JP2000512621A

JP2000512621A - 医薬品級植物性薬剤

Info

Publication number: JP2000512621A
Application number: JP09537454A
Authority: JP
Inventors: クワジャ，タスニーム，エー．; フリードマン，エリオット，ピー．
Original assignee: ファーマプリント，インコーポレーテッド; ユニバーシティーオブサザンカリフォルニア
Priority date: 1996-04-15
Filing date: 1997-04-15
Publication date: 2000-09-26
Also published as: WO1997039355A1; AU2813197A; AU716155B2; CA2252426A1; US6379714B1; EP0900375A1; CN1239547A

Abstract

(57)【要約】本発明は、一般的には、植物性材料ならびに医薬として有用でありかつ製剤学的に許容される形態の前記植物材料を調製する方法に関する。さらに特定すると、本発明は、疾患、障害または症状を治療および／または改善するために臨床または獣医分野で使用するのに好適な医薬品級の組成物としての資格がある薬剤を調製するための、植物性材料の加工処理における組成フィンガープリントおよび活性フィンガープリントの使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】医薬品級植物性薬剤本願は、1997年2月4日出願の米国特許出願No.08/774,550のために放棄された1 995年4月14日出願の米国特許出願No.08/421,993の一部継続出願である、1996年4 月15日出願の係属中の米国特許出願No.08/632,273の一部継続出願である。 1.発明の分野本発明は一般的には植物材料及びそのような材料を医薬として有用で薬学的に許容される形態に変換するための方法に関するものである。より詳細には、本発明は、疾病、障害及び／または症状を治療及び／または緩和するために臨床的環境において使用するのに適した医薬品級組成物と等級付けられる植物性薬剤を製造するための、植物材料の処理における組成及び活性のフィンガープリントの使用に関するものである。 2.発明の背景医薬品製造は、各製造バッチについて組成及び生物活性を制御することに基づいて行われる。この標準化及び制御により、予測可能で一貫した患者の治療における再現性のある材料が得られる。植物材料から製造される生薬には、医薬品に必要な制御、再現性、及び標準化を望む製造者にとって独特の問題が存在する。この問題は主として、生薬に含まれる複数の成分、及び原料の成長や収穫の条件による組成や効能の大幅な変動に起因するものである。植物は従来から様々な薬用化合物の原料であり続けている。数世紀にわたって様々な形態の植物由来の材料が多数の様々な病気の治療に用いられてきた。植物材料は典型的には、一種または二種以上の植物、または植物の部分から製造された粉末形態、あるいは植物全体または植物の選択された部分に由来する抽出物の形態のものであった。これらの粉末及び抽出物は、その大部分が生物学的に活性な化合物と生物学的に不活性な化合物との双方からなる複雑な混合物である。植物粉末及び抽出物は薬用の目的で広く用いられてきたが、このような医薬の使用に伴ういくつかの問題点がある。例えば、植物材料の複雑な化学的性質のために、どのような種類においても制御され予測可能な方法で植物材料を使用することが困難となっている。また、異なる植物収穫物から得られた材料の異なるバッチで化学的組成が変化する可能性があることにより、そのような材料は臨床的な状況で使用するのに適さないものとなっている。プラス面についていえば、植物材料において典型的に見られる生物活性成分の複雑な集合により、相乗的な生物活性プロフィールの可能性が得られる。しかし、これらの薬物としての有効性を高める可能性は、これらの複雑な材料の性質が未知であるため予測不可能である。植物医薬に特有の化学的複雑さに関連する上記の問題のために、薬用として重要な多数の植物材料から生物学的に活性な成分を分離し、単離する多くの努力が払われることになった。この研究の分野は、化学的分離及び分析技術における多くの改良とともに急速に拡大した。様々な活性成分が単離及び精製されれば、臨床的環境において使用して特定の成分の薬物としての有効性が確定される。植物材料から個々の成分を分離及び精製することは、このような種類の医薬開発方法の基礎である。活性成分である可能性のある成分が精製されると、これを通常は薬学的に許容される担体と混合し、実験動物及び最終的にはヒトでの臨床試験においてさらに研究する。臨床的な効能の立証にあたっては、これらのタイプの薬剤は、既知の量で存在する十分に特性化された成分を一種、あるいは多くとも少数含んでいることから、医薬品級のものであると見なされる。医薬品級薬剤は、治療プロトコルにおいて個々の成分の効果を詳細に追跡できるという利点がある。さらに、この薬剤の投与量を詳細に制御して、比較的予測可能な医薬作用を得ることができる。このような医薬品水準薬剤の相対的な純度の欠点は、薬剤をその天然環境から単離したことにより、天然植物材料により提供される複雑で相乗的な生物活性の可能性が低くなってしまうことである。単離された生成物の研究により、感受性の生物−植物複合体の分解により生成されたアーチファクトが示されることもある。このような相乗的な活性により得られる可能性のある利益よりは、臨床的環境において十分に特性化されておらず制御されていない複雑な植物材料を使用することに伴う臨床的リスクの方が上回っていると、当分野の多くの専門家は考えている。植物材料から一種類の化合物を単離、精製することは医薬研究開発の通常の形態であるが、複雑な植物抽出物を研究においてそれらの薬剤としての性質を特性化することにも関心が向けられてきた。例えば、後述するように、ヤドリギの抽出物が詳細に研究されてきた。ヤドリギは、世界中で見られる様々な半寄生植物を含むヤドリギ属（ヤドリギ科系統群）に属する。ヤドリギは、リンゴ、サクラ、樫、トネリコ、サンザシ、ライム、及び殻斗果（ドングリ）等の様々な落葉樹で成長する寄生生物である。ヤドリギ及びヤドリギの抽出物は、数世紀にわたって様々な治療的環境において用いられてきた。多数の病気の治療のための治療薬としてのヤドリギの有効性は、多くの民間伝承、迷信、及び秘伝の主題であった。昔のヤドリギの使用の多くは事実より幻想に基づくものであったが、この寄生植物はかなり多くの様々な複雑で薬理学的に有効な成分を含んでいることから、ヤドリギはその強力な万能薬としての評価を受けるに値するものである。 1900年代の初期から、ヤドリギ及びヤドリギからの抽出物の薬理学的特性について、より厳密な科学的研究がなされてきた。特にヤドリギ抽出物は、循環器疾患、特に高血圧症や動脈硬化症、癌、関節症を含む様々な特定の疾病の治療における用途が示唆されてきた。ＩＳＣＡＤＯＲ、ＨＥＬＩＸＯＲ、及びＰＬＥＮＯＳＯＬの商品名で市販される発酵ヤドリギ抽出物が、多数の特定の疾病の治療における使用のために提案されている。ＩＳＣＡＤＯＲ及びＨＥＬＩＸＯＲは皮下注射用であり、ＰＬＥＮＯＳＯＬは皮内及び静脈内に投与されるものである。これら三種の市販の製剤は、ヨーロッパで見られるヤドリギ（Viscum album L）に由来するものである。ヤドリギが免疫調節特性を有し、ＨＩＶ及び癌の治療において有用である可能性があることから、1980年以来ヤドリギの研究が盛んになってきた。Internatio nal Journal of Cancer Research Treatment‐ONCOLOGY‐Vol．43，Supplement 1,1986を参照されたい。ヤドリギの研究が直面した主な問題は、ヤドリギ及びその抽出物における薬理学的活性成分の分析、同定、及び標準化であった。この問題は、ヤドリギ抽出物において見出される多数の複雑な成分が、ヤドリギの種、その植物が成長した地域、その植物の収穫の時期、特定の宿主木、使用された抽出の手順、及び多数のその他の因子により、その種類及び量において大幅に変化するという事実のために一層やっかいなものとなった。薬理学的活性を与えることがわかったヤドリギの成分の主な種類としては、フェニルプロパノイド、レクチン、フェニルプロパン、ビスコトキシン、アルカロイド、フラボノイド、リグナン、アミン、フェニルカルボン酸、及び多糖類が挙げられる。ヤドリギに一般的に存在する薬理学的に重要な化合物の一般的な種類は同定されたが、一または二以上の成分が認められる生物活性の原因となっているのかどうかということや、特定の成分群が協働して作用しているのか、あるいは個別に効果があるのかということを確認するために、多数の入手可能な抽出物を標準化することについてはあまり成功していなかった。ヤドリギの抽出物の極めて多様な性質や、抽出物組成の固有の可変性により、臨床的研究を行うためにこの抽出物を使用することが困難になっている。上述のヤドリギについての議論は、詳細に研究されてきた植物材料についての技術の現状の一例である。有効であるが比較的予測不可能な薬物特性を有する複雑な植物材料及び抽出物が他にも多く存在する。成分のばらつきのないバッチが確立されておらず組成が大幅に異なる可能性がある、特性化が不十分な材料による患者の治療に伴う固有のリスクのために、これらの物質の大部分は臨床的環境では有用なものでない。従って、臨床的研究や患者の治療においてこのような複雑な植物材料をより効果的に使用できるようにするために、それらを標準化するための方法を提供することが必要である。 3.発明の概要本発明は、医薬品級植物性薬剤を製造する方法を提供する。この方法は、「ファーマプリンティング（pharmaprinting）」のプロセスである。ある態様においては、上記方法は、所与の生物学的活性を有する複数の成分を含む植物材料を準備する段階；前記植物材料から代表となるアリコートを取り出す段階；前記アリコートを、それぞれが活性成分の少なくとも一種を含む複数のマーカー画分に分離する段階；各マーカー画分について前記所与の生物学的活性の程度を測定し、前記アリコートの生物活性フィンガープリントを得る段階；及び前記アリコートの生物活性フィンガープリントを、医薬品級植物性薬剤について確立された生物活性フィンガープリント標準と比較して生物活性フィンガープリントの比較を得、前記生物活性フィンガープリントの比較に基づいて前記植物材料が医薬品級植物性薬剤であるか否かを判定する段階を含む。本発明はまた、所与の生物学的活性を有する、複数の成分を含む植物材料を準備する段階；前記植物材料の代表となるアリコートを、少なくともその一つが活性成分の少なくとも一種を含む複数のマーカー画分に分離する段階；各マーカー画分について前記所与の生物学的活性の程度を測定し、前記代表となるアリコートの生物活性フィンガープリントを得る段階；及び前記代表となるアリコートの生物活性フィンガープリントを、医薬品級植物性薬剤について確立された生物活性フィンガープリント標準と比較して前記植物材料が医薬品級植物性薬剤であるか否かを判定する段階を含む方法を提供する。ある態様においては、一または二以上のマーカー画分が一種の活性成分を含む。前記方法はまた、追加の段階として、各マーカー画分中の活性成分の量を測定して前記アリコートの定量的組成フィンガープリントを得る段階、及び定量的組成フィンガープリント及び生物活性フィンガープリントの両方を、定量的組成及び生物活性フィンガープリント標準と比較して、前記植物材料が医薬品級植物性薬剤であるか否かを判定する段階とを含む。前記方法はまた、追加の段階として、前記植物材料のアリコートの総生物活性を測定する段階、及び前記アリコートの総生物活性を、医薬品級薬物について確立された標準の総生物活性と比較する段階を含む。本発明はまた、医薬品級植物性薬剤の製造方法を提供し、該方法は、所与の生物学的活性を有する複数の成分を含む植物材料を準備する段階であって、各活性成分のそれぞれが標準化生物活性プロフィールを有する該段階；植物材料から代表となるアリコートを取り出す段階；前記アリコートを、それぞれが活性成分の少なくとも一種を含む複数のマーカー画分に分離する段階；各マーカー画分中に存在する各活性成分の量を測定する段階；存在する各活性成分の量及び標準化成分生物活性プロフィールに基づいて各マーカー画分の生物活性を計算し、アリコートの計算された生物活性フィンガープリントを得る段階；前記アリコートの計算された生物活性フィンガープリントを、医薬品級植物性薬剤について確立された生物活性フィンガープリント標準と比較して生物活性フィンガープリントの比較を得、その生物活性フィンガープリントの比較に基づいて前記植物材料が医薬品級植物性薬剤であるか否か（が得られたかどうか）を判定する段階を含む。本発明の方法は、所与の、または所望の生物学的活性を有する任意の植物材料から医薬品級植物性薬剤を製造するのに有用である。好ましくは、この植物材料は、アルコール抽出物または超臨界二酸化炭素抽出物等の水性または有機抽出物のような、植物原料から生成された抽出物である。あるいは、この植物材料は、粉末化植物材料、種子油、精油、または水蒸気蒸留の生成物である。好ましくは、植物材料は均質な材料である。植物材料は任意の植物材料でよい。適当な植物材料としては、限定するものではないが、アロエ(Aloe)、コケモモ(Bilberry)、ショウマ(Black Cohosh)、カミルレ(Chamomile)、イタリアニンジンボク(Chaste tree)、クリ(Chestnut)、Echina cea、マツヨイグサ(Evening Primrose)、ナツシロギク(Feverfew)、ニンニク(Ga rlic)、ショウガ(Ginger)、イチョウ(Ginkgo)、チョウセンニンジン(Ginseng)( アジア産)、ヒドラスチス(Goldenseal)、緑茶(Green tea)、Guggulipid、サンザシ(Hawthorn)、キヅタ(Ivy)、カワカワ(Kava)、カンゾウ(Licorice)、オオアザミ(Milk Thistle)、トケイソウ(Passion Flower)、カボチャ(Pumpkin)、Pygeum 、マンネンロウ(Rosemary)、Siberian Ginseng、ノコギリパルメツト(Saw Palme tto)、オトギリソウ(St．John's Wort)、Stinging Nettle(イラクサの一種)、カノコソウ(Valerian)等が挙げられる。植物材料は、限定するものではないが、例えばノコギリパルメットとカボチャの種子との混合物、ルードベキア(Echinacea )とヒドラスチスとの混合物、またはオトギリソウとカノコソウとの混合物等の植物材料の混合物であってもよい。本発明においては、活性成分は以下の化学物質、即ちアセトゲニン、アルカロイド、炭水化物、カロチノイド、ケイ皮酸誘導体、脂肪酸、脂肪酸エステル、フラボノイド、グリコシド、イソプレノイド、大環式抗生物質、核酸、ペニシリン、ペプチド、フェノール系化合物(phenolics)、ポリアセチレン、ポリケチド、ポリフェノール、多糖類、タンパク質、プロスタグランジン、ステロイド、及びテルペノイドの一種とし得る。植物薬材料の生物活性や臨床的適応症は、ヒトまたはその他の動物の任意の疾病、障害、または症状に関連したものであり得る。従って、前記方法は、ヒト及び／または獣医学上の疾病、障害、または症状の、治療及び／または緩和及び／または予防のための医薬品級植物性薬剤の製造に有用である。適応症の例としては、限定するものではないが、アレルギー性／炎症性障害、循環器障害、癌または中枢神経系障害、胃腸障害、代謝障害、悪心、または微生物またはウイルスによって誘発された障害が含まれる。これらの方法では、アリコートを生物学的に活性な成分と不活性な成分に分離することができる。さらに、マーカー画分は関連成分の群を含み得る。本発明はまた、医薬品級薬剤のファーマプリントの作成方法も提供する。さらに本発明は、上記の方法で製造された医薬品級薬剤を提供する。 3.1 定義本明細書において使用する用語「医薬品級」は、植物性薬剤中の特定の生物学的に活性な成分及び／または不活性な成分が、特定の絶対的濃度範囲及び／または相対的濃度範囲になければならないこと、及び／またはその成分が疾病、障害、症状特異的生物活性アッセイで測定される特定の活性レベルを示さなければならないことを意味する。この疾病、障害、症状は、ヒトまたは動物が罹患するものであり得る。本明細書で使用する「成分」は、植物性薬剤に天然に存在するか、規定の生物活性範囲及び／または組成範囲にある成分を含む医薬品級植物性薬剤を製剤するように植物性薬剤に添加された個々の成分（即ち化学物質）を意味する。本明細書で使用する「活性成分」は、一または二以上の成分であって、疾病に特異的なバイオアッセイにおけるその個々の成分の活性の総和が、植物材料の観察される生物学的活性の実質的な部分となる成分を意味する。好ましくは、活性成分の活性の総和が、観察される生物学的活性の過半、すなわち50％を超える生物学的活性となるものである。本明細書で使用する「画分」は、通常、例えば溶解度、分子量範囲、極性範囲、吸収係数、結合特性、化学反応性または選択溶解度のような規定されたパラメータを有する構造の類似した成分のグループ、または群を意味する。多くの場合、画分は、クロマトグラフィー分離法の生成物、即ちフラッシュクロマトグラフィー、分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、分取ガスクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、液体−液体クロマトグラフィー、例えば、向流クロマトグラフィーまたは向心クロマトグラフィー等の生成物である。以下の項の発明の詳細な説明や特定の態様の実施例、及び添付の図面を参照することにより本発明をより完全に理解できるであろう。 4. 図面の簡単な説明図1は、医薬品級薬剤の製造において、後に処理された植物材料を比較する対象となる標準化学的フィンガープリント及び／または標準生物活性フィンガープリントを確立するために用いられる、本発明による手順の概略図である。図2は、植物材料を処理して医薬品級薬剤とするために用いられる、本発明による手順の概略図である。図3は、種々の種類の生物学的に活性な成分を単離するための手順の概略図である。図4は、市販の製品からのノコギリパルメットの分別分析の結果を示す。縦軸は重量／重量％である。二つの軸は、様々な脂肪酸、脂肪酸エステル、及び溶媒系の画分である。図5は、ノコギリパルメット抽出物＃3の濃度を上昇させることによる特異的³ Ｈ-ＤＨＴ結合の阻害を示す。モル濃度は活性成分の分子量を200と仮定して計算した。図6は、ラウリン酸エチルエステルの濃度を上昇させることによる特異的³Ｈ- ＤＨＴ結合の阻害を示す。図7は、リノール酸エチルエステルの濃度を上昇させることによる特異的³Ｈ- ＤＨＴ結合の阻害を示す。図8は、5種の異なる市販のノコギリパルメット製品の化学的分析を示す。縦軸は重量／重量％である。他の軸は、脂肪酸、脂肪酸エステル、及びソースとなる材料である。図9は、ヤドリギ抽出物の分析のためのクロマトグラフィーの段階を示す。図10は、オトギリソウの分別分析を示す。縦軸は重量／重量％である。横軸は画分及び化学成分である。図11は、オトギリソウの化学分析の結果を示す。縦軸は製品の10ｍｌあたりのｍｇであり、その他の軸は化学化合物及び市販品のソースである。図12は、ショウガの分別分析を示す。縦軸は重量／重量％である。残りの軸は画分数及び特定の化学成分である。図13は、5種の市販のショウガ製品の化学分析の結果を示す。縦軸はカプセル当たりのｍｇ数である。横軸はショウガの成分及び市販品のソースである。 5. 発明の詳細な説明 5.1. ファーマプリンティングの方法本発明は、医薬品級のものとして分類され得る植物性薬剤を製造する方法を提供する。この方法を「ファーマプリンティング（Pharmaprinting）」と称する。本発明の方法により製造された医薬品級植物性薬剤は、臨床的研究における使用や、より重要なものとして患者の治療における使用に特によく適するものである。特定のプロトコルに使用される薬剤の品質が一定であることと、その薬剤がヒトに対してまたは獣医学的に用いられる予防用または治療用薬剤としての使用に一貫して適したものであることが、この方法により保証される。本発明は、植物抽出物及び他の植物材料、例えば植物抽出物及び哺乳類組織由来の生物学的製剤の品質、投薬、及び臨床的有効性を詳細に制御する能力を提供するものである。本発明の一つの形態は、様々な植物材料に対する化学的及び／または生物活性フィンガープリント標準の確立を使用する。このフィンガープリント標準を確立して薬剤製造方法に使用すると、植物材料が医薬品級の要件に合致することが確保される。多数の植物材料に対して確立された具体的な定量的及び生物学的フィンガープリントを本発明の別の形態として示す。これらのフィンガープリントは、特定の植物材料が特定の治療処置のための薬理学的活性のレベル及び組成の要件を満たしているかどうかを判定するのに有用である。このような判定は、その植物材料を用いる臨床研究や患者の治療が、一貫した検証可能な抽出物組成パラメータに基づいたものであることを確保するために重要である。本発明は、十分に特性化され、その組成がバッチ間で均一で、臨床的環境において正確な量で投与され、有効に用られ得る植物材料を提供するのに有用である。本明細書で説明する方法により、臨床試験の結果が再現可能であることが確保される。最初に対象の植物材料のサンプルを得る。多くの植物は、そのままの材料として、あるいは処理された抽出物として市場から入手可能である。多くの場合、薬剤として使用することが意図されているのは、植物抽出物またはその他の組成物である。この処理された材料は、所与の生物学的活性を示す複数の活性成分と、対象の生物学的活性を直接示すことのない複数の不活性成分とを含み得る。ある態様においては、植物材料からアリコートを取り出し、これを品質保証、すなわち標準化工程に供する。好ましくは、このアリコートは均質な植物材料の代表的なアリコートである。この工程は、植物材料のアリコートをそれぞれが活性成分の少なくとも一種、あるいはある場合には不活性成分の一種を含むものである複数のマーカー画分に分離することを含む。アリコートの定量的フィンガープリントを提供するために、各マーカー画分における活性成分または不活性成分の量を測定する。アリコートの生物学的活性フィンガープリントを提供するために、各マーカー画分の生物学的活性の程度も測定する。次いで、アリコートの化学的及び／または生物学的活性フィンガープリントを、医薬品級薬剤に対して確立された対応するフィンガープリントと比較する。植物薬材料のフィンガープリントが標準フィンガープリントと一致した場合は、その植物薬材料は医薬品級植物性薬剤として確認される。そうでない場合には、その植物薬材料を標準フィンガープリントと一致するように改変するか、あるいは拒絶する。 5.1.1 ファーマプリントの作成方法推定活性成分の範囲が既知であるとき、植物薬材料のファーマプリントの作成方法は、文献の検討から始まる。これは、化学文献、生物学文献、植物薬材料の公開されたバイオアッセイ及び臨床データを検討することを含む。特に役立つ情報源は、Pharmaceutical Science，University of Illinois，ChicagoのProgram for Collaborative ResearchにおけるDr．Norman Farnsworthにより管理されているＮＡＰＲＡＬＥＲＴコンピュータデータベース；Leung及びFosterによるEnc yclopedia of Common Natural Ingredients Used in Food，Drugs and Cosmetic s，2nd Ed．John Wiley ＆ Sons:New York，NY，1996;Herbal Drugs and Phytop harmaceuticals，ed．N．G．Bisset，CRC Press:Boca Raton，FL，1994;Duke，H andbook of Biologically Active Phytochemicals and Their Activities，CRC Press:Boca Raton，FL，1992；Tyler及びFoster，“Herbs and Phytomedicinal Products”，Handbook of Nonprescription Drugs Berardiらeds.，United Book Press，Inc.:Washington，DC，1996である。所与の適応症については、推定活性成分がその疾病状態と実際に関連があることを確認するために文献を調べなければならない。さらに、その推定活性成分及びその適応症について既知のバイオアッセイが存在する場合は、そのバイオアッセイは適応症及び推定活性成分の双方に対して一貫したものとしなければならない。適切なバイオアッセイは、臨床的に関連する目的と関連する。バイオアッセイは、幅広い濃度範囲について定量的なものであるべきである。典型的には、IC₅₀曲線（50％阻害濃度）または適切なＫ_i曲線を準備する。次いで、植物薬材料の推定活性成分及びクロマトグラフィーの画分の双方について、徹底的な化学的及び生物学的分析を行う。この結果を分析して、サンプルにおける化学的成分のそれぞれの生物学的活性の定量分析を得る。次いでサンプルの全体としての生物活性を個々の成分の生物活性と比較する。この時点で、個々の化学的成分は臨床的に関連する目的と関連付けられ得る。類似の方法を刺激効果を測定するバイオアッセイに適用することができる。成分の活性に個別に基づき、かつ全体の活性がわかれば、個々の成分を合わせると、生物学的活性の実質的な部分を示すものとなるはずである。一般に、合わせた活性は全体の活性の少なくとも25％となる。好ましくは、個々の活性成分の活性の総和は、観察される生物学的活性の過半、すなわち50％を超えるものとなる。より好ましくは、単離された個々の成分が 7 0％を超える活性を示すものである。さらにより好ましくは、単離された個々の成分が生物学的活性の80％を超える部分を示すものである。もう一つの考慮事項は、ファーマプリントの一部となる、できる限り少数の活性成分を選択することである。より少ない活性成分とすることは、原材料の許容と製造における実際的な考慮に重要である。本発明においては、関連する化学成分と生物活性との間での相関性を確立する。満足な相関性が確立されれば、各サンプルに対して生物学的フィンガープリントを行なう必要がなくなる。適切な成分及び／またはマーカー画分の化学的分析を行えばよい。むしろ、対象の植物薬材料のサンプルのそれぞれが、生物活性の殆どを示し、所与の植物サンプルが医薬品水準であることを確認するのに十分なものとなる。ある態様においては、本発明は以下の手順の一つを含み得る。ある手順は、図 1に概略的に示すように、所与の医薬品級植物性薬剤についての組成及び生物活性フィンガープリント標準を確立することを含む。フィンガープリント標準が確立されれば、植物薬材料を医薬品級薬剤への実際の処理は、図2に概略的に示すように実施することができる。所与の植物薬材料について化学的及び／または生物活性フィンガープリントを確定する最初の段階は、図１の段階１に示すように、抽出物あるいは粉末を１またはそれ以上のグループに分離することを含む。これらのグループを、処理された植物性材料について確定されるフィンガープリントのマーカー（活性成分を含んでいても含まなくてもよい）としての可能性に基づき、分離し同定する。可能性のあるマーカーとして選択され同定される推定成分あるいは推定成分のグループは、処理される植物薬材料および医薬用途によって大きく変化する。各植物薬材料について選択された推定マーカーは少なくとも２以上でなければならない。可能性のあるマーカーの数は５を越えてよく、複雑な植物抽出物あるいは粉末では１５から２０あるいはそれ以上になり得る。可能性のあるマーカーは、多くの場合、可能性のある生物学的活性あるいは所与の医薬用途についての生物学的活性への寄与に基づき同定し、選択する。異なる適応症については、特定の生物活性成分を最適化するために、同じ植物薬材料を用いて異なる抽出方法で抽出物を調製してもよい。それ自体明らかな生物学的活性をもたないマーカーを分離し、フィンガープリントで使用するマーカーとして含めてもよい。これらの「代用」マーカーも、マーカーの存在が植物性医薬について観察された生物学的活性全体の実質的部分を与えるのに必要なその他の活性成分を示すものである場合には内部標準として望ましい場合もある。植物薬材料を推定マーカーの種々のグループに分離する最初の分離は、単純な抽出から、ゲルろ過クロマトグラフィー、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー及び逆相クロマトグラフィーを含む複雑なアフィニティークロマトグラフィにいたる慣用の分離技術によって行う。所与の植物薬材料について推定マーカーが同定されれば、次いで図１の段階２に示すように、各マーカーの生物活性を測定する。植物薬材料の生物活性を測定するのに使用する特定のバイオアッセイは、その植物薬材料の意図された用途に基づき選択する。バイオアッセイは、その植物薬材料で治療される症状や適応症に関して推定マーカーの生物活性を反映するものであることが好ましい。段階２で得られたバイオアッセイの結果を使用して所望の生物活性を有する成分を同定し（段階３）、活性が殆どないか実質的に不活性である成分を同定する（段階４）。次に段階３及び４で同定された各グループを定量分析し、各グループに存在する各成分の量を決定する。次いでバイオアッセイと成分の定量的組成分析の結果を用いて、図１の段階５に示すように植物薬材料についてバイオアッセイフィンガープリント及び／または化学的フィンガープリントを調製する。植物薬材料についてのフィンガープリント確定することの一部として、生物活性及び／または化学組成の許容範囲を決定する。これは主に各マーカーについての生物活性および定量的量の許容範囲を確定することに基づいて行われ、処理された材料全体としての所望の医薬活性を与える。さらに、活性及び非活性マーカー画分の種々の組合せを評価し、活性及び非活性成分の組合せにより生じる所望の生物活性が増加する可能性を確認する。段階５で確定されたバイオアッセイ及び定量的フィンガープリントにより、植物薬材料の正確な同定ができ、これは臨床的使用に必要な投与計画及び治療スケジュールを確定するのに使用することができる。投与計画及び治療スケジュールは、新薬を開発するとき一般的に採用される慣用の臨床的方法を用いて確定される。投与及び治療スケジュールを決定するために使用される処理された材料は、段階５で確定されたフィンガープリントの要件に一致し適合しなければならない。本発明によれば、投与及びスケジュール作成の研究に使用される処理材料はすべて同じフィンガープリントを有することになるので、この方法により投与及び治療スケジュールが効果的で再現性があることが確保される。図１に記載したような一般的な手順によって決定されたバイオアッセイ及び定量的フィンガープリントは、医薬品級植物薬剤を製造する製造工程の一部として使用される。フィンガープリントは、品質保証あるいは標準化工程の一部として使用され、所与の植物薬材料が適切な化合物を含み、正確に処理されて、図１に示した工程に従い標準化され試験された材料と臨床的に同じ性能の植物性薬剤を提供することを確保する。本発明に従い医薬品級植物薬材料を製造する手順の実施例を図２に概略的に示す。対象とする植物薬材料21を最初に抽出、粉末化あるいは他の製造方法によって処理し、処理された植物材料22を形成する。次に処理された材料22のサンプルを分析し、それが図１の標準化手順において確定されたフィンガープリントの要件に適合するかどうかを確定する。この品質保証あるいは標準化手順を図２の23 に示す。処理された材料が既に確定された特定の物質についてのフィンガープリントの要件に適合する場合は、それを段階24で示すように医薬品級であると承認する。材料が標準フィンガープリントに近いが、完全には一致しない場合、それを必要に応じフィンガープリント標準に合致するように修正する（段階25）。処理された材料をフィンガープリント標準に合致させる修正は種々の方法で行うことができる。植物薬材料をさらに処理する方法としては、必要に応じ、植物薬材料の付加的な抽出、選択的抽出、選択的処理、バッチの再配合（例えば、高含量バッチと低含量バッチを混合し医薬品級材料を調製）、あるいは種々の化合物の添加等を挙げることができる。植物薬材料が実質的に生物活性マーカー及び定量的マーカーのいずれについてもフィンガープリント範囲から外れる場合は、そのバッチを拒絶する（段階26）。ある態様においては、所与の植物薬材料が医薬品級であるかを決定するために使用する品質保証標準化段階23が、試験される植物薬材料の均一なサンプル、好適には均質なサンプル、あるいはアリコートを得ることを含む。サンプルは、材料の観察された生物活性に寄与し、既に決定された標準の生物活性及び／または化学的フィンガープリントを生成する活性成分を含まなければならない。サンプルはまた１以上の不活性成分を含む。不活性成分は直接測定可能な生物活性をもたないものであり得る。不活性成分には下記の種類のもの、すなわち、活性が低すぎて活性の実質的な部分を示さない成分、その存在が他の生物活性成分の存在を示し、これらの成分についての代用マーカーとして作用できる成分、関連するアッセイにおいて化学的あるいは生物学的に不活性である不活性成分が含まれる。サンプルは試験されている植物材料の小さなアリコートのみであることが好ましい。従って、材料のバッチ全体を代表する均一なサンプル、好適には均質なサンプルを得ることが重要である。より詳細な概要を図３に示す。図３は植物薬材料の水性抽出物に存在する種々の成分の最初の分離を示している。水性相あるいは有機相のいずれかに活性成分を単離するために抽出と沈殿とを連続して用いる。図３のスキームは、特にヤドリギのような植物薬材料から水溶性活性成分の群を分離するのに適している。植物をその化学成分の主な群に分離する一般的な方法の例を図３に概略的に示す。最初に新鮮な植物（葉、根、花、果実及び茎を含む）を使用する。所望の場合は、葉、花、茎あるいは根のような植物の特定の部分を使用してもよい。特定の部分あるいは植物全体を液体窒素温度で凍結してもよい。これにより粉砕が容易となり、また活性成分の完全性と性能とが保たれる。粉砕された粉末を蒸留水で繰り返し抽出する。所望の場合は、抽出を熱水、アルコール、その他の有機溶媒、アルコール水溶液、希酢酸あるいはそれらの混合物で行ってもよい。実際に選択される温度は、好ましくは水の沸点またはその近傍である。水性抽出物の全体的な生物活性を最初に決定することが好ましい。合わせた水抽出物について特定のバイオアッセイを行う。例えば、薬剤が抗菌剤として使用される場合は、ペトリ皿で細菌増殖の抑制についての試験を行う。あるいは、薬剤を抗ガン剤として使用しようとする場合は、ガン細胞の細胞培養に対する試験を行うのが好ましい。これらのデータから、抽出物１ｍｌ当りに含まれる生物活性単位を算出する（生物活性単位は、試験系における細菌あるいはガン細胞の増殖を50％抑制するのに必要なこの抽出物の希釈倍数として定義する）。同様に、刺激効果、例えば免疫刺激についての生物活性単位を算出することができる。本発明によりフィンガープリントを確定するために、植物を図３に記述した手順に従って抽出し、それを主要な成分（例えば、サポニン、テルペノイド、脂質、アルカロイド、核酸、タンパク質及び炭水化物）に分離する。分離された各成分グループを、必要に応じ生物活性について試験する。これは（例えば、Viscum albumにおけるようなタンパク質及びアルカロイド画分における）活性を示し得る。化合物の活性種を、アフィニティークロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーあるいはガスクロマトグラフィーによりさらに個々の成分に分離する。生物活性に対して主として寄与する成分をその重量及び比生物活性単位に基づいて定量する。これらの成分はもとの草本抽出物についての医薬的要件を確定するためのフィンガープリントを与える。医薬品級抽出物の１ｍｌ当りの生物活性単位により、臨床研究のための正確な投与量を確定する方法が得られる。少なくとも一つが少なくとも一種の活性成分を有する個々のマーカー画分にサンプルを分離した後、各画分を分析し、その中の活性成分量を決定し、サンプルの定量的フィンガープリントを得る。各画分の定量は、公知の定量分析方法の任意のものを用いて行うことができる。定量法の例としては、重量分析、スペクトル分析、あるいはガスクロマトグラフィーまたは高性能液体クロマトグラフィー及び他の分離システムに使用されるような定量検出器の使用が挙げられる。その他の適する定量分析方法としては、酵素分析、放射分析、比色分析、分光光度分析、蛍光または燐光法による分析及び酵素結合イムノソーベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）やラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）のような抗体アッセイが挙げられる。一つの態様においては、各画分の定量分析の結果を使用してサンプルの定量的フィンガープリントを調製する。フィンガープリントは、各マーカー画分中の成分の量とその成分の種類とからなる。材料が医薬品級であるとみなすためには、この定量的フィンガープリントをその後、確定されている既知の標準フィンガープリントと比較する（図１）。サンプルの定量的フィンガープリントが医薬品級フィンガープリントについて示された量の範囲内にであるならば、その材料は医薬品級であると同定される。品質保証アッセイの別の一部として、個々のマーカー画分について生物学的アッセイを行ってもよい。種々の画分を試験するのに使用される生物学的アッセイとしては、標準フィンガープリントに用いたものと同じものを使用し、同様に材料について意図された特定の臨床用途に依存する。材料が医薬品級であるとするために、その材料について生成した生物活性フィンガープリントを、確定されている既知の標準生物活性フィンガープリントと比較する。サンプルの生物活性フィンガープリントが、医薬品級フィンガープリントについて示された生物活性の範囲内にあるならば、その材料は医薬品級であると同定され、承認される。 5.1.2. ファーマプリントを生成する別の方法推定活性成分が未知である場合に植物的薬材をファーマプリントする方法もまた文献の検討から始める。それは、任意の化学文献、生物学文献、公開されたバイオアッセイあるいはその植物的薬材についてあるいは関連する活性を有する植物的薬材について利用可能な臨床データの検討を含む。疾病の状態に基づき、一連の関連性のあるバイオアッセイを選択する。全サンプルあるいは抽出物の活性をそのバイオアッセイで分析する。次に活性を示すバイオアッセイを用いて、推定活性成分が未知である植物薬材料の画分を分析する。分画化は例えば、誘電率、極性、サイズあるいは吸収力による分離のような通常の方法に基づいて行う。次いで画分を分析し、どの画分が活性の原因であるかを決定する。活性が見られれば、各活性画分を再分画化し、個々の推定活性成分、即ち純粋な化学的化合物を単離する。個々の化学的化合物を知ること及びそれらの定量的生物学的活性を知ることに基づいて、定量的能力曲線を描出することができ、各個々の化学成分についての50％阻害濃度（IC₅₀）を決定することができる。推定活性成分が作動薬であるならば、他のパラメータ（結合、活性化、応答）が必要となる。一般的な場合、バイオアッセイは、構成成分、画分または抽出物全体の刺激あるいは阻害効果の適当な試験からなり、その後これらの効果の適切な定量評価を行う。標準（または放射能標識された）作動薬が測定可能な効果を引起こすような最もありそうな（典型的な）アッセイについては、対象の材料による阻害を評価することができ、それは典型的にはIC₅₀値、あるいは他の適当な尺度（例えば、Ki）の測定により表わすことができる。次いで個々の推定活性成分の活性を合計し、その合計を未分画化植物サンプルにおける活性と比較する。これらの成分が活性の実質的部分の原因であるならば、活性成分が未知であった植物薬材料についての「活性成分」の最初のフィンガープリントを得たことになる。 5.1.3 ファーマプリントの生成方法の別の変法推定活性成分が未知である植物薬材料のファーマプリント生成について前述した一般的方法は、分析の過程で複雑なことが生じた場合について、いくつかの変法を有する。一つの変法は、個々の成分の合計が植物薬材料の生物活性の実質的な部分の原因ではないときに必要である。このとき、個々の成分の低くなった活性についてはいくつかの理由が有り得、一つは活性成分の分解あるいは減成であり、二つ目は相乗効果である。その他の可能な説明は、どの画分からも有意な活性が見られないが、植物薬材料あるいは抽出物全体としてはバイオアッセイにおいて活性を示す場合である。活性成分がアッセイの過程で分解しているかどうかを判定することは比較的容易である。単に全ての画分を再混合し、再混合した画分の活性を粗材料の活性と比較すればよい。実質的な活性が失われていれば、問題はおそらく分解である。どの活性成分が分解しているかを決定するためには、もとの粗植物薬材料のクロマトグラフィー分析を再混合画分のものと比較する。消失しているか大きさが減少したピークが、その成分が分解していることを示す。分解を避けるための多くの方法がある。典型的には、液相−液相クロマトグラフィ（向流クロマトグラフィ）のような、より穏やかな抽出／分画化方法あるいは超臨界二酸化炭素抽出またはクロマトグラフィーを採用することができる。個々の画分の活性が予想される全活性の実質的な部分に相当しないことの別の説明は、1以上の活性成分の相乗効果である。相乗効果が起こっているかどうかを調べるためには、対として再混合した画分を分析することが必要である。組合せた画分が個々の画分よりも高い活性を示せば、その画分中の2以上の個々の成分が相乗的に作用している可能性がある。例えば、生物活性の10％を担う3つの画分があり(合わせていない相加的生物活性は30％である)、それらを合わせた画分が活性の100％を示す場合である。この場合、その画分は相乗的に作用している。画分を繰り返し対に組換え、あるいはより大きい画分を見ることにより、任意の相乗的活性が発見される。2つの画分が相乗性を示した場合、それらを上記のようにして再分画化し、個々の画分の対あるいは単離された成分の対を調べて相乗的に作用する個々の成分を確認する。個々の成分あるいは画分の三者の比較について調べることもできる。植物薬材料が活性を示すバイオアッセイにおいて画分が活性を有していない場合はどうであろうか？この場合の説明としては、分解、相乗性、あるいは個々の画分が活性を示さないような非常に多くの活性成分があること等が挙げられる。最初の段階はそれぞれの最初の画分を分画化し、バイオアッセイにおいて活性成分が出現するかどうかを調べることである。それが成功しない場合は、その画分を組換え、活性物の分解が起こるかどうかを調べる。分解が起こる場合には、上記のような適当な手段を採用する。分解が起こらない場合は、別の分画化方法を試みる。最終的に、十分に大きいか、適当なサイズを有するか、あるいは選択された画分が活性を示すことになる。相乗性が可能性を有する場合は、上記の相乗性の項に記載したように行う。 5.2. 植物材料の種類本発明により処理できる植物材料の種々の種類の例としては、限定するものではないが、高等植物からの任意の植物材料を挙げることができる。植物薬材料の例は、Leung及びFoster，1996;Bisset，1994あるいはTyler及びFoster，1996の参考文献に見られる。詳細な説明中に例示される植物薬材料の具体例としては、イタリアニンジンボク、アロエ、チョウセンニンジン、コケモモ、サラシナショウマ、カミルレ、クリ、カワラタケ（Coriolus Versicolor）、ルードベキア、マツヨイグサ、ナツシロギク、ニンニク、ショウガ、イチョウ、ヒドラスチス、緑茶、グッグリピド、サンザシ、キヅタ、カワ、カンゾウ、オオアザミ、ヤドリギ（アメリカ、アジア及びヨーロッパ種）、トケイソウ、カボチャ、ピジウム、ローズマリー、シベリアニンジン、ノコギリパルメット、オトギリソウ、イラクサ、カノコソウ等が挙げられる。さらに１種以上の植物薬材料の組合せ、例えばルードベキアとヒドラチスを本発明により処理することができる。 5.2.1. 植物材料の処理及び抽出方法植物材料を処理して植物全体あるいは植物の選択された部分の水性または有機抽出物を形成することができる。植物材料は全体あるいは部分を粉末に加工することもできる。対象となる植物薬材料の多くのものが粉末、水性抽出物、有機抽出物、あるいはオイルとして市販されている。一つの態様においては、植物材料の抽出物が好ましく、これは液体医薬担体に溶解しやすいからである。しかし、粉末植物材料も、医薬を固体形態、例えば錠剤、カプセル等で投与する場合には多くの用途に十分に適している。そのような方法は当業者に周知である。さらに、植物材料及び／または抽出物の多くのものが市販品として入手可能である。