JP2000504687A

JP2000504687A - トポイソメラーゼインヒビターとしてのカラリン類似体

Info

Publication number: JP2000504687A
Application number: JP9528606A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．ラボイ，エドモンド; フォングリュ，レロイ; ビー．マケイ，ダーシャン
Original assignee: ルトガーズ，ザステイトユニバーシティオブニュージャージー
Priority date: 1996-02-12
Filing date: 1997-02-11
Publication date: 2000-04-18
Also published as: HUP9900413A3; NO983669D0; EP0888346A1; NZ330705A; PT888346E; KR19990082488A; AU710070C; AU2115597A; AU710070B2; DE69705112T2; DE69705112D1; CN1211252A; ES2161442T3; WO1997029106A1; EP0888346B1; NO983669L; CA2241551A1; BR9707425A; PL328402A1; TR199801555T2

Abstract

(57)【要約】本発明は、抗癌剤として有効なプロトベルベリンアルカロイド誘導体、およびその使用法を提供する。また、本発明は、トポイソメラーゼインヒビターとして有効なプロトベルベリン誘導体を提供する。本発明は、また、カンプトセシン耐性癌細胞に対して有効なトポイソメラーゼＩターゲテッド治療剤であり、かつＣＮＳ腫瘍に対して特に有効である、コラリンおよびニチジン誘導体を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】トポイソメラーゼインヒビターとしてのカラリン類似体従来技術ＤＮＡトポイソメラーゼは、ＤＮＡのホスホジエステル主鎖を破壊しかつ再結合することによって、ＤＮＡのトポロジカル状態を変更する核酵素の独特なクラスを表す。哺乳動物のトポイソメラーゼＩは１つのＤＮＡ鎖を一時的に破壊することによってＤＮＡのトポロジーを変更することができるが、トポイソメラーゼＩＩは二本鎖の破壊を引き起こすことによって作用する。最近、トポイソメラーゼの毒作用は、新規な癌化学療法の開発のための魅力的な薬理学的ターゲットとして認識された。アルカロイドおよびそれらの誘導体は、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）およびベルベリン（ｂｅｒｂｒｉｎｅ）を包含する、潜在的抗腫瘍剤として研究されてきている（Ｈａｈｎ他、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、Ｖｏｌ．３．、Ｇｏｔｔｌｉｅｂ他（編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ：ＮｅｗＹｏｒｋ、ｐｐ．５７７−５８４（１９７５）；Ｓｈｉｄｅｍａｎ、Ｂｕｌｌ．Ｎａｔｌ．ＦｏｒｍｕｌａｒｙＣｏｍｍｉｔｔｅ、１８：３（１９５０）；Ｂｈａｋｋｕｎｉ他、ＴｈｅＡｌｋａｌｏｉｄｓ；Ｖｏｌ．２８、Ｂｒｏｓｓｉ、Ａ．（編）、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ：ＮｅｗＹｏｒｋ、ｐｐ．９５− １８１（１９８６）；Ｓｕｆｆｎｅｓｓ他、ＴｈｅＡｌｋａｌｏｉｄｓ；Ｖｏｌ．ＸＸＶ、Ｂｒｏｓｓｉ、Ａ．（編）、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ：ＮｅｗＹｏｒｋ、ｐｐ．１７８−１９７（１９８５））。カンプトテシンおよびその誘導体の広範な研究は、細胞のトポイソメラーゼＩが抗腫瘍アルカロイドカンプトテシンのための分子のターゲットであることを確立した（Ｈｓｉａｎｇ他、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４８：１７２２−１７２６（１９８８））。しかしながら、腫瘍細胞のいくつかの系統はカンプトテシンに対する耐性を証明した。トポイソメラーゼＩがカンプトテシンの分子のターゲットであることの証明は、他のトポイソメラーゼＩターゲッティング抗腫瘍化合物（トポイソメラーゼＩの毒物）の同定および開発をさらに剌激した。これらの中には下記のものがある：アクチノマイシンＤ、モルホリノドキソルビシン、ＤＮＡマイナーグルーブ結合性ビス−およびトリス−ベンズイミダゾール、ヨードカルバゾール誘導体、ブルガレイン、イントプリシン、サイントピン、インドロキノリンジオン、ニチジン（ｎｉｔｉｄｉｎｅ）誘導体およびベルベリン誘導体。これらの化合物の多数は、また、トポイソメラーゼＩおよびＩＩの双方の二重毒物である。新規なトポイソメラーゼＩの毒物の数は急速に増加しているが、カンプトテシンを除外して、トポイソメラーゼＩ毒作用は新規な毒物のいずれについても細胞を殺すことに関係することは証明されなかった。同様に、ＤＮＡ結合の介在的モードはトポイソメラーゼＩＩ毒作用に必須であることが知られており、このモードが二重毒物としてトポイソメラーゼＩに毒作用を及ぼすことに関係するかどうかは不明瞭である。イソキノリン環に関係する構造を有するアルカロイドの広く分布したクラスに、研究は集中されてきてた。これらの化合物の２つ、すなわち、ベンゾフェナントリジン、ニチジン、および関係するアルカロイドのファガロニンは、ｉｎｖｉｔｒｏにおいてトポイソメラーゼＩ仲介ＤＮＡ切断を誘導する高い効力を有する（Ｗａｎｇ他、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．６：８１３−８１８（１９９３））。動物において抗腫瘍活性を有することが知られているプロトベルベリンのファミリーに属するいくつかの化合物も、トポイソメラーゼＩの毒物であることが示された。ベルベリンは天然に存在するプロトベルベリンアルカロイドの最も集中的に研究されたものの１つであり、マウスのＰ−３８８白血病に対して弱い抗腫瘍活性を示すことが報告された（Ｓｕｆｆｎｅｓｓ他、ＴｈｅＡｌｋａｌｏｉｄｓ、Ｖｏｌ．ＸＸＶ、Ｂｒｏｓｓｉ、Ａ．（編）、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ：ＮｅｗＹｏｒｋ、ｐｐ． 17８−１９７（１９８５））。プロトベルベリンのアルカロイド類似体であるコラリン（ｃｏｒａｌｙｎｅ）は、ベルベリンに関していっそう顕著な抗腫瘍活性を有し、マウスにおいてＬ１２１０およびＰ３８８白血病に対して有意なｉｎｖｉｖｏ活性を示す（Ｚｅｅ −Ｃｈｅｎｇ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１７：３４７（１９７４）；Ｚｅｅ −Ｃｈｅｎｇ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９：８８２（１９７６））。その抗腫瘍活性についての分子基準は同定されなかったが、二重らせんまたは三重らせんＤＮＡに結合する能力は観測された抗白血病活性に寄与しうると推測された（Ｗｉｌｓｏｎ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９：１２６１（１９７６）；Ｌｅｅ他、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３２：５５９１−５５９７（１９９３））。コラリンの抗腫瘍活性は、その比較的低い毒性と組み合わせて、多数の誘導体の合成についての研究を促進し（Ｚｅｅ−Ｃｈｅｎｇ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１７：３４７（１９７４））、そしてコラリンの８−位におけるメチル置換基の存在および５，６−位における不飽和がマウスにおけるＬ１２１０およびＰ３８８白血病に強く関連づけらることを示唆した（Ｍｅｓｓｍｅｒ他、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６１：１８５８−１８５９（１９７２）；Ｃｕｓｈｍａｎｎ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２８：１０３１−１０３６（１９８５）；Ｓｔｅｒｍｉｔｚ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１８：７０８−７１３（１９７５）；Ｊａｎｉｎ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６：３６８６−３６９２（１９９３））。しかしながら、安全なかつ有効な治療剤を開発するこれらの努力にかかわらず、改良された細胞障害性を有しかつ薬剤耐性癌細胞に対して有効である抗癌剤が必要とされている。発明の要約本発明は、下記式の化合物を提供する：式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシ、好ましくは−ＯＣＨ₃ であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキル、好ましくは−ＯＣＨ₃ であるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキル、好ましくは−ＣＨ₃ であるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ は独立して−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ₂ ）₂ であるか、あるいは不存在である。代りに、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、そしてＲ₆およびＲ₇ は一緒になって −ＯＣＨ₂ Ｏ−である。１つの態様において、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−である。他の態様によれば、Ｒ₈ は−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｒ₉ は不存在であり、そしてＲ₃ はＨである。他の態様において、Ｒ₉ は−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ₂ ）₂ −であり、Ｒ₁ またはＲ₂ はＨであり、そしてＲ₅ およびＲ₈ は不存在である。なお他の態様において、Ｒ₈ およびＲ₉ の双方は不存在である。式（Ｉ）の化合物は、親化合物に関して、トポイソメラーゼＩに対して改良された阻害活性を示し、また、トポイソメラーゼＩＩの有効なインヒビターである。本発明の化合物は、また、癌細胞に対して有効な細胞障害因子であり、そしてカンプトテシン耐性ヒト腫瘍細胞系統に対して細胞障害性活性を有する。さらに、癌に悩む哺乳動物に、このような癌細胞の増殖を抑制するために有効な量の式（Ｉ）の化合物を投与することからなる、癌細胞の増殖を抑制する方法が提供される。発明の詳細な説明ＤＮＡトポイソメラーゼはＤＮＡのトポロジー的状態を修飾する核酵素である。コラリンの類似体が合成され、そしてトポイソメラーゼＩおよびトポイソメラーゼＩＩの毒物としてのそれらの活性について評価された。また、これらの類似体はヒトリンパ芽球細胞系統、ＲＰＭＩ８４０２、およびそのカンプトテシン耐性変異型、ＣＰＴＫ−５；表皮癌腫細胞系統、ＫＢ３−１；およびグリア芽細胞腫（ＣＮＳ腫瘍）、ＳＦ−２６８に対する細胞障害性について評価された。これらの類似体の薬理学的活性は、置換パターンおよび置換基の特質に対する強い依存性を示した。また、いくつかの１−ベンジルイソキノリンおよび３−フェニルイソキノリンが合成された。これらの化合物は、コラリンの環構造の一部分のみを組込み、トポイソメラーゼの毒物として、そして細胞障害性について評価された。これらの構造−活性の研究は、コラリン環系に関連する構造の剛性か薬理学的活性のために重大であることを示す。これらのコラリン類似体上の３，４−メチレンジオキシ置換基の存在は、一般に、トポイソメラーゼの毒物として増強された活性に関係づけられた。５，６−ジヒドロ−３，４−メチレンジオキシ−１０，１１−ジメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライドは、カンプトテシンに対して同様な活性を有する、評価されたコラリン類似体の中で、最も効力のあるトポイソメラーゼＩの毒物であった。この類似体はトポイソメラーゼＩＩの毒物としても例外的効力を有した。本発明によれば、癌に悩む哺乳動物に有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することによって癌細胞は抑制される。本明細書において使用するとき、「有効量」はターゲット癌細胞の増殖を抑制する量である。本明細書において記載するように、適当な投与量は約０．５〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲であろう。本明細書に記載する組成物は、充実哺乳動物腫瘍または血液学的悪性疾患の治療において有効であると考えられる。これらの充実腫瘍は、頭および頸部、肺、中皮腫、縦隔、食道、胃、膵臓、肝胆汁系、小腸、結腸、直腸、肛門、腎臓、尿管、膀胱、前立腺、尿道、陰茎、精巣、婦人科学的器官、卵巣、乳房、内分泌系、皮膚および中枢神経系の癌；軟質組織および骨の肉腫；および皮膚および眼内器官の黒色腫を包含する。血液学的悪性疾患は、幼児期の白血病およびリンパ腫、ホジキン病、リンパ球および皮膚由来のリンパ腫、急性および慢性の白血病、プラズマ細胞新形成およびエイズに関連する癌を包含する。治療の好ましい哺乳動物種はヒトおよび家畜化動物である。文献において報告されている方法に類似する方法を、ジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウム誘導体の製造において使用した（Ｚｅｅ−Ｃｈｅｎｇ他、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６１：９６９−９７１（１９７２））。使用した一般的合成アプローチをスキーム１において概説する。適当に置換されたジメトキシフェネチルアミンを３，４−ジメトキシフェニルアセチルクロライドと反応させると、フェニルアセトアミド、５ａ−ｃ、が生成し、これをオキシ塩化リンの存在において環化して、３，４−ジヒドロ−１−ベンジルイソキノリン中間体、６ａ−ｃ、を製造した。これらのジヒドロイソキノリン中間体は、発煙Ｈ₂ ＳＯ₄ の存在において無水酢酸を使用して、５，６−ジヒドロジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウム誘導体、７ａ−ｃ、に直接変換することができる。代りに、６ａ−ｃをフィルスマイヤー−ハーク（Ｖｉｌｓｍｅｉｅｒ−Ｈａａｃｋ）条件下に８ａ−ｃに変換することができた(Le Ｑｕａｎｇ他、Ａｃａｄ．Ｓｃ．、ｓｅｒ．Ｃ１３４０（１９６８））。また、ジヒドロイソキノリン中間体、６ａ−ｃ、を、炭素担持パラジウムの存在において、それらの１−ベンジルイソキノリン誘導体、９ａ−ｃ、に酸化することができる。