JP2000136135A

JP2000136135A - 光学活性化合物を用いた組成物

Info

Publication number: JP2000136135A
Application number: JP11320021A
Authority: JP
Inventors: Hamish C S Wood; クリストファースワンウッドハーミッシュ; Colin J Suckling; ジェイムスサックリングコリン; Lilias Rees; リーズリリアス
Original assignee: University of Strathclyde
Current assignee: University of Strathclyde
Priority date: 1986-09-03
Filing date: 1999-11-10
Publication date: 2000-05-16
Also published as: CA1339368C; US4959472A; EP0608002A1; JP2844532B2; ZA876562B; ATE230746T1; US6849628B2; DE3752384T2; AU7777587A; EP0266042A3; EP0266042A2; AU598024B2; ATE295173T1; JPS63115880A; DE3752362T2; ES2191669T3; DE3752361D1; DE3752361T2; GB8621268D0; ES2241933T3

Abstract

(57)【要約】【課題】テトラヒドロホレート誘導体の実質的に純粋
なジアステレオマーを薬剤的に許容される担体と組合せ
た組成物を提供する。【解決手段】（６Ｓ）と（６Ｒ）ジアストレオマーの
等量混合物から（６Ｓ）ジアストレオマーの極性溶剤が
備える異なる溶解度を利用して分離した結果得られる結
腸直腸癌の治療用調剤組成物であって；ａ）９５重量％
以上の５−ホルミル−テトラヒドロホレートカルシウム
の（６Ｓ）ジアステレオマーの形の治療上アクセプタブ
ル化合物で、５重量％以下の５−ホルミル−テトラヒド
ロホレートカルシウムの（６Ｒ）ジアステレオマーを含
み、ｂ）前記アクセプタブル化合物の量は少なくとも１
０.４ｇであり、かつｃ）該組成物は、ヒト治療用アク
セプタブル担体と組合わせた、前記ａ）に限定した化合
物を１日当たり投与量２００から２０００ｍｇの治療有
効量の形式とした調剤組成物。また、この組成物に、更
に少量の５−フルオロウラシルを含ませてなる調剤組成
物である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は実質的に純粋なジア
ステレオマーであるテトラヒドロ葉酸エステル誘導体の
組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】メトトレキセート［Ｎ−（４−（（２，
４−ジアミノ−６−プテルジル）メチル）メチルアミ
ノ）ベンゾイル−Ｌ−グルタミン酸］は、ジヒドロ葉酸
エステル還元酵素（ＤＨＦＤ）のインヒビターであっ
て、このものはデオキシウリジレートのチミジレートへ
の転化を阻止し、従って、ＤＮＡの生合成を阻止するの
で、癌の化学療法に一般に使用されている。しかし、多
くの抗癌剤と同様に、このメトトレキセートは正常細胞
にも毒性があるため、多量のメトトレキセートを投与し
た場合には、その後の１２〜２４時間は「レスキュー
剤」がしばしば投与される。ロイコボリン（５−ホルミ
ルテトラヒドロ葉酸）がメトトレキセートのレスキュー
剤として一般に使用される。

【０００３】ロイコボリンは二つのキラル中心を有し、
市販の製品「ウェルカム・ファンディション・リミッド
のウエルコボリン（ＲＴＭ）」は式（Ｉａ）及び（Ｉ
ｂ）の化合物（いずれもカルシウム塩の形）を等量含
み、これらの化合物はそれぞれ６位の炭素で（Ｒ）及び
（Ｓ）立体化学の性質を備えている。

