JP2001228149A - 臨床検査用微粒子分散剤、検査用試薬、試薬の製造方法、検査方法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】微粒子含有試薬の分散安定性を向上させ、また
試薬調整の過程あるいは測定の過程で凝集させた臨床検
査用微粒子に対して、結合させている抗体や抗原等の活
性を落とすことなく再分散性を向上させ再現性が高く高
感度で自動分析機に適した簡単な方法で処理できる臨床
検査用微粒子分散剤を提供する。 【解決手段】ホスホリルコリン類似基含有単量体を含む
単量体組成物を重合してなる重合体を有効成分とする臨
床検査用微粒子分散剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、臨床検査の分野に
おいて微粒子を使用する際の分散剤、それを用いた検査
試薬、検査方法、試薬の製造方法、生体関連物質の分離
精製方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】臨床検査の分野では、高感度に抗原量を
測定する検査方法としてポリスチレン等のラテックスの
凝集反応による検査が行われている。ラテックス表面に
抗原（または抗体）を物理的あるいは化学的に担持（感
作）させ、検出対象である前記の抗原に対する抗体（ま
たは前記の抗体に対する抗原）との免疫反応によりラテ
ックスが凝集する際に変化する濁度、粒径分布等を検出
し、被測定物質量を評価する方法である。

【０００３】このようなラテックス試薬は、年々自動化
及び高感度化が進められている。自動化を行うために
は、自動分析機内でラテックス試薬が経時的に凝集した
り、ラインやセルに吸着することのないように分散安定
化させる必要がある。高感度化を行うためには、検体が
入る前はラテックスの分散性が高く、検体導入後の免疫
反応による凝集は速やかに起こる必要があり、免疫反応
を阻害せずに分散安定化させることがやはり必要とな
る。

【０００４】また、ラテックス試薬を調製する際には、
ラテックスに抗原（または抗体）を結合させた後に遠心
沈殿処理を行い、ラテックスを一度凝集させ未担持（未
感作）の抗原（または抗体）や不純物を上澄みと一緒に
取り除く操作を行う。この精製処理の際に、ラテックス
が凝集し完全に再分散することができないことがあり、
測定の再現性や感度が低下することになる。

【０００５】このような場合には、ラテックスを調製す
る際に使用する界面活性剤や重合可能な親水性単量体を
利用することで表面の電荷を制御し再分散性を上げる方
法が一般的に行われる。しかしながら、このような表面
電荷を制御する方法では、結合させるべき抗原（または
抗体）を結合させることが困難となったり、免疫反応に
よる凝集を阻害することがあるため、結合させる抗原
（または抗体）の種類に応じて複雑で煩雑な調整が必要
となる。

【０００６】その他に臨床検査の分野では、磁性微粒子
を使用する検査方法がある。この方法では通常、表面に
抗体を結合させた磁性微粒子を使用して、以下の方法に
準じて検査を行う。 （１）抗体（または抗原）を担持させた磁性微粒子（磁
性微粒子−抗体、とする）の入った反応容器に抗原（被
検出物質となる（または抗体）の入った検体を導入し免
疫反応を起こさせる（磁性微粒子−抗体−抗原、とす
る）。 （２）磁力により前記の磁性微粒子を凝集させ、検体液
を分離した後、磁力を落として分散状態とする。 （３）抗原と結合する酵素標識抗体液（酵素標識抗体）
を容器に導入し、免疫反応を起こさせ、磁性微粒子−抗
体−抗原−酵素標識抗体の複合体を形成させる。 （４）磁力により磁性微粒子を凝集させ、酵素標識抗体
液と分離させ未反応の酵素標識抗体を取り除いた後、磁
力を落として分散状態とする。 （５）酵素標識抗体の基質液を導入し、酵素反応により
生じた物質の量を測定することにより、抗原量を評価す
る。

【０００７】このような手順で行われる検査において、
凝集させた磁性微粒子の再分散性が劣ると免疫反応の効
率に悪影響をおよぼす。通常は、界面活性剤等を使用し
て磁性微粒子の再分散性を向上させる方法が行われる
が、磁性微粒子に結合している抗体を変性させ活性を落
としたり、残留した界面活性剤が抗原との免疫反応を阻
害することがあるため、結合させる抗体や検体の種類に
応じて複雑で煩雑な調整が必要となる。

【０００８】臨床検査の分野においては、磁性微粒子を
使用するのは単に検査をする場合だけではなく、磁性微
粒子表面に結合させた抗体と免疫反応する抗原を分離精
製する目的にも使用される。この場合には、例えば、磁
性微粒子−抗体−抗原の複合体を磁力で凝集させ不純物
を液とともに取り除いた後、再分散させｐＨの変化等に
より抗原を遊離回収させる方法が行われる。この時、磁
性微粒子−抗体−抗原の複合体の再分散性が低いと抗原
の回収率が低下するし、再分散性を向上させるために界
面活性剤を添加すると抗体や抗原の変性が起こる恐れが
ある。

【０００９】同様な操作により、細胞、細菌、ＤＮＡ、
酵素等についても、それぞれに対して特異的結合部位を
担持する磁性微粒子を用いた分離精製が行われている。
しかし、このような分離精製の場合には、上記と同様な
理由から高い再分散性を有する磁性微粒子が望まれてい
る。

【００１０】一方、ホスホリルコリン基含有重合体は、
生体膜に由来するリン脂質類似構造に起因して、血液適
合性、補体非活性化、生体物質非吸着性等の生体適合性
に優れ、また防汚性、保湿性等の優れた性質を有するこ
とが知られており、それぞれの機能を生かした生体関連
材料の開発を目的とした重合体の合成およびその用途に
関する研究開発が活発に行われている。

【００１１】その中でも特開平７−５１７７号公報、特
開平７−８３９２３号公報、特開平１０−１１４８００
号公報には、ホスホリルコリン基含有重合体が容器等へ
のタンパク質の吸着を抑制することができることを利用
して、高精度の臨床検査が行える技術が開示されてい
る。

【００１２】特に特開平１０−１１４８００号公報に
は、ラテックス状、微粒子状の固相に対してもタンパク
質の非特異的吸着を抑制することが開示されている。し
かしながら、このような臨床検査用微粒子に対して免疫
反応を阻害せずに臨床検査用微粒子の分散性を向上させ
る効果があることについては知られていない。

【００１３】また、特開平１０−１０９０２９号公報に
は、ホスホリルコリン基含有重合体を利用して水に溶解
あるいは分散させるのが困難なものを可溶化できる技術
が開示されている。しかしながら、微粒子を利用する臨
床検査の分野において、ホスホリルコリン基含有重合体
を利用して、免疫反応を阻害せずに臨床検査用微粒子を
分散させる効果及び凝集した臨床検査用微粒子を再分散
させる効果については知られていない。

