JPH06172397A - 新規物質ドラスタチンｃ及びその用途 - Google Patents
新規物質ドラスタチンｃ及びその用途Info
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- JPH06172397A JPH06172397A JP4352439A JP35243992A JPH06172397A JP H06172397 A JPH06172397 A JP H06172397A JP 4352439 A JP4352439 A JP 4352439A JP 35243992 A JP35243992 A JP 35243992A JP H06172397 A JPH06172397 A JP H06172397A
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- JP
- Japan
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- dolastatin
- methanol
- ethyl acetate
- chloroform
- ddq
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- Pending
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-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/618—Molluscs, e.g. fresh-water molluscs, oysters, clams, squids, octopus, cuttlefish, snails or slugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07G—COMPOUNDS OF UNKNOWN CONSTITUTION
- C07G99/00—Subject matter not provided for in other groups of this subclass
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【構成】日本産タツナミガイ（Dolabella auricularia)
の内臓を有機溶媒により抽出し、クロマトグラフィー
により分離、精製することによりドラスタチンＣを純品
で得た。本化合物はHela S3 （ヒト子宮頸癌）細胞に対
して、強い増殖阻害作用を示した。 【効果】本発明化合物は制癌剤の有効成分として有用で
ある。
の内臓を有機溶媒により抽出し、クロマトグラフィー
により分離、精製することによりドラスタチンＣを純品
で得た。本化合物はHela S3 （ヒト子宮頸癌）細胞に対
して、強い増殖阻害作用を示した。 【効果】本発明化合物は制癌剤の有効成分として有用で
ある。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗腫瘍活性を有し、医薬
品として期待される新規物質ドラスタチンＣ及びそれを
有効成分とする抗腫瘍剤に関する。
品として期待される新規物質ドラスタチンＣ及びそれを
有効成分とする抗腫瘍剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】現在、抗腫瘍剤には癌細胞の代謝を阻害
するアルキル化剤（代謝 17 1553 〜1544、1980) 、核
酸合成の拮抗阻害剤（癌と化学療法 10 1029 〜1086、
1983) 、抗生物質および植物アルカロイド（山村雄一・
杉村隆著「ガン」251 〜270 共立出版）などがある。ま
た動植物より抽出したエキスも抗腫瘍活性のあることが
認められ各種製剤化されている。これらの抗腫瘍剤は、
各々において効果を発揮しているが、なお十分ではな
い。
するアルキル化剤（代謝 17 1553 〜1544、1980) 、核
酸合成の拮抗阻害剤（癌と化学療法 10 1029 〜1086、
1983) 、抗生物質および植物アルカロイド（山村雄一・
杉村隆著「ガン」251 〜270 共立出版）などがある。ま
た動植物より抽出したエキスも抗腫瘍活性のあることが
認められ各種製剤化されている。これらの抗腫瘍剤は、
各々において効果を発揮しているが、なお十分ではな
い。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】近年、海洋生物中に構
造ならびに生物活性に興味深い二次代謝物が多く含まれ
ることから、海洋生物中に含まれる抗腫瘍活性を示す新
規物質に抗腫瘍剤としての開発が望まれている。