【０００４】

【化１】

【０００５】天然のジアステレオマーである（６Ｓ）ジ
アステレオマー（Ｉｂ）だけが一炭素代謝を回復するの
に有効であって、それ故にメトトレキセートのレスキュ
ーに有用であることが報告されている（モトゴメリーほ
か「カンサー・トリートメント・リポート」、1980,65,
1117-1119参照）。Ｌ．カセイからのチミジレートシン
ターゼは非天然のジアステレオマーである５，１０−メ
チレンテトラヒドロ葉酸エステルによって抑制されるこ
とが報告され（リアリーほか「バイオケミカル・バイオ
フィジカル・リサーチ・コミュニケーション」、1973,5
6,484参照）、また大腸菌（Ｅ，コリ）からの５，１０
−メチレンテトラヒドロ葉酸エステルデヒドロゲナーゼ
も同じジアステレオマーによって抑制されることが報告
されている（スコット及びドナルドソン「バイオケミカ
ル・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーショ
ン」、1984,147,523参照）。さらに、非天然のジアステ
レオマーである１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸エステ
ルは、鶏の肝臓からのグリシナミドリボヌクレオチド
（ＧＡＲ）ホルミル−トランスフェラーゼの強い競争的
な抑制剤である（スミス、ベンコビック及びベンコビッ
ク「バイオケミストリー」、1981,20,4034参照）。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】これらの報告は非天然
のジアステレオマーであるテトラヒドロ葉酸エステルの
一炭素誘導体によって、ピリミジン及びプリンの両方の
生合成が抑制され、従ってＤＮＡの生合成も抑制される
ことを意味する。もし、これらの抑制が哺乳類系でも存
在すれば、ロイコボリンの天然の（６Ｓ）ジアステレオ
マーに対し、臨床的な潜在的要請がある。ロイコボリン
の二つのジアステレオマーを分離することは、分別結晶
法（コウリッヒほか「ジャーナル・オブ・アメリカン・
ケミカル・ソサイェテー」、1952,74,4215参照）やクロ
マトグラフィー（フィーニーほか「バイオケミストリ
ー」、1981,20,1837参照）で行われている。そして、
（６Ｓ）ジアステレオマーは酵素を触媒としてジヒドロ
葉酸エステルを還元し、次いでホルミル化することで得
られているが（リー、バレンテ、サックリング及びウッ
ド、「テトラヒドロン」、1986,42,117参照）、ホルミ
ル化の収率が低く、また還元工程では妥当な純度で異性
体を得ることが難しい。本発明は、これらの不利益を解
消するとともに、テトラヒドロホレート誘導体の実質的
に純粋なジアステレオマーを薬剤的に許容される担体と
組合せた薬剤組成物を提供することを目的とするもので
ある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】ここにおいて、本発明者
等はテトラヒドロ葉酸エステル又はその誘導体ノエピメ
リック中心に近い６位の炭素に、キラル補助グループを
導入すると、新しい一対のジアステレオマーの分離が容
易になり、分離されたジアステレオマーは高収率で純粋
な（Ｉａ）及び（Ｉｂ）に転化することを見出し、この
所見に基づいて本発明を完成したものである。すなわ
ち、請求項１は、（６Ｓ）と（６Ｒ）ジアストレオマー
の等量混合物から（６Ｓ）ジアストレオマーの極性溶剤
が備える異なる溶解度を利用して分離した結果得られる
結腸直腸癌の治療用調剤組成物であって；ａ）９５重量
％以上の５−ホルミル−テトラヒドロホレートカルシウ
ムの（６Ｓ）ジアステレオマーの形の治療上アクセプタ
ブル化合物で、５重量％以下の５−ホルミル−テトラヒ
ドロホレートカルシウムの（６Ｒ）ジアステレオマーを
均衡させ、ｂ）前記アクセプタブル化合物の量は少なく
とも１０.４ｇであり、かつｃ）該組成物は、ヒト治療
用アクセプタブル担体と組合わせた、前記ａ）に限定し
た化合物を１日当たり投与量２００から２０００ｍｇの
治療有効量の形式であることを特徴とする。請求項２
は、請求項１に記載の組成物に、更に．２００から．２
０００ｍｇの５−フルオロウラシルを含ませてなる調剤
組成物である。また、請求項３は、（６Ｓ）と（６Ｒ）
ジアストレオマーの等量混合物から（６Ｓ）ジアストレ
オマーの極性溶剤が備える異なる溶解度を利用して分離
した結果得られる治療用調剤組成物であって；ａ）９５
重量％以上の５−ホルミル−テトラヒドロホレートカル
シウムの（６Ｓ）ジアステレオマーの形の治療上アクセ
プタブル化合物で、５重量％以下の５−ホルミル−テト
ラヒドロホレートカルシウムの（６Ｒ）ジアステレオマ
ーを均衡させ、ｂ）前記アクセプタブル化合物の量は少
なくとも１０.４ｇであり、かつｃ）該組成物は、ヒト
治療用アクセプタブル担体と組合わせた、前記ａ）に限
定した化合物を１日当たり投与量２００から２０００ｍ
ｇの治療有効量の形式であることを特徴とする。

【０００８】本発明は、テトラヒドロ葉酸誘導体の実質
的に純粋な所望の６Ｒ又は６Ｓジアステレオマーを調製
するものであって；ａ）テトラヒドロ葉酸又はその誘導
体である葉酸塩又は葉酸エステルのジアステレオマー６
Ｒ及び６Ｓの混合物のＮ−５もしくはＮ−１０のいずれ
かにキラル補助グループを付与させて一対の新しいジア
ステレオマーを形成させ；ｂ）一対の新しいジアステレ
オマーを分離し、新しいジアステレオマー（６Ｒ又は６
Ｓ）を回収して対応する所望のジアステレオマー（６Ｒ
又は６Ｓ）を形成させ；ｃ）こうして単離された実質的
に純粋な新しいジアステレオマーを、テトラヒドロ葉酸
又はその塩もしくはそのエステルの対応する所望のジア
ステレオマー（６Ｒ又は６Ｓ）に転化する工程を含む。
テトラヒドロ葉酸、その塩及びそのエステルの適当な誘
導体には、ロイコボリン、５−メチルテトラヒドロホレ
ート、５，１０−メテニルテトラヒドロホレート、５，
１０−メチレンテトラヒドロホレート等が含まれる。ロ
イコボリンは本発明にとって好ましいテトラヒドロホレ
ート誘導体である。誤解のないように付言すれば、本発
明はテトラヒドロ葉酸の塩とエステルの両方を包含す
る。便宜上、ここではテトラヒドロホレート又は置換テ
トラヒドロホレートと呼ぶが、特に断らない限り、これ
らはフリーの酸、塩及びエステルを指す。特に好ましい
生理学的に許容される塩にはカルシウム塩が含まれる。
また、適当なエステルには低級アルキルエステルが含ま
れる。

