JP2000139491A - アデノシン（チミジン）−５’，５’’’−ｐ１，ｐ４−テトラリン酸の製造方法 - Google Patents
アデノシン（チミジン）−５’，５’’’−ｐ１，ｐ４−テトラリン酸の製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】アデノシン（チミジン）−５'，５'''−Ｐ１，
Ｐ４−テトラリン酸（以下、Ａｐ４Ｔという。）を高濃
度・高収率で合成する方法を提供する。 【解決手段】アデノシン５'−トリリン酸と、チミジン
５'−トリリン酸と、イソロイシンを反応基質として用
い、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用により
特定のＡｐ４Ｔを生成させることを特徴とするＡｐ４Ｔ
の製造方法。
Ｐ４−テトラリン酸（以下、Ａｐ４Ｔという。）を高濃
度・高収率で合成する方法を提供する。 【解決手段】アデノシン５'−トリリン酸と、チミジン
５'−トリリン酸と、イソロイシンを反応基質として用
い、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用により
特定のＡｐ４Ｔを生成させることを特徴とするＡｐ４Ｔ
の製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、医薬品又はその原
料として有用な下記構造式で示されるアデノシン（チミ
ジン）−５'，５'''−Ｐ１，Ｐ４−テトラリン酸（以下
Ａｐ４Ｔという。）の製造方法に関するものであり、特
に工業的に有利な製造方法に関するものである。
料として有用な下記構造式で示されるアデノシン（チミ
ジン）−５'，５'''−Ｐ１，Ｐ４−テトラリン酸（以下
Ａｐ４Ｔという。）の製造方法に関するものであり、特
に工業的に有利な製造方法に関するものである。
【０００２】
【化１】
【０００３】
【従来の技術】従来、ジヌクレオシドポリリン酸が、ア
ミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用により、アデ
ノシン５'−トリリン酸（以下ＡＴＰという。）とヌク
レオシドポリリン酸から合成されることが知られていた
（特開平１−１０４１９１号公報参照）。また、ジャー
ナル・オブ・ケミカル・ソサエティー（Ｊ．Ｃｈｅｍ．
Ｓｏｃ．）パーキン・トランス１、２００９、（１９９
６）では、リジル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いてアデノシ
ン（２'−デオキシチミジン）−５'，５'''−Ｐ１，Ｐ
４−テトラリン酸を合成することが報告されている。
ミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用により、アデ
ノシン５'−トリリン酸（以下ＡＴＰという。）とヌク
レオシドポリリン酸から合成されることが知られていた
（特開平１−１０４１９１号公報参照）。また、ジャー
ナル・オブ・ケミカル・ソサエティー（Ｊ．Ｃｈｅｍ．
Ｓｏｃ．）パーキン・トランス１、２００９、（１９９
６）では、リジル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いてアデノシ
ン（２'−デオキシチミジン）−５'，５'''−Ｐ１，Ｐ
４−テトラリン酸を合成することが報告されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかし、リジル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を用いてＡｐ４Ｔを合成した場合、基質で
あるＡＴＰ及びチミジン５'−トリリン酸（以下ＴＴＰ
という。）の濃度を低くしても、特に高価であるＴＴＰ
に対する収率が悪く、副生成物であるアデノシン（アデ
ニン）−５'，５'''−Ｐ１，Ｐ４−テトラリン酸（以下
Ａｐ４Ａという。）が多く生成するという問題点があっ
た。このため、Ａｐ４Ｔを高濃度・高収率で合成するこ
とが困難であった。本発明は、高濃度・高収率でＡｐ４
Ｔを製造する方法を提供することを目的とするものであ
る。
ＮＡ合成酵素を用いてＡｐ４Ｔを合成した場合、基質で
あるＡＴＰ及びチミジン５'−トリリン酸（以下ＴＴＰ
という。）の濃度を低くしても、特に高価であるＴＴＰ
に対する収率が悪く、副生成物であるアデノシン（アデ
ニン）−５'，５'''−Ｐ１，Ｐ４−テトラリン酸（以下
Ａｐ４Ａという。）が多く生成するという問題点があっ