造ならびに生物活性に興味深い二次代謝物が多く含まれ
ることから、海洋生物中に含まれる抗腫瘍活性を示す新
規物質に抗腫瘍剤としての開発が望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、海洋生物
中より新規抗腫瘍物質を見い出すべく鋭意研究の結果、
日本産タツナミガイ（Dolabella auricularia)から有機
溶媒抽出物から新規物質ドラスタチンＣを見い出し、本
発明に到達したものである。即ち、本発明はドラスタチ
ンＣ又はその薬学的に許容される塩を有効成分とするこ
とを特徴とする抗腫瘍剤に関する。本発明化合物は例え
ば、日本産タツナミガイ（Dolabella auricularia)の内
臓をメタノールと共に粉砕し、２日間室温にて放置した
後、混合物をろ過により除去し、ろ液を濃縮し、この濃
縮液から酢酸エチルで抽出した後、減圧濃縮し、得られ
た油状物を脱脂、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラ
フィー、アルミナクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、ＴＬ
Ｃで精製し、純粋なドラスタチンＣを得ることができ
る。本発明で得られたドラスタチンＣの理化学的性状を
以下に示す。
中より新規抗腫瘍物質を見い出すべく鋭意研究の結果、
日本産タツナミガイ（Dolabella auricularia)から有機
溶媒抽出物から新規物質ドラスタチンＣを見い出し、本
発明に到達したものである。即ち、本発明はドラスタチ
ンＣ又はその薬学的に許容される塩を有効成分とするこ
とを特徴とする抗腫瘍剤に関する。本発明化合物は例え
ば、日本産タツナミガイ（Dolabella auricularia)の内
臓をメタノールと共に粉砕し、２日間室温にて放置した
後、混合物をろ過により除去し、ろ液を濃縮し、この濃
縮液から酢酸エチルで抽出した後、減圧濃縮し、得られ
た油状物を脱脂、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラ
フィー、アルミナクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、ＴＬ
Ｃで精製し、純粋なドラスタチンＣを得ることができ
る。本発明で得られたドラスタチンＣの理化学的性状を
以下に示す。
【０００５】（１）実質的に無色無定形の粉末で、
（ａ）メタノール、エタノール、アセトン、アセトニト
リル、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、クロロホル
ム、塩化メチレンおよびベンゼンに可溶性であり（ｂ）
シリカゲル薄層クロマトグラフィー[ 展開溶媒：CHCl3-
MeOH(9:1) でRf値0.05を示し、
（ａ）メタノール、エタノール、アセトン、アセトニト
リル、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、クロロホル
ム、塩化メチレンおよびベンゼンに可溶性であり（ｂ）
シリカゲル薄層クロマトグラフィー[ 展開溶媒：CHCl3-
MeOH(9:1) でRf値0.05を示し、
【０００６】（ｃ）ＨＰＬＣ[Inertsil 0DS-2(4.6X 250
nm), 60 ％MeCN,1.0ml/min、UV(215nm) 検出] で保持時
間18.9分を示し、（ｄ）比旋光度（〔α〕25 D ＝−136
°、Ｃ＝0.0664、MeOH）を有し、（ｅ）低分解能ＥＩ質
量分析法により測定して、実質的に図１に示すような６
４３の分子量〔643( M＋,3.5) 、586(3)、485(7)〕を有
し、
nm), 60 ％MeCN,1.0ml/min、UV(215nm) 検出] で保持時
間18.9分を示し、（ｄ）比旋光度（〔α〕25 D ＝−136
°、Ｃ＝0.0664、MeOH）を有し、（ｅ）低分解能ＥＩ質
量分析法により測定して、実質的に図１に示すような６
４３の分子量〔643( M＋,3.5) 、586(3)、485(7)〕を有
し、
【０００７】（ｆ）低分解能ＦＡＢ質量分析法により測
定して、実質的に図２に示すような６４４の分子量〔64
4(MH＋,37)、485(4)、383(56) 〕を有し、（ｇ）3490,3
410,3350,3005,2970,2930,2875,2850,2780,1730,1685,1
640,1590,1505,1250,1170,1150,1125,1095,1040,1005cm
-1に主な吸収ピークを示す実質的に図３に示されるよう
な赤外吸収スペクトル（クロロホルム溶液）を有し、