植物薬材料の処理及び抽出の例として以下の実施例を挙げる。別の実施例を詳細な説明中に挙げる。典型的な根については、スライスし、凍結し、あるいは粉砕することができる。粉末化されたら、適当な溶媒とともに震盪し、濾過する(Tanabeら、1991，Sho yakugaku Zassi，45(4):316-320)。あるいは以下の方法を使用する。すなわち、根をホモジナイズし、アセトンで抽出し、濾過するか、あるいは植物薬材料を蒸気抽出して精油を得、蒸留物をアセトン−水あるいは適当な溶媒に溶解するか、あるいは切断した根茎を凍結及び／または凍結乾燥し、得られた粉末をアセトン −水抽出する(Tanabeら、1991，Shoyakugaku Zassi，45(4):321-326)。植物薬材料の別の処理方法は、100℃の水での水性抽出である(Yamaharaら、1985，J．Eth nopharmacology 13:217-225)。上記の方法からの最初の溶媒抽出物は、適当な溶媒による液／液抽出によりさらに抽出することができる。植物薬材料は、極性及び非極性溶媒をそれぞれ使用して二段階で抽出することができる。その後溶媒を蒸発させ、画分を合わせる(Nagabhusanら、1987，Cncer Let．36:221-233)。植物薬材料はまた、調理し得るペーストあるいは粉末に加工することができる(Zha ngら、1994，J．of Food Science 59(6):1338-1343)。種々の溶媒を乾燥した植物薬材料を抽出するのに使用することができ、例えばアセトン、アセトニトリル、ジクロロメタン、エタノール、イソプロパノール、超臨界二酸化炭素等を使用できる(Siproら、1990，Int．J．of Food Science an d Technology 25:566-575及びその中に引用された文献)。その他の植物薬材料、例えばノコギリパルメット等については、医薬製品は種子油あるいは乾燥果実である。典型的な調製物では、ヘキサンあるいは超臨界二酸化炭素抽出物を調製する。多くの調製物が市販品として利用でき、例えばPerm ixonやTalsoがある。植物薬材料の超臨界二酸化炭素抽出の例については、Inden a、ヨーロッパ特許0 250 953 B1を参照されたい。あるいは、植物薬材料を粉砕し、ソックスレー抽出器中で適当な溶媒(90％)により抽出してもよい(Elghamry ら、1969，Experienia 25(8):828-829)。また植物薬材料はエタノールで抽出してもよい(Weisserら、1996，The Prostate 28:300-306)。乾燥材料は種々の方法により調製することができ、マイクロ波により乾燥し、液体窒素で冷却し、粉砕する等の凍結乾燥、あるいは真空下70℃で10時間乾燥する、あるいは日陰で風乾する等の方法がある(List及びSchmit,Hagers Handbuch der Pharmazeutischen Praxis，Springer-Verlag:New York，1993，1973-79;Ara yaら、1981，Journal of Comparative Pathology，135-141)。水性の希釈抽出物である茶は煎薬としても知られており、60〜80℃の湯中で生成することができる (Nosal及びSchilcher，1990)。粒子径が0.25ｍｍ未満であると抽出がより効率的になる(List及びSchmit，Phytopharmaceutical Technology，CRC Press:Boca Ra ton，FL，1989)。植物薬材料の油抽出物の製造のためには種々の情報が利用できる。植物薬材料を油中で45℃で10日間、あるいはその他で推奨される70℃で12〜24時間消化(細断)する(Hobbes，1989，Herbal Gram 18/19:24-33;Smithら、Quality Validatio n Laboratory‐Herb．Pharm.:Williams，OR，1996)。例えばオトギリソウにおいては、調製物を抽出工程の間日光に曝すことにより、ケルセチンとして計算してフラボノイド含量が４倍に増加することが報告されている(Maisenbacher及びKov ar，1992)。さらに、オトギリソウについては、材料をアルコールによりさらに抽出し、油と混合した油調製物においてヒペリシンが2倍に増加したことが報告されている(Georgievら、1983，Nauchni Tr．Vissh Inst．Plovid．30: 175-183)。あるいは、植物薬材料のアルコール-水調製物を製造することができる(Dyukov a，1985，Farmicsiya 34:71-72;Georgievら、1985，Nauchni Tr．Vissh Inst．P lovid．32:257-263;Wagner及びBladt，1994，Kowalewskiら、1981，HerbaPol．2 7:295-302)。Hagers Handbuchによれば、例えばオトギリソウのような植物薬材料のチンキ剤を、薬剤を使用して、あるいはエタノールに浸漬して凍結し、濾過して光遮蔽ビン中に保存することにより調製できる(List及びHorhammer，1993) 。オトギリソウのようなある種の植物薬材料は温度及び光の両方に感受性を有する。このようなタイプの植物薬材料については、材料を冷却剤とともに乾燥状態で梱包するか、冷蔵下で流通させ、光及び空気から保護しなければならない。オトギリソウにおいては、50℃の温度で6週間を超えて保存すると(140Ｆ)、粉末化抽出物、錠剤、及びジュース調製物においてはヒペリシン含量が有意に低下した。20℃で貯蔵された乾燥抽出物は、少なくとも1年は安定であることが判明している(Adamskiら、1971，Farm．Pol.，27:237-241;Benigniら、Hypericum．Piant e Medicinali:Chimica．Farmacologia e Terapia，Milano:Inverni ＆ DellaBef fa;1971)。その他のオトギリソウ成分であるヒペフォリン(hyperforin)及びびアドヒペフォリン(adhyperforin)は油調製物中で非常に不安定で、特に光に露出すると不安定であり、最低14日以内で分解し得ることが判った(Meisenbacherら、1 992，Planta Med.，351-354)。安定性(空気の不存在下における)はエタノールで抽出した調製物では6カ月まで改善された。同様に、4種までのキサンテン及び数種のフラボノイド、すなわちケルセチン、及びI3'、II8-ビアピゲニン等が検出され、これらは外用剤の活性成分に含ませることができるものであることが示唆されている(Bystrovら、1975,Tetrahedron Letters 32:2791-2794)。 5.3 画分の分離サンプル抽出物を調製及び／またはその代わりに市販品として購入したら、一部を分別分析する必要がある。フィンガープリントが既に確定されていたら、サンプルまたはアリコートを、標準フィンガープリントに存在する同じ複数のマーカー画分に分離する。マーカー画分のそれぞれは、１種以上の活性あるいは不活性成分を含むことになる。試験する植物材料のそれぞれについて個々のベースでマーカー画分を確定する。いくつかの材料については数個のマーカー画分のみでよい。その他のより複雑な材料については多数のマーカー画分が存在し得る。例えば、ヤドリギViscum albumタンパク質抽出物においては、好ましいタンパク質マーカー画分は、画分の糖結合アフィニティに基づいて分離された画分である。しかし、材料をマーカー画分に同定し分離するための種々のパラメーターを、植物材料中に存在する成分の種類に基づいて決定することができる。マーカー画分へのサンプルの分離は、液体クロマトグラフィー及び抽出法のような慣用の分離法の任意のもので行うことができる。標準フィンガープリントを確定するのに使用したのと同じ方法を使用しなければならない。種々の画分が生物活性について試験され得るので、非破壊的な分離法を使用することが好ましい。特に使用する化合物（例えば炭水化物及び標的酵素）の特異的な結合能力に基づくアフィニティクロマトグラフィーによる液体カラムクロマトグラフィーは有用な分離方法である。分画化の後、溶媒を除去し、材料をバイオアッセイ用の適当な媒体中に溶解する。適当な媒体の例としては、ＤＭＳＯ、エタノール、種々の洗剤、水、適当なバッファー等が挙げられる。溶媒の選択は分析する成分の化学的性質及びアッセイ系との適合性に依る。 5.4 適当なバイオアッセイの確定生物学的アッセイの例としては、任意の細胞増殖アッセイ、例えばＬ 1210細胞阻害、免疫活性あるいは特定の疾患に関連する必須の酵素の阻害を測定すること等が挙げられる。バイオアッセイに使用できるその他の形質転換された細胞系の例としては、ＨＤＬＭ-3ホジキンリンパ腫及びラージバーキットリンパ腫、肝細胞癌細胞系、特定の細胞受容体あるいは酵素を有するヒト/動物細胞系の一次あるいは樹立培養等が挙げられる。生物学的アッセイの結果を使用してその材料の生物活性フィンガープリントを生成する。このフィンガープリントは、2種の選択されたマーカー画分のアッセイのようなシンプルなものとし得る。逆に、フィンガープリントは多数の異なる画分について行われる多くの異なるバイオアッセイを含んでもよい。異なるマーカー画分について同じアッセイを行ってもよい。また、異なるアッセイを同じマーカー画分について行ってもよい。バイオアッセイの組合せは、所与の植物材料の複雑さ及びその意図される臨床用途による。バイオアッセイは標準材料の生物活性フィンガープリントの確定において行ったものと同じものとする。 5.4.1. 酵素的アッセイ及び受容体に基づくアッセイ酵素的アッセイ及び受容体に基づくアッセイが本発明の実施において好ましい。アッセイは、臨床的疾患について是認されている酵素的アッセイに基づいて選択されるか、あるいは所与の臨床的疾患についての関連するアッセイから選択される。適当なバイオアッセイを選択することが重要である。理想的には、バイオアッセイは単純なものであり、一定期間再現可能であり、広い濃度範囲にわたって用量応答を示すものである。活性成分が知られていない生物薬材料が直面する問題は、関連するバイオアッセイの選択である。この場合、ヒトの治療用途が、可能性のある作用のメカニズムに基づいてアッセイを当分野で公知のものから選択するガイドとなる。作用のメカニズムは臨床的に関連する目的に一致するものでなければならない。酵素活性、受容体結合活性、細胞培養活性、組織及び動物全体のin vivo活性に対する活性に基づく広範な種類の臨床的に関連するアッセイがある。この項では酵素的アッセイ及び受容体結合アッセイについて述べる。酵素的アッセイ及び受容体結合アッセイについての多くの書物があり、例えばMethod in Enzymology，Academic PressあるいはBoyers，The Enzymesが挙げられる。“Bio active Natural Products，Detection，Isolation，and Structural Determinat ion”,S.M．Colegate及びR.J．Molyneux，CRC Press(1993)も特定のバイオアッセイについて記載している。“Methods in Cellular Immunology”,R．Rafael F ernandez-Botran及びV.Vetvicka，CRC Press(1995)は、免疫細胞活性化からのアッセイ及びサイトカイン受容体アッセイを記載している。“Screening Microbial Metabolites for New Drugs‐Theoretical and Practical Considera tions”は、医薬を見つけるその他の方法を記載している(Yarbroughら、（1993 ）J.Antibiotics 46(4):536-544)。商用の契約研究業者も多くあり、Panlabs、N ovascreen等がある。例えば、神経障害の治療に有用な生物薬材料については、一連のバイオアッセイはアドレナリン作動性受容体、コリン作動性受容体、ドーパミン受容体、ＧＡＢＡ受容体、グルタメート受容体、モノアミンオキシダーゼ、酸化窒素シンテターゼ、オピエート受容体、あるいはセロトニン受容体を使用し得る。循環器疾患については、一連のアッセイは、アデノシンＡ₁アゴニズム及びアンタゴニズム、アドレナリン作動性α₁、α₂、β₁アゴニズム及びアンタゴニズム；アンギオテンシンI阻害；血小板凝集；カルシウムチャンネル拮抗；回腸、心不整脈；心筋変力性（cardiac inotropy）；血圧；心拍数；変時性（chronotropy）；収縮性；低酸素症、低圧；低酸素症、ＫＣＮ；門静脈、カリウム減極；門静脈、自発的活性化；あるいはトロンボキサンＡ₂、血小板凝集を使用し得る。代謝障害については、以下のバイオアッセイ、コレステロール、血清ＨＰＬ、血清トータル；血清ＨＰＬ/コレステロール比；ＨＤＬ/ＬＤＬ比；グルコース、血清-グルコース負荷；あるいは腎機能、カリウム排泄(kaluresis)、塩排泄、及び尿用量変化を使用できる。アレルギー／炎症疾患については、以下のバイオアッセイ、アレルギー、受動皮膚アナフィラキシー；ブラジキニンＢ₂；収縮性、気管；ヒスタミンＨ₁アンタゴニズム；炎症、カラゲナン；ロイコトリエンＤ₄アンタゴニズム；ニューロキニンＮＫ₁アンタゴニズム；あるいは血小板活性化因子、血小板凝集を使用することができる。胃腸管疾患については、以下のバイオアッセイ、コレシストキニンＣＣＫ_Aアンタゴニズム；コリン作動性アンタゴニズム、末梢；胃液酸度、ペンタガストリン；胃潰瘍、エタノール；回腸電気刺激変調；回腸電気刺激痙攣あるいはセロトニン5-ＨＴ₃アンタゴニズムを使用できる。抗微生物、抗真菌あるいは抗トリコモナス疾患については以下の、Candida albicans； Escherichia coli；Klebsiella pneumonaie；Mycobacterium ranae；Proteus vu lgaris；Pseudomonas aeruginosa；Staphylococcus aureus、メチシリン耐性；T richomonasfoetus；あるいはTrychophyton mentagrophytesを使用する。その他の適用対象については、当業者であれば関連するバイオアッセイのリストを選択できるであろう。酵素または受容体に基づいたアッセイの具体的な例としては、アルドールレダクターゼ；アンギオテンシン変換酵素(ＡＣＥ)；ラットアンドロゲン受容体；ＣＮＳ受容体；シクロオキシゲナーゼ１または２(Cox 1、Cox 2)；ＤＮＡ修復酵素；ドーパミン受容体；エストロゲン受容体；フィブリノーゲン；ＧＡＢＡＡまたはＧＡＢＡＢ；β-グルクロニダーゼ；リポキシゲナーゼ、例えば5-リボキシゲナーゼ；モノアミンオキシダーゼ(ＭＡＯ-Ａ、ＭＡＯ-Ｂ)；血小板活性化因子 (ＰＡＦ)；プロスタサイクリンサイクリン；プロスタグランジンシンテターゼ；セロトニンアッセイ、例えば5-ＨＴ活性またはその他のセロトニン受容体サブタイプ；セロトニン再取り込み活性あるいはトロンボキサン合成活性等が挙げられる。具体的な酵素的アッセイは、Panlabs Inc(Bothell，WA)、Novascreen(Balti more，MD)等の種々のソースから利用可能である。別のアッセイとしては、ＡＴＰアーゼ阻害、ベンツピレンヒドロキシラーゼ阻害、ＨＭＧ-CoAレダクターゼ阻害、ホスホジエントラーゼ阻害、プロテアーゼ阻害、タンパク質生合成阻害、チロシンヒドロキシラーゼ阻害、テストステロン-5α-レダクターゼ及びサイトカイン受容体アッセイが挙げられる。５．４．２．細胞培養およびその他のアッセイ酵素的アッセイに加えて、その他の生物学的アッセイも存在する。好ましくは、これらのアッセイは細胞培養において行なわれるが、生物全体において行ってもよい。細胞培養アッセイには、培養肝細胞およびヘパトマー(hepatomers)における活性（コレステロールレベル、ＬＤＬ−コレステロール受容体レベルおよびＬＤＬ／ＨＤＬコレステロール比における作用についてのもの）；PC12ヒト神経芽細胞腫細胞における受容体レベルをモジュレートする、L1210細胞に対する抗癌活性；黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）またはプロラクチンの細胞培養活性；肥満細胞へのCa²⁺流入；食作用、リンパ球活性またはＴＮＦ放出についての細胞培養アッセイ；血小板凝集活性またはHDLM-3ホジキンリンパ腫およびラージバーキットリンパ腫細胞に対する活性、抗有糸分裂活性、感染細胞における抗ウイルス活性、抗菌活性（細菌細胞培養）および抗真菌活性が含まれる。また、組織または全動物アッセイも、抗炎症マウス耳皮膚炎、ラット足腫脹；筋肉収縮性アッセイ、血管拡張性アッセイ；または全動物カーボンクリアランス試験などに用いられ得る。これらのアッセイは、Panlabs社（Bothell ，ワシントン州）などの種々の供給元から入手可能である。５．４．３．抗癌活性薬剤の抗癌作用は、種々の細胞培養系において研究することができ、かかる細胞培養系としては、マウス白血病L1210、P388、L1578Yなどが挙げられる。また、KBおよびHeLaのようなヒト起源の腫瘍細胞系も使用されている。典型的なアッセイにおいては、腫瘍細胞は、10％ウシ胎児血清を含むRPMI-1640のような適当な細胞培養培地中で増殖させる。対数増殖細胞を、種々の濃度の試験材料で、その細胞系の細胞周期に依存して14〜72時間処理する。インキュベーションの最後に、非処理群と処理群中の細胞数を数えることによって細胞増殖を評価する。細胞生存度は、トリパンブルー封入試験によって、またはミトコンドリアデヒドロゲナーゼによるテトラゾリウム染料の還元によって確かめることができる。薬剤が培養中に細胞増殖を阻害する能力は、その抗癌作用の可能性を示唆するものであり得る。これらの作用は、ヒトの疾患のモデルである腫瘍を有する動物において確かめることができる(Khwaja，T．A.ら，（1986）Oncology，43（補遺１）:4 2-5 0)。薬剤の抗癌作用を評価するための最も経済的な方法は、10％ウシ胎児血清を含む最小必須培地（ＭＥＭ）における腫瘍細胞の増殖に対するその作用を研究することである。薬剤に曝された細胞（２群(in duplicates)）を、加湿CO₂インキュベーター中、37℃で、腫瘍細胞の個体数倍増時間に依存して２〜４日間インキュベートする。インキュベーションの最後に細胞を計数して、同一の条件下における非処理の対照細胞の増殖と比較することによって細胞増殖阻害の程度を計算する。使用する細胞系の型は、個々の要求に依存して実験毎に変更されている。合衆国の国立癌研究所(National Cancer Institute、ＮＣＩ)は、in vitroでの抗癌剤の評価に対してKB細胞（ヒト鼻咽頭癌）を使用することを推奨している。細胞増殖阻害は、薬剤で処理したものと、薬剤で処理していない対照のタンパク質含量を定量すること（ローリー法）によって測定される。また、ＮＣＩは、植物抽出物および関連する天然産物の抗癌能力の評価に対してマウス白血病P388の懸濁培養物を使用することも推奨している。本発明者らは、抗癌活性についてのin vitroアッセイのために、マイクロタイタープレート中で培養したマウス白血病L1210細胞をルーチン的に用いた。白血病L1210の細胞個体数倍増時間は10〜11時間であり、薬剤に48時間（対数増殖の３〜４世代）曝すことによりその抗腫瘍活性の評価を行う。本明細書で報告した増殖阻害研究のために、全ての保存溶液および希釈溶液は無菌の0.9％NaCl溶液を用いて作った。細胞培養においては、マイクロタイタープレート（0.18ml／ウェル）中の各阻害剤濃度に対して２群ずつ２〜５×10⁴細胞／mlを接種した。阻害剤は、それぞれの場合において0.02ml容量に１：10希釈になるように加えた。マイクロタイタープレートにカバーをして、CO₂５％を含有する空気を入れた加湿CO₂インキュベーター中で48時間インキュベートした。インキュベーションの最後に、各ウェルのアリコートを正確に容積を測った等張生理食塩水に加えて、電気細胞カウンターで計数した。高濃度のヤドリギ抽出物は急速な細胞断片化(f ragmentation)を引き起こすので、結果が損なわれないように細胞数の計数前に試験用マイクロタイタープレートを顕微鏡でルーチン的にチェックした。細胞生存度はトリパンブルー排除によって測定した。薬剤濃度のlogに対して細胞増殖阻害のパーセント（生理食塩水で処理した対照の細胞密度と比較したもの）をプロットすることによって結果を計算し、グラフから決定される、細胞増殖の50％阻害（ＩＤ₅₀）を引き起こす濃度として表した。腫瘍細胞系における薬剤の細胞毒作用も評価することができるが、これらの実験には長時間かかり、より費用がかかる。これらの研究においては、薬剤で処理した細胞を洗浄して薬剤を除去し、次いで軟寒天または適切な培地中で培養し、生存している細胞が繁殖して微視的なコロニーを形成する能力によって細胞生存度を評価する。ある一定の薬剤濃度で得られた細胞コロニーの数を、非処理対照から得られたものと比較して、細胞死滅または細胞毒活性を評価する。ヤドリギ (mistletoe)抽出物を用いた本発明者らの研究においては、EMT-6細胞（マウス乳腺癌）の懸濁培養液を使用した。これらの細胞は、10％透析ウシ胎児血清および抗生物質を含有するイーグルのＭＥＭ（F14）中で増殖させた。細胞懸濁液を攪拌し、ペレットを10％透析ウシ胎児血清を補給したSpinner's培地中に懸濁し（7 0細胞／ml）、プラスチック製のペトリ皿に入れて２時間インキュベートして細胞を接着させた。このとき、細胞を種々の濃度の抽出物に２〜24時間曝した。次いで、培地を除去して薬剤を含まない培地に代えて、皿を５〜７日間インキュベートした。コロニーをメチレンブルー（0.01％KOH中0.33％）で染色し、自動コロニーカウンターで計数した。EMT-6細胞の培養効率は46％であった(Khwajaら， 1986，Oncology，43（補遺１）:4250)。５．４．４．抗ウイルス活性種々の薬剤の抗ウイルス活性は、HeLaまたはH9リンパ腫細胞のようなヒト細胞系の細胞培養において確かめることができる。これらの細胞にウイルスを感染させ、ウイルスを細胞培養液中で増殖させる。ウイルスが細胞溶解または細胞変性作用を生じる能力が終点としてみなされる。したがって、H9細胞のHIV感染は、多核細胞の産生を媒介する。細胞変性作用が、ある一定の濃度の薬剤によって低減され、または排除される場合、抗HIV剤としての可能性を示すものである。これらの結果は、細胞培養におけるウイルス酵素の評価、例えば、ウイルス逆転写酵素の発現量を調べることによって確かめることができる。ウイルス酵素の発現の低下は、薬剤治療の抗ウイルス効果を裏付けるものである（Khwaja，T．A．米国特許第5,565,200; J．Levyら，1984，Science225:840）。５．５．化学成分を分析するための分析方法個々の化学成分を分離して分析する方法には、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、質量分光法（ＭＳ）、ＧＣ−ＭＳ、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ＨＰＬＣ−ＭＳ、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、ゲルクロマトグラフィーおよび逆相クロマトグラフィー（ＲＰＣ）など多くの方法がある。これらのクロマトグラフィーは、分析スケールまたは分取スケールのいずれかで行なわれ得る。未知の成分の実際の化学構造を決定するには、核磁気共鳴（ＮＭＲ）および質量スペクトル断片化(fragmentation)分析が典型的に用いられる。クロマトグラフィーのタイプの決定は、生物活性の原因である可能性の高い化学成分に依存するであろう。例えば、生物活性が脂肪酸による可能性がある場合、脂肪酸をエステル化してエステルをＧＣで分析する。アルコール基を有する有機化合物に対しては、それらを修飾してエーテル、シリル誘導体またはその他の極性の低い官能基を調製する。これらの誘導体は、ＧＣによる分析に適している（Steinkeら，1993，Planta Med．59:155-160;Breuら，1992，Arznelm．-Forsch /Drug Res．42(1):547-551）。活性がフラボノイド類による可能性が高い場合、ＨＰＬＣが最適な方法である。逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）は、種々の植物性薬剤(botanicals)、具体的にはサンザシ、トケイソウ、カミルレ、イチョウ由来のフラボノイド類を分析するのに用いられている（Piettaら，1989，Chromato graphia 27(9/10): 509-512）。植物成分はＴＬＣによって定量的に測定され（V anhaelenおよびVanhaelen-Fastre，1983，J．Chromatography 281:263-271）、ニンニク）はＭＳ−分析によって定量的に測定される。「脂質の分析(Analysis of Lipids)」，K．D．Mukherjee、「ステロイドの分析および特性付け(Analysis and Characterization of Steroids)」，H．Lamparczyk，J．Sherma，および「ペプチドおよびタンパク質の高速液体クロマトグラフィー(High-Performance Li quid Chromatography of Peptides and Proteins)」，C．T．MantおよびR．S．H odgesのクロマトグラフィーのＣＲＣハンドブックが入手可能であり、これにはカラムおよび溶媒系が記載されている。５．６．画分の分析別の実施態様においては、公知の生物活性を有する別個の化学成分に基づいたフィンガープリント(fingerprint)よりもむしろ、化合物の規定の画分またはクラスに基づいたフィンガープリントを確立してもよい。植物性薬剤中のいくつかの化学成分は、密接に関連した成分の複雑な混合物を形成しているので、実際的な検討の点から、個々の成分よりも成分の画分またはクラスにおけるフィンガープリントの基礎を形成することが要求される。このようなタイプの成分の例としては、レクチン（糖結合性タンパク質）または糖タンパク質が挙げられる。分画分析の例は多数存在する（Gel Filtration Principles and Methods Pharmacia Biotech，Rahme i Lund:Sweden;Utsumiら，1987，J．Biochem．101:1199-1208）。５．７．医薬プリントが付された(pharmaprlnted)植物性薬剤の具体例下記の例は、ＡＩＤＳおよびある一定の癌の治療に有効なヤドリギの医薬品級の抽出物についての一般的な製造を示すものである。最初に、抽出物を、その化合物(chemical entlties)（成分）の種々のクラスに分けた。主な生物活性は、そのタンパク質画分に関係しており（＞95％）、残りの活性はアルカロイド画分に分類された。定量的フィンガープリントは、種々の糖に対して異なる結合親和性を有する特定のタンパク質画分の測定に基づくものである。標準医薬品級の定量的フィンガープリントは、画分が、ラクトース、ガラクトース、メリビオース、N-アセチル-D-ガラクトサミンまたはフコースと結合することが可能なCa⁺⁺依存性糖結合性タンパク質を0.01〜1.0mg／ml含み、約0.50pg/ml以下の阻害濃度を示すことを要求する。本節で用いる場合、「阻害濃度」は、その糖結合性タンパク質がある一定の癌細胞系のin vitro増殖を阻害する能力の尺度である。阻害濃度は、特定の癌細胞系の増殖の50％阻害を引き起こすのに必要な抽出物溶液１ml 当たりの糖結合性タンパク質のμｇで表される。阻害濃度の測定に用いられる好ましい細胞系は、L1210として識別されている白血病細胞系である。この特定の癌細胞系は、いくつかの供給元から市販されている。L1210細胞は、従来、薬剤の効力を試験するためのスクリーニング系として用いられてきた。L1210細胞の培養および増殖についての詳細は、いくつかの科学論文に記載されている（Onco logy 43:42-50およびExperientla 1980，36:599-600）。阻害濃度を測定するのに使用することができるその他の細胞系としては、再現可能な結果を示すKB細胞またはその他の急速増殖細胞系が挙げられる。所与の細胞培養系においては巨大分子合成の阻害のようなその他のパラメーターが用いられ得る。ヤドリギ抽出物を医薬品級と同定するには、好ましくは、抽出物の標準フィンガープリントがラクトース、ガラクトース、メリビオース、N-アセチル-D-ガラクトサミンまたはフコースと結合することが可能な１以上のCa⁺⁺非依存性糖結合性タンパク質画分も含むことが必要である。Ca⁺⁺非依存性糖結合性タンパク質の定量的レベルは、各画分について約0.1〜2.0mg／mlの間でなければならない。１以上のCa⁺⁺非依存性糖結合性タンパク質画分の阻害活性は、好ましくは約0.5μ ｇ/ml以下である。５．７．１．植物源／抽出方法ヤドリギ粉末（生物材料を加工処理したもの）は、公知の粉化操作のいずれかにしたがって調製される。あらゆる種類のヤドリギを用いることができるが、抽出物の不良率を低レベルに維持するために、ヤドリギ抽出物は、韓国のオークの木において見出されるビスカムアルバム(viscum album)、コロラタム種(colorat um species)、またはヨーロッパ中で一般的に見出されるビスカムアルバムL.種( Viscum album L．species)から調製するのが好ましい。さらに、ヤドリギは、採取後すぐにフラッシュ(flash)冷凍して、冷凍状態で粉末に摩砕するのが好ましい。液体窒素または同様の低温の液体によるフラッシュ冷凍が好ましい。粉末の調製にはヤドリギ植物全体を使用することができる。好ましい採取時期は、液果が熟しているときである。ヤドリギ中の複雑な成分全てが変化しやすく比較的知られていない性質を有するので、本発明の方法の要求を満たす抽出調製物の数を最高にするためには上記の好ましい工程の全てにしたがうのが好ましい。ヤドリギ植物の新鮮な軟質部分（葉、幹および／または液果など）を加圧して、細胞液をしぼり取ってもよく、水または無菌生理学的食塩水で希釈することにより水性抽出物が得られる。ヤドリギ粉末は、実質的に純粋な水溶液を用いて抽出される。抽出用の溶液は、抽出の進行を高めるための付加成分を含み得る。抽出物は、ヤドリギ液汁からのタンパク質の抽出を高めるのに十分な量の塩化カルシウムまたは塩化ナトリウムなどの塩を含み得る。0.02Ｍのオーダーの塩濃度が好ましい。また、植物細胞壁からのタンパク質の抽出を高めるためにTRITON（登録商標）×100などの界面活性剤を加えてもよい。抽出剤は、0.02ＭのTris緩衝剤を用いて約7.8のpHにするのが好ましい。抽出操作においては、下記に示したレベルのタンパク質を産生するような量の抽出用ヤドリギに適切な量の抽出剤を利用するべきである。好ましくは、約100〜400グラムのヤドリギ粉末を、約1000〜4000mlの水溶液を用いて抽出する。粉末を溶液に混合して、１〜４時間そのまま放置する。抽出後、残った粉末微粒子を濾過、遠心分離またはその他の通常の分離技術によって分離して水性ヤドリギ抽出物を得る。５．７．２．分画分析ヤドリギ抽出物の含有分の薬理学的分析の前に、ヤドリギ抽出物を、その全生物活性についてアッセイするのが好ましい。抽出物の生物学的評価は、培養中のマウス白血病L1210の増殖の阻害に基づいて行なわれる。この最初の試験から、抽出物のＩＣ₅₀(非処理の対照と比較した、L1210細胞の増殖における50％阻害を引き起こす抽出物の濃度（μｇ/ml））が測定される。抽出物の生物活性は、「活性単位」（A.U.）という用語で表されるが、これは、そのＩＣ₅₀値（μｇ/ml ）に対する抽出物の濃度（抽出物μｇ/mlで表される）の割合を示すものである。この抽出物評価の最初の工程に合格するためには、１％抽出物１ml（全抽出物 10mg）は、100単位以上の活性を含まなければならない。A.U.値が100未満の抽出物は却下され、合格品級の抽出物は、その生物学的に活性な成分の特定値(speci fic values)および割合を確認するために下記のようにしてさらに分析される。ヤドリギ抽出物の、その種々のタンパク質画分への分離は、好ましくは、図１０に概略的に示したようなアフィニティカラムクロマトグラフィーによって行なわれる。この分離は、好ましくは、糖に結合するためにCa⁺⁺が必要なタンパク質と、非Ca⁺⁺依存性のタンパク質とを分離するために２段階で行なわれる。エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）またはその他のキレート剤を含む緩衝液を用いて、所望の特異的な糖、すなわちラクトース、ガラクトース、メリビオース、N-アセチル-D-ガラクトサミンおよびフコースで処理したアフィニティカラムからCa⁺ ⁺ 依存性糖結合性タンパク質を溶離させる。次いで、得られた画分について定量的タンパク質含量を分析する。同様のクロマトグラフィーの原理に基づくその他のアフィニティカラムは、例えば、マンノース、ラムノース、マルトース、アシアロフォイチン(asialofeutin)、グルコサミンおよびN-アセチルグルコサミンなども使用し得る。これらの糖に特異的な抽出物中のレクチンの適正なレベルおよび活性は、上述の糖特異的レクチンについての基準を満たす抽出物中のそれらのレベルを測定することによって確認することができる。ＥＤＴＡまたはＥＧＴＡ（エチレングリセリル四酢酸）含有緩衝液を用いて糖特異的アフィニティカラムのそれぞれについて溶離を行った後、各アフィニティカラムに結合した糖に対応する糖をそれぞれ含有する緩衝液でカラムの溶離を行う。セファロース（登録商標）4Bが好ましいカラム材料である。この第２の溶離で得られた種々の画分には、非Ca⁺⁺依存性糖結合性タンパク質が含まれている。これらの画分のそれぞれのタンパク質含量も定量的に測定する。タンパク質の定量は、ニンヒドリンに基づく試験、分光学的測定およびBio-RadまたはPierce分析などの通常の定量分析操作のいずれかを用いて行うことができる。上記のような複合的な緩衝液(multiple buffers)の使用は、それぞれの種類のタンパク質の総レベルが測定されるので好ましい。アフィニティカラムクロマトグラフィーは、当業者に周知であり、その糖結合特異性に基づいて抽出物からタンパク質を分離するのに非常に適した通常の分離技術であるので好ましい。その他の分離操作も、選択された糖結合性タンパク質のそれぞれの正確な測定を行い得れば利用してもよい。抽出物中のレクチン（糖結合性タンパク質）含量、アルカロイド画分およびビスコトキシンレベルを分析する別の方法は、硫酸アンモニウムの使用が関与する。この方法においては、ヤドリギ調製物の全タンパク質を70％硫酸アンモニウムを用いて沈殿させる。調製物を遠心分離し、沈殿物（この沈殿物にはビスコトキシンおよび糖結合性タンパク質（レクチン）の混合物が含まれる）を酸−加水分解セファロース4Bカラム上で分離させる。結合したレクチンは、上記のような特異的糖を含む緩衝液を用いてカラムから溶離することができる。特異的糖結合性タンパク質を同定するためのアフィニティクロマトグラフィーを、上記のようにして行うこともできる。カラムを通って最初に扇形に広がる非結合タンパク質には、通常のタンパク質定量分析にしたがって定量されるビスコトキシンが含まれる。硫酸アンモニウム−上澄み液（この上澄み液にはアルカロイド画分が含まれる）を凍結乾燥して、アルカロイドをクロロホルムで抽出する。クロロホルム残液から秤量法またはその他の通常の方法によっても定量される全アルカロイドが得られる。フィンガープリントを作製するために使用される５種類のCa⁺⁺依存性および非 Ca⁺⁺依存性糖結合性タンパク質画分は、ラクトース、ガラクトース、メリビオース、N-アセチル-D-ガラクトサミンまたはフコースと結合するものである。糖結合性タンパク質（Ca⁺⁺依存性および非Ca⁺⁺依存性の両方）のそれぞれの濃度は、抽出物中の総タンパク質含量の0.1〜2.8重量％である。本発明の要求を満たすために抽出物に必要な比相対的(specific relative)重量パーセント範囲を表１に示す。表２および３には、ヨーロッパと韓国のヤドリギからそれぞれ調製された医薬品級の抽出物についての重量パーセント範囲を示す。抽出物の総タンパク質含量に対する各糖結合性タンパク質の相対的な割合は、抽出条件に関係なく全く一定である。しかしながら、種々の糖結合性タンパク質の実際の濃度レベルは、各抽出物において、ヤドリギおよび水性抽出剤の相対量、抽出の長さ、および温度などのいくつかの要因に依存して変動するであろう。抽出物を分析して種々の特定の糖結合性タンパク質の濃度レベルを測定し、これらの濃度レベルを、抽出物が本発明の医薬品級の要求を満たすかどうかを決定する主要な方法として用いることが好ましい。しかしながら、抽出物を希釈または濃縮して好ましい濃度範囲外のタンパク質濃度レベルにしてもよい。ここで、糖結合性タンパク質の相対的な割合は、一般的なヤドリギ抽出物については表１に示した範囲内のままであり、ヨーロッパおよび韓国のヤドリギ抽出物についてはそれぞれ表２および表３に示した範囲内のままである。抽出物は、一度医薬品級と同定されたら、再水和用の粉末として乾燥して保存され得るものであり、後でＡＩＤＳまたは癌を治療するために使用することが可能である。表１医薬品級のヤドリギ抽出物についての一般的な定量的フィンガープリント表２医薬品級のヨーロッパヤドリギ抽出物についての定量的フィンガープリント表３医薬品級の韓国ヤドリギ抽出物についての定量的フィンガープリント抽出物中のCa⁺⁺依存性糖結合性タンパク質の好ましい濃度レベルは、約0.01〜 1.0mg／mlの範囲内である。本発明の方法は、抽出物が医薬品級の範囲内にあるかどうかを確認するためにCa⁺⁺依存性糖結合性タンパク質の１種のみを測定することによって行うことができる。しかしながら、糖結合性タンパク質、例えばガラクトース、ラクトースおよび／またはN-アセチル−D-ガラクトサミン特異的タンパク質の２種以上を測定するのが好ましい。より好ましくは、抽出物は、５種全てのCa⁺⁺依存性糖結合性タンパク質の濃度レベルが上記の定量的フィンガープリント範囲を満たすかどうかを測定するために分析される。また、この方法は、特定のCa⁺⁺依存性糖結合性タンパク質の３または４種のさまざまな組み合わせを測定することによって行うこともできる。濃度範囲および阻害活性範囲を表４、５および６に示す。表４医薬品級のヤドリギ抽出物についての定量的および生物活性フィンガープリント表５医薬品級のヨーロッパヤドリギ抽出物についての定量的および生物活性フィンガープリント表６医薬品級の韓国ヤドリギ抽出物についての定量的および生物活性フィンガープリント抽出物中の非Ca⁺⁺依存性糖結合性タンパク質の濃度レベルは、約0.10〜2.0mg ／mlの範囲内でなければならない。本発明の方法は、抽出物が医薬品級の範囲内にあるかどうかを確認するために、非Ca⁺⁺依存性糖結合性タンパク質の１種のみを測定することによって行うことができる。しかしながら、上記のように、２種以上の非Ca⁺⁺依存性糖結合性タンパク質レベルを測定するのが好ましい。より好ましくは、抽出物は、５種全ての非Ca⁺⁺依存性糖結合性タンパク質の濃度レベルが要求される濃度範囲を満たすかどうかを測定するために分析される。最も好ましい方法は、完全なタンパク質フィンガープリント、すなわち、10種全ての糖結合性タンパク質画分におけるタンパク質濃度を測定することを含む。この最も好ましい実施態様においては、10種全てのタンパク質画分が上記のような要求される濃度レベルを持たない限り、抽出物は医薬品級の抽出物であると同定されないか、さもなければ認められない。標準フィンガープリントパラメーターを表４、５および６に示す。抽出物を本発明による医薬品級として同定するためには、種々のタンパク質画分の生物活性と、それぞれの濃度レベルと組み合わせて用いられる。各Ca⁺⁺依存性糖結合性タンパク質群を構成する種々のタンパク質は、それぞれ、約0.001〜0 .5μｇ/mlの阻害濃度を示さなければならない。各非Ca⁺⁺依存性糖結合性タンパク質を構成するタンパク質も、それぞれ、約0.0001〜0.5μg/mlの阻害濃度を示さなければならない。阻害作用の測定方法は、前述の参考文献を含む多数の科学論文に記載されている。阻害作用は白血病L1210細胞に関してin vitroで測定するのが好ましい。この操作が好ましいのは、L1210細胞は容易に入手でき、周知の培養操作によって容易に維持され、そして一貫して再現性のある結果が得られるためである。各糖結合性タンパク質画分の阻害濃度は、加える画分の量を増大させて、細胞増殖が対照培養と比較して50％阻害されたときに測定することによって測定される。各糖結合性タンパク質の濃度レベルおよび阻害濃度を測定するのが好ましく、その抽出物を本発明による医薬品級と同定するためにはそれら全てが上記ならびに表４、５および６に示した範囲内にあることが好ましい。指摘した糖結合性タンパク質の濃度レベルおよび／または阻害濃度が一度確認されたら、その抽出物は、上記の範囲を満たす場合、医薬品級と同定される。１以上の要求が満たされない場合、すなわち、試料フィンガープリントが標準フィンガープリントと適合しない場合、その抽出物は却下される。医薬品級と同定された抽出物は、次いで、ＡＩＤＳおよび癌のような病気の治療のための治療プログラムにおいて使用される。医薬品級抽出物は、ＡＩＤＳの治療において有用なだけでなく、免疫系が抑制された個体を治療するためにも用いられ得る。抽出物が上記の範囲を超えるタンパク質レベルを有する場合、その抽出物タンパク質濃度を確認された範囲よりも低くするために要求されたとおりに希釈され得る。抽出物タンパク質レベルが範囲よりも低い場合、その抽出物は拒否され、医薬品級とは同定されない。糖結合性タンパク質フィンガープリントのより厳密な分析を始める前に、最初、抽出物を全活性についてスクリーニングするのが好ましい。ある一定の全活性レベルを満たさない抽出物は、本発明のより特定的なタンパク質フィンガープリント要求も満たさないということがわかった。活性単位は、抽出物全体が試験されるという相違点はあるが、個々のタンパク質画分に対する手法と同じ手法で測定される。本発明によれば、抽出物は１00AU以上の活性を有していなければならない。表７は、最初のスクリーニングの結果を示すものであり、ここでは、いくつかの異なるヤドリギ抽出物が、前述のL1210細胞を用いてその生物活性を測定するためにスクリーニングされている。この表からわかるように、ISCADORなどの市販の調製物は、最初のスクリーニング試験を満たさず、よって本発明による医薬品級ものではない。また、ISCADOR抽出物は、本発明のよりきびしい特定的なタンパク質フィンガープリント要求も満たさない。しかしながら、抽出物n-T4 GENおよびT4GENは、本発明の特定的なタンパク質濃度フィンガープリントを満たしており、いずれも最小値100A.U.よりも十分高い活性レベルを有している。このスクリーニング操作は、非医薬品級抽出物をより時間のかかるタンパク質フィンガープリンティングを行うことなく比較的速やかに同定することができるので、好ましい。抽出物がこの最初のスクリーニング工程に一度合格したら、次に、この抽出物は、本発明による医薬品級と同定されるためにはさらなるタンパク質フィンガープリント要求を満たさなければならない。表７活性単位(A.U.)に基づくヤドリギ抽出物の生物活性糖に結合しないタンパク質を含む抽出物の画分を、その抽出物が医薬品級であるか否かを同定するのに用いられるさらなるフィンガープリントを得るために分析することも好ましい。図９に示したように、抽出物から糖結合性タンパク質を分離した後、非結合タンパク質を含む画分が残る。この非結合タンパク質画分には「アルカロイド」画分およびビスコトキシン画分が含まれる。この２種類の画分は、セファデックスG-75カラムまたはその同等物を用いるカラムクロマトグラフィーによって互いに単離することができる。アルカロイド画分中のアルカロイドの量は、１パーセント抽出物１ml当たり約10〜50μｇである。タンパク質画分中のビスコトキシンの量は、１パーセント抽出物１ml当たり約10〜40μｇである。前述したように、１パーセント抽出物とは、最初の全非乾燥植物材料１グラムを水性抽出剤100mlを用いて抽出したものである。ビスコトキシンおよびアルカロイドの量は、100ml当たりに抽出される植物材料の量の増加に比例して増加するであろう。使用の際、抽出物はそのまま使用してもよく、または適当な医薬担体で希釈してもよく、ＡＩＤＳまたは特定の癌の治療のために公知の手法にしたがって投与される。ＡＩＤＳの治療に対しては、抽出物は、好ましくは１パーセント抽出物を0.01〜１mの範囲の用量で皮下注射される。２および５パーセント抽出物のようなより濃度の高い抽出物を使用してもよい。