９ａ−ｃをＨ₂ ＳＯ₄ の存在において無水酢酸で処理すると、８−メチルジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウム誘導体、２ａ− ｃ、が生成した。フィルスマイヤー−ハーク条件下に、９ａ−ｃをジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド誘導体、１０ａ−ｃ、に変換した。スキーム１スキーム２１−メチル−３−フェニルイソキノリン誘導体の製造に使用した合成法をスキーム２において概説する。文献の手法をわずかに変更した手法を使用して、１，２−ジメトキシベンゼンおよび１，２−（メチレンジオキシ）ベンゼンを３，４ −ジメトキシフェニル−アセチルクロライドでフリーデル−クラフツアシル化すると、それぞれ、中間体、１１ａおよび１１ｂ、が得られた。これらのケトンをＰ₂ Ｏ₅ の存在下にアセトニトリルと反応させて、６，７−ジメトキシ−１−メチル−３−（３，４−ジメトキシフェニル）イソキノリン、１２ａ、および６，７−メチレンジオキシ−１−メチル−３−（３，４−ジメトキシフェニル）イソキノリン、１２ｂ、に変換した。クロロホルム中のブロモトリブロマイドを使用して１２ａのメトキシ基の切り放して、テトラヒドロキシ誘導体、１３、を製造した。化合物１２ａ、１２ｂ、および１３を、硫酸ジメチルで処理することによって、それぞれ、それらの２−メチルイソキノリニウム誘導体、１４ａ、１４ｂ、および１５、に変換した。哺乳動物のトポイソメラーゼのインヒビターとしてコラリンおよび関係する化合物の相対活性を、実施例中の表１に記載する。この表に示すように、コラリンおよびその類似体のいくつかは、哺乳動物のトポイソメラーゼＩの毒物として、ある場合においてカンプトテシンに匹敵する、顕著な活性を有した。マウスにおけるＬ１２１０およびＰ３８８白血病に対する１系列のコラリン誘導体の構造の影響についての以前の研究において、８−アルキル置換の存在、平坦性、および構造の剛性は抗腫瘍活性のための決定的因子であることが明らかにされた。この研究において、コラリンの２，３−位（２ａ、７ａ、８ａ、９ａ、１０ａ）または３，４−位（２ｂ、７ｂ、８ｂ、９ｂ、１０ｂ）に等しい部位にメトキシ置換基を有する類似体を評価した。さらに、３，４−メチレンジオキシ置換類似体（２ｃ、７ｃ、８ｃ、９ｃ、１０ｃ）をまた合成し、それらの薬理学的活性を評価した。これらのコラリン類似体の３，４−位におけるメチレンジオキシ基は、トポイソメラーゼの毒物としてのそれらの効力に関連する共通の因子であるように見える。メチレンジオキシ誘導体、２ｃ、７ｃ、８ｃ、および１０ｃはコラリンのそれに匹敵する顕著な活性を保持したばかりでなく、かつまたトポイソメラ −ゼＩＩの毒物として顕著な活性を有した。トポイソメラーゼＩ毒作用の分子のメカニズムがトポイソメラーゼＩＩの毒物の原因となるものに関係することを示唆する証拠が存在しないので、これらの類似体について、増強された活性がこれらのトポイソメラーゼの双方について観察されるという観察は予測されてなかった。しかしながら、置換のパターンおよび置換基におけるこの変更がこれらの分子を、効力のあるトポイソメラーゼＩおよびＩＩの毒物、ニチジン、上のアルコキシの置換パターンに、いっそう密接に類似させるという事実にかんがみて、これらの結果は首尾一貫している。トポイソメラーゼの毒物として１系列のコラリン類似体の相対効力の評価において、種々のコラリン誘導体のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性について報告された構造−活性の関係に比較したとき、作用の有利である構造的要件において、また、いくつかの差が認められた。この系列の化合物（８ｃ）における最良のトポイソメラーゼＩの毒物は８−アルキル置換基を欠如し、これはマウスにおける抗腫瘍活性についての構造−活性の研究と一致しないことに注目してみることは特に興味深いことである。８ｃ（０．27μＭ、０．１μｇ／ｍｌ）およびカンブトテシン（０．２９μＭ、０．１μｇ／ｍｌ）についてほとんど等しい濃度で見出されるトポイソメラーゼＩの存在において観察されたＤＮＡの完全な切断により、８ｃの潜在的活性は明らかである。さらに、８ｃの５，６−位が飽和されているために、８ｃはそうでなければ平らな分子の中にキンクを有する。マウスにおけるコラリン誘導体の抗腫瘍活性についての以前の研究において、この位置における不飽和の存在は活性の減少に関係づけられた。平らであるおよび／または８−メチル置換基を有する、すべての他の同様な置換分子２Ｃ、７Ｃ、および１０ｃは、トポイソメラーゼＩの毒物として、８ｃに比較して１０倍低い活性を有する。８ｃの位置異性体であるベルベリンは、同一条件下にトポイソメラーゼＩの毒物としてアッセイしたとき、不活性である。化合物２ｂ、７ｂ、８ｂ、および１０ｂは、トポイソメラーゼＩの毒物として有意な活性を示さなかった。したがって、３，４−メチレンジオキシ置換基に関して、これらのコラリン類似体の３，４−位におけるジメトキシ置換基はトポイソメラーゼＩの毒物としてそれらの効力を劇的に変更した。８ｃはトポイソメラーゼＩＩの毒物として適度の活性を示したか、２ｃおよび１０ｃを包含する、これらの類似体のいくつかは、トポイソメラーゼＩＩの毒物として効力のある活性を示した（表１）。１０ａを除外した、２，３−ジメトキシコラリン誘導体のすべては、トポイソメラーゼＩＩの毒物として有意な活性をもたない選択的トポイソメラーゼＩの毒物である。２ａ、７ａ、および８ａを使用して観測された結果と対照的に、化合物１０ａはトポイソメラーゼＩの毒物として不活性であり、トポイソメラーゼ１１に対して有意な活性を示した。トポイソメラーゼの毒物として１０ａおよび他の２，３−ジメトキシコラリン誘導体の能力に関連する活性のこの例外的な差についての基礎は、この時において不明瞭である。構造的剛性は、この系列の化合物内のトポイソメラーゼの毒物としての活性の保持のために決定的な要件であろう。化合物９ａ、９ｂおよび９ｃは、８−位における炭素ならびに第四級アンモニウム基に関連するカチオン電荷を欠如するコラリンの開環類似体と見なすことができる。これらの類似体のすべての３つは、トポイソメラーゼＩまたはトポイソメラーゼ１１の毒物として非常に弱い活性を示した。１−メチル−３−フェニルイソキノリン誘導体１２ａおよび１２ｂおよびそれらのＮ−メチル化第四級化類似体１４ａおよひ１４ｂはコラリンのＣ₅ −Ｃ₆ 部分を欠如する開環類似体と見なすことかでき、有意なトポイソメラーゼ毒作用活性を示さなかった。また、それぞれ、化合物１２ａ／１２ｂおよび１４ａ／１４ｂのポリフェノール系類似体である化合物１３および１５は、トポイソメラーゼＩまたはＩＩの毒物として比較的無効であった。ヒトリンパ芽球細胞系統、ＲＰＭＩ８４０２に対するコラリンおよびこれらの類似体の細胞障害性を表１に要約する。ＭＴＡアッセイを使用して測定した細胞障害性と、トポイソメラーゼＩまたはＩＩの毒物としての効力との間において、明瞭な相関は観察されなかった。カンプトテシンと対照的に、これらの誘導体はカチオン第四アンモニウム化合物として存在する。トポイソメラーゼＩを阻害するこれらの誘導体のいくつかの固有の活性に基づいて、コラリンの構造的に剛性の類似体の構造に関連する第四級アンモニウム官能価は細胞の吸収を制限しかつそれらの細胞障害活性を減衰する主要な因子であうる可能性が存在する。コラリンおよびベルベリンの融合した平らなカチオン性芳香族環系は、ＤＮＡを挿入することか示された。さらに、コラリンはＤＮＡ三重らせんに結合することが示された。これらのプロセスがトポイソメラーゼの毒作用およびこれらの分子の相互作用におけるカチオン部分の役割に関係づけられる程度は、完全には確立されてない。この研究において合成されかつ細胞障害性について評価され、トポイソメラーゼ毒作用として不活性であった類似体のいくつかは、有意な細胞障害性を示した。詳しくは、化合物９ｃ、１３、ｌ４ｂおよび１５はＲＰＭＩ８４０２細胞に対して明らかな細胞障害性を有した。これらの場合において、それらの細胞障害性に関連する特定の薬理学的ターゲットは未知である。また、トポイソメラーゼＩの突然変異の形態を含有するカンプトテシン耐性細胞系統、ＣＰＴ−Ｋ５、において、これらの化合物の細胞障害活性を評価した。この研究においていっそう効力のあるトポイソメラーゼＩの毒物（２ａ、２ｃ、７ａ、７ｃ、８ａ、８ｃ、１０ｃ）の細胞障害性にかんがみて、ＲＰＭＩ８４０２細胞のそれらに比較してＣＰＴ−Ｋ５細胞について得られたＩＣ₅₀ 値の間に差が存在した。これらのコラリン誘導体の細胞障害性に関連する薬理学的ターゲットがトポイソメラーゼＩの毒物としてのそれらの活性に関係するという指示として、これらのデータを見ることかできた。しかしながら、トポイソメラーゼＩの毒物として不活性である類似体について認めるすることができる同様な差にかんかみて、この差をＣＰＴ−Ｋ５における特別にトポイソメラーゼＩの突然変異の形態に対する作用に帰属させることができない。また、評価した化合物についてのこれらの細胞系統の間の細胞障害性の差はカンプトテシンに関して小さいことは明らかである。この研究において、コラリン類似体の間の小さい構造的変動は、トポイソメラーゼＩまたはトポイソメラーゼＩＩの毒物として、それらの活性に深遠な衝撃を有することがあることが証明された。３，４−位にメチレンジオキシ置換基が存在する場合、コラリン類似体はトポイソメラーゼＩおよびＩＩの双方の毒物として増強した活性を示した。これらの結果は、トポイソメラーゼＩＩとしてのニチジンの効力のある活性およびこれらのコラリン誘導体に対するニチジンの空間的関係と一致する。この研究において、トポイソメラーゼＩＩの毒物として活性をほとんどもたないトポイソメラーゼＩの毒物として効力のある活性を有するコラリン類似体は、２，３−位にメトキシ置換基を有した。これらのデータか示唆するように、ニチジンの同様に置換された類似体、すなわち、２，３−メチレンジオキシ置換基と反対に１，２−ジメトキシ誘導体は、哺乳動物のトポイソメラーゼＩまたはＩＩを阻害するそのポテンシャルに関して同様な選択性を示すことができた。また、化合物７ｃをグリア芽細胞腫細胞系統ＳＦ−２６８に対して試験した。これらの結果を表２に表す。このような腫瘍細胞に対する類似体の有効性および選択性は、活性な輸送が起こっているであろうことを示唆する。髄腔内注射による本発明の類似体の投与は、全身的毒性をわずかにしてＣＮＳ腫瘍に対する選択的細胞障害性を達成する手段を提供する。本明細書において記載する生物学的に活性な化合物の薬学上許容される塩は、特許請求する方法において同様に使用することができる。有機または無機の塩基、ＮａＯＨ、Ｎａ（ＣＯ₃ ）₂ 、ＮａＨＣＯ₃ 、ＫＯＨおよびその他、ならびに酸、例えば、塩酸およびスルホ酢酸およびその他を使用して、薬学上許容される塩を形成することができる。本明細書において記載する化合物および／またはそれらの塩は純粋な化学物質として投与することかできるか、医薬組成物として活性成分を提供することが好ましい。したがって、本発明は、さらに、１種または２種以上の化合物および／またはそれらの薬学上許容される塩と、１種または２種以上の薬学上許容される担体と、必要に応じて、他の治療成分および／または予防成分とを含んでなる医薬組成物の使用を提供する。１種または２種以上の担体は、医薬組成物の他の成分と適合性でありかつそれらの受容体に対して有害ではないという意味において「許容され」なくてはならない。医薬組成物は、経口的または非経口的（筋肉内、皮下および静脈内を包含する）投与に適当であるものを包含する。組成物は、適当ならば、個々の単位投与形態で好都合に提供することができ、そして薬学分野においてよく知られている任意の方法により製造することができる。このような方法は、活性化合物を液状担体、固体状基質、半固体状担体、微細固体状担体またはそれらの組合わせと一緒にし、次いで、必要に応じて、生成物を所望の送出し系に造形する工程を包含する。経口投与に適当な医薬組成物は、各々が前もって決定した量の活性成分を含有する、個々の単位投与形態、例えば、硬質または軟質のゼラチンカプセル、カシェ剤または錠剤として；粉剤としてまたは粒剤として；溶液、懸濁液として、または乳濁液として提供することができる。また、活性成分はボーラス、舐剤またはペーストとして提供することができる。経口投与のための錠剤またはカプセル剤は慣用の賦形剤、例えば、結合剤、充填剤、滑剤、崩壊剤、または湿潤剤を含有することができる。錠剤をこの分野においてよく知られている方法に従い、例えば、腸溶コーティングにより被覆することができる。経口液状製剤は、例えば、水性または油性の懸濁液、溶液、乳濁液、シロップ剤またはエリキシル剤の形態であるか、あるいは使用前に水または他の適当なベヒクルで構成するための乾燥生成物として提供することができる。このような液状製剤は慣用の添加剤、例えば、懸濁剤、乳化剤、非水性ベヒクル（これは食用油を包含する）、または保存剤を含有することかできる。また、化合物は非経口投与（例えば、注射、例えば、ボーラス注射または連続的注入による）のために処方することができ、そして単位投与形態においてアンプル、前もって充填した注射器、小さいボーラス注入容器または保存剤を添加した多数回投与の容器で提供することができる。組成物は、油性または水性のベヒクル中の懸濁液、溶液、または乳濁液のような形態を取ることができ、そして処方剤、例えば、懸濁剤、安定剤および／または分散剤を含有することができる。また、活性成分は、無菌の固体の無菌的単離によるか、あるいは、使用前に、適当なベヒクル、例えば、無菌の、無発熱物質の水で構成するために、溶液から凍結乾燥により得られた、粉末の形態であることができる。表皮への局所投与のために、化合物は軟膏、クリームまたはローションとして処方するか、あるいは経皮パッチの活性成分として処方することができる。適当な経皮送達系は、例えば、Ｆｉｓｈｅｒ他（米国特許第４，７８８，６０３号）またはＢａｗａｓ他（米国特許第４，９３１，２７９号、第４，６６８，５０４号および第４，７１３，２２４号）に開示されている。軟膏およびクリームは、例えば、水性または油性の基剤を使用して、適当な増粘剤またはゲル化剤を添加して処方することができる。ローションは水性または油性の基剤を使用して処方することかできそして、一般に、また、１種または２種以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、または着色剤を含有するであろう。また、活性成分はイオン導入法により、例えば、米国特許第４，１４０，１２２号、第４，３８３，５２９号、または第４，０５１，８４２号に開示されているように、送達することができる。口の中への局所投与に適当な組成物は、単位投与形態、例えば、香味剤添加した基剤、例えば、スクロースおよびアカシアゴムまたはトラガカント中の活性成分を含んでなるロゼンジ；不活性基剤、例えば、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアゴム中の活性成分を含んでなるトローチ；粘液付着性ゲル、および適当な液状担体中の活性成分を含んでなるうがい薬を包含する。