（ｈ）メタノール溶液中で207nm(ε 17500)に吸収ピー
クを示す実質的に図４に示されるような紫外吸収極大値
を有し、
定して、実質的に図２に示すような６４４の分子量〔64
4(MH＋,37)、485(4)、383(56) 〕を有し、（ｇ）3490,3
410,3350,3005,2970,2930,2875,2850,2780,1730,1685,1
640,1590,1505,1250,1170,1150,1125,1095,1040,1005cm
-1に主な吸収ピークを示す実質的に図３に示されるよう
な赤外吸収スペクトル（クロロホルム溶液）を有し、
（ｈ）メタノール溶液中で207nm(ε 17500)に吸収ピー
クを示す実質的に図４に示されるような紫外吸収極大値
を有し、
【０００８】（ｉ）0.62(3H,d,J=6.4Hz),0.82(3H,d,J=
6.7Hz),0.83(3H,t,J=7.4Hz),0.85(3H,d,J=6.7Hz),0.88
(6H,t,J=7.5Hz),0.99(1H,ddq,j=13.6,8.8,7.4Hz),1.15
(1H,ddq,J=13.5,8.1,7.5Hz),1.24(1H,m),1.40(1H,ddq,J
=13.6,2.9,7.4Hz),1.66(2H,m),1.82(3H,m),1.94(1H,m),
2.01(2H,m),2.03(1H,m),2.30(6H,s),2.91(1H,d,J=10.4H
z),3.08(1H,dd,J=13.9,6.9Hz),3.11(3H,s),3.22(1H,dd,
J=13.9,6.6Hz),3.50(1H,dt,J=10.7,6.5Hz),3.85(1H,dt,
J=10.7,7.3Hz),4.30(1H,dd,J=7.0,6.1Hz),4.66(1H,ddd,
J=8.2,6.9,6.6Hz),5.00(1H,d,J=7.9Hz),5.15(1H,d,11.3
Hz),5.33(1H,br s),6.31(1H,d,J=8.2Hz),6.41(1H,br
s),7.18(2H,m),7.24(1H,m),7.29(2H,m)にシグナルを示
す実質的に図５に示されるような重クロロホルム（CDCl
3)中の500MHzプロトン磁気共鳴スペクトルを有し、
6.7Hz),0.83(3H,t,J=7.4Hz),0.85(3H,d,J=6.7Hz),0.88
(6H,t,J=7.5Hz),0.99(1H,ddq,j=13.6,8.8,7.4Hz),1.15
(1H,ddq,J=13.5,8.1,7.5Hz),1.24(1H,m),1.40(1H,ddq,J
=13.6,2.9,7.4Hz),1.66(2H,m),1.82(3H,m),1.94(1H,m),
2.01(2H,m),2.03(1H,m),2.30(6H,s),2.91(1H,d,J=10.4H
z),3.08(1H,dd,J=13.9,6.9Hz),3.11(3H,s),3.22(1H,dd,
J=13.9,6.6Hz),3.50(1H,dt,J=10.7,6.5Hz),3.85(1H,dt,
J=10.7,7.3Hz),4.30(1H,dd,J=7.0,6.1Hz),4.66(1H,ddd,
J=8.2,6.9,6.6Hz),5.00(1H,d,J=7.9Hz),5.15(1H,d,11.3
Hz),5.33(1H,br s),6.31(1H,d,J=8.2Hz),6.41(1H,br
s),7.18(2H,m),7.24(1H,m),7.29(2H,m)にシグナルを示
す実質的に図５に示されるような重クロロホルム（CDCl
3)中の500MHzプロトン磁気共鳴スペクトルを有し、
【０００９】（ｊ）10.4(q,2C),10.8(q),14.4(q),15.1
(q),15.6(q),23.8(t),24.8(t),24.9(t),25.0(t),28.9
(t),30.4(q),32.6(d),33.4(d),36.4(d),37.0(t),41.5
(q,2C),48.1(t),53.7(d),57.6(d),61.3(d),72.2(d),73.
8(d),127.3(d),128.9(d,2C),129.3(d,2C),136.6(s),17
0.9(s),171.0(s),171.1(s),171.7(s),172.9(s)にシグナ
ルを示す実質的に図６に示されるような重クロロホルム
中の67.8MHz 炭素-13 核磁気共鳴スペクトルを有する。
(q),15.6(q),23.8(t),24.8(t),24.9(t),25.0(t),28.9
(t),30.4(q),32.6(d),33.4(d),36.4(d),37.0(t),41.5
(q,2C),48.1(t),53.7(d),57.6(d),61.3(d),72.2(d),73.
