JPS63115880A - 光学活性化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は実質的に純粋なジアステレオマーであるテトラ
ヒドロＭ酸エステル誘導体の調製と、そうしたジアステ
レオマーの用法に関する。

［従来の技術とその問題点コ メトドレキサート［Ｎ　−（４−（（２，４−ジアミノ
　−６−ブテリジル）メヂル丁メチルアミン）−Ｌ−グ
ルタミン酸］は、ジヒドロ葉酸エステル還元酵素（ＤＨ
ＦＤ）のインヒビターであって、このものはドオキシウ
リジレートのチミジレートへの転化を阻止し、従って、
ＤＮＡの生合成を阻止するので、癌の化学療法に一般に
使用されている。しかし、多くの抗癌剤と同様に、この
メトトレキサートは正常細胞にも毒性があるため、多量
のメトトレキサートを投与した場合には、その後の１２
〜２４時間は「レスキュー剤」がしばしば投与される。

ロイコボリン（５−ホルミルテトラヒドロ葉酸）がメト
トレキサートのレスキュー剤として一般に使用される。

ロイコボリンは二つのキラル中心を有し、市販の製品［
ウェルカム　ファンディジョン　リミテッドのウエルコ
ボリン（ＲＴＨ）　］は式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の化合
物（いずれもカルシウム塩の形）を等量含み、これらの
化合物はそれぞれ６位の炭素で（Ｒ）及び（Ｓ）立体化
学の性質を備えている。

＋Ｉａ）　　　　　　　　　　　　（Ｚｂ）天然のジア
ステレオマーである（６Ｓ）ジアステレオマー（Ｉｂ）
だけが−炭素代謝を回復するのに有効であって、それ故
にメトトレキサートのレスキューに有用であることが報
告されている（モトゴメリーはか、カンサー・トリート
メント・リポート、１９８１．６５．１１１７−１１１
９参照）。

し、カセイからのチミジレートシンターゼは非天然のジ
アステレオマーである５、１０−メチレンテトラヒドロ
葉酸エステルによって抑制されることが報告され（リア
リーほか、バイオケミカル・バイオフィジカル・リサー
チ・コミュニケーション、１９７３、５６．４８４参照
）、また太陽菌（Ｅ、コリ）からの５，１０−メチレン
テトラヒドロ葉酸エステルデヒドロゲナーゼも同じジア
ステレオマーによって抑制されることが報告されている
（スコツト及びドナルドソン、バイオケミカル・バイオ
入イジカル・リサーチ・コミュニケーション、１９６４
．１４７．５２３参照）。さらに、非天然のジアステレ
オマーである１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸エステル
は、鶏の肝臓からのグリシナミドリボヌクレオチド（Ｇ
ＡＲ）ホルミル−トランスフェラーゼの強い競争的な抑
制剤である（スミス、ペンコピツク及びペンコピツク、
バイオケミストリー、１９８１，２０．４０３４参照）
。

これらの報告は非天然のジアステレオマーであるテトラ
ヒドロ葉酸エステルの一炭素誘導体によって、ピリミジ
ン及びプリンの両方の生合成が抑制され、従ってＤＮＡ
の生合成ら抑制されることを意味する。もし、これらの
抑制が哺乳類系でも存在すれば、ロイコボリンの天然の
（６Ｓ）ジアステレオマーに対し、臨床的な潜在的要請
がある。

ロイコボリンの二つのジアステレオマーを分離すること
は、分別結晶法（コスリツヒはか、ジャーナル・オブ・
アメリカン・ケミカル・ソサイエテー、１９５２．７４
．４２１５参照）やクロマトグラフィー（フィーニーほ
か、バイオケミストリー、１９８１．２０、１８３７参
照）で行なわれている。そして、（６Ｓ）ジアステレオ
マーは酵素を触媒としてジヒドロ葉酸エステルを還元し
、次いでホルミル化することで得られているが（リ−、
バレンテ、サックリング及びウッド、テトラヘドロン、
１９８６．４２．１１７参照）、ホルミル化の収率が低
く、また還元工程では妥当な純度で異性体を得ることが
難しい。

本発明の一つの目的は、これらの不利益を解消すること
にある。

し問題点を解決するための手段］ ここにおいて、本発明者等はテトラヒドロ葉酸エステル
又はその誘導体のエビメリック中心に近い６位の炭素に
、キラル補助グループを導入すると、新しい一対のジア
ステレオマーの分離が容易になり、分離されたジアステ
レオマーは高収率で純粋な（Ｉａ）及び（Ｉｂ）に転化
することが見出し、この所見に基づいて本発明を完成し
たものである。

すなわち、本発明はテトラヒドロ葉酸誘導体の実質的に
純粋な所望の６Ｒ又は６Ｓジアステレオマーを調製する
方法を提供するものであって；ａ）テトラヒドロ葉酸又
はその誘導体である葉酸塩又は葉酸エステルのジアステ
レオマー６Ｒ及び６Ｓの混合物のＮ−５もしくはＮ−１
０のいずれかにキラル補助グループを付与させて一対の
新しいジアステレオマーを形成させ；ｂ）一対の新しい
ジアステレオマーを分離し、新しいジアステレオマー（
６Ｒ又は６Ｓ）を回収して対応する所望のジアステレオ
マー（６Ｒ又は６３）を形成させ；Ｃ）こうして単離さ
れた実質的に純粋な新しいジアステレオマーを、テトラ
ヒドロ葉酸又はその塩もしくはそのエステルの対応する
所望のジアステレオマー（６Ｒ又は６Ｓ）に転化する工
程を含む。

