素環成分からなるグループから選択されている ）で示されるスルホン からなるグループから選択されており、 （ｂ）Ｚ₁およびＺ₂は、独立に窒素原子、硫黄原子、酸素原子、ＮＨおよび ＮＲ₄からなるグループから選択されているが、但し、Ｚ₁およびＺ₂の一 方が、窒素原子、ＮＨまたはＮＲ₄である場合には、Ｚ₁およびＺ₂の他方 は、窒素原子、硫黄原子、酸素原子、ＮＨまたはＮＲ₄であり、 （ｃ）Ｚ₃およびＸ₁は、独立に窒素原子、硫黄原子および酸素原子からなるグ ループから選択されている〕 で示される構造を有するアザベンズイミダゾール化合物。
19. 【請求項１９】 前記のＺ₁およびＺ₂が、独立に窒素原子およびＮＨからな
    るグループから選択されている、請求項１８に記載の化合物。
20. 【請求項２０】 前記のＲ₁、Ｒ₂、Ｒ₃およびＲ₄が、独立に （ｉ）水素原子； （ｉｉ）単環または複素環成分または多環成分（この場合、前記の環成分は 、独立にアルキル、ハロゲン原子、トリハロメチル、ヒドロキシ、 アルコキシ、カルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からな るグループから選択された１個、２個または３個の置換基で置換さ れていてもよい）で置換されていてもよい飽和または不飽和アルキ ル； （ｉｉｉ）独立にアルキル、ハロゲン原子、トリハロメチル、ヒドロキシ、ア ルコキシ、カルボキシレート、ニトロおよびエステル成分からなる グループから選択された１個、２個または３個の置換基で置換され ていてもよい単環または複素環成分 からなるグループから選択されている、請求項１９に記載の化合物。
21. 【請求項２１】 前記のＲ₂およびＲ₃が、水素原子である、請求項２０に記
    載の化合物。
22. 【請求項２２】 前記のＲ₁が、独立にアルキル、アルコキシ、ハロゲン原 子、トリハロメチル、カルボキシレート、ニトロまたはエステル成分からなるグ
    ループから選択された１個、２個または３個の置換基で置換されていてもよいフ
    ェニルである、請求項２１に記載の化合物。
23. 【請求項２３】 前記のＲ₁が、ＳＡＢＩ置換基からなるグループから選択 されている、請求項２２に記載の化合物。
24. 【請求項２４】 前記のＸ₁が、硫黄原子、酸素原子およびＮＨから選択さ れている、請求項２３に記載の化合物。
25. 【請求項２５】 前記のＺ₃が、酸素原子である、請求項２４に記載の化合 物。
26. 【請求項２６】 前記のＲ₄が、メチルおよびエチルからなるグループから 選択されている、請求項２５に記載の化合物。
27. 【請求項２７】 前記のアザベンズイミダゾール化合物が、ＳＡＢＩ化合物
    からなるグループから選択されている、請求項２６に記載の化合物。
28. 【請求項２８】 請求項１８から２７までのいずれか１項に記載のアザベン
    ズイミダゾール化合物および生理学的に認容性の担持剤または希釈剤を含有する
    医薬組成物。
29. 【請求項２９】 請求項１８に記載の式（Ｉ）の化合物を合成するための方
    法において、 （ａ）溶剤中での２−アミノ−６−クロロ−３−二トロピリジンと第二反応成分 との反応、第一中間生成物の発生、この場合、前記の第二反応成分は、置 換されたアリール環である； （ｂ）触媒および還元剤の存在下での前記の第一中間生成物の還元、第二中間生 成物の発生； （ｃ）第二中間生成物と第三反応成分との反応；および （ｄ）請求項１８に記載の前記化合物の精製 の工程を含むことを特徴とする、請求項１８に記載の式（Ｉ）の化合物の合成法
    。
30. 【請求項３０】 前記の溶剤が、ｎ−プロパノールである、請求項２９に記
    載の方法。
31. 【請求項３１】 前記の置換されたアリール環が、置換されたフェノール、
    置換されたチオフェノールおよび置換されたアニリンである、請求項３０に記載
    の方法。
32. 【請求項３２】 前記の置換されたフェノール、置換されたチオフェノール
    および置換されたアニリンが、ＳＡＢＩ反応成分からなるグループから選択され
    ている、請求項３１に記載の方法。
33. 【請求項３３】 前記の還元剤が、水素原子である、請求項２９に記載の方
    法。
34. 【請求項３４】 前記の触媒が、ラネーニッケルである、請求項２９に記載
    の方法。
35. 【請求項３５】 前記の第三反応成分が、Ｏ−メチルイソウレアである、請
    求項２９に記載の方法。
36. 【請求項３６】 前記の第三反応成分が、Ｓ−メチルイソチオウロニウムス
    ルフェートとアルキルクロロホルメートとの反応生成物である、請求項２９に記
    載の方法。
37. 【請求項３７】 前記のアルキルが、メチルまたはエチルである、請求項３
    ６に記載の方法。