【００１４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の第１の目的
は、臨床検査試薬を調整する過程及び検査に使用する過
程において凝集させた臨床検査用微粒子に対し、結合さ
せている抗体や抗原等の活性を低下させることなく分散
性を向上させ、さらに凝集状態からの再分散性を向上さ
せる分散剤を提供することにある。また、本発明の第２
の目的は、前記の分散剤を用いて担持させた、臨床検査
用微粒子を使用する再現性が高く高感度で自動分析機に
適した検査試薬を提供することにある。また、本発明の
第３の目的は、前記の分散剤を用いて担持させた、臨床
検査用微粒子を使用する検査試薬の製造方法を提供する
ことにある。また、本発明の第４の目的は、前記の分散
剤を用いて担持させた、臨床検査用微粒子を使用する臨
床検査方法を提供することにある。またさらに、本発明
の第５の目的は、前記の分散剤を用いて担持させた、臨
床検査用微粒子を使用する生体関連物質の回収率を向上
させる分離精製方法を提供することにある。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の問
題点に鑑み、鋭意検討した結果、特定のホスホリルコリ
ン類似基含有単量体を含む単量体組成物を重合して得ら
れる重合体を、臨床検査用微粒子に処理すると、前記の
問題点を解決することの知見を得て、本発明を完成する
に至った。すなわち本発明は、以下の〔１〕〜〔７〕の
とおりである。

【００１６】〔１〕 下記の式（１）

【００１７】

【化３】

【００１８】｛ただし、式中、Ｘは２価の有機残基を示
し、Ｙは炭素数１〜６のアルキレンオキシ基を示し、Ｚ
は水素原子もしくはＲ⁵−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（ただし、
Ｒ⁵は炭素数１〜１０のアルキル基または炭素数１〜１
０のヒドロキシアルキル基を示す）を示す。また、Ｒ¹
は水素原子もしくはメチル基を示し、Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴
は同一もしくは異なる基であって、水素原子、炭素数１
〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。
ｍは０または１を示す。ｎは１〜４の整数である。｝で
表されるホスホリルコリン類似基含有単量体を含む単量
体組成物を重合してなる重合体を有効成分とする臨床検
査用微粒子分散剤。

【００１９】〔２〕 ホスホリルコリン類似基含有単量
体を含む単量体組成物が、Ａ成分のホスホリルコリン類
似基含有単量体（Ａ）２０〜９８ｍｏｌ％とＢ成分の疎
水性単量体（Ｂ）２〜８０ｍｏｌ％とからなる単量体組
成物である前記〔１〕の臨床検査用微粒子分散剤。

【００２０】〔３〕 Ａ成分のホスホリルコリン類似基
含有単量体が、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル
−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート
であり、Ｂ成分の疎水性単量体が下記の式（２）

【００２１】

【化４】

【００２２】｛ただし、式中、Ｌ¹は、−Ｃ₆Ｈ₄−、−
Ｃ₆Ｈ₁₀−、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−、−（Ｃ＝
Ｏ）ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−および−Ｏ−（Ｃ＝
Ｏ）−Ｏ−からなる群より選ばれる基を示し、Ｌ²は、
水素原子、−（ＣＨ₂）_g−Ｌ³、（（ＣＨ₂）_p−Ｏ）_h−
Ｌ³から選ばれる疎水性官能基を示す。（ｇ、ｈは１〜
２４、ｐは３〜５の整数を示し、Ｌ³は、水素原子、メ
チル基、−Ｃ₆Ｈ₅、−Ｏ−Ｃ₆Ｈ₅から選ばれる官能基を
示す。）｝で表される疎水性単量体である前記〔１〕ま
たは〔２〕の臨床検査用微粒子分散剤。

【００２３】〔４〕 検査用微粒子に、前記の臨床検査
用微粒子分散剤と、生体関連物質に生化学的に特異的に
結合する部位とを担持させてなる微粒子を含有すること
を特徴とする微粒子含有臨床検査試薬。

【００２４】〔５〕 検査用微粒子が、微粒子ラテック
スまたは磁性微粒子である前記〔４〕の微粒子含有臨床
検査試薬。

【００２５】〔６〕 臨床検査用の水中分散微粒子と、
前記の臨床検査用微粒子分散剤の分散溶液とを接触させ
て、微粒子に前記の式（１）で表される単量体に基づく
構成成分を含有する重合体、及び生体関連物質に生化学
的に特異的に結合する部位を担持させてなることを特徴
とする臨床検査試薬の製造方法。

【００２６】〔７〕 前記の臨床検査用微粒子分散剤
と、生体関連物質に生化学的に特異的に結合する部位と
を担持させた微粒子と、前記の生体関連物質とを接触さ
せて複合体を形成させ、分離し、さらにその複合体か
ら、前記の生体関連物質を分離して精製する方法。

【００２７】

【発明の実施の形態】本発明の臨床検査用微粒子分散剤
は、特定のホスホリルコリン類似基含有単量体（以下、
ＰＣ単量体と略す）を含む単量体組成物を重合してなる
重合体（以下ＰＣ重合体と略す）を主成分とするもので
ある。ＰＣ単量体を含む単量体組成物は、ＰＣ単量体の
みでもよいし、その他に重合可能な他の重合性単量体を
含んでいてもよい。具体的には、さらに、前記のＰＣ重
合体は、Ａ成分としてＰＣ単量体２０〜９８ｍｏｌ％と
Ｂ成分として疎水性単量体２〜８０ｍｏｌ％とからなる
単量体組成物を重合してなる重合体を好ましく挙げるこ
とができる。より好ましくは、Ａ成分としてＰＣ単量体
４０〜８０ｍｏｌ％とＢ成分として疎水性単量体２０〜
６０ｍｏｌ％とからなる単量体組成物である。

【００２８】Ｂ成分の疎水性単量体が２ｍｏｌ％未満で
は十分に微粒子の表面の疎水性成分に対する親和性を持
たせることができず、８０ｍｏｌ％より多いとホスホリ
ルコリン類似基（ＰＣ基と略す）の効果を発揮させるの
が困難であるので好ましくない。

【００２９】またさらに、前記のＰＣ重合体は、Ａ成分
としてＰＣ単量体２０〜８８ｍｏｌ％と、Ｂ成分として
疎水性単量体２〜４０ｍｏｌ％およびＣ成分として親水
性単量体１０〜７０ｍｏｌ％の単量体組成物を重合して
なる重合体を好ましく挙げることができる。より好まし
くは、Ａ成分としてＰＣ単量体４０〜７０ｍｏｌ％と、
Ｂ成分として疎水性単量体５〜３０ｍｏｌ％およびＣ成
分として親水性単量体２０〜５０ｍｏｌ％の単量体組成
物である。