【０００９】

【発明の実施の形態】キラル補助グループは当業界で公
知の標準的方法で導入することができ、例えばペプチド
化学でアミノグループを保護するための方法で導入する
ことができる。適当なキラル補助グループは、一対の新
しいジアステレオマーを分離した後に除去が容易なもの
である。テトラヒドロホレートとの反応でウレタンを形
成するようなキラルアルコールは、特に好適な補助グル
ープである。（−）メントール（−）ボルネオール、
（−）イソボルネオール（Ｒ）及び（Ｓ）−ブタン−２
−オール、（Ｓ）−２−メチルブタン−１−オール、
（Ｒ）−１−フェニルプロパノール、（Ｒ）及び（Ｓ）
−２−メチルフェニル−プロパン−１−オール、（Ｒ）
及び（Ｓ）−オクタン−２−オール、（Ｒ）及び（Ｓ）
−１，２，３，４−テトラヒドロ−１−ナフトール、
（１Ｓ）−ノポール、（１Ｓ，２Ｓ，５Ｓ）−ミルタノ
ール、（１Ｒ）−ミルテノール、（Ｓ）−Ｂ−シトロネ
ロール、（−）−８−フェニルメンソールおよび（１
Ｓ，２Ｒ，５Ｒ）−イソメンソールのようなキラルアル
コールのホルメ−トエステル、例えばクロロホルメート
エステルは、テトラヒドロホレートのＮ−５にキラル補
助グループを付加するための好ましい試薬である。Ｎ−
５が未置換であると、反応はこの位置で起こり、さもな
ければＮ−１０で反応が起こる。Ｎ−１０で反応が起こ
った場合、Ｎ−５の置換基は所望のテトラヒドロホレー
ト誘導体のＮ−５に付加したグループであるか、そのグ
ループに転化可能なものであるべきである。Ｎ−５の好
ましいグループはホルミル基、メチル基またはこれらの
基に変るものである。キラルアルコールのコロルホルメ
ートとテトラヒドロ葉酸との反応は、極性溶媒中で、例
えばエタノールのようなアルコールの水溶液中で、ほぼ
中性の領域のｐＨで都合よく生起する。この反応は−２
０〜１００℃の温度で進行し、好ましくは室温で進行す
る。

【００１０】こうして生成した一対の新しいジアステレ
オマーは、結晶化法、クロマトグラフィー、溶媒抽出な
どの標準的方法で分離される。溶媒抽出及び再結晶法で
使用される溶媒は適当な極性溶媒であって、好ましくは
アルコールが使用される。従って、例えば５−（−）メ
ンチルオキシカルボニル−テトラヒドロ葉酸の場合は、
ジアステレオマーがブタン−１−オール中への溶解度の
違いによって分離される。第１図はロイコボリンのジア
ステレオマーのサンプルの調整に必要な反応と分離の工
程を示している。５−（−）ボルニルオキシカルボニル
−テトラヒドロ葉酸の場合は、ジアステレオマーがブタ
ン−１−オール中への、又はブタン−２−オールへの溶
解度の違いによって分離される。必要に応じて純度を向
上させるために、溶媒抽出又は分別結晶工程を繰返すこ
ともできる。通常は純度９０％以上のジアステレオマー
が回収できるまで工程を繰返す。

【００１１】分離されたジアステレオマーからキラル補
助グループを取除くことは、ペプチド合成で普通採用さ
れる方法に従い、酸で処理することによって行われる。
使用可能な酸には、臭化水素酸、硫酸のような鉱酸、ギ
酸、酢酸、三弗化酢酸のような有機酸又はこれらの混合
物が含まれる。従って、例えばテトラヒドロホレートの
５−（−）メンチルオキシカルボニル誘導体又は５−
（−）ボルニルオキシカルボニル誘導体は、ギ酸と臭化
水素と酢酸の混合物で処理される（図１参照）。この方
法でキラル補助グループが除去されると、５，１０−メ
テニルテトラヒドロホレートの個々のジアステレオマー
が形成され、次いでこれらはさらに所望のテトラヒドロ
ホレート誘導体に転化される。

【００１２】従って、例えば、５，１０−メテニルテト
ラヒドロホレートの個々のジアステレオマーは、英国特
許第１５６０３７２号に記載されているような当業界で
公知の方法により、中性のｐＨでロイコボリンの純粋な
ジアステレオマーに容易に転化できる。あるいはまた、
５，１０−メテニルテトラヒドロホレートの個々のジア
ステレオマーは、チャナリン及びペリーが記載した（バ
イオケミストリー・ジャーナル、1967,105,633参照）と
同様な方法で例えばナトリウムボロハイドライドで還元
することにより、５−メチルテトラヒドロホレートの個
々のジアステレオマーに転化することができる。５，１
０−メチレンテトラヒドロホレートの個々のジアステレ
オマーは、例えばホルムアルデヒドの存在下に分離され
た中間体ジアステレオマーからキラル補助グループを外
すことによって調製できる。５，１０−メチレンテトラ
ヒドロホレート自体は、サカミが「バイオケミカル・プ
レパレーション」、1963, 10, 103 に記載した方法及び
ホワイト、ベイリー及びゴールドマンが「バイオロジカ
ル・ケミストリー」、1978,253,242に記載した方法に類
似する方法で、例えばナトリウムボロハイドライドで還
元することにより、５−メチルテトラヒドロホレートに
転化される。

