HU225496B1

HU225496B1 - Pharmaceutical compositions of prolonged delivery, containing peptides

Info

Publication number: HU225496B1
Application number: HU9400350A
Authority: HU
Inventors: Dennis Edward Danley; Robert Alan Gelfand; Kieran Francis Geoghegan; Yesook Kim; William Joseph Lambert; Hong Qi
Original assignee: Scios Inc
Priority date: 1993-04-07
Filing date: 1994-02-08
Publication date: 2007-01-29
Also published as: BR9401185A; CA2116478A1; AU682328B2; HU9400350D0; AU5501694A; DE69434588D1; IL108611A0; ZA94878B; CN1544084A; JP2006213727A; JP2010006841A; CN1311865C; EP0619322B1; CZ296341B6; JP5081213B2; ATE314393T1; NO940436D0; HUT68525A; JPH072695A; HK1070589A1

Description

A leírás terjedelme 46 oldal (ezen belül 10 lap ábra)

HU 225 496 Β1

A találmány peptideket tartalmazó nyújtott hatású gyógyszerkészítményekre vonatkozik, amelyek alkalmasak diabetes mellitus kezelésére.

Közelebbről, a találmány szerinti gyógyszerkészítmények a glükagonszerű peptid 1 (GLP-1), valamint ennek származékainak nyújtott hatását biztosítják. Ezek a készítmények alkalmasak a nem inzulinfüggő diabetes mellitus (NIDDM) kezelésére.

A GLP-1 aminosavszekvenciája a következő:

His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-AlaGlu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-ValSer-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-AlaAla-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-LeuVal-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 1)

A GLP-1 peptidet a következő irodalmi helyeken ismertetik: Lopez, L. C. és munkatársai, P.N.A.S., Amerikai Egyesült Államok 80:5485-5489 (1983); Bell, G. I. és munkatársai: Natúré 302:716-718 (1983); Heinrich, G. és munkatársai: Endocrinol. 115:2176-2181 (1984) és Ghiglione, M. és munkatársai: Diabetologia 27.: 599-600(1984).

A szervezetben a hasnyálmirigyben és a belekben a GLP-1 egy 31 aminosavat tartalmazó peptiddé alakul át, amely a GLP-1 7-37 aminosavjait tartalmazza, ezt a továbbiakban GLP-1 (7-37) pepiidként említjük.

Erről a peptidről kimutatták, hogy inzulinotropikus aktivitása van, azaz stimulálni képes az inzulinhormon szintézisét vagy expresszióját. A GLP-1 (7-37) inzulinotropikus aktivitása révén ezt inzulinotropinként is említik.

A GLP-1 (7-37) aminosavszekvenciája a következő:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2).

A GLP-1 (7-37) peptidet, valamint bizonyos származékait és ezek alkalmazását a diabetes mellitus kezelésére emlősöknél az US-P 5 118 666 (továbbiakban *666) és US-P 5 120 712 (továbbiakban 712 számú) szabadalmi leírásokban ismertetik. A ’666 és 712 számú szabadalmi leírásokban ismertetett GLP-1 (7-37) peptid származékai között vannak olyan polipeptidek, amelyek tartalmaznak vagy amelyekből hiányzik egy vagy több aminosav, amely nem lehet jelen a természetben előforduló szekvenciában. További, az említett '666 és 712 számú szabadalmi leírásokban ismertetett GLP-1 (7-37)-peptid-származékok közé tartoznak bizonyos C-terminális sók, észterek és amidok, amelyeknél a sókat és észtereket OM képlettel jelölik, ahol M jelentése gyógyászatilag elfogadható kation, vagy 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, és az amidokat -NR²R³ képlettel jelölik, ahol R² és R³ jelentése azonos vagy különböző, és lehet hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport.

Bizonyos más polipeptideket, amelyeket csonkított GLP-1 pepiidként vagy csonkított inzulinotropinként említenek, és amelyek inzulinotropikus aktivitásúak, valamint ezek származékait a PCT/US89/01121 (WO 90/11296) publikációban ismertetik. Azon polipeptidek aminosavszekvenciája, amelyeket GLP-1 (7-36), GLP-1 (7-35) és GLP-1 (7-34) pepiidként említenek, a következő:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (szekvencia száma: 3);

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Me-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly (szekvencia száma: 4); és

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys (szekvencia száma: 5).

A fenti publikációban említett polipeptidek származékai közé tartoznak olyan polipeptidek, amelyek nem lényeges aminosavszubsztitúciókat tartalmaznak, vagy további aminosavakat tartalmaznak a hordozóproteinek kapcsolásának fokozására vagy az inzulinotropikus hatás növelésére. Bizonyos más, ezen publikációban ismertetett inzulinotropinszármazékok közé tartoznak bizonyos C-terminális sók, észterek és amidok, ahol a sókat és észtereket OM képlettel írják le, ahol M jelentése gyógyászatilag elfogadható kation vagy 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport, az amidokat pedig -NR²R³ képlettel írják le, ahol R² és R³ jelentése azonos vagy különböző, és lehet hidrogénatom vagy rövid szénláncú, egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoport.

A WO 91/11457 és WO 83/18785 számú publikációkban diabétesz elleni, nyújtott hatású készítményeket ismertetnek, de egyikben sincs utalás olyan injekciózható készítményekre, amelynél a peptidkomponens oldhatósága 500 gg/ml vagy ennél kisebb érték.

A mellékelt 1. ábrán 4 ng/kg/perc inzulinotropin nyújtott infúziós adagolásának (7 óra) hatását mutatjuk be NIDDM-ben szenvedő betegek plazmaglükózszintjére.

A 2. ábrán 10 ng/kg/perc mennyiségű inzulinotropin rövid infúziós adagolásának (60 perc) hatását mutatjuk be NIDDMben szenvedő betegek plazmaglükózszintjére.

A 3. ábrán 2 ng/kg/perc és 4 ng/kg/perc inzulinotropin nyújtott infúziós adagolásának (7 óra) hatását mutatjuk be NIDDMben szenvedő betegek plazmaglükózszintjére.

A 4. ábrán patkányok esetén (n=3) a plazma inzulinotropin koncentrációjának átlagértékét ábrázoljuk különböző vizes szuszpenziók (AS) formájában adagolt egyetlen 0,5 mg/0,5 ml dózis szubkután adagolása után.

HU 225 496 Β1

Az 5. ábrán patkányok esetén (n=3) a plazma inzulinotropin koncentrációjának átlagértékét ábrázoljuk különböző vizes szuszpenziók (AS) formájában adagolt egyetlen 0,5 mg/0,5 ml dózis szubkután adagolása után.

A 6. ábrán patkányok esetén (n=3) a plazma inzulinotropin koncentrációjának átlagértékét ábrázoljuk különböző vizes szuszpenziók (AS) formájában adagolt egyetlen 0,5 mg/0,5 ml dózis szubkután adagolása után.

A 7. ábrán patkányok esetén (n=3) a plazma inzulinotropin koncentrációjának átlagértékét ábrázoljuk különböző vizes szuszpenziók (AS) formájában adagolt egyetlen 0,5 mg/0,5 ml dózis szubkután adagolása után.

A 8. ábrán patkányok esetén (n=3) a plazma inzulinotropin koncentrációjának átlagértékét ábrázoljuk különböző vizes szuszpenziók (AS) formájában adagolt egyetlen 0,5 mg/0,13 ml dózis szubkután adagolása után.

A 9. ábrán patkányok esetén (n=3) a plazma inzulinotropin koncentrációjának átlagértékét ábrázoljuk különböző vizes szuszpenziók (AS) formájában adagolt egyetlen 0,5 mg/0,13 ml dózis szubkután adagolása után.

A 10. ábrán inzulinotropin-cink precipitátum farmakokinetikal vizsgálatát mutatjuk be.

A találmány egyik kivitelezési módja szerint nem inzulinfüggő diabetes mellitusban szenvedő emlősök kezelésére alkalmas gyógyszerkészítményekre vonatkozik, amely nyújtott hatású vegyületet tartalmaz, amely nyújtott hatás szükséges az emlősöknél hosszan tartóan a vércukorszint szabályozására, és amely vegyület a következő vegyületek egyike:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2), (b) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-X (szekvencia száma: 7), amely képletben X jelentése:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptid:

H₂N-W-COOH amely képletben W jelentése valamely következő aminosavszekvencia:

His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-AlaGlu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-ValSer-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-AlaAla-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-LeuVal-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 1) vagy

His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-AlaGlu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-ValSer-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-AlaAla-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-LeuVal-Lys-Gly-Arg (szekvencia száma: 6), (d) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

H₂N-R-COOH amely képletben R jelentése valamely következő aminosavszekvencia:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2)

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (szekvencia száma: 3)

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly (szekvencia száma: 4) és

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys (szekvencia száma: 5) és (e) a fenti (a)—(d) pontok szerinti peptidek valamely következő származéka:

(1) gyógyászatilag elfogadható savaddíciós só, (2) gyógyászatilag elfogadható karboxilátsó;

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, amely amid lehet egy amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid.

A fenti vegyületeket előnyösen szubkután adagoljuk.

Előnyös továbbá az intramuszkuláris adagolás is.

Szintén előnyös adagolási mód a transzdermális adagolás.

Ugyancsak előnyösen adagolhatjuk a vegyületeket infúziós szivattyú segítségével.

Előnyös továbbá az orális inhaláció is.

Ugyancsak előnyös adagolási mód a nazális inhaláció.

Szintén előnyös a gasztrointesztinális úton való adagolás.

HU 225 496 Β1

A találmány egy másik kivitelezési módozat szerint készítményekre vonatkozik, amelyek a következőket tartalmazzák:

(i) egy valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-ThrSer-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-LeuGlu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-GluPhe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-LysGly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2), (b) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly (szekvencia száma: 4) vagy

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy polimer, amely képes a vegyület nyújtott hatását biztosítani a hosszan tartó vércukorszint-szabályozás érdekében, ez a polimer előnyösen egy kis molekulatömegű polimer, különösen előnyösek azok a készítmények, amelyek polimerként valamely következő polimert tartalmaznak: polietilénglikol, poli(etilén-oxi)poli(propilén-oxi) kopolimerek, valamely polianhidrid vagy poliszacharid, úgymint kitozán, akácmézga, karajagumi, guargumi, xantángumi, tragant, alginsav, karragén, agaróz vagy furcelleranok, dextrán, keményítő, keményítőszármazékok vagy hialuronsav, amelyek közül különösen előnyös a polietilénglikol.

Egy másik kiviteli formánál a találmány szerinti készítmény összetétele a következő:

(i) egy valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-AlaGlu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-ValSer-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-AlaAla-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-LeuVal-Lys-Gly-Arg (szekvencia száma: 6),

HU 225 496 Β1 (d) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addícíós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy gyógyászatilag elfogadható vízzel nem elegyedő olajos szuszpenzió, amely alkalmas a fenti vegyület nyújtott hatásának biztosítására, különösen előnyös, ha a fenti készítmény olajként valamely következő anyagot tartalmazza: földimogyoró-olaj, szezámolaj, mandulaolaj, ricinusolaj, kamillaolaj, gyapotmagolaj, olívaolaj, kukoricaolaj, szójaolaj, sáfrányolaj, zsírsavak észterei és zsíralkoholok észterei.

Különösen előnyösen a készítmény még tartalmaz nedvesítőszert, különösen nemionos nedvesítőszert.

Egy még előnyösebb kiviteli formánál a fenti készítmény még szuszpendálószert is tartalmaz.

A találmány egy további kiviteli módjánál a készítmény összetétele a következő:

(i) egy valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys (szekvencia száma: 5) és (e) a fenti (a)-(d) pontok szerinti peptidek valamely következő származéka;

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addícíós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) cink(ll), amely a peptiddel elkevert formában van.

HU 225 496 Β1

Különösen előnyösek azok a készítmények, amelyekben a cinktermék amorf.

Ugyancsak különösen előnyösek azok a készítmények, amelyekben a cinktermék kristályos.

A találmány egy következő kiviteli formájánál a készítmény összetétele a következő:

(i) egy valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid: His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2), (b) egy következő aminosavszekvenciájú peptid: His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-X (szekvencia száma: 7), amely képletben X jelentése:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy valamely következő fém: Ni(ll), Co(ll), Mg(ll), Ca(ll), K(l), Mn(ll), Fe(ll) és Cu(ll).

(i) egy valamely következő vegyület:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly6

HU 225 496 Β1

Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2)

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys (szekvencia száma: 5) és (e) a fenti (a)-(d) pontok szerinti peptidek valamely következő származéka:

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy bázikus polipeptid, amelyben a készítmény vizes szuszpenzió formájában képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására.

Egy különösen előnyös kiviteli formánál a bázikus polipeptid egy protamin.

A találmány egy további kiviteli formájánál a készítmény a következőket tartalmazza:

(i) egy valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2), (b) egy következő aminosavszekvenciájú peptid;

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos diaikil-amid, és (ii) egy fenolos vegyület, amelyben a készítmény vizes szuszpenzió formájában képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására.

Különösen előnyösek azok a készítmények, amelyek fenolos komponensként a következőket tartalmazzák: fenol, krezol, rezorcin vagy metil-parabén.