テトラヒドロ葉酸、その塩及びそのエステルの適当な誘
導体には、ロイコボリン、５−メチルテトラヒドロホレ
ート、５．１０−メテニルテトラヒドロホレート、５．
１０−メチレンテトラヒドロホレート等が含まれる。ロ
イコボリンは本発明にとって好ましいテトラヒドロホレ
ート誘導体である。

誤解のないよう付言すれば、本発明はテトラヒドロ葉酸
の塩とエステルの両方を包含する。便宜上、ここではテ
トラヒドロホレート又は置換テトラヒドロホレートと呼
ぶが９、特に断わらない限り、これらはフリーの酸、塩
及びエステルを指す。特に好ましい生理学的に許容され
る塩にはカルシウム塩が含まれる。また、適当なエステ
ルには低級アルキルエステルが含まれる。

キラル補助グループは当業界で公知の標準的方法で導入
することができ、例えばペプチド化学でアミノグループ
を保護するための方法で導入することができる。適当な
キラル補助グループは、−対の新しいジアステレオマー
を分離した後に除去が容易なものである。テトラヒドロ
ホレートとの反応でウレタンを形成するようなキラルア
ルコールは、特に好適な補助グループである。（−）メ
ントール、（−）ボルネオール、（−）イソボルネオー
ル（Ｒ）及び（Ｓ）−ブタン−２−オール、（Ｓ）−２
−メチルブタン−１−オール、（Ｒ）−１−フェニルプ
ロパツール、（Ｒ）及び（Ｓ）−２−メチルフェニル−
１−プロパン−１−オール、（Ｒ）及び（Ｓ）−オクタ
ン−２−オール、（Ｒ）及び（Ｓ）−１，２，３，４−
テトラヒドロ−１−ナフトール、（１Ｓ）−ノポール、
（１Ｓ、２３．５８）−ミルテノール、（１Ｒ）−ミル
テノール、（Ｓ）−８−シトロネロール、（−）−８−
フェニルメンソールおよび（１８，２Ｒ。

５Ｒ）−イソメンソールのようなキラルアルコールのホ
ルメートエステル、例えばクロルホルメートエステルは
、テトラヒドロホレートのＮ−５にキラル補助グループ
を付加するための好ましい試薬である。Ｎ−５が未置換
であると、反応はこの位置で起こり、さもなければＮ−
１０で反応が起こる。Ｎ−１０で反応が起こった場合、
Ｎ−５の置換基は所望のテトラヒドロホレート誘導体の
Ｎ−５に付加したグループであるか、そのグループに転
化可能なものであるべきである。Ｎ−５の好ましいグル
ープはホルミル基、メチル基またはこれらの基に変るも
のである。

キラルアルコールのクロルホルメートとテトラヒドロ葉
酸との反応は、極性溶媒中で、例えばエタノールのよう
なアルコールの水溶液中で、はぼ中性の領域のｐｌ＋で
都合よく生起する。この反応は一２０〜１００℃の温度
で進行し、好ましくは室温で進行する。

こうして生成した一対の新しいジアステレオマーは、結
晶化法、クロマトグラフィー、溶媒抽出などの標準的方
法で分離される。溶媒抽出及び再結晶法で使用される溶
媒は、適当な極性溶媒であって、好ましくはアルコール
が使用される。従って、例えば５−（−）メンチロキシ
カルボニル−テトラヒドロ葉酸の場合は、ジアステレオ
マーがブタン−１−オール中への溶解度の違いによって
分離される。第１図はロイコボリンのジアステレオマー
のサンプルの調整に必要な反応と分離の工程を示してい
る。５−（−）ボルニロキシ力ルポニルーテトラヒドロ
葉酸の場合は、ジアステレオマーがブタン−１−オール
中への、又はブタン−２−オールへの溶解度の違いによ
って分離される。

必要に応じて純度を向上させるために、溶媒抽出又は分
別結晶工程を繰返すこともできる。通常は純度９０％以
上のジアステレオマーが回収できるまで工程を繰返す。

分離されたジアステレオマーからキラル補助グループを
取除くことは、ペプチド合成で普通採用される方法に従
い、酸で処理することによって行なわれる。使用可能な
酸には、臭化水素酸、硫酸のようなｍ酸、ギ酸、酢酸、
三弗化酢酸のようケ有［０又はこれらの混合物が含まれ
る。従ッテ、例えばテトラヒドロホレートの５−（−）
メンチロキシカルボニル誘導体又は５−　ｉ）ボルニロ
キシ力ルボニル誘導体は、ギ酸と臭化水素と酢酸の混合
物で処理される（第１図参照）。この方法でキラル補助
グループが除去されると、５．１０−メテニルテトラヒ
ドロホレートの個々のジアステレオマーが形成され、次
いでこれら（よさらに所望のテトラヒドロホレート誘導
体に転イヒされる。

