JP2001048896A - 新規ジアデノシンテトラリン酸およびその製造方法 - Google Patents
新規ジアデノシンテトラリン酸およびその製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ジアデノシン５’，５’’’−Ｐ１，Ｐ４−
テトラリン酸より生体内半減期の長い新規ジアデノシン
テトラリン酸及びその製造方法を提供する。 【解決手段】 下記化学式（Ｉ）で示される構造を有す
る新規ジアデノシンテトラリン酸。 【化１】
テトラリン酸より生体内半減期の長い新規ジアデノシン
テトラリン酸及びその製造方法を提供する。 【解決手段】 下記化学式（Ｉ）で示される構造を有す
る新規ジアデノシンテトラリン酸。 【化１】
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、医薬品またはその
原料として有用な新規ジアデノシンテトラリン酸および
その製造方法に関するものである。
原料として有用な新規ジアデノシンテトラリン酸および
その製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】ジアデノシン５’，５’’’−Ｐ１，Ｐ
４−テトラリン酸（以下Ａｐ４Ａという。）は、例えば
リン酸化の阻害作用（Ｐ．Ｆ．Ｍａｎｅｓｓ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５８，ｐ４０５
５，１９８３）、血小板凝集阻害作用（Ｍ．Ｊ．Ｈａｒ
ｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒ
ｓ，５４，ｐ５７，１９７５）、抗不整脈作用（特開平
３−１６７１２６号公報）、低血圧維持作用（特開平５
−２８６８６１号公報）、虚血心筋保護作用（特開平８
−１２５８１号公報）等の生物活性を有し、医薬品また
はその原料として有用な物質である。
４−テトラリン酸（以下Ａｐ４Ａという。）は、例えば
リン酸化の阻害作用（Ｐ．Ｆ．Ｍａｎｅｓｓ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５８，ｐ４０５
５，１９８３）、血小板凝集阻害作用（Ｍ．Ｊ．Ｈａｒ
ｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒ
ｓ，５４，ｐ５７，１９７５）、抗不整脈作用（特開平
３−１６７１２６号公報）、低血圧維持作用（特開平５
−２８６８６１号公報）、虚血心筋保護作用（特開平８
−１２５８１号公報）等の生物活性を有し、医薬品また
はその原料として有用な物質である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、Ａｐ４Ａの血
漿中の半減期は２．９分、全血中の半減期は５．９分で
あり（Ｊ．Ｌｕｔｈｊｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７３，ｐ２４１，１９８８）、Ａ
ｐ４Ａは生体内で分解酵素の働きにより短時間で分解
し、薬効を有していても速やかに消失するため、持続性
に問題があった。本発明は、Ａｐ４Ａと同様の生理作用
を有し、かつ生体内半減期の長い化合物を提供すること
を目的とするものである。
漿中の半減期は２．９分、全血中の半減期は５．９分で
あり（Ｊ．Ｌｕｔｈｊｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７３，ｐ２４１，１９８８）、Ａ
ｐ４Ａは生体内で分解酵素の働きにより短時間で分解
し、薬効を有していても速やかに消失するため、持続性
に問題があった。本発明は、Ａｐ４Ａと同様の生理作用
を有し、かつ生体内半減期の長い化合物を提供すること
を目的とするものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、このよう
な課題を解決するために鋭意検討の結果、下記化学式