要求される用量に応じてより高濃度の抽出物も使用し得る。注射は好ましくは１週間に２回行なわれるが、より高い頻度で行ってもよい。癌性腫瘍に対しては、抽出物はその腫瘍に直接注入されるか、または皮下注射される。５．７．３．生物活性分析本明細書中でn-T4GENと識別された抽出物を、その抗ＨＩＶ活性を証明するために試験した。n-T4GENを分析したところ、表６に示した糖結合性タンパク質フィンガープリントを満たすことがわかった。アルカロイドおよびビスコトキシン画分中のタンパク質の量も、要求されるフィンガープリント範囲内にあることがわかった。n-T4GEN抽出物は韓国ヤドリギから調製した。n-T4GENを、試験溶液１ ml当たり１パーセント抽出物１A.U.の濃度（試験溶液１ml当たり抽出物10μｇに等しい）になるような量で培養ウェルに加えた。この濃度のn-T4GENは、H9リンパ球ヒト白血病細胞においてＨＩＶ−誘導細胞変性作用を阻害し、同時にその感染細胞におけるウイルス逆転写酵素レベルを低下させた。ヒト免疫抑制ウイルス（ＨＩＶ）はT4リンパ球に感染する。H9ヒトリンパ腫細胞系においては、ウイルスによって巨大な多核性細胞が生じる。ウイルス感染の３〜６日後、多核細胞の数は、試験される薬剤の存在下および不存在下において定量した場合、ウイルス増殖の程度に相関している。これらの細胞変性作用およびウイルス逆転写酵素のアッセイを用いて、n-T4GENの抗ＨＩＶ効果を証明した。試験溶液１ml当たりの１パーセントn-T4GEN抽出物１μｇ/mlを用いる抗ＨＩＶアッセイは下記のようにして行った：ＨＩＶ接種材料を、精製された鳥類骨髄芽球症ウイルスRT（BRL Labs、Gaithe rsberg、メリーランド州）を用いて逆転写酵素（ＲＴ）活性に対して標準化し、２×10⁶細胞当たり0.02ＲＴ単位のＨＩＶでボリブレン(polybrene)処理H9細胞を感染させるのに用いた。このウイルスを37℃で２時間吸着させ、次いで細胞を２回洗浄し、10％ウシ胎児血清を含有するRPMI 1640中に２×10⁶細胞／mlで再懸濁して、１mlずつ24−ウェルプレート(Falcon Division，Becton Dickinson社、Cockneyville、メリーランド州）に分散した。感染の５〜６日後に多核巨大細胞形成が観察され、0.1mlの無水メタノール中に0.1mlずつ分散させ、巨大細胞を顕微鏡で観察しながら数えることによってその細胞変性作用（ＣＰＥ）を定量的に測定した。試験溶液１ml当たり1A.U．（10μg）の１パーセントn-T4GEN抽出物を用いた抗ウイルス処理によるＣＰＥの阻害を、未処理の感染H9細胞と比較した。逆転写酵素活性を、600×ｇで30分間清澄化し、10％ポリエチレングリコール −0.13Ｍ NaCl中で４℃にて18時間沈殿させ、600×ｇで60分間遠心分離した１ml 培養アリコートを用いて測定した。ペレットをグリセロール−Tris緩衝液（50％グリセロール、25mM Tris HCl pH 7.5、５mMジチオスレイトール、15mM KCl、0. 025％Triton-X、および0.25mM EDTA）中に溶解した。ＲＴアッセイは既に発表されている方法(Levyら，1984，Science 225:840;Hoら，1984，Science 226:451) を、40mM Tris HCl pH 7.8、2.2mMジチオスレイトール、10mM MgCl₂、50mM KCl 0.03％Triton-X、25μCi ³H-チミジン三リン酸（New England Nuclear、ボストン、マサチューセッツ州）および50pg/mlポリrAオリゴ^dt12-18（BRL、Gaithersb urg、メリーランド州）を含有する最終反応混合物を用いて修正変更したものである。バックグラウンドカウントをポリrAオリゴ^dt12-18を鋳型として用いて測定し、そのポリrA dTプライマーcpmから引き算してＲＴ−活性によるチミジン取り込みを特異的に測定した。試験結果を下記の表８に示す：表８培養中のH9リンパ腫細胞へのＨＩＶの感染力におけるヤドリギ抽出物の作用この結果から、非毒性濃度のn-T4GENは、H9リンパ腫細胞においてＨＩＶ誘導細胞変性作用を阻害するということがわかる。これらの濃度（10μｇ/ml）では、ウイルス逆転写酵素も有意に（67.2％）阻害する。ここで、T4GENと識別される抽出物をn-T4GENといっしょに試験し、その抗癌活性を証明した。T4GENを分析したところ、表５に示された糖結合性タンパク質フィンガープリントを満たすことがわかった。アルカロイドおよびビスコトキシン画分中のタンパク質の量も要求されるフィンガープリント範囲内にあることがわかった。T4GEN抽出物は、ヨーロッパヤドリギから調製した。 T4GENおよびn-T4GENの抗癌活性を、C3H乳腺癌16/Cの皮下移植片を有する動物において研究した。この腫瘍はC3H雌マウス中で肺通過腫瘍(lung passed tumor) として維持されている。この実施例では、腫瘍（１×10⁵細胞）を18〜20ｇのB6C 3F1ハイブリッド雌マウスに移植した（Ｓ．Ｃ．）。後日、腫瘍を有する動物を無作為化し、種々の処置群に分けた（10マウス／群）。対照群の15匹の動物には、処置期間中、生理学的食塩水のみを与えた。処置（ｉ．ｐ．）は、移植の48時間後に開始し、14日間投与した（１日１回注射）。５、９および14日目に動物の重さを計ることによって、毒性作用を評価した。移植後21および28日目に腫瘍を測定し、その結果を、式（１×ｗ²）／２（ｌ＝腫瘍の長さ、ｗ＝腫瘍の幅、単位：mm）を用いて腫瘍の重量として示す。下記に示した結果から、T4GEN抽出物は、１mlの１パーセント抽出物／kg（20m g/kg）、ｇｄ（１〜14）に相当する投与計画にて、この腫瘍の増殖を98％阻害したことがわかる。同じ実験において、n-T4GEN（５mg/kg、ｇｄ１〜14）は、乳腺癌16/Cの増殖を33％阻害したが、処置された動物の30％は、実験の終了（93日）まで腫瘍がないままであった。この動物モデルは、ヒト乳癌に対して一般に容認されたモデルである。この結果を下記の表９に示す：表９ B6C3F1雌マウスにおけるC3H乳腺癌16/Cの皮下移植片の増殖に対する T4GENおよびn-T4GENの作用*１パーセント抽出物１mlで示される量５．８．医薬プリントが付された材料の使用方法植物性薬品材料にフィンガープリントを確立した後、次に個々の試料を分析してそれらが容認される基準内に入るかどうかを判定する。その試料が一度承認されたら、それはヒトおよび動物に関連したさまざまな病気に適している。そのような材料は、臨床試験において一貫性のある品質の材料および試験用の正確な用量の製剤を得るために有用である。医薬プリントが付された材料は、材料の一貫性が定量的毒性分析に有用である動物における毒性学的試験にも有用である。多くの場合において、この材料は、分析的または生物学的使用のための基準材料として用いられるであろう。医薬プリントが付された植物性薬品材料は、植物性薬剤が関連するあらゆる病気の状態に有用である。例えばLeungおよびFoster，1996およびHerbal Drug and Phytopharmacueticals，1994を参照されたい。病気の状態または治療適応症のより具体的な例としては、ＡＩＤＳ、軽度〜中度のうつ病、抗関節炎、抗癌、下痢止め、抗炎症、ＧＩによる制吐、抗リウマチ、抗痙攣、抗潰瘍、抗菌、抗突然変異誘発、抗酸化剤、抗ウイルス、関節炎、喘息、血圧、良性前立腺肥大（ＢＰＨ）、気管支喘息、気管支炎、鎮静薬、大脳循環障害、コレステロール低下、肝硬変、皮膚科学的抗炎症、糖尿病、利尿、強烈な瀉下、月経困難、消化不良、環境ストレス、去痰、フリーラジカルスカベンジャー、ＧＩ窮迫、痔、肝炎、肝保護、高血脂症、過プロラクチン血症、免疫調節活性、繊維素溶解上昇、細菌感染に対する低抗性、炎症、不眠、授乳、肝臓保護、長寿、月経周期調節、偏頭痛、筋肉痛、骨関節炎、痛み、抹消血管疾患、血小板凝集、ＰＭＳ、月経促進(puromot e menstrual flow)、前立腺障害、トリグリセリド低下、月経痛緩和、気道感染（ＲＴＩ）、網膜症、リウマチ、鎮静剤、睡眠促進剤、咽喉炎、頭髪成長刺激、皮相創傷治癒、耳鳴り、局所湿疹（皮膚炎）、尿路感染（ＵＴＩ）、拡張蛇行静脈、静脈不全、または創傷治癒などが挙げられる。下記の実施例は単に説明を目的とするものであり、いかなる場合にも本発明の範囲を限定するものではない。６．実施例：ノコギリパルメット（Saw Palmetto）、serenoa repens、serenoa serrulata）Sabal serrulata ６．１．植物源／抽出方法ノコギリパルメットは、合衆国原産の小さいヤシである。植物性薬品調製物においては、その小さくて茶色がかった色の液果が膀胱および前立腺の病気を治療するために長い間使用されてきた。ノコギリパルメットの抽出物は、種々の方法、典型的には、ヘキサン抽出または超臨界二酸化炭素抽出にて調製される。植物性薬品材料を加工処理し、抽出する方法を記載している抽出方法が上記されている。また、Madaus、S.A.から市販されている脂質抽出物およびけん化抽出物もある。６．２．販売元／製品名 Sabal serrulata抽出物の販売元は多数存在する。下記の名称が用いられている:IDS 90(Weisserら，1996,The Prostate 28:300-306);Sanofi Winthrop GmbH （ミュンヘン、ドイツ）から市販されているStrogen Porte，Talso（商標名）， SG290Talso（商標名）uno。また、Madaus S.A（ケルン、ドイツ）からも市販されている。Permixon（商標名）は、Centre de Recherches P．Fabre(Castres,フランス）から入手可能である。親油性抽出物、LSESP抽出物およびPA109抽出物などの何種類かのPermixon抽出物が入手可能である。入手可能な別の抽出物は、Th erabel Pharma(ベルギー)から市販されているSerenoa repensの精製抽出物Prost aserene（商標名）である。ノコギリパルメットも下記の会社によって製造されている:NaturaLife、Herbal Choice、Botalia Gold、Herb Pharm、PhytoPharmic a。６．３．良性前立腺肥大症の症状の緩和のための臨床使用ヨーロッパにおいては、植物性薬品材料が、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）の全処方薬のほぼ半分を占めている(Di Silverioら，1993，Minerva Urol．Nefrol.4 5:143-9)。ＢＰＨに対して処方されるより一般的な植物抽出物、または植物性治療薬のいくつかは、Serenoa repens（ノコギリパルメット液果）、Pygeum afric anum（プラム樹皮）およびCucurbita pepo（かぼちゃの種）から得られる。ＢＰＨの治療に対して断然広く使用されている植物性薬品材料は、ノコギリパルメット液果の脂質抽出物である。ノコギリパルメット液果抽出物（ＳＰＢ−抽出物）は非毒性であり、広範な臨床試験において副作用はほとんどあるいは全く示されていない。ＳＰＢ−抽出物の最も広範な臨床試験は、フランスで行なわれた。これらの試験においては、ＳＰＢ−抽出物Permixonが用いられた。この抽出物は、1982年から市販されている。フランスの科学者らによれば、Permixonは非常に安全であり、有害な副作用の証拠はほとんどない。今日、Permixonおよびその他の種々の製品は世界の20ヶ国以上で入手可能である。近年、ＳＰＢ−抽出物に関するいくつかの研究が発表された。1984年には、Ch ampaultらが110人の外来患者における二重盲検偽薬対照試験を報告した(Champau ltら，1984，Br．J．Clin．Pharm．18:461-462)。この研究においては、30日間、55人の患者にＳＰＢ−抽出物Permixon（160mg、１日２回）が投与され、55人の患者に偽薬が投与された。この研究により夜間多尿、排尿障害の強さ、尿流量、および排尿後残尿感(post-micturition residue)において、統計的に有意な改善が報告されている。この報告には、５人の患者において小さい副作用（例えば頭痛）が記録されている。Di Silverioらは、３ヶ月間、ＳＰＢ−抽出物Strogen Forte（160mg、１日２回）による34人のＢＰＨ患者の治療について報告している（Di Silverioら、同上）。この研究の結果から、患者の60％において主観的な改善が見られ、それには、50％の患者における尿量の減少、53％の患者における前立腺体積のわずかな減少、ならびに血清テストステロンレベルの有意な増大および前立腺内ＤＨＴ濃度の有意な減少が含まれる。また、この著者らは、1983 〜1985年に、ＢＰＨ患者におけるＳＰＢ−抽出物Strogen Forteの効力および許容可能性(tolerabillty)を報告する研究も概説している。1993年には、Romicsらが42人の患者における１年間の治療研究について報告した(Romicsら，1993，Int ernat．Urol．and Nephrol．25(6):565-569)。この研究においては、夜間排尿（ 68.4％）、残量（74.7％）、ならびに患者の80％における尿の流れの中断および排尿後のしたたりなどの客観的な症状において有意な改善が報告された。副作用は報告されなかった。別の研究においては、Vohlensieckらが、Sabal serrulata のＳＰＢ−抽出物による1334人のＢＰＨ外来患者の12週間の治療研究を報告している(Vohlensieckら，1993，Fortsch der Med．111(18):323-326)。この治療においては、残留尿の量が50％減少しており、頻尿症が平均37％減少しており、夜間多尿症が54％減少している。排尿時に痛みを有する患者の数は、75％から37％に減少した。さらに、Vohlensieckらは、これらのケースの80％以上においてこの薬剤の効力が「良好〜きわめて良好」であり、患者の95％以上において許容可能性が「良好〜きわめて良好」であることを見出した。したがって、ノゴギリパルメットは、ＢＰＨおよび／または尿機能不全を治療および／または改善するのに有用である。組み合わせ治療がその他の研究者によって報告されている。具体的には、ＳＰＢ−抽出物をかぼちゃの種(Carbinら，1990，Br．J．Urol．66:639-641)の抽出物（53人の患者）またはウリカ(urica)抽出物（2,080人の患者）と組み合わせて用いている(Schneiderら，1996，Fortsch der Med．113(3):37-40)。これらの研究の全てがＢＰＨおよび／または尿機能不全の治療におけるＳＰＢ−抽出物の効力を裏付けるものである。６．４．ノコギリパルメットの分画分析市販のノコギリパルメットのゲルキャップ(gel caps)の内容物の分画を、順相フラッシュクロマトグラフィーを用いて行った。この方法は、観察される質量回収（＞90％）、選択された基準物質（脂肪酸、そのエステル）の分離、ならびにその他の共生成成分の分離がきわめて良好であることから、好ましい分取クロマトグラフィー技術として選択された。利用した材料および方法の詳細な説明は下記のとおりである。ノコギリパルメット(Sereno repens)についての文献の広範囲にわたる調査によって、フィトステロール（β−シトステロール）、脂肪酸（パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ミリスチン酸、およびラウリン酸）、ならびにそれらのエチルエステルが、いくつかのアッセイ｛脂肪酸／エステル：５α −レダクターゼ(Weisser，1996，同上）、アンドロゲン受容体(Casarosa，1988 ）；フィトステロール（エストラジオールの活性の10％未満であるが、特にβ− シトステロール）；エストロゲン様活性(Duke，1985)｝において最も一貫性のある生物活性を有するノコギリパルメット中の成分であることがわかった。分取−ＣＣ法：市販のノコギリパルメットのゲルカプセルの内容物約５ｇを、 25mlのCH₂Cl₂に溶解した。得られた抽出物を、SiO₂が予め充填された分取フラッシュガラスクロマトグラフィーカラムに加えた。フラッシュＣＣ（カラムクロマトグラフィー）条件は下記のとおりである：カラム−60μｍ SiO₂；各移動相容量＝２カラム容量；下記の表に示した溶離プロフィールで画分を集めた。全回収量4.77ｇが92％全質量バランス(total mass balance)で得られた。分析キャピラリーＧＣ法：ＧＣシステムとしてはStarデータ処理ソフトウェアを備えたVarian GC/FIDを用いた。キャピラリーカラム（Restek RTX-2330、30ｍカラム、0.25μｍ、0.20μｍｄｆ）上に注入容量１μｌで注入し、下記のような温度勾配系：55℃に１分間、7.5℃／分、250℃に５分間保持、を用いることによって分離を行った。カラム流量は、注入スプリット比(injection split ratio) １：100で、1.0ｍｌ／分に維持した。用いたインジェクターおよび検出器温度は 260℃であった。ノコギリパルメットアッセイについての標準の供給元は、Aldri ch Chemical社（ミルウォーキー、ウィスコンシン州、ＵＳＡ）など多数ある。約５グラムの市販のＳＰＢ−抽出物（ゲルカプセルからのもの）を、塩化メチレン25mlに溶解した。この溶液を用いてフラッシュクロマトグラフィーを行った。このクロマトグラフィー系は、60μｍのシリカゲルおよび下記の溶離用溶剤から構成されていた：回収された移動相の各画分から記録された乾燥残留物の量は、下記のとおりであった：１（〜0.1ｇ）、２（〜2.5ｇ）、３（〜1.6ｇ）、４（〜0.1ｇ）、５（〜0.1ｇ）、６〜９（〜0.0ｇ）、および10（〜0.5ｇ）。フラッシュクロマトグラフィーによって回収された全乾燥残留物を計算したところ、4.77ｇであった。抽出物の最初の添加量は5.15ｇであり、抽出物の92％が乾燥残留物として回収された。６．５．生物活性分析文献の考察および本発明の方法の教示にしたがって、下記カテゴリーのバイオアッセイを選択してＢＰＨに対するノコギリパルメットの生物活性をin vitroで評価した：抗アンドロゲン、抗炎症、シクロオキシゲナーゼ／リポキシゲナーゼ（ＣＯ／ＬＯ）阻害、筋肉収縮性。これらのカテゴリーから、研究された特定のアッセイは以下のとおりである：5-リポキシゲナーゼアッセイ、シクロオキシゲナーゼ-1-アッセイ、シクロオキシゲナーゼ-2-アッセイ（Panlabs、ワシントン州）、および下記のようなジョージア医科大学で開発されたアンドロゲン受容体アッセイ。 6.5.1. ラット前立腺アンドロゲン受容体アッセイ：ジヒドロテストステロンに対する競合核受容体リガンド結合アッセイ 6.5.1.1 材料および方法動物日齢60日の雄ラット(体重300〜350g)をHarlan(ミズーリ州St．Louis)より入手し、空気調節されかつ12時間の明-暗サイクルで光調節された部屋に24時間入れて順化させた。ラットにはPurina食および水道水を無制限に与えた。実施したすべての動物実験は、National Institutes of HealthおよびUnited States Department of Agricultureのガイドラインに従って、Medical College of Georgia Institutional Committee for the Care and Use of Animals in Re search and Educationによる承認を受けた。ステロイドおよび試薬一般化学薬品(試薬等級)、遊離脂肪酸、脂肪酸エチルエステル、および放射不活性ステロイドは、Sigma Chemical Company(ミズーリ州St．Louis)から入手した。³H-ジヒドロテストステロン(5α-アンドロスタン-17β-オール-3-オン、60C i/mmol)は、NEW Life Science Products(マサチューセッツ州Boston)から購入した。すべてのインヒビターおよび放射不活性化学薬品の調製に対して、常に100% エタノールを使用した。アンドロゲン受容体結合テストステロン(400μｇ/体重100g)を用い、動物に対して腹腔内処置を行った。1時間後、斬首により動物を犠牲にし、すばやく腹側前立腺を取り出し、氷冷された「均質化緩衝液」(10mM Tris-HCl、1.5mM Na₂EDTA、0.5mMジチオスレイトール、0.25Mショ糖、1ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド、pH7.4、22℃) 中に入れた。550mg/mlの組織-緩衝液比において10秒間の破砕と30秒間の冷却時間とを交互に繰り返し、Polytronホモジナイザ(４に設定)により氷上で前立腺を切り刻み、均質化した。4℃においてホモジネートを800gで20分間遠心分離した。次に、氷冷された「核緩衝液」（10mM Tris,.0.5mMジチオスレイトール、0.25 Mショ糖、12.5mM MgCl₂、pH7.4、22℃、550mg組織/ml)中に再び核ペレットを懸濁させた。再懸濁させたペレットを、懸濁液が均一になるまでガラスDounceホモジナイザを用いて氷上で均質化した。核ペレットの再均質化を行った後で得られた核懸濁液のアリコートを、³H-ジヒドロテストステロン10μlと種々の濃度のインヒビター5μlの入った12×75mm ガラス試験管中に、または³H-ジヒドロテストステロン10μlは入っているがインヒビターは入っていない12×75mmガラス試験管中に導入し、最終体積を1mlにした。インヒビターの代わりに放射不活性ジヒドロテストステロン(10^-5M)を用いることにより、非特異的結合を測定した。試験管を15℃において20時間インキュベートした。一晩インキュベーションを行った後、氷冷された核緩衝液1mlを添加し、4℃において800gで１０分間遠心分離した。核ペレットを氷冷された同じ核緩衝液1ml 中に懸濁し、上述したように混合および遠心分離を行うことにより、核ペレットの洗浄を3回行った。最終の上清を廃棄した後、各ペレットに100%エタノール1ml を添加し、攪拌した。試験管を30℃の水浴中に40分間入れ、10分ごとに攪拌し、最後に800gで10分間遠心分離した。エタノール抽出物をデカントし、シンチレーション液(Ecoscint A)4mlの入ったバイアルに移し、振盪し、計数した。初期濃度1×10^-5、場合により2×10^-5において、化合物、抽出物、および画分のスクリーニングを行った。2×10^-5以下において50%を超える活性の抑制が観測された場合、全用量応答曲線を求めた。この分析結果は、Saw Palmettoに対するまとめの表の中に示されている。金酸エステル、リノール酸エステル、および抽出物＃3のK₅₀置換は、それぞれ図4、5、および6に示されている。ラット前立腺アンドロゲン受容体アッセイの推定活性成分の2つの濃度における³H-ジヒドロテストステロン結合の抑制パーセントとして表された結果は、以下のまとめの表の中にある。 6.5.2. 5-リポキシゲナーゼアッセイ 5-リポキシゲナーゼは、ロイコトリエンの形成につながる生合成経路における最初の反応であるアラキドン酸から5-ヒドロキシエイコサテトラエン酸(5-HETE) への酸化的代謝を触媒する。手順は次の通りである。5-リポキシゲナーゼアッセイは、ラット好塩基性白血病細胞(RBL-1)から得られた粗製の酵素調製物を用いて行った。この酵素と共に試験化合物を室温において5分間プレインキュベートし、基質(アラキドン酸)を添加して反応を開始させた。室温で8分間のインキュベーションを行った後、クエン酸を添加して反応を停止し、5-HETEラジオイムノアッセイ(RIA)により5-HETEのレベルを測定した。化合物30μＭでスクリーニングする(Shimuzu et al.，1984，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 81:689-693)。次の基準化合物を5-リポキシゲナーゼの抑制に使用した：基準化合物，（IC₅₀ (μＭ)）：BW-755C，（6.6）；ノルジヒドログアイアレチン酸(NDGA)，（0.26）；フェニドン，(30)。初期濃度3×10^-5において化合物および画分のスクリーニングを行った。3×10^-5 において50%を超える活性の抑制が観測された場合、全用量応答曲線を求めた。この分析結果は、Saw Palmettoに対するまとめの表の中に示されている。 6.5.3. シクロオキシゲナーゼ-1アッセイアッセイ管1つ当たり125単位のシクロオキシゲナーゼ-1(雄ヒツジ貯精嚢から得たもの)を、1mM GSH、1mMヒドロキノン、1.25mMヘモグロビン、および試験化合物と共に25℃で1分間プレインキュベートした。アラキドン酸(100mM)を添加して反応を開始し、37℃で20分間のインキュベーションを行った後、トリクロロ酢酸(TCA)を添加して反応を停止させた。遠心分離およびチオバルビツル酸の添加を行った後、530nmにおける吸光度を読みとってシクロオキシゲナーゼ活性を求めた(Evans et al.，1987，Biochem．Pharamac．36:2035-2037; Boopathy and B alasubramanian，1988，J．Biochem．239:371-377)。次の基準化合物をシクロオキシゲナーゼ1の抑制に使用した：基準化合物，（I C50(μＭ)）：アスピリン，（240）；インドメタシン，(1.7)。初期濃度3×10^-4において化合物および画分のスクリーニングを行った。3×10^-4 において50%を超える活性の抑制が観測された場合、全用量応答曲線を求めた。この分析結果は、Saw Palmettoに対するまとめの表の中に示されている。 6.5.4. シクロオキシゲナーゼ-2アッセイアッセイ管1つ当たり80単位のシクロオキシゲナーゼ-2(ヒツジ胎盤から得たもの)を、1mM GSH、1mMヒドロキノン、1.25mMヘモグロビン、および試験化合物と共に25℃で１分間プレインキュベートした。アラキドン酸(100mM)を添加して反応を開始し、37℃で20分間のインキュベーションを行った後、TCAを添加して反応を停止させた。遠心分離およびチオバルビツル酸の添加を行った後、530nmにおける吸光度を読みとってシクロオキシゲナーゼ活性を求めた(Boopathy and Ba lasubramanian，1988；Evans et al.，1987; O'Sullivan et al.，1992，Bioche m．Biophy．Res．Commun．187:1123-1127)。次の基準化合物をシクロオキシゲナーゼ-2の抑制に使用した：基準化合物，（ IC₅₀(μＭ)）：アスピリン，（660）；インドメタシン，(2.4)。シクロオキシゲナーゼ-2アッセイの結果は、以下のまとめの表の中に示されている。まとめの表 Saw Palmetto抽出物−生物学的アッセイの結果成分／抽出物アンドロゲン Coxl Cox2 5-Lipo 画分受容体ラウリン酸陰性陰性陰性陰性リノール酸陰性陰性陰性陰性リノレン酸陰性 233μＭ陰性 12μＭミリスチン酸陰性陰性陰性陰性オレイン酸陰性陰性陰性陰性パルミチン酸陰性陰性陰性陰性ラウリン酸エステル 130nM 陰性陰性陰性リノール酸エステル６μｍ陰性陰性陰性リノレン酸エステル陰性陰性陰性陰性ミリスチン酸エステル陰性陰性陰性陰性オレイン酸エステル陰性陰性陰性陰性パルミチン酸エステル陰性陰性陰性陰性抽出物＃1 陰性陰性陰性陰性抽出物＃2 30nM^* 陰性陰性陰性抽出物＃3 3.5μＭ陰性陰性陰性抽出物＃4 試験せず陰性陰性陰性抽出物＃5 陰性陰性陰性陰性画分＃1 試験せず陰性陰性陰性画分＃2 陰性陰性陰性陰性画分＃3 陰性陰性陰性陰性画分＃4 試験せず陰性陰性陰性画分＃5 試験せず陰性陰性陰性画分＃10 試験せず陰性陰性陰性画分＃6〜9^** 試験せず試験せず試験せず試験せず^* Saw Palmettoの節の薬物プリンティング(pharmaprinting)の説明を参照のこと。^** 乾燥残査ゼログラム 6.5.5. 5-α-レダクターゼアッセイ 6.5.5.1. ラット由来の前立腺5-α-レダクターゼの調製典型的な実験において、成体の雄Sprague-Dawleyラット(10〜20)を頸部脱臼により犠牲にする。前立腺を取り出し、結合組織を除去することにより洗浄する。 0〜4℃で組織を保持し、3倍容量の緩衝液A(20mMリン酸ナトリウム、pH6；0.32mM ショ糖；および0.1mMジチオスレイトール)中に懸濁させ、切断し、切り刻み、更にPolytronホモジナイザで均質化する。ホモジネートを10,000gで60分間遠心分離し、更に、10,000g上清を140,000gで60分間遠心分離する。2つのペレットを合わせ、ペレットの2倍容量の緩衝液B（2mMリン酸ナトリウム，pH6.5；2M NaC １；5mg/mlジギトニン；0.1mM EDTA；40％グリセロール；および1mMジチオスレイトール)中に0℃で60分間懸濁させる。懸濁液を150,000gで60分聞遠心分離し、溶解された5-α-レダクターゼを含有する上清に5mM4のNADPHを添加した後、タンパク質の含有量を推定し、5-α-レダクターゼとして-70℃で保存する。 6.5.5.2. ヒト由来の前立腺5-α-レダクターゼの調製外科的経膀胱切除を行って、BPH患者からヒト前立腺組織を採取する。組織を氷冷生理食塩水中に入れて60分以内に実験室に移す。組織サンプルを洗浄し、１〜3gの試験片に切断し、液体窒素中ですばやく凍結し、-70℃で保存する。BPHは、組織学的検査により確認する。前立腺組織を解凍し、鋭い鋏で切断し(または、液体N₂温度で粉砕し)、更に、 4℃において5倍容量の緩衝液(100mM Tris/HCl pH7.4、20%グリセロール、100mM クエン酸ナトリウム、100mM KCl,，1mM EDTA、および15mMβ-メルカプトエタノール)中で30秒間のソニケーター処理にかけて均質化する。ホモジネートをガラスウールに通して濾過することにより細胞破片を除去し、次いで800gで10分間遠心分離し、核ペレットを得る。上清を1mlのアリコートに分け、120,000gで45分間遠心分離にかけ、5-α-レダクターゼを含有するミクロソームペレットを得た後、このペレットを-70℃で保存するか、または0.25mg/ml Lubrol PXもしくは0. 5mg/mlジギトニンを含有する緩衝液B中に懸濁させ、25ゲージシリンジに通してホモジネートを形成し、これを120,000gで45分間遠心分離にかける。上清ミクロソーム5-α-レダクターゼ（推定タンパク質含有量）をアッセイに使用するか、または活性を損失させずに-20℃において40%グリセロール中に保存する。 6.5.5.3. 5-α-レダクターゼ活性のアッセイ 5-α-レダクターゼアッセイは、37℃における放射標識された[³H]テストステロン(T)から[³H]5-α-ジヒドロテストステロン(DHT)への還元に基づいて行う。1 00mMクエン酸ナトリウム、100mM KCl,．20%(v/v)グリセロール、1mM EDTA、15mM β-メルカプトエタノール、5mMグルコース-6-ホスフェートデヒドロゲナーゼ、および1μM-[³H]テストステロンを含有するlmlTris-HCI (pH7.4)緩衝液の入った管(二本)を、37℃で15分間プレインキュベートする。インヒビター(異なる供給源由来のSPB抽出物および異なる濃度)の存在下または不存在下で5〜50μlの5- α-レダクターゼ(ラットまたはヒト)を添加することによりアッセイを開始する。陽性の対照としてProscar^TM(フィナステリド)を使用する。T、DHT、および3- α-アンドロスタンジオールをそれぞれ25μｇ含有したジエチルエーテル1mlを添加することにより反応を停止する。各管を攪拌し、遠心分離し、エーテル上層を分離する。窒素流と共にエーテルをエバポレートし、残査を20μｌのクロロホルム／メタノール(2:1，v/v)に溶解し、薄層プレート(独国Darmstadt5748-7のE．M erck製シリカゲル60)に載置する。このプレートをクロロホルム／酢酸エチル(3: 1，v/v)で展開し、-70℃において18時間かけてオートラジオグラフィー処理し、放射性ゾーン(T、DHT、および3-α-アンドロスタンジオールに対応する)を切り取り、液体シンチレーションカウンター中で放射能を計数する。この方法を用いて、K_mおよびV_maxの値、ならびに異なる濃度のSPB抽出物の存在下におけるTから DHTへの変換の抑制パーセントを計算する。 6.6．オレイン酸、ラウリン酸、リノール酸、リノレン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸の遊離脂肪酸およびエチルエステルの両方に対する化学分析GC-MS、HPL C Saw Palmetto：パルミチン酸メチル、ステアリン酸メチル、オレイン酸メチル、リノール酸メチル、ラウリン酸エチル、リノレン酸メチル、ミリスチン酸エチル、カプロン酸メチル、パルミチン酸エチル、カプリル酸メチル、カプリン酸メチル、オレイン酸エチル、ラウリン酸メチル、リノール酸エチル、ミリスチン酸メチル、およびエチルリノリネエート(ethyl linolineate)。 6.7.薬物プリント(PHARMAPRINT)の決定 Saw Palmettoの5つの市販の抽出物を定量分析し、各抽出物中の一般的な脂肪酸および脂肪酸エステルの量を決定した。結果は図4に示されている。この図は、種々の抽出物中に存在する成分がそれぞれ広範囲に変化しうることを示している。脂肪酸および脂肪酸エステル、すなわち、図4の成分、のそれぞれを分析し、B PHの臨床的指標に関わる4つのバイオアッセイにおける活性を調べた。これらの成分はいずれもCox-2に対する活性を示さなかった。他の3つのバイオアッセイおける精製成分の活性IC₅₀は次の通りであった：リノレン酸(COX-1で233μＭ、5-L IPOで12μＭ)；リノール酸エチルエステル(アンドロゲン受容体アッセイで６μ Ｍ)；ラウリン酸エチルエステル(アンドロゲン受容体アッセイで130nM)；および β-シトステロール(アンドロゲン受容体アッセイで〜10μＭ)。COX-1アッセイおよび5-LIPOアッセイでは抽出物はいずれも活性ではなかったため、以下に示す計算に対してはアンドロゲン受容体アッセイを選択した。観測された全生物活性に対する個々の成分の寄与は、(i)植物抽出物の全生物活性、(ii)各抽出物中に存在する各成分の量、および(iii)各精製成分のIC₅₀を用いて計算する。この計算については、市販のサンプル＃3およびアンドロゲン受容体アッセイを用いて以下で具体的に述べる。成分の平均分子量を200と仮定すると、サンプル＃3の全抽出物IC₅₀値はアンドロゲン受容体に対して3.5μＭ( 全生物活性)である。サンプル＃3のカプセルには、次の比率でラウリン酸のエチルエステル(0.036W/W%;228MWt)とリノール酸のエチルエステル(0.115W/W%;308MW t)が含まれている¹。（脚注¹β-シトステロールは全抽出物中に〜0.2%W/Wで存在する。精製β-シトステロールの活性(〜10μＭ)。これらの結果の予備的性質によりβ-シトステロールは計算に含まれない。) 全抽出物生物活性に対するラウリン酸エチルエステルのアンドロゲン受容体生物活性の寄与パーセントの計算は、次式を用いて行う：抽出物IC⁵⁰生物活性(3.5μＭ＝3,500nM;平均MWt<200>)に、存在するラウリン酸エチルエステルの量(0.036%W/W)をかけ、次にラウリン酸エチルエステルのIC₅₀観測値(130nM)で割り、続いて100をかけ、更に分子量に対する補正を行う(3,500nM×200MWt×0.0355×100)／(130nM×228MWt)＝83.9%)。リノール酸エチルエステルの寄与パーセントは、同じ式を用いて次のように計算される：(3.5μＭ×200×0.1146×100)/(6μＭ×308)＝4.4%従って、2つの成分、すなわち、ラウリン酸エチルエステルとリノール酸エチルエステルを合わせると、このアッセイにおけるin vitro生物活性の観測値の90%を占めるため、アンドロゲン受容体バイオアッセイにおける活性成分と見なされる。医薬品等級の組成物の認定または拒絶に対する生物活性標準を定義するために、ラウリン酸およびリノール酸のエチルエステルを合わせた生物活性を使用する² 。(脚注²抽出物＃２は、化学的アッセイおよび生物学的アッセイでの分析に基づく挙動が一致しなかった。抽出物＃2は試験された最良の標準よりも、見掛けのアンドロゲン受容体アッセイの活性が4倍強い(ラウリン酸エチルエステルについては 30nM対130nM)。しかしながら、抽出物＃2には非常に少量の成分が含まれるものと推定される。従って、抽出物＃2は分析の対象にはならない。) 所定の植物製剤が医薬品等級の植物製剤として認可できるかを決定するために、生物活性の範囲を次のように設定する：1つの計算において、活性成分は上述の活性成分標準に基づく生物活性の25%を占めなければならないという要件を設定する。必要な生物活性(標準の25%)および活性成分に対する既知の生物活性が与えられた場合、次のように計算を行う：活性成分の重量パーセントに、必要な生物活性の最小パーセントをかける；例えば、ラウリン酸に対しては(0.036%W/W ×25%＝0.009%W/W)。同様に、リノール酸に対しては0.42%を占めなければならない。あるいは、2つのエステルの組合わせが、観測された生物活性の少なくとも2 5%を占めるという要件が設定される。各成分が、生物活性の50%を占める必要がある場合、サンプルには、少なくとも0.018%W/Wのラウリン酸エステルまたは0.84%のリノール酸エステルが含まれなければならない。各成分が、生物活性の70%を占める必要がある場合、サンプルには、少なくとも0.025%W/Wのラウリン酸エステルまたは1.176%W/Wのリノール酸エステルが含まれなければならない。各成分が、生物活性の80%を占める必要がある場合、サンプルには、少なくとも0.029%W/Wのラウリン酸エステルまたは1.344%のリノール酸エステルが含まれなければならない。ラウリン酸およびリノール酸のエチルエステルの生物活性を合わせて使用するか、または個々のエステルの生物活性を使用することにより、これらのエステルの%W/Wを基準に、試験対象の5つの市販のサンプルのそれぞれに対する医薬品等級の組成物としての認定または拒絶に関する明確に定義された標準を設けることができる。図4に示されている5つの市販のサンプルに対して、最も制約の弱い要件、例えば25%、を用いた場合でさえも、サンプル1、2、4、および5は、各サンプルに対して測定された2つのエステルのレベルに基づいて、医薬品等級の薬剤組成物には不適合であるとして拒絶される。 7. 実施例：朝鮮ヤドリギ 7.1. 植物供給源／抽出方法朝鮮ヤドリギから得られた植物粉末(2.4Kg)を、清浄なブレンダー中で1バッチ当たり300mlの水を用いて抽出した。チーズクロスのライニングが施されたフイルターベッドに抽出物を通して濾過し、繊維質および水不溶性の残査を除去した。最終容積6.03リットル。抽出物の最終濃度は39.8%(植物重量／容量)であった。 7.2. 分別分析空気の不存在下で4℃において2週間にわたり抽出物を放置した(窒素でフラッシングした)。この時に、更に不溶解分が析出した。低温の抽出物を0.8μフィルターに通して濾過し、最後に、滅菌雰囲気下で0.2μフィルターを用いて滅菌濾過を行った。この半精製の生成物を500mlの滅菌減圧容器中に回収し、T4GENであることを確認した。この生成物サンプルには発熱物質が含まれないことが分かった。層流フード中で滅菌シリンジを用いてフラスコからサンプルを取り出し、各サンプル1ml当たり400mgの抽出物が含まれるように希釈した(40%溶液)。標準マーカーのフィンガープリントを決定するために使用したものと同じシステムである図9に略図で示されているアフィニティークロマトグラフィーシステムに基づいて抽出サンプルを分析した。タンパク質の分離に使用したカラムはSe pharose^TM4Bであった。カラムは次のように作製した。 Sepharose^TM4Bの活性化：2回蒸留を行った水を用いてSepharose^TM4B(400ml)を繰返し洗浄し、ブフナー漏斗で濾過した。Na₂CO₃(0.5M，pH11)を用いてSepharos e残査を繰返し洗浄し、次いで2リットルシリンダー中で攪拌しながら400mlNa₂CO₃ (0.5M，pH11)に懸濁させた。シリンダーをアルミニウム箔でカバーし、Sepharo se^TM4Bの懸濁液中に攪拌しながら80分間にわたりジビニルスルホン(48ml，光を遮断)を滴下した。反応物を室温で更に30分間攪拌した。次に、約500mlのNa₂CO₃ (0.5M，pH10，NaHCO₃で調整した)を用いて焼結ガラス漏斗(手を触れず、しかも濾紙を用いない)で樹脂を濾過した。この時点で、400ml Na₂CO₃(0.5M，p H10)中に樹脂を懸濁させ、これを用いて次のように糖特異的親和性樹脂を調製した。ガラクトース特異性Sepharose^TM4B：活性化された樹脂380ml(5M Na₂CO₃中)に、光を遮断した状態で攪拌しながらガラクトース(38g)を添加した。この懸濁液を一晩攪拌し、次いで焼結ガラス漏斗で懸濁液を濾過した。反応させた活性化Se pharoseを不活性化するために、0.5M NaHO₃(pH8.5)で残査を洗浄し、次いで350m l NaHCO₃(0.5M，pH8.5)および14ml 2-メルカプトエタノール中に懸濁させた。室温において懸濁液を攪拌しながら4℃に保持し、次いで焼結ガラス漏斗で濾過した。0.2MPBS(リン酸緩衝食塩水)で樹脂を洗浄し、最後に、380mlの0.2M PBS中に懸濁させ、NaN₃の数粒の結晶と共に4℃で保存した。ラクトース特異性Sepharose^TM4B：調製方法は、ガラクトースについて記載したものと同じであった。ここでは、300mlの活性化Sepharose^TMを、30ｇのラクトースと反応させ、親和性樹脂を300mlのNaHCO₃(0.5M，pH8.5)および12mlの2-メルカプトエタノールで不活性化し、最後に、先の調製で説明したようにNaN₃の入った300mlのPBS中に懸濁させた。 N-アセチル-D-ガラクトサミン特異性Sepharose^TM4B：活性化Sepharose 4B (3 0ml)を、先に記載したように、3gのN-アセチル-D-ガラクトサミンで処理した。3 0mlのNaHCO₃(0.5M，pH8.5)および5mlの2-メルカプトエタノールで反応を停止させた。NaN₃の数粒の結晶の入った30mlのPBS中で樹脂を4℃で保存した。フコース特異性Sepharose^TM4B：活性化Sepharose^TM4B(50ml)を5gのフコースと反応させた。この親和性樹脂を50mlのNaHCO₃および5mlの2-メルカプトエタノールで処理して未反応Sepharose^TMを不活性化させた。先に記載したように、NaN₃ の入った50mlのPBS中で樹脂を保存した。メリビオース特異性Sepharose^TM4B：活性化Sepharose^TM4B(50ml)を5gのメリビオースと反応させた。50mlのNaHCO₃および5mlの2-メルカプトエタノールで反応を停止させた。NaN₃の数粒の結晶の入った50mlのPBS中、４℃で樹脂を保存した。これと同じ方法を使用すれば、異なる糖特異性のカラムを得ることができる。使用したカラムは、5M尿素による溶離、続く0.5M NaHCO₃(pH8.5)による溶離を行うことによって再生した。使用前に0.02M Tris/HCl緩衝液(緩衝液C)を用いてカラムを平衡状態にした。抽出およびアフィニティークロマトグラフィーに使用した緩衝液は、次のように調製した。緩衝液はすべて、2回の蒸留を行った水(DD)を用いて調製した。 A)NaCl(0.2M)とジチオスレイトール(1mM)を含有したTris/HCl(0.02M，pH7.8) であり、使用直前にフェニルメタンスルホニルフルオリド(0.01mM)を添加した。(緩衝液A) B)0.4M KCl、2%Tritonx-200、1mMジチオスレイトール、および(使用する前に添加される)0.01mMフェニルメタンスルホニルフルオリドを含有したTris/H Cl(0.02M，pH7.8)。(緩衝液B) C)1.25M NaCl、25mM CaCl₂、0.05%Triton X-100、および1mMジチオスレイトールを含有したTris/HCl(0.02M，pH7.8)。(緩衝液C) D)25mM CaCl₂の代わりに4mM EDTAを含有した緩衝液(C)。(緩衝液Ｄ) 必要な場合には、EDTAの代わりにEGTAを使用してもよい。既知容量のヤドリギ抽出物を2M Tris緩衝液を用いてpH7.8に調整した。この溶液を、一連のSepharose^TM4Bアフィニティーカラム(1.6×7cm)に吸着させた。