【００１３】この明細書で「実質的に純粋な」とは、ジ
アステレオマーの純度が８０％以上、好ましくは９０％
以上、さらに好ましくは９５％以上であることをいう。
本発明はまた、テトラヒドロホレートの実質的に純粋な
ジアステレオマーを提供する。好ましい具体例に於いて
は、本発明はロイコボリンの実質的に純粋なジアステレ
オマーを提供する。ジアステレオマーの純度は、ナトリ
ウムシアノボロハイドライドの存在下でのＤ−グリセリ
ンアルデヒドとの反応及び形成された新ジアステレオマ
ーのＮＭＲスペクトルによって確認できる（図１参
照）。テトラヒドロ葉酸又は置換テトラヒドロ葉酸のＮ
−５またはＮ−１０にキラル補助グループが付いた中間
体化合物は新規化合物であって、これは本発明のもう一
つの特徴である。

【００１４】そうした新規化合物は、（６Ｒ）及び（６
Ｓ）５−（−）メンチルオキシカルボニル−テトラヒド
ロ葉酸（図１参照）、（６Ｒ）及び（６Ｓ）５−（−）
ボルニルオキシカルボニル−テトラヒドロ葉酸（図２参
照）、（６Ｒ）及び（６Ｓ）５−（−）イソボルニルオ
キシカルボニル−テトラヒドロ葉酸（図３参照）、並び
にこれらの塩及びエステル等である。本発明の新規中間
体はプレリジン環の６位にキラル中心を有し、それ故、
（６Ｒ）または（６Ｓ）異性体として、あるいはジアス
テレオマーの混合物として存在する。

【００１５】また、本発明は、テトラヒドロホレート誘
導体の実質的に純粋なジアステレオマーを薬剤的に許容
される担体と組合せた薬剤組成物を提供する。適当な担
体にはロイコボリン含有薬剤組成物を調製する際に当業
界で公知の担体が含まれる。一般に、本発明の組成物
は、商品名ウエルコボリンで市販されている公知のロイ
コボリン組成物と同様に調合される（例えば、「フィジ
シャンス・デスクマニュアル」、1986,769頁及びマルテ
ィンダーレの「ザ・エキストラ・ファーマソピーア」26
版、1948頁参照）。ロイコボリンの実質的に純粋な６Ｓ
ジアステレオマーは、メトトレキセートのようなDHFR抑
制剤の作用を中和するレスキュー剤として使用できる。
また、ホレート欠乏症の治療にも使用できる。さらに結
腸癌、直腸癌の治療に５−フルオロウラシルとの組合せ
で使用可能である（マコヴァーほか、「カンサー・トリ
ートメント・リポート」、1982,66,1803頁及びマダジェ
ビィック等、「カンサー・リサーチ」、1984,44,4467頁
参照）。従って、本発明はこのような病気を治療するた
めの薬剤の調製及び哺乳類のこのような疾患を治療する
方法を包含する。本発明の化合物は好適には塩の形で、
特にカルシウム塩の形で使用される。ロイコボリンの実
質的に純粋な６Ｓ−ジアステレオマーは経口的にまたは
非経口的に投与でき、また通常の方法で調合できる。適
当な調合には注射可能な溶液、注入用粉末（これは使用
直前に水を加え注射液とされる）及び錠剤がある。メト
トレキセートのレスキュー剤として使用する場合、ロイ
コボリンの６Ｓ−ジアステレオマーの投薬量は、投与さ
れたメトトレキセートの量に依存するが、典型的には１
日の投与量は一般に１５０ｍｇまでであって、例えば２
５〜１５０ｍｇが２〜４回に分けて投与される。ホレー
ト欠乏症の治療には一般に少量のロイコボリンが投与さ
れ、成人に対する１日当たりの投与量は通常２〜２５ｍ
ｇの範囲で、これらは錠剤の形で１回投与される。結腸
直腸癌の治療には、成人に対する１日当たりの典型的な
投与量は通常２００〜２０００ｍｇで、少量（．２００
〜．２０００ｍｇ）の５−フルオロウラシルと共に投与
される。５−メチルテトラヒドロホレートは、食事療法
の補充物として使用される。

【００１６】

【実施例】下記の実施例は本発明を限定することなくさ
らに詳しく説明するものであり、これらは添付の図面で
も図示される。なお、図２および図３は前述のごとき手
法によってテトラヒドロホレートの誘導体を調製する場
合の図式を示すものである。実施例に於いて、物理的特
性は次のように測定した。核磁気共鳴（ＮＭＲ）：ブルカー(Bruker)HW-２５０分
光計を用いて測定。内部標準物質にはテトラメチルシラ
ンを使用。旋光度：通路長１デシメーターのジャケット付きセ
ルを有するパーキン・エルマー（Perkin Elmer)241偏光
計を使用して測定。