必要に応じて、前述の組成物は、使用する活性成分の持続放出を提供するように、例えば、活性成分をある種の親水性ポリマーの基質、例えば、天然のゲル、合成ポリマーのゲルまたはそれらの混合物を含んでなる基質と組合わせることによって持続放出を提供するように適合させることができる。本発明による医薬組成物は、また、他のアジュバント、例えば、香味剤、着色剤、抗菌剤、または保存剤を含有することかできる。さらに、治療に要求される化合物、それらの塩または誘導体の量は選択した特定の塩とともに変化するばかりでなく、かつまた投与のルート、治療する症状の特質および患者の年令および症状とともに変化し、そして究極的に主治医または臨床医の判断に従うであろうことを当業者は理解するであろう。しかしながら、一般に、適当な投与量は、約０．５〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、例えば、約１０〜約７５ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲、例えば、３〜約５０ｍｇ／ｋｇ受容体体重／日、好ましくは６〜約９０ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは１５〜約６０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であろう。化合物は好都合には単位投与形態、例えば、５〜１０００ｍｇ、好都合には１０〜７５０ｍｇ、最も好都合には５０〜５００ｍｇの活性成分／単位投与形態を含有する単位投与形態で投与される。理想的には、活性成分は約０．５〜約７５μＭ、好ましくは約１〜約５０μＭ、最も好ましくは約２〜約３０μＭの活性化合物のピーク血漿濃度を達成するように投与すべきである。これは、例えば、必要に応じて生理食塩水中の、活性成分の０．０５〜５％の溶液の静脈内注射により達成することができるか、あるいは約１〜１００ｍｇの活性成分を含有するボーラスとして経口的に投与することができる。望ましい血液レベルは連続的注入により約０．０１〜５．０ｍｇ／ｋｇ／時を提供するか、あるいは約０．４〜１５ｍｇ／ｋｇの１種または２種以上の活性成分を含有する間欠的注入により維持することができる。望ましい投与量は単一の投与量において、あるいは適当な間隔、例えば、２、３、４またはそれより多い回数／日において投与される分割投与量で提供することができる。細分投与量それ自体をさらに分割することができ、例えば、多数の個々のゆるく間隔を置いた投与、例えば、注入器からの多数回の吸入に分割することができるか、あるいは眼の中への複数の点滴剤の適用により分割することができる。種々の特定の、好ましい態様または技術を参照して、本発明を説明した。しかしながら、本発明の精神および範囲から逸脱しないで多数の変化および変更が可能であることを理解すべきである。下記の実施例により、本発明を例示する。これらの実施例は本発明を限定しない。実施例実施例Ｉ−一般的トマス−フーバー・ユニメルト（Ｔｈｏｍａｓ−ＨｏｏｖｅｒＵｎｉｍｅｌｔ）毛管融点装置を使用して、融点を測定した。パーキン・エルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）１６００フーリエ変換分光計を使用して、赤外スペクトルのデータ（ＩＲ）を得、cm^-1で報告する。プロトン（¹ ＨＮＭＲ）および炭素（¹³ ＣＮＭＲ）核磁気共鳴を、それぞれ、２００ＭＨｚおよび５０ＭＨｚにおいて、バリアン・ゲミニ（Ｖａｒｉａｎ−Ｇｅｍｉｎｉ）−２００フーリエ変換分光計で記録した。ＮＭＲスペクトルをＣＤＣｌ₃ 中で記録し（特記しない限り）化学シフトをテトラメチルシラン（ＴＭＳ）からのダウンフィールドのδ単位で報告する。結合定数をヘルツで報告する。生物医学および生物有機質量分析についてのワシントン大学源（ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＲｅｓｏｕｒｃｅｆｏｒＢｉｏｍｅｄｉｃａｌａｎｄＢｉｏ−ＯｒｇａｎｉｃＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）から、質量スペクトルを得た。カラムクロマトグラフィーは、示された溶媒合系を使用してＳｉｌｉＴｅｃｈ３２ −６３μｍ（ＩＣＮＢｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、ドイツ国エシュウェッゲ）で実施したフラッシュクロマトグラフィーを意味する。燃焼分析をアトランティック・マイクロラブス・インコーポレーテッド（ＡｔｌａｎｔｉｃＭｉｃｒｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．、ジョージア州ノークロス）により実施した。実施例ＩＩ−８−メチルジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート（２ａ−ｃ）の合成の一般的手順発煙（２０％）硫酸（１ｍｌ）を４ｍｌの新しく蒸留した無水酢酸に添加して、激しく発熱性の反応を発生させ、混合物はワイン・レッドの色となった。この混合物を８５〜９０℃に１０分間加熱した。次いで１−ベンジルイソキノリンの溶液（９ａ−ｃ）１ｍｌの新しく蒸留した無水酢酸中の２．３５ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下にワイン・レッドの硫酸溶液に添加し、生ずる混合物を８５〜９０℃ に３０〜６０分間加熱した。次いで反応混合物を室温に冷却し、５ｍｌのメタノールを滴下し、３０分間撹拌した。次いで混合物を氷浴中で冷却し、さらに３０分間撹拌した。得られた固体状生成物を濾過し、連続的に２回２ｍｌの蒸留水で、２回２ｍｌのメタノールで、２回１０ｍｌの水で洗浄した。次いで粗生成物を熱メタノールから再結晶化させて、所望生成物が黄色結晶質物質として９０〜９５％の収率で得られた。８−メチル−２，３，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート（２ａ）：９ａから製造した；融点２８０℃；ＩＲ１７３５；₁ ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ３．２８（ｓ，３Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、４．０３（ｓ，３Ｈ)、４．０９（ｓ，６Ｈ）、７．４２（ｓ，１Ｈ）、７．５３（ｓ，１Ｈ）、７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０）、７．９８（ｓ，１Ｈ）、８．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０）、９．２８（ｓ，１Ｈ）；¹³ ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ１７．５、５６．２、５６．６、５７．２、１０４．１、１０５．０、１０７．３、１０８．１、１１６．０、１１９．９、１２０．８、１２１．９、１２３．７、１２４．７、１３３．５、１３４．５、１４５．４、１５１．６、１５２．７、１５２．９、１５６．３；分析、Ｃ₂₄ Ｈ₂₅ ＮＯ₉ Ｓについての計算値：Ｃ，５７．２５、Ｈ，５．００、Ｎ，２．７８；実測値：Ｃ，５７．０７、Ｈ，５．１７、Ｎ，２．７２。８−メチル−３，４，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート（２ｂ）：９ｂから製造した；融点２６７−２６９ ℃分解（文献¹⁴融点２６７−２６９℃分解）；ＩＲ（ヌジョール）２７６２、１７０２、１６４２、１５９５、１５４６；¹ ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ３．４０（ｓ，３Ｈ）、３．４３（ｓ，３Ｈ）、４．００（ｓ，３Ｈ）、４．０９（ｓ，３Ｈ）、４．１３（ｓ，６Ｈ）、７．７７（ｓ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１)、８．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１）、８．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０）、８．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０）、９．６７（ｓ，１Ｈ）；¹³ ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ１７．７、５６．８、５６．９、５７．３、６１．６、１０４．９、１０５．５、１１５．１、１１６．３、１１７．ｌ）１１９．５、１２１．３、１２２．３、１２２．９、１２６．９、１３４．５、１３５．５、１４７．２、１５３．１、１５３．７、１５６．９：分析、Ｃ₂₄ H₂₅ NＯ₉ Ｓについての計算値：Ｃ，５７．２４、Ｈ，５．００、Ｎ，２．７８；実測値：Ｃ，５７．０８、Ｈ，５．３５、Ｎ，２．７５。８−メチル−３，４−メチレンジオキシ−１０，１１−ジメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート（２ｃ）：９ｃから製造した；融点＞２７０℃分解；ＩＲ（ヌジョール）３４１７、１７２７、１６４８、１６１５、１５５１；¹ ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ３．４１（ｓ，３Ｈ）、４．１３（ｓ，３Ｈ）、６．４６（ｓ，２Ｈ）、７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７）、７．７６（ｓ，１Ｈ）、７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０）、7.８９（ｓ，１Ｈ）、８．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７）、８．８４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０）、９．６４（ｓ，１Ｈ）：分析、Ｃ₂₃ Ｈ₂₁ ＮＯ₉ Ｓ・２．２５Ｈ₂ Ｏについての計算値：Ｃ，５２．３２、Ｈ，４．４４、Ｎ，２．６５；実測値：Ｃ，５２．２１、Ｈ，４．２４、Ｎ，２．６８。ＨＲＭＳ、Ｃ₂₁ Ｈ₁₈ ＮＯ₄ についての計算値：３８４．１２３６；実測値：３４８．１２３７。実施例ＩＩＩ−フェニルアセトアミド（５ａ−ｃ）の合成の一般的手順クロロホルム（６ｍｌ）中の３，４−ジメトキシフェニルアセチルクロライド（４ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素雰囲気下に、適当に置換されたフェネチルアミン（４ｍｍｏｌ）、クロロホルム（６ｍｌ）、および２Ｍの炭酸ナトリウム（３ｍｌ）の混合物に０℃において激しく撹拌しながら滴下した。反応が完結するまで（１〜３時間）撹拌を０℃において続けた。追加の２ｍｌのクロロホルムおよび２ｍｌの水を使用して、反応混合物を分液漏斗に移した。有機相を分離し、水相を５ｍｌのクロロホルムで抽出した。一緒にしたクロロホルム抽出液を連続的に５ｍｌの０．１ＮＮａＯＨ、５ｍｌの０．１ＮＨＣ１および５ｍｌの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。クロロホルム抽出液を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。粗生成物をメタノールから結晶化させると、純粋なアミドが白色針状結晶として９５〜１００％の収率で得られた。Ｎ−（３，４−ジメトキシフェニルエチル）−２−（３，４−ジメトキシフェニル）アセトアミド（５ａ）：３，４−ジメトキシフェニルエチルアミンおよび３，４−ジメトキシフェニルアセチルクロライドから製造した；融点１２５℃(文献¹⁷融点１２３−１２５℃）；ＩＲ（ＫＢｒ）３３２７、３０６４、３００７、２９１６、２８４０、１６４２、１６０８、１５９１；¹ ＨＮＭＲδ２．６７（ｔ，２Ｈ）、３．４０−３．４７（ｍ，４Ｈ）、３．８３（ｓ，６Ｈ）、３．８６（ｓ，３Ｈ）、３．８８（ｓ，３Ｈ）、５．３０（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．５２−６．８６（ｍ，６Ｈ）；¹³ ＣＮＭＲδ３５．６、４１．２、４３．５、５６．３、５６．４、１１１．７、１１２．２、１１５．８、１２１．１、１２７．５、１２７．９、１２８．５、１２９．１、１３１．１、１３１．６、１３７．３、１４８．１、１４９．５、１５８．５、１７１．８。Ｎ−（２，３−ジメトキシフェニルエチル）−２−（３，４−ジメトキシフェニル）アセトアミド（５ｂ）：２，３−ジメトキシフェニルエチルアミン（Ｌｉｎｄｅｍａｎｎ、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ）１９４９、３２、ｐ．６９− ７５）および３，４−ジメトキシフェニルアセチルクロライドから製造した；融点８０℃（文献²⁹融点７９−８０℃）；ＩＲ３３１５、２９６２、２８３８、１６３６、１５９３、１５４８；¹ ＨＮＭＲδ２．６１（ｔ，２Ｈ）、３．２２ −３．３０（ｍ，４Ｈ)、３．５８（ｓ，３Ｈ）、３．６４（ｓ，６Ｈ）、３．６７（ｓ，３Ｈ）、６．２２（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．４４−６．７９（ｍ，６Ｈ）；¹³ ＣＮＭＲδ３０．０、４１．０、４３．７、５５．９、５６．２、５６．３、６０．９、１１２．２、１１１．９、１１２．９、１２２．０、１２２．６、１２４．４、１２７．９、１３３．１、１４７．５、１４８．５、１４９．５、１５３．１、１７１．９。Ｎ−（２，３−メチレンジオキシフェニルエチル）−２−（３，４−ジメトキシフェニル）アセトアミド（５ｃ）：２，３−メチレンジオキシフェニルエチルアミン²⁸よび３，４−ジメトキシフェニルアセチルクロライドから製造した；融点１２４℃；ＩＲ（ＫＢｒ）３２９７、３０８４、２９３５、１６４３、１４５８；¹ ＨＮＭＲδ２．６６（ｔ，２Ｈ）、３．３６−３．４２（ｍ，４Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、３．７９（ｓ，３Ｈ）、５．７３（ｓ，２Ｈ）、５．８１（ｂｒｓ，１Ｈ）、６．６１−６．７６（ｍ，６Ｈ）；¹³ ＣＮＭＲδ２９．８、３９．７、４３．８、５６．４、１０１．０）１０７．５、１１１．９、１１２．９、１２０．７、１２２．０）１２２．１、１２３．３、１２７．７、１４６．０）１４７．５、１４８．７、１４９．６、１７１．８；分析、Ｃ₁₉ Ｈ₂₁ ＮＯ₅ についての計算値：Ｃ，６６．４６、Ｈ，６．１６、Ｎ，４．０８；実測値：Ｃ，６６．３ＬＨ，６．１６、Ｎ，４．０７。実施例ＩＶ− ジヒドロイソキノリン（６ａ−ｃ）の合成の一般的手順アセトアミド（５ａ−ｃ、２．４７ｍｍｏｌ）をオキシ塩化リン（５．６９ｍｍｏｌ）および乾燥トルエン（１０ｍｌ）と、窒素雰囲気下に２０〜６０分間、還流させた。次いで溶媒を注意して蒸発させ、残留物を約５ｍｌのメタノール中に溶解した。この溶液を約１０〜１５ｍｌの冷水中に注いだ。１０ｍｌのエーテルで２回洗浄した後、１０ｇの氷を水性層に添加した。