た。このため、Ａｐ４Ｔを高濃度・高収率で合成するこ
とが困難であった。本発明は、高濃度・高収率でＡｐ４
Ｔを製造する方法を提供することを目的とするものであ
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らはこのような
課題を解決するために鋭意検討の結果、イソロイシル−
ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用を利用することにより、高
濃度かつ高収率にＡｐ４Ｔを合成できることを見出し本
発明に到達した。すなわち、本発明は、ＡＴＰと、ＴＴ
Ｐと、イソロイシンとを反応基質として用い、イソロイ
シル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用によりＡｐ４Ｔを生
成させることを特徴とするＡｐ４Ｔの製造方法を要旨と
するものである。
課題を解決するために鋭意検討の結果、イソロイシル−
ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用を利用することにより、高
濃度かつ高収率にＡｐ４Ｔを合成できることを見出し本
発明に到達した。すなわち、本発明は、ＡＴＰと、ＴＴ
Ｐと、イソロイシンとを反応基質として用い、イソロイ
シル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用によりＡｐ４Ｔを生
成させることを特徴とするＡｐ４Ｔの製造方法を要旨と
するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に使用されるイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素と
しては、その由来は特に限定されるものではなく、例え
ばエシェリチア・コリ、バチルス・ステアロサーモフィ
ルス等の微生物由来のものが挙げられる。また、イソロ
イシル−ｔＲＮＡ合成酵素としては、市販の酵素を使用
してもよいし、これらの微生物を培養し
本発明に使用されるイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素と
しては、その由来は特に限定されるものではなく、例え
ばエシェリチア・コリ、バチルス・ステアロサーモフィ
ルス等の微生物由来のものが挙げられる。また、イソロ
イシル−ｔＲＮＡ合成酵素としては、市販の酵素を使用
してもよいし、これらの微生物を培養し
【０００７】これらの微生物を培養してイソロイシル−
ｔＲＮＡ合成酵素を得るには、通常の方法に従って菌体
を培養した後、例えば圧破砕機や超音波破砕機、ダイノ
ミル（商標名）等を用いる方法又はリゾチーム、トリト
ン等を添加する方法等によって細胞を破砕し、ろ過や遠
心分離を行えばよい。本発明においては、このようにし
て得られるイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素の抽出物を
そのまま用いてもよく、さらに塩析、カラムクロマトグ
ラフィー等の通常行われている方法によって精製された
イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いてもよい。
ｔＲＮＡ合成酵素を得るには、通常の方法に従って菌体
を培養した後、例えば圧破砕機や超音波破砕機、ダイノ
ミル（商標名）等を用いる方法又はリゾチーム、トリト
ン等を添加する方法等によって細胞を破砕し、ろ過や遠
心分離を行えばよい。本発明においては、このようにし
て得られるイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素の抽出物を
そのまま用いてもよく、さらに塩析、カラムクロマトグ
ラフィー等の通常行われている方法によって精製された
イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いてもよい。
【０００８】本発明においては、膜型又はカラム型等の
反応器を用いて連続的にＡｐ４Ｔを合成してもよいし、
バッチ式の反応器を用いて合成してもよい。反応器とし
て膜型反応器を用いると、酵素は高分子物質であるのに
対して反応生成物は低分子であるので、酵素がそのまま
反応器の中にとどまった状態で使用することができるの
で特に有効である。また、カラム型反応器を用いる場合
には、使用する酵素を適当な担体、例えば、セルロー
ス、デキストラン、アガロース等のような多糖類の誘導
体、ポリスチレン、エチレン−マレイン酸共重合体、架