【００１７】〈実施例１〉メンチルオキシカルボニル誘
導体を経て５−ホルミル−（６Ｒ及び６Ｓ）テトラヒド
ロ葉酸カルシウムの調製。（ｉ）５−（−）メンチルオキシカルボニル−テトラヒ
ドロ葉酸（３ａ，３ｂ）の混合ジアステレオマー（６
Ｓ）の調製。メカニカルスターラー、無酸素窒素用のガス出入口、等
圧に保持できる滴下ロートを備えた１０リットルの三つ
口フラスコで、葉酸５０ｇを蒸留水１０５０ｍｌに分
散させた。以下すべての作業を窒素中で行った。フラス
コを氷−水浴中に漬け、水酸化ナトリウムの水溶液（５
０％，２１ｍｌ）を加え、次いで水（１５０ｍｌ）にナ
トリウムボロハイドライド（５０ｇ）を溶かした溶液を
３０分間で滴下した。反応混合物を０〜５℃で４．５時
間撹拌し、次に蒸留水（１５０ｍｌ）にナトリウムボロ
ハイドライド（５０ｇ）を溶かした溶液を３０分間で滴
下した。この混合物を窒素雰囲気で一夜撹拌した。この
反応混合物を氷−水浴に漬け、これに濃塩酸（１７５ｍ
ｌ）を４５分間で滴下することで過剰のナトリウムボロ
ハイドライドを分解させた。脱ガスし、窒素で飽和させ
たトリス−塩化水素緩衝液（５０ｍＭ，ｐＨ７，１リッ
トル）をこれに加えてｐＨを７に調節した。エタノール
（２．５リットル、脱ガスし、窒素で飽和したもの）
に、（−）メンチルクロロホルメート（３０ｍｌ）を溶
かした溶液を、溶液調製後直ちに添加し、全体を室温で
２１．５時間撹拌した。ロータリーエバポレーターを使
用して反応混合物の容量を半分に減少させて濾過した。
濾液を氷−水浴で冷却しｐＨ３に調節した。分離した粗
生成物を遠心分離機で収集し、水酸化ナトリウム水溶液
（０．５Ｍ、１．５リットル）に溶解して濾過し、再度
ｐＨ３に調節して再沈殿させることにより精製した。こ
のスラリーを遠心分離し、固形分を少量の水で洗浄して
濾過した。得られた固形物を吸引乾燥し、最後に五酸化
リン上で真空乾燥することにより、５−（−）メンチル
オキシカルボニルーテトラヒドロ葉酸の混合ジアステレ
オマー（８８ｇ）を得た。

【００１８】（ｉｉ）５−（−）メンチルオキシカルボ
ニル−テトラヒドロ葉酸（３ａ及び３ｂ）の混合ジアス
テレオマー（６ＲＳ）の分離。ジアステレオマーの乾燥混合物（１７ｇ）を乾燥ブタン
−１−オール（１．５リットル）と一夜撹拌した。混合
物を遠心分離して可溶性フラクション（Ｉ）と不溶性フ
ラクション（II）を得た。以下、分離プロセスの工程を
図４に示す。ロータリーエバポレーターを使用して可溶
性フラクション（Ｉ）を温度５０〜６０℃で容量を４０
０ｍｌに減少させた。これによって新しい沈殿（IV）が
得られたので、これを遠心分離で集めた。上澄（III）
を蒸発乾固して（６Ｒ）テトラヒドロ葉酸のメンチロキ
シカルボニル誘導体（５．５ｇ）を得た。沈殿（IV）は
下記のようにして得られた可溶性フラクション（Ｖ）と
混合した。不溶性フラクション（II）は１リットルのブ
タン−１−オールと一夜撹拌して第２のブタノール抽出
を行った。これによって可溶性フラクション（Ｖ）が得
られるので、これを蒸発乾固して上記のように使用し、
一方、不溶性物質（VI）を五酸化リン上で真空乾燥する
ことにより、（６Ｓ）テトラヒドロ葉酸のメンチルオキ
シカルボニル誘導体（５．４７ｇ）を得た。フラクショ
ン（IV）と（Ｖ）を混合し、３００ｍｌのブタン−１−
オールと４８時間撹拌することで第３のブタノール抽出
を行った。これにより再び可溶性フラクション（VII）
と不溶性フラクション（VIII）が得られた。ロータリー
エバポレーターを使用して可溶性フラクション（VII）
を蒸発乾固し、残渣を一夜３５ｍｌのブタン−１−オー
ルと撹拌した。可溶性物質を再び蒸発乾固して（６Ｒ）
テトラヒドロ葉酸のメンチルオキシカルボニル誘導体の
第２群（１．２ｇ）を得た。不溶性フラクション（VII
I）を２００ｍｌのブタン−１−オールと一夜撹拌し、
その不溶性物質を上のように乾燥して（６Ｓ）テトラヒ
ドロ葉酸のメンチルオキシカルボニル誘導体の第２群
（１．２ｇ）を得た。

【００１９】（ｉｉｉ）５，１０−メテニル−（６Ｒ）
テトラヒドロ葉酸の塩化物（ＮＢ：天然ジアステレオマ
ー）（４ｂ）の調製。５−（−）メンチロキシカルボニル−（６Ｓ）テトラヒ
ドロ葉酸（４０ｇ，異性体純度９１％）を、ガスの出入
口を備えた２リットルの三つ口フラスコ内で、４００ｍ
ｌのギ酸（９８％）に溶かした。臭化水素の酢酸溶液
（４５％，８００ｍｌ）を加えた。反応混合物を浴中で
５５〜６０℃に保持し、臭化水素ガスを液中に５時間ゆ
っくり吹込んだ。２−メルカプトエタノール（８ｍｌ）
を加え、ロータリーエバポレーターを使用して反応混合
物を５０℃以下の温度で殆ど乾燥するまで蒸発させた。
塩酸（０．５Ｍ，１２００ｍｌ，０．１％の２−メルカ
プトエタノール含有）を加え、溶液を５０℃に加温し
た。加温溶液を濾過し、ロータリーエバポレーターを使
用して濾液を５０℃以下の温度で約半量に減少させた。
混合物を一夜冷蔵し、濾過によって５，１０−メテニル
−（６Ｒ）テトラヒドロ葉酸の塩化物（１２．９ｇ）を
回収し、五酸化リン上で真空乾燥した。母液の蒸発によ
ってさらに１．１ｇの目的物を得た。