窒素を氷冷水性層を通して泡立てて入れ、ｐＨを濃水酸化アンモニウムでｐＨ１０に調節した。次いで水性層を塩化ナトリウムで飽和させ、２０ｍｌのエーテルで５回抽出した。一緒にしたエーテル抽出液を無水塩化カリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させると、ジヒドロイソキノリン、６ａ−ｃ、が得られた。これらの化合物は容易に酸化するので、空気への暴露を回避した。ジヒドロイソキノリンをそれ以上精製しないで７ａ−ｃ、８ａ−ｃ、および９ａ−ｃの製造に使用した。実施例Ｖ−５，６−ジヒドロ−８−メチルジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート（７ａ−ｃ）の合成の一般的手順各ジヒドロイソキノリン（６ａ−ｃ、２．３５ｍｍｏ１）をｌ．０ｍｌの新しく蒸留した無水酢酸中に溶解した。８−メチルジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート（２ａ−ｃ）の合成に使用した手順に類似する手順を用いた。前の手順において用いた対応する１−ベンジルイソキノリン中間体の存在下に、それぞれのジヒドロイソキノリン中間体を使用した。得られた生成物を沸騰するメタノールから結晶化させると、輝いた黄色の結晶質生成物が８５〜９０％の収率で得られた。５，６−ジヒドロ−８−メチル−２，３，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート（７ａ）：６ａから製造した；融点２７８−２７９℃(文献１３２７７−２７９℃)；ＩＲ（ＫＢｒ）３４５０、２９４６、１７２５、１６１１、１５６７；¹ ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ ３．１８（ｔ，２Ｈ）、３．２３（ｓ，３Ｈ）、３．４０（ｓ，３Ｈ）、３．８９（ｓ，３Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、４．０８（ｓ，６Ｈ）、４．７５（ｔ，２Ｈ）、７．１３（ｓ，１Ｈ）、７．６３（ｓ，２Ｈ）、７．８０（ｓ，１Ｈ）、８．７４（ｓ，１Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ１７．８、２６．２、４９．８、５６．ｌ、５６．３、５６．８、５７．３、１０６．２、１０６．４、１０９．１、１１０．９、１１７．５、１２０．０）１２２．２、１２８．６、１３５．６、１３９．０、１４８．９、１５１．６、１５２．２、１５５．４、１５６．９、１６７．５。５，６−ジヒドロ−８−メチル−３，４，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート（７ｂ）：６ｂから製造した；融点２５５−２５６℃；ＩＲ（ＫＢｒ）３４３２、２９４６、１７２３、１６０９、１５６７、１５０２、１４２９；¹ ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ３．２０（ｔ，２Ｈ）、３．２２（ｓ，３Ｈ）、３．８２（ｓ，３Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、４．０７（ｓ，６Ｈ）、４．７４（ｔ，２Ｈ）、７．２６（ｄ，ＩＨ，Ｊ＝８．９)、７．６７（ｓ，ＩＨ）、７．７８（ｓ，１Ｈ）、７．８７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９）、８．６７（ｓ，１Ｈ）；¹³ ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ１７．７、２１．０、４９．４、５６．３、５６．８、５７．３、５６．８、５７．３、６０．７、１０６．３、１１２．７、１１７．６、１２１．３、１２２．３、１２２．９、１２８．９、１３５．５、１３８．９、１４４．７、１５２．３、１５４．６、１５５．３、１５６．９、１６７．６；分析、Ｃ₂₄Ｈ₂₇ＮＯ₉Ｓ・１．２５Ｈ₂ Ｏについての計算値：Ｃ，５４．５９、Ｈ，５．６３、Ｎ，２．６５；実測値：Ｃ，５４．５９、Ｈ，５．６０、Ｎ，２．６７；ＨＲＭＳ，．Ｃ₂₂Ｈ₂₄ＮＯ₄ についての計算値：３６６．１７０５；実測値：３６６．１７０６。５，６−ジヒドロ−８−メチル−３，４−メチレンジオキシ−１０，１１−ジメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート（７ｃ）：６ｃから製造した；融点＞２７０℃；ＩＲ（ＫＢｒ）３４３４、２９２０、１７２４、１６１７；¹ ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ３．１６（ｔ，２Ｈ）、３．２３（ｓ，３Ｈ）、３．４０（ｓ，３Ｈ）、４．０８（ｓ，６Ｈ）、４．７６（ｔ，２Ｈ）、６．２３（ｓ，２Ｈ）、７．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０）、７．６７（ｓ，１Ｈ）、７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０）、７．８１（ｓ，１Ｈ）、８．６９（ｓ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ１７．９、２０．８、４９．２、５６．８、５７．３、１０２．７、１０６．３、１０６．５、１０８．５、１１６．２、１１８．１、１２１．２、１２２．４、１２２．７、１３５．５、１３９．０、１４４．２、１４９．６、１５２．４、１５５．６、１５７．０、１６７．６；分析、Ｃ₂₃Ｈ₂₃ＮＯ₉ Ｓ−Ｈ₂ Ｏについての計算値：Ｃ，５４．４３、Ｈ，４．９６、Ｎ，２．７６；実測値：Ｃ，５４．３９、Ｈ，４．９６、Ｎ，２．７４；ＨＲＭＳＮＣ_2lＨ₂₀ＮＯ₄ についての計算値：３５０．１３９２；実測値：３５０．１３８４。実施例ＶＩ−５，６−ジヒドロジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド（８ａ−ｃ）の合成の一般的手順冷却した（０℃）ジメチルホルムアミドにオキシ塩化リン（７．４２ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下に添加した。この混合物を０℃において１５分間撹拌した。次いで５．５ｍｌのジメチルホルムアミド中のそれぞれのジヒドロイソキノリン（２．７ｍｍｏｌ）溶液を添加し、０℃において１〜２時間撹拌した。次いで反応混合物を１００℃において１〜２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、２０gの氷および１０ｍｌの６ＮＨＣｌを含有する混合物中に注いだ。生ずる沈澱を濾過し、連続的に５ｍｌの冷水で２回、１０ｍｌのエーテルで２回洗浄した。各場合における最終生成物をメタノールから再結晶化した。５，６−ジヒドロ−２，３，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド（８ａ）：６ａから製造した；融点２６１−２６２℃ ；ＩＲ（ヌジョール）１６６４、１６６０、１５６４；¹ ＨＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ３．３５（ｔ，３Ｈ）、３．９１（ｓ，３Ｈ）、４．０２（ｓ，３Ｈ）、４．１０（ｓ，３Ｈ）、４．１７（ｓ，３Ｈ）、５．０４（ｔ，２Ｈ）、７．１０（ｓ，１Ｈ）、７．７８（ｓ，１Ｈ）、８．６０（ｓ，１Ｈ）、９．６４（ｓ，１Ｈ）、１０．１２（ｓ，１Ｈ）；¹³ ＣＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ２８．１、５６．４、５６．７、５６．９、５７．３、５７．８、１０４．４、１０６．６、１０７．５、１０８．１、１０８．２、１０９．０）１１０．２、１１２．４、１１２．５、１１２．８、１１５．４、１１７．７、１１９．６、１３０．４、１４６．５；分析、Ｃ₂₁Ｈ₂₂ＮＯ₄ Ｃ１・０．７５Ｈ₂ Ｏについての計算値：Ｃ，６２．８４、Ｈ，５．９０、Ｎ，３．４９；実測値：Ｃ，６２．７９、Ｈ，５．８４、Ｎ，３．４６；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₁Ｈ₂₂ＮＯ₄ についての計算値：３５２．１５４９：実測値：３５２．１５４９。５，６−ジヒドロ−３，４，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド（８ｂ）：６ｂから製造した；融点２５２℃；ＩＲ（ヌジョール）３３８３、１６３２、１６００、１５７１；¹ ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ３．２７（ｔ，２Ｈ）、３．８１（ｓ，３Ｈ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）、４．０１（ｓ，３Ｈ）、４．０８（ｓ，３Ｈ）、４．８０（ｔ，２Ｈ）、７．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９）、７．６８（ｓ，１Ｈ）、７．７３（ｓ，１Ｈ）、７．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９）、８．８２（ｓ，１Ｈ）、９．６０（ｓ，１Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ２０．９、５４．４、５６．３、５６．６、５６．９、６０．６、１０５．７、１０６．７、１１２．７、１１８．４、１２０．４、１２２．４、１２２．６、１２９．１、１３６．８、１３８．５、１４５．２、１４５．７、１５２．５、１５４．９、１５７．６；分析、Ｃ₂₁H₂₂ＮＯ₄ Ｃｌ・１．５Ｈ₂ Ｏについての計算値：Ｃ，６０．７９、Ｈ，５．７１、Ｎ，３．３８；実測値：Ｃ，６０．７９、Ｈ，５．７１、Ｎ，３．３８；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₀Ｈ₁₈ＮＯ₄ についての計算値：３３６．１２３６；実測値：３３６．１２４４。５，６−ジヒドロ−３，４−メチレンジオキシ−１０，１１−ジメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド（８ｃ）：６ｃから製造した；融点＞２８０℃；ＩＲ（ヌジョール）２７２５、１６２２、１５７４；¹ ＨＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ３．２７（ｔ，２Ｈ）、４．０７（ｓ，３Ｈ）、４．１３（ｓ，３Ｈ）、４．６２（ｔ，２Ｈ）、６．１６（ｓ，２Ｈ）、７．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４）、７．６０（ｓ，１Ｈ）、７．６３（ｓ，１Ｈ）、７．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４）、８．６０（ｓ，１Ｈ）、９．３４（ｓ，１Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ２２．２、５６．０、５７．３、５７．７、１０４．３、１０６．６、１０７．５、１０９．６、１１７．３、１２０．１、１２２．３、１２２．９、１２４．６、１３９．２、１４６．５、１４６．６、１５２．０、１５５．０、１６０．３；分析、Ｃ₂₀Ｈ₁₈ＮＯ₄ Ｃ１・２Ｈ₂ Ｏについての計算値：Ｃ，５８．８９、Ｈ，５．４３、Ｎ，３．４３；実測値：Ｃ，５８．７４、Ｈ，５．３９、Ｎ，３．４５；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₀Ｈ₁₈ＮＯ₄についての計算値：３３６．１２３６：実測値：３３６．１２４４。実施例ＶＩＩ−１−べンジルイソキノリン（９ａ−ｃ）の合成の一般的手順適当なジヒドロイソキノリン（３．４ｍｍｏｌ）を２２０〜２３０℃において０．３ｇの１０％炭素担持パラジウムとともに５ｍｌのテトラリン（使用前に窒素で２０分間パージした）中で３〜４時間還流させた。次いで反応混合物を１８０℃に冷却し、窒素雰囲気下にシュレンク（Ｓｃｈｌｅｎｋ）型濾過ユニット（ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．）を使用して濾過した。室温に冷却した後、濾液を０℃に冷却し、塩化水素（１．０Ｍ、無水エーテル中）を添加して、混合物のｐＨをｐＨ１．０に調節した。１−ベンジルイソキノリンの塩酸塩が沈澱した。この沈澱を濾過し、１０ｍｌの無水エーテルで３回洗浄し、乾燥すると、それぞれの１−ベンジルイソキノリン塩酸塩が９０〜１００％の収率で得られた。次いで乾燥した塩酸塩を最小量のメタノール（２〜５ｍｌ）中に溶解し、これに１０ｇの氷を添加した。濃水酸化アンモニウムを氷冷水溶液に添加して、ｐＨを１０に調節した。水性層を塩化ナトリウムで飽和させ、次いで３×１０ｍｌの部分のクロロホルムで抽出した。一緒にしたクロロホルム抽出液を乾燥（Ｎａ₂ ＳＯ₄ ）し、蒸発させると、９ａ−ｃか得られた。５，６−ジメトキシ−１−（３，４−ジメトキシベンジル）イソキノリン塩酸塩（９ｂ）：６ｂから製造した；融点２０６−２０８℃(文献¹⁴２０6−２０８℃ )；ＩＲ（ヌジョール）２６７６、１６３０、１６２５、１５８８；¹ＨＮＭＲ（ＣＤ．ＯＤ）δ３．７６（ｓ，３Ｈ）、３．８１（ｓ，３Ｈ）、４．０３（ｓ，３Ｈ）、４．１５（ｓ，３Ｈ）、４．８７（ｓ，２Ｈ）、６．８６（ｔ，２Ｈ）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、７．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１）、８．３１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．７）、８．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ３８．１、５６．９、５７．１、５８．１、６２．５、１１３．７、１１４．２、１１９．２、１２０．８、１２２．５、１２２．８、１２７．７、１２９．１、１３１．２、１３５．９、１４３．５、１５０．５、１５１．３、１５８．５、１６０．２。５，６−メチレンジオキシ−１−（３，４−ジメトキシベンジル）イソキノリン（９ｃ）：６ｃから製造した；融点１１１℃；ＩＲ（ＫＢｒ）３４２９、３０６４、３００３、２９３０；¹ＨＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ２．９３（ｓ，３Ｈ）、４．０３（ｓ，３Ｈ）、４．０４（ｓ，３Ｈ）、６．０１（ｓ，２Ｈ）、６．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、７．２５（ｓ，１Ｈ）、７．６０（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｓ，１Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）２３．２、５６．５、７６．９、７７．４、７８．２、１０１．６、１０４．４、１０６．０、１０７．８、１０９．９、１１４．１、１２１．０、１２２．５、１３４．０、１３５．