25m M CaCl₂を含有する過剰(200ml)の0.02M Tris緩衝液(pH7.8)(緩衝液C)でカラムを洗浄し、未結合タンパク質(ビスコトキシンおよびアルカロイド)を除去した。次に、4mM EDTAを含有したTris緩衝液(pH7.8)(緩衝液D)を用いて各カラムを別々に洗浄し、特定の糖に結合するためにCa⁺⁺を必要とするタンパク質、すなわち、Ca⁺⁺ 依存性糖結合タンパク質、を溶離させた(100mlサンプル)。続いて、Tris緩衝液(緩衝液C，20Oml)を用いてカラムを洗浄し、次いで0.5Mの対応する糖を含有する同じ緩衝液(100ml)で溶離させて非Ca⁺⁺依存性糖結合タンパク質を除去した。未結合タンパク質はSephadex^TMG75カラム(2.5×75cm)で分画し、アルカロイドからビスコトキシンを分離した。塩および他の緩衝液成分を除去するためにすべての画分を透析した。DIAFLO^TM限外濾過膜YM10(10,000カットオフ)を用いて、Amic on^TM濃縮器により各透析画分を濃縮した。ウシグロブリンを標準とするBio-Rad アッセイにより、タンパク質濃度を測定した(分離された各タンパク質は、SDS- PAGEゲルクロマトグラフィーにより純度および分子量の特性決定を行うこともできる)。 7.3. 生物活性の分析各糖結合タンパク質に対する抑制濃度(IC₅₀)は次のように測定した。 10%(v/v)ウシ胎仔血清および1%(v/v)Pen Strepが補足されたRPMI 1640培地中で、37℃において非同期対数増殖状態で白血病L1210細胞を維持した。細胞集団2 倍増殖時間は11〜12時間であった。細胞を対数増殖状態に保つために、細胞を48 時間ごとに1×10⁴細胞／mlとなるようにした。すべての増殖抑制実験に対して、ストック溶液および希釈液は、滅菌された0. 7%NaCl溶液を用いて調製した。細胞培養体は、各インヒビター濃度につき2回、マイクロタイタープレート(0.18ml/ウェル)に2〜5×10⁴細胞／mlで接種した。マイクロタイタープレートにカバーをし、空気中に5%CO₂を含有する加湿CO₂培養器中で48時間インキュベートした。インキュベーション時間の終了時に、容量の測定された等張食塩水に各ウェルのアリコートを添加し、電子計数器を用いてカウントした。高濃度の画分は迅速な細胞分裂を引き起こすので、細胞数をカウントする前に顕微鏡で通常どおり試験マイクロタイタープレートをチェックし、結果が妥協されないようにした。細胞生存度は、トリパンブルー排除法により決定した。結果の計算は、タンパク質(または特定の画分)濃度のlogに対して細胞増殖抑制パーセント(食塩水処理された対照の細胞濃度と比較したときのパーセント) をプロットし、細胞増殖の50%抑制(IC₅₀)を引き起こす濃度をグラフから決定することにより行った。この実施例に従って調製されたn-T4GENの塩抽出物および洗浄剤抽出物に対する分析の結果は表10および11に示されている。表10および11から分かるように、朝鮮ヤドリギの樹液および細胞壁のいずれから得られた抽出物についても、本発明に従えば、それらのタンパク質レベルおよび抑制活性はすべて、医薬品等級の抽出物として認定するために必要な範囲内に入る。従って、これらの抽出物は、癌またはAIDSの治療を目的とした臨床試験に使用することが可能である。これらの抽出物はまた、通常の患者の治療に使用することもできる。なぜなら、それらの品質および効力は、本発明で必要とされるタンパク質フィンガープリントアイデンティファイアーに従って確定されたからである。表10 抗白血病L121O活性を有するV．album coloratumの種々の成分の分画−n-T4GEN(4 0%抽出物) ^a 培養中でL1210細胞の増殖を50%抑制する抑制濃度をμｇタンパク質/mlで表したもの。^b 活性単位は、特定の画分をL1210細胞に添加した場合に50%細胞増殖抑制を引き起こすのに必要な希釈度として定義される。^c 全溶離液325mlのうち50mlをカラムにかけた。^d 画分IVから31mgのアルカロイドが得られた。表11 抗白血病L1210活性を有するV．album coloratumの種々の成分の分画（40%抽出物） ^a 培養中でL1210細胞の増殖を50%抑制する抑制濃度をμｇタンパク質/mlで表したもの。^b 活性単位は、特定の画分をL1210細胞に添加した場合に50%抑制を引き起こすのに必要な希釈度として定義される。^c 全溶離液420mlのうち50mlをカラムにかけた。^d 画分ITTから22mgのアルカロイドが得られた。 Sephadex^TM-G75カラムから得られたL1210系で生物活性を呈するタンパク質含有画分(12〜100)(表10参照)には、ビスコトキシンの混合物(1.019g)が含まれていた。画分(101〜140)を合わせ、3×20Omlのクロロホルムで抽出した。クロロホルム層を無水Na₂SO₄フィルターで脱水し、濾液を減圧下でエバポレートして201m gのアルカロイドを得た(表10に記載のビスコトキシンおよびアルカロイドの重量は、アフィニティーカラムから得られた未結合画分に対して全量325mlに調整されている)。従って、1mlの1%抽出物には、4.9pgのレクチン；10〜40pgのビスコトキシンを含有する72pgの未結合タンパク質；および14.3μｇのアルカロイドが含まれていた。 7.4. 医薬品等級の水抽出物の調製既知重量の植物(100g)を採取し、2回蒸留した水の存在下で洗浄および粉砕を行い、40重量%のヤドリギの溶液を形成することにより、朝鮮ヤドリギからの抽出物を調製した。植物を切断し、切断したものをプラスチックバッグ中に入れ、液体窒素中で急速に凍結し、その後で粉砕および蒸留水との混合を行うことが好ましい。凍結材料の粉砕および蒸留水との混合は、好ましくは、ブレンダー中で約2分間行う。得られた混合物を10,000rpmで65分間遠心分離し、不溶性残査から抽出物を分離する。残査を既知容量(100ml)の水で2回抽出し、すべての抽出物を取り出して遠心分離にかける。上清を合わせる。得られた抽出物を室温において空気の不存在下で2週間保存する。次に、従来から周知の段階的濾過により滅菌する。次に、滅菌抽出物を、先に述べたように予備スクリ−ニングし、L1210白血病系に関する生物活性が100A.U.以上であるかを調べる。抽出物がこの試験に合格した場合、先の実施例に記載したようにより厳しい試験にかけて糖結合タンパク質フィンガープリントを決定する。タンパク質レベルが本発明に従って規定された範囲内に入る場合、その抽出物は医薬品等級として認定される。表11は、上述したように調製された抽出物の試験結果を示している。見て分かるように、抽出物は、本発明に従って医薬品等級として認定されるために必要な標準のフィンガープリントの範囲内に入る濃度レベルおよび生物活性の値をもつ。表12 Viscum album C.抽出物(40%，FrF)(n-T4GEN)から得られた種々の生物活性炭水化物結合タンパク質の分画 ^a 培養中でL1210細胞を50%抑制するするのに必要な1ml当たりの希釈度。^b 活性単位は、特定の画分をL1210細胞に添加した場合に細胞増殖を50%抑制するのに必要な希釈度として定義される。 7.5. 朝鮮ヤドリギの医薬品等級の全抽出物の調製朝鮮ヤドリギの抽出物を次のように調製した。まず、100gのヤドリギを採取し、凍結し、更に粉末化した。次に、凍結した粉末を解凍し、200mlの冷アセトンで抽出した。この抽出混合物を10,000rpmで60分間遠心分離にかけた。沈殿物を冷アセトンの100mlアリコートで2回洗浄し、再度、10,000rpmで60分間遠心分離にかけた。得られた抽出残査をブレンダー中でそれぞれ2分間かけて緩衝液A（実施例8参照)の200mlアリコートで2回抽出した。2つの抽出アリコートを10,000rpm で60分間遠心分離にかけ、上清を合わせた。最後に、更に200mlの緩衝液Aで抽出残査を抽出した。遠心分離の後、この最終抽出物を他の2つのアリコートと合わせて塩抽出物を形成し、更に、塩を除去した後で本発明に従って試験を行い、その糖結合タンパク質フィンガープリントが上記の医薬品等級の要件を満たすかを決定した。緩衝液Aによる上記抽出の後に残った抽出残査は、界面活性剤抽出液−緩衝液B （実施例８参照）−で抽出することにより抽出物を形成し、透析により界面活性剤および塩を除去した後で、本発明の医薬品等級の要件を満たすかを調べるための試験を行うこともできる。 8. 実施例：ヨーロッパヤドリギ実施例7に従ってヨーロッパヤドリギ(Viscum album L.)の抽出物を調製した。ただし、水性塩抽出物だけについて、その糖結合タンパク質のフィンガープリントを分析した。この抽出物はT4GENであることが確認されている。フィンガープリントの分析結果は、表12に示されている。T4GEN抽出物は、確立された標準フィンガープリントの要件を満たすので、医薬品等級の抽出物として認定される。表13は、発酵させたヤドリギ抽出物であるISCADORTMの分析を示している。この画分は、標準フィンガープリントの要件の一部分を満たすが全部を満たす訳ではない。例えば、メリビオースおよびフコースの画分の生物活性は、非常に低い。表14は、T4GENおよびISCADOR^TMに対する生物活性アッセイの結果を示している。ただし、IC₅₀は、培養中でL1210細胞を50%抑制するするのに必要な1ml当たりの希釈度表として表されている。表14は、表12および13から誘導されたものであり、未発酵のヨーロッパヤドリギ抽出物(T4GEN)と比較した場合にISCADOR^TM活性が全体的に低下することを示している。表13 T-4GENから得られた生物活性炭水化物結合タンパク質の分画 ^a 培養中でL1210細胞の増殖を50%抑制する抑制濃度をμｇタンパク質/mlで表したもの。^b 活性単位は、特定の画分をL1210細胞に添加した場合に50%細胞増殖抑制を引き起こすのに必要な希釈度として定美される。表14 ISCADOR「M」,(20%)から得られた生物活性炭水化物結合タンパク質の分画 ^a 培養中でL1210細胞の増殖を50%抑制する抑制濃度をμｇタンパク質/mlで表したもの。^b 活性単位は、特定の画分をL1210細胞に添加した場合に50%細胞増殖抑制を引き起こすのに必要な希釈度として定義される。表15 Viscum album L.(ISCADOR^TM「M」)の炭水化物結合タンパク質（レクチン）の生物活性に及ぼす発酵の影響発酵および未発酵のヤドリギの臨床用調製物の実施例としてISCADOR^TM「M」,2 0%およびT4GEN(10%)を使用した。活性は、他にも記載されているように全活性として記されている。 9. 実施例:St.John's Wort,Hypericum perforatum 9.1. 植物供給源／抽出方法 St．John'ｓ Wortには多数の供給源および多数の形態がある。それは乾燥された(茎、葉、花、蕾)であってもよい。粉末抽出物の形態であってもよい。凍結乾燥されていてもよい。粉砕された花の油抽出物が調製されてもよい。種々の形態の温浸法（水性）、油浸軟法、またはアルコール水抽出法が利用できる。St．Jo hn's Wortの処理および抽出の方法については、先に記載した発明の詳細な説明の中で説明されている。 9.2. 供給業者／商品名 St．John's Wortの製造業者およびSt．John's Wortの抽出物は多数存在するが、例えば、次の例を挙げることができる：Jarsln^TM，Jarsin^TM300(LI160)(ベルリンにあるLichtwer Pharma GmbH)、Psychotonin^TMM、Psychotonin^TMforte（ダルムシュタットにあるHersteller)、Hyperforat^TM、Extract^TMZ 90017、N europlant^TM、Neuropas^TM、Esbericum^TM、Remotiv^TM(独国にあるBayer)、および Sedarlstan^TM。次の会社もまたSt．John's Wortを商業生産している：Phytophar mica、Nature's Way、Herbal Choice、Botalia Gold、およびHerb Pharm。 VIMRx Pharmaceuticals^TMから入手可能なVIMRxyn^TMと呼ばれる市販のヒペリシン製品が1つ存在する。 9.3. 臨床的研究 St．John's Wortは、抽出物および植物そのものに関する多くの臨床的研究の対象となっている。主に、軽い鬱病〜中程度の鬱病を軽減させるときに臨床的な適用がなされる。臨床的に適用される他の例としては、AIDS、抗菌用途、制ガン用途、抗突然変異用途、抗ウイルス用途、免疫促進薬としての使用、および免疫抑制用途が挙げられる。これらについては、後続の節でより詳細に説明する。 9.3.1. 軽い鬱病〜中程度の鬱病医師が生薬処方を慣例的に指示する独国では、St．John's Wortの利用が増大している。1994年には、独国において、鬱病の治療に使用するために、St．John 's Wortが1日あたり6,600万投与で処方指示された(De Smet and Nolen，1996，B ritish Medical Journal 313:241-247)。この植物性薬剤は、これまでにプラシーボおよび他の活性薬剤の投与と比較して3,000人を超える患者で試験された(Ha nsgen et al.，1994，Nervenheilkunde 12:285-289;Harrer et al.，1994，J.Ge riatric Psychiatry Neurology 7:S24-28;Hubner et al.，1994，J.Geriatric P sychiatry Neurology 7:S12-14;Martinez et al.，1994，J Geriatric Psychiat ry Neurology 7:S29-33;Sommer and Harrer，1994，J Geriatric Psychiatry Ne urology 7:S9-11;Vorbach et al.，1994，J Geriatric Psychiatry Neurology 7 :S19-23;Woelk et al.，1994，J.Geriatric Psychiatry Neurology 7:S34-38)。独国の臨床試験に使用される主な製剤が表15にまとめられている。これらの製剤はすべて、ヒペリシン(hepericin)の含有量に従って標準化されている。表15 鬱病の研究に使用される主なSt．John's Wort製剤の説明 ^*このほかにvalerian抽出物が含まれる。独国の研究者（テキサス州San Antonioからの共同研究者を含む）は、最近、軽い鬱病〜中程度の鬱病の外来患者合計1,757人を対象にしたSt．John's Wortの 23のランダム化試験のメタ分析(meta-analysis)を報告した。これらの研究者は、ハーブがプラシーボよりも著しく優れており、しかも標準的な抗鬱薬に匹敵する効力を示すが、副作用が少ないという結論を出した(Linde，1996，British Me dical Journal 313，253-258)。メタ分析に用いられた鬱病に対するSt．John's Wortの効力に関する制御された実験を、入れ替えによりランダム化または「ほぼランダム化」した。ハーブ単独もしくは他の植物抽出物との併用と、プラシーボおよび／または標準的な抗鬱薬との比較を行った。23の試験のうちの20は二重盲検試験、1つは一重盲検試験、2つはラベル明示試験であった。ほとんとが4〜8週間の試験期間であった。各試験方法の質を少なくとも2人により評価し、メタ分析に含めるに値するかを決定した。各試験において、鬱症状の改善は、評価者間の信頼性のある鬱病スケールを用いて、ごく一般的にはHamilton鬱病スケール(HAM-D)および臨床的な全体的印象スケール(CGI)を用いて評価した。ヒペリシン、標準化用の基準物質、または全抽出物のいずれの日用量も、それぞれ0.4、2.7mgから、および300、1000mgの量で実験ごとに大きく変化させた。単一のSt．John's Wort製剤とプラシーボとを比較した13の試験において、プラシーボでは22.3パーセント(94人)が改善されたのに対して、ハーブを服用した患者では55.1パーセント(225人)が改善された。標準的な抗鬱薬と比較した場合、単一製剤を用いた3つの試験および併用製剤を用いた2つの試験において、標準的な抗鬱薬では58.3パーセント(93人)に改善が見られたのに対して単一製剤では 63.9パーセント(101人)に改善が見られ、更に、標準的な抗鬱薬では50パーセント(66人)に改善が見られたのに対して併用抽出物製剤（St．John's WortとValer iana）では67.7パーセント(88人)に改善が見られた。研究者は、きわめて異なった実験のプールされたデータから価値ある結論を導き出す際の問題を指摘した。これらの問題は、実験ごとに使用されるハーブの種々の量および製剤と、ヒペリシンだけが生物活性成分でない可能性とが絡み合ったものである。これらの制約を除いて、Lindeおよび共同研究者らは、特定の鬱病を治療するうえでSt．John's Wortがプラシーボよりも良好であると結論付けるのに十分な証拠を見出している。しかしながら、これらのデータは、標準的な抗鬱薬として有効であると判断するには不適当である。ただし、副作用は少ないと考えられる。研究者は、こうした初期の効力が現れたことから、様々なSt．John's Wort製剤と標準的な抗鬱薬とを比較する長期の制御試験を行う価値があると考えている。メタ分析に関連した別の論評の中で、オランダの研究者Peter De SmetおよびW illen Nolenは、これらのデータは有望なものであるが、有効な抗鬱薬としてSt. John's Wortを許容するにはまだ十分ではないとの一致した意見を示した(De Sme t and Nolen，1996，British Medical Journal 313:241-247)。用量の標準化および試験期間の適正化が必要であるほかに、彼らは、重度の鬱病患者での試験および長期間の試験を行うことにより、遅発性副作用の出現および再発の危険性を評価する必要かあると述べている(De Smet and Nole，上記)。季節的情動障害を患った患者の他の一重盲検実験において(DSM-III-R判定基準 )、毎日900mgのSt．John's Wortを服用すると、従来の光治療の効果と等しい結果が得られることが観察された(Kapser et al.，1996，2nd International Co ngress on Phytomedicine，Munich)。動物実験向精神活性を予測する数種の動物モデルにおいて、市販の標準化されたSt．Jo hn's Wort抽出物(Psychotonin^TM)が試験された(Okpanyi and Weicher，1987，Ar zneim-Forsch 37:10-13)。これらの活性には、抗鬱薬に対して使用される2つの活性：すなわち、水車試験において増大する活性、および隔離された雄マウスの低下する攻撃性である。最近の発表の中で、Butterweckらは、St．John's Wort抽出物LI160と合成抗鬱薬であるブプロピオンとを比較した(Butterweck et al．2nd International Con gress on Phytomedicine，Munich;1996)。著者らは、尾吊下げ試験（マウス）および強制遊泳試験（ラット）において、両方の薬剤が類似の作用を示すことを見出した。St．John's Wort療法は、ドーパミン機能活性を低下させる薬剤（ハロペリドール、スルビリド、χ-メチルチロシン、およびγ-ブチロラクトン)と競合したため、筆者は、St．John's Wortはドーパミン作動性活性化を介してその活性を呈すると結論付けた。メタノール抽出物の種々の画分に関する研究から、成分が異なるために種々の活性が現れることが明らかになった。水／アルコール抽出物の肝臓保護活性が、500mg/kgの用量でマウスに腹腔内投与した場合について報告されている(Ozturk，et al.，1992)。この結論は、st.J ohn's Wortがラットにおいて胆管の流れを促進する能力、およびバルビツル酸処理されたマウスにおいてCCl₄誘発麻酔を弱める能力に基づくものであった。Mull erらは(1996年)、St．John's Wort抽出物LI160で中程度の期間にわたる処置(2週間で25Omg/kg)を行った後、ラットの前頭皮質におけるβ-アドレナリン作動性受容体の調節が15%低下したと報告した。同じ研究の中で、これらの筆者は、同じような用量(臨床的用量の10倍量)のイミプラミンの投与を行った後、調節が25% 低下することを見出した。 9.3.2. 抗ウイルス活性ヒペリシンは、現在、米国において抗ウイルス剤として初期の臨床試験段階にある(Bombardelli and Morazzoni，1995;Meruelo et al.，1988)。研究の結果、 St．John's Wortの主要成分のうちの2つ、すなわち、ヒペリシンおよび偽ヒペリシン(pseudohypericin)は、単純ヘルペスウイルス(Weber et al.，1994)およびA IDSに関連したウイルスであるヒト免疫不全ウイルスタイプ1(HIV-1)(Lavie et a l.，1989;Lopez-Bassocchi et al.，1991;Meruelo et al.，1988)などの様々な被包性ウイルスを阻害することが分かった。後者の研究者らは、ヒペリシンおよび偽ヒペリシンが独特で普通には見られないほど有効な抗ウイルス活性を呈すると結論付けたが、Weberらは(1994)、この原因は細胞およびウイルスの膜との非特異的な結合にあると提案した。マウスサイトメガロウイルス、シンドビス（Si ndbis）ウイルス、(Hudson et al，1991;Lopez-Bazzocchi et al.，1991)、およびウマ伝染性貧血ウイルス(Carpenter and Kraus，1991)に対しても活性が報告されている。抗ウイルス活性には、一重項酸素を形成してウイルスの融合やシンシチウムの形成を不活性化する(Lenard et al.，1993;Thomas et al.，1992;Yipet al.，19 96)光活性化過程が含まれると考えられる(Carpenter and Kraus，1991;Degar et al.，1993;Krausetal.，1990;Lopez-Bazzocchi et al.，1991)。ヒペリシンはi n vivoで抗ウイルス活性を示すが(マウス)、これらの光動力学的性質により抗レトロウイルス薬としての潜在的な有用性が制限される可能性がある。しかしながら、一重項酸素を生成するほかに、ヒペリシンは、酸素をスーパーオキシドラジカルに光還元することができ、更に、光の不在下でセミキノンラジカルを形成することができる(Lavie et al.，1995)。これらの後者の著者らは、こうしたセミキノン類を形成する能力がすべての動物における抗ウイルス活性化に寄与しており、しかも(1980年代初期から)ヒペリシンの臨床的応用に役立ってきたと考えている。ヒペリシンは、組織培養において神経膠腫細胞の成長を抑制すると報告されている(Couldwell et al.，1994)。この抗腫瘍性にも光活性が関与しているものと考えられる(Andreoni et al.，1994)。ヒペリシンおよび偽ヒペリシンは重要な調節酵素であるプロテインキナーゼC を抑制することが見出された(IC₅₀はそれぞれ1.7μｇ/mlおよび15μｇ/mlである )(Takahashi et al.，1989)。表皮細胞成長因子の受容体チロシンキナーゼ活性もまた、ヒペリシンによって抑制される(de Witte et al.，1993)。このような後者の作用は、抗ウイルス活性と抗腫瘍活性の両方に関連付けられてきた(Lavie e t al.，1995;Panossian et al.，1996)。 9.3.3. 創傷治癒効果オトギリソウは、歴史的に最も信頼された創傷治療用の薬用植物の一つであった。この活性の一部は、精油に起因すると考えられるオトギリソウの抗微生物活性によるものである。フラボノイド、フロログルシノール誘導体のヒペルフォリンおよびアドヒペルフォリン、およびキサントンキールコリンもまたオトギリソウの創傷治癒効果に寄与していると考えられている。精油およびアルコール抽出物の水溶性フラクションは、弱い抗真菌活性および顕著な抗細菌活性を示す。タンニンおよびフラボノイドは、1:400または1:200の希釈率において、E．coliを不活性化した(Khosa and Bhatia，1982;Shakirovaet al.，1970)。ヒペルフォリンおよびアドヒペルフォリンは、スルホニルアミドよりも大きい抗生効果を有することが報告されている(Negrash and Pochinok，1 972)。 5gの新鮮な花を100gのオリーブ油で20℃で10日間抽出して調製した熱傷用軟膏を、第１度、第２度および第３度の熱傷の治療に用いた。第１度の熱傷は48時間で治癒した。第２度および第３度の熱傷は、通常おこなう方法で治療した熱傷の３倍以上の速さで、搬痕を残さず治癒した。ケロイドの形成が阻害された(Salji c，1975)。市販の製剤（ノボイマミン：0.412％のクエルセチンを含む）は、黄色ブドウ球菌(Staphyloccusaureus)感染に対して効果があることが見いだされた (Negrash and Pochinok，1972)。これに関しては、その効果がスルホニルアミドを用いて通常おこなう治療よりも大きいことが同様に報告されている(Aizenman ，1969)。オトギリソウの同種療法用チンキ剤(1:10)について、その創傷を治癒する特性を研究し、別の広く使用されている創傷治癒用の草である、キンセンカ(Calendu la officinalis)と比較した。経口投与したオトギリソウのチンキ剤の効果は、キンセンカチンキ剤の局所適用と比較して、上皮形成および創傷破損強度の増加から明らかなように、切開、切除および死腔の創傷の治癒においてより著しいものであった(Gurumadhva et al.，1991)。［表16参照］表16 創傷治癒に対するオトギリソウおよびキンセンカのチンキ剤の効果 n＝7，*P＜0.001（Gurumadhva et al.，1991） 9.3.4 種々の効果オトギリソウは他の多くの症状に対しても有用であることが報告されている。一つの研究においては、オトギリソウのプロシアニジン(PC)フラクションを分離されたモルモット心臓調製物においてテストして(Melzer，et al.，1989)、サンザシ(Crategus)から得られたプロシアニジンと同じ方法で環状動脈の流量を増加させることを見いだした(Hawthorn)。同じ研究者が、ブタの分離された冠状動脈においてプロシアニジンフラクションをテストした。すべてのPCフラクションは、ヒスタミンまたはプロスタグランジンF2アルファで誘発される動脈の収縮を拮抗した(Melzer，et al.，1991)。別の研究において、予備的知見から、オトギリソウが慢性緊張性頭痛の治療に有用であることが示唆されている(Heinza andGob el，1996)。 9.4. シリカゲルカラムによるフラクション分析順相カラムクロマトグラフィーを用いて、アルコール性オトギリソウチンキ剤の分画をおこなった。この方法は、観察された優れた質量回収率(＞90%)、選択された基準物質（フラボノイド：マンギフェリン(mangiferin)、ルチン、ヒペロシド(hyperoside)、クエルシトリン、クエルシチン；ヒペリシン）の分離、および他の共存する成分の分離という理由から、好ましいクロマトグラフィー前の技術として選択された。使用した材料および方法については下に詳細に記載する。オトギリソウに対する化学標識を以下の方法を用いて選択した。オトギリソウ (Hyperium perforatum)に関する文献を広範囲に検索したところ、ヒペリシンおよび主要なフラボノイドのいくつか（ルチン、クエルセチン、クエルシトリン）が、多くのアッセイにおいて最も不変の生物活性[フラボノイド：鎮痛(Vasil'ch enko，1986)、鎮静(Berghofer，1987)、MAO活性(Kitanov，1987)；ヒペリシン：抗ウイルス(Bystrov，1975)、抗うつおよび抗不安(Duke,1992)]を有する成分であって、ヨーロッパにおいて感染症およびうつ病の治療に広く使われたことを裏付けることが示された。これは、以下において、個々の成分、またはヒペリシンおよびフラボノイドの大部分を含む化合物の種類が濃縮されているフラクションのどちらかを生体試験することにより、異なるグループによリ決定された。材料となる草：オトギリソウ(Hypericum perforatum)の生の材料から作られたアルコールチンキは販売元から購入した。分取カラムクロマトグラフィーの方法：およそ14mlの市販のアルコールチンキを一晩蒸発・乾燥し、640mgの残渣を得た。得られた抽出物を４部のSiO2とともに粉砕し、30gのSiO₂（シリカゲル）を詰めた分取解放ガラスカラムに載せた。C C（カラムクロマトグラフィー）の条件は、以下の通りである：カラム-SiO₂；流速133ml/時；５本のフラクション(200ml)を以下の溶剤を用いた溶離プロフィールにより集めた：CHCl₃/MeOH 8:2（はっきり区別できる着色したバンドからなる二つのフラクション）；CHCl₃/MeOH 7:3、CHCl₃/MeOH 1:1および100%MeOH。液状抽出物(SJO41、14ml)を減圧下蒸発・乾燥させ0.64gの残渣を得た。乾燥した残渣を４部のシリカゲルと共に粉砕し（密接に混合する）、クロロホルムに懸濁した30gのシリカゲルをあらかじめ充填したガラスカラムの上に載せた。クロロホルム：メタノールを用いた段階勾配により６時間にわたるカラムの展開をおこなった。溶離の過程において、8:2から7:3、1:1、そして最後は100％メタノールとなるように比率を変化させて、それぞれの段階に200mlの溶媒体積を用いた。二つのはっきリ区別できる着色バンドからなるフラクション１および２が、比率8:2のCHCl3:MeOH溶離液から得られた。他のフラクションは、それぞれ順次勾配溶離により得られた溶離液をあらわす。集められたフラクションを減圧下で蒸発・乾燥し、得られた収率を下に示す。 TLC分析： TLCのクロマトグラムは上に上げた５つのフラクションの教科書どおりの分離を示した。含まれる植物化学物質の標準品を同時にクロマトグラフィーにかけることはしなかった。フラクション分析による化学物質の含有量を図10に示す。 9.5. 生物学的活性の分析、モノアミンオキシダーゼ、セロトニン輸送体アッセイ、他のアッセイ 9.5.1. モノアミンオキシダーゼ-A（MAO-A）モノアミンオキシダーゼ（MAO、E.C.1.4.3.4）は非常に識別性の低い酵素で、これにより内在性物質（ノルエピネフリン、エピネフリン、ドパミン、チラミン、5-ヒドロキシトリプタミン）およびアミンである多くの薬物のようなさまざまな基質からのアミノ基の脱離を触媒する。MAOは、外因性の生物学的に活性なアミンに対する重要な防御機構として機能する。基質に対する異なる選択性と選択的阻害剤に対する異なる感受性を示す、少なくとも２つのタイプのMAOがあり、これらは、元来クロルジリンに対する感受性と5-HTに対する選択性（MAO-A）、およびセレジリン（デプレニル）に対する感受性とフェニルエチルアミンに対する選択性（MAO-B）により区別された。これらの二つのタイプのMAOは、異なる組織中にさまざまな比率で存在する分子そのものを識別しているように見える。最近治療に用いられるMAO阻害剤は比較的非選択的であるが、ある種の臨床的な利用法においては選択的な阻害剤が有利になる場合がある。MA O-Aの選択的な阻害剤（たとえば、クロルジリン）のみが主なうつ病の治療に有効性を有するように見えるし、また、選択的MAO-B阻害剤はパーキンソン病およびジスキネジーに有益な効果を有すると思われる。分画遠心分離によりラット脳から分離したミトコンドリアフラクション中でMA O_A酵素活性をアッセイする。40μｇの膜タンパク質を20mMリン酸緩衝液(pH7.4) に入れて、被検化合物と混合し、95μＭ[³H]セロトニン(2-10mCi/mmol)を加えることにより反応を開始する。37℃で20分間インキュベートした後、5% HClを加えることにより反応を停止する。抽出物中の[³H]セロトニンの放射能を測定する。化合物は10μＭでスクリーニングする。(Medvedev et al.，1994，Biochem．Pha rmacol．47:303-308)。モノアミンオキシダーゼA活性の阻害化合物 IC₅₀（μＭ）テトリンドールメシレート 0.046 ピルリンドールメシレート 0.016 *クロルジリン 0.00089 * 標準化合物モノアミンオキシダーゼAアッセイの結果は、下の結果を示す表に記載する。 9.5.2. モノアミンオキシダーゼB モノアミンオキシダーゼ(MAO、E.C,1.4.3.4)はあまり識別性の高い酵素ではなく、内在性の物質（ノルエピネフリン、エピネフリン、ドパミン、チラミン、5- ヒドロキシトリプタミン）ならびにアミンである多くの薬物のようなさまざまな基質からのアミノ基の脱離を触媒する。MAOは、外因性の生物学的に活性なアミンに対する重要な防御機構として機能する。基質に対する異なる選択性と選択的阻害剤に対する異なる感受性を示す、少なくとも二つのタイプのMAOが存在し、元来クロルジリンに対する感受性と5-HTに対する選択性（MAO-A）、および、セレジリン（デプレニル）に対する感受性とフェニルエチルアミンに対する選択性（MAO-B）により区別された。二つのタイプのMAOは異なる組織の中にさまざまな比率で存在する分子そのものを識別しているように見える。最近治療用に用いられるMAO阻害剤は比較的非選択的であるが、ある特定の臨床的な利用法においては、選択的な阻害剤が有利となることがある。MAO-Aの選択的阻害剤（たとえば、クロルジリン）のみが主要なうつ病の治療に有効性を有するように見えるし、選択的MAO-B阻害剤はパーキンソン病およびジスキネジーに有益な効果をもつと思われる。分画遠心分離によりラット肝臓から分離したミトコンドリアフラクション中で、MAO-B酵素活性をアッセイした。40μｇの膜タンパク質を20mMのリン酸緩衝液( pH7.4)に入れて、被検化合物と混合し、140μＭの[³H]ドパミン（2-10mCi/mmol ）を加えることにより反応を開始した。37℃で20分間インキュベートした後、5% HClを加えて反応を停止した。抽出物中の[³H]ドパミンの放射能を測定した。化合物は10μＭでスクリーニングした(Egashara et al.,1976，Biochem．Pharmaco l．25:2583-2586)。以下の対照標準化合物をモノアミンオキシダーゼBの阻害に用いた：対照標準化合物(IC₅₀(μＭ))；塩酸N-(2-アミノエチル)-4-クロロベンズアミド、(23)；塩酸N-(2-アミノエチル)-3-ヨードベンズアミド、(1.7)；およびクロルジリン、(0.0027)。 9.5.3. セロトニン輸送体(transporter)アッセイこのアッセイでは、セロトニンの取り込みに伴う前シナプス部位への[¹²⁶I]RT I-121の結合を測定した。体重175±25gの雄のウィスター系ラットの大脳皮質膜を、改変Tris-HCl pH7.4緩衝液中に標準的な技術を用いて調製した。膜の5mgのアリコートに10pM[¹²⁶I]RTI-121を加えて25℃で90分間インキュベートした。100 μＭのクロミプラミン存在下で非特異的結合を測定した。膜を濾過して３回洗浄し、特異的に結合した[¹²⁶I]RTI-121を測定するために濾過物をカウントした。化合物は10μＭでスクリーニングする(Boja et al.,1992，Synapse 12:27-36)。 MAO-Bおよびセロトニン輸送体アッセイについての結果は、下の結果を示した表に記載する。オトギリソウ抽出物の生物学的アッセイの結果標準/抽出物/フラクション MAO 5-HT 再取り込みヒペリシン陰性４μＭヒペロシド陰性陰性ルチン陰性陰性クエルセチン 1.9μＭ陰性クエセトリン陰性陰性マグニフェリン陰性陰性抽出物＃１陰性陰性抽出物＃２陰性陰性フラクション１陰性陰性フラクション２陰性陰性フラクション３陰性陰性フラクション４陰性陰性フラクション５陰性陰性生物学的アッセイにより、クエルセチンのMAO-A活性およびヒペリシンのセロトニン取り込み活性が証明された。しかしながら、抽出物（図11）およびフラクション（図10）のどちらも、どちらの標準（クエルセチン、ヒペリシン）についても二つの生体活性を検出するのに十分な量を含んでいなかった。したがって、これらの成分のそれぞれの寄与のパーセンテージを計算することはできなかった。 9.5.4. 他のin vitroでの研究以前の研究では、ヒペリシンは50g/mlの濃度でMAOを阻害することが報告されているが(たとえば、Suzuki et al.，1984，Planta Medica.50:272-274)、他の研究においてはこの効果を確認できていない(Bladt and Wagner，1994,J．Geria tric Psychiatry Neurology 7:S57-59;Dem isch et al.，1989,Pharmacopsychiatry 22:194;Thiede and Walper，1994，J． Geriatric Psychiatry Neurology 7:S54-56)。一つの説明は、Suzukiが用いたヒペリシンは80％の純度しかない抽出物であったと思われるということである。この調製物の残りの20％中の一つ以上の構成要素が、この弱い酵素阻害の原因を説明できる可能性もある。この可能性は、最大のMAO阻害を有するオトギリソウフラクションが最も高い濃度のフラボノイドを含有することを示したBladtおよびW agner(1994)の研究により支持される。オトギリソウの構成要素のコンピューターによるモデル化もまた、フラボノイドがMAO阻害剤フラクションに存在するらしいことを示唆しており(Holtje and Walper，1993，Nervenheilkunde 12:339-3 40)、近親の種(Hypericum brasiliense)においては、キサントンフラクションが、特にMAO-Aに対して、最も活性が高かった(Rocha et al.,1994，Phytochemistr y 36)。しかしながら、オトギリソウで見られるMAO阻害は、in vivoで確認できなかったため、薬学的に関連がないかもしれない。BladtおよびWagner(1994)は、ラットに300mg/kgのオトギリソウ抽出物を投与した後、生体外でのMAO阻害は見られなかったと報告した。これが活性成分の代謝が速いためなのか、他の理由によるものなのかは現時点では明言することはできない。けれども、オトギリソウ抽出物、LI160を用いておこなった薬動学的研究によれば、ボランティアのヒトに300 mgを一回投与した後にはヒペリシンの血漿レベルが1.5ng/mしかなく、定常状態で3.5ng/mlであった(Staffeldt et al.，1994，J．GeriatricPsychiatry Neurol ogy 7:S47-53)。活性化合物がヒペリシンよりもはるかに大量に存在しているか、シナプス末端に集中していない限り、これらの血液レベルはMAOを阻害するために必要な濃度よりも数桁低いものである。オトギリソウのさまざまなエタノール性フラクションを500μｇ/mlまでの超生理学的濃度で用いると、別のカテコールアミン分解酵素である、カテコール-o-メチルトランスフェラーゼ(COMT)の阻害もまた見ることができる (Thiede and Walper,1994)。他の提案されているメカニズムは、セロトニンへの効果に関係する。MullerおよびRossel(1994)は、オトギリソウ抽出物が、50μＭ（これらの著者が粗抽出物を指す場合に“モル濃度”という用語を用いる方法に従えば、約25μｇ/ml）の濃度でセロトニン受容体の発現を阻害することを報告しており、PerovicおよびM uller(1995)は、セロトニン取り込みの阻害（IC₅₀＝6.2μｇ/ml）を報告した(Mu ller and Rossel，1994，J．Geriatric Psychiatry Neurology 7:S63-64；Perov ic and Muller，1995，Arzneim-Forsch 45:1145-1148)。前者の効果を得るのに必要な濃度は動物の生体全体では決して実現できないものであり、後者の濃度も実現できるとは思われない。対照標準との比較から、Mullerらは、合成抗うつ薬のクロミプラミンのセロトニン取り込み阻害に対するIC₅₀は0.9nM(約0.3ng/ml) であると報告した(Muller et al.，1996，2nd International Congress on Phyt omedicine，Munich;1996)。さらに、Mullerらは、シナプトソームのGABA取り込み(IC₅₀＝１μｇ/ml LI 160)およびGABA_A-受容体の結合(IC₅₀＝3μｇ/ml)の両方の阻害についても報告した。また、オトギリソウ抽出物（濃度は記載されていない）がサイトカインの発現 [インターロイキン-6]を減少させることが、新たに提議された(Thiele et al.,1 994，J．Geriatric Psychiatry Neurology 7(前掲．1):S60-62)。この仮説は、インターロイキンが、うつ病になり易い個体のうつ病を軽減することができるというものである(Smith，1991，Med.Hypotheses 35:298-306)。おそらく精神神経免疫学の分野は大変新しいので、近い将来にこのメカニズムに関する明確な答えを出すことはできないかもしれないが、うつ病と免疫システムのつながりはまだ注目を集めている(Kook，et al.，1995，Biol．Psychiatry 37:817-819)。 NIMHスクリーニング契約(NovaScreen（商標），Baltimore，Maryland)によりオトギリソウ(Hypericum perforatum)の新鮮な花および蕾から得た約0.1%ヒペリシンを含む市販の粗抽出物｛1：1.5;水-アルコール(40:60)、開花した先端部から作ったもの；Herb Pharm（商標）｝を減圧乾燥し、4% DMSOに溶解して、最初の濃度である5g/mlに希釈して、39の受容体タイプおよび二つの酵素系の一連のin vitroのアッセイに用いた。少なくとも50% の放射性リガンド置換（またはMAOの50%の阻害）を示した受容体アッセイは、“ ヒット”であるとみなした。次いで、ヒットしたものについて濃度-反応曲線(IC₅₀ )を作製した。結果を表17に示す。表17 NIMH/Nova スクリーニング受容体結合/オトギリソウ抽出物 (HerbPharm)を用いておこなった酵素活性アッセイオトギリソウの粗抽出物は、アデノシン、GABA_A、GABA_B、ベンゾジアゼピン、イノシトール三リン酸(IP₃)、およびモノアミンオキシダーゼ(MAO-A、MAO-B)に著しい受容体親和性を有していた。粗製オトギリソウ抽出物によるMAOの阻害は、以前の報告と一致する(Bladt and Wagner，1994;Suzuki et al.,1984，Planta Medica．50:272-274;Thiede and Walper，1994)。結果を表18に示す。 *Ki＝IC5O/1＋リガンド親和性/リガンド濃度しかし、合成ヒペリシン（95%）は、粗抽出物とは異なり、0.1mMまでの濃度では有意なMAO-AまたはMAO-B阻害が見られなかった（表18）。ヒペリシンはNMDA受容体(Ki-1M)のみに親和性を持っており、NMDA拮抗体はgp 120で誘発される神経毒性を防ぐので、このことがその報告された抗ウイルス活性において或る役割を果たしているのかもしれない(Diop et al.，1994，Neuroscience Letters 165:1 87-190)。表19 受容体結合/ヒペリシンによる酵素阻害これらのデータは、この植物の他の成分が報告された精神治療活性に対してより重要であることを示唆する最近得られた薬学的な証拠と一致するものである。これらの結果のいくつは以前に報告されている（Cott，1995，Psychopharm.Bull etin 31:131-137;Cott，1996，Psychopharm．Bulletin 31:745-751)。GABA_AおよびGABA_Bを除いて、これらのin vitroの活性に必要なオトギリソウ抽出物の濃度は、動物または人の生体に経口投与した後で達成できないと考えられる。ここで示されたオトギリソウ抽出物のGABA受容体への非常に高い親和性が重要であると考えられる。必要な成分が全体的な循環に入る前に代謝されない限り、GABA受容体に結合するのに十分な血漿レベルとなることが予想される。Mullerら(1996)が GABA_AのIC₅₀が3μｇ/mlであると報告していることは注目に値する。