（Ｉ）で示される新規ジアデノシンテトラリン酸が生体
内でＡｐ４Ａと同様の生理作用を有し、かつ生体内半減
期が長いということを見出し、本発明に到達した。すな
わち、第１の発明は下記化学式（Ｉ）で示される新規ジ
アデノシンテトラリン酸を要旨とするものである。ま
た、第２の発明は、下記化学式（ＩＩ）で示されるアデ
ノシン５’−（β、γ−チオ）トリリン酸（以下Ａｐｐ
Ｓｐという。）と、アデノシン５’−トリリン酸（以下
ＡＴＰという。）とを反応基質として用い、アミノアシ
ル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用によって下記化学式
（Ｉ）で示される化合物を合成することを特徴とする新
規ジアデノシンテトラリン酸の製造方法を要旨とするも
のである。
な課題を解決するために鋭意検討の結果、下記化学式
（Ｉ）で示される新規ジアデノシンテトラリン酸が生体
内でＡｐ４Ａと同様の生理作用を有し、かつ生体内半減
期が長いということを見出し、本発明に到達した。すな
わち、第１の発明は下記化学式（Ｉ）で示される新規ジ
アデノシンテトラリン酸を要旨とするものである。ま
た、第２の発明は、下記化学式（ＩＩ）で示されるアデ
ノシン５’−（β、γ−チオ）トリリン酸（以下Ａｐｐ
Ｓｐという。）と、アデノシン５’−トリリン酸（以下
ＡＴＰという。）とを反応基質として用い、アミノアシ
ル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用によって下記化学式
（Ｉ）で示される化合物を合成することを特徴とする新
規ジアデノシンテトラリン酸の製造方法を要旨とするも
のである。
【０００５】
【化４】
【０００６】
【化５】
【０００７】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の新規ジアデノシンテトラリン酸は、上記の化学
式（Ｉ）で示される構造を有するものである。このよう
な新規ジアデノシンテトラリン酸は、例えば、ＡｐｐＳ
ｐと、ＡＴＰとを反応基質として用い、アミノアシル−
ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用によって製造することがで
きる。
本発明の新規ジアデノシンテトラリン酸は、上記の化学
式（Ｉ）で示される構造を有するものである。このよう
な新規ジアデノシンテトラリン酸は、例えば、ＡｐｐＳ
ｐと、ＡＴＰとを反応基質として用い、アミノアシル−
ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用によって製造することがで
きる。
【０００８】本発明に使用されるアミノアシル−ｔＲＮ
Ａ合成酵素は、新規ジアデノシンテトラリン酸を合成し
得るものであれば特に酵素の特異性や由来等は限定され
るものではないが、中でもイソロイシル−ｔＲＮＡ合成
酵素、ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素、リジル−ｔＲＮＡ
合成酵素、フェニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素、セリ
ル−ｔＲＮＡ合成酵素、プロリル−ｔＲＮＡ合成酵素、
ヒスチジル−ｔＲＮＡ合成酵素は酵素活性が高く望まし
い。これらの酵素は、市販の酵素を使用してもよいし、
微生物を培養して得られる酵素を使用してもよい。
Ａ合成酵素は、新規ジアデノシンテトラリン酸を合成し
得るものであれば特に酵素の特異性や由来等は限定され
るものではないが、中でもイソロイシル−ｔＲＮＡ合成
酵素、ロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素、リジル−ｔＲＮＡ
合成酵素、フェニルアラニル−ｔＲＮＡ合成酵素、セリ
ル−ｔＲＮＡ合成酵素、プロリル−ｔＲＮＡ合成酵素、
ヒスチジル−ｔＲＮＡ合成酵素は酵素活性が高く望まし
い。これらの酵素は、市販の酵素を使用してもよいし、