Egy további kiviteli formánál a találmány szerinti készítmény a következőket tartalmazza:

(i) egy valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

HU 225 496 Β1

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy bázikus polipeptid és egy fenolos vegyület, amelyben a fenti készítmények vizes szuszpenzió formájában alkalmasak a vércukorszint hosszan tartó szabályozására.

(i) egy valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

HU 225 496 Β1

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy bázikus polipeptid, egy fenolos vegyület és egy fémion, amelyben a készítmény vizes szuszpenzió formájában képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására.

Az előnyös készítmények bázikus polipeptidként protamint tartalmaznak.

Ugyancsak előnyösek azok a készítmények, amelyekben a fémion cink.

(i) egy valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és az említett peptidek és származékaik olyan körülményeknek lettek kitéve, hogy amorf vagy kristályos forma, csapadék vagy aggregátum jött létre.

A találmány szerinti mindegyik készítmény fontos jellemzője, hogy injekciózható készítmény, nyújtott hatású, képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására, és az i) pont szerinti vegyületek megfelelő kezeléssel olyan kristályos vagy amorf formává lettek alakítva, amelyek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb érték fiziológiás körülmények között.

Előnyösek azok a készítmények, amelyeknél az említett kezelésként nagy nyíróhatást, sókkal való kezelést vagy ezek kombinációját alkalmaztuk.

Különösen előnyösek azok a készítmények, amelyeknél a következő sókat alkalmazzuk: ammónium-szulfát, nátrium-szulfát, lítium-szulfát, lítium-klorid, nátrium-citrát, ammónium-citrát, nátrium-foszfát, kálium-foszfát, nátrium-klorid, kálium-klorid, ammónium-klorid, nátrium-acetát, ammónium-acetát, magnézium-szulfát, kalcium-klorid, ammónium-nitrát vagy nátrium-formát vagy ezek keveréke.

A találmány vonatkozik továbbá a nem inzulinfüggő diabetes mellitusban szenvedő emlősök kezelésére alkalmas, nyújtott hatású, a vércukorszint hosszan tartó szabályozására alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására is, amely eljárásnál az előzőek szerinti bár9

HU 225 496 Β1 mely kiviteli forma komponenseit folyékony, adagolásra alkalmas készítménnyé alakítjuk.

Hacsak másképpen nem jelöljük, a leírásban és az igénypontokban alkalmazott „származék” kifejezés a korlátozás szándéka nélkül olyan polipeptidekre vonatkozik, amelyek a bemutatott primer szerkezettel rendelkeznek, és amelyek a C-terminálison egy vagy több L-aminosavat tartalmaznak; amelyekben a C-terminális karboxilcsoport egy 1-6 szénatomos egyenes vagy elágazó láncú alkilcsoporttal észtert képez; amelyekben a C-terminális karboxilcsoport karboxamidot vagy szubsztituált karboxamidot képez; amelyekben a savas aminosavcsoportok (Asp és/vagy Glu) egy észtert vagy karboxamidot képeznek; valamint ezek kombinációi.

A találmány oltalmi körébe tartoznak azok a polipeptidek is, amelyek a fentiekben említett peptidekkel homológok, amely homológia olyan mértékű, hogy elegendő a polipeptidek inzulinotropikus aktivitásának biztosítására. Ugyancsak a találmány oltalmi körébe tartoznak a fentiekben ismertetett polipeptidek variánsai, amely variánsok nem lényeges aminosavszubsztitúciót tartalmaznak, és amely variánsok inzulinotropikus aktivitásúak.

A glükagonszerű peptid-1 (7-37), ezek elválasztása, jellemzése és alkalmazása a diabetes mellitus kezelésére az USP 5 118 666 és 5 120 712 számú szabadalmi leírásokban van ismertetve.

Felismertük, hogy a GLP-1 és ezzel rokon peptidek nyújtott (ismételt) emelkedése a plazmában szükséges az étkezési idő alatt és azon túl, hogy a nem inzulinfüggő diabetes mellitusban szenvedő betegeknél a vércukorszint hosszan tartó szabályozását biztosítsuk. Meglepetésszerűen azt találtuk, hogy a GLP-1 peptid, valamint a rokon peptidek növelése az étkezési idő környékén akár még 1 óra időtartamra, önmagában nem elegendő a glükózszint kielégítő szabályozására. így a GLP-1, valamint a rokon peptidek adagolása nyújtott hatású hordozó- (szállító-) rendszert igényel. Ez a nyújtott hatású hordozórendszer eredményezi az inzulinhatás növekedését.

A leírás során, valamint az igénypontokban alkalmazott „az inzulinhatás növelése kifejezés magában foglal a korlátozás szándéka nélkül egy vagy több fokozódó inzulinszintézist, fokozódó inzulinkiválasztást, az izmok és a zsír által felvett glükóz emelkedését és a máj által termelt glükóz csökkenését.

A találmány szerinti polipeptideket a szakember számára ismert különböző módszerekkel állíthatjuk elő. így például a polipeptideket előállíthatjuk automata peptidszintetizátorokkal, így például egy Applied Biosystems (ABI) 430A típusú szilárd fázisú peptidszintetizátorral. Más módszer szerint a találmány szerinti polipeptideket előállíthatjuk rekombináns-DNS-technológiával is, ahol a polipeptidet kódoló DNS-szekvenciát működőképesen kapcsoljuk a megfelelő gazdasejt transzformálásához használt expressziós vektorhoz. A transzformált gazdasejtet ezután olyan körülmények között tenyésztjük, amelyeknél a polipeptid expresszálódik. A polipeptidet ezután a sejtkultúrából kinyerjük. Továbbá alkalmazhatjuk még a szintézis és a rekombináns-DNS-technikák kombinációját is az amidok és az észterszármazékok előállítására, és/vagy a kívánt polipeptidek fragmenseinek előállítására, amelyeket ezután a szakember számára ismert módon kapcsolunk.

A találmány szerinti polipeptidek származékait szintén a szakterületen ismert módszerek szerint állítjuk elő. így például a találmány szerinti polipeptidek C-terminális alkil-észter-származékait úgy állítjuk elő, hogy a kívánt 1-6 szénatomos alkanolt a kívánt polipeptiddel reagáltatjuk katalitikus sav, így például HCI jelenlétében. Az ilyen alkil-észter-kialakuláshoz megfelelő reakciókörülmények az 50 °C körüli hőmérséklet és 1-3 órás reakcióidő. Hasonlóképpen előállíthatjuk ezzel a módszerrel az olyan találmány szerinti polipeptidszármazékokat, amelyek az Asp és/vagy Glu csoport 1-6 szénatomos alkil-észtereit tartalmazzák.

A találmány szerinti polipeptidek karboxamidszármazékait szintén ismert módon szilárd fázisú peptidszintézissel állítjuk elő, így például a következő irodalmi helyen leírtak szerint: Solid Phase Peptide Synthesis, Stewart, J. M. és munkatársai, Pierce Chem. Co. Press, 1984.

Más módszer szerint, vagy a fentiekkel kombinációban alkalmazva a találmány szerinti polipeptidszármazékokat előállíthatjuk úgy is, hogy az ezen polipeptideket kódoló DNS-szekvenciákat módosítjuk úgy, hogy a bázikus aminosavcsoportokat helyettesítjük eltérő bázikus aminosavcsoportokkal, vagy egy savas vagy neutrális aminosavcsoporttal, vagy egy savas aminosavcsoportot helyettesítünk másik savas aminosavcsoporttal vagy bázikus vagy semleges aminosavcsoporttai, vagy pedig a semleges aminosavcsoportot helyettesítjük másik semleges aminosavcsoporttal, vagy egy savas vagy bázikus aminosavcsoporttal. Az ilyen változások a polipeptid primer szekvenciájában elvégezhetők a származék közvetlen szintézisével is. Az ilyen módszerek a szakember számára ismertek. Természetesen az ilyen, a találmány értelmében alkalmazható származékok inzulinotropikus hatással kell hogy rendelkezzenek.

A találmány szerinti polipeptidszármazékok inzulinotropikus aktivitását a következőképpen határozzuk meg.

Normálpatkányok hasnyálmirigyszövetéből hasnyálmirigyszigeteket izolálunk Lacy, P. E. és munkatársai módosított módszere szerint [Lacy, P. E. és munkatársai, Diabetes, 16:35-39 (1967)], amely során a hasnyálmirigyszövet kollagenázos emésztését Ficoll gradiensen (27%, 23%, 20,5% és 11%, Hanks-féle kiegyensúlyozott sóoldat, pH 7,4) elválasztjuk. A szigeteket a 20,5%/11% érintkezési felületnél gyűjtjük, mossuk, majd kézzel sztereomikroszkóp alatt az exocrint és más szövetet eltávolítjuk. A szöveteket ezután egy éjszakán át RPMI 1640 típusú, 10% szarvasmarhamagzatiszérummal és 11 mmol glükózzal kiegészített tápközegben 37 °C hőmérsékleten 95% levegő/5% CO₂ jelenlétében inkubáljuk. A szigeteket ezután RPMI 1640 típusú, 10% szarvasmarha-magzatiszérummal és 5,6 mmol glükózzal kiegészített tápközegbe áttesszük. A szigeteket 60 percen át 37 °C hőmérsékleten 95% levegő/5% CO₂ jelenlétében inkubáljuk. A vizsgálni kívánt polipeptidszármazékokból 1 nmol és 10 nmol

HU 225 496 Β1 koncentrációjú oldatot készítünk RPMI közegben, amely még 10% szarvasmarha-magzatiszérumot és 16,7 mmol glükózt tartalmaz. Ezután kb. 8-10 izolált szigetet pipettával 250 μΙ térfogatnyi mennyiségű polipeptidszármazékot tartalmazó közeggel egy 96 lyukú mikrotiterlemezre viszünk. A szigeteket a polipeptidszármazékok jelenlétében 37 °C hőmérsékleten 95% levegő/5% CO₂ jelenlétében 90 percen át inkubáljuk. Ezután a szigetmentes közegből aliquot részt veszünk, és 100 μΙ mennyiséget vizsgálunk a jelen lévő inzulinra radioimmunovizsgálattal Equate Insulin RIA Kit (Binax, Inc., Portland, ME) alkalmazásával.

A felnőtt diabéteszbetegek kezelésénél hatásos dózis mennyisége 1 pg/kg és 1000 pg/kg naponta, a találmány szerinti polipeptidszármazék esetén, például intravénás, intramuszkuláris vagy szubkután adagolással. Az előnyös dózis intravénás infúzió esetén az étkezések alatt vagy az étkezések között 4-10 ng/kg/perc, vagy 0,6-1,4 pg/nap 100 kg tömegű beteg esetén. Nyilvánvaló azonban, hogy a fentiekben megadott dózisok alkalmazása is lehetséges, és ezek szintén a találmány oltalmi körébe tartoznak. A megfelelő dózist a kezelőorvos fogja és tudja meghatározni, és ez függ a kezelni kívánt betegség komolyságától, valamint az adagolás során a származékkal elért választól, valamint a beteg korától, tömegétől, nemétől és kórtörténetétől.

A hosszan tartó ismételt adagolást végezhetjük szubkután, intramuszkuláris vagy transzdermálisan, orális vagy nazális inhalációval, gasztrointesztinálisan vagy infúziós szivattyú segítségével.

A GLP-1 és ezzel rokon peptidek nyújtott adagolását különböző vízben oldható polimerekkel képzett oldatok formájában is végezhetjük, ezek a polimerek általában kis molekulatömegű (<15 kDa) polimerek. A korlátozás szándéka nélkül ilyen polimerként alkalmazhatók például a következők: polietilénglikol, poli(vinil-pirrolidon), poli(vinil-alkohol) és poli(etilén-oxi)-poli(propilén-oxi) kopolimerek. Nagy molekulatömegű polimerek szintén alkalmazhatók. A korlátozás szándéka nélkül az ilyen nagyobb molekulatömegű polimerek közé tartoznak például a poliszacharidok, így például a cellulóz és származékai, kitozán, akácgumi, karajagumi, guargumi, xantángumi, tragant, alginsav, karragén, agaróz és furcelleran. Ez utóbbi esetben olyan polimerek, amelyek in vivő degradálódnak, akár enzimatikusan, akár hidrolízissel, előnyösen alkalmazhatók, ilyenek például a dextrán, keményítő és származékai, hialuronsav, poliészterek, poliamidok, polianhidridek és poli(orto-észterek). A nagy molekulatömegű, biológiailag nem lebomló polimerekkel kapcsolatos szövetakkumuláció elkerülhető, ha kis molekulatömegű polimereket vagy biológiai úton lebomló polimereket alkalmazunk. A készítmények általában GLP-1 vagy ezzel rokon peptidet tartalmaznak kb. 1 mg/ml mennyiségben, polimert a polimertől függő koncentrációban, de általában olyan koncentrációban, amely 50 cps viszkozitást biztosít, valamint adott esetben alkalmas puffért, tonizálószert és konzerválószert is tartalmaznak. A patkányoknál és embereknél kapott in vivő adatok azt mutatják, hogy a készítményekkel mérhető vér-inzulinotropinszintet lehet elérni például 24 órán át. Ezzel szemben például a foszfáttal puffért sóoldattal formulázott inzulinotropin gyors (—15 perc) csúcsplazmaszintet eredményez, amely plazmaszint a kimutathatósági határ alá esik 4 óra alatt. A plazma koncentráció-idő függvényében felvett ábrából kitűnik, hogy az inzulinotropin abszorpciós mértéke például az injekció helyétől, szignifikáns mértékben csökken a polimerek jelenlétében.