従って、例えば、５，１０−メテニルテトラヒドロホレ
ートの個々のジアステレオマー（よ、英国特許第１５６
０３７２号に記載されているような当業界で公知の方法
により、中性のｐＨでロイコ７１り１ノンの純粋なジア
ステレオマーに容易に転化できる。ある（Ｘはまた、５
．１０−メテニルテトラヒドロホレートの個々のジアス
テレオマーは、チャナ１ノン及びぺ１ノーが記載した（
バイオケミストリー・ジャーナル、１９６７、１０５．
６３３参照）と同様な方法で例え番Ｊナト１ノウムボロ
ハイドライドで還元することにより、５−メチルテトラ
ヒドロホレートの個々のジアステレオマーに転化するこ
とができる。

５．１０−メチレンテトラヒドロホレートの個々のジア
ステレオマーは、例えばホルムアルデヒドの存在下に分
離された中間体ジアステレオマーからキラル補助グルー
プを外すことによって調製できる。５，１０−メチレン
テトラヒドロホレート自体は、サカミがバイオケミカル
・プレバレージョン、１９６３、１０．１０３に記載し
た方法及びホワイト、ベイリー及びゴールドマンがバイ
オロジカル・ケミストリー、１９７８，２５３，２４２
に記載した方法に類似する方法で、例えばナトリウムボ
ロハイドライドで還元することにより、５−メチルテト
ラヒドロホレートに転化される。

この明細書で「実質的に純粋な」とは、ジアステレオマ
ーの純度が８０％以上、好ましくは９０％以上、さらに
好ましくは９５％以上であることをいう。

本発明はまた、テトラヒドロホレートの実質的に純粋な
ジアステレオマーを提供する。好ましい具体例に於いて
、本発明はロイコボリンの実質的に純粋なジアステレオ
マーを提供する。ジアステレオマーの純度は、ナトリウ
ムシアノボロハイドライドの存在下でのＤ−グリセリン
アルデヒドとの反応及び形成された新ジアステレオマー
のＮＭＲスペクトルによって確認できる（第１図参照）
。

テトラヒドロ葉酸又は直換テトラヒドロ葉酸のＮ−５ま
たはＮ−１０にキラル補助グループが付いた中間体化合
物は新規化合物であって、これは本発明のもう一つの特
徴である。

そうした新規化合物は、（６Ｒ）及び（６Ｓ）５−　（
−）メンチロキシカルボニル−テトラヒドロ葉酸（第１
図参照）、（６Ｒ）及び（６３）５−（−）ボルニロキ
シ力ルポニルーテトラヒドロ葉酸（第２図参照）、（６
Ｒ）及び（６Ｓ）５−（−）イソボルニロキシカルボニ
ル−テトラヒドロ菓１ｍ＜第３図参照）、並びにこれら
の塩及びエステル等である。

本発明の新規中間体はプレリジン環の６位にキラル中心
を有し、それ故、（６Ｒ）又は（６Ｓ）異性体として、
あるいはジアステレオマーの混合物として存在する。

本発明はまた、テトラヒドロホレート誘導体の実質的に
純粋なジアステレオマーを薬剤的に許容される担体と組
合せた薬剤組成物を提供する。適当な担体にはロイコボ
リン含有薬剤組成物を調製する際に当業界で公知の担体
が含まれる。一般に、本発明の組成物は、商品名ウエル
コボリンで市販されている公知のロイコボリン組成物と
同様に調合される（例えば、フィジシャンス・デスクマ
ニュアル、１９８６．７６９頁及びマルティンダーレの
「ザ・エキストラ・ファーマソビーア、２６版、１９４
８頁参照）。ロイコバリンの実質的に純粋な６Ｓジアス
テレオマーは、メトトレキサートのようなりＨＦＲ抑制
剤の作用を中和するレスキュー剤として使用できる。ま
た、ホレート欠乏症の治療にも使用できる。さらに結腸
癌、直腸癌の治療に５−フルオロウラシルとの組合せで
使用可能である（マコヴ７−ほか、カンサー・トリート
メント・リポート、１９８２　、６６　、１８０３頁及
びマダジェヴイック等、カンサー・リサーチ、１９８４
．４４．４４６７頁参照）。従って、本発明はこのよう
な病気を治療するための薬剤の調製及び哺乳類のこのよ
うな疾患を治療する方法を包含する。本発明の化合物は
好適には塩の形で、特にカルシウム塩の形で使用される
。

ロイコボリンの実質的に純粋な６Ｓ−ジアステレオマー
は経口的にまたは非経口的に投与でき、また通常の方法
で調合できる。適当な調合には注射可能な溶液、注入用
粉末（これは使用直前に水を加えて注射液とされる）及
び錠剤がある。メトトレキサートのレスキュー剤として
使用する場合、ロイコボリンの６Ｓ−ジアステレオマー
の投薬量は、投与されたメトトレキサートの母に依存す
るが、典型的には１日の投与量は一般に１５０ｍｇまで
であって、例えば２５〜１５０ｍ０が２〜４回に分けて
投与される。ホレート欠乏症の治療には一般に少量のロ
イコボリンが投与され、成人に対する１日当りの投与量
は通常２〜２５ｍｇの範囲で、これらは錠剤の形で１回
投与される。結腸直腸癌の治療には、成人に対する１日
当りの典型的な投与量は通常２００〜２０００ｍｇで、
０．２００〜０．２０００１１０の５−フルオロウラシ
ルと共に投与される。５−メチルテトラヒドロホレート
は、食事療法の補充物として使用される。