２、１４８．１、１４９．２、１５０．１、１５３．１、１５６．２；分析、Ｃ₁₉ Ｈ₁₇Ｏ₄についての計算値：Ｃ，７０．５８、Ｈ，５．３０、Ｎ，４．３３；実測値：Ｃ，７０．８５、Ｈ，５．５１、Ｎ，４．３１。実施例ＶＩＩＩ−ジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド（１０ａ−ｃ）の合成の一般的手順使用する手順は、５，６−ジヒドロジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド、８ａ−ｃ、の合成において使用した手順に類似した。前の手順における対応するジヒドロイソキノリン中間体の代わりに、１−ベンジルイソキノリン中間体を使用した。得られた生成物を氷酢酸および６ＮＨＣＩの１：１混合物から結晶化させると、黄色結晶質生成物として１０ａ−ｃが９２〜９８％の収率で得られた。２，３，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド（１０ａ）：９ａから製造した；融点、ＩＲ、¹ ＨＮＭＲ、¹³ＣＮＭＲは以前に報告された通りであった¹²。３，４，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド（１０ｂ）：９ｂから製造した；融点２２３−２２５℃分解；ＩＲ（ＫＢｒ）３３９４、２９４７、２８４３、１６２６、１５９８、１５６１、１５０３、１４３３；¹ ＨＮＭＲ（同軸管を使用し、９ｂを外側管中のトリフルオロ酢酸中に溶解し、そしてジュウテリウム酸化物を内側管に入れた）δ４．５１（ｓ，３Ｈ）、４．５５（ｓ，６Ｈ）、４．６１（ｓ，３Ｈ）、７．９４（ｓ，１Ｈ）、７．９６（ｓ，１Ｈ）、８．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２）、８．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３）、８．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３）、９．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２）、９．５６（ｓ，１Ｈ）、９．８３（ｓ，１Ｈ）；¹³ ＣＮＭＲ（同軸管を使用し、９ｂを外側管中のトリフルオロ酢酸中に溶解し、そしてジュウテリウム酸化物を内側管に入れた）δ５８．４、５８．８、５９．１、６４．７、１０７．０）１０７．２、１１８．９、１１９．２、１１９．７、１２１．６、１２５．０）１２６．８、１２７．２、１３２．０）１３９．４、１３９．５、１４０．０、１４５．１、１５６．６、１５７．９、１６１．１；分析、Ｃ₂₁Ｈ₂₀ＮＯ₄ Ｃｌ・１．２５Ｈ₂Ｏについての計算値：Ｃ，６１．７６、Ｈ，５．５５、Ｎ，３．４３；実測値：Ｃ，６０．６７、Ｈ，５．３７、Ｎ，３．４３；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₁Ｈ₂₀ＮＯ₄についての計算値：３５０．１３９２；実測値：３５０．１３９２。３，４−メチレンジオキシ−１０，１１−ジメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド（１０ｃ）：９ｃから製造した；融点＞２７０℃分解；ＩＲ（ＫＢｒ）３４１４、３０１５、２９２８、１６２０、１５６４、１４８８：¹ ＨＮＭＲ（同軸管を使用し、化合物を外側管中のトリフルオロ酢酸中に溶解し、そしてジュウテリウム酸化物を内側管に入れた）δ４．５５（ｓ，３Ｈ）、４．６０（ｓ，３Ｈ）、６．６７（ｓ，２Ｈ）、７．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５）、７．９２（ｓ，２Ｈ）、８．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．７）、８．６８（ｔ，２Ｈ）、９．４７（ｓ，１Ｈ）、９．７７（ｓ，１Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（同軸管を使用し、化合物を外側管中のトリフルオロ酢酸中に溶解し、そしてジュウテリウム酸化物を内側管に入れた）δ５８．８、５９．１、１０６．７、１０７．０、１１５．２、１１５．７、１１８．４、１１９．８、１２１．７、１２１．８、１２６．６，１３１．１、１３９．５、１３９．９、１４０．３、１４７．ｌ、１５３．６、１５６．４、１６１．１；分析、Ｃ₂₀Ｈ₁₆ＮＯ₄ Ｃｌ・１．７５Ｈ₂ Ｏについての計算値：Ｃ，５９．８６、Ｈ，４．９０、Ｎ，３．４９；実測値・Ｃ，５９．７２、Ｈ，４．９３、Ｎ，３．４８；ＨＲＭＳ、Ｃ₂₀Ｈ₁₆ＮＯ₄についての計算値：３３４．１０７９；実測値：３３４．１０７５。実施例ＩＸ−３，４，３’，４’−テトラメトキシデソキシベンゾイン（１１ａ）１０ｍｌの新しく蒸留した乾燥ジクロロメタン中の１，２−ジメトキシベンゼン（０．６４ｇ）４．６６ｍｍｏｌ）および３，４−ジメトキシフェニルアセチルクロライド（１．０ｇ、４．６６ｍｍｏｌ）の撹拌した混合物に、粉末状無水塩化アンモニウム（０．７８ｇ）をゆっくり添加した。発熱反応が起こった。混合物を還流しているとき、オレンジ色溶液は褐色になった。反応混合物をさらに２時間加熱還流させ、次いで室温に放冷した。５ｇの砕氷および５．５ｍｌの７．５ＮＨＣｌを含有する混合物の中に、冷却した溶液を注いだ。有機相を分離し、水相を１０ｍｌのジクロロメタンで３回抽出した。一緒にしたジクロロメタン抽出液を乾燥（Ｎａ₂ ＳＯ₄ ）し、濾過し、蒸発させると、白色固体状物か得られ、これをエタノール反応させると、１１ａの純粋な白色針状結晶か９８％の収率で得られた；融点１０５−１０７℃（文献³⁰融点１０４−１０６℃）；¹ ＨＮＭＲδ３．８５（ｓ，６Ｈ）、３．９１（ｓ，３Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、４．１８（ｓ，２Ｈ）、６．８１（ｓ，２Ｈ）、６．９１（ｍ，２Ｈ）、６．９１（ｍ，２Ｈ）、７．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０）、７．６６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４、２．０）；¹³ＣＮＭＲδ４５．２、５６．３、５６．４、５６．５、１１０．４、１１１．１、１１１．８、１１２．８、１２１．３、１２１．９、１２３．９、１２７．９、１３０．２、１４８．４、１４９．５、１５３．８、１９７．０。実施例Ｘ−３，４−ジメトキシ−３’，４’−メチレンジオキシデソキシベンゾイン（１１ｂ）１５ｍｌの新しく蒸留した乾燥ジクロロメタン中の３，４−ジメトキシフェニルアセチルクロライド（３．２５ｇ）１５ｍｍｏｌ）の溶液を、−１０℃の１５ｍｌのジクロロメタン中の１，３−ベンゾジオキソール（１．８３ｇ）１５ｍｍｏｌ）および塩化錫（ＩＶ）（４．６ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に滴下した。次いでこの混合物を室温に上昇させ、さらに２時間撹拌した。次いで反応混合物を２５ｍｌの６ＮＨＣｌ中に注ぎ、１６時間撹拌した。次いで有機相を分離し、水相を２０ｍｌのアリコートのジクロロメタンで３回抽出した。一緒にしたジクロロメタンの抽出液を連続的に２０ｍｌの０．１ＮＮａＯＨおよび２０ｍｌの蒸留水で洗浄した。次いでジクロロメタン抽出液を乾燥（Ｎａ₂ ＳＯ₄ ）し、濾過し、蒸発させると、クリーム色固体状物か得られた。粗生成物をエタノールから結晶化させると、３．０ｇの１１ｂの白色針状結晶が６６％の収率で得られた；融点１１０−１１１℃；ＩＲ（ヌジョール）２７２５、１６７５、１５８９、１５１９；¹ＨＮＭＲδ３．８０（ｓ，３Ｈ）、３．８１（ｓ，３Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、５．９６（ｓ，２Ｈ）、６．７６（ｍ，４Ｈ）、７．４２（ｄ、１Ｈ，Ｊ＝１．５）、７．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４、１．５）；¹³ＣＮＭＲδ４５．３、５６．３、１０２．３、１０８．３、１０８．７、１１１．８、１１２．７、１１２．９、１２１．９、１２５．４、１２７．７、１３１．８、１４８．４、１４８．６、１４９．４、１５２．２、１９６．４；分析、Ｃ₁₇Ｈ₁₆ＮＯ₅についての計算値：Ｃ，６７．９９、Ｈ，５．３７；実測値：Ｃ，６７．９８、Ｈ，５．３２。実施例ＸＩ−１−メチル−３−フェニルイソキノリン（１２ａ、１２ｂ）の合成の一般的手順１０ｍｌのアセトニトリル中のそれぞれのデソキシベンゾインの溶液（１００ｍＭ）に、無水五酸化リン（４ｍｍｏｌ）を３つの部分で添加した。反応混合物を窒素雰囲気下に１８〜２０時間撹拌した。１０ｍｌの水の添加により反応混合物を急冷した。生ずる懸濁液を１０％ＮａＯＨで中和し、３×１０ｍｌの部分のジクロロメタンで３回抽出した。一緒にした有機相を乾燥（Ｎａ₂ ＳＯ₄ ）し、濾過し、蒸発させると、クリーム色残留物が得られた。この残留物をシリカゲルのクロマトグラフィーにかけ、溶離剤として、それぞれ、ジクロロメタンおよび酢酸エチルの９５：５混合物を使用すると、対応する１−メチル−３−フェニルイソキノリン、１２ａおよび１２ｂ、が７５〜８５％の収率で得られた。６，７−ジメトキシ−１−メチル−３−（３，４−ジメトキシフェニル）イソキノリン（１２ａ）：１１ａから製造した；融点１６８−１６９℃（文献³¹１６８−１７０℃）；ＩＲ（ヌジョール）２７２５、１６２１、１５７３、１５０８；¹ ＨＮＭＲδ２．９５（ｓ，３Ｈ）、３．９３（ｓ，３Ｈ）、４．０２（ｓ，９Ｈ）、６．９６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４）、７．０８（ｓ，１Ｈ）、７．２５（ｓ，１Ｈ）、７．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４、２．０）、７．７１（ｓ，２Ｈ）；¹³ＣＮＭＲδ２３．２、５６．４、１０４．３、１０５．９、１１０．４、１１１．７、１１３．９、１１９．５、１２２．４、１３３．６、１３３．９、１４９．２、１４９．６、１４９．７、１５３．１、１５６．２。６，７−ジメトキシ−１−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）イソキノリン（１２ｂ）：１１ｂから製造した；融点１７４℃；ＩＲ（ヌジョール）２７２７、１６２２、１５７３、１５０４；¹ＨＮＭＲδ２．９３（ｓ，３Ｈ）、４．０３（ｓ，３Ｈ）、４．０４（ｓ，３Ｈ）、６．００（ｓ，２Ｈ）、６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８）、７．０７（ｓ，１Ｈ）、７．２５（ｓ，１Ｈ）、７．６０（ｍ，２Ｈ）、７．６７（ｓ，１Ｈ）；¹³ＣＮＭＲδ２３．２、５６．５、１０１．６、１０４．４、１０６．０、１０７．８、１０８．９、１１４．１、１２１．０、１２２．５、１３３．９、１３５．２、１４８．１、１４８．６、１４９．２、１５０．１、１５３．１、１５６．２；分析、Ｃ₁₉ Ｈ₁₇ＮＯ₄ についての計算値：Ｃ，７０．５８、Ｈ，５．３０、Ｎ，４．３３；実測値：Ｃ，７０．５５、Ｈ，５．２８、Ｎ，４．３０。実施例Ｘ１１−６，７ −ジヒドロキシ−１−メチル−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）イソキノリン（１３）化合物１２ａ（２５０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を５ｍｌの乾燥クロロホルム中に溶解し、ドライアイスおよびアセトンの混合物で−５０℃に冷却した。この混合物に、７．４ｍｌのジクロロメタン中の三臭化ホウ素の１．０Ｍ溶液を滴下した。反応混合物を４時間かけて室温にした。沈澱を濾過し、２ｍｌ部分のエーテルで２回洗浄した。この粗生成物をエタノールから再結晶化させると、１３が白色針状結晶として９８％の収率で得られた；融点＞２８０℃分解；ＩＲ（ヌジョール）３３２６、１６０２、１５３１；¹ ＨＮＭＲ（ＣＤ．ＯＤ）δ３．０８（ｓ，３Ｈ）、６．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１）、７．１９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１、１．９）、７．２４（ｓ，１Ｈ）、７．３７（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｓ，１Ｈ）、７．９４（ｓ，１Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ１７．８、１０９．６、１１０．６、１１６．１、１１７．３、１１９．６、１２１．２、１２２．８、１２５．６、１３８．４、１４２．５、１４７．７、１４９．５、１５２．０、１５４．３、１５８．３；ＨＲＭＳ、Ｃ₁₆Ｈ₁₃ＮＯ₄ についての計算値：２８３．０８４４；実測値：２８３．０８３９。実施例ＸＩＩＩ−１，２−ジメチル−３−フェニルイソキノリニウム誘導体（１４ａ、１４ｂ、１５）の合成の一般的手順それぞれの１−メチル−３−フェニルイソキノリン誘導体（０．６７ｍｍｏｌ）の各々を１ｍｌの硫酸ジメチルに添加した。次いでこの反応混合物を１００℃ に２０〜６０分間加熱し、次いで室温に放冷した。無水エーテル（８ｍｌ）を冷却した反応混合物に添加し、生ずる懸濁液を５分間撹拌した。沈澱を濾過し、メタノールから再結晶化させると、対応するＮ−メチルイソキノリニウム塩が９５〜１００％の収率で得られた。６，７−ジメトキシ−１，２−ジメチル−３−（３，４−ジメトキシフェニル）イソキノリニウムメソサルフェート（１４ａ）：１２ａから製造した；融点２２４−２２６℃；ＩＲ（ヌジョール）３５０８、１６４０、１６１３、１５４８、１５０６；¹ ＨＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ３．２１（ｓ，３Ｈ）、３．６７（ｓ，３Ｈ）、３．９４（ｓ，３Ｈ）、３．９８（ｓ，３Ｈ）、４．１１（ｓ，３Ｈ）、４．１２（ｓ，１Ｈ）、７．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６）、７．４８（ｍ，２Ｈ）、７．６２（ｓ，１Ｈ）、７．６６（ｓ，１Ｈ）、８．２４（ｓ，１Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ１８．０、５６．９、５７．１、５７．３、５７．６、１０６．０、１０７．５、１１２．８、１１３．５、１２０．７、１２２．７、１２３．２、１２６．４、１３９．１、１５１．５、１７０．４、１７０．９、１７１．３；分析、Ｃ₂₂Ｈ₂₇ＮＯ₈ Ｓ・１．５Ｈ₂ Ｏについての計算値：Ｃ，５３．６５、Ｈ，５．８３、Ｎ，２．８４；実測値：Ｃ，５３．３５、Ｈ，５．５２、Ｎ，２．９１。６，７−ジメトキシ−１，２−ジメチル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）イソキノリニウムメソサルフェート（１４ｂ）：１２ｂから製造した；融点２３５−２３７℃；ＩＲ（ヌジョール）３４７９、１６１２、１５６８；¹ ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ３．