A GLP-1 és rokon peptidei gyógyászatilag elfogadható olajokban szuszpendált részecskék formájában is formulázhatók. Erre a célra előnyös olajok például a trigliceridek. A korlátozás szándéka nélkül említjük például a következő szintén felhasználható olajokat: földimogyoró-olaj, szezámolaj, mandulaolaj, ricinusolaj, kamillaolaj, gyapotmagolaj, olívaolaj, kukoricaolaj, szójaolaj, sáfrányolaj. Más osztályba tartozó olajok is alkalmazhatók, így például zsírsavak észterei és zsíralkoholok észterei, amennyiben ezek az olajok vízzel nem elkeverhetők, és a peptid számára rossz oldószerek. A készítmények tartalmazhatnak még megfelelő konzerválóanyagokat, nedvesítő- és szuszpendálószereket. Az inzulinotropin tömeg%-a a készítményben 0,01-10% között lehet. Patkányoknál meghatározott in vivő adatok kimutatják, hogy ezen készítményekkel mérhető inzulinotropin-vérszint érhető el például 24 óráig. Ezzel szemben például a foszfáttal pufferolt sóoldattal készült inzulinotropinkészítmény esetében gyors (~15 perces) csúcsplazmaszintet nyernek, amely plazmaszint a mérhető szint alá csökken már 4 óra alatt. A plazma koncentráció-idő függvényében felvett görbék alapján kitűnik, hogy az inzulinotropinabszorpció mértéke az injekció helyétől szignifikáns mértékben csökken az olajos szuszpenziókban.

A GLP-1 és ezzel rokon peptideket kialakíthatjuk alacsony oldhatóságú készítmények formájában is fémionokkal kombinálva, előnyösen sókkal kombinálva. Az előnyös ion ilyen készítményeknél a cink(ll). Az így kapott készítmény lehet amorf vagy kristályos. Erre a célra használható egyéb fémionok még a következők: Ni(ll), Co(ll), Mg(ll), Ca(ll), K(l), Mn(ll), Fe(ll) vagy Cu(ll).

A nyújtott hatású készítmények egy további típusa az inzulinotropinprecipitátumok vagy -aggregátumok vizes szuszpenziója, amelyeket kicsapószerrel, így például fenolos vegyülettel vagy bázikus polipeptiddel vagy fémionokkal vagy sókkal és/vagy nagy nyíróhatással készítünk. Egyidejűleg több kicsapószert is lehet alkalmazni. A precipitátum lehet kristályos vagy amorf.

Inzulinotropinkristályokat állíthatunk elő például a hatóanyag vizes oldatából pH-gradiens (nagy érték—>kis érték vagy kis érték-^nagy érték) és/vagy hőmérséklet-gradiens és/vagy só alkalmazásával, amelyekkel az oldhatóságot csökkentjük. Az alkalmazható sók közé tartoznak például a következők: ammónium-citrát, nátrium- vagy kálium-foszfát, nátrium- vagy kálium- vagy ammónium-klorid, nátrium- vagy ammónium-acetát, magnézium-szulfát, kalcium-klorid, ammónium-nitrát, nátrium-formát és más egyéb sók, amelyek a hatóanyag oldhatóságát csökkentik. Amennyiben a kristályosításhoz alkalmazott só gyógyászatilag

HU 225 496 Β1 nem elfogadható, az anyalúgot gyógyászatilag elfogadható közeggel helyettesíthetjük, miután a kristályosítást befejeztük. Amennyiben a hatóanyag oldhatóságának további csökkentése szükséges, a kívánt farmakokinetikai profil elérése érdekében, a kristályokat fémionokkal, így például cink- vagy kalciumionokkal és/vagy fenolvegyületekkel kezelhetjük. Ezt a kezelést például úgy végezzük, hogy ezeket az adalék anyagokat egyszerűen a kristályos szuszpenzióhoz adagoljuk.

Az inzulinotropinprecipitátum vagy -aggregátum oldhatósága kisebb mint 1 pg/ml és 500 pg/ml között van fiziológiai körülmények között. A patkányoknál kapott in vivő adatok azt mutatják, hogy a készítmények alkalmazásával mérhető inzulinotropinszint biztosítható a vérben például legalább 30 órán át.

A fenti készítményekhez alkalmazott vizes közeg lehet bármilyen pufferrendszer, amelyet injekciókhoz általában alkalmaznak, vagy lehet akár tiszta víz is. A végső készítmény pH-értéke lehet bármilyen értékű, egészen addig, amíg a készítmény injekciózható. A készítményhez beadagolhatunk protamint bármilyen só formájában (például szulfát, klorid stb.), vagy protaminbázlst. A készítmények előállításánál felhasználható komponensek koncentrációtartományai például a következők: fenol (0,5-5 mg/ml), m-krezol (0,5-5,5 mg/ml), protamin (0,02-1 mg/ml), cink (0,1-6 cink/inzulinotropin mólarány), nátrium-klorid (max. 100 mg/ml) és foszfátpuffer (5-500 mmol).

Más fenolos vagy nem fenolos vegyületek szintén alkalmazhatók. így például a korlátozás szándéka nélkül említjük a következőket: rezorcin, metil-parabén, propil-parabén, benzil-alkohol, klór-krezol, krezol, benzaldehid, katechol, pirogallol, hidrokinon, n-propil-gallát, butilezett hidroxi-anizol, butilezett hidroxi-toluol. Példaképpen említjük bázikus polipeptidként a polilizint, poliarginint stb.

A következő példákban a találmányt közelebbről illusztráljuk. Ezen példák azonban nyilvánvalóan nem jelentik a találmány korlátozását, amelynek oltalmi körét az igénypontokkal határozzuk meg.

1. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A1 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 4 ml foszfáttal pufferolt sóoldatot (PBS), hogy a hatóanyagot ebben diszpergáljuk és oldjuk. Ezután megfelelő mennyiségű PBS-sel (szükség szerinti PBS) a mérőlombikot megtöltjük. 20 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t a hatóanyag diszpergálására és oldására. Ezután a szükséges PBS mennyiséget adagoljuk itt is a mérőlombikba. Ezután a két mérőlombik tartalmát egyesítjük, egy üvegfecskendőn és egy 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötés) egy 10 ml-es üvegfiolába. Az így kapott A1 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B1 oldat előállítása mg protamin-szulfátot és 44 mg fenolt bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd szükség szerinti mennyiségű PBS-t adagolunk hozzá a protamin-szulfát és a fenol oldására. Az így kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn keresztül (alacsony proteinkötés) egy 10 ml-es üvegfiolába szűrjük. Az így kapott B1 oldat 0,6 mg/ml protaminbázist és 4,4 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 1

1,5 ml A1 oldatot pipettával 3,5 ml I típusú üvegfiolába mérünk, majd a fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben 1,5 ml B1 oldatot pipettázunk hozzá. A fiolát ezután bedugaszoljuk, és egy alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát gyengén 16 órán keresztül keverjük a szuszpenzió kialakítása céljából. Az így kapott szuszpenzió 1 mg/ml inzulinotropint, 0,3 mg/ml protaminbázist és 2,2 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

2. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A2 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 4 ml PBS-t a hatóanyag diszpergálására és oldására. Ezután a szükség szerinti PBS-t adagoljuk a mérőlombikhoz. 20 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk 8 ml PBS-t a hatóanyag diszpergálására és oldására, majd a szükséges mennyiségű PBS-t adagoljuk a mérőlombikba. Ezután a két mérőlombik tartalmát szűréssel egyesítjük úgy, hogy azokat egy 0,22 pm-es szűrőn keresztül egy 10 ml-es üvegfiolába szűrjük. A kapott A2 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B2 oldat előállítása mg protamin-szulfátot és 44 mg fenolt bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd a szükséges mennyiségű PBS-t adagoljuk hozzá a protamin-szulfát és fenol oldására. A kapott oldatot egy 0,22 pm-es szűrőn keresztül egy 10 ml-es üvegfiolába szűrjük. Az így kapott B2 oldat 0,15 mg/ml protaminbázist és

4,4 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 2

1,5 ml A2 oldatot egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába pipettázunk. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben 1,5 ml B2 oldatot pipettázunk hozzá. A fiolát ezután bedugaszoljuk és alumíniumfóllával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 2 1 mg/ml inzulinotropint, 0,075 mg/ml protaminbázist és 2,2 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk a patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

3. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A3 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t a hatóanyag diszpergálására és oldására, majd kiegészítjük a szükséges mennyiségű PBS-sel. A kapott A3 oldatot egy injekciós tűvel egy 0,22 pm-es szűrőn keresztül

HU 225 496 Β1 egy 10 ml-es üvegfiolába szűrjük. Az így kapott A3 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B3 oldat előállítása mg protamin-szulfátot, 44 mg fenolt és 323 mg glicerint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük a protamin-szulfát, a fenol és a glicerin oldása céljából. A kapott oldatot egy injekciós tűvel egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B3 oldat 0,6 mg/ml protaminbázist, 4,4 mg/ml fenolt és 32 mg/ml glicerint tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 3

1,5 ml A3 oldatot egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába pipettázunk. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzápipettázunk 1,5 ml B3 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. Az így kapott vizes szuszpenzió 3 1 mg/ml inzulinotropint, 0,3 mg/ml protaminbázist,

2,2 mg/ml fenolt és 16 mg/ml glicerint tartalmaz PBSben. Az így kapott szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

4. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A4 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t a hatóanyag diszpergálására és oldására, majd kiegészítjük a szükséges mennyiségű PBS-sel. A kapott A4 oldatot ezután egy fecskendő segítségével egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük (Millipore Millex-GV) egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A4 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B4 oldat előállítása mg protamin-szulfátot és 52 mg m-krezolt bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, és kiegészítjük a szükséges mennyiségű PBS-sel a protamin-szulfát és m-krezol oldására. A kapott oldatot egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B4 oldat 0,6 mg/ml protaminbázist és 5 mg/ml m-krezolt tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 4

1,5 ml A4 oldatot pipettával bemérünk egy

3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben 1,5 ml B4 oldatot pipettázunk hozzá. A fiolát ezután ledugaszoljuk, és egy alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a kristályok kialakulása céljából. A vizes szuszpenzió 4 1 mg/ml inzulinotropint, 0,3 mg/ml protaminbázist és 2,5 mg/ml m-krezolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

5. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A5 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 25 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 23 ml PBS-t a hatóanyag diszpergálására és oldására, és a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott A5 oldatot egy fecskendő segítségével egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 50 ml-es üvegfiolába. A kapott A5 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

Fenoltörzsoldat előállítása

0,44 g fenolt bemérünk egy 100 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 95 ml PBS-t a fenol oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük a fenol oldására. A kapott oldat

4.4 mg/ml fenolt tartalmaz, ezt alkalmazzuk a B5 oldat előállításához.

B5 oldat előállítása

A B5 oldat előállításához átszűrünk egy 0,2 pm-es szűrőn 25 ml előző fenoltörzsoldatot egy 50 ml-es üvegfiolába. Az így kapott B5 oldat 4,4 mg/ml PBS-t tartalmaz.

Vizes szuszpenzió 5

1,25 ml A5 oldatot pipettával bemérünk egy

3.5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzápipettázunk 1,25 ml B5 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk, alumíniumfóliával lezárjuk és 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 5 1 mg/ml inzulinotropint és 2,2 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

6. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A6 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 25 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 23 ml PBS-t a hatóanyag diszpergálására és oldására, majd a szükséges mennyiségű PBS-sel a mérőlombikot kiegészítjük. A kapott A6 oldatot egy fecskendő segítségével 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 50 ml-es üvegfiolába. A kapott A6 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

Fenoltörzsoldat előállítása

0,44 g fenolt bemérünk egy 100 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 95 ml PBS-t a fenol oldására, majd a mérőlombikot kiegészítjük a szükséges PBS-sel a fenol teljes oldása céljából. A kapott oldat

4,4 mg/ml fenolt tartalmaz, ezt alkalmazzuk a B6 oldat előállításához.

B6 oldat előállítása

1,25 mg protamin-szulfátot bemérünk egy 25 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 20 ml fenoltörzsoldatot a protamin-szulfát oldására, majd a szükséges mennyiségű fenoltörzsoldatot adagoljuk a mérőlombikba. A kapott B6 oldatot 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 50 ml-es üvegfiolába. A kapott B6 oldat

4.4 mg/ml fenolt és 0,038 mg/ml protaminbázist tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 6

1,25 ml A6 oldatot pipettával bemérünk egy

3.5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzápipettázunk 1,25 ml B6 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumínium13

HU 225 496 Β1 fóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 6 1 mg/ml inzulinotropint, 2,2 mg/ml fenolt és 0,019 mg/ml protaminbázist tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

7. példa

Inzulínotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A 7 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 25 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 23 ml PBS-t a hatóanyag diszpergálására és oldására, majd a szükséges mennyiségű PBS-sel a mérőlombikot kiegészítjük. A kapott A7 oldatot egy fecskendő segítségével 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 50 ml-es üvegfiolába. A kapott A7 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

Fenoltörzsoldat előállítása

4,4 mg/ml fenolt tartalmaz, ezt alkalmazzuk a B7 oldat előállításához.