ここで得られた知見との相違の理由はわからない。このGABA結合の意義は現在わかっていないが、GABAの感情障害における役割についての文献は多くある。GABA_Bの刺激は、イミプラミン治療の間の受容体を低下させる調節を増強することが見いだされている(Enna，et al.，1986，Barthol iniら編、GABA and Mood Disorders:Experimental andClinical Research:Raven Press:New York，NY，1986:23-49)。Nielsenらは、GABAの効果に似た薬物、フェンガビンがうつ病の外来患者に対して抗うつ効果を示したことを報告した(Nie lsen et al.，1990，Acta Psychiatrica Scandinavica 82:366-371)。Pettyらは、GABAの血漿レベルは双極性および単極性の両方のうつ病において低く、ベンゾジアゼピン（GABA_Aの活性を増強する）が、抗うつおよび不安に有効であることを報告した(Petty et al.,1992，Biological Psychiatry 32:354-363;Petty et al.，1993,Neuropsychopharmacology 9:125-132;Petty et al.，1995，Biologic al Psychiatry 38:578-591)。GABA神経系はドパミンおよびドパミン誘発行動をも調節する(Cott，et al.，1976，Naunyn Schmiedabergs Arch.Pharmacol．295: 203-209;Cott and Engel,1977，J．Neural Transm.40:253-268)。 9.6. 文献に記載されたオトギリソウの活性成分オトギリソウは文献に記載された生物学的活性を有する数多くの化合物を含んでいる。ほとんどの研究者は、その効果はいずれか一つの成分に起因するものではなく、さまざまな構成成分によって生じていると考えている。最も興昧を引いた構成成分には、ナフトジアンスロン、ヒペリシンおよびプソイドヒペリシン、ならびにクエルセチン、クエルシトリン、アメントフラボンおよびヒペリンのような広範囲のフラボノイドが含まれる。両方のクラスの化合物が、その抗うつおよび抗ウイルス活性に寄与していると報告されている。フロログルシノール、ヒペルフォリンおよびアドヒペルフォリン、精油、フラボノイド、およびキサントンのすべてが、オトギリソウの創傷を治癒する特性に寄与している。 9.6.1. オトギリソウの成分オトギリソウの主要な活性成分は、ナフトジアンスロン誘導体(＜0.1-0.15%)( Deutscher Arzneimittel-Codex，3rd Supplement 91 ed．1986)；ヒペリシン[0. 02-1.8%](Benigni et al.，Hypericum Piante Medicinali;Chlmica，Farmacalog ia & Terapia，Inverni & Della Beffa，Milano，1971)、プソイドヒペリシン、イソヒペリシン、エモジンアンスロンである。新鮮な材料にはプロトヒペリシンおよびプロトプソイドヒペリシンも存在する。これらの生合成前駆体は光に当たることによりヒペリシンおよびプソイドヒペリシンに変換する。シクロプソイドヒペリシンも引用されており、これはプソイドヒペリシンの酸化生成物である(E SCOP，1996，Monograph St．John's wort,European Scientific Cooperative fo r Phytomedicines)。 9.6.2. オトギリソウのヒペリシン含有量ヒペリシンの最高濃度は、乾燥した花において観察され(Benigni，1971)、これに続いて、さく果および最も高い位置の葉が高かった(Benign i，1971;Southwell and Campbell，1991，Phytochemistry 30:475-478)。比較的数多くの油分泌組織[mmあたり6.2]を有する葉の細い品種は、葉の広い品種[mmあたり2.2の油分泌組織]に比べて有意に高い濃度のヒペリシンを産出することが報告されている(Southwell and Campbell，1991)。オトギリソウ(H．perforatum)のさまざまな部分におけるヒペリシン含有量（g%）（Benigni et al.，1971;List and Horhammer，1993）ヒペリシン含有量（ppm）（Benigni et al.，1971）（Benigni et al.，1971;Southwell and Campbell，1991）９．６．３．オトギリソウ属植物のフラボノイド含量フラボノイド含量を調べた２２３種の植物のうち、セイヨウオトギリ（Hyperi cum perforatum）の花が、１１．７％でもっとも高かった（Tsitsina，1969，Tr ．Bot．Sadov．Akad．Nauk．Kaz.，111-114）。ビフラボノイドのうち、二量体、三量体、四量体、および高重合体からなるプロアントシアニジンが、植物の地上部分の乾重量の１２％に相当する。上記は、以下のフラボノイドを包含する；ケンペロール、ルテオリン、ミリセチン、クエルセチン（２％）；フラボングリコシド；クエルシトリン（０．５２４−０．３％）、イソクエルシトリン［０．３％］（Dorossiev，1985，Pharmazie 585-586;Koget，1972，Khimiya Prirodny kh Soedinea 242-243）、ヒペリン［０．７−１．１％ヒペロシド］（ListおよびHoerhammer，1993）、Ｉ３’、II８-ビアピゲニン[０．１−０．５％]（Bergh oeferおよびHoelzl，1987，Planta Medica 216-291;ListおよびHoerhammer，199 3）アメントフラボン、Ｉ３’、II８-ビアピゲニン（花において、０．０１−０．０５％）、ルチン［０．３％］（Akhtardzhievら，1984，Farmatsiya（Sophia ）34:1-6;BerghoeferおよびHoelzl，1989，Planta Medica．91;Kitanov，1987， Khimiya Prirodnykh Soedinenii 2:185-203）、ゲンチシン酸、ロイコシアニジン（Benigniら，1971）。（Benigiら、1971）フラボノイドおよびプロシアニジン濃度は、開花直前のつぼみの時期の花がもっとも高く（１１．７１％）、次に葉および茎である（７．４％）と報告されている。また、フラボノイド濃度は、標高の高いところで生育する植物、および南向きの日当たりのよいところで生育する植物よりもその植物の重量が少ないような北側斜面に生育する植物において、もっとも高いと報告されている（Brantner ら、1994，Scientia Pharmaceutica 62:261-276;Tsitsina，1969;Zhebeleva，19 73，Rast．Resur．2:402-404）。Ｉ３’、II８−ビアピゲニンの濃度はつぼみと花がもっとも高いが、その果実は非常に低濃度であって、茎および葉には含まれていない（BerghoeferおよびHoelzl，1987）。ヒペリンは花でもっとも高く（３％）、つづいて葉であり（１．０５−１．８０％）、茎では微量に存在するだけである（０．１３％）（MaksyutinaおよびKoget，1971，Khimiya Prirodnykh So edinenii，3:363-367）。クエルセチンは葉および花に存在するが（０．１−０．５８２％）、緑の葉では微量で、赤色の葉の方が高濃度であり、開花期の葉がもっとも高いが、さらに開花期の頂芽のほうが高い。ルチンはあらゆる部分に存在するが、花（０．０９５％）よりも出芽期の葉（２％）の方がかなり高く、乾燥条件で生育した植物の方が湿潤条件で生育したものよりも高い。さらにタ方収穫する場合が最高であると報告されている。日光のもとで細胞間解離した標品は、暗所で解離した標品よりも高濃度のルチンを与える（Benigniら、1971）。新鮮材料に関するある分析では、クエルセチンは、葉のみ、または開花している頂芽のみよりも、植物の上半分に高濃度に存在する（Smithら、1996，Quality Validation Laboratory Herb Pharm^TM:Willia ms，OR，1996）。（Akhtardzhievら、1984;Benigniら、1971;BerghoeferおよびHoelzl，1989; Brantnerら、1994;Dorossiev，1985;Kitanov，1987;Koget，1972;ListおよびHoe rhammer，1993;Smithら、1996;Tsitsina，1969）９．６．４．オトギリソウ属植物由来の精油精油はおもにモノテルペン（ピネン）およびセスキテルペンからなり、０．１ −１％を成している（Benigni，1971;ESCOP，1996)。主要化合物は、飽和炭化水素、メチル−２−オクタン（１６．４％）およびα−ピネン（１０．６％）を包含する；また、微量のメチル−２−デカン、メチル−２−ブテノールおよびウンデカン、α−およびβ−ピネン、α−テルピネオール、ゲラニオール、微量のミルセン、リモネン、カリオフィレン、フムレン、Ｃ₁₆およびＣ₂₄ｎ−アルカン、Ｃ₂₄、Ｃ₂₆およびＣ₂₈ｎ−アルカノールも存在する（BrondzおよびGreibrokk，1 983，Journal of Natural Products 46:940-941;Brondzら、1983，Phytochemist ry 22:295-296;MathisおよびOurisson，1964，Phytochemistry 3:37-378）。茎の精油含量は非常に少ないが、熟した朔果よりは多い。また、開花前の茎の方が（０．２６％）花における含量（０．１１％）より多い。茎を除去すると、植物は０．３５％の精油を与える(Benigniら、1971)。９．６．５．オトギリソウ属植物のフロログルシノールヒペルフォリン（フロログルシノールのプレニル化誘導体）、アドヒペルフォリン（ホップの苦みのもとであるアドフムロンに類似）。ヒペルフォリンおよびアドヒペルフォリン濃度は果実の形成期に著しく増加するが、このときヒペルフォリンは乾重量当り、花の２．０％から果実中の４．５％へと増加し、極性ヒペルフォリン様化合物は０．０５から０．３％に増加する。アドヒペルフォリンは花における０．２％から朔果における１．９％へと１０倍増加する（Benigniら、1971;Brondzら、1982，Tetrahedron Letters 23:1299-1300;Bystrov，1975，T etrahedron Letters 32:2791-2794;MaisenbacherおよびKovar，1992，Planta Me dica 291-293）。ヒペルフォリンは親油性で、熱や光にさらされると不安定である。９．６．６．オトギリソウ属植物におけるその他の化合物コリン、カロテノイド（ルテイン、ビオラキサンチン、シス−トロリキサンチン、トロリクロモン）、β−シトステロール、ペクチン、フロバフェンおよびロダン；コーヒー酸（０．１％）、クロロゲン酸、イソバレリアン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ニコチン酸（葉において０．１２％）、パルミチン酸およびステアリン酸；システイン、GABA（０．７mg/g）、グルタミン、ロイシン、リシン、オルニチン、プロリン、スレオニンを包含するアミノ酸；スコポレチン、ウンベリフェロン；ビタミンＣ、キサントノリグノイド（１．２８mg／１００ｇ、キールコリン）（BennettおよびLee，1989，Phytochemistry 28:967-998;Karryev ，1980，Izv．Akad，Nauk，Turkm．SSR．52-57;ListおよびHoerhammmer，1993）。９．６．７．分析方法マーカー成分として関心の持たれる二つの化合物は、二つの天然に存在する色素、ヒペリシンおよびシュードヒペリシン（ナフトジアントロン）を包含する。上記色素は、当該草本に特有なマーカーであって、メタノール中に容易に抽出される。二色素はいずれも最大吸収５８８nmにて可視光を吸収し、メタノール中で強く蛍光を放つ。二色素はいずれもその吸収スペクトルおよび発光スペクトルが、吸光率も含めて、類似している。上記二色素のそれぞれの濃度を決定するためには、二色素の分離が必要である。また、フラボノイドもオトギリソウ属植物の成分の中で重要な種類の化合物であると考えられる。二種類の化合物に関する方法を提示する。９．６．８．ヒペリシンおよびシュードヒペリシンの薄層クロマトグラフィー（ TLC）サンプルの調製乾燥植物材料の代表的なサンプルから、１．０ｇのサンプルを４回連続して１０ｍｌメタノールで繰返し抽出することによって、ヒペリシン抽出物を調製する。全４回の抽出の内容物全体をメスフラスコ中で５０mlに希釈する。この溶液を TLCまたはHPLCによる分析の前に０．４５μｍフィルターで濾過する。標準サンプルの調製合成ヒペリシン標品（ICN Biochemidal^TM，Cleveland，OH，Cat ♯ 193423）を０．１０mg／mlの濃度で精製メタノールに溶解し、０．４５μｍフィルターで濾過する。この標準保存溶液をTLCおよびHPLCの検量線作成に使用する。標準溶液／サンプル溶液の安定性ヒペリシンおよびシュードヒペリシン色素はいずれも、またそれらから調製された溶液も、暗所に保存すれば数ケ月間安定である。ストップテスト上記抽出物の濾紙上の小スポットは、３６５nmＵＶ光のもとで、鮮やかな赤色の蛍光を示す。液体の抽出物溶液も３６５nmＵＶ光のもとで鮮やかな赤い蛍光を発する。クロマトグラフィー条件 TLCのためのクロマトグラフィー条件は、典型的には下記の通りである。シリカゲル（例えば、蛍光指示薬をゲルに添加した、または無添加のEastman No．# 6060-13181）を、トルエン：酢酸エチル：氷酢酸（３：６：１）で展開する。一般に、１−５μｌのサンプルをキャピラリーを用いて添加する。３６５nmのＵＶ光を用いて検出を行う。ヒペリシン色素は鮮やかな赤色の蛍光を発するので、可視光による検出も可能である。ヒペリシンのRf値は０．７１、シュードヒペリシンは０．５０である。このアッセイの検出限界は０．２μｇである。９．６．９．ヒペリシンおよびシュードヒペリシンの高速液体クロマトグラフィー（HPLC）サンプル標品および標準は上記TLC実験の記載にしたがって調製した。HPLCパラメーターは下記の通りである。Waters Nova-pak C-18カラム、３．９×１５０ mmを、無勾配条件下で移動相を用いて展開するが、ここでの条件は移動相がメタノール：０．４％リン酸：トリエチルアミン（８２：１７：１）である。流速は、分速１．０mlとし、検出は５８８nmで可視光検出器を用いて行う。カラムは周囲温度で行う。実施時間は、１０−５０μｌのサンプル注入について通常１２分である。活性成分であるシュードヒペリシンおよびヒペリシンの溶離時間は、それぞれ２．８分および９．６分である。定量および検出の限界検出限界は、計測機器によって決まる。本発明者らはWaters Mod I^TM HPLCシステムを、Waters 991M Photodiode Array（PDA）検出器とともに用い、５８８n ｍでモニターした。検出限界はシュードヒペリシンおよびヒペリシンともに約２．５μｇである。スパイク回収率の確認スパイク回収率はスパイクされたサンプルの全ての吸収性が０．８AUFS以下の場合には、概ね１００％（＋／−５％）である。HPLC （フラボノイド、ヒペリシン、およびシュードヒペリシン）抽出濾過後、残渣を、超音波浴およびフィルターを用いて１０分間室温で４０mlアセトンで抽出する。メタノールおよびアセトン濾液を合わせて、真空下で濃縮乾燥する。乾燥物を４．０mlメタノールに溶解し、濾過する。フラボノイド、ヒペリシン、およびシュードヒペリシンのためのHPLCは以下の条件で行う。逆相（RP）８プレ−カラムを備えるLichroCart^TM逆相（RP）18スーパースフェアーカラム、４×２５０mmを、周囲温度で、０〜３９分までは1ml／分の流速で、４０分以降は０．６ml／分の流速で、展開する。注入量は２０μｌで、検出は UV２５４nmで行う。三つの異なる移動相を用いる。ルチン、ヒペロシド、およびイソクエルシトリンを検出するためには、アセトニトリル：水：リン酸（１６：８３：１）を使用し、溶出時間は３０分である。クエルシトリンおよびイソクエルセチンの検出には、次のような系を用いる、すなわちアセトニトリル：水：リン酸（３２：６７：１）で、溶出時間は４５分である。 I3，II8-ビアピゲニン、アメントフラボン、シュードヒペリシンおよびヒペリシンについては、条件は下記の通りである。溶媒系はアセトニトリル：メタノール：水：リン酸（５５：２０：２４：１）である。溶出時間は７５分とする。保持時間（分で表す）は、以下のとおりである：ルチン（１６．７）；ヒペロシド（１８．５）；イソクエルシトリン（１９．２）；クエルセチン（２３．８）；ルエルセチン（３６．４）；I3，II8-ビアピゲニン（４２．８）；アメントフラボン（５５．９）；シュードヒペリシン（５９．７）；およびヒペリシン（６８．４）。ルチン、ヒペロシド、イソクエルシトリン、クエルシトリンおよびヒペリシンの標準物質は、Sigma,St．Louis，MO，USAから購人し、他はRothから入手した。サンプルは、Kartnigら、1996，Plants Medica 62:51-53の方法にしたがって、メタノール中２５μｇ／mlの外部標準と比較して、定量される。９．６．１０．UV／可視分光法、（ヒペリシン／シュードヒペリシン）、サンプル調製１．０ｇの粉末草本サンプルを２５mlジクロロメタン（CH₂Cl₂）で、３回または濾液が透明になるまで抽出することによって、定量的な抽出物を調製する。ジクロロメタン抽出物を捨てる。乾燥させた残渣をアセトンで徹底的に抽出する。アセトン抽出物を真空下で蒸発乾固する。残渣を８mlメタノールで３回溶解し、２５ml容のメスフラスコに移す。総量２５．００mlとなるように、必要なだけの追加のメタノールを添加する。この溶液の１０mlを濾過する；はじめの２mlを捨てる。別の２５mlメスフラスコで、５．０mlの濾液を、メタノールで２５．００ mlに希釈する。９．７．オトギリソウ属植物成分、ヒペロシド、ルチン、クエルセチン、クエルシトリン、ヒペリシン、マグニフェリンのHPLC分析分析用HPLCの方法は下記の通りである。HPLCシステムは、二つの510型EFポンプ、717型オートサンプラー、486型UV−可視光検出器（254nmで使用）、およびM illenium^TMVersion 2.15システムコントローラーおよびデータプロセシングソフトウェアからなるWaters^TM HPLCシステムを用いた。１０μｌの注入量を逆相Ｃ −１８カラム（Beckman Ultrasphere，ODSカラム、５μm、２５０×４．６mm）にロードし、以下のような概要にしたがって、溶離液ＡおよびＢ（Ａ＝０．１Ｍ NaH₂PO₄(０．０５％ TFA H₂O溶液)、Ｂ＝ＡＣＮ）を用いた勾配溶出系によって分離を行った：０−１０分１００−６０％Ａ、０−４０％Ｂ：１０−２０分６０−０％Ａ、４０−１００％Ｂ；２０−３０分０−１００％Ａ、１００−０％Ｂ。流速は１．０ml／分に保ち、２５４nmでピークをモニターした。マグニフェリン、ルチン、ヒペロシド、クエルシトリン、クエルセチンおよびヒペリシン成分を測定した。市販の５サンプルに関する結果は下記の通りである：結果は図１１にも示してある。１０．実施例：ショウガ、Zingiber officinale ショウガは様々な方法で調製することができる。薄片に切ってもよいし、凍結乾燥してもよく、また微粉砕することもできる。精油を得るためには水蒸気蒸留することができる。溶媒抽出してもよい。１０．１．植物源／抽出方法：天然のショウガを処理し抽出する別の方法は、詳細な説明の処理および抽出の節の方法から明らかである。１０．２．販売元／製品名ショウガは、Hauser Nutraceuticals(Boulder,CO)、Herb Phyters(West Holly wood，CA)、Nature's Fingarprint Triarco Industries，Inc．（GNCより販売）、Natures Way(Springvale，UT)、Solaray(Ogden，UT)およびZintona(Israel)、 Herbal Choice-Botaria、Herb Pharm、Nature's Resourceを包含するさまざまな供給元から市販品として入手することができる。１０．３．臨床的適用ショウガは臨床用途は、乗り物酔い、および悪心や嘔吐の治療である。ショウガは、抗ヒスタミン作用として中枢神経系を通して作用するよりはむしろ胃腸管に作用することによって乗り物酔いを軽くすると思われる。一方では、ショウガは胃腸の反応およびその結果起こる吐き気の反応を抑止して、胃の固有運動性を増加させるとの提案がなされているが、他方では、証拠は発見されていない（Mo wreyおよびClayson，1982，Lancet 655）。ショウガは、月経障害、および吐き気または胃腸の不快感に関わる他の疾病も改善する。ショウガの別の用法は、術後の吐き気や嘔吐を防ぐことである（Arfe enら、1995，Anaesth．Intens．Care 23:449-454）。ショウガが、抗血小板活性を示し、粘膜の損傷を防ぎ、コレステロール低下活性、心臓血管活性、強心作用、抗炎症作用、および解熱作用を示すとの報告もなされている（Mustafaら、199 3，J．Drug Dev．6(1):25-39）。Mustafaはまた、ショウガがヒトにおいて、トロンボキサンＢ₂レベルを介して作用することを報告している。他の研究者らはプロスタサイクリン（PGE2）およびトロンボキサン（TXA₂）を介したショウガの活性を研究した（Bakon，1986，Med．Hypothesis 20:271-278）。１０．４．分取HPLCによる画分分析逆相分取HPLCを用いて、生のショウガのアルコール抽出物の分画を行った。この方法は、非常に高い回収率（＞９０％）が認められたこと、選択された標準物質（ショガオール(shogaol)およびギンゲロール(gingerol)）の分離、ならびにその他の共存する成分の分離に基づいて、望ましい分取クロマトグラフィーの技法として選択された。用いた材料および方法の詳細な説明を以下に示す。ショウガに対するマーカー化合物の選択は以下のプロトコールに基づく。ショウガ（Zingiber officinale）に関する文献についての包括的な探索によって、数多くの多様なアッセイにおいて、もっとも一貫して矛盾のない生物活性を有する成分として、６−、８−および１０−ギンゲロール、ならびに６−、８−および１０−ショガオールが示された（鎮痛性、制吐作用、抗５−ＨＴ、強心作用、プロスタグランジンおよびトロンボキサンの抑制（Duke，1992））。非−ＣＮＳ制吐作用の臨床的適用はプロスタグランジン／トロンボキサン生物活性によって支えられているが、この経路は消化管において鍵となる重要な役割を果す（酸の産生の調節／吸収／膜の再生）。これらのバイオデータは、異なるグループによって、個々の成分の生物検定によってまたはショウガの精油抽出物（大量のギンゲロールおよびショガオールを含有する）の生物検定により測定された。草本材料：一袋の粉末乾燥ショウガ（Zingiber officinale）原料をHauser Nu traceuticalsより購入し、LIMS 157381と名称を付した。分取HPLC法：約１５０ｇの乾燥ショウガ粉末を５００ｍｌの９５％ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏに懸濁し、一晩混合した。得られた抽出物を濾過し、回転蒸発によって油状残渣とし、１０ml残渣を分取HPLC（SepTech NavaPrep 5000^TM）に注入した。H PLC条件は以下のとおりとした：カラム-Vydac C18、5.0×25cm ID；UV検出器＠２８２nm；流速１００ml／分：勾配は１０％ＡＣＮ〜１００％ＡＣＮとし、引き続いて１０分間１００％ＡＣＮに保った。画分（３００ml）を、最初の３０分間は３分ごとに集め、次に３０分から４０分までを１リットルのｌ画分として集めて、全部で１１画分とした。分析HPLC法：HPLCシステムは、L-4500A Diode Array Detector、およびD-6000 Interface、L-6200A Intelligent PumpおよびAS4000 Intelligent Autosampler^TM からなるHitachi HPLCシステムとした。１０μｌ注入量を逆相Ｃ−１８カラム（Alltech Hypersil^TM ODS，５μｍ，4.6×260mm）にロードし、溶離液ＡおよびＢ（Ａ＝ＡＣＮ；Ｂ＝９９／ｌＨ₂Ｏ／MeＯＨ）を用いた勾配溶離系を利用して、以下の概要にしたがって、分離を行った：０−５分、５５％ＡＣＮ、４５％Me OH／H₂O；１４分、８０％ＡＣＮ、２０％MeOH／H₂O；２０−２５分、５５％ＡＣＮ、４５％MeOH／H₂O；０−５分、５５％ＡＣＮ、４５％MeOH／H₂O；０−５分、５５％ＡＣＮ、４５％MeOH／H₂O。流速を１．０ml／分に保ち、２８２nmでピークをモニターした。上記分析方法の再現性は２．５％相対標準偏差を越えるべきではない。逆相分取HPLCを用いて生のショウガのアルコール抽出物の分画を行った。この方法は、非常に高い回収率（＞９０％）が認められたこと、選択された標準物質（ショガオールおよびギンゲロール）の分離、ならびにその他の共存する成分の分離に基づいて、望ましい分取クロマトグラフィーの技法として選択された。用いられた材料および方法の詳細な説明を以下に示す。約１５０ｇの乾燥ショウガ粉末を５００ｍｌの９５％ＭｅＯＨ／Ｈ₂Ｏに懸濁し、一晩混合した。サンプル抽出物を回転蒸発によって油状残渣とし、この残渣１０mlを分取HPLCに注入した。HPLC条件は以下のとおりとした：カラム-Vydac C 18、5.0ｘ 25cm ID、カタログ番号218TP101550；検出器２８２nm；流速１０0ml ／分；３０分間は１０％アセトニトリルから１００％アセトニトリルまでの勾配とし、引き続いて１０分間１００％アセトニトリルに保った。画分を、最初の３０分間は３分ごとに集め、次に３０分から４０分までを１リットルの１画分として集めて、全部で１１画分とした。ショウガ（Zingiber officinale）に関する文献についての包括的な探索によって、数多くのアッセイにおいて、もっとも一貫して矛盾のない生物活性を有する成分として、６−、８−および１０−ギンゲロール、ならびに６−、８−および１０−ショガオールが示された（鎮痛性、制吐作用、抗５−ＨＴ、強心作用、プロスタグランジンの抑制；Duke，1992参照）。文献中の化合物の中から選択された上記化合物が、様々なグループによって、個々の成分またはショウガの精油抽出物（大量のギンゲロールおよびショガオールを含有する）を生物検定することにより下記において測定された。次に、６−ギンゲロール、８−ギンゲロール、１０−ギンゲロール、６−ショガオール、８−ショガオール、および１０−ショガオールを測定するために、上記のようにHPLCによって画分を分析した。Sigma Chemical Co.より購入したカプサイシン標準の応答に基づいて、すべての成分の定量化を行った。ショウガの化学分析のための標準物質は、文献の方法によって得ることができる。例えば、いくつかの総説があり、情報源は下記に見いだすことができる：（Gvindaragan，1 982，CRC; Critical Reviews in Science and Nutrition 17:191-196，189-256; Van Beekら、1987，Phytochemistry 26: 3005-3010）。各画分についての結果を表２０に示す。結果は図１２にも示す。表２０ショウガ画分の結果 HPLC分析後、各画分を蒸発させて油状の残渣とし、残渣の重量を測定した。１０．５．生物活性分析、トロンボキサン合成阻害、プロスタサイクリンアゴニスト；PGシンセターゼインヒビター；特異的バイオアッセイ、トロンボキサンシンセターゼ阻害１０．５．１．トロンボキサンＡ₂バイオアッセイトロンボキサンＡ₂（ＴＸＡ₂）は強力な血小板活性化物質であり、これは、例えばＡＤＰ、エピネフリン、および低濃度のコラーゲンおよびトロンビンのような弱い血小板アゴニストに対する応答を増幅するよう作用する。ＴＸＡ₂はシクロオキシゲナーゼによってアラキドン酸から生じ、それ自体は細胞の活性化の際にホスホリパーゼによって放出される。その結果生じた不安定なプロスタグランジンエンドペルオキシド（ＰＧＧ₂またはＰＧＨ₂）は、酵素ＴＸＡ₂シンターゼによってＴＸＡ₂に変換される。血小板の凝集によって生じるエンドペルオキシドおよびＴＸＡ₂は、主として血小板血栓にすぐ隣接する血管の領域に限定される強い血管収縮を引き起こすことができる。血小板凝集時に起こる強い血管収縮によって、脳または冠状動脈の梗塞にともなって血管痙攣が生じることがある。ＴＸＡ₂生産の増大は、さまざまな血栓症や虚血性疾患の病因と関係がある。ＴＸＡ₂生合成の阻害剤は、虚血性心疾患、脳梗塞、動脈硬化および糖尿病に対して有益な利点を有する。アッセイに使用されたミクロソーム画分のトロンボキサンＡ₂シンターゼは、ウサギ血小板から常法の遠心分離法によって単離される。反応は基質であるプロスタグランジンＧ₂を、試験化合物（または媒体）、アッセイバッファーおよび酵素を含有する試験管に添加することによって開始し、引き続いて３０分間３０ ℃でインキュベートした後、トロンボキサンＡ₂の生成が測定されるが、これは速やかにトロンボキサンＢ₂に変換される。トロンボキサンＢ₂の生成量をラジオイムノアッセイ法で定量する。化合物は１００μＭにてスクリーニングする（Gr eseleら、1991，Trends Pharmacol．Sci．12:158-163;Brownlieら、1993，Brit ．J．Pharmacol．110: 1600-1606）。トロンボキサンアッセイの結果は以下の通りである：ショウガ抽出物−生物学的アッセイ結果標準／抽出物／画分トロンボキサン６−ギンゲロール陰性８−ギンゲロール N．T．１０−ギンゲロール N．T．６−ショガオール N．T．８−ショガオール N．T．１０−ショガオール N．T．抽出物陰性画分＃１陰性画分＃２陰性画分＃３陰性画分＃４陰性画分＃５陰性画分＃６陰性画分＃７陰性画分＃８陰性画分＃９陰性画分＃１０陰性画分＃１１陰性 N．T．＝テストせずトロンボキサンアッセイにおいて抽出物、標準および画分の結果が陰性であったのは、このアッセイがあまりにも選択的であること（メカニズムが限られすぎていること）を示し、ショウガに適したアッセイではないかもしれない。ショウガ抽出物、画分および標準のプロスタグランジン関連生物活性を調べるためのより普遍的なアッセイは、プロスタノイドＦＰアッセイである。この組織アッセイの詳細を以下に示す。１０．５．２．プロスタノイドＦＰアッセイ頸部脱臼により犠牲にした、体重２７５±２５ｇのLong Evans産メスラットから採取した子宮のストリップを用いる。その組織を、３２℃で、リン酸緩衝塩類液（ｐＨ７．４）を含有する１０ｍｌのバッチ中に１ｇの張力のもとにおく。試験物質（３０μＭ）によって誘発され等尺的に記録された、５分間で５０％以上という収縮は、対照の０．１μＭＰＧＦ２αで誘発される応答と比較して、プロスタノイドＦＰ受容体アゴニスト活性の可能性を示す。有意なアゴニスト活性の見られない検体濃度で、５０％以上の程度までＰＧＦ２α−誘導収縮応答を低下させる能力は、プロスタノイドＦＰレセプターアンタゴニスト活性を表す。（ Pettiboneら、1991，J．Pharmacol．Exp．Ther．256:304-308;Vaneら、1973，Br ．J．Pharmacol．48: 629-639）。１０．６．化学分析、６−ギンゲロール、８−ギンゲロール、１０−ギンゲロール、６−ショガオール、８−ショガオール、１０−ショガオールに対するHPLC いくつかのショウガの市販品から得られた化学分析の結果は下記の通りである。結果を図３に示す。１１．実施例：Coriolus Versicolor １１．１ Coriolus Versicolorの成分の単離 Coriolus Versicolorはキノコである。薄いキノコの抽出物が術後の悪性腫瘍の治療に使用されている。Coriolus Versicolorの活性は、免疫調節作用に依っている。 Coriolus Versicolorの粉末多糖ポリペプチド（ＰＳＰ）粗標品６５０mg（Lan dford，１８カプセルロット番号９４１２３１）を、４５mlのバッファーＣ（実施例１１参照）に添加し、４℃で一晩攪拌した。翌日、溶液を遠心分離し（10,0 00 rpm，１時間）、上清を除去して、一連の糖特異的カラムに通した（流速６ml ／時間）。すべての非結合タンパク質を除去するために、カラムをバッファーＣで洗浄した。つぎに、各カラムをEDTAを含有するバッファーＤ（ヤドリギの節参照）で洗浄した（カラムの10倍量）。これらの溶出液を別々に集めたが、それぞれ、その結合特異性にＣａ⁺⁺を必要とする炭水化物結合タンパク質を含有していた。つぎに各カラムをバッファーＣで洗浄し、別々に０．５Ｍ糖（ラクトース、ガラクトースおよびメリビオース）含有バッファーＣで溶出した。各溶出液を集めたが、それぞれ、結合特異性にＣａ⁺⁺を必要としない炭水化物結合タンパク質を含有していた。塩および低分子量成分を除去するために、全部で６の溶出液を５Ｋカットオフ限外濾過膜を用いて濃縮した。それぞれのタンパク質およびカラムに結合しない物質の生物学的活性を、前記の実施例で用いたのと同じ白血病Ｌ１２系でアッセイした。各サンプルのタンパク質含量をBio Radによってアッセイし、サンプルの分子量は６．５％ＳＤＳゲルによってアッセイした。単離されたタンパク質13.87mg収率＝(13.87×100)/605＝2.29％ Coriolus Versicolorのサンプルに関する定量的および生物活性のタンパク質フィンガープリントを表２１に示す。医薬品級に対して確立された標準フィンガープリントを表２２に示す。サンプルと標準品のフィンガープリントの比較により、それらがマッチするか、即ち本発明ではサンプルが医薬品級であるか否かが判る。表２１ Coriolus Versicolorサンプルの定量的および生物活性のフィンガープリントａ培養中にL121O白血病細胞の生育を５０％阻害する阻害濃度（μｇ／ml）ｂ活性ユニットは、L121O細胞に添加したとき５０％生育阻害を引き起こすような特異的なフラクションに必要な希釈ファクターとして定義される。表２２ Coriolus Versicolorの定量的および生物活性の標準フィンガープリントａ培養中にL121O白血病細胞の生育を５０％阻害する阻害濃度（μｇ／ml）ｂ活性ユニットは、L121O細胞に添加したとき５０％生育阻害を引き起こすような特異的なフラクションに必要な希釈ファクターとして定義される。１２．実施例：アロエ、Aloe vera １２．１．植物源／背景アロエは元来二つの用途を有する。一つは傷を癒すための用途であり、抗炎症剤としての用途である。もう一つの重要な用途は、刺激的な緩下剤としてである。これは、Aloe veraまたはA．barbadnsisとして知られている。傷を治すためのアロエは、葉の中央から得られる粘液性のゲルである。緩下剤として利用するためのアロエの形態は、植物の葉の上皮の下側にある葉肉の外層と内層の境に存在する特殊な細胞から得られる。緩下剤の形状は、植物から得られる苦い黄色の乳液を原料として作られ、乾燥させると赤みがかった黒色の固まりとなる。二つのアロエの形状は全く異なっている。 Aloe veraゲルまたはAloe vera抽出物の別の用途は、肝臓の保護、関節炎のためであり、抗炎症剤としての利用、止痒剤としての利用、抗細菌剤としての利用、抗潰瘍剤としての利用がある。アロエを記載した参考文献には、LeungおよびFoster，1996，およびBisset,1994がある。アロエは乾燥した緩下剤の形状において、ドイツＥモノグラフで承認されている（Germany Commission E Monogra ph B Anz．No．154，1985年８月２１日）。１２．２．販売元／製品名アロエには多くの供給源がある。アロエは、Natures Way Products，Inc．(Sp ringville，Utah)によって、緩下剤の形で市販されている。市販されているゲル製剤は、Aloe vera（Aloecorp）、Aristo^TM（Steiner,Germany）、Krauterlax^TM （Dolorgiet，Germany）およびDermaide Aloe^TM（Dermaide Research Corp.）を包含する。安定化されたアロエゲル組成物が報告されている（米国特許第3,878, 197号、Maret）。１２．３．臨床的適用アロエの主要な臨床適用は上記で論じた、すなわち傷の治療、抗炎症作用、肝臓の保護、止痒作用、緩下作用、抗細菌作用および抗潰瘍作用である。アロエが有効である別の適用は抗白血病薬としてであり、これはin vitroでは証明されている（Kupchan，1976，J．Nat．Prod．39: 223）。ほかに消化性潰瘍に抗する活性が報告され、わずかな研究では血行が改善されている。FDAは、火傷の治療のためにアロエを研究したが、製品として認可するには証拠が不十分であり、文献による証拠固めが不十分であることを見出した。別の研究は、アロエが通常の環境のもとで、または凍傷のある患者に対して、傷の治癒を促進することを示した（Fulton，1990，J．Dermatol．Surg．Oncol．16(5):450;McCaulyら、1990，P ostgrad．Med．88(8):67）。しかしながら、また別の研究では、アロエが傷の治癒を遅らせることも見出された（SchmidtおよびGreenspon，1991，Obstet．Gyne col．78(1):115）。１２．４．画分分析ゲル濾過クロマトグラフィーを用いて、上記のようにアロエの炭水化物成分の画分分析を行った。１２．５．生物活性分析アロエは多くの生物学的作用を有することが報告されている。アロエは蠕動を刺激し、胃腺分泌を抑制し、毛細血管を広げることが知られている。アロエはまた、マイトジエン活性、赤血球凝集活性およびアンチトロンボキサン活性を有する。用いた基本的なアッセイは、肝細胞酵素、ラットの外科的癒傷モデル、シクロオキシゲナーゼ−１、シクロオキシゲナーゼ−２およびリポキシゲナーゼアッセイである。シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ活性は、上記のノコギリパルメットの節と同様に行う。アンチトロンボキサン活性は上記ショウガの節と同様に分析する。アロエ抽出物および画分は、傷の治癒能について米国特許第5,487,899号、Davis、の記載に従って分析する。該特許は、アロエ単独で、または他の薬品と組み合わせたときに傷の治癒を助ける能力を分析するための齧歯動物癒傷モデルを記載している。 12.6．化学分析バーバロイン（barbaloin）、イソ−バーバロイン、ｏ−グリコシド、多糖グルコマンナン、ブラジキニナーゼ、タンニンおよび乳酸マグネシウムを含む多くの推定成分がアロエ中にある。化学分析をHPLCおよびGPCにより行う。加えて、アロエの化学分析をまたガスクロマトグラフィー質量分光分析法(GC-MS)により行ってもよい。アロエの成分に関する化学分析の最近の例としては、1993年にYamaguchiにより行われている( Yamaguchiら，1993，Biosci.Biotech.Biochem．57(8):1350-1352)。そこでは、彼らは凍結乾燥アロエのヘキサン抽出物およびアセトン抽出物を研究した。ゲルは、酸性ガラクタン、マンナン、グルコマンナン、アラビナン、および／またはグルコガラクトマンナンを含む数種の型の多糖から主としてなる。多糖は新しいゲルの0.2-0.3％を構成する（Tyler &Foster，1996）。成分はプロスタグランジン前駆体としてアラセドン酸を含む(Afzalら，1991， Planta Med．57:38-40)。その他の主要成分は酸性ガラクタン、マンナン、グルコマンナン、アラビナンおよびグルコガラクトマンナンを含む多糖を含む。多糖は新しいゲルの0.2-0.3を構成する。多糖含量をGPCにより測定する。アロエから単離したグルリマンナンがMandelおよびDas，1980により報告された(MandelおよびDas，1980，Carbohydrate Research 87:249-256)。アロエ中のその他の化学活性化合物は、抗癌活性および抗炎症活性を示すレクチン様タンパク質を含む(Win tersら，1981，Economic Botany 35(1):89-95; Wintersら，1995，Phytotherapy Research 9:395-400)。アロエのその他の小分子成分は、種々の脂肪酸および種々の炭化水素を含む(Yamaguchiら，1993，Biosci.Biotech.Biochem．57(8):1350 -1352)。 13．実施例：コケモモ、Vaccinium Myrtillus それは典型的にはベリー（berry）の果実形態または抽出物として投与される。抽出物は典型的には１日１回または２回の160mgの投与量中36％アントシノシドに標準化される。 13.1 商用供給業者／製品名コケモモの種々の商用供給業者がいる。主要製品の一つはIndena-Inverni del la Beffa Research Laboratories(Milan，Italy)によるTegens^TMである。Myrtoc yan^TM(Morazzoniら，1990，Fitoterapia,v LXI: 1)はV.myrtillus(Tegens^TM中の一成分)からのアントシアノシド複合体の商品名である。コケモモ抽出物はまたN atural Factors Nutritional Products，Led．（Burnaby，British Columbia，C anada）およびMurdock Madaus Schwabe(Springville，Utah)から入手し得る。カプセル形態のコケモモ、25％アントロシアノシド（anthrocyanoside）はHerbal Choice-Botalia、PhytoPharmica、Source Natural、Nature's HerbsおよびNatur e's Wayから入手し得る。 13.2 臨床的適用コケモモの臨床的適用は様々である。主要な適用は下肢の静脈不全、拡張蛇行静脈、アテローム硬化症および変性性網膜症状である。これは毛細血管強化活性および血管収縮性の改善のためであると考えられる。また、コケモモは抗炎症活性、抗下痢活性、創傷治癒活性、および血管保護活性を有することが示されている。血管保護活性および抗炎症活性を有するその植物が局所または静脈内に投与されてもよい(Liettiら，1976，Arzneimittel-Forschung 26(5):829)。 13.3 画分分析コケモモの成分はタンニン、アントロシアニン、フラボノイド、種々の転化糖およびペクチンを含む。コケモモの成分をHPLC、GPCまたはゲル濾過によリ分離する。カラムの例として、ポリマー・ラボラトリーズPL-ゲル5m 500Åポリマー、Toyopearl 8HW 40Sカラムが挙げられ、またSephadex^TMLH-20デキストランカラムも使用される。分画した物質を酢酸エチル水溶液、水および／またはアルコール並びに／あるいは水および／またはアセトン移動相によるゲル濾過に供する。逆相カラムクロマトグラフィー(RP-HPLC)を使用し、水並びに／または水およびアセトン並びに／または水およびアルコールを移動相として使用して、HPLCを行う。GPCについて、水並びに／または水およびアルコール並びに／または水およびアセトニトリル（緩衝液を使用し、または使用しない）を使用する。Sephadex^TMカラムについて、エタノールまたはクロロホルムを使用し、エタノールを溶離剤として使用する。 13.4 生物学的活性分析静脈不全適用についてのコケモモに関する分析の一次生物学的方法は、血管収縮性アッセイおよび血小板凝集による。抗炎症活性について、一次アッセイはシクロオキシゲナーゼ-1および-2並びに5-リポキシゲナーゼである。実験を上記の Saw Palmetto節に記載されたようにして行う。血小板活性化因子アッセイをMorazzionおよびMagistretti(1990，Fitoterapia 61(1):13-21)により記載されたようにして行う。in vitroの血小板凝集、in vi voの血小板凝集およびex vivoの血小板付着性を測定する。血管拡張剤抑制効果の静脈不全臨床適用に関する別のアッセイを、アセチルコリンに対する冠動脈セグメントの収縮応答の研究(Bettiniら，1991，Fitoterapia 62(1):15-28)により行う。 