２２（ｓ，３Ｈ）、３．３８（ｓ，３Ｈ）、４．０６（ｓ，６Ｈ）、６．２０（ｓ，２Ｈ）、７．１４（ｍ，２Ｈ）、７．２３（ｍ，１Ｈ）、７．７０（ｓ，１Ｈ）、７．８６（ｓ，１Ｈ）、８．０９（ｓ，１Ｈ）：¹³ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ１８．２、４３．５、５６．８、５６．９、１０２．２、１０６．２、１０６．３、１０９．１、１１０．０、１２２．９、１２３．２、１２４．１、１２７．７、１３４．７、１４４．９、１４７．９、１４９．０、１５２．５、１５６．９、１５７．１；分析、Ｃ₂₁Ｈ₂₃ ＮＯ₈Ｓについての計算値：Ｃ，５３．１１、Ｈ，５．１５、Ｎ，３．１１；実測値：Ｃ，５３．０３、Ｈ，５．１９、Ｎ，２．９５。６，７−ジヒドロキシ−ｌ，２−ジメチル−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）イソキノリニウムメソサルフェート（１５）：１３から製造した；融点１１８−１２０℃；ＩＲ（ＫＢｒ）３２４９、１６１４、１５２８、１４５４；¹ ＨＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ３．０８（ｓ，３Ｈ）、３．６８（ｓ，３Ｈ）、６．９８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．１）、７．２１（ｍ，２Ｈ）、７．３７（ｓ，１Ｈ）、７．６１（ｓ，１Ｈ）、７．９４（ｓ，１Ｈ）；¹³ＣＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ１７．８、１０９．６、１１０．６、１１６．１、１１７．３、１１９．６、１２１．２、１２２．８、１２５．６、１３８．４、１４２．６、１４７．７、１４９．５、１５２．０、１５４．３、１５８．３：分析、Ｃ₁₈Ｈ₁₉ＮＯ₈Ｓについての計算値：Ｃ，５２．８１、Ｈ，４．６８、Ｎ，３．４２；実測値：Ｃ，５２．７９、Ｈ，４．６５、Ｎ，３．４０。実施例ＸＩＶ−材料酵素の発現に使用したプラスミドｐＥＴ１１ａおよび大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）株をノバゲン（Ｎｏｖａｇｅｎ）から購入した。ＩＰＴＧをシグマ（Ｓｉｇｍａ）から購入した。細菌ライゼイトのウェスタンブロット分析に使用したＥＣＬ系をアマーシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）（英国）から購入した。すべての制限酵素およびベント（Ｖｅｎｔ）ポリメラーゼをニュー・イングランド・バイオラブス(new ＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ）から購入した。哺乳動物トポイソメラーゼ１１を公表された手順に従い仔ウシ胸腺から分離した（Ｈａｌｌｉｇａｎ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２４７５−２４８２））。ＪＮ２−１３４酵母株における種々のトポイソメラーゼＩ遺伝子を発現する単一コピーの酵母プラスミドＹＣｐＧＡＬ１は、Ｍ−Ａ．Ｂｊｏｒｎｓｔｉ博士（ＴｈｏｍａｓＪｅｆｆｅｒｓｏｎＵｎｉｖｅｒｓｔｙ、ペンシルベニア州フィラデルフィア）からの贈り物であった。すべての細菌および酵母の培地はディフコ（Ｄｉｆｃｏ）（ミシガン州デトロイト）から購入したが、細胞培養の培地はギブコ（Ｇｉｂｃｏ）−ＢＲＬ（マリイランド州ガイサーバーグ）から購入した。実施例ＸＶ−大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるトポイソメラーゼＩの発現大量のヒトトポイソメラーゼＩを得るために、ヒトトポイソメラーゼＩｃＤＮＡをｐＥＴ１１ａベクターの中にクローニングし、このベクターにおいてｃＤＮＡの転写は誘導可能なＴ７プロモーターの制御下にあった（Ｓｔｕｄｉｅｒ他、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌ．Ｖｏｌ．１８５：６０−８９、ＳａｎＤｉｅｇｏ：ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ（１９９０））。簡単に述べると、プラスミドＹＣｐＧＡＬ１−ｈＴＯＰ１（Ｂｊｏｒｎｓｔｉ他、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４９：６３１８−６３２３（１９８９））から、ＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ部位における切断により、ヒトトポイソメラーゼＩの全体のコーディング配列を含有する３．４ｋｂのＤＮＡフラグメントおよび停止コドンの下流のほぼ１ｋｂの非翻訳領域を単離した。ベクターｐＥＴ−１１ａを同一制限酵素で切断し、脱リン酸化し、ベクターのクローニング部位の下流の適切なリーディングフレームにおいてインサートに結合した。結合混合物を使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を形質転換し、正しいクローンｐＥＴ１Ｂを単離し（地図について第２Ａ図を参照のこと）、その同一性を制限マッピングにより確証した。ｐＥＴにおける翻訳開始は上流のＮｄｅＩ挿入に位置するので、発現されたトポイソメラーゼＩはそのＮ−末端に１５アミノ酸の融合を有する。次いでｐＥＴ１Ｂを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）の中に形質転換し、０．４ｍＭのＩＰＴＧで１時間誘導すると、細菌ライゼイトを１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。ヒトトポイソメラーゼＩに対するウサギ抗体を使用するウェスタンブロッティングにより、発現を確証した。発現したタンパク質の単離は簡単な手順で行った。簡単に述べると、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞を、超音波突発を繰り返すことにより溶解した。超音波抽出を１ＭのＮａＣｌおよび６％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）中で実施して核酸を除去した。ＰＥＧ上清をヒドロキシアパタイトカラム上で直接クロマトグラフィーにかけた。発現されたヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩを０．６Ｍのリン酸カリウム段階で溶離した。溶離した酵素を５０％のグリセロール、３０ｍＭのリン酸カリウム（ｐＨ７．０）、１ｍＭのジチオスレイトール（ＤＴＴ）および０．１ｍＭのＥＤＴＡに対して透析し、−２０℃において貯蔵した。精製した酵素の緩和活性は、仔ウシ胸腺トポイソメラーゼＩよりも約２桁低い比活性を有した。実施例ＸＶＩ−大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるカンプトテシン耐性（ＣＰＴ− Ｋ５）トポイソメラーゼＩの発現ＣＰＴ−Ｋ５（１９）における耐性表現型の原因となる点突然変異ＣＡＧ（Ａｓｐ５３３）−＞ＣＧＧ（Ｇｌｙ）を含有する２つの相補的オリゴヌクレオチドを合成し、順次のＰＣＲ法を使用してトポＩコーディング配列において操作した（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、Ｉｎ：Ａｕｓｕｂｅｌｅｔａｌ．（編）、Ｖｏｌ．１、ｐｐ．８．５．７．Ｂｏｓｔｏｎ：ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｎｃｅ（１９９１））。２つのオリゴヌクレオチドは下記の通りである：５’−ＣＴＴＣＣＴＣＧＧＧＡＡＧＧＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＡＴＡＣ−３’（プライマーＸ１）、および５’− ＧＴＡＴＣＴＧＡＴＧＧＡＧＣＣＣＴＴＣＣＣＧＡＧＧＡＡＧ−３’（プライマーＸ２）、ここで下線が引かれている配列は突然変異したコドンを表す。各オリゴヌクレオチドを別々のＰＣＲ反応において使用して、それぞれ、Ｘ１およびＸ２についての相対的プライマー対としてオリゴヌクレオチド５’−ＡＣＴＧＴＧＡＴＣＣＴＡＧＧＧ−３’（「Ａ」）およひ５’−ＣＴＴＣＡＴＣＧＡＣＡＡＧＣＴＴＧＣＴＣＴＧＡＧ−３’（「Ｈ」）を使用して、突然変異部位に隣接して２つのＤＮＡセグメントを増幅した。「Ａ」および「Ｈ」はユニーク制限部位ＡｖｒＩＩおよびＨｉｎｄＩＩＩの付近のヒトトポＩ配列に対して相補的である。ＰＣＲの第１ラウンド後、２つの増幅された産物Ｘ１−ＨおよびＸ２−Ａは、オリゴヌクレオチドＸｌおよひＸ２のオーバーラップのために、それらの１５塩基対の相補的配列により変性およびアニールされた。次いで二本鎖ＤＮＡのこの短いストレッチを、７２℃においてベントポリメラーゼにより２分間、推定上の７４８塩基対の全長産物Ａ−Ｈに延長した。次いで２つの外部のプライマー「Ａ」および「Ｈ」を使用して、突然変異したトポＩフラグメントを含有する全長のＤＮＡフラグメントを増幅した。次いで増幅された突然変異体トポイソメラーゼＩｃＤＮＡをＡｖｒＩＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化し、トポイソメラーゼＩｃＤＮＡ配列の対応するＡｖｒＩＩ／ＨｉｎｄＩＩＩフラグメントを置換することによってｐＥＴ１Ｂの中にクローニングした。プラスミドｐＥＴ１Ｂ −ＣＰＴＫ５は野生型ヒトトポイソメラーゼＩｃＤＮＡの代わりに突然変異体ＣＰＴ−Ｋ５トポイソメラーゼＩｃＤＮＡを含有し、これを発現のために大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）の中に形質転換した。ＩＰＴＧで誘導すると、ライゼイト中のタンパク質はウェスタンブロッティングにより確証された。次いでＣＰＴ−Ｋ５トポイソメラーゼＩを、野生型酵素について記載されているように、細菌ライゼイトから精製した。実施例ＸＶＩＩ−トポＩおよびトポ１１の切断アッセイ組換えトポイソメラーゼＩおよび仔ウシ胸腺トポイソメラーゼＩおよびＩＩについての切断アッセイを記載されているように実施した（Ｌｉｕ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５８：１５３６５−１５３７０（１９８３））。発表された手順に従い、切断アッセイに使用したプラスミドＹＥｐＧＤＮＡを調製し、その３’末端において標識化した。実施例ＸＶＩＩＩ−酵母の細胞毒性アッセイトポイソメラーゼＩ機能か消滅したとき、酵母は生存できること、およびトポイソメラーゼＩの毒物は機能的トポイソメラーゼＩを有する細胞のみを殺すことが確立されている（Ｂｊｏｒｎｓｔｉ他、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４９：６３１８−６３２３（１９８９））。したかって、種々の薬剤の存在において被験株の各々の増殖の相対的程度を無薬剤の対照プレートと比較すると、１）薬剤が酵母に対して細胞毒性作用を有するかどうか、２）細胞毒性がトポＩ特異的であるかどうか、および３）ヒトトポＩと比較して酵母について薬剤の異なる特異性が存在するかどうかが示される。トポイソメラーゼＩ特異的ｉｎｖｉｖｏ細胞毒性アッセイをＫｎａｂ他（Ｋｎａｂ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２２３２２−２２３３０（１９９３））から採用した。この系において、単一のコピーの酵母プラスミドベクター、ＹＣｐＧＡＬ１の中にクローニングした種々のトポＩ遺伝子（Ｋｎａｂ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２２３２２−２２３３０（１９９３））は、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）のＪＮ２−１３４株においてＧＡＬ１プロモーター制御下に発現される（ＭＡＴａ、ｒａｄ５２：：ＬＥＵ２、ｔｒｐｌ、ａｄｅ２−１、ｈｉｓ７、ｕｒａ３−５２、ｉｓｅ１、ｔｏｐ１−１、１ｅｕ２）（Ｂｊｏｒｎｓｔｉ他、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４９：６３１８−６３２３（１９８９））。ベクター中のトポＩ構築物は、それぞれ、下記の通りである：野生型酵母トポＩ（ＹＣｐＧＡＬ−ＳｃＴＯＰ１）、非機能的酵母トポＩ(ここで活性部位チロシン−７２７はフェニルアラニンに突然変異している）（ＹＣｐＧＡＬ１−Ｓｃｔｏｐ１Ｙ７２７Ｆ）（Ｋｎａｂ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２２３２２−２２３３０（１９９３））、および野生型ヒトトポイソメラーゼＩ（ＹＣｐＧＡＬ−ｈＴＯＰ１）（Ｂｊｏｒｎｓｔｉ他、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４９：６３１８−６３２３（１９８９））。薬剤の細胞毒性およびトポＩ特異性を定性的に試験するために、特異的プラスミドを含有する酵母細胞を連続希釈し（５倍に）、ウラシルおよび２％ガラクトースを補充したドロポウト（ｄｒｏｐｏｕｔ）培地中で増殖させた。さらに、プレートは下記の成分を含有した：Ａ：対照、プレート中の薬剤の不存在；Ｂ：カンプトテシン（ＣＰＴ）、０．５μＭ；Ｃ：コラリン、１μＭ；Ｄ：メチレンジオキシ−ジヒドロ−デメチル−コラリン（ＭＤＤ−コラリン）、１μＭ、およびＥ：ニチジン、１μＭ。プレートを３０℃において３日間増殖させて、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中で発現された種々のトポイソメラーゼＩ酵素に対する異なる化合物の致死的作用および試験する薬剤を評価した。実施例ＸＩＸ−細胞毒性アッセイＭＴＴ−マイクロタイタープレートのテトラゾリニウム細胞毒性アッセイにより、試験した薬剤のＩＣ₅₀を測定した（Ｍｏｓｍａｎｎ、Ｔ．、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ６５：５５−６３（１９８３）；Ｄｅｎｉｚｏｔ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ８９：２７１−２７７（１９８６））。ヒトリンパ芽球ＲＰＭＩ８４０２細胞およびそれらのカンプトテシン耐性ＣＰＴ −Ｋ５細胞（Ａｎｄｏｈ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：５５６５−５５６９（１９８７））は、ＴｏｓｈｉｗｏＡｎｄｏｈ博士（愛知癌中央研究所、日本国名古屋）から提供された。細胞系統Ａ２７８０およびそのカンプトテシン耐性誘導体ＣＰＴ−２０００は、ＪａｕｌａｎｇＨｗａｎｇ博士（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉａｓｉｎｉｃａ、台湾）から提供された。