微生物を培養して得られる酵素を使用してもよい。
【０００９】微生物を培養してアミノアシル−ｔＲＮＡ
合成酵素を得るには、通常の方法に従って菌体を培養し
た後、例えば圧破砕機や超音波破砕機、ダイノミル（商
標名）等を用いる方法又はリゾチーム、トリトン等を添
加する方法等によって細胞を破砕し、濾過や遠心分離を
行えばよい。本発明においては、このようにして得られ
るアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の抽出物をそのまま
用いてもよく、さらに塩析、カラムクロマトグラフィー
等の通常行われている方法によって精製された酵素を用
いてもよい。
合成酵素を得るには、通常の方法に従って菌体を培養し
た後、例えば圧破砕機や超音波破砕機、ダイノミル（商
標名）等を用いる方法又はリゾチーム、トリトン等を添
加する方法等によって細胞を破砕し、濾過や遠心分離を
行えばよい。本発明においては、このようにして得られ
るアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の抽出物をそのまま
用いてもよく、さらに塩析、カラムクロマトグラフィー
等の通常行われている方法によって精製された酵素を用
いてもよい。
【００１０】また、反応の基質として用いるアデノシン
トリリン酸類は、たとえばシグマ社から市販されている
ので、それぞれ市販品を用いればよい。
トリリン酸類は、たとえばシグマ社から市販されている
ので、それぞれ市販品を用いればよい。
【００１１】本発明においては、膜型又はカラム型の反
応器を用いて連続的に新規ジアデノシンテトラリン酸を
合成してもよいし、バッチ式の反応器を用いて合成して
もよい。反応器として膜型反応器を用いると、酵素は高
分子物質であるのに対して反応生成物は低分子であるの
で、酵素がそのまま反応器の中にとどまった状態で使用
することができるので特に有効である。また、カラム型
反応器を用いる場合には、使用する酵素を適当な担体、
例えば、セルロース、デキストラン、アガロース等のよ
うな多糖類の誘導体、ポリスチレン、エチレン−マレイ
ン酸共重合体、架橋ポリアクリルアミド等のようなビニ
ルポリマーの誘導体、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタミン酸
共重合体、ポリアスパラギン酸等のようなポリアミノ酸
又はアミドの重合体、ガラス、アルミナ、ヒドロキシア
パタイト等のような無機物の誘導体等に結合、包括ある
いは吸着させて、いわゆる固定化酵素としてカラムに充
填して使用すればよい。
応器を用いて連続的に新規ジアデノシンテトラリン酸を
合成してもよいし、バッチ式の反応器を用いて合成して
もよい。反応器として膜型反応器を用いると、酵素は高
分子物質であるのに対して反応生成物は低分子であるの
で、酵素がそのまま反応器の中にとどまった状態で使用
することができるので特に有効である。また、カラム型
反応器を用いる場合には、使用する酵素を適当な担体、
例えば、セルロース、デキストラン、アガロース等のよ
うな多糖類の誘導体、ポリスチレン、エチレン−マレイ
ン酸共重合体、架橋ポリアクリルアミド等のようなビニ
ルポリマーの誘導体、Ｌ−アラニン、Ｌ−グルタミン酸
共重合体、ポリアスパラギン酸等のようなポリアミノ酸
又はアミドの重合体、ガラス、アルミナ、ヒドロキシア
パタイト等のような無機物の誘導体等に結合、包括ある
いは吸着させて、いわゆる固定化酵素としてカラムに充
填して使用すればよい。
【００１２】以下に、バッチ式の反応器で新規ジアデノ
シンテトラリン酸を製造する場合を例にとり、反応条件
について説明する。反応液中のアデノシントリリン酸類
の濃度としては、１０μＭ以上、特に１００μＭ〜１０
０ｍＭ、さらに１〜３０ｍＭが適当である。また、アミ
ノ酸の濃度としては、０．１μＭ以上、特に１μＭ〜１
０ｍＭが好ましい。
シンテトラリン酸を製造する場合を例にとり、反応条件
について説明する。反応液中のアデノシントリリン酸類