【００２０】（ｉｖ）５，１０−メテニル−（６Ｓ）テ
トラヒドロ葉酸の塩化物（ＮＢ：非天然ジアステレオマ
ー）（４ａ）の調製。５−（−）メンチルオキシカルボニル−（６Ｒ）テトラ
ヒドロ葉酸（３０．４ｇ）を使用し、上の（６Ｒ）ジア
ステレオマーの場合と同様にして標記の化合物（１７．
６ｇ）を得た。

【００２１】（ｖ）５−ホルミル−（６Ｓ）テトラヒド
ロ葉酸カルシウム（１ｂ）の調製。すべての作業を無酸素窒素雰囲気下で行った。予め脱ガ
スし、窒素で飽和した沸騰水（４００ｍｌ）を撹拌し、
これに５，１０−メテニル−（６Ｓ）テトラヒドロ葉酸
の塩化物（１７．５ｇ）を区分して添加した。脱ガス
し、窒素で飽和した水酸化ナトリウム水溶液（３．７
Ｍ）を用いて、区分添加毎にｐＨを６．５〜７．０に調
節した。この添加には約４５分を要した。水酸化ナトリ
ウム水溶液（３．７Ｍ）を加えてｐＨを６．５〜７．０
に調節しながら、還流下に撹拌して反応を５時間行っ
た。反応混合物を一夜冷却し、ｐＨを９に調節した。清
浄な塩化カルシウム溶液（２２ｍｌ，無水塩化カルシウ
ム２１０ｇを水２５ｍｌに溶かして調製）を加え、さら
に２００ｍｌのエタノールを加えた。混合物を冷やし、
クリーム色の生成物を濾別し、少量のエタノール：水混
合液（５０：５０）で洗浄し、さらにエタノールで洗浄
し、五酸化リン上で真空乾燥することにより、５−ホル
ミル−（６Ｓ）テトラヒドロ葉酸カルシウム（７．２
ｇ）を得た。［Ｇｋ］_Ｄ ^２０−１２．５。５００ｍｌのエタノールを
母液に加えて、さらに、３．２ｇの目的物を得た。

【００２２】（ｖｉ）５−ホルミル−（６Ｒ）テトラヒ
ドロ葉酸カルシウム（１ａ）の調製。５，１０−メテ
ニル−（６Ｒ）テトラヒドロ葉酸の塩化物（１７．５
ｇ）を使用し、上の（６Ｓ）ジアステレオマーの場合と
同様にして標記の化合物（１４ｇ）を得た。［ＧＫ］_Ｄ ^２０＋２２．９。

【００２３】〈実施例２〉ボルニルオキシカルボニル誘
導体を経て５−ホルミル−（６Ｒ及び６Ｓ）テトラヒド
ロ葉酸カルシウムの調製。（ｉ）（−）ボルニルクロロホルメートの調製。氷−水浴に漬けた丸底フラスコ内で、３０ｍｌの乾燥ト
ルエンに溶かした（−）ボルネオール（４．９２ｇ）
を、ホスゲンが溶けたトルエン（３２ｍｌ、１２．５
％）に１時間で滴下した。反応混合物を室温まで放冷
し、密閉して一夜放置した。トルエンをオイルポンプで
除去すると、きれいな残渣が残るが、このものは蒸留さ
れた（０．５ｍｍでの沸点７０℃）。赤外分光で１７７
０ｃｍ−１に強いカルボニルのシグナルを有し、ヒドロ
キシルのシグナルを持たない白色固体として（−）ボロ
ニルクロロホルメートが得られた。

【００２４】（ｉｉ）５−（−）ボルニルオキシカルボ
ニル−テトラヒドロ葉酸（６ａ，６ｂ）の混合ジアステ
レオマー（６ＲＳ）の調製。メンチルオキシカルボニル−テトラヒドリ葉酸を調製す
る場合と同様にして葉酸（２．０ｇ）をテトラヒドロ葉
酸に還元した。反応混合物を氷−水浴に漬け、濃い塩酸
（６ｍｌ）を滴下して過剰のナトリウムボロハイドライ
ドを分解した。脱ガスし、窒素で飽和したトリス−塩化
水素緩衝液（５ｍＭ、ｐＨ７，１５０ｍｌ）を加え、ｐ
Ｈを７に調節した。脱ガスし、窒素で飽和した２００ｍ
ｌのエタノールに１．２ｇの（−）ボルニルクロロホー
メートを溶かした溶液を調製後直ちに一度に添加し、全
体を室温で２．２５時間撹拌した。ロータリーエバポレ
ーターを使用して反応混合物の容量を半分に減少させ、
濾過した。濾液を氷−水浴で冷却し、ｐＨを３に調節し
た。分離した粗生成物を遠心分離で集め、水酸化ナトリ
ウム水溶液に溶解して洗浄し、濾過し、上記の葉にｐＨ
を３に調整して再沈殿させた。スラリーを遠心分離し、
１００ｍｌの水で固形分を洗浄し、濾過した。固形分を
吸引乾燥し、最後に五酸化リン上で真空乾燥して、５−
（−）ボルニルオキシカルボニル−テトラヒドロ葉酸の
混合ジアステレオマー（２．４２ｇ）を得た。ブタン−
１−オール又はブタン−２−オールを使用して上記のメ
ンチルオキシカルボニル誘導体と同じくこの混合ジアス
テレオマーを分離した。分離したジアステレオマーを上
記のメンチルオキシカルボニル同族体と同様に、５−ホ
ルミルテトラヒドロ葉酸カルシウム（Ｉａ）及び（Ｉ
ｂ）に転化させた。