橋ポリアクリルアミド等のようなビニルポリマーの誘導
体、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタミン酸共重合体、ポリア
スパラギン酸等のようなポリアミノ酸またはアミドの誘
導体、ガラス、アルミナ、ヒドロキシアパタイト等のよ
うな無機物の誘導体等に結合、包括あるいは吸着させ
て、いわゆる固定化酵素としてカラムに充填して使用す
ればよい。
反応器を用いて連続的にＡｐ４Ｔを合成してもよいし、
バッチ式の反応器を用いて合成してもよい。反応器とし
て膜型反応器を用いると、酵素は高分子物質であるのに
対して反応生成物は低分子であるので、酵素がそのまま
反応器の中にとどまった状態で使用することができるの
で特に有効である。また、カラム型反応器を用いる場合
には、使用する酵素を適当な担体、例えば、セルロー
ス、デキストラン、アガロース等のような多糖類の誘導
体、ポリスチレン、エチレン−マレイン酸共重合体、架
橋ポリアクリルアミド等のようなビニルポリマーの誘導
体、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタミン酸共重合体、ポリア
スパラギン酸等のようなポリアミノ酸またはアミドの誘
導体、ガラス、アルミナ、ヒドロキシアパタイト等のよ
うな無機物の誘導体等に結合、包括あるいは吸着させ
て、いわゆる固定化酵素としてカラムに充填して使用す
ればよい。
【０００９】以下に、バッチ式の反応器でＡｐ４Ｔを製
造する場合を例にとり、反応条件について説明する。反
応液中のＡＴＰ及びＴＴＰの濃度としては、１０μＭ以
上、特に１００μＭ〜１００ｍＭ、さらに１〜３０ｍＭ
が適当である。また、イソロイシンの濃度としては、
０．１μＭ以上、特に１μＭ〜１０ｍＭが好ましい。
造する場合を例にとり、反応条件について説明する。反
応液中のＡＴＰ及びＴＴＰの濃度としては、１０μＭ以
上、特に１００μＭ〜１００ｍＭ、さらに１〜３０ｍＭ
が適当である。また、イソロイシンの濃度としては、
０．１μＭ以上、特に１μＭ〜１０ｍＭが好ましい。
【００１０】さらに、本発明においては、反応をスムー
ズに進めるために、ピロフォスファターゼや、マグネシ
ウムイオン、マンガンイオン、カルシウムイオン、亜鉛
イオン、コバルトイオン、カドミウムイオン等の金属イ
オンを添加してもよい。反応のｐＨとしては、おおむね
中性付近、すなわちｐＨ５〜１１、好ましくはｐＨ６〜
９の範囲で使用され、ｐＨは緩衝液で調節することがで
きる。このときに使用する緩衝液としては、イソロイシ
ル−ｔＲＮＡ合成酵素、イソロイシン、ＡＴＰ、ＴＴＰ
などが溶解し、また酵素活性を維持し、所定のｐＨが得
られるものであれば、いかなるものを使用してもよい。
具体例として、トリス緩衝液、ヘペス緩衝液などのグッ
ド緩衝液、イミダゾール緩衝液、トリエタノールアミン
緩
ズに進めるために、ピロフォスファターゼや、マグネシ
ウムイオン、マンガンイオン、カルシウムイオン、亜鉛
イオン、コバルトイオン、カドミウムイオン等の金属イ
オンを添加してもよい。反応のｐＨとしては、おおむね
中性付近、すなわちｐＨ５〜１１、好ましくはｐＨ６〜
９の範囲で使用され、ｐＨは緩衝液で調節することがで
きる。このときに使用する緩衝液としては、イソロイシ
ル−ｔＲＮＡ合成酵素、イソロイシン、ＡＴＰ、ＴＴＰ
などが溶解し、また酵素活性を維持し、所定のｐＨが得
られるものであれば、いかなるものを使用してもよい。
具体例として、トリス緩衝液、ヘペス緩衝液などのグッ
ド緩衝液、イミダゾール緩衝液、トリエタノールアミン
緩
【００１１】また、反応の温度としては、酵素の失活が
起こらず、反応がスムーズに進行する範囲であれば特に
限定されるものではないが、２０〜８０℃、特に３０〜
５５℃の範囲が好ましい。反応の時間としては、１〜１
００時間が好ましく、特に４〜５０時間が好ましい。
起こらず、反応がスムーズに進行する範囲であれば特に
限定されるものではないが、２０〜８０℃、特に３０〜
５５℃の範囲が好ましい。反応の時間としては、１〜１
００時間が好ましく、特に４〜５０時間が好ましい。
【００１２】また、反応時に、有機溶媒を共存させるこ
とが好ましく、有機溶媒としては、特に限定されるもの
ではないが、アルコール類を用いることが好ましく、特
に、メタノール、エタノール、プロパノール、エチレン
グリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等
が好ましい。反応液中の有機溶媒の濃度としては、１〜