の濃度としては、１０μＭ以上、特に１００μＭ〜１０
０ｍＭ、さらに１〜３０ｍＭが適当である。また、アミ
ノ酸の濃度としては、０．１μＭ以上、特に１μＭ〜１
０ｍＭが好ましい。
【００１３】また、アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の
濃度としては、特に限定されるものではないが、通常は
１〜１×１０6ユニット／ｍｌであることが好ましく、
特に１０〜１×１０5ユニット／ｍｌであることが好ま
しい。
濃度としては、特に限定されるものではないが、通常は
１〜１×１０6ユニット／ｍｌであることが好ましく、
特に１０〜１×１０5ユニット／ｍｌであることが好ま
しい。
【００１４】さらに、本発明においては、反応をスムー
ズに進めるために、ピロフォスファターゼや、マグネシ
ウムイオン、マンガンイオン、カルシウムイオン、亜鉛
イオン、コバルトイオン、カドミウムイオン等の金属イ
オン、またメタノール、エタノール、プロパノールなど
の有機溶媒を添加してもよい。
ズに進めるために、ピロフォスファターゼや、マグネシ
ウムイオン、マンガンイオン、カルシウムイオン、亜鉛
イオン、コバルトイオン、カドミウムイオン等の金属イ
オン、またメタノール、エタノール、プロパノールなど
の有機溶媒を添加してもよい。
【００１５】反応に使用する緩衝液としては、酵素、ア
ミノ酸、基質などが溶解し、また酵素活性を維持し、所
定のｐＨが得られるものであれば、いかなるものを使用
してもよい。具体例として、トリス緩衝液、ヘペス緩衝
液などのグッド緩衝液、イミダゾール緩衝液、トリエタ
ノールアミン緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液などが
挙げられる。ｐＨは、おおむね中性付近、すなわちｐＨ
５〜１１、好ましくはｐＨ６〜９の範囲である。
ミノ酸、基質などが溶解し、また酵素活性を維持し、所
定のｐＨが得られるものであれば、いかなるものを使用
してもよい。具体例として、トリス緩衝液、ヘペス緩衝
液などのグッド緩衝液、イミダゾール緩衝液、トリエタ
ノールアミン緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液などが
挙げられる。ｐＨは、おおむね中性付近、すなわちｐＨ
５〜１１、好ましくはｐＨ６〜９の範囲である。
【００１６】また、反応温度としては、酵素の失活が起
こらず、反応がスムーズに進行する範囲であれば特に限
定されるものではないが、２０〜８０℃、特に３０〜５
５℃の範囲が好ましい。反応の時間としては、１００時
間までが好ましく、特に５０時間までが好ましい。
こらず、反応がスムーズに進行する範囲であれば特に限
定されるものではないが、２０〜８０℃、特に３０〜５
５℃の範囲が好ましい。反応の時間としては、１００時
間までが好ましく、特に５０時間までが好ましい。
【００１７】このようにして合成した新規ジアデノシン
テトラリン酸は、イオン交換クロマトグラフィー等一般
に広く用いられている方法で精製し、単離することがで
きる。
テトラリン酸は、イオン交換クロマトグラフィー等一般
に広く用いられている方法で精製し、単離することがで
きる。
【００１８】
【実施例】次に、本発明を実施例によって具体的に説明
する。なお、本発明において用いられるアミノアシル−
ｔＲＮＡ合成酵素におけるユニットは、一般に用いられ
るヒドロキサメートによるアミノアシル−ｔＲＮＡ合成
酵素活性測定法において、１分間に１×１０-11モルの
アミノ酸ヒドロキサメートを生ずる酵素量を１ユニット
とした。この活性測定法の原理は、以下の通りである。
する。なお、本発明において用いられるアミノアシル−
ｔＲＮＡ合成酵素におけるユニットは、一般に用いられ
るヒドロキサメートによるアミノアシル−ｔＲＮＡ合成
酵素活性測定法において、１分間に１×１０-11モルの
アミノ酸ヒドロキサメートを生ずる酵素量を１ユニット
とした。この活性測定法の原理は、以下の通りである。