B7 oldat előállítása

2,5 mg protamin-szulfátot bemérünk egy 25 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 20 ml fenoltörzsoldatot a protamin-szulfát oldására, majd a szükséges mennyiségű fenoltörzsoldatot adagoljuk a mérőlombikba. A kapott B7 oldatot 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 50 ml-es üvegfiolába. A kapott B7 oldat

4.4 mg/ml fenolt és 0,075 mg/ml protaminbázist tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 7

1,25 ml A7 oldatot pipettával bemérünk egy

3.5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzápipettázunk 1,25 ml B7 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 7 1 mg/ml inzulinotropint, 2,2 mg/ml fenolt és 0,038 mg/ml protaminbázist tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

8. példa

Inzulínotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A12 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 80 ml PBS-t a hatóanyag diszpergálására és oldására, majd a szükséges mennyiségű PBS-sel a mérőlombikot kiegészítjük. A kapott A12 oldatot egy fecskendő segítségével 0,22 pm-es szűrőn átszűijük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A12 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B12 oldat

B12 oldat előállítása mg fenolt bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t a fenol oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű

PBS-sel kiegészítjük. A kapott B12 oldatot 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott

B12 oldat 2 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 12 ml A12 oldatot pipettával bemérünk egy 10 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát keverjük, miközben 4 ml B12 oldatot pipettázunk hozzá. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 12 1 mg/ml inzulinotropint és 1 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

9. példa

Inzulínotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A15 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 8 ml foszfátpuffert (PB) oldására, majd a szükséges mennyiségű PB-vel a mérőlombikot kiegészítjük. A kapott A15 oldatot egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A15 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PB-ben.

B15 oldat előállítása mg protamin-szulfátot bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml PB-t a protamin-szulfát oldására, és a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PB-vel kiegészítjük. A kapott B15 oldatot ezután 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B15 oldat 0,6 mg/ml protaminbázist tartalmaz PB-ben.

Vizes szuszpenzió 15 ml A15 oldatot pipettával bemérünk egy 10 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát keverjük, miközben hozzápipettázunk 3 ml B15 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk, és a tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 15 1 mg/ml inzulinotropint és 0,3 mg/ml protaminbázist tartalmaz PB-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

10. példa

Inzulínotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A16 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 8 ml PB-t a hatóanyag oldására, majd a szükséges mennyiségű PB-vel a mérőlombikot kiegészítjük. A kapott A16 oldatot egy fecskendő segítségével 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A16 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PB-ben.

B16 oldat előállítása mg fenolt bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml PB-t a fenol oldására, majd a mérőlombikot szükséges mennyiségű PB-vel kiegészítjük. A kapott B16 oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B16 oldat 4,4 mg/ml fenolt tartalmaz PB-ben.

HU 225 496 Β1

Vizes szuszpenzió 16 ml A16 oldatot bemérünk egy 10 ml-es I típusú fiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzámérünk 3 ml B16 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 16 1 mg/ml inzulinotropint és 2,2 mg/ml fenolt tartalmaz PB-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

11. példa

Inzulinotropinszuszpenzió 1 mg/ml

Vizes szuszpenzió 17 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk 8 ml PB-t a hatóanyag oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PB-vel kiegészítjük. A mérőlombik tartalmát egy fecskendő segítségével egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük, egy 10 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 17 1 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PB-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

12. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

Vizes szuszpenzió 18 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, és hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t a hatóanyag oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A mérőlombik tartalmát egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát gyengén keverjük (biztosítva, hogy hab- vagy buborékképződés ne történjen) 16 órán át a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 18 1 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

13. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (0,2 mg/ml)

A22 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 3 ml PBS-t a hatóanyag oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott A22 oldatot 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A22 oldat 0,4 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B22 oldat előállítása mg fenolt bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t a fenol oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott B22 oldatot egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B22 oldat 44 mg/ml PBS-t tartalmaz.

Vizes szuszpenzió 22

1,5 ml A22 oldatot pipettával bemérünk egy

3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzámérünk 1,5 ml B22 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 22 0,2 mg/ml inzulinotropint és 2,2 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

14. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (0,2 mg/ml)

A23 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 3 ml PBS-t a hatóanyag oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott A23 oldatot egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A23 oldat 0,4 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B23 oldat előállítása

8,8 mg fenolt bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t a fenol oldására, majd a mérőlombikot szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott B23 oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B23 oldat 0,88 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 23

1,5 ml A23 oldatot bemérünk egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzáadunk 1,5 ml B23 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 230,2 mg/ml inzulinotropint és 0,44 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

15. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A24 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 3 ml PBS-t a hatóanyag oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott A24 oldatot egy fecskendő segítségével egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A24 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

624 oldat előállítása mg protamin-szulfátot bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t a protamin-szulfát oldására, majd a mérőlombikot szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott B24 oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B24 oldat 0,6 mg/ml protaminbázist tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 24

1,5 ml A24 oldatot bemérünk egy 3,5 ml-es I típusú fiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miköz15

HU 225 496 Β1 ben 1,5 ml B24 oldatot adagolunk hozzá. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 24 1 mg/ml inzulinotropint és 0,3 mg/ml protaminbázist tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

16. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A25 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 3 ml PBS-t a hatóanyag oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott A25 oldatot egy fecskendő segítségével egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A25 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B25 oldat előállítása mg m-krezolt bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t az m-krezol oldására, majd a mérőlombikot szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészitjük. A kapott B25 oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B25 oldat 5,3 mg/ml m-krezolt tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 25

1,5 ml A25 oldatot bemérünk egy 3,5 ml-es I típusú fiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzámérünk 1,5 ml B25 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 25 1 mg/ml inzulinotropint és 2,5 mg/ml m-krezolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

17. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (0,5 mg/ml)

A29 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 25 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 20 ml PBS-t a hatóanyag oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott A29 oldatot egy fecskendő segítségével egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 50 ml-es üvegfiolába. A kapott A29 oldat 1 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B29 oldat előállítása mg fenolt bemérünk egy 50 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 40 ml PBS-t a fenol oldására, majd a mérőlombikot szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott B29 oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 50 ml-es üvegfiolába. A kapott B29 oldat 1 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 29

1,5 ml A29 oldatot bemérünk egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzámérünk 1,5 ml B29 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 29 0,5 mg/ml inzulinotropint és 0,56 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben.

Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

18. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (1 mg/ml)

A31 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 4 ml PBS-t a hatóanyag oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott A31 oldatot egy fecskendő segítségével egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A31 oldat 2 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B31 oldat előállítása mg fenolt bemérünk egy 50 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 40 ml PBS-t a fenol oldására, majd a mérőlombikot szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott B31 oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 50 ml-es üvegfiolába. A kapott B31 oldat 1 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 31

1,5 ml A31 oldatot bemérünk egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben hozzámérünk 1,5 ml B31 oldatot. A fiolát ezután ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát 16 órán át keverjük a szuszpenzió kialakulása céljából. A kapott vizes szuszpenzió 31 1 mg/ml inzulinotropint és 0,5 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

19. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (4 mg/ml)

A51 oldat előállítása

22,2 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es üvegfiolába, hozzáadunk 5 ml PBS-t a hatóanyag oldására, majd az oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A51 oldat 4,44 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B51 oldat előállítása

110 mg fenolt és 30 mg protamin-szulfátot bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 4 ml PBS-t a fenol és a protamin-szulfát oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük PBS-sel. Az oldatot egy 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B51 oldat 22 mg/ml fenolt és 4,5 mg/ml protaminbázist tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 51 ml A51 oldatot és 0,33 ml B51 oldatot bemérünk egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát gyengén összerázzuk a homogenitás biztosítására, majd a fiolát a környezeti hőmérsékleten 16 órán át állni hagyjuk. A kapott vizes szuszpenzió 51 4 mg/ml inzulinotropint, 0,44 mg protaminbázist és 2,2 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

HU 225 496 Β1

20. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (4 mg/ml)

A52 oldat előállítása

22,2 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es üvegfiolába, majd hozzámérünk 5 ml PBS-t a hatóanyag oldására, és a kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A52 oldat 4,44 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B52 oldat előállítása

110 mg fenolt és 15,6 mg cink-acetát-dihidrátot bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 4 ml injekció céljára alkalmas vizet a fenol és a cink-acetát-dihidrát oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldatot egy 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B52 oldat 22 mg/ml fenolt és

7,8 mg/ml cink-acetát-dihidrátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 52 ml A52 oldatot és 0,33 ml B52 oldatot bemérünk egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát gyengén összerázzuk a homogenitás biztosítására, majd a fiolát szobahőmérsékleten 16 órán át állni hagyjuk. A kapott vizes szuszpenzió 52 4 mg/ml inzulinotropint, 0,78 mg/ml cink-acetát-dihidrátot és 2,2 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

21. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (4 mg/ml)

Fenololdat előállítása

244 mg fenolt bemérünk egy 100 ml-es mérőiombikba, hozzáadunk kb. 90 ml injekció céljára alkalmas vizet a fenol oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldat pH-ját 5%-os NaOH-oldattal pH=9 értékre beállítjuk. Az így kapott fenololdat 2,44 mg/ml fenolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben, pH=9-nél.

A 71 oldat előállítása

22,2 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es üvegfiolába, majd hozzámérünk 50 ml fenololdatot a hatóanyag oldására, és a kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A71 oldat 4,44 mg/ml inzulinotropint és 2,44 mg/ml fenolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

B71 oldat előállítása

116 mg protamin-szulfátot bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml injekció céljára alkalmas vizet a protamin-szulfát oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B71 oldat 8,7 mg/ml protaminbázist tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C71 oldat előállítása

156 mg cink-acetát-dihidrátot és 1,632 g NaCI-ot mérünk be egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát és nátrium-klorid oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldatot ezután 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott C71 oldat

15,6 mg/ml cink-acetát-dihidrátot és 163,2 mg/ml nátrium-kloridot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 71 ml A71 oldatot és 0,165 ml B71 oldatot és 0,165 ml C71 oldatot mérünk be egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát gyengén összerázzuk a homogenitás biztosítására, majd a fiolát környezeti hőmérsékleten 16 órán át állni hagyjuk. A kapott vizes szuszpenzió 71 4 mg/ml inzulinotropint, 0,435 mg/ml protaminbázist, 0,78 mg/ml cink-acetát-dihidrátot, 8,16 mg/ml nátrium-kloridot és 2,2 mg/ml fenolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál a farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

22. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (4 mg/ml) m-Krezol-oldat előállítása

244 mg m-krezolt bemérünk egy 100 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 90 ml injekció céljára alkalmas vizet az m-krezol oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük injekció céljára alkalmas vízzel. A kapott oldat pH-ját pH=9,0-re beállítjuk 5%-os nátrium-hidroxid-oldattal. A kapott m-krezol-oldat 2,44 mg/ml m-krezolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben, pH=9.

A100 oldat előállítása

22,2 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es üvegfiolába, majd hozzámérünk 5 ml m-krezol-oldatot a hatóanyag oldására, és a kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A100 oldat 4,44 mg/ml inzulinotropint és 2,44 mg/ml m-krezolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

B100 oldat előállítása

116 mg protamin-szulfátot bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml injekció céljára alkalmas vizet a protamin-szulfát oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B100 oldat 8,7 mg/ml protaminbázist tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C100 oldat előállítása

156 mg cink-acetát-dihidrátot és 1,632 g NaCI-ot mérünk be egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát és a nátrium-klorid oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldatot ezután 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott C100 oldat

Vizes szuszpenzió 100 ml A100 oldatot és 0,165 ml B100 oldatot és 0,165 ml C100 oldatot mérünk be pipettával egy

3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát gyengén összerázzuk a homogenitás biztosítására, majd a

HU 225 496 Β1 fiolát környezett hőmérsékleten 16 órán át állni hagyjuk. A kapott vizes szuszpenzió 100 4 mg/ml inzulínotropint, 0,435 mg/ml protaminbázist, 0,78 mg/ml cink-acetát-dihidrátot, 8,16 mg/ml nátrium-kloridot és

2,2 mg/ml m-krezolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál a farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

23. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (4 mg/ml)

A68 oldat előállítása

22,2 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es üvegfiolába, majd hozzáadunk 5 ml PBS-t a hatóanyag oldására, és a kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A68 oldat 4,44 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B68 oldat előállítása

116 mg protamin-szulfátot bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml injekció céljára alkalmas vizet a protamin-szulfát oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B68 oldat 8,7 mg/ml protaminbázist tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C68 oldat előállítása

156 mg cink-acetát-dihidrátot és 440 mg fenolt mérünk be egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát és a fenol oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldatot ezután 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott C68 oldat 15,6 mg/ml cink-acetát-dihidrátot és 44 mg/ml fenolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 68 ml A68 oldatot, 0,165 ml B68 oldatot és 0,165 ml C68 oldatot mérünk be pipettával egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát gyengén összerázzuk a homogenitás biztosítására, majd a fiolát környezeti hőmérsékleten 16 órán át állni hagyjuk. A kapott vizes szuszpenzió 68 4 mg/ml inzulinotropint, 0,435 mg/ml protaminbázist, 0,78 mg/ml cink-acetát-dihidrátot és

2,2 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

24. példa

Inzulinotropinszuszpenzió (4 mg/ml)

A67 oldat előállítása

22,2 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es üvegfiolába, majd hozzáadunk 5 ml PBS-t a hatóanyag oldására, és a kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A67 oldat 4,44 mg/ml inzulinotropint tartalmaz PBS-ben.