13.5 化学分析 HPLCを使用して、化学分析を行う。主成分はタンニン、アントシアニン、フラボノイド、植物酸、転化糖、ペクチンである。 14．実施例：ブラックコホッシュ、Cimicifuga racemosa 14.1植物源／バックグラウンドブラックコホッシュは乾燥した根茎または根として投与される薬剤である。それはキンポウゲ（buttercup）ファミリーの一員である。それは開かれた森林中で、又はオンタリオからテネシー更にはミズーリーのような離れた西部までの稠密な森林の端部で成長する。ブラックコホッシュは月経困難、消化不良およびリウマチの治療に従来から使用されていた。 14.2 商用供給業者／製品名ブラックコホッシュの種々の商用供給業者がいる。主要製品の一つはShaper&B rummer（Salzgitter，Germany）のRemifemin^TMである。別のヨーロッパの製品は Klimadynon^TMと称される(Jarryら，1995，Phytopharmaka Forsch.Klin.Anwend.- Conference Proceedings pp．99-112)。また、Wild Appalachian Black C ohosh Root Extract^TMとして販売される製品がMurdock Madaus Schwabe（Spring ville，Utah）から入手し得る。 14.3 臨床的適用 German Commision E Monographは月経前不快および月経困難についての使用を記載している。それは典型的には茶、煎剤またはアルコール中のチンキ剤として１日あたり40-200mgの投与量で投与される。ブラックコホッシュに関する臨床的適用は月経前症候群、月経困難、消化不良、リウマチ、咽喉炎、気管支炎、鎮静および月経サイクル調節剤としてである。一つの臨床研究では、エタノール抽出物が脳下垂体黄体形成ホルモン(LH)の血清濃度の選択的低下を生じさせることがわかった(Bradley編集British Herbal Compendium，Vol.1，British Herbal Med icine Association:Dorset，England，1992)。 14.4 画分分析上記のSt．John's Wort節に記載されているように逆相HPLCを使用して、ブラックコホッシュの臨床分析を行う。 14.5 生物学的活性分析月経前症候群臨床適用に関する一次バイオアッセイはエストロゲン受容体結合アッセイ、黄体形成ホルモンアッセイ、FSHバイオアッセイおよびオキシトシンバイオアッセイである。 14.5.1．エストロゲン受容体ブラックコホッシュの全物質および成分の画分のin vitro結合を幾つかのエストロゲンアッセイにより分析する。一つのアッセイは２種の凍結した仔ウシ子宮エストロゲン受容体の結合である。第二のアッセイはin vitroのエストロゲン拮抗作用である。第三のアッセイはラット子宮エストロゲン受容体モデルである。ブラックコホッシュ抽出物および画分を３日連続にわたって体重13±1gの５匹のICR由来未熟雌マウスのグループにp.o.投与し(10mg/kg)、最終投与の直後に安息香酸エストラジオール(3μｇ/kg s.c.)で抗原投与した。動物を最終投与の24 時間後に犠牲にし、それぞれの動物の子宮の湿潤重量を測定する。子宮重量のエストラジオール誘導増加の50％以上（≧50）の減少がエストロゲンアンタゴニスト活性を示す(Hirotsuら，1986，Arzneim.-Forsch．38(11): 1410-14 16)。化合物 ED50mg/kg p.o. ^*タモキシフェン 0.1ｘ３ ^*は使用した通常の基準薬剤を示す。ラットエストロゲン受容体への全ブラックコホッシュ抽出物、ブラックコホッシュ画分および成分の結合をJarryら，1985（Jarryら，1985,Planta Med．4: 31 6-319)に記載されているようにして行う。 14.5.2 オキシトシン受容体アゴニストアッセイ頸部脱臼により犠牲にした体重275±25gのLong Evans由来雌ラットから得られた子宮を静脈切除（strip）して使用する。その組織をリン酸緩衝化生理食塩水( pH7.4)を含む浴10mlに32℃で1gの張力下に置く。ブラックコホッシュおよび画分を30μＭで導入する。対照２nMオキシトシン応答に対し、５分以内で50％より大きい誘導された等長で記録された収縮が、オキシトシン受容体アゴニスト活性の可能性を示す。有意なアゴニスト活性が見られないような試験物質濃度では、50 ％より大きくオキシトシン誘導収縮応答を減少させる能力により、オキシトシン受容体アンタゴニスト活性が示される(Pettiboneら，1991，J.Pharmacol.Exp.Th er.256: 304-308)。アゴニスト(#45900) EC50（μＭ） ^* オキシトシン 0.0012 プロスタグランジンF₂α 0.035 アンタゴニスト(#45901) EC50（μＭ） ^*d(CH₂)₅ ［Tyr(Me)₂、Thr₄、 0.012 Orn₈ ］OT_1-8 ^*は使用した通常の基準薬剤を示す。 14.5.3 LH減少アッセイ黄体形成ホルモンアッセイ(LH)をJarryおよびHarnischfeger，1985（JarryおよびHarnischfeger，1985，Planta Med．1:46-49）により記載されているようにして行う。 14.6．化学分析ブラックコホッシュ中の成分として、ステロイドトリテルペン（アクテイン、シミゴシド、27-デオキシアクテイン、シミシフギン、タンニンおよびアルカロイド）が挙げられる。また、ホロノネチンを含むイソフラボンもブラックコホッシュ中に存在する。また、微量成分として、イソフェルラ酸系化合物（isoferul ics）およびサリチル酸系化合物（salicyclics）が挙げられる。それらをHPLCにより分析する。 15．実施例：カミルレ、Matricharia recutita 15.1植物源／バックグラウンド薬剤カミルレはゲルマンカミルレ、Matricaria recutitaの乾燥した頭状花からなる。また、ゲルマンカミルレとは異なるChamaelum nobleから得られたローマンカミルレがある。ローマンカミルレは殆ど英国で使用される。また、German therapeutic monographは胃腸痙攣および胃腸管炎症疾患用のカミルレ製剤を有する。また、局所用製品が使用される。 15.2 商用供給業者／製品名カミルレの種々の商用供給業者がいる。主要製品の一つはAsta Medica AG（Fr ankfurt am Main，Germany）のKamillosan^TMである。カミルレ乾燥抽出物がInde na s.a．(Milan，Italy)から入手でき、１％全アピゲニンおよび0.5％エッセンシャルオイルを含むように標準化される。また、German Chamomile Flowers^TMとして販売される製品がMurdock Madaus Schwabe（Springville，Ut-ah）から入手し得る。 15.3臨床的適用カミルレは多くの臨床的適用を有する。一次適用はGI困難用の抗痙攣剤および皮膚の抗炎症剤としての使用である。その他の適用は一般的な風邪、消化不良合併症、アクネ、口の炎症の治療および創傷治癒を含む。また、カミルレは殺菌活性および殺真菌活性を有すると報告されている。典型的には、花１もしくは２ｇまたはチンキ剤１〜４mlの注入が胃腸痙攣に使用される。従来の使用は胆嚢水腫(cholic)、下痢、消化不良、不眠症、乳児痙攣、歯の痛み、並びに出血および腫れ上がった歯肉の治療を含む。カミルレの抗菌使用の一例はCarleらの米国特許第5,244,885号に記載されたような膣灌注（vaginal douch）としてである。 15.4画分分析カミルレの画分分析をSt.John's Wortについて上記された方法と同様の方法で逆相クロマトグラフィーを使用して行う。 15.5生物学的活性分析カミルレの生物学的分析を行うのに、酵素アッセイ、組織培養アッセイおよび共生物(co-organism)アッセイを含む多くの方法がある。抗炎症活性に関する酵素アッセイはシクロオキシゲナーゼ-1および-2並びに5-リポキシゲナーゼである。これらのアッセイを上記のSaw Palmetto節に記載されたようにして行う。筋肉痙攣組織培養アッセイを分離したモルモット回腸について行う。痙攣アツセイをCarleおよびGomaa，1992(CarleおよびGomaa，1992，Drugs of Today28(8) : 559-565;Achterrath-Tuckermannら，1980，Planta Med．39:38)に記載されたようにして行う。また、マスト細胞へのCa²⁺流入並びにマウス耳皮膚炎およびラット足膨潤アッセイを含む全動物アッセイを行う。マウス耳実験は以下に記載されるとおりである。 15.5.1マウス耳皮膚炎モデルカミルレ抽出物、オイルおよび画分を予め剃られた腹表面に適用されるオキサゾロン（５％溶液0.1ml）への感作の１時間前に体重22±2gの５匹のICR由来雄マウスのグループにi.p.投与する(0.1、１、10および100mg/kg)。７日後に、動物の右の耳に適用されるオキサゾロン(２％溶液25μｌ)を抗原投与し、ビヒクルを左の耳に適用する。24時間後に、それぞれのマウスを犠牲にし、耳の厚さをDyer Modelマイクロメートルゲージで測定する。ビヒクル処理対照グループに対する30％以上（≧30）の増進が有意と考えられ、これにより免疫刺激活性の可能性が示される(Griswoldら，1974，Cell.Immunol．11: 198-204)。化合物 ED30mg/kg i.p. ^*Azimexone 100 Bestatin 1 Levamisole 30 ^*は使用した通常の基準薬剤を示す。 15.5.2ラット足膨潤アッセイ足炎症実験を以下に記載されるようにして行う。カミルレ抽出物、オイルおよび画分をカラゲーナン（１％懸濁液0.1ml、足底内）の右後足注射の１時間前に体重150±20gの３匹のLong Evans雄または雌の終夜拘束したラットのグループに p.o.投与する(100mg/kg)。カラゲーナン投与の３時間後の30％以上（≧30）の後足浮腫の減少が有意な急性抗炎症活性を示す(Winterら，1962,Proc.Soc.Exper.B iol.Med．111: 544-547)）。化合物 ED30mg/kgp.o. アセタゾラミド >50 アスピリン 150 BW 755C 30 Clonidine 1 Diflunisal 30 Furosemide 50 Hydrocortisone 30 Hydroflumethiazide >50 Ibuprofen 30 ^*Indomethacin 3 Ketoprofen 3 Naproxen 3 Phenidone 50 Phenylbutazone 50 Probenecid >50 Salbutamol 10 ^*は使用した通常の基準薬剤を示す。 BW 755C=３−アミノ−１−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−２−ピラゾリン 15.6化学分析化学分析をHPLCにより行う。成分として、α−ビサボロール、α−ビサボルオキサイドａおよびｂ、並びにカマズレンが挙げられる。また、成分として、フラボノイド、例えば、エピゲニン、ロイトリン、ペルシチン、ミリシチン、エピゲニン７グルコシドおよびエルチンが挙げられる。 16．イタリアニンジンボク、Vitex agnus-castus 16.1植物源／バックグラウンドイタリアニンジンボクベリーの源は西アジアおよび南西ヨーロッパに自生し、そしてまた北アメリカに広く分布している小さい木であるvitax agnus cultusl ，shrubの果実である。イタリアニンジンボクは月経問題について2,000年以上にわたって使用されており、典型的には乾燥果実20mgの投与量について粉末果実のアルコール抽出物として投与され、または１日あたりの投与量で果実30-40mgを使用して煎剤として投与される。 16.2商用供給業者／製品名イタリアニンジンボクの種々の商用供給業者がいる。製品の幾つかはMurdockM adaus Schwabe(Springville，Utah)のFemaprin^TM、Madaus A.G．(Koln，Germ any)のAgnolyt^TM、およびStrotan^TMカプセル(Hamburg，Germany)である。また、抽出物がBionorica^TM(Germany)、Femaprin-Vitex^TMからカプセル形態であるagnu sideとして入手でき、0.15％がNature's Wayにより入手し得る。 16.3臨床的適用イタリアニンジンボクに関する臨床的適用は多く、PMS症候群の改善および月経サイクル調節、抗感染活性および増大された泌乳を含む。また、乳房痛および月経閉止症候を助け、不十分な泌乳を治療することが知られている。また、それは抗痙攣剤として使用される。 16.4画分分析イタリアニンジンボクの画分分析を上記のSaw Palmettoの方法と同様の方法で行う。分画をヘキサンで開始し、酢酸エチルの如きより極性の溶媒に向かって作用するシリカゲルクロマトグラフィーで行う。また、C-18カラムを使用し、溶媒系としてアセトニトリルから水へと作用させて、逆相RPクロマトグラフィーを行う。 16.5生物学的活性分析イタリアニンジンボク抽出物、イタリアニンジンボクベリー、イタリアニンジンボク画分およびイタリアニンジンボクからの特定化合物の生物学的分析は下記のアッセイの使用に基いている。ドーパミン拮抗作用活性について分析し、プロラクチン分泌の抑制を測定し、黄体形成ホルモン(LH)を増加し、卵胞刺激ホルモンを減少する。また、イタリアニンジンボク抽出物は抗菌活性を有することが示されていた。一次アッセイはラット脳下垂体細胞からのプロラクチン分泌の抑制である(Sli utzら，1993，Horm.Motab.Res．25:253-255)。このアッセイでは、新たに回収したラット脳下垂体を使用する細胞培養系をチロキシン放出ホルモン(TRH)の正の制御によるプロラクチンの放出について分析する。別の研究者らによるアッセイでその活性が判明した。黄体形成ホルモン(LH)アッセイを上記されたブラックコホッシュの例(Jarryら，1985)のようにして行う。 16.6化学分析化学分析をGC-MSまたはHPLCにより行う。公表された操作(ZwavingおよびBos， 1996，Planta Med．62:83-84)を使用して、イタリアニンジンボク成分のGC-MS分析を行う。イタリアニンジンボクの成分として、リモネン、シネオレ、サビネン、フラボノイド、ブランチンおよびイソビテキシンが挙げられる。 17．実施例：ウマグリ、Castanea dentata，Aesculus hippocastanum 17.1植物源／バックグラウンドウマグリはトチノキ（aesculus）の果実であり、この木は成長して75フィートの高さになり、米国およびヨーロッパで一般的である。殻が乾燥する時、堅果が放出される。ウマグリの抽出物が拡張蛇行静脈および痔を含む種々の使用のために市販されている。 17.2商用供給業者／製品名ウマグリの種々の商用供給業者がいる。主要製品の一つはKlinge Pharma（Mun ich，Germany）のVenostasin retard^TMである。ウマグリの新鮮な成熟種子からの液体薬草抽出物がHerb Pharm（Williams，Oregon）から入手し得る。この抽出物は58-64％グレインアルコールおよび蒸留水を含む。ウマクリ乾燥抽出物はInd ena s．a．（Milan，Italy）から入手でき、アエシン(aescin)として計算して20 ％トリテルペンサポニンを含むように標準化される。また、粉末化抽出物がZuel lig Botanicals，Inc.(Germany)の部門であるBotanicals Internationalから入手し得る（最低20％アエシン）。 17.3臨床的適用ウマグリに関する臨床的適用は以下のとおりである。静脈不全、痔、拡張蛇行静脈、湿疹、月経痛および静脈炎。22人の患者に関する一つの臨床研究は市販のウマグリキスVenostatin^TMを使用する。彼らはVenostatin^TMが経毛細管濾過を減少することにより浮腫形成に関して抑制効果を有することを判明した(Bislerら，1986，Dtsh.Med.Wochenschr．111(35):1321-1329)。別の研究では、月経閉止の婦人中の増大されたゴナドトロピン放出が報告された。Dukerらは、ウマグリのエタノール抽出物であるRemifemin^TMが黄体形成ホルモン(LH)分泌を減少させることを1990年に報告した。その研究では、FSHレベルではなく、LHレベルが、その抽出物を服用した患者で有意に減少した。ウマグリの抽出物は慢性静脈不全の患者で特に有効であった(Hitzenberger，1989，W ien.Med.Wochenschr.，139(17):1385; Diehmら，1992，Vasa 21:188)。 17.4画分分析ウマグリキスの画分分析を行うのには幾つかの方法がある。アセトンの如き溶媒を用い、メタノールの如きより強力な溶媒に作用する、シリカゲルクロマトグラフィーを行う。また、溶媒系としてアセトニトリルおよび水を使用して、逆相クロマトグラフィーを行ってもよい。他人が溶離剤としてメタノールを使用して Sephadex^TMLH-20カラムによる成分の分離を報告している(Dukerら，1991，Plant a Med．57:420-424))。 17.5生物学的活性分析ウマグリキス、画分および特定の化学マーカーの成分を、自然活性化ラット門静脈モデル、分離された犬静脈モデル、およびラット中のリンパ系浮腫を含む幾つかの様式で分析する。特定化合物中のウマグリキス画分の抗炎症活性をカラゲーナン浮腫誘発ラットモデルおよび上記の抗炎症アッセイ、即ち、シクロオキシゲナーゼ-1およびシクロオキシゲナーゼ-2並びに5-リポゲナーゼモデルにより測定する。下記の操作を使用して、門脈モデルを行う。 17.5.1自然活性化された門静脈頸部脱臼により犠牲にされた体重275±25gのLong Evans由来雄または雌ラットから得られた門静脈環を使用する。その組織をリン酸緩衝化生理食塩水(pH7.4) を含む10mlの浴中で32℃で2gの張力下に置いて、自然筋収縮を発生させる。30μ Ｍのウマグリ粉末、種子または画分が10分以内に等長記録した弛緩を50％より多く誘発する時、それは有意な活性を意味する(Hamiltonら，1986，Br.J．Pharmac ol．88: 103-111)。アゴニスト EC50（μＭ） Cromokalim 0.17 ^*Pinacidil 0.84 ^*は使用した通常の基準薬剤を示す。公表された方法(GuillaumeおよびPadioleau，1994，Arzneimittleforschung44 :25-35)を使用して、イヌ静脈モデルを行う。エストロゲン受容体への［³H］エストラジオールの結合の調節を測定するエストロゲン受容体ッセイを使用して、ウマグリのステロイド成分の抗炎症活性を分析する。通常の技術を使用して、凍結した仔ウシ子宮からのサイトゾルを改良Tr is-HCl（pH7.4）緩衝液中で調製する。サイトゾルタンパク質のアリコート100μ ｇを14-16時間にわたって４℃で1.5nM［³H］エストラジオールとともにインキュベートする。非特異的結合を5.8μＭジエチルスチルベストロールの存在下で推定する。結合した［³H］エストラジオールをデキストラン被覆木炭への吸着により遊離ラジオリガンドから分離する。低速遠心分離後に、アリコートを上澄みから除去し、カウントして特異的に結合した［³H］エストラジオールを測定する。ウマグリのサンプルを推定平均分子量200に基いて10μMでスクリーニングする(M cGuireら編，Estrogen Receptors in Human Breast Cancer．Raven Press，N.Y ．1975)。アッセイ基準データ：Ｋ^d 0.06 nM Ｂ^max： 42fmol/mgタンパク質特異的結合： 75％化合物 IC50（nM）Ｋⁱ（nM） nH ＊ジエチルスチルベストロール 0.65 0.025 1.0 17−α−エストラジオール 1.1 0.041 0.7 エチニルエストラジオール 0.081 0.003 1.1 ＊は使用した通常の基準薬剤を示す。カミルレ節に上記したプロトコル後に、ラット足浮腫モデルを使用して、分析を行う。また、公表されたプロトコルを使用する(Duker，1991，Planta Med． 57: 420-424; Senatore，1989，Boll.Soc.It.Blol.Sper．65(2):137-141)。 17.6化学分析 HPLCを使用して化学分析を行う。成分として、デイック酸(delc acids)、フェノール酸、クマリン、シクリトール、アエサイン（aesain）、サポニン、種々のトリテルペン、種々のフラボノイド、ポリプレイノイド、モノテルピン、脂質および炭水化物が挙げられる。 18．実施例：エキナセア、ECHINACEA ANGUSTIFOLIAおよびポプラ 18.1植物源／バックグラウンドエキナセアは典型的には１日あたり900mgの投与量で投与される。それはしばしば50％エタノールで調製されたチンキ剤(1:5)の形態で投与される。エキナセアは錠剤またはカプセルの形態で投与され、投与量は１日３回で1gである。エキナセアはGerman Commision E Monographにより認可された(B Anz.No．162、1992 年８月29日付け)。しばしばパープルコーンフラワーと称されるEchinasea angustifoliaは北アメリカ起源の植物である。アメリカ原住民は創傷治癒（抗生物質）のため、また抗炎症剤としてこの植物からの抽出物を使用している。この植物からの葉および根の新たに搾られた液が気道および尿路の再発性感染症の治療についてドイツ政府により認可されていた。液体エキナセア製剤は経口投与または非経口投与された時に免疫刺激活性を有することが示された。脾臓細胞の活性化は顆粒細胞および食細胞の活性を増進する抽出物の能力に寄与し得ると考えられる。本発明のフィンガープリンティングについて、生の葉および根を切断し、-100 ℃未満で凍結する。次にその混合物を微粉砕し、既知容積の水で抽出する。この操作が最大量の成分を保持するのに好ましい。成分は揮発性オイル、グリコシド、アミドおよびポリアセチレンの混合物である。 18.2商用供給業者／製品名エキナセアは入手し得る最も人気がある植物製品の一つである。主要製品の一つはMadaus AG（Koln，Germany）のEchinacin^TMであり、同様の製品がMurdock Madaus Schwabe(Springville，Utah)によりEchinaguard^TMとして米国で販売されている。また、Echinacea angustifoliaの粉末化抽出物がZuellig Botanicals，Inc．( Ge-rmany)の部門であるBotanicals Internationalから入手し得る（最低4-5 ％エキノシド）。その他の供給業者として、Trout Lake Farm、PhytoPharmica、He r-bal Choice-Boatalia、Shaklee、Botalia Gold、Nature's Herbs、Nature's W ay、Flora Laboratories、およびHerb Pharmが挙げられる。 18.3臨床的適用エキナセアの臨床的適用は多い。一次適用は上部気道中の感染症、風邪等に対する耐性の増大である。その他の適用は表面の創傷治癒、再発性尿路感染症または気道感染症、単純ヘルペスの治療、抗炎症活性および抗菌活性である。 18.4画分分析上記のヤドリギ実験に記載されたようにしてSephadex^TMクロマトグラフィーを使用して、画分分析を行う。また、逆相C-18クロマトグラフィーまたはGPCクロマトグラフィーが使用されてもよい。エキナセア中の生物活性成分の二つの重要なカテゴリー、クロロホルムで抽出される非極性物質およびエタノール画分または水画分中にある極性物質がある。非極性親油性成分として、BauerおよびFoste r(BauerおよびFoster，1991，Planta Med．57:447-449)により記載されたような種々の陰イオンが挙げられる。極性成分として、アルカミドおよび多糖が挙げられる（BauerおよびRemiger，1989，Planta Med．55:367-371:Steinmullerら，19 93，J.Immunopharmacol．15(5):605-614）。 18.5生物学的活性分析エキナセア全抽出物および画分の生物活性を、ヒトTNF-α受容体への［¹²⁵I］腫瘍壊死因子−α（TNF-α）の結合の調節を測定するアッセイで分析する。通常の技術を使用して、U-937（ヒト組織球リンパ腫）細胞を使用して改良Tris HCl 緩衝液(pH8.6)中で膜を調製する。アリコート200μｇを３時間にわたって４℃で 62pMの［¹²⁵I］TNF-αとともにインキュベートする。非特異的結合を50nMTNF-α の存在下で推定する。膜を濾過し、３回洗浄し、フィルターをカウントして特異的に結合された［¹²⁵I］TNF-αを測定する。化合物を10μＭでスクリーニングする(MaloffおよびDelmendo，1991，Agents and Actions 34:32-34)。アッセイ基準データ：Ｋ^d 37pM Ｂ^max： 11pM mgタンパク質特異的結合： 65％化合物 IC50（nM）Ｋⁱ（nM） nH インターロイキン-1α >500 − −（IL-1α） ^*TNF- α 0.084 0.032 1.2 TNF- β 0.714 0.27 1.0 ＊は使用した通常の基準薬剤を示す。エキナセアの別の臨床的適用は抗炎症活性である。種々の方法を使用して、抗炎症活性を分析し得る。使用される三つのin vitroアッセイは上記のSaw Palmet to節に記載された、シクロオキシゲナーゼ-1、シクロオキシゲナーゼ-2およびリポキシゲナーゼアッセイを含む。また、アラキドン酸代謝産物をWagnerら，1989 （Planta Med．55:566-567）の操作に従って分析し得る。また、ラット足アッセイまたはマウス耳アッセイの如きin vivoアッセイをカミルレ節に記載されたようにして、または文献調製(Tragniら，1985，Chem.Toxic．23(2):317-319)のように行う。抽出物を図３に示された操作に従って成分の基本的なクラスに分離する。成分のそれぞれの分離したクラスを二つの型のバイオアッセイにかける（初期の抽出物についても同様）。最初のアッセイはC57BL/6マウス中の脾臓細胞の活性化を測定する。マウスをP815Yリンパ腫で感作し、無菌抽出物または特定成分の異なる投与量で治療する。リンパ腫細胞接種の11日後に、脾臓を回収し、脾臓細胞を使用して、⁵¹Cr入りのP815Yリンパ腫細胞を抗原投与する。腫瘍細胞からの放射性⁵¹Crの放出が脾臓細胞（アッセイ系）の活性化の測定（放射能カウント）を与える。二次臨床的適用、抗菌活性に関するバイオアッセイを、E.coliの培養物中でそれらの増殖の目安として増殖E.coliの濁度を使用して行う。所定の試験抽出物またはその成分の存在下の濁度の欠如は抗菌活性の適用を可能とする。 18.5.1マクロファージ活性化に関するバイオアッセイエキナセア抽出物およびその多糖はマクロファージ活性を刺激し得る。実験系では、マクロファージを２％澱粉またはチオグリコレート2-3mlによるマウスへのi.p.注射により得ることができる。4-5日後に、マウスの腹腔細胞をPBS５ml のi.p.注射で回収する。緩衝液をシリンジで除去し、回収した細胞を遠心分離により集め、10％仔ウシ胎児血清を含むRPMI 1640培地中で37℃でインキユベートする。１時間後に、非付着細胞を捨て、残部を試験に使用する。マクロファージを培地中で異なる濃度のエキナセア抽出物およびエキナセア画分で処理し、活性化を標的である⁵¹Cr入りのP8l5細胞に対する細胞毒性により定性化する(Stimpel ら，Infection and Immunity，46:845-849)。 18.6化学分析HPLC、GPC 最も生物活性と関連する成分（例えば、テルペノイド）をGC、GC/MSまたはHPL C技術により個々の成分に分離し、これらを本発明のフィンガープリントを得るのに使用する。ヒドロアルコール製剤中に、下記の化合物が見られる。エチナコシド、アラビノガラクタン、ヘテロキシラン（イソルチルアミド、チコル酸により強化された活性）。公表された操作(BauerおよびFoster，1991; BauerおよびReminger,1989 ; Bauerら，1989，Zeit.fur Phytotherapie 10:43-48)を使用して、エキナセアの化学的に活性な成分の詳細な分析を行う。 19．実施例：メマツヨイグサ、OENOTHERA BLENNIS 19.1植物源／バックグラウンド薬剤メマツヨイグサは種子から発現された油である。それは北アメリカに自生するが、どこにでも広く帰化され、サクラソウファミリーの一員である。種子は約14％の油含量を有し、そのうちの油がシスリノール酸(50-70％)である。次に最も優勢な成分はγリノール酸(7-10％)である。主活性成分はγ−リノール酸(G LA)であると考えられる。GLA補給条件に関する投与量はアトピー性湿疹について１日あたり600-6,000mgである。投与量は１日２回服用される250mg カプセルである。 19.2商用供給業者／製品名メマツヨイグサ油の種々の商用供給業者がある。一つの公知の製品はScotia H olding(Kentville，Nova Scotia，Canada)の子会社であるEfamol Research Inc ．のEfamol^TMまたはEvening Primrose Oil^TMと称される。別の製品はPGE Canada （Saskatoon，Saskatchewan，Canada）のHealth From the Sun Evening Primros e Oil^TMカプセルとして知られており、これらは“無ヘキサン抽出方法”でつくられる。付加的なEPO製品はAmerican Healthから入手し得るEpogam^TMおよびGamm aoil^TM(Morseら，1989，Er.J.of Dermatology，121: 75-90)、Royal Brittany E vening Primrose Oil^TMである。 19.3臨床的適用メマツヨイグサの使用に関する臨床的適用は多く、心血管疾患、癌、慢性関節リウマチ、月経前症候群、多発性硬化症、アトピー性湿疹およびその他の局所疾患である。少ない適用として、糖尿病、アルコール中毒の肝臓保護薬、自己免疫疾患、幼児過敏症、慢性炎症の治療、エタノール誘導毒性の治療、急性アルコール禁断症状症候群、尋常魚鱗癬、硬皮症、Sjogren症候群、Sicca症候群、脆い爪、乳房痛、精神症候群、晩発性運動障害、潰瘍性大腸炎、片頭痛、および肝臓癌が挙げられる。関係する主要な臨床的適用は湿疹の治療である(Bordoniら,1987 ，Drugs Exptl.Clin.Res.14(4):291-297)。湿疹に対する有効性はGLAのためであると考えられる。プロスタグランジン、特にPGE₁はＴリンパ球の調節に関係するようであり、アトピー性湿疹の患者は典型的には低いPGE₁レベルを有する。その他の研究者らは、メマツヨイグサ油が乳房痛または胸部の痛みを軽減するのに有効であることを報告している(GateleyおよびMansel，1991，British Medi cal Bulletin 47(2):284-294)。加えて、メマツヨイグサ油は糖尿病の実験モデルで有効であることが報告されていた(Stevensら，1993，Prostaglandins，Leuc otorins and Essential Fatty Acids 49:699-706)。最後に、メマツヨイグサ油は免疫抑制剤として作用すると報告されている(米国特許第3,993,775 号および同第4,058,594号(両方ともWilliamsの特許))。 19.4画分分析メマツヨイグサに関する画分分析を上記のSaw Palmetto実験に記載されたようにしてフラッシュクロマトグラフィーにより行う。 19.5生物学的活性分析生物学的分析を二つの方法で行う。第一の方法は血小板活性化因子結合の研究である。第二の方法はウサギからの血液を使用して血小板凝集を研究することである。分析を以下に記載されるようにして行う。 19.5.1血小板活性化因子、血小板凝集体重2.5-3kgの雄または雌のNew Zealand由来シロウサギから得られた静脈血液を1/10容積のクエン酸三ナトリウム(0.13M)と混合し、10分間にわたって220gで室温で遠心分離する。メマツヨイグサ油および画分(30μＭ)を光学アグレゴメーターにより測定して５nM血小板活性化因子−acether（PAF-acether）に対し５分以内に50％より大きい上澄みの血小板に富む血漿の誘導凝集について分析する。 >50％の誘導凝集はPAF受容体アゴニスト活性の可能性を示す。有意なアゴニスト活性が見られないサンプル濃度では、PAF-acether誘導最大不可逆凝集応答を50 ％より大きく減少する能力によりPAF受容体アンタゴニスト活性が示される(Nune zら，1986，Eur.J.Pharmacol．123: 197-205)。アゴニスト(#46300) EC50（μＭ） ^*PAF(血小板活性化 0.0018 因子）アンタゴニスト(#46301) EC50（μＭ） Nectandrin A （BN-52021） 3.3 CGS-12970 26 CV-3988 10 Kadsurenone （L-651108） 1.7 L-652731 0.83 L-659989 0.33 RP-48740 17 SRI-63441 1.7 ^*WEB-2086 0.11 ^*は使用した通常の基準薬剤を示す。 CGS-12970=３−メチル−２−（３−ピリジニル）−１Ｈ−インドール−１−オクタン酸、CV-3988=３−（４−ヒドロキシ−７−メトキシ−10−オキソ−３，５，９−トリオキサ−11−アザ−４−ホスファノナコス−１−イル）−トリアゾリニウム、L-652731=２Ｒ，５Ｒ−ジ（３，４，５−トリメトキシフェニル）−テトラヒドロフラン、L-659989=ピロ−２−アミノアジピル−ヒスチジル−チアゾリジン−４−カルボキサミド、WEB-2086=３−（４−［２−クロロフェニル］−９ −メチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］−トリアゾロ−［４，３ −ａ］［１，４］−ジアゼピン−２−イル）１−（４−モルホリニル）−１−プロパノン 19.5.2血小板活性化因子このアッセイでは、メマツヨイグサ油および画分をPAF受容体への［³H］血小板活性化因子(PAF)の結合を測定することにより分析する。通常の技術を使用して、体重2.5-3kgの雄または雌のNew Zealand由来シロウサギの血小板を改良Tr is-HCl（pH7.5）緩衝液中で調製する。膜のアリコート50μｇを60分間にわたって25℃で0.4nM［³H］PAFとともにインキュベートする。非特異的結合を１μＭ P AFの存在下で推定する。膜を濾過し、３回洗浄し、フィルターをカウントして特異的に結合した［³H］PAFを測定する。サンプルを10μＭでスクリーニングする( Hwangら，1983，Biochemistry 22: 4756-4763)。アッセイ基準データ：Ｋ^d 0.73 nM Ｂ^max： 4.6pmol/mgタンパク質特異的結合： 93％化合物 IC50（nM）Ｋｉ（nM） nH *PAF 9 5.8 1.0 WEB-2086 110 71 0.8 ＊は使用した通常の基準薬剤を示す。 WEB-2086=３−（４−［２−クロロフェニル］−９−メチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］−トリアゾロ−［３，３−ａ］［１，４］−ジアゼピン−２−イル）１−（４−モルホリニル）−１−プロパノン上記のアロエ節に記載されたようにしてプロスタノイドFTアッセイを使用してメマツヨイグサ油の免疫活性を研究し得る。 19.6化学分析 HPLCを使用して、化学分析をリノール酸およびその他の必須脂肪酸について行う(Cisowskiら，1993，Phytoterapia 64(2):155-162)。また、化学物質を上記の Saw Palmetto実験に記載されたようにして分析する。必須脂肪酸、γリノール酸、シスリノール酸が主成分である。 20．実施例：ナツシロギク、Tanacetum parthenium 20.1植物源／バックグラウンドナツシロギクはアスターファミリーの一員である。それはヨーロッパに自生するが、北アメリカおよび南アメリカの両方に帰化している。そのハーブは典型的には錠剤またはカプセル形態で乾燥した葉の形態で投与される。典型的な平均毎日投与量は0.2％パルテノリドの最大含量を有する葉125mgである。 20.2商用供給業者／製品名ナツシロギクの種々の商用供給業者がいる。米国の主要製品の一つはMurdock Madaus Schwabe(Springville，Utah)のMygrafew^TMとして知られている。また、ナツシロギクハーブの粉末抽出物がZuellig Bostanicals，Inc.(Germany) の部門であるBostanicals International並びにNo.tural Factors Nutritional Products，Ltd．(Burnaby，British Columbia，Canada)から入手し得る。また、 Herbal Choice-Botalia、Herb Pharm、Nature's Way、Herbal Harvest、Botalia GoldおよびHerbal Laboratoriesがナツシロギクを供給する。 20.3臨床的適用ナツシロギクに関する臨床的適用は片頭痛（局所）、exema、月経痛の緩和、喘息、関節炎、循環器系病気、視力問題、疲労および光に対する感受性である。それがフランスおよびカナダで認可されていた主要な適用は偏頭痛の治療である。カナダ当局は“偏頭痛に対する予防薬として使用される”というクレームによる標識を認めていた。カナダ製品は0.2％パルテノリドを含むことが必要とされる（Awang，1987，The Pharmaceutical Journal，239:487）。また、ナツシロギクは関節炎に関する臨床研究の主題であった(Pattrickら，1 989，Annals of Rheumatic Disease，48:547-549)。この研究は、対照グループとナツシロギクを受けたグループの間に重大な相違がないが、患者の全てが“不十分に調節された炎症関節症候群”を有し、研究開始前に良く応答していないことを判明した。また、著者らは骨関節炎または軟組織病変におけるナツシロギクの可能な利益を注目している。ナツシロギクのアルコールチンキ剤は湿疹に局所使用し得る。 20.4画分分析 St.John's Wort節に上記されたような逆相クロマトグラフィーを使用して、ナツシロギク抽出物の画分分析を行う。 20.5生物学的活性分析ナツシロギクの生物学的分析はプロスタグランジン合成の顕著な抑制、アラキドン酸生成の阻止、血小板のin vitro凝集の抑制、およびセロトニン5HT₁抑制に基いている。セロトニンアッセイをSt.John's Wort節に上記されたようにして行う。血小板凝集アッセイをメマツヨイグサ節に上記されたようにして行う。また、ナツシロギクの抽出物を血液血小板および多形核白血球中の顆粒分泌を研究して分析してもよい。クロロホルム抽出物およびメタノール抽出物の両方並びに水性緩衝液抽出物を研究して、ナツシロギクは一貫して血小板凝集を抑制したが、トロンボキサン合成を抑制しなかった(Heptinstalら，May 11，1985,Lanc et 1071-1073）。 20.6化学分析上記のSt.John's Wort節に上記されたようにしてHPLCを使用して、化学分析を行う。ナツシロギクの主化学成分はセスキテルペノイド（sesquiterpenoid）、特に、パルテノリド(0.12-1.27％)である。葉はセスキテルペノイド、アルテカニン、カニン、クリサンテモリド、クリサンテモニン、10-epi-カニン、１β−ヒドロキシアルブスクリン、８β−ヒドロキシレイノシン、３β−ヒドロキシパルテノリド、マグノリオリド、パルテノリド（セスキテルペン含量の85％まで）、レイノシン、サンタマリン、セコタナパルトリドＡ、タナパルシン、タナパルシン −１α、４α−エポキシド、タナパルシン−１β、４β−エポキシドを含む(Leu ng&Foster，1996)。 21．実施例：ニンニク、Allium sativum 21.1植物源／バックグラウンドユリファミリーのAllium sativumの乾燥球根または新鮮な球根としてのニンニクは世界中に生育し、5,000年以上にわたって培養されてきた。また、必須油がニンニクから入手し得る。 21.2商用供給業者／製品名ニンニクの種々の商用供給業者がある。主要製品の幾つかはWakanuga Pharmac eutical Co.，Ltd．(Osaka，Japan-Mission Viejo，Caの子会社)のKyolic^TMニンニクカプセル、Enzymatic Therapy(Green Bay，Wisconsin)のGarlinase4000^TMである。また、ニンニク粉末錠剤がLichtwer Pharma，GmbH（Germany）から入手でき、ニンニクカプセルがNatural Factors Nutritional Products，Ltd．(Burnab y，British Columbia，Canada)から入手し得る。Shaklee、Herbal Choice-Bota lia、Nature's Way、Sunsource、PhytoPharmica、Lichtwer、Bayer Consumerがまたニンニクを供給する。 21.3臨床的適用ニンニクは多くの臨床活性を有する。ニンニクは抗菌活性、抗真菌活性、抗血栓活性および降圧活性を含む多くの活性を有する。また、それは繊維素溶解を活性化し、抗炎症薬である。また、ニンニクは高血圧、アテローム硬化症、低血糖、消化性病気、風邪、インフルエンザ、気管支炎および血液コレステロールの治療並びにトリグリセリド低下活性について研究されていた(Foster，1991，“Garlic: Alium Sativum，” Botanical Series No．311 American Botanical Counsel: Austin Texas，pg．1 -7)。低血糖活性がラットモデルで研究されていた(KamannaおよびChandrasekhar ,1984，Indian J.Med.Res．79:580-583)。そこで、ニンニクの低コレステロール血活性が必須油画分中にのみあることが観察された。その他の研究者らはニンニクが臨床研究で血小板凝集を低下することを報告していた(Kiesewetterら，1991 ，Int.J.Clin.Pharm．29(4):151-155)。その研究の患者はニンニク紛末800mgを受けた（200mgで４個の錠剤、Lichtwer Pharma GmbH）。 21.4画分分析超臨界CO₂クロマトグラフィーまたは逆相クロマトグラフを使用して、ニンニクの画分分析を行う。５％フェニルメチルポリシロキサンカラムでSFC-FSE^TMグレードC₂(Air Produc ts and Chemicals Inc.；Allentown，PA)を使用して、クロマトグラフィーを行う。 21.5生物学的活性分析血小板凝集、PAF、繊維素溶解、コレステロール分泌を測定するための肝細胞アッセイについて血小板活性化因子を使用し、またメマツヨイグサ節に上記されたような血小板凝集アッセイを使用して、ニンニクの生物学的分析を行う。 21.6化学分析GC-MS、HPLC ニンニク中の化学成分として、アリイン、アジョエンおよび種々のその他の硫黄含有化合物が挙げられる。GC-MSまたはHPLCを使用して、分析を行う。公表された操作(Iberlら，1990，Planta Med．56:320-326)を使用して、HPLC分析を行う。また、超臨界液体クロマトグラフィー質量分光分析法(Calveyら，1994)を使用して、ニンニクの化学分析を行う。ニンニクは0.1-0.36％（通常約0.2％）の揮発性油、アリイン（Ｓ−アリル− Ｌ−システインスルホキシド）、Ｓ−メチル−Ｌ−システインスルホキシド、酵素（例えば、アリイナーゼ、ペルオキシダーゼ、およびミロシナーゼ）、アジョエン（Ｅ，Ｚ−アジョエン、Ｅ，Ｚ−メチルアジョエン、およびジメチルアジョエン）、タンパク質（16.8％、乾燥重量基準）、ミネラル、ビタミン（チアミン、リボフラビン、ニアシン等）、脂質、アミノ酸等を含む。