【００３０】Ａ成分のＰＣ単量体が２０ｍｏｌ％未満で
は、ＰＣ基の効果を発揮させるのが困難であるので好ま
しくなく、Ｂ成分の疎水性単量体が２ｍｏｌ％未満、Ｃ
成分の親水性単量体１０ｍｏｌ％未満では、微粒子表面
の親水性成分に対する親和性を持たせることができず好
ましくない。Ａ成分のＰＣ単量体が８８ｍｏｌ％より多
くなると、微粒子への親和性が小さくなるので好ましく
なく、Ｂ成分の疎水性単量体が４０ｍｏｌ％より多いと
親水性の付与が少なくなり、Ｃ成分の親水性単量体７０
ｍｏｌ％より多いと非特異吸着が増加するので好ましく
ない。

【００３１】ここで、前記のＰＣ単量体は、下記の式
（１）

【００３２】

【化５】

【００３３】｛ただし、式中、Ｘは２価の有機残基を示
し、Ｙは炭素数１〜６のアルキレンオキシ基を示し、Ｚ
は水素原子もしくはＲ⁵−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（ただし、
Ｒ⁵は炭素数１〜１０のアルキル基または炭素数１〜１
０のヒドロキシアルキル基を示す）を示す。また、Ｒ¹
は水素原子もしくはメチル基を示し、Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴
は同一もしくは異なる基であって、水素原子、炭素数１
〜６のアルキル基またはヒドロキシアルキル基を示す。
ｍは０または１を示す。ｎは１〜４の整数。｝で表され
る。

【００３４】式（１）中のＸの２価の有機残基として
は、例えば、−Ｃ₆Ｈ₄−、−Ｃ₆Ｈ₁₀−、−（Ｃ＝Ｏ）
−Ｏ−、−Ｏ−、−ＣＨ₂−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ
−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−
Ｃ₆Ｈ₄−Ｏ−、−Ｃ₆Ｈ₄−ＣＨ₂−Ｏ−、−Ｃ₆Ｈ₄−
（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−等が挙げられる。

【００３５】式（１）中のＹは、炭素数１〜６のアルキ
レンオキシ基であり、例えば、メチルオキシ、エチルオ
キシ、プロピルオキシ、ブチルオキシ、ペンチルオキ
シ、ヘキシルオキシ等の基が挙げられる。

【００３６】式（１）中のＺは、水素原子もしくはＲ⁵
−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−基を示す。ただし、Ｒ⁵は炭素数１
〜１０のアルキル基または炭素数１〜１０のヒドロキシ
アルキル基を示す。ここで、炭素数１〜１０のアルキル
基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル
基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、
オクチル基、ノニル基、デシル基等が挙げられる。

【００３７】また、炭素数１〜１０のヒドロキシアルキ
ル基としては、例えば、ヒドロキシメチル基、２−ヒド
ロキシエチル基、３−ヒドロキシプロピル基、２−ヒド
ロキシプロピル基、４−ヒドロキシブチル基、２−ヒド
ロキシブチル基、５−ヒドロキシペンチル基、２−ヒド
ロキシペンチル基、６−ヒドロキシヘキシル基、２−ヒ
ドロキシヘキシル基、７−ヒドロキシヘプチル基、２−
ヒドロキシヘプチル基、８−ヒドロキシオクチル基、２
−ヒドロキシオクチル基、９−ヒドロキシノニル基、２
−ヒドロキシノニル基、１０−ヒドロキシデシル基、２
−ヒドロキシデシル基等が挙げられる。

【００３８】ＰＣ単量体としては、具体的には例えば、
２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−
（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、３−
（（メタ）アクリロイルオキシ）プロピル−２’−（ト
リメチルアンモニオ）エチルホスフェート、４−（（メ
タ）アクリロイルオキシ）ブチル−２’−（トリメチル
アンモニオ）エチルホスフェート、５−（（メタ）アク
リロイルオキシ）ペンチル−２’−（トリメチルアンモ
ニオ）エチルホスフェート、６−（（メタ）アクリロイ
ルオキシ）ヘキシル−２’−（トリメチルアンモニオ）
エチルホスフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキ
シ）エチル−２’−（トリエチルアンモニオ）エチルホ
スフェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチ
ル−２’−（トリプロピルアンモニオ）エチルホスフェ
ート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−
２’−（トリブチルアンモニオ）エチルホスフェート、
２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’−
（トリシクロヘキシルアンモニオ）エチルホスフェー
ト、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチル−２’
−（トリフェニルアンモニオ）エチルホスフェート、

【００３９】２−（（メタ）アクリロイルオキシ）エチ
ル−２’−（トリメタノールアンモニオ）エチルホスフ
ェート、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）プロピル
−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェー
ト、２−（（メタ）アクリロイルオキシ）ブチル−２’
−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−
（（メタ）アクリロイルオキシ）ペンチル−２’−（ト
リメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（（メ
タ）アクリロイルオキシ）ヘキシル−２’−（トリメチ
ルアンモニオ）エチルホスフェート、

【００４０】２−（ビニルオキシ）エチル−２’−（ト
リメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−（アリ
ルオキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エ
チルホスフェート、２−（ｐ−ビニルベンジルオキシ）
エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフ
ェート、２−（ｐ−ビニルベンゾイルオキシ）エチル−
２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、
２−（スチリルオキシ）エチル−２’−（トリメチルア
ンモニオ）エチルホスフェート、２−（ｐ−ビニルベン
ジル）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチル
ホスフェート、２−（ビニルオキシカルボニル）エチル
−２’−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェー
ト、２−（アリルオキシカルボニル）エチル−２’−
（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、

【００４１】２−（アクリロイルアミノ）エチル−２’
−（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、２−
（ビニルカルボニルアミノ）エチル−２’−（トリメチ
ルアンモニオ）エチルホスフェート、

【００４２】エチル−（２’−トリメチルアンモニオエ
チルホスホリルエチル）フマレート、ブチル−（２’−
トリメチルアンモニオエチルホスホリルエチル）フマレ
ート、ヒドロキシエチル−（２’−トリメチルアンモニ
オエチルホスホリルエチル）フマレート、エチル−
（２’−トリメチルアンモニオエチルホスホリルエチ
ル）マレート、ブチル−（２’−トリメチルアンモニオ
エチルホスホリルエチル）マレート、ヒドロキシエチル
−（２’−トリメチルアンモニオエチルホスホリルエチ
ル）マレート等を挙げることができる。