９０ｖ／ｖ％が好ましく、１０〜６０ｖ／ｖ％がさらに
好ましい。反応液中に有機溶媒を共存させることによ
り、Ａｐ４Ｔの生成量が増加し、さらに反応副生成物で
あるＡｐ４Ａの生成量に対するＡｐ４Ｔの生成量が増加
するために好ましい。
とが好ましく、有機溶媒としては、特に限定されるもの
ではないが、アルコール類を用いることが好ましく、特
に、メタノール、エタノール、プロパノール、エチレン
グリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等
が好ましい。反応液中の有機溶媒の濃度としては、１〜
９０ｖ／ｖ％が好ましく、１０〜６０ｖ／ｖ％がさらに
好ましい。反応液中に有機溶媒を共存させることによ
り、Ａｐ４Ｔの生成量が増加し、さらに反応副生成物で
あるＡｐ４Ａの生成量に対するＡｐ４Ｔの生成量が増加
するために好ましい。
【００１３】このようにして合成したＡｐ４Ｔは、イオ
ン交換クロマトグラフィー等一般に広く用いられている
方法で精製し、単離することができる。
ン交換クロマトグラフィー等一般に広く用いられている
方法で精製し、単離することができる。
【００１４】
【実施例】次に、本発明を実施例によって具体的に説明
する。本発明においてＡｐ４Ｔ及びＡｐ４Ａの定量は高
速液体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣという。）を
用いて以下のようにして行った。すなわち、カラムはウ
ォーターズ社製ノバパックＣ１８を用い、過塩素酸テト
ラブチルアンモニウム ３ｍＭ、リン酸１カリウム ３
０ｍＭ、メタノール １５ｖ／ｖ％、水 ８５ｖ／ｖ％
の溶液を移動相として、流速１．０ｍｌ／分で流し、検
出はＵＶの吸収（λ＝２５４ｎｍ）を測定することによ
り行った。
する。本発明においてＡｐ４Ｔ及びＡｐ４Ａの定量は高
速液体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣという。）を
用いて以下のようにして行った。すなわち、カラムはウ
ォーターズ社製ノバパックＣ１８を用い、過塩素酸テト
ラブチルアンモニウム ３ｍＭ、リン酸１カリウム ３
０ｍＭ、メタノール １５ｖ／ｖ％、水 ８５ｖ／ｖ％
の溶液を移動相として、流速１．０ｍｌ／分で流し、検
出はＵＶの吸収（λ＝２５４ｎｍ）を測定することによ
り行った。
【００１５】参考例１ エシェリチア・コリＮ４８３０−１／ｐＳＩ１０（微工
研菌寄第Ｐ−１３９０７号）の菌体５ｇを、５倍量の２
ｍＭの２−メルカプトエタノール及び２ｍＭのエチレン
ジアミン四酢酸ナトリウムを含む２５ｍＭのリン酸カリ
ウム緩衝液（ｐＨ８．０）に懸濁し、ソニケータを用い
て細胞を破砕した後、遠心分離により不溶物を除去し、
イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得
た。ＤＥＡＥ−セファロース（ファルマシア社製）を充
填したカラムにこの粗抽出液を通し、０から０．６Ｍ塩
化カリウムを含む上記緩衝液で溶出し、イソロイシル−
ｔＲＮＡ合成酵素の活性画分を集め、濃縮、脱塩を行っ
た結果、３０キロユニット／ｍｌのイソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗酵素液２．０ｍｌを得た。上記操
作はすべて４℃にて行った。
研菌寄第Ｐ−１３９０７号）の菌体５ｇを、５倍量の２
ｍＭの２−メルカプトエタノール及び２ｍＭのエチレン
ジアミン四酢酸ナトリウムを含む２５ｍＭのリン酸カリ
ウム緩衝液（ｐＨ８．０）に懸濁し、ソニケータを用い
て細胞を破砕した後、遠心分離により不溶物を除去し、
イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得
た。ＤＥＡＥ−セファロース（ファルマシア社製）を充
填したカラムにこの粗抽出液を通し、０から０．６Ｍ塩
化カリウムを含む上記緩衝液で溶出し、イソロイシル−
ｔＲＮＡ合成酵素の活性画分を集め、濃縮、脱塩を行っ
た結果、３０キロユニット／ｍｌのイソロイシル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗酵素液２．０ｍｌを得た。上記操
作はすべて４℃にて行った。
【００１６】参考例２ バチルス・ステアロサーモフィラスＮＣＡ１５０３（微
工研菌寄第Ｐ−４７７８号）の菌体１００ｇを、５倍量
の２ｍＭの２−メルカプトエタノール及び２ｍＭのエチ
レンジアミン四酢酸ナトリウムを含む２５ｍＭのリン酸