【００１９】
【式１】
【００２０】また、ジアデノシンテトラリン酸類の定量
は高速液体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣとい
う。）を用いて以下のようにして行った。すなわち、カ
ラムはウォーターズ社製ノバパックＣ１８を用い、過塩
素酸テトラブチルアンモニウム ３ｍＭ、リン酸１カリ
ウム−水酸化カリウム（ｐＨ７．０） ３０ｍＭ、メタ
ノール１５ｖ／ｖ％、水８５ｖ／ｖ％の溶液を移動相と
して、流速１．０ｍｌ／分で流し、検出はＵＶの吸収
（λ＝２５４ｎｍ）を測定することにより行った。
は高速液体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣとい
う。）を用いて以下のようにして行った。すなわち、カ
ラムはウォーターズ社製ノバパックＣ１８を用い、過塩
素酸テトラブチルアンモニウム ３ｍＭ、リン酸１カリ
ウム−水酸化カリウム（ｐＨ７．０） ３０ｍＭ、メタ
ノール１５ｖ／ｖ％、水８５ｖ／ｖ％の溶液を移動相と
して、流速１．０ｍｌ／分で流し、検出はＵＶの吸収
（λ＝２５４ｎｍ）を測定することにより行った。
【００２１】血中半減期を求める際のジアデノシンテト
ラリン酸類の定量はジアデノシンテトラリン酸類をエテ
ノ化した後、ＨＰＬＣを用いて以下のようにして行っ
た。すなわち、カラムは東ソー社製ＴＳＫｇｅｌ ＯＤ
Ｓ−８０ＴＭを用い、リン酸１カリウム−リン酸２カリ
ウム（ｐＨ６．０） ９０ｍＭ、メタノール ９ｖ／ｖ
％の水溶液を移動相として、流速０．７ｍｌ／分で流
し、検出は蛍光波長（励起波長２７５ｎｍ、測定波長４
１０ｎｍ）を測定することにより行った。
ラリン酸類の定量はジアデノシンテトラリン酸類をエテ
ノ化した後、ＨＰＬＣを用いて以下のようにして行っ
た。すなわち、カラムは東ソー社製ＴＳＫｇｅｌ ＯＤ
Ｓ−８０ＴＭを用い、リン酸１カリウム−リン酸２カリ
ウム（ｐＨ６．０） ９０ｍＭ、メタノール ９ｖ／ｖ
％の水溶液を移動相として、流速０．７ｍｌ／分で流
し、検出は蛍光波長（励起波長２７５ｎｍ、測定波長４
１０ｎｍ）を測定することにより行った。
【００２２】参考例１ エシェリチア・コリＮ４８３０−１／ｐＳＩ１０（ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１３９０７号）の菌体１０ｇを、５倍量の２
ｍＭ２−メルカプトエタノールおよび２ｍＭエチレンジ
アミン四酢酸二ナトリウムを含む２５ｍＭリン酸カリウ
ム緩衝液に懸濁し、ソニケータを用いて細胞を破砕した
後、遠心分離により不溶物を除去し、イソロイシル−ｔ
ＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得た。ＤＥＡＥ−セフ
ァロース（ファルマシア社製）を充填したカラムに上記
の粗抽出液を通し、塩化カリウムを含む上記緩衝液で溶
出せしめると、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素が溶出
した。これを集め、濃縮、脱塩を行った結果、３０キロ
ユニット／ｍｌのイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含
む粗抽出液４．０ｍｌを得た。上記操作をすべて４℃に
て行った。
ＲＭ Ｐ−１３９０７号）の菌体１０ｇを、５倍量の２
ｍＭ２−メルカプトエタノールおよび２ｍＭエチレンジ
アミン四酢酸二ナトリウムを含む２５ｍＭリン酸カリウ
ム緩衝液に懸濁し、ソニケータを用いて細胞を破砕した
後、遠心分離により不溶物を除去し、イソロイシル−ｔ
ＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得た。ＤＥＡＥ−セフ
ァロース（ファルマシア社製）を充填したカラムに上記
の粗抽出液を通し、塩化カリウムを含む上記緩衝液で溶
出せしめると、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素が溶出