［実施例］ 下記の実施例は本発明を限定することなくさらに詳しく
説明するものであり、これらは添付の図面でも図示され
る。なお、第２図および第３図は前述のごとき手法によ
ってテ１〜ラヒドロホレートの誘導体を調製する場合の
図式を示すものである。

実施例に於いて、物理的特性は次のように測定した。

核磁気共鳴（ＮＭＲ）ニ プルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）　ＷＨ−２５０分光計を用い
て測定。

内部標準物質にはテトラメチルシランを使用。

旋光度： 通路長１デシメーターのジャケット付きセルを有するベ
ルキン・エルｖ　−（Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ）　２
４１偏光計を使用して測定。

〈実施例１〉メンチロキシカルボニル誘導体を経て５−
ホルミル−（６Ｒ及び６ Ｓ）テトラヒドロ葉酸カルシウム の調製。

（ｉ）５−（−）メンチロキシカルボニル−テトラヒド
ロ葉Ｍ　（３ａ、３ｂ）の混合ジアステレオマー（６Ｓ
）の調製。

メカニカルスターラー、無酸素窒素用のガス出入口、等
圧に保持できる滴下ロートを備えた１０リツトルの三つ
ロフラスコで、葉Ｍ　（５０ｇ）を蒸留水（１０１０５
Ｏ）に分散させた。以下すべての作業を窒素中で行なっ
た。フラスコを氷−水浴中に漬け、水酸化ナトリウムの
水溶液（５０％、２１ｆｆｌ＋）を加え、次いで水（１
５０＋１１１　）にナトリウムボロハイドライド（５０
（Ｊ）を溶かした溶液を３０分間で滴下した。

反応混合物を０〜５℃で４，５時間撹拌し、次に蒸留水
（１５０ｍｌ　）にナトリウムボロハイドライド（５０
（］）を溶かした溶液を３０分間で滴下した。この混合
物を窒素雰囲気で一夜撹拌した。この反応混合物を氷−
水浴に漬け、これに濃塩酸（１７５ｍｌ　）を４５分間
で滴下することで過剰のナトリウムボロハイドライドを
分解させた。脱ガスし、窒素で飽和させたトリス−塩化
水素Ｍ！！液（５０ＩＩ＋Ｈ，ｐＨ７，１リツトル）を
これに加えてｐＨを７に調節した。エタノール（２，５
リツトル、脱ガスし、窒素で飽和したもの）に、（−）
メンチルクロロホルメート（３０ｍｌ）を溶かした溶液
を、溶液ＷＪ製後直ちに添加し、全体を室温で２１．５
時間撹拌した。

ロータリーエバポレーターを使用して反応混合物の容量
を半分に減少させて濾過した。濾液を氷−水浴で冷却し
ｐ１１３に調節した。分離した粗生成物を遠心分離機で
収集し、水酸化ナトリウム水溶液（Ｑ、５Ｍ、　　１．
５１Ｊ　ットＪＩｔ）　ニ溶解しＣ’ｌＡ過し、再度１
１８３に調節して再沈澱させることにより精製した。こ
のスラリーを遠心分離し、固形分を生母の水で洗浄して
濾過した。得られた固形分を吸引乾燥し、最後に五酸化
リン上で真空乾燥することにより、５−　（−）メンチ
ロキシカルボニル−テトラヒドロ葉酸の混合ジアステレ
オマー（８８（＋）を得た。

（ｉｉ）５−　（−）メンチロキシカルボニル−テトラ
ヒドロ葉Ｍ（３ａ及び３ｂ）の混合ジアステレオマー（
６Ｒ８）の分離。

ジアステレオマーの乾燥混合物（１７（＋）を乾燥ブタ
ン−１−オール（１，５リツトル）と−夜撹拌した。混
合物を遠心分離して可溶性フラクション（１）と不溶性
フラクション（ＩＩ）を得た。

ロータリーエバポレーターを使用して可溶性フラクショ
ン（１）を温度５０〜６０℃で容量を４００１に減少さ
せた。これによって新しい沈澱（ＥＶ）が得られたので
、これを遠心分離で集めた。上澄（ＩＩＩ）を蒸発乾固
して（６Ｒ）テトラヒドロ葉酸のメンチロキシカルボニ
ル誘導体（５，５ａ　）を得た。沈澱（ＩＶ）は下記の
ようにして得られた可溶性フラクション（Ｖ　）と混合
した。

不溶性フラクション（ＩＩ）は１リツトルのブタン−１
−オールと一夜撹拌して第２のブタノール抽出を行なっ
た。これによって可溶性フラクション（Ｖ　）が得られ
るので、これを蒸発乾固して上記のように使用し、一方
、不溶性物質（Ｖｌ）を五酸化リン上で真空乾燥するこ
とにより、（６Ｓ）テトラヒドロ葉酸のメンチロキシカ
ルボニル誘導体（５，４７＋Ｉ＋）を得た。フラクショ
ン（ＩＶ）と（Ｖ　）を混合し、３００１のブタン−１
−オールと４８時間撹拌することで第３のブタノール抽
出を行なった。

これにより再び可溶性フラクション（Ｖｌｌ）と不溶性
フラクション（ＶＩＩＴ）が得られた。ロータリーエバ
ポレーターを使用して可溶性フラクション（Ｖｌｌ）を
蒸発乾固し、残漬を一夜３５１のブタン−１−オールと
撹拌した。可溶性物質を再び蒸発乾固して（６Ｒ）テト
ラヒドロ葉酸のメンチロキシカルボニル誘導体の第２群
（１，２ｇ）を得た。