8(d),127.3(d),128.9(d,2C),129.3(d,2C),136.6(s),17
0.9(s),171.0(s),171.1(s),171.7(s),172.9(s)にシグナ
ルを示す実質的に図６に示されるような重クロロホルム
中の67.8MHz 炭素-13 核磁気共鳴スペクトルを有する。
【００１０】本発明化合物のドラスタチンＣは酸又はア
ルカリと塩を作るが、本発明においてはこれらは薬学的
に許容される塩であればよく、かかる塩としては、塩
酸、硫酸、硝酸などの無機酸；ｐ−トルエンスルホン
酸、クエン酸、コハク酸などの有機酸等との酸付加塩が
あげられる。またナトリウム、カリウムなどのアルカリ
金属；カルシウムなどのアルカリ土類金属等との塩があ
げられる。
ルカリと塩を作るが、本発明においてはこれらは薬学的
に許容される塩であればよく、かかる塩としては、塩
酸、硫酸、硝酸などの無機酸；ｐ−トルエンスルホン
酸、クエン酸、コハク酸などの有機酸等との酸付加塩が
あげられる。またナトリウム、カリウムなどのアルカリ
金属；カルシウムなどのアルカリ土類金属等との塩があ
げられる。
【００１１】本発明製剤は、経口的または非経口的（例
えば、静脈もしくは筋肉内に注射）に投与することがで
きる。経口投与用製剤としては、固体または液体の剤
型、具体的には、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコー
ティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤
（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、エリキシ
ル、乳剤、懸濁剤等が用いられる。この経口投与用製剤
は製剤分野において通常用いられる担体もしくは賦形剤
と混合し、自体公知の方法に従い製造することができ
る。このような担体、賦形剤としては、例えばシロッ
プ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガン
トゴム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、ラクトー
ス、糖類、とうもろこし澱粉、リン酸カルシウム、グリ
シン等の充填剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、
ポリエチレングリコール、シリカ等の滑沢剤、馬鈴薯澱
粉等の崩壊剤、ナトリウムラウリルサルフェート等の湿
潤剤等が用いられる。
えば、静脈もしくは筋肉内に注射）に投与することがで
きる。経口投与用製剤としては、固体または液体の剤
型、具体的には、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコー
ティング錠を含む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤
（ソフトカプセル剤を含む）、シロップ剤、エリキシ
ル、乳剤、懸濁剤等が用いられる。この経口投与用製剤
は製剤分野において通常用いられる担体もしくは賦形剤
と混合し、自体公知の方法に従い製造することができ
る。このような担体、賦形剤としては、例えばシロッ
プ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガン
トゴム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、ラクトー
ス、糖類、とうもろこし澱粉、リン酸カルシウム、グリ
シン等の充填剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、
ポリエチレングリコール、シリカ等の滑沢剤、馬鈴薯澱
粉等の崩壊剤、ナトリウムラウリルサルフェート等の湿
潤剤等が用いられる。
【００１２】非経口投与用製剤としては、例えば注射剤
（例えば皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤等）、坐
薬等が用いられる。このような注射剤は自体公知の方
法、例えばドラスタチンＣ又はその塩を通常注射剤に用
いられる無菌の水性もしくは油性液に懸濁または乳化す
ることによって製造される。注射剤用の水性液としては
生理食塩水、等張液等があげられ、必要により適当な懸
濁化剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウ
ム、非イオン性界面活性剤等と併用してもよい。油性液
としてはゴマ油、大豆油等が用いられ、溶解補助剤とし
て安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等を併用して
もよい。調製された注射液は通常適当なアンプルに充填
される。
（例えば皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤等）、坐
薬等が用いられる。このような注射剤は自体公知の方
法、例えばドラスタチンＣ又はその塩を通常注射剤に用
いられる無菌の水性もしくは油性液に懸濁または乳化す
ることによって製造される。注射剤用の水性液としては
生理食塩水、等張液等があげられ、必要により適当な懸
濁化剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウ
ム、非イオン性界面活性剤等と併用してもよい。油性液
としてはゴマ油、大豆油等が用いられ、溶解補助剤とし
て安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等を併用して
もよい。調製された注射液は通常適当なアンプルに充填
される。
【００１３】本発明の製剤を治療に用いる場合、１日当
たりの投与量は、患者の状態や体重、投与の方法等によ
り異なるが、成人（体重50kg）一人当たり活性成分とし
て0.1 から100mg であり、１日当たり１から３回にわけ
て投与する。
たりの投与量は、患者の状態や体重、投与の方法等によ