カリウム緩衝液（ｐＨ８．０）に懸濁し、ソニケータを
用いて細胞を破砕した後、遠心分離により不溶物を除去
し、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を
得た。これを参考例１と同様に精製、濃縮及び脱塩する
ことにより、４６キロユニット／ｍｌのイソロイシル−
ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗酵素液１．０ｍｌを得た。上
記操作はすべて４℃にて行った。
工研菌寄第Ｐ−４７７８号）の菌体１００ｇを、５倍量
の２ｍＭの２−メルカプトエタノール及び２ｍＭのエチ
レンジアミン四酢酸ナトリウムを含む２５ｍＭのリン酸
カリウム緩衝液（ｐＨ８．０）に懸濁し、ソニケータを
用いて細胞を破砕した後、遠心分離により不溶物を除去
し、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を
得た。これを参考例１と同様に精製、濃縮及び脱塩する
ことにより、４６キロユニット／ｍｌのイソロイシル−
ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗酵素液１．０ｍｌを得た。上
記操作はすべて４℃にて行った。
【００１７】参考例３ バチルス・ステアロサーモフィラスＮＣＡ１５０３（微
工研菌寄第Ｐ−４７７８号）の菌体１００ｇを、参考例
２と同様に菌体破砕、精製、濃縮及び脱塩することによ
り、２３キロユニット／ｍｌのヒスチジル−ｔＲＮＡ合
成酵素を含む粗
工研菌寄第Ｐ−４７７８号）の菌体１００ｇを、参考例
２と同様に菌体破砕、精製、濃縮及び脱塩することによ
り、２３キロユニット／ｍｌのヒスチジル−ｔＲＮＡ合
成酵素を含む粗
【００１８】実施例１ ＡＴＰ５ｍＭ、ＴＴＰ５ｍＭ、イソロイシン０．０２ｍ
Ｍ、塩化マグネシウム１５ｍＭ、参考例１で得たイソロ
イシル−ｔＲＮＡ合成酵素１０００ユニット／ｍｌ、イ
ミダゾール緩衝液（ｐＨ７．０）２５ｍＭからなる反応
溶液を、４０℃で３０時間反応させてＡｐ４Ｔを合成し
たところ、１．９ｍＭのＡｐ４Ｔが生成した。反応生成
物がＡｐ４Ｔであることは核磁気共鳴スペクトルにより
確認した。
Ｍ、塩化マグネシウム１５ｍＭ、参考例１で得たイソロ
イシル−ｔＲＮＡ合成酵素１０００ユニット／ｍｌ、イ
ミダゾール緩衝液（ｐＨ７．０）２５ｍＭからなる反応
溶液を、４０℃で３０時間反応させてＡｐ４Ｔを合成し
たところ、１．９ｍＭのＡｐ４Ｔが生成した。反応生成
物がＡｐ４Ｔであることは核磁気共鳴スペクトルにより
確認した。
【００１９】実施例２ 実施例１におけるイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を、
参考例２で得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素に代え
た以外は実施例１と同様にバッチ法でＡｐ４Ｔを合成し
たところ、０．７７ｍＭのＡｐ４Ｔが生成した。反応生
成物がＡｐ４Ｔであることは核磁気共鳴スペクトルによ
り確認した。
参考例２で得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素に代え
た以外は実施例１と同様にバッチ法でＡｐ４Ｔを合成し
たところ、０．７７ｍＭのＡｐ４Ｔが生成した。反応生
成物がＡｐ４Ｔであることは核磁気共鳴スペクトルによ
り確認した。
【００２０】比較例１ イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素に代えて参考例３で得
たヒスチジル−ｔＲＮＡ合成酵素を用い、イソロイシン
をヒスチジンに代えた以外は実施例１と同様にバッチ法
でＡｐ４Ｔを合成したところ、０．３４ｍＭのＡｐ４Ｔ
が生成した。反応生成物がＡｐ４Ｔであることは核磁気
共鳴スペクトルにより確認した。
たヒスチジル−ｔＲＮＡ合成酵素を用い、イソロイシン
をヒスチジンに代えた以外は実施例１と同様にバッチ法
でＡｐ４Ｔを合成したところ、０．３４ｍＭのＡｐ４Ｔ
が生成した。反応生成物がＡｐ４Ｔであることは核磁気
共鳴スペクトルにより確認した。
【００２１】以上の結果から、アミノアシル−ｔＲＮＡ
合成酵素としてイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用い
ることにより、ＡＴＰとＴＴＰから収率よくＡｐ４Ｔを
合成できることがわかる。
合成酵素としてイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用い