不溶性フラクションｍＩＩ）を２００１のブタン−１−
オールと一夜撹拌し、その不溶性物質を上のように乾燥
して（６Ｓ）テトラヒドロＭ酸のメンチロキシカルボニ
ル誘導体の第２群（１，２（＋）を得た。

分離プロセスの工程を第４図に示す。

（ｉｉｉ）　５．１０−メテニル−（６Ｒ）テトラヒド
ロＭ酸の塩化物（Ｎ８：天然ジアステレオマー）（４ｂ
）の調製。

５−（−）メンチロキシカルボニル−（６ｓ）テトラヒ
ドロ葉酸（４０ａ、異性体純度９１％）を、ガスの出入
口を備えた２リツトルの三つロフラスコ内で、４００１
のギ酸（９８％）に溶かした。

臭化水素の酢酸溶液（４５％、８００ｍ１　）を加えた
。

反応混合物を浴中で５５〜６０℃に保持し、臭化水素ガ
スを液中に５時間ゆっくり吹込んだ。

２−メルカプトエタノール ータリーエバポレーターを使用して反応混合物を５０℃
以下の温度で殆ど乾燥するまで蒸発させた。

塩Ｍ　（　０．５Ｍ，　１２０ｈ＋１，０．１χの２−
メルカプトエタノール含有）を加え、溶液を５０℃に加
温した。

加温溶液を濾過し、ロータリーエバポレーターを使用し
て濾液を５０℃以下の温度で約半吊に減少させた。混合
物を一夜冷蔵し、濾過によって５．１０−メテニル−（
６Ｒ）テトラヒドロ葉酸の塩化物（１２．９（］　）を
回収し、五酸化リン上で真空乾燥した。母液の蒸発によ
ってさらに１．１ｇの目的物を得た。

（ｉｖ）５．１０−メテニル−（６Ｓ）テトラヒドロ葉
酸の塩化物（８８：非天然ジアステレオマー）（４ａ）
の調製。

５−　（−）メンチロキシカルボニル−（６Ｒ）テトラ
ヒドロ葉酸（３０．４ａ　）を使用し、上の（６Ｒ）ジ
アステレオマーの場合と同様にして標記の化合物（ｏ．
ｓｇ　）を得た。

（ｖ）５−ホルミル−（６Ｓ）テトラヒドロ葉酸カルシ
ウム（１ｂ）の調製。

すべての作業を無酸素窒素雰囲気下で行なった。

予め脱ガスし、窒素で飽和した沸騰水（４００ｍｌ　）
を撹拌し、これに５，１０−メテニル−（６Ｓ）テトラ
ヒドロ葉酸の塩化物（１７．５！Ｉ＋　）を区分して添
加した。脱ガスし、窒素で飽和した水酸化ナトリウム水
溶液（３．７Ｍ＞を用いて、区分添加毎にｐｌ＋を６．
５〜７．０に調節した。この添加には約４５分を要した
。水酸化ナトリウム水溶液＜３．７Ｍ）を加えてＩ）Ｉ
Ｉを６，５〜７．０に調節しながら、還流下に撹拌して
反応を５時間行なった。

反応混合物を一夜冷却し、ｐＨを９に調節した。

清浄な塩化カルシウム溶液（２２ｍｌ，無水ＣａＣ　Ｉ
　２　１０（Ｉを水２５１に溶かして調製）を加え、ざ
らに２００１のエタノールを加えた。混合物を冷やし、
クリーム色の生成物を濾別し、少岳のエタノール：水混
合液（　５０：５０　）で洗浄し、さらにエタノールで
洗浄し、五酸化リン上で真空乾燥することにより、５−
ホルミル−（６Ｓ）テトラヒドロ葉酸カルシウム（７，
２ｏ　）を得た。

［Ｇｋ］　　−１２，５゜５００ｍ１のエタノールを母
液に加えてさらに３．２ｇの目的物を得た。

（ｖ　ｉ　）　５−ホルミル− ルシウム（１ａ）の調製。

５、１０−メテニル−（６Ｒ）テトラヒドロ葉酸の塩化
物（１７．５１１１　）を使用し、上の（６Ｓ）ジアス
テレオマーの場合と同様にして標記の化合物（１４（］
）を１９だ。　　　　２。

［Ｇｋ］　　＋２２．９。

〈実施例２〉ボルニロキシｈルボニル誘導体を経て５−
ホルミル−（６Ｒ及び６ Ｓ）テトラヒドロ葉酸カルシウム の調製。

（ｉ）（＝）ボルニルクロルホルメートの調製。

氷−水浴に漬けた丸底フラスコ内で、３０１の乾燥トル
エンに溶かした（−）ボルネオール（４．９２（＋＞を
、ホスゲンが溶けたトルエン（３２ｍｌ，１２．５％）
に１時間で滴下した。反応混合物を室温まで放冷し、密
閉して一夜放置した。

トルエンをオイルポンプで除去すると、きれいな残渣が
残るが、このものは蒸留された（　０．５ｍｌ１１での
沸点７０℃）。赤外分光で１７７０ｃｍ−’に強いカル
ボニルのシグナルを有し、ヒドロキシルのシグナルを持
たない白色固体として（−）ボロニルクロルホルメート
が得られた。