【００４３】この中でも２−（（メタ）アクリロイルオ
キシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチル
ホスフェートが好ましく、さらに２−（メタクリロイル
オキシ）エチル−２’−（トリメチルアンモニオ）エチ
ルホスフェート（＝２−（メタクリロイルオキシ）エチ
ルホスホリルコリンともいう、以下、ＭＰＣと略す）が
入手性等の点でより好ましい。

【００４４】ＰＣ単量体を重合する際には、前記のＰＣ
単量体の１種を単独で、もしくは２種以上を混合物とし
て用いることができる。

【００４５】ＰＣ単量体は、公知の方法で製造できる。
例えば、特開昭５４−６３０２５号公報、特開昭５８−
１５４５９１号公報等に示された公知の方法等に準じて
製造することができる。

【００４６】ＰＣ単量体と共重合するＢ成分の疎水性単
量体は、式（２）

【００４７】

【化６】

【００４８】｛ただし、式中、Ｌ¹は、−Ｃ₆Ｈ₄−、−
Ｃ₆Ｈ₁₀−、−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）
ＮＨ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−および−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−
Ｏ−からなる群より選ばれる基を示し、Ｌ²は、水素原
子、−（ＣＨ₂）_g−Ｌ³、−（（ＣＨ₂）ｐ−Ｏ）_h−Ｌ³
から選ばれる疎水性官能基を示す。（ｇ、ｈは１〜２
４、ｐは３〜５の整数を示し、ここで、Ｌ³は、水素原
子、メチル基、−Ｃ₆Ｈ₅、−Ｏ−Ｃ₆Ｈ₅から選ばれる官
能基を示す。｝で表される。

【００４９】Ｂ成分の疎水性単量体としては、具体的に
は例えば、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メ
タ）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、２−
エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メ
タ）アクリレート、ステアリル（メタ）アクリレート等
の直鎖または分岐アルキル（メタ）アクリレート；シク
ロヘキシル（メタ）アクリレート等の環状アルキル（メ
タ）アクリレート；ベンジル（メタ）アクリレート、フ
ェノキシエチル（メタ）アクリレート等の芳香族（メ
タ）アクリレート；ポリプロピレングリコール（メタ）
アクリレート等の疎水性ポリアルキレングリコール（メ
タ）アクリレート；スチレン、メチルスチレン、クロロ
メチルスチレン等のスチレン系単量体；メチルビニルエ
ーテル、ブチルビニルエーテル等のビニルエーテル系単
量体；酢酸ビニル、プロピオン酸ビニル等のビニルエス
テル系単量体等が挙られる。これらの１種または２種以
上が用いられる。

【００５０】Ｃ成分の親水性単量体は、例えば、ヒドロ
キシ基、カルボキシル基、ホスホン酸基、スルホン酸
基、アミド基、アミノ基、ジアルキルアミノ基、トリア
ルキルアミノ塩基、トリアルキルホスホニウム塩基およ
びポリオキシエチレン基からなる群より選ばれる親水性
基を有する単量体である。さらに、具体的には例えば、
２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、２−ヒド
ロキシブチル（メタ）アクリレート、４−ヒドロキシブ
チル（メタ）アクリレート等の水酸基含有（メタ）アク
リレート；アクリル酸、メタクリル酸（ＭＡｃ）等のカ
ルボン酸；スチレンスルホン酸、（メタ）アクリロイル
オキシホスホン酸、２−ヒドロキシ−３−（メタ）アク
リルオキシプロピルトリメチルアンモニウムクロライド
等のイオン性基含有単量体；（メタ）アクリルアミド、
アミノエチルメタクリレート、ジメチルアミノエチル
（メタ）アクリレート等の含窒素単量体；ポリエチレン
グリコール（メタ）アクリレート等が挙げられる。これ
らの１種または２種以上が用いられる。

【００５１】ＰＣ重合体は、前記Ａ成分のＰＣ単量体と
Ｂ成分の疎水性単量体との単量体組成物、あるいは、前
記Ａ成分のＰＣ単量体とＢ成分の疎水性単量体およびＣ
成分の親水性単量体との単量体組成物を重合したもので
あればよく、通常のラジカル共重合により製造すること
ができる。

【００５２】本発明のＰＣ重合体の分子量は、重量平均
で、５，０００〜５，０００，０００の範囲がよく、さ
らに望ましくは１００，０００〜２，０００，０００の
範囲である。重合体の重量分子量が５，０００未満では
十分に微粒子再分散性を発揮させるのが困難であり、重
合体の重量分子量が５，０００，０００より大きいとＰ
Ｃ重合体の水性溶液の粘性が高くなりすぎ微粒子の免疫
反応を阻害するおそれがあるため好ましくない。

【００５３】本発明における臨床検査用微粒子とは、お
およそ１０ｎｍ〜１００μｍの直径の水分散性の微粒子
を指し、ラテックス、リポソーム、磁性微粒子、磁性細
菌、赤血球等の臨床検査に使用することのできる微粒子
であればいずれでもよい。

【００５４】本発明の微粒子再分散剤が適用できるラテ
ックスを使用した臨床検査方法としては、いずれの方法
でもよいが、ラテックス凝集反応による濁度、光散乱、
粒度分布等の変化を検出する方法等が挙げられる。

【００５５】ラテックスとしては、乳化重合で製造され
たポリスチレン、ポリメチルメタクリレート等の微粒子
が一般的であるが、どのような素材、方法で製造された
ものでもよい。

【００５６】本発明の微粒子再分散剤が適用できる磁性
微粒子としては、前記従来技術で説明したような検査方
法や分離精製方法で使用される磁性微粒子が一般的であ
るが、試薬調製、検査、分離精製の過程で一旦磁力で凝
集させた後再分散させる磁性微粒子には、いずれの場合
にも好適に使用できる。

【００５７】磁性微粒子の構造としては、フェライト磁
石、サマリウム−コバルト磁石、希土磁石、鉄、マンガ
ン、コバルト、四三酸化鉄、三二酸化鉄、フェライト型
ステンレス、マルテンサイト型ステンレス、アモルファ
ス合金、シリコン鉄難磁性結晶、ニッケル、クロム等の
ように磁性を有する金属あるいは金属化合物の微粒子で
あり、必要に応じてポリマーや親油化剤で被覆したりあ
るいは含有させているものでもよい。

【００５８】前記の検査用微粒子のなかでも、微粒子ラ
テックスまたは磁性微粒子がより好ましく挙げられる。

【００５９】本発明の微粒子再分散剤が適用できる微粒
子に結合させ得る生体関連物質と生化学的な特異的な結
合部位を有する化合物としては、前記の特異的な結合部
位を有していれば、いずれのものでもよいが、例えば、
抗原、抗体等の免疫反応活性物質、ＤＮＡ、ＲＮＡ等の
核酸関連物質、酵素、蛍光物質、放射性物質、発光物質
等の標識関連物質等が挙げられる。