り異なるが、成人（体重50kg）一人当たり活性成分とし
て0.1 から100mg であり、１日当たり１から３回にわけ
て投与する。
【００１４】
【作用】次に本発明の薬理作用を実験例により示す。 実験例 癌細胞に対する増殖阻害作用 培養プレートに１well当たり2000個の癌細胞を播き、24
時間培養後、被験薬をDMSOで溶解し、生理食塩水で希釈
したものを種々の濃度で添加した。その後、37℃、5%CO
2 インキュベーターで72時間培養した。培養後、細胞を
0.05% メチレンブルー水溶液で染色した後、3%塩酸で溶
出したメチレンブルーを660nm で測定し、その吸光度か
らコントロールに対する50% 増殖阻害濃度(IC50)を求め
た。
時間培養後、被験薬をDMSOで溶解し、生理食塩水で希釈
したものを種々の濃度で添加した。その後、37℃、5%CO
2 インキュベーターで72時間培養した。培養後、細胞を
0.05% メチレンブルー水溶液で染色した後、3%塩酸で溶
出したメチレンブルーを660nm で測定し、その吸光度か
らコントロールに対する50% 増殖阻害濃度(IC50)を求め
た。
【００１５】結果を表１に示す。 表１ 癌細胞に対する増殖阻害作用 細胞名 IC50（μg/ml) Hela S3（ヒト子宮頸癌） 0.008 表１に示すように、本化合物はHela S3 細胞に対して、
強い増殖阻害作用を示した。
強い増殖阻害作用を示した。
【００１６】
【発明の効果】以上のことから、本発明のドラスタチン
Ｃは抗腫瘍活性を示すことが明らかとなり、抗腫瘍剤と
して期待される。
Ｃは抗腫瘍活性を示すことが明らかとなり、抗腫瘍剤と
して期待される。
【００１７】
実施例１ ドラスタチンＣの精製剤 日本産タツナミガイ（Dolabella auricularia) (20kg)
の内臓(11kg)をメタノール（20L)と共に粉砕し、２日間
室温にて放置した。混合物をろ過してろ液を1Lで濃縮し
た。得られた水混合物を酢酸エチル(1L)で３回抽出した
後、有機層を合わせて減圧濃縮すると油状物（33.1g)が
得られた。この油状物をメタノール−水（9:1)(300ml)
に溶かしヘキサン（300ml)で２度脱脂を行った後、メタ
ノール−水層を減圧濃縮すると油状物（11.5g)が得られ
た。この油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
により分離した。溶出溶媒にはトルエン−酢酸エチル
（1:1)、酢酸エチル、酢酸エチル−メタノール(95:5,9:
1)、メタノールを順次用いた。酢酸エチル−メタノール
（95:5) で溶出する画分(354mg) をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーにより分離した。溶出溶媒にはヘキサ
ン−アセトン（4:1,2:1,1:1,1:2) 、アセトン、メタノ
ールを順次用いた。ヘキサン−アセトン（2:1)で溶出す
る画分(154mg) をアルミナカラムクロマトグラフィーに
より分離した。溶出溶媒には、酢酸エチル、酢酸エチル
−メタノール（95:5,9:1) 、メタノール、酢酸エチル−
メタノール−酢酸（5:4:1)を順次用いた。酢酸エチル−
メタノール（95:5) で溶出する画分(46.7mg)をＨＰＬＣ
によりDev-elosil ODS5(10X259nm) 、70% から100%MeOH
(60分の直線グラジエント) 、2ml/min で分離した。ド
ラスタチンＣをふくむ画分（2.6mg)をＨＰＬＣによりDe
velosil ODS5(10X250nm)、60%MeCN 、3ml/min 、UV(251
nm) で検出し、分離した。ドラスタチンＣを含む画分
（1.8mg)をシリカゲル分取ＴＬＣ〔CHCl3-MeOH(10:1)〕
で精製し、純粋なドラスタチンＣ（1.6mg)を得た。 実施例２ 製剤例 ドラスタチンＣ１部、ポリソルベート８０ １部及びＤ
−マンニトール２０部を注射用蒸留水2,000 部に分散溶
解し、メンブランフィルターでろ過した後バイアルに分
注して、常法により凍結乾燥しゴム栓で密栓して注射用
製剤を得た。
の内臓(11kg)をメタノール（20L)と共に粉砕し、２日間
室温にて放置した。混合物をろ過してろ液を1Lで濃縮し
た。得られた水混合物を酢酸エチル(1L)で３回抽出した
後、有機層を合わせて減圧濃縮すると油状物（33.1g)が
得られた。この油状物をメタノール−水（9:1)(300ml)
に溶かしヘキサン（300ml)で２度脱脂を行った後、メタ
ノール−水層を減圧濃縮すると油状物（11.5g)が得られ
た。この油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
により分離した。溶出溶媒にはトルエン−酢酸エチル
（1:1)、酢酸エチル、酢酸エチル−メタノール(95:5,9:
1)、メタノールを順次用いた。酢酸エチル−メタノール
（95:5) で溶出する画分(354mg) をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィーにより分離した。溶出溶媒にはヘキサ
ン−アセトン（4:1,2:1,1:1,1:2) 、アセトン、メタノ
ールを順次用いた。ヘキサン−アセトン（2:1)で溶出す
る画分(154mg) をアルミナカラムクロマトグラフィーに
より分離した。溶出溶媒には、酢酸エチル、酢酸エチル
−メタノール（95:5,9:1) 、メタノール、酢酸エチル−
メタノール−酢酸（5:4:1)を順次用いた。酢酸エチル−
メタノール（95:5) で溶出する画分(46.7mg)をＨＰＬＣ
によりDev-elosil ODS5(10X259nm) 、70% から100%MeOH
(60分の直線グラジエント) 、2ml/min で分離した。ド
ラスタチンＣをふくむ画分（2.6mg)をＨＰＬＣによりDe
velosil ODS5(10X250nm)、60%MeCN 、3ml/min 、UV(251
nm) で検出し、分離した。ドラスタチンＣを含む画分