した。これを集め、濃縮、脱塩を行った結果、３０キロ
ユニット／ｍｌのイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を含
む粗抽出液４．０ｍｌを得た。上記操作をすべて４℃に
て行った。
【００２３】参考例２ バチルス・ステアロサーモフィルスＮＣＡ１５０３（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−４７７８号）の菌体３００ｇを、５倍量の
２ｍＭ２−メルカプトエタノールおよび２ｍＭエチレン
ジアミン四酢酸二ナトリウムを含む２５ｍＭリン酸カリ
ウム緩衝液に懸濁し、ソニケータを用いて細胞を破砕し
た後、遠心分離により不溶物を除去し、プロリル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得た。これを参考例１と
同様に精製、濃縮および脱塩した結果、４０キロユニッ
ト／ｍｌのプロリル−ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液
１．０ｍｌを得た。上記操作をすべて４℃にて行った。
ＥＲＭ Ｐ−４７７８号）の菌体３００ｇを、５倍量の
２ｍＭ２−メルカプトエタノールおよび２ｍＭエチレン
ジアミン四酢酸二ナトリウムを含む２５ｍＭリン酸カリ
ウム緩衝液に懸濁し、ソニケータを用いて細胞を破砕し
た後、遠心分離により不溶物を除去し、プロリル−ｔＲ
ＮＡ合成酵素を含む粗抽出液を得た。これを参考例１と
同様に精製、濃縮および脱塩した結果、４０キロユニッ
ト／ｍｌのプロリル−ｔＲＮＡ合成酵素を含む粗抽出液
１．０ｍｌを得た。上記操作をすべて４℃にて行った。
【００２４】実施例１ 参考例１で得たイソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用い
て、バッチ法で新規ジアデノシンテトラリン酸の合成を
行った。このとき、ＡＴＰ５ｍＭ、ＡｐｐＳｐ（シグマ
社製）２ｍＭ、イソロイシン２．５ｍＭ、塩化マグネシ
ウム１０ｍＭ、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素１００
０ユニット／ｍｌ、イミダゾール緩衝液（ｐＨ７．０）
２５ｍＭ、メタノール１５ｖ／ｖ％からなる反応溶液６
０ｍｌを、３７℃で２時間反応させた。得られた反応生
成物を、ノバパックＣ１８（ウォーターズ社製）カラム
を用いてＨＰＬＣで分析したところ、１．１ｍＭの新規
ジアデノシンテトラリン酸が生成していた。これをＤＥ
ＡＥ−セファロース樹脂（ファルマシア社製）を充填し
たカラム（φ２２ｍｍ×１００ｍｍ）に通液し、０．０
５Ｍの塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、０．０５〜
０．２５Ｍの塩化ナトリウム水溶液の塩濃度勾配により
溶出した。通液速度は、いずれも毎分２．８ｍｌとし
た。反応生成物が新規ジアデノシンテトラリン酸である
ことを核磁気共鳴スペクトルおよびＦＡＢマススペクト
ルで確認した。図１は、本発明の新規ジアデノシンテト
ラリン酸の核磁気共鳴スペクトル（1Ｈ）であり、図２
は、本発明の新規ジアデノシンテトラリン酸の核磁気共
鳴スペクトル（13Ｃ）であり、図３は、本発明の新規ジ
アデノシンテトラリン酸のＦＡＢマススペクトルを示す
図である。
て、バッチ法で新規ジアデノシンテトラリン酸の合成を
行った。このとき、ＡＴＰ５ｍＭ、ＡｐｐＳｐ（シグマ
社製）２ｍＭ、イソロイシン２．５ｍＭ、塩化マグネシ
ウム１０ｍＭ、イソロイシル−ｔＲＮＡ合成酵素１００
０ユニット／ｍｌ、イミダゾール緩衝液（ｐＨ７．０）
２５ｍＭ、メタノール１５ｖ／ｖ％からなる反応溶液６
０ｍｌを、３７℃で２時間反応させた。得られた反応生
成物を、ノバパックＣ１８（ウォーターズ社製）カラム
を用いてＨＰＬＣで分析したところ、１．１ｍＭの新規