【００６０】抗原、抗体等の免疫反応活性物質として
は、例えば、免疫グロブリン、血漿タンパク質、ホルモ
ン関連物質、腫瘍関連物質、ウイルス関連物質、薬剤に
対する抗体、酵素に対する抗体等が挙げられ、またこれ
らの物質に対する抗体も挙げられる。

【００６１】血漿タンパク質としては、例えば、Ｃ反応
性タンパク質（ＣＲＰ）、アポタンパク質関連物質、リ
ューマチ因子（ＲＦ）、トランスフェリン等が挙げられ
る。

【００６２】ホルモン関連物質としては例えば、甲状腺
刺激ホルモン（ＴＳＨ）、トリヨードサイロニン（Ｔ
３）、サイロキシン（Ｔ４）、チロキシン結合タンパク
質（ＴＢＧ）等が挙げられる。

【００６３】腫瘍関連物質としては、例えば、癌胎児性
抗原（ＣＥＡ）、β２−マイクログロブリン、αフェト
プロテイン（ＡＦＰ）等が挙げられる。

【００６４】ウイルス関連物質としては、例えば、ＨＢ
ｓ抗原、ＨＢｓ抗体、ＨＢｅ抗原、ＨＢｅ抗体、ムンプ
ス、ヘルペス、麻疹、風疹、抗エイズ抗体等が挙げられ
る。

【００６５】薬剤に対する抗体としては、例えば、フェ
ノバルビタール、アセトアミノフェノン、サリチル酸、
シクロスポリン等の抗体が挙げられる。

【００６６】酵素としては具体的には、例えば、アセチ
ルコリンエステラーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、β
−Ｄ−ガラクトシターゼ、ペルオキシターゼ、グルコア
ミラーゼ、グルコースオキシターゼ、リゾチーム等が挙
げられる。

【００６７】蛍光物質としては、例えば、フルオロセイ
ンイソチオシアネート、４−クロロ−７−ニトロベンゼ
ンゾフラザン、４−フルオロ−７−ニトロベンゼンゾフ
ラザン、スルホローダミン１０１酸クロライド等が挙げ
られる。

【００６８】発光物質としては、例えば、１０−メチル
−９−［４−｛２−（スクシンイミジルオキシカルボニ
ル）エチル｝フェニルオキシカルボニル］アクリジニウ
ムフルオロサルフェート等が挙げられる。

【００６９】前記の生体関連物質のなかでも、免疫グロ
ブリン、血漿タンパク質等がより好ましく挙げられる。

【００７０】本発明のＰＣ重合体により臨床検査用微粒
子の分散安定性を向上させる方法としては、微粒子を含
有する臨床検査試薬にＰＣ重合体を０．００１〜１重量
％となるように添加する方法である。

【００７１】また、特に測定容器あるいはラインに対し
て吸着して凝集するような安定性の低い微粒子含有臨床
検査試薬を使用する場合には、微粒子を含有する臨床検
査試薬が測定容器あるいはラインに接触させる前に、前
記の測定容器あるいはラインに対して、ＰＣ重合体を
０．００１〜１重量％含む液を加えて、接触させる方法
も有効である。

【００７２】ＰＣ重合体が、０．００１重量％より低い
濃度では微粒子分散安定化効果を十分に発揮させること
ができず、１重量％より高い濃度であるとＰＣ重合体が
粒子表面で必要以上に残留し免疫反応を阻害する恐れが
あるため好ましくない。

【００７３】本発明のＰＣ重合体により臨床検査用微粒
子の再分散性を向上させる方法としては、微粒子を凝集
させる前の微粒子分散液にＰＣ重合体を０．００１〜１
重量％となるように添加する方法である。

【００７４】本発明のＰＣ重合体により臨床検査用微粒
子の再分散性を向上させる別の方法としては、凝集させ
た微粒子を再分散させる直前にＰＣ重合体を０．００１
〜１重量％となるように添加する方法である。

【００７５】ＰＣ重合体が、０．００１重量％より低い
濃度では微粒子再分散性を十分に発揮させることができ
ず、ＰＣ重合体が１重量％より高い濃度であるとＰＣ重
合体が粒子表面で必要以上に残留し免疫反応を阻害する
恐れがあるため好ましくない。

【００７６】微粒子を再分散させる前の凝集させる方法
としては、いずれの方法でもよいが、ポリスチレンラテ
ックスのように媒体と比重のわずかに異なる微粒子の場
合には遠心沈殿法が適当であり、磁性微粒子の場合には
磁力により凝集させる方法が適当である。

【００７７】本発明の微粒子含有臨床検査試薬は、前記
の臨床検査用微粒子分散剤と検査用微粒子とを接触させ
て、前記の微粒子に担持させてなる微粒子を含有するこ
とを特徴とする微粒子含有臨床検査試薬である。特に臨
床検査用微粒子には、例えば、前記に記載の抗原、抗体
等の免疫反応活性物質、ＤＮＡ、ＲＮＡ等の核酸関連物
質、酵素、蛍光物質、放射性物質、発光物質等の標識関
連物質等あるいはこれらの関連物質の生物学的特異的な
結合部位を担持したものが好ましく挙げられる。より好
ましくは、抗原−抗体反応を用いる抗原（または抗体）
を担持させたものが挙げられる。

【００７８】本発明の臨床検査試薬の製造方法は、前記
のように臨床検査用の水中分散微粒子と、前記に記載の
臨床検査用微粒子分散剤水溶液とを接触させて、微粒子
に前記の式（１）で表される単量体に基づく構成成分を
含有する重合体を担持させた微粒子を作成する、容易な
臨床検査試薬の製造方法である。

【００７９】また、本発明の生体関連物質を分離精製す
る方法は、前記の臨床検査用微粒子分散剤と、生体関連
物質に生化学的に特異的に結合する部位とを担持させた
微粒子を用いる方法で、前記の微粒子と、さらに前記の
生体関連物質とを接触させて複合体を形成させ、分離
し、さらにその複合体から、前記の生体関連物質を分離
して精製する方法である。微粒子が磁性微粒子の場合に
も、生体関連物質としては、前記のものが使用でき、前
記と同様な操作により、細胞、細菌、ＤＮＡ、酵素等に
ついても、それぞれに対して特異的結合部位を有する物
質を磁性微粒子に担体させて、同様に複合体の形成さ
せ、それを分離し、さらにその複合体から前記の生体関
連物質を分離して精製する方法である。このような分離
精製の場合には、前記と同様な理由から高い再分散性を
有する磁性微粒子がより好ましく挙げられる。