【００２５】〈実施例３〉イソボルニルオキシカルボニ
ル誘導体を経て５−ホルミル−（６Ｒ及び６Ｓ）テトラ
ヒドロ葉酸カルシウムの調製。（ｉ）イソボロネオールの調製。最初にリチウムトリ（テトラブトキシ）アルミニウムハ
イドライド試薬を調製した。リチウムアルミニウムハイ
ドライド（１．５２ｇ）を乾燥エーテル（５０ｍｌ）に
分散させて撹拌した。乾燥エーテル（１０ｍｌ）に溶け
た乾燥ｔ−ブタノール（８．８９ｇ）を４０分で滴下し
た。次いで混合物を３０分間還流した。乾燥エーテル
（１０ｍｌ）に溶けたカンファー（３．０ｇ）を還流中
の反応混合物に３０分間滴下した。反応混合物をさらに
２．２５時間還流した。過剰の試薬を分解するために、
水と塩酸水溶液を加え、有機層を分離して水で洗浄し
た。エーテルを含む溶液を無水硫酸ナトリウム上で乾燥
し、ロータリーエバポレーターを用いて蒸発させて白い
固体生成物２．９ｇを得た。これを石油エーテル（沸点
６０〜８０℃）から再結晶させて白色の結晶固体を得
た。［ＧＫ］_Ｄ ^２０２９．０。ＧＣＬ分析（Ｆ．Ｆ．Ａ．Ｐ．カラム１２０℃）によれ
ば、このものは９３．５％の（−）イソボルネオールと
６．５％の（＋）ボルネオールからなる。（ｉｉ）（−）イソボルニルクロロホルメートの調製。乾燥トルエン（２０ｍｌ）に溶けたイソボルネオール
（４．９２ｇ）をホスゲンが溶けたトルエン（５１．２
ｍｌ，１２．５％）１時間で滴下した。塩化カルシウム
の乾燥管を備えた丸底フラスコ中で、反応混合物を一夜
放置した。反応混合物から取ったサンプルの赤外分光分
析によれば、反応は不完全であった。ホスゲンが溶けた
トルエン（２６ｍｌ，１２．５％）を一度に加え、フラ
スコを密閉した。反応混合物を一夜室温で撹拌した。ト
ルエンを真空下で除去し、赤外分光で１７７０ｃｍ−１
に強いカルボニルのシグナルを有し、ヒドロキシルのシ
グナルを持たない濃厚なオイルとして生成物を得た。

【００２６】（ｉｉｉ）５−（−）イソボルニルオキシ
カルボニル−テトラヒドロ葉酸（７ａ，７ｂ）の混合ジ
アステレオマー（６ＲＳ）の調製。葉酸（２．０ｇ）をテトラヒドロ葉酸に還元し、過剰の
ナトリウムボロハイドライドを、メンチルオキシカルボ
ニル−テトラヒドロ葉酸調製の場合と同様にして分解し
た。脱ガスし、窒素で飽和したトリス−塩化水素緩衝液
（５０ｍＭ，ｐＨ７，１５０ｍｌ）を加え、ｐＨを７に
調節した。脱ガスし、窒素で飽和した２００ｍｌのエタ
ノールに１．２ｍｌの（−）イソボロニルクロロホルメ
ートを溶かした溶液を調製後直ちに一度に添加し、全体
を室温で撹拌した。ＨＰＬＳ（高速液体クロマトグラフ
ィー）分析によれば、反応は１時間後約５０％進行して
いた。さらに１．５時間後のＨＰＬＣ分析では、僅かな
変化が認められた。この時点で（−）イソボルニルクロ
ロホルメート（１．２ｍｌ）を追加し、１時間後にまた
添加した。全体を室温で一夜撹拌した。オフホワイトの
沈殿である生成物を濾別し、水酸化ナトリウム水溶液に
溶かして洗滌し、濾過し、ｐＨ３に調節して再沈殿させ
た。スラリーを遠心分離し、固体を少量の水で洗浄して
濾過することにより、５−（−）イソボルニルオキシカ
ルボニル−テトラヒドロ葉酸の混合ジアステレオマー
（１．４５ｇ）を得た。反転層カラムにＨＰＬＣを使用
したクロマトグラフィーで、これらのジアステレオマー
を分離し、分離されたジアステレオマーの純度をＨＰＬ
Ｃで確認した。この実施例は、キラル補助グループが付
加して形成された新しいジアステレオマーをクロマトグ
ラフィーで分離した例を示す。分離された新しいジアス
テレオマーは、実施例１の手順によりテトラヒドロ葉酸
の対応するジアステレオマーに転化させることができ
る。