細胞（２０００細胞／ウェル、２００ｍｌの増殖培地中に播種した）を３７℃において５％ＣＯ₂ 中で懸濁増殖させ、１０％熱不活性化胎仔ウシ血清、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、およびストレブトマイシン（０．１ｍｇ／ｍｌ）を補充したＲＰＭＩ培地中の規則的継代により維持した。細胞を連続的に４日間異なる薬剤濃度に暴露し、第４日の終わりにおいてアッセイした。各濃度および無薬剤の対照を６レプリカウェル中で少なくとも２回反復した。結果をプロットし、次いでＩＣ₅₀を測定した。薬剤感受性ヒト類表皮癌ＫＢ３ −１細胞系統およびそのビンブラスチン選択多薬剤耐性変異型ＫＢ−Ｖ１細胞（Ａｋｉｙａｍａ他、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１１：１１７−１２６（１９８５））は、ＭｉｃａｅｌＧｏｔｔｅｓｍａｎｎ博士（ＮａｔｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）により提供された。それらを３７℃において５％ＣＯ₂ 中で単層培養物として増殖させ、１０％熱不活性化胎仔ウシ血清を補充したダルベッコ変性イーグル培地中の規則的継代により維持した。ＫＢ−Ｖ１細胞を１ｍｇ／ｍｌのビンブラスチンの存在において維持した。表１．コラリン誘導体および関係する化合物のトポイソメラーゼＩおよびトポイソメラーゼＩＩ仲介ＤＮＡ切断ａ）４日の連続的薬剤暴露後にＩＣ₅₀を計算した。ｂ）トポイソメラーゼＩ切断値はＲＥＣ（ＲｅｌａｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｉｖｅＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）、すなわち、カンプトテシン（ＣＰＴ）（その値を任意に１と仮定した）に関する濃度として報告し、これら値はヒトトポイソメラーゼＩの存在におけるプラスミドＤＮＡに対する同一切断を生成することができる値である。ｃ）トポイソメラーゼＩＩ切断値はＲＥＣ（ＲｅｌａｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｉｖｅＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）、すなわち、ＶＭ−２６（その値を任意に１と仮定した）に関する濃度として報告し、これら値は仔ウシ胸腺トポイソメラーゼＩＩの存在におけるプラスミドＤＮＡに対する同一切断を生成することができる値である。ｄ）細胞毒性の指示の不存在はアッセイした最高の投与量より実質的に大きいＩＣ₅₀値の指示と考えた。コラリン類似体７ｃをグリア芽細胞腫細胞に対するその有効性について試験した。使用したアッセイはＲＰＭＩ８４０２細胞系統について前述したアッセイに類似した。結果を表２に示す。表２において、白血病細胞系統（ＲＰＭＩ８４０２）、表皮癌（ＫＢ３−１）およびグリア芽細胞腫（ＳＦ−２６８）に対する化合物７ｃの作用を比較する。実施例ＸＸ−結果ヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩがコラリンおよびその誘導体の細胞障害性ターゲットであるかどうかを確立するために、ヒトトポイソメラーゼＩｃＤＮＡをＴ７発現系において発現させた。発現されたヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩを単一のクロマトグラフィー工程により精製した。組換えヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩを使用して、コラリンおよびその誘導体の活性を評価した。組換えヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩおよび仔ウシ胸腺から精製されたトポイソメラーゼＩは、匹敵する切断活性を有し、そしてカンプトテシンおよびコラリンの存在において同様な切断パターンを生成する。組換えヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩは、コラリンまたはカンプトテシンの存在においてＹＥｐＧＤＮＡ上の広範なＤＮＡの破壊を誘導した。これらのＤＮＡの破壊は、下記の基準によりトポイソメラーゼＩ切断可能な複合体の形成を反映することが示された：（１）中性アガロースゲル上への負荷の前に反応が変性されない場合、破壊は観察されなかったので、それらは一本鎖の破壊を表す；（２）破壊はタンパク質結合であり、６５℃に加熱したとき可逆的であること（トポイソメラーゼＩ切断可能な複合体の特徴）か示された。コラリンにより誘導される切断パターンは、カンプトテシンのそれと同一でない場合、同様であり、２つの薬剤がトポイソメラーゼＩに対して同様な作用モードを共有することを示唆する。コラリンが二重毒物であるかどうかを試験するために、仔ウシ胸腺ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩに対するコラリンの活性を評価した。コラリンは精製された仔ウシ胸腺ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩに対する活性を本質的にもたないことが決定された。ニチジンおよびＶＭ−２６の双方を比較の対照として使用した。ニチジンは、ＶＭ−２６と同様であるが、コラリンと異なり、高度に効力のあるトポイソメラーゼ１１の毒物である。コラリンがむしろ特異的なトポイソメラーゼＩの毒物であるという事実は、細胞におけるコラリンの細胞毒性ターゲットとしてのトポイソメラーゼＩの役割の評価を可能とする。酵母細胞におけるカンプトテシンの唯一の細胞毒性ターゲットとしてのヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩの役割を証明するために、ヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩを発現する酵母ｔｏｐ１欠失株は首尾よく適用された。ヒトトポイソメラーゼＩまたは非機能的酵母トポイソメラーゼＩを発現する酵母株に対してコラリンは細胞毒性を示さなかったが、コラリン誘導体のいくつかはヒトトポイソメラーゼＩを発現する酵母細胞に対して高度に細胞毒性であった。ＭＤＤ−コラリンはヒトＤＮＡトポイソメラーゼＩを発現する酵母細胞に対して高度に細胞毒性であるか、機能的または非機能的酵母トポイソメラーゼＩを発現する酵母細胞に対して細胞毒性ではない。この結果か示すように、ＭＤＤ−コラリンの細胞毒性ターゲットは酵母系におけるヒトトポイソメラーゼＩである。機能的酵母トポイソメラーゼＩを発現する酵母細胞はカンプトテシンに対して非常に感受性であるので、それらかコラリンに対して耐性であることは驚くべきことであった。ニチジンはＭＤＤ−コラリンに構造的に類似するので、酵母系におけるその活性をまた評価した。ニチジンは、ＭＤＤ−コラリンと同様に、ヒトトポイソメラーゼＩを発現する酵母細胞に対して高度に細胞毒性であるが、機能的または非機能的酵母トポイソメラーゼＩを発現する酵母細胞に対して細胞毒性ではない。この結果は、再び、ヒトトポイソメラーゼＩがニチジンの細胞毒性ターゲットであり、そして酵母トポイソメラーゼＩがニチジンに対して耐性であるという見解を支持する。ヒト細胞における細胞毒性ターゲットとしてのトポイソメラーゼＩの可能な役割を評価するために、コラリン誘導体を２対のカンプトテシン耐性細胞系統（ＲＰＭＩ８４０２／ＣＰＴ−Ｋ５およびＡ２７８０／ＣＰＴ２０００）に対して試験した。双方の細胞系統の対において、カンプトテシンに対する耐性はヒトトポイソメラーゼＩの構造遺伝子内の突然変異に寄与して、カンプトテシン耐性ヒトトポイソメラーゼＩに導いた（Ｔａｍｕｒａ他、Ｎｕｃ１．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１９：６９−７５（１９９１））。表１に示すように、カンプトテシンについての耐性指数が１０００〜１０，０００範囲であるか、コラリン誘導体およびニチジンについての耐性指数は１〜９の間で変化した。カンプトテシンおよびコラリン誘導体（また、ニチジン）により生成される同様な切断パターンにかんがみて、コラリン誘導体およびニチジンに対するカンプトテシン耐性細胞系統の有意な交差耐性の欠如は驚くべきことであった。これらの薬剤は追加の１または２以上の細胞障害性ターゲットを有することを示しうる。また、耐性細胞におけるカンプトテシン耐性トポイソメラーゼＩは、非オーバーラッピングレセプタ一部位のために、コラリン誘導体およびニチジンに対する耐性を単に付与しない。これらの２つの可能性を区別するために、カンプトテシン耐性トポイソメラーゼＩをＣＰＴ−Ｋ５細胞から単離し、コラリン誘導体およびニチジンに対する耐性／感受性について試験した。不都合なことには、ＣＰＴ −Ｋ５細胞から精製されたＣＰＴ−Ｋ５トポイソメラーゼＩは結論的結果を与えるために十分に活性ではなかった。この問題を克服するために、ｉｎｖｉｔｒｏ部位特異的突然変異誘発を実施して、ヒトトポイソメラーゼＩｃＤＮＡのヌクレオチド位置１８０９におけるＡ→Ｇ転移突然変異をつくった。タンパク質のアミノ酸配列中のＡｓｐ→Ｇｌｙ（アミノ酸＃５３３）変化を引き起こす突然変異は、カンプトテシン耐性の原因となることが示された（Ｔａｍｕｒａ他、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１９：６９−７５（１９９１））。この突然変異をｐＥＴ１Ｂ上のヒトトポイソメラーゼＩｃＤＮＡの中に操作した。ＣＰＴ−Ｋ５トポイソメラーゼＩの過度の発現のために、生ずるプラスミド、ｐＥＴ１Ｂ／ＣＰＴ−Ｋ５を使用した。過度に発現された組換えＣＰＴ−Ｋ５トポイソメラーゼＩを部分的に精製し、そして、同様な方法において発現および精製された野生型ヒトトポイソメラーゼＩと、ほぼ同一の特異的活性を有することが示された。組換えＣＰＴ−Ｋ５トポイソメラーゼＩは、カンプトテシンに対して高度に耐性（１０００倍を越える）であることか示された。しかしながら、組換えＣＰＴ −Ｋ５トポイソメラーゼＩはニチジンに対してのみ限界的に（１０倍より小さい）耐性でありそしてＤ−コラリンに対して中程度に（約３０倍）耐性であった。驚くべきことには、切断アッセイにより証明されるように、組換えＣＰＴ−Ｋ５トポイソメラーゼＩはコラリンに対して高度に耐性であった。表２に示すように、化合物７ｃはグリア芽細胞腫細胞に対して例外的な細胞毒性を有し、そして白血病または表皮癌細胞系統よりも、このＣＮＳ腫瘍細胞に対して細胞毒性である。ＳＦ−２６８に対するその有効性は、この化合物の選択的吸収が起こりうることを示唆する。これらの研究が証明するように、コラリン類似体はトポイソメラーゼＩおよび／またはトポイソメラーゼＩＩの毒物として増強された活性を示す。これらのデータか示唆するように、ニチジンの同様に置換された類似体は哺乳動物のトポイソメラーゼＩまたはＩＩの毒物の抑制に関して同様な選択的を示すことができるであろう。

【手続補正書】【提出日】１９９８年８月１３日（１９９８．８．１３）【補正内容】 (1) 明細書第51頁の後に別紙配列表を加入します。（なお、配列は国際出願時の明細書第28頁、翻訳された明細書第41頁に記載されていたものです。） (2) 請求の範囲を別紙の通り補正します。請求の範囲１．癌細胞の増殖を抑制するための、式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ は独立して−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ₂ ）₂ であるか、あるいは不存在であり、ただし、Ｒ₈ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ）₂ −であるとき、Ｒ₉ は不存在でありかつＲ₃ はＨであり、そしてＲ₉ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ₂ ）₂ であるとき、Ｒ₁ またはＲ₂ はＨでありかつＲ₅ およびＲ₈ は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩。２．癌細胞が中枢神経系の中に位置する、請求項１に記載の化合物。３．癌が白血病または黒色腫である、請求項１に記載の化合物。４．癌が充実腫瘍である、請求項１に記載の化合物。５．腫瘍が乳房、肺、結腸、または卵巣の腫瘍である、請求項１に記載の化合物。６．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₃ はＨであり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ は（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、Ｒ₈ は−ＣＨ＝ＣＨ−であり、そしてＲ₉ は不存在である）の化合物、または薬学上許容される塩。７．Ｒ₆ およびＲ₇ が−ＯＣＨ₃ である、請求項６に記載の化合物。８．Ｒ₁ が−ＯＣＨ₃ である、請求項７に記載の化合物。９．Ｒ₂ が−ＯＣＨ₃ である、請求項７に記載の化合物。１０．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ は不存在であり、Ｒ₈ は不存在であり、そしてＲ₉ は−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ₂ ）₂ であり、ただし、Ｒ₁ またはＲ₂ はＨである）の化合物またはその薬学上許容される塩。１１．Ｒ₆ およびＲ₇ が−ＯＣＨ₃ である、請求項１０に記載の化合物。１２．Ｒ₄ がＣＨ₃ である、請求項１１に記載の化合物。１３．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₃ である、請求項１２に記載の化合物。１４．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₂ Ｏ−である、請求項１２に記載の化合物。１５．Ｒ₄ がＨである、請求項１１に記載の化合物。１６．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₃ である、請求項１５に記載の化合物。１７．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₂ Ｏ−である、請求項１５に記載の化合物。１８．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、およびＲ₃ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₆ およびＲ₇ の各々はＯＨであり、そしてＲ₈ およびＲ₉ の各々は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩。１９．Ｒ₄ がＣＨ₃ である、請求項１８に記載の化合物。２０．Ｒ₅ がＣＨ₃ である、請求項１９に記載の化合物。２１．Ｒ₁ がＨであり、そしてＲ₂ およびＲ₃ の各々がＯＨである、請求項２０に記載の化合物。２２．