ジアデノシンテトラリン酸が生成していた。これをＤＥ
ＡＥ−セファロース樹脂（ファルマシア社製）を充填し
たカラム（φ２２ｍｍ×１００ｍｍ）に通液し、０．０
５Ｍの塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後、０．０５〜
０．２５Ｍの塩化ナトリウム水溶液の塩濃度勾配により
溶出した。通液速度は、いずれも毎分２．８ｍｌとし
た。反応生成物が新規ジアデノシンテトラリン酸である
ことを核磁気共鳴スペクトルおよびＦＡＢマススペクト
ルで確認した。図１は、本発明の新規ジアデノシンテト
ラリン酸の核磁気共鳴スペクトル（1Ｈ）であり、図２
は、本発明の新規ジアデノシンテトラリン酸の核磁気共
鳴スペクトル（13Ｃ）であり、図３は、本発明の新規ジ
アデノシンテトラリン酸のＦＡＢマススペクトルを示す
図である。
【００２５】ヘパリンナトリウムを含む市販の採血管に
採血した血液に、Ａｐ４Ａまたは新規ジアデノシンテト
ラリン酸を５μｇ／ｍｌとなるよう添加し、３７℃で保
温した。フッ化ナトリウム、ヘパリンナトリウムおよび
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを含む市販の採血
管に、経時的に血液を採取した。遠心分離後、血漿を得
た。血漿０．２ｍｌに１０％過塩素酸０．１ｍｌを添加
混合して遠心分離した。上清０．１５ｍｌに２Ｍ炭酸水
素カリウム０．０７５ｍｌを添加混合して遠心分離し
た。上清０．１５ｍｌに２Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ４．５）０．０３７５ｍｌおよび４０％クロロアセト
アルデヒド溶液０．００３ｍｌを添加混合し、８０℃で
エテノ化した。ＨＰＬＣ分析したところ、Ａｐ４Ａの半
減期は６．７分であったのに対し、新規ジアデノシンテ
トラリン酸の半減期は１１．０分であった。
採血した血液に、Ａｐ４Ａまたは新規ジアデノシンテト
ラリン酸を５μｇ／ｍｌとなるよう添加し、３７℃で保
温した。フッ化ナトリウム、ヘパリンナトリウムおよび
エチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを含む市販の採血
管に、経時的に血液を採取した。遠心分離後、血漿を得
た。血漿０．２ｍｌに１０％過塩素酸０．１ｍｌを添加
混合して遠心分離した。上清０．１５ｍｌに２Ｍ炭酸水
素カリウム０．０７５ｍｌを添加混合して遠心分離し
た。上清０．１５ｍｌに２Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ４．５）０．０３７５ｍｌおよび４０％クロロアセト
アルデヒド溶液０．００３ｍｌを添加混合し、８０℃で
エテノ化した。ＨＰＬＣ分析したところ、Ａｐ４Ａの半
減期は６．７分であったのに対し、新規ジアデノシンテ
トラリン酸の半減期は１１．０分であった。
【００２６】実施例２ 参考例２で得たプロリル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いて、
バッチ法で新規ジアデノシンテトラリン酸の合成を行っ
た。このとき、ＡＴＰ５ｍＭ、ＡｐｐＳｐ３ｍＭ、プロ
リン２．５ｍＭ、塩化マグネシウム１０ｍＭ、塩化亜鉛
０．２ｍＭ、塩化カリウム１５０ｍＭ、ピロフォスファ
ターゼ８ユニット／ｍｌ、プロリル−ｔＲＮＡ合成酵素
１００ユニット／ｍｌ、トリス緩衝液（ｐＨ８．０）２
０ｍＭからなる反応溶液を、３７℃で２４時間反応させ
た。得られた反応生成物を、ノバパックＣ１８（ウォー
ターズ社製）カラムを用いてＨＰＬＣで分析したとこ
ろ、０．８０ｍＭの新規ジアデノシンテトラリン酸が生
成していた。実施例１と同様の方法により新規ジアデノ
シンテトラリン酸を精製した後、反応生成物が新規ジア
デノシンテトラリン酸であることを核磁気共鳴スペクト
ルおよびＦＡＢマススペクトルで確認した。
バッチ法で新規ジアデノシンテトラリン酸の合成を行っ
た。このとき、ＡＴＰ５ｍＭ、ＡｐｐＳｐ３ｍＭ、プロ