揮発性油は主成分としてアリシン（ジアリルジスルフィド−Ｓ−オキサイド；ジアリルチオスルフィネート）、アリルプロピルジスルフィド、ジアリルジスルフィド、およびジアリルトリスルフィドを含み、更に少ない量のジメチルスルフィド、ジメチルジスルフィド、ジメチルトリスルフィド、アリルメチルスルフィド、２，３，４−トリチアペンタン、およびその他の関連硫黄化合物を含む。存在するその他の揮発性化合物として、シトラール、ゲラニオール、リナロール、並びにα−およびβ−フェランドレンが挙げられる。プロスタグランジンA2およびF14 がホモジナイズされたニンニク抽出物から最近単離された(LeungおよびF oster，1996)。 22．実施例：イチョウ、Ginkgo bilboa 22.1植物源／バックグラウンド経口形態および静脈内形態イチョウはイチョウファミリーの一員であるGinkgo bilboa植物の乾燥した葉をベースとする。従来、イチョウは抗周期性薬、防腐薬、止血薬、利尿薬および強壮薬としての使用について報告されていた。 22.2商用供給業者／製品名イチョウ製剤は入手し得る人気がある植物製品の一つである。IPSEN Research Laboratories(Paris，France)のEgb761はブランド名Tebonin ^TM、Tanakan ^TMおよびRokan^TMとして販売される商用抽出物であり、種々のヨーロッパの臨床試験に広範に使用されている。IPSENの別のイチョウ抽出物であるLI 1370はブランド名Kaveriとして販売される。Ginkgo bilboa乾燥抽出物はIndena s.a．(Milan，I taly)から入手でき、24％全ギンゴフラボングリコシド（ginkgoflavonglycoside ）、６％ギンゴリド（ginkgolide）およびビロバリドを含むように標準化される。また、抽出物はNatural Factors N-utritional Products，Ltd．（Burnaby，B ritish Columbia，Canada）、Murdock Madaus Schwabe(Springville，Utah)、およびZuellig Botanicals，Inc．（Ger-many）の部門であるBotanicals Internat ional、Herbal Choice-Botalia、Thompson Nutritional、Hudson、NaturaLife、 Botalia Gold、Nature's Resource、Herb Pharm、PhytoPharmica、Nature's Wa y、Tebonin^TM(Schwabe，Germany)、Rokan^TM(Intersan，Germany)およびPhytoPha rmicaから入手し得る。 22.3臨床的適用イチョウの１日あたりの投与量は標準葉抽出物120-160mgである。また、それは粘膜の炎症、痔、鼻鬱血、sore gums、sore eyes、傷、ただれ、アクネ、ふけおよび白癖に関係する状況に使用されていた。また、それは癌に使用されていた。イチョウの臨床使用が最近概説された(CleijenおよびKnipchild，1992，Lance t 340:1136-1139)。主な適用は血流の増加、特に脳血流の増加である。また、イチョウは耳鳴り、末梢血管疾患、間欠性跛行、低下された機能能力および党醒（脳循環器の乱れ）、網膜症、記憶障害、目眩、目眩について報告されていた。イチョウ成分の組成および使用が特許文献に報告されている（Bombardelliらの米国特許第5,246,216号は特にpneumocystis cariniiについて抗感染薬としての使用を報告し、Bombardelliらの米国特許第5,202,313号はビロバリド誘導体について報告する）。 22.4画分分析化学成分はフラビノール、フラボン、セスキテルペン、ジテルペン、モノテルペン、ギンゴリドおよびそれらの炭水化物誘導体であるので、画分分析をC18液体クロマトグラフィー系で行った。 22.5生物活性分析イチョウは遊離基脱除剤として作用し、血小板活性化因子(PAF)を抑制し、EEG 変化を生じ、毛細管脆弱を低減し、血液流動性を増大する。血小板活性化因子アッセイ、遊離基脱除剤アッセイ測定および血液流動性の増大を使用して、イチョウ抽出物およびイチョウ画分の生物活性を分析し得る。メマツヨイグサ節に上記されたようにして血小板活性化因子アッセイを使用して、イチョウ画分、抽出物および生素材を分析する。 22.6化学分析 GC-MSおよびHPLCを使用して、イチョウの化学分析を行う。主成分はフラボノールおよびフラボン（主としてケルセチンおよびカンフェロール）グリコシド、ビロバライド（セスキテルペン）、イソギンゲチン、ギンコリドＡ、Ｂ、Ｃ、Ｍ＆Ｊ（ジテルペンラクトン誘導体）、６−ヒドロキシキヌレン酸、シキミン酸、プロトカテキユ酸、バニリン酸、パラ−ヒドロキシ安息香酸、プロアントロシアニジン、ヘテロシド、バイオフラボン、シオピチシン、ギンゲチン、ビロベチンおよびギンゴル酸である。 23．実施例：チョウセンニンジン(アジア産)、Panax Ginseng 23.1 植物源／背景チョウセンニンジンは、アジア産チョウセンニンジンまたはアメリカ産チョウセンニンジンの乾燥根であり、これらはいずれもチョウセンニンジン科に属する。チョウセンニンジンは希少でありかつ野生であるが、中国および韓国で広く栽培されている。 23.2 販売元／製品名チョウセンニンジンは、世界中で入手可能な最も普及している植物性薬剤製品と言える。該製品には、Murdock Madaus Schwabe(Springville，Utah)製のGinsu n^TM、Enzymatic Therapy(Green Bay,Wisconsin)製のＧＳ-500^TM、およびNatural Factors Nutritional Products,Ltd.(Burnaby,Brtish Columbia,Canada)製のGi nseng Softgels^TMがある。粉末チョウセンニンジン抽出物は、Zuellig Botanica ls,Inc.(Germany)の一部門であるBotanicals Internationalから入手できる。チョウセンニンジン乾燥抽出物IDBはIndena s.a.(Milan，Italy)より入手可能であり、７％のジンセノシド(ginsenoside)を含むよう規格化されている。チョウセンニンジンは以下の会社からも入手可能である：Shaklee、Lichtwer、Sunsource 、Nature's Resource、Herbal Choice-Botalia、Nature's Way、NaturaLife、He rbal Harvest、Botalia GoldおよびPhytoPharmica。 23.3 臨床的適用典型的には、チョウセンニンジンを、その根を適切な製剤として１〜２ｇの１日投与量で投与する。チョウセンニンジンは、German Commission E.Monograph No.11(1991年１月17日)で認可されている。チョウセンニンジンは、心臓血管系および神経系に対して様々な作用を有するジンセノシドといった様々な成分からなる複雑な混合物である(BrekhmanおよびDardymov,1969,Ann.Rev.Pharmacol.9:4 19-430)。チョウセンニンジンは心臓血管系では異なる活性を示す(Kakuら、1975 ,Axzneim.Forsch.25:539-547)。チョウセンニンジンは抗癌活性も示す。ある研究では、チョウセンニンジンが培養細胞を電離性放射線から保護することが報告されている(BenhurおよびFulde r,1981,Am.J.Chinese Med.9(1):48-56)。この研究では、チョウセンニンジンの細胞培養における放射線耐性増強能が報告されている。別の研究では、マウスにおける放射線防護剤としての活性が報告されている(Yonezaw,1976,J.Radiation Res.17:111)。別の研究では、種々の中枢神経系に対する作用が報告されている(Petkov,1959 ,Arzneim.Forsch.(Drug Res.)9:305-311)。痙攣の開始を遅らせ、フェノバルビル(phenobarbyl)による睡眠時間を持続させることが示されている。また、チョウセンニンジンは、摂食障害ラットの睡眠と覚醒の周期も安定化させる(Leeら、 1990,Neurosci.Let.111:217)。 23.4 画分分析画分分析は、上述の方法に従い、アセトニトリル水勾配を用いてＣ-18カラムを用いる逆相(ＲＰ)カラムで行う。 23.5 生物学的分析ストレス解放の臨床的症状についてのチョウセンニンジンの生物学的分析は、ＰＣ12細胞の活性化を検討するアッセイにて行う。手順は文献に記載の通りである(Mohriら、1992,Planta Med.58:321-323)。この文献には、記載のモデルでは、チョウセンニンジンの親油性成分が神経細胞を活性化し得ることが報告されている。 23.6 鬱病、テトラベナジンテトラベナジンメタンスルホネート(100ｍｇ/ｋｇ，腹腔内)の注射30分後に、チョウセンニンジン、チョウセンニンジン抽出物および画分を経口(30ｍｇ／ｋｇ)にて体重22±2gの３匹のICR誘導マウス群へ投与し、体温を60分後に記録する。テトラベナジンによって誘発される体温降下応答が50％以上(≧50)低減する場合には有意差があると考えられ、抗欝活性の指標となり得る(Gylysら、1963,Ann als N.Y.Acad.Sci.107:899-913)。化合物ＥＤ５０ｍｇ/ｋｇ経口アミトリプチリン３アンフェタミン１ビュープロピオン 30 クロニジン＞30 デシプラミン１フルオキセチン＞30 ^*イミプラミン３ミアンセリン 30 パルギリン 10 サルブタモール＞30トラニルシプロミン３ ^*は使用した標準対照物質あるいは、ラットのin vivoモデルまたはマウスのin vivoモデルにてチョウセンニンジンの抗ストレス活性を評価する。これらの動物モデルにおけるチョウセンニンジン成分を検討する実験は、文献に報告されている(Nabataら、1973,Japa n J.Pharmacol.23:29-41)。この文献には、条件回避試験、運動協調試験および棒登り試験といったマウスおよびラットでの様々な挙動研究が報告されている。別の研究では、チョウセンニンジンの成分がＧＡＢＡ-ＡおよびＧＡＢＡ-Ｂ受容体に結合することが報告されている(Kimuraら、1994,Gen.Pharmacol.25(1):19 3-199)。 23.7 化学分析ＨＰＬＣチョウセンニンジンの化学分析をＨＰＬＣまたはＴＬＣによって行う。チョウセンニンジンは、ステロール(β-シトステロールおよびβ-グルコシド)、７〜９％のチョウセンニンジン多糖、パナキシン(panaxin)Ａ〜Ｕ、ペクチン、遊離の糖、ビオミン(biomin)、ポリアセチリン(polyacetyline)、ポリペプチドといった様々な置換基を含んでいる。サピニン(sappinin)は、日本の研究者にはジンセノシドと呼ばれており、ロシアの研究者にはパナキソシド(panaxoside)と呼ばれている。アジア産チョウセンニンジンには、少なくとも18種のサピニンが見つかつている。これらは全てトリテルペノイドである。６種のパナキソシドが報告されている。チョウセンニンジン油もsesquiterpeneuiturpineを含むことが報告されており、ギノサポニン(gynosaponin)と呼ばれる少なくとも56種の密接に関連するサポニンがある(LeungおよびFoster，1996)。 24．実施例：ヒドラスチス、Hydrastis canadensis 24.1 植物源／背景ヒドラスチスは、アメリカ合衆国のバーモント州からアーカンソー州にかけての深い森林地帯に見られる多年生の植物である。ヒドラスチスはキンポウゲ科に属する。その製剤は、抗微生物活性、収斂活性および抗出血活性のため、古くから使用されている。 24.2 販売元／製品名ヒドラスチスの供給元は数多くある。製品には、Murdock Madaus Schwabe(Spr ingville,Utah)製のWild American Goldenseal Root^TMカプセル、Zuellig Botan icals,Inc.(Germany)の一部門であるBotanicals International製のGoldenseal Root Powdered Extract^TM（全量で５％のアルカロイドおよび５％のヒドラスチンを含むよう規格化されている）がある。ヒドラスチンが５％に規格化されたヒドラスチス抽出物もIndena s.a.(Milan，Italy)より入手可能である。 24.3 臨床的適用ヒドラスチスの臨床研究はほとんどない。しかしながら、ヒドラスチスは、抗菌剤および抗アメーバ剤であるベルベリンを多量に含んでいる。特に、粘膜炎症の治療に使用されることが多い。ドイツでは、Gingivitolという名の製剤として認可されている（認可された薬剤の内容は、ヒドラスチンが1.5％〜2.5％以上と特定されている)。総投与量は、乾燥根0.5ｇまたはチンキ（1:10、60％エタノール）2ml〜4mlを日に３回である(Bradley，1992)。 24.4 画分分析ヒドラスチスの画分分析は、Ｃ-18逆相(ＲＰ)クロマトグラフィーまたはシリカゲルクロマトグラフィーのいずれかを用いて行う。条件は上述の通りである。 24.5 生物学的活性分析ＭＡＯ-Ａ、セロトニンの取り込み月経前症候群臨床的適用についてのヒドラスチスの生物学的分析を、上述のショウマの節で記載したオキシトシンアッセイの通りに行う。また、ヒドラスチスは、オトギリソウの節に記載したＭＡＯ-Ａアッセイおよびセロトニン取り込みアッセイを使用しても分析が可能である。うがい薬としての臨床用途の場合には、抗感染症活性、抗細菌活性を上述のように測定することができる。 24.6 化学分析ヒドラスチスは、主にヒドラスチン(1.5〜４％)およびベルベリン(0.5〜６％) からなり、少量ではあるがカナジン(テトラヒドロベルベリン)、カナダリン(can adaline)、1-α-ヒドラスチン、5-ヒドロキシテトラヒドロベルベリンも含むイソキノリンアルカロイド等の活性成分を含み、他の関連するアルカロイドも存在する。その他の成分としては、メコニン、クロロゲン酸、75％の不飽和脂肪酸および25％の飽和脂肪酸を含む脂質、樹脂、デンプン、糖、並びに少量の揮発性油が挙げられる(LeungおよびFoster，1996)。ベルベリンの化学分析はＴＬＣまたはＨＰＬＣにて行う。生理活性成分としてはベルベリンおよびヒドラスチンが挙げられる。これらの成分は主に、根茎および根由来のイソキノリンアルカロイドである。 25．実施例：緑茶、Camellia sinensis 25.1 植物源／背景 C.Sinesis Trauma（緑茶）は、東アジアに自生する常緑葉を有する大きな木であり、東アジアで広く栽培されている。緑茶の乾燥葉は、数千年の昔から飲料の調製に使用されている。茶は、何世紀もの間医学的に使用されており、中国では癌の治療薬として認められている。 25.2 販売元／製品名緑茶の供給元は世界中に数多くある。緑茶粉末抽出物はZuellig Botanicals， Inc.(Germany)の一部門であるBotanicals Internationalから入手でき、15％のタンニンおよび３〜10％のカフェインを含むよう規格化されている。緑茶抽出物はIndena s.a.(Milan Italy)からも入手でき、80％のポリフェノールを含むよう規格化されている。 25.3 臨床的適用緑茶には、抗癌活性、コレステロール低下活性、血小板凝集活性および血液低粘稠化活性等の多くの臨床的適用がある。緑茶は長寿とも関係している。主な適用は抗癌活性であり、該抗癌活性はin vitroおよびin vivoで報告されている(Wa ngおよびWu,1991,IARC Sci.Publ.105:546)。別の文献には、緑茶は突然変異によって誘発される染色体異常を緩和(modify)したことが報告されている(Imanishi ら、1991,Mutat.Res.259(1):79)。緑茶は、結腸癌の危険性の減少および小腸発癌の抑制にも関連している(Konoら、1991,J.Clin.Epidemiol.44(11):1255;ItoおよびImaida,1992,Tetratogenesis Carcineg.Mutagen.12(2):79)。緑茶は総コレステロールレベルの低下とも関連している(Konoら、1992,Prev.M ed.21(4):526)。また、緑茶は日本人女性の長寿とも関係している(Sadakataら、 1992,Tohoku J.Exp.Med.166(4):475)。緑茶は虫歯の予防薬であることも判明している(Rosenら、1984,J.Dent.Res.63(5):658)。血液低粘稠化活性も、近年、刊行された文献に記載されている(Aliら、1990,Prostaglandins,Leukotrienes and Essential Fatty acids 40:281-283)。 25.4 画分分析緑茶の画分分析は、微分抽出(differential extraction)等の多種多様な方法を用いて行う(国際公開番号ＷＯ96/28178 Bombardelliら)。画分分析は、公開された手順に従ってSephadex^TMＬＨ-20クロマトグラフィーを用いて行う(Cattell およびNursten,1976,Phyto Chemistry 15:1967-1976;Sagesaka-Mitaneら、1990, Chem.Pharm.Bull.38(3):790-793)。あるいは、画分分析は、シリカゲルまたはポリアクリルアミドを用いて行うことも可能である(Chkhikvishvli,1985,Chem.Nat Compounds 20(5):629-630)。 25.5 生物学的活性分析抗癌臨床的適用の場合には、in vitroおよびin vivoで実施が可能な多くのバイオアッセイが存在する。Ｐ450アッセイを行う(Obermeierら、1990,Xenobiotic a25(6):575-584)。この研究では、ラットおよびヒト肝臓ミクロソームにおける肝Ｐ450活性に対するバイオフラボニン(bioflavonin)の作用を検討している。あるいは、in vitroでの抗癌活性を化学的抗酸化活性によって検討する(Tanizawa ら、1984,Chem,Pharm.Bull.32(5):2011-2014)。あるいは、上述のヤドリギの節に記載したＬ1210癌モデルを用いることができる。 25.6 化学分析緑茶の化学分析はＨＰＬＣ、ＧＰＣまたはＴＬＣを用いて行う。主な生理活性成分は以下の化学種(Chemical category)に分けられる：アルカロイド、ベンゾノイド(benzonoid)、テルペン、セスキテルペン、ジテルペン、モノテルペンおよび炭水化物。ほとんどの研究がカテキンに注目している(Gotoら、1996,J.Chro m.A749:295-299)。緑茶のＴＬＣ分析は、近年の刊行物に記載されている通りに行う(Minpeigen,1991,Phytotherapy Res.5:239-240)。 26．実施例：サンザシ、Cartaegus laevigata 26.1 植物源／背景植物性薬剤としてのサンザシはCratigus laevigataの花の乾燥葉を基剤とする。Cratigus laevigataは野生から採取するか、またはヨーロッパで栽培されている集団から採取する。中国およびアメリカでも使用されている。サンザシはバラ科に属する。伝統的な中国医学では、サンザシの実は、消化、胃機能の促進、血液循環の刺激および各種胃障害に使用される。伝統的な中国医学における適用対象としては、高血圧、高脂血症(hyperlipdemia)および冠状動脈性心疾患が挙げられる。 26.2 販売元／製品名サンザシの販売元は数多くある。主な製品には、Murdock Madaus Schwabe(Spr ingville,Utha)製のHeartcare^TMおよびWilid European Hawthorn^TM、並びにNatu ral Factors Nutritonal Products,Ltd.(Burnaby,British Columbia,Canada)製のサンザシチンキ(Hawthorn Ticture)がある。サンザシの葉および花の粉末抽出物は、Zuellig Botanicals,Inc.(Germany)の一部門であるBotanicals Internati onalから入手でき、1.8〜2.8％のvitexin-hyperosideを含むよう規格化されている。 26.3 臨床的適用ヨーロッパでは、実、花および葉が、収斂薬、鎮痙薬、強心薬、下剤(diarrhe tics)、血圧降下剤および抗不整脈薬として使用される組み合わせである。アメリカインディアンも、胃腸障害および循環系障害にサンザシを用いている。サンザシは、ドイツでは心不全および徐脈型不整脈への使用が認められている (German Commission E Monograph B Anz 1,1989年１月３日)。サンザシの臨床的適用としては、心機能の増強、老人性心症状(senile heart condition)の治療、軽度型狭心症および軽度型リズム障害の治療、並びに血圧の降下が挙げられる(O cchiutoら、1986,Planta Med.20:52;StepkaおよびWinters,1973;Lloydia,36:436 )。臨床研究では、サンザシが抗不整脈作用を有し、酸素欠乏に対する心筋の耐性を増強し、心筋虚血後の血管再生を刺激することも報告されている(Guendjv,1 977,R.Arnzeim.Forch,27:1576)。 26.4 画分分析サンザシの画分分析は、まず水層と有機層を分離し(Thompsonら、1974,J.Phar m.Sci.63:193-6)、次いで画分をＣ-18カラムでさらに分離する。 26.5 生物学的分析サンザシの生物学的分析は、トロンボキサン(thromboxin)Ａ2アッセイ、冠状血管の拡張の測定、心筋の収縮性の測定、および心室排出速度の測定といった様々な方法を用いて行う。トロンボキサンＡ2アッセイは以下のように行う。 26.6 トロンボキサンＡ₂ このアッセイでは、[³Ｈ]ＳＱ-29548のトロンボキサンＡ₂受容体への結合を調節するサンザシ抽出物および画分の能力を測定する。オスまたはメスのニュージーランド産アルビノウサギ(体重2.5〜３kg)の血小板を、標準的な技術に従って改変トリス-HCl緩衝液(ｐＨ7.2)中で調製する。膜のアリコート2ｍｇを3nMの[³ Ｈ]ＳＱ-29548と共に45分間25℃でインキュベートする。１μＭＢＭ13505の存在下にて非特異的結合を見積もる。膜を濾過し、３回洗浄し、フィルターを計数して特異的に結合している[³Ｈ]ＳＱ-29548を測定する。化合物は10μＭにてスクリーニングする(Saussyら、1986,J.Biol.Chem.261:3025-3029;Hedbergら、198 8,J.Pharmacol.Exp.Ther.245:786-792)。アツセイ標準データ：Ｋ^d 4.2nＭＢ^max: 960 fmol/ｍｇタンパク質特異的結合： 95％化合物ＩＣ₅₀(nM) Ki(nM) nH ^*ＢＭ-13505 18 11 0.9 ＳＱ-29548 6.6 3.9 1.1Ｕ-46619 34 20 1.1 ^*は使用した標準対照薬剤ＢＭ-13505=デルトロバン(deltroban)；ＳＱ29548＝(Is-[1α,2β{5Ｚ},3β,4α ])-7-(3-[{(2-フェニルアミノ)カルボニル}ヒドラジノ]メチル)-7-オキサビシクロ[2.2.1.]ヘピ-2-イル-5-ヘプタン酸；Ｕ-46619＝11α,9α-エポキシメタノ-ＰＧＨ_λ サンザシ抽出物の心筋作用は、公表された手順を用いて分析することが可能である(Schusselrら,1995,Annzeim.Forch.Drug Res.45:11)。一つの研究では、単離したモルモットの心臓を冠状動脈血流量、心拍数および左心室血圧並びに収縮および弛緩の速度について分析する。抽出物の研究結果をhyperosideルテオリン -7-グルコシドおよびルチンと比較する。サンザシは、文献に記載の手順を使用して、心筋虚血に対する保護作用について検討することも可能である(Liandaら、1984,J.Trad.Chinese Med.4:289-292) 。培養したラット心臓細胞と酸素およびグルコースが欠乏したラット心臓細胞とを用いてサンザシの検討を行う。先の研究者らによって、培養細胞アッセイでは、vitexinラムノシドが心臓保護剤として活性であることが判明している。 26.7 化学分析ＨＰＬＣ C．laevlgataおよびC．monogynaは、hyperoside(hyperin)、ケルセチン、vite xin、vitexin-4'-Ｌ-ラムノ-Ｄ-グルコシド、vitexin-4'-Ｌ-ラムノシド、vitex in-4'-7-ジ-D-グルコシド、ルチン、ケルセチン-3-ラムノ-ガラクトシド、およびその他といったフラボノイドを含む。キサンチン、アミン、プロアントシアニジンも存在する。(LeungおよびFoster、1996)。サンザシの化学分析は、上述のオトギリソウの実験に記載したように逆相ＨＰＬＣを使用して行う。 27．実施例：キヅタ葉、Hederae folium 27.1 植物源／背景キヅタは、ヨーロッパ全土および地中海に自生している。典型的には抽出物の状態で市販されている。古くから防腐剤、収斂薬、下剤、避妊薬、催吐薬、緩下薬、瀉下薬、興奮薬、血管収縮薬、血管拡張薬および駆虫薬として認められている。キヅタは、リウマチ性硬化症(rheumatism sclerosis)、瘰癧および歯痛にも使用される。 27.2 販売元／製品名市販されているキヅタ源としては、Prospan^TM(Engelhard，Germany)、Hedelix^TM (Krewel Meuselbach，Germany)およびBronchofortan^TMが挙げられる。 27.3 臨床的適用キヅタは、ドイツのモノグラフでは、気道の炎症、慢性炎症性気管支症状の治療での使用が認められている(German Commission E Monographs E Anz No．122 、1988年７月６日)。キヅタ葉の典型的な用量は、薬剤または対応する抽出物として0.3gである。キヅタは、変形性関節炎および胃腸虚弱(ＧＩ distress)に対する活性も有する。キヅタは、去痰活性、発汗活性および収斂活性を有する。消化不良に使用することもできる。 27.4 画分分析キヅタ葉抽出物の画分分析は、上述のオトギリソウの実験で記載したように逆相クロマトグラフィーを用いて行う。 27.5 生物学的分析生物学的分析は、回腸モデルを用いて行い、分泌溶解(secretolytic)作用および鎮痙作用を検討する。 27.6 化学分析ＨＰＬＣキヅタに含まれる成分としては、サポニン(2.5〜６％)、α-へデリン(hederin )、オレアノール酸グリコシド、へデラコシド(hederacoside)Ｃ、ラムノース；フラボノールグリコシド、カエンプフェロール(kaempferol)3-ルチノシド；微量成分；ステロール類スチグマステロール、シトステロール、コレステロール、カンペステロール、α-スピナステロール、および５α-スチグマ-7-エン-3β-オール；スコポリン、クロロゲン酸、コーヒー酸、セスキテルペン炭化水素germacrene、 β-elemene、lobinolおよび抗原性カテコールが挙げられる(Bisset，1994)。 28．実施例：カワ、Piper methysticum 28.1 植物源／背景カワはカワカワとしても知られている。ハワイからニューギニアにかけて南太平洋に自生する落葉性の低木である。薬剤に用いられる部分は根茎である。 28.2 販売元／製品名カワの販売元は数多くある。主な製品には、Murdock Madaus Schwabe(Springv ille,Utha)製のポリネシア産カワ根、Antares^TM(Krewel Meuselbach，Germany) 、Laitan^TM(Schwabe,Germany)およびNatrol(Chatsworth，Clalifornia)製のKava trol^TMがある。カワ根粉末抽出物もZuellig Botanicals,Inc.(Germany)の一部門であるBotanicals Internationalから入手でき、30％のカワピロン(kavapyrone) を含むよう規格化されている。 28.3 臨床的適用カワには多くの生物学的活性がある。カワは、不眠症、神経質、ストレスに対する鎮静薬として、および筋弛緩剤として使用されている。鎮痙性活性および抗痙攣性活性を有する。カワの主な適用は、非アヘン剤鎮痛薬としての適用である。カワは神経不安、ストレスおよび不安の症状での使用が認められている。カワはカボチャ種子油、Cucurbita semenと組み合わせて過敏性腸症候群の治療に使用される。カワは、German Commission Emonograph No.101(1990年６月１日)で認可されている。 28.4 画分分析カワの画分分析は、上述のオトギリソウおよびノコギリパルメットの説で記載したように、C-18カラム逆相クロマトグラフィーまたはシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを使用して行う。 28.5 生物活性分析ＧＡＢＡカワの活性についての生物学的分析は、末梢および中枢の両方のＧＡＢＡ受容体への結合、セロトニンの再取り込みアッセイおよびドーパミン受容体への結合を検討することにより行う。ＧＡＢＡ-ＡおよびＧＡＢＡ-Ｂ受容体並びにベンゾジアゼピン受容体への結合についての分析は、公表された手順に従って行う(Daviesら、1992,Pharm．andTo xin.71:120-126)。さらに、ＧＡＢＡ-Ａ受容体に対する公表された置換アッセイを使用してカワ抽出物の結合も検討する(Jussoifieら、1994，Psychopharmacolo gy 116:469-474)。 28.6 化学分析カワは３〜20％のカワラクトン(kavalactone)を含む。樹脂中のカワラクトンは、炭素４にメトキシ基を有し、炭素６に芳香族スチリル部分を有するα-ピロンであり、カバイン、7,8-ジヒドロカバイン、5.6-デヒドロカバイン、ヤンゴニン(yangonin)、5,6,7,8-テトラヒドロヤンゴニン、メチスチシン(methysticin) 、ジヒドロメチスチシン、5,6-デヒドロメチスチシン、5,6-ジヒドロヤンゴニン、7,8-ジヒドロヤンゴニン、10-メトキシ-ヤンゴニン、11-メトキシ-ヤンゴニン、11-ヒドロキシ-ヤンゴニン、ヒドロキシカバイン、および11-メトキシ-12-ヒドロキシーデヒドロカバインが挙げられる。根茎にもフラボカバインＡおよびＢ；アルカロイドピペルメチスチン(pipermethystin);セファラジオン(cepharadio ne)Ａ、シンナマラケトン(cinnamalaketone)等のケトン、メチレンジオキシ-3,4 -シンナマラケトン；およびアルコール、ジヒドロカバイン-5-オールが含まれる (LeungおよびFoster,1996)。 29．実施例：カンゾウ、Glycyrrhiza glabra 29.1 植物源／背景カンゾウは、亜熱帯気候で生育する４〜５フィートの低木である。市販されているカンゾウの多くは、品種Ｇ．glabaraのものである。薬剤は乾燥根茎および根からなる。カンゾウはエンドウ科に属する。 29.2 販売元／製品名カンゾウの販売元は数多くある。粉末カンゾウ根抽出物はZuellig Botanicals ，Inc.(Germany)の一部門であるBotanicals Internationalから入手できる。５％のグリシルリジン酸を含むよう規格化されているカンゾウ乾燥抽出物は、Inde nas.a.(Milan，Italy)から入手でき、Lakriment^TM(Knoll,Germany),Suczulen^TM( Dolorgiet,Germany)、およびLicorice Root 500^TMはNatural Factors Nutrition al Products Ltd.(Burnaby,British Columbia,Canada)から入手できる。 29.3 臨床的適用カンゾウの臨床的適用は、抗潰瘍薬投与、抗炎症薬、抗関節炎薬として、去痰薬としておよび抗感染症薬として使用される。典型的なカンゾウの用量は、細かく切断した根または粉砕した根として５〜15gである(200〜600ｍｇのグリシルリジンが含まれると計算される)。最も一般的には、胃-十二指腸潰瘍の治療に対して融解(fusion)の状態で使用する。あるいは、根液を使用する(気道炎症の場合には0.5〜１gまたは潰瘍の場合には1.5〜3g)。カンゾウは、German Commission E Monograph No.90(1985年５月15日、1990年３月13日および1991年４月４日改訂 )によって認可されている。カンゾウの成分は抗ＨＩＶ活性を有することが判明している(Hatanoら、1988, Chem.Pharm.Bull.36(6):2286-2288)。カンゾウは、虫歯の原因である連鎖球菌に対して活性であることも判明している(Segalら、1985,J.Pharm,Sci.74:79-81)。 29.4 画分分析カンゾウの成分の画分分析は、上述の通り、逆相Ｃ-18カラムを用いて行う。 29.5 生物学的活性分析全カンゾウ抽出物およびカンゾウの各成分の生物学的分析は、上述のシクロオキシゲナーゼアッセイおよびリポキシゲナーゼアッセイおよび抗プロスタグランジンアッセイを使用して行う。実施される別のバイオアッセイは、11-βヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼアッセイである(MacKenzieら、1990,J.Clin.En docrinol.Metab.70:1637-1643)。 29.6 化学分析HPLC カンゾウは、主な生物活性素(bioactive principle)として、トリテルペングリコシドグリシルリジン（グリシルリジン酸としても知られている）を、供給源およびアッセイ方法に応じて１〜24％の範囲の濃度で含有する。アッセイ法が異なるだけでグリシルリジン値が１０倍異なるという報告もある。グリシルリジンは、加水分解の際に、グリシルリジン酸と２個のグルクロン酸分子を生じる。カンゾウの他の構成成分としては、フラボノイドおよびイソフラボノイド［リコフラボノール(licoflavonol)、クマタケニン(kumatakenin)、リコリコン(li coricone)、グラブロール(glabrol)、グラブロン(glabrone)、グリザリン(glyza rin)、リコイソフラボン(licoisoflavone)ＡおよびＢ、リコイソフラバノン(lic oisoflavanone)、グリシロール(glycyrol)、ホルモノネチン(formononetln)、リクイリチゲニン(liqulritigenin)、リクイリチン(liquiritin)、ネオリクイリチン(neoliquiritin)、ラムノリクイリチン(rhamnoliquiritin)、グリザグラブリン(glyzaglabrin)、4'-7'-ジヒドロキシフラボン、グララニン(glaranine)、等］、カルコン(chalcone)［イソリクイリチゲニン(isoliquiritigenin)、イソリクイリチン(isoliquiritin)、ネオイソリクイリチン(neoisoliquiritin)、リクラシド(licuraside)、ラムノイソリクイリチン(rhamnoisoliquiritin)、エチナチン(echinatin)、リコカルコン(licochalcone)ＡおよびＢ、4-ヒドロキシカルコン(4-hydroxychalcone)、等］、クマリン［ウンベリフェロン(umbelliferone) 、ヘルニアリン(herniarin)、リクイクマリン(liqcoumarin)、グリセリン、等］、トリテルペノイド［リクイリチン酸、グリチルレトール(glycyrrhetol)、グラブロライド(glabrolide)、イソグラブロライド(isoglabrolide)、リコリン酸(li coritic acid)、β-アミリン(amyrin)、18-β-グリチルレチン酸、等］、ステロール［β-シトステロール、スチグマステロール、22,23-ジヒドロスチグマステロール、等］、２〜20％のデンプン、３〜14％の糖（グルコースおよびスクロース）、リグニン、アミノ酸（プロリン、セリン、アスパラギン酸、等）、アミン（アスパラギン、ベタイン、コリン］、ガム、ワックス、多くの芳香化合物を含む揮発性油［該芳香化合物としては、特に、アセトール、2-アセチルフラン、プロピオン酸、2-アセチルピロール、フルフリルアルコール、ベンズアルデヒド、ペンタノール、ヘキサノール、trans-ヘクス-3-エン-1-オール、オクト-1-エン-3-オール、リナロール、酸化リナリル、α-テルピネオール、ブチロラクトン、ツージョン(thujone)、およびフェンコンを含む（これらのいずれもが単独ではカンゾウのフレーバーを説明することができない）］などが含まれる(LeungおよびFoster，1996)。カンゾウ画分の化学分析はHPLCにより行った。 30．実施例オオアザミ、Silybum marianum、さらにCarduus marianus、Carduu s marianum 30.1 植物源／背景オオアザミはカシミールに固有の植物であるが、カナダからメキシコのかけて北アメリカにも見られる。オオアザミは植物性薬剤として種子全体の形態で、および抽出物として販売されている。オオアザミは、肝臓保護剤として伝統的に用いられている。 30.2 販売元／製品名オオアザミは、もう１つの非常にポピュラーな植物性薬剤製品である。Milk T histle 250（商標）はNatural Factors Nutritional Products，Ltd．(Burnaby ，British Columbla，Canada)から販売されており、オオアザミ粉末抽出物であるSilymarin（70〜80％含有するように規格化されたもの）はBotanlcals Intern ational［Zuellig Botanicals，Inc.(Germany)の一部門］から販売されている。オオアザミ抽出物は、Bionorica(Germany)、Madaus AG(Germany)およびKlinger( Germany)からも販売されている。以下の会社もオオアザミを販売している：Herb al Choice-Botalia、NaturaLife、Herb Pharm、Nature's Herbs、PhytoPharmica 、Legalon（商標）（Madaus，Germany）、Silimarit（商標）（Bionorica，Germ any）、Permixon（商標）(Pierre Faber，Germany)およびNature's Way。 30.3 臨床的適用（１）肝臓保護剤、フリーラジカルスカベンジャー、抗酸化剤、肝硬変、肝炎、消化不良の病訴、肝臓／胆嚢の病訴、食欲不振 30.4 画分分析オオアザミについての画分分析は、C-18カラムでの逆相クロマトグラフィーまたはシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーを用いて行う。これら両方の方法は、それぞれ上記のオトギリソウおよびノコギリパルメットの節で記載したようにして行う。 30.5 生物学的活性の分析生物学的分析を行って、培養肝細胞、c-AMP、β-グルクロニダーゼおよび肝臓酵素のレベルを調べる。 30.5.1. β-グルクロニダーゼの阻害についてのアッセイ β-グルクロニダーゼは、肝臓損傷または肝臓癌の後に血液中で増加する典型的なリソソーム酵素である。したがって、オオアザミの肝臓保護効果およびその成分を、この酵素に対する阻害効果により定量する。この酵素は、ヒトの糞便から記載[Kimら，1994，(Biol．Pharm．Bull．17:443-445)のようにして調製できる。酵素活性を測定するために、該酵素を、阻害剤の存在下または不在下で、20 μｌの10mM p．ニトロフェニル-β-グルクロニド[0.1Mリン酸緩衝液(pH7.0)中] と共に37℃（50分）でインキュベートする。0.25N ＮａＯＨを添加することにより反応を停止させ、405nmでの遊離ｐ．ニトロフェノールの吸光度を測定する。 30.5.2 環状AMP、ホスホジストラーゼ(PDE)の阻害についてのアッセイ本アッセイでは、Kochら,1985（Meth．Find Exp．Clin．Pharmacol．1:409-41 3）に記載のようにして、c-AMP（0.1mM）をPDEと共に、40mMトリス-HCl緩衝液(p H７〜８)中で、種々の量のオオアザミ抽出物および画分の存在下で25℃にて10分間インキュベートする。冷過塩素酸の添加により反応を停止させる。タンパク質の沈殿物を遠心分離し、上清をHPLC（逆相クロマトグラフィー）によりアッセイする。c-AMPからAMPへの変換の低下により酵素の阻害を調べる。 30.6化学分析TLC、HPLC フラバノリグナン(flavanolignan)複合体、シリマリン(silymarin)は最初、19 68年に種子から単離された。シリマリン（熟した実の中には４〜６％）は主に３つのフラバノリグナンであるシリビン(silybin)［シリビニン(silivinin)］、シリクリスチン(silychristin)(silichristin)およびシリジアニン(silidianin)から構成される。他のフラバノリグナンとしては、デヒドロシリビン(dehydrosili bin)、3-デスオキシシリクリスチン(3-desoxysilichrlstin)、デオキシシリジアニン(deoxysilydianin)(silymonin)、シリアンドリン(siliandrin)、シリビノム (silybinome)、シリヘルミン(silyhermin)およびネオシリヘルミン(neosilyherm in)が含まれる。他の構成成分としては、アピゲニン(apigenin)、シリボノール( silybonol)、大部分がリノレン酸およびオレイン酸からなり、さらにミリスチン酸、パルミチン酸およびステアリン酸を含む不揮発性油（16〜18％）、塩酸ベタイン、トリアミン、ヒスタミン、等を含む（LeungおよびFoster，1996）。オオアザミを上記のようにしてTLCおよびHPLCを用いて分析する。 31.実施例：トケイソウPassiflora incarnata 31.1 植物源／背景トケイソウはアメリカ原産であり、亜熱帯地域および熱帯地域の両方で栽培されている。その薬剤はアメリカ合衆国、インドおよび西インド諸島で製造されている。 31.2販売元／商品名トケイソウ抽出物にはいろいろな販売元がある。トケイソウ乾燥抽出物は、In dena s.a．(Milan，Italy)から販売されており、3.5％のフラボノイド［イソビテキシン(isovitexine)として計算したもの］を含有するように規格化されている。粉末状抽出物はまた、Botanicals International（Zuelling Botanicals ，Inc.，Germanyの一部門である）から販売されており、４％のフラボノイドを含有するように規格化されている。それはまた、Passifloradragees Alsitan（商標）(Alistan，Germany)からも販売されている。 31.3 臨床的適用トケイソウは、不安症の鎮静・治療剤として、睡眠困難、不安、各種神経障害のために使用される。トケイソウはまた鎮痙剤としても用いられる（Paris，196 3，Ann．Pharm．France，21:389）。典型的な投薬レジメは、一日当たりの摂取薬剤が４〜８ｇである。神経薬理学的研究から、中枢神経系に対して有効であることが示されている(SperoniおよびMinghetti，1988，Planta Med．54:488)。 31.4 画分分析トケイソウの画分分析は、c-18カラムでの逆相クロマトグラフィーまたはシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーを用いて行う。これら両者のクロマトグラフィーは、それぞれ上記のオトギリソウおよびノコギリパルメットの節で記載したようにして行う。 31.5 生物学的活性の分析 MAO、GABA A（末梢、中枢）に対する生物学的分析を行い、実験は上記のようにして行う。 31.6 化学分析HPLC トケイソウは、少量で量のバラツキが大きい（＜0.01〜0.09％）のインドールアルカノイド［主に、ハルマン(harman)からなる］ならびにさらに少量のハーモル(harmol)、ハーマリン(harmaline)、ハーミン(harmine)およびハーマロール (harmalol)を含有する。最後の４種のアルカノイドの存在については議論されてきた。