JP2001158749A

JP2001158749A - ペプチドの持続放出

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Publication number: JP2001158749A
Application number: JP2000317228A
Authority: JP
Inventors: Dennis Edward Danley; デニス・エドワード・ダンリー; Robert Alan Gelfand; ロバート・アラン・ジェルファンド; Kieran Francis Geoghegan; キーラン・フランシス・ジョグヘガン; Kim Yesook; イエソーク・キム; William Joseph Lambert; ウィリアム・ジョセフ・ランバート; Kuwi Hon; ホン・クウィ
Original assignee: Scios LLC
Current assignee: Scios LLC
Priority date: 1993-04-07
Filing date: 2000-10-17
Publication date: 2001-06-12
Also published as: BR9401185A; CA2116478A1; AU682328B2; HU225496B1; HU9400350D0; AU5501694A; DE69434588D1; IL108611A0; ZA94878B; CN1544084A; JP2006213727A; JP2010006841A; CN1311865C; EP0619322B1; CZ296341B6; JP5081213B2; ATE314393T1; NO940436D0; HUT68525A; JPH072695A

Abstract

(57)【要約】【課題】持続的に血糖を制御するための組成物、およ
び哺乳動物のインシュリン非依存性糖尿病の治療法を提
供すること。【解決手段】ＧＬＰ−１（７−３７）およびその関連
ペプチドを持続的に投与することよりなる、哺乳動物の
インシュリン非依存性糖尿病の治療法、ならびにそれら
のペプチドの投与を持続させるための組成物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は糖尿病を治療するた
めの組成物および方法に関するものである。より詳細に
は、本発明はグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）お
よびその誘導体の投与を持続させる組成物に関するもの
である。これらの組成物はインシュリン非依存性糖尿病
（ＮＩＤＤＭ）の治療に有用である。

【０００２】

【従来の技術】ＧＬＰ−１のアミノ酸配列は下記のとお
りであることが知られている：

【０００３】

【化２】

【０００４】ＧＬＰ−１は、ロペツ（Ｌｏｐｅｚ，Ｌ．
Ｃ．）ら，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．，ＵＳＡ８０：５４８５−
５４８９（１９８３）；ベル（Ｂｅｌｌ，Ｇ．Ｉ．）
ら，Ｎａｔｕｒｅ３０２：７１６−７１８（１９８
３）；ハインリッヒ（Ｈｅｉｎｒｉｃｈ，Ｇ．）ら，Ｅ
ｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１１５：２１７６−２１８１（１
９８４）およびギグリオン（Ｇｈｉｇｌｉｏｎｅ，
Ｍ．）ら，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ２７：５９９−６
００（１９８４）に提示されている。

【０００５】ＧＬＰ−１は、膵臓および腸管内で処理さ
れる間に、ＧＬＰ−１のアミノ酸７−３７を含む３１ア
ミノ酸のペプチドに変換される。以下、このペプチドを
ＧＬＰ−１（７−３７）と呼ぶ。

【０００６】このペプチドは向インシュリン活性（ｉｎ
ｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ）をも
ち、すなわちホルモンであるインシュリンの合成または
発現を刺激し、または刺激の原因となりうる。この向イ
ンシュリン活性のため、ＧＬＰ−１（７−３７）はイン
シュリノトロピン（ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｎ）と
も呼ばれる。

【０００７】ＧＬＰ−１（７−３７）は下記のアミノ酸
配列をもつ：

【０００８】

【化３】

【０００９】ＧＬＰ−１（７−３７）、その特定の誘導
体、およびそれらを哺乳動物において糖尿病の治療に用
いることは、米国特許第５，１１８，６６６号（’６６
６特許）および第５，１２０，７１２号（’７１２特
許）明細書に示されており、これらの明細書の記載を本
明細書に参考として引用する。’６６６および’７１２
特許明細書に示されるＧＬＰ−１（７−３７）の誘導体
には、天然の配列に存在しないアミノ酸を含むか、また
は１もしくは２以上のアミノ酸を欠如するポリペプチド
が含まれる。’６６６および’７１２特許明細書に示さ
れる他のＧＬＰ−１（７−３７）誘導体には、特定のＣ
−末端塩、エステルおよびアミドが含まれ、その場合塩
類およびエステルはＯＭと定義され、そこでＭは薬剤学
的に許容しうるカチオンまたは低級（Ｃ_l−Ｃ₆）の分枝
鎖もしくは非分枝鎖アルキル基であり、アミドは−ＮＲ
²Ｒ³と定義され、そこでＲ²およびＲ³は同一であるか、
または異なり、水素および低級（Ｃ_l−Ｃ₆）の分枝鎖も
しくは非分枝鎖アルキル基よりなる群から選ばれる。

【００１０】トランケートしたＧＬＰ−１またはトラン
ケートしたインシュリノトロピンとも呼ばれる、向イン
シュリン活性をもつ特定の他のポリペプチド、およびそ
れらの誘導体が、国際特許出願ＵＳ８９／０１１２１
（ＷＯ９０／１１２９６）号明細書に示されている。そ
こでＧＬＰ−１（７−３６）、ＧＬＰ−１（７−３５）
およびＧＬＰ−１（７−３４）と呼ばれているポリペプ
チドは、それぞれ下記のアミノ酸配列をもつ：

【００１１】

【化４】

【００１２】国際特許出願ＵＳ８９／０１１２１号明細
書に示されているポリペプチドの誘導体には、キャリヤ
ー蛋白質への結合を高めるための、またはその向インシ
ュリン効果を高めるための、本質的な効果に影響を及ぼ
さない（ｉｎｃｏｎｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ）アミノ酸置
換、または追加のアミノ酸を含むポリペプチドが含まれ
る。国際特許出願ＵＳ８９／０１１２１号明細書に示さ
れている他のインシュリノトロピン誘導体には、特定の
Ｃ−末端塩、エステルおよびアミドが含まれ、その場合
塩類およびエステルはＯＭと定義され、そこでＭは薬剤
学的に許容しうるカチオンまたは低級の分枝鎖もしくは
非分枝鎖アルキル基であり、アミドは−ＮＲ²Ｒ³と定義
され、そこでＲ²およびＲ³は同一であるか、または異な
り、水素および低級の分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキル
基よりなる群から選ばれる。

【００１３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、持続
的に血糖を制御するための組成物、および哺乳動物のイ
ンシュリン非依存性糖尿病の治療法を提供することであ
る。

【００１４】

【課題を解決するための手段】１形態においては本発明
は、各投与後に持続性作用を伴う化合物を長期間にわた
って反復投与することよりなる、インシュリン非依存性
糖尿病の治療を必要とする哺乳動物におけるその治療方
法において、持続性作用が哺乳動物における持続的な血
糖制御を達成するために必要なものであり、化合物が下
記よりなる群から選ばれる方法に関するものである：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【００１５】

【化５】

【００１６】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【００１７】

【化６】

【００１８】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【００１９】

【化７】

【００２０】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【００２１】

【化８】

【００２２】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）−（ｄ）の
誘導体であって、下記よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド。

【００２３】投与が皮下になされる方法が好ましい。

【００２４】投与が筋肉内になされる方法も好ましい。

【００２５】投与が経皮的になされる方法も好ましい。

【００２６】投与が注入ポンプによりなされる方法も特
に好ましい。

【００２７】投与が経口吸入によりなされる方法も好ま
しい。

【００２８】投与が鼻内吸入によりなされる方法も好ま
しい。

【００２９】投与が胃腸内になされる方法も好ましい。

【００３０】他の形態においては本発明は、下記よりな
る組成物に関するものである：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【００３１】

【化９】

【００３２】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【００３３】

【化１０】

【００３４】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【００３５】

【化１１】

【００３６】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【００３７】

【化１２】

【００３８】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）−（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）持続的な血糖制御を達成するために上
記化合物の作用を持続させうるポリマー。

【００３９】ポリマーが低分子量ポリマーである組成物
が特に好ましい。

【００４０】さらにポリマーが下記よりなる群から選ば
れる組成物が特に好ましい：ポリエチレングリコール、
ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリオ
キシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー、下記
よりなる群から選ばれる多糖類：セルロース、セルロー
ス誘導体、キトサン、アラビアゴム、カラヤゴム、グア
ーゴム、キサンタンゴム、トラガカント、アルギン酸、
カラジーナン、アガロースおよびフルセララン（ｆｕｒ
ｃｅｌｌａｒａｎｓ）、デキストラン、デンプン、デン
プン誘導体、ヒアルロン酸、ポリエステル、ポリアミ
ド、ポリアンヒドリドならびにポリオルトエステル。ポ
リエチレングリコールおよびポリビニルピロリドンより
なる群から選ばれるポリマーが特に好ましい。

【００４１】他の形態においては本発明は、下記よりな
る組成物に関するものである：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【００４２】

【化１３】

【００４３】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【００４４】

【化１４】

【００４５】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：
（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−
Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【００４６】

【化１５】

【００４７】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【００４８】

【化１６】

【００４９】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）―（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）上記化合物の作用を持続させうる薬剤
学的に許容しうる水−非混和性の油懸濁液。

【００５０】持続的な血糖制御を達成することができる
組成物が好ましい。

【００５１】油がラッカセイ油、ゴマ油、アーモンド
油、ヒマシ油、ツバキ油、綿実油、オリーブ油、トウモ
ロコシ油、大豆油、ベニバナ油、ヤシ油、脂肪酸エステ
ルおよび脂肪アルコールエステルよりなる群から選ばれ
る組成物が特に好ましい。

【００５２】さらに、湿潤剤、特に非イオン界面活性剤
をさらに含む組成物が特に好ましい。

【００５３】さらにまた、懸濁化剤をさらに含む組成物
が特に好ましい。

【００５４】他の形態においては本発明は、下記よりな
る組成物に関するものである：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【００５５】

【化１７】

【００５６】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【００５７】

【化１８】

【００５８】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【００５９】

【化１９】

【００６０】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【００６１】

【化２０】

【００６２】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）―（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）ペプチドとのコンプレックスを形成し
た亜鉛（ＩＩ）。

【００６３】持続的な血糖制御作用を達成することがで
きる組成物が好ましい。

【００６４】持続的な血糖制御作用を達成することがで
きる水性懸濁液である組成物が好ましい。

【００６５】亜鉛生成物が非晶質である組成物が特に好
ましい。

【００６６】亜鉛生成物が結晶質である組成物も特に好
ましい。

【００６７】さらに他の形態においては本発明は、下記
よりなる組成物：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【００６８】

【化２１】

【００６９】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【００７０】

【化２２】

【００７１】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【００７２】

【化２３】

【００７３】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【００７４】

【化２４】

【００７５】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）―（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）Ｎｉ（ＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、Ｍｇ
（ＩＩ）、Ｃａ（ＩＩ）、Ｋ（Ｉ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｆ
ｅ（ＩＩ）およびＣｕ（ＩＩ）よりなる群から選ばれる
金属。

【００７６】持続的な血糖制御を達成することができる
組成物が好ましい。

【００７７】さらに他の形態においては本発明は、下記
よりなる組成物に関するものである：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【００７８】

【化２５】

【００７９】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【００８０】

【化２６】

【００８１】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【００８２】

【化２７】

【００８３】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【００８４】

【化２８】

【００８５】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）―（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）塩基性ポリペプチド；であって、持続
的に血糖を制御することができる水性懸濁液である組成
物。

【００８６】塩基性ポリペプチドがプロタミンである組
成物が特に好ましい。

【００８７】さらに他の形態においては本発明は、下記
よりなる組成物に関するものである：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【００８８】

【化２９】

【００８９】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【００９０】

【化３０】

【００９１】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ―Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【００９２】

【化３１】

【００９３】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【００９４】

【化３２】

【００９５】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）―（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）フェノール系化合物；であって、持続
的に血糖を制御することができる水性懸濁液である組成
物。

【００９６】フェノール系化合物がフェノール、クレゾ
ール、レゾルシンおよびメチルパラベンよりなる群から
選ばれる組成物が特に好ましい。

【００９７】さらに他の形態においては本発明は、下記
よりなる組成物に関するものである：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【００９８】

【化３３】

【００９９】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【０１００】

【化３４】

【０１０１】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【０１０２】

【化３５】

【０１０３】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【０１０４】

【化３６】

【０１０５】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）―（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）塩基性ポリペプチドおよびフェノール
系化合物；であって、持続的に血糖を制御することがで
きる水性懸濁液である組成物。

【０１０６】さらに他の形態においては本発明は、下記
よりなる組成物に関するものである：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【０１０７】

【化３７】

【０１０８】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【０１０９】

【化３８】

【０１１０】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【０１１１】

【化３９】

【０１１２】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【０１１３】

【化４０】

【０１１４】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）―（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）塩基性ポリペプチド、フェノール系化
合物および金属イオン；であって、持続的に血糖を制御
することができる水性懸濁液である組成物。

【０１１５】塩基性ポリペプチドがプロタミンである組
成物が好ましい。

【０１１６】金属イオンが亜鉛である組成物も好まし
い。

【０１１７】さらに他の形態においては本発明は、下記
よりなる組成物に関するものである：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【０１１８】

【化４１】

【０１１９】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【０１２０】

【化４２】

【０１２１】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【０１２２】

【化４３】

【０１２３】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【０１２４】

【化４４】

【０１２５】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）―（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）非晶質または結晶質の物質を生成する
条件下で処理された上記ペプチドおよびそれらの誘導
体。

【０１２６】その条件が高剪断、塩類への暴露、または
それらの組み合わせである組成物が好ましい。

【０１２７】塩類が硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウ
ム、硫酸リチウム、塩化リチウム、クエン酸ナトリウ
ム、クエン酸アンモニウム、リン酸ナトリウム、リン酸
カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化アンモ
ニウム、酢酸ナトリウム、酢酸アンモニウム、硫酸マグ
ネシウム、塩化カルシウム、硝酸アンモニウムおよび蟻
酸ナトリウム、ならびにそれらの組み合わせよりなる群
から選ばれる組成物が特に好ましい。