癌に悩む哺乳動物に、ある量の式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨＮＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏーであり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ は独立して−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ₂ ）₂ であるか、あるいは不存在であり、ただし、Ｒ₈ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ）₂ −であるとき、Ｒ₉ は不存在でありかつＲ₃ はＨであり、そしてＲ₉ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ₂ ）₂ であるとき、Ｒ₁ またはＲ₂ はＨでありかつＲ₅ およびＲ₈ は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩を投与することからなる治療法。２３．癌細胞が中枢神経系の中に位置する、請求項２２に記載の方法。２４．癌を有する哺乳動物における腫瘍細胞を抑制するために有効な薬剤を製造するために、式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨＮＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁−Ｃ₈）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁−Ｃ₈）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ は独立して−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ₂ ）₂ であるか、あるいは不存在であり、ただし、Ｒ₈ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ）₂−であるとき、Ｒ₉ は不存在でありかつＲ₃ はＨであり、そしてＲ₉ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ₂ ）₂ であるとき、Ｒ₁ またはＲ₂ はＨでありかつＲ₅ およびＲ₈ は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩を使用する方法。２５．哺乳動物がヒトである、請求項２４に記載の方法。２６．癌が白血病または黒色腫である、請求項２４に記載の方法。２７．癌が充実腫瘍である、請求項２４に記載の方法。２８．腫瘍が乳房、肺、結腸、または卵巣の腫瘍である、請求項２７に記載の方法。２９．癌細胞が中枢神経系の中に位置する、請求項２４に記載の方法。３０．前記化合物を薬学上許容される担体と組み合わせて投与する、請求項２４に記載の方法。３１．前記担体が液状ベヒクルである、請求項３０に記載の方法。３２．前紀担体が非経口投与に適合する、請求項３０に記載の方法。３３．前記担体が錠剤またはカプセルである、請求項３０に記載の方法。３４．有効量の式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂Ｏ−であり、Ｒ₄ Ｈまたは（Ｃ₁ Ｃ₈）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ は独立して−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ₂ ）₂ であるか、あるいは不存在であり、ただし、Ｒ₈ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ）₂ −であるとき、Ｒ₉ は不存在でありかつＲ₃ はＨであり、そしてＲ₉ が−ＣＨ＝ＣＨ−またはー（ＣＨ₂ ）₂ であるとき、Ｒ₁ またはＲ₂ はＨでありかつＲ₅ およびＲ₈ は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩を、薬学上許容される担体と組み合わせて、含んでなる医薬組成物。３５．化合物８−メチル−３，４，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート；８−メチル−３，４−メチレンジオキシ−１０，１１−ジメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］−キノリジニウムアセトサルフェート；５，６−ジヒドロ−８−メチル−３，４，１０，１１−テトラメトキシ−ジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート；５，６−ジヒドロ −８−メチル−３，４−メチレンジオキシ−１０，１１−ジメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムアセトサルフェート；５，６−ジヒドロ−３，４，１０，１１−テトラメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド；５，６ −ジヒドロ−３，４−メチレンジオキシ−１０，１１−ジメトキシジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド；３，４，１０，１１−テトラメトキシ−ジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド；または３，４−メチレンジオキシ− １０，１１−ジメトキシ−ジベンゾ［ａ，ｇ］キノリジニウムクロライド；またはそれらの薬学上許容される塩。３６．化合物６，７−ジメトキシ−１−メチル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）イソキノリン；６，７−ジヒドロキシ−１−メチル−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）イソキノリン；６，７−ジメトキシ−１，２−ジメチル−３−（３，４−メチレンジオキシフェニル）イソキノリニウムメソサルフェート；または６，７−ジヒドロキシ−１，２−ジメチル−３−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−イソキノリニウムメソサルフェート；またはそれらの薬学上許容される塩。３７．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₃ はＨであり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、Ｒ₈ は−（ＣＨ₂ )₂ −であり、そしてＲ₉ は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩。３８．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ Ｈまたは（Ｃ₁ Ｃ₈ アルキルであり、Ｒ₅ は不存在であり、Ｒ₈ は不存在であり、そしてＲ₉ は−ＣＨ＝ＣＨ−であり、ただし、Ｒ₁ またはＲ₂ はＨである）の化合物またはその薬学上許容される塩。３９．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ は不存在であり、Ｒ₈ は不存在であり、そしてＲ₉は−（ＣＨ₂ ）₂ −であり、ただし、Ｒ₁ またはＲ₂ はＨである）の化合物またはその薬学上許容される塩。４０．式：（式中、Ｒ₁ ＯＨであり、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁−Ｃ₈）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁−Ｃ₈）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ の各は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩。４１．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₂ はＯＨであり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ の各々は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩。４２．式：（式中、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂Ｏ−であり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ の各々は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩。４３．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ の各々は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩。４４．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ およびＲ₃ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、Ｒ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、そしてＲ₈ およびＲ₉ の各々は不存在である）の化合物またはその薬学上許容される塩。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 31/473 Ａ６１Ｋ 31/47 ６０６Ｃ０７Ｄ 221/18 Ｃ０７Ｄ 221/18 455/03 455/03 471/04 １０２ 471/04 １０２ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者リュ，レロイフォングアメリカ合衆国，ニュージャージー 08807，ブリッジウォーター，フェアアクレスドライブ５ (72)発明者マケイ，ダーシャンビー. アメリカ合衆国，ニュージャージー 08854，ピスカタウェイ，ビビールロード 720

Claims

【特許請求の範囲】１．式：（式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ 、Ｒ₃ 、Ｒ₆ およびＲ₇ は独立してＨ、ＯＨ、または（Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルコキシであり、Ｒ₂ およびＲ₃ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₁ およびＲ₂ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であるか、あるいはＲ₆ およびＲ₇ は一緒になって−ＯＣＨ₂ Ｏ−であり、Ｒ₄ はＨまたは(Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであり、Ｒ₅ はＨ、(Ｃ₁ −Ｃ₈ ）アルキルであるか、あるいは不存在であり、そしてＲ₄ およびＲ₉ は独立して−ＣＨ＝ＣＨ−、−（ＣＨ₂ ）₂ であるか、あるいは不存在であり、ただし、Ｒ₈ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ）₂ −であるとき、Ｒ₉ は不存在でありかつＲ₃ はＨであり、そしてＲ₉ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ₂ ）₂であるとき、Ｒ₁ またはＲ₂ はＨでありかつＲ₅ およびＲ₈ は不存在である）の化合物、あるいはＲ₅ およびＲ₉ が存在する場合、その薬学上許容される塩。２．Ｒ₈ が−ＣＨ＝ＣＨ−である、請求項１に記載の化合物。３．Ｒ₆ およびＲ₇ が−ＯＣＨ₃ である、請求項２に記載の化合物。４．Ｒ₁ が−ＯＣＨ₃ である、請求項３に記載の化合物。５．Ｒ₂ が−ＯＣＨ₃ である、請求項３に記載の化合物。６．Ｒ₉ が−ＣＨ＝ＣＨ−または−（ＣＨ₂ )₂ −である、請求項１に記載の化合物。７．Ｒ₆ およびＲ₇ が−ＯＣＨ₃ である、請求項６に記載の化合物。８．Ｒ₄ がＣＨ₃ である、請求項７に記載の化合物。９．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₃ である、請求項８に記載の化合物。１０．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₂ Ｏ−である、請求項８に記載の化合物。１１．Ｒ₄ がＨである、請求項７に記載の化合物。１２．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₃ である、請求項１１に記載の化合物。１３．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₂ Ｏ−である、請求項１１に記載の化合物。１４．Ｒ₈ およびＲ₉ が不存在である、請求項１に記載の化合物。１５．Ｒ₆およびＲ⁷がＯＨである、請求項１４に記載の化合物。１６．Ｒ₄ がＣＨ₃ である、請求項１５に記載の化合物。１７．Ｒ₅ がＣＨ₃ である、請求項１６に記載の化合物。１８．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ₂ およびＲ₃ がＯＨである、請求項１７に記載の化合物。１９．Ｒ₆ およびＲ₇ が−ＯＣＨ₃ である、請求項１４に記載の化合物。２０．Ｒ₄ がＣＨ₃ である、請求項１９に記載の化合物。２１．Ｒ₅ がＣＨ₃ である、請求項２０に記載の化合物。２２．Ｒ₁ がＨであり、Ｒ ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₃ である、請求項２１に記載の化合物。２３．Ｒ₂ およびＲ₃ が−ＯＣＨ₂ Ｏ−である、請求項２２に記載の化合物。２４．癌に悩む哺乳動物にある量の請求項１に記載の化合物を投与することからなる、癌細胞の増殖を抑制する治療法。２５．癌細胞が中枢神経系（ＣＮＳ）の中に位置する、請求項２４に記載の方法。２６．癌を有する哺乳動物における腫瘍細胞の増殖を抑制するために有効な薬剤を製造するために請求項１に記載の化合物を使用する方法。２７．哺乳動物がヒトである、請求項２６に記載の方法。２８．癌が白血病または黒色腫である、請求項２６に記載の方法。２９．癌が充実腫瘍である、請求項２６に記載の方法。３０．腫瘍が乳房、肺、結腸、または卵巣の腫瘍である、請求項２９に記載の方法。３１．癌細胞が中枢神経系（ＣＮＳ）の中に位置する、請求項２６に記載の方法。３２．前記化合物を薬学上許容される担体と組み合わせて投与する、請求項２６に記載の方法。３３．前記担体が液状ベヒクルである、請求項３２に記載の方法。３４．前記担体が非経口投与に適合する、請求項３２に記載の方法。３５．前記担体が錠剤またはカプセルである、請求項３２に記載の方法。