【００８０】本発明の臨床検査用微粒子分散剤には、本
発明の効果を損なわない範囲において、界面活性剤、溶
剤、防腐剤等の他の成分を添加してもよい。

【００８１】

【発明の効果】第１の発明の臨床検査用微粒子分散剤
は、臨床検査試薬を調整する過程及び検査に使用する過
程において凝集させた検査用微粒子に対し、結合させて
いる抗体や抗原等の活性を落とすことなく分散性を向上
させ、さらに凝集状態からの再分散性を向上させる分散
剤である。また、第２の発明の検査試薬は、前記の分散
剤を用いて、担持させた臨床検査用微粒子を使用する再
現性が高く高感度で自動分析機に適した検査試薬であ
る。また、第３の発明の検査試薬の製造方法は、前記の
分散剤を、微粒子に担持させた臨床検査用微粒子を使用
する簡単な検査試薬の製造方法である。また、第４の発
明の臨床検査方法は、前記の分散剤を用いて、担持させ
た臨床検査用微粒子を使用する臨床検査方法で容易に実
施することができる。またさらに、第５の発明の生体関
連物質の分離精製方法は、前記の分散剤を用いて、生体
関連物質｛例えば抗体（または抗原）｝を担持させた臨
床検査用微粒子を使用するので容易に回収率よく生体関
連物質の分離精製することができる方法である。

【００８２】

【実施例】以下、実施例に基づいてさらに詳しく説明す
る。次に用いたポリマーの重量平均分子量の分析方法を
示す。 ＜重量平均分子量の測定＞リン酸バッファー（ｐＨ７．
４、２０ｍＭ）を溶離液としたゲルパーミエーションク
ロマトグラフィー（ＧＰＣ）、ポリエチレングリコール
標準、ＵＶ（２１０ｎｍ）及び屈折率を用いて検出し
た。

【００８３】合成例１；ポリマー１（Ｐ−１）の合成 ＭＰＣ；３５．７ｇ、ｎ−ブチルメタクリレート（ＢＭ
Ａ）；４．３ｇ（単量体組成モル比、ＭＰＣ／ＢＭＡ＝
８０／２０）をエタノール；１６０ｇに溶解し４つ口フ
ラスコに入れ、３０分間窒素を吹込んだ後、６０℃でア
ゾビスイソブチロニトリル；０．８２ｇを加えて８時間
重合反応させた。重合液を３リットルのジエチルエーテ
ル中にかき混ぜながら滴下し、析出した沈殿を濾過し、
４８時間室温で真空乾燥を行って、粉末２９．６ｇを得
た。得られた共重合体は、ＧＰＣにより評価した重量平
均分子量で１５３，０００であった。これをポリマー１
（Ｐ−１）とする。

【００８４】合成例２；ポリマー２（Ｐ−２）の合成 前記の合成例１のポリマー１に準じて単量体の種類、組
成比（モル組成比ＭＰＣ０．５−ＢＭＡ０．２−ＭＡｃ
０．３）、溶媒種を変え、合成例１と同様の操作によ
り、重合体ポリマー２（Ｐ−２）を得た。得られた共重
合体のポリマーは、前記と同様にして測定した結果、重
量平均分子量で３５４，０００であった。

【００８５】

【表１】

【００８６】注；表中に用いた略号は次のとおりであ
る。 ＭＰＣ；２−（メタクリロイルオキシ）エチル−２’−
（トリメチルアンモニオ）エチルホスフェート、 ＢＭＡ；ｎ−ブチルメタクリレート、 ＭＡｃ；メタクリル酸

【００８７】実施例１ 平均粒径１９７ｎｍのポリスチレン製ラテックス溶液
｛ジェイエスアール（株）社製｝１．０ｍＬ（５０ｍｇ
／ｍＬ）に純水４ｍＬを加え軽くかき混ぜた後、ポリマ
ー１を０．０１ｇ加え（ポリマー１濃度０．２％）かき
混ぜて溶解させた。その後、６００００回転１時間で遠
心分離し、上澄み液を捨て、ポリマー１を０．０１ｇ溶
解させた純水５ｍＬを加え超音波照射を行い再分散させ
た。この遠心分離操作をさらに４回繰り返して最終的に
ラテックス分散液５ｍＬを得た。ＣＯＵＬＴＥＲ社製の
サブミクロン粒度分布計Ｎ４ＳＤ型を使用して、初期及
び５回の遠心分離後のラテックスの粒径（Ｄ）、標準偏
差（ＳＤ）およびＣＶ値｛（ＳＤ／Ｄ）×１００％｝を
求めた。結果を表２に示す。

【００８８】比較例１ 平均粒径１９７ｎｍのポリスチレン製ラテックス溶液
｛ジェイエスアール（株）社製｝１．０ｍＬ（５０ｍｇ
／ｍＬ）に純水４ｍＬを加え軽くかき混ぜた。その後、
６００００回転１時間で遠心分離し、上澄み液を捨て、
純水５ｍＬを加え超音波照射を行い再分散させた。この
遠心分離操作をさらに４回繰り返して最終的にラテック
ス分散液５ｍＬを得た。そのラテックスを用いて、実施
例１と同様にして数値を求めた。結果を表２に示す。

【００８９】

【表２】

【００９０】実施例２ 平均粒径１９７ｎｍのポリスチレン製ラテックス溶液
｛ジェイエスアール（株）社製｝１．０ｍＬ（５０ｍｇ
／ｍＬ）に２０ｍｇ／ｍＬのヤギ抗（マウスＩｇＧ）抗
体溶液１．０ｍＬ（リン酸緩衝液）を添加して、室温に
て２時間かき混ぜた。かき混ぜた後、２０ｍｇ／ｍＬの
ウシ血清アルブミン溶液（リン酸緩衝液）を添加して、
室温で２時間かき混ぜた。かき混ぜ終了後、ポリマー１
を０．１％溶解させたリン酸緩衝液１．０ｍＬ加え軽く
更にかき混ぜた。その後、４００００回転、１時間の遠
心分離を行った。遠心分離終了後、上清を除去した。そ
の後、ポリマー１を０．１％溶解させたリン酸緩衝液３
ｍＬ加え１分間の超音波照射で再分散させた。遠心分離
による洗浄操作を４回繰り返して、最終的にポリマー１
を０．１％溶解させたリン酸緩衝液を添加して、２ｍｇ
／ｍＬのラテックス懸濁液を調製した。測定は自動分析
機器７０７０｛（株）日立製作所社製｝で行った。 ＜試薬と条件＞ 第１試薬（Ｒ１）；ポリマー１を０．１％溶解させたリ
ン酸緩衝液２００μＬ、 第３試薬（Ｒ３）；先に調製した２ｍｇ／ｍｌのラテッ
クス懸濁液５０μＬ、 検体；マウス血清（３種類の検体で同一検体を５回測
定）３μＬ。 ＜条件＞ 測定形式；２ポイントエンドの１０分間反応、 キャリブレーション；スプライン、 測定ポイント；１８−３１、 測定波長は、７００−３４０ｎｍである。結果を表３に
示す。