【０１２８】さらに他の形態においては本発明は、下記
よりなる組成物に関するものである：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：

【０１２９】

【化４５】

【０１３０】（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチ
ド：

【０１３１】

【化４６】

【０１３２】式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌ
ｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり：

【０１３３】

【化４７】

【０１３４】これらの誘導体は哺乳動物において処理さ
れた際に向インシュリン活性を有するポリペプチド誘導
体を生じる；（ｄ）下記の一次構造よりなるポリペプチドの誘導体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある：

【０１３５】

【化４８】

【０１３６】ならびに（ｅ）ペプチド（ａ）―（ｄ）の誘導体であって、下記
よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；ならびに（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ｉｉ）リポソームデリバリーシステム。

【０１３７】持続的な血糖制御を達成することができる
組成物が好ましい。

【０１３８】リポソームがリン脂質系のものである組成
物が特に好ましい。

【０１３９】リポソームが非リン脂質系のものである組
成物も特に好ましい。

【０１４０】また本発明は、本発明の組成物を長期間投
与することよりなる、インシュリン非依存性糖尿病の治
療を必要とする哺乳動物においてそれを治療することに
関するものである。

【０１４１】

【発明の実施の形態】持続的に血糖を制御するための組
成物、および哺乳動物のインシュリン非依存性糖尿病の
治療法を提供する。

【０１４２】ＧＬＰ−１（７−３７）およびその関連ペ
プチドを持続的に投与することよりなる、哺乳動物のイ
ンシュリン非依存性糖尿病の治療法が開示される。それ
らのペプチドの投与を持続させるための組成物も開示さ
れる。

【０１４３】特に指示しない限り、本明細書および特許
請求の範囲全体を通して用いられる”誘導体”という語
は、提示された一次構造を構成するポリペプチドにおい
て、そのＣ−末端に１個または２個以上のＬ−アミノ酸
が含まれるもの；Ｃ−末端カルボキシル基が（Ｃ₁−
Ｃ₆）直鎖または分枝鎖アルキル基を含むエステルを形
成したもの；Ｃ−末端カルボキシル基がカルボキシアミ
ドまたは置換カルボキシアミドを形成したもの；酸性ア
ミノ酸残基（Ａｓｐおよび／またはＧｌｕ）がエステル
またはカルボキシアミドを形成したもの；およびそれら
の組み合わせが含まれるが、それらに限定されない。

【０１４４】上記ペプチドに対する相同性をもつポリペ
プチドであって、その相同性がそれらのポリペプチドに
向インシュリン活性を付与するのに十分なものが本発明
の範囲に含まれる。上記ポリペプチドの変異体であっ
て、その変異体が本質的な効果に影響を及ぼさないアミ
ノ酸の置換からなり、かつ向インシュリン活性をもつも
のも本発明の範囲に含まれる。

【０１４５】グルカゴン様ペプチド−１（７−３７）、
その単離、解明、および糖尿病の治療に使用すること
は、米国特許第５，１１８，６６６および５，１２０，
７１２号明細書に示されており、これらの特許明細書の
記載全体を本明細書に参考として引用する。

【０１４６】本発明においては、インシュリン非依存性
糖尿病を伴う患者において、食事その他に際し持続的な
血糖制御を達成するために、ＧＬＰ−１および関連ポリ
ペプチドを血漿中に持続的に増加させるのが必要である
ことが見出された。意外にも、ＧＬＰ−１および関連ペ
プチドを食事時間付近で最高１時間増加させるだけでは
グルコース水準が適切に制御されないことが認められ
た。従ってＧＬＰ−１および関連ペプチドの投与には持
続的なデリバリーシステムが必要とされる。この持続的
なデリバリーシステムによってインシュリンの作用が増
強される。

【０１４７】本明細書および特許請求の範囲全体を通し
て用いられる”インシュリンの作用の増強”という句に
は、インシュリン合成の増加、インシュリン分泌の増
加、筋肉および脂肪によるグルコース取り込みの増加、
ならびに肝臓によるグルコース産生の減少のうち１また
は２以上が含まれるが、これらに限定されない。

【０１４８】本発明のポリペプチドは、当業者に周知の
各種方法により製造される。たとえばこれらのポリペプ
チドは自動ペプチド合成装置、たとえばアプライド・バ
イオシステムズ（ＡＢＩ）４３０Ａ固相ペプチド合成装
置により合成することができる。あるいは本発明のポリ
ペプチドは組換えＤＮＡ技術を用いて製造することがで
き、この場合そのポリペプチドをコードするＤＮＡ配列
が発現ベクターに作動的に結合しており、これを用いて
適宜な宿主細胞を形質転換する。この形質転換された細
胞を、次いでポリペプチドが発現される条件下で培養す
る。次いでポリペプチドを培養物から採取する。さらに
また、合成法および組換えＤＮＡ技術を併用して、本発
明のアミドおよびエステル誘導体を製造し、および／ま
たは目的とするポリペプチドのフラグメントを製造し、
次いでこれを当業者に周知の方法で結合させることがで
きる。

【０１４９】本発明によるポリペプチドの誘導体は、当
業者に周知の方法により製造される。たとえば本発明の
ポリペプチドのＣ−末端アルキルエステル誘導体は、目
的とする（Ｃ₁−Ｃ₆）アルカノールと目的とするポリペ
プチドを、触媒酸、たとえばＨＣｌの存在下で反応させ
ることにより製造される。このアルキルエステル形成に
適した反応条件には、約５０℃の反応温度および約１−
約３時間の反応時間が含まれる。同様にポリペプチド内
にＡｓｐおよび／またはＧｌｕ残基の（Ｃ₁−Ｃ₆）アル
キルエステルを含む本発明のポリペプチドの誘導体を、
こうして製造することができる。

【０１５０】本発明のポリペプチドのカルボキシアミド
誘導体も当業者に周知の固相ペプチド合成法により製造
される。たとえば下記を参照されたい：ＳｏｌｉｄＰ
ｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，スチ
ュワート（Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．）ら，パース・ケ
ム出版社，１９８４。

【０１５１】上記の代わりに、または上記と組み合わせ
て、塩基性アミノ酸残基を異なる塩基性アミノ酸残基
と、または酸性もしくは中性アミノ酸残基と交換する
か、あるいは酸性アミノ酸残基を異なる酸性アミノ酸残
基と、または塩基性もしくは中性アミノ酸残基と交換す
るか、あるいは中性アミノ酸残基を異なる中性アミノ酸
残基と、または酸性もしくは塩基性アミノ酸残基と交換
することにより、そのポリペプチドに対するＤＮＡコー
ド配列を修飾することによって本発明のポリペプチドの
誘導体を製造しうる。このようなポリペプチドの一次配
列の変化は、誘導体の直接合成によっても達成しうる。
それらの方法は当業者に周知である。もちろん、本発明
を実施する際に有用であるためには、これらの誘導体は
向インシュリン作用を達成しなければならない。

【０１５２】本発明によるポリペプチド誘導体の向イン
シュリン活性は下記により測定される。

【０１５３】正常なラットの膵臓組織からランゲルハン
ス島をランシー（Ｌａｎｃｙ，Ｐ．Ｅ）ら，Ｄｉａｂｅ
ｔｅｓ，１６：３５−３９（１９６７）の方法の変法に
より摘出する。この方法においては、膵臓組織のコラー
ゲナーゼ消化物をフィコール濃度勾配（ハンクの平衡塩
類溶液中２７％、２３％、２０．５％および１１％、ｐ
Ｈ７．４）において分離する。ランゲルハンス島を２
０．５％／１１％界面から採取し、洗浄し、立体顕微鏡
下に外分泌組織および他の組織を手作業で取り除く。１
０％ウシ胎仔血清を補充され、かつ１１ｍＭグルコース
を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で３７℃および９
５％空気／５％ＣＯ₂において、ランゲルハンス島を一
夜インキュベートする。次いで１０％ウシ胎仔血清を補
充され、かつ５．６ｍＭグルコースを含有するＲＰＭＩ
１６４０培地にランゲルハンス島を移す。３７℃およ
び９５％空気／５％ＣＯ₂において６０分間、ランゲル
ハンス島をインキュベートする。１０％ウシ胎仔血清を
補充され、かつ１６．７ｍＭグルコースを含有するＲＰ
ＭＩ１６４０培地中において、検査すべきポリペプチ
ド誘導体を１ｎＭおよび１０ｎＭ濃度に調製する。次い
で８−１０個の摘出されたランゲルハンス島を、９６ウ
ェルのミクロタイター皿内の全容量２５０μｌポリペプ
チド誘導体含有培地に移す。ランゲルハンス島をポリペ
プチド誘導体の存在下で３７℃および９５％空気／５％
ＣＯ₂において９０分間インキュベートする。次いでラ
ンゲルハンス島を含まない培地のアリコートを採取し、
その１００μｌをインシュリンの存在量につき、ラジオ
イムノアッセイ法により、イクエート・インシュリンＲ
ＩＡキット（ＥｑｕａｔｅＩｎｓｕｌｉｎＲＩＡＫ
ｉｔ）（バイナックス社、メイン州ポートランド）を用
いてアッセイする。

【０１５４】成人発症糖尿病の治療に有効な用量は、本
発明のポリペプチド誘導体をたとえば静脈内、筋肉内ま
たは皮下に投与する場合、１日当たり約１ｐｇ／ｋｇ−
１，０００μｇ／ｋｇであろう。食事中および食間での
静脈注入のための好ましい用量範囲は、１００ｋｇの患
者を基準として約４−１０ｎｇ／ｋｇ／分または約０．
６−１．４μｇ／ｋｇ／日である。ただしこの範囲外の
用量も可能であり、本発明の範囲に含まれることを認識
すべきである。適切な用量は処方する医師が決定し、治
療される症状の程度、および投与される誘導体により達
成される反応、ならびに患者の年齢、体重、性別および
病歴に応じて決定されるであろう。

【０１５５】持続投与は皮下、筋肉内もしくは経皮的手
段により、経口吸入、鼻内吸入により、胃腸内に、また
は注入ポンプを用いて行うことができる。

【０１５６】ＧＬＰ−１および関連ペプチドの持続投与
は、各種の水溶性ポリマー中における溶液としての配合
物によっても達成しうる。これらのポリマーは一般に低
分子量（＜１５ｋＤａ）のポリマーである。限定ではな
いこれらの低分子量ポリマーの例には、ポリエチレング
リコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコー
ルおよびポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコ
ポリマーが含まれる。これより高い分子量のポリマーも
使用しうる。限定ではない、より高い分子量のポリマー
の例には、多糖類、たとえばセルロース、セルロース誘
導体、キトサン、アラビアゴム、カラヤゴム、グアーゴ
ム、キサンタンゴム、トラガカント、アルギン酸、カラ
ジーナン、アガロースおよびフルセラランが含まれる。
後者の場合、インビボで酵素により、または加水分解に
より分解されるポリマー、たとえばデキストラン；デン
プンおよびその誘導体、ヒアルロン酸、ポリエステル、
ポリアミド、ポリアンヒドリドおよびポリオルトエステ
ルが好ましい。低分子量ポリマーまたは生物分解性ポリ
マーを用いることにより、高分子量の生物非分解性ポリ
マーに伴う組織蓄積が避けられる。配合物は一般に約１
ｍｇ／ｍｌのＧＬＰ−１または関連ペプチドを含有し、
濃度はポリマーに依存するが、一般に最高で５０ｃｐｓ
の粘度に達する濃度であり、かつ適切な緩衝剤、張性調
節剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙａｇｅｎｔ）および防腐剤を
含有しうる。ラットおよびヒトにおけるインビボデータ
は、たとえば測定可能な血中インシュリノトロピン水準
を最高で２４時間達成しうることを証明する。これに対
し、たとえばリン酸緩衝食塩液中に配合されたインシュ
リノトロピンは急激に（約１５分）ピーク血漿中水準に
達し、わずか４時間を越えると血漿中水準は検出限界未
満にまで低下する。時間に対する血漿中濃度のプロット
は、たとえば注射部位からのインシュリノトロピン吸収
がポリマーの存在下では著しく減少したことを示唆す
る。

【０１５７】ＧＬＰ−１および関連ペプチドは、薬剤学
的に許容しうる油に懸濁された粒子として配合されても
よい。好ましい油はトリグリセリドである。これらの油
の限定ではない例には、ラッカセイ油、ゴマ油、アーモ
ンド油、ヒマシ油、ツバキ油、綿実油、オリーブ油、ト
ウモロコシ油、大豆油、ベニバナ油およびヤシ油が含ま
れる。油が水と非混和性であり、かつペプチドに対する
貧溶媒である限り、他の群の油、たとえば脂肪酸のエス
テルおよび脂肪アルコールのエステルも許容される。配
合物は適切な防腐剤、湿潤剤および懸濁化剤をも含有し
うる。たとえば配合物中のインシュリノトロピンの重量
％は、０．０１−１０％である。ラットにおけるインビ
ボデータは、たとえば測定可能な血中インシュリノトロ
ピン水準を最高で２４時間達成しうることを証明する。
これに対し、たとえばリン酸緩衝食塩液中に配合された
インシュリノトロピンは急激に（約１５分）ピーク血漿
中水準に達し、わずか４時間を越えると血漿中水準は検
出限界未満にまで低下する。時間に対する血漿中濃度の
プロットは、たとえば注射部位からのインシュリノトロ
ピン吸収が油懸濁液中では著しく減少したことを示唆す
る。

【０１５８】ＧＬＰ−１および関連ペプチドは、金属イ
オン、好ましくは塩の形のものと組み合わせることによ
り、低溶解性投与形態のものとして配合されてもよい。
この組み合わせにより、非晶質または結晶質である組成
物が得られる。好ましいイオンは亜鉛（ＩＩ）である。
Ｎｉ（ＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、Ｍｇ（ＩＩ）、Ｃａ（Ｉ
Ｉ）、Ｋ（Ｉ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩ）およびＣ
ｕ（ＩＩ）を含めた他の金属イオンも使用しうる。