（ｉｉ）５　−　（　＝）ボロニルカルボニル−テトラ
ヒドロ葉酸（６ａ，　６ｂ）の混合ジアステレオマー（
６ＲＳ）の調製。

メンチロキシカルボニル−テトラヒドリ葉酸を１！！製
する場合と同様にして葉酸（　２．ＯＱ　＞をテトラヒ
ドロ葉酸に還元した。

反応混合物を氷−水浴に漬け、濃い塩酸（６ｍｌ　）を
滴下して過剰のナトリウムボロハイドライドを分解した
。脱ガスし、窒素で飽和した］・リス−塩化水素緩衝液
（　５０＋ｎＨ，　ｐｆ１７，　１５０ｍｌ　）を加え
、ｐｌ＋を７に調節した。脱ガスし、窒素で飽和した２
００ｍｌのエタノールに１．２ｇの（＝）ボロニルクロ
ルホーメートを溶かした溶液を調製後直ちに一度に添加
し、全体を室温で２．２５時間撹拌した。ロータリーエ
バポレーターを使用して反応混合物の容量を半分に減少
させ、濾過した。濾液を氷−水浴で冷却し、ｐＨを３に
調節した。分離した粗生成物を遠心分離で集め、水酸化
ナトリウム水溶液に熔解して洗浄し、濾過し、上記のよ
うにｐＨを３に調整して再沈澱させた。スラリーを遠心
分離し、１００ｍｌの水で固形分を洗浄し、濾過した。

固形分を吸引乾燥し、最後に五酸化リン上で寞空乾燥し
て、５−（−）ポロニル力ルポニルーテｉ・ラヒドロ葉
酸の混合ジアステレオマー（　２．４２ｇ）を得た。

ブタン−１−オール又はブタン−２−オールを使用して
上記のメチロキシカルボニル誘導体と同様にしてこの混
合ジアステレオマーを分離した。

分離したジアステレオマーを上記のメンチロキシカルボ
ニル同族体と同様に、５−ホルミルテトラヒドロ葉酸カ
ルシウム（Ｉａ）及び（Ｉｂ）に転化させた。

〈実施例３〉イソボルニロキシ力ルボニル誘導体を経て
５−ホルミル＝（６Ｒ及 び６Ｓ）テトラヒドロ葉酸カルシ ラムの調製。

（ｉ）イソボロネオールの調製。

最初にリチウムトリ（テトラブトキシ）アルミニウムハ
イドライド試薬を調製した。リチウムアルミニウムハイ
ドライド（　　１．５２ｇ）を乾燥エーテル（　５０ｍ
ｌ　）に分散させて撹拌した。乾燥エーテル（１０ｍｌ
）に溶けた乾燥（−ブタノール（　８．８９ｇ）を４０
分で滴下した。次いで混合物を３０分間還流した。

乾燥エーテル（１０ｍ＋）に溶けたカンフ、−−＜３．
０ａ）を還流中の反応混合物に３０分間滴下した。反応
混合物をさらに２．２５時間還流した。過剰の試薬を分
解するために、水と塩酸水溶液を加え、右ｔ［を分離し
て水で洗浄した。エーテルを含む溶液を無水硫酸ナトリ
ウム上で乾燥し、ロータリーエバポレーターを用いて蒸
発させて白い固体生成物２，９ｇを得た。これを石油エ
ーテル（沸点６０〜８０℃）から再結晶させて白色の結
晶固体を得た。

［Ｇｋ］２０−２９、０。

ＧＣＬ分析（Ｆ、　Ｆ、　Ａ、　Ｐ、カラム１２０℃）
によれば、このものは９３．５％の（−）イソボルネオ
ールと６．５％のく＋）ボルネオールからなる。

（ｉｉ）（−）イソボルニルクロルホルメートの調製。

乾燥トルエン（２０ｍｌ）に溶けたイソボルネオール（
４，９２０）をホスゲンが溶けたトルエン（ＳＬ２ｎ＋
Ｉ、　１２．５％）１時間で滴下した。塩化カルシウム
の乾燥管を備えた丸底フラスコ中で、反応混合物を一夜
放置した。

反応混合物から取ったサンプルの赤外分光分析によれば
、反応は不完全であった。ホスゲンが溶けたトルエン（
２６ｍｌ、１２．５％）を−度に加え、フラスコを密閉
した。反応混合物を一夜室温で攪拌した。トルエンを真
空下で除去し、赤外分光で１７７０ＣＩ１１−１に強い
カルボニルのシグナルを有し、ヒドロキシルのシグナル
を持たな濃厚なオイルとして生成物を得た。

（ｉｉｉ）　５−　（−）イソボルニロキシ力ルポニル
ーテトラヒドロ葉酸（７ａ、７ｂ）の混合ジアステレオ
マー（６Ｒ８）のＫ１１ｌ製。

葉酸（２，０（＋　）をテトラヒドロ葉酸に還元し、過
剰のナトリウムボロハイドライドを、メンチロキシカル
ボニル−テトラヒドロ葉酸調製の場合と同様にして分解
した。脱ガスし、窒素で飽和したトリス−塩化水素緩衝
液（５０ｍＨ，ｐＨ７，１５０ｍ１）を加え、ｐＨを７
に調節した。脱ガスし、窒素で飽和した２００１のエタ
ノールに１．２１の（−）インボロニルクロルホーメー
トを溶かした溶液を調製後直ちに一度に添加し、全体を
室温で撹拌した。