（1.8mg)をシリカゲル分取ＴＬＣ〔CHCl3-MeOH(10:1)〕
で精製し、純粋なドラスタチンＣ（1.6mg)を得た。 実施例２ 製剤例 ドラスタチンＣ１部、ポリソルベート８０ １部及びＤ
−マンニトール２０部を注射用蒸留水2,000 部に分散溶
解し、メンブランフィルターでろ過した後バイアルに分
注して、常法により凍結乾燥しゴム栓で密栓して注射用
製剤を得た。
【図１】第１図は、ドラスタチンＣのＥＩ質量分析によ
る低分解能質量を示す。
る低分解能質量を示す。
【図２】第２図は、ドラスタチンＣのＦＡＢ質量分析に
よる低分解能質量を示す。
よる低分解能質量を示す。
【図３】第３図は、ドラスタチンＣのクロロホルム溶液
中で測定した赤外吸収スペクトルを示す。
中で測定した赤外吸収スペクトルを示す。
【図４】第４図は、ドラスタチンＣのメタノール溶液中
で測定した紫外吸収スペクトルを示す。
で測定した紫外吸収スペクトルを示す。
【図５】第５図は、ドラスタチンＣの重クロロホルム中
で測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルを示す。
で測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルを示す。
【図６】第６図は、ドラスタチンＣの重クロロホルム中
で測定した炭素核磁気共鳴スペクトルを示す。
で測定した炭素核磁気共鳴スペクトルを示す。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年２月２４日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正内容】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００５】（１）実質的に無色無定形の粉末で、
（ａ）メタノール、エタノール、アセトン、アセトニト
リル、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、クロロホル
ム、塩化メチレンおよびベンゼンに可溶性であり（ｂ）
シリカゲル薄層クロマトグラフィー［展開溶媒：ＣＨＣ
ｌ３−ＭｅＯＨ（９：１）でＲｆ値０．５０を示し、
（ａ）メタノール、エタノール、アセトン、アセトニト
リル、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、クロロホル
ム、塩化メチレンおよびベンゼンに可溶性であり（ｂ）
シリカゲル薄層クロマトグラフィー［展開溶媒：ＣＨＣ
ｌ３−ＭｅＯＨ（９：１）でＲｆ値０．５０を示し、
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００８】（ｉ）０．６２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈ
ｚ），０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８
３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），０．８５（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．
５Ｈｚ），０．９９（１Ｈ，ｄｄｑ，ｊ＝１３．６，
８．８，７．４Ｈｚ），１．１５（１Ｈ，ｄｄｑ，Ｊ＝
１３．５，８．１，７．５Ｈｚ），１．２４（１Ｈ，
ｍ），１．４０（１Ｈ，ｄｄｑ，Ｊ＝１３．６，２．
９，７．４Ｈｚ），１．６６（２Ｈ，ｍ），１．８２
（３Ｈ，ｍ），１．９４（１Ｈ，ｍ），２．０１（２
Ｈ，ｍ），２．０３（１Ｈ，ｍ），２．３０（６Ｈ，
ｓ），２．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ），３．
０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．９，６．９Ｈｚ），３．
１１（３Ｈ，ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．
９，６．６Ｈｚ），３．５０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１０．
７，６．５Ｈｚ），３．８５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１０．
７，７．３Ｈｚ），４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．
０，６．１Ｈｚ），４．６６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．
２，６．９，６．６Ｈｚ），５．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．９Ｈｚ），５．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈ
ｚ），５．３３（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．３１（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，ｂｒ ｓ），
７．１８（２Ｈ，ｍ），７．２４（１Ｈ，ｍ），７．２
９（２Ｈ，ｍ）にシグナルを示す実質的に図５に示され
るような重クロロホルム（ＣＤＣｌ３）中の５００ＭＨ
ｚプロトン磁気共鳴スペクトルを有し、
ｚ），０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８
３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），０．８５（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．
５Ｈｚ），０．９９（１Ｈ，ｄｄｑ，ｊ＝１３．６，
８．８，７．４Ｈｚ），１．１５（１Ｈ，ｄｄｑ，Ｊ＝
１３．５，８．１，７．５Ｈｚ），１．２４（１Ｈ，