【００９１】実施例３ 実施例２で用いたポリマー１の代わりにポリマー２を用
いた以外は実施例２と同様に行った。結果を表３に示
す。

【００９２】比較例２ 実施例２のポリマー１の代わりにウシ血清アルブミンを
用いた以外は実施例２と同様に行った。結果を表３に示
す。

【００９３】

【表３】

【００９４】実施例４ 下記の（１−１）〜（１−５）の操作手順で、ポリマー
１を微粒子再分散剤として使用し抗体を結合させた磁性
Ｆｅ微粒子分散液を作成し、抗原の測定を行った。 （１−１）粒径２．５μｍのＦｅ微粒子（ポリサイエン
ス社製、球状強磁性鉄粉）５．０ｍｇにγ−アミノプロ
ピルトリエトキシシラン１．０ｍＬを加え、１分間の超
音波照射で再分散させた後、室温で１０分間インキュベ
ートさせた。 （１−２）磁石で容器の底にＦｅ微粒子を凝集させなが
ら溶媒を除去し、磁力を解除した後、ポリマー１を０．
１％溶解させたリン酸緩衝液１．０ｍＬを加え軽くかき
混ぜて洗浄した。 （１−３）（１−２）の洗浄操作を２回繰り返した後、
２．５％グルタルアルデヒドのリン酸緩衝液５ｍＬを加
え１分間の超音波照射で再分散させ、室温で１時間イン
キュベートを行った。 （１−４）（１−２）の操作を３回繰り返し余分なグル
タルアルデヒドを取り除いた後、抗（マウスＩｇＧ）抗
体の１．０ｍｇ／ｍＬのリン酸緩衝液１．０ｍＬを加
え、室温で１時間インキュベートした。 （１−５）（１−２）の操作を３回繰り返した後、ポリ
マー１を０．１％溶解させたリン酸緩衝液１．０ｍＬを
添加し、抗体固定化磁性Ｆｅ微粒子１ｍＬ（磁性微粒子
濃度；５ｍｇ／ｍＬ）を得た。上の操作により得られた
抗体固定化磁性Ｆｅ微粒子を使用して下記の（２−１）
〜（２−５）の手順で抗原の測定を行った。 （２−１）抗体固定化磁性Ｆｅ微粒子分散液１００μＬ
づつを３本のガラス試験管（直径：１２ｍｍ、長さ：７
５ｍｍ）に入れ、磁石で試験管の底に磁性Ｆｅ微粒子を
凝集させ分散媒を取り除いた。 （２−２）各容器に０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、１
００ｎｇ／ｍＬの３種類の濃度のマウスＩｇＧ溶液をそ
れぞれ５００μＬづつ加えて、１分間超音波をかけた
後、室温で１時間インキュベートを行って抗原−抗体反
応をさせた。 （２−３）磁石で容器の底に前記のＦｅ微粒子を凝集さ
せながら溶媒を除去し、磁力を解除してポリマー１を
０．１％溶解させたリン酸緩衝液１．０ｍＬを加え軽く
かき混ぜて洗浄した。 （２−４）（２−３）の洗浄操作を２回行った後、磁石
で前記のＦｅ微粒子を凝集させ分散媒を除去し、９−
〔（６，６−ジメチル−３−イソプロピル−２，４，５
−トリオキサシクロヘキシノ）カルボニル〕アントラセ
ン標識抗（マウスＩｇＧ）抗体（以下、トリオキサン標
識抗体と略す）溶液溶液（濃度；３３０ｎｇ／ｍＬ）を
５００μＬ加えて室温で１時間インキュベートを行っ
た。（なお、９−〔（６，６−ジメチル−３−イソプロ
ピル−２，４，５−トリオキサシクロヘキシノ）カルボ
ニル〕アントラセンは特開平６−２２８１２９号記載の
方法により合成し、Ｎ−ヒドロシキスクシンイミド及
び、ジシクロヘキシルカルボジイミドを用いてアントラ
セン標識抗体を調製した。） （２−５）（２−３）の洗浄操作を２回行った後、磁石
で前記のＦｅ微粒子を凝集させ分散媒を除去し、ジメチ
ルホルムアミド２００μＬ加え、１０Ｎ水酸化ナトリウ
ム液２００μＬをトリガーとして加え化学発光させた。
発光量はＬＵＭＩＮＥＳＣＥＮＣＥ ＲＥＡＤＥＲ Ｂ
ＬＲ−２０１（アロカ社製）を用いて、１分間までの積
算発光カウントを測定した。測定結果を表４に示す。

【００９５】実施例５ 実施例４のポリマー１を溶解させたリン酸緩衝液の代わ
りに、ポリマー２を溶解させたリン酸緩衝液を用いた以
外は実施例４と同様に行い、１分間までの積算発光カウ
ントを測定した。測定結果を表４に示す。

【００９６】比較例３ 実施例４のポリマー１を溶解させたリン酸緩衝液の代わ
りに、ウシ血清アルブミンを添加したリン酸緩衝液を用
いた以外は実施例４と同様に行い、１分間までの積算発
光カウントを測定した。測定結果を表４に示す。