ＩＩ　Ｐ　Ｌ　Ｃ分析によれば、反応は１時間後約５０
％進行していた。さらに１．５時間後のＨＰＬＣ分析で
は、僅かな変化が認められた。この時点で（−）イソボ
ルニルクロルホーメート（１，２ｍ１）を追加し、１時
間後にまた添加した。全体を室温で一夜撹拌した。

オフホワイトの沈澱である生成物を濾別し、水酸化ナト
リウム水溶液に溶かして洗滌し、濾過し、ｐＨ３に調節
して再沈澱させた。スラリーを遠心分離し、固体を少量
の水で洗浄して濾過することにより、５−　（−）イソ
ボルニロキシカルボニル−テトラヒドロ葉酸の混合ジア
ステレオマー（１，４５ｇ＞を得た。

反転層カラムにＨＰＬＣを使用したクロマトグラフィー
で、これらのジアステレオマーを分離し、分離されたジ
アステレオマーの純度をＨＰＬＣで確認した。

この実施例は、キラル補助グループが付加して形成され
た新しいジアステレオマーをクロマトグラフィーで分離
した例を示す。

分離された新しいジアステレオマーは、実施例１の手順
によりテトラヒドロ葉酸の対応するジアステレオマーに
転化させることができる。

〈実施例４〉５−ホルミルテトラヒドロ葉酸の混合ジア
ステレオマー誘導体の調 製と物理的性質の比較。

（ｉ）５−ホルミル−１０（２Ｒ，３〜ジヒドロキシプ
ロピル）テトラヒドロ菓Ｍ（５ａ、５ｂ）の混合ジアス
テレオマー（６Ｒ８）の調製。

すべての作業を無酸素窒素雰囲気下で行なった。

５−ホルミル−（６Ｒ８）テｊ−ラヒドロＭＷカルシウ
ム（「ウエルコボリンＪ　　０．１ｏ　）を蒸留水（２
ｍｌ　）に溶解させ、Ｄ（＋）グリセルアルデヒド（０
，０７１り　）とナトリウムシアノボロハイドライド（
０，０１５（＋　＞を加えた。反応混合物を室温で撹拌
し、塩酸（ＩＭ）を加えてｐｌ＋を約５に保持した。２
４時間後及び４８時間後に、再びＤ（＋）グリセルアル
デヒド（０，０７１ｇ　）とナトリウムシアノボロハイ
ドライド（０，０１５（１）を加え、ｐＨを５に維持し
た。７０時間後、ｐＨを３に調節し、溶液を冷やすこと
によって、淡色の固体として混合ジアステレオマー（０
，０１６（１）を得た。混合物のＮ　Ｍ　Ｒスペクトル
は、８．７１　ｐｐｍ及び８．８０　ｐｐｍに５−ホル
ミル基の特徴的ピークがあることを示した。

なお、同様にして５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒド
ロ葉酸（上記実施例４によって調製され、かつジヒドロ
ホレートの酵素還元によって得たテトラヒドロホレート
のサンプルから調製された葉酸）の誘導体と、・（６Ｒ
）ジアステレオマ〜の対応誘導体とを調製した。これら
誘導体はＮＭＲスペクトルによって次のように区別され
る。

（ａ）（６Ｒ）ジアステレオマーの誘導体（５ｂ）（ｉ
）実施例１（ｖ）で調製されたジアステレオマー・・・
・・・８．７１　ｐｐｍにピーク信号。

（ｔｉ）酵素的に調製されたジアステレオマー・・・・
・・８．７１　ｐｐｍにピーク信号。

（ｂ）実施例１　（Ｖｉ）で調製された（６Ｒ）ジアス
テレオマーの誘導体（５ａ）　・・・・・・８．８０１
）Ｅｌｍにピーク信号。

【図面の簡単な説明】

第１図はロイコボリンのジアステレオマーのサンプルの
調製に必要な反応と分離工程を示す図、第２図および第
３図はテトラヒドロホルメート誘導体をＵ４製する場合
の概要図、第４図は分離プロセスの工程を示す図である
。 ユニバーシティ　オブ　ストラスクライト代　　理　　
人　　　芦　　１）　直　　斯朝　　愈　　　正　　　
幸