ｍ），１．４０（１Ｈ，ｄｄｑ，Ｊ＝１３．６，２．
９，７．４Ｈｚ），１．６６（２Ｈ，ｍ），１．８２
（３Ｈ，ｍ），１．９４（１Ｈ，ｍ），２．０１（２
Ｈ，ｍ），２．０３（１Ｈ，ｍ），２．３０（６Ｈ，
ｓ），２．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ），３．
０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．９，６．９Ｈｚ），３．
１１（３Ｈ，ｓ），３．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．
９，６．６Ｈｚ），３．５０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１０．
７，６．５Ｈｚ），３．８５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１０．
７，７．３Ｈｚ），４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．
０，６．１Ｈｚ），４．６６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．
２，６．９，６．６Ｈｚ），５．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．９Ｈｚ），５．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈ
ｚ），５．３３（１Ｈ，ｂｒ ｓ），６．３１（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，ｂｒ ｓ），
７．１８（２Ｈ，ｍ），７．２４（１Ｈ，ｍ），７．２
９（２Ｈ，ｍ）にシグナルを示す実質的に図５に示され
るような重クロロホルム（ＣＤＣｌ３）中の５００ＭＨ
ｚプロトン磁気共鳴スペクトルを有し、
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１０】本発明化合物のドラスタチンＣは酸と塩を
作るが、本発明においてはこれらは薬学的に許容される
塩であればよく、かかる塩としては、塩酸、硫酸、硝酸
などの無機酸；ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、コ
ハク酸などの有機酸等との酸付加塩があげられる。
作るが、本発明においてはこれらは薬学的に許容される
塩であればよく、かかる塩としては、塩酸、硫酸、硝酸
などの無機酸；ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、コ
ハク酸などの有機酸等との酸付加塩があげられる。
Claims (3)
- 【請求項１】次の物理化学的性質を有するドラスタチン
Ｃ又はその薬学的に許容される塩。実質的に無色無定形
の粉末で、（ａ）メタノール、エタノール、アセトン、
アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、酢酸エチル、
クロロホルム、塩化メチレンおよびベンゼンに可溶性で
あり（ｂ）シリカゲル薄層クロマトグラフィー [展開溶
媒：CHCl3-MeOH(9:1)]でRf値0.05を示し、（ｃ）ＨＰＬ
Ｃ [Inertsil ODS-2(4.6X 250nm),60％MeCN,1.0ml/mi
n、UV(215nm) 検出] で保持時間18.9分を示し、（ｄ）
比旋光度（〔α〕25 D ＝−136 °、Ｃ＝0.0664、MeOH）
を有し、（ｅ）低分解能ＥＩ質量分析法により測定し
て、実質的に図１に示すような６４３の分子量〔643( M
＋,3.5）、586(3)、485(7)〕を有し、（ｆ）低分解能Ｆ
ＡＢ質量分析法により測定して、実質的に図２に示すよ
うな644 の分子量〔644(MH＋,37)、485(4)、383(56) 〕
を有し、 （ｇ）3490,3410,3350,3005,2970,2930,2875,2850,278
0,1730,1685,1640,1590, 1505,1250,1170,1150,1125,10
95,1040,1005cm -1に主な吸収ピークを示す実質的に図
３に示されるような赤外吸収スペクトル（クロロホルム
溶液）を有し、（ｈ）メタノール溶液中で207nm(ε 175
00) に吸収ピークを示す実質的に図４に示されるような
紫外吸収極大値を有し、（ｉ）0.62(3H,d,J=6.4Hz),0.8
2(3H,d,J=6.7Hz),0.83(3H,t,J=7.4Hz),0.85(3H,d,J=6.7
Hz),0.88(6H,t,J=7.5Hz),0.99(1H,ddq,j=13.6,8.8,7.4H
z),1.15(1H,ddq,J=13.5,8.1,7.5Hz),1.24(1H,m),1.40(1
H,ddq,J=13.6,2.9,7.4Hz),1.66(2H,m),1.82(3H,m),1.94
(1H,m),2.01(2H,m),2.03(1H,m),2.30(6H,s),2.91(1H,d,
J=10.4Hz),3.08(1H,dd,J=13.9,6.9Hz),3.11(3H,s),3.22
(1H,dd,J=3.9,6.6Hz),3.50(1H,dt,J=10.7,6.5Hz),3.85
(1H,dt,J=10.7,7.3Hz),4.30(1H,dd,J=7.0,6.1Hz),4.66
(1H,ddd,J=8.2,6.9,6.6Hz),5.00(1H,d,J=7.9Hz),5.15(1
H,d,11.3Hz),5.33(1H,br s),6.31(1H,d,J=8.2Hz),6.41
(1H,br s),7.18(2H,m),7.24(1H,m),7.29(2H,m) にシグ
ナルを示す実質的に図５に示されるような重クロロホル
ム（CDCl3)中の500MHzのプロトン磁気共鳴スペクトルを
有し、（ｊ）10.4(q,2C),10.8(q),14.4(q),15.1(q),15.