【００９７】

【表４】

【００９８】実施例６ 実施例４の（１−１）〜（１−５）の操作手順で作成し
た抗体を担持させた磁性Ｆｅ微粒子を、１００μＬづつ
３本の試験管（直径；１２ｍｍ、長さ；７５ｍｍ）に入
れ、磁石で試験管の底に前記の磁性Ｆｅ微粒子を凝集さ
せ分散媒を取り除いた。これにマウス血清５００μＬづ
つを加えて、１分間超音波をかけた後、室温で１時間イ
ンキュベートを行って、抗原−抗体反応をさせた。次い
で、磁石で容器の底に前記のＦｅ微粒子を凝集させなが
ら溶媒を除去し、磁力を解除して、ポリマー１を０．１
％溶解させたリン酸緩衝液１．０ｍｌを加えて軽くかき
混ぜて洗浄した。この洗浄操作を２回行った後に、酢酸
緩衝液（ｐＨ４．５）５００μＬを加えて１分間超音波
をかけた後、室温で１時間インキュベートを行って結合
した抗原（マウスＩｇＧ）を遊離させた。次いで、磁石
で試験管の底に前記の磁性Ｆｅ微粒子を凝集させた後
に、上清を４００μＬ回収した。この上清に含まれるマ
ウスＩｇＧ濃度を以下の方法で測定した。 ＜マウスＩｇＧの測定＞１０μＬ／ｍｇのヤギ抗（マウ
スＩｇＧ）抗体｛和光純薬工業（株）社製｝溶液（１０
０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．５）をポリスチレン製９
６穴タイタープレート（イムノプレート、Ｆ９６、マキ
シソープ、Ｎｕｎｃ社製）に１００μＬ／ウエルで加
え、４℃、一晩インキュベートして物理的に吸着させた
後に、生理的リン酸緩衝液（以下、ＰＢＳと略す）で４
回洗浄を行った。次いで、５％のウシ血清アルブミン
（以下、ＢＳＡと略す）を添加したＰＢＳを３００μＬ
／ウエルで加え、４℃、一晩インキュベートした後に、
ＢＳＡ溶液を除去し、抗体吸着固相を調製した。次い
で、先の上清をＰＢＳで１００倍希釈したものを１００
μＬ／ウエルで加え、２５℃、２時間インキュベート
し、続いてＰＢＳで４回洗浄した。次いでパーオキシダ
ーゼ標識−抗（マウス抗体）抗体｛和光純薬工業（株）
社製｝溶液をＰＢＳで１００００倍希釈して、１００μ
Ｌ／ウエルで加え、２５℃、２時間インキュベートし、
続いてＰＢＳで４回洗浄した。次いで、ペルオキシダー
ゼ発色キットＴ｛住友ベークライト（株）社製｝で各ウ
エルを室温で、１０分間発色させた後に、ＳＰＥＣＴＲ
Ａ ＭＡＸ２５０（マイクロプレートリーダー、モレキ
ュラーデバイス社製）を用いて、各ウエルの４５０ｎｍ
の吸光度を測定した。既知量のＩｇＧを含む溶液を用い
て検量線を作成し、それを用いて先の上清中のマウスＩ
ｇＧ濃度を求めた。１検体について８回測定した。結果
を表５に示す。

【００９９】実施例７ 実施例６で用いたポリマー１の代わりにポリマー２を用
いた以外は、実施例６と同様にして行い、マウスＩｇＧ
濃度を求めた。結果を表５に示す。

【０１００】比較例４ 実施例６で用いたポリマー１の代わりにウシ血清アルブ
ミンを用いた以外は、実施例６と同様にして行い、マウ
スＩｇＧ濃度を求めた。結果を表５に示す。

【０１０１】

【表５】

【０１０２】なおここでは、回収率（％）は、比較例４
を基準として実施例６および７で検出したマウスＩｇＧ
量を％で表示した。

【０１０３】以上の結果より、比較例１〜３に対して、
実施例１〜５の場合には、高い精度の結果が得られ、検
査方法として優れていることがわかる。また、比較例４
に比べて実施例６および７が回収率が高く、優れている
ことがわかる。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記の式（１） 【化１】 ｛ただし、式中、Ｘは２価の有機残基を示し、Ｙは炭素
   数１〜６のアルキレンオキシ基を示し、Ｚは水素原子も
   しくはＲ⁵−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−（ただし、Ｒ⁵は炭素数１
   〜１０のアルキル基または炭素数１〜１０のヒドロキシ
   アルキル基を示す）を示す。また、Ｒ¹は水素原子もし
   くはメチル基を示し、Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁴は同一もしくは
   異なる基であって、水素原子、炭素数１〜６のアルキル
   基またはヒドロキシアルキル基を示す。ｍは０または１
   を示す。ｎは１〜４の整数である。｝で表されるホスホ
   リルコリン類似基含有単量体を含む単量体組成物を重合
   してなる重合体を有効成分とする臨床検査用微粒子分散
   剤。
2. 【請求項２】ホスホリルコリン類似基含有単量体を含む
   単量体組成物が、Ａ成分のホスホリルコリン類似基含有
   単量体２０〜９８ｍｏｌ％と、Ｂ成分の疎水性単量体２
   〜８０ｍｏｌ％とからなる単量体組成物である請求項１
   記載の臨床検査用微粒子分散剤。
3. 【請求項３】Ａ成分のホスホリルコリン類似基含有単量
   体が、２−（メタ）アクリロイルオキシエチル−２’−
   （トリメチルアンモニオ）エチルホスフェートであり、
   Ｂ成分の疎水性単量体が下記の式（２） 【化２】 ｛ただし、式中、Ｌ¹は、−Ｃ₆Ｈ₄−、−Ｃ₆Ｈ₁₀−、−
   （Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｏ
   −（Ｃ＝Ｏ）−および−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−からなる
   群より選ばれる基を示し、Ｌ²は、水素原子、−（Ｃ
   Ｈ₂）_g−Ｌ³、（（ＣＨ₂）_p−Ｏ）_h−Ｌ³から選ばれる
   疎水性官能基を示す。（ｇ、ｈは１〜２４、ｐは３〜５
   の整数を示し、Ｌ³は、水素原子、メチル基、−Ｃ
   ₆Ｈ₅、−Ｏ−Ｃ₆Ｈ₅から選ばれる官能基を示す。）｝で
   表される疎水性単量体である請求項１または２記載の臨
   床検査用微粒子分散剤。
4. 【請求項４】請求項１〜３のいずれか１項に記載の臨床
   検査用微粒子分散剤と、生体関連物質に生化学的に特異
   的に結合する部位とを担持させてなる検査用微粒子を含
   有することを特徴とする微粒子含有臨床検査試薬。
5. 【請求項５】検査用微粒子が、微粒子ラテックスまたは
   磁性微粒子である請求項４に記載の微粒子含有臨床検査
   試薬。
6. 【請求項６】臨床検査用の水中分散微粒子と、前記の請
   求項１〜３のいずれか１項に記載の臨床検査用微粒子分
   散剤の分散溶液とを接触させて、微粒子に前記の式
   （１）で表される単量体に基づく構成成分を含有する重
   合体と、生体関連物質に生化学的に特異的に結合する部
   位とを担持させてなることを特徴とする臨床検査試薬の
   製造方法。
7. 【請求項７】請求項１〜３のいずれか１項に記載の臨床
   検査用微粒子分散剤と生体関連物質に生化学的に特異的
   に結合する部位とを担持させた微粒子と、前記の生体関
   連物質とを接触させて複合体を形成させ、分離し、さら
   にその複合体から、前記の生体関連物質を分離して精製
   する方法。 【０００９】