B67 oldat előállítása

116 mg protamin-szulfátot bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml injekció céljára alkalmas vizet a protamin-szulfát oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldatot ezután egy 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott B67 oldat 8,7 mg/ml protaminbázist tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C67 oldat előállítása

156 mg cink-acetát-dihidrátot és 440 mg fenolt mérünk be egy 10 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 8 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát és az m-krezol oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. Az oldatot ezután 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 10 ml-es üvegfiolába. A kapott C67 oldat

15,6 mg/ml cink-acetát-dihidrátot és 44 mg/ml m-krezolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 67 ml A67 oldatot, 0,165 ml B67 oldatot és 0,165 ml C67 oldatot mérünk be pipettával egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát gyengén összerázzuk a homogenitás biztosítására, majd a fiolát környezeti hőmérsékleten 16 órán át állni hagyjuk. A kapott vizes szuszpenzió 67 4 mg/ml inzulinotropint, 0,435 mg/ml protaminbázist, 0,78 mg/ml cink-acetát-dihidrátot és

2,2 mg/ml m-krezolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

25. példa

A39 oldat előállítása

67,6 mg inzulinotropint mérünk egy üvegfiolába, hozzáadunk az inzulinotropin oldására kb. 22 ml injekció céljára alkalmas vizet, majd a pH-t nátrium-hidroxiddal 9,6-re beállítjuk, így tiszta oldatot kapunk. Ezután injekció céljára alkalmas vizet adagolunk a fiolába úgy, hogy a végső hatóanyag-koncentráció 2,5 mg/ml legyen.

B39 oldat előállítása

386,8 mg cink-acetát-dihidrátot mérünk be egy 100 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 80 ml injekció céljára alkalmas vizet cink-acetát-dihidrát oldására, majd a mérőlombikot az említett vízzel jelig töltjük. A kapott B39 oldat 3,9 mg/ml cink-acetát-dihidrátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C39 oldat előállítása

1,095 g fenolt bemérünk egy 50 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 40 ml injekció céljára alkalmas vizet a fenol oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. A kapott C39 oldat 21,9 mg/ml fenolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

D39 oldat előállítása

2,25 g nátrium-kloridot bemérünk egy 25 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 20 ml C39 oldatot a nátrium-klorid oldására, majd ezzel az oldattal a mérőlombikot jelig töltjük. A kapott D39 oldat 9 t/tf% Na-kloridot és 21,9 mg/ml fenolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 39

Az összes oldatot átszűrjük 0,22 pm-es szűrőkön (alacsony proteinkötésű). 9 ml A39 oldatot bemérünk

HU 225 496 Β1 egy 10 ml-es fiolába. 1 ml D39 oldatot hozzáadunk a fiolához enyhe keverés közben, amikor is azonnal csapadék képződik. A mérés szerint a pH értéke 7. A fiolát ezután szobahőmérsékleten 18 órán át állni hagyjuk.

ml mintát ezután egy másik 10 ml-es fiolába viszünk át, és hozzáadunk 0,44 ml D39 oldatot. A kapott mintát percen át enyhén keverjük, majd szobahőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk.

A kapott vizes szuszpenzió 39 2 mg/ml inzulinotropint, 2,2 mg/ml fenolt, 0,9% NaCI-ot és 0,39 mg/ml cink-acetátot tartalmaz. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

26. példa

A53 oldat előállítása

32,5 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es üvegfiolába, hozzáadunk 6 ml injekció céljára alkalmas vizet, a fiola tartalmát 1 t/tf%-os NaOH-oldattal pH=9,6-re beállítjuk, így tiszta oldatot nyerünk. Ezután a fiolához annyi injekció céljára alkalmas vizet adunk, hogy a hatóanyag koncentrációja 5 mg/ml legyen.

B53 oldat előállítása

390 mg cink-acetát-dihidrátot bemérünk egy 50 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 40 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát oldására, majd a mérőlombikot az említett vízzel jelig töltjük. A kapott B53 oldat 7,8 mg/ml cink-acetát-dihidrátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 53

Minden oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrünk. 2,4 mg/ml A53 oldatot egy

3.5 ml-es fiolába adagolunk, majd hozzámérünk 300 pl B53 oldatot enyhe keverés közben. Kettős törésű precipitátum képződik azonnal az adagolás után, a pH értéke a mérés szerint 6,8. Ezután a fiolát környezeti hőmérsékleten 20 órán át állni hagyjuk, majd hozzáadunk közvetlenül a leülepedett szuszpenzió felülúszójához 7,5 pl m-krezolt. A szuszpenziót ezután enyhén keverjük az m-krezol oldására. Ezután 300 pl 9%-os nátrium-klorid-oldatot adagolunk keverés közben. A kapott vizes szuszpenzió 53 4 mg/ml inzulinotropint, 0,9% nátrium-kloridot, 0,78 mg/ml cink-acetátot és

2.5 mg/ml m-krezolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

27. példa

A54 oldat előállítása

32,5 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es üvegfiolába, hozzáadunk 6 ml injekció céljára alkalmas vizet, a fiola tartalmát 1 t/tf%-os nátrium-hidroxid adagolásával pH=9,6-re beállítjuk, így tiszta oldatot nyerünk. Megfelelő mennyiségű injekció céljára alkalmas vizet adunk ezután, hogy a hatóanyag koncentrációja 5 mg/ml legyen.

B54 oldat előállítása

390 mg cink-acetát-dihidrátot bemérünk egy 50 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 40 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát oldására, majd a mérőlombikot az említett vízzel jelig töltjük. A kapott B54 oldat 7,8 mg/ml cink-acetát-dihidrátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C54 oldat előállítása

1.1 g fenolt és 4,5 g nátrium-kloridot mérünk be egy 50 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk 40 ml injekció céljára alkalmas vizet, majd a mérőlombikot az említett vízzel a jelig töltjük. A kapott C54 oldat 22 mg/ml fenolt és 90 mg/ml nátrium-kloridot tartalmaz.

Vizes szuszpenzió 54

Minden oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrünk. 2,4 mg/ml A54 oldatot egy

3,5 ml-es fiolába adagolunk, majd keverés közben hozzáadunk 300 pl B54 oldatot. Kettős törésű csapadék képződik azonnal az adagolás után, a pH értéke a mérés szerint 6,8. A mintát ezután környezeti hőmérsékleten 20 órán át állni hagyjuk, majd enyhe keverés közben hozzáadunk 300 pl C54 oldatot. A kapott vizes szuszpenzió 54 4 mg/ml inzulinotropint, 0,78 mg/ml cink-acetát-dihidrátot, 2,2 mg/ml fenolt és 9 mg/ml nátrium-kloridot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

28. példa

A57 oldat előállítása mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es üvegfiolába, majd hozzáadunk 3 ml injekció céljára alkalmas vizet, a fiola tartalmát 5%-os nátrium-hidroxid adagolásával pH=9,9-re beállítjuk, ekkor a hatóanyag teljesen feloldódik. A kapott A57 oldat 5 mg/ml inzulinotropint tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

B57 oldat előállítása

780 mg cink-acetát-dihidrátot bemérünk egy 100 ml-es mérőlombíkba, majd hozzáadunk kb. 80 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát oldására, majd a mérőlombikot az említett vízzel jelig töltjük. A kapott B57 oldat 7,8 mg/ml cink-acetát-dihidrátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C57 oldat előállítása

2.2 g fenolt és 9 g nátrium-kloridot mérünk be egy 100 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 80 ml injekció céljára alkalmas vizet a fenol és a nátrium-klorid oldására, majd a mérőlombikot az említett vízzel a jelig töltjük. A kapott C57 oldat 22 mg/ml fenolt és 90 mg/ml nátrium-kloridot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 57

2,4 mg/ml A57 oldatot mérünk be egy 3,5 ml-es fiolába, majd az oldatot gyengén keverjük, miközben 300 pl B57 oldatot adagolunk hozzá. Az adagolásra azonnal csapadék képződik, a pH értéke ekkor 7,1. A mintát ezután hagyjuk szobahőmérsékleten 24 órán át állni, majd enyhe keverés közben hozzáadunk 300 pl C57 oldatot. A kapott vizes szuszpenzió 57 4 mg/ml inzulinotropint, 0,78 mg/ml cink-acetát-dihidrátot, 2,2 mg/ml fenolt és 9 mg/ml nátrium-kloridot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

HU 225 496 Β1

29. példa

A64 oldat előállítása

53,3 mg inzulinotropint bemérünk egy 30 ml-es üvegfiolába, majd hozzáadunk 11 ml injekció céljára alkalmas vizet, a pH értékét 5 t/tf%-os nátrium-hidroxiddal 8,3 értékre beállítjuk az inzulinotropin oldása érdekében. A pH-t ezután 6-ra állítjuk be hígított sósavval annak biztosítására, hogy az oldat még tiszta maradjon. Ezután megfelelő mennyiségű injekció céljára alkalmas vizet adagolunk hozzá, hogy a koncentráció

4,4 mg/ml legyen. Az így kapott A64 oldatot ezután 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük egy 3,5 ml-es fiolába. 1,8 ml szűrt oldatot ezután egy külön, steril 3,5 ml-es fiolába adagolunk, és a fiolát szobahőmérsékleten 3 napon át hagyjuk kristályosodni.

B64 oldat előállítása

780 mg cink-acetát-dihidrátot bemérünk egy 50 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 40 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát oldására, majd a mérőlombikot az említett vízzel jelig töltjük. A kapott B64 oldat 15,6 mg/ml cink-acetát-dihidrátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C64 oldat előállítása g nátrium-kloridot mérünk egy 100 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 80 ml injekció céljára alkalmas vizet a nátrium-klorid oldására, majd a mérőlombikot az említett vízzel a jelig töltjük. Az így kapott C64 oldat 180 mg/ml nátrium-kloridot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 64

Miután az A64 oldat kristályosodása befejeződött,

1,8 ml kristályos szuszpenzióhoz lassú keverés közben 100 pl B64 oldatot adagolunk, majd a mintát szobahőmérsékleten 3 napon át állni hagyjuk. Ezután a kristályos szuszpenzióhoz gyenge keverés közben 100 pl C64 oldatot adagolunk, a szuszpenzió pH-ját hígított nátrium-hidroxiddal 7,3 értékre beállítjuk, majd hozzáadunk 5 pl m-krezolt. A kapott vizes szuszpenzió 64 4 mg/ml inzulinotropint, 0,78 mg/ml cink-acetát-dihidrátot, 9 mg/ml nátrium-kloridot és 2,5 mg/ml m-krezolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

30. példa

A69 oldat előállítása g nátrium-kloridot mérünk be egy 100 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 80 ml injekció céljára alkalmas vizet a nátrium-klorid oldására, majd a mérőlombikot az említett vízzel jelig töltjük. Az A69 oldat 1 t/tf% nátrium-kloridot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

B69 oldat előállítása

390 mg cink-acetát-dihidrátot bemérünk egy 100 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 80 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát oldására, majd a mérőlombikot az említett vízzel jelig töltjük. A kapott B69 oldat 3,9 mg/ml cink-acetát-dihidrátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C69 emulzió előállítása

2,5 ml sterilre szűrt (0,22 pm-es, alacsony proteinkötésű szűrő) m-krezolt 100 ml-es mérőlombikba mérünk, majd a mérőlombikot jelig töltjük injekció céljára alkalmas vízzel, és ultrahanggal kezeljük a homogén szuszpenzió biztosítására. Az emulzió C69 25 mg/ml m-krezolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 69

35,74 mg inzulinotropint mérünk be egy 10 ml-es üvegfiolába, majd hozzáadunk 7 ml A69 oldatot. A fiola tartalmának pH-ját 9,2-re beállítjuk a hatóanyag oldásának biztosítására. Az oldat pH-ját ezután hígított sósavval visszaállítjuk 6,5-re. Megfelelő mennyiségű injekció céljára alkalmas vizet adagolunk a fiolába úgy, hogy a hatóanyag koncentrációja 4,4 mg/ml legyen. A kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük. Az oldatot szobahőmérsékleten 6 órán át állni hagyjuk, miközben az inzulinotropin kikristályosodik.