リン２．５ｍＭ、塩化マグネシウム１０ｍＭ、塩化亜鉛
０．２ｍＭ、塩化カリウム１５０ｍＭ、ピロフォスファ
ターゼ８ユニット／ｍｌ、プロリル−ｔＲＮＡ合成酵素
１００ユニット／ｍｌ、トリス緩衝液（ｐＨ８．０）２
０ｍＭからなる反応溶液を、３７℃で２４時間反応させ
た。得られた反応生成物を、ノバパックＣ１８（ウォー
ターズ社製）カラムを用いてＨＰＬＣで分析したとこ
ろ、０．８０ｍＭの新規ジアデノシンテトラリン酸が生
成していた。実施例１と同様の方法により新規ジアデノ
シンテトラリン酸を精製した後、反応生成物が新規ジア
デノシンテトラリン酸であることを核磁気共鳴スペクト
ルおよびＦＡＢマススペクトルで確認した。
【００２７】
【発明の効果】本発明の新規ジアデノシンテトラリン酸
は、Ａｐ４Ａより生体内での半減期が長く、低容量の投
与で長時間作用が持続する。また、本発明によれば、ア
ミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いることで、高収率
に新規ジアデノシンテトラリン酸を得ることができる。
は、Ａｐ４Ａより生体内での半減期が長く、低容量の投
与で長時間作用が持続する。また、本発明によれば、ア
ミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素を用いることで、高収率
に新規ジアデノシンテトラリン酸を得ることができる。
【図１】本発明の新規ジアデノシンテトラリン酸の核磁
気共鳴スペクトル（1Ｈ）を示す図である。
気共鳴スペクトル（1Ｈ）を示す図である。
【図２】本発明の新規ジアデノシンテトラリン酸の核磁
気共鳴スペクトル（13Ｃ）を示す図である。
気共鳴スペクトル（13Ｃ）を示す図である。
【図３】本発明の新規ジアデノシンテトラリン酸のＦＡ
Ｂマススペクトルを示す図である。
Ｂマススペクトルを示す図である。
Claims (2)
- 【請求項１】 下記化学式（Ｉ）で示される構造を有す
る新規ジアデノシンテトラリン酸。 【化１】 - 【請求項２】 下記化学式（ＩＩ）で示されるアデノシ
ン５’−（β，γ−チオ）トリリン酸と、アデノシン
５’−トリリン酸とを反応基質として用い、アミノアシ
ル−ｔＲＮＡ合成酵素の触媒作用によって下記化学式
（Ｉ）で示される化合物を合成することを特徴とする新
規ジアデノシンテトラリン酸の製造方法。 【化２】 【化３】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22845999A JP2001048896A (ja) | 1999-08-12 | 1999-08-12 | 新規ジアデノシンテトラリン酸およびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22845999A JP2001048896A (ja) | 1999-08-12 | 1999-08-12 | 新規ジアデノシンテトラリン酸およびその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001048896A true JP2001048896A (ja) | 2001-02-20 |
Family
ID=16876828
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22845999A Pending JP2001048896A (ja) | 1999-08-12 | 1999-08-12 | 新規ジアデノシンテトラリン酸およびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001048896A (ja) |
-
1999
- 1999-08-12 JP JP22845999A patent/JP2001048896A/ja active Pending
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