存在する他の構成成分としては、特に、フラボノイド［イソビテキシン(i sovitexin)2"-β-D-グルコシド、イソオリエンチン(isoorientin)2"-β-D-グルコシド、アピゲニン(apigenin)、ルテオリン(luteolin)、クエルセチン、カェムフェロール(kaempferol)、シャフトシド(schaftoside)、イソシャフトシド(is oschaftoside)、サポナレチン(saponaretin)、サポナリン(saponarin)、ビテキシン(vitexin)、オリエンチン(orientin)およびルチン(rutin)；シアノゲニック (cyanogenic)グルコシド、ギノカージン(gynocardin)(0.01％)；糖（主にラフィノースおよびスクロース）；ステロール［スチグマステロールおよびシトステロール(sitosterol)］；n-非アコサン(n-non-acosane)、およびガムが挙げられる。マルトールおよびエチルマルトールがこの植物から単離されている。クマリンスウンベリフェロンおよびスコポレチンは根から検出されている(LeungおよびFo ster，1996)。それはHPLCで分析される。 32．実施例：カボチヤ、Cucurbitae semen 32.1 植物源／背景カボチャは、ペポカボチャ、夏カボチャ(summer squash)および冬カボチャ(wi nter squash)などのいろいろな名称で知られており、北アメリカ原産であるが、世界中で栽培されている。投薬フォーマットでは、種子全体および粉末にした種子を用いることが必要とされる。 32.2 販売元／商品名カボチャ種抽出物にはいろいろな販売元がある。Botanicals International[Z uelling Botanicals，Inc．(Germany)の一部門］は、２つの変種を提供しており、それらは0.02％のフィトステロールを含む粉末抽出物と、0.5％フィトステロールおよび70％脂肪酸を含む軟質抽出物である。また、カボチャ種子の親油性抽出物はIndena s.a．(Milan，Italy)から販売されている。該抽出物は、Prosta F ink（商標）（Fink Germany）およびCysto-Uregenin（商標）(Madaus，Germany) としても販売されている。 32.3 臨床的適用主な適用は、特に良性の前立腺過形成(BPH)に関連する排尿の問題を処置するためものである。この臨床的使用はほとんど経験に基づくものであるが、信頼できる報告がある（Lutzelburger，Artzl．Praxis，1974，76:3278;Haefele，Artz l．Praxis，1977，79:3321）。平均一日量は種子10gである。 32.4画分分析カボチャの種子および抽出物についての画分分析は、C-18カラムでの逆相クロマトグラフィーまたはシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーを用いて行う。それら両方のクロマトグラフィーは、それぞれ上記のオトギリソウおよびノコギリパルメットの節で記載したようにして行う。 32.5 生物学的活性の分析 BPHの臨床的適用の場合、抗炎症活性についての主たるアッセイはシクロオキシゲナーゼ−１、シクロオキシゲナーゼ−２および5-リポオキシゲナーゼのバイオアッセイである。これらの実験は、上記のノコギリパルメットの節で記載したようにして行う。BPHの臨床的症状についての他の関連のあるバイオアッセイは、アンドロゲン受容体結合アッセイおよび5-α-レダクターゼアッセイである。これらのアッセイは、上記のノコギリパルメットの節で記載したようにして行う。 32.6 化学分析カボチャ種子は、１％のステロイド（特に、24β-エチル-５α-コレスタ-7, 25(27)-ジエン-３β-オールおよび24β-エチル-５α-コレスタ-7-trans-22,25(2 7)-トリエン-３β-オール）を必須成分として含有し、さらに多少のステロールグルコシドならびにΔ⁵-ステロールおよびΔ⁸-ステロール；トコフェロール（ビタミンＥ）；微量元素（特に、セレニウム、マンガン、亜鉛および銅）；35〜40 ％の不揮発性油；約30％のペクチン；約25〜30％のタンパク質を含有する(Bisse t，1994)。 33．実施例：Pygeum、Pygeum africanum 33.1 植物源／背景この植物は主にアフリカに見られ、樹皮の製造がカメルーンで行われている。粉末にした乾燥樹皮を有機溶剤で抽出し乾燥することにより、様々な組成の濃縮粉末薬剤が得られる（Bonati，J．Ethnopharmacol.，1991，32:195-7）。 33.2 販売元／商品名 pygeum抽出物にはいろいろな販売元がある。１つの主な供給元はIndena s.a. （Milan，Italy）であり、この会社はpygeumの精製した軟質の抽出物を提供しており、この抽出物は全ステロール13％（β-シトステロールとして計算したもの）を含むように規格化されている。DEBAT Laboratories（Garches，France）によるTandnan（商標）、Inofarma（Madrid，Spain）によるPronitol（商標）およびMurdock Madaus Schwabe（Springville，Utah）によるPygeum Capsules（商標）も一般に普及している。 33.3 臨床的適用主な適用は、カボチャおよびノコギリパルメットと同様であり、特に良性の前立腺過形成(BPH)に関連する排尿の問題を処置するためものである。最近報告された、BPHに罹患している134人の患者を56日間にわたって25mgの該薬剤をイラクサと組合せて処置した臨床試行では、両方とも安全であり有効であると見なされた(Krzeski，Kazon，Borkowski，WiteskaおよびKuczera，1993，Clin．Ther.，1 5 :1011-20)。 33.4画分分析 Pygeumについての画分分析は、C-18カラムでの逆相クロマトグラフィーまたはシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーを用い、それぞれ上記のオトギリソウおよびノコギリパルメットの節で記載したようにして行う。 33.5 生物学的活性の分析 BPHの臨床的適用の場合、抗炎症活性についての主たるアッセイはシクロオキシゲナーゼ−１、シクロオキシゲナーゼ−２および5-リポオキシゲナーゼのバイオアッセイである。これらの実験は、上記のノコギリパルメットの節で記載したようにして行う。BPHの臨床的症状についての他の関連のあるバイオアッセイは、アンドロゲン受容体結合アッセイおよび5-α-レダクターゼアッセイである。これらのアッセイも、上記のノコギリパルメットの節で記載したようにして行う。筋肉の収縮性も測定する。 33.6 化学分析HPLC、GC 化学分析はHPLCおよびGCにより行う。成分としては、アルカン、脂肪酸、ステロールおよびトリテルペンが含まれる。 34. 実施例：マンネンロウ、Rosemarinus officlnalis 34.1 植物源／背景植物マンネンロウは地中海地域が原産であり、多くの国で栽培されている。この薬剤は、スペイン、モロッコ、ユーゴスラビアおよびチュニジアで製造されている。マンネンロウ油は葉および葉の多い茎の水蒸気蒸留により製造される。その葉は摘みたてまたは乾燥させたものを用い、エタノールを用いて抽出できる。 34.2 販売元／商品名マンネンロウの葉の粉末抽出物はBotanicals International（Zuellig Botani cals，Inc.，Germanyの一部門）から販売されている。 34.3 臨床的適用主な適用は、消化不良(digestive upsets)、鼓腸、拡張、食欲および胃の分泌刺激における駆風薬および健胃薬としての使用のためである。また胆汁分泌薬としても用いられる。外用薬としては、リューマチの治療用ならびに血行の局所的刺激においてオイルまたはリニメントの形態で用いられる。平均一日量は薬剤２〜６ｇまたは精油10〜20滴である。 34.4画分分析マンネンロウの成分の画分分析は、上記のように逆相C-18カラムを用いて行う。 34.5 生物学的活性の分析生物学的分析は以下のアッセイと、アルドース(Aldol)-レダクターゼ、ラットおよびマウス糖尿病（db dbマウス、ob obマウス、Zuckerラット）を用いて行う。アルドース・レダクターゼアッセイは以下のように行う。 34.5.1. アルドースレダクターゼアルドースレダクターゼ（モノマー性のNADP-依存性アルドーケトレダクターゼの１メンバー）はポリオル経路における律速酵素であり、種々のアルデヒドの還元を触媒する。これには、アルデヒド型のグルコースから対応する糖アルコール・ソルビトールへの還元が含まれる。ソルビトールの蓄積は、糖尿病の動物の水晶体、神経、腎臓および網膜において報告されている。大量のソルビトールは、浸透崩壊(osmotic disruption)の原因となり、これは、幾つかの糖尿病合併症の病因の病因フアクターの一つであり得る。ラット水晶体から得たアルドースレダクターゼを、組織ホモジナイズ化および遠心分離により部分精製する。化合物または媒体(vehicle)、酵素、NADPHおよびアッセイ用緩衝液を25℃で３分間プレインキュベートし、340nmで吸光度を観察して初期のゼロ時の値とする。次に、DL-グリセルアルデヒドの添加により反応を開始し、インキュベーションを25℃で８分間継続し、その時点での最終吸光度を記録する。酵素活性は、初期吸光度と最終吸光度との差により求める。化合物を100μMでスクリーニングする（DeRuiterら，1993，J．Enzyme Inhibition 7:2 49-256；Kuboら，1994，Biol．Pharm．Bull．17:458-459）。標準対照物質はカルビドパおよびベンゼラジドである。 34.6 化学分析HPLC、GC マンネンロウは約0.5％の揮発性油；フラボノイド［ジオスメチン(diosmeti n)、ジオスミン(diosmin)、ゲンクワニン(genkwanin)、ゲンクワニン- 4'-メチルエーテル、6-メトキシ-ゲンクワニン、ルテオリン(luteolin)、6-メトキシルテオリン、6-メトキシルテオリン-7-メチルエーテル、ヒスピジュリン(hi spidulin)、アピゲニン(apigenin)、等］；フェノール酸［ロスマリン酸(rosmar inic acid)、ラビアチン酸(labiatic acid)、クロロゲン酸、ネオクロロゲン酸およびカフェイン酸］；カルノシン酸；ロスマリシン(rosmaricine)およびイソロスマリシン（カルノシン酸の反応生成物）；トリテルペン酸［主にウルソール酸(ursolic acid)およびオレアノール酸であり、微量の19α-ヒドロキシウルソール酸、２β-ヒドロキシオレアノール酸および３β-ヒドロキシ尿素-12,20(3)- ジエン-17-オン酸(3β-hydroxyurea-12,20(3)-dien-17-oic acid)を含む］；ロスマノール(rosmanol)、7-エトキシロスマノール、ベツリン酸(betulinic acid) およびカルノソール(carnosol)；等を含有する。精油は、主にモノテルペンハイドロカーボン［α-ピネン、β-ピネン、カンフェン、リモネン、等］、シネオール［オイカリプトール(eucalyptol)］およびボルネオールを含有し、さらにショウノウ、リナロール、ベルベノール、テルピネオール、3-オクタノンおよび酢酸イソボルニルも存在する(LeungおよびFoster，1996)。揮発性油としては、モノテルペンハイドロカーボン、ショウノウ、ボルネオールおよびシネオールならびにフラボノイドが含まれる。 35. 実施例：シベリア産チョウセンニンジン（SIBERIAN GINSENG）、Eleuthero coccus senticosus 35.1 植物源／背景シベリア産チョウセンニンジン（Siberian ginsing）はロシアの科学者達によつて紹介されたアジア産チョウセンニンジン（Asian ginsingと同じ分類に属するものである。その漢方薬は根を基剤とする。 35.2 販売元／商品名種々の形態のシベリア産チョウセンニンジンが以下のように入手可能である： Natural Life，Herbal Harvest，Herbal Cholce-Botalia，Herb Pharm，Eleu-Ko kk（商標）(Pharmaton，Germany)およびVital-Kapseln-ratiopharm（商標）(Ratopharm，Germany)。 35.3 臨床的適用シベリア産チョウセンニンジンには、抗癌特性、免疫刺激特性および血圧低下を含む多くの臨床的適用がある。これはまた、総合強壮剤としても報告されている。 35.4画分分析画分は上記のヤドリギの節で記載したようにして調製する。あるいはまた、公表されている手法を用いる[BauerおよびRemiger，1989，Planta Med．55:367-37 1；Steinmullerら，1993，J．Immunopharmacol．15(5):605-614]。 35.5 生物学的活性の分析抗癌性の臨床適用についての生物学的分析は、上記のヤドリギの節で記載したようにして行う。 35.6 化学分析化学分析はHPLCにより行う。成分としては、エリューセロシド(eleutherosi des)、リガンドおよびステロールが含まれる。 36. 実施例：STINGING NETTLE（イラクサの一種）、Urthica dloica 36.1 植物源／背景この植物は、ほぼ世界中に分布しており、南東ヨーロッパで製造される。この薬剤は、冷たい圧搾油として外用的に、ならびに細かく粉砕した植物材料から作られるお茶として内服的に用いられる。 35.2 販売元／商品名新鮮な凍結乾燥したイラクサが、Bcclectic Institute(Sandy，Oregon)および Bionorica(Germany)から販売されている。根（泌尿器系用の薬剤）は、 Bazoton(商標)(Kanoldt，Germany)、Prostaforton（商標）(Sanofi Winthrop,Ge rmany)から販売されており、葉（抗リューマチ剤）はRheuma-Heck（商標）(Krew el Meuselbach，Germany)から販売されている。 36.3 臨床的適用主な使用は利尿剤としてであるが、それ以外の使用として創傷の癒合の促進剤として、ならびに胆汁の病訴の治療における使用がある（Kirchhoff，Z．Phytot herap，1983，4:621）。平均一日量は、150mlの熱湯に茶匙３〜４杯のイラクサの草葉を入れたものを一日当たり３〜４回摂取する。 36.4画分分析 Stinging Nettleの成分の画分分析は上記のようにして逆相C-18カラムを用いて行う。 36.5 生物学的活性の分析生物学的分析は、上記のノコギリパルメットの節で記載したようにして行う。 36.6 化学分析HPLC この薬剤から、β-シテステロールおよびタンニン、最近ではスコポレチン、β-シトステリル3-β-D-グルコシダーゼ、他のステロール、およびステリルグルコシドが単離されている。この薬剤では、ホモバニリルアルコールおよび対応するグルコシドを含むフェニルプロパン、ならびに比較的稀なモノエポキシリグナン型のリガンド、特にネオ-オリビル(neo-olivil)および誘導体が検出された。一連のポリフェノールおよびそれらのメチルエーテルが存在する。幾つかのモノテルペンジオールが遊離またはグルコシドの形態で単離された。レクチン（0. 1〜0.2％）、いわゆるUDA［ウルチカ・ジオイカ・アグルチニン(Urtica dioicaa gglutinin)］および多糖（酸性および中性の両方）、ならびに9-ヒドロキシオクタデカ-10-trans、12-cis-ジエン酸も見出されている(Bissat，1994)。 37. 実施例：カノコソウ、Valeriana officianalis 37.1 植物源／背景植物カノコソウはヨーロッパおよびアジアが原産であり、北アメリカに馴化している。この薬草はアメリカ合衆国、日本およびヨーロッパで栽培されている。最も一般的な利用は、根、根茎および匐枝としてであり、お茶として摂取される。根をエタノール抽出することにより精油やチンキ剤も製造される。 37.2 販売元／商品名カノコソウにはいろいろな販売元がある。１つの主な販売元はIndena s.a.(Mi lan，Italy)であり、この会社はカノコソウの乾燥抽出物（0.8％の吉草酸を含有するように規格化されたもの）を提供している。他の製品としては、Murdock Ma daus Schwabe（Springville，Utah）によるCalmaid（商標）およびValerian Nig httime（商標）が挙げられる。Flora Laboratories、Trout Lake Farm、PhytoPh armica,Herbal Choice-Botalia、Botalia Gold、HerbPharm，Nature's WayおよびSchaklee。 37.3 臨床的適用カノコソウに関連する臨床的適用は以下のとおりである：鎮静剤(calmative) 、睡眠促進剤、鎮静、肝臓保護、肝硬変、肝炎、免疫調節活性、高脂血症、鎮静 (sedative)、ストレス、神経質および不眠症。 37.4画分分析カノコソウの成分の画分分析は、上記のようにして逆相C-18カラムを用いて行う。さらに画分も上記のヤドリギの節で記載したようにして調製する。あるいはまた、公表された手順を用いる（BauerおよびRemiger，1981；Steinmullerら，1 993）。 37.5 生物学的活性の分析カノコソウは、CNS受容体、GABA-A（中枢、末梢）および5HTi受容体活性について上記のようにして分析する。上記の動物モデルを用いて鬱病的挙動も調べる。 37.5.1 アミノ酪酸−Ａ(GABA-A)受容体結合についてのバイオアッセイ雄ラットを断頭により犠牲にし、それらの皮質を取り出し、10倍量の冷たい０〜32Ｍスクロース(pH7.4)中でPotter-Eleveheimホモジナイザーにてホモジネートする。ホモジナイズした材料を100ｇにて10分間遠心分離しする。次に、上清を20,000ｇにて20分間遠心分離し、ペレットを20倍量の新鮮な蒸留水中に再懸濁し、冷却し、8,000×ｇにて20分間遠心分離する。上清および「バッフィーコート」を50,000×ｇにて20分間遠心分離して、GABA-A受容体をペレットとして得る。結合アッセイは、50mmトリス-HCl（pH7.4）緩衝液中で行う。³Ｈ-ムシモールのGABA-A受容体に対する結合についてのカノコソウ抽出物およびその画分の効果（０℃で30分間インキュベートした後）を、BernasconiおよびMorazzoni，1993( Fitoterapia，LXIV巻，291-299)に従って定量する。 37.6 化学分析HPLC、TLC、超臨界二酸化炭素通常のカノコソウは、その主な生物活性構成成分として、バレポトリアート (valepotriates)と呼ばれる幾つかのイリドイド(iridoid)化合物を含有し、それらの化合物としては、バルトラート（バルトラート、バルトラートイソバレロキシヒドリン、アセバルトラート、バレクロリン等）、ジドロバルトラート(didro valtrates)［ジドロバルトラート、ホモジドロバルトラート、デオキシドジドロバルトラート、ホモデオキシドジドロバルトラート、イソバレロキシヒドロキシジドロバレトラート、等］およびイソバルトラート［イソバルトラート、7-エピデアセチルイソバルトラート(7-epideacetylisovaltrate)、等］が含まれ、バルトラートおよびジドロバルトラートが主なバレポトリアートである。さらに、カノコソウは、バレロシダタム(valorosidatum)（イリドイドエステルグリコシド）および多くの成分からなる揮発性油（0.5〜２％）を含有し、そのような揮発性油の成分としては、特に、酢酸ボルニルやイソ酪酸ボルニル（主な化合物）、カリオフィレン(caryophyllene)、α-ピネン、β-ピネン、バレレナール (valerenal)、バレレン酸(valerenic acid)、バレラノン(valeranone)、β-ヨノン、イソ吉草酸オイゲニル(eugenyl isovalerate)、イソ吉草酸イソオイゲニル、パッチョーリ(patchouli)アルコール、バレリアノール(valerianol)、ボルネオール、カンフェン、β-ビサボレン(bisabolene)、レドール(ledol)、イソ吉草酸およびターピノレン(terpinolene)が含まれる。通常のカノコソウは、アクチニジンバレリアニン(actinidine valerianine)、バレリンおよびシャチニン(Cha tinine)を含む幾つかのアルカノイドも含有する。通常のカノコソウ中に存在する他の構成成分としては、塩素（約３％）、メチル2-ピロールケトン、クロロゲン酸(chlorogenic acid)およびカフェイン酸；β-シトステロール(sitosterol) ；タンニン、ガム；等が含まれる。インドカノコソウ(Indian valerian)は一般に、バレポトリアート、バレロシダタムおよび揮発性油などの、通常のカノコソウと同様の構成成分を含有すると報告されている。さらに、アセチル化リナリンの2A"'-O-および3"'-O-2-メチルブチリルエステルを含有する(LeungおよびFoste r，1996)。本明細書に記載され請求される発明は、本明細書中に開示の具体例によって範囲が限定されるものではない。何故ならば、これらの具体例は本発明の幾つかの態様を説明するためのものであるからである。如何なる等価の実施態様も本発明の範囲にあるとされる。事実、本明細書中に示してあり記載されているもの以外の本発明の種々の改変は、上記の記載から当業者には明らかであろう。そのような改変も添付した請求の範囲の範疇にあるとされる。本出願中には、種々の出願および特許がカッコ内に引用されている。それらの内容は、参考として本出願に組み入れるものとする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者クワジャ，タスニーム，エー. アメリカ合衆国 92660 カリフォルニア州，ニューポートビーチ，ポートアルバンズプレース 1971 (72)発明者フリードマン，エリオット，ピー. アメリカ合衆国 93108 カリフォルニア州．モンテシト，ヴィアマナナ 734

Claims

【特許請求の範囲】１．医薬品級の植物性薬剤の調製方法であって、ある特定の生物学的活性を有する植物性材料を用意する工程、ただし、前記植物性材料は複数の成分を含有するものである；前記植物性材料の代表的なアリコートを複数のマーカー画分に分離する工程、その際、前記マーカー画分の少なくとも１つは少なくとも１つの活性成分を含むものである；前記マーカー画分のそれぞれの前記特定の生物学的活性の程度を測定して前記代表的なアリコートの生物活性フィンガープリントを得る工程；および前記代表的なアリコートの生物活性フィンガープリントを、医薬品級の植物性薬剤に関して確立されている標準品の生物活性フィンガープリントと比較して、前記植物性材料が医薬品級の植物性薬剤になるか否かを判定する工程；を含んでなる方法。２．前記マーカー画分の１以上が１つの活性成分を含有する、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。３．前記方法が、前記マーカー画分の少なくとも１つに存在する活性成分の量を測定して、前記代表的なアリコートの定量的組成のフィンガープリントを得る工程；および前記代表的なアリコートの定量的組成のフィンガープリントを、所定の医薬品級の植物性薬剤に関して確立されている標準品の定量的組成フィンガープリントと比較して、前記植物性材料が医薬品級の植物性薬剤になるか否かを判定する工程；をさらに含んでなる、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。４．前記方法が、前記植物性材料の代表的なアリコートの総生物活性を測定する工程；および前記代表的なアリコートの総生物活性を前記標準品の総生物活性と比較して、前記植物性材料が医薬品級の植物性薬剤になるか否かを判定する工程；をさらに含んでなる、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。５．前記植物性材料が植物から調製した抽出物である、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。６．前記植物性材料が超臨界二酸化炭素抽出物である、請求項５に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。７．前記植物性材料がエタノール抽出物である、請求項５に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。８．前記植物性材料が水性または有機抽出物である、請求項５に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。９．前記植物性材料が種子油(seed oil)である、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 10．前記植物性材料が粉末状の植物材料である、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 11．前記植物性材料がアロエ(Aloe)、コケモモ(Bilberry)、ショウマ(Black Coh osh)、カミルレ(Chamomile)、イタリアニンジンボク(Chaste tree)、クリ(Che stnut)、Echinacea、マツヨイグサ(Evening Primrose)、ナツシロギク(Feverf ew)、ニンニク(Garlic)、ショウガ(Ginger)、イチョウ(Ginkgo)、チョウセンニンジン(Ginseng)(アジア産)、ヒドラスチス(Goldenseal)、緑茶(Green tea) 、Guggulipid、サンザシ(Hawthorn)、キヅタ(Ivy)、カワカワ(Kava)、カンゾウ(Licorice)、オオアザミ(Milk Thistle)、トケイソウ(Passion Flower)、カボチャ(Pumpkin)、pygeum、マンネンロウ(Rosemary)、Siberian Ginseng、ノコギリパルメット(Saw Palmetto)、オトギリソウ(St.John's Wort)、Stinging Nettle(イラクサの一種)、およびカノコソウ(Valerian)よりなる群から選択される、請求項１、２、３または４に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 12．前記植物性材料がアロエ(Aloe)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 13．前記植物性材料がコケモモ(Bilberry)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 14．前記植物性材料がショウマ(Black Cohosh)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 15．前記植物性材料がカミルレ(Chamomile)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 16．前記植物性材料がクリ(Chestnut)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 17．前記植物性材料がEchinaceaである、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 18．前記植物性材料がマツヨイグサ(Evening Primrose)油である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 19．前記植物性材料がナツシロギク(Feverfew)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 20．前記植物性材料がニンニク(Garlic)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 21．前記植物性材料がショウガ(Ginger)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 22．前記植物性材料がイチョウ(Ginkgo)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 23．前記植物性材料がチョウセンニンジン(Ginseng)(アジア産)である、請求項 11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 24．前記植物性材料がヒドラスチス(Goldenseal)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 25．前記植物性材料が緑茶(Green tea)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 26．前記植物性材料がサンザシ(Hawthorn)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 27．前記植物性材料がキヅタ(Ivy)の葉である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 28．前記植物性材料がカワカワ(Kava)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 29．前記植物性材料がカンゾウ(Licorice)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 30．前記植物性材料がオオアザミ(Milk Thistle)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 31．前記植物性材料がトケイソウ(Passion Flower)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 32．前記植物性材料がカボチャ(Pumpkin)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 33．前記植物性材料がPygeumである、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 34．前記植物性材料がマンネンロウ(Rosemary)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 35．前記植物性材料がノコギリパルメット(Saw Palmetto)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 36．前記植物性材料がSiberian Ginsengである、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 37．前記植物性材料がオトギリソウ(St．John's Wort)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 38．前記植物性材料がStinging Nettleである、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 39．前記植物性材料がカノコソウ(Valerian)である、請求項11に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 40．前記植物性材料が植物材料の混合物である、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 41．前記植物材料の混合物がノコギリパルメット(Saw Palmetto)とカボチャ(Pum pkin)の混合物である、請求項40に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 42．前記植物材料の混合物がEchinaceaとヒドラスチス(Goldenseal)の混合物である、請求項40に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 43．前記植物材料の混合物がオトギリソウ(St．John's Wort)とカノコソウ(Vale rian)の混合物である、請求項40に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 44．前記活性成分がアセトゲニン、アルカロイド、炭水化物、カロチノイド、ケイ皮酸誘導体、脂肪酸、脂肪酸エステル、フラボノイド、グリコシド、イソプレノイド、大環式抗生物質、核酸、ペニシリン、ペプチド、フェノール系化合物(phenolics)、ポリアセチレン、ポリケチド、ポリフェノール、多糖類、タンパク質、プロスタグランジン、ステロイド、およびテルペノイドよりなる群から選択される、請求項１、２、３または４に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 45．前記活性成分がアセトゲニンである、請求項44に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 46．前記活性成分がアルカロイドである、請求項44に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 47．前記活性成分が炭水化物である、請求項44に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 48．前記活性成分が脂肪酸エステルである、請求項44に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 49．前記活性成分がフラボノイドである、請求項44に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 50．前記活性成分がレクチンである、請求項44に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 51．前記活性成分がフェノール系化合物(phenolic)である、請求項44に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 52．前記活性成分がステロイドである、請求項44に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 53．前記活性成分がテルピノイドである、請求項44に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 54．前記生物活性がアレルギー／免疫疾患を治療または改善するための使用を示す、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 55．前記生物活性が心臓血管系の疾患を治療または改善するための使用を示す、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 56．前記生物活性が中枢神経系の障害を治療または改善するための使用を示す、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 57．前記生物活性が胃腸障害を治療または改善するための使用を示す、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 58．前記生物活性が代謝障害を治療または改善するための使用を示す、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 59．前記生物活性が微生物またはウイルスにより引き起こされた疾患を治療または改善するための使用を示す、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 60．前記植物性材料が均質な材料である、請求項１に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 61．医薬品級の植物性薬剤の調製方法であって、ある特定の生物学的活性を有する、複数の成分を含有する植物性材料を用意する工程、ただし、各成分は標準化された生物活性プロフィールを有するものである；前記植物性材料由来の代表的なアリコートを複数のマーカー画分に分離する工程、その際、前記マーカー画分の少なくとも１つは少なくとも１つの活性成分を含むものである；前記マーカー画分のそれぞれに存在する活性成分の量を測定する工程；前記マーカー画分のそれぞれの生物活性を、各活性成分の存在量および成分の前記標準化生物活性プロフィールに基づいて算出して、前記代表的なアリコートの算出された生物活性フィンガープリントを得る工程；および前記代表的なアリコートの算出された生物活性フィンガープリントを、医薬品級の植物性薬剤に関して確立されている標準品の生物活性フィンガープリントと比較して、前記植物性材料が医薬品級の植物性薬剤になるか否かを判定する工程；を含んでなる方法。 62．前記方法が、前記植物性材料の代表的なアリコートの総生物活性を測定する工程；および前記代表的なアリコートの総生物活性を前記標準品の総生物活性と比較して、前記植物性材料が医薬品級の植物性薬剤になるか否かを判定する工程；をさらに含んでなる、請求項61に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 63．前記植物性材料が植物由来の抽出物である、請求項61に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 64．前記植物性材料が水性または有機抽出物である、請求項63に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 65．前記植物性材料が粉末状の植物材料である、請求項63に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 66．前記植物性材料がアロエ(Aloe)、コケモモ(Bilberry)、ショウマ(Black Coh osh)、カミルレ(Chamomile)、イタリアニンジンボク(Chaste tree)、クリ(Che stnut)、Echinacea、マツヨイグサ(Evening Primrose)、ナツシロギク(Feverf ew)、ニンニク(Garlic)、ショウガ(Ginger)、イチョウ(Ginkgo)、チョウセンニンジン(Ginseng)(アジア産)、ヒドラスチス(Goldenseal)、緑茶(Green tea) 、Guggulipid、サンザシ(Hawthorn)、キヅタ(Ivy)、カワカワ(Kava)、カンゾウ(Licorice)、オオアザミ(Milk Thistle)、トケイソウ(Passion Flower)、カボチャ(Pumpkin)、pygeum、マンネンロウ(Rosemary)、Siberian Ginseng、ノコギリパルメット(Saw Palmetto)、オトギリソウ(St.John's Wort)、Stinging Nettle(イラクサの一種)、およびカノコソウ(Valerian)よりなる群から選択される、請求項61または62に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 67．前記植物性材料が植物材料の混合物である、請求項61に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 68．前記活性成分がアセトゲニン、アルカロイド、炭水化物、カロチノイド、ケイ皮酸誘導体、脂肪酸、脂肪酸エステル、フラボノイド、グリコシド、イソプレノイド、大環式抗生物質、核酸、ペニシリン、ペプチド、フェノール系化合物(phenolics)、ポリアセチレン、ポリケチド、ポリフェノール、多糖類、タンパク質、プロスタグランジン、ステロイド、およびテルペノイドよりなる群から選択される、請求項61または62に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 69．前記生物活性がアレルギー／免疫疾患を治療または改善するための使用を示す、請求項61に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 70．前記生物活性が心臓血管系の疾患を治療または改善するための使用を示す、請求項61に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 71．前記生物活性が中枢神経系の障害を治療または改善するための使用を示す、請求項61に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 72．前記生物活性が胃腸障害を治療または改善するための使用を示す、請求項61 に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 73．前記生物活性が代謝障害を治療または改善するための使用を示す、請求項61 に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 74．前記生物活性が微生物またはウイルスにより引き起こされた疾患を治療または改善するための使用を示す、請求項61に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 75．前記植物性材料が均質な材料である、請求項61に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 76．前記マーカー画分が１つのクラスの関連成分を含有する、請求項１、４、61 または62に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 77．医薬品級の植物性薬剤の調製方法であって、ある特定の生物学的活性を有する植物性材料を用意する工程、ただし、前記植物性材料は複数の成分を含有するものである；前記植物性材料の代表的なアリコートを複数のマーカー画分に分離する工程、その際、前記マーカー画分の少なくとも１つは少なくとも１つの活性クラスの成分類を含むものである；前記マーカー画分のそれぞれの前記特定の生物学的活性の程度を測定して前記代表的なアリコートの生物活性フィンガープリントを得る工程；および前記代表的なアリコートの生物活性フィンガープリントを、医薬品級の植物性薬剤に関して確立されている標準品の生物活性フィンガープリントと比較して、前記植物性材料が医薬品級の植物性薬剤になるか否かを判定する工程；を含んでなる方法。 78．前記植物性材料がアロエ(Aloe)、コケモモ(Bilberry)、ショウマ(Black Coh osh)、カミルレ(Chamomile)、イタリアニンジンボク(Chaste tree)、クリ(Che stnut)、Echinacea、マツヨイグサ(Evening Primrose)、ナツシロギク(Feverf ew)、ニンニク(Garlic)、ショウガ(Ginger)、イチョウ(Ginkgo)、チョウセンニンジン(Ginseng)(アジア産)、ヒドラスチス(Goldenseal)、緑茶(Green tea) 、Guggulipid、サンザシ(Hawthorn)、キヅタ(Ivy)、カワカワ(Kava)、カンゾウ(Licorice)、オオアザミ(Milk Thistle)、トケイソウ(Passion Flower)、カボチャ(Pumpkin)、pygeum、マンネンロウ(Rosemary)、Siberian Ginseng、ノコギリパルメット(Saw Palmetto)、オトギリソウ(St.John's Wort)、Stinging Nettle(イラクサの一種)、およびカノコソウ(Valerian)よりなる群から選択される、請求項77に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 79．前記活性クラスの成分類がアセトゲニン、アルカロイド、炭水化物、カロチノイド、ケイ皮酸誘導体、脂肪酸、脂肪酸エステル、フラボノイド、グリコシド、イソプレノイド、大環式抗生物質、核酸、ペニシリン、ペプチド、フェノール系化合物(phenolics)、ポリアセチレン、ポリケチド、ポリフェノール、多糖類、タンパク質、プロスタグランジン、ステロイド、およびテルペノイドよりなる群から選択される、請求項77に記載の医薬品級の植物性薬剤の調製方法。 80．請求項１、３、61または77に記載の方法により調製された医薬品級の植物性薬剤。 81．前記マーカー画分が１つのクラスの関連成分を含有する、請求項１に記載の方法により得られた医薬品級の植物性薬剤。