1,5 ml kristályos szuszpenziót adagolunk egy külön fiolába, majd hozzáadunk 167 pl B69 oldatot enyhe keverés közben, és a mintát szobahőmérsékleten 1 napon át állni hagyjuk. Ezután a kiülepedett szuszpenzió felülúszójához 167 pl C69 emulziót adagolunk, a mintát elkeverjük az m-krezol oldása érdekében. A kapott vizes szuszpenzió 69 3,6 mg/ml inzulinotropint, 0,36 mg/ml cink-acetátot, 8,17 mg/ml nátrium-kloridot és 2,28 mg/ml m-krezolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

31. példa

A101 oldat előállítása g nátrium-acetátot bemérünk egy 100 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 80 ml injekció céljára alkalmas vizet a nátrium-acetát oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. A kapott oldat

100 mg/ml nátrium-acetátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 101

44,4 mg inzulinotropint mérünk be egy 10 ml-es üvegfiolába, majd hozzáadunk 8 ml injekció céljára alkalmas vizet, és a pH értékét 9,3-re beállítjuk, amikor is tiszta oldatot nyerünk. Ezután 1 ml A101 oldatot adagolunk hozzá, majd a pH értékét 6,5-re visszaállítjuk. A kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük, majd a szűrt oldatot szobahőmérsékleten 3 napon át állni hagyjuk, hogy a kristályosodás bekövetkezzen. A vizes szuszpenzió

101 4,9 mg/ml inzulinotropint, 11,1 mg/ml nátrium-acetátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

32. példa

A82 oldat előállítása g nátrium-kloridot bemérünk 100 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 80 ml injekció céljára alkalmas vizet a nátrium-klorid oldására, majd a mérőlombikot jelig töltjük az említett vízzel. A kapott A82 oldat 9 t/tf% nátrium-kloridot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

HU 225 496 Β1

B82 oldat előállítása

789 mg cink-acetát-dihidrátot bemérünk egy 100 ml-es mérőlombikba, hozzámérünk kb. 80 ml injekció céljára alkalmas vizet a cink-acetát-dihidrát oldására, majd a mérőlombikot injekció céljára alkalmas vízzel jelig töltjük. A kapott B82 oldat 7,89 mg/ml cink-acetát-dihidrátot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

C82 emulzió előállítása

2.5 ml sterilre szűrt (0,22 pm-es, alacsony proteinkötésű szűrő) m-krezolt bemérünk egy 100 ml-es mérőlombikba, a mérőlombikot jelig töltjük injekció céljára alkalmas vízzel, és ultrahanggal kezeljük a homogén szuszpenzió kialakítására. A kapott C82 emulzió 25 mg/ml m-krezolt tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben.

Vizes szuszpenzió 82

Az összes oldatot a 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük. 45,34 mg inzulinotropint bemérünk egy 10 ml-es fiolába, és hozzáadunk 8 ml vizet. A pH értékét 5%-os nátrium-hidroxiddal 9,3-re beállítjuk, majd 1 ml A82 oldatot adunk hozzá, és a pH értékét hígított sósavval 6,55-ra visszaállítjuk. Az oldatot (5 mg/m inzulinotropin) 0,22 pm-es szűrőn (alacsony proteinkötésű) átszűrjük, majd a sterilre szűrt oldathoz 85 pl vizes szuszpenzió 101 -et adagolunk, és a minta rázásával diszpergáljuk. A mintát ezután 72 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, a kristályos szuszpenzió kialakítására. Ezután 2,4 ml szuszpenziót bemérünk egy 3,5 ml-es fiolába, és gyenge rázás közben hozzáadunk 300 pl B82 oldatot, a pH értékét hígított nátrium-hidroxiddal 7,3-re beállítjuk. A kiülepedett szuszpenzió felülúszójához 300 pl emulzió C82-t adagolunk. A kapott vizes szuszpenzió 82 4 mg/ml inzulinotropint, 0,79 mg/ml cink/acetát-dihidrátot, 2,5 mg/ml m-krezolt és 0,9% nátrium-kloridot tartalmaz injekció céljára alkalmas vízben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

33. példa

GLP-1 (7-36)-amid-szuszpenzió (1 mg/ml)

A26 oldat előállítása mg GLP-1 (7-36) amidot bemérünk egy 5 ml-es mérőlombikba, majd hozzáadunk kb. 3 ml PBS-t a hatóanyag oldására, majd a mérőlombikot a szükséges mennyiségű PBS-sel kiegészítjük. A kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük a 10 ml-es üvegfiolába. A kapott A26 oldat 10 mg/ml GLP-1 (7-36) peptidet tartalmaz PBS-ben.

B26 oldat előállítása mg fenolt bemérünk egy 10 ml-es mérőlombikba, hozzáadunk kb. 8 ml PBS-t a fenol oldására, majd a szükséges mennyiségű PBS-sel a mérőlombikot kiegészítjük. A kapott oldatot 0,22 pm-es szűrőn átszűrjük egy 10 ml-es fiolába. A B26 oldat 4,4 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben.

Vizes szuszpenzió 26

1.5 ml A26 oldatot bemérünk egy 3,5 ml-es I típusú üvegfiolába. A fiola tartalmát mágnesesen keverjük, miközben 1,5 ml B26 oldatot adagolunk hozzá, majd a fiolát ledugaszoljuk és alumíniumfóliával lezárjuk. A fiola tartalmát enyhén keverjük (biztosítva, hogy habés buborékképződés ne történjen) 18 órán át a szuszpenzió kialakulása érdekében. A kapott vizes szuszpenzió 26 1 mg/ml GLP-1 (7-36) amidot és 2,2 mg/ml fenolt tartalmaz PBS-ben. Ezt a szuszpenziót alkalmazzuk patkányoknál az in vivő farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

34. példa

A találmány egyik kiviteli formájánál kis oldhatóságé GLP-1 (7-37) peptidet állítunk elő úgy, hogy 2-15 mg GLP-1 (7-37) peptidet pH=7-8,5 értékű pufferben elkeverünk egy fémsóoldattal úgy, hogy 1-8 mg/ml GLP-1 (7-37) oldatot nyerjünk, amelyben a cink:GLP-1 (7-37) mólarány (1:1) és (270:1) közötti érték. Sűrű csapadék képződik, ezt szobahőmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk. A GLP-1 (7-37) oldhatósága az alkalmazott fémiontól függően változik. A GLP-1 (7-37) pellet fémet nem tartalmazó oldószerben (például PBS vagy víz) végzett oldhatósági vizsgálata szerint cink-, kobalt- és nikkelionok jelenlétében alakul ki GLP-1 (7-37) kis oldhatóságú formája.

1. táblázat

Különböző fémionsók alacsony oldhatóságú GLP-1 (7-37)-képző képessége

Fémionsó	Oldékonyság fémtartalmú oldatban	Oldékonyság PBS-ben
Cink-acetát	0,04 pg/ml	0,04 pg/ml
Cink-klorid	0,04 pg/ml	0,03 pg/ml
Co-klorid	0,11 pg/ml	0,04 pg/ml
Ni-szulfát	0,14 pg/ml	0,07 pg/ml
Mn-klorid	0,23 pg/ml	1,64 pg/ml
Mg-klorid	1,75 pg/ml	ppt
Ca-klorid	1,98 pg/ml	ppt

Megjegyzés: minden esetben 100 pl 5 mmol fémsóoldatot adagoltunk 5 mg/ml koncentrációjú 100 μΙ GLP-1 (7-37) oldathoz, majd jól elkevertük, és egy éjszakán át állni hagytuk.

A nem oldható pelletet centrifugálással eltávolítottuk. Mértük a fémsóoldatban visszamaradó GLP-1 (7-37) koncentrációját.

A pelletet foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS) ismételten reszuszpendáltuk, ultrahanggal kezeltük, és egy éjszakán át állni hagytuk. Az oldhatatlan anyagot ismételten pelleteztük, és meghatároztuk a GLP-1 (7-37) koncentrációját.

35. példa

A GLP-1 (7-37) mikrokristályos formáját előállíthatjuk, ha pH=7-8,5 értékű pufferben készült GLP-1 (7-37) oldatokat bizonyos sók kombinációjával és kis molekulatömegű polietilénglikolokkal (PEG) elkeverjük. A 2. táblázatban ismertetünk hat speciális körülményt, amelyek között a GLP-1 (7-37) mikrokristályos formáit előállítottuk.

HU 225 496 Β1

2. táblázat

Reagensek, amelyek mikrokristályokat eredményeznek

Reagensek száma	Só	Puffer	Kicsapószer
1.	nincs	nincs	0,4 m K-, Na-tartarát
2.	0,2 m Na-citrát	0,1 m trisz pH 8,5	30% PEG 400
3.	0,2 m MgCI₂	0,1 m HEPES pH 7,5	28% PEG 400
4.	0,2 m MgCI₂	0,1 m HEPES pH 7,5	30% PEG 400
5.	0,5 m K₂HPO₄	0	20% PEG 8000
6.	0	0	30% PEG 1500

Megjegyzések: 5 mg/ml koncentrációjú 50 mmol-os trisz pH=8,1 pufferben készült GLP-1 (7-37) törzsoldatot 1:1 arányban elkeverünk a reagenssel. Cseppeket vizsgálunk és értékeljük az oldhatatlan GLP-1 (7-37) kristályos vagy amorf formájának jelenlétére. Általában a kis molekulatömegű PEG-ek tűnnek kedvezőbbnek a kristályos formákra. A trisz jelentése trisz(hidroxi-metil)-amino-metán és a HEPES jelentése N-2-(hidroxi-etil)-piperazin-N-2-etánszulfonsav.

36. példa

A GLP-1 (7-37) és PEG koncentrációinak specifikus kombinációi szükségesek a mikrokristályos formák és a nagy kihozatal elérése érdekében. A 3. táblázatban összefoglalunk néhány specifikus PEG 600 és

GLP-1 (7-37) koncentrációértékeket, amelyeknél mikrokristályos anyag alakul ki, szemben a hatóanyag amorf formájával. Az oldhatatlan formában lévő GLP-1 (7-37) mennyiségeket szintén megadtuk.

3. táblázat

Kristályos GLP-1 (7-37) kialakulása/kihozatal

GLP-1 (7-37)	15% PEG 600	22,5% PEG 600	30% PEG 600
2,0 mg/ml (forma/kihozatal)	amorf/8%	amorf/10%	amorf/8%
3,5 mg/ml (forma/kihozatal)	kristályos/62%	kristályos/26%	kristályos/59%
5,0 mg/ml (forma/kihozatal)	amorf/34%	kristályos/63%	kristályos/72%
6,5 mg/ml (forma/kihozatal)	amorf/52%	kristályos/76%	kristályos/82%
8,0 mg/ml (forma/kihozatal)	amorf/55%	kristályos/82%	amorf/66%
9,5 mg/ml (forma/kihozatal)	amorf/69%	kristályos/85%	amorf/83%

Megjegyzés: A GLP-1 (7-37) mikrokristályait úgy állítjuk elő, hogy pH=8 értékű trisz-pufferrel készült 20 mg/ml koncentrációjú GLP-1 (7-37) oldatokat 60%-os vizes polietilénglikol (PEG 600)-oldattal és pH=8 értékű trisz-pufferrel elkeverünk úgy, hogy a végső koncentráció 15-30% PEG és 3-10 mg/ml GLP-1 legyen. Egy éjszakán át a keveréket állni hagyjuk, az oldatban a mikrokristályos GLP-1 (7-37) mennyisége 50-85%.

37. példa

Ebben a példában egy másik kiviteli formáját mutatjuk be a találmánynak, amelynél előre kialakított GLP-1 (7-37) mikrokristályokat különböző fémionokkal elkeve- 55 rünk, és így nyerjük a kis oldhatóságú mikrokristályos formákat. GLP-1 (7-37) mikrokristályokat állítunk elő a 22. példában leírtak szerint 8 mg/ml GLP-1 (7-37) és 22,5% PEG alkalmazásával, ezek oldhatósága azonos a tiszta liofilizált GLP-1 (7-37) oldhatóságával. Annak 60 érdekében, hogy a kívánt kis oldhatóságú tulajdonságot biztosítsuk a nyújtott hatású hatóanyag-biztosítás érdekében, ezeket az előre kialakított mikrokristályokat fémsók oldatával kezeljük fém:GLP-1 (7-37)=1:1 és 260:1 közötti arány alkalmazásával egy éjszakán át szobahőmérsékleten. A felesleges fémsót centrifugálással, majd mosással eltávolítjuk. A következő 4. táblázatban összefoglaljuk a különböző kétértékű fémsókkal végzett kezelés eredményeit.

HU 225 496 Β1

4. táblázat

GLP-1 (7-37) kristályok oldhatósága különböző kezelések esetén

Adalék	GLP-1 (7-37) (mg/ml) a kezelőoldatban	GLP-1 (7-37) (mg/ml) PBS-ben	GLP-1 (7-37) (mg/ml) PBS/EDTA elegyben
Nincs (PBS)	1,2	1,2	ND
Citrát pH 5,2	0,15	ND	ND
ZnCI₂ pH 5,2	0,03	0,03	1,1
ZnAc pH 5,2	0,01	0,02	1,1
ZnAc pH 6,5	0,06	0,02	0,92
MgSO₄ pH 5,2	0,50	0,55	ND
NiSO₄ pH 5,2	0,10	0,04	0,45
MnCI₂ pH 5,2	0,10	0,10	ND
CaCI₂ pH 5,2	0,40	0,27	ND

Megjegyzés: a GLP-1 (7-37) kristályokat 50 mmol-os trisz-pufferben (pH=8) készített 8 mg/ml IST-oldatból 22,5% vizes PEG 600 jelenlétében nyertük. A kezelőoldatok koncentrációja minden esetben 100 mmol kétértékű fémsó volt 10 mmol Na-citrátban (pH=5,2) vagy Na-MES-ben (pH=6,5).