【００２７】〈実施例４〉５−ホルミルテトラヒドロ葉
酸の混合ジアステレオマー誘導体の調製と物理的性質の
比較。（ｉ）５−ホルミル−１０（２Ｒ，３−ジヒドロキシプ
ロピル）テトラヒドロ葉酸（５ａ，５ｂ）の混合ジアス
テレオマー（６ＲＳ）の調製。すべての作業を無酸素窒素雰囲気下でおこなった。５−
ホルミル−（６ＲＳ）テトラヒドロ葉酸カルシウム
（「ウェルコボリン」０．１ｇ）を蒸留水（２ｍｌ）に
溶解させ、Ｄ（＋）グリセルアルデヒド（０．０７１
ｇ）とナトリウムシアノボロハイドライド（０．０１５
ｇ）を加えた。反応混合物を室温で撹拌し、塩酸（１
Ｍ）を加えてｐＨを約５に保持した。２４時間後及び４
８時間後に、再びＤ（＋）グリセルアルデヒド（０．０
７１ｇ）とナトリウムシアノボロハイドライド（０．０
１５ｇ）を加え、ｐＨを５に維持した。７０時間後、ｐ
Ｈを３に調節し、溶液を冷やすことによって、淡色の固
体として混合ジアステレオマー（０．０１６ｇ）を得
た。混合物のＮＭＲスペクトルは、８．７１ｐｐｍ及び
８．８０ｐｐｍに５−ホルミル基の特徴的ピークがある
ことを示した。なお、同様にして５−ホルミル−（６
Ｓ）−テトラヒドロ葉酸（上記実施例４によって調製さ
れ、かつジヒドロホレートの酵素還元によって得たテト
ラヒドロホレートのサンプルから調製された葉酸）の誘
導体と、（６Ｒ）ジアステレオマーの対応誘導体とを調
製した。これら誘導体はＮＭＲスペクトルによって次の
葉に区別される。（ａ）（６Ｒ）ジアステレオマーの誘導体（５ｂ）（ｉ）実施例１（ｖ）で調製されたジアステレオマー…
…８．７１ｐｐｍにピーク信号。（ｉｉ）酵素反応的に調製されたジアステレオマー……
８．７１ｐｐｍにピーク信号。（ｂ）実施例１（ｖｉ）で調製された（６Ｒ）ジアステ
レオマーの誘導体（５ａ）……８．８０ｐｐｍにピーク
信号。

【図面の簡単な説明】

【図１】ロイコボリンのジアステレオマーのサンプルの
調製に必要な反応と分離工程を示す図。、

【図２】テトラヒドロホルメート誘導体を調製する場合
の概要図。

【図３】テトラヒドロホルメート誘導体を調製する場合
の概要図。

【図４】分離プロセスの工程を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ハーミッシュクリストファースワンウッドイギリス国スコットランドグラスゴウジー61 ２ピージーベアスデンアルバートドライブ 26 (72)発明者コリンジェイムスサックリングイギリス国スコットランドグラスゴウジー61 ３エイエフベアスデンノースグレインジロード62 (72)発明者リリアスリーズイギリス国スコットランドグラスゴウジー64 ２デーゼットビショップブリッグスポロックドライブ100

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（６Ｓ）と（６Ｒ）ジアストレオマーの
等量混合物から（６Ｓ）ジアストレオマーの極性溶剤が
備える異なる溶解度を利用して分離した結果得られる結
腸直腸癌の治療用調剤組成物であって；ａ）９５重量％以上の５−ホルミル−テトラヒドロホレ
ートカルシウムの（６Ｓ）ジアステレオマーの形の治療
上アクセプタブル化合物で、５重量％以下の５−ホルミ
ル−テトラヒドロホレートカルシウムの（６Ｒ）ジアス
テレオマーを含み、ｂ）前記アクセプタブル化合物の量は少なくとも１０.
４ｇであり、かつｃ）該組成物は、ヒト治療用アクセプタブル担体と組合
わせた、前記ａ）に限定した化合物を１日当たり投与量
２００から２０００ｍｇの治療有効量の形式であること
を特徴とする調剤組成物。
【請求項２】請求項１に記載の組成物に、更に少量の
５−フルオロウラシルを含ませてなる調剤組成物。
【請求項３】（６Ｓ）と（６Ｒ）ジアストレオマーの
等量混合物から（６Ｓ）ジアストレオマーの極性溶剤が
備える異なる溶解度を利用して分離した結果得られる治
療用調剤組成物であって；ａ）９５重量％以上の５−ホルミル−テトラヒドロホレ
ートカルシウムの（６Ｓ）ジアステレオマーの形の治療
上アクセプタブル化合物で、５重量％以下の５−ホルミ
ル−テトラヒドロホレートカルシウムの（６Ｒ）ジアス
テレオマーを含み、ｂ）前記アクセプタブル化合物の量は少なくとも１０.
４ｇであり、かつｃ）該組成物は、ヒト治療用アクセプタブル担体と組合
わせた、前記ａ）に限定した化合物を１日当たり投与量
２００から２０００ｍｇの治療有効量の形式であること
を特徴とする調剤組成物。