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　ａ）テトラヒドロ葉酸又はその誘導体である葉酸塩
   又は葉酸エステルのジアステレオマー６Ｒ及び６Ｓの混
   合物のＮ−５又はＮ−１０のいずれかに、キラル補助グ
   ループを付加させて一対の新しいジアステレオマーを形
   成させ、 ｂ）一対の新しいジアステレオマーを分離し、新しいジ
   アステレオマー（６Ｒ又は６Ｓ）を回収して対応する所
   望のジアステレオマー（６Ｒ又は６Ｓ）を形成させ、そ
   して ｃ）単離された実質的に純粋な新しいジアステレオマー
   を、対応するテトラヒドロ葉酸又はその誘導体である葉
   酸塩又は葉酸エステルの実質的に純粋な所望のジアステ
   レオマー（６Ｒ又は６Ｓ）に転化する、 ことを含むテトラヒドロ葉酸又はその誘導体である葉酸
   塩又は葉酸エステルの実質的に純粋なジアステレオマー
   （６Ｒ又は６Ｓ）を調製する方法。 ２　キラル補助グループがキラルアルコールから誘導さ
   れる特許請求の範囲１記載の方法。 ３　キラルアルコールが（−）メンソール、（−）ボル
   ネオール又は（−）イオソボルネオールある特許請求の
   範囲２記載の方法。 ４　得られたテトラヒドロ葉酸又はその塩もしくはその
   エステルが、ロイコボリン（５−ホルミルテトラヒドロ
   葉酸）又はその塩もしくはそのエステルの実質的に純粋
   なジアステレオマー（６Ｓ）である特許請求の範囲１〜
   ３のいずれか１項記載の方法。 ５　テトラヒドロ葉酸又はその塩もしくはそのエステル
   が、５−メチル−又は５，１０−メチレン−または５，
   １０−メテニル−テトラヒドロ葉酸又はその塩もしくは
   そのエステルである特許請求の範囲１〜３のいずれか１
   項記載の方法。 ６　キラル補助グループを除去する工程を含む特許請求
   の範囲１〜５のいずれか１項記載の方法。 ７　５，１０−メテニルテトラヒドロホレートの実質的
   に純粋なジアステレオマー（６Ｓ）を、５−ホルミル−
   又は５−メチルテトラヒドロ葉酸又はその塩もしくはそ
   のエステルに転化させる工程をさらに含み、５，１０−
   メテニルヒドロ葉酸又はその塩もしくはそのエステルの
   実質的に純粋なジアステレオマー（６Ｓ）を得る特許請
   求の範囲６記載の方法。 ８　新しいジアステレオマーが溶媒抽出、分別結晶又は
   クロマトグラフィーで単離される特許請求の範囲１〜７
   のいずれか１項記載の方法。 ９　溶媒抽出又は分別結晶が極性溶媒を使用して行なわ
   れる特許請求の範囲８記載の方法。 １０　溶媒抽出又は分別結晶を、単離される新しいジア
   ステレオマーの純度が９０％以上になるまで繰返す特許
   請求の範囲８又は９記載の方法。 １１　特許請求の範囲１〜８のいずれかの方法で調製さ
   れるテトラヒドロ葉酸又はその塩もしくはそのエステル
   の実質的に純粋なジアステレオマー。 １２　特許請求の範囲１〜４、７及び８のいずれかの方
   法で調製されるロイコボリンの実質的に純粋なジアステ
   レオマー（６Ｓ）。 １３　７５％以上の純度を有するテトラヒドロ葉酸又は
   その塩もしくはそのエステルの実質的に純粋なジアステ
   レオマー。 １４　８０％以上の純度を有する合成されたテトラヒド
   ロ葉酸又はその塩もしくはそのエステルの実質的に純粋
   なジアステレオマー。 １５　ロイコボリンの実質的に純粋なジアステレオマー
   （６Ｓ）。 １６　合成ロイコボリンの実質的に純粋なジアステレオ
   マー。 １７　９０％以上の純度を有する特許請求の範囲１３〜
   １６のいずれか１項記載の実質的に純粋なジアステレオ
   マー。 １８　Ｎ−５又はＮ−１０がキラル補助グループによつ
   て置換されているテトラヒドロ葉酸、その塩又はそのエ
   ステル。 １９　（６Ｒ）及び（６Ｓ）５−（−）メチロキシカル
   ボニル−テトラヒドロ葉酸及びその混合物、（６Ｒ）及
   び（６Ｓ）５−（−）ボルニロキシカルボニル−テトラ
   ヒドロ葉酸及びその混合物、（６Ｒ）及び（６Ｓ）５−
   （−）イソボルニロキシカルボニル−テトラヒドロ葉酸
   及びその混合物。 ２０　特許請求の範囲１１〜１７のいずれかに記載の実
   質的に純粋なジアステレオマーと、薬剤的に許容される
   担体とを組合せた薬剤組成物。 ２１　メトトレキサート用レスキュー剤を製造するため
   に、ロイコボリンの実質的に純粋なジアステレオマー（
   ６Ｓ）を使用すること。 ２２　５−フルオロウラシルとの組合せで結腸直腸癌用
   治療薬を製造するために、ロイコボリンの実質的に純粋
   なジアステレオマー（６Ｓ）を使用すること。 ２３　ホレート欠乏症の治療薬を製造するために、ロイ
   コボリンの実質的に純粋なジアステレオマー（６Ｓ）を
   使用すること。 ２４　特許請求の範囲１２、１５又は１６に記載したロ
   イコボリンの実質的に純粋なジアステレオマー（６Ｓ）
   の有効量を、哺乳類に投与するすることを含む哺乳類へ
   のメトトレキサート毒性を中和する方法。 ２５　特許請求の範囲１２、１５又は１６に記載したロ
   イコボリンの実質的に純粋なジアステレオマー（６Ｓ）
   の有効量を、哺乳類に投与するすることを含む哺乳類の
   ホレート欠乏症を治療する方法。 ２６　特許請求の範囲１２に記載したロイコボリンの実
   質的に純粋なジアステレオマー（６Ｓ）の有効量を、有
   効量の５−フルオロウラシルと共に哺乳類に投与するす
   ることを含む哺乳類の結腸直腸癌を治療する方法。