38. példa

Az ismertetett eljárással mind amorf, mind mikrokristályos formájú, kis oldhatóságú készítményt állítottunk elő cink-acetát alkalmazásával. Patkányoknak szubkután injekció formájában adagoltuk (három állat készítményenként), majd mértük a GLP-1 (7-37) plazmaszintjét radioimmun vizsgálattal 24 órán át. A 8. ábrán látható a hatóanyag hosszan tartó hatása a plazmában, összehasonlítva az oldható GLP-1 (7-37) szubkután adagolt injekcióval, amelyet kontrollként alkalmazunk.

39. példa t/tf% polietilénglikol 3350 (PEG) mg/ml inzulinotropin mmol foszfátpuffer szükség szerint steril, injekció céljára alkalmas víz (SWFI) tömeg%-os PEG-oldatot állítunk elő SWFI alkalmazásával. 200 mmol-os foszfátpuffert készítünk külön vízmentes nátrium-foszfát dibázikus (26,85 mg/ml) és nátrium-foszfát monobázikus monohidrát (1,41 mg/ml) alkalmazásával. Ha szükséges, a pufferoldat pH-ját pH=8-ra beállítjuk vagy nátrium-hidroxid, vagy sósav alkalmazásával. A megfelelő mennyiségű inzulinotropint elegendő pufferoldatban oldjuk, hogy 10 mg/ml koncentrációjú inzulinotropinoldatot kapjunk. A megfelelő mennyiségű PEG-oldatot ezután az inzulinotropinoldathoz adagoljuk, hozzáadunk elegendő mennyiségű SWFI-t, hogy az oldatot a kívánt térfogatra állítsuk be. A végső oldatot ezután sterilen szűrjük 0,2 pm-es szűrőn, majd aszeptikusán fiolákba töltjük. 0,5 ml oldatot adagolunk szubkután a patkányoknak, és a plazma inzulinotropinszintjét RIA-analízissel követjük.

40. példa

1,32% t/tf% hidroxi-etil-cellulóz (HEC) mg/ml inzulinotropin mmol foszfátpuffer

100 mmol nátrium-klorid szükség szerint steril, injekció céljára alkalmas víz (SWFI) tömeg%-os hidroxi-etil-cellulóz-oldatot állítunk elő SWFI alkalmazásával. 200 mmol-os foszfátpuffert készítünk külön, vízmentes nátrium-szulfát dibázikus (26,85 mg/ml) és nátrium-foszfát monobázikus monohidrát (1,41 mg/ml) alkalmazásával. Ha szükséges, a puffer pH-ját pH=8-ra beállítjuk vagy nátrium-hidroxid, vagy sósav alkalmazásával. A megfelelő mennyiségű inzulinotropint és nátrium-kloridot elegendő mennyiségű pufferben oldjuk, hogy 10 mg/ml koncentrációjú inzulinotropinoldatot kapjunk. A megfelelő mennyiségű HEC-oldatot ezután az inzulinotropinoldathoz adagoljuk, elegendő mennyiségű SWFI-t adunk hozzá, hogy az oldatot a kívánt térfogakra állítsuk be. A végső oldatot ezután sterilen szűrjük 0,2 pm-es szűrőn, és aszeptikusán fiolákba töltjük. 0,5 ml oldatot adagolunk szubkután a patkányoknak, és a plazma inzulinotropinszintjét RIA-analízissel követjük.

41. példa t/tf% Pluronic F127 mg/ml inzulinotropin mmol foszfátpuffer szükség szerint steril, injekció céljára alkalmas víz (SWFI) tömeg%-os Pluronic F127 oldatot állítunk elő SWFI alkalmazásával. A polimer oldásához Polytron típusú homogenizátort alkalmazunk jégfürdőn. 20 mmol-os foszfátpuffert állítunk elő külön vízmentes nátrium-foszfát dibázikus (26,85 mg/ml) és nátrium-foszfát monobázikus monohidrát (1,41 mg/ml) alkalmazásával. Ha szükséges, a pH értékét pufferrel pH=8-ra állítjuk be vagy nátrium-hidroxid, vagy sósav alkalmazásával. A megfelelő mennyiségű inzulinotropint elegendő mennyiségű pufferben oldjuk, hogy 10 mg/ml koncentrá23

HU 225 496 Β1 ciójú inzulinotropinoldatot kapjunk. A szükséges mennyiségű Pluronic-oldatot ezután az inzulinotropinoldathoz adagoljuk, és elegendő mennyiségű vizet adunk hozzá, hogy az oldatot a kívánt térfogatra állítsuk be.

A végső oldatot ezután sterilen szűrjük 0,2 pm-es szűrőn, és aszeptikusán fiolákba töltjük. 0,5 ml oldatot adagolunk szubkután a patkányoknak, és a plazma inzulinotropinszintjét RIA-analízissei követjük.

42. példa

Földimogyoróolaj-szuszpenzió (golyósmalomban) mg/ml inzulinotropin

1% Tween 80

1% mennyiségű Tween 80-at adagolunk a földimogyoró-olajhoz. A kapott oldatot sterilen szűrjük 15 0,2 pm-es szűrőn, majd az olajban szilárd inzulinotropint szuszpendálunk. A részecskeméretet golyós őrléssel Szesvari Attritorban 40 fordulat/perc mellett 18 órán át a kívánt méretre csökkentjük (hideg vizes hűtés). Az így kapott szuszpenziót ezután fiolákba töltjük. 0,5 ml 20 szuszpenziót adagolunk szubkután a patkányoknak, és az inzulinotropinszintet RIA-analízissel követjük.

43. példa

22,6% t/tf% dextrán mg/ml inzulinotropin mmol foszfátpuffer szükség szerint injekció céljára alkalmas víz tömeg%-os dextránoldatot készítünk SWFI alkalmazásával. 200 mmol-os foszfátpuffert állítunk elő külön vízmentes nátrium-foszfát dibázikus (26,85 mg/ml) és nátrium-foszfát monobázikus monohidrát (1,41 mg/ml) alkalmazásával. Ha szükséges, a puffer pH-ját pH=8 értékre állítjuk be vagy nátrium-hidroxid, vagy sósav alkalmazásával. A megfelelő mennyiségű inzulinotropint ele- 35 gendő mennyiségű pufferben oldjuk, hogy 5 mg/ml koncentrációjú inzulinotropinoldatot kapjunk. A szükséges mennyiségű dextránoldatot ezután az inzulinotropinoldathoz adagoljuk, és elegendő mennyiségű SWFI-vel az oldatot a kívánt térfogatra állítjuk be. A végső oldatot ez- 40 után sterilen szűrjük 0,2 pm-es szűrőn, és aszeptikusán fiolákba töltjük. 0,5 ml oldatot adagolunk szubkután a patkányoknak, és a plazma inzulinotropinszintjét RIA-analízissel követjük.

44. példa

Foszfáttal pufferolt sóoldat (PBS), etanol és m-krezol keverékéből inzulinotropint kristályosítunk ki. A homogén inzulinotropinszuszpenziót (10 mg/ml) PBS-sel 5 állítjuk elő üvegfiolában, és nagy mennyiségű etanolt (9-szerese a szuszpenziónak) adagolunk a fiolába, miközben a fiola tartalmát mágnesesen keverjük. Ekkor igen finom méretű amorf inzulinotropin képződik. Ekkor m-krezolt adagolunk a fiolába úgy, hogy az m-krezol 10 koncentrációja 1 tf/tf% legyen. A fiolát ezután lezárjuk, az oldószer elpárolgásának meggátlására. A kristályosító keveréket ezután szobahőmérsékleten néhány napig állni hagyjuk. Tű formájú kristályos lemezkék válnak ki az amorf részecskékből. A kristályok hossza 50 és 200 pm, a szélessége 2 és 4 pm közötti.

45. példa

Inzulinotropint oldunk (1-4 mg/ml koncentrációval) 1%-os nátrium-szulfát- (vagy nátrium-acetát vagy nátrium-klorid vagy ammónium-szulfát) oldatban, pH=8-nál nagyobb pH-értéknél, majd a pH értékét sósavval 6-7,5 közötti értékre beállítjuk. A tiszta oldatot szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Néhány nap múlva tű formájú vagy lemezes kristályokat nyerünk, függően 25 a kristályosítási körülményektől.

46. példa

GLP-1 (7-37) peptidet oldunk 50 mmol glicinpufferben, amely 0,1-0,2 mól nátrium-kloridot tartalmaz 30 pH=8,5-9,5 közötti értéken, a koncentráció 1-5 mg/ml. Ezután cinksó- (acetát vagy klorid) oldatot adagolunk úgy, hogy a mólarány 0,5:1 és 1,5:1=cink:GLP-1 (7-37) legyen. A GLP-1 (7-37) kristályokat szobahőmérsékleten egy éjszakán át történő állással nyerjük, a kihozatal 70-97%.

47. példa

GLP-1 (7-37) kristályokat nyerhetünk gőzdiffúzióval, a peptidet 100 mmol trisz pufferben (pH=8-9,5) 10-20 mg/ml koncentrációban tartalmazó oldatból. A peptidoldatot 1:1 arányban elkeverjük azonos pufferrel, amely még 0,5-2,5 mól NaCI-ot tartalmaz, majd lezárt rendszerben kiegyensúlyozzuk a teljes erősségű pufferrel (azaz trisz+0,5-2,5 mól NaCI) szemben.

Szekvenciák felsorolása (1) Általános információk:

(i) Bejelentő: Kim, Yesook Lambert, William J.

Qi, Hong

Gelfand, Róbert A.

Geoghegan, Kieran F.

Danley, Dennis E.

(ii) Találmány címe: Nyújtott hatású peptidek (iii) Szekvenciák száma: 7 (iv) Levelezési cím:

(A) Címzett: Pfizer Inc.

(B) Utca: 235 East 42nd Street, 20th Floor (C) Város: New York (D) Ország: Amerikai Egyesült Államok

HU 225 496 Β1 (E) Irányítószám: 10017-5755 (ν) Komputeradatok:

(A) Hordozó típusa: floppy disc (B) Computer: IBM PC kompatibilis (C) Operációs rendszer: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: Patent In Release # 1.0, #1.25 verzió (vi) Jelen bejelentés adatai:

(A) Bejelentés száma:

(B) Benyújtás napja:

(C) Osztályozás:

(viii) Ügyvivő adatai:

(A) Név: Sheyka, Róbert F.

(B) Regisztrációs szám: 32,304 (C) Ügyiratszám: PC8391 (ix) Telekommunikációs adatok:

(A) Telefon: (212)573-1189 (B) Telefax: (212)573-1939 (C) Telex: N/A (2) SEQ No: 1 adatai:

(i) Szekvenciajellemzők:

(A) Hossz: 37 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: peptid (iii) Hipotetikus: 0 (iv) Antiszenz: 0 (v) Fragmenstípus: N-terminális (vi) Eredeti forrás:

(A) Organizmus: N/A (B) Törzs: N/A (C) Egyes izolátum: N/A (E) Haplotípus: N/A (H) Sejtvonal: N/A (vii) Azonnali forrás:

(A) Könyvtár: N/A (B) Klón: N/A (viii) Helyzet a genomban (A) Kromoszóma/szegmens: N/A (B) Térkép helyzete: N/A (C) Egységek: N/A (xi) Szekvencia leírása: SEQ ID NO: 1:

His 1

Asp

Glu

Phe

Glu 5

Arg

His

Alá

Glu

Gly 10

Thr

Phe

Thr

Ser

Asp 15

Val

Ser

Tyr

Leu 20

Glu

Gly

Gin

Alá

Alá 25

Lys

Glu

Phe

Ile

Alá 30

Trp

Leu

Val

Lys

Gly 35

Arg

Gly

(2) SEQ No: 2 adatai:

(i) Szekvenciajellemzők:

(A) Hossz: 31 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: peptid (iii) Hipotetikus: 0 (iv) Antiszenz: 0

HU 225 496 Β1 (v) Fragmenstípus: N-terminális (vi) Eredeti forrás:

(A) Könyvtár: N/A (B) Klón: N/A (viii) Helyzet a genomban (A) Kromoszóma/szegmens: N/A (B) Térkép helyzete: N/A (C) Egységek: N/A (xi) Szekvencia leírása: SEQ ID NO: 2:

His 1

Alá

Glu Gly

Thr 5

Phe

Thr

Ser

Asp

Val 10

Ser

Tyr

Leu

Glu Gly 15

Gin

Alá

Lys

Glu

Phe

Ile

Alá

Trp

Leu

Val

Lys

Gly

Arg

Gly

20

25

30

(2) SEQ No: 3 adatai:

(i) Szekvenciajellemzők:

(A) Hossz: 30 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: peptid (iii) Hipotetikus: 0 (iv) Antiszenz: 0 (v) Fragmenstípus: N-terminális (vi) Eredeti forrás:

(A) Könyvtár: N/A (B) Klón: N/A (viii) Helyzet a genomban (A) Kromoszóma/szegmens: N/a (B) Térkép helyzete: N/A (C) Egységek: N/A

(xi) Szekvencia leírása: SE	QIDNO: 3:
His Alá	Glu Gly Thr	Phe	Thr	Ser	Asp	Val	Ser	Ser	Tyr	Leu
1	5					10
Gin Alá	Alá Lys Glu	Phe	Ile	Alá	Trp	Leu	Val	Lys	Gly	Arg
	20				25					30

(2) SEQ No: 4 adatai:

(i) Szekvenciajellemzők:

(A) Hossz: 29 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: peptid (iii) Hipotetikus: 0 (iv) Antiszenz: 0

HU 225 496 Β1 (v) Fragmenstípus: N-terminális (vi) Eredeti forrás:

(A) Könyvtár: N/A (B) Klón: N/A (viii) Helyzet a genomban (A) Kromoszóma/szegmens: N/a (B) Térkép helyzete: N/A (C) Egységek: N/A (xi) Szekvencia leírása: SEQ ID NO: 4:

His Alá Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15

Gin Alá Alá Lys Glu Phe Ile Alá Trp Leu Val Lys Gly 20 25 (2) SEQ No: 5 adatai:

(i) Szekvenciajellemzők:

(A) Hossz: 28 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: peptid (iii) Hipotetikus: 0 (iv) Antiszenz: 0 (v) Fragmenstípus: N-terminális (vi) Eredeti forrás:

(A) Könyvtár: N/A (B) Klón: N/A (viii) Helyzet a genomban (A) Kromoszóma/szegmens: N/a (B) Térkép helyzete: N/A (C) Egységek: N/A (xi) Szekvencia leírása: SEQ ID NO: 5:

His Alá Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15

Gin Alá Alá Lys Glu Phe Ile Alá Trp Leu Val Lys 20 25 (2) SEQ No: 6 adatai:

(i) Szekvenciajellemzők:

(A) Hossz: 36 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: peptid (iii) Hipotetikus: 0 (iv) Antiszenz: 0

HU 225 496 Β1 (v) Fragmenstípus: N-terminális (vi) Eredeti forrás:

(A) Könyvtár: N/A (B) Klón: N/A (viii) Helyzet a genomban (A) Kromoszóma/szegmens: N/A (B) Térkép helyzete: N/A (C) Egységek: N/A (xi) Szekvencia leírása: SEQ ID NO: 6:

His 1

Asp

Glu

Phe

Glu 5

Arg

His Alá

Glu

Gly 10

Thr

Phe

Thr

Ser

Asp 15

Ser

Tyr

Leu

Glu

Gly

Gin

Alá

Lys

Glu

Phe

He

Alá

Trp

20

25

30

Val

Leu

Val Lys Gly Arg 35 (2) SEQ No: 7 adatai:

(i) Szekvenciajellemzők:

(A) Hossz: 27 aminosav (B) Típus: aminosav (C) Száltípus: egyszálú (D) Topológia: lineáris (ii) Molekulatípus: peptid (iii) Hipotetikus: 0 (iv) Antiszenz: 0 (v) Fragmenstípus: N-terminális (vi) Eredeti forrás:

(A) Könyvtár: N/A (B) Klón: N/A (viii) Helyzet a genomban (A) Kromoszóma/szegmens: N/a (B) Térkép helyzete: N/A (C) Egységek: N/A (xi) Szekvencia leírása: SEQ ID NO: 7:

His 1	Alá	Glu Gly Thr 5	Phe	Thr	Ser Asp	Val 10	Ser	Ser Tyr Leu Glu 15
Gin	Alá	Alá	Lys	Glu	Phe	He	Alá	Trp	Leu	Val
			20					25

HU 225 496 Β1

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1— .Ω '(0 lO

HU 225 496 Β1

Int. Cl.: A61K 38/26

CM ω Μ^- in CM CM CM CM ω ω ω ω < < < <

Idő (óra) .Q 'CO tő (|ut/Bu) ueqeiuze|d e opejjuaouo^ uidojjoui|nzu|

HU 225 496 Β1

Int. Cl.: A61K 38/26 σ>

CM ω

<

co ω

<

Idő (óra) .Ω 'CO f-L (|in/6u) ueqewze|d b oioejjuaouc»} uidoj}oui|nzu|

HU 225 496 B1

Int. Cl.: A61K 38/26

Inzulinotropin (ng/ml plazma)

HU 225 496 Β1

Int. Cl.: A61K 38/26

Idő (óra)

1. Gyógyszerkészítmény, amely a következőket tartalmazza:

(I) valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-AlaGlu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-ValSer-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-AlaAla-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-LeuVal-Lys-Gly-Arg (szekvencia száma: 6);

(d) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2),

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Me-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (szekvencia száma: 3),

2. Gyógyszerkészítmény, amely a következőket tartalmazza:

(i) valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

HU 225 496 Β1 (d) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg (szekvencia száma: 3),

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, (ii) egy bázikus polipeptid,

HU 225 496 Β1 és amely készítmény injekciózható készítmény, nyújtott hatású, képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására, és az i) pont szerinti vegyület kezeléssel olyan kristályos vagy amorf formává lett alakítva, amelynek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb 5 érték, fiziológiás körülmények között.

12. Eljárás nyújtott hatású, a vércukorszint hosszan tartó szabályozására alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti i) és ii) pontok szerinti komponenseket adagolásra alkalmas folyékony készítménnyé alakítjuk.

HU 225 496 Β1

Int. Cl.: A61K 38/26 •c π

+-* c

Π3

N (Λ

280 r~—ί-r

o O O O O o o o o to CM O CO to CM o CM CM CM CM r- T— V T— T“

-120 -60 0 60 120 180 240 300 360 420 (ip/Biu) iuizszo>jn|6 Buizeid

HU 225 496 Β1

Int. Cl.: A61K 38/26

II

Idő (perc) 'CO

Csí

o o O O O O o o O O 00 CD CM O 00 co M- CM o CM CM CM CM CM τ— V T- τ- ·«—

(ip/βω) iuizszo^n|6 bluzbij

HU 225 496 Β1

Int. Cl.: A61K 38/26

280

o O O O O o o o o CO CM O CO CO Φ CM o CM CM CM CM T- T” T— T^- τ—

-120 -60 0 60 120 180 240 300 360 420 (ip/βω) }uizszo>jn|B euizeid

HU 225 496 Β1

Int. Cl.: A61K 38/26

Idő (óra) .Ω '(0 (|ui/6u) ueqeiuzEjd e oiobjjugouo^ uidoj)oui|nzu|

HU 225 496 Β1

Int. Cl.: A61K 38/26 cm «η cd r- ro

T~* τ— T— T“ T— ω ω ω ω ω < < < < <

ueqeuize|d e oioBjjuaouo>| uidoj)oui|nzu|

Idő (óra) cu

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és és amely peptidek és származékaik kezeléssel amorf vagy kristályos csapadékká vagy aggregátummá lettek alakítva, amelyek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb érték fiziológiás körülmények között, amely kezelés vagy nyíróhatásnak, vagy sókezelésnek vagy ezek kombinációjának való kitétel, és amely készítmény injekciózható készítmény, és képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozásának biztosítására.

10. A 9. igénypont szerinti készítmény, amelynél az említett só valamely következő só: ammónium-szulfát, nátrium-szulfát, lítium-szulfát, lítium-klorid, nátrium-citrát, ammónium-citrát, nátrium-foszfát, kálium-foszfát, nátrium-klorid, kálium-klorid, ammónium-klorid, nátrium-acetát, ammónium-acetát, magnézium-szulfát, kalcium-klorid, ammónium-nitrát, nátrium-formát vagy ezek keveréke.

11. Gyógyszerkészítmény, amely a következőket tartalmazza:

(i) valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Giy-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Me-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2),

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-IIe-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly (szekvencia száma: 4) vagy

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy bázikus polipeptid, egy fenolos vegyület és egy fémion, és amely készítmény injekciózható készítmény, nyújtott hatású, képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására, és az i) pont szerinti vegyület kezeléssel olyan kristályos vagy amorf formává lett alakítva, amelynek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb érték, fiziológiás körülmények között.

9. Gyógyszerkészítmény, amely a következőket tartalmazza:

(i) valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

H₂N-R-COOH

HU 225 496 Β1 amely képletben R jelentése valamely következő aminosavszekvencia:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyG1n-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AláΤ' rp- Leu- Val -Lys -Gly (szekvencia száma: 4) vagy

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy bázikus polipeptid és egy fenolos vegyület, és amely készítmény injekciózható készítmény, nyújtott hatású, képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására, és az i) pont szerinti vegyület kezeléssel olyan kristályos vagy amorf formává lett alakítva,

HU 225 496 Β1 amelynek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb érték, fiziológiás körülmények között.

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy fenol, krezol, rezorcin vagy metil-parabén, és amely készítmény injekciózható készítmény, nyújtott hatású, képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására, és az i) pont szerinti vegyület kezeléssel olyan kristályos vagy amorf formává lett alakítva, amelynek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb érték, fiziológiás körülmények között.

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) valamely következő fém: Ni(ll), Co(ll), Mg(ll), Ca(ll), K(l), Mn(ll), Fe(ll) és Cu(ll), és amely készítmény injekciózható készítmény, nyújtott hatású, képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására, és az i) pont szerinti vegyület kezeléssel olyan kristályos vagy amorf formává lett alakítva, amelynek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb érték, fiziológiás körülmények között.

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy

HU 225 496 Β1 (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ii) egy cink(ll)ion a peptiddel elkeverve, és amely készítmény injekciózható készítmény, nyújtott hatású, képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására, és az i) pont szerinti vegyület kezeléssel olyan kristályos vagy amorf formává lett alakítva, amelynek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb érték, fiziológiás körülmények között.

3. A 2. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely még nedvesítőszert, úgymint nemionos nedvesítőszert, valamint szuszpendálószert is tartalmaz.

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, és (ü) ^e9Y gyógyászatilag elfogadható, vízzel nem keveredő olajszuszpenzió, amely olaj valamely következő olaj: földimogyoró-olaj, szezámolaj, mandulaolaj, ricinusolaj, kamillaolaj, gyapotmagolaj, olívaolaj, kukoricaolaj, szójaolaj, sáfrányolaj, kókuszdióolaj, zsírsavak észterei és zsíralkoholok észterei, és amely készítmény injekciózható készítmény, nyújtott hatású, képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására, és az i) pont szerinti vegyület kezeléssel olyan kristályos vagy amorf formává lett alakítva, amelynek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb érték, fiziológiás körülmények között.

(3) gyógyászatilag elfogadható alkálifém-addíciós só, (4) gyógyászatilag elfogadható 1-6 szénatomos alkil-észter, vagy (5) gyógyászatilag elfogadható amid, 1-6 szénatomos alkil-amid vagy 1-6 szénatomos dialkil-amid, (ii) egy valamely következő polimer: polietilénglikol, poli(etilén-oxi)-poli(propilén-oxi) kopolimerek, polianhidridek vagy poliszacharidok, úgymint kitozán, akácmézga, karajagumi, guargumi, xantángumi, tragant, alginsav, karragén, agaróz vagy furcelleranok, dextrán, keményítő, keményítőszármazékok vagy hialuronsav, és amely készítmény injekciózható készítmény, nyújtott hatású, képes a vércukorszint hosszan tartó szabályozására, és az i) pont szerinti vegyület kezeléssel olyan kristályos vagy amorf formává lett alakítva, amelynek oldhatósága 500 pg/ml vagy ennél kisebb érték, fiziológiás körülmények között.

4. Gyógyszerkészítmény, amely a következőket tartalmazza:

(i) valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly (szekvencia száma: 2), (b) egy következő aminosavszekvenciájú peptid: His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-AlaTrp-Leu-Val-X (szekvencia száma: 7), amely képletben X jelentése:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

5. Gyógyszerkészítmény, amely a következőket tartalmazza:

(i) valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

6. Gyógyszerkészítmény, amely a következőket tartalmazza:

(i) valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Asp-Glu-Phe-Glu-Arg-His-AlaGlu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-ValSer-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala31

HU 225 496 Β1

Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-LeuVal-Lys-Gly-Arg (szekvencia száma: 6), (d) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

7. Gyógyszerkészítmény, amely a következőket tartalmazza:

(i) valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Alá-Alá-Lys-Glu-Phe-Me-AláTrp-Leu-Val-X (szekvencia száma: 7), amely képletben X jelentése:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

8. Egy gyógyszerkészítmény, amely a következőket tartalmazza:

(i) valamely következő vegyület:

(a) egy következő aminosavszekvenciájú peptid:

(A) Lys, (B) Lys-Gly, vagy (C) Lys-Gly-Arg;

(c) egy következő primer szerkezetű peptidszármazék:

His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GlyGln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Me-AlaTrp-Leu-Val-Lys-Gly (szekvencia száma: 4) vagy

9. ábra

HU 225 496 Β1

Int. Cl.: A61K 38/26