6(q),23.8(t),24.8(t),24.9(t),25.0(t),28.9(t),30.4
(q),32.6(d),33.4(d),36.4(d),37.0(t),41.5(q,2C),48.
1(t),53.7(d),57.6(d),61.3(d),72.2(d),73.8(d),127.3
(d),128.9(d,2C),129.3(d,2C),136.6(s),170.9(s),171.
0(s),171.1(s),171.7(s),172.9(s)にシグナルを示す実
質的に図６に示されるような重クロロホルム中の67.8MH
z 炭素-13 核磁気共鳴スペクトルを有する。 - 【請求項２】日本産タツナミガイ（Dolabella auricula
ria ）より有機溶媒によって抽出されることを特徴とす
る請求項第１項記載のドラスタチンＣの製法 - 【請求項３】請求項１で示されたドラスタチンＣ又はそ
の薬学的に許容される塩を有効成分とすることを特徴と
する抗腫瘍剤。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4352439A JPH06172397A (ja) | 1992-12-11 | 1992-12-11 | 新規物質ドラスタチンｃ及びその用途 |
| AU55532/94A AU5553294A (en) | 1992-12-11 | 1993-12-07 | Novel substance dolastatin c and pharmaceutical use thereof |
| PCT/JP1993/001774 WO1994013684A1 (en) | 1992-12-11 | 1993-12-07 | Novel substance dolastatin c and pharmaceutical use thereof |
| CN93112863A CN1098105A (zh) | 1992-12-11 | 1993-12-11 | 新的物质哚拉斯他汀c及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4352439A JPH06172397A (ja) | 1992-12-11 | 1992-12-11 | 新規物質ドラスタチンｃ及びその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06172397A true JPH06172397A (ja) | 1994-06-21 |
Family
ID=18424087
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4352439A Pending JPH06172397A (ja) | 1992-12-11 | 1992-12-11 | 新規物質ドラスタチンｃ及びその用途 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06172397A (ja) |
| CN (1) | CN1098105A (ja) |
| AU (1) | AU5553294A (ja) |
| WO (1) | WO1994013684A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2022338463A1 (en) | 2021-09-03 | 2024-03-21 | Toray Industries, Inc. | Pharmaceutical composition for cancer treatment and/or prevention |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4414205A (en) * | 1981-08-28 | 1983-11-08 | University Patents, Inc. | Cell growth inhibitory substances |
| US4486414A (en) * | 1983-03-21 | 1984-12-04 | Arizona Board Of Reagents | Dolastatins A and B cell growth inhibitory substances |
-
1992
- 1992-12-11 JP JP4352439A patent/JPH06172397A/ja active Pending
-
1993
- 1993-12-07 WO PCT/JP1993/001774 patent/WO1994013684A1/ja active Application Filing
- 1993-12-07 AU AU55532/94A patent/AU5553294A/en not_active Abandoned
- 1993-12-11 CN CN93112863A patent/CN1098105A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1098105A (zh) | 1995-02-01 |
| WO1994013684A1 (en) | 1994-06-23 |
| AU5553294A (en) | 1994-07-04 |
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