ることにより、ＡＴＰとＴＴＰから収率よくＡｐ４Ｔを
合成できることがわかる。
【００２２】実施例３ ＡＴＰ５ｍＭ、ＴＴＰ５ｍＭ、イソロイシン５ｍＭ、塩
化マグネシウム１５ｍＭ、塩化亜鉛０．５ｍＭ、参考例
１で得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素３５０ユニッ
ト／ｍｌ、イミダゾール緩衝液（ｐＨ７．０）２５ｍＭ
からなる反応溶液に、メタノールを２０ｖ／ｖ％又は水
を添加し、４０℃で反応させた。反応液の量は１００ｍ
ｌであった反応３時間及び２４時間後、それぞれの反応
液で合成されたＡｐ４Ｔ及びＡｐ４ＡをＨＰＬＣで分析
し、Ａｐ４Ｔ合成量及びＡｐ４Ａ合成量に対するＡｐ４
Ｔの合成量を求めた。その結果を表１に示す。
化マグネシウム１５ｍＭ、塩化亜鉛０．５ｍＭ、参考例
１で得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素３５０ユニッ
ト／ｍｌ、イミダゾール緩衝液（ｐＨ７．０）２５ｍＭ
からなる反応溶液に、メタノールを２０ｖ／ｖ％又は水
を添加し、４０℃で反応させた。反応液の量は１００ｍ
ｌであった反応３時間及び２４時間後、それぞれの反応
液で合成されたＡｐ４Ｔ及びＡｐ４ＡをＨＰＬＣで分析
し、Ａｐ４Ｔ合成量及びＡｐ４Ａ合成量に対するＡｐ４
Ｔの合成量を求めた。その結果を表１に示す。
【００２３】
【表１】
【００２４】表１から、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵
素を用いてＡｐ４Ｔを合成する際に、有機溶媒を共存さ
せることにより、Ａｐ４Ｔ合成量及びＡｐ４Ａ合成量に
対するＡｐ４Ｔの合成量を高めることができることがわ
かる。
素を用いてＡｐ４Ｔを合成する際に、有機溶媒を共存さ
せることにより、Ａｐ４Ｔ合成量及びＡｐ４Ａ合成量に
対するＡｐ４Ｔの合成量を高めることができることがわ
かる。
【００２５】
【発明の効果】本発明によれば、Ａｐ４Ｔを高濃度かつ
高収率に合成できる。さらに、高価であるＴＴＰに対す
る収率が高いことから、工業的なＡｐ４Ｔの製造法とし
てきわめて有効である。
高収率に合成できる。さらに、高価であるＴＴＰに対す
る収率が高いことから、工業的なＡｐ４Ｔの製造法とし
てきわめて有効である。
Claims (1)
- 【請求項１】 アデノシン５'−トリリン酸と、チミジ
ン５'−トリリン酸と、イソロイシンとを反応基質とし
て用い、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用に
よりアデノシン（チミジン）−５'，５'''−Ｐ１，Ｐ４
−テトラリン酸を生成させることを特徴とするアデノシ
ン（チミジン）−５'，５'''−Ｐ１，Ｐ４−テトラリン
酸の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10316058A JP2000139491A (ja) | 1998-11-06 | 1998-11-06 | アデノシン（チミジン）−５’，５’’’−ｐ１，ｐ４−テトラリン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10316058A JP2000139491A (ja) | 1998-11-06 | 1998-11-06 | アデノシン（チミジン）−５’，５’’’−ｐ１，ｐ４−テトラリン酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000139491A true JP2000139491A (ja) | 2000-05-23 |
Family
ID=18072800
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10316058A Pending JP2000139491A (ja) | 1998-11-06 | 1998-11-06 | アデノシン（チミジン）−５’，５’’’−ｐ１，ｐ４−テトラリン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000139491A (ja) |
-
1998
- 1998-11-06 JP JP10316058A patent/JP2000139491A/ja active Pending
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