【０１５９】他の形態の持続投与には、多重ラメラまた
は単一ラメラのリポソームが含まれ、その製法は当業者
に周知である。リポソームは多重ラメラまたは単一ラメ
ラのいずれも、リン脂質系または非リン脂質系のいずれ
であってもよい。

【０１６０】他の形態の持続投与は、沈殿剤、たとえば
フェノール系化合物もしくは塩基性ポリペプチドまたは
金属イオンもしくは塩類を用いて、および／または高剪
断力を用いて形成された、インシュリノトロピン沈殿ま
たは凝集物の水性懸濁液である。２種以上の沈殿剤を同
時に用いることができる。沈殿は結晶質または非晶質の
いずれであってもよい。

【０１６１】インシュリノトロピン結晶は、水中におけ
る薬物溶液からｐＨ勾配（高から低へ、または低から高
へ）および／または温度勾配および／または塩類を用い
て溶解度を低下させることにより得られる。塩類には、
クエン酸アンモニウム、リン酸ナトリウムまたはカリウ
ム、塩化ナトリウムまたはカリウムまたはアンモニウ
ム、酢酸ナトリウムまたはアンモニウム、硫酸マグネシ
ウム、塩化カルシウム、硝酸アンモニウム、蟻酸ナトリ
ウム、および薬物の溶解度を低下させうる他のいずれか
の塩類が含まれる。結晶化のために用いられる塩類が薬
剤学的に許容しうるものでない場合、結晶化が完了した
のち母液を薬剤学的に許容しうる媒質と交換することが
できる。目的とする薬物動態プロフィルを達成するため
にさらに薬物溶解度を低下させる必要がある場合、結晶
を金属イオン、たとえば亜鉛もしくはカルシウム、およ
び／またはフェノール系化合物で処理することができ
る。この処理は、単にこれらの添加物を結晶懸濁液に添
加することにより実施しうる。

【０１６２】インシュリノトロピン沈殿または凝集物の
溶解度は生理的条件下で１μｇ／ｍＬ以下から５００μ
ｇ／ｍＬにまで及びうる。ラットにおけるインビボデー
タは、これらの配合物が測定可能な血中インシュリノト
ロピン水準をたとえば少なくとも３０時間達成しうるこ
とを証明する。

【０１６３】上記の配合物に用いられる水性媒質は、注
射に使用しうるいずれかの種類の緩衝剤系、または純水
であってもよい。最終配合物のｐＨは、配合物が注射可
能である限りいかなる値であってもよい。プロタミンを
いずれかの塩の形（たとえば硫酸塩、塩化物など）で、
またはプロタミン塩基として添加することができる。配
合物の調製のために使用しうる成分の濃度範囲の例は下
記のとおりである：フェノール（０．５−５．０ｍｇ／
ｍｌ）、ｍ−クレゾール（０．５−５．５ｍｇ／ｍ
ｌ）、プロタミン（０．０２−１．０ｍｇ／ｍｌ）、亜
鉛（０．１０−６、亜鉛／インシュリノトロピン、モル
比）、塩化ナトリウム（最高１００ｍｇ／ｍｌ）および
リン酸緩衝液（５−５００ｍＭ）。

【０１６４】他のフェノール系または非フェノール系化
合物も使用しうる。それらの化合物の限定ではない例に
は、レゾルシン、メチルパラベン、プロピルパラベン、
ベンジルアルコール、クロロクレゾール、クレゾール、
ベンズアルデヒド、カテコール、ピロガロール、ハイド
ロキノン、没食子酸ｎ−プロピル、ブチル化ヒドロキシ
アニソール、ブチル化ヒドロキシトルエンが含まれる。
塩基性ポリペプチドの限定ではない例は、ポリリシン、
ポリアルギニンなどである。従って、本明細書において
「塩基性ポリペプチド」とは、プロタミン、ポリリシン
またはポリアルギニンの塩基性と実質的に同等か、また
はそれ以上の塩基性を有するポリペプチドをいう。

【０１６５】

【実施例】以上、本発明を一般的に述べたが、以下に個
々の例につき述べる。これらの例は本発明を限定するた
めのものではなく、本発明の範囲は特許請求の範囲の記
載によって定められると解すべきである。

【０１６６】（実施例１）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ１の調製１０ｍｇのインシュリノトロピンを５ｍｌのメスフラス
コ中へ秤量した。約４ｍｌのリン酸緩衝食塩液（ＰＢ
Ｓ）をフラスコに添加して、薬物を分散、溶解した。フ
ラスコを満たすのに十分なＰＢＳ（適量）を添加した。
２０ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約８ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加
して、薬物を分散、溶解した。適量のＰＢＳをフラスコ
に添加した。両フラスコの内容物を、ガラス注射器によ
り０．２２μのフィルター（蛋白質結合が低いもの）を
通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過することによ
り混和した。溶液Ａ１はインシュリノトロピン２ｍｇ／
ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０１６７】溶液Ｂ１の調製８ｍｇの硫酸プロタミンおよび４４ｍｇのフェノールを
１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。適量のＰＢＳを
添加して、硫酸プロタミンおよびフェノールを溶解し
た。この溶液を０．２２μのフィルター（蛋白質結合が
低いもの）を通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過
した。溶液Ｂ１はプロタミン塩基０．６ｍｇ／ｍｌおよ
びフェノール４．４ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有してい
た。

【０１６８】水性懸濁液１１．５ｍｌの溶液Ａ１を３．５ｍｌのタイプ１ガラスバ
イアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁気
撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ１をバイアル中ヘ
ピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウムシ
ェルでシールした。バイアル内容物を１６時間緩和に撹
拌して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液１はインシュ
リノトロピン１ｍｇ／ｍｌ、プロタミン塩基０．３ｍｇ
／ｍｌ、およびフェノール２．２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中
に含有していた。この懸濁液をラットにおいてインビボ
薬物動態研究に用いた。

【０１６９】（実施例２）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ２の調製１０ｍｇのインシュリノトロピンを５ｍｌのメスフラス
コ中へ秤量した。約４ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加し
て、薬物を分散、溶解した。適量のＰＢＳをフラスコに
添加した。２０ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌ
のメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍｌのＰＢＳをフラ
スコに添加して、薬物を分散、溶解した。適量のＰＢＳ
をフラスコに添加した。両フラスコの内容物を、ガラス
注射器により０．２２μのフィルターを通して１０ｍｌ
のガラスバイアル中へ濾過することにより混和した。溶
液Ａ２はインシュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中
に含有していた。

【０１７０】溶液Ｂ２の調製２ｍｇの硫酸プロタミンおよび４４ｍｇのフェノールを
１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。適量のＰＢＳを
フラスコに添加して、硫酸プロタミンおよびフェノール
を溶解した。この溶液を０．２２μのフィルターを通し
て１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｂ２は
プロタミン塩基０．１５ｍｇ／ｍｌおよびフェノール
４．４ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０１７１】水性懸濁液２１．５ｍｌの溶液Ａ２を３．５ｍｌのタイプ１ガラスバ
イアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁気
撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ２をバイアル中ヘ
ピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウムシ
ェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌し
て、懸濁液を形成させた。水性懸濁液２はインシュリノ
トロピン１ｍｇ／ｍｌ、プロタミン塩基０．０７５ｍｇ
／ｍｌ、およびフェノール２．２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中
に含有していた。この懸濁液をラットにおいてインビボ
薬物動態研究に用いた。

【０１７２】（実施例３）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ３の調製２０ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約８ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加
して、薬物を分散、溶解した。適量のＰＢＳをフラスコ
に添加した。溶液Ａ３を、注射器により０．２２μのフ
ィルターを通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過し
た。溶液Ａ３はインシュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌをＰ
ＢＳ中に含有していた。

【０１７３】溶液Ｂ３の調製８ｍｇの硫酸プロタミン、４４ｍｇのフェノールおよび
３２３ｍｇのグリセリンを１０ｍｌのメスフラスコ中へ
秤量した。適量のＰＢＳをフラスコに添加して、硫酸プ
ロタミン、フェノールおよびグリセリンを溶解した。こ
の溶液を、注射器により０．２２μのフィルターを通し
て１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｂ３は
プロタミン塩基０．６ｍｇ／ｍｌ、フェノール４．４ｍ
ｇ／ｍｌ、およびグリセリン３２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中
に含有していた。

【０１７４】水性懸濁液３１．５ｍｌの溶液Ａ３を３．５ｍｌのタイプ１ガラスバ
イアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁気
撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ３をバイアル中ヘ
ピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウムシ
ェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌し
て、懸濁液を形成させた。水性懸濁液３はインシュリノ
トロピン１ｍｇ／ｍｌ、プロタミン塩基０．３ｍｇ／ｍ
ｌ、フェノール２．２ｍｇ／ｍｌ、およびグリセリン１
６ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁液を
ラットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０１７５】（実施例４）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ４の調製２０ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約８ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加
して、薬物を分散、溶解した。適量のＰＢＳをフラスコ
に添加した。溶液Ａ４を、注射器により０．２２μのフ
ィルター（ミリポア、ミレックス（Ｍｉｌｌｅｘ）−Ｇ
Ｖ）を通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。
溶液Ａ４はインシュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ
中に含有していた。

【０１７６】溶液Ｂ４の調製８ｍｇの硫酸プロタミンおよび５２ｍｇのｍ−クレゾー
ルを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。適量のＰＢ
Ｓをフラスコに添加して、硫酸プロタミンおよびｍ−ク
レゾールを溶解した。この溶液を注射器により０．２２
μのフィルターを通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ
濾過した。溶液Ｂ４はプロタミン塩基０．６ｍｇ／ｍｌ
およびｍ−クレゾール５ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有し
ていた。

【０１７７】水性懸濁液４１．５ｍｌの溶液Ａ４を３．５ｍｌのタイプ１ガラスバ
イアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁気
撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ４をバイアル中ヘ
ピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウムシ
ェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌し
て、結晶を形成させた。水性懸濁液４はインシュリノト
ロピン１ｍｇ／ｍｌ、プロタミン塩基０．３ｍｇ／ｍ
ｌ、およびｍ−クレゾール２．５ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中
に含有していた。この懸濁液をラットにおいてインビボ
薬物動態研究に用いた。

【０１７８】（実施例５）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ５の調製５０ｍｇのインシュリノトロピンを２５ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約２３ｍｌのＰＢＳをフラスコに添
加して、薬物を分散、溶解した。適量のＰＢＳをフラス
コに添加した。溶液Ａ５を、注射器により０．２２μの
フィルターを通して５０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過
した。溶液Ａ５はインシュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌを
ＰＢＳ中に含有していた。

【０１７９】フェノール原液の調製０．４４ｇのフェノールを１００ｍｌのメスフラスコ中
へ秤量した。約９５ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加して
フェノールを溶解した。適量のＰＢＳをフラスコに添加
してフェノールを溶解した。得られた溶液（フェノール
４．４ｍｇ／ｍｌ）を溶液Ｂ５の調製に用いた。

【０１８０】溶液Ｂ５の調製２５ｍｌのフェノール原液を０．２μのフィルターを通
して５０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過することによ
り、溶液Ｂ５を調製した。溶液Ｂ５はフェノール４．４
ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０１８１】水性懸濁液５１．２５ｍｌの溶液Ａ５を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．２５ｍｌの溶液Ｂ５をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌
して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液５はインシュリ
ノトロピン１ｍｇ／ｍｌおよびフェノール２．２ｍｇ／
ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁液をラットに
おいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０１８２】（実施例６）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ６の調製５０ｍｇのインシュリノトロピンを２５ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約２３ｍｌのＰＢＳをフラスコに添
加して、薬物を分散、溶解した。適量のＰＢＳをフラス
コに添加した。溶液Ａ６を、注射器により０．２２μの
フィルターを通して５０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過
した。溶液Ａ６はインシュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌを
ＰＢＳ中に含有していた。

【０１８３】フェノール原液の調製０．４４ｇのフェノールを１００ｍｌのメスフラスコ中
へ秤量した。約９５ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加して
フェノールを溶解した。適量のＰＢＳをフラスコに添加
してフェノールを溶解した。得られた溶液（フェノール
４．４ｍｇ／ｍｌ）を溶液Ｂ６の調製に用いた。

【０１８４】溶液Ｂ６の調製下記により溶液Ｂ６を調製した。１．２５ｍｇの硫酸プ
ロタミンを２５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約２
０ｍｌのフェノール原液をフラスコに添加して硫酸プロ
タミンを溶解した。適量のフェノール原液をフラスコに
添加した。溶液Ｂ６を０．２２μのフィルターを通して
５０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｂ６はフ
ェノール４．４ｍｇ／ｍｌおよびプロタミン塩基０．０
３８ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０１８５】水性懸濁液６１．２５ｍｌの溶液Ａ６を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．２５ｍｌの溶液Ｂ６をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌
して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液６はインシュリ
ノトロピン１ｍｇ／ｍｌ、フェノール２．２ｍｇ／ｍ
ｌ、およびプロタミン塩基０．０１９ｍｇ／ｍｌをＰＢ
Ｓ中に含有していた。この懸濁液をラットにおいてイン
ビボ薬物動態研究に用いた。

【０１８６】（実施例７）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ７の調製５０ｍｇのインシュリノトロピンを２５ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約２３ｍｌのＰＢＳをフラスコに添
加して、薬物を分散、溶解した。適量のＰＢＳをフラス
コに添加した。溶液Ａ７を、注射器により０．２２μの
フィルターを通して５０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過
した。溶液Ａ７はインシュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌを
ＰＢＳ中に含有していた。

【０１８７】フェノール原液の調製０．４４ｇのフェノールを１００ｍｌのメスフラスコ中
へ秤量した。約９５ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加して
フェノールを溶解した。適量のＰＢＳをフラスコに添加
してフェノールを溶解した。得られた溶液（フェノール
４．４ｍｇ／ｍｌ）を溶液Ｂ７の調製に用いた。

【０１８８】溶液Ｂ７の調製溶液Ｂ７を下記により調製した。２．５ｍｇの硫酸プロ
タミンを２５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約２０
ｍｌのフェノール原液をフラスコに添加して硫酸プロタ
ミンを溶解した。適量のフェノール原液をフラスコに添
加した。溶液Ｂ７を０．２２μのフィルターを通して５
０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｂ７はフェ
ノール４．４ｍｇ／ｍｌおよびプロタミン塩基０．０７
５ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０１８９】水性懸濁液７１．２５ｍｌの溶液Ａ７を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．２５ｍｌの溶液Ｂ７をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌
して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液７はインシュリ
ノトロピン１ｍｇ／ｍｌ、フェノール２．２ｍｇ／ｍ
ｌ、およびプロタミン塩基０．０３８ｍｇ／ｍｌをＰＢ
Ｓ中に含有していた。この懸濁液をラットにおいてイン
ビボ薬物動態研究に用いた。

【０１９０】（実施例８）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ１２の調製２０ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約８ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加
して、薬物を分散、溶解した。適量のＰＢＳをフラスコ
に添加した。溶液Ａ１２を、注射器により０．２２μの
フィルターを通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過
した。溶液Ａ１２はインシュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌ
をＰＢＳ中に含有していた。

【０１９１】溶液Ｂ１２溶液Ｂ１２を下記により調製した。２０ｍｇのフェノー
ルを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍｌの
ＰＢＳをフラスコに添加してフェノールを溶解した。適
量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ｂ１２を０．２
２μのフィルターを通して１０ｍｌのガラスバイアル中
へ濾過した。溶液Ｂ１２はフェノール２ｍｇ／ｍｌをＰ
ＢＳ中に含有していた。

【０１９２】水性懸濁液１２４ｍｌの溶液Ａ１２を１０ｍｌのタイプ１ガラスバイア
ル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁気撹拌
し、その間に４ｍｌの溶液Ｂ１２をバイアル中ヘピペッ
ト注入した。バイアルに栓をし、アルミニウムシェルで
シールした。バイアル内容物を１６時間撹拌して、懸濁
液を形成させた。水性懸濁液１２はインシュリノトロピ
ン１ｍｇ／ｍｌおよびフェノール１ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ
中に含有していた。この懸濁液をラットにおいてインビ
ボ薬物動態研究に用いた。

【０１９３】（実施例９）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ１５の調製２０ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約８ｍｌのリン酸緩衝液（ＰＢ）を
フラスコに添加して、薬物を溶解した。適量のＰＢをフ
ラスコに添加した。溶液Ａ１５を、注射器により０．２
２μのフィルターを通して１０ｍｌのガラスバイアル中
へ濾過した。溶液Ａ１５はインシュリノトロピン２ｍｇ
／ｍｌをＰＢ中に含有していた。

【０１９４】溶液Ｂ１５の調製溶液Ｂ１５を下記により調製した。８ｍｇの硫酸プロタ
ミンを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍｌ
のＰＢをフラスコに添加して硫酸プロタミンを溶解し
た。適量のＰＢをフラスコに添加した。溶液Ｂ１５を
０．２２μのフィルターを通して１０ｍｌのガラスバイ
アル中へ濾過した。溶液Ｂ１５はプロタミン塩基０．６
ｍｇ／ｍｌをＰＢ中に含有していた。

【０１９５】水性懸濁液１５３ｍｌの溶液Ａ１５を１０ｍｌのタイプ１ガラスバイア
ル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁気撹拌
し、その間に３ｍｌの溶液Ｂ１５をバイアル中ヘピペッ
ト注入した。バイアルに栓をし、アルミニウムシェルで
シールした。バイアル内容物を１６時間撹拌して懸濁液
を形成させた。水性懸濁液１５はインシュリノトロピン
１ｍｇ／ｍｌおよびプロタミン塩基０．３ｍｇ／ｍｌを
ＰＢ中に含有していた。この懸濁液をラットにおいてイ
ンビボ薬物動態研究に用いた。

【０１９６】（実施例１０）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ１６の調製２０ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約８ｍｌのＰＢをフラスコに添加し
て、薬物を溶解した。適量のＰＢをフラスコに添加し
た。溶液Ａ１６を、注射器により０．２２μのフィルタ
ーを通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶
液Ａ１６はインシュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌをＰＢ中
に含有していた。

【０１９７】溶液Ｂ１６の調製溶液Ｂ１６を下記により調製した。４４ｍｇのフェノー
ルを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍｌの
ＰＢをフラスコに添加してフェノールを溶解した。適量
のＰＢをフラスコに添加した。溶液Ｂ１６を０．２２μ
のフィルターを通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾
過した。溶液Ｂ１６はフェノール４．４ｍｇ／ｍｌをＰ
Ｂ中に含有していた。

【０１９８】水性懸濁液１６３ｍｌの溶液Ａ１６を１０ｍｌのタイプ１ガラスバイア
ル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁気撹拌
し、その間に３ｍｌの溶液Ｂ１６をバイアル中ヘピペッ
ト注入した。バイアルに栓をし、アルミニウムシェルで
シールした。バイアル内容物を１６時間撹拌して、懸濁
液を形成させた。水性懸濁液１６はインシュリノトロピ
ン１ｍｇ／ｍｌおよびフェノール２．２ｍｇ／ｍｌをＰ
Ｂ中に含有していた。この懸濁液をラットにおいてイン
ビボ薬物動態研究に用いた。

【０１９９】（実施例１１）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液水性懸濁液１７１０ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約８ｍｌのＰＢをフラスコに添加し
て、薬物を溶解した。適量のＰＢをフラスコに添加し
た。フラスコの内容物を、注射器により０．２２μのフ
ィルターを通して１０ｍｌのタイプ１ガラスバイアル中
へ濾過した。バイアルに栓をし、アルミニウムシェルで
シールした。バイアル内容物を１６時間撹拌して、懸濁
液を形成させた。水性懸濁液１７はインシュリノトロピ
ン１ｍｇ／ｍｌをＰＢ中に含有していた。この懸濁液を
ラットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２００】（実施例１２）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液水性懸濁液１８１０ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約８ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加
して、薬物を溶解した。適量のＰＢＳをフラスコに添加
した。フラスコの内容物を、注射器により０．２２μの
フィルターを通して１０ｍｌのタイプ１ガラスバイアル
中へ濾過した。バイアルに栓をし、アルミニウムシェル
でシールした。バイアル内容物を１６時間緩和に撹拌し
て（泡またはバブルが確実に生じないようにする）、懸
濁液を形成させた。水性懸濁液１８はインシュリノトロ
ピン１ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁
液をラットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２０１】（実施例１３）インシュリノトロピン（０．２ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ２２の調製溶液Ａ２２を下記により調製した。２ｍｇのインシュリ
ノトロピンを５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約３
ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加して、薬物を溶解した。
適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ａ２２を、注
射器により０．２２μのフィルターを通して１０ｍｌの
ガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ２２はインシュリ
ノトロピン０．４ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有してい
た。

【０２０２】溶液Ｂ２２の調製溶液Ｂ２２を下記により調製した。４４ｍｇのフェノー
ルを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍｌの
ＰＢＳをフラスコに添加してフェノールを溶解した。適
量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ｂ２２を０．２
２μのフィルターを通して１０ｍｌのガラスバイアル中
へ濾過した。溶液Ｂ２２はフェノール４．４ｍｇ／ｍｌ
をＰＢＳ中に含有していた。

【０２０３】水性懸濁液２２１．５ｍｌの溶液Ａ２２を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ２２をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌
して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液２２はインシュ
リノトロピン０．２ｍｇ／ｍｌおよびフェノール２．２
ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁液をラ
ットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２０４】（実施例１４）インシュリノトロピン（０．２ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ２３の調製溶液Ａ２３を下記により調製した。２ｍｇのインシュリ
ノトロピンを５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約３
ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加して、薬物を溶解した。
適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ａ２３を、注
射器により０．２２μのフィルターを通して１０ｍｌの
ガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ２３はインシュリ
ノトロピン０．４ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有してい
た。

【０２０５】溶液Ｂ２３の調製溶液Ｂ２３を下記により調製した。８．８ｍｇのフェノ
ールを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍｌ
のＰＢＳをフラスコに添加してフェノールを溶解した。
適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ｂ２３を０．
２２μのフィルターを通して１０ｍｌのガラスバイアル
中へ濾過した。溶液Ｂ２３はフェノール０．８８ｍｇ／
ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０２０６】水性懸濁液２３１．５ｍｌの溶液Ａ２３を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ２３をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌
して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液２３はインシュ
リノトロピン０．２ｍｇ／ｍｌおよびフェノール０．４
４ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁液を
ラットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２０７】（実施例１５）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ２４の調製溶液Ａ２４を下記により調製した。１０ｍｇのインシュ
リノトロピンを５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約
３ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加して、薬物を溶解し
た。適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ａ２４
を、注射器により０．２２μのフィルターを通して１０
ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ２４はイン
シュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有してい
た。

【０２０８】溶液Ｂ２４の調製溶液Ｂ２４を下記により調製した。８ｍｇの硫酸プロタ
ミンを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍｌ
のＰＢＳをフラスコに添加して硫酸プロタミンを溶解し
た。適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ｂ２４を
０．２２μのフィルターを通して１０ｍｌのガラスバイ
アル中へ濾過した。溶液Ｂ２４はプロタミン塩基０．６
ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０２０９】水性懸濁液２４１．５ｍｌの溶液Ａ２４を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ２４をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌
して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液２４はインシュ
リノトロピン１ｍｇ／ｍｌおよびプロ夕ミン塩基０．３
ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁液をラ
ットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２１０】（実施例１６）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ２５の調製溶液Ａ２５を下記により調製した。１０ｍｇのインシュ
リノトロピンを５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約
３ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加して、薬物を溶解し
た。適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ａ２５
を、注射器により０．２２μのフィルターを通して１０
ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ２５はイン
シュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有してい
た。

【０２１１】溶液Ｂ２５の調製溶液Ｂ２５を下記により調製した。５３ｍｇのｍ−クレ
ゾールを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍ
ｌのＰＢＳをフラスコに添加してｍ−クレゾールを溶解
した。適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ｂ２５
を０．２２μのフィルターを通して１０ｍｌのガラスバ
イアル中へ濾過した。溶液Ｂ２５はｍ−クレゾール５．
３ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０２１２】水性懸濁液２５１．５ｍｌの溶液Ａ２５を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ２５をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌
して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液２５はインシュ
リノトロピン１ｍｇ／ｍｌおよびｍ−クレゾール２．５
ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁液をラ
ットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２１３】（実施例１７）インシュリノトロピン（０．５ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ２９の調製溶液Ａ２９を下記により調製した。２５ｍｇのインシュ
リノトロピンを２５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。
約２０ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加して、薬物を溶解
した。適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ａ２９
を、注射器により０．２２μのフィルターを通して５０
ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ２９はイン
シュリノトロピン１ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有してい
た。

【０２１４】溶液Ｂ２９の調製溶液Ｂ２９を下記により調製した。５０ｍｇのフェノー
ルを５０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約４０ｍｌ
のＰＢＳをフラスコに添加してフェノールを溶解した。
適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ｂ２９を０．
２２μのフィルターを通して５０ｍｌのガラスバイアル
中へ濾過した。溶液Ｂ２９はフェノール１．０ｍｇ／ｍ
ｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０２１５】水性懸濁液２９１．５ｍｌの溶液Ａ２９を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ２９をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌
して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液２９はインシュ
リノトロピン０．５ｍｇ／ｍｌおよびフェノール０．５
ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁液をラ
ットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２１６】（実施例１８）インシュリノトロピン（１ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ３１の調製１０ｍｇのインシュリノトロピンを５ｍｌのメスフラス
コ中へ秤量した。約４ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加し
て、薬物を溶解した。適量のＰＢＳをフラスコに添加し
た。溶液Ａ３１を、注射器により０．２２μのフィルタ
ーを通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶
液Ａ３１はインシュリノトロピン２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ
中に含有していた。

【０２１７】溶液Ｂ３１の調製溶液Ｂ３１を下記により調製した。５０ｍｇのフェノー
ルを５０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約４０ｍｌ
のＰＢＳをフラスコに添加してフェノールを溶解した。
適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ｂ３１を０．
２２μのフィルターを通して５０ｍｌのガラスバイアル
中へ濾過した。溶液Ｂ３１はフェノール１ｍｇ／ｍｌを
ＰＢＳ中に含有していた。

【０２１８】水性懸濁液３１１．５ｍｌの溶液Ａ３１を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ３１をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１６時間撹拌
して、懸濁液を形成させた。水性懸濁液３１はインシュ
リノトロピン１ｍｇ／ｍｌおよびフェノール０．５ｍｇ
／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁液をラット
においてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２１９】（実施例１９）インシュリノトロピン（４ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ５１の調製２２．２ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。５ｍｌのＰＢＳをバイアルに
ピペット注入して、薬物を溶解した。この溶液を０．２
２μのフィルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１
０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ５１はイ
ンシュリノトロピン４．４４ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含
有していた。

【０２２０】溶液Ｂ５１の調製１１０ｍｇのフェノールおよび３０ｍｇの硫酸プロタミ
ンを５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約４ｍｌのＰ
ＢＳをフラスコに添加してフェノールおよび硫酸プロタ
ミンを溶解した。フラスコにマークの位置までＰＢＳを
充填した。この溶液を０．２２μのフィルター（蛋白質
結合の低いもの）を通して１０ｍｌのガラスバイアル中
へ濾過した。溶液Ｂ５１はフェノール２２ｍｇ／ｍｌお
よびプロタミン塩基４．５ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有
していた。

【０２２１】水性懸濁液５１３ｍｌの溶液Ａ５１および０．３３ｍｌの溶液Ｂ５１を
３．５ｍｌのタイプ１ガラスバイアル中ヘピペット注入
した。バイアルの内容物を緩和に振盪して、確実に均質
に混合した。バイアルを周囲温度に１６時間静置した。
水性懸濁液５１はインシュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、
プロタミン塩基０．４４ｍｇ／ｍｌ、およびフェノール
２．２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁
液をラットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２２２】（実施例２０）インシュリノトロピン（４ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ５２の調製２２．２ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。５ｍｌのＰＢＳをバイアルに
ピペット注入して、薬物を溶解した。この溶液を０．２
２μのフィルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１
０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ５２はイ
ンシュリノトロピン４．４４ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含
有していた。

【０２２３】溶液Ｂ５２の調製１１０ｍｇのフェノールおよび１５．６ｍｇの酢酸亜鉛
・２水和物を５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約４
ｍｌの注射用水をフラスコに添加してフェノールおよび
酢酸亜鉛・２水和物を溶解した。フラスコにマークの位
置まで注射用水を充填した。この溶液を０．２２μのフ
ィルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１０ｍｌの
ガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｂ５２はフェノール
２２ｍｇ／ｍｌおよび酢酸亜鉛・２水和物７．８ｍｇ／
ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２２４】水性懸濁液５２３ｍｌの溶液Ａ５２および０．３３ｍｌの溶液Ｂ５２を
３．５ｍｌのタイプ１ガラスバイアル中ヘピペット注入
した。バイアルの内容物を緩和に振盪して、確実に均質
に混合した。バイアルを周囲温度に１６時間静置した。
水性懸濁液５２はインシュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、
酢酸亜鉛・２水和物０．７８ｍｇ／ｍｌ、およびフェノ
ール２．２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この
懸濁液をラットにおいてインビボ薬物動態研究に用い
た。

【０２２５】（実施例２１）インシュリノトロピン（４ｍｇ／ｍｌ）懸濁液フェノール溶液の調製２４４ｍｇのフェノールを１００ｍｌのメスフラスコ中
へ秤量した。約９０ｍｌの注射用水をフラスコに添加し
てフェノールを溶解した。フラスコにマークの位置まで
注射用水を充填した。この溶液のｐＨを５％ＮａＯＨ溶
液によりｐＨ９．０に調整した。このフェノール溶液は
フェノール２．４４ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有して
いた。ｐＨ９．０。

【０２２６】溶液Ａ７１の調製２２．２ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。５ｍｌのフェノール溶液をバ
イアルにピペット注入して、薬物を溶解した。この溶液
を０．２２μのフィルター（蛋白質結合の低いもの）を
通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ
７１はインシュリノトロピン４．４４ｍｇ／ｍｌおよび
フェノール２．４４ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有して
いた。

【０２２７】溶液Ｂ７１の調製１１６ｍｇの硫酸プロタミンを１０ｍｌのメスフラスコ
中へ秤量した。約８ｍｌの注射用水をフラスコに添加し
て硫酸プロタミンを溶解した。フラスコにマークの位置
まで注射用水を充填した。この溶液を０．２２μのフィ
ルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１０ｍｌのガ
ラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｂ７１はプロタミン塩
基８．７ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２２８】溶液Ｃ７１の調製１５６ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物および１．６３２ｇの
ＮａＣｌを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８
ｍｌの注射用水をフラスコに添加して酢酸亜鉛・２水和
物およびＮａＣｌを溶解した。フラスコにマークの位置
まで注射用水を充填した。この溶液を０．２２μのフィ
ルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１０ｍｌのガ
ラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｃ７１は酢酸亜鉛・２
水和物１５．６ｍｇ／ｍｌおよびＮａＣｌ１６３．２
ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２２９】水性懸濁液７１３ｍｌの溶液Ａ７１、０．１６５ｍｌの溶液Ｂ７１、お
よび０．１６５ｍｌの溶液Ｃ７１を３．５ｍｌのタイプ
１ガラスバイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内
容物を緩和に振盪して、確実に均質に混合した。バイア
ルを周囲温度に１６時間静置した。水性懸濁液７１はイ
ンシュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、プロタミン塩基０．
４３５ｍｇ／ｍｌ、酢酸亜鉛・２水和物０．７８ｍｇ／
ｍｌ、ＮａＣｌ８．１６ｍｇ／ｍｌ、およびフェノー
ル２．２ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。この
懸濁液をラットにおいてインビボ薬物動態研究に用い
た。

【０２３０】（実施例２２）インシュリノトロピン（４ｍｇ／ｍｌ）懸濁液ｍ−クレゾール溶液の調製２４４ｍｇのｍ−クレゾールを１００ｍｌのメスフラス
コ中へ秤量した。約９０ｍｌの注射用水をフラスコに添
加してｍ−クレゾールを溶解した。フラスコにマークの
位置まで注射用水を充填した。この溶液のｐＨを５％Ｎ
ａＯＨ溶液によりｐＨ９．０に調整した。このｍ−クレ
ゾール溶液はｍ−クレゾール２．４４ｍｇ／ｍｌを注射
用水中に含有していた。ｐＨ９．０。

【０２３１】溶液Ａ１００の調製２２．２ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。５／ｍｌのｍ−クレゾール溶
液をバイアルにピペット注入して、薬物を溶解した。こ
の溶液を０．２２μのフィルター（蛋白質結合の低いも
の）を通して１０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。
溶液Ａ１００はインシュリノトロピン４．４４ｍｇ／ｍ
ｌおよびｍ−クレゾール２．４４ｍｇ／ｍｌを注射用水
中に含有していた。

【０２３２】溶液Ｂ１００の調製１１６ｍｇの硫酸プロタミンを１０ｍｌのメスフラスコ
中へ秤量した。約８ｍｌの注射用水をフラスコに添加し
て硫酸プロタミンを溶解した。フラスコにマークの位置
まで注射用水を充填した。この溶液を０．２２μのフィ
ルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１０ｍｌのガ
ラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｂ１００はプロタミン
塩基８．７ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２３３】溶液Ｃ１００の調製１５６ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物および１．６３２ｇの
ＮａＣｌを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８
ｍｌの注射用水をフラスコに添加して酢酸亜鉛・２水和
物およびＮａＣｌを溶解した。フラスコにマークの位置
まで注射用水を充填した。この溶液を０．２２μのフィ
ルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１０ｍｌのガ
ラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｃ１００は酢酸亜鉛・
２水和物１５．６ｍｇ／ｍｌおよびＮａＣｌ１６３．
２ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２３４】水性懸濁液１００３ｍｌの溶液Ａ１００、０．１６５ｍｌの溶液Ｂ１０
０、および０．１６５ｍｌの溶液Ｃ１００を３．５ｍｌ
のタイプ１ガラスバイアル中ヘピペット注入した。バイ
アルの内容物を緩和に振盪して、確実に均質に混合し
た。バイアルを周囲温度に１６時間静置した。水性懸濁
液１００はインシュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、プロタ
ミン塩基０．４３５ｍｇ／ｍｌ、酢酸亜鉛・２水和物
０．７８ｍｇ／ｍｌ、ＮａＣｌ８．１６ｍｇ／ｍｌ、
およびｍ−クレゾール２．２ｍｇ／ｍｌを注射用水中に
含有していた。この懸濁液をラットにおいてインビボ薬
物動態研究に用いた。

【０２３５】（実施例２３）インシュリノトロピン（４ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ６８の調製２２．２ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。５ｍｌのＰＢＳをバイアルに
ピペット注入して、薬物を溶解した。この溶液を０．２
２μのフィルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１
０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ６８はイ
ンシュリノトロピン４．４４ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含
有していた。

【０２３６】溶液Ｂ６８の調製１１６ｍｇの硫酸プロタミンを１０ｍｌのメスフラスコ
中へ秤量した。約８ｍｌの注射用水をフラスコに添加し
て硫酸プロタミンを溶解した。フラスコにマークの位置
まで注射用水を充填した。この溶液を０．２２μのフィ
ルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１０ｍｌのガ
ラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｂ６８はプロタミン塩
基８．７ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２３７】溶液Ｃ６８の調製１５６ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物および４４０ｇのフェ
ノールを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍ
ｌの注射用水をフラスコに添加して酢酸亜鉛・２水和物
およびフェノールを溶解した。フラスコにマークの位置
まで注射用水を充填した。この溶液を０．２２μのフィ
ルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１０ｍｌのガ
ラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｃ６８は酢酸亜鉛・２
水和物１５．６ｍｇ／ｍｌおよびフェノール４４ｍｇ／
ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２３８】水性懸濁液６８３ｍｌの溶液Ａ６８、０．１６５ｍｌの溶液Ｂ６８およ
び０．１６５ｍｌの溶液Ｃ６８を３．５ｍｌのタイプ１
ガラスバイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容
物を緩和に振盪して、確実に均質に混合した。バイアル
を周囲温度に１６時間静置した。水性懸濁液６８はイン
シュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、プロタミン塩基０．４
３５ｍｇ／ｍｌ、酢酸亜鉛・２水和物０．７８ｍｇ／ｍ
ｌ、およびフェノール２．２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含
有していた。この懸濁液をラットにおいてインビボ薬物
動態研究に用いた。

【０２３９】（実施例２４）インシュリノトロピン（４ｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ６７の調製２２．２ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。５ｍｌのＰＢＳをバイアルに
ピペット注入して、薬物を溶解した。この溶液を０．２
２μのフィルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１
０ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ａ６７はイ
ンシュリノトロピン４．４４ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含
有していた。

【０２４０】溶液Ｂ６７の調製１１６ｍｇの硫酸プロタミンを１０ｍｌのメスフラスコ
中へ秤量した。約８ｍｌの注射用水をフラスコに添加し
て硫酸プロタミンを溶解した。フラスコにマークの位置
まで注射用水を充填した。この溶液を０．２２μのフィ
ルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１０ｍｌのガ
ラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｂ６７はプロタミン塩
基８．７ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２４１】溶液Ｃ６７の調製１５６ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物および４４０ｇのｍ−
クレゾールを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約
８ｍｌの注射用水をフラスコに添加して酢酸亜鉛・２水
和物およびｍ−クレゾールを溶解した。フラスコにマー
クの位置まで注射用水を充填した。この溶液を０．２２
μのフィルター（蛋白質結合の低いもの）を通して１０
／ｍｌのガラスバイアル中へ濾過した。溶液Ｃ６７は酢
酸亜鉛・２水和物１５．６ｍｇ／ｍｌおよびｍ−クレゾ
ール４４ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２４２】水性懸濁液６７３ｍｌの溶液Ａ６７、０．１６５ｍｌの溶液Ｂ６７およ
び０．１６５ｍｌの溶液Ｃ６７を３．５ｍｌのタイプ１
ガラスバイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容
物を緩和に振盪して、確実に均質に混合した。バイアル
を周囲温度に１６時間静置した。水性懸濁液６７はイン
シュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、プロタミン塩基０．４
３５ｍｇ／ｍｌ、酢酸亜鉛・２水和物０．７８ｍｇ／ｍ
ｌ、およびｍ−クレゾール２．２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中
に含有していた。この懸濁液をラットにおいてインビボ
薬物動態研究に用いた。

【０２４３】（実施例２５）溶液Ａ３９の調製６７．６ｍｇのインシュリノトロピンをガラスバイアル
中へ秤量した。約２２ｍｌの注射用水をバイアルに添加
してインシュリノトロピンを溶解した。バイアル内容物
のｐＨをＮａＯＨにより９．６に調整して、透明な溶液
となした。注射用水をバイアルに添加して、最終薬物濃
度を２．５ｍｇ／ｍｌとなした。

【０２４４】溶液Ｂ３９の調製３８６．８ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物を１００ｍｌのメ
スフラスコ中へ秤量した。約８０ｍｌの注射用水をフラ
スコに添加して酢酸亜鉛・２水和物を溶解した。フラス
コにマークの位置まで注射用水を充填した。溶液Ｂ３９
は酢酸亜鉛・２水和物３．９ｍｇ／ｍｌを注射用水中に
含有していた。

【０２４５】溶液Ｃ３９の調製１．０９５ｇのフェノールを５０ｍｌのメスフラスコ中
へ秤量した。約４０ｍｌの注射用水をフラスコに添加し
てフェノールを溶解した。フラスコにマークの位置まで
注射用水を充填した。溶液Ｃ３９はフェノール２１．９
ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２４６】溶液Ｄ３９の調製２．２５ｇのＮａＣｌを２５ｍｌのメスフラスコ中へ秤
量した。約２０ｍｌの溶液Ｃ３９をフラスコに添加して
ＮａＣｌを溶解した。フラスコにマークの位置まで溶液
Ｃ３９を充填した。溶液Ｄ３９はＮａＣｌ９％（ｗ／
ｖ）およびフェノール２１．９ｍｇ／ｍｌを注射用水中
に含有していた。

【０２４７】水性懸濁液３９すべての溶液を０．２２μのフィルター（蛋白質結合の
低いもの）を通して濾過した。９ｍｌの溶液Ａ３９を１
０ｍｌの試料バイアルに移した。緩和に撹拌しながら１
ｍｌの溶液Ｂ３９をバイアルに添加した。直ちに沈澱が
生じた。ｐＨは７．０と測定された。バイアルを周囲温
度に約１８時間静置した。４ｍｌの試料を別個の１０ｍ
ｌのバイアルに移し、０．４４ｍｌの溶液Ｄ３９をバイ
アルに添加した。試料を５分間緩和に撹拌し、次いで周
囲温度に一夜静置した。

【０２４８】水性懸濁液３９はインシュリノトロピン２
ｍｇ／ｍｌ、フェノール２．２ｍｇ／ｍｌ、ＮａＣｌ
０．９％、および酢酸亜鉛０．３９ｍｇ／ｍｌを含有し
ていた。この懸濁液をラットにおいてインビボ薬物動態
研究に用いた。

【０２４９】（実施例２６）溶液Ａ５３の調製３２．５ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。６ｍｌの注射用水をバイアル
に添加した。バイアル内容物のｐＨを１％（ｗ／ｖ）Ｎ
ａＯＨにより９．６に調整して、透明な溶液となした。
適量の注射用水を添加して、薬物濃度を５．０ｍｇ／ｍ
ｌとなした。

【０２５０】溶液Ｂ５３の調製３９０ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物を５０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約４０ｍｌの注射用水をフラスコに
添加して酢酸亜鉛・２水和物を溶解した。フラスコにマ
ークの位置まで注射用水を充填した。溶液Ｂ５３は酢酸
亜鉛・２水和物７．８ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有し
ていた。

【０２５１】水性懸濁液５３すべての溶液を０．２２μのフィルター（蛋白質結合の
低いもの）を通して濾過した。２．４ｍｌの溶液Ａ５３
を３．５ｍｌのバイアルに移した。緩和に撹拌しながら
３００μｌの溶液Ｂ５３をバイアルに添加した。添加
後、直ちに複屈折性沈殿が生じた。ｐＨは６．８と測定
された。バイアルを周囲温度に２０時間静置したのち、
７．５μｌのｍ−クレゾールを沈降した懸濁液の上清に
直接に添加した。次いで懸濁液を緩和に撹拌して、ｍ−
クレゾールを溶解した。３００μｌの９％ＮａＣｌ溶液
を撹拌下に懸濁液に添加した。水性懸濁液５３はインシ
ュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、ＮａＣｌ０．９％、酢
酸亜鉛０．７８ｍｇ／ｍｌ、およびｍ−クレゾール２．
５ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。この懸濁液
をラットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２５２】（実施例２７）溶液Ａ５４の調製３２．５ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。６ｍｌの注射用水をバイアル
に添加した。バイアル内容物のｐＨを１％（ｗ／ｖ）Ｎ
ａＯＨにより９．６に調整して、透明な溶液となした。
適量の注射用水を添加して、薬物濃度を５．０ｍｇ／ｍ
ｌとなした。

【０２５３】溶液Ｂ５４の調製３９０ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物を５０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約４０ｍｌの注射用水をフラスコに
添加して酢酸亜鉛・２水和物を溶解した。フラスコにマ
ークの位置まで注射用水を充填した。溶液Ｂ５４は酢酸
亜鉛・２水和物７．８ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有し
ていた。

【０２５４】溶液Ｃ５４の調製１．１ｇのフェノールおよび４．５ｇのＮａＣｌを５０
ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約４０ｍｌの注射用
水を添加した。フラスコにマークの位置まで注射用水を
充填した。溶液Ｃ５４はフェノール２２ｍｇ／ｍｌおよ
びＮａＣｌ９０ｍｇ／ｍｌを含有していた。

【０２５５】水性懸濁液５４すべての溶液を０．２２μのフィルター（蛋白質結合の
低いもの）を通して濾過した。２．４ｍｌの溶液Ａ５４
を３．５ｍｌのバイアルに移した。撹拌しながら３００
μｌの溶液Ｂ５４をバイアルに添加した。添加後、直ち
に複屈折性沈殿が生じた。ｐＨは６．８と測定された。
試料を周囲温度に２０時間静置した。３００μｌの溶液
Ｃ５４を緩和な撹拌下に添加した。水性懸濁液５４はイ
ンシュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、酢酸亜鉛・２水和物
０．７８ｍｇ／ｍｌ、フェノール２．２ｍｇ／ｍｌ、お
よびＮａＣｌ９ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有してい
た。この懸濁液をラットにおいてインビボ薬物動態研究
に用いた。

【０２５６】（実施例２８）溶液Ａ５７の調製１５ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラスバ
イアル中へ秤量した。３ｍｌの注射用水をバイアルに添
加した。バイアル内容物のｐＨを５％ＮａＯＨにより
９．９に調整して、薬物を完全に溶解した。溶液Ａ５７
はインシュリノトロピン５．０ｍｇ／ｍｌを注射用水中
に含有していた。

【０２５７】溶液Ｂ５７の調製７８０ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物を１００ｍｌのメスフ
ラスコ中へ秤量した。約８０ｍｌの注射用水をフラスコ
に添加して酢酸亜鉛・２水和物を溶解した。フラスコに
マークの位置まで注射用水を充填した。溶液Ｂ５７は酢
酸亜鉛・２水和物７．８ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有
していた。

【０２５８】溶液Ｃ５７の調製２.２ｇのフェノールおよび９ｇのＮａＣｌを１００ｍ
ｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８０ｍｌの注射用水
をフラスコに添加して、フェノールおよびＮａＣｌを溶
解した。フラスコにマークの位置まで注射用水を充填し
た。溶液Ｃ５７はフェノール２２ｍｇ／ｍｌおよびＮａ
Ｃｌ９０ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２５９】水性懸濁液５７２.４ｍｌの溶液Ａ５７を３．５ｍｌのバイアルに移し
た。３００μｌの溶液Ｂ５７を添加する際、溶液を緩和
に撹拌した。溶液Ｂ５７の添加後、直ちに沈殿が生じ
た。ｐＨを測定して７．１であることが認められた。試
料を周囲温度に２４時間静置した。３００μｌの溶液Ｃ
５７を緩和な撹拌下に添加した。水性懸濁液５７はイン
シュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、酢酸亜鉛・２水和物
０．７８ｍｇ／ｍｌ、フェノール２．２ｍｇ／ｍｌ、お
よびＮａＣｌ９ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有してい
た。この懸濁液をラットにおいてインビボ薬物動態研究
に用いた。

【０２６０】（実施例２９）溶液Ａ６４の調製５３．３ｍｇのインシュリノトロピンを３０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。１１ｍｌの注射用水を添加し
たのち、バイアル内容物のｐＨを５％ＮａＯＨ（ｗ／
ｖ）により８．３に調整して、インシュリノトロピンを
溶解した。溶液をなお確実に透明な状態に維持するため
に、希ＨＣｌによりｐＨを６．０に調整した。適量の注
射用水を添加して、薬物濃度を４．４ｍｇ／ｍｌとなし
た。溶液Ａ６４を０．２２μのフィルター（蛋白質結合
の低いもの）を通して３．５ｍｌの試料バイアル中へ濾
過した。濾過した溶液１．８ｍｌを別個の無菌３．５ｍ
ｌの試料バイアルに移し、バイアルを周囲温度に３日間
静置して結晶化させた。

【０２６１】溶液Ｂ６４の調製７８０ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物を５０ｍｌのメスフラ
スコ中へ秤量した。約４０ｍｌの注射用水をフラスコに
添加して酢酸亜鉛・２水和物を溶解した。フラスコにマ
ークの位置まで注射用水を充填した。溶液Ｂ６４は酢酸
亜鉛・２水和物１５．６ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有
していた。

【０２６２】溶液Ｃ６４の調製１８ｇのＮａＣｌを１００ｍｌのメスフラスコ中へ秤量
した。約８０ｍｌの注射用水をフラスコに添加してＮａ
Ｃｌを溶解した。フラスコにマークの位置まで注射用水
を充填した。溶液Ｃ６４はＮａＣｌ１８０ｍｇ／ｍｌ
を注射用水中に含有していた。

【０２６３】水性懸濁液６４溶液Ａ６４の結晶化が完了したのち、１００μｌの溶液
Ｂ６４を１．８ｍｌの結晶懸濁液に徐々に撹拌しながら
添加した。次いで試料を周囲温度に３日間静置した。１
００μ１の溶液Ｃ６４を結晶懸濁液に緩和な撹拌下で添
加した。希ＮａＯＨにより懸濁液のｐＨをｐＨ７．３に
調整した。ｐＨ調整した結晶懸濁液に５．０μのｍ-ク
レゾールを直接に添加した。水性懸濁液６４はインシュ
リノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、酢酸亜鉛・２水和物０．７
８ｍｇ／ｍｌ、ＮａＣｌ９ｍｇ／ｍｌ、およびｍ-ク
レゾール２．５ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有してい
た。この懸濁液をラットにおいてインビボ薬物動態研究
に用いた。

【０２６４】（実施例３０）溶液Ａ６９の調製１ｇのＮａＣｌを１００ｍｌのメスフラスコ中へ秤量し
た。約８０ｍｌの注射用水をフラスコに添加してＮａＣ
ｌを溶解した。フラスコにマークの位置まで注射用水を
充填した。溶液Ａ６９はＮａＣｌ１％（ｗ／ｖ）を注
射用水中に含有していた。

【０２６５】溶液Ｂ６９の調製３９０ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物を１００ｍｌのメスフ
ラスコ中へ秤量した。約８０ｍｌの注射用水をフラスコ
に添加して酢酸亜鉛・２水和物を溶解した。フラスコに
マークの位置まで注射用水を充填した。溶液Ｂ６９は酢
酸亜鉛・２水和物３．９ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有
していた。

【０２６６】エマルジョンＣ６９の調製２.５ｍｌの濾過した（０．２２μ、蛋白質結合の低い
もの）無菌ｍ−クレゾールを１００ｍｌのメスフラスコ
中へ移した。フラスコにマークの位置まで注射用水を充
填し、音波処理して均質な懸濁液を調製した。エマルジ
ョンＣ６９はｍ−クレゾール２５ｍｇ／ｍｌを注射用水
中に含有していた。

【０２６７】水性懸濁液６９３５．７４ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガ
ラスバイアル中へ秤量した。７ｍｌの溶液Ａ６９を添加
した。バイアル内容物のｐＨを９．２に調整して、薬物
を溶解した。希ＨＣｌにより溶液のｐＨを６．５に再調
整した。適量の注射用水を添加して、薬物濃度を４．４
ｍｇ／ｍｌとなした。この溶液を０．２２μのフィルタ
ー（蛋白質結合の低いもの）を通して濾過した。溶液を
周囲温度に６日間静置し、その間にインシュリノトロピ
ンが結晶化した。１．５ｍｌの結晶懸濁液を別個のバイ
アルに移した。１６７μｌの溶液Ｂ６９を緩和な撹拌下
に添加した。試料を周囲温度に１日間静置した。１６７
μｌのエマルジョンＣ６９を、沈降した懸濁液の上清に
添加した。試料を撹拌して、ｍ−クレゾールを溶解し
た。水性懸濁液６９はインシュリノトロピン３．６ｍｇ
／ｍｌ、酢酸亜鉛０．３６ｍｇ／ｍｌ、ＮａＣｌ８．
１７ｍｇ／ｍｌ、およびｍ−クレゾール２．２８ｍｇ／
ｍｌを注射用水中に含有していた。この懸濁液をラット
においてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２６８】（実施例３１）溶液Ａｌ０１の調製１０ｇの酢酸ナトリウムを１００ｍｌのメスフラスコ中
へ秤量した。約８０ｍｌの注射用水をフラスコに添加し
て酢酸ナトリウムを溶解した。フラスコにマークの位置
まで注射用水を充填した。溶液Ａ２００は酢酸ナトリウ
ム１００ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有していた。

【０２６９】水性懸濁液１０１４４．４ｍｇのインシュリノトロピンを１０ｍｌのガラ
スバイアル中へ秤量した。８ｍｌの注射用水をフラスコ
に添加した。バイアル内容物のｐＨを９．３に調整し
て、透明な溶液を得た。１ｍｌの溶液Ａ２００をインシ
ュリノトロピン溶液に添加した。次いでｐＨを６．５に
調整した。この溶液を０．２２μのフィルター（蛋白質
結合の低いもの）を通して濾過した。濾過した溶液を周
囲温度に３日間静置して結晶化させた。水性懸濁液１０
１はインシュリノトロピン４．９ｍｇ／ｍｌ、酢酸ナト
リウム１１．１ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含有してい
た。この懸濁液をラットにおいてインビボ薬物動態研究
に用いた。

【０２７０】（実施例３２）溶液Ａ８２の調製９ｇのＮａＣｌを１００ｍｌのメスフラスコ中へ秤量し
た。約８０ｍｌの注射用水をフラスコに添加してＮａＣ
ｌを溶解した。フラスコにマークの位置まで注射用水を
充填した。溶液Ａ８２はＮａＣｌ９％（ｗ／ｖ）を注
射用水中に含有していた。

【０２７１】溶液Ｂ８２の調製７８９ｍｇの酢酸亜鉛・２水和物を１００ｍｌのメスフ
ラスコ中へ秤量した。約８０ｍｌの注射用水をフラスコ
に添加して酢酸亜鉛・２水和物を溶解した。フラスコに
マークの位置まで注射用水を充填した。溶液Ｂ８２は酢
酸亜鉛・２水和物７．８９ｍｇ／ｍｌを注射用水中に含
有していた。

【０２７２】エマルジョンＣ８２の調製２.５ｍｌの濾過した（０．２２μ、蛋白質結合の低い
もの）無菌ｍ−クレゾールを１００ｍｌのメスフラスコ
中へ移した。フラスコにマークの位置まで注射用水を充
填し、音波処理して均質な懸濁液を調製した。エマルジ
ョンＣ８２はｍ−クレゾール２５ｍｇ／ｍｌを注射用水
中に含有していた。

【０２７３】水性懸濁液８２すべての溶液を０．２２μのフィルター（蛋白質結合の
低いもの）を通して濾過した。４５．３４ｍｇのインシ
ュリノトロピンを１０ｍｌのバイアルに添加し、これに
８ｍｌの水を添加した。５％ＮａＯＨによりｐＨを９．
３に調整した。１ｍｌの溶液Ａ８２をバイアルに添加し
たのち、希ＨＣｌにより溶液のｐＨを６．５５に調整し
た。この溶液（インシュリノトロピン５ｍｇ／ｍｌ）を
０．２２μのフィルター（蛋白質結合の低いもの）を通
して濾過した。８１μｌの水性懸濁液１０１（実施例３
１参照）を、濾過した無菌インシュリノトロピン溶液に
添加し、試料を振盪することにより分散させた。次いで
試料を周囲温度に７２時間静置して、結晶懸濁液を調製
した。２．４ｍｌの懸濁液を３．５ｍｌのバイアルに移
した。３００μｌの溶液Ｂ８２を緩和な撹拌下にバイア
ルに添加した。バイアル内容物のｐＨを希ＮａＯＨによ
り７．３に調整した。３００μ１のエマルジョンＣ８２
を、沈降した懸濁液の上清に添加した。水性懸濁液８２
はインシュリノトロピン４ｍｇ／ｍｌ、酢酸亜鉛・２水
和物０．７９ｍｇ／ｍｌ、ｍ−クレゾール２．５ｍｇ／
ｍｌ、およびＮａＣｌ０．９％を注射用水中に含有し
ていた。この懸濁液をラットにおいてインビボ薬物動態
研究に用いた。

【０２７４】（実施例３３）ＧＬＰ−１（７−３６）アミド（ｌｍｇ／ｍｌ）懸濁液溶液Ａ２６の調製溶液Ａ２６を下記により調製した。１０ｍｇのＧＬＰ−
１（７−３６）アミドを５ｍｌのメスフラスコ中へ秤量
した。約３ｍｌのＰＢＳをフラスコに添加して薬物を溶
解した。適量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ａ２
６を０．２２μのフィルターを通して１０ｍｌのガラス
バイアル中へ濾過した。溶液Ａ２６はＧＬＰ−１（７−
３６）２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。

【０２７５】溶液Ｂ２６の調製溶液Ｂ２６を下記により調製した。４４ｍｇのフェノー
ルを１０ｍｌのメスフラスコ中へ秤量した。約８ｍｌの
ＰＢＳをフラスコに添加してフェノールを溶解した。適
量のＰＢＳをフラスコに添加した。溶液Ｂ２６を０．２
２μのフィルターを通して１０ｍｌのガラスバイアル中
へ濾過した。溶液Ａ２６はフェノール４．４ｍｇ／ｍｌ
をＰＢＳ中に含有していた。

【０２７６】水性懸濁液２６１．５ｍｌの溶液Ａ２６を３．５ｍｌのタイプ１ガラス
バイアル中ヘピペット注入した。バイアルの内容物を磁
気撹拌し、その間に１．５ｍｌの溶液Ｂ２６をバイアル
中ヘピペット注入した。バイアルに栓をし、アルミニウ
ムシェルでシールした。バイアル内容物を１８時間緩和
に撹拌して（泡またはバブルが確実に生じないようにす
る）懸濁液を形成させた。水性懸濁液２６はＧＬＰ−１
（７−３６）アミドｌｍｇ／ｍｌおよびフェノール２．
２ｍｇ／ｍｌをＰＢＳ中に含有していた。この懸濁液を
ラットにおいてインビボ薬物動態研究に用いた。

【０２７７】（実施例３４）本発明の１形態において
は、溶解度の低い形態のＧＬＰ−１（７−３７）が下記
により製造される。ｐＨ７−８．５の緩衝液中２−１５
ｍｇ／ｍｌのＧＬＰ−１（７−３７）を金属イオン塩の
溶液と混和して、１−８ｍｇ／ｍｌのＧＬＰ−１（７−
３７）を亜鉛：ＧＬＰ−１（７−３７）のモル比約１：
１−２７０：１で含有する溶液を得る。重い沈澱が生成
し、これを室温で一夜放置する。金属イオン溶液中にお
けるＧＬＰ−１（７−３７）の溶解度は、用いる金属に
応じて異なる。次いで、金属を含有しない溶剤、たとえ
ばＰＢＳまたは水中のＧＬＰ−１（７−３７）ペレット
の溶解度を測定して、亜鉛、コバルトおよびニッケルイ
オンが溶解度の低い形態のＧＬＰ−１（７−３７）を形
成することが示される。

【０２７８】

【表１】

【０２７９】注釈：それぞれの場合、５ｍＭの金属イオ
ン溶液１００μ１を５ｍｇ／ｍｌのＧＬＰ−１（７−３
７）１００μ１に添加し、混合し、一夜放置した。不溶
性ペレットを遠心分離により除去した。金属イオン溶液
中に残留するＧＬＰ−１（７−３７）の濃度を測定し
た。ペレットをリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）に再懸濁
し、音波処理し、一夜放置した。再び不溶性物質をペレ
ット化し、ＧＬＰ−１（７−３７）の濃度を測定した。

【０２８０】（実施例３５）ｐＨ７−８．５の緩衝液中
のＧＬＰ−１（７−３７）の溶液を特定の組み合わせの
塩類および低分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
と混合することによって、微結晶質形態のＧＬＰ−１
（７−３７）が得られる。表２に微結晶質形態のＧＬＰ
−１（７−３７）を形成する特定の７組の条件を記載す
る。

【０２８１】

【表２】

【０２８２】注釈：５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８.１）
中の５ｍｇ／ｍｌのＧＬＰ−１（７−３７）原液に試薬
を１：１で添加した。液滴を観察し、結晶質または非晶
質の形態の不溶性ＧＬＰ−１（７−３７）の存否を採点
した。一般に低分子量ＰＥＧは結晶質形態を助成すると
思われる。Ｔｒｉｓはトリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタンであり、ＨＥＰＥＳはＮ−２−（ヒドロキシエ
チル）ピペラジン−Ｎ−２−エタンスルホン酸である。

【０２８３】（実施例３６）微結晶形態および高収率を
得るためには、特定の組み合わせのＧＬＰ−１（７−３
７）およびＰＥＧの濃度が必要である。表３は非晶質で
はなく微結晶質の形態の薬物を生成する特定の組み合わ
せのＰＥＧ６００およびＧＬＰ−１（７−３７）の濃度
を示す。不溶性形態のＧＬＰ−１（７−３７）の収率も
示される。

【０２８４】

【表３】

【０２８５】注釈：ＧＬＰ−１（７−３７）の微結晶が
下記により生成する。Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８）中の２
０ｍｇ／ｍｌのＧＬＰ−１（７−３７）溶液、Ｈ₂Ｏ中
の６０％ポリエチレングリコール６００（ＰＥＧ６０
０）、およびＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８）を混和して、最
終濃度１５−３０％のＰＥＧおよび３−１０ｍｇ／ｍｌ
のＧＬＰ−１を得る。一夜放置したのち、ＧＬＰ−１
（７−３７）の微結晶が溶液中に５０−８５％の収率で
生成する。

【０２８６】（実施例３７）この実験は、予め形成され
たＧＬＰ−１（７−３７）の微結晶を各種金属イオンで
処理して溶解度の低い微結晶形態を形成することによ
る、他の形態の本発明を例示する。実施例２２の記載に
従って８ｍｇ／ｍｌのＧＬＰ−１（７−３７）および２
２．５％ＰＥＧにおいて製造された微結晶ＧＬＰ−１
（７−３７）は、純粋な凍結乾燥ＧＬＰ−１（７−３
７）に等しい溶解度をもつ。長時間作用形ドラッグデリ
バリーのために望まれる低溶解度という特性を付与する
ために、これらの予め形成された微結晶を金属塩の溶液
で、金属：ＧＬＰ−１（７−３７）の比率１：１−２６
０：１において、室温で一夜処理することができる。過
剰の金属塩を遠心分離／洗浄処理により除去した。表４
は処理剤として数種の２価カチオン金属塩を用いた結果
を示す。

【０２８７】

【表４】

【０２８８】注釈：５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８）中の
８ｍｇ／ｍｌのＩＳＴにＨ₂Ｏ中の２２．５％ＰＥＧ６
００を添加したものから、ＧＬＰ−１（７−３７）結晶
を生長させる。添加する処理剤溶液はすべて１０ｍＭ
クエン酸Ｎａ（ｐＨ５．２）またはＮａＭＥＳ（ｐＨ
６．５）中の１００ｍＭ２価金属イオン塩である。

【０２８９】（実施例３８）本明細書に記載した方法に
より、酢酸亜鉛を用いて非晶質および微結晶質両方の低
溶解度配合物を調製した。ラット（各配合物につき３匹
の動物）に皮下注射を行い、ＧＬＰ−１（７−３７）の
血漿中水準を２４時間にわたってラジオイムノアッセイ
法により測定した。図８は、対照の可溶性ＧＬＰ−１
（７−３７）皮下注射と比較して、血漿中における薬物
の持続性が延長したことを示す。

【０２９０】（実施例３９）４５％ｗ／ｖポリエチレングリコール３３５０（Ｐ
ＥＧ）１ｍｇ／ｍｌインシュリノトロピン２０ｍＭリン酸緩衝液十分量の無菌注射用水（ＳＷＦＩ）ＳＷＦＩを用いて５０％ｗ／ｗＰＥＧ溶液を調製し
た。無水の二塩基性リン酸ナトリウム（２６．８５ｍｇ
／ｍｌ）および一塩基性リン酸ナトリウム・１水和物
（１．４１ｍｇ／ｍｌ）を用いて、別個に２００ｍＭリ
ン酸緩衝液を調製した。必要に応じ水酸化ナトリウムま
たは塩酸を用いて緩衝液のｐＨをｐＨ８となした。イン
シュリノトロピンの１０ｍｇ／ｍｌ溶液を調製するのに
適した量のインシュリノトロピンを十分量の緩衝液に溶
解した。適切な重量のＰＥＧ溶液をこのインシュリノト
ロピン溶液に添加し、かつ溶液を目的容量となすのに十
分な量のＳＷＦＩを用いた。次いでこの最終溶液を０．
２μのフィルターで無菌的に濾過し、無菌的にバイアル
に充填した。この溶液（０．５ｍｌ）をラットに皮下注
射し、ＲＩＡアッセイ法により血漿中インシュリノトロ
ピン水準を追跡した。

【０２９１】（実施例４０）１．３２％ｗ／ｖヒドロキシエチルセルロース（Ｈ
ＥＣ）１ｍｇ／ｍｌインシュリノトロピン２０ｍＭリン酸緩衝液１００ｍＭ塩化ナトリウム十分量の無菌注射用水（ＳＷＦＩ）ＳＷＦＩを用いて２％ｗ／ｗヒドロキシエチルセル
ロース溶液を調製した。無水の二塩基性リン酸ナトリウ
ム（２６．８５ｍｇ／ｍｌ）および一塩基性リン酸ナト
リウム・１水和物（１．４１ｍｇ／ｍｌ）を用いて、別
個に２００ｍＭリン酸緩衝液を調製した。必要に応じ水
酸化ナトリウムまたは塩酸を用いて緩衝液のｐＨをｐＨ
８となした。インシュリノトロピンの１０ｍｇ／ｍｌ溶
液を調製するのに適した量のインシュリノトロピンおよ
び塩化ナトリウムを十分量の緩衝液に溶解した。適切な
重量のＨＥＣ溶液をこのインシュリノトロピン溶液に添
加−し、かつ溶液を目的容量となすのに十分な量のＳＷ
ＦＩを用いた。次いでこの最終溶液を０．２μのフィル
ターで無菌的に濾過し、無菌的にバイアルに充填した。
この溶液（０．５ｍｌ）をラットに皮下注射し、ＲＩＡ
アッセイ法により血漿中インシュリノトロピン水準を追
跡した。

【０２９２】（実施例４１）１８％ｗ／ｖプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ
１２７１ｍｇ／ｍｌインシュリノトロピン２０ｍＭリン酸緩衝液十分量の無菌注射用水（ＳＷＦＩ）ＳＷＦＩを用いて２０％ｗ／ｗプルロニックＦ１２
７溶液を調製した。ポリマーを溶解するために氷浴を備
えたポリトロン（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ、プローブホモジナ
イザー）を用いた。無水の二塩基性リン酸ナトリウム
（２６．８５ｍｇ／ｍｌ）および一塩基性リン酸ナトリ
ウム・１水和物（１．４１ｍｇ／ｍｌ）を用いて、別個
に２００ｍＭリン酸緩衝液を調製した。必要に応じ水酸
化ナトリウムまたは塩酸を用いて緩衝液のｐＨをｐＨ８
となした。インシュリノトロピンの１０ｍｇ／ｍｌ溶液
を調製するのに適した量のインシュリノトロピンを十分
量の緩衝液に溶解した。適切な重量のプルロニック溶液
をこのインシュリノトロピン溶液に添加し、かつ溶液を
目的容量となすのに十分な量のＳＷＦＩを用いた。次い
でこの最終溶液を０．２μのフィルターで無菌的に濾過
し、無菌的にバイアルに充填した。この溶液（０．５ｍ
ｌ）をラットに皮下注射し、ＲＩＡアッセイ法により血
漿中インシュリノトロピン水準を追跡した。

【０２９３】（実施例４２）ラッカセイ油懸濁液（ボールミル処理）１ｍｇ／ｍｌインシュリノトロピン１％ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０ツイーン８０を１％の量でラッカセイ油に添加した。こ
の溶液を０．２μのフィルターで無菌的に濾過した。次
いで固体インシュリノトロピンをこの油に懸濁した。セ
ズバリ・アトリッター（ＳｚｅｓｖａｒｉＡｔｔｒｉ
ｔｏｒ）を用いて４０ｒｐｍで１８時間ボールミル処理
することにより（冷水ジャケット）、粒度を低下させ
た。次いでこの懸濁液をバイアルに充填した。この懸濁
液（０．５ｍｌ）をラットに皮下注射し、ＲＩＡアッセ
イ法により血漿中インシュリノトロピン水準を追跡し
た。

【０２９４】（実施例４３）２２．６％ｗ／ｖデキストラン１ｍｇ／ｍｌインシュリノトロピン２０ｍＭリン酸緩衝液十分量の無菌注射用水（ＳＷＦＩ）ＳＷＦＩを用いて５０％ｗ／ｗデキストラン溶液を
調製した。無水の二塩基性リン酸ナトリウム（２６．８
５ｍｇ／ｍｌ）および一塩基性リン酸ナトリウム・１水
和物（１．４１ｍｇ／ｍｌ）を用いて、別個に２００ｍ
Ｍリン酸緩衝液を調製した。必要に応じ水酸化ナトリウ
ムまたは塩酸を用いて緩衝液のｐＨをｐＨ８となした。
インシュリノトロピンの５．０ｍｇ／ｍｌ溶液を調製す
るのに適した量のインシュリノトロピンを十分量の緩衝
液に溶解した。適切な重量のデキストラン溶液をこのイ
ンシュリノトロピン溶液に添加し、かつ溶液を目的容量
となすのに十分な量のＳＷＦＩを用いた。次いでこの最
終溶液を０．２μのフィルターで無菌的に濾過し、無菌
的にバイアルに充填した。この溶液（０．５ｍｌ）をラ
ットに皮下注射し、ＲＩＡアッセイ法により血漿中イン
シュリノトロピン水を追跡した。

【０２９５】（実施例４４）インシュリノトロピンをリ
ン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ）、エタノールおよびｍ−クレ
ゾールの混合物から結晶化した。ガラスバイアル中にＰ
ＢＳを用いて均質なインシュリノトロピンのスラリー
（１０ｍｇ／ｍｌ）を調製し、大容量（スラリーの９
倍）のエタノールをバイアルに添加し、その間にバイア
ル内容物を磁気撹拌した。インシュリノトロピンの極め
て微細な非晶質粒子が生成した。得られるｍ−クレゾー
ル濃度が１％（ｖ／ｖ）となるようにｍ−クレゾールを
添加した。溶剤が蒸発するのを防止するためにバイアル
に蓋をした。この結晶化混合物を室温に数日間保存し
た。非晶質粒子から針状結晶板が生長した。結晶の長さ
は５０−２００μｍであり、幅は２−４μｍである。

【０２９６】（実施例４５）インシュリノトロピン（１
−４ｍｇ／ｍｌ）を、８より高いｐＨ値の１％硫酸ナト
リウム（または酢酸ナトリウム、または塩化ナトリウム
または硫酸アンモニウム）溶液に溶解し、溶液のｐＨを
ｄ−ＨＣｌにより６．０−７．５に低下させた。この透
明な溶液を周囲温度に静置した。数日後に、結晶化条件
に応じて針状または板状の結晶が得られた。

【０２９７】（実施例４６）０．１−０．２ＭＮａＣ
ｌを含有するｐＨ８．５−９．５の５０ｍＭグリシン緩
衝液に、ＧＬＰ−１（７−３７）を１−５ｍｇ／ｍｌに
溶解した。亜鉛塩（酢酸塩または塩化物）の溶液を添加
して、亜鉛：ＧＬＰ−１（７−３７）のモル比０．５：
１−１．５：１を得た。ＧＬＰ−１（７−３７）の結晶
を室温で一夜生長させ、７０−９７％の収率を得た。

【０２９８】（実施例４７）ＧＬＰ−１（７−３７）結
晶は、１００ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ８−９．５）に１０
−２０ｍｇ／ｍｌで溶解したペプチドを用いる蒸気拡散
法により生長させることができる。このペプチド溶液
を、０．５−２．５ＭＮａＣｌを含有する同一緩衝液
と１：１で混合し、次いで密閉系内で未希釈緩衝液（す
なわち０．５−２.５ＭＮａＣｌを含有するＴｒｉ
ｓ）に対して平衡化した。

【０２９９】

【発明の効果】本発明によれば、持続的に血糖を制御す
るための組成物、および哺乳動物のインシュリン非依存
性糖尿病の治療法が提供される。

【０３００】

【配列表】

【０３０１】

【０３０２】

【０３０３】

【０３０４】

【０３０５】

【０３０６】

【図面の簡単な説明】

【図１】４ｎｇ／ｋｇ／分のインシュリノトロピンの長
期注入（７時間）がインシュリン非依存性糖尿病（ＮＩ
ＤＤＭ）を伴う患者の血漿中グルコース水準に及ぼす作
用を示す。

【図２】１０ｎｇ／ｋｇ／分のインシュリノトロピンの
短期注入（６０分間）がＮＩＤＤＭを伴う患者の血漿中
グルコース水準に及ぼす作用を示す。

【図３】２ｎｇ／ｋｇ／分および４ｎｇ／ｋｇ／分のイ
ンシュリノトロピンの長期注入（７時間）がＮＩＤＤＭ
を伴う患者の血漿中グルコース水準に及ぼす作用を示
す。

【図４】ラットに種々の水性懸濁液（ＡＳ）中における
１回量０．５ｍｇ／０．５ｍｌを皮下投与したのちのイ
ンシュリノトロピンの平均（ｎ＝３）血漿中濃度を示
す。

【図５】ラットに種々の水性懸濁液（ＡＳ）中における
１回量０．５ｍｇ／０．５ｍｌを皮下投与したのちのイ
ンシュリノトロピンの平均（ｎ＝３）血漿中濃度を示
す。

【図６】ラットに種々の水性懸濁液（ＡＳ）中における
１回量０．５ｍｇ／０．５ｍｌを皮下投与したのちのイ
ンシュリノトロピンの平均（ｎ＝３）血漿中濃度を示
す。

【図７】ラットに種々の水性懸濁液（ＡＳ）中における
１回量０．５ｍｇ／０．５ｍｌを皮下投与したのちのイ
ンシュリノトロピンの平均（ｎ＝３）血漿中濃度を示
す。

【図８】ラットに種々の水性懸濁液（ＡＳ）中における
１回量０．５ｍｇ／０．１３ｍｌを皮下投与したのちの
インシュリノトロピンの平均（ｎ＝３）血漿中濃度を示
す。

【図９】ラットに種々の水性懸濁液（ＡＳ）中における
１回量０．５ｍｇ／０．１３ｍｌを皮下投与したのちの
インシュリノトロピンの平均（ｎ＝３）血漿中濃度を示
す。

【図１０】インシュリノトロピン亜鉛沈殿の薬物動態研
究の結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 47/14 Ａ６１Ｐ 3/10 47/44 Ｃ０７Ｋ 14/605 ＺＮＡＡ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｋ 37/28 Ｃ０７Ｋ 14/605 ＺＮＡ 37/02 (71)出願人 593215117 2450 ＢＡＹＳＨＯＲＥＰＡＲＫＷＡＹ，ＭＯＵＮＴＡＩＮＶＩＥＷ，ＣＡＬＩＦＯＲＮＩＡ 94043，Ｕ．Ｓ．Ａ. (72)発明者ロバート・アラン・ジェルファンドアメリカ合衆国コネチカット州06443，マディソン，ランディ・ドライブ 100 (72)発明者キーラン・フランシス・ジョグヘガンアメリカ合衆国コネチカット州06355，ミスティック，フォート・レイチェル・プレイス 14 (72)発明者イエソーク・キムアメリカ合衆国コネチカット州06405，ブランフォード，クアリー・ドック・ロード 47 (72)発明者ウィリアム・ジョセフ・ランバートアメリカ合衆国コネチカット州06333，イースト・ライム，スプリング・ロック・ロード 17 (72)発明者ホン・クウィアメリカ合衆国コネチカット州06340，グロートン，メリディアン・ストリート 290，ユニット１

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】インシュリン非依存性糖尿病における持
続的な血糖制御のための、下記の成分を含む組成物：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド：His-Ala-
Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Gl
u-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-
Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２）（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-X（配列番号：７）式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり： His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
（配列番号：１）および His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列
番号：６）この誘導体は哺乳動物において処理された際に向インシ
ュリン活性を有するポリペプチド誘導体を生じる；（ｄ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列番号：３） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly（配列番号：４）および His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys（配列番号：５）ならびに（ｅ）該ペプチド（ａ）−（ｄ）の誘導体であって、下
記よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；および（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ii）持続的な血糖制御を達成するために上記
化合物の作用を持続させうる薬剤学的に許容しうる水−
非混和性の油懸濁液であって、該油はラッカセイ油、ゴ
マ油、アーモンド油、ヒマシ油、ツバキ油、綿実油、オ
リーブ油、トウモロコシ油、大豆油、ベニバナ油、ヤシ
油、脂肪酸エステルおよび脂肪アルコールエステルより
なる群から選ばれるもの。
【請求項２】さらに湿潤剤を含み、該湿潤剤が非イオ
ン界面活性剤であり、かつ該組成物が懸濁化剤をも含有
する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】インシュリン非依存性糖尿病における持
続的な血糖制御のための、下記の成分を含む組成物：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２）（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-X（配列番号：７）式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり： His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
（配列番号：１）および His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列
番号：６）この誘導体は哺乳動物において処理された際に向インシ
ュリン活性を有するポリペプチド誘導体を生じる；（ｄ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列番号：３） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly（配列番号：４）および His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys（配列番号：５）ならびに（ｅ）該ペプチド（ａ）−（ｄ）の誘導体であって、下
記よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；および（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ii）該ペプチドとのコンプレックスを形成し
た亜鉛（II）；であって、ここで該組成物は、非晶質、
結晶質または水性懸濁液の形態である組成物。
【請求項４】インシュリン非依存性糖尿病における持
続的な血糖制御のための、下記の成分を含む組成物：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２）（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-X（配列番号：７）式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり： His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
（配列番号：１）および His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列
番号：６）この誘導体は哺乳動物において処理された際に向インシ
ュリン活性を有するポリペプチド誘導体を生じる；（ｄ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列番号：３） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly（配列番号：４）および His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys（配列番号：５）ならびに（ｅ）該ペプチド（ａ）−（ｄ）の誘導体であって、下
記よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；および（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキルアミドよりなる群か
ら選ばれる薬剤学的に許容しうるアミド；ならびに（ii）Ｎｉ（II）、Ｃｏ（II）、Ｍｎ（II）、
Ｆｅ（II）およびＣｕ（II）よりなる群から選ばれる金
属。
【請求項５】インシュリン非依存性糖尿病における持
続的な血糖制御のための、下記の成分を含む組成物：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２）（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-X（配列番号：７）式中のＸは下記よりなる群
から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり： His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
（配列番号：１）および His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列
番号：６）この誘導体は哺乳動物において処理された際に向インシ
ュリン活性を有するポリペプチド誘導体を生じる；（ｄ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列番号：３） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly（配列番号：４）および His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys（配列番号：５）ならびに（ｅ）該ペプチド（ａ）−（ｄ）の誘導体であって、下
記よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；および（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ii）フェノール、クレゾール、レゾルシンお
よびメチルパラベンよりなる群から選ばれるフェノール
系化合物；であって、水性懸濁液である組成物、ただ
し、該組成物は以下の一般式IIのリン脂質を含まない：
式II 【化１】（式中、Ｒ’およびＲ”は同一でも異っていてもよく、
各々水素、各基において14個以下の炭素原子を含有する
アルキル、アルケニル、アルカノイル、アルケノイル、
アルカジエノイル、アルカトリエノイルまたはアルカテ
トラエノイルであり、ただしＲ’およびＲ”は同時に水
素であることはなく、そしてＲ'''は２−（トリメチル
アンモニオ）エチル、２−アミノエチルまたは２，３−
ジヒドロキシプロピルである）。
【請求項６】インシュリン非依存性糖尿病における持
続的な血糖制御のための、下記の成分を含む組成物：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２）（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-X（配列番号：７）式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり： His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
（配列番号：１）および His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列
番号：６）この誘導体は哺乳動物において処理された際に向インシ
ュリン活性を有するポリペプチド誘導体を生じる；（ｄ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列番号：３） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly（配列番号：４）および His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys（配列番号：５）ならびに（ｅ）該ペプチド（ａ）−（ｄ）の誘導体であ
って、下記よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；および（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ii）塩基性ポリペプチドおよびフェノール系
化合物；であって、水性懸濁液である組成物。
【請求項７】インシュリン非依存性糖尿病における持
続的な血糖制御のための、下記の成分を含む組成物：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２）（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-X（配列番号：７）式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり： His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
（配列番号：１）および His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列
番号：６）この誘導体は哺乳動物において処理された際に向インシ
ュリン活性を有するポリペプチド誘導体を生じる；（ｄ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列番号：３） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly（配列番号：４）および His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys（配列番号：５）ならびに（ｅ）該ペプチド（ａ）−（ｄ）の誘導体であ
って、下記よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；および（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；ならびに（ii）塩基性ポリペプチド、フェノール系化合
物および金属イオン；であって、水性懸濁液である組成
物。
【請求項８】インシュリン非依存性糖尿病における持
続的な血糖制御のための、下記の成分を含む組成物：（ｉ）下記よりなる群から選ばれる化合物：（ａ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２）（ｂ）下記のアミノ酸配列を有するペプチド： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-X（配列番号：７）式中のＸは下記よりなる群から選ばれる：（Ａ）Ｌｙｓ、（Ｂ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ、および（Ｃ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ；（ｃ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｗ−ＣＯＯＨ式中のＷは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
あり： His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly
（配列番号：１）および His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Th
r-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-
Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列
番号：６）この誘導体は哺乳動物において処理された際に向インシ
ュリン活性を有するポリペプチド誘導体を生じる；（ｄ）下記の一次構造で表されるポリペプチドの誘導
体：Ｈ₂Ｎ−Ｒ−ＣＯＯＨ式中のＲは下記よりなる群から選ばれるアミノ酸配列で
ある： His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly（配列番号：２） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly-Arg（配列番号：３） His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys-Gly（配列番号：４）および His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Ty
r-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-
Leu-Val-Lys（配列番号：５）ならびに（ｅ）該ペプチド（ａ）−（ｄ）の誘導体であって、下
記よりなる群から選ばれる誘導体：（１）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる酸付加塩；（２）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるカルボキシレ
ート塩；（３）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアルカリ付加
塩；（４）該ペプチドの薬剤学的に許容しうる低級アルキル
エステル；および（５）該ペプチドの薬剤学的に許容しうるアミドであっ
て、アミド、低級アルキルアミドおよび低級ジアルキル
アミドよりなる群から選ばれる薬剤学的に許容しうるア
ミド；であって、該ペプチドおよびそれらの誘導体は、非晶質
または結晶質の、沈殿物または凝集物を生成する条件下
で処理されており；その条件は、高剪断、塩類への暴
露、またはそれらの組み合わせである。
【請求項９】前記塩類が硫酸アンモニウム、硫酸ナト
リウム、硫酸リチウム、塩化リチウム、クエン酸ナトリ
ウム、クエン酸アンモニウム、リン酸ナトリウム、リン
酸カリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化アン
モニウム、酢酸ナトリウム、酢酸アンモニウム、硫酸マ
グネシウム、塩化カルシウム、硝酸アンモニウムおよび
蟻酸ナトリウム、ならびにそれらの組み合わせよりなる